CN114025794A - 包含细菌菌株的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含细菌菌株的组合物，所述组合物用作疫苗佐剂；用于治疗、预防或延迟免疫衰老；或者用于增强细胞疗法如CAR‑T。本发明还提供了包含细菌菌株和一种或多种抗原的疫苗组合物。

Description

包含细菌菌株的组合物

技术领域

本发明属于以下领域：包含来自哺乳动物消化道的细菌菌株的组合物，以及这些组合物用于诱导期望的免疫反应以预防或治疗从感染到癌症的范围内的多种疾病中的用途。

发明背景

人类肠道被认为在子宫中是无菌的，但是在出生之后它立即暴露于各种各样的母体和环境微生物。此后，发生动态时间段的微生物定殖和演替，这受到例如以下因素的影响：分娩方式、环境、饮食和宿主基因型，全部这些都影响肠道微生物群的组成，在早期生命期间尤其如此。随后，微生物群稳定化并且变得类似成人[1]。人类肠道微生物群含有超过500-1000种不同的种系型，它们基本上属于两种主要的细菌分类：拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)[2]。由人类肠道的细菌定殖引起的成功的共生关系已产生各种各样的代谢、结构、保护性和其他有益的功能。所定殖肠道的增强的代谢活动确保以其他方式难以消化的膳食组分被降解并释放副产物，从而为宿主提供重要的营养物来源。类似地，肠道微生物群的免疫学重要性是公认的并且在无菌动物中示例，所述无菌动物具有在引入共生细菌后在功能上重构的受损免疫系统[3-5]。

微生物群组成的巨大变化在例如炎症性肠病(IBD)的胃肠病症中已有文献记载。举例来说，梭菌(Clostridium)集群XIVa细菌的水平在IBD患者中降低，而大肠杆菌(E.coli)的数量增加，这表明肠道内共生生物与病原生物的平衡的变化[6-9]。有趣的是，这种微生物生态失调也与T效应细胞群体失衡相关。

在认识到某些细菌菌株对于动物肠道可能具有的潜在积极作用之后，已提出多种菌株用于治疗各种疾病(参见例如[10-13])。此外，已提出主要包括乳杆菌属(Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)菌株的某些菌株用于治疗与肠无直接关联的各种炎症性和自身免疫性疾病，例如通过抗炎机制(关于综述，参见[14]和[15])。已提出某些链球菌属(Streptococcus)和韦荣氏球菌属(Veillonella)菌株，以及在较小程度上肠球菌属(Enterococcus)和乳杆菌属菌株具有免疫调节作用，在体外对不同的细胞因子具有不同的作用。然而，不同疾病与不同细菌菌株之间的关系和特定细菌菌株对于肠道和在全身水平下以及对任何特定类型的疾病的确切作用并未被良好表征。

最近，已经研究了各种副拟杆菌属(Parabacteroides)物种的抗炎特性和治疗特性。例如，狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)被证实在多种疾病模型如重度哮喘、类风湿性关节炎和多发性硬化中具有广泛的抗炎作用[16]。还已经在结直肠癌动物模型中测试了狄氏副拟杆菌[17]。还已观测到古氏副拟杆菌(Parabacteroidesgoldsteinii)的抗炎作用[18]。

本领域中需要新的治疗疾病的疗法。还需要待表征肠道细菌的潜在作用，以便可开发出使用肠道细菌的新治疗策略。

发明内容

本发明人已经开发了可用作疫苗佐剂的包含副拟杆菌属细菌菌株的新组合物。

因此，本发明提供了在受试者中用作疫苗佐剂的包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物。优选地，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含来自狄氏副拟杆菌、古氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii)和/或粪副拟杆菌(Parabacteroides merdae)物种的菌株。在优选的实施方案中，本发明的组合物包含来自狄氏副拟杆菌物种的菌株。在这样的实施方案中，菌株可以是以登录号42382保藏在NCIMB的菌株，或其衍生物或生物型，其用作疫苗佐剂。

在其他方面，本发明提供了一种包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，其用于增强细胞疗法如CAR-T。优选地，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含来自狄氏副拟杆菌、古氏副拟杆菌和/或粪副拟杆菌物种的菌株。在优选的实施方案中，本发明的组合物包含来自狄氏副拟杆菌物种的菌株。在这样的实施方案中，所述菌株可以是以登录号42382保藏在NCIMB的菌株，或其衍生物或生物型，其用于增强细胞疗法如CAR-T。

在其他方面，本发明提供了包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，所述组合物用于治疗、预防或延迟免疫衰老。优选地，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含来自狄氏副拟杆菌、古氏副拟杆菌和/或粪副拟杆菌的菌株。在优选的实施方案中，本发明的组合物包含来自狄氏副拟杆菌物种的菌株。在这样的实施方案中，所述菌株可以是以登录号42382保藏在NCIMB的菌株，或其衍生物或生物型，其用于治疗、预防或延迟免疫衰老。

最优选地，用于本发明的组合物中的细菌是以登录号42382保藏在NCIMB的菌株。

在优选的实施方案中，如实施例中所示，本发明的组合物用于增加单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的分泌水平和/或活性和/或B细胞的扩增。优选地，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含以登录号42382保藏在NCIMB的菌株，或其衍生物或生物型，其在用作疫苗佐剂时用于增加MCP-1的表达水平和/或活性和/或B细胞的扩增。

与实施例中测试的副拟杆菌属菌株密切相关的菌株预期在增强疫苗功效方面特别有效。在优选的实施方案中，本发明的组合物包含具有与SEQ ID NO:9具至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列的细菌菌株，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:9表示的16s rRNA基因序列。

在某些实施方案中，本发明的组合物用于口服施用。口服施用本发明的细菌菌株对于疫苗辅佐可能是有效的。此外，口服施用对于患者和专业人员来说是方便的，并且允许递送到肠和/或部分或全部定殖在肠中。

在某些实施方案中，本发明的组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。

在某些实施方案中，本发明的组合物包含已经冻干的细菌菌株。冻干是用于制备允许细菌递送的稳定组合物的有效且方便的技术。

在某些实施方案中，本发明提供了一种包含如上所述的组合物的食品，所述食品用于以上定义的医学用途。

在某些实施方案中，本发明提供了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含如上所述的细菌菌株和一种或多种抗原，例如病原体抗原或肿瘤抗原。病原体抗原包括病毒抗原，例如病毒表面蛋白；细菌抗原，例如蛋白质和/或糖抗原；真菌抗原；和寄生虫抗原。当抗原是细菌抗原时，其通常不会来自副拟杆菌属菌株。

在某些实施方案中，本发明的疫苗组合物包含一种或多种来自以下病原体的抗原：流感病毒、HIV、钩虫、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、衣原体、SARS冠状病毒、水痘带状疱疹病毒、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、爱泼斯坦巴尔病毒(Epstein Barr virus)或人乳头瘤病毒。优选地，本发明的疫苗组合物包含一种或多种流感病毒抗原。

在某些实施方案中，本发明的疫苗组合物包含以下中的一者或多者：新抗原，糖蛋白抗原，脂多糖抗原，古细菌抗原，黑素瘤抗原E(MAGE)，癌胚抗原(CEA)，MUC-1，HER2，唾液酸-Tn(STn)，人端粒酶逆转录酶(hTERT)，威尔姆斯瘤(Wilms tumour)基因(WT1)，CA-125，前列腺特异性抗原(PSA)，致癌蛋白，β淀粉样蛋白，Tau，PCSK9或习惯形成物质如尼古丁、酒精或阿片剂。

本发明还提供了如上文所定义的疫苗组合物，其用于医学中，特别是用于如上文所定义的用途。

另外，本发明提供了在受试者中增强疫苗功效，增强细胞疗法如CAR-T，或治疗、预防或延迟免疫衰老的方法，所述方法包括施用包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物。

本发明还提供了以下编号的实施方案：

1.一种包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，所述组合物用作疫苗佐剂。

2.一种包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，所述组合物用于治疗、预防或延迟免疫衰老。

3.一种包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，所述组合物用于增强细胞疗法如CAR-T。

4.如前述实施方案中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株属于狄氏副拟杆菌、古氏副拟杆菌或粪副拟杆菌物种。

5.如前述实施方案中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23具至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23表示的16s rRNA基因序列。

6.如前述实施方案中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:9具至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:9表示的16s rRNA基因序列。

7.如实施方案6所述的组合物，其中所述细菌菌株是以登录号42382保藏在NCIMB的菌株。

8.如实施方案1-5中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:9、12、13、16、17或19具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由9、12、13、16、17或19表示的16s rRNA基因序列。

9.如实施方案1-5中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:10或11具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:10或11表示的16s rRNA基因序列。

10.如实施方案9所述的组合物，其中所述细菌菌株是以登录号DSMZ19448或DSMZ29187保藏的菌株。

11.如实施方案1-5中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:18具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:18表示的16s rRNA基因序列。

12.如实施方案1-3或5中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ IDNO:15具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:15表示的16s rRNA基因序列。

13.如实施方案1或4-12中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种病原体或肿瘤抗原。

14.如实施方案13所述的组合物，其中所述一种或多种病原体抗原选自病毒抗原，例如病毒表面蛋白；细菌抗原，例如蛋白质和/或糖抗原；真菌抗原；和寄生虫抗原。

15.如实施方案14所述的组合物，其中所述一种或病原体抗原来自任何以下病原体：流感病毒、HIV、钩虫、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌、衣原体、SARS冠状病毒、水痘带状疱疹病毒、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、结核分枝杆菌、炭疽芽孢杆菌、爱泼斯坦巴尔病毒或人乳头瘤病毒。

16.如实施方案15所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种流感病毒抗原。

17.如实施方案1或4-13中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种选自以下的抗原：新抗原，糖蛋白抗原，脂多糖抗原，古细菌抗原，黑素瘤抗原E(MAGE)，癌胚抗原(CEA)，MUC-1，HER2，唾液酸-Tn(STn)，人端粒酶逆转录酶(hTERT)，威尔姆斯瘤基因(WT1)，CA-125，前列腺特异性抗原(PSA)，致癌蛋白，β淀粉样蛋白，Tau，PCSK9或习惯形成物质如酒精或阿片剂。

18.如前述实施方案中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于口服施用。

19.如前述实施方案中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。

20.如前述实施方案中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株是冻干的。

21.如前述实施方案中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株表达异源抗原，例如病原体抗原或肿瘤抗原。

22.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于增加MCP-1的表达水平和/或活性和/或B细胞的扩增。

23.如实施方案22所述的组合物，其中所述B细胞包括CD19⁺CD3^-B细胞。

24.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导TNF-α细胞因子产生。

25.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-1β细胞因子产生。

26.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-2细胞因子产生。

27.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导GM-CSF细胞因子产生。

28.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IFN-γ细胞因子产生。

29.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-27细胞因子产生。

30.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IP-10细胞因子产生。

31.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导RANTES细胞因子产生。

32.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导MIP-1α细胞因子产生。

33.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导MIP-1β细胞因子产生。

34.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导MIP-2细胞因子产生。

35.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-10细胞因子产生。

36.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-22细胞因子产生。

37.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-5细胞因子产生。

38.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-18细胞因子产生。

39.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-23细胞因子产生。

40.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导CXCL1细胞因子产生。

41.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-6细胞因子产生。

42.如实施方案1或4-41中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于治疗病毒感染、细菌感染、真菌感染、寄生虫感染或肿瘤。

43.如实施方案42所述的组合物，其中所述组合物用于治疗流感病毒感染。

44.如实施方案2、4-12或18-41中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于治疗、预防或延迟B细胞免疫衰老。

45.如实施方案2、4-12、18-41或44中任一项所述的组合物，其中所述组合物通过治疗、预防或延迟免疫衰老而用于治疗心血管疾病；神经退行性疾病，例如阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)或帕金森氏病(Parkinson's disease)；癌症；2型糖尿病；或自身免疫性疾病。

46.如实施方案3-12或17-41中任一项所述的组合物，其中所述组合物通过增强CAR-T而用于治疗癌症。

47.如实施方案46所述的组合物，其中所述癌症是慢性淋巴细胞性白血病。

48.一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含副拟杆菌属细菌菌株和一种或多种抗原。

49.根据实施方案48所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含一种或多种病原体抗原或肿瘤抗原。

50.如实施方案48或49所述的组合物，其中所述细菌菌株属于狄氏副拟杆菌、古氏副拟杆菌或粪副拟杆菌物种。

51.如实施方案48-50中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ IDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23具至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23表示的16s rRNA基因序列。

52.如实施方案48-51中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ IDNO:9具至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:9表示的16s rRNA基因序列。

53.如实施方案52所述的组合物，其中所述细菌菌株是以登录号42382保藏在NCIMB的菌株。

54.如实施方案48-51中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ IDNO:9、12、13、16、17或19具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:9、12、13、16、17或19表示的16s rRNA基因序列。

55.如实施方案48-51中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ IDNO:10或11具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:10或11表示的16s rRNA基因序列。

56.如实施方案55所述的组合物，其中所述细菌菌株是以登录号DSMZ19448或DSMZ29187保藏的菌株。

57.如实施方案48-51中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ IDNO:18具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:18表示的16s rRNA基因序列。

58.如实施方案48、49或51中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQID NO:15具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:15表示的16s rRNA基因序列。

59.如实施方案49-58中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种病原体抗原。

60.如权利要求59所述的组合物，其中所述一种或多种病原体抗原选自病毒抗原，例如病毒表面蛋白；细菌抗原，例如蛋白质和/或糖抗原；真菌抗原；和寄生虫抗原。

61.如实施方案59或60所述的组合物，其中所述一种或多种病原体抗原来自任何以下病原体：流感病毒、HIV、钩虫、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌、衣原体、SARS冠状病毒、水痘带状疱疹病毒、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、结核分枝杆菌、炭疽芽孢杆菌、爱泼斯坦巴尔病毒或人乳头瘤病毒。

62.如实施方案61所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种流感病毒抗原。

63.如实施方案48-58中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种选自以下的抗原：新抗原，糖蛋白抗原，脂多糖抗原，古细菌抗原，黑素瘤抗原E(MAGE)，癌胚抗原(CEA)，MUC-1，HER2，唾液酸-Tn(STn)，人端粒酶逆转录酶(hTERT)，威尔姆斯瘤基因(WT1)，CA-125，前列腺特异性抗原(PSA)，致癌蛋白，β淀粉样蛋白，Tau，PCSK9或习惯形成物质如酒精或阿片剂。

64.如实施方案48-63中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于口服施用。

65.如实施方案48-64中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。

66.如实施方案48-65中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株是冻干的。

67.如实施方案48-66中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株表达异源抗原，例如病原体抗原或肿瘤抗原。

68.如实施方案48-67中任一项所述的组合物，所述组合物用于药物中。

69.如实施方案68所述的组合物，所述组合物用于增加MCP-1的表达水平和/或活性和/或B细胞的扩增。

70.如实施方案69所述的组合物，其中所述B细胞包括CD19⁺CD3^-B细胞。

71.如实施方案68-70中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导TNF-α细胞因子产生。

72.如实施方案68-71中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-1β细胞因子产生。

73.如实施方案68-72中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-2细胞因子产生。

74.如实施方案68-73中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导GM-CSF细胞因子产生。

75.如实施方案68-74中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IFN-γ细胞因子产生。

76.如实施方案68-75中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-27细胞因子产生。

77.如实施方案68-76中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IFN-γ细胞因子产生。

78.如实施方案68-77中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-27细胞因子产生。

79.如实施方案68-78中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IP-10细胞因子产生。

80.如实施方案68-79中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导RANTES细胞因子产生。

81.如实施方案68-80中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导MIP-1α细胞因子产生。

82.如实施方案68-81中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导MIP-1β细胞因子产生。

83.如实施方案68-82中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导MIP-2细胞因子产生。

84.如实施方案68-83中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-10细胞因子产生。

85.如实施方案68-84中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-22细胞因子产生。

86.如实施方案68-85中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-5细胞因子产生。

87.如实施方案68-86中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-18细胞因子产生。

88.如实施方案68-87中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-23细胞因子产生。

89.如实施方案68-88中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导CXCL1细胞因子产生。

90.如前述实施方案中任一项所述的组合物，所述组合物用于诱导IL-6细胞因子产生。

91.如实施方案68-90中任一项所述的组合物，所述组合物用于疫苗接种。

92.如实施方案68-91中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于治疗病毒感染、细菌感染、真菌感染、寄生虫感染或肿瘤。

93.如实施方案92所述的组合物，其中所述组合物用于治疗流感病毒感染。

94.如实施方案68-90中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于治疗、预防或延迟免疫衰老。

95.如实施方案94所述的组合物，其中所述免疫衰老是B细胞免疫衰老。

96.如实施方案94或95中任一项所述的组合物，其中所述组合物通过治疗、预防或延迟免疫衰老而用于治疗心血管疾病；神经退行性疾病，例如阿尔茨海默氏病或帕金森氏病；癌症；2型糖尿病；或自身免疫性疾病。

97.如实施方案68-90中任一项所述的组合物，其中所述组合物通过增强CAR-T而用于治疗癌症。

98.如实施方案97所述的组合物，其中所述癌症是慢性淋巴细胞性白血病。

99.如实施方案1-47或68-98中任一项所述的组合物，所述组合物用于免疫受损的受试者。

100.如实施方案1-47或68-99中任一项所述的组合物，所述组合物用于免疫抑制的受试者。

101.根据实施方案99或100所述的组合物，其中与无疾病受试者的淋巴结相比，所述受试者在淋巴结内具有升高数量的调节性T细胞(Treg)。

102.根据实施方案99-101中任一项所述的组合物，所述组合物用于患有癌症的受试者中，其中与无癌症受试者的淋巴结相比，所述受试者在淋巴结如转移性淋巴结内具有升高数量的调节性T细胞(Treg)。

103.根据实施方案99-102中任一项所述的组合物，其中与来自无疾病受试者的一定体积的外周血单核细胞(PBMC)相比，所述受试者在相同体积的PBMC内具有升高数量的Treg。

104.根据实施方案99-103中任一项所述的组合物，所述组合物用于患有癌症的受试者，其中与来自无癌症受试者的一定体积的外周血单核细胞(PBMC)相比，所述受试者在相同体积的PBMC内具有升高数量的Treg。

105.根据实施方案99-104中任一项所述的组合物，其中与来自无疾病受试者的一定体积的PBMC相比，所述受试者在相同体积的PBMC内具有升高数量的髓样树突状细胞(mDC)。

106.根据实施方案99-105中任一项所述的组合物，所述组合物用于患有癌症的受试者，其中与来自无癌症受试者的一定体积的PBMC相比，所述受试者在相同体积的PBMC内具有升高数量的髓样树突状细胞(mDC)。

107.根据实施方案99-106中任一项所述的组合物，其中与来自无疾病受试者的一定体积的PBMC相比，所述受试者在相同体积的PBMC中具有升高数量的浆细胞样树突状细胞(pDC)。

108.根据实施方案99-207中任一项所述的组合物，所述组合物用于患有癌症的受试者，其中与来自无癌症受试者的一定体积的PBMC相比，所述受试者在相同体积的PBMC内具有升高数量的浆细胞样树突状细胞(pDC)。

附图说明

图1：通过NCIMB 42382处理增加的B细胞百分比。

图2：对于图1中呈现的数据，用于通过流式细胞术分析不同免疫细胞(CD4、CD8和CD19+细胞)群体的选通策略。

图3：通过NCIMB 42382处理增加的MCP-1分泌。

图4：(A)具有条件培养基的NCIMB 42382和(B)单独的NCIMB 42382对HT29细胞的TNF-α分泌的诱导。

图5：使用(A)Rapid ID 32A和(B)API 50CHL系统获得的NCIMB 42382的发酵概况。

图6：用副拟杆菌属菌株处理后的脾细胞增殖(“YCFA”＝YCFA+)。

图7：用各种副拟杆菌属菌株处理后的脾细胞的细胞因子分泌—(A)TNF-α，(B)IL-1β，(C)IL-2，(D)GM-CSF，(E)IFN-γ，(F)IL-27，(G)IL-10，(H)IL-6，(I)MIP-2，(J)MIP-1α，(K)MIP-1β，(L)IL-22，(M)RANTES，(N)IP-10，(O)IL-4，(P)IL-5，(Q)IL-18，(R)IL-23，(S)IL-9，(T)CXCL1，(U)MCP-3，(V)MCP-1和(W)IL-17A(“YCFA”＝YCFA+)。

图8：用各种副拟杆菌属菌株处理后的脾细胞的细胞因子分泌—(A)菌株参考9(狄氏副拟杆菌)，(B)菌株参考10(约氏副拟杆菌(P.johnsonii))，(C)菌株参考7(粪副拟杆菌)，(D)菌株参考11(副拟杆菌属种)，(E)菌株参考2(狄氏副拟杆菌)，(F)菌株参考12(副拟杆菌属种)，(G)菌株参考13(副拟杆菌属种)，(H)菌株参考14(副拟杆菌属种)和(I)菌株参考15(副拟杆菌属种)。

具体实施方式

细菌菌株

本发明的组合物包含副拟杆菌属菌株(例如狄氏副拟杆菌、古氏副拟杆菌、粪副拟杆菌或约氏副拟杆菌物种的菌株)。实施例表明，这些细菌菌株引起与疫苗辅佐强烈相关的免疫学反应。优选的本发明的细菌菌株是属于狄氏副拟杆菌、古氏副拟杆菌和粪副拟杆菌，特别是狄氏副拟杆菌物种的细菌菌株。优选的本发明的细菌菌株是以登录号NCIMB 42382保藏的细菌。

副拟杆菌属类似于拟杆菌属，并且是革兰氏阴性，专性厌氧，无孢子形成，不活动且呈杆状，并且大小为0.8-1.6×1.2-12μm。狄氏副拟杆菌是人类粪便中最常见的物种之一。狄氏副拟杆菌的典型菌株是JCM 5825^T(＝CCUG 4941^T＝DSM 20701^T＝ATCC 8503^T)。狄氏副拟杆菌菌株JCM 5825T、JCM 13400、JCM 13401、JCM 13402、JCM 13403和JCM 13404以及粪副拟杆菌菌株JCM 9497T和JCM 13405的16S rRNA基因序列的GenBank/EMBL/DDBJ登录号分别为AB238922-AB238929(本文公开为SEQ ID NO:1-8)。示例性菌株也描述于[19]中。

在实施例中测试了以登录号NCIMB 42382保藏的狄氏副拟杆菌细菌并且在本文中也称为菌株755(或NCIMB 42382或菌株NCIMB 42382)。所述菌株是从健康人类供体的消化道中分离出来的。所测试的755菌株的16S rRNA基因序列以SEQ ID NO:9提供。菌株755在2015年3月12日以“副拟杆菌属755种”由GT Biologics有限公司(Life SciencesInnovation Building,Aberdeen,AB25 2ZS,苏格兰)保藏于国际保藏机构NCIMB有限公司(Ferguson Building,Aberdeen,AB21 9YA,苏格兰)并指定登录号NCIMB 42382。GTBiologics有限公司随后更名为4D Pharma Research有限公司。

WO 2016/203220描述了向小鼠施用菌株755，并显示其可影响肠外的疾病过程(例如哮喘和关节炎)。此外，由于用细菌菌株治疗未观测到发病率或死亡率，因此表明其在无需操纵天然存在菌株的情况下用于治疗应用的安全性。

WO 2016/203220的SEQ ID NO:10提供了菌株NCIMB 42382的基因组序列。该序列是使用PacBio RS II平台生成的。

在实施例中测试了以登录号DSMZ19448和DSMZ29187保藏的古氏副拟杆菌菌株。菌株DSMZ19448的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:10提供。菌株DSMZ29187的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:11提供。菌株已保藏在DSMZ-德国微生物和细胞培养保藏公司(Inhoffenstr.7B 38124，德国不伦瑞克)并且是公开可用的。

在实施例中还测试了以下副拟杆菌属菌株：菌株参考1(狄氏副拟杆菌)、菌株参考2(狄氏副拟杆菌)、菌株参考3(副拟杆菌属种)、菌株参考4(约氏副拟杆菌)、菌株参考5(狄氏副拟杆菌)、菌株参考6(狄氏副拟杆菌)、菌株参考7(粪副拟杆菌)、菌株参考8(狄氏副拟杆菌)、菌株参考9(狄氏副拟杆菌)、菌株参考10(约氏副拟杆菌)、菌株参考11(副拟杆菌属种)、菌株参考12(副拟杆菌属种)、菌株参考13(副拟杆菌属种)、菌株参考14(副拟杆菌属种)、菌株参考15(副拟杆菌属种)。菌株参考1(狄氏副拟杆菌)的16s rRNA基因序列以SEQID NO:12提供。菌株参考2(狄氏副拟杆菌)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:13提供。菌株参考3(副拟杆菌属种)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:14提供。菌株参考4(约氏副拟杆菌)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:15提供。菌株参考5(狄氏副拟杆菌)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:16提供。菌株参考6(狄氏副拟杆菌)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:17提供。菌株参考7(粪副拟杆菌)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:18提供。菌株参考9(狄氏副拟杆菌)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:19提供。菌株参考11(副拟杆菌属种)的16srRNA基因序列以SEQ ID NO:20提供。菌株参考12(副拟杆菌属种)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:21提供。菌株参考14(副拟杆菌属种)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:22提供。菌株参考15(副拟杆菌属种)的16s rRNA基因序列以SEQ ID NO:23提供。

与实施例中测试的菌株密切相关的细菌菌株也预期可有效作为疫苗佐剂。在某些实施方案中，用于本发明的细菌菌株的16s rRNA基因序列与狄氏副拟杆菌的细菌菌株的16s rRNA基因序列具有(优先级递增)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％同一性。用于本发明的细菌菌株的16s rRNA基因序列可与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23，优选地与SEQ ID NO:9具(优先级递增)至少90％、91％、92％、93％或94％同一性。优选地，用于本发明的细菌菌株的16s rRNA基因序列与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23具有(优先级递增)至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％同一性。优选地，序列同一性是与SEQ ID NO:9的序列同一性。优选地，用于本发明的细菌菌株具有由SEQ ID NO:9表示的16s rRNA基因序列。最优选地，用于本发明的细菌菌株是以登录号NCIMB 42382保藏的狄氏副拟杆菌菌株。

在本发明的组合物中使用的细菌菌株是狄氏副拟杆菌物种的实施方案中，优选的菌株具有与SEQ ID NO:9、12、13、16、17或19，优选地与SEQ ID NO:9具(优先级递增)至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列。更优选地，这些优选菌株具有由SEQ ID NO:9、12、13、16、17或19，特别是SEQ ID NO:9表示的16s rRNA基因序列。最优选地，所述细菌菌株是以登录号NCIMB 43382保藏的狄氏副拟杆菌菌株。

在本发明的组合物中使用的细菌菌株是古氏副拟杆菌物种的实施方案中，优选的菌株具有与SEQ ID NO:10或11具(优先级递增)至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者更优选具有由SEQ ID NO:10或11表示的16s rRNA基因序列，或者最优选是以登录号DSMZ19448和DSMZ29187保藏的古氏副拟杆菌菌株。

在本发明的组合物中使用的细菌菌株是粪副拟杆菌物种的实施方案中，优选的菌株具有与SEQ ID NO:18具(优先级递增)至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16srRNA基因序列，或者更优选具有由SEQ ID NO:18表示的16s rRNA基因序列。

在本发明的组合物中使用的细菌菌株是约氏副拟杆菌物种的实施方案中，优选的菌株具有与SEQ ID NO:15具(优先级递增)至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16srRNA基因序列，或者更优选具有由SEQ ID NO:15表示的16s rRNA基因序列。

在优选的实施方案中，本发明的组合物包含活细菌。在优选的实施方案中，本发明的组合物包含活性状态的活细菌，优选冻干的活细菌。

在优选的实施方案中，本发明的细菌菌株增加了例如PBMC的MCP-1分泌，如实施例中所述。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加MCP-1表达的细菌并用作疫苗佐剂。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加MCP-1表达的细菌菌株并用于增强细胞疗法如CAR-T。

在优选的实施方案中，本发明的细菌菌株增加了例如PBMC的B细胞扩增，例如如实施例中所述。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加B细胞扩增的细菌菌株并用作疫苗佐剂。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加B细胞扩增的细菌菌株并用于增强细胞疗法如CAR-T。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加B细胞扩增的细菌菌株并用于治疗、预防或延迟免疫衰老。

在优选的实施方案中，本发明的细菌菌株增加了脾细胞的增殖，例如如实施例中所述。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加脾细胞增殖的细菌菌株并用作疫苗佐剂。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加脾细胞增殖的细菌菌株并用于增强细胞疗法如CAR-T。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加脾细胞增殖的细菌菌株并用于治疗、预防或延迟免疫衰老。

在优选的实施方案中，本发明的细菌菌株增加了例如脾细胞的细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-27、IL-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、IL-22、IL-5、IL-18、IL-23、CXCL1、IL-2、GM-CSF、IFN-γ、IL-6、IP-10和/或RANTES中的一种或多种、优选全部的产生，例如如实施例中所述。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-27、IL-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、IL-22、IL-5、IL-18、IL-23、CXCL1、IL-2、GM-CSF、IFN-γ、IL-6、IP-10和/或RANTES中的一种或多种、优选全部的产生的细菌菌株并用作疫苗佐剂。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-27、IL-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、IL-22、IL-5、IL-18、IL-23、CXCL1、IL-2、GM-CSF、IFN-γ、IL-6、IP-10和/或RANTES中的一种或多种、优选全部的产生的细菌菌株并用于增强细胞疗法如CAR-T。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含增加细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-27、IL-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、IL-22、IL-5、IL-18、IL-23、CXCL1、IL-2、GM-CSF、IFN-γ、IL-6、IP-10和/或RANTES中的一种或多种、优选全部的产生的细菌菌株并用于治疗、预防或延迟免疫衰老。

在某些实施方案中，本发明的组合物包含以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的生物型。作为以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的生物型的细菌菌株也预期可用作疫苗佐剂。生物型将具有与原始NCIMB 42382菌株相当的活性。生物型是具有相同或非常相似的生理和生化特性的密切相关的菌株。

生物型将对MCP-1的表达和/或B细胞的扩增产生与实施例中所示作用相当的作用，这可通过使用实施例中描述的培养和施用方案来鉴定。例如，菌株NCIMB 42382的生物型可能会增加外周血单核细胞(PBMC)群体中B细胞(例如CD19+CD3-细胞)的百分比，例如增加至大于细胞群体的40％(例如增加至基于5次重复大于细胞群体的40％的平均值)，这可通过使用实施例中描述的培养和施用方案来确定。例如，另外或可替代地，菌株NCIMB42382的生物型可增加PBMC的MCP-1表达，例如增加至无细胞共培养上清液的MCP-1蛋白大于1000pg/ml，这可使用实施例中描述的培养和施用方案来确定。

另外或可替代地，菌株NCIMB 42382的生物型将增加脾细胞的增殖，例如与未处理的脾细胞或用对照培养基(例如YCFA+培养基)处理的脾细胞相比增加至更大程度，这可使用测量3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)转化为MTT-甲臜的测定法，例如通过比色检测MTT-甲臜(例如如实施例10中)来确定。另外或可替代地，菌株NCIMB42382的生物型将增加脾细胞的细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-27、IL-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、IL-22、IL-5、IL-18、IL-23、CXCL1、IL-2、GM-CSF、IFN-γ、IL-6、IP-10和/或RANTES中的一种或多种、优选全部的产生，例如与未处理的脾细胞或用对照培养基(例如YCFA+培养基)处理的脾细胞相比增加至更大程度，这可通过细胞因子免疫测定法(例如，如实施例11和12中使用的来自Thermo Fischer Scientific的26重小鼠ProcartaPlex^TM多重免疫测定法)来确定。

可通过对以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的其他核苷酸序列进行测序，来鉴定作为以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的生物型并且适用于本发明的菌株。例如，可对基本上整个基因组进行测序，并且用于本发明的生物型菌株可在其整个基因组的至少80％上(例如在至少85％、90％、95％或99％上，或在其整个基因组上)具有至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％序列同一性。例如，在一些实施方案中，生物型菌株在其基因组的至少98％上具有至少98％的序列同一性，或在其基因组的99％上具有至少99％的序列同一性。用于鉴定生物型菌株的其他合适的序列可包括hsp60或重复序列，例如BOX、ERIC、(GTG)₅或REP[20]。

生物型菌株可具有与以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的相应序列具至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％序列同一性的此类序列。在一些实施方案中，生物型菌株可具有与以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的相应序列具至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％序列同一性的16S rRNA基因序列。在一些实施方案中，生物型菌株可包含与SEQ ID NO:9具至少99％同一性(例如至少99.5％或至少99.9％同一性)的16S rRNA基因序列。在一些实施方案中，生物型菌株具有SEQ ID NO:9的16S rRNA基因序列。

在某些实施方案中，用于本发明的细菌菌株具有与WO2016/203220的SEQ ID NO:10具序列同一性的基因组。在优选的实施方案中，用于本发明的细菌菌株具有在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的至少60％(例如至少65％、70％、75％、80％、85％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)上与WO 2016/203220的SEQ ID NO:10具至少90％序列同一性(例如至少92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的基因组。例如，用于本发明的细菌菌株可具有在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的70％上与WO2016/203220的SEQ ID NO:10具至少90％序列同一性，或在WO2016/203220的SEQ ID NO:10的80％上与WO2016/203220的SEQ ID NO:10具至少90％序列同一性，或在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的90％上与WO 2016/203220的SEQ ID NO:10具至少90％序列同一性，或在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的100％上与WO2016/203220的SEQ ID NO:10具至少90％序列同一性，或在WO2016/203220的SEQ ID NO:10的70％上与WO 2016/203220的SEQ ID NO:10具至少95％序列同一性，或在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的80％上与WO 2016/203220的SEQ ID NO:10具至少95％序列同一性，或在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的90％上与WO2016/203220的SEQ ID NO:10具至少95％序列同一性，或在WO2016/203220的SEQ ID NO:10的100％上与WO 2016/203220的SEQ ID NO:10具至少95％序列同一性，或在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的70％上与WO 2016/203220的SEQ ID NO:10具至少98％序列同一性，或在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的80％上与WO2016/203220的SEQ ID NO:10具至少98％序列同一性，或在WO2016/203220的SEQ ID NO:10的90％上与WO 2016/203220的SEQID NO:10具至少98％序列同一性，或在WO 2016/203220的SEQ ID NO:10的100％上与WO2016/203220的SEQ ID NO:10具至少98％序列同一性的基因组。

或者，可通过使用登录号NCIMB 42382保藏物和限制性片段分析和/或PCR分析，例如通过使用荧光扩增片段长度多态性(FAFLP)和重复DNA元件(rep)-PCR指纹图谱或蛋白质谱分析或部分16S或23s rDNA测序，来鉴定作为以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的生物型并适用于本发明的菌株。在优选的实施方案中，这样的技术可用于鉴定其他副拟杆菌属菌株。

在某些实施方案中，作为以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的生物型并适用于本发明的菌株是当通过扩增核糖体DNA限制性分析(ARDRA)，例如当使用Sau3AI限制性酶分析时(关于示例性方法和指导，参见例如[21])，提供与以登录号NCIMB 42382保藏的细菌相同模式的菌株。

或者，将生物型菌株鉴定为具有与以登录号NCIMB 42382保藏的细菌相同的碳水化合物发酵模式的菌株(参见实施例4和图5)。或者，将生物型菌株鉴定为具有与以登录号NCIMB 42382保藏的细菌相同的氨基酸发酵模式的菌株(参见实施例4和图5)。

在优选的实施方案中，本发明中使用的生物型细菌菌株(特别是狄氏副拟杆菌细菌菌株)，例如当在适当的悬浮培养基(例如API悬浮培养基)中于37℃培养4小时时，表现出针对以下中的一种或多种，例如以下中的(优先级递增)2、3、4或全部5种的酶活性：α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶和碱性磷酸酶。本发明中使用的生物型细菌菌株(特别是狄氏副拟杆菌细菌菌株)，例如当在适当的悬浮培养基(例如API悬浮培养基)中于37℃培养4小时时，优选能够使以下中的一种或多种，例如以下中的(优先级递增)2、3、4、5或全部6种发酵：精氨酸、亮氨酰-甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸、组氨酸和谷氨酰谷氨酸。本发明中使用的生物型细菌菌株(特别是狄氏副拟杆菌细菌菌株)，例如当在适当的悬浮培养基(例如API悬浮培养基)中于37℃培养4小时时，更优选能够使以下中的一种或多种，例如以下中的(优先级递增)2、3、4、5或全部6种发酵：精氨酸、亮氨酰-甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸、组氨酸和谷氨酰谷氨酸，并且表现出针对以下中的一种或多种，例如以下中的(优先级递增)2、3、4或全部5种的酶活性：α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶和碱性磷酸酶。本领域已知的任何合适的测定法可用于评估细菌使碳水化合物源或氨基酸发酵的能力。优选地，使用Rapid ID32A分析(优选使用来自bioMérieux的Rapid ID32A系统)。

在替代的优选实施方案中，本发明中使用的生物型细菌菌株(特别是狄氏副拟杆菌细菌菌株)能够使以下中的一种或多种，例如以下中的(优先级递增)2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或全部15种发酵：果糖、甘露糖、甘露糖醇、山梨糖醇、熊果苷、七叶苷、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、棉子糖、淀粉、糖原、松二糖和岩藻糖。此外，本发明中使用的生物型细菌菌株(特别是狄氏副拟杆菌细菌菌株)优选地表现出以下中的一种或多种，例如以下中的(优先级递增)2、3、4、5、6、7或全部8种的中间发酵：木糖、N-乙酰氨基葡萄糖、苦杏仁苷、水杨苷、纤维二糖、海藻糖、松三糖和龙胆二糖。在这样的实施方案中，本领域已知的任何合适的测定法可用于评估细菌使碳水化合物源发酵的能力。优选地，使用API 50CH分析(优选使用来自bioMérieux的API 50CH系统)。

本发明中使用的尤其优选的生物型细菌菌株(特别是狄氏副拟杆菌细菌菌株)(i)表现出对α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶和碱性磷酸酶的酶活性；(ii)能够使精氨酸、亮氨酰-甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸、组氨酸和谷氨酰谷氨酸发酵；以及(iii)能够使果糖、甘露糖、甘露糖醇、山梨糖醇、熊果苷、七叶苷、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、棉子糖、淀粉、糖原、松二糖和岩藻糖发酵。此外，生物型细菌菌株优选地(iv)表现出木糖、N-乙酰氨基葡萄糖、苦杏仁苷、水杨苷、纤维二糖、海藻糖、松三糖和龙胆二糖的中间发酵。(i)和(ii)优选在将细菌菌株在适当的悬浮培养基(例如API悬浮培养基)中于37℃培养4小时时进行评估，并通过Rapid ID 32A分析(优选使用来自bioMérieux的Rapid ID 32A系统)进行评估。(iii)和(iv)优选通过API 50CH分析(优选使用来自bioMérieux的API 50CH系统)进行评估。

可使用任何适当的方法或策略，包括实施例中所述的测定法，来鉴定可用于本发明的组合物和方法中的其他副拟杆菌属菌株，例如以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的生物型。特别地，与以登录号NCIMB 42382保藏的细菌具有相似的生长模式、代谢类型和/或表面抗原的细菌菌株可用于本发明。

在某些实施方案中，本发明的组合物包含以登录号NCIMB 42382保藏的细菌的衍生物。以登录号NCIMB 42382保藏的菌株的衍生物可以是子代菌株(后代)或从原始菌株培养(亚克隆)的菌株。本发明的菌株的衍生物可例如在遗传水平上被修饰而不破坏生物活性。特别地，本发明的衍生菌株具有治疗活性。衍生菌株将具有与原始NCIMB42382菌株相当的疫苗佐剂活性。NCIMB 42382菌株的衍生物通常将是NCIMB 42382菌株的生物型。

衍生菌株将引起与实施例中所示的作用相当的疫苗佐剂作用，其可通过使用实施例中描述的培养和施用方案来鉴定。特别地，衍生菌株将引起与以登录号NCIMB 42382保藏的细菌相当的对MCP-1表达和B细胞扩增的影响。NCIMB 42382菌株的衍生物通常将是NCIMB42382菌株的生物型。例如，菌株NCIMB 42382的衍生物可增加外周血单核细胞(PBMC)群体中B细胞(例如CD19+CD3-细胞)的百分比，例如增加至大于细胞群体的40％(例如增加至基于5次重复大于细胞群体的40％的平均值)，这可通过使用实施例中描述的培养和施用方案来确定。例如，另外或可替代地，菌株NCIMB 42382的生物型可增加PBMC的MCP-1表达，例如增加至无细胞共培养上清液的MCP-1蛋白大于1000pg/ml，这可使用实施例中描述的培养和施用方案来确定。

另外或可替代地，菌株NCIMB 42382的衍生物将增加脾细胞的增殖，例如与未处理的脾细胞或用对照培养基(例如YCFA+培养基)处理的脾细胞相比增加至更大程度，这可使用测量3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)转化为MTT-甲臜的测定法，例如通过比色检测MTT-甲臜(例如如实施例10中)来确定。另外或可替代地，菌株NCIMB42382的衍生物将增加脾细胞的细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-27、IL-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、IL-22、IL-5、IL-18、IL-23、CXCL1、IL-2、GM-CSF、IFN-γ、IL-6、IP-10和/或RANTES中的一种或多种、优选全部的产生，例如与未处理的脾细胞或用对照培养基(例如YCFA+培养基)处理的脾细胞相比增加至更大程度，这可通过细胞因子免疫测定法(例如，如实施例11和12中使用的来自Thermo Fischer Scientific的26重小鼠ProcartaPlex^TM多重免疫测定法)来确定。

对以登录号NCIMB 42382保藏的副拟杆菌属菌株的细胞的提及涵盖任何具有与以登录号NCIMB 42382保藏的菌株相同的安全性和治疗功效特性的细胞，并且本发明涵盖此类细胞。因此，所述组合物可包含副拟杆菌属菌株，其不是以登录号NCIMB 42382保藏的菌株，但是具有与以登录号NCIMB 42382保藏的菌株相同的安全性和治疗功效特性。可例如通过测试菌株对抗生素的抗性，例如区分对抗生素的固有抗性和可传播抗性，来建立菌株的安全特性。也可通过在体外评估菌株的致病特性，例如毒素产生水平来建立菌株的安全特性。其他安全性测试包括在大鼠和小鼠模型中测试细菌菌株的急性或慢性毒性。菌株的治疗功效可通过使用相关模型在体外和体内对细菌菌株进行功能表征来建立。

在优选的实施方案中，本发明的组合物中的细菌菌株是活的菌株，并且能够部分或全部定殖于肠。

在某些优选的实施方案中，用于本发明的细菌菌株能够增加来自PBMC的MCP-1的表达和/或B细胞(尤其是B淋巴细胞)的扩增。

在某些优选的实施方案中，用于本发明的细菌菌株能够增加脾细胞的增殖。这可使用测量3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)转化为MTT-甲臜的测定法，例如通过比色检测MTT-甲臜(例如如实施例5中)来确定。

在某些优选的实施方案中，用于本发明的细菌菌株能够增加来自脾细胞的TNF-α、IL-1β、IL-27、IL-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、IL-22、IL-5、IL-18、IL-23、CXCL1、IL-2、GM-CSF、IFN-γ、IL-6、IP-10和/或RANTES中的一种或多种，优选全部的产生。这可通过细胞因子免疫测定法(例如，如实施例6和7中使用的来自Thermo Fischer Scientific的26重小鼠

多重免疫测定法)来确定。

在某些优选的实施方案中，用于本发明的细菌菌株产生乙酸。在某些优选的实施方案中，用于本发明的细菌菌株产生丙酸。在某些优选的实施方案中，用于本发明的细菌菌株产生乙酸和丙酸。乙酸和/或丙酸的产生可使用气相色谱法/质谱法(例如，如实施例8和9中)来确定。

在一些实施方案中，本发明的组合物中的细菌菌株是副拟杆菌属的细菌菌株，其中所述细菌菌株不是以登录号NCIMB 42382保藏的菌株。

在一些实施方案中，本发明的组合物中的细菌菌株是狄氏副拟杆菌物种的细菌菌株，其中所述细菌菌株不是以登录号NCIMB 42382保藏的菌株。

治疗用途

作为疫苗佐剂的用途

实施例表明，施用本发明的组合物可导致MCP-1表达的增加。已知MCP-1对于疫苗反应是重要的。关于佐剂如MF59和明矾公布的研究强调，包括MCP-1在内的趋化因子的分泌与佐剂功效相关[22]。由于趋化因子具有调节淋巴细胞发育、引发和效应功能并增强保护性免疫的能力，因此已被用作疫苗佐剂[23]。已发现副拟杆菌属菌株上调的其他趋化因子包括IL-5、CXCL1、IP-10、RANTES、MIP-1α、MIP-1β和MIP-2(参见实施例)，类似于已建立的疫苗佐剂，例如MF59(其尤其上调RANTES、MIP-1α、MIP-1β[57])。此外，已经发现副拟杆菌属菌株增加了脾细胞的GM-CSF产生(参见实施例)，其本身用于为临床批准的疫苗提供佐剂作用[58]。在实施例中发现副拟杆菌属菌株诱导从HT29细胞系和脾细胞表达的TNF-α，也报道了疫苗佐剂作用[55]。由于显示出施用本发明的组合物尤其是增加MCP-1表达，因此本发明的组合物可用作疫苗佐剂。在一个实施方案中，本发明的组合物通过增加MCP-1的表达水平和/或活性而用作疫苗佐剂。在另一个实施方案中，本发明的组合物通过增加IL-5、CXCL1、IP-10、RANTES、MIP-1α、MIP-1β、MIP-2、GM-CSF和/或TNFα中的一者或多者、优选全部的表达水平和/或活性(优选表达水平)而用作疫苗佐剂。在一个实施方案中，本发明的组合物用作疫苗佐剂。在一个实施方案中，本发明的组合物用作流感治疗中的疫苗佐剂。在某些实施方案中，本发明的组合物用于增强针对抗原的免疫反应。在某些实施方案中，本发明提供了与抗原组合施用的组合物。在某些实施方案中，本发明的组合物中存在的细菌菌株可被工程化以表达抗原。在某些实施方案中，本发明的组合物用于在疫苗接种之前或之后不久向患者施用。优选地，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含以登录号42382保藏在NCIMB的菌株，或其衍生物或生物型，所述组合物用于作为疫苗佐剂的任何此类用途。

实施例还表明，施用本发明的组合物可导致B细胞群体的扩增。已知B细胞可增强对抗原的免疫反应。由于显示出本发明的组合物的施用增加了PBMC内的B细胞百分比，因此本发明的组合物可用作疫苗佐剂。

通常，当用作疫苗佐剂时，本发明的组合物将独立施用以提供对已经单独施用于患者的抗原的佐剂作用。在某些实施方案中，本发明的组合物是经口施用的，而抗原是经肠胃外注射的。

在某些实施方案中，本发明的细菌菌株表达一种或多种抗原。通常，抗原将重组表达并将与细菌细胞异源。因此，在本发明的实施方案中，在表达异源抗原的组合物中提供了副拟杆菌属的细菌菌株。

可由副拟杆菌属的细菌菌株表达和/或可在组合物中单独提供或与本发明的组合物依序施用或分开施用的示例性抗原包括：病毒抗原，例如病毒表面蛋白；细菌抗原，例如蛋白质和/或糖抗原；真菌抗原；寄生虫抗原；和肿瘤抗原。

本发明对于来自以下病原体的抗原特别有用：流感病毒、HIV、钩虫、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌、衣原体、SARS冠状病毒、水痘带状疱疹病毒、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、结核分枝杆菌、炭疽芽孢杆菌、爱泼斯坦巴尔病毒、人乳头瘤病毒。

其他抗原包括糖蛋白和脂多糖抗原，古细菌抗原，黑素瘤抗原E(MAGE)，癌胚抗原(CEA)，MUC-1，HER2，唾液酸-Tn(STn)，人端粒酶逆转录酶(hTERT)，威尔姆斯瘤基因(WT1)，CA-125，前列腺特异性抗原(PSA)，爱泼斯坦-巴尔病毒抗原，新抗原，致癌蛋白，β淀粉样蛋白，Tau，PCSK9和习惯形成物质如尼古丁、酒精或阿片剂。

本发明还提供以下用途：(i)抗原(例如一种或多种上述鉴定的抗原)的水性制剂；和(ii)包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，在制造药物时用作疫苗佐剂。优选地，所述细菌菌株是以登录号42382保藏在NCIMB的菌株，或其衍生物或生物型。

通过这些方法和用途引起的免疫反应通常将包括抗体反应，优选地是保护性抗体反应。

如本文所用，“增强”疫苗或受试者的免疫反应的功效，是指当与在不添加副拟杆菌属细菌菌株的情况下接受相同抗原的受试者中的免疫反应相比时，本发明的疫苗在受试者中引起更大的免疫反应(例如体液免疫反应)。

细胞疗法

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法

因此，本发明的组合物可用于细胞疗法，特别是CAR-T细胞疗法。在一个实施方案中，本发明的组合物用于细胞疗法。在一个实施方案中，本发明的组合物用于CAR-T细胞疗法。在一个实施方案中，本发明的组合物通过增强CAR-T而用于治疗癌症。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物通过增强CAR-T而用于治疗慢性淋巴细胞性白血病。优选地，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含以登录号42382保藏在NCIMB的菌株或其衍生物或生物型，其用于任何此类用途。

在某些实施方案中，在CAR-T疗法期间T细胞过继转移之前，将本发明的组合物施用于患者。

在某些实施方案中，在CAR-T疗法期间T细胞过继转移之后，将本发明的组合物施用于患者。

因此，本发明的组合物可用于细胞疗法，特别是用于增强对细胞疗法的反应。

如本文所用，“增强”细胞疗法如CAR-T的功效是指由于本发明的组合物的施用，当与不存在其施用相比时，本发明的组合物从细胞疗法在受试者中引起更大的治疗作用(例如，在CAR-T的情况下，T细胞介导的免疫反应，特别是针对肿瘤抗原)。例如，当与用细胞疗法而非本发明的组合物治疗的对照受试者相比时，用本发明的组合物和细胞疗法治疗的受试者可表现出来自细胞疗法的更大的这种治疗作用。

间充质干细胞(MSC)疗法

已报道间充质干细胞(MSC)疗法具有免疫刺激性质。当MSC用LPS处理时，它们上调促炎性细胞因子IL-8，这引起B细胞增殖增加[24]。因此，由于本发明的组合物显示增加B细胞增殖，因此它们可与MSC细胞疗法组合使用。

干细胞移植疗法

已报道，代替在干细胞移植疗法中使用未分化干细胞，在移植前使干细胞在某种程度上分化可能有益。例如，Heng等人[25]报道干细胞的心肌源性分化通过具有较高植入效率、增强的肌细胞再生和增加的心脏功能恢复而可能有益。此外，研究已表明，用某些共生细菌菌株进行GI定殖可改善同种异体造血细胞移植后的存活[26]。由于本发明的组合物的施用刺激细胞，因此本发明的组合物可用于干细胞移植疗法中的干细胞分化。特别是，本发明的组合物用于造血细胞移植如同种异体造血细胞移植的方法中。

免疫衰老

Fulop等人[27]确定B细胞数量减少与适应性免疫系统的老化相关。因此，本发明的组合物可用于预防或延迟免疫衰老。在一个实施方案中，本发明的组合物用于预防免疫衰老。在另一个实施方案中，本发明的组合物用于延迟以B细胞数量减少为特征的免疫衰老(B细胞免疫衰老)。在一个实施方案中，本发明的组合物通过增加B细胞数量而用于延迟免疫衰老。在一个实施方案中，本发明的组合物用于治疗由免疫衰老引起的疾病。在一个实施方案中，本发明的组合物用于通过延迟和/或预防免疫衰老来治疗与老化相关的疾病。优选地，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含以登录号42382保藏在NCIMB的菌株或其衍生物或生物型，其用于任何此类用途。

此外，已经提出疫苗佐剂可克服免疫衰老[28]。由于本发明的组合物适合用作疫苗佐剂，因此本发明的组合物可用于预防或延迟免疫衰老。在另一个实施方案中，本发明的组合物作为疫苗佐剂用于延迟和/或预防免疫衰老。在另一个实施方案中，本发明的组合物用作疫苗佐剂，其中所述组合物延迟和/或预防免疫衰老。

与免疫衰老相关的疾病包括心血管疾病、神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病和帕金森氏病、癌症、2型糖尿病[29]和自身免疫性病症[30]。

患者亚组

如实施例中所示，许多副拟杆菌属菌株引起免疫刺激作用，例如脾细胞增殖和细胞因子分泌。因此，在上文详述的任何治疗用途中，本发明的组合物在免疫受损或免疫抑制的受试者中可能特别有效。受试者可由于任何原因而免疫受损或免疫抑制，包括但不限于器官接受，医源性免疫抑制，免疫抑制感染(例如HIV感染)的存在和/或肿瘤引起的免疫抑制。优选地，受试者患有癌症，并且由于肿瘤诱导的免疫抑制而免疫受损或免疫抑制。

免疫受损或免疫抑制(例如，由于肿瘤诱导的免疫抑制的结果)的受试者与无疾病受试者、特别是无癌症受试者相比，在淋巴结内和/或在一定体积的外周血单核细胞(PBMC)内，可表现出升高数量的调节性T细胞(Treg)(参见例如[31]、[32])。因此，在以上详述的任何治疗用途中，本发明的组合物优选用于与无疾病受试者的淋巴结相比在淋巴结内具有升高数量的调节性T细胞(Treg)的受试者中。更优选地，所述受试者患有癌症，并且本发明的组合物用于与无癌症受试者的淋巴结(例如转移性淋巴结)相比在淋巴结内具有升高数量的调节性T细胞(Treg)的受试者中。另外或可替代地，在以上详述的任何治疗用途中，本发明的组合物优选用于与来自无疾病受试者的一定体积的PBMC相比在相同体积的PBMC中具有升高数量的Treg的受试者中。更优选地，所述受试者患有癌症，并且本发明的组合物用于与来自无癌症受试者的一定体积的PBMC相比在相同体积的PBMC中具有升高数量的Treg的受试者中。在这些实施方案中，Treg可替代地定义为CD4+CD25+细胞，或FOXP3+细胞，或CD4+CD25+和Foxp3+细胞(参见[32])。与无疾病、特别是无癌症受试者相比，免疫受损或免疫抑制的受试者还可表现出更高数量的髓样树突状细胞(mDC)和/或浆细胞样树突状细胞(pDC)(参见例如[33])。因此，另外或可替代地，在以上详述的任何治疗用途中，本发明的组合物优选用于与来自无疾病受试者的一定体积的PBMC相比在相同体积的PBMC内具有升高数量的mDC的受试者中。更优选地，所述受试者患有癌症，并且本发明的组合物用于与来自无癌症受试者的一定体积的PBMC相比在相同体积的PBMC内具有升高数量的mDC的受试者中。另外或可替代地，在以上详述的任何治疗用途中，本发明的组合物优选用于与来自无疾病受试者的一定体积的PBMC相比在相同体积的PBMC内具有升高数量的pDC的受试者中。更优选地，所述受试者患有癌症，并且本发明的组合物用于与来自无癌症受试者的一定体积的PBMC相比在相同体积的PBMC内具有升高数量的pDC的受试者中。在这些实施方案中，pDC可以可替代地定义为CD11c+细胞，和/或mDC可以可替代地定义为CD123+细胞(参见[33])。可使用本领域可用的标准方法，例如流式细胞术来确定细胞数量和细胞表面标志物的表达(参见例如[32])。

施用模式

优选地，将本发明的组合物施用于胃肠道，以便能够用本发明的细菌菌株递送至肠和/或部分或全部定殖于肠。通常，本发明的组合物是经口施用的，但是它们可经直肠、鼻内，或经颊或舌下途径施用。

在某些实施方案中，本发明的组合物可以泡沫、喷雾剂或凝胶剂的形式施用。

在某些实施方案中，本发明的组合物可作为栓剂如直肠栓剂，例如呈可可油(可可脂)、合成硬脂(例如suppocire、witepsol)、甘油-明胶、聚乙二醇或皂甘油组合物的形式施用。

在某些实施方案中，本发明的组合物经由管(例如鼻胃管、口胃管、胃管、空肠造瘘管(J管)、经皮内窥镜胃造口术(PEG))或端口(例如提供到胃的路径的胸壁端口、空肠或其他合适的路径端口)来施用到胃肠道。

本发明的组合物可以一次施用，或者它们可作为治疗方案的一部分依次施用。在某些实施方案中，本发明的组合物有待每天施用。

在本发明的某些实施方案中，根据本发明的治疗伴随着对患者肠道微生物群的评估。如果未能实现本发明菌株的递送和/或部分或全部定殖而使得未观察到功效，则可重复治疗；或者如果递送和/或部分或全部定殖成功并且观察到功效，则可停止治疗。

在某些实施方案中，可将本发明的组合物施用于怀孕的动物，例如哺乳动物如人，以减少其孩子在子宫内和/或在其出生后患上疾病的可能性。

可将本发明的组合物施用于已经被鉴定为具有B细胞数量减少的患者。

本发明的组合物可作为食品例如营养补充剂施用。

通常，本发明的组合物用于治疗人类，但它们可用于治疗动物，包括单胃哺乳动物如家禽、猪、猫、狗、马或兔子。本发明的组合物可用于增强动物的生长和性能。如果施用于动物，则可使用管饲法。

组合物

本发明的组合物包含细菌。在本发明的优选实施方案中，将组合物配制成冻干形式。例如，本发明的组合物可包含颗粒或明胶胶囊，例如硬明胶胶囊，其包含本发明的细菌菌株。

优选地，本发明的组合物包含冻干细菌。细菌的冻干是一种公认程序，并且相关指导可在例如参考文献[34,36]中获得。

或者，本发明的组合物可包含活的活性细菌培养物。

在优选的实施方案中，将本发明的组合物封装以使细菌菌株能够递送至肠。封装可保护组合物免于降解，直至例如通过用化学或物理刺激(例如压力、酶活性或可通过pH变化触发的物理崩解)而破裂来递送在目标位置。可使用任何适当的封装方法。示例性的封装技术包括捕集在多孔基质内，附着或吸附在固体载体表面上，通过絮凝自聚集或与交联剂聚集，以及在微孔膜或微胶囊后的机械容纳。关于可用于制备本发明组合物的封装的指导可在例如参考文献[37]和[38]中获得。

所述组合物可经口施用，并且可以是片剂、胶囊剂或散剂的形式。封装产品是优选的，因为来自副拟杆菌属的生物是厌氧菌。可包括其他成分(例如维生素C)作为除氧剂和益生元底物，以改善体内的递送和/或部分或全部定殖和存活。或者，本发明的益生菌组合物可作为食品或营养产品例如基于乳或乳清的发酵乳制品或作为药物产品经口施用。

所述组合物可配制成益生菌。

本发明的组合物包含治疗有效量的本发明的细菌菌株。治疗有效量的细菌菌株足以对患者发挥有益作用。治疗有效量的细菌菌株可能足以导致向患者肠道的递送和/或部分或全部定殖。

例如，对于成年人，细菌的合适的日剂量可为约1×10³至约1×10¹¹个菌落形成单位(CFU)；例如，约1×10⁷至约1×10¹⁰个CFU；在另一个实例中约1×10⁶至约1×10¹⁰个CFU；在另一个实例中约1×10⁷至约1×10¹¹个CFU；在另一个实例中约1×10⁸至约1×10¹⁰个CFU；在另一个实例中约1×10⁸至约1×10¹¹个CFU。

在某些实施方案中，细菌的剂量为每天至少10⁹个细胞，例如每天至少10¹⁰个、至少10¹¹个或至少10¹²个细胞。

在某些实施方案中，相对于组合物的重量，所述组合物包含的细菌菌株的量为约1×10⁶至约1×10¹¹CFU/g；例如，约1×10⁸至约1×10¹⁰CFU/g。剂量可以是例如1g、3g、5g和10g。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，其中细菌菌株的量相对于组合物的重量为每克约1×10³至约1×10¹¹个菌落形成单位。

在某些实施方案中，药物组合物包含16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5个或更少的不同细菌物种。在某些实施方案中，药物组合物包含4个或更少的不同细菌物种。在某些实施方案中，药物组合物包含3个或更少的不同细菌物种。在某些实施方案中，药物组合物包含2个或更少的不同细菌物种。在某些实施方案中，药物组合物包含狄氏副拟杆菌、粪副拟杆菌、约氏副拟杆菌或古氏副拟杆菌并且不包含其他细菌物种。在优选的实施方案中，本发明的组合物包含单个狄氏副拟杆菌、粪副拟杆菌、约氏副拟杆菌或古氏副拟杆菌的菌株并且不包含其他细菌菌株或物种。这样的组合物可仅包含极少量或生物学上不相关量的其他细菌菌株或物种。令人惊讶的是，实施例表明，仅包含单一本发明菌株的组合物可具有有效的作用，而不依赖于与其他菌株或物种的共同施用。

在某些实施方案中，本发明提供上述药物组合物，其中所述组合物以500mg至1000mg、600mg至900mg、700mg至800mg、500mg至750mg或750mg至1000mg的剂量施用。在某些实施方案中，本发明提供上述药物组合物，其中所述药物组合物中的冻干细菌以500mg至1000mg、600mg至900mg、700mg至800mg、500mg至750mg或750mg至1000mg的剂量施用。

通常，益生菌，例如本发明的组合物，任选地与至少一种合适的益生元化合物组合。益生元化合物通常是不可消化的碳水化合物，例如寡糖或多糖或糖醇，其在上消化道中不会降解或吸收。已知的益生元包括商业产品，例如菊粉和反式半乳糖寡糖。

在某些实施方案中，本发明的益生菌组合物包含益生元化合物，其量相对于组合物总重量为约1至约30重量％(例如5至20重量％)。碳水化合物可选自由以下组成的组：低聚果糖(或FOS)，短链低聚果糖，菊粉，异麦芽寡糖，果胶，木寡糖(或XOS)，壳聚糖寡糖(或COS)，β-葡聚糖，阿拉伯树胶改性和抗性淀粉，聚右旋糖，D-塔格糖，阿拉伯胶纤维，角豆，燕麦和柑桔纤维。在一个方面，益生元是短链果糖寡糖(为简单起见，在下文中显示为FOSs-c.c.)；所述FOSs-c.c.是不可消化的碳水化合物，通常通过甜菜糖的转化而获得，并且包括与三个葡萄糖分子结合的蔗糖分子。

本发明的组合物可包含药学上可接受的赋形剂或载体。此类合适的赋形剂的实例可见于参考文献[39]中。用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂在制药领域是众所周知的，并且例如描述于参考文献[40]中。合适的载体的实例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露糖醇、山梨糖醇等。合适的稀释剂的实例包括乙醇、甘油和水。可关于预期的施用途径和标准药学实践选择药物载体、赋形剂或稀释剂。药物组合物可包含任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂作为载体、赋形剂或稀释剂，或除载体、赋形剂或稀释剂外还包含任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂。合适的粘合剂的实例包括淀粉，明胶，天然糖如葡萄糖、无水乳糖、自由流动乳糖、β-乳糖，玉米甜味剂，天然和合成树胶如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻酸钠，羧甲基纤维素和聚乙二醇。合适的润滑剂的实例包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。可在药物组合物中提供防腐剂、稳定剂、染料和甚至调味剂。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯。也可使用抗氧化剂和悬浮剂。

本发明的组合物可配制成食品。例如，除了本发明的治疗作用外，食品还可提供营养益处，例如呈营养补充剂的形式。类似地，可配制食品来增强本发明组合物的味道或通过与普通食物而不是药物组合物更相似来使组合物更具消费吸引力。在某些实施方案中，本发明的组合物被配制成乳基产品。术语“乳基产品”是指具有变化的脂肪含量的任何基于液体或半固体的乳或乳清基产品。乳基产品可以是例如牛奶，山羊奶，绵羊奶，脱脂奶，全脂奶，由奶粉和乳清复合而成的未经任何加工的奶，或经过加工的产品，例如酸乳酪、凝固乳、凝乳、酸奶、酸味全脂奶、酪乳和其他酸奶产品。另一重要组包括乳饮料，例如乳清饮料、发酵乳、炼乳、婴儿或幼儿乳；调味乳，冰淇淋；含乳食物，例如糖果。

在某些实施方案中，本发明的组合物包含单个细菌菌株或物种，并且不包含任何其他细菌菌株或物种。这样的组合物可仅包含极少量或生物学上不相关量的其他细菌菌株或物种。这样的组合物可以是基本上不含其他生物物种的培养物。

根据本发明使用的组合物可能需要或可能不需要市场批准。

在一些情况下，在施用前将冻干的细菌菌株重构。在一些情况下，通过使用本文所述的稀释剂进行重构。

本发明的组合物可包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。

在某些实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含：本发明的细菌菌株；和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂；其中所述细菌菌株的量当施用于有需要的受试者时足以治疗病症。

在某些实施方案中，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含：本发明的细菌菌株；和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂；其中所述细菌菌株的量足以治疗或预防疾病或疾患。

在某些实施方案中，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含：本发明的细菌菌株；和药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂；其中所述细菌菌株的量足以治疗或预防由降低的免疫反应介导的疾病或疾患。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，其中细菌菌株的量相对于组合物的重量为每克约1×10³至约1×10¹¹个菌落形成单位。

在某些实施方案中，本发明提供上述药物组合物，其中所述组合物以1g、3g、5g或10g的剂量施用。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，其中所述组合物是通过选自由经口、经直肠、皮下、经鼻、经颊和舌下组成的组的方法施用。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，所述药物组合物包含选自由乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露糖醇和山梨糖醇组成的组的载体。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，所述药物组合物包含选自由乙醇、甘油和水组成的组的稀释剂。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，所述药物组合物包含选自由以下组成的组的赋形剂：淀粉、明胶、葡萄糖、无水乳糖、自由流动乳糖、β-乳糖、玉米甜味剂、阿拉伯胶、黄蓍胶、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠和氯化钠。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，所述药物组合物还包含防腐剂、抗氧化剂和稳定剂中的至少一种。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，所述药物组合物包含选自由苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯组成的组的防腐剂。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，其中所述细菌菌株是冻干的。

在某些实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，其中当将所述组合物在约4℃或约25℃下储存在密封容器中并且将所述容器放置在具有50％相对湿度的气氛中时，至少80％的细菌菌株(如以菌落形成单位计量)在至少约1个月、3个月、6个月、1年、1.5年、2年、2.5年或3年的时期后仍然存在。

培养方法

用于本发明的细菌菌株可使用例如参考文献[41-43]中详述的标准微生物学技术来培养。

用于培养的固体或液体培养基可以是YCFA琼脂或YCFA培养基。YCFA培养基可包含(每100ml，近似值)：酪胨(1.0g)、酵母提取物(0.25g)、NaHCO₃(0.4g)、半胱氨酸(0.1g)、K₂HPO₄(0.045g)、KH₂PO₄(0.045g)、NaCl(0.09g)、(NH₄)₂SO₄(0.09g)、MgSO₄·7H₂O(0.009g)、CaCl₂(0.009g)、刃天青(0.1mg)、氯化血红素(1mg)、生物素(1μg)、钴胺素(1μg)、对氨基苯甲酸(3μg)、叶酸(5μg)和吡哆胺(15μg)。YCFA+培养基具有以下组成：

矿物质溶液1：K₂HPO₄-3.0g；d.H₂O至总体积为1l

矿物质溶液2：KH₂PO₄-3.0g；(NH₄)₂SO₄-6.0g；NaCl-6.0g；MgSO₄-0.6g；CaCl₂-0.6g；d.H₂O至总体积为1l

刃天青溶液：于100ml蒸馏水中的0.1％粉末状刃天青。

短链脂肪酸溶液：乙酸-17ml；丙酸-6ml；正戊酸-1ml；异戊酸-1ml；异丁酸-1ml

氯高铁血红素溶液：KOH-0.28g乙醇95％-25ml；氯高铁血红素-100mg；d.H₂O至总体积为100ml

维生素溶液1：生物素-1mg；钴胺素-1mg；对氨基苯甲酸-3mg；叶酸-5mg；吡哆胺-15mg；d.H₂O至总体积为100ml

维生素溶液2：硫胺素-5mg；核黄素-5mg；d.H₂O至总体积为100ml

疫苗组合物

本发明人已经确定本发明的细菌菌株可用作疫苗佐剂。因此，当在疫苗组合物中作为佐剂与一种或多种抗原如病原体抗原或肿瘤抗原组合施用时，本发明的细菌菌株也可用于预防疾病或疾患。因此，本发明还提供了疫苗组合物，所述疫苗组合物包含副拟杆菌属(如上文所定义)的细菌菌株，以及一种或多种抗原如病原体抗原或肿瘤抗原。病原体抗原包括病毒抗原，例如病毒表面蛋白；细菌抗原，例如蛋白质和/或糖抗原；真菌抗原；和寄生虫抗原。

本发明疫苗组合物中的抗原包括来自以下病原体的抗原：流感病毒、HIV、钩虫、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌、衣原体、SARS冠状病毒、水痘带状疱疹病毒、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、结核分枝杆菌、炭疽芽孢杆菌、爱泼斯坦巴尔病毒、人乳头瘤病毒。流感病毒抗原是优选的。

本发明疫苗组合物中的其他抗原包括糖蛋白和脂多糖抗原，古细菌抗原，黑素瘤抗原E(MAGE)，癌胚抗原(CEA)，MUC-1，HER2，唾液酸-Tn(STn)，人端粒酶逆转录酶(hTERT)，威尔姆斯瘤基因(WT1)，CA-125，前列腺特异性抗原(PSA)，新抗原，致癌蛋白，β淀粉样蛋白，Tau，PCSK9和习惯形成物质如尼古丁、酒精或阿片剂。

在一些实施方案中，疫苗组合物包含药学上可接受的赋形剂或载体。在一些实施方案中，疫苗组合物包含其他佐剂，例如铝盐(特别是氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝)。在其他实施方案中，疫苗组合物不包含另外的佐剂(即，根据本发明的细菌菌株是组合物中的唯一佐剂)。

在一些实施方案中，副拟杆菌属(如上文所定义)的细菌菌株在疫苗组合物中表达一种或多种抗原。通常，抗原将重组表达并将与细菌细胞异源。因此，在一些实施方案中，在表达异源抗原的疫苗组合物中提供了副拟杆菌属(如上文所定义)的细菌菌株。

在某些这样的实施方案中，本发明的细菌菌株可以被杀死、灭活或减毒。在某些实施方案中，疫苗组合物用于经由注射，例如经由皮下注射施用。

本发明的疫苗组合物还可包含如上文所定义的组合物特征(参见“组合物”部分)。

本发明的疫苗组合物也可用于医学中，包括以上定义的任何治疗用途。

通则

除非另有说明，否则本发明的实施将采用本领域技术范围内的常规化学、生物化学、分子生物学、免疫学和药理学方法。文献中对这些技术进行了充分的解释。参见例如参考文献[44]和[45,51]等。

术语“包含”涵盖“包括”以及“组成”，例如“包含”X的组合物可仅由X组成或者可包括额外的事物，例如X+Y。

关于数值x的术语“约”是任选的并且是指例如x±10％。

词语“基本上”不排除“完全”，例如“基本上不含”Y的组合物可完全不含Y。必要时，词语“基本上”可从本发明的定义中省略。

对两个核苷酸序列之间的序列同一性百分比的提及是指当比对时，所述百分比的核苷酸在比较两个序列时是相同的。这种比对和同源性或序列同一性百分比可使用本领域中已知的软件程序，例如参考文献[52]的章节7.7.18中所述的那些来确定。优选的比对是通过Smith-Waterman同源性搜寻算法使用空位开放罚分12和空位扩展罚分2、BLOSUM矩阵62进行仿射空位搜寻来确定。Smith-Waterman同源性搜寻算法在参考文献[53]中公开。

除非另有规定，否则包括众多步骤的工艺或方法可在方法开始或结束时包括额外步骤，或者可包括额外中间步骤。此外，适当时，步骤可组合、省略或以替代性次序进行。

本文描述本发明的各种实施方案。应了解，每个实施方案中指定的特征可与其他指定特征组合，以提供另外的实施方案。特别是，本文中突出强调为合适、典型或优选的实施方案可彼此组合(除非它们相互排斥)。

本发明的实施方式

实施例1-来自健康供体的PBMC的基本细胞表型分析

细菌菌株

狄氏副拟杆菌菌株NCIMB 42382

方法

PBMC处理

冷冻的健康人PBMC购自Stem Cells Technologies(英国剑桥)。短暂地将细胞解冻，并使其在37℃下在CO2温育箱中的完全生长培养基(含10％FBS、2mM L.谷氨酰胺和100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI 1640)中静置过夜。对于实验，将细胞以750,000个细胞/孔的密度铺在48孔板中，并在存在或不存在1ng/ml LPS的情况下在具有10％细菌上清液的完全生长培养基中处理。将细胞培养基添加至未处理的孔中。将细胞静置72h，然后收集无细胞上清液，并在4℃下以10,000g快速离心3分钟。将样品储存在-80℃下以进行细胞因子分析。

免疫表型分析

每个样品1.5×10⁶个细胞用活力固定染料(Miltenyi)染色，以在室温下区分活细胞和死细胞持续10min。然后，将细胞用下面列出的抗体混合液(Miltenyi)染色以进行基本免疫表型分析(CD3/CD4/CD8/CD25/CD127和CD19)，并在室温下温育10min。

进行实验以测量以下细胞群体的百分比：

·CD4+CD3+细胞(CD4 T辅助细胞的标志物)

·CD4+CD25+细胞(CD4+活化细胞的标志物)

·CD4+细胞群体中的CD25++CD17-细胞(Treg细胞的标志物)

·CD8+CD3+细胞(细胞毒性T细胞的标志物)

·CD25+CD8+细胞(CD8+活化细胞的标志物)

·CD19+CD3-细胞(B细胞的标志物)。

测定CD8+/Treg的比率和活化的CD8/Treg细胞的比率。

抗体

Aria	AB-荧光染料
		V2	CD3-VioBlue
APC Cy7	CD4-APC-Vio 770
		PE-Cy7	CD8-PE-Vio 770
PE	CD25-PE
		APC	CD127-APC
FITC	CD19-VioBright 515

结果

实验结果示于图1中。

最令人惊讶的结果是NCIMB 42382处理对代表B细胞的CD19+CD3-细胞百分比的影响(参见图1F)。NCIMB 42382选择性地增加PBMC群体中B细胞的百分比。NCIMB 42382处理并未显著改变CD4T辅助细胞、CD4+活化细胞、Treg细胞、细胞毒性T细胞或CD8+活化细胞的百分比。

讨论

用NCIMB 42382处理选择性地增加B细胞百分比的观察结果支持了副拟杆菌属菌株作为疫苗佐剂的功效以及可有效治疗以B细胞水平降低为特征的其他疾患如免疫衰老。

实施例2–来自健康供体的PBMC的细胞因子分析

引言

本发明人试图进一步分析与NCIMB 42382一起温育后的PBMC。本发明人分析了已知与疫苗佐剂功效相关的来自PBMC的特定细胞因子即MCP-1的表达。

细菌菌株

狄氏副拟杆菌菌株NCIMB 42382

方法

PBMC处理

如实施例1所述处理PBMC。

细胞因子定量

按照制造商的建议(Thermo Fischer Scientific)使用ProcartaPlex多重免疫测定法进行细胞因子定量。简而言之，使用带有xPONENT软件(Luminex，Austin,TX,USA)的

系统(Merck)，将50μl无细胞共培养上清液用于细胞因子定量。使用

分析家软件(Merck)使用5参数逻辑曲线和背景扣除来分析数据，以将平均荧光强度转换为pg/ml值。

结果

结果示于图3中。来自健康供体的PBMC培养物中NCIMB 42382的细胞因子分析结果表明MCP-1的表达增加。

讨论

这表明NCIMB 42382有效地引起来自PBMC的MCP-1增加，MCP-1是一种与疫苗佐剂活性相关的细胞因子。

实施例3–NCIMB 42382对HT29细胞系的TNF-α分泌的影响

方法

分化的HT29细胞形成不可渗透的极化顶膜/粘膜和基底外侧/浆膜并且在结构上和功能上类似于小肠的上皮细胞。

将HT29细胞以200,000个细胞/孔的密度铺在12孔板中。使细胞分化10天(每2天更换培养基)。实验当天将细胞置于厌氧罩中，并用厌氧平衡的HANKs溶液洗涤。然后将900μl生长培养基(不含FBS和抗生素)添加到细胞中。将细菌细胞重悬于生长培养基(不含FBS和抗生素)中，然后以100μl中总共10⁷的量添加。在厌氧罩中将细胞与细菌共温育2小时。然后，在不含FBS但含有抗生素的生长培养基中洗涤细胞。将细胞在1ml ThP1条件培养基中静置24h。温育24h后，收集上清液并在4℃下以10,000g快速离心3min。将样品在-80℃下冷冻直至进一步使用。

ThP1条件培养基：Thp1以4×10⁶个/烧瓶的密度接种在T25烧瓶中。在含有1ug/mlLPS或LPS+5mM ATP(LPS后3小时添加ATP)的RPMI培养基(含有2mM L-谷氨酰胺，不含FBS)中处理细胞。使细胞静置24hr。然后通过在室温下以250g快速离心细胞5min来收集条件培养基(CM)。不同的CM用于处理HT29细胞。将一小份等分试样在80℃下冷冻用于ELISA。

收集不同样品的上清液，并使用来自Peprotech的人TNF-a ELISA试剂盒根据制造商的说明进行细胞因子分析。GraphPad Prism7用于绘制和分析数据。

结果和讨论

NCIMB 42382上清液单独地或与Thp1条件培养基(CM)一起诱导HT29癌细胞系(结直肠癌)的TNF-α分泌，分别参见图4B和图4A。TNF-α是一种有效的免疫刺激性细胞因子，其分泌由疫苗佐剂诱导[54]；此外，TNF-α本身已经报道了作为疫苗佐剂的作用[55]。这些数据为NCIMB 42382例如在癌症疗法中具有作为疫苗佐剂的功效提供了进一步的证据。

实施例4–NCIMB 42382的发酵概况

方法

按照制造商的说明，对NCIMB 42382菌落进行Rapid ID 32A测试。使用来自2015年6月26日生成的NCIMB 42382珠粒储备液的单个珠粒来接种YCFA琼脂板(E&O Labs)，将其在厌氧工作站中于37℃温育24小时。从板上移出菌落并重悬于2ml安瓿瓶的

悬浮培养基(bioMérieux)中，并且按照制造商的说明将这种悬浮液用于接种Rapid ID 32A试纸条(bioMérieux)。根据制造商的说明将试纸条温育和显影，并记录每个杯形器的颜色并指定阴性值、中间值或阳性值。

按照制造商的说明进行

50CHL测试并做了一些细微的改动。使用来自2015年8月14日生成的NCIMB 42382甘油储备液的单个珠粒来接种YCFA琼脂板(E&O Labs)，将其在厌氧工作站中于37℃温育24小时。将来自该板的单个菌落用于接种在YCFA肉汤(E&OLabs)中的培养物，并将其在37℃下厌氧温育16-18小时。将该培养物在

CHL培养基(bioMérieux)中稀释十倍，以产生悬浮液，将其用于接种

50CH测试板(bioMérieux)上的每个杯形器。将试纸条在加湿的温育箱中于37℃厌氧温育48小时，然后记录每个杯形器的颜色并指定阴性值、中间值或阳性值。

结果和讨论

使用Rapid ID 32A分析，NCIMB 42382对α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、碱性磷酸酶的发酵以及精氨酸、亮氨酰-甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸、组氨酸和谷氨酰谷氨酸的利用测试呈阳性(图5A)。使用

50CHL，NCIMB 42382对以下碳水化合物源的利用测试呈阳性：果糖、甘露糖、甘露糖醇、山梨糖醇、熊果苷、七叶苷、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、棉子糖、淀粉、糖原、松二糖和岩藻糖(图5B)。观察到木糖、N-乙酰氨基葡萄糖、苦杏仁苷、水杨苷、纤维二糖、海藻糖、松三糖和龙胆二糖的中间反应。对于碳水化合物和/或氨基酸(特别是碳水化合物)，表现出与NCIMB42382高度相似或相同发酵概况的细菌菌株预期可用作疫苗佐剂，用于治疗、预防或延迟免疫衰老，或用于增强细胞疗法。

实施例5–副拟杆菌属菌株对脾细胞增殖的影响

方法

从解剖自6至8周龄的雌性C57BL/6小鼠的脾脏新鲜制备脾细胞。简而言之，将脾细胞以900,000个细胞/孔接种在96孔板中的含10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素和55μMβ-巯基乙醇的RPMI 1640中。细胞未经处理(静置)或用来自各种菌株固定培养物的10％细菌培养基YCFA+(空白培养基)或10％无细胞细菌上清液处理，并在37℃的CO₂温育箱中温育72h。培养每个副拟杆菌属菌株并如下制备上清液：使用100μL的Research Cell Bank小瓶接种10mL的YCFA+肉汤。将培养物在厌氧工作站中于37℃温育过夜。每种过夜培养物用于接种五个含有10mL具10％继代培养物的新鲜生长培养基的Hungate管。温育培养管直至它们达到早期固定相，然后如下收集无细胞上清液(CFS)。合并各个培养管并记录细菌密度(O.D.600nm)。通过离心(5000xg，15分钟)获得副拟杆菌属菌株的无细胞上清液，并通过0.45μm过滤，接着通过0.22μm过滤器过滤。

MTT测定试剂盒购自Merck Millipore(目录号CT01)。温育72h后，将10μl MTT溶液添加到每个孔中，将细胞在CO₂温育箱中温育4h。然后，向每个孔中加入100μl异丙醇/0.04MHCL溶液，并在560nm波长下测量吸光度(参考波长为655nm)。

结果

所测试的副拟杆菌属菌株是NCIMB 42382(狄氏副拟杆菌)、菌株参考1(狄氏副拟杆菌)、菌株参考2(狄氏副拟杆菌)、菌株参考3(副拟杆菌属种)、菌株参考4(约氏副拟杆菌)、菌株参考5(狄氏副拟杆菌)、菌株参考6(狄氏副拟杆菌)、菌株参考7(粪副拟杆菌)、菌株参考8(狄氏副拟杆菌)、以登录号DSMZ19448保藏的菌株(古氏副拟杆菌)、以登录号DSMZ29187保藏的菌株(古氏副拟杆菌)。与YCFA+或未处理的细胞相比，所有菌株在培养72h后均诱导脾细胞增殖(图6)。脾细胞包括免疫细胞如T细胞、B细胞和巨噬细胞的各种子集[56]。因此，这些数据证明用副拟杆菌属菌株的治疗引起免疫刺激作用，表明它们可充当疫苗佐剂，用于治疗、预防或延迟免疫衰老的治疗剂，或用于增强细胞疗法如CAR-T的辅助治疗剂。

实施例6–副拟杆菌属菌株对脾细胞分泌细胞因子的影响

方法

按照实施例5制备脾细胞并用细菌上清液处理。然后将细胞在4℃以500g快速离心5分钟，并收集无细胞上清液，并储存在-80℃用于细胞因子分析。根据制造商的建议(Thermo Fischer Scientific)，使用26重小鼠ProcartaPlex多重免疫测定法进行细胞因子定量。简而言之，使用带有xPONENT软件(Luminex，Austin,TX,USA)的

系统(Merck)，将50μl无细胞共培养上清液用于细胞因子定量。使用

分析家软件(Merck)使用5参数逻辑曲线和背景扣除来分析数据，以将平均荧光强度转换为pg/ml值。

结果

所测试的副拟杆菌属菌株是NCIMB 42382(狄氏副拟杆菌)、菌株参考1(狄氏副拟杆菌)、菌株参考2(狄氏副拟杆菌)、菌株参考3(副拟杆菌属种)、菌株参考4(约氏副拟杆菌)、菌株参考5(狄氏副拟杆菌)、菌株参考6(狄氏副拟杆菌)、菌株参考7(粪副拟杆菌)、菌株参考8(狄氏副拟杆菌)、DSMZ19448(古氏副拟杆菌)、DSMZ29187(古氏副拟杆菌)，并且结果示于图7中。所有测试的副拟杆菌属菌株相比于YCFA+培养基和未处理的对照均引起TNF-α、IL-1β、IL-27、IL-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、IL-22、IL-5和CXCL1的更多分泌。此外，所有测试的副拟杆菌属菌株相比于YCFA+培养基对照均引起IL-2、GM-CSF、IFN-γ、IL-6、IP-10、IL-18、IL-23和RANTES的更多分泌。因此，这些数据进一步证明了用副拟杆菌属菌株进行治疗引起免疫刺激作用，表明它们可充当疫苗佐剂，用于治疗、预防或延迟免疫衰老的治疗剂，或用于增强细胞疗法如CAR-T的辅助治疗剂。许多上调的细胞因子/趋化因子(例如IL-5、CXCL1、IP-10、RANTES、MIP-1α、MIP-1β和MIP2)可募集免疫细胞，因此可起到产生局部化免疫反应的作用。MF59，一种本领域已知的佐剂，被认为是通过这种机制起作用的(尤其是MIP-1α、MIP-1β和RANTES上调)[57]。此外，已知GM-CSF可为临床批准的疫苗提供佐剂作用[58]，从而进一步表明副拟杆菌属菌株作为疫苗佐剂的效用。

实施例7–其他副拟杆菌属菌株对脾细胞分泌细胞因子的影响

方法

如实施例6中所述进行这些实验。

结果

所测试的副拟杆菌属菌株是：菌株参考2(狄氏副拟杆菌)、菌株参考7(粪副拟杆菌)、菌株参考9(狄氏副拟杆菌)、菌株参考10(约氏副拟杆菌)、菌株参考11(副拟杆菌属种)、菌株参考12(副拟杆菌属种)、菌株参考13(副拟杆菌属种)、菌株参考14(副拟杆菌属种)和菌株参考15(副拟杆菌属种)。结果示于图8中。用来自大多数测试的副拟杆菌属菌株的上清液处理小鼠脾细胞相比于YCFA+培养基和未处理的对照引起细胞因子/趋化因子IP-10、RANTES、TNF-α、MIP-1α、MIP-1β和MIP2的更多分泌。总的来说，这些结果证明了用副拟杆菌属菌株进行处理引起免疫刺激作用，表明它们可充当疫苗佐剂，用于治疗、预防或延迟免疫衰老的治疗剂，或用于增强细胞疗法如CAR-T的辅助治疗剂。如以上在实施例6中所述，许多上调的细胞因子/趋化因子(IP-10、RANTES、MIP-1α、MIP-1β和MIP2)可募集免疫细胞，并因此产生局部化免疫反应。

实施例8–狄氏副拟杆菌菌株DSM20701的短/中链脂肪酸产生概况

方法

狄氏副拟杆菌菌株DSM 20701的纯培养物在YCFA+肉汤中厌氧生长。来自细菌上清液的短链脂肪酸(SCFA)和中链脂肪酸(MCFA)由丹麦的MS Omics APS分析和定量。使用盐酸将样品酸化，并添加氘标记的内标。所有样品均按随机顺序进行分析。使用安装在气相色谱仪(7890B,Agilent)中的高极性柱(Zebron^TM ZB-FFAP，GC Cap.柱30m×0.25mm×0.25μm)与四极杆检测器(5977B,Agilent)耦合进行分析。所述系统由ChemStation(Agilent)控制。使用Chemstation(Agilent)将原始数据转换为netCDF格式，然后使用PARADISe软件在MatlabR2014b(Mathworks,Inc.)中导入数据并进行处理。

结果

狄氏副拟杆菌菌株DSM 20701给出短/中链脂肪酸的以下概况：

实施例9–其他副拟杆菌属菌株的短/中链脂肪酸产生概况

方法

根据实施例8测量下文详述的菌株的短/中链脂肪酸产生概况。

结果

可看出，所测试的不同副拟杆菌属菌株一致地同时产生乙酸和丙酸。

序列

SEQ ID NO:1(狄氏副拟杆菌基因，16S核糖体RNA，部分序列，菌株：JCM 5825-AB238922)

1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg

61 ggcagcgggg tgtagcaata caccgccggc gaccggcgca cgggtgagta acgcgtatgc

121 aacttgccta tcagaggggg ataacccggc gaaagtcgga ctaataccgc atgaagcagg

181 gatcccgcat gggaatattt gctaaagatt catcgctgat agataggcat gcgttccatt

241 aggcagttgg cggggtaacg gcccaccaaa ccgacgatgg ataggggttc tgagaggaag

301 gtcccccaca ttggtactga gacacggacc aaactcctac gggaggcagc agtgaggaat

361 attggtcaat gggcgtaagc ctgaaccagc caagtcgcgt gagggatgaa ggttctatgg

421 atcgtaaacc tcttttataa gggaataaag tgcgggacgt gtcccgtttt gtatgtacct

481 tatgaataag gatcggctaa ctccgtgcca gcagccgcgg taatacggag gatccgagcg

541 ttatccggat ttattgggtt taaagggtgc gtaggcggcc ttttaagtca gcggtgaaag

601 tctgtggctc aaccatagaa ttgccgttga aactgggggg cttgagtatg tttgaggcag

661 gcggaatgcg tggtgtagcg gtgaaatgca tagatatcac gcagaacccc gattgcgaag

721 gcagcctgcc aagccattac tgacgctgat gcacgaaagc gtggggatca aacaggatta

781 gataccctgg tagtccacgc agtaaacgat gatcactagc tgtttgcgat acactgtaag

841 cggcacagcg aaagcgttaa gtgatccacc tggggagtac gccggcaacg gtgaaactca

901 aaggaattga cgggggcccg cacaagcgga ggaacatgtg gtttaattcg atgatacgcg

961 aggaacctta cccgggtttg aacgcattcg gaccgaggtg gaaacacctt ttctagcaat

1021 agccgtttgc gaggtgctgc atggttgtcg tcagctcgtg ccgtgaggtgtcggcttaag

1081 tgccataacg agcgcaaccc ttgccactag ttactaacag gttaggctgaggactctggt

1141 gggactgcca gcgtaagctg cgaggaaggc ggggatgacg tcaaatcagcacggccctta

1201 catccggggc gacacacgtg ttacaatggc gtggacaaag ggaggccacctggcgacagg

1261 gagcgaatcc ccaaaccacg tctcagttcg gatcggagtc tgcaacccgactccgtgaag

1321 ctggattcgc tagtaatcgc gcatcagcca tggcgcggtg aatacgttcccgggccttgt

1381 acacaccgcc cgtcaagcca tgggagccgg gggtacctga agtccgtaaccgaaaggatc

1441 ggcctagggt aaaactggtg actggggcta agtcgtaaca aggtaacc

SEQ ID NO:2(狄氏副拟杆菌基因，16S核糖体RNA，部分序列，菌株：JCM 13400-AB238923)

1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg

61 ggcagcacag gtagcaatac cgggtggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa

121 cttacctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg

181 ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag

241 gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt

301 cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat

361 tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat

421 cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg cgggacgtgt cctgttttgt atgtacctta

481 tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt

541 atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc

601 tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctggggggct tgagtatgtt tgaggcaggc

661 ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc

721 agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga

781 taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac agtgtaagcg

841 gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa

901 ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag

961 gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag

1021 ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtcggcttaagtg

1081 ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt aaagctgaggactctggtgg

1141 gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcacggcccttaca

1201 tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg aagccacctggcgacaggga

1261 gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgactccgtgaagct

1321 ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccgggccttgtac

1381 acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccgaaaggatcgg

1441 cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc

SEQ ID NO:3(狄氏副拟杆菌基因，16S核糖体RNA，部分序列，菌株：JCM 13401-AB238924)

1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg

61 ggcagcacag gtagcaatac ccgccggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa

121 cttgcctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg

181 ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag

241 gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt

301 cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat

361 tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat

421 cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg tgggacgtgt cctgttttgt atgtacctta

481 tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt

541 atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc

601 tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctgggaggct tgagtatgtt tgaggcaggc

661 ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc

721 agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga

781 taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac actgtaagcg

841 gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa

901 ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag

961 gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag

1021 ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtcggcttaagtg

1081 ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt gatgctgaggactctggtgg

1141 gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcacggcccttaca

1201 tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg atgccacctggcgacaggga

1261 gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgactccgtgaagct

1321 ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccgggccttgtac

1381 acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccgaaaggatcgg

1441 cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc

SEQ ID NO:4(狄氏副拟杆菌基因，16S核糖体RNA，部分序列，菌株：JCM 13402-AB238925)

1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg

61 ggcagcacag gtagcaatac cgggtggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa

121 cttacctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg

181 ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag

241 gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt

301 cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat

361 tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat

421 cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg cgggacgtgt cccgttttgt atgtacctta

481 tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt

541 atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc

601 tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctgggaggct tgagtatgtt tgaggcaggc

661 ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc

721 agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga

781 taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac actgtaagcg

841 gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa

901 ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag

961 gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag

1021 ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtcggcttaagtg

1081 ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt aaagctgaggactctggtgg

1141 gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcacggcccttaca

1201 tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg aggccacctggcgacaggga

1261 gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgactccgtgaagct

1321 ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccgggccttgtac

1381 acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccgaaaggatcgg

1441 cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc

SEQ ID NO:5(狄氏副拟杆菌基因，16S核糖体RNA，部分序列，菌株：JCM 13403-AB238926)

1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg

61 ggcagcacag gtagcaatac cgggtggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa

121 cttacctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg

181 ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag

241 gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt

301 cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat

361 tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat

421 cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg tgggacgtgt cccgttttgt atgtacctta

481 tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt

541 atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc

601 tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctgggaggct tgagtatgtt tgaggcaggc

661 ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc

721 agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga

781 taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac attgtaagcg

841 gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa

901 ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag

961 gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag

1021 ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtcggcttaagtg

1081 ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt aaagctgaggactctggtgg

1141 gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcacggcccttaca

1201 tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg aggccacctggcgacaggga

1261 gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgactccgtgaagct

1321 ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccgggccttgtac

1381 acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccgaaaggatcgg

1441 cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc

SEQ ID NO:6(狄氏副拟杆菌基因，16S核糖体RNA，部分序列，菌株：JCM 13404-AB238927)

1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg

61 ggcagcacag gtagcaatac cgggtggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa

121 cttacctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg

181 ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag

241 gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt

301 cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat

361 tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat

421 cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg tgggacgtgt cccgttttgt atgtacctta

481 tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt

541 atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc

601 tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctgggaggct tgagtatgtt tgaggcaggc

661 ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc

721 agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga

781 taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac attgtaagcg

841 gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa

901 ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag

961 gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag

1021 ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtcggcttaagtg

1081 ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt aaagctgaggactctggtgg

1141 gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcacggcccttaca

1201 tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg aggccacctggcgacaggga

1261 gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgactccgtgaagct

1321 ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccgggccttgtac

1381 acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccgaaaggatcgg

1441 cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc

SEQ ID NO:7(粪副拟杆菌基因，16S核糖体RNA，部分序列，菌株：JCM 9497-AB238928)

1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg

61 ggcagcatga tttgtagcaa tacagattga tggcgaccgg cgcacgggtg agtaacgcgt

121 atgcaactta cctatcagag ggggatagcc cggcgaaagt cggattaata ccccataaaa

181 caggggtccc gcatgggaat atttgttaaa gattcatcgc tgatagatag gcatgcgttc

241 cattaggcag ttggcggggt aacggcccac caaaccgacg atggataggg gttctgagag

301 gaaggtcccc cacattggta ctgagacacg gaccaaactc ctacgggagg cagcagtgag

361 gaatattggt caatggccga gaggctgaac cagccaagtc gcgtgaagga agaaggatct

421 atggtttgta aacttctttt ataggggaat aaagtggagg acgtgtcctt ttttgtatgt

481 accctatgaa taagcatcgg ctaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggaggatgcg

541 agcgttatcc ggatttattg ggtttaaagg gtgcgtaggt ggtgatttaa gtcagcggtg

601 aaagtttgtg gctcaaccat aaaattgccg ttgaaactgg gttacttgag tgtgtttgag

661 gtaggcggaa tgcgtggtgt agcggtgaaa tgcatagata tcacgcagaa ctccgattgc

721 gaaggcagct tactaaacca taactgacac tgaagcacga aagcgtgggg atcaaacagg

781 attagatacc ctggtagtcc acgcagtaaa cgatgattac taggagtttg cgatacaatg

841 taagctctac agcgaaagcg ttaagtaatc cacctgggga gtacgccggc aacggtgaaa

901 ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggaggaaca tgtggtttaa ttcgatgata

961 cgcgaggaac cttacccggg tttgaacgta gtctgaccgg agtggaaaca ctccttctag

1021 caatagcaga ttacgaggtg ctgcatggtt gtcgtcagct cgtgccgtgaggtgtcggct

1081 taagtgccat aacgagcgca acccttatca ctagttacta acaggtgaagctgaggactc

1141 tggtgagact gccagcgtaa gctgtgagga aggtggggat gacgtcaaatcagcacggcc

1201 cttacatccg gggcgacaca cgtgttacaa tggcatggac aaagggcagctacctggcga

1261 caggatgcta atctccaaac catgtctcag ttcggatcgg agtctgcaactcgactccgt

1321 gaagctggat tcgctagtaa tcgcgcatca gccatggcgc ggtgaatacgttcccgggcc

1381 ttgtacacac cgcccgtcaa gccatgggag ccgggggtac ctgaagtccgtaaccgcaag

1441 gatcggccta gggtaaaact ggtgactggg gctaagtcgt aacaaggtaa cc

SEQ ID NO:8(粪副拟杆菌基因，16S核糖体RNA，部分序列，菌株：JCM 13405-AB238929)

1 agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg

61 ggcagcatga tttgtagcaa tacagattga tggcgaccgg cgcacgggtg agtaacgcgt

121 atgcaactta cctatcagag ggggatagcc cggcgaaagt cggattaata ccccataaaa

181 caggggttcc gcatgggaat atttgttaaa gattcatcgc tgatagatag gcatgcgttc

241 cattaggcag ttggcggggt aacggcccac caaaccgacg atggataggg gttctgagag

301 gaaggtcccc cacattggta ctgagacacg gaccaaactc ctacgggagg cagcagtgag

361 gaatattggt caatggccga gaggctgaac cagccaagtc gcgtgaagga agaaggatct

421 atggtttgta aacttctttt ataggggaat aaagtggagg acgtgtcctt ttttgtatgt

481 accctatgaa taagcatcgg ctaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggaggatgcg

541 agcgttatcc ggatttattg ggtttaaagg gtgcgtaggt ggtgatttaa gtcagcggtg

601 aaagtttgtg gctcaaccat aaaattgccg ttgaaactgg gttacttgag tgtgtttgag

661 gtaggcggaa tgcgtggtgt agcggtgaaa tgcatagata tcacgcagaa ctccgattgc

721 gaaggcagct tactaaacca taactgacac tgaagcacga aagcgtgggg atcaaacagg

781 attagatacc ctggtagtcc acgcagtaaa cgatgattac taggagtttg cgatacaatg

841 taagctctac agcgaaagcg ttaagtaatc cacctgggga gtacgccggc aacggtgaaa

901 ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggaggaaca tgtggtttaa ttcgatgata

961 cgcgaggaac cttacccggg tttgaacgta gtctgaccgg agtggaaaca ctccttctag

1021 caatagcaga ttacgaggtg ctgcatggtt gtcgtcagct cgtgccgtgaggtgtcggct

1081 taagtgccat aacgagcgca acccttatca ctagttacta acaggtgaagctgaggactc

1141 tggtgagact gccagcgtaa gctgtgagga aggtggggat gacgtcaaatcagcacggcc

1201 cttacatccg gggcgacaca cgtgttacaa tggcatggac aaagggcagctacctggcga

1261 caggatgcta atctccaaac catgtctcag ttcggatcgg agtctgcaactcgactccgt

1321 gaagctggat tcgctagtaa tcgcgcatca gccatggcgc ggtgaatacgttcccgggcc

1381 ttgtacacac cgcccgtcaa gccatgggag ccgggggtac ctgaagtccgtaaccgcaag

1441 gatcggccta gggtaaaact ggtgactggg gctaagtcgt aacaaggtaa cc

SEQ ID NO:9(狄氏副拟杆菌菌株755/NCIMB 42382的共同16S rRNA基因序列)

AMCCGGGTGGCGACCGGCGCACGGGTGAGTAACGCGTATGCAACTTGCCTATCAGAGGGGGATAACCCGGCGAAAGTCGGACTAATACCGCATGAAGCAGGGATCCCGCATGGGAATATTTGCTAAAGATTCATCGCTGATAGATAGGCATGCGTTCCATTAGGCAGTTGGCGGGGTAACGGCCCACCAAACCGACGATGGATAGGGGTTCTGAGAGGAAGGTCCCCCACATTGGTACTGAGACACGGACCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGAGGAATATTGGTCAATGGGCGTGAGCCTGAACCAGCCAAGTCGCGTGAGGGATGAAGGTTCTATGGATCGTAAACCTCTTTTATAAGGGAATAAAGTGCGGGACGTGTCCCGTTTTGTATGTACCTTATGAATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTATCCGGATTTATTGGGTTTAAAGGGTGCGTAGGCGGCCTTTTAAGTCAGCGGTGAAAGTCTGTGGCTCAACCATAGAATTGCCGTTGAAACTGGGAGGCTTGAGTATGTTTGAGGCAGGCGGAATGCGTGGTGTAGCGGTGAAATGCATAGATATCACGCAGAACCCCGATTGCGAAGGCAGCCTGCCAAGCCATTACTGACGCTGATGCACGAAAGCGTGGGGATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCAGTAAACGATGATCACTAGCTGTTTGCGATACACTGTAAGCGGCACAGCGAAAGCGTTAAGTGATCCACCTGGGGAGTACGCCGGCAACGGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGGAACATGTGGTTTAATTCGATGATACGCGAGGAACCTTACCCGGGTTTGAACGCATTCGGACMGAKGTGGAAACACATTTTCTAGCAATAGCCATTTGCGAGGTGCTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGTCGGCTTAAGTGCCATAACGAGCGCAACCCTTGCCACTAGTTACTAACAGGTAAAGCTGAGGACTCTGGTGGGACTGCCAGCGTAAGCTGCGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAATCAGCACGGCCCTTACATCCGGGGCGACACACGTGTTACAATGGCGTGGACAAAGGGAAGCCACCTGGCGACAGGGAGCGAATCCCCAAACCACGTCTCAGTTCGGATCGGAGTCTGCAACCCGACTCCGTGAAGCTGGATTCGCTAGTAATCGCGCATCAGCCATGGCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGCCATGGGAGCCGGGGGTACCTGAAGTCCGTAACCGCGAGGATCGGCCTAGGGTAAAACTGGTGACTGGGGCTAAGTCGTACGGGG

SEQ ID NO:10(古氏副拟杆菌菌株DSMZ 19448/JCM13446，16S核糖体RNA基因，部分序列-GenBank:EU136697.1):

1 gtttgatcct ggctcaggat gaacgctagc gacaggctta acacatgcaa gtcgaggggc

61 agcacgatgt agcaatacat tggtggcgac cggcgcacgg gtgagtaacg cgtatgcaac

121 ctacctatca gaggggaata acccggcgaa agtcggacta ataccgcata aaacaggggt

181 tccacatgga aatatttgtt aaagaattat cgctgataga tgggcatgcg ttccattaga

241 tagttggtga ggtaacggct caccaagtcc acgatggata ggggttctga gaggaaggtc

301 ccccacactg gtactgagac acggaccaga ctcctacggg aggcagcagt gaggaatatt

361 ggtcaatggg cgagagcctg aaccagccaa gtcgcgtgaa ggatgaagga tctatggttt

421 gtaaacttct tttatatggg aataaagtga ggaacgtgtt cctttttgta tgtaccatat

481 gaataagcat cggctaactc cgtgccagca gccgcggtaa tacggaggat gcgagcgtta

541 tccggattta ttgggtttaa agggtgcgta ggtggttaat taagtcagcg gtgaaagttt

601 gtggctcaac cataaaattg ccgttgaaac tggttgactt gagtatattt gaggtaggcg

661 gaatgcgtgg tgtagcggtg aaatgcatag atatcacgca gaactccgat tgcgaaggca

721 gcttactaaa ctataactga cactgaagca cgaaagcgtg gggatcaaac aggattagat

781 accctggtag tccacgcagt aaacgatgat tactagctgt ttgcgataca cagtaagcgg

841 cacagcgaaa gcgttaagta atccacctgg ggagacgccg gcaacggtgaaactcaaagg

901 aattgacggg ggcccgcaca agcggaggaa catgtggttt aattcgatga tacgcgagga

961 accttacccg ggtttgaacg catattgaca gctctggaaa cagagtctct agtaatagca

1021 atttgcgagg tgctgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgccgt gaggtgtcggcttaagtgcc

1081 ataacgagcg caacccttat cactagttac taacaggtca tgctgaggactctagtgaga

1141 ctgccagcgt aagctgtgag gaaggtgggg atgacgtcaa atcagcacggcccttacatc

1201 cggggcgaca cacgtgttac aatggtgggg acaaagggca gctaccgtgtgagcggatgc

1261 gaatctccaa accccatctc agttcggatc gaagtctgca acccgacttcgtgaagctgg

1321 attcgctagt aatcgcgcat cagccatggc gcggtgaata cgttcccgggccttgtacac

1381 accacccgtc aagccatggg agttgggggt acctaaagtc cgtaaccgcaaggatcggcc

1441 tagggtaaaa ccgatgactg gggctaagtc gtaacaaggt agccgtaccggaaggtgcgg

1501 ctggaacacc tcctttctgg agcgcagagt tcgttatcaa gttgactcagaggtattagt

1561 taacttgtac tacggttgaa tatgtataaa atatagatct accggcaataaagtgtcggc

1621 aagagagaaa aatgatgctg agggaaacca aggcaaagtt gacagtcctatagctcagtt

1681 ggttagagcg ctacactgat aatgtagagg tcggcagttc aactctgcctgggactacag

1741 aatctctaag agagaatttt gggggattag ctcagctggc tagagcatctgccttgcacg

1801 cagagggtca acggttcgaa tccgttattc tccacaaaaa gttaccgagacatcagaaac

1861 gtaaagtaac gacaagatct ttgacatgat ggacaacgta aaataaagtaacaagagcaa

1921 gctgaagata tatcaatccg atttacccct gtggtaaccg gaaataagaaagtaagcaag

1981 ggcagacggt ggatgccttg gc

SEQ ID NO:11(古氏副拟杆菌菌株DSMZ29187/BS-C3-2 16S，核糖体RNA基因，部分序列-Genbank GQ456205.2):

1 ctggctcagg atgaacgcta gcgacaggct taacacatgc aagtcgaggg gcagcacgat

61 gtagcaatac attggtggcg accggcgcac gggtgagtaa cgcgtatgca acctacctat

121 cagaggggaa taacccggcg aaagtcggac taataccgca taaaacaggg gttccacatg

181 gaaatatttg ttaaagaatt atcgctgata gatgggcatg cgttccatta gatagttggt

241 gaggtaacgg ctcaccaagt ccacgatgga taggggttct gagaggaagg tcccccacac

301 tggtactgag acacggacca gactcctacg ggaggcagca gtgaggaata ttggtcaatg

361 ggcgagagcc tgaaccagcc aagtcgcgtg aaggatgaag gatctatggt ttgtaaactt

421 cttttatatg ggaataaagt gaggaaacgt gttccttttt gtatgtacca tatgaataag

481 catcggctaa cttccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga ggatgcgagc gttatccgga

541 tttattgggt ttaaagggtg cgtaggtggt taattaagtc agcggtgaaa gtttgtggct

601 caaccataaa attgccgttg aaactggttg acttgagtat atttgaggta ggcggaatgc

661 gtggtgtagc ggtgaaatgc atagatatca cgcagaactc cgattgcgaa ggcagcttac

721 taaactataa ctgacactga agcacgaaag cgtggggatc aaacaggatt agataccctg

781 gtagtccacg cagtaaacga tgattactag ctgtttgcga tacacagtaa gcggcacagc

841 gaaagcgtta agtaatccac ctggggagta cgccggcaac ggtgaaactc aaaggaattg

901 acgggggccc gcacaagcgg aggaacatgt ggtttaattc gatgatacgc gaggaacctt

961 acccgggttt gaacgcattc ggaccggagt ggaaacactt cttctagtaa tagccgtttg

1021 cgaggtgctg catggttgtc gtcagctcgt gccgtgaggt gtcggcttaagtgccataac

1081 gagcgcaacc cttatcacta gttactaaca ggtcaagctg aggactctagtgagactgcc

1141 agcgtaagct gtgaggaagg tggggatgac gtcaaatcag cacggcccttacatccgggg

1201 cgacacacgt gttacaatgg tggggacaaa gggcagctac ctggcgacaggatgctaatc

1261 tccaaacctc atctcagttc ggatcgaagt ctgcaacccg acttcgtgaagctggattcg

1321 ctagtaatcg cgcatcagcc atggcgcggt gaatacgttc ccgggccttgtacacaccgc

1381 ccgtcaagcc atgggagttg ggggtaccta aagtccgtaa ccgcaagg

SEQ ID NO:12:菌株参考1(狄氏副拟杆菌)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

AAGGCCGATCCTTGTCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCACCAGGTGGCCTCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCTTTACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAACGGCTATTGCTAGAAAAGGTGTTTCCACCTCGGTCCGAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACAGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTCATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACAAAACGGGACACGTCCCGCACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGCCTCTCGGCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGGCCCCTGCTTCATGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGTAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCACCCGGTATTGCTACCTGTGCTGCCGCCTCGACTGCA

SEQ ID NO:13:菌株参考2(狄氏副拟杆菌)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

AGGCCGATCCTTGTCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCCAGGTGGCATCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCTTTACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAATCGCTATTGCTAGAGGCTGTGTTTCCACAGCGGTCCAAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACCGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTCATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTSTGCGTGATATCTAAGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACAAAACGGGACACGTCCCGCACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGGCTTACGCCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGACCCCTGCTTCATGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGTAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCACCCGGTATTGCTACCTGTGCTGCCCCTCGACTTGCATGTGTAA

SEQ ID NO:14:菌株参考3(副拟杆菌属种)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

GGGCCCAATTTAACTAGGCCGATCCTTGCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGAGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACATGGTTTGGAGATTTGCATCACATCGCTGTGTAGCTGCCCTTTGTCCATGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCACAGCTTACGCTGGCAGTCTCACCAGAGTCCTCAGCTTGACCTGTTAGTAACTAGTGATAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACYTCGCAAACGGTCATTGCTGAAAGGAGCGTTTCCACTCCGGTCCGAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATTACTTAACGCTTTCGCTGTAGAGCTTACTGTCTATCGCAAACTCCTAGTAATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCTTCAGTGTCAGTTATAGTTTAGTAAGCTGCCTTCGCAATCGGAGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTACCTCAAATATACTCAAGTCATCCAGTTTCAACGGCAATTTTATGGTTGAGCCACAAACTTTCACCGCTGACTTAAACAACCACCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGCATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATGCTTATTCATACGGTACATACAAAATGGGACACGTCCCACACTTTATTCCCSKATAAAAGAAGTTTACAAACCATAGATCCTTCATCCTTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGCCTCCCGGCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGARTTTGGACCGTGTCTCAGTTCCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAACAAATATTCCCATGCGGGACCCCTGTTTTATGGAGCATTAATCCGACTTTCGCCGGGCTATTCCCCTCTGATAGGCAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCGGCAGGCATTGCTGCCCCCGCTGCCCCTCGACTTGCATGGTTAGCCTCCAATTCCCC

SEQ ID NO:15:菌株参考4(狄氏副拟杆菌)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

TAGGCCGATCCTTGCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGAGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACATGGTTTGGAGATTTGCATCACATCGCTGTGTAGCTGCCCTTTGTCCATGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCACAGCTTACGCTGGCAGTCTCACCAGAGTCCTCAGCTTGACCTGTTAGTAACTAGTGATAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAACGGTCATTGCTGAAAGGAGCGTTTCCACTCCGGTCCGAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCYGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATTACTTAACGCTTTCGCTGTAGAGCTTACTGTCTATCGCAMACTCCTAGTAATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCTTCAGTGTCAGTTATAGTTTAGTAAGCTGCCTTCGCAATCGGAGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTACCTCAAATATACTCAAGTCATCCAGTTTCAACGGCAATTTTATGGTTGAGCCACAAACTTTCACCGCTGACTTAAACAACCACCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGCATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATGCTTATTCATACGGTACATACAAAATGGGACACGTCCCACACTTTATTCCCGTATAAAAGAAGTTTACAAACCATAGATCCTTCATCCTTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGCCTCCCGGCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGACCGTGTCTCAGTTCCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAACAAATATTCCCATGCGGGACCCCTGTTTTATGGAGCATTAATCCGACTTTCGCCGGGCTATTCCCCTCTGATAGGCAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCGGCAGGCATTGCTGCCCCCGCTGCCCCTCGACTTGCATGTGTT

SEQ ID NO:16:菌株参考5(狄氏副拟杆菌)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

GTAGGCCGATCCTCGCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCCAGGTGGCTTCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCYTWACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAACGGCTATTGCTAGAAAAGGTGTTTCCACCTCGGTCCGAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACACTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTCATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACAAAACGGGACACGTCCTACACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGGCTTACGCCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCMTATMTATCAGCGATGWATCTTKMGCAAATATCCCCRTGCGGGGCCCGTGCTTCRTGCGGTATTAGTCMGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGYAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCRGCCGCGGTATCTGCTACCCCGCGCTGCCCCTCGACTTGCATGGT

SEQ ID NO:17:菌株参考6(狄氏副拟杆菌)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

GATCCTCGCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCCAGGTGGCCTCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCATCACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAACGGCTATTGCTAGAAAAGGTGTTTCCACCTCGGTCCGAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACAGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTCATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACAAAACGGGACACGTCCCGCACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGCCTTTCGGCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGGCCCCTGCTTCATGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGTAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCACCCGGTATTGC

SEQ ID NO:18:菌株参考7(粪副拟杆菌)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

TTAAATAGGCCGATCCTTGCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGAGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACATGGTTTGGAGATTAGCATCCTGTCACCAGGTAGCTGCCCTTTGTCCATGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCACAGCTTACGCTGGCAGTCTCACCAGAGTCCTCAGCTTCACCTGTTAGTAACTAGTGATAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGTAATCTGCTATTGCTAGAAAGAGTGTTTCCACTCCGGTCAGACTACGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATTACTTAACGCTTTCGCTGTAGAGCTTACATTGTATCGCAAACTCCTAGTAATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCTTCAGTGTCAGTTATGGTTTAGTAAGCTGCCTTCGCAATCGGAGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTACCTCAAACACACTCAAGTAACCCAGTTTCAACGGCAATTTTATGGTTGAGCCACAAACTTTCACCGCTGACTTAAATCACCACCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGCATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATGCTTATTCATAGGGTACATACAAAAAAGGACACGTCCTCCACTTTATTCCCCTATAAAAGAAGTTTACAAACCATAGATCCTTCTTCCTTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGCCTCTCGGCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAACAAATATTCCCATGCGGGACCCCTGTTTTATGGGGTATTAATCCGACTTTCGCCGGGCTATCCCCCTCTGATAGGTAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCATCAATCTGTATTGCTACAAATCATGCTGCCCCTCGACTTGCATGGTTAAG

SEQ ID NO:19菌株参考9(狄氏副拟杆菌)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

GATCTCGCGGTTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCCAGGTGGCCTCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCATCACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAACGGCTATTGCTAGAAAAGGTGTTTCCACCTCGGTCCGAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACAGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTCATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACAAAACGGGACACGTCCCGCACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGCCTTTCGGCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGGCCCCTGCTTCATGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGTAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCACCCGGTATTGCTACCTGGTGCTGCCCCCTCGACTGC

SEQ ID NO:20菌株参考11(副拟杆菌属种)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

CCGATCCTTTCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCCAGGTGGCCTCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCATCACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAATCGCTATCGCTAGAGACTCTGTTTCCAGAGCTGTCGAAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACAGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTAATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCYGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACMAAACGGGACACGTCCCGCACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGSCTCTCGCCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCMWGCCKATYTATCAGCGAWGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGGCCCCTGCTTCMTGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGCAAGTWGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCACCCGGTATTGCTACCCTGYGCTGCCCCTCGACTTGCATGKTAA

SEQ ID NO:21菌株参考12(副拟杆菌属种)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

GCGCGGTTTAACTAGGCCGATCCTTTCGGTTACGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCCAGGTGGCCTCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCATCACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAATCGCTATCGCTAGAGACTCTGTTTCCAGAGCTGTCGAAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGNCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTAYTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACAGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTAATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCANTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACAAAACGGGACACGTCCCGCACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGCCTTTCGGCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATTGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGGCCCCTGCTTCATGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGCAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCGAGCCGCGGTATTGCTACCCTCGTGCTGCCCCTCGACTTGCATGGTTAGCCTCCATCCC

SEQ ID NO:22菌株参考14(副拟杆菌属种)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

CTTAGGCCGATCCCTCGCGGTTCGGACTTCAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCCAGGTGGCCTCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCATCACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAACGGCTATTGCTAGAAAAGGTGTTTCCACCTCGGTCCGAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACAGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTCATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGGGGTTCTGCGTGATATCTATGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACAAAACGGGACACGTCCCGCACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGCCTTTCGGCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCCTAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGGCCCCTGCTTCATGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGTAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCACCCGGTATTGCTACCTGGTGCTGCCCCTCGACTGCAT

SEQ ID NO:23菌株参考15(副拟杆菌属种)16S核糖体RNA基因，使用Geneious组装：

GCGAGGTATCGAGACTACTAGGTACCCCCGGCTCCCATGGCTTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGCCATGGCTGATGCGCGATTACTAGCGAATCCAGCTTCACGGAGTCGGGTTGCAGACTCCGATCCGAACTGAGACGTGGTTTGGGGATTCGCTCCCTGTCGCCAGGTGGCATCCCTTTGTCCACGCCATTGTAACACGTGTGTCGCCCCGGATGTAAGGGCCGTGCTGATTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCGCAGCTTACGCTGGCAGTCCCACCAGAGTCCTCAGCTTTACCTGTTAGTAACTAGTGGCAAGGGTTGCGCTCGTTATGGCACTTAAGCCGACACCTCACGGCACGAGCTGACGACAACCATGCAGCACCTCGCAAATCGCTATTGCTAGAGGCTCTGTTTCCACATCGGTCCAAATGCGTTCAAACCCGGGTAAGGTTCCTCGCGTATCATCGAATTAAACCACATGTTCCTCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCACCGTTGCCGGCGTACTCCCCAGGTGGATCACTTAACGCTTTCGCTGTGCCGCTTACCGTGTATCGCAAACAGCTAGTGATCATCGTTTACTGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGATCCCCACGCTTTCGTGCATCAGCGTCAGTCATGGCTTGGCAGGCTGCCTTCGCAATCGAGGTTCTGCGTGATATCTAAGCATTTCACCGCTACACCACGCATTCCGCCTGCCTCAAACATACTCAAGCCCCCCAGTTTCAACGGCAATTCTATGGTTGAGCCACAGACTTTCACCGCTGACTTAAAAGGCCGCCTACGCACCCTTTAAACCCAATAAATCCGGATAACGCTCGGATCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGATCCTTATTCATAAGGTACATACAAAACRGGACACGTCCCGCACTTTATTCCCTTATAAAAGAGGTTTACGATCCATAGAACCTTCATCCCTCACGCGACTTGGCTGGTTCAGGCTTACGCCCATTGACCAATATTCCTCACTGCTGCCTCCCGTTGGAGTTTGGTCCGTGTCTCAGTACCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTCGGTTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTGCATAATGGAACGCATGCCTATCTATCAGCGATGAATCTTTAGCAAATATCCCCATGCGGGACCCCTGCTTCATGCGGTATTAGTCCGACTTTCGCCGGGTTATCCCCCTCTGATAGGTAAGTTGCATACGCGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCACCCGGTATTGCTACGGGTGA

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序列表

<110> 4D制药研究有限公司(4D PHARMA RESEARCH LIMITED)

<120> 包含细菌菌株的组合物

<130> P074289WO

<160> 23

<170> SeqWin2010, version 1.0

<210> 1

<211> 1488

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 1

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcgggg tgtagcaata caccgccggc gaccggcgca cgggtgagta acgcgtatgc 120

aacttgccta tcagaggggg ataacccggc gaaagtcgga ctaataccgc atgaagcagg 180

gatcccgcat gggaatattt gctaaagatt catcgctgat agataggcat gcgttccatt 240

aggcagttgg cggggtaacg gcccaccaaa ccgacgatgg ataggggttc tgagaggaag 300

gtcccccaca ttggtactga gacacggacc aaactcctac gggaggcagc agtgaggaat 360

attggtcaat gggcgtaagc ctgaaccagc caagtcgcgt gagggatgaa ggttctatgg 420

atcgtaaacc tcttttataa gggaataaag tgcgggacgt gtcccgtttt gtatgtacct 480

tatgaataag gatcggctaa ctccgtgcca gcagccgcgg taatacggag gatccgagcg 540

ttatccggat ttattgggtt taaagggtgc gtaggcggcc ttttaagtca gcggtgaaag 600

tctgtggctc aaccatagaa ttgccgttga aactgggggg cttgagtatg tttgaggcag 660

gcggaatgcg tggtgtagcg gtgaaatgca tagatatcac gcagaacccc gattgcgaag 720

gcagcctgcc aagccattac tgacgctgat gcacgaaagc gtggggatca aacaggatta 780

gataccctgg tagtccacgc agtaaacgat gatcactagc tgtttgcgat acactgtaag 840

cggcacagcg aaagcgttaa gtgatccacc tggggagtac gccggcaacg gtgaaactca 900

aaggaattga cgggggcccg cacaagcgga ggaacatgtg gtttaattcg atgatacgcg 960

aggaacctta cccgggtttg aacgcattcg gaccgaggtg gaaacacctt ttctagcaat 1020

agccgtttgc gaggtgctgc atggttgtcg tcagctcgtg ccgtgaggtg tcggcttaag 1080

tgccataacg agcgcaaccc ttgccactag ttactaacag gttaggctga ggactctggt 1140

gggactgcca gcgtaagctg cgaggaaggc ggggatgacg tcaaatcagc acggccctta 1200

catccggggc gacacacgtg ttacaatggc gtggacaaag ggaggccacc tggcgacagg 1260

gagcgaatcc ccaaaccacg tctcagttcg gatcggagtc tgcaacccga ctccgtgaag 1320

ctggattcgc tagtaatcgc gcatcagcca tggcgcggtg aatacgttcc cgggccttgt 1380

acacaccgcc cgtcaagcca tgggagccgg gggtacctga agtccgtaac cgaaaggatc 1440

ggcctagggt aaaactggtg actggggcta agtcgtaaca aggtaacc 1488

<210> 2

<211> 1486

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 2

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcacag gtagcaatac cgggtggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa 120

cttacctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg 180

ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag 240

gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt 300

cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat 360

tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat 420

cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg cgggacgtgt cctgttttgt atgtacctta 480

tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt 540

atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc 600

tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctggggggct tgagtatgtt tgaggcaggc 660

ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc 720

agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga 780

taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac agtgtaagcg 840

gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa 900

ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag 960

gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag 1020

ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtc ggcttaagtg 1080

ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt aaagctgagg actctggtgg 1140

gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcac ggcccttaca 1200

tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg aagccacctg gcgacaggga 1260

gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgact ccgtgaagct 1320

ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac 1380

acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccg aaaggatcgg 1440

cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc 1486

<210> 3

<211> 1486

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 3

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcacag gtagcaatac ccgccggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa 120

cttgcctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg 180

ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag 240

gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt 300

cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat 360

tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat 420

cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg tgggacgtgt cctgttttgt atgtacctta 480

tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt 540

atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc 600

tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctgggaggct tgagtatgtt tgaggcaggc 660

ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc 720

agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga 780

taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac actgtaagcg 840

gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa 900

ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag 960

gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag 1020

ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtc ggcttaagtg 1080

ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt gatgctgagg actctggtgg 1140

gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcac ggcccttaca 1200

tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg atgccacctg gcgacaggga 1260

gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgact ccgtgaagct 1320

ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac 1380

acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccg aaaggatcgg 1440

cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc 1486

<210> 4

<211> 1486

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 4

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcacag gtagcaatac cgggtggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa 120

cttacctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg 180

ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag 240

gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt 300

cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat 360

tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat 420

cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg cgggacgtgt cccgttttgt atgtacctta 480

tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt 540

atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc 600

tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctgggaggct tgagtatgtt tgaggcaggc 660

ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc 720

agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga 780

taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac actgtaagcg 840

gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa 900

ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag 960

gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag 1020

ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtc ggcttaagtg 1080

ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt aaagctgagg actctggtgg 1140

gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcac ggcccttaca 1200

tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg aggccacctg gcgacaggga 1260

gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgact ccgtgaagct 1320

ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac 1380

acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccg aaaggatcgg 1440

cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc 1486

<210> 5

<211> 1486

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 5

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcacag gtagcaatac cgggtggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa 120

cttacctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg 180

ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag 240

gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt 300

cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat 360

tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat 420

cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg tgggacgtgt cccgttttgt atgtacctta 480

tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt 540

atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc 600

tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctgggaggct tgagtatgtt tgaggcaggc 660

ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc 720

agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga 780

taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac attgtaagcg 840

gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa 900

ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag 960

gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag 1020

ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtc ggcttaagtg 1080

ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt aaagctgagg actctggtgg 1140

gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcac ggcccttaca 1200

tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg aggccacctg gcgacaggga 1260

gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgact ccgtgaagct 1320

ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac 1380

acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccg aaaggatcgg 1440

cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc 1486

<210> 6

<211> 1486

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 6

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcacag gtagcaatac cgggtggcga ccggcgcacg ggtgagtaac gcgtatgcaa 120

cttacctatc agagggggat aacccggcga aagtcggact aataccgcat gaagcagggg 180

ccccgcatgg ggatatttgc taaagattca tcgctgatag ataggcatgc gttccattag 240

gcagttggcg gggtaacggc ccaccaaacc gacgatggat aggggttctg agaggaaggt 300

cccccacatt ggtactgaga cacggaccaa actcctacgg gaggcagcag tgaggaatat 360

tggtcaatgg gcgtaagcct gaaccagcca agtcgcgtga gggatgaagg ttctatggat 420

cgtaaacctc ttttataagg gaataaagtg tgggacgtgt cccgttttgt atgtacctta 480

tgaataagga tcggctaact ccgtgccagc agccgcggta atacggagga tccgagcgtt 540

atccggattt attgggttta aagggtgcgt aggcggcctt ttaagtcagc ggtgaaagtc 600

tgtggctcaa ccatagaatt gccgttgaaa ctgggaggct tgagtatgtt tgaggcaggc 660

ggaatgcgtg gtgtagcggt gaaatgctta gatatcacgc agaaccccga ttgcgaaggc 720

agcctgccaa gccatgactg acgctgatgc acgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga 780

taccctggta gtccacgcag taaacgatga tcactagctg tttgcgatac attgtaagcg 840

gcacagcgaa agcgttaagt gatccacctg gggagtacgc cggcaacggt gaaactcaaa 900

ggaattgacg ggggcccgca caagcggagg aacatgtggt ttaattcgat gatacgcgag 960

gaaccttacc cgggtttgaa cgcattcgga ccgaggtgga aacacctttt ctagcaatag 1020

ccgtttgcga ggtgctgcat ggttgtcgtc agctcgtgcc gtgaggtgtc ggcttaagtg 1080

ccataacgag cgcaaccctt gccactagtt actaacaggt aaagctgagg actctggtgg 1140

gactgccagc gtaagctgcg aggaaggcgg ggatgacgtc aaatcagcac ggcccttaca 1200

tccggggcga cacacgtgtt acaatggcgt ggacaaaggg aggccacctg gcgacaggga 1260

gcgaatcccc aaaccacgtc tcagttcgga tcggagtctg caacccgact ccgtgaagct 1320

ggattcgcta gtaatcgcgc atcagccatg gcgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac 1380

acaccgcccg tcaagccatg ggagccgggg gtacctgaag tccgtaaccg aaaggatcgg 1440

cctagggtaa aactggtgac tggggctaag tcgtaacaag gtaacc 1486

<210> 7

<211> 1492

<212> DNA

<213> 粪副拟杆菌(Parabacteroides merdae)

<400> 7

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcatga tttgtagcaa tacagattga tggcgaccgg cgcacgggtg agtaacgcgt 120

atgcaactta cctatcagag ggggatagcc cggcgaaagt cggattaata ccccataaaa 180

caggggtccc gcatgggaat atttgttaaa gattcatcgc tgatagatag gcatgcgttc 240

cattaggcag ttggcggggt aacggcccac caaaccgacg atggataggg gttctgagag 300

gaaggtcccc cacattggta ctgagacacg gaccaaactc ctacgggagg cagcagtgag 360

gaatattggt caatggccga gaggctgaac cagccaagtc gcgtgaagga agaaggatct 420

atggtttgta aacttctttt ataggggaat aaagtggagg acgtgtcctt ttttgtatgt 480

accctatgaa taagcatcgg ctaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggaggatgcg 540

agcgttatcc ggatttattg ggtttaaagg gtgcgtaggt ggtgatttaa gtcagcggtg 600

aaagtttgtg gctcaaccat aaaattgccg ttgaaactgg gttacttgag tgtgtttgag 660

gtaggcggaa tgcgtggtgt agcggtgaaa tgcatagata tcacgcagaa ctccgattgc 720

gaaggcagct tactaaacca taactgacac tgaagcacga aagcgtgggg atcaaacagg 780

attagatacc ctggtagtcc acgcagtaaa cgatgattac taggagtttg cgatacaatg 840

taagctctac agcgaaagcg ttaagtaatc cacctgggga gtacgccggc aacggtgaaa 900

ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggaggaaca tgtggtttaa ttcgatgata 960

cgcgaggaac cttacccggg tttgaacgta gtctgaccgg agtggaaaca ctccttctag 1020

caatagcaga ttacgaggtg ctgcatggtt gtcgtcagct cgtgccgtga ggtgtcggct 1080

taagtgccat aacgagcgca acccttatca ctagttacta acaggtgaag ctgaggactc 1140

tggtgagact gccagcgtaa gctgtgagga aggtggggat gacgtcaaat cagcacggcc 1200

cttacatccg gggcgacaca cgtgttacaa tggcatggac aaagggcagc tacctggcga 1260

caggatgcta atctccaaac catgtctcag ttcggatcgg agtctgcaac tcgactccgt 1320

gaagctggat tcgctagtaa tcgcgcatca gccatggcgc ggtgaatacg ttcccgggcc 1380

ttgtacacac cgcccgtcaa gccatgggag ccgggggtac ctgaagtccg taaccgcaag 1440

gatcggccta gggtaaaact ggtgactggg gctaagtcgt aacaaggtaa cc 1492

<210> 8

<211> 1492

<212> DNA

<213> 粪副拟杆菌(Parabacteroides merdae)

<400> 8

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcgacaggc ttaacacatg caagtcgagg 60

ggcagcatga tttgtagcaa tacagattga tggcgaccgg cgcacgggtg agtaacgcgt 120

atgcaactta cctatcagag ggggatagcc cggcgaaagt cggattaata ccccataaaa 180

caggggttcc gcatgggaat atttgttaaa gattcatcgc tgatagatag gcatgcgttc 240

cattaggcag ttggcggggt aacggcccac caaaccgacg atggataggg gttctgagag 300

gaaggtcccc cacattggta ctgagacacg gaccaaactc ctacgggagg cagcagtgag 360

gaatattggt caatggccga gaggctgaac cagccaagtc gcgtgaagga agaaggatct 420

atggtttgta aacttctttt ataggggaat aaagtggagg acgtgtcctt ttttgtatgt 480

accctatgaa taagcatcgg ctaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggaggatgcg 540

agcgttatcc ggatttattg ggtttaaagg gtgcgtaggt ggtgatttaa gtcagcggtg 600

aaagtttgtg gctcaaccat aaaattgccg ttgaaactgg gttacttgag tgtgtttgag 660

gtaggcggaa tgcgtggtgt agcggtgaaa tgcatagata tcacgcagaa ctccgattgc 720

gaaggcagct tactaaacca taactgacac tgaagcacga aagcgtgggg atcaaacagg 780

attagatacc ctggtagtcc acgcagtaaa cgatgattac taggagtttg cgatacaatg 840

taagctctac agcgaaagcg ttaagtaatc cacctgggga gtacgccggc aacggtgaaa 900

ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggaggaaca tgtggtttaa ttcgatgata 960

cgcgaggaac cttacccggg tttgaacgta gtctgaccgg agtggaaaca ctccttctag 1020

caatagcaga ttacgaggtg ctgcatggtt gtcgtcagct cgtgccgtga ggtgtcggct 1080

taagtgccat aacgagcgca acccttatca ctagttacta acaggtgaag ctgaggactc 1140

tggtgagact gccagcgtaa gctgtgagga aggtggggat gacgtcaaat cagcacggcc 1200

cttacatccg gggcgacaca cgtgttacaa tggcatggac aaagggcagc tacctggcga 1260

caggatgcta atctccaaac catgtctcag ttcggatcgg agtctgcaac tcgactccgt 1320

gaagctggat tcgctagtaa tcgcgcatca gccatggcgc ggtgaatacg ttcccgggcc 1380

ttgtacacac cgcccgtcaa gccatgggag ccgggggtac ctgaagtccg taaccgcaag 1440

gatcggccta gggtaaaact ggtgactggg gctaagtcgt aacaaggtaa cc 1492

<210> 9

<211> 1403

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌菌株755/NCIMB 42382 (Parabacteroides distasonis strain755/NCIMB 42382)

<400> 9

amccgggtgg cgaccggcgc acgggtgagt aacgcgtatg caacttgcct atcagagggg 60

gataacccgg cgaaagtcgg actaataccg catgaagcag ggatcccgca tgggaatatt 120

tgctaaagat tcatcgctga tagataggca tgcgttccat taggcagttg gcggggtaac 180

ggcccaccaa accgacgatg gataggggtt ctgagaggaa ggtcccccac attggtactg 240

agacacggac caaactccta cgggaggcag cagtgaggaa tattggtcaa tgggcgtgag 300

cctgaaccag ccaagtcgcg tgagggatga aggttctatg gatcgtaaac ctcttttata 360

agggaataaa gtgcgggacg tgtcccgttt tgtatgtacc ttatgaataa ggatcggcta 420

actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga ggatccgagc gttatccgga tttattgggt 480

ttaaagggtg cgtaggcggc cttttaagtc agcggtgaaa gtctgtggct caaccataga 540

attgccgttg aaactgggag gcttgagtat gtttgaggca ggcggaatgc gtggtgtagc 600

ggtgaaatgc atagatatca cgcagaaccc cgattgcgaa ggcagcctgc caagccatta 660

ctgacgctga tgcacgaaag cgtggggatc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg 720

cagtaaacga tgatcactag ctgtttgcga tacactgtaa gcggcacagc gaaagcgtta 780

agtgatccac ctggggagta cgccggcaac ggtgaaactc aaaggaattg acgggggccc 840

gcacaagcgg aggaacatgt ggtttaattc gatgatacgc gaggaacctt acccgggttt 900

gaacgcattc ggacmgakgt ggaaacacat tttctagcaa tagccatttg cgaggtgctg 960

catggttgtc gtcagctcgt gccgtgaggt gtcggcttaa gtgccataac gagcgcaacc 1020

cttgccacta gttactaaca ggtaaagctg aggactctgg tgggactgcc agcgtaagct 1080

gcgaggaagg cggggatgac gtcaaatcag cacggccctt acatccgggg cgacacacgt 1140

gttacaatgg cgtggacaaa gggaagccac ctggcgacag ggagcgaatc cccaaaccac 1200

gtctcagttc ggatcggagt ctgcaacccg actccgtgaa gctggattcg ctagtaatcg 1260

cgcatcagcc atggcgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcaagcc 1320

atgggagccg ggggtacctg aagtccgtaa ccgcgaggat cggcctaggg taaaactggt 1380

gactggggct aagtcgtacg ggg 1403

<210> 10

<211> 2002

<212> DNA

<213> 古氏副拟杆菌菌株DSMZ 19448 / JCM13446 (Parabacteroides goldsteiniistrain DSMZ 19448 / JCM13446)

<400> 10

gtttgatcct ggctcaggat gaacgctagc gacaggctta acacatgcaa gtcgaggggc 60

agcacgatgt agcaatacat tggtggcgac cggcgcacgg gtgagtaacg cgtatgcaac 120

ctacctatca gaggggaata acccggcgaa agtcggacta ataccgcata aaacaggggt 180

tccacatgga aatatttgtt aaagaattat cgctgataga tgggcatgcg ttccattaga 240

tagttggtga ggtaacggct caccaagtcc acgatggata ggggttctga gaggaaggtc 300

ccccacactg gtactgagac acggaccaga ctcctacggg aggcagcagt gaggaatatt 360

ggtcaatggg cgagagcctg aaccagccaa gtcgcgtgaa ggatgaagga tctatggttt 420

gtaaacttct tttatatggg aataaagtga ggaacgtgtt cctttttgta tgtaccatat 480

gaataagcat cggctaactc cgtgccagca gccgcggtaa tacggaggat gcgagcgtta 540

tccggattta ttgggtttaa agggtgcgta ggtggttaat taagtcagcg gtgaaagttt 600

gtggctcaac cataaaattg ccgttgaaac tggttgactt gagtatattt gaggtaggcg 660

gaatgcgtgg tgtagcggtg aaatgcatag atatcacgca gaactccgat tgcgaaggca 720

gcttactaaa ctataactga cactgaagca cgaaagcgtg gggatcaaac aggattagat 780

accctggtag tccacgcagt aaacgatgat tactagctgt ttgcgataca cagtaagcgg 840

cacagcgaaa gcgttaagta atccacctgg ggagacgccg gcaacggtga aactcaaagg 900

aattgacggg ggcccgcaca agcggaggaa catgtggttt aattcgatga tacgcgagga 960

accttacccg ggtttgaacg catattgaca gctctggaaa cagagtctct agtaatagca 1020

atttgcgagg tgctgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgccgt gaggtgtcgg cttaagtgcc 1080

ataacgagcg caacccttat cactagttac taacaggtca tgctgaggac tctagtgaga 1140

ctgccagcgt aagctgtgag gaaggtgggg atgacgtcaa atcagcacgg cccttacatc 1200

cggggcgaca cacgtgttac aatggtgggg acaaagggca gctaccgtgt gagcggatgc 1260

gaatctccaa accccatctc agttcggatc gaagtctgca acccgacttc gtgaagctgg 1320

attcgctagt aatcgcgcat cagccatggc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac 1380

accacccgtc aagccatggg agttgggggt acctaaagtc cgtaaccgca aggatcggcc 1440

tagggtaaaa ccgatgactg gggctaagtc gtaacaaggt agccgtaccg gaaggtgcgg 1500

ctggaacacc tcctttctgg agcgcagagt tcgttatcaa gttgactcag aggtattagt 1560

taacttgtac tacggttgaa tatgtataaa atatagatct accggcaata aagtgtcggc 1620

aagagagaaa aatgatgctg agggaaacca aggcaaagtt gacagtccta tagctcagtt 1680

ggttagagcg ctacactgat aatgtagagg tcggcagttc aactctgcct gggactacag 1740

aatctctaag agagaatttt gggggattag ctcagctggc tagagcatct gccttgcacg 1800

cagagggtca acggttcgaa tccgttattc tccacaaaaa gttaccgaga catcagaaac 1860

gtaaagtaac gacaagatct ttgacatgat ggacaacgta aaataaagta acaagagcaa 1920

gctgaagata tatcaatccg atttacccct gtggtaaccg gaaataagaa agtaagcaag 1980

ggcagacggt ggatgccttg gc 2002

<210> 11

<211> 1428

<212> DNA

<213> 古氏副拟杆菌菌株DSMZ29187 / BS-C3-2 16S (Parabacteroidesgoldsteinii strain DSMZ29187 / BS-C3-2 16S)

<400> 11

ctggctcagg atgaacgcta gcgacaggct taacacatgc aagtcgaggg gcagcacgat 60

gtagcaatac attggtggcg accggcgcac gggtgagtaa cgcgtatgca acctacctat 120

cagaggggaa taacccggcg aaagtcggac taataccgca taaaacaggg gttccacatg 180

gaaatatttg ttaaagaatt atcgctgata gatgggcatg cgttccatta gatagttggt 240

gaggtaacgg ctcaccaagt ccacgatgga taggggttct gagaggaagg tcccccacac 300

tggtactgag acacggacca gactcctacg ggaggcagca gtgaggaata ttggtcaatg 360

ggcgagagcc tgaaccagcc aagtcgcgtg aaggatgaag gatctatggt ttgtaaactt 420

cttttatatg ggaataaagt gaggaaacgt gttccttttt gtatgtacca tatgaataag 480

catcggctaa cttccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga ggatgcgagc gttatccgga 540

tttattgggt ttaaagggtg cgtaggtggt taattaagtc agcggtgaaa gtttgtggct 600

caaccataaa attgccgttg aaactggttg acttgagtat atttgaggta ggcggaatgc 660

gtggtgtagc ggtgaaatgc atagatatca cgcagaactc cgattgcgaa ggcagcttac 720

taaactataa ctgacactga agcacgaaag cgtggggatc aaacaggatt agataccctg 780

gtagtccacg cagtaaacga tgattactag ctgtttgcga tacacagtaa gcggcacagc 840

gaaagcgtta agtaatccac ctggggagta cgccggcaac ggtgaaactc aaaggaattg 900

acgggggccc gcacaagcgg aggaacatgt ggtttaattc gatgatacgc gaggaacctt 960

acccgggttt gaacgcattc ggaccggagt ggaaacactt cttctagtaa tagccgtttg 1020

cgaggtgctg catggttgtc gtcagctcgt gccgtgaggt gtcggcttaa gtgccataac 1080

gagcgcaacc cttatcacta gttactaaca ggtcaagctg aggactctag tgagactgcc 1140

agcgtaagct gtgaggaagg tggggatgac gtcaaatcag cacggccctt acatccgggg 1200

cgacacacgt gttacaatgg tggggacaaa gggcagctac ctggcgacag gatgctaatc 1260

tccaaacctc atctcagttc ggatcgaagt ctgcaacccg acttcgtgaa gctggattcg 1320

ctagtaatcg cgcatcagcc atggcgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc 1380

ccgtcaagcc atgggagttg ggggtaccta aagtccgtaa ccgcaagg 1428

<210> 12

<211> 1397

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 12

aaggccgatc cttgtcggtt acggacttca ggtacccccg gctcccatgg cttgacgggc 60

ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcgccatgg ctgatgcgcg attactagcg 120

aatccagctt cacggagtcg ggttgcagac tccgatccga actgagacgt ggtttgggga 180

ttcgctccct gtcaccaggt ggcctccctt tgtccacgcc attgtaacac gtgtgtcgcc 240

ccggatgtaa gggccgtgct gatttgacgt catccccgcc ttcctcgcag cttacgctgg 300

cagtcccacc agagtcctca gctttacctg ttagtaacta gtggcaaggg ttgcgctcgt 360

tatggcactt aagccgacac ctcacggcac gagctgacga caaccatgca gcacctcgca 420

aacggctatt gctagaaaag gtgtttccac ctcggtccga atgcgttcaa acccgggtaa 480

ggttcctcgc gtatcatcga attaaaccac atgttcctcc gcttgtgcgg gcccccgtca 540

attcctttga gtttcaccgt tgccggcgta ctccccaggt ggatcactta acgctttcgc 600

tgtgccgctt acagtgtatc gcaaacagct agtgatcatc gtttactgcg tggactacca 660

gggtatctaa tcctgtttga tccccacgct ttcgtgcatc agcgtcagtc atggcttggc 720

aggctgcctt cgcaatcggg gttctgcgtg atatctatgc atttcaccgc tacaccacgc 780

attccgcctg cctcaaacat actcaagccc cccagtttca acggcaattc tatggttgag 840

ccacagactt tcaccgctga cttaaaaggc cgcctacgca ccctttaaac ccaataaatc 900

cggataacgc tcggatcctc cgtattaccg cggctgctgg cacggagtta gccgatcctt 960

attcataagg tacatacaaa acgggacacg tcccgcactt tattccctta taaaagaggt 1020

ttacgatcca tagaaccttc atccctcacg cgacttggct ggttcagcct ctcggccatt 1080

gaccaatatt cctcactgct gcctcccgta ggagtttggt ccgtgtctca gtaccaatgt 1140

gggggacctt cctctcagaa cccctatcca tcgtcggttt ggtgggccgt taccccgcca 1200

actgcctaat ggaacgcatg cctatctatc agcgatgaat ctttagcaaa tatccccatg 1260

cggggcccct gcttcatgcg gtattagtcc gactttcgcc gggttatccc cctctgatag 1320

gtaagttgca tacgcgttac tcacccgtgc gccggtcgcc acccggtatt gctacctgtg 1380

ctgccgcctc gactgca 1397

<210> 13

<211> 1403

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 13

aggccgatcc ttgtcggtta cggacttcag gtacccccgg ctcccatggc ttgacgggcg 60

gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcgccatggc tgatgcgcga ttactagcga 120

atccagcttc acggagtcgg gttgcagact ccgatccgaa ctgagacgtg gtttggggat 180

tcgctccctg tcgccaggtg gcatcccttt gtccacgcca ttgtaacacg tgtgtcgccc 240

cggatgtaag ggccgtgctg atttgacgtc atccccgcct tcctcgcagc ttacgctggc 300

agtcccacca gagtcctcag ctttacctgt tagtaactag tggcaagggt tgcgctcgtt 360

atggcactta agccgacacc tcacggcacg agctgacgac aaccatgcag cacctcgcaa 420

atcgctattg ctagaggctg tgtttccaca gcggtccaaa tgcgttcaaa cccgggtaag 480

gttcctcgcg tatcatcgaa ttaaaccaca tgttcctccg cttgtgcggg cccccgtcaa 540

ttcctttgag tttcaccgtt gccggcgtac tccccaggtg gatcacttaa cgctttcgct 600

gtgccgctta ccgtgtatcg caaacagcta gtgatcatcg tttactgcgt ggactaccag 660

ggtatctaat cctgtttgat ccccacgctt tcgtgcatca gcgtcagtca tggcttggca 720

ggctgccttc gcaatcgggg ttstgcgtga tatctaagca tttcaccgct acaccacgca 780

ttccgcctgc ctcaaacata ctcaagcccc ccagtttcaa cggcaattct atggttgagc 840

cacagacttt caccgctgac ttaaaaggcc gcctacgcac cctttaaacc caataaatcc 900

ggataacgct cggatcctcc gtattaccgc ggctgctggc acggagttag ccgatcctta 960

ttcataaggt acatacaaaa cgggacacgt cccgcacttt attcccttat aaaagaggtt 1020

tacgatccat agaaccttca tccctcacgc gacttggctg gttcaggctt acgcccattg 1080

accaatattc ctcactgctg cctcccgtag gagtttggtc cgtgtctcag taccaatgtg 1140

ggggaccttc ctctcagaac ccctatccat cgtcggtttg gtgggccgtt accccgccaa 1200

ctgcctaatg gaacgcatgc ctatctatca gcgatgaatc tttagcaaat atccccatgc 1260

gggacccctg cttcatgcgg tattagtccg actttcgccg ggttatcccc ctctgatagg 1320

taagttgcat acgcgttact cacccgtgcg ccggtcgcca cccggtattg ctacctgtgc 1380

tgcccctcga cttgcatgtg taa 1403

<210> 14

<211> 1430

<212> DNA

<213> 副拟杆菌属种(Parabacteroides sp.)

<400> 14

gggcccaatt taactaggcc gatccttgcg gttacggact tcaggtaccc ccggctccca 60

tggcttgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcgcca tggctgatgc 120

gcgattacta gcgaatccag cttcacggag tcgagttgca gactccgatc cgaactgaga 180

catggtttgg agatttgcat cacatcgctg tgtagctgcc ctttgtccat gccattgtaa 240

cacgtgtgtc gccccggatg taagggccgt gctgatttga cgtcatcccc accttcctca 300

cagcttacgc tggcagtctc accagagtcc tcagcttgac ctgttagtaa ctagtgataa 360

gggttgcgct cgttatggca cttaagccga cacctcacgg cacgagctga cgacaaccat 420

gcagcacytc gcaaacggtc attgctgaaa ggagcgtttc cactccggtc cgaatgcgtt 480

caaacccggg taaggttcct cgcgtatcat cgaattaaac cacatgttcc tccgcttgtg 540

cgggcccccg tcaattcctt tgagtttcac cgttgccggc gtactcccca ggtggattac 600

ttaacgcttt cgctgtagag cttactgtct atcgcaaact cctagtaatc atcgtttact 660

gcgtggacta ccagggtatc taatcctgtt tgatccccac gctttcgtgc ttcagtgtca 720

gttatagttt agtaagctgc cttcgcaatc ggagttctgc gtgatatcta tgcatttcac 780

cgctacacca cgcattccgc ctacctcaaa tatactcaag tcatccagtt tcaacggcaa 840

ttttatggtt gagccacaaa ctttcaccgc tgacttaaac aaccacctac gcacccttta 900

aacccaataa atccggataa cgctcgcatc ctccgtatta ccgcggctgc tggcacggag 960

ttagccgatg cttattcata cggtacatac aaaatgggac acgtcccaca ctttattccc 1020

skataaaaga agtttacaaa ccatagatcc ttcatccttc acgcgacttg gctggttcag 1080

cctcccggcc attgaccaat attcctcact gctgcctccc gtaggarttt ggaccgtgtc 1140

tcagttccaa tgtgggggac cttcctctca gaacccctat ccatcgtcgg tttggtgggc 1200

cgttaccccg ccaactgcct aatggaacgc atgcctatct atcagcgatg aatctttaac 1260

aaatattccc atgcgggacc cctgttttat ggagcattaa tccgactttc gccgggctat 1320

tcccctctga taggcaagtt gcatacgcgt tactcacccg tgcgccggtc gccggcaggc 1380

attgctgccc ccgctgcccc tcgacttgca tggttagcct ccaattcccc 1430

<210> 15

<211> 1402

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 15

taggccgatc cttgcggtta cggacttcag gtacccccgg ctcccatggc ttgacgggcg 60

gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcgccatggc tgatgcgcga ttactagcga 120

atccagcttc acggagtcga gttgcagact ccgatccgaa ctgagacatg gtttggagat 180

ttgcatcaca tcgctgtgta gctgcccttt gtccatgcca ttgtaacacg tgtgtcgccc 240

cggatgtaag ggccgtgctg atttgacgtc atccccacct tcctcacagc ttacgctggc 300

agtctcacca gagtcctcag cttgacctgt tagtaactag tgataagggt tgcgctcgtt 360

atggcactta agccgacacc tcacggcacg agctgacgac aaccatgcag cacctcgcaa 420

acggtcattg ctgaaaggag cgtttccact ccggtccgaa tgcgttcaaa cccgggtaag 480

gttcctcgcg tatcatcgaa ttaaaccaca tgttcctccg cttgtgcggg ccccygtcaa 540

ttcctttgag tttcaccgtt gccggcgtac tccccaggtg gattacttaa cgctttcgct 600

gtagagctta ctgtctatcg camactccta gtaatcatcg tttactgcgt ggactaccag 660

ggtatctaat cctgtttgat ccccacgctt tcgtgcttca gtgtcagtta tagtttagta 720

agctgccttc gcaatcggag ttctgcgtga tatctatgca tttcaccgct acaccacgca 780

ttccgcctac ctcaaatata ctcaagtcat ccagtttcaa cggcaatttt atggttgagc 840

cacaaacttt caccgctgac ttaaacaacc acctacgcac cctttaaacc caataaatcc 900

ggataacgct cgcatcctcc gtattaccgc ggctgctggc acggagttag ccgatgctta 960

ttcatacggt acatacaaaa tgggacacgt cccacacttt attcccgtat aaaagaagtt 1020

tacaaaccat agatccttca tccttcacgc gacttggctg gttcagcctc ccggccattg 1080

accaatattc ctcactgctg cctcccgtag gagtttggac cgtgtctcag ttccaatgtg 1140

ggggaccttc ctctcagaac ccctatccat cgtcggtttg gtgggccgtt accccgccaa 1200

ctgcctaatg gaacgcatgc ctatctatca gcgatgaatc tttaacaaat attcccatgc 1260

gggacccctg ttttatggag cattaatccg actttcgccg ggctattccc ctctgatagg 1320

caagttgcat acgcgttact cacccgtgcg ccggtcgccg gcaggcattg ctgcccccgc 1380

tgcccctcga cttgcatgtg tt 1402

<210> 16

<211> 1405

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 16

gtaggccgat cctcgcggtt acggacttca ggtacccccg gctcccatgg cttgacgggc 60

ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcgccatgg ctgatgcgcg attactagcg 120

aatccagctt cacggagtcg ggttgcagac tccgatccga actgagacgt ggtttgggga 180

ttcgctccct gtcgccaggt ggcttccctt tgtccacgcc attgtaacac gtgtgtcgcc 240

ccggatgtaa gggccgtgct gatttgacgt catccccgcc ttcctcgcag cttacgctgg 300

cagtcccacc agagtcctca gcytwacctg ttagtaacta gtggcaaggg ttgcgctcgt 360

tatggcactt aagccgacac ctcacggcac gagctgacga caaccatgca gcacctcgca 420

aacggctatt gctagaaaag gtgtttccac ctcggtccga atgcgttcaa acccgggtaa 480

ggttcctcgc gtatcatcga attaaaccac atgttcctcc gcttgtgcgg gcccccgtca 540

attcctttga gtttcaccgt tgccggcgta ctccccaggt ggatcactta acgctttcgc 600

tgtgccgctt acactgtatc gcaaacagct agtgatcatc gtttactgcg tggactacca 660

gggtatctaa tcctgtttga tccccacgct ttcgtgcatc agcgtcagtc atggcttggc 720

aggctgcctt cgcaatcggg gttctgcgtg atatctatgc atttcaccgc tacaccacgc 780

attccgcctg cctcaaacat actcaagccc cccagtttca acggcaattc tatggttgag 840

ccacagactt tcaccgctga cttaaaaggc cgcctacgca ccctttaaac ccaataaatc 900

cggataacgc tcggatcctc cgtattaccg cggctgctgg cacggagtta gccgatcctt 960

attcataagg tacatacaaa acgggacacg tcctacactt tattccctta taaaagaggt 1020

ttacgatcca tagaaccttc atccctcacg cgacttggct ggttcaggct tacgcccatt 1080

gaccaatatt cctcactgct gcctcccgta ggagtttggt ccgtgtctca gtaccaatgt 1140

gggggacctt cctctcagaa cccctatcca tcgtcggttt ggtgggccgt taccccgcca 1200

actgcctaat ggaacgcatg cmtatmtatc agcgatgwat cttkmgcaaa tatccccrtg 1260

cggggcccgt gcttcrtgcg gtattagtcm gactttcgcc gggttatccc cctctgatag 1320

gyaagttgca tacgcgttac tcacccgtgc gccggtcgcc rgccgcggta tctgctaccc 1380

cgcgctgccc ctcgacttgc atggt 1405

<210> 17

<211> 1365

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 17

gatcctcgcg gttacggact tcaggtaccc ccggctccca tggcttgacg ggcggtgtgt 60

acaaggcccg ggaacgtatt caccgcgcca tggctgatgc gcgattacta gcgaatccag 120

cttcacggag tcgggttgca gactccgatc cgaactgaga cgtggtttgg ggattcgctc 180

cctgtcgcca ggtggcctcc ctttgtccac gccattgtaa cacgtgtgtc gccccggatg 240

taagggccgt gctgatttga cgtcatcccc gccttcctcg cagcttacgc tggcagtccc 300

accagagtcc tcagcatcac ctgttagtaa ctagtggcaa gggttgcgct cgttatggca 360

cttaagccga cacctcacgg cacgagctga cgacaaccat gcagcacctc gcaaacggct 420

attgctagaa aaggtgtttc cacctcggtc cgaatgcgtt caaacccggg taaggttcct 480

cgcgtatcat cgaattaaac cacatgttcc tccgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt 540

tgagtttcac cgttgccggc gtactcccca ggtggatcac ttaacgcttt cgctgtgccg 600

cttacagtgt atcgcaaaca gctagtgatc atcgtttact gcgtggacta ccagggtatc 660

taatcctgtt tgatccccac gctttcgtgc atcagcgtca gtcatggctt ggcaggctgc 720

cttcgcaatc ggggttctgc gtgatatcta tgcatttcac cgctacacca cgcattccgc 780

ctgcctcaaa catactcaag ccccccagtt tcaacggcaa ttctatggtt gagccacaga 840

ctttcaccgc tgacttaaaa ggccgcctac gcacccttta aacccaataa atccggataa 900

cgctcggatc ctccgtatta ccgcggctgc tggcacggag ttagccgatc cttattcata 960

aggtacatac aaaacgggac acgtcccgca ctttattccc ttataaaaga ggtttacgat 1020

ccatagaacc ttcatccctc acgcgacttg gctggttcag cctttcggcc attgaccaat 1080

attcctcact gctgcctccc gtaggagttt ggtccgtgtc tcagtaccaa tgtgggggac 1140

cttcctctca gaacccctat ccatcgtcgg tttggtgggc cgttaccccg ccaactgcct 1200

aatggaacgc atgcctatct atcagcgatg aatctttagc aaatatcccc atgcggggcc 1260

cctgcttcat gcggtattag tccgactttc gccgggttat ccccctctga taggtaagtt 1320

gcatacgcgt tactcacccg tgcgccggtc gccacccggt attgc 1365

<210> 18

<211> 1415

<212> DNA

<213> 粪副拟杆菌(Parabacteroides merdae)

<400> 18

ttaaataggc cgatccttgc ggttacggac ttcaggtacc cccggctccc atggcttgac 60

gggcggtgtg tacaaggccc gggaacgtat tcaccgcgcc atggctgatg cgcgattact 120

agcgaatcca gcttcacgga gtcgagttgc agactccgat ccgaactgag acatggtttg 180

gagattagca tcctgtcacc aggtagctgc cctttgtcca tgccattgta acacgtgtgt 240

cgccccggat gtaagggccg tgctgatttg acgtcatccc caccttcctc acagcttacg 300

ctggcagtct caccagagtc ctcagcttca cctgttagta actagtgata agggttgcgc 360

tcgttatggc acttaagccg acacctcacg gcacgagctg acgacaacca tgcagcacct 420

cgtaatctgc tattgctaga aagagtgttt ccactccggt cagactacgt tcaaacccgg 480

gtaaggttcc tcgcgtatca tcgaattaaa ccacatgttc ctccgcttgt gcgggccccc 540

gtcaattcct ttgagtttca ccgttgccgg cgtactcccc aggtggatta cttaacgctt 600

tcgctgtaga gcttacattg tatcgcaaac tcctagtaat catcgtttac tgcgtggact 660

accagggtat ctaatcctgt ttgatcccca cgctttcgtg cttcagtgtc agttatggtt 720

tagtaagctg ccttcgcaat cggagttctg cgtgatatct atgcatttca ccgctacacc 780

acgcattccg cctacctcaa acacactcaa gtaacccagt ttcaacggca attttatggt 840

tgagccacaa actttcaccg ctgacttaaa tcaccaccta cgcacccttt aaacccaata 900

aatccggata acgctcgcat cctccgtatt accgcggctg ctggcacgga gttagccgat 960

gcttattcat agggtacata caaaaaagga cacgtcctcc actttattcc cctataaaag 1020

aagtttacaa accatagatc cttcttcctt cacgcgactt ggctggttca gcctctcggc 1080

cattgaccaa tattcctcac tgctgcctcc cgtaggagtt tggtccgtgt ctcagtacca 1140

atgtggggga ccttcctctc agaaccccta tccatcgtcg gtttggtggg ccgttacccc 1200

gccaactgcc taatggaacg catgcctatc tatcagcgat gaatctttaa caaatattcc 1260

catgcgggac ccctgtttta tggggtatta atccgacttt cgccgggcta tccccctctg 1320

ataggtaagt tgcatacgcg ttactcaccc gtgcgccggt cgccatcaat ctgtattgct 1380

acaaatcatg ctgcccctcg acttgcatgg ttaag 1415

<210> 19

<211> 1390

<212> DNA

<213> 狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)

<400> 19

gatctcgcgg tttacggact tcaggtaccc ccggctccca tggcttgacg ggcggtgtgt 60

acaaggcccg ggaacgtatt caccgcgcca tggctgatgc gcgattacta gcgaatccag 120

cttcacggag tcgggttgca gactccgatc cgaactgaga cgtggtttgg ggattcgctc 180

cctgtcgcca ggtggcctcc ctttgtccac gccattgtaa cacgtgtgtc gccccggatg 240

taagggccgt gctgatttga cgtcatcccc gccttcctcg cagcttacgc tggcagtccc 300

accagagtcc tcagcatcac ctgttagtaa ctagtggcaa gggttgcgct cgttatggca 360

cttaagccga cacctcacgg cacgagctga cgacaaccat gcagcacctc gcaaacggct 420

attgctagaa aaggtgtttc cacctcggtc cgaatgcgtt caaacccggg taaggttcct 480

cgcgtatcat cgaattaaac cacatgttcc tccgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt 540

tgagtttcac cgttgccggc gtactcccca ggtggatcac ttaacgcttt cgctgtgccg 600

cttacagtgt atcgcaaaca gctagtgatc atcgtttact gcgtggacta ccagggtatc 660

taatcctgtt tgatccccac gctttcgtgc atcagcgtca gtcatggctt ggcaggctgc 720

cttcgcaatc ggggttctgc gtgatatcta tgcatttcac cgctacacca cgcattccgc 780

ctgcctcaaa catactcaag ccccccagtt tcaacggcaa ttctatggtt gagccacaga 840

ctttcaccgc tgacttaaaa ggccgcctac gcacccttta aacccaataa atccggataa 900

cgctcggatc ctccgtatta ccgcggctgc tggcacggag ttagccgatc cttattcata 960

aggtacatac aaaacgggac acgtcccgca ctttattccc ttataaaaga ggtttacgat 1020

ccatagaacc ttcatccctc acgcgacttg gctggttcag cctttcggcc attgaccaat 1080

attcctcact gctgcctccc gtaggagttt ggtccgtgtc tcagtaccaa tgtgggggac 1140

cttcctctca gaacccctat ccatcgtcgg tttggtgggc cgttaccccg ccaactgcct 1200

aatggaacgc atgcctatct atcagcgatg aatctttagc aaatatcccc atgcggggcc 1260

cctgcttcat gcggtattag tccgactttc gccgggttat ccccctctga taggtaagtt 1320

gcatacgcgt tactcacccg tgcgccggtc gccacccggt attgctacct ggtgctgccc 1380

cctcgactgc 1390

<210> 20

<211> 1399

<212> DNA

<213> 副拟杆菌属种(Parabacteroides sp.)

<400> 20

ccgatccttt cggttacgga cttcaggtac ccccggctcc catggcttga cgggcggtgt 60

gtacaaggcc cgggaacgta ttcaccgcgc catggctgat gcgcgattac tagcgaatcc 120

agcttcacgg agtcgggttg cagactccga tccgaactga gacgtggttt ggggattcgc 180

tccctgtcgc caggtggcct ccctttgtcc acgccattgt aacacgtgtg tcgccccgga 240

tgtaagggcc gtgctgattt gacgtcatcc ccgccttcct cgcagcttac gctggcagtc 300

ccaccagagt cctcagcatc acctgttagt aactagtggc aagggttgcg ctcgttatgg 360

cacttaagcc gacacctcac ggcacgagct gacgacaacc atgcagcacc tcgcaaatcg 420

ctatcgctag agactctgtt tccagagctg tcgaaatgcg ttcaaacccg ggtaaggttc 480

ctcgcgtatc atcgaattaa accacatgtt cctccgcttg tgcgggcccc cgtcaattcc 540

tttgagtttc accgttgccg gcgtactccc caggtggatc acttaacgct ttcgctgtgc 600

cgcttacagt gtatcgcaaa cagctagtga tcatcgttta ctgcgtggac taccagggta 660

tctaatcctg tttgatcccc acgctttcgt gcatcagcgt cagtaatggc ttggcaggct 720

gccttcgcaa tcggggttct gcgtgatatc tatgcatttc accgctacac cacgcattcy 780

gcctgcctca aacatactca agccccccag tttcaacggc aattctatgg ttgagccaca 840

gactttcacc gctgacttaa aaggccgcct acgcaccctt taaacccaat aaatccggat 900

aacgctcgga tcctccgtat taccgcggct gctggcacgg agttagccga tccttattca 960

taaggtacat acmaaacggg acacgtcccg cactttattc ccttataaaa gaggtttacg 1020

atccatagaa ccttcatccc tcacgcgact tggctggttc agsctctcgc ccattgacca 1080

atattcctca ctgctgcctc ccgtaggagt ttggtccgtg tctcagtacc aatgtggggg 1140

accttcctct cagaacccct atccatcgtc ggtttggtgg gccgttaccc cgccaactgc 1200

ctaatggaac gcmwgcckat ytatcagcga wgaatcttta gcaaatatcc ccatgcgggg 1260

cccctgcttc mtgcggtatt agtccgactt tcgccgggtt atccccctct gataggcaag 1320

twgcatacgc gttactcacc cgtgcgccgg tcgccacccg gtattgctac cctgygctgc 1380

ccctcgactt gcatgktaa 1399

<210> 21

<211> 1431

<212> DNA

<213> 副拟杆菌属种(Parabacteroides sp.)

<400> 21

gcgcggttta actaggccga tcctttcggt tacggacttc aggtaccccc ggctcccatg 60

gcttgacggg cggtgtgtac aaggcccggg aacgtattca ccgcgccatg gctgatgcgc 120

gattactagc gaatccagct tcacggagtc gggttgcaga ctccgatccg aactgagacg 180

tggtttgggg attcgctccc tgtcgccagg tggcctccct ttgtccacgc cattgtaaca 240

cgtgtgtcgc cccggatgta agggccgtgc tgatttgacg tcatccccgc cttcctcgca 300

gcttacgctg gcagtcccac cagagtcctc agcatcacct gttagtaact agtggcaagg 360

gttgcgctcg ttatggcact taagccgaca cctcacggca cgagctgacg acaaccatgc 420

agcacctcgc aaatcgctat cgctagagac tctgtttcca gagctgtcga aatgcgttca 480

aacccgggta aggttcctcg cgtatcatcg aattaaacca catgttcctc cgcttgtgnc 540

gggcccccgt caattccttt gagtttcacc gttgccggcg taytccccag gtggatcact 600

taacgctttc gctgtgccgc ttacagtgta tcgcaaacag ctagtgatca tcgtttactg 660

cgtggactac cagggtatct aatcctgttt gatccccacg ctttcgtgca tcagcgtcag 720

taatggcttg gcaggctgcc ttcgcaatcg gggttctgcg tgatatctat gcatttcacc 780

gctacaccac gcattccgcc tgcctcaaac atactcaagc cccccanttt caacggcaat 840

tctatggttg agccacagac tttcaccgct gacttaaaag gccgcctacg caccctttaa 900

acccaataaa tccggataac gctcggatcc tccgtattac cgcggctgct ggcacggagt 960

tagccgatcc ttattcataa ggtacataca aaacgggaca cgtcccgcac tttattccct 1020

tataaaagag gtttacgatc catagaacct tcatccctca cgcgacttgg ctggttcagc 1080

ctttcggcca ttgaccaata ttcctcactg ctgcctcccg taggagtttg gtccgtgtct 1140

cagtaccaat gtgggggacc ttcctctcag aacccctatc cattgtcggt ttggtgggcc 1200

gttaccccgc caactgccta atggaacgca tgcctatcta tcagcgatga atctttagca 1260

aatatcccca tgcggggccc ctgcttcatg cggtattagt ccgactttcg ccgggttatc 1320

cccctctgat aggcaagttg catacgcgtt actcacccgt gcgccggtcg ccgagccgcg 1380

gtattgctac cctcgtgctg cccctcgact tgcatggtta gcctccatcc c 1431

<210> 22

<211> 1399

<212> DNA

<213> 副拟杆菌属种(Parabacteroides sp.)

<400> 22

cttaggccga tccctcgcgg ttcggacttc aggtaccccc ggctcccatg gcttgacggg 60

cggtgtgtac aaggcccggg aacgtattca ccgcgccatg gctgatgcgc gattactagc 120

gaatccagct tcacggagtc gggttgcaga ctccgatccg aactgagacg tggtttgggg 180

attcgctccc tgtcgccagg tggcctccct ttgtccacgc cattgtaaca cgtgtgtcgc 240

cccggatgta agggccgtgc tgatttgacg tcatccccgc cttcctcgca gcttacgctg 300

gcagtcccac cagagtcctc agcatcacct gttagtaact agtggcaagg gttgcgctcg 360

ttatggcact taagccgaca cctcacggca cgagctgacg acaaccatgc agcacctcgc 420

aaacggctat tgctagaaaa ggtgtttcca cctcggtccg aatgcgttca aacccgggta 480

aggttcctcg cgtatcatcg aattaaacca catgttcctc cgcttgtgcg ggcccccgtc 540

aattcctttg agtttcaccg ttgccggcgt actccccagg tggatcactt aacgctttcg 600

ctgtgccgct tacagtgtat cgcaaacagc tagtgatcat cgtttactgc gtggactacc 660

agggtatcta atcctgtttg atccccacgc tttcgtgcat cagcgtcagt catggcttgg 720

caggctgcct tcgcaatcgg ggttctgcgt gatatctatg catttcaccg ctacaccacg 780

cattccgcct gcctcaaaca tactcaagcc ccccagtttc aacggcaatt ctatggttga 840

gccacagact ttcaccgctg acttaaaagg ccgcctacgc accctttaaa cccaataaat 900

ccggataacg ctcggatcct ccgtattacc gcggctgctg gcacggagtt agccgatcct 960

tattcataag gtacatacaa aacgggacac gtcccgcact ttattccctt ataaaagagg 1020

tttacgatcc atagaacctt catccctcac gcgacttggc tggttcagcc tttcggccat 1080

tgaccaatat tcctcactgc tgcctcccgt aggagtttgg tccgtgtctc agtaccaatg 1140

tgggggacct tcctctcaga acccctatcc atcgtcggtt tggtgggccg ttaccccgcc 1200

aactgcctaa tggaacgcat gcctatctat cagcgatgaa tctttagcaa atatccccat 1260

gcggggcccc tgcttcatgc ggtattagtc cgactttcgc cgggttatcc ccctctgata 1320

ggtaagttgc atacgcgtta ctcacccgtg cgccggtcgc cacccggtat tgctacctgg 1380

tgctgcccct cgactgcat 1399

<210> 23

<211> 1371

<212> DNA

<213> 副拟杆菌属种(Parabacteroides sp.)

<400> 23

gcgaggtatc gagactacta ggtacccccg gctcccatgg cttgacgggc ggtgtgtaca 60

aggcccggga acgtattcac cgcgccatgg ctgatgcgcg attactagcg aatccagctt 120

cacggagtcg ggttgcagac tccgatccga actgagacgt ggtttgggga ttcgctccct 180

gtcgccaggt ggcatccctt tgtccacgcc attgtaacac gtgtgtcgcc ccggatgtaa 240

gggccgtgct gatttgacgt catccccgcc ttcctcgcag cttacgctgg cagtcccacc 300

agagtcctca gctttacctg ttagtaacta gtggcaaggg ttgcgctcgt tatggcactt 360

aagccgacac ctcacggcac gagctgacga caaccatgca gcacctcgca aatcgctatt 420

gctagaggct ctgtttccac atcggtccaa atgcgttcaa acccgggtaa ggttcctcgc 480

gtatcatcga attaaaccac atgttcctcc gcttgtgcgg gcccccgtca attcctttga 540

gtttcaccgt tgccggcgta ctccccaggt ggatcactta acgctttcgc tgtgccgctt 600

accgtgtatc gcaaacagct agtgatcatc gtttactgcg tggactacca gggtatctaa 660

tcctgtttga tccccacgct ttcgtgcatc agcgtcagtc atggcttggc aggctgcctt 720

cgcaatcgag gttctgcgtg atatctaagc atttcaccgc tacaccacgc attccgcctg 780

cctcaaacat actcaagccc cccagtttca acggcaattc tatggttgag ccacagactt 840

tcaccgctga cttaaaaggc cgcctacgca ccctttaaac ccaataaatc cggataacgc 900

tcggatcctc cgtattaccg cggctgctgg cacggagtta gccgatcctt attcataagg 960

tacatacaaa acrggacacg tcccgcactt tattccctta taaaagaggt ttacgatcca 1020

tagaaccttc atccctcacg cgacttggct ggttcaggct tacgcccatt gaccaatatt 1080

cctcactgct gcctcccgtt ggagtttggt ccgtgtctca gtaccaatgt gggggacctt 1140

cctctcagaa cccctatcca tcgtcggttt ggtgggccgt taccccgcca actgcataat 1200

ggaacgcatg cctatctatc agcgatgaat ctttagcaaa tatccccatg cgggacccct 1260

gcttcatgcg gtattagtcc gactttcgcc gggttatccc cctctgatag gtaagttgca 1320

tacgcgttac tcacccgtgc gccggtcgcc acccggtatt gctacgggtg a 1371

PCT/RO/134表

Claims (27)

1.一种包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，所述组合物用作疫苗佐剂。

2.一种包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，所述组合物用于治疗、预防或延迟免疫衰老。

3.一种包含副拟杆菌属细菌菌株的组合物，所述组合物用于增强细胞疗法如CAR-T。

4.一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包含副拟杆菌属细菌菌株和一种或多种抗原。

5.如权利要求4所述的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含一种或多种病原体抗原或肿瘤抗原。

6.如权利要求1-5中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株属于狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis)、古氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii)或粪副拟杆菌(Parabacteroides merdae)物种。

7.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:9具至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:9表示的16s rRNA基因序列。

8.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株是以登录号42382保藏在NCIMB的菌株。

9.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:9、12、13、16、17或19具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:9、12、13、16、17或19表示的16s rRNA基因序列。

10.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:10或11具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:10或11表示的16s rRNA基因序列。

11.如实施方案1-6中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:18具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:18表示的16s rRNA基因序列。

12.如实施方案1-5中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株具有与SEQ ID NO:15具至少98％、99％、99.5％或99.9％同一性的16s rRNA基因序列，或者其中所述细菌菌株具有由SEQ ID NO:15表示的16s rRNA基因序列。

13.如权利要求1或4-12中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种选自以下的病原体抗原：病毒抗原，例如病毒表面蛋白；细菌抗原，例如蛋白质和/或糖抗原；真菌抗原；和寄生虫抗原。

14.如权利要求13所述的组合物，其中所述抗原来自任何以下病原体：流感病毒、HIV、钩虫、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、衣原体、SARS冠状病毒、水痘带状疱疹病毒、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、爱泼斯坦巴尔病毒或人乳头瘤病毒。

15.如权利要求14所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种流感病毒抗原。

16.如权利要求1或4-12中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种选自以下的抗原：新抗原、糖蛋白抗原、脂多糖抗原、古细菌抗原、黑素瘤抗原E(MAGE)、癌胚抗原(CEA)、MUC-1、HER2、唾液酸-Tn(STn)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)、威尔姆斯瘤基因(WT1)、CA-125、前列腺特异性抗原(PSA)、致癌蛋白、β淀粉样蛋白、Tau、PCSK9或习惯形成物质如酒精或阿片剂。

17.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于口服施用，和/或包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体，并且/或者其中所述细菌菌株是冻干的。

18.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述细菌菌株表达异源抗原，例如病原体抗原或肿瘤抗原。

19.如权利要求4-18中任一项所述的组合物，所述组合物用于药物中。

20.如前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物用于增加MCP-1的表达水平和/或活性和/或B细胞的扩增。

21.如权利要求20所述的组合物，其中所述B细胞包括CD19+CD3-B细胞。

22.如权利要求1或4-21中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于治疗病毒感染、细菌感染、真菌感染、寄生虫感染或肿瘤。

23.如权利要求22所述的组合物，其中所述组合物用于治疗流感病毒感染。

24.如权利要求2、6-12、17或19-21中任一项所述的组合物，其中所述组合物用于治疗、预防或延迟B细胞免疫衰老。

25.如权利要求2、6-12、17、19-21或24中任一项所述的组合物，其中所述组合物通过治疗、预防或延迟免疫衰老而用于治疗心血管疾病；神经退行性疾病，例如阿尔茨海默氏病或帕金森氏病；癌症；2型糖尿病；或自身免疫性疾病。

26.如权利要求3、6-12、17或19-21中任一项所述的组合物，其中所述组合物通过增强CAR-T而用于治疗癌症。

27.如权利要求26所述的组合物，其中所述癌症是慢性淋巴细胞性白血病。

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