JP2022512813A - 細菌株を含む組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、ワクチンアジュバントとして使用するための細菌株、免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するための細菌株、またはＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するための細菌株を含む組成物を提供する。本発明は、細菌株と、１つ以上の抗原とを含むワクチン組成物も提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、哺乳類消化管由来の細菌株を含む組成物、及び感染症からがんに及ぶ様々な疾患の予防または治療に望ましい免疫応答を誘発するためのかかる組成物の使用の分野にある。

ヒト腸管は、子宮内で無菌と考えられているが、出生後直ぐに様々な母体及び環境微生物に曝される。その後、微生物の定着及び連鎖の動的期間があるが、この定着及び連鎖は、分娩様式、環境、食事、及び宿主の遺伝子型などの因子により影響を受け、それらの因子は全て、特に幼少期において、腸内微生物叢の組成に影響を与える。その後、微生物叢は安定し、成体様になる［１］。ヒト腸内微生物叢は、５００～１０００を超える異なる系統型を含んでおり、この系統型は本質的に２つの主要な細菌分類、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門及びＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門に属する［２］。細菌のヒト腸への定着から生じる共生関係が成功することにより、多種多様な代謝的、構造的、保護的、及び他の有益な機能がもたらされる。定着された腸の増強された代謝活性により、本来なら難消化性の食事成分が、副産物の放出とともに確実に分解され、重要な栄養源が宿主に与えられる。同様に、腸内微生物叢が免疫学的に重要であることも十分に認識されており、例えば、共生細菌の導入後に機能的に再構成される免疫系に障害がある無菌動物において示されている［３～５］。

微生物叢組成物の劇的な変化が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの胃腸障害において記録されている。例えば、ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍクラスターＸＩＶａ細菌のレベルは、ＩＢＤ患者において低減しているが、Ｅ．ｃｏｌｉの数は増加しており、腸内の共生生物と病原性共生生物とのバランスがシフトしていることが示唆される［６～９］。興味深いことに、この微生物ディスバイオシスは、エフェクターＴ細胞集団の不均衡にも関連している。

ある特定の細菌株が動物の腸に与え得る潜在的な肯定的効果の認識において、様々な株が、様々な疾患の治療における使用に提案されている（例えば、［１０～１３］を参照されたい）。また、ある特定の株、例えば、主にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ株が、例えば、抗炎症機構を介して腸管と直接関連しない様々な炎症性疾患及び自己免疫疾患の治療における使用に提案されている（［１４］及び［１５］の総説を参照されたい）。ある特定のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ株及びＶｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ株、ならびにより低い程度でＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ株及びＬａｃｔｏｂａｃｃｉｌｌｕｓ株が、免疫調節効果を有し、インビトロで異なるサイトカインに様々な影響を及ぼすことが示唆されている。しかしながら、異なる疾患と異なる細菌株との間の関係、ならびに特定の細菌株が腸及び全身レベルに、かついずれかの特定のタイプの疾患に与える正確な効果は、十分に特徴付けられていない。

最近、様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種が抗炎症特性及び治療特性について調査されている。例えば、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓは、重度の喘息、リウマチ性関節炎、及び多発性硬化症などのいくつかの疾患モデルにおいて広範な抗炎症効果を有することが実証された［１６］。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓは、大腸癌の動物モデルにおいても試験されている［１７］。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉの抗炎症作用も観察されている［１８］。

疾患を治療する新たな方法が当該技術分野で必要とされている。腸バクテリアを使用した新たな治療戦略が開発され得るように腸バクテリアの潜在的効果が特徴付けられることも必要とされている。

本発明人らは、ワクチンアジュバントとして使用することができるＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む新たな組成物を開発した。

したがって、本発明は、対象においてワクチンアジュバントとして使用するためのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む組成物を提供する。好ましくは、本発明は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種、及び／またはＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種由来の株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種由来の株を含む。かかる実施形態では、この株は、ワクチンアジュバントとして使用するための、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託されたもの、またはその誘導体もしくはバイオタイプであり得る。

さらなる態様では、本発明は、ＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するためのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む組成物を提供する。好ましくは、本発明は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種、及び／またはＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種由来の株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種由来の株を含む。かかる実施形態では、この株は、ＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するための、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託されたもの、またはその誘導体もしくはバイオタイプであり得る。

さらなる態様では、本発明は、免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するためのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む組成物を提供する。好ましくは、本発明は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種、及び／またはＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種由来の株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種由来の株を含む。かかる実施形態では、この株は、免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するための、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託されたもの、またはその誘導体もしくはバイオタイプであり得る。

最も好ましくは、本発明の組成物に使用される細菌は、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株である。

好ましい実施形態では、本発明の組成物は、実施例で実証されるように、単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）の分泌レベル及び／または活性の増加、及び／またはＢ細胞の増殖の増加に使用するためのものである。好ましくは、本発明は、ワクチンアジュバントとして使用された場合に、ＭＣＰ－１の発現レベル及び／または活性の増加、及び／またはＢ細胞の増殖の増加に使用するための、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株、またはその誘導体もしくはバイオタイプを含む組成物を提供する。

実施形態で試験されるＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株と近縁の株がワクチンの有効性の増強に特に有効であることが期待される。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、配列番号９と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する細菌株を含むか、またはこの細菌株は、配列番号９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、経口投与用である。本発明の細菌株の経口投与は、ワクチンアジュバント活性に有効であり得る。また、経口投与は、患者及び施術者にとって簡便であり、腸への送達及び／または腸での部分的もしくは全体的な定着を可能にする。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌株を含む。凍結乾燥は、細菌の送達を可能にする安定した組成物を調製するための有効かつ便利な技術である。

ある特定の実施形態では、本発明は、上で定義される医学的用途に使用するための上記の組成物を含む食品を提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、上記の細菌株と、病原体抗原または腫瘍抗原などの１つ以上の抗原とを含むワクチン組成物を提供する。病原体抗原には、ウイルス表面タンパク質などのウイルス抗原、タンパク質及び／またはサッカリド抗原などの細菌性抗原、真菌性抗原、ならびに寄生虫抗原が含まれる。抗原が細菌性抗原である場合、これは、通常、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株に由来しない。

ある特定の実施形態では、本発明のワクチン組成物は、以下の病原体：インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、鉤虫、Ｂ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、クラミジア、ＳＡＲＳコロナウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、エプスタイン・バーウイルス、またはヒトパピローマウイルス由来の１つ以上の抗原を含む。好ましくは、本発明のワクチン組成物は、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原を含む。

ある特定の実施形態では、本発明のワクチン組成物は、ネオ抗原、糖タンパク質抗原、リポグリカン抗原、古細菌抗原、黒色腫抗原Ｅ（ＭＡＧＥ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、シアリル－Ｔｎ（ＳＴｎ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＣＡ－１２５、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、癌タンパク質、アミロイド－ベータ、Ｔａｕ、ＰＣＳＫ９、またはニコチン、アルコール、もしくはオピエートなどの習慣性物質のうちの１つ以上を含む。

本発明は、薬剤に使用するための、具体的には、上で定義されるように使用するための、上で定義されるワクチン組成物をさらに提供する。

加えて、本発明は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む組成物を投与することを含む、対象におけるワクチンの有効性を増強する方法、ＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法を増強する方法、または免疫老化を治療する、予防する、または遅延させる方法を提供する。

本発明は、以下の番号付けされた実施形態も提供する。
１．ワクチンアジュバントとして使用するための、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む、組成物。

２．免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するための、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む、組成物。

３．ＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するための、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む、組成物。

４．前記細菌株が、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種、またはＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種に属する、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

５．前記細菌株が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

６．前記細菌株が、配列番号９と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

７．前記細菌株が、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株である、実施形態６に記載の組成物。

８．前記細菌株が、配列番号９、１２、１３、１６、１７、または１９と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号９、１２、１３、１６、１７、または１９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態１～５のいずれかに記載の組成物。

９．前記細菌株が、配列番号１０または１１と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１０または１１によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態１～５のいずれかに記載の組成物。

１０．細菌株が、受託番号ＤＳＭＺ１９４４８またはＤＳＭＺ２９１８７のいずれかの下で寄託された株である、実施形態９に記載の組成物。

１１．前記細菌株が、配列番号１８と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１８によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態１～５のいずれかに記載の組成物。

１２．前記細菌株が、配列番号１５と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１５によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態１～３または５のいずれかに記載の組成物。

１３．前記組成物が、１つ以上の病原体抗原または腫瘍抗原を含む、実施形態１または４～１２のいずれかに記載の組成物。

１４．前記１つ以上の病原体抗原が、ウイルス表面タンパク質などのウイルス抗原、タンパク質及び／またはサッカリド抗原などの細菌性抗原、真菌性抗原、ならびに寄生虫抗原から選択される、実施形態１３に記載の組成物。

１５．前記１つまたは病原体抗原が、以下の病原体：インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、鉤虫、Ｂ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、クラミジア、ＳＡＲＳコロナウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、エプスタイン・バーウイルス、またはヒトパピローマウイルスのいずれかに由来する、実施形態１４に記載の組成物。

１６．前記組成物が、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原を含む、実施形態１５に記載の組成物。

１７．前記組成物が、ネオ抗原、糖タンパク質抗原、リポグリカン 抗原、古細菌 抗原、黒色腫抗原Ｅ（ＭＡＧＥ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、シアリル－Ｔｎ（ＳＴｎ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＣＡ－１２５、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、癌タンパク質、アミロイド－ベータ、Ｔａｕ、ＰＣＳＫ９、またはアルコールもしくはオピエートなどの習慣性物質から選択される１つ以上の抗原を含む、実施形態１または４～１３のいずれかに記載の組成物。

１８．前記組成物が経口投与用である、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

１９．前記組成物が、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２０．前記細菌株が凍結乾燥されている、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２１．前記細菌株が、病原体抗原または腫瘍抗原などの異種抗原を発現する、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２２．ＭＣＰ－１の発現レベル及び／または活性の増加、及び／またはＢ細胞の増殖の増加に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２３．前記Ｂ細胞がＣＤ１９^＋ＣＤ３^－Ｂ細胞を含む、実施形態２２に記載の組成物。

２４．ＴＮＦ－αサイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２５．ＩＬ－１βサイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２６．ＩＬ－２サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２７．ＧＭ－ＣＳＦサイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２８．ＩＦＮ－γサイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

２９．ＩＬ－２７サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３０．ＩＰ－１０サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３１．ＲＡＮＴＥＳサイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３２．ＭＩＰ－１αサイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３３．ＭＩＰ－１βサイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３４．ＭＩＰ－２サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３５．ＩＬ－１０サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３６．ＩＬ－２２サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３７．ＩＬ－５サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３８．ＩＬ－１８サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

３９．ＩＬ－２３サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

４０．ＣＸＣＬ１サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

４１．ＩＬ－６サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

４２．前記組成物が、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症、または腫瘍の療法に使用するためのものである、実施形態１または４～４１のいずれかに記載の組成物。

４３．前記組成物が、インフルエンザウイルス感染症の療法に使用するためのものである、実施形態４２に記載の組成物。

４４．前記組成物が、Ｂ細胞免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するためのものである、実施形態２、４～１２、または１８～４１のいずれかに記載の組成物。

４５．前記組成物が、免疫老化を治療する、予防する、または遅延させることによって、心血管疾患、アルツハイマー病またはパーキンソン病などの神経変性疾患、がん、２型糖尿病、または自己免疫疾患の療法に使用するためのものである、実施形態２、４～１２、１８～４１、または４４のいずれかに記載の組成物。

４６．前記組成物が、ＣＡＲ－Ｔを増強することによってがんの療法に使用するためのものである、実施形態３～１２または１７～４１のいずれかに記載の組成物。

４７．前記がんが慢性リンパ球性白血病である、実施形態４６に記載の組成物。

４８．Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株と、１つ以上の抗原と、を含む、ワクチン組成物。

４９．１つ以上の病原体抗原または腫瘍抗原を含む、実施形態４８に記載のワクチン組成物。

５０．前記細菌株が、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種、またはＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種に属する、実施形態４８または４９に記載の組成物。

５１．前記細菌株が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態４８～５０のいずれかに記載の組成物。

５２．前記細菌株が、配列番号９と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態４８～５１のいずれかに記載の組成物。

５３．前記細菌株が、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株である、実施形態５２に記載の組成物。

５４．前記細菌株が、配列番号９、１２、１３、１６、１７、または１９と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号９、１２、１３、１６、１７、または１９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態４８～５１のいずれかに記載の組成物。

５５．前記細菌株が、配列番号１０または１１と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１０または１１によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態４８～５１のいずれかに記載の組成物。

５６．細菌株が、受託番号ＤＳＭＺ１９４４８またはＤＳＭＺ２９１８７のいずれかの下で寄託された株である、実施形態５５に記載の組成物。

５７．前記細菌株が、配列番号１８と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１８によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態４８～５１のいずれかに記載の組成物。

５８．前記細菌株が、配列番号１５と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１５によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態４８、４９、または５１のいずれかに記載の組成物。

５９．前記組成物が、１つ以上の病原体抗原を含む、実施形態４９～５８のいずれかに記載の組成物。

６０．前記１つ以上の病原体抗原が、ウイルス表面タンパク質などのウイルス抗原、タンパク質及び／またはサッカリド抗原などの細菌性抗原、真菌性抗原、ならびに寄生虫抗原から選択される、請求項５９に記載の組成物。

６１．前記１つ以上の病原体抗原が、以下の病原体：インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、鉤虫、Ｂ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、クラミジア、ＳＡＲＳコロナウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、エプスタイン・バーウイルス、またはヒトパピローマウイルスのいずれかに由来する、実施形態５９または６０に記載の組成物。

６２．前記組成物が、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原を含む、実施形態６１に記載の組成物。

６３．前記組成物が、ネオ抗原、糖タンパク質抗原、リポグリカン 抗原、古細菌 抗原、黒色腫抗原Ｅ（ＭＡＧＥ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、シアリル－Ｔｎ（ＳＴｎ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＣＡ－１２５、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、癌タンパク質、アミロイド－ベータ、Ｔａｕ、ＰＣＳＫ９、またはアルコールもしくはオピエートなどの習慣性物質から選択される１つ以上の抗原を含む、実施形態４８～５８のいずれかに記載の組成物。

６４．前記組成物が経口投与用である、実施形態４８～６３のいずれかに記載の組成物。

６５．前記組成物が、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、実施形態４８～６４のいずれかに記載の組成物。

６６．前記細菌株が凍結乾燥されている、実施形態４８～６５のいずれかに記載の組成物。

６７．前記細菌株が、病原体抗原または腫瘍抗原などの異種抗原を発現する、実施形態４８～６６のいずれかに記載の組成物。

６８．薬剤に使用するための、実施形態４８～６７のいずれかに記載の組成物。

６９．ＭＣＰ－１の発現レベル及び／または活性の増加、及び／またはＢ細胞の増殖の増加に使用するための、実施形態６８に記載の組成物。

７０．前記Ｂ細胞がＣＤ１９^＋ＣＤ３^－Ｂ細胞を含む、実施形態６９に記載の組成物。

７１．ＴＮＦ－αサイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７０のいずれかに記載の組成物。

７２．ＩＬ－１βサイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７１のいずれかに記載の組成物。

７３．ＩＬ－２サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７２のいずれかに記載の組成物。

７４．ＧＭ－ＣＳＦサイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７３のいずれかに記載の組成物。

７５．ＩＦＮ－γサイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７４のいずれかに記載の組成物。

７６．ＩＬ－２７サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７５のいずれかに記載の組成物。

７７．ＩＦＮ－γサイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７６のいずれかに記載の組成物。

７８．ＩＬ－２７サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７７のいずれかに記載の組成物。

７９．ＩＰ－１０サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７８のいずれかに記載の組成物。

８０．ＲＡＮＴＥＳサイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～７９のいずれかに記載の組成物。

８１．ＭＩＰ－１αサイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８０のいずれかに記載の組成物。

８２．ＭＩＰ－１βサイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８１のいずれかに記載の組成物。

８３．ＭＩＰ－２サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８２のいずれかに記載の組成物。

８４．ＩＬ－１０サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８３のいずれかに記載の組成物。

８５．ＩＬ－２２サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８４のいずれかに記載の組成物。

８６．ＩＬ－５サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８５のいずれかに記載の組成物。

８７．ＩＬ－１８サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８６のいずれかに記載の組成物。

８８．ＩＬ－２３サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８７のいずれかに記載の組成物。

８９．ＣＸＣＬ１サイトカイン産生の誘発に使用するための、実施形態６８～８８のいずれかに記載の組成物。

９０．ＩＬ－６サイトカイン産生の誘発に使用するための、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。

９１．ワクチン接種に使用するための、実施形態６８～９０のいずれかに記載の組成物。

９２．前記組成物が、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症、または腫瘍の療法に使用するためのものである、実施形態６８～９１のいずれかに記載の組成物。

９３．前記組成物が、インフルエンザウイルス感染症の療法に使用するためのものである、実施形態９２に記載の組成物。

９４．前記組成物が、免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するためのものである、実施形態６８～９０のいずれかに記載の組成物。

９５．前記免疫老化がＢ細胞免疫老化である、実施形態９４に記載の組成物。

９６．前記組成物が、免疫老化を治療する、予防する、または遅延させることによって、心血管疾患、アルツハイマー病もしくはパーキンソン病などの神経変性疾患、がん、２型糖尿病、または自己免疫疾患の療法に使用するためのものである、実施形態９４または９５のいずれかに記載の組成物。

９７．前記組成物が、ＣＡＲ－Ｔを増強することによってがんの療法に使用するためのものである、実施形態６８～９０のいずれかに記載の組成物。

９８．前記がんが慢性リンパ球性白血病である、実施形態９７に記載の組成物。

９９．免疫不全対象に使用するための、実施形態１～４７または６８～９８のいずれかに記載の組成物。

１００．免疫抑制対象に使用するための、実施形態１～４７または６８～９９のいずれかに記載の組成物。

１０１．前記対象が、疾患を有さない対象のリンパ節と比較して、リンパ節内に増加した数の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を有する、実施形態９９または１００に記載の組成物。

１０２．がんを有する対象に使用するためのものであり、前記対象が、がんを有さない対象のリンパ節と比較して、転移性リンパ節などのリンパ節内に増加した数の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を有する、実施形態９９～１０１に記載の組成物。

１０３．前記対象が、疾患を有さない対象由来のある量の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と比較して、同容量のＰＢＭＣ内にＴｒｅｇの数が増加している、実施形態９９～１０２のいずれかに記載の組成物。

１０４．がんを有する対象に使用するためのものであり、前記対象が、がんを有さない対象由来のある量の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と比較して、同容量のＰＢＭＣ内にＴｒｅｇの数が増加している、実施形態９９～１０３のいずれかに記載の組成物。

１０５．前記対象が、疾患を有さない対象由来のある容量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内に骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）の数が増加している、実施形態９９～１０４のいずれかに記載の組成物。

１０６．がんを有する対象に使用するためのものであり、前記対象が、がんを有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内に骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）の数が増加している、実施形態９９～１０５のいずれかに記載の組成物。

１０７．前記対象が、疾患を有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内に形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の数が増加している、実施形態９９～１０６のいずれかに記載の組成物。

１０８．がんを有する対象に使用するためのものであり、前記対象が、がんを有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内に形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の数が増加している、実施形態９９～２０７のいずれかに記載の使用のための組成物。

ＮＣＩＭＢ ４２３８２処理によるＢ細胞のパーセンテージの増加。 ＮＣＩＭＢ ４２３８２処理によるＢ細胞のパーセンテージの増加。 ＮＣＩＭＢ ４２３８２処理によるＢ細胞のパーセンテージの増加。 ＮＣＩＭＢ ４２３８２処理によるＢ細胞のパーセンテージの増加。 ＮＣＩＭＢ ４２３８２処理によるＢ細胞のパーセンテージの増加。 ＮＣＩＭＢ ４２３８２処理によるＢ細胞のパーセンテージの増加。 ～図１に提示されるデータのフローサイトメトリーによる、異なる免疫細胞集団（ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、及びＣＤ１９＋細胞）を分析するために使用したゲーティング戦略。 図１に提示されるデータのフローサイトメトリーによる、異なる免疫細胞集団（ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、及びＣＤ１９＋細胞）を分析するために使用したゲーティング戦略。 図１に提示されるデータのフローサイトメトリーによる、異なる免疫細胞集団（ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、及びＣＤ１９＋細胞）を分析するために使用したゲーティング戦略。 図１に提示されるデータのフローサイトメトリーによる、異なる免疫細胞集団（ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、及びＣＤ１９＋細胞）を分析するために使用したゲーティング戦略。 図１に提示されるデータのフローサイトメトリーによる、異なる免疫細胞集団（ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、及びＣＤ１９＋細胞）を分析するために使用したゲーティング戦略。 図１に提示されるデータのフローサイトメトリーによる、異なる免疫細胞集団（ＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞、及びＣＤ１９＋細胞）を分析するために使用したゲーティング戦略。 ＮＣＩＭＢ ４２３８２処理によるＭＣＰ－１の分泌の増加。 （Ａ）ＮＣＩＭＢ ４２３８２＋条件培地、及び（Ｂ）ＮＣＩＭＢ ４２３８２のみによるＨＴ２９細胞からのＴＮＦ－α分泌の誘発。 （Ａ）Ｒａｐｉｄ ＩＤ ３２Ａシステム及び（Ｂ）ＡＰＩ ５０ ＣＨＬシステムを使用して得たＮＣＩＭＢ ４２３８２の発酵プロファイル。 Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞増殖（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＴＮＦ－α（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－１β（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－２（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＧＭ－ＣＳＦ（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＦＮ－γ（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－２７（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－１０（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－６（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＭＩＰ－２（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＭＩＰ－１α（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＭＩＰ－１β（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－２２（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＲＡＮＴＥＳ（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＰ－１０（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－４（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－５（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－１８（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－２３（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－９（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＣＸＣＬ１（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＭＣＰ－３（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＭＣＰ－１（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌－ＩＬ－１７Ａ（「ＹＣＦＡ」＝ＹＣＦＡ＋）。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－基準株９（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－基準株１０（Ｐ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－基準株７（Ｐ．ｍｅｒｄａｅ）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－基準株１１（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－基準株２（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－基準株１２（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－（Ｇ）基準株１３（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－基準株１４（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。 様々なＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株－基準株１５（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）での処理後の脾細胞からのサイトカイン分泌。

細菌株
本発明の組成物は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属（例えば、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種、またはＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ種）の株を含む。実施例は、かかる細菌株が、ワクチンアジュバント活性に強く関連する免疫学的応答を引き出すことを実証する。本発明の好ましい細菌株は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種、及びＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種、特にＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種に属するものである。本発明の好ましい細菌株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌である。

Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓに類似し、グラム陰性、絶対嫌気性、非胞子形成、非運動性、及び棒状、ならびに０．８～１．６×１．２～１２μｍのサイズである。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓは、ヒトの糞便で最も一般的な種の１つである。Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓの基準株は、ＪＣＭ５８２５^Ｔ（＝ＣＣＵＧ ４９４１^Ｔ＝ＤＳＭ ２０７０１^Ｔ＝ＡＴＣＣ ８５０３^Ｔ）である。Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ株ＪＣＭ ５８２５Ｔ、ＪＣＭ １３４００、ＪＣＭ １３４０１、ＪＣＭ １３４０２、ＪＣＭ １３４０３、及びＪＣＭ １３４０４、ならびにＰ．ｍｅｒｄａｅ株ＪＣＭ ９４９７Ｔ及びＪＣＭ １３４０５の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列のＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ受託番号は、それぞれ、ＡＢ２３８９２２～ＡＢ２３８９２９である（本明細書において配列番号１～８として開示される）。例示的な株はまた、［１９］にも記載されている。

受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託されたＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ細菌を実施例で試験し、本明細書で７５５株（またはＮＣＩＭＢ ４２３８２もしくはＮＣＩＭＢ ４２３８２株）とも称される。この株を、健常ヒトドナーの消化管から単離した。試験した７５５株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号９に提供する。７５５株は、ＧＴ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｌｔｄ．（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２５ ２ＺＳ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）によって２０１５年３月１２日に「Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ ７５５」として国際寄託機関ＮＣＩＭＢ，Ｌｔｄ．（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２１ ９ＹＡ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）に寄託され、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２が割り当てられた。その後、ＧＴ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｌｔｄ．は、その名称を４Ｄ Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌｉｍｉｔｅｄに変更した。

ＷＯ２０１６／２０３２２０は、７５５株のマウスへの投与について説明し、それが腸外の疾患プロセス（喘息及び関節炎など）に影響し得ることを示す。さらに、この細菌株での処理の結果として罹患または死亡は観察されず、それ故に、この天然に存在する株の操作を必要としない治療的用途へのその安全性を示した。

ＮＣＩＭＢ ４２３８２株のゲノム配列は、ＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０に提供される。この配列は、ＰａｃＢｉｏ ＲＳ ＩＩプラットフォームを使用して生成された。

受託番号ＤＳＭＺ１９４４８及びＤＳＭＺ２９１８７下で寄託されたＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ株を実施例で試験した。ＤＳＭＺ１９４４８株の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１０に提供する。ＤＳＭＺ２９１８７株の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１１に提供する。これらの株は、ＤＳＭＺ－Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ＧｍｂＨ（Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒ．７Ｂ ３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に寄託され、公開されている。

以下のＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株：基準株１（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株２（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株３（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株４（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、基準株５（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株６（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株７（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ）、基準株８（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株９（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株１０（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、基準株１１（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株１２（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株１３（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株１４（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株１５（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）も実施例で試験した。基準株１（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１２に提供する。基準株２（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１３に提供する。基準株３（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１４に提供する。基準株４（Ｐ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１５に提供する。基準株５（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１６に提供する。基準株６（（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１７に提供する。基準株７（Ｐ．ｍｅｒｄａｅ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１８に提供する。基準株９（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号１９に提供する。基準株１１（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号２０に提供する。基準株１２（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号２１に提供する。基準株１４（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号２２に提供する。基準株１５（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ）の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を配列番号２３に提供する。

実施例で試験した株と近縁の細菌株がワクチンアジュバントとして有効であることも期待される。ある特定の実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓの細菌株の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である（増加するほど好ましい）１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。本発明に使用するための細菌株は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３、好ましくは配列番号９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、または９４％同一である（増加するほど好ましい）１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有し得る。好ましくは、本発明に使用するための細菌株は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である（増加するほど好ましい）１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号９に対する。好ましくは、本発明に使用するための細菌株は、配列番号９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。最も好ましくは、本発明に使用するための細菌株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託されたＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ株のものである。

本発明の組成物において使用される細菌株がＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種のものである実施形態では、好ましい株は、配列番号９、１２、１３、１６、１７、または１９、好ましくは配列番号９と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である（増加するほど好ましい）１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。より好ましくは、かかる好ましい株は、配列番号９、１２、１３、１６、１７、または１９、特に配列番号９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。最も好ましくは、細菌株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４３３８２下で寄託されたＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓの株である。

本発明の組成物において使用される細菌株がＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種のものである実施形態では、好ましい株は、配列番号１０または１１と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である（増加するほど好ましい）１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、またはより好ましくは、配列番号１０または１１によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または最も好ましくは、受託番号ＤＳＭＺ１９４４８もしくはＤＳＭＺ２９１８７下で寄託されたＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ株のいずれかである。

本発明の組成物において使用される細菌株がＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種のものである実施形態では、好ましい株は、配列番号１８と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である（増加するほど好ましい）１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、またはより好ましくは、配列番号１８によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。

本発明の組成物において使用される細菌株がＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ種のものである実施形態では、好ましい株は、配列番号１５と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である（増加するほど好ましい）１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、またはより好ましくは、配列番号１５によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。

好ましい実施形態では、本発明の組成物は、生細菌を含む。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、活性状態、好ましくは凍結乾燥された生細菌を含む。

好ましい実施形態では、本発明の細菌株は、例えば、実施例に記載されるＰＢＭＣなどのＰＢＭＣによるＭＣＰ－１の分泌を増加させる。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ＭＣＰ－１の発現を増加させ、かつワクチンアジュバントとして使用するための細菌を含む。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ＭＣＰ－１の発現を増加させ、かつＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するための細菌株を含む。

好ましい実施形態では、本発明の細菌株は、例えば、実施例に記載されるＰＢＭＣなどのＰＢＭＣによるＢ細胞の増殖を増加させる。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、Ｂ細胞の増殖を増加させ、かつワクチンアジュバントとして使用するための細菌株を含む。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、Ｂ細胞の増殖を増加させ、かつＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するための細菌株を含む。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、Ｂ細胞の増殖を増加させ、かつ免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するための細菌株を含む。

好ましい実施形態では、本発明の細菌株は、例えば、実施例に記載される脾細胞の増殖を増加させる。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、脾細胞の増殖を増加させ、かつワクチンアジュバントとして使用するための細菌株を含む。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、脾細胞の増殖を増加させ、かつＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するための細菌株を含む。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、脾細胞の増殖を増加させ、かつ免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するための細菌株を含む。

好ましい実施形態では、本発明の細菌株は、例えば、実施例に記載の脾細胞などの脾細胞による、サイトカインＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２７、ＩＬ－１０、ＭＩＰ－２、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＰ－１０、及び／またはＲＡＮＴＥＳのうちの１つ以上、好ましくはそれら全ての産生を増加させる。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、サイトカインＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２７、ＩＬ－１０、ＭＩＰ－２、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＰ－１０、及び／またはＲＡＮＴＥＳのうちの１つ以上、好ましくはそれら全ての産生を増加させ、かつワクチンアジュバントとして使用するための細菌株を含む。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、サイトカインＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２７、ＩＬ－１０、ＭＩＰ－２、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＰ－１０、及び／またはＲＡＮＴＥＳのうちの１つ以上、好ましくはそれら全ての産生を増加させ、かつＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するための細菌株を含む。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、サイトカインＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２７、ＩＬ－１０、ＭＩＰ－２、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＰ－１０、及び／またはＲＡＮＴＥＳのうちの１つ以上、好ましくはそれら全ての産生を増加させ、かつ免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するための細菌株を含む。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌のバイオタイプを含む。受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌のバイオタイプである細菌株も、ワクチンアジュバントとして有用であると期待される。バイオタイプは、元のＮＣＩＭＢ ４２３８２株と同等の活性を有するであろう。バイオタイプは、同じまたは極めて同様の生理学的及び生化学的特性を有する近縁株である。

バイオタイプは、実施例に示される効果と同等のＭＣＰ－１の発現及び／またはＢ細胞の増殖に対する効果を引き出し、それは、実施例に記載される培養及び投与プロトコルを使用して特定され得る。例えば、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株のバイオタイプは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）集団におけるＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ３－細胞）のパーセンテージを、例えば、その細胞集団の４０％超（例えば、５反復に基づいてその細胞集団の平均４０％超）に増加させる可能性があり、それは、実施例に記載される培養及び投与プロトコルを使用して決定され得る。例えば、加えてまたはあるいは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株のバイオタイプは、ＰＢＭＣによるＭＣＰ－１の発現を、例えば、無細胞共培養上清のＭＣＰ－１タンパク質１０００ｐｇ／ｍＬ超に増加させる可能性があり、それは、実施例に記載される培養及び投与プロトコルを使用して決定され得る。

加えてまたはあるいは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株のバイオタイプは、例えば、未処理脾細胞または対照培地（例えば、ＹＣＦＡ＋培地）で処理された脾細胞よりも大きい程度に、脾細胞の増殖を増加させ、それは、例えば、３－［４，５－ジメチルチアゾール－２－イル］－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）の、ＭＴＴ－ホルマザンへの変換を測定するアッセイを使用して、例えば、ＭＴＴ－ホルマザンの比色検出によって決定され得る（例えば、実施例１０のように）。加えてまたはあるいは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株のバイオタイプは、脾細胞からのサイトカインＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２７、ＩＬ－１０、ＭＩＰ－２、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＰ－１０、及び／またはＲＡＮＴＥＳのうちの１つ以上、好ましくはそれら全ての産生を、例えば、未処理脾細胞または対照培地（例えば、ＹＣＦＡ＋培地）で処理された脾細胞よりも大きい程度に増加させ、それは、サイトカインイムノアッセイ（例えば、実施例１１及び実施例１２で使用されるＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃからの２６－ｐｌｅｘ Ｍｏｕｓｅ ＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘ（商標）マルチプレックスイムノアッセイ）によって決定され得る。

受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌のバイオタイプであり、かつ本発明における使用に好適な株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌の他のヌクレオチド配列を配列決定することによって特定され得る。例えば、実質的に全ゲノムは、配列決定され得、本発明に使用するためのバイオタイプ株は、その全ゲノムの少なくとも８０％にわたって（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、または９９％にわたって、またはその全ゲノムにわたって）少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％の配列同一性を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、バイオタイプ株は、そのゲノムの少なくとも９８％にわたって少なくとも９８％の配列同一性を有するか、またはそのゲノムの９９％にわたって少なくとも９９％の配列同一性を有する。バイオタイプ株の特定に使用するための他の好適な配列は、ｈｓｐ６０または反復配列、例えば、ＢＯＸ、ＥＲＩＣ、（ＧＴＧ）_５、またはＲＥＰを含み得る［２０］。

バイオタイプ株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％の配列同一性を有する配列を有し得る。いくつかの実施形態では、バイオタイプ株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％の配列同一性を有する１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有し得る。いくつかの実施形態では、バイオタイプ株は、配列番号９と少なくとも９９％同一である（例えば、少なくとも９９．５％または少なくとも９９．９％同一である）１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を含み得る。いくつかの実施形態では、バイオタイプ株は、配列番号９の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する。

ある特定の実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、ＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０との配列同一性を有するゲノムを有する。好ましい実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、ＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の少なくとも６０％（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有するゲノムを有する。例えば、本発明に使用するための細菌株は、ＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の７０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の８０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の９０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の１００％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の７０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９５％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の８０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９５％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の９０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９５％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の１００％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９５％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の７０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９８％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の８０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９８％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の９０％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９８％の配列同一性、またはＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０の１００％にわたってＷＯ２０１６／２０３２２０の配列番号１０と少なくとも９８％の配列同一性を有するゲノムを有し得る。

あるいは、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌のバイオタイプであり、かつ本発明における使用に好適な株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２の寄託物及び制限断片分析及び／またはＰＣＲ分析を使用して、例えば、蛍光増幅断片長多型（ＦＡＦＬＰ）及び反復ＤＮＡエレメント（ｒｅｐ）－ＰＣＲフィンガープリンティング、またはタンパク質プロファイリング、または部分的１６Ｓもしくは２３ｓ ｒＤＮＡ配列決定を使用して特定され得る。好ましい実施形態では、かかる技術を使用して、他のＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株を特定することができる。

ある特定の実施形態では、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌のバイオタイプであり、かつ本発明における使用に好適な株は、増幅リボソームＤＮＡ制限分析（ＡＲＤＲＡ）によって分析した場合、例えば、Ｓａｕ３ＡＩ制限酵素を使用した場合、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌と同じパターンを提供する株である（例示の方法及びガイダンスについて、例えば、［２１］を参照されたい）。

あるいは、バイオタイプ株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌と同じ炭水化物発酵パターンを有する株として特定される（実施例４及び図５を参照されたい）。あるいは、バイオタイプ株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌と同じアミノ酸発酵パターンを有する株として特定される（実施例４及び図５を参照されたい）。

好ましい実施形態では、本発明において使用されるバイオタイプ細菌株（特に、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ細菌株）は、例えば、適切な懸濁培地（ＡＰＩ懸濁培地など）で、３７℃で４時間培養した場合、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、α－グルコシダーゼ、β－グルコシダーゼ、及びアルカリホスファターゼのうちの２、３、４、または５つ全てなど（増加するほど好ましい）、１つ以上の酵素活性を呈する。本発明において使用されるバイオタイプ細菌株（特に、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ細菌株）は、好ましくは、例えば、適切な懸濁培地（ＡＰＩ懸濁培地など）で、３７℃で４時間培養した場合、アルギニン、ロイシル－グリシン、ロイシン、アラニン、ヒスチジン、及びグルタミルグルタミン酸のうちの２、３、４、５、または６つ全てなど（増加するほど好ましい）、１つ以上を発酵させることができる。本発明において使用されるバイオタイプ細菌株（特に、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ細菌株）は、より好ましくは、例えば、適切な懸濁培地（ＡＰＩ懸濁培地など）で、３７℃で４時間培養した場合、アルギニン、ロイシル－グリシン、ロイシン、アラニン、ヒスチジン、及びグルタミルグルタミン酸のうちの２、３、４、５、または６つ全てなど（増加するほど好ましい）、１つ以上を発酵させることができ、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、α－グルコシダーゼ、β－グルコシダーゼ、及びアルカリホスファターゼのうちの２、３、４、または５つ全てなど（増加するほど好ましい）、１つ以上の酵素活性を呈する。当該技術分野で既知の任意の好適なアッセイを使用して、炭水化物源またはアミノ酸を発酵させる細菌の能力を評価してもよい。好ましくは、Ｒａｐｉｄ ＩＤ ３２Ａ分析が使用される（好ましくは、ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘからのＲａｐｉｄ ＩＤ ３２Ａシステムを使用する）。

代替の好ましい実施形態では、本発明において使用されるバイオタイプ細菌株（特に、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ細菌株）は、フルクトース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、アルブチン、エスクリン、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、ラフィノース、デンプン、グリコーゲン、ツラノース、及びフコースのうちの２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個全てなど（増加するほど好ましい）、１つ以上を発酵させることができる。本発明において使用されるバイオタイプ細菌株（特に、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ細菌株）は、好ましくは、キシロース、Ｎ－アセチルグルコサミン、アミグダリン、サリシン、セロビオース、トレハロース、メレジトース、及びゲンチオビオースのうちの２、３、４、５、６、７、または８個全てなど（増加するほど好ましい）、１つ以上の中間発酵をさらに呈する。かかる実施形態では、当該技術分野で既知の任意の好適なアッセイを使用して、炭水化物源を発酵させる細菌の能力を評価してもよい。好ましくは、ＡＰＩ ５０ ＣＨ分析が使用される（好ましくは、ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘからのＡＰＩ ５０ ＣＨシステムを使用する）。

本発明において使用される特に好ましいバイオタイプの細菌株（特に、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ細菌株）は、（ｉ）α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、α－グルコシダーゼ、β－グルコシダーゼ、及びアルカリホスファターゼに対する酵素活性を呈し、（ｉｉ）アルギニン、ロイシル－グリシン、ロイシン、アラニン、ヒスチジン、及びグルタミルグルタミン酸を発酵させることができ、（ｉｉｉ）フルクトース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、アルブチン、エスクリン、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、ラフィノース、デンプン、グリコーゲン、ツラノース、及びフコースを発酵させることができる。バイオタイプ細菌株は、好ましくは、（ｉｖ）キシロース、Ｎ－アセチルグルコサミン、アミグダリン、サリシン、セロビオース、トレハロース、メレジトース、及びゲンチオビオースの中間発酵を呈する。（ｉ）及び（ｉｉ）は、好ましくは、細菌株が３７℃で４時間適切な懸濁培地（ＡＰＩ懸濁培地など）中で培養された場合に評価され、Ｒａｐｉｄ ＩＤ ３２Ａ分析によって（好ましくは、ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘからのＲａｐｉｄ ＩＤ ３２Ａシステムを使用して）評価される。（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）は、好ましくは、ＡＰＩ ５０ ＣＨ分析によって（好ましくは、ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘからのＡＰＩ ５０ ＣＨシステムを使用して）評価される。

受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌のバイオタイプなどの本発明の組成物及び方法に有用な他のＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、実施例に記載されるアッセイを含む任意の適切な方法または戦略を使用して特定され得る。具体的には、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌と同様の増殖パターン、代謝型、及び／または表面抗原を有する細菌株が本発明に有用であり得る。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌の誘導体を含む。受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された株の誘導体は、娘菌株（子孫）または原株から培養（サブクローン）された株であり得る。本発明の株の誘導体は、生物学的活性を除去することなく、例えば、遺伝子レベルで修飾してもよい。特に、本発明の誘導体株は、治療的に活性である。誘導体株は、元のＮＣＩＭＢ ４２３８２株と同等のワクチンアジュバント活性を有する。ＮＣＩＭＢ ４２３８２株の誘導体は、概して、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株のバイオタイプである。

誘導体株は、実施例に記載される培養及び投与プロトコルを使用して特定され得る、実施例に示される効果と同等のワクチンアジュバント効果を引き出すであろう。具体的には、誘導体株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された細菌のものと同等のＭＣＰ－１発現及びＢ細胞増殖に対する効果を引き出すであろう。ＮＣＩＭＢ ４２３８２株の誘導体は、概して、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株のバイオタイプである。例えば、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株の誘導体は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）集団におけるＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋ＣＤ３－細胞）のパーセンテージを、例えば、その細胞集団の４０％超（例えば、５反復に基づいてその細胞集団の平均４０％超）に増加させる可能性があり、それは、実施例に記載される培養及び投与プロトコルを使用して決定され得る。例えば、加えてまたはあるいは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株の誘導体は、ＰＢＭＣによるＭＣＰ－１の発現を、例えば、無細胞共培養上清のＭＣＰ－１タンパク質１０００ｐｇ／ｍＬ超に増加させる可能性があり、それは、実施例に記載される培養及び投与プロトコルを使用して決定され得る。

加えてまたはあるいは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株の誘導体は、例えば、未処理脾細胞または対照培地（例えば、ＹＣＦＡ＋培地）で処理された脾細胞よりも大きい程度に、脾細胞の増殖を増加させ、それは、例えば、３－［４，５－ジメチルチアゾール－２－イル］－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）の、ＭＴＴ－ホルマザンへの変換を測定するアッセイを使用して、例えば、ＭＴＴ－ホルマザンの比色検出によって決定され得る（例えば、実施例１０のように）。加えてまたはあるいは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２株の誘導体は、脾細胞からのサイトカインＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２７、ＩＬ－１０、ＭＩＰ－２、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＰ－１０、及び／またはＲＡＮＴＥＳのうちの１つ以上、好ましくはそれら全ての産生を、例えば、未処理脾細胞または対照培地（例えば、ＹＣＦＡ＋培地）で処理された脾細胞よりも大きい程度に増加させ、それは、サイトカインイムノアッセイ（例えば、実施例１１及び実施例１２で使用されるＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃからの２６－ｐｌｅｘ Ｍｏｕｓｅ ＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘ（商標）マルチプレックスイムノアッセイ）によって決定され得る。

受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託されたＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された株と同じ安全性及び治療有効性特性を有する任意の細胞を包含し、かかる細胞は本発明により包含される。したがって、組成物は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された株ではないが、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された株と同じ安全性及び治療有効性特性を有するＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株を含み得る。株の安全性特性は、例えば、株の抗生物質に対する耐性を試験することによって、例えば、抗生物質に対する固有の耐性と伝播性耐性とを区別することによって確立され得る。株の安全性特性は、インビトロでの株の病原性特性、例えば、毒素産生レベルを評価することによっても確立され得る。他の安全性試験は、ラット及びマウスモデルにおける細菌株の急性または慢性毒性を試験することを含む。株の治療有効性は、関連するモデルを使用した細菌株のインビトロ及びインビボでの機能的特徴付けによって確立することができる。

好ましい実施形態では、本発明の組成物中の細菌株は、生存可能であり、腸管に部分的または完全に定着することができる。

ある特定の好ましい実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、ＰＢＭＣからのＭＣＰ－１の発現及び／またはＢ細胞（特にＢリンパ球）の増殖を増加させることができる。

ある特定の好ましい実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、脾細胞の増殖を増加させることができる。これは、３－［４，５－ジメチルチアゾール－２－イル］－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）の、ＭＴＴ－ホルマザンへの変換を測定するアッセイを使用して、例えば、ＭＴＴ－ホルマザンの比色検出によって決定され得る（例えば、実施例５のように）。

ある特定の好ましい実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、脾細胞からのＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２７、ＩＬ－１０、ＭＩＰ－２、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＰ－１０、及び／またはＲＡＮＴＥＳのうちの１つ以上、好ましくはそれら全ての産生を増加させることができる。これは、サイトカインイムノアッセイ（例えば、実施例６及び実施例７で使用されるＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃからの２６－ｐｌｅｘ Ｍｏｕｓｅ ＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘ（登録商標）マルチプレックスイムノアッセイ）によって決定され得る。

ある特定の好ましい実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、酢酸を産生する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、プロピオン酸を産生する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明に使用するための細菌株は、酢酸及びプロピオン酸を産生する。酢酸及び／またはプロピオン酸の産生は、ガスクロマトグラフィー／質量分析（例えば、実施例８及び実施例９のように）を使用して決定され得る。

いくつかの実施形態では、本発明の組成物中の細菌株は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株であり、細菌株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された株のものではない。

いくつかの実施形態では、本発明の組成物中の細菌株は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種の細菌株であり、細菌株は、受託番号ＮＣＩＭＢ ４２３８２下で寄託された株のものではない。

治療用途
ワクチンアジュバントとしての使用
実施例は、本発明の組成物の投与がＭＣＰ－１の発現の増加をもたらすことができることを示す。ＭＣＰ－１は、ワクチン応答に重要であることが知られている。ＭＦ５９及びＡｌｕｍなどのアジュバントについて公開された研究は、ＭＣＰ－１を含むケモカインの分泌がアジュバントの有効性に関連していることを強調した［２２］。ケモカインは、リンパ球分化、プライミング、及びエフェクター機能を調節し、かつ防御免疫を増強するそれらの能力のため、ワクチンアジュバントとして使用されている［２３］。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株が上方制御することが見出されている追加のケモカインには、ＭＦ５９（とりわけ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１βを上方制御するもの［５７］）などの確立されたワクチンアジュバントと同様の、ＩＬ－５、ＣＸＣＬ１、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、及びＭＩＰ－２（実施例を参照のこと）が含まれる。さらに、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、脾細胞からのＧＭ－ＣＳＦの産生を増加させることが見出されており（実施例を参照されたい）、ＧＭ－ＣＳＦはそれ自体が臨床的に承認されたワクチンにアジュバント効果を提供するために使用されている［５８］。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株が実施例においてＨＴ２９細胞株及び脾細胞からの発現を誘発することが見出されたＴＮＦ－αもワクチンアジュバント効果を報告している［５５］。本発明の組成物の投与が、とりわけ、ＭＣＰ－１発現を増加させることが示されたため、本発明の組成物はワクチンアジュバントとして有用であり得る。一実施形態では、本発明の組成物は、ＭＣＰ－１の発現レベル及び／または活性を増加させることによってワクチンアジュバントとして使用するためのものである。別の実施形態では、本発明の組成物は、ＩＬ－５、ＣＸＣＬ１、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＭＩＰ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、及び／またはＴＮＦαのうちの１つ以上、好ましくはそれら全ての発現レベル及び／または活性（好ましくは発現レベル）を増加させることによってワクチンアジュバントとして使用するためのものである。一実施形態では、本発明の組成物は、ワクチンアジュバントとして使用するためのものである。一実施形態では、本発明の組成物は、インフルエンザ療法においてワクチンアジュバントとして使用するためのものである。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、抗原に対する免疫応答の増強に使用するためのものである。ある特定の実施形態では、本発明は、抗原と組み合わせて投与される組成物を提供する。ある特定の実施形態では、本発明の組成物中に存在する細菌株は、抗原を発現するように操作され得る。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、ワクチン接種の直前または直後に患者に投与するためのものである。好ましくは、本発明は、ワクチンアジュバントとしてのいずれかのかかる使用のための、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株、またはその誘導体もしくはバイオタイプを含む組成物を提供する。

実施例は、本発明の組成物の投与がＢ細胞集団の増殖をもたらすことができることも示す。Ｂ細胞が抗原に対する免疫応答を増強することが知られている。本発明の組成物の投与がＰＢＭＣ中のＢ細胞のパーセンテージを増加させることが示されたため、本発明の組成物はワクチンアジュバントとして有用である。

概して、ワクチンアジュバントとして使用される場合、本発明の組成物は、単独で投与されて、患者に別個に投与された抗原にアジュバント効果を提供するであろう。ある特定の実施形態では、本発明の組成物が経口投与される一方で、抗原は非経口注射される。

ある特定の実施形態では、本発明の細菌株は、１つ以上の抗原を発現する。概して、抗原は、組換え的に発現され、細菌細胞とは異種である。したがって、本発明の実施形態では、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株は、異種抗原を発現する組成物中に提供される。

Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株によって発現され得る及び／または本発明の組成物中に別個に提供され得るまたは本発明の組成物と順次もしくは別個に投与され得る例示的な抗原には、ウイルス表面タンパク質などのウイルス抗原、タンパク質及び／またはサッカリド抗原などの細菌性抗原、真菌性抗原、寄生虫抗原、ならびに腫瘍抗原が含まれる。

本発明は、以下の病原体：インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、鉤虫、Ｂ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、クラミジア、ＳＡＲＳコロナウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、エプスタイン・バーウイルス、ヒトパピローマウイルス由来の抗原に特に有用である。

さらなる抗原には、糖タンパク質及びリポグリカン 抗原、古細菌 抗原、黒色腫抗原Ｅ（ＭＡＧＥ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、シアリル－Ｔｎ（ＳＴｎ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＣＡ－１２５、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、エプスタイン・バーウイルス抗原、ネオ抗原、癌タンパク質、アミロイド－ベータ、Ｔａｕ、ＰＣＳＫ９、及び習慣性物質、例えば、ニコチン、アルコール、またはオピエートが含まれる。

本発明は、ワクチンアジュバントとして使用するための薬剤の製造における、（ｉ）抗原（例えば、上で特定されたもののうちの１つ以上）の水性調製物及び（ｉｉ）Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む組成物、の使用も提供する。好ましくは、この細菌株は、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株、またはその誘導体もしくはバイオタイプである。

これらの方法及び使用によってもたらされた免疫応答には、概して、抗体応答、好ましくは、防御抗体応答が含まれる。

本明細書で使用される場合、ワクチンの有効性または対象の免疫応答を「増強する」とは、本発明のワクチンが、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株の添加を伴わない同じ抗原（複数可）を受けた対象における免疫応答と比較して、対象におけるより高い免疫応答（体液性免疫応答など）を引き出すことを指す。

細胞療法
キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）療法
したがって、本発明の組成物は、細胞療法、特にＣＡＲ－Ｔ細胞療法において有用であり得る。一実施形態では、本発明の組成物は、細胞療法に使用するためのものである。一実施形態では、本発明の組成物は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法に使用するためのものである。一実施形態では、本発明の組成物は、ＣＡＲ－Ｔを増強することによってがんの療法に使用するためのものである。好ましい一実施形態では、本発明の組成物は、ＣＡＲ－Ｔを増強することによって慢性リンパ球性白血病の治療に使用するためのものである。好ましくは、本発明は、いずれかのかかる使用のための、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株、またはその誘導体もしくはバイオタイプを含む組成物を提供する。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、ＣＡＲ－Ｔ療法中のＴ細胞養子移入前に患者に投与される。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、ＣＡＲ－Ｔ療法中のＴ細胞養子移入後に患者に投与される。

したがって、本発明の組成物は、細胞療法に、特に細胞療法に対する応答の増強に有用であり得る。

本明細書で使用される場合、ＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の有効性を「増強する」とは、本発明の組成物が、その投与なしと比較して、その投与の結果として細胞療法（ＣＡＲ－Ｔの場合、特に腫瘍抗原に対するＴ細胞媒介性免疫応答など）による対象におけるより高い治療効果を引き出すことを指す。例えば、本発明の組成物及び細胞療法で治療された対象は、細胞療法で治療されたが、本発明の組成物では治療されていない対照対象と比較してより高い細胞療法によるかかる治療効果を呈し得る。

間葉幹細胞（ＭＳＣ）療法
間葉幹細胞（ＭＳＣ）療法が免疫刺激特性を有することが報告されている。ＭＳＣがＬＰＳで処理された場合、それらは、Ｂ細胞増殖の増加を引き起こす炎症促進性サイトカインＩＬ－８を上方制御する［２４］。したがって、本発明の組成物がＢ細胞増殖を増加させることが示されたため、それらは、ＭＳＣ細胞療法と組み合わせて有用であり得る。

幹細胞移植療法
幹細胞移植療法で未分化幹細胞を使用する代わりに、幹細胞を移植前にある程度分化させることが有益であり得ることが報告されている。例えば、Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．［２５］は、幹細胞の心筋原性分化が、より高い生着効率、筋細胞再生の増強、及び心機能回復の増加を有するため、有益であり得ることを報告した。また、細菌のある特定の片利共生株でのＧＩ定着が同種造血細胞移植後に生存率を改善することができることを研究が示している［２６］。本発明の組成物の投与が細胞を刺激したため、本発明の組成物は幹細胞移植療法における幹細胞分化に有用であり得る。具体的には、本発明の組成物は、同種造血細胞移植などの造血細胞移植の方法に使用するためのものである。

免疫老化
Ｆｕｌｏｐ ｅｔ ａｌ．［２７］は、Ｂ細胞数の減少が適応免疫系の加齢に関連していると特定した。したがって、本発明の組成物は、免疫老化を予防するまたは遅延させるために使用され得る。一実施形態では、本発明の組成物は、免疫老化の予防に使用するためのものである。別の実施形態では、本発明の組成物は、Ｂ細胞数の減少を特徴とする免疫老化（Ｂ細胞免疫老化）の遅延に使用するためのものである。一実施形態では、本発明の組成物は、Ｂ細胞数を増加させることによって免疫老化の遅延に使用するためのものである。一実施形態では、本発明の組成物は、免疫老化によって引き起こされた疾患の治療に使用するためのものである。一実施形態では、本発明の組成物は、免疫老化を遅延させる及び／または予防することによって加齢性疾患の治療に使用するためのものである。好ましくは、本発明は、いずれかのかかる使用のための、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株、またはその誘導体もしくはバイオタイプを含む組成物を提供する。

さらに、ワクチンアジュバントが免疫老化を打開し得ることが提案されている［２８］。本発明の組成物がワクチンアジュバントとしての使用に好適であるため、本発明の組成物は、免疫老化の予防または遅延に有用であり得る。別の実施形態では、本発明の組成物は、ワクチンアジュバントとして免疫老化の遅延及び／または予防に使用するためのものである。別の実施形態では、本発明の組成物は、ワクチンアジュバントとして使用するためのものであり、本組成物は、免疫老化を遅延させる及び／または予防する。

免疫老化に関連する疾患には、心血管疾患、アルツハイマー病及びパーキンソン病などの神経変性疾患、がん、２型真性糖尿病［２９］、ならびに自己免疫障害［３０］が含まれる。

患者下位群
実施例に示されるように、多数のＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、脾細胞増殖及びサイトカイン分泌などの免疫刺激効果を引き出す。したがって、上で詳述された治療用途のうちのいずれにおいても、本発明の組成物は、免疫不全対象または免疫抑制対象に特に有効であり得る。対象は、臓器レシピエンシー、医原性免疫抑制、免疫抑制感染（ＨＩＶ感染など）の存在、及び／または腫瘍誘発免疫抑制を含むが、これらに限定されない、任意の理由で免疫不全または免疫抑制であり得る。好ましくは、対象は、がんを有し、腫瘍誘発免疫抑制の結果として免疫不全または免疫抑制である。

（腫瘍誘発免疫抑制の結果として）免疫不全または免疫抑制である対象は、疾患を有さない対象、特にがんを有さない対象と比較して、リンパ節内及び／またはある量の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内に制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数の増加を呈し得る（例えば、［３１］、［３２］を参照されたい）。したがって、上で詳述された治療用途のうちのいずれにおいても、本発明の組成物は、好ましくは、疾患を有さない対象のリンパ節と比較して、リンパ節内に増加した数の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を有する対象に使用するためのものである。より好ましくは、対象はがんを有し、本発明の組成物は、がんを有さない対象のリンパ節と比較して、リンパ節（転移性リンパ節など）内に増加した数の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を有する対象に使用するためのものである。加えてまたはあるいは、上で詳述された治療用途のうちのいずれにおいても、本発明の組成物は、好ましくは、疾患を有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内にＴｒｅｇの数が増加した対象に使用するためのものである。より好ましくは、対象はがんを有し、本発明の組成物は、がんを有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内にＴｒｅｇの数が増加した対象に使用するためのものである。これらの実施形態では、Ｔｒｅｇは、代わりに、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞、ＦＯＸＰ３＋細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋及びＦｏｘｐ３＋細胞として定義され得る（［３２］を参照されたい）。免疫不全対象または免疫抑制対象は、疾患を有さない対象、特にがんを有さない対象と比較して、より多数の骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）及び／または形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を呈し得る（例えば、［３３］を参照されたい）。したがって、加えてまたはあるいは、上で詳述された治療用途のうちのいずれにおいても、本発明の組成物は、好ましくは、疾患を有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内にｍＤＣの数が増加した対象に使用するためのものである。より好ましくは、対象はがんを有し、本発明の組成物は、がんを有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内にｍＤＣの数が増加した対象に使用するためのものである。加えてまたはあるいは、上で詳述された治療用途のうちのいずれにおいても、本発明の組成物は、好ましくは、疾患を有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内にｐＤＣの数が増加した対象に使用するためのものである。より好ましくは、対象はがんを有し、本発明の組成物は、がんを有さない対象由来のある量のＰＢＭＣと比較して、同容量のＰＢＭＣ内にｐＤＣの数が増加した対象に使用するためのものである。これらの実施形態では、ｐＤＣは、代わりに、ＣＤ１１ｃ＋細胞として定義されてもよく、及び／またはｍＤＣは、代わりに、ＣＤ１２３＋細胞として定義されてもよい（［３３］を参照されたい）。細胞数及び細胞表面マーカーの発現は、フローサイトメトリーなどの当該技術分野で入手可能な標準的な方法を使用して決定され得る（例えば、［３２］を参照されたい）。

投与方法
好ましくは、本発明の組成物は、本発明の細菌株による腸への送達及び／または腸での部分的もしくは全体的な定着を可能にするために、胃腸管に投与される。概して、本発明の組成物は、経口投与されるが、それらは、直腸、鼻腔内、または口腔もしくは舌下経路を介して投与され得る。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、泡として、スプレーまたはゲルとして投与され得る。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、坐剤、例えば、肛門坐薬として、例えば、カカオ脂（ココアバター）、合成硬質脂肪（例えば、坐剤用基材、ウィテップゾール）、グリセロ－ゼラチン、ポリエチレングリコール、または石鹸グリセリン組成物の形態で投与され得る。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、チューブ、例えば、鼻腔栄養チューブ、経口胃チューブ、胃チューブ、経空腸チューブ（Ｊチューブ）、経皮的内視鏡下胃瘻造設術（ＰＥＧ）、またはポート、例えば、胃、空腸、及び他の好適なアクセスポートへのアクセスを付与する胸壁ポートを介して胃腸管に投与される。

本発明の組成物は、１回投与されてもよく、または治療レジメンの一部として順次投与されてもよい。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、毎日投与される。

本発明のある特定の実施形態では、本発明による治療は、患者の腸内微生物叢のアセスメントを伴う。本発明の株の送達及び／または部分的もしくは全体的な定着が達成されず、その結果、有効性が観察されない場合、治療は繰り返されてもよく、あるいは、送達及び／または部分的もしくは全体的な定着が成功し、かつ有効性が観察された場合、治療は中止されてもよい。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、疾患が子宮内の子に及び／または生後に発症する可能性を低下させるために、妊娠中の動物、例えば、ヒトなどの哺乳動物に投与され得る。

本発明の組成物は、Ｂ細胞数の減少を有すると特定された患者に投与され得る。

本発明の組成物は、栄養補助食品などの食品として投与され得る。

概して、本発明の組成物は、ヒトの治療のためのものであるが、それらを使用して、家禽、ブタ、ネコ、イヌ、ウマ、またはウサギなどの単胃哺乳動物を含む動物を治療することができる。本発明の組成物は、動物の成長及び能力の増強に有用であり得る。動物に投与される場合、経口胃管栄養法が使用され得る。

組成物
本発明の組成物は、細菌を含む。本発明の好ましい実施形態では、本組成物は、凍結乾燥形態で調合される。例えば、本発明の組成物は、本発明の細菌株を含む顆粒またはゼラチンカプセル、例えば、硬質ゼラチンカプセルを含んでもよい。

好ましくは、本発明の組成物は、凍結乾燥細菌を含む。細菌の凍結乾燥は、十分に確立された手順であり、関連するガイダンスは、例えば、参考文献［３４、３６］で入手可能である。

あるいは、本発明の組成物は、生きている活性細菌培養物を含んでもよい。

好ましい実施形態では、本発明の組成物は、細菌株の腸への送達を可能にするようにカプセル化されている。カプセル化は、標的位置に送達されるまで、例えば、ｐＨの変化によって引き起こされ得る圧力、酵素活性、または物理的崩壊などの化学的または物理的刺激での破裂による分解から組成物を保護する。任意の適切なカプセル化方法が使用されてもよい。例示的なカプセル化技術としては、多孔質マトリックス内への取り込み、固体担体表面への付着または吸着、凝集によるまたは架橋剤を用いた自己会合、及び微多孔膜またはマイクロカプセルの後ろでの機械的封じ込めが挙げられる。本発明の組成物の調製に有用であり得るカプセル化に関するガイダンスは、例えば、参考文献［３７］及び［３８］で入手可能である。

本組成物は、経口投与されてもよく、錠剤、カプセル、または粉末の形態であってもよい。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属由来の生物が嫌気性生物であるため、カプセル化された製品が好ましい。他の成分（例えば、ビタミンＣなど）が、インビボでの送達及び／または部分的もしくは全体的な定着ならびに生存を改善するように脱酸素剤及びプレバイオティック基質として含まれていてもよい。あるいは、本発明のプロバイオティック組成物は、食品もしくは栄養製品、例えば、ミルクもしくはホエイベースの発酵乳製品として、または医薬製品として経口投与されてもよい。

本組成物は、プロバイオティックとして調合されてもよい。

本発明の組成物は、治療有効量の本発明の細菌株を含む。治療有効量の細菌株は、患者への有益な効果を発揮するのに十分である。治療有効量の細菌株は、患者の腸への送達及び／または腸での部分的もしくは全体的な定着をもたらすのに十分であり得る。

例えば、成人ヒトへの細菌の好適な１日用量は、約１×１０^３～約１×１０^１１コロニー形成単位（ＣＦＵ）、例えば、約１×１０^７～約１×１０^１０ＣＦＵ、別の例では、約１×１０^６～約１×１０^１０ＣＦＵ、別の例では、約１×１０^７～約１×１０^１１ＣＦＵ、別の例では、約１×１０^８～約１×１０^１０ＣＦＵ、別の例では、約１×１０^８～約１×１０^１１ＣＦＵであり得る。

ある特定の実施形態では、細菌の用量は、少なくとも１０^９細胞／日、例えば、少なくとも１０^１０細胞／日、少なくとも１０^１１細胞／日、または少なくとも１０^１２細胞／日である。

ある特定の実施形態では、本組成物は、本組成物の重量に対して約１×１０^６～約１×１０^１１ＣＦＵ／ｇ、例えば、約１×１０^８～約１×１０^１０ＣＦＵ／ｇの量の細菌株を含む。用量は、例えば、１ｇ、３ｇ、５ｇ、及び１０ｇであってもよい。

ある特定の実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物を提供し、細菌株の量は、本組成物の重量に対してグラム当たり約１×１０^３～約１×１０^１１コロニー形成単位である。

ある特定の実施形態では、本医薬組成物は、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、またはそれ以下の異なる細菌種を含む。ある特定の実施形態では、本医薬組成物は、４つ以下の異なる細菌種を含む。ある特定の実施形態では、本医薬組成物は、３つ以下の異なる細菌種を含む。ある特定の実施形態では、本医薬組成物は、２つ以下の異なる細菌種を含む。ある特定の実施形態では、本医薬組成物は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ、ｍｅｒｄａｅ、ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、またはｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉを含み、他の細菌種は含まない。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ、ｍｅｒｄａｅ、ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、またはｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉの単一株を含み、他の細菌株または種は含まない。かかる組成物は、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の他の細菌株または種を含み得る。驚くべきことに、実施例は、本発明の単一株のみを含む組成物が、他の株または種との同時投与に依存することなく、強力な効果を有することができることを実証する。

ある特定の実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物を提供し、本組成物は、５００ｍｇ～１０００ｍｇ、６００ｍｇ～９００ｍｇ、７００ｍｇ～８００ｍｇ、５００ｍｇ～７５０ｍｇ、または７５０ｍｇ～１０００ｍｇの用量で投与される。ある特定の実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物を提供し、本医薬組成物中の凍結乾燥細菌は、５００ｍｇ～１０００ｍｇ、６００ｍｇ～９００ｍｇ、７００ｍｇ～８００ｍｇ、５００ｍｇ～７５０ｍｇ、または７５０ｍｇ～１０００ｍｇの用量で投与される。

典型的には、本発明の組成物などのプロバイオティックは、任意選択的に、少なくとも１つの好適なプレバイオティック化合物と組み合わせられる。プレバイオティック化合物は、通常、上部消化管で分解または吸収されない、非消化性炭水化物、例えば、オリゴ糖もしくは多糖、または糖アルコールである。既知のプレバイオティクスとしては、市販品、例えば、イヌリン及びトランスガラクト－オリゴ糖が挙げられる。

ある特定の実施形態では、本発明のプロバイオティック組成物は、本組成物の総重量に対して約１～約３０重量％（例えば、５～２０重量％）の量でプレバイオティック化合物を含む。炭水化物は、フラクト－オリゴ糖（またはＦＯＳ）、短鎖フラクト－オリゴ糖、インスリン、イソマルト－オリゴ糖、ペクチン、キシロ－オリゴ糖（またはＸＯＳ）、キトサン－オリゴ糖（またはＣＯＳ）、β－グルカン、耕作性ガム（ａｒａｂｌｅ ｇｕｍ）変性及び耐性デンプン、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシアファイバー、イナゴマメ、オート麦、ならびにシトラスファイバーからなる群から選択され得る。一態様では、プレバイオティクスは、短鎖フルクト－オリゴ糖（簡潔にするために、本明細書の以下ではＦＯＳｓ－ｃ．ｃと示される）であり、前述のＦＯＳｓ－ｃ．ｃ．は、消化性炭水化物ではなく、一般にテンサイ糖の変換によって得られ、３つのグルコース分子が結合しているサッカロース分子を含んでいる。

本発明の組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含み得る。かかる好適な賦形剤の例は、参考文献［３９］で見つけることができる。治療的使用のための許容可能な担体または希釈剤は、薬剤分野で周知であり、例えば、参考文献［４０］に記載されている。好適な担体の例としては、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが挙げられる。好適な希釈剤の例としては、エタノール、グリセロール、及び水が挙げられる。医薬担体、賦形剤、または希釈剤の選択は、意図される投与経路及び標準の薬務に関して選択され得る。本医薬組成物は、担体、賦形剤、または希釈剤として、またはそれに加えて、任意の好適な結合剤（複数可）、滑沢剤（複数可）、懸濁剤（複数可）、コーティング剤（複数可）、可溶化剤（複数可）を含んでもよい。好適な結合剤の例としては、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えば、グルコース、無水ラクトース、自由流動ラクトース、β－ラクトース、トウモロコシ甘味料、天然及び合成ガム、例えば、アカシア、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、及びポリエチレングリコールが挙げられる。好適な滑沢剤の例としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。防腐剤、安定剤、染料、及びさらなる香味剤が本医薬組成物中に提供されてもよい。防腐剤の例としては、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ－ヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。抗酸化剤及び懸濁剤も使用され得る。

本発明の組成物は、食品として調合され得る。例えば、食品は、栄養補助食品などにおいて、本発明の治療効果に加えて、栄養的利益を提供し得る。同様に、食品は、本発明の組成物の風味を向上させるように、または本組成物を、医薬組成物よりもむしろ、一般食料品とより類似することによって、消費するのにより魅力的であるようにするように調合されてもよい。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、ミルクベースの製品として調合される。用語「ミルクベースの生成物」とは、変動する脂肪分を有する任意の液体または半固体のミルクベースまたはホエイベースの製品を意味する。ミルクベースの製品は、例えば、ウシのミルク、ヤギのミルク、ヒツジのミルク、スキムミルク、ホールミルク、いかなる処理もしていない粉ミルク及びホエイからの還元ミルク、または加工製品、例えば、ヨーグルト、凝固したミルク、カード、酸乳、酸全乳、バターミルク、及び他の酸乳製品であり得る。別の重要な群としては、ミルク飲料、例えば、ホエイ飲料、発酵乳、コンデンスミルク、乳幼児用ミルク；フレーバーミルク、アイスクリーム；ミルク含有食品、例えば、スイーツが挙げられる。

ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、単一細菌株または種を含有し、他の細菌株または種はいずれも含有しない。かかる組成物は、ほんの僅少なもしくは生物学的に関連のない量の他の細菌株または種を含み得る。かかる組成物は、他の種の生物を実質的に含まない培養物であり得る。

本発明による使用のための組成物は、販売承認を必要としてもしなくてもよい。

一部の場合には、凍結乾燥された細菌株は、投与前に再構成される。一部の場合には、再構成は、本明細書に記載の希釈剤の使用による。

本発明の組成物は、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含むことができる。

ある特定の実施形態では、本発明は、本発明の細菌株と、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む医薬組成物を提供し、細菌株は、それを必要とする対象に投与される場合、障害を治療するのに十分な量である。

ある特定の実施形態では、本発明は、本発明の細菌株と、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む医薬組成物を提供し、細菌株は、疾患または状態を治療または予防するのに十分な量である。

ある特定の実施形態では、本発明は、本発明の細菌株と、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む医薬組成物を提供し、細菌株は、低下した免疫応答によって媒介される疾患または状態を治療または予防するのに十分な量である。

ある特定の実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物を提供し、細菌株の量は、本組成物の重量に対してグラム当たり約１×１０^３～約１×１０^１１コロニー形成単位である。

ある特定の実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物を提供し、本組成物は、１ｇ、３ｇ、５ｇ、または１０ｇの用量で投与される。

ある特定の実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物を提供し、本組成物は、経口、直腸、皮下、経鼻、口腔、及び舌下からなる群から選択される方法によって投与される。

ある特定の実施形態では、本発明は、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、及びソルビトールからなる群から選択される担体を含む、上記の医薬組成物を提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、エタノール、グリセロール、及び水からなる群から選択される希釈剤を含む、上記の医薬組成物を提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、デンプン、ゼラチン、グルコース、無水ラクトース、自由流動ラクトース、β－ラクトース、トウモロコシ甘味料、アカシア、トラガカント、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び塩化ナトリウムからなる群から選択される賦形剤を含む、上記の医薬組成物を提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、防腐剤、抗酸化剤、及び安定剤のうちの少なくとも１つをさらに含む、上記の医薬組成物を提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ－ヒドロキシ安息香酸エステルからなる群から選択される防腐剤を含む、上記の医薬組成物を提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、前述の細菌株が凍結乾燥されている、上記の医薬組成物を提供する。

ある特定の実施形態では、本発明は、上記の医薬組成物を提供し、本組成物が密封容器内に約４℃または約２５℃で保管され、容器が５０％相対湿度を有する雰囲気中に配置された場合、コロニー形成単位で測定される細菌株の少なくとも８０％が、少なくとも約１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、または３年の期間後にも残存する。

培養方法
本発明に使用するための細菌株は、例えば、参考文献［４１～４３］に詳述されている標準の微生物学技術を使用して培養され得る。

培養に使用される固体または液体培地は、ＹＣＦＡ寒天またはＹＣＦＡ培地であってもよい。ＹＣＦＡ培地は、（１００ｍＬ当たりの近似値）：カシトン（１．０ｇ）、酵母エキス（０．２５ｇ）、ＮａＨＣＯ_３（０．４ｇ）、システイン（０．１ｇ）、Ｋ_２ＨＰＯ_４（０．０４５ｇ）、ＫＨ_２ＰＯ_４（０．０４５ｇ）、ＮａＣｌ（０．０９ｇ）、（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４（０．０９ｇ）、ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ（０．００９ｇ）、ＣａＣｌ_２（０．００９ｇ）、レザズリン（０．１ｍｇ）、ヘミン（１ｍｇ）、ビオチン（１μｇ）、コバラミン（１μｇ）、ｐ－アミノ安息香酸（３μｇ）、葉酸（５μｇ）、及びピリドキサミン（１５μｇ）を含み得る。ＹＣＦＡ＋培地は、以下の組成を有する。
バクトカシチオン １．０ｇ
酵母エキス ０．２５ｇ
炭酸水素ナトリウム ０．４ｇ
グルコース ０．２ｇ
セロビオース ０．２ｇ
可溶性デンプン ０．２ｇ
ミネラル溶液１ １５ｍＬ
ミネラル溶液２ １５ｍＬ
ＳＣＦＡ溶液 ０．３１ｍＬ
ヘミン溶液 １ｍＬ
ビタミン溶液１ １００μＬ
ビタミン溶液２ １００μＬ
レザズリン溶液 ０．１ｍＬ
システイン ０．１ｇ
総量に対する蒸留水：１００ｍ

ミネラル溶液１：Ｋ_２ＨＰＯ_４－３．０ｇ；総量に対する蒸留水１Ｌ
ミネラル溶液２：ＫＨ_２ＰＯ_４－３．０ｇ；（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４－６．０ｇ；ＮａＣｌ－６．０ｇ；ＭｇＳＯ_４－０．６ｇ；ＣａＣｌ_２－０．６ｇ；総量に対する蒸留水１Ｌ
レザズリン溶液：１００ｍＬの蒸留水中０．１％粉末レザズリン
短鎖脂肪酸溶液：酢酸－１７ｍＬ、プロピオン酸－６ｍＬ、ｎ－バレル酸－１ｍＬ、イソ吉草酸－１ｍＬ、イソ酪酸－１ｍＬ
ヘミン溶液：ＫＯＨ－０．２８ｇエタノール９５％－２５ｍｌ；ヘミン－１００ｍｇ；総量に対する蒸留水１００ｍＬ
ビタミン溶液１：ビオチン－１ｍｇ；コバラミン－１ｍｇ；ｐ－アミノ安息香酸－３ｍｇ；葉酸－５ｍｇ；ピリドキサミン－１５ｍｇ；総量に対する蒸留水１００ｍＬ
ビタミン溶液２：チアミン－５ｍｇ；リボフラビン－５ｍｇ；総量に対する蒸留水１００ｍＬ

ワクチン組成物
本発明人らは、本発明の細菌株がワクチンアジュバントとして有用であると特定した。それ故に、本発明の細菌株は、病原体抗原または腫瘍抗原などの１つ以上の抗原と組み合わせてアジュバントとしてワクチン組成物で投与された場合、疾患または状態の予防にも有用であり得る。したがって、本発明は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株（上で定義される）と、病原体抗原または腫瘍抗原などの１つ以上の抗原とを含むワクチン組成物も提供する。病原体抗原には、ウイルス表面タンパク質などのウイルス抗原、タンパク質及び／またはサッカリド抗原などの細菌性抗原、真菌性抗原、ならびに寄生虫抗原が含まれる。

本発明のワクチン組成物中の抗原には、以下の病原体：インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、鉤虫、Ｂ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、クラミジア、ＳＡＲＳコロナウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、エプスタイン・バーウイルス、ヒトパピローマウイルスに由来するものが含まれる。インフルエンザウイルス抗原が好ましい。

本発明のワクチン組成物中のさらなる抗原には、糖タンパク質及びリポグリカン抗原、古細菌抗原、黒色腫抗原Ｅ（ＭＡＧＥ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、シアリル－Ｔｎ（ＳＴｎ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＣＡ－１２５、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ネオ抗原、癌タンパク質、アミロイド－ベータ、Ｔａｕ、ＰＣＳＫ９、及び習慣性物質、例えば、ニコチン、アルコール、またはオピエートが含まれる。

いくつかの実施形態では、本ワクチン組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。いくつかの実施形態では、本ワクチン組成物は、アルミニウム塩（特に、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、または硫酸アルミニウム）などのさらなるアジュバントを含む。他の実施形態では、本ワクチン組成物は、さらなるアジュバントを含まない（すなわち、本発明による細菌株が組成物中で唯一のアジュバントである）。

いくつかの実施形態では、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株（上で定義される）は、本ワクチン組成物中の１つ以上の抗原を発現する。概して、抗原は、組換え的に発現され、細菌細胞とは異種である。したがって、いくつかの実施形態では、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株（上で定義される）は、異種抗原を発現する本ワクチン組成物中に提供される。

ある特定のかかる実施形態では、本発明の細菌株は、殺滅され得るか、不活性化され得るか、または弱毒化され得る。ある特定の実施形態では、本ワクチン組成物は、皮下注射などの注射を介した投与のためのものである。

本発明のワクチン組成物は、上で定義される組成物特徴（「組成物」の節を参照されたい）をさらに含む。

本発明のワクチン組成物は、上で定義される治療用途のうちのいずれかを含む、薬剤に使用するためのものでもある。

総則
本発明の実施には、別途指示されない限り、当該技術分野の技術の範囲内の化学、生化学、分子生物学、免疫学、及び薬理学の従来の方法が採用される。かかる技術は、文献で十分に説明されている。例えば、参考文献［４４］及び［４５、５１］などを参照されたい。

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなり得るか、または追加のもの、例えば、Ｘ＋Ｙを含み得る。

数値ｘに関連する用語「約」は、任意選択であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。

単語「実質的に」は、「完全に」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを全く含まなくてもよい。必要に応じて、単語「実質的に」は、本発明の定義から省略されてもよい。

２つのヌクレオチド配列間の配列同一性パーセンテージへの言及は、アラインされている場合、ヌクレオチドのパーセンテージがそれらの２つの配列を比較したときに同じであることを意味する。このアラインメント及び相同性または配列同一性パーセントは、当該技術分野で既知のソフトウェアプログラム、例えば、参考文献［５２］の第７．７．１８節に記載されているものを使用して決定され得る。好ましいアラインメントは、ギャップオープンペナルティ１２及びギャップエクステンションペナルティ２、ＢＬＯＳＵＭマトリックス６２によるアフィンギャップ検索を使用してＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献［５３］に開示されている。

特に記述されていない限り、多数のステップを含むプロセスまたは方法は、その方法の開始及び終了時に追加のステップを含んでもよく、または追加の介在ステップを含んでもよい。また、ステップは、適切な場合、組み合わされても、省略されても、または代替の順序で実施されてもよい。

本発明の様々な実施形態が本明細書に記載される。各実施形態で特定される特徴が他の特定された特徴と組み合わせられて、さらなる実施形態を提供することができることが理解されよう。具体的には、好適な、典型的な、または好ましいものとして本明細書で強調される実施形態は、互いに組み合わせられてもよい（それらが互いに排他的である場合を除いて）。

本発明を実施するための形態
実施例１－健常ドナー由来のＰＢＭＣの基本的な細胞表現型決定
細菌株
Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ株 ＮＣＩＭＢ ４２３８２
方法
ＰＢＭＣの処理
健常ヒト凍結ＰＢＭＣをＳｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＵＫ）から購入した。簡単に言えば、細胞を解凍し、３７℃のＣＯ２インキュベーター内の完全増殖培地（１０％ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ．グルタミン、及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ １６４０）中に一晩静置した。本実験のために、細胞を７５０，０００細胞／ウェルの密度で４８ウェルプレートにプレーティングし、１ｎｇ／ｍＬ ＬＰＳの存在下または不在下で１０％細菌上清を含む完全増殖培地中で処理した。細胞培養培地を未処理のウェルに添加した。細胞を７２時間静置し、その後、無細胞上清を回収し、４℃で３分間にわたって１０，０００ｇでスピンダウンした。試料をサイトカイン分析のために－８０℃で保管した。

免疫表現型決定
１．５×１０^６細胞／試料を、室温で１０分間、Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｄｙｅ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で染色して、生細胞と死細胞を区別した。その後、細胞を、基本的な免疫表現型決定（ＣＤ３／ＣＤ４／ＣＤ８／ＣＤ２５／ＣＤ１２７及びＣＤ１９）のために、以下に列記した抗体のカクテル（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で染色し、室温で１０分間インキュベートした。

以下の細胞集団のパーセンテージを測定するための実験を行った。
●ＣＤ４＋ＣＤ３＋細胞（ＣＤ４ ヘルパーＴ細胞のマーカー）
●ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞（ＣＤ４＋活性化細胞のマーカー）
●ＣＤ４＋細胞集団からのＣＤ２５＋＋ＣＤ１７－細胞（Ｔｒｅｇ細胞のマーカー）
●ＣＤ８＋ＣＤ３＋細胞（細胞傷害性Ｔ細胞のマーカー）
●ＣＤ２５＋ＣＤ８＋細胞（ＣＤ８＋活性化細胞のマーカー）
●ＣＤ１９＋ＣＤ３－細胞（Ｂ細胞のマーカー）

ＣＤ８＋／Ｔｒｅｇの比率及び活性化ＣＤ８／Ｔｒｅｇ細胞の比率を決定した。

結果
実験の結果を図１に示す。

最も驚くべき結果は、Ｂ細胞を表すＣＤ１９＋ＣＤ３－細胞のパーセンテージに対するＮＣＩＭＢ ４２３８２処理の効果である（図１Ｆを参照のこと）。ＮＣＩＭＢ ４２３８２は、ＰＢＭＣ集団におけるＢ細胞のパーセンテージを選択的に増加させた。ＮＣＩＭＢ ４２３８２処理は、ＣＤ４ ヘルパーＴ細胞、ＣＤ４＋活性化細胞、Ｔｒｅｇ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、またはＣＤ８＋活性化細胞のパーセンテージを有意に変化させなかった。

考察
ＮＣＩＭＢ ４２３８２での処理がＢ細胞のパーセンテージを選択的に増加させたという観察結果は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属由来の株のワクチンアジュバントとしての有効性を支持し、免疫老化などのＢ細胞レベルの減少を特徴とする他の状態の治療にも有効であることを支持する。

実施例２－健常ドナー由来のＰＢＭＣのサイトカイン分析
序文
本発明人らは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２とのインキュベーション後のＰＢＭＣのさらなる分析に努めた。本発明人らは、ワクチンアジュバントの有効性に関連していることが知られているＰＢＭＣ由来の特定のサイトカイン、すなわち、ＭＣＰ－１の発現を分析した。

細菌株
Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ株 ＮＣＩＭＢ ４２３８２
方法
ＰＢＭＣの処理
ＰＢＭＣを実施例１に記載されるように処理した。

サイトカイン定量化
サイトカイン定量化を、製造業者（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の推奨事項に従ってＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘマルチプレックス免疫アッセイを使用して行った。簡単に言えば、５０μＬの無細胞共培養上清を、ｘＰＯＮＥＮＴソフトウェアを備えたＭＡＧＰＩＸ（登録商標）ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）システム（Ｍｅｒｃｋ）（Ｌｕｍｉｎｅｘ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）を使用したサイトカイン定量化に使用した。５パラメータロジスティクス曲線及びバックグラウンド除去を使用したＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）アナリストソフトウェア（Ｍｅｒｃｋ）を使用してデータを分析し、平均蛍光強度をｐｇ／ｍＬ値に変換した。

結果
結果を図３に示す。健常ドナー由来のＰＢＭＣ培養物中のＮＣＩＭＢ ４２３８２のサイトカイン分析の結果は、ＭＣＰ－１の発現の増加を示した。

考察
これは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２がワクチンアジュバント活性に関連するサイトカインであるＰＢＭＣ由来のＭＣＰ－１の増加を効果的に引き出すことを示す。

実施例３－ＨＴ２９細胞株によるＴＮＦ－α分泌に対するＮＣＩＭＢ ４２３８２の効果
方法
分化ＨＴ２９細胞は、不透過性であり、かつ小腸の上皮細胞と構造的及び機能的に類似する分極頂端膜／粘膜及び側底膜／漿膜を形成する。

ＨＴ２９細胞を２００，０００細胞／ウェルの密度で１２ウェルプレートにプレーティングした。細胞を１０日間分化させた（２日毎に培地を取り換えた）。実験当日、細胞を嫌気性フード内に置き、嫌気性平衡化ＨＡＮＫ溶液で洗浄した。その後、９００μＬの増殖培地（ＦＢＳ及び抗生物質を含まない）を細胞に添加した。細菌細胞を（ＦＢＳ及び抗生物質を含まない）増殖培地に再懸濁し、その後、合計１０＾７で１００μＬ中に添加した。細胞を嫌気性フード内で細菌と２時間共インキュベートした。その後、細胞を、ＦＢＳを含まないが抗生物質を含む増殖培地中で洗浄した。細胞を、１ｍＬのＴｈＰ１条件培地中に２４時間静置した。２４時間インキュベートした後、上清を回収し、４℃で３分間、１０，０００ｇでスピンダウンした。試料を、さらに使用するまで－８０℃で凍結した。

ＴｈＰ１条件培地：Ｔｈｐ１を４×１０＾６／フラスコの密度でＴ２５フラスコに播種した。細胞を、１ｕｇ／ｍＬのＬＰＳまたはＬＰＳ＋５ｍＭのＡＴＰ（ＬＰＳの３時間後にＡＴＰを添加）で、ＲＰＭＩ培地（２ｍＭのＬ－グルタミンを含み、ＦＢＳを含まない）中で処理した。細胞を２４時間静置した。その後、条件培地（ＣＭ）を、細胞を室温で５分間にわたって２５０ｇでスピンダウンすることによって回収した。異なるＣＭを使用して、ＨＴ２９細胞を処理した。ＥＬＩＳＡ用に少量のアリコートを８０℃で凍結した。

異なる試料由来の上清を回収し、サイトカイン分析を、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製のヒトＴＮＦ－ａ ＥＬＩＳＡキットを使用して製造業者の指示に従って実施した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７を使用して、データをプロットし、分析した。

結果及び考察
ＮＣＩＭＢ ４２３８２上清は、単独でまたはＴｈｐ１条件培地（ＣＭ）とともにのいずれでも、ＨＴ２９癌細胞株（大腸癌）からのＴＮＦ－α分泌を誘発した。それぞれ、図４Ｂ及び図４Ａを参照されたい。ＴＮＦ－αは、強力な免疫刺激サイトカインであり、その分泌は、ワクチンアジュバントによって誘発され［５４］、さらに、ＴＮＦ－α自体がワクチンアジュバントとして有効であることが報告されている［５５］。これらのデータは、ＮＣＩＭＢ ４２３８２が、例えば、がん療法においてワクチンアジュバントとして有効性を有するというさらなる証拠を提供する。

実施例４－ＮＣＩＭＢ ４２３８２の発酵プロファイル
方法
Ｒａｐｉｄ ＩＤ ３２Ａ試験を、製造業者の指示に従ってＮＣＩＭＢ ４２３８２コロニーに対して行った。２０１５年６月２６日に生成されたＮＣＩＭＢ ４２３８２ビーズストック由来の単一ビーズを使用して、ＹＣＦＡ寒天プレート（Ｅ＆Ｏ Ｌａｂｓ）に接種し、嫌気性ワークステーション内で、３７℃で２４時間インキュベートした。コロニーをプレートから除去し、２ｍＬアンプルのＡＰＩ（登録商標）懸濁培地（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）中に再懸濁し、この懸濁液を使用して、Ｒａｐｉｄ ＩＤ ３２Ａストリップ（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）を製造業者の指示に従って接種した。ストリップをインキュベートし、製造業者の指示に従って現像し、各莢膜（capsule）の色を記録し、負、中間、または正の値を割り当てた。

ＡＰＩ（登録商標）５０ ＣＨＬ試験を、多少の変更を伴い製造業者の指示に従って行った。２０１５年８月１４日に生成されたＮＣＩＭＢ ４２３８２グリセロールストック由来の単一ビーズを使用して、ＹＣＦＡ寒天プレート（Ｅ＆Ｏ Ｌａｂｓ）に接種し、嫌気性ワークステーション内で、３７℃で２４時間インキュベートした。このプレート由来の単一のコロニーを使用して、ＹＣＦＡブロス（Ｅ＆Ｏ Ｌａｂｓ）中で培養物に接種し、これを３７℃で１６～１８時間嫌気的にインキュベートした。この培養物をＡＰＩ（登録商標）ＣＨＬ培地（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）中で１０倍希釈して懸濁液を作製し、これを使用して、各莢膜をＡＰＩ（登録商標）５０ ＣＨ試験パネル（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ）上で接種した。試験片を加湿したインキュベーションボックス内で、３７℃で４８時間嫌気的にインキュベートし、その後、各莢膜の色を記録し、負、中間、または正の値を割り当てた。

結果及び考察
Ｒａｐｉｄ ＩＤ ３２Ａ分析を使用して、ＮＣＩＭＢ ４２３８２は、α－ガラクトシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、α－グルコシダーゼ、β－グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼの発酵、ならびにアルギニン、ロイシル－グリシン、ロイシン、アラニン、ヒスチジン、及びグルタミルグルタミン酸の発酵について陽性を示した（図５Ａ）。ＡＰＩ（登録商標）５０ ＣＨＬを使用して、ＮＣＩＭＢ ４２３８２は、以下の炭水化物源：フルクトース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、アルブチン、エスクリン、マルトース、ラクトース、メリビオース、スクロース、ラフィノース、デンプン、グリコーゲン、ツラノース、及びフコースの利用について陽性を示した（図５Ｂ）。中間反応が、キシロース、Ｎ－アセチルグルコサミン、アミグダリン、サリシン、セロビオース、トレハロース、メレジトース、及びゲンチオビオースで観察された。炭水化物及び／またはアミノ酸（特に炭水化物）について、ＮＣＩＭＢ ４２３８２と極めて同様の発酵プロファイルまたは同じ発酵プロファイルのいずれかを呈する細菌株は、ワクチンアジュバントとして、免疫老化の治療、予防、または遅延に、または細胞療法の増強における使用に有用であることが期待される。

実施例５－脾細胞増殖に対するＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株の効果
方法
脾細胞を、６～８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスから解剖した脾臓から新鮮に調製した。簡単に言えば、脾細胞を、１０％ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、及び５５μＭ β－メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ １６４０中の９６ウェルプレート中に９００，０００細胞／ウェルでプレーティングした。細胞を未処理のまま（静置）にしたか、または様々な株の静止培養由来の１０％細菌培地ＹＣＦＡ＋（ブランク培地）もしくは１０％無細胞細菌上清で処理し、３７℃のＣＯ_２インキュベーター内で７２時間インキュベートした。各Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株を培養し、上清を以下のように調製した。１００μＬのＲｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｌｌ Ｂａｎｋバイアルを使用して、１０ｍＬのＹＣＦＡ＋ブロスを接種した。培養物を嫌気性ワークステーション内で、３７℃で一晩インキュベートした。各々の一晩培養物を使用して、１０ｍＬの新鮮な増殖培地を含有する５つのＨｕｎｇａｔｅチューブに１０％のサブ培養物を接種した。培養チューブを、それらが初期静止期に達するまでインキュベートし、その後、無細胞上清（ＣＦＳ）を以下のように回収した。個々の培養チューブを組み合わせ、細菌密度（Ｏ．Ｄ．６００ｎｍ）を記録した。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株の無細胞上清を、遠心分離（５０００×ｇで１５分間）し、０．４５μｍフィルター、続いて、０．２２μｍフィルターに通して濾過することによって得た。

ＭＴＴアッセイキットを、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（カタログ番号ＣＴ０１）から購入した。７２時間インキュベートした後、１０μＬのＭＴＴ溶液を各ウェルに添加し、細胞をＣＯ_２インキュベーター内で４時間インキュベートした。その後、１００μＬのイソプロパノール／０．０４Ｍ ＨＣＬ溶液を各ウェルに添加し、吸光度を６５５ｎｍの基準波長で、５６０ｎｍの波長で測定した。

結果
試験したＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、ＮＣＩＭＢ ４２３８２（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株１（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株２（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株３（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株４（Ｐ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、基準株５（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株６（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株７（Ｐ．ｍｅｒｄａｅ）、基準株８（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、受託番号ＤＳＭＺ１９４４８下で寄託された株（Ｐ．ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ）、受託番号ＤＳＭＺ２９１８７下で寄託された株（Ｐ．ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ）であった。全ての株は、ＹＣＦＡ＋または未処理細胞と比較して７２時間の培養後に脾細胞の増殖を誘発した（図６）。脾細胞には、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びマクロファージなどの免疫細胞の様々なサブセットが含まれる［５６］。したがって、これらのデータは、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理が免疫刺激効果を引き出すことを実証し、それらが、ワクチンアジュバントとして、免疫老化を治療する、予防する、または遅延させるための治療薬として、またはＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法を増強するための補助治療薬として作用することができることを示す。

実施例６－脾細胞からのサイトカイン分泌に対するＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株の効果
方法
実施例５のように脾細胞を調製し、細菌上清で処理した。その後、細胞を４℃で５分間、５００ｇでスピンダウンし、無細胞上清を回収し、サイトカイン分析のために－８０℃で保管した。サイトカイン定量化を、製造業者（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の推奨事項に従って、２６プレックスマウスＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘマルチプレックス免疫アッセイを使用して行った。簡単に言えば、５０μＬの無細胞共培養上清を、ｘＰＯＮＥＮＴソフトウェアを備えたＭＡＧＰＩＸ（登録商標）ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）システム（Ｍｅｒｃｋ）（Ｌｕｍｉｎｅｘ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）を使用したサイトカイン定量化に使用した。５パラメータロジスティクス曲線及びバックグラウンド除去を使用したＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）アナリストソフトウェア（Ｍｅｒｃｋ）を使用してデータを分析し、平均蛍光強度をｐｇ／ｍＬ値に変換した。

結果
試験したＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、ＮＣＩＭＢ ４２３８２（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株１（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株２（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株３（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株４（Ｐ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、基準株５（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株６（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株７（Ｐ．ｍｅｒｄａｅ）、基準株８（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、ＤＳＭＺ１９４４８（Ｐ．ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ）、ＤＳＭＺ２９１８７（Ｐ．ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ）であり、結果を図７に示す。試験した全てのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、ＹＣＦＡ＋培地対照及び未処理対照よりも高いＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２７、ＩＬ－１０、ＭＩＰ－２、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－５、及びＣＸＣＬ１分泌を誘発した。さらに、試験した全てのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、ＹＣＦＡ＋培地対照よりも高いＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＰ－１０、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、及びＲＡＮＴＥＳ分泌を誘発した。したがって、これらのデータは、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理が免疫刺激効果を引き出すことを実証し、それらが、ワクチンアジュバントとして、免疫老化を治療する、予防する、または遅延させるための治療薬として、またはＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法を増強するための補助治療薬として作用することができることを示す。上方制御されたサイトカイン／ケモカイン（例えば、ＩＬ－５、ＣＸＣＬ１、ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、及びＭＩＰ２）の多くが免疫細胞を動員することができ、それ故に、局在性免疫応答をもたらすように作用し得る。当該技術分野で既知のアジュバントであるＭＦ５９は、この機構（とりわけ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、及びＲＡＮＴＥＳ上方制御）によって作用すると考えられている［５７］。さらに、ＧＭ－ＣＳＦは、臨床的に承認されたワクチンにアジュバント効果を提供することが知られており［５８］、それにより、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株のワクチンアジュバントとしての有用性をさらに示す。

実施例７－脾細胞からのサイトカイン分泌に対するさらなるＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株の効果
方法
これらの実験を実施例６に記載されるように行った。

結果
試験したＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、基準株２（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株７（Ｐ．ｍｅｒｄａｅ）、基準株９（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）、基準株１０（Ｐ．ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、基準株１１（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株１２（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株１３（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、基準株１４（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）、及び基準株１５（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）であった。結果を図８に示す。試験した大半のＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株由来の上清でのマウス脾細胞の処理は、ＹＣＦＡ＋培地対照及び未処理対照よりも高いサイトカイン／ケモカインＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＮＦ－α、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、及びＭＩＰ２分泌を誘発した。全体として、これらの結果は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株での処理が免疫刺激効果を引き出すことを実証し、それらが、ワクチンアジュバントとして、免疫老化を治療する、予防する、または遅延させるための治療薬として、またはＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法を増強するための補助治療薬として作用することができることを示す。実施例６に上述されるように、上方制御されたサイトカイン／ケモカイン（ＩＰ－１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、及びＭＩＰ２）の多くが免疫細胞を動員し、それ故に、局在性免疫応答をもたらすように作用することができる。

実施例８－Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ株ＤＳＭ２０７０１の短鎖／中鎖脂肪酸産生プロファイル
方法
Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ株ＤＳＭ２０７０１の純粋な培養物を、ＹＣＦＡ＋ブロス中で嫌気的に増殖させた。細菌上清由来の短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）及び中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）を、ＭＳ Ｏｍｉｃｓ ＡＰＳ（Ｄｅｎｍａｒｋ）によって分析し、定量化した。試料を、塩酸を使用して酸性化し、重水素標識内部標準物を添加した。全ての試料を無作為順序で分析した。分析を、四重極検出器（５９７７Ｂ、Ａｇｉｌｅｎｔ）に連結したガスクロマトグラフ（７８９０Ｂ、Ａｇｉｌｅｎｔ）に設置した高極性カラム（Ｚｅｂｒｏｎ（商標）ＺＢ－ＦＦＡＰ、ＧＣ Ｃａｐ．カラム３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ）を使用して実施した。このシステムを、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によって制御した。生データを、Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用してｎｅｔＣＤＦ形式に変換した後、データをインポートし、ＰＡＲＡＤＩＳｅソフトウェアを使用してＭａｔｌａｂ Ｒ２０１４ｂ（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．）で処理した。

結果
Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ株ＤＳＭ２０７０１は、以下の短鎖／中鎖脂肪酸プロファイルをもたらした。

実施例９－追加のＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株の短鎖／中鎖脂肪酸産生プロファイル
方法
以下に詳述する株の短鎖／中鎖脂肪酸産生プロファイルを実施例８に従って測定した。

見ることができるように、試験した異なるＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ株は、酢酸及びプロピオン酸の両方を一貫して産生した。

配列
配列番号１（１６ＳリボソームＲＮＡのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ遺伝子、部分配列、株：ＪＣＭ ５８２５－ＡＢ２３８９２２）

配列番号２（１６ＳリボソームＲＮＡのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ遺伝子、部分配列、株：ＪＣＭ １３４００－ＡＢ２３８９２３）

配列番号３（１６ＳリボソームＲＮＡのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ遺伝子、部分配列、株： ＪＣＭ １３４０１－ＡＢ２３８９２４）

配列番号４（１６ＳリボソームＲＮＡのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ遺伝子、部分配列、株： ＪＣＭ １３４０２－ＡＢ２３８９２５）

配列番号５（１６ＳリボソームＲＮＡのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ遺伝子、部分配列、株： ＪＣＭ １３４０３－ＡＢ２３８９２６）

配列番号６（１６ＳリボソームＲＮＡのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ遺伝子、部分配列、株：ＪＣＭ １３４０４－ＡＢ２３８９２７）

配列番号７（１６ＳリボソームＲＮＡのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ遺伝子、部分配列、株：ＪＣＭ ９４９７－ＡＢ２３８９２８）

配列番号８（１６ＳリボソームＲＮＡのＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ遺伝子、部分配列、株：ＪＣＭ １３４０５－ＡＢ２３８９２９）

配列番号９（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ７５５株／ＮＣＩＭＢ ４２３８２のコンセンサス１６ Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列）

配列番号１０（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ株ＤＳＭＺ１９４４８／ＪＣＭ１３４４６、１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列－ＧｅｎＢａｎｋ： ＥＵ１３６６９７．１）：

配列番号１１（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ株ＤＳＭＺ２９１８７／ＢＳ－Ｃ３－２、１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、部分配列－Ｇｅｎｂａｎｋ ＧＱ４５６２０５．２）：

配列番号１２：基準株１（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号１３：基準株２（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号１４：基準株３（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号１５：基準株４（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号１６：基準株５（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号１７：基準株６（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号１８：基準株７（Ｐ．ｍｅｒｄａｅ）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号１９ 基準株９（Ｐ．ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号２０ 基準株１１（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号２１ 基準株１２（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号２２ 基準株１４（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

配列番号２３ 基準株１５（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．）の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、Ｇｅｎｅｉｏｕｓを使用して構築した：

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Claims (27)

1. ワクチンアジュバントとして使用するための、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む、組成物。
2. 免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するための、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む、組成物。
3. ＣＡＲ－Ｔなどの細胞療法の増強に使用するための、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株を含む、組成物。
4. Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属の細菌株と、１つ以上の抗原と、を含む、ワクチン組成物。
5. １つ以上の病原体抗原または腫瘍抗原を含む、請求項４に記載のワクチン組成物。
6. 前記細菌株が、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ種、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｇｏｌｄｓｔｅｉｎｉｉ種、またはＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｒｄａｅ種に属する、請求項１～５のいずれかに記載の組成物。
7. 前記細菌株が、配列番号９と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、請求項１～６のいずれかに記載の組成物。
8. 前記細菌株が、ＮＣＩＭＢに受託番号４２３８２下で寄託された株である、請求項１～７のいずれかに記載の組成物。
9. 前記細菌株が、配列番号９、１２、１３、１６、１７、または１９と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号９、１２、１３、１６、１７、または１９によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、請求項１～６のいずれかに記載の組成物。
10. 前記細菌株が、配列番号１０または１１と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１０または１１によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、請求項１～６のいずれかに記載の組成物。
11. 前記細菌株が、配列番号１８と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１８によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態１～６のいずれかに記載の組成物。
12. 前記細菌株が、配列番号１５と少なくとも９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％同一である１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有するか、または前記細菌株が、配列番号１５によって表される１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列を有する、実施形態１～５のいずれかに記載の組成物。
13. 前記組成物が、ウイルス表面タンパク質などのウイルス抗原、タンパク質及び／またはサッカリド抗原などの細菌性抗原、真菌性抗原、ならびに寄生虫抗原から選択される１つ以上の病原体抗原を含む、請求項１または４～１２のいずれかに記載の組成物。
14. 前記抗原が、以下の病原体：インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、鉤虫、Ｂ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、クラミジア、ＳＡＲＳコロナウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、エプスタイン・バーウイルス、またはヒトパピローマウイルスのうちのいずれかに由来する、請求項１３に記載の組成物。
15. 前記組成物が、１つ以上のインフルエンザウイルス抗原を含む、請求項１４に記載の組成物。
16. 前記組成物が、ネオ抗原、糖タンパク質抗原、リポグリカン抗原、古細菌抗原、黒色腫抗原Ｅ（ＭＡＧＥ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、シアリル－Ｔｎ（ＳＴｎ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＣＡ－１２５、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、癌タンパク質、アミロイド－ベータ、Ｔａｕ、ＰＣＳＫ９、またはアルコールもしくはオピエートなどの習慣性物質から選択される１つ以上の抗原を含む、請求項１または４～１２のいずれかに記載の組成物。
17. 前記組成物が経口投与用である、及び／または前記組成物が１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、及び／または前記細菌株が凍結乾燥されている、請求項１～１７のいずれかに記載の組成物。
18. 前記細菌株が、病原体抗原または腫瘍抗原などの異種抗原を発現する、請求項１～１７のいずれかに記載の組成物。
19. 薬剤に使用するための、請求項４～１８のいずれかに記載の組成物。
20. ＭＣＰ－１の発現レベル及び／または活性の増加、及び／またはＢ細胞の増殖の増加に使用するための、請求項１～１９のいずれかに記載の組成物。
21. 前記Ｂ細胞がＣＤ１９＋ＣＤ３－Ｂ細胞を含む、請求項２０に記載の組成物。
22. 前記組成物が、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症、または腫瘍の療法に使用するためのものである、請求項１または４～２１のいずれかに記載の組成物。
23. 前記組成物が、インフルエンザウイルス感染症の療法に使用するためのものである、請求項２２に記載の組成物。
24. 前記組成物が、Ｂ細胞免疫老化の治療、予防、または遅延に使用するためのものである、請求項２、６～１２、１７、または１９～２１のいずれかに記載の組成物。
25. 前記組成物が、免疫老化を治療する、予防する、または遅延させることによって、心血管疾患、アルツハイマー病もしくはパーキンソン病などの神経変性疾患、がん、２型糖尿病、または自己免疫疾患の療法に使用するためのものである、請求項２、６～１２、１７、１９～２１、または２４のいずれかに記載の組成物。
26. 前記組成物が、ＣＡＲ－Ｔを増強することによってがんの療法に使用するためのものである、請求項３、６～１２、１７、または１９～２１のいずれかに記載の組成物。
27. 前記がんが慢性リンパ球性白血病である、請求項２６に記載の組成物。

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