JP2022521543A - 抗菌活性を有するポリペプチド、これを含む敗血症の予防または治療用組成物、および抗菌用組成物 - Google Patents

抗菌活性を有するポリペプチド、これを含む敗血症の予防または治療用組成物、および抗菌用組成物 Download PDF

Info

Publication number
JP2022521543A
JP2022521543A JP2021549548A JP2021549548A JP2022521543A JP 2022521543 A JP2022521543 A JP 2022521543A JP 2021549548 A JP2021549548 A JP 2021549548A JP 2021549548 A JP2021549548 A JP 2021549548A JP 2022521543 A JP2022521543 A JP 2022521543A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
polypeptide
arginine
lysine
general formula
polypeptide according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2021549548A
Other languages
English (en)
Other versions
JP7219512B2 (ja
Inventor
ミン パク、ヨン
キム、ヤンミ
ドク チョン、イン
イ、スン－ヒョン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HLB Science Inc
Original Assignee
Dandi Bioscience Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from KR1020200023629A external-priority patent/KR102368983B1/ko
Application filed by Dandi Bioscience Inc filed Critical Dandi Bioscience Inc
Publication of JP2022521543A publication Critical patent/JP2022521543A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7219512B2 publication Critical patent/JP7219512B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

【課題】 本発明は、抗菌活性を有するペプチド、これを含む敗血症の予防または治療用組成物、および抗菌用組成物等を提供する。【解決手段】 より具体的に、本発明によるペプチドは、バクテリアの増殖抑制だけでなく、バクテリア由来の内毒素を除去する優れた効果を有していて、優れた敗血症治療効果を発揮するところ、敗血症の予防または治療に有用に用いることができる。また、本発明によるペプチドは、グラム陽性・陰性菌に対して選択的に優れた抗菌活性を有していて、グラム陽性・陰性菌に対する抗菌用組成物またはグラム陽性・陰性菌によって誘発される様々な感染性疾患の予防または治療に有用に用いることができる。また、本発明によるペプチドは、タンパク質分解酵素に対して優れた抵抗性を示すので、高い安定性を有して、薬学的組成物、化粧学的組成物、食品組成物、健康食品組成物、飼料組成物および医薬部外品組成物など様々な形態で活用可能なものと期待される。【選択図】図４

Description

本発明は、抗菌活性を有するポリペプチド、これを含む敗血症の予防または治療用組成物、および抗菌用組成物等に関する。
本出願は、２０１９年２月２８日に出願された韓国特許出願第１０－２０１９－００２３５３４号および２０２０年２月２６日に出願された韓国特許出願第１０－２０２０－００２３６２９号に基づく優先権を主張し、当該出願の明細書および図面に開示されたすべての内容は本出願に援用される。
敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）は、病原性グラム陰性細菌が生体に感染した場合、細胞壁の成分であるリポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）が毒素として作用して生体の免疫体系が過度に活性化することによって誘発される炎症反応であり、全身に感染症を起こしたり、症状がひどい場合、ショックを伴うことがある。具体的に、敗血症は、悪性腫瘍、白血病、悪性リンパ腫、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、膠原病、腎不全、肝疾患、脳血管障害、糖尿病等の基礎疾患を有する患者や高齢者、早産児のような体液性免疫不全または細胞性免疫不全を有する抵抗力の弱い宿主が、副腎ステロイドや抗腫瘍剤の化学療法、コバルト照射等の放射線治療または留置カテーテル、血液透析、臓器移植、心臓手術等の処置、手術を受けた場合に主に発病する。敗血症は、病院の重症患者用の病床に入院した患者が死亡する主要な原因となり、これによる致死率が通常３０％以上である、非常に深刻な病気である。医学技術の発展にもかかわらず、まだ全世界的に手術後遺症によって感染することで敗血症が発生する場合が多く、新生児や高齢者のように体内の免疫力の弱いヒトが感染した場合、敗血症に進行する場合も多い。代表的に、新生児敗血症の場合、正期産児１，０００人のうち３人程度が発生することが知られており、早産児は、発病率が３～４倍増加することが知られている。
敗血症にかかった場合、たいていは抗生剤治療を受けることになるが、適切な処置が遅れて菌が多く増殖した場合や抗生剤に耐性の強い菌株により感染した場合には、抗生剤のみでは効果的な治療ができず、様々な抗生剤に対する耐性を有する病原菌が次第に増加していて、あらたな敗血症治療剤の開発が急務である。
一方、抗菌剤耐性細菌とは、特定の抗菌剤に耐性を示し、抗菌剤が効かない細菌をいう。例えば、ペニシリンの効かないペニシリン耐性黄色ブドウ球菌がこれに該当する。これ以外にも、１９６１年に最初に学界に報告されて、その後、全世界的に主な病原性感染菌となっているメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）が報告されたことがあり、１９８８年にバンコマイシンに耐性を示す腸球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ，ＶＲＥ）がヨーロッパで初めて発見され、また、人体感染の最もありふれた原因菌である黄色ブドウ球菌の最後の治療剤として知られたバンコマイシンに高度な耐性を示すブドウ球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，ＶＲＳＡ）が、２００２年アメリカ疾病予防管理センター（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ）で世界で初めて報告されることによって、いわゆるスーパーバクテリアの拡散の可能性が非常に高まっている。
これより、本発明者らは、上記のような要求を満たすために研究を繰り返した結果、特定のアミノ酸配列を有するペプチドが、バクテリアの増殖抑制だけでなく、死んだバクテリアから分離した内毒素を除去するという優れた効果を有していて、敗血症の治療に効果的であるという点と、グラム陽性・陰性菌に対して選択的に優れた抗菌活性を示すことを確認することによって、本発明を完成した。
したがって、本発明が解決しようとする課題は、抗菌活性を有するペプチド、これを含む敗血症の予防または治療用組成物、抗菌用組成物等を提供することにある。
しかし、本発明が達成しようとする技術的課題は、以上で言及した課題に制限されず、言及されていない他の課題は、下記の記載から本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が明らかに理解できる。
本発明の目的を達成するために、本発明は、下記の配列一般式で表されるポリペプチドを提供する：
［一般式］
Ｌｎ－Ｘ１－Ｌ－Ｘ２－Ｖ－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｒ－Ｘ６－Ｌ－Ｘ７
上記一般式中、
ｎは、０または１；
Ｌは、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ）；
Ｖは、バリン（ｖａｌｉｎｅ）；
Ｒは、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ）；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）またはリシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）またはロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）、トリプトファン（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ：Ｗ）、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）；および
Ｘ７は、アスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）、
ただし、上記一般式中、Ｋ－Ｌ－Ｇ－Ｖ－Ｅ－Ａ－Ｋ－Ｒ－Ｙ－Ｌ－Ｄの配列で表されるポリペプチドは除く。
本発明の一具現例において、以下の１）～９）からなる９種のポリペプチドのうちいずれか１つのポリペプチドを提供する：
１）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチド；
２）上記一般式中、
ｎは、１；
Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチド；
３）上記一般式中、
ｎは、１；
Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチド；
４）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
Ｘ５は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）である、
ポリペプチド；
５）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチド；
６）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチド；
７）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチド；
８）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、トリプトファン（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ：Ｗ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチド；および
９）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチド。
本発明の一具現例において、上記ポリペプチドは、Ｌ型、Ｄ型およびペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）を含むペプチド模倣体または非天然アミノ酸である、ポリペプチドを提供する。
本発明の一具現例において、上記ポリペプチドの末端をアルキレーション（Ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ）、ペギュレーション（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）、またはアミデーション（Ａｍｉｄａｔｉｏｎ）したものである、ポリペプチドを提供する。
本発明の一具現例において、上記ポリペプチドのＣ末端にアミン基（ＮＨ２）が追加されたものである、ポリペプチドを提供する。
本発明の一具現例において、上記ポリペプチドは、以下の特徴のうち１つ以上の特徴を有するものである、ポリペプチドを提供する：
グラム陰性菌のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）への結合能；
バクテリア細胞膜の選択的破壊能；
タンパク質分解酵素に対する抵抗性；
グラム陽性菌の細胞膜破壊能；および
グラム陽性菌由来のＬＴＡ（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ）またはＬＰＰ（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）への結合能。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸（Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＴＦＡ）のアセテート塩置換体を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、敗血症の予防、改善または治療用組成物を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、敗血症の予防、改善または治療用薬学的／食品／健康食品／化粧品／医薬部外品／飼料組成物を提供する。
本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む敗血症の予防または治療方法を提供する。
更に、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の敗血症に対する予防、改善または治療用途を提供する。
しかも、本発明は、敗血症の予防、改善または治療用製剤の製造のための上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、抗菌用組成物を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、抗菌用薬学的／食品／健康食品／化粧品／医薬部外品／飼料組成物を提供する。
本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む抗菌方法を提供する。
更に、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の抗菌用途を提供する。
しかも、本発明は、抗菌剤の製造のための上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途を提供する。
本発明の一具現例において、上記抗菌用組成物の抗菌対象菌は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ１、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓよりなる群から選ばれた１以上である、抗菌用組成物を提供する。
本発明の一具現例において、上記抗菌用組成物の抗菌対象菌は、拡張型β－ラクタム系抗生剤分解酵素（ＥＳＢＬ；Ｅｘｔｅｎｄｅｄ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｂｅｔａ Ｌａｃｔａｍａｓｅ）耐性菌、カルバペネム耐性菌およびコリスチン耐性菌よりなる群から選ばれた１以上の抗生剤耐性菌である、抗菌用組成物を提供する。
本発明の一具現例において、上記抗生剤耐性菌は、ＥＳＢＬ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ＣＲ）－Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、ＣＲ－Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ＣＲ－Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、およびＣｏｌｉｓｔｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉよりなる群から選ばれた１以上である、抗菌用組成物を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、感染性疾患の予防、改善または治療用組成物を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、感染性疾患の予防、改善または治療用薬学的／食品／健康食品／化粧品／医薬部外品／飼料組成物を提供する。
本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む感染性疾患の予防または治療方法を提供する。
更に、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の感染性疾患に対する予防、改善または治療用途を提供する。
しかも、本発明は、感染性疾患の予防、改善または治療用製剤の製造のための上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途を提供する。
本発明の一具現例において、上記感染性疾患は、肺炎、腹膜炎、脳膜炎、創傷感染、骨関節炎、胆嚢炎、尿路感染症、脳髄膜炎、心内膜炎、心筋炎、心外膜炎、関節炎、 咽頭炎、淋病、細菌性疫痢、腸炎、結膜炎、胃炎、中耳炎、膀胱炎、およびリンパ管炎よりなる群から選ばれるグラム陰性菌によって誘発される感染性疾患である、組成物を提供する。
本発明の一具現例において、上記感染性疾患は、咽喉炎、膿痂疹、リウマチ熱、糸球体腎炎、新生児敗血症、髄膜炎、咽頭炎、肺炎、心内膜炎、 猩紅熱、皮膚軟部組織感染、深部軟組織感染、膿胸および膣炎よりなる群から選ばれるグラム陽性菌によって誘発される感染性疾患である、組成物を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。
また、本発明は、上記ポリヌクレオチドを含む組換えベクターを提供する。
また、本発明は、上記組換えベクターで形質転換された宿主細胞を培養する段階を含む、上記配列一般式で表されるポリペプチドの製造方法を提供する。
本発明によるペプチドは、標準バクテリアおよび抗生剤耐性バクテリアの増殖抑制だけでなく、バクテリア由来の内毒素を除去するという優れた効果を有していて、優れた敗血症治療効果を有しており、抗生剤と併用する場合、抗生剤による副作用を最小化することができて、敗血症の予防または治療に有用に用いることができる。
また、本発明によるペプチドは、グラム陽性・陰性菌に対して選択的に優れた抗菌活性を有していて、グラム陽性・陰性菌に対する抗菌用組成物またはグラム陽性・陰性菌によって誘発される様々な感染性疾患の予防または治療に有用に用いることができる。
また、本発明によるペプチドは、人体に安全なだけでなく、タンパク質分解酵素に対しても安定性を示すので、様々な用途に活用することができる。
図１は、本発明の実施例４の溶血活性の測定結果を示すグラフである。上段の左側から右側方向に、ＦＰ１２－ＮＨ２（配列番号６）／ａｌｌＤ＿ＦＰ１２－ＮＨ２（配列番号８）；およびＦＰ１３－ＮＨ２（配列番号７）／ａｌｌＤ＿ＦＰ１３－ＮＨ２（配列番号９）。下段の左側から右側方向に、ａｌｌＤ＿ＦＰ１３＿９Ａ（配列番号１０）／ａｌｌＤ＿ＦＰ１３＿９Ｄ（配列番号１８）；およびａｌｌＤ＿ＦＰ１３＿９Ｗ（配列番号１１）／ａｌｌＤ＿ＦＰ１３＿９Ｋ（配列番号１２）。 図２は、本発明の実施例５の円偏光二色性分光器でペプチドの２次構造を測定した結果を示すグラフである。 図３は、本発明の実施例６のバクテリア細胞膜（上段）と赤血球細胞膜（下段）を模倣するリポソームに対するペプチドの破壊能の測定結果を示す図である。 図４は、本発明の実施例８のａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドの抗生効果を示す図である。それぞれ、左側から右側方向に、標準菌株Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ１に対するａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドの抗生効果；臨床菌株Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＥＳＢＬ）に対するａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドの抗生効果；および臨床菌株Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍｍａｎｉｉに対するａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドの抗生効果を示すものである。 図５ａ～図５ｃは、本発明の実施例９のａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）ペプチドの抗生効果、毒性効果および抗炎症サイトカイン抑制効果の確認結果を示すものである。図５ａは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＥＳＢＬ）に対する抗生効果の比較、ＡｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＴＦＡ）（上）およびＡｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）（下）；図５ｂは、ｉｎ ｖｉｖｏ毒性の比較、ＡｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＴＦＡ）（上）およびＡｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）（下）；および図５ｃは、抗炎症サイトカイン（ＩＬ－６）抑制効果の比較、ＡｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＴＦＡ）（上）およびＡｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）（下）。 図６は、本発明の実施例１１のグラム陽性菌細胞膜を模倣するリポソームに対するペプチドの破壊能の測定結果を示す図である。
本発明は、下記の配列一般式で表されるポリペプチドを提供する：
［一般式］
Ｌｎ－Ｘ１－Ｌ－Ｘ２－Ｖ－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｒ－Ｘ６－Ｌ－Ｘ７
上記一般式中、
ｎは、０または１；
Ｌは、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ）；
Ｖは、バリン（ｖａｌｉｎｅ）；
Ｒは、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ）；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）またはリシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）またはロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）、トリプトファン（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ：Ｗ）、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）；および
Ｘ７は、アスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）、
ただし、上記一般式中、Ｋ－Ｌ－Ｇ－Ｖ－Ｅ－Ａ－Ｋ－Ｒ－Ｙ－Ｌ－Ｄの配列で表されるポリペプチドは除く。
本発明の一具現例において、以下の１）～９）からなる９種のポリペプチドのうちいずれか１つ以上のポリペプチドを提供する：
１）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＫＬＧＶＥＡＫＲＹＬＲ（配列番号２）のアミノ酸配列を有するポリペプチド；
２）上記一般式中、
ｎは、１；
Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＬＲＬＧＶＥＡＫＲＹＬＲ（配列番号３）のアミノ酸配列を有するポリペプチド；
３）上記一般式中、
ｎは、１；
Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＬＲＬＧＶＥＬＫＲＹＬＲ（配列番号４）のアミノ酸配列を有するポリペプチド；
４）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
Ｘ５は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＫＬＧＶＥＡＬＲＹＬＤ（配列番号５）のアミノ酸配列を有するポリペプチド；
５）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＲＬＲＶＫＬＲＲＹＬＲ（配列番号１５）のアミノ酸配列を有するポリペプチド；
６）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＫＬＲＶＫＬＲＲＹＬＲ（配列番号１６）のアミノ酸配列を有するポリペプチド；
７）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＫＬＲＶＫＬＲＲＡＬＲ（配列番号１０）のアミノ酸配列を有するポリペプチド；
８）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、トリプトファン（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ：Ｗ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＫＬＲＶＫＬＲＲＷＬＲ（配列番号１１）のアミノ酸配列を有するポリペプチド；および
９）上記一般式中、
ｎは、０；
Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
Ｘ６は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）、および
Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
ポリペプチドであり、
すなわち、ＫＬＲＶＫＬＲＲＫＬＲ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有するポリペプチド。
本明細書において使用された用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合によりアミノ酸残基が互いに結合されて形成された線形（ｌｉｎｅａｒ）の分子を意味する。本発明のポリペプチドは、分子生物学的な方法と共に、当業界における公知の化学的合成方法（例えば、固相合成技術（ 例えば、ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ））によって製造できる（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９－５４（１９６３）；Ｓｔｅｗａｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、２ｎｄ．ｅｄ．，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．：Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、１１１（１９８４））。
また、本発明のポリペプチドの範囲には、本発明のポリペプチドと同等な生物学的活性を示すアミノ酸配列の変異を有する生物学的機能同等物が含まれ得る。このようなアミノ酸配列の変異は、アミノ酸の側鎖置換体の相対的類似性、例えば、疎水性、親水性、電荷およびサイズ等に基づいてなされる。アミノ酸の側鎖置換体のサイズ、形態および種類に対する分析によって、アルギニン、リシンとヒスチジンは、いずれも、正電荷を帯びた残基であり；アラニン、グリシンとセリンは、類似したサイズを有し；フェニルアラニン、トリプトファンとチロシンは、類似した形態を有することが分かる。したがって、このような考慮事項に基づいて、アルギニン、リシンとヒスチジン；アラニン、グリシンとセリン；そしてフェニルアラニン、トリプトファンとチロシンは、生物学的に機能同等物といえる。
変異を導入するにあたって、アミノ酸の疎水性インデックスが考慮されることができる。それぞれのアミノ酸は、疎水性と電荷によって疎水性インデックスが付与されている。また、類似した親水性値（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ ｖａｌｕｅ）を有するアミノ酸間の置換が同等な生物学的活性を有するペプチドを招くことも知られている。
分子の活性を全体的に変更させないペプチドにおけるアミノ酸交換は、当該分野において一般的に知られている（Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ，Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９）。最も通常的に起こる交換は、アミノ酸残基Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｈｙ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ間の交換である。
上述した生物学的同等活性を有する変異を考慮すると、本発明のポリペプチドは、配列リストに記載された配列と実質的な同一性（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を示す配列も含むものと解釈される。上記の実質的な同一性は、本発明の配列と任意の他の配列を最大限対応するようにアラインし、当業界において通常的に用いられるアルゴリズムを用いてアラインされた配列を分析した場合に、最小８０％の相同性、９０％の相同性または９５％の相同性を示す配列を意味し得る。配列比較のためのアラインメント方法は、当業界において一般的に知られている（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｐ．Ａｐｐｌ．ＢｉｏＳｃｉ．８：１５５－６５（１９９２）；Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３１（１９９４））。
また、本発明の一具現例において、本発明による配列一般式で表されるポリペプチドは、Ｌ型、Ｄ型およびペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）を含むペプチド模倣体または非天然アミノ酸でありうる。
上記Ｄ型ポリペプチドは、Ｌ型ポリペプチドとアミノ酸配列が同じ鏡像異性体であり、ａｌｌｏｍｅｒｉｃ ｔｙｐｅのポリペプチドを意味する。
本発明の具体的な実施例において、例えば、ＦＰ１２－ＮＨ２（配列番号６）とアミノ酸配列が同じａｌｌｏｍｅｒｉｃ ｔｙｐｅのポリペプチドとしてａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２（配列番号８）を提供する。
本明細書においてポリペプチドを命名して使用された用語「ａｌｌＤ」は、Ｄ型ポリペプチドを指す。
上記Ｌ型、Ｄ型およびペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）を含むペプチド模倣体または非天然アミノ酸のポリペプチドは、定められたアミノ酸配列によって当業界における公知の様々な方法で製造できる。
本発明の一具現例において、本発明による配列一般式で表されるポリペプチドの末端をアルキレーション（Ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ）、ペギュレーション（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）またはアミデーション（Ａｍｉｄａｔｉｏｎ）したものでありうる。
本発明の具体的な実施例において、本発明によるポリペプチドのうちａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）（配列番号１３）のＮ末端をペギュレーションして、ＰＥＧ－ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）（配列番号１４）を提供する。これに制限されないが、上記ペギュレーションのために、本発明によるポリペプチドとＦｍｏｃ－ＮＨ－ＰＥＧ２－ＣＨ２ＣＯＯＨを反応させることができ、この際、ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌのＭｗ（分子量）は、３８５．４Ｄａである。
選択されるポリペプチドによって通常の技術者がペギュレーションのための条件を調節することができ、ペギュレーションする方法は、当業界における公知の様々な方法に従うことができる。
アルキレーションまたはアミデーションも、選択されるポリペプチドによって通常の技術者がアルキレーションまたはアミデーションのための条件を調節することができ、アルキレーションまたはアミデーションする方法は、当業界における公知の様々な方法に従うことができる。
本発明の一具現例において、本発明による配列一般式で表されるポリペプチドのＣ末端にアミン基（ＮＨ２）が追加されたものでありうる。
本発明の具体的な実施例において、本発明によるポリペプチドのうちＦＰ１２（配列番号１５）のＣ末端にアミン基（ＮＨ２）が追加されたポリペプチドとしてＦＰ１２－ＮＨ２（配列番号６）を提供する。
本明細書においてポリペプチドを命名して使用された用語「－ＮＨ２」は、ポリペプチドのＣ末端にアミン基（ＮＨ２）が追加されたものを指す。
ポリペプチドのＣ末端にアミン基（ＮＨ２）を追加することは、当業界における公知の様々な方法に従うことができる。
また、本発明のポリペプチドの範囲には、その薬学的に許容可能な塩も含まれ得る。
本明細書において使用された用語「薬学的に許容可能な」は、過度な毒性、刺激、アレルギー反応またはその他問題点や合併症なしにベネフィット／リスクの割合が合理的であるので、対象体（例：ヒト）の組織と接触して使用するのに適しており、健全な医学的判断の範疇以内であるペプチドを意味する。上記薬学的に許容可能な塩は、例えば薬学的に許容可能な遊離酸（ｆｒｅｅ ａｃｉｄ）により形成された酸付加塩および薬学的に許容可能な金属塩を含む。
好適な酸の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、グルコン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸等が挙げられる。酸付加塩は、通常の方法、例えば化合物を過量の酸水溶液に溶解させ、この塩をメタノール、エタノール、アセトンまたはアセトニトリルのような水混和性有機溶媒を使用して沈殿させて製造することができる。また、同モル量の化合物および水中の酸またはアルコールを加熱し、引き続いて、上記混合物を蒸発させて乾燥させたり、または析出された塩を吸引濾過させて製造することができる。
好適な塩基から誘導された塩は、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、マグネシウム等のアルカリ土類金属、およびアンモニウム等を含むことができるが、これに制限されるものではない。アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩は、例えば化合物を過量のアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解し、非溶解化合物塩を濾過した後、ろ液を蒸発、乾燥させて得ることができる。この際、金属塩としては、特にナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩を製造することが製薬上好ましく、また、これに対応する銀塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩を適当な銀塩（例、硝酸銀）と反応させて得ることができる。
上述したポリペプチドの薬学的に許容可能な塩の一環として、本発明は、上述したポリペプチドのアセテート塩を提供する。
より具体的に、本発明によるポリペプチドのトリフルオロ酢酸（Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＴＦＡ）のアセテート塩置換体を提供する。
より具体的に、本発明は、上述した配列一般式で表されるポリペプチド；Ｌ型、Ｄ型およびペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）を含むペプチド模倣体または非天然アミノ酸であるポリペプチド；末端がアルキレーション（Ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ）、ペギュレーション（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）またはアミデーション（Ａｍｉｄａｔｉｏｎ）したポリペプチド；またはＣ末端にアミン基（ＮＨ２）が追加されたポリペプチドのアセテート塩を提供する。
本明細書においてポリペプチドを命名して使用された用語「（ＡｃＯＨ）」は、ポリペプチドのアセテート塩を意味する。
本発明によるポリペプチドとその塩置換体は、以下の特徴のうち１つ以上の特徴を有する：
グラム陰性菌のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）への結合能；
バクテリア細胞膜の選択的破壊能；
タンパク質分解酵素に対する抵抗性；
グラム陽性菌の細胞膜破壊能；および
グラム陽性菌由来のＬＴＡ（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ）またはＬＰＰ（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）への結合能。
本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩置換体の後述するような特徴を確認したが、これらの特徴に制限されるものではない。
本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩置換体がリポポリサッカライド（ＬＰＳ）に強い結合力を有することを確認した（実施例１）。
また、本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩置換体がバクテリア細胞膜に対する破壊能を有することを確認した（実施例６および実施例１１）。特に、赤血球細胞膜に対しては破壊能を示さないところ、安全性が立証された（実施例６）。
また、本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩置換体がタンパク質分解酵素に対する優れた抵抗性を有することを確認した（実施例７）。タンパク質分解酵素とともに処理しても、優れた抗菌活性を示すところ、タンパク質分解酵素に対して安定性を確保していることを確認した。
また、本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩置換体がグラム陽性菌の細胞壁の成分であるＬＴＡ（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ）とＬＰＰ（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）に優れた結合力を有することを確認した（実施例１２）。
また、本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩置換体が微々たる溶血活性を示すので、非常に毒性が低いことを確認した（実施例４）。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、敗血症の予防、改善または治療用組成物を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、敗血症の予防、改善または治療用薬学的／食品／健康食品／化粧品／医薬部外品／飼料組成物を提供する。
本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む敗血症の予防または治療方法を提供する。
更に、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の敗血症に対する予防、改善または治療用途を提供する。
しかも、本発明は、敗血症の予防、改善または治療用製剤の製造のための上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途を提供する。
本明細書において使用された用語「敗血症」とは、微生物に感染して全身に深刻な炎症反応が現れる状態をいう。体温が３８℃以上に上がる発熱症状あるいは３６℃以下に下がる低体温症、呼吸数が１分当たり２４回以上に増加（頻呼吸）、１分当たり９０回以上の心拍数（頻脈）、血液検査上の白血球数の増加あるいは顕著な減少の中で、２つ以上の症状を示す場合、これを全身性炎症反応症候群（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＳＩＲＳ）と呼ぶ。このような全身性炎症反応症候群が微生物の感染によるものである場合、敗血症という。身体の感染病巣から病原菌が持続的または断続的に血流に入り、複数の臓器の組織に定着して病巣を作り、激しい全身症状を示すものである。原因菌としては、ブドウ球菌、連鎖球菌、大腸菌、緑膿菌、結核菌、肺炎桿菌、真菌、嫌気性菌等があるが、これに制限されない。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、抗菌用組成物を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、抗菌用薬学的／食品／健康食品／化粧品／医薬部外品／飼料組成物を提供する。
本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む抗菌方法を提供する。
更に、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の抗菌用途を提供する。
しかも、本発明は、抗菌剤の製造のための上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途を提供する。
本明細書において使用された用語「抗菌」または「抗菌活性」とは、細菌やかびのような微生物に対して抵抗する性質を意味し、より詳細には、抗生物質等が細菌の成長または増殖を抑制する特性を意味する。
本明細書において使用された用語「抗菌用組成物」は、細菌やかびのような微生物の生育を阻害する活性を有する組成物であり、抗菌効果が要求される様々な分野において使用されるすべての形態が含まれ得、例えば、医薬品、化粧品、医薬部外品、食品添加剤または飼料添加剤等の形態でありうる。具体的に、医薬においては抗生剤や汚染防止剤のような目的で、食品においては防腐や抗菌目的で、農業においては抗菌、殺菌、消毒の目的で、化粧品や生活用品においてはふけ抑制用、水虫防止用、ワキガ臭抑制用、抗にきび用など微生物と直接関係のある製品に使用したり、清掃用洗浄剤や食器洗浄用洗浄剤等に防腐や抗菌または殺菌目的で使用することができ、このような目的にのみ限定されるものではない。
本発明の一具現例において、本発明による抗菌用組成物の抗菌対象は、グラム陰性菌、グラム陽性菌、抗生剤耐性グラム陰性菌および抗生剤耐性グラム陽性菌等が含まれる。
本明細書において使用された用語「グラム陰性菌（ｇｒａｍ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ）」は、グラム染色法で染色する際に赤色に染色される細菌を意味するもので、一般的に色素抵抗力が強く、界面活性剤の耐性が強い。本発明のグラム陰性菌には、エンドトキシン（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ）を保有するすべての種類のグラム陰性菌が含まれ、例えば、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属、モラクセラ（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）属、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）属、ステノトロホモナス（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ）属、ブデロビブリオ（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ）属、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）属菌株等が含まれ、これに制限されない。具体的に、グラム陰性菌には、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードモナス・エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）、シュードモナス・クロロラフィス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）、シュードモナス・ペルツシノゲナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｅｒｔｕｃｉｎｏｇｅｎａ）、シュードモナス・スタッツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ）、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、アシネトバクター・ルオフィイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｌｗｏｆｆｉｉ）、アシネトバクター・カルコアセティカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、アシネトバクター・ヘモリティカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、サルモネラ・エンテリカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ）、サルモネラ・ボンゴリ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｂｏｎｇｏｒｉ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、サルモネラ・ガリナルム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、サルモネラ・プロラーム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐｕｌｌｏｒｕｍ）、サルモネラ・ムバンダカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｂａｎｄａｋａ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、サルモネラ・トンプソン（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｈｏｍｐｓｏｎ）、サルモネラ・インファンティス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、サルモネラ・ダービー（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｄｅｒｂｙ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クレブシエラ・グラニュロマティス（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、クレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）、クレブシエラ・テリゲナ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ）、ナイセリア・ゴノロエエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）、シゲラ・ボイディイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ）、シゲラ・ディセンテリアエ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、シゲラ・フレクスネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ソンネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、モラクセラ・ラクナータ（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｌａｃｕｎａｔａ）、モラクセラ・ボビス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｂｏｖｉｓ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、ヘリコバクター・ヘイルマニ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ）、ヘリコバクター・フェリス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｌｉｓ）、ヘリコバクター・ムステラエ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｍｕｓｔｅｌａｅ）、ヘリコバクター・フェネリアエ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｎｅｌｌｉａｅ）、ヘリコバクター・ラッピニ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｒａｐｐｉｎｉ）、ヘリコバクター・ヘパティカス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｈｅｐａｔｉｃｕｓ）、ヘリコバクター・ビリス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｂｉｌｉｓ）、ヘリコバクター・プローラム（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｕｌｌｏｒｕｍ）、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）、ステノトロホモナス・ニトリティレデュセンス（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｎｉｔｒｉｔｉｒｅｄｕｃｅｎｓ）、ブデロビブリオ・バクテリオボルス（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ ｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、レジオネラ・アニーサ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ａｎｉｓａ）、レジオネラ・バーミンガメンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍｅｎｓｉｓ）、レジュネラ・ボゼマニー（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｂｏｚｅｍａｎｉｉ）、レジオネラ・シンシンナティエンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・ダモフィイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｄｕｍｏｆｆｉｉ）、レジオネラ・フィーレイイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｆｅｅｌｅｉｉ）、レジュネラ・ゴルマニー（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｇｏｒｍａｎｉｉ）、レジオネラ・ハッケリアエ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｈａｃｋｅｌｉａｅ）、レジオネラ・イスラエレンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・ジョルダニス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｊｏｒｄａｎｉｓ）、レジオネラ・ランシンゲンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｌａｎｓｉｎｇｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・ロングビーチアエ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｌｏｎｇｂｅａｃｈａｅ）、レジオネラ・マセアケルニイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｍａｃｅａｃｈｅｒｎｉｉ）、レジオネラ・ミクダデイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｍｉｃｄａｄｅｉ）、レジオネラ・オークリジェンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｏａｋｒｉｄｇｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・セントヘレンシ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｓａｉｎｔｈｅｌｅｎｓｉ）、レジオネラ・ツクソネンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｔｕｃｓｏｎｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・ワズワーシイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉｉ）等が含まれて、これに制限されない。
本明細書において使用された用語「グラム陽性菌（ｇｒａｍ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ）」は、グラム染色で群青色または紫色に染色される細菌であり、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属菌株等が含まれ、これに制限されない。具体的に、グラム陽性菌には、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・エピデルミジス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、バチルス・アンシラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）等が含まれ、これに制限されない。
本明細書において使用された用語「抗生剤耐性グラム陽性菌」には、例えば、Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ耐性グラム陽性菌、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ耐性グラム陽性菌、Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ耐性グラム陽性菌、Ｍａｃｒｏｌｉｄｅおよび多剤耐性グラム陽性菌等が含まれ、これに制限されない。
本明細書において使用された用語「抗生剤耐性グラム陰性菌」には、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ耐性グラム陰性菌、Ｃｏｌｉｓｔｉｎ耐性グラム陰性菌、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ耐性グラム陰性菌、Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ耐性グラム陰性菌、Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ耐性グラム陰性菌、Ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ耐性グラム陰性菌、┐ｅｎｅｍ耐性グラム陰性菌、拡張型β－ラクタム系抗生剤分解酵素（ＥＳＢＬ；Ｅｘｔｅｎｄｅｄ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｂｅｔａ Ｌａｃｔａｍａｓｅ）耐性グラム陰性菌、Ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ耐性グラム陰性菌および多剤耐性グラム陰性菌等が含まれ、これに制限されない。
本発明の一具現例において、上記抗菌用組成物の抗菌対象菌は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ１、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓよりなる群から選ばれた１以上でありうる。
また、本発明の一具現例において、上記抗菌用組成物の抗菌対象菌は、拡張型β－ラクタム系抗生剤分解酵素（ＥＳＢＬ；Ｅｘｔｅｎｄｅｄ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｂｅｔａ Ｌａｃｔａｍａｓｅ）耐性菌、カルバペネム耐性菌およびコリスチン耐性菌よりなる群から選ばれた１以上の抗生剤耐性菌でありうる。例えば、上記抗生剤耐性菌は、ＥＳＢＬ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ＣＲ）－Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、ＣＲ－Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ＣＲ－Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、およびＣｏｌｉｓｔｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉでありうるが、これに制限されない。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、感染性疾患の予防、改善または治療用組成物を提供する。
また、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、感染性疾患の予防、改善または治療用薬学的／食品／健康食品／化粧品／医薬部外品／飼料組成物を提供する。
本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む感染性疾患の予防または治療方法を提供する。
更に、本発明は、上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の感染性疾患に対する予防、改善または治療用途を提供する。
しかも、本発明は、感染性疾患の予防、改善または治療用製剤の製造のための上記配列一般式で表されるポリペプチドまたは上記配列一般式で表されるポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途を提供する。
本明細書において使用された用語「感染性疾患」は、ウイルス、細菌、かび、寄生虫のように病気を起こす病原体が動物やヒトに伝播、侵入して起こす疾患を意味し、本発明の目的上、グラム陰性菌またはグラム陽性菌によって誘発されるすべての感染性疾患を意味する。
例えば、上記感染性疾患には、肺炎、腹膜炎、脳膜炎、創傷感染、骨関節炎、胆嚢炎、尿路感染症、脳髄膜炎、心内膜炎、心筋炎、心外膜炎、関節炎、 咽頭炎 、淋病、細菌性疫痢、腸炎、結膜炎、胃炎、中耳炎、膀胱炎、リンパ管炎等のグラム陰性菌によって誘発される感染性疾患が含まれるか、これに制限されない。
例えば、上記感染性疾患には、咽喉炎、膿痂疹、リウマチ熱、糸球体腎炎、新生児敗血症、髄膜炎、咽頭炎、肺炎、心内膜炎、 猩紅熱 、皮膚軟部組織感染、深部軟組織感染、膿胸および膣炎等のグラム陽性菌によって誘発される感染性疾患が含まれるか、これに制限されない。
本発明の薬学的組成物は、薬学的組成物の製造に通常的に使用する適切な担体、賦形剤および希釈剤をさらに含むことができる。本発明による薬学的組成物は、それぞれ、通常の方法により散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾル等の経口型剤形、外用剤、坐剤および滅菌注射溶液の形態で剤形化して使用することができる。
本発明の薬学的組成物に含まれ得る担体、賦形剤および希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアガム、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾアート、プロピルヒドロキシベンゾアート、タルク、マグネシウムステアレートおよび鉱物油が挙げられる。
本発明の薬学的組成物を製剤化する場合には、通常的に使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤等の希釈剤または賦形剤を使用して調製される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等が含まれており、このような固形製剤は、上記有効成分に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、カルシウムカーボネート、スクロース、ラクトース、ゼラチン等を混ぜて調製される。また、単純な賦形剤以外にマグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤も使用される。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤等が該当するが、頻用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤等が含まれ得る。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレートのような注射可能なエステル等を使用できる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチン等を使用できる。
本明細書において使用された用語「予防」とは、本発明による組成物の投与によって疾患による症状を遮断したり、抑制または遅延させるすべての行為を意味する。
本明細書において使用された用語「治療」または「改善」とは、本発明による組成物の投与によって症状が好転したり有益に変更されるすべての行為を意味する。
本明細書において使用される用語「投与」は、任意の適切な方法で個体に所定の本発明の組成物を提供することを意味する。
本明細書において使用された用語「個体」とは、病気の予防または治療を必要とする対象を意味する。例えば、上記個体は、ヒト、または非ヒトである霊長類、マウス（ｍｏｕｓｅ）、犬、猫、馬、羊および牛を含む哺乳類でありうる。
本発明による薬学的組成物は、薬学的に有効な量で投与される。上記「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット／リスクの割合で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量水準は、患者の疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路および排出比率、治療期間、同時使用される薬物を含む要素およびその他医学分野によく知られた要素によって決定することができる。好ましい投与量は、個体の状態および体重、病気の程度、薬物形態、投与経路および期間によって選択することができる。具体的な例として、上記薬学的組成物は、０．００１～１０００ ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１０ｍｇ／ｋｇまたは０．１～１ｍｇ／ｋｇの量を１日に１回～数回に分けて投与することができる。上記した要素を全部考慮して副作用なしに最小限の量で最大効果を得ることができる量を投与することが重要であり、これは、当業者によって決定することができる。具体的に、本発明による薬学的組成物の有効量は、患者の年齢、性別、状態、体重、体内での活性成分の吸収度、不活性率および排泄速度、病気の種類、併用される薬物によって変わることができる。
本発明の薬学的組成物は、個体に様々な経路で投与することができる。投与のすべての方式は予想されることができるが、例えば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜または脳血管内注射によって投与することができる。
本発明による薬学的組成物は、上記有効成分以外に敗血症または敗血症性ショック；抗菌；感染性疾患の改善、予防または治療効果を有する公知の物質を１つ以上さらに含むことができる。
本発明による薬学的組成物は、上記有効成分以外に、気管支拡張剤、抗ヒスタミン剤または消炎鎮痛剤をさらに含むことができる。
例えば、上記気管支拡張剤としては、β効能剤、抗コリン剤、メチルキサンチン等を使用でき、上記抗ヒスタミン剤としては、アクリバスチン（ａｃｒｉｖａｓｔｉｎｅ）、セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、デスロラタジン（ｄｅｓｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、フェキソフェナジン（ｆｅｘｏｆｅｎａｄｉｎｅ）、レボセチリジン（ｌｅｖｏｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、ロラタジン（ｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、ミゾラスチン（ｍｉｚｏｌａｓｔｉｎｅ）、アリメマジン（ａｌｉｍｅｍａｚｉｎｅ）、 クロセチリジン（ｃｈｌｏｒｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、クレマスチン（ｃｌｅｍａｓｔｉｎｅ）、シプロヘプタジン（ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ）、ヒドロキシジン（ｈｙｄｒｏｘｙｚｉｎｅ）、ケトチフェン（ｋｅｔｏｔｉｆｅｎ）、プロメタジン（ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ）等を使用でき、上記消炎鎮痛剤としては、アスピリン（ａｓｐｉｒｉｎ）、ジクロフェナク（ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、フェノプロフェン（ｆｅｎｏｐｒｏｆｅｎ）、フルルビプロフェン（ｆｌｕｒｂｉｐｒｏｆｅｎ）、イブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）、ケトプロフェン（ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ）、ナプロキセン（ｎａｐｒｏｘｅｎ）、ピロキシカム（ｐｉｒｏｘｉｃａｍ）、スリンダク（ｓｕｌｉｎｄａｃ）、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、バルデコキシブ（ｖａｌｄｅｃｏｘｉｂ）、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）等を使用できる。
本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩のＬＰＳとの結合能を測定して、本発明によるポリペプチドおよびその塩がＬＰＳとの結合力が高いことを確認した（実施例１）。
また、本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩が、優れた抗菌活性を示すことを確認した（実施例２、実施例３および実施例１０）。
また、本発明の具体的な実施例では、本発明によるポリペプチドとその塩が、強い抗生効果を示すことを確認した（実施例８および実施例９）。
また、本発明は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。
本明細書において使用された用語「ポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」は、単鎖または二本鎖の形態で存在するデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドの重合体である。ＲＮＡゲノム配列、ＤＮＡ（ｇＤＮＡおよびｃＤＮＡ）およびこれから転写されるＲＮＡ配列を包括し、特に別の言及がない限り、天然のポリヌクレオチドの類似体を含む。
上記ポリヌクレオチドは、上記ヌクレオチド配列だけでなく、その配列に相補的な（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）配列も含む。上記相補的な配列は、完ぺきに相補的な配列だけでなく、実質的に相補的な配列も含む。これは、当業界における公知の厳しい条件（ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）下で、上記ヌクレオチド配列とハイブリダイゼーションしうる配列を意味する。
また、上記ポリヌクレオチドは変形が可能である。上記変形は、ヌクレオチドの追加、欠失または非保存的置換または保存的置換を含む。上記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、上記ヌクレオチド配列に対して実質的な同一性を示すヌクレオチド配列も含むものと解釈される。上記の実質的な同一性は、上記ヌクレオチド配列と任意の他の配列を最大限対応するようにアラインし、当業界において一般的に用いられるアルゴリズムを用いてアラインされた配列を分析した場合に、最小８０％の相同性、最小９０％の相同性または最小９５％の相同性を示す配列でありうる。
また、本発明は、上記ポリヌクレオチドを含む組換えベクターを提供する。
本明細書において使用された用語「ベクター（ｖｅｃｔｏｒ）」は、宿主細胞で目的遺伝子を発現させるための手段を意味する。例えば、プラスミドベクター、コスミドベクターおよびバクテリオファージベクター、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクターのようなウイルスベクターを含む。上記組換えベクターとして使用可能なベクターは、当業界において頻用されるプラスミド（例えば、ｐＳＣ１０１、ｐＧＶ１１０６、ｐＡＣＹＣ１７７、ＣｏｌＥ１、ｐＫＴ２３０、ｐＭＥ２９０、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ８／９、ｐＵＣ６、ｐＢＤ９、ｐＨＣ７９、ｐＩＪ６１、ｐＬＡＦＲ１、ｐＨＶ１４、ｐＧＥＸシリーズ、ｐＥＴシリーズおよびｐＵＣ１９等）、ファージ（例えば、λλλλΔおよびＭ１３等）またはウイルス（例えば、ＣＭＶ、ＳＶ４０等）を操作して製作することができる。
上記組換えベクターにおいて上記ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されうる。本明細書において使用された用語「作動可能に連結された（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」は、ヌクレオチド発現調節配列（例えば、プロモーター配列）と他のヌクレオチド配列との間の機能的な結合を意味する。したがって、これによって、上記調節配列は、上記他のヌクレオチド配列の転写および／または解読を調節することができる。
上記組換えベクターは、典型的にクローニングのためのベクターまたは発現のためのベクターとして構築することができる。上記発現用ベクターは、当業界において植物、動物または微生物で外来のタンパク質を発現するのに用いられる通常のものを使用できる。上記組換えベクターは、当業界における公知の様々な方法を用いて構築することができる。
また、本発明は、上記組換えベクターで形質転換された宿主細胞を提供する。
宿主細胞は、当業界における公知のいかなる宿主細胞も用いることができ、原核細胞としては、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９、Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１、Ｅ．ｃｏｌｉ ＲＲ１、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＥ３９２、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ １７７６、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０、バチルス・サブティリス、バチルス・チューリンゲンシスのようなバチルス属菌株、そしてサルモネラ・チフィムリウム、セラチア・マルセッセンスおよび様々なシュードモナス種のような腸内菌と菌株等があり、真核細胞に形質転換させる場合には、宿主細胞として、酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、昆虫細胞、植物細胞および動物細胞、例えば、ＳＰ２／０、ＣＨＯ（Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ）Ｋ１、ＣＨＯ ＤＧ４４、ＰＥＲ．Ｃ６、Ｗ１３８、ＢＨＫ、ＣＯＳ－７、２９３、ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ７、３Ｔ３、ＲＩＮおよびＭＤＣＫ細胞株等を用いることができる。
本発明は、上記宿主細胞を培養する段階を含む、本発明による配列一般式で表されるポリペプチドの製造方法を提供する。
上記ポリヌクレオチドまたはこれを含む組換えベクターの宿主細胞内への挿入は、当業界において広く知られた挿入方法を使用できる。上記運搬方法は、例えば、宿主細胞が原核細胞である場合、ＣａＣｌ２方法または電気穿孔法等を使用でき、宿主細胞が真核細胞である場合には、微細注入法、カルシウムホスフェート沈殿法、電気穿孔法、リポソーム媒介形質感染法および遺伝子ボンバードメント等を使用できるが、これに限定されない。
上記形質転換された宿主細胞を選別する方法は、選択標識によって発現する表現型を用いて、当業界において広く知られた方法により容易に実施することができる。例えば、上記選択標識が特定抗生剤耐性遺伝子である場合には、上記抗生剤が含有された培地で形質転換体を培養することによって、形質転換体を容易に選別することができる。
以下では、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかし、下記の実施例は、本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎず、下記実施例により本発明の内容が限定されるものではない。
実施例１：Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１に対するＡＤＫ由来のペプチド候補のＬＰＳ結合能の測定
ＦＰ１（ＡＤＫ ４４－５４）をＷＴ（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ）で表記し、ＷＴにおいて様々な部分に対して点突然変異（ｐｏｉｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ）したペプチドを製作した（ＦＰ３、ＦＰ５、ＦＰ６、およびＦＰ９）。ＦＰ３の残基配列において、ＬＰＳとの相互作用を高めるために、ＦＰ３とＬＰＳ結合モデルに基づいてペプチドを設計し（ＦＰ１２－ＮＨ２およびＦＰ１３－ＮＨ２）、非天然アミノ酸とアミノ酸異性体（ａｌｌｏｍｅｒｉｃ Ｄ型アミノ酸）を追加導入してペプチドを設計した（ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ－１３－９ａ、ａｌｌＤ ＦＰ－１３－９ｗ、ａｌｌＤ ＦＰ－１３－９ｋ、およびａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ））。また、Ｎ－末端ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）したペプチド（ＰＥＧ－ａｌｌｄ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ））を追加設計して、（株）アニジェンから合成後に提供を受けた。提供を受けたそれぞれのペプチドとリポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）、２つの物質間のＢｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ（Ｋｄ）を測定するＩｓｏｔｈｅｒｍａｌ Ｔｉｔｒａｔｉｏｎ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ（ＩＴＣ）を用いてＬＰＳとのｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙを確認した。
具体的に、ペプチドとＬＰＳ間の結合力（Ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ（Ｋｄ））の分析方法は、以下の通りである。
Ｍａｌｖｅｒｎ ｍｉｃｒｏｃａｌ ｐｅａｑ－ｉｔｃ ｃｅｌｌ装備を使用して測定し、ＬＰＳとのｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎを確認するために、以下のような前処理を行った。Ｃｅｌｌのサンプル量および形態は、３００μｌ、ｃｏｉｎ－ｓｈａｐｅｄ、ｆｉｘｅｄ－ｉｎ－ｐｌａｃｅ；シリンジー回転率は、１２００ＲＰＭ；そして温度は、３０℃、３５℃、２５℃とした。
試験前にあらかじめＰＢＳでＬＰＳとｐｅｐｔｉｄｅを希釈させて、ＬＰＳ ２ｍＭとｐｅｐｔｉｄｅ ０．２ｍＭを作った。Ｗａｓｈが終わったＩＴＣ機器のｃｅｌｌ中にｐｅｐｔｉｄｅ ３００μＬを入れ、ｓｙｒｉｎｇｅには、ＬＰＳ ４０μＬを入れた。ＩＴＣの測定条件（温度、ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ回数）を設定した後、ｓｙｒｉｎｇｅをｃｅｌｌ中に差し、ＩＴＣ測定を始めた。測定が完了すると、分析を通じてＬＰＳとｐｅｐｔｉｄｅのＫｄ値を算出した。
測定結果、ＦＰ３、ＦＰ５、ＦＰ６、ＦＰ９、ＦＰ１２－ＮＨ２、ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ－１３－９ａ、ａｌｌＤ ＦＰ－１３－９ｗ、およびａｌｌＤ ＦＰ－１３－９ｋ、およびａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）のすべての種類のペプチドにおいてＬＰＳ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙがあることが確認され、ＦＰ１（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ，ＷＴ）と同等またはそれ以上の強いＬＰＳ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙを示すことが分かった。
Figure 2022521543000002
Figure 2022521543000003
（上記表１および表２で、ａｌｌＤは、Ｄ型アミノ酸を意味する。）
（上記表１および表２で、（ＡｃＯＨ）は、ペプチドのＮ末端から９番目のアミノ酸の末端のＴｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＴＦＡ）をアセテート塩で置換した塩置換体を意味する。）
（上記表２で、ＰＥＧは、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）を意味する。ペプチドＮ－末端ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎの情報：ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、Ｍｗ（分子量）＝３８５．４Ｄａ、Ｆｍｏｃ－ＮＨ－ＰＥＧ２－ＣＨ２ＣＯＯＨ）
実施例２：ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ ２ と市販中の抗生剤４種のグラム陽・陰性標準菌株に対する抗菌活性の比較評価
実施例１で設計したペプチドのうち、ＬＰＳに強いａｆｆｉｎｉｔｙを確認したペプチド１種（ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２）と市販中の抗生剤４種のグラム陽性・陰性標準菌株に対する抗菌活性を比較確認した。
抗生剤４種（Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ、Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ、Ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ、Ｉｍｉｐｅｎｅｍ）とａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）ペプチドの抗菌活性を比較するために、グラム陰性およびグラム陽性標準菌株（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ１、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、およびＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する最小阻害濃度（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ、ＭＩＣ５０とＭＩＣ８０）の測定を通した抗菌活性実験法で評価した。
より具体的に、９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに培地１００μＬと１列目に培地２００μＬと抗生剤およびペプチドを分注した。１列目から１１列目まで１／２ずつｓｅｒｉａｌ ｄｉｌｕｔｉｏｎし、あらかじめ培養したグラム陰性およびグラム陽性バクテリアを希釈して（希釈時にＯＤ６００ｎｍの値は約０．００２５）、各ｗｅｌｌに分注した。Ｐｌａｔｅを３７℃インキュベーターで４時間培養した後、ＯＤ６００ｎｍで測定した。ｂｌａｎｋ（培地と菌のみが入ったｗｅｌｌ）のＯＤ６００ｎｍの値で菌の生長率を１００％で算定し、生長抑制率が５０％のＯＤ６００ｎｍ値を有する抗生剤およびペプチドの濃度を確認して、ＭＩＣ５０で算出し、生長抑制率８０％は、ＭＩＣ８０に該当する濃度（μｇ／ｍｌ）で算出した。
その結果、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）ペプチドは、市販中の抗生剤４種（Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ、Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ、Ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ、Ｉｍｉｐｅｎｅｍ）と比較して、同等またはさらに優れた程度でグラム陽性・陰性菌株７種全体に対して抗菌活性を示すことを確認することができた。
Figure 2022521543000004
実施例３：ペプチドおよび抗生剤３種の抗生剤耐性バクテリア（ＥＳＢＬおよびカルバペネム耐性バクテリア）に対する抗菌活性の比較評価
ペプチド９種を対象に抗菌活性を分析するために、ＡＭＰ（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、ｉｍｉｐｅｎｅｍ、ｃｏｌｉｓｔｉｎと５種の抗生剤耐性バクテリア（ＥＳＢＬ－Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃｏｌｉｓｔｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）に対する抗菌活性を確認した。
最小阻害濃度（ＭＩＣ５０、Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ５０、５０％の菌を死滅させる最小濃度）の測定を通した抗菌活性実験法で評価した。
より具体的に、９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに培地１００μＬと１列目に培地２００μＬと抗生剤およびペプチドを分注した。１列目から１１列目まで１／２ずつｓｅｒｉａｌ ｄｉｌｕｔｉｏｎし、あらかじめ培養した５種の抗生剤耐性バクテリア（ＥＳＢＬ－Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃｏｌｉｓｔｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）を希釈して（希釈時にＯＤ６００ｎｍの値は約０．００２５）、各ｗｅｌｌに分注した。Ｐｌａｔｅを３７℃インキュベーターで４時間培養した後、ＯＤ６００ｎｍで測定した。ｂｌａｎｋ（培地と菌のみが入ったｗｅｌｌ）のＯＤ６００ｎｍの値で菌の生長率を１００％で算定し、生長率が５０％のＯＤ６００ｎｍの値を有する抗生剤およびペプチドの濃度を確認して、ＭＩＣ５０値を算出した。
その結果、本発明によるペプチドにおいて比較抗生剤３種（ＡＭＰ（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、ｉｍｉｐｅｎｅｍ、ｃｏｌｉｓｔｉｎ）に比べて抗菌活性が改善されたことを確認した。特に、これらの抗生剤に対する耐性菌（特に、カルバペネム、コリスチン耐性菌株）に対しても抗菌活性があることを確認した。
Figure 2022521543000005
実施例４：ペプチドの溶血活性の測定
ヒトの赤血球溶血活性の測定を通してペプチドの毒性の有無を判別するために、以下のような実験を実施した。
ヒトの赤血球をＰＢＳで希釈した後、１０分間遠心分離して３回洗浄した。ＰＢＳで希釈した８．０％赤血球溶液を９６ウェルマイクロ滴定プレートに１００μｌずつローディングした後、ペプチド溶液１００μｌずつ混ぜた後、３７℃で１時間培養した後、９６ウェルマイクロ滴定プレートを５分間遠心分離した。上澄み液を１００μｌずつ取って、他の９６ウェルマイクロ滴定プレートに移した後、４０５ｎｍでの吸光度を測定した。この際、０．１％トリトンＸ－１００で処理した場合の値を１００％溶血で計算し、ペプチドの溶血活性を％ｈｅｍｏｌｙｓｉｓとして下記数式１によって算出した。
ここで、Ａは、ペプチド溶液における４０５ｎｍの吸光度であり、Ｂは、０．１％トリトンＸ－１００における４０５ｎｍの吸光度であり、Ｃは、ＰＢＳ溶液における４０５ｎｍの吸光度を示す。
この際、対照群のペプチドとして強い抗菌活性を有すると同時に、強い溶血活性を示す抗菌ペプチドであるメリチンを使用した。
Figure 2022521543000006
その結果、図１に示されたように、本発明によるペプチドは、１００ｕＭの高濃度でもほとんど溶血活性を示さなくて、毒性が低いことが分かった。反面、対照群であるメリチンは、低い濃度でも１００％溶血活性を示すことで、毒性が非常に高いことが分かった。
実施例５：円偏光二色性分光法を用いたペプチド２次構造の測定
ＦＰ１２－ＮＨ２とＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドの２次構造を測定するために、以下のようにして実施した。
生体膜類似環境でのペプチドの２次構造を研究するために、水溶液、１００ｍＭ ＳＤＳ、５０ｍＭ ＤＰＣでペプチド試料当たり１００μＭになるように、溶媒０．３ｍｌに溶かした。１ｍｍ ｐａｔｈ ｌｅｎｇｔｈのｃｅｌｌを用いてＪａｓｃｏ Ｊ－７２０円偏光二色性分光器で１００ｎｍ／ｍｉｎの注射速度で０．１ｎｍごとに吸収値が得られ、６回の注射が平均になって測定値を得た。
円偏光二色性分光法は、ポリペプチドの主骨格の２次構造によって特徴的な吸収形態を示す。ＦＰ１２－ＮＨ２とＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドは、水溶液では２次構造を有しないが、生体膜類似環境であるＤＰＣ ｍｉｃｅｌｌｅでは、α－ｈｅｌｉｘ構造の特徴的な吸収形態である２０８、２２２ｎｍ近くの波長で２つの最小点を有した（図２）。
上記結果から、これらのペプチドは、バクテリアの生体膜においてα－ｈｅｌｉｘ構造を形成することで、抗菌活性を示すものであることを予測することができる。反面、Ｄ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ置換をしたａｌｌ＿Ｄ（ＦＰ１２－ＮＨ２）、ａｌｌ＿Ｄ（ＦＰ１３－ＮＨ２）ペプチドは、正確に母体ペプチドの鏡像を有することが分かった。母体ペプチドのＣＤ ｓｐｅｃｔｒｕｍがｒｉｇｈｔ－ｈａｎｄｅｄ α－ｈｅｌｉｘ（右巻きアルファヘリックス）構造を有することとは反対に、ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙを有することで、ｌｅｆｔ－ｈａｎｄｅｄ α－ｈｅｌｉｘ構造を有することを確認した（図２）。
実施例６：グラム陰性バクテリア細胞膜と赤血球細胞膜を模倣するリポソームに対するペプチドの破壊能の測定
ＦＰ１２－ＮＨ２、ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドを対象に作用機序を研究するために、バクテリア細胞膜と赤血球細胞膜を模倣するリポソームに対するペプチドの破壊能を測定した。
ペプチドの抗菌作用がバクテリアの細胞膜を標的として細菌を殺す作用機序を示すものであるかを確認するために、蛍光染料（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｄｙｅ）であるカルセイン（ｃａｌｃｅｉｎ）を捕獲させたグラム陰性バクテリアの細胞膜を模倣するＥＹＰＣ／ＥＹＰＧ（７：３、ｗ／ｗ）で構成されたリポソームとヒトの赤血球を模倣するＥＹＰＣ／ＣＨ（１：１０、ｗ／ｗ）を製作して、以下の蛍光染料放出実験（ｄｙｅ ｌｅａｋａｇｅ ａｓｓａｙ）を行った。
ＥＹＰＧは、ｅｇｇ ｙｏｌｋ Ｌ－α－ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ－ＤＬ－ｇｌｙｃｅｒｏｌの略語であり、ＥＹＰＣは、ｅｇｇ ｙｏｌｋ １，２－ｄｉａｃｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅの略語である。ＣＨは、コレステロールの略字である。各構成成分の含量に基づいて構成されたリン脂質をクロロホルムに溶かした後、ｒｏｔａｒｙ ｅｖａｐｏｒａｔｏｒでクロロホルムを除去し、一晩中凍結乾燥させた。その後、乾燥した脂質フィルムをトリス－緩衝溶液にカルセインを溶かして、液体窒素で冷凍－解凍を繰り返した後、ｅｘｔｒｕｄｅｒ装置を用いてカルセインを捕獲したリポソームを製作した。しかして、Ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｅｒ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＲＦ ５３０１ ＰＣ ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｅｒ，Ｊａｐａｎ）のｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈを４９０ｎｍに、ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈを５２０ｎｍに合わせ、リポソームにペプチドを投与して、１００％ ｄｙｅ ｌｅａｋａｇｅは、０．０１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００を入れたときの蛍光強度で表示して、相対的な染料放出を測定した。
その結果を図３に示した。図３の上段は、ペプチドによる蛍光染料（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｄｙｅ）カルセイン（ｃａｌｃｅｉｎ）を捕獲させた、バクテリア細胞を模倣するＥＹＰＣ／ＥＹＰＧ（７：３、ｗ／ｗ）リポソームに対する％染料放出（ｄｙｅ ｌｅａｋａｇｅ）をペプチド濃度によって示すものであり、ここでは、対照群（細胞膜標的の作用機序を示すペプチド）として抗菌ペプチドｍｅｌｉｔｔｉｎを使用した。図３の下段は、ペプチドによる蛍光染料（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｄｙｅ）カルセイン（ｃａｌｃｅｉｎ）を捕獲させたヒトの赤血球を模倣する中性脂質であるＥＹＰＣ／ＣＨ（１０：１、ｗ／ｗ）リポソームに対する％染料放出（ｄｙｅ ｌｅａｋａｇｅ）をペプチド濃度によって示すものであり、ここでは、対照群（細胞膜標的の作用機序を示すペプチド）として抗菌ペプチドｍｅｌｉｔｔｉｎを使用した。
図３に示されたように、対照ペプチドであるｍｅｌｉｔｔｉｎは、低い濃度でもバクテリアの細胞膜を模倣するＰＣ／ＰＧ（７：３、ｗ／ｗ）で構成されたリポソームからカルセインを放出させた。ヒトの赤血球を模倣するＰＣ／ＣＨ（１０：１、ｗ／ｗ）リポソームにおいてＭｅｌｉｔｔｉｎが０．２５μＭで１００％に近いカルセイン放出を起こして、全くバクテリア細胞に対する選択性を示さなく、毒性の非常に高いことを予測することができる。
反面、ＦＰ１２－ＮＨ２、ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドは、バクテリア細胞膜を模倣するＰＣ／ＰＧ（７：３、ｗ／ｗ）リポソームに対して大きい染料放出を起こして、バクテリア細胞膜破壊能が高いことが分かった。ＦＰ１２－ＮＨ２、ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドは、選択的に哺乳動物の赤血球細胞膜を模倣するＰＣ／ＣＨ（１：１、ｗ／ｗ）リポソームに対しては、ほとんど染料放出を示さなくて、低い溶血活性と一致する結果を示した。したがって、本発明によるペプチドは、バクテリア細胞膜を選択的に破壊する作用機序を有することが分かった。
実施例７：ペプチドのタンパク質分解酵素抵抗性の測定を通した安定性の評価
設計されたａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドのタンパク質分解酵素抵抗性の測定を通して血液内安定性を確認した。
より具体的に、３つのタンパク質分解酵素であるｔｒｙｐｓｉｎ、ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｋ、ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎに対する抵抗性を確認するために、タンパク質分解酵素を処理した後、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉおよびＳ．ａｕｒｅｕｓに対するペプチドの抗菌活性を測定した。
その結果、非天然アミノ酸であるＤ－ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ置換を経て設計されたａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドは、これらのタンパク質分解酵素に対する抵抗性が非常に増進されたことを確認することができた。
表５でのＥ．ｃｏｌｉ、Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉに対する実験で、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドは、タンパク質分解酵素を処理しない場合と比較して、類似しているか、または２～４倍程度減少されることに過ぎない抗菌活性を示すことによって、安定性の非常に高い高機能性ペプチドであることを確認した。
また、表６でのＳ．ａｕｒｅｕｓに対する実験でも、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドは、安定性の非常に高い高機能性ペプチドであることを確認した。
Figure 2022521543000007
Figure 2022521543000008
実施例８：標準菌株Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１と臨床菌株２種に対するａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ ２ の抗生効果
ペプチドの抗菌活性の評価のために、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１（標準菌株）、Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＳＢＬ）とカルバペネム耐性バクテリア（Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍｍａｎｉｉ（ＣＲＡＢ））に対するペプチドの抗生効果および治療効果を動物実験を通じて検証した。
Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１（標準菌株）以外に、Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＳＢＬ）とカルバペネム耐性バクテリア（ＣＲＡＢ）は、高麗大学校の感染内科で重症感染症患者から採取した抗生剤耐性菌の分譲を受けた。実験菌は、形態学的に同じ１０～２０個のコロニーを採取して、好適な液体培地（Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ）１０ｍｌが入っている試験管に接種して、３７℃インキュベーターで１２時間培養した。培養液は、１ｍｌずつ滅菌されたクライオチューブーに入れて、－８０℃で保管した。
試験菌株は、３７℃インキュベーターで２日間培養後［ＢＡＰ（ｂｌｏｏｄ ａｇａｒ ｐｌａｔｅ）］、ＭＨＢ（Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ）液体培地に接種菌株量（１×１０８または８×１０７）に合わせて準備し、６週齢マウスの腹腔内に（１ｍＬ）注入して、感染を誘導した。各実験グループにマウス（１グループ当たりｎ＝５または６）を区分し、ＨＡＲＴＭＡＮＮ’Ｓ ＤＥＸ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｖｅｈｉｃｌｅ）と混合したａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２をマウス腹腔内に０時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間で６回に分けて接種し、１２時間間隔で３日生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ）を観察した。
その結果、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ１、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＥＳＢＬ）、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉをそれぞれ感染させた敗血症動物モデルに１ｋｇ当たり合計３ｍｇから１２ｍｇの濃度範囲で生存率が増加（抗生効果）することを確認した（図４）。実施例１で設計したペプチドが、標準菌株および臨床菌株感染動物モデルでもｉｎ ｖｉｖｏで抗生および抗敗血症効果を示すことを検証したものである。
実施例９：ペプチドのアセテート塩置換体
ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２のアセテート塩置換体の治療効果および薬物学的効果を確認するために、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（標準菌株およびＥＳＢＬ）菌株をそれぞれ腹腔投与して誘導した敗血症動物モデルあるいは正常マウスにペプチドａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）を処理して、塩置換体の抗生効果と、毒性、抗炎症サイトカインＩＬ－６の抑制活性をＴｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＴＦＡ）末端の同一ペプチドと比較した。
実験方法は、以下の通りである：
６週齢の雌性平均体重２５ｇのＩＣＲマウス（ＳＰＦ ｍｏｕｓｅ、サムタコ社）を実験動物として使用した。実験動物は、滅菌飼料と水を提供し、ケージ別に１０匹未満の動物を飼育し、昼夜周期は１２時間とした。
試験菌株は、３７℃インキュベーターで２日間培養後［ＢＡＰ（ｂｌｏｏｄ ａｇａｒ ｐｌａｔｅ）］、ＭＨＢ（Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ）液体培地に接種菌株量（１×１０８）に合わせて準備し、６週齢マウスの腹腔内に（１×１０８／２００μｌ）注入して感染を誘導した。各実験グループにマウス（１グループ当たりｎ＝５または６）を区分し、ＨＡＲＴＭＡＮＮ’Ｓ ＤＥＸ ｓｏｌ（ｖｅｈｉｃｌｅ）と混合したａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＴＦＡ）とａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）をマウス腹腔内に０時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間で６回に分けて接種し、１２時間間隔で生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ）を観察した。
ｉｎ ｖｉｖｏ毒性評価のために、各実験グループにマウス（１グループ当たりｎ＝５または６）を区分し、ＨＡＲＴＭＡＮＮ’Ｓ ＤＥＸ ｓｏｌ（ｖｅｈｉｃｌｅ）と混合したａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＴＦＡ）、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）をマウス腹腔内に０時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間で６回に分けて接種し、１２時間間隔、７２時間生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ）を観察した。
また、ＢＭＤＣ（骨髄由来の樹状細胞）に対するＩＬ－６分泌試験は、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＴＦＡ）、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）のＬＰＳ媒介免疫反応の評価を、ペプチド処理３０分後にＬＰＳにより分泌されるサイトカインを比較分析することによって行った。
その結果、敗血症動物モデル（Ｅ．ｃｏｌｉ ＥＳＢＬ誘発モデル）に対する抗生効果および毒性試験の結果、ＥＤ５０が約１ｍｐｋ（ｍｇ／ｋｇ）、ＬＤ５０が８０ｍｐｋで希望する反応を示すための薬物用量に対する毒性を示す薬物用量の比（治療指数、ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｄｅｘ＝ＬＤ５０／ＥＤ５０）が８０を上回るので、十分な安全域（ｓａｆｅｔｙ ｍａｒｇｉｎ）を確保するこが予想されて、優れた抗敗血症の新薬の開発可能性があることを確認した。また、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２（ＡｃＯＨ）が、ＬＰＳにより増加したＩＬ－６の分泌を顕著に減少させることを確認した（図５ａ～図５ｃ）。
実施例１０：ａｌｌＤ－ｔｙｐｅペプチドのグラム陽性バクテリア３種（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ２種およびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）に対する抗菌活性の評価
ａｌｌＤ－ｔｙｐｅペプチドのグラム陽性菌に対する抗菌活性を分析するために、グラム陽性バクテリア３種（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ２種およびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）に対する抗菌活性を確認した。
最小阻害濃度（ＭＩＣ５０、５０％の菌を死滅させる最小濃度；ＭＩＣ１００、菌を完全死滅させるのに要する最小濃度）の測定のために、抗菌活性実験法で評価した。
より具体的に、９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに培地１００μＬと１列目に培地２００μＬと抗生剤およびペプチドを分注した。１列目から１１列目まで１／２ずつｓｅｒｉａｌ ｄｉｌｕｔｉｏｎし、あらかじめ培養した３種のグラム陽性バクテリア（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ２種およびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）を希釈して（希釈時にＯＤ６００ｎｍの値は約０．００２５）、各ｗｅｌｌに分注した。Ｐｌａｔｅを３７℃インキュベーターで４時間培養した後、ＯＤ６００ｎｍで測定した。ｂｌａｎｋ（培地と菌のみが入ったｗｅｌｌ）のＯＤ６００ｎｍの値で菌の生長率を１００％で算定し、生長率が５０％あるいは１００％のＯＤ６００ｎｍの値を有するペプチドの濃度を確認して、ＭＩＣ５０とＭＩＣ１００値を算出した。
その結果、グラム陽性バクテリアに対する抗菌活性分析の結果、非天然アミノ酸とアミノ酸異性体（ａｌｌｏｍｅｒｉｃ Ｄ－ｔｙｐｅアミノ酸）を追加導入した３種のペプチド（ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ２１－ＮＨ２）が、Ｍｅｌｉｔｔｉｎと同等な水準でグラム陽性バクテリアに対する優れた抗菌活性を示すことを確認した。
Figure 2022521543000009
実施例１１：グラム陽性バクテリア細胞膜を模倣するリポソームに対するペプチドの破壊能の測定
ＦＰ１２－ＮＨ２、ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドを対象に作用機序を研究するために、バクテリア細胞膜を模倣するリポソームに対するペプチドの破壊能を測定した。
ペプチドの抗菌作用がグラム陽性バクテリアの細胞膜を標的にしてバクテリアを殺す作用機序を示すものであるかを確認する実験を進めるために、蛍光染料（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｄｙｅ）であるカルセイン（ｃａｌｃｅｉｎ）を捕獲させたグラム陽性バクテリアの細胞膜を模倣するＥＹＰＧ／ＥＹＰＣ（６：４、ｗ／ｗ）で構成されたリポソームを製作して、蛍光染料放出実験（ｄｙｅ ｌｅａｋａｇｅ ａｓｓａｙ）を行った。
その結果、ＦＰ１２－ＮＨ２、ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドは、バクテリア細胞膜を模倣するＥＹＰＧ／ＥＹＰＣ（６：４、ｗ／ｗ）リポソームに対して多くの染料放出を起こして、バクテリア細胞膜の破壊能に優れていることが分かった。これによって、本発明によるＦＰ１２－ＮＨ２、ＦＰ１３－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１２－ＮＨ２、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２ペプチドが、グラム陽性バクテリア細胞膜を破壊する作用機序も有することが分かった（図６）。
実施例１２：ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ ２ のグラム陽性菌由来のＬＴＡおよびＬＰＰ結合能の測定
ペプチドのグラム陽性菌に対する抗菌活性を確認して作用機序を確認するために、以下の実験を進めた。
ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２を用いて、グラム陽性菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の細胞壁の成分であるＬＴＡ（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ）とＬＰＰ（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）に対する結合力をＩＴＣ分析を通じて確認した。
ＩＴＣ分析法を用いた結合能を確認するところ、実験方法は、実施例１の方法を準用した。
その結果、ａｌｌＤ ＦＰ１３－ＮＨ２が、グラム陽性菌の細胞壁の成分であるＬＴＡとＬＰＰに結合することを確認した。ＬＴＡにＬＰＰが含まれており、突然変異したＬＴＡを含むＬＰＰに結合しないことを確認し、ＦＰ１３－ＮＨ２とＬＴＡの結合にＬＰＰがさらに重要な役割をすることが予想された。したがって、ＦＰ１３－ＮＨ２のグラム陽性菌に対する抗菌活性機序は、グラム陽性菌の細胞壁の成分であるＬＰＰ（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）結合が重要であることを確認した。
上述した本発明の説明は例示のためのもので、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者は、本発明の技術的思想や必須的な特徴を変更することなく、他の具体的な形態に容易に変形が可能であることが理解できる。したがって、以上で記述した実施例は、全ての面において例示的なものであり、限定的ではないものと理解すべきである。
本発明によるペプチドは、標準バクテリアおよび抗生剤耐性バクテリアの増殖抑制だけでなく、バクテリア由来の内毒素を除去するという優れた効果を有していて、優れた敗血症治療効果を有しており、抗生剤と併用する場合、抗生剤による副作用を最小化することができて、敗血症の予防または治療に有用に用いることができる。また、本発明によるペプチドは、グラム陽性・陰性菌に対して選択的に優れた抗菌活性を有していて、グラム陽性・陰性菌に対する抗菌用組成物またはグラム陽性・陰性菌によって誘発される様々な感染性疾患の予防または治療に有用に用いることができる。また、本発明によるペプチドは、人体に安全なだけでなく、タンパク質分解酵素に対しても安定性を示すので、様々な用途に活用できる。
以下、下記の項目を記載する。
［配列番号、
ポリペプチド名称、
アミノ酸配列］
1
FP1(WT)
Lys Leu Gly Val Glu Ala Lys Arg Tyr Leu Asp
2
FP3
Lys Leu Gly Val Glu Ala Lys Arg Tyr Leu Arg
3
FP5
Leu Arg Leu Gly Val Glu Ala Lys Arg Tyr Leu Arg
4
FP6
Leu Arg Leu Gly Val Glu Leu Lys Arg Tyr Leu Arg
5
FP9
Lys Leu Gly Val Glu Ala Leu Arg Tyr Leu Asp
6
FP12-NH2
Arg Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Arg
7
FP13-NH2
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Arg
8
allD FP12-NH2
Arg Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Arg
9
allD FP13-NH2
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Arg
10
allD FP-13-9a-NH2
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Ala Leu Arg
11
allD FP-13-9w-NH2
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Trp Leu Arg
12
allD FP-13-9k-NH2
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Lys Leu Arg
13
allD FP13-NH2(AcOH)
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Arg
14
PEG-allD FP13-NH2(AcOH)
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Arg
15
FP12
Arg Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Arg
16
FP13
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Tyr Leu Arg
17
allD FP21-NH2
Arg Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Trp Leu Arg
18
allD FP-13-9d-NH2
Lys Leu Arg Val Lys Leu Arg Arg Asp Leu Arg

Claims (27)

  1. 下記の配列一般式で表されるポリペプチド：
    ［一般式］
    Ｌｎ－Ｘ１－Ｌ－Ｘ２－Ｖ－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｒ－Ｘ６－Ｌ－Ｘ７
    上記一般式中、
    ｎは、０または１；
    Ｌは、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ）；
    Ｖは、バリン（ｖａｌｉｎｅ）；
    Ｒは、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ）；
    Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）またはリシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）またはロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
    Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）、トリプトファン（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ：Ｗ）、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）またはアスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）；および
    Ｘ７は、アスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）またはアルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）、
    ただし、上記一般式中、Ｋ－Ｌ－Ｇ－Ｖ－Ｅ－Ａ－Ｋ－Ｒ－Ｙ－Ｌ－Ｄの配列で表されるポリペプチドは除く。
  2. １）～９）からなる９種のポリペプチドのうちのいずれか１つである、請求項１に記載のポリペプチド：
    １）請求項１の一般式中、
    ｎは、０；
    Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
    Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
    Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
    Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、およびＸ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、ポリペプチド；
    ２）請求項１の一般式中、
    ｎは、１；
    Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
    Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
    Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
    Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
    Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、ポリペプチド；
    ３）請求項１の一般式中、
    ｎは、１；
    Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
    Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
    Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
    Ｘ５は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
    Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、ポリペプチド；
    ４）請求項１の一般式中、
    ｎは、０；
    Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ２は、グリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ：Ｇ）；
    Ｘ３は、グルタミン酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ：Ｅ）；
    Ｘ４は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）；
    Ｘ５は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
    Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
    Ｘ７は、アスパラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ：Ｄ）である、ポリペプチド；
    ５）請求項１の一般式中、
    ｎは、０；
    Ｘ１は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
    Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
    Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、ポリペプチド；
    ６）請求項１の一般式中、ｎは、０；
    Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
    Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ６は、チロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ：Ｙ）、および
    Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、ポリペプチド；
    ７）請求項１の一般式中、
    ｎは、０；
    Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
    Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ６は、アラニン（ａｌａｎｉｎｅ：Ａ）、および
    Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、ポリペプチド；
    ８）請求項１の一般式中、
    ｎは、０；
    Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
    Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ６は、トリプトファン（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ：Ｗ）、および
    Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、
    ポリペプチド；および
    ９）請求項１の一般式中、
    ｎは、０；
    Ｘ１は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ２は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ３は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）；
    Ｘ４は、ロイシン（ｌｅｕｃｉｎｅ：Ｌ）；
    Ｘ５は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）；
    Ｘ６は、リシン（ｌｙｓｉｎｅ：Ｋ）、および
    Ｘ７は、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ：Ｒ）である、ポリペプチド。
  3. 前記ポリペプチドは、Ｌ型、Ｄ型およびペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）を含むペプチド模倣体または非天然アミノ酸である、請求項１に記載のポリペプチド。
  4. 前記ポリペプチドの末端をアルキレーション（Ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ）、ペギュレーション（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）またはアミデーション（Ａｍｉｄａｔｉｏｎ）したものである、請求項１に記載のポリペプチド。
  5. 前記ポリペプチドのＣ末端にアミン基（ＮＨ２）が追加されたものである、請求項１に記載のポリペプチド。
  6. 前記ポリペプチドは、以下の特徴のうち１つ以上の特徴を有するものである、請求項１に記載のポリペプチド：
    グラム陰性菌のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）への結合能；
    バクテリア細胞膜の選択的破壊能；
    タンパク質分解酵素に対する抵抗性；
    グラム陽性菌の細胞膜破壊能；および
    グラム陽性菌由来のＬＴＡ（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ）またはＬＰＰ（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）への結合能。
  7. 請求項１に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸（Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：ＴＦＡ）のアセテート塩置換体。
  8. 請求項１に記載のポリペプチドまたは第７項のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、敗血症の予防または治療用組成物。
  9. 請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、抗菌用組成物。
  10. 上記抗菌用組成物の抗菌対象菌は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ１、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓよりなる群から選ばれた１以上である、請求項９に記載の抗菌用組成物。
  11. 上記抗菌用組成物の抗菌対象菌は、拡張型β－ラクタム系抗生剤分解酵素（ＥＳＢＬ；Ｅｘｔｅｎｄｅｄ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｂｅｔａ Ｌａｃｔａｍａｓｅ）耐性菌、カルバペネム耐性菌およびコリスチン耐性菌よりなる群から選ばれた１以上の抗生剤耐性菌である、請求項９に記載の抗菌用組成物。
  12. 上記抗生剤耐性菌は、ＥＳＢＬ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ＣＲ）－Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、ＣＲ－Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ＣＲ－Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、およびＣｏｌｉｓｔｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｏｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉよりなる群から選ばれた１以上である、請求項１１に記載の抗菌用組成物。
  13. 請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を有効成分として含む、感染性疾患の予防または治療用組成物。
  14. 上記感染性疾患は、肺炎、腹膜炎、脳膜炎、創傷感染、骨関節炎、胆嚢炎、尿路感染症、脳髄膜炎、心内膜炎、心筋炎、心外膜炎、関節炎、 咽頭炎 、淋病、細菌性疫痢、腸炎、結膜炎、胃炎、中耳炎、膀胱炎、およびリンパ管炎よりなる群から選ばれるグラム陰性菌によって誘発される感染性疾患である、請求項１３に記載の組成物。
  15. 上記感染性疾患は、咽喉炎、膿痂疹、リウマチ熱、糸球体腎炎、新生児敗血症、髄膜炎、咽頭炎、肺炎、心内膜炎、 猩紅熱 、皮膚軟部組織感染、深部軟組織感染、膿胸および膣炎よりなる群から選ばれるグラム陽性菌によって誘発される感染性疾患である、請求項１３に記載の組成物。
  16. 請求項１に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
  17. 請求項１６に記載のポリヌクレオチドを含む組換えベクター。
  18. 請求項１７に記載の組換えベクターで形質転換された宿主細胞を培養する段階を含む、請求項１に記載のポリペプチドの製造方法。
  19. 請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む敗血症の治療方法。
  20. 請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の敗血症に対する予防、改善または治療用途。
  21. 敗血症の予防、改善または治療用製剤の製造のための請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途。
  22. 請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む感染性疾患の治療方法。
  23. 請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の感染性疾患に対する予防、改善または治療用途。
  24. 感染性疾患の予防、改善または治療用製剤の製造のための請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途。
  25. 請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体を、これを必要とする個体に投与する段階を含む抗菌方法。
  26. 請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の抗菌用途。
  27. 抗菌剤の製造のための請求項１に記載のポリペプチドまたは請求項７に記載のポリペプチドのトリフルオロ酢酸のアセテート塩置換体の用途。
JP2021549548A 2019-02-28 2020-02-27 抗菌活性を有するポリペプチド、これを含む敗血症の予防または治療用組成物、および抗菌用組成物 Active JP7219512B2 (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2019-0023534 2019-02-28
KR20190023534 2019-02-28
KR10-2020-0023629 2020-02-26
KR1020200023629A KR102368983B1 (ko) 2019-02-28 2020-02-26 항균활성을 갖는 폴리펩타이드, 이를 포함하는 패혈증 예방 또는 치료용 조성물, 및 항균용 조성물
PCT/KR2020/002826 WO2020175936A1 (ko) 2019-02-28 2020-02-27 항균활성을 갖는 폴리펩타이드, 이를 포함하는 패혈증 예방 또는 치료용 조성물, 및 항균용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022521543A true JP2022521543A (ja) 2022-04-08
JP7219512B2 JP7219512B2 (ja) 2023-02-08

Family

ID=72239598

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021549548A Active JP7219512B2 (ja) 2019-02-28 2020-02-27 抗菌活性を有するポリペプチド、これを含む敗血症の予防または治療用組成物、および抗菌用組成物

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20220144892A1 (ja)
JP (1) JP7219512B2 (ja)
BR (1) BR112021016996A8 (ja)
CA (1) CA3168643A1 (ja)
WO (1) WO2020175936A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115960171B (zh) * 2022-10-12 2023-08-29 东北农业大学 高稳定性Trp-pocket跨链交互型β-发卡抗菌肽及制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012504597A (ja) * 2008-10-05 2012-02-23 ウニヴェルシタ・デグリ・ストゥディ・ディ・シエナ 抗菌適用のためのペプチド配列、それらの分岐形態、及びその使用
JP2015174855A (ja) * 2014-03-18 2015-10-05 国立研究開発法人産業技術総合研究所 両生類ネッタイツメガエル皮膚由来機能性ペプチド
JP2018529689A (ja) * 2015-09-17 2018-10-11 ソウル大学校産学協力団Ｓｅｏｕｌ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒ＆Ｄｂ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ グラム陰性菌に対する抗菌活性を示す切断または折り畳まれたヘリックスペプチドまたはペプチド類似体およびその用途

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006060484A2 (en) * 2004-12-01 2006-06-08 Gene Therapy Systems, Inc. Tuberculosis nucleic acids, polypeptides and immunogenic compositions
AU2008316225B2 (en) * 2007-10-26 2014-06-19 Avivagen Inc. Compositions and methods for enhancing immune response
HUE054437T2 (hu) * 2011-05-20 2021-09-28 H Lundbeck As Anti-CGRP készítmények és alkalmazásuk
WO2012177658A2 (en) * 2011-06-19 2012-12-27 New York Univeristy Methods of treating and preventing staphylococcus aureus infections and associated conditions
KR101792239B1 (ko) * 2016-11-01 2017-10-31 경북대학교 산학협력단 7,10-에폭시옥타데카-7,9-다이에노산 및 항생제를 유효성분으로 포함하는 항균 조성물
JP2020519731A (ja) 2017-06-16 2020-07-02 ボレアリス エージー 光起電用途用ポリマー組成物
US11400136B2 (en) * 2017-06-19 2022-08-02 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for treating a microbial infection
KR102011676B1 (ko) 2017-08-29 2019-08-19 (주) 한성스틸 벽난로
CN115298197A (zh) * 2020-03-20 2022-11-04 Hlb科学株式会社 用于去除脂多糖的组合物和试剂盒
KR20220027685A (ko) * 2020-08-27 2022-03-08 단디바이오사이언스 주식회사 알츠하이머 치매 예방 또는 치료용 펩타이드 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012504597A (ja) * 2008-10-05 2012-02-23 ウニヴェルシタ・デグリ・ストゥディ・ディ・シエナ 抗菌適用のためのペプチド配列、それらの分岐形態、及びその使用
JP2015174855A (ja) * 2014-03-18 2015-10-05 国立研究開発法人産業技術総合研究所 両生類ネッタイツメガエル皮膚由来機能性ペプチド
JP2018529689A (ja) * 2015-09-17 2018-10-11 ソウル大学校産学協力団Ｓｅｏｕｌ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒ＆Ｄｂ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ グラム陰性菌に対する抗菌活性を示す切断または折り畳まれたヘリックスペプチドまたはペプチド類似体およびその用途

Also Published As

Publication number Publication date
BR112021016996A8 (pt) 2022-11-22
CA3168643A1 (en) 2020-09-03
US20220144892A1 (en) 2022-05-12
WO2020175936A1 (ko) 2020-09-03
BR112021016996A2 (ja) 2021-11-30
JP7219512B2 (ja) 2023-02-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3932936A1 (en) Polypeptide having antibacterial activity, composition for preventing or treating sepsis comprising same, and antibacterial composition
US6288212B1 (en) Anti-endotoxic, antimicrobial cationic peptides and methods of use therefor
JP7315724B2 (ja) リシン置換を含むＲｏｍｏ１由来抗菌ペプチドおよびその変異体
JP2000513209A (ja) 抗微生物ペプチドと使用方法
US7745390B2 (en) Antimicrobial peptides
KR102224929B1 (ko) 해삼에서 분리한 항균 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
JP4812347B2 (ja) 抗菌性ペプチド
OA10059A (en) Compositions and methods for treating infections caused by organisms sensitive to beta-lactam antibiotics
KR102415725B1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 h123 및 이의 용도
KR102415734B1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
JP2022521543A (ja) 抗菌活性を有するポリペプチド、これを含む敗血症の予防または治療用組成物、および抗菌用組成物
WO2024053836A1 (ko) 항생제 내성균에 대한 항균 활성을 가지는 항균 펩타이드 h103b 및 이의 용도
CA2451310C (en) Antimicrobial peptides
WO2023048411A1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
RU2797347C2 (ru) Полипептид, обладающий антибактериальной активностью, композиция для профилактики или лечения сепсиса, которая включает его, и антибактериальная композиция
US20230287044A1 (en) Novel antibacterial peptide and use thereof
WO2012033450A1 (en) Novel antimicrobial peptides
CN111848817A (zh) 一种兼具抗菌、抗病毒、免疫调节和抗炎活性的多功能杂合肽及其制备方法和应用
KR102451854B1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 h103 및 이의 용도
JP3661549B2 (ja) 抗菌及び抗真菌ペプチド
JP2005532784A (ja) 新規の抗菌ボリシンペプチド

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20210906

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210823

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210823

RD01 Notification of change of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426

Effective date: 20210906

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220216

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220823

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221121

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20221121

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20230106

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20230120

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7219512

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150