JP2022511977A - ＫＲＡＳバリアントｍＲＮＡ分子 - Google Patents

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Abstract

本発明は、少なくとも１つのＫＲＡＳバリアントペプチドをコードするｍＲＮＡ分子を提供する。更に、本発明は、前記ｍＲＮＡ分子を含む医薬組成物及びキットを提供する。前記ｍＲＮＡ分子、医薬組成物、及びキットは、癌の治療に有用である。【選択図】なし

Description

ＲＡＳ遺伝子（ラット肉腫を形成する役割に因んで命名）は、ヒトの癌細胞で同定された最初の癌遺伝子であった。３種のＲＡＳ遺伝子は、８２％～９０％のアミノ酸配列同一性を有し、ほぼ同一の構造的及び生化学的性質を有する１８８～１８９個のアミノ酸タンパク質をコードする。ＲＡＳ（ラット肉腫）タンパク質ファミリーのメンバーは、細胞の分化、増殖、及び生存の調節に役割を果たす低分子量ＧＴＰ結合タンパク質である。ＲＡＳファミリーには、３つの主要なメンバー、即ち、ＨＲＡＳ、ＮＲＡＳ、及びＫＲＡＳがあり、これらは、ヒトの癌で最も頻繁に変異する癌遺伝子ファミリーであり、ＲＡＳの変異はヒトの癌の約２５～３０％で見られる（非特許文献１）。
ＲＡＳ変異の頻度は、米国における癌による死亡の主な原因の３つ（肺癌、結腸直腸癌、膵臓癌）のうち最も高いので、抗ＲＡＳ療法の開発に懸命な努力がなされている（非特許文献２、非特許文献３、及び非特許文献４）。
ＫＲＡＳは、最も頻繁に変異するＲＡＳアイソフォームであり、膵臓腺癌の最大９０％、結腸直腸癌の４５％、及び肺腺癌の２５～３５％で変異していることが示された（非特許文献５、非特許文献６、及び非特許文献７）。ＫＲＡＳ変異は、膵臓、結腸、小腸、胆管、及び肺癌の腫瘍で観察され、ＮＲＡＳ変異は、造血及び皮膚癌で観察されている（非特許文献８）。ＲＡＳ変異は、副腎、胆道、骨、乳房、子宮頸部、子宮内膜、リンパ球、腎臓、大腸、肝臓、肺、食道、卵巣、膵臓、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、胃、及び精巣で観察され、ＫＲＡＳは、ＲＡＳの最も頻繁に変異するアイソフォームであり、ＣＯＳＭＩＣデータセットで分析された腫瘍の２２％に存在する（非特許文献９）。
しかし、３０年間を超える懸命な努力にもかかわらず、効果的なＫＲＡＳ阻害剤は、未だに癌患者に届いておらず、ＫＲＡＳによって引き起こされる癌は、治療が最も困難で、治療から除外されることもある癌である。Ｒａｓタンパク質は、効果的な化学的阻害剤を同定できないことから、「アンドラッガブル」と呼ばれている。
したがって、ＫＲＡＳ変異を伴う腫瘍を有する患者の効果的な抗癌治療に対して、充足されていない医学的ニーズが依然として存在する。
Ｅ Ｓａｎｔｏｓ， Ｇｅｎｅｓ Ｃａｎｃｅｒ ２０１１； ２： ３４４－３５８ Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２０１３； ５６： ５２１９－５２３０ Ｗａｔｅｒｓ ａｎｄ Ｄｅｒ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ． ２０１８； ８： ａ０３１４３５ Ｓｔｅｐｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ． ２０１４； ２５：２７２－８１， ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｃｃｒ．２０１４．０２．０１７ Ｚｅｉｔｏｕｎｉ Ｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒｓ （Ｂａｓｅｌ） ２０１６； ８：４５ Ｔａｎ Ｃ ａｎｄ Ｘ Ｄｕ， Ｗｏｒｌｄ Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ． ２０１２； １８： ５１７５－５１８９ Ｋｅｍｐｆ Ｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｒｅｓｐ． Ｒｅｖ． ２０１６； ２５： ７１－７６ Ｈｕｎｔｅｒ ＪＤ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １３： １３２５ （２０１５） Ｐｒｉｏｒ ＩＡ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１： ２４５７ （２０１２）
本発明は、ＣＴＬＡ４シグナルペプチドと、ＫＲＡＳバリアントペプチドと、ＰＡＤＲＥ由来のＴヘルパーエピトープ配列と、ＣＴＬＡ４膜貫通ドメイン又はその一部とを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ配列を含むｍＲＮＡ分子を提供する。好ましい実施形態では、ＫＲＡＳバリアントペプチドは、ＫＲＡＳバリアントペプチド配列の２９個の連続したアミノ酸残基を含む。
好ましい一実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、脂質ナノ粒子として、例えば医薬組成物中に製せられる。別の実施形態では、例えば医薬組成物中の脂質ナノ粒子は、脂質ナノ粒子として製せられる１、２、３、４、又は５つのｍＲＮＡ分子を含み、個々のｍＲＮＡ分子は、それぞれ異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。別の好ましい実施形態では、例えば医薬組成物中の脂質ナノ粒子は、５つのｍＲＮＡ分子を含み、個々のｍＲＮＡ分子は、それぞれ異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。別の好ましい実施形態では、例えば医薬組成物中の脂質ナノ粒子は、４つのｍＲＮＡ分子を含み、個々のｍＲＮＡ分子は、それぞれ異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。別の好ましい実施形態では、例えば医薬組成物中の脂質ナノ粒子は、３つのｍＲＮＡ分子を含み、個々のｍＲＮＡ分子は、それぞれ異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。別の好ましい実施形態では、例えば医薬組成物中の脂質ナノ粒子は、２つのｍＲＮＡ分子を含み、個々のｍＲＮＡ分子は、それぞれ異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。別の実施形態では、例えば医薬組成物中の脂質ナノ粒子は、１つのｍＲＮＡ分子を含む。
別の好ましい実施形態では、それぞれが異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする１以上の個々のｍＲＮＡ分子が、脂質ナノ粒子として製せられる前に混合される。別の好ましい実施形態では、それぞれが特定のＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする１、２、３、４、又は５つの個々のｍＲＮＡ分子が、脂質ナノ粒子として製せられる前に混合される。別の好ましい実施形態では、それぞれが異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする５つの個々のｍＲＮＡ分子が、脂質ナノ粒子として製せられる前に混合される。
好ましい一実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子と、ホスホコリン（例えば、ジステアロイルホスホコリン（ＤＳＰＣ）又は１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）と、ペグ化脂質（例えば、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミド）と、ステロール（例えば、コレステロール）と、本明細書中の式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）に由来するカチオン性脂質（例えば、本明細書中の表４のＬＮＰＩＩＩ－３の脂質）とを含む。別の実施形態では、脂質ナノ粒子は、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子と、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）と、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドと、コレステロールと、本明細書中の表４のＬＮＰＩＩＩ－３の脂質とを含む。
別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳバリアントペプチドは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントアミノ酸残基、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントアミノ酸残基、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントアミノ酸残基、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントアミノ酸残基、又はＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントアミノ酸残基を含む。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、更に、３’－ＵＴＲ配列を含む。別の実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、更に、５’－ＵＴＲ配列及び３’－ＵＴＲ配列を含む。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、他の機能的エレメントをコードする配列を含まない。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）ペプチド又はポリペプチドをコードしない。
別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳバリアントペプチドは、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、又は配列番号１２（表１）のアミノ酸配列を含み、これらのアミノ酸配列は、表１の３列目及び４列目に示される核酸によってそれぞれコードされていることが好ましい。
Figure 2022511977000001
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、表２の配列識別子に示されるｍＲＮＡ分子である。
Figure 2022511977000002
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、又は配列番号６７（表２）に示されるｍＲＮＡ分子である。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、又は配列番号６２（表２）に示されるｍＲＮＡ分子である。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、又は配列番号５２（表３）に示されるＫＲＡＳバリアントペプチド又はポリペプチドをコードする。別の好ましい実施形態では、分子は、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、又は配列番号５７に示される。
Figure 2022511977000003
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号４８を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５３を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５８を含む。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６３を含む。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号４９を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５４を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５９を含む。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６４を含む。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５０を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５５を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６０を含む。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６５を含む。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５１を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５６を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６１を含む。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６６を含む。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５２を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５７を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６２を含む。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号６７を含む。
特に好ましい実施形態によれば、ｍＲＮＡ分子は、更に、少なくとも１つの５’－配列及び／又は３’－ＵＴＲ配列を含む。
本発明はまた、本明細書に記載の本発明のｍＲＮＡ分子と、１以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
好ましい実施形態では、医薬組成物は、１、２、３、４、又は５つの異なるｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、単一のＫＲＡＳバリアントペプチドをコードするｍＲＮＡ分子を含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、２つの異なるｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、３つのｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、４つのｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、５つのｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡは、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子を含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号４８を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５３を含むアミノ酸配列をコードする。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子を含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号４９を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５４を含むアミノ酸配列をコードする。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子を含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５０を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５５を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子を含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５１を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５６を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子を含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５２を含むアミノ酸配列をコードする。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、配列番号５７を含むアミノ酸配列をコードする。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントペプチドは、配列番号８であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントペプチドは、配列番号９であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントペプチドは、配列番号１０であり、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントペプチドは、配列番号１１であり、ＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントペプチドは、配列番号１２である。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号４９のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５０のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５１のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５２のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５３のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５４のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５５のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５６のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子と、配列番号５７のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号５９を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６０を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６１を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６２を含むｍＲＮＡ分子とを含む。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６４を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６５を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６６を含むｍＲＮＡ分子と、配列番号６７を含むｍＲＮＡ分子とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、更に、カチオン性脂質と、ステロールと、中性脂質と、ＰＥＧ脂質とを含む。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号６３～６７に示されるｍＲＮＡ分子の１以上と、コレステロールと、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドと、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）と、以下のカチオン性脂質とを含む。
Figure 2022511977000004
別の好ましい実施形態では、カチオン性脂質：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＰＥＧ脂質のモル比は、約５０：１０：３８．５：１．５、４７．５：１０：４０．８：１．７、又は４７．４：１０：４０．９：１．７ｍｏｌ％である。
別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、配列番号５８～６２に示される１以上のｍＲＮＡ分子と、コレステロールと、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドと、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）と、以下のカチオン性脂質とを含む。
Figure 2022511977000005
別の好ましい実施形態では、カチオン性脂質：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＰＥＧ脂質のモル比は、約５０：１０：３８．５：１．５、４７．５：１０：４０．８：１．７、又は好ましくは、４７．４：１０：４０．９：１．７ｍｏｌ％である。
本発明はまた、請求項１から１６のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子と、任意に、ｍＲＮＡ分子の用法及び用量に関する情報を含む指示書とを含むキットを提供する。
好ましい一実施形態では、本発明は、ヒトへの投与のための本発明のｍＲＮＡ分子又は本発明の医薬組成物を提供する。
更なる態様によれば、本発明は、癌の治療に使用するための本発明のｍＲＮＡ分子又は医薬組成物に関する。したがって、本発明は、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療するための方法を提供する。一実施形態では、癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃（胃臓）癌、精巣癌、甲状腺癌、又は子宮癌である固形腫瘍癌である。
特に好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、又は膵臓癌である。
別の好ましい実施形態では、肺癌は、非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、非小細胞肺癌は、扁平上皮癌、大細胞癌、又は腺癌である。別の好ましい実施形態では、非小細胞肺癌は、進行性及び／又は転移性非小細胞肺癌であり、更により好ましくは、切除不能及び／又は進行性の非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、非小細胞肺癌は、標準的な治療処置に対して抵抗性である進行性及び／又は転移性の非小細胞肺癌である。別の好ましい実施形態では、非小細胞肺癌は、非転移性の切除可能な非小細胞肺癌、又は残存病変がない外科的切除後の非小細胞肺癌、又は残存病変がない化学放射線療法後の化学放射線療法が適切な非小細胞肺癌である。
別の好ましい実施形態では、結腸直腸癌は、結腸癌又は直腸癌である。別の好ましい実施形態では、結腸直腸癌は、進行性及び／又は転移性の結腸直腸癌であり、更により好ましくは、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）又は非過剰変異性（ｎｏｎ－ｈｙｐｅｒｍｕｔａｔｅｄ）のマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）のいずれかを有する進行性及び／又は転移性の過剰変異癌である。別の好ましい実施形態では、結腸直腸癌は、切除可能な結腸直腸癌、化学放射線療法が適切な直腸癌又は化学放射線療法後の直腸癌、又はマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）、又は非過剰変異性のマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）のいずれかを伴う残存病変がない外科的切除後の結腸直腸癌である。
別の好ましい実施形態では、結腸直腸癌は、切除可能な結腸直腸癌、化学放射線療法が適切な直腸癌又は化学放射線療法後の直腸癌、又はマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）又は非過剰変異性のマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）のいずれかを伴う残存病変がない外科的切除後の結腸直腸癌である。別の好ましい実施形態では、膵臓癌は、膵臓癌である。別の好ましい実施形態では、膵臓癌は、進行性及び／又は転移性の膵臓癌である。別の好ましい実施形態では、膵臓癌は、切除可能な膵臓癌、又は化学放射線療法が適切な膵臓癌又は化学放射線療法後の膵臓癌、又は残存病変がない外科的切除後の膵臓癌である。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子が投与される対象は、腫瘍タイピングされている。一実施形態では、対象は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、又はＧ１３Ｄ変異のうちの１以上について腫瘍タイピングされている。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡが投与される対象は、ＨＬＡタイピングされている。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡが投与される対象は、腫瘍タイピング及びＨＬＡタイピングの両方がされている。
別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子が投与される対象は、腫瘍タイピングされていない。一実施形態では、対象は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、又はＧ１３Ｄ変異のうちの１以上について腫瘍タイピングされている。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡが投与される対象は、ＨＬＡタイピングされていない。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡが投与される対象は、腫瘍タイピングもＨＬＡタイピングもされていない。
本発明のｍＲＮＡ分子又は医薬組成物は、非経口的に、例えば、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、結節内、又は腹腔内に投与することができる。別の実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、筋肉内投与される。
したがって、更なる態様によれば、本発明は、特に癌の治療のための医薬として使用するための、本発明のｍＲＮＡ分子又は医薬組成物に関する。好ましい一実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、筋肉内投与される。別の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、皮下投与される。
本発明は更に、癌を治療するための医薬の製造における本発明のｍＲＮＡ分子又は医薬組成物の使用に関する。
別の好ましい実施形態では、本発明は、本発明のｍＲＮＡ分子の有効量を、１以上の抗腫瘍剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。抗腫瘍剤の非限定的な例としては、ラムシルマブ、ネシツムマブ、オララツマブ、ガルニセルチブ、アベマシクリブ、レゴラフェニブ、エルロチニブ、クリゾチニブ、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソームドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミド及びドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、ｎａｂ－パクリタキセル、注射用懸濁用パクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、及びイリノテカン）、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、オキサリプラチン、及びイリノテカン）、ペメトレキセド、ゲムシタビン、セツキシマブ、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ阻害剤、ＴＧＦベータ阻害剤、及びＴＧＦベータ受容体阻害剤が挙げられる。
別の好ましい実施形態では、本発明は、本発明のｍＲＮＡ分子の有効量を、１以上の癌免疫療法剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。癌免疫療法剤の非限定的な例としては、ニボルマブ、イピリムマブ、ピディリズマブ、ペムブロリズマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＬＹ３３０００５４（その重鎖及び軽鎖の配列は、国際公開第２０１７／０３４９１６号及び米国特許公開第２０１７／００５８０３３号明細書に、それぞれ配列番号１０及び１１として示されている）。
別の好ましい実施形態では、本発明は、本発明のｍＲＮＡ分子の有効量を、１以上の癌免疫療法剤と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせることなく投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
別の好ましい実施形態では、本発明は、本発明のｍＲＮＡ分子の有効量を、放射線療法と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
別の好ましい実施形態では、本発明は、本発明のｍＲＮＡ分子の有効量を、手術と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
本発明はまた、治療において使用するための本発明のｍＲＮＡ分子を提供する。
本発明はまた、癌の治療において使用するための本発明のｍＲＮＡ分子を提供する。好ましい一実施形態では、癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃臓癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、又は尿路上皮癌である固形腫瘍癌である。別の実施形態では、肺癌は、非小細胞肺癌である。
本発明はまた、癌の治療のための医薬の製造のための本発明のｍＲＮＡ分子を提供する。好ましい一実施形態では、癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃臓癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、又は尿路上皮癌である固形腫瘍癌である。別の実施形態では、肺癌は、非小細胞肺癌である。
一実施形態では、本発明に係るｍＲＮＡ分子又は医薬組成物が投与される対象は、以下から選択される腫瘍又は癌疾患を有する対象であり得る。
－非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、好ましくは進行性及び／又は転移性のＮＳＣＬＣ、更により好ましくは切除不能及び／又は進行性のＮＳＣＬＣ、
－結腸直腸癌（ＣＲＣ）、好ましくは進行性及び／又は転移性のＣＲＣ、更により好ましくは、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）又は非過剰変異性マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）のいずれかを有する進行性及び／又は転移性の過剰変異癌、又は
－膵臓癌、好ましくは進行性及び／又は転移性の膵臓癌、更により好ましくは切除不能及び／又は進行性の膵臓癌。
一実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子又は医薬組成物が投与される対象は、腫瘍又は癌疾患、好ましくは本明細書で定義される腫瘍又は癌疾患、より好ましくは非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、好ましくは進行性及び／又は転移性のＮＳＣＬＣ、更により好ましくは切除不能及び／又は進行性のＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、好ましくは結腸癌及び直腸癌、更により好ましくはマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）又は非過剰変異性のマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）のいずれかを有する進行性及び／又は転移性の過剰変異癌、又は膵臓癌、好ましくは膵臓腺癌からなる群から選択される疾患を有する、化学療法（例えば、一次化学療法又は二次化学療法）、放射線療法、化学放射線療法（化学療法と放射線療法との組合せ）、キナーゼ阻害剤、抗体療法及び／又はチェックポイントモジュレーター（例えば、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ－１経路阻害剤）が施された又は施される対象、又は前記処置の１以上が施された後、完全奏効、部分奏効、疾患の安定化を達成した対象であり得る。
いくつかの実施形態では、本発明に係るｍＲＮＡ分子又は医薬組成物が投与される対象は、腫瘍又は癌疾患、好ましくは本明細書で定義される腫瘍又は癌疾患、より好ましくは非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、好ましくは進行性及び／又は転移性のＮＳＣＬＣ、更により好ましくは切除不能及び／又は進行性のＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、好ましくは結腸癌及び直腸癌、又は膵臓癌、好ましくは膵臓腺癌からなる群から選択される疾患を有する、本明細書に記載のこれらの疾患のいずれかに従来使用されている化合物を投与された又は投与される対象であり得る。
いくつかの実施形態では、本発明に係るｍＲＮＡ分子又は医薬組成物が投与される対象は、腫瘍又は癌疾患、好ましくはＮＳＣＬＣ、より好ましくは進行性及び／又は転移性のＮＳＣＬＣを有する、以下の治療の少なくとも１つが施される又は施された対象であり得る。
－術前（ネオアジュバント化学療法）及び／又は術後（アジュバント）の化学療法、
－手術、又は好ましくは原発性腫瘍の初回手術、
－放射線治療、
－チェックポイントモジュレーターの単剤療法、好ましくはＣＴＬＡ４、ＰＤ１（ペムブロリズマブなど）、又はＰＤ－Ｌ１（ＬＹ３３０００５４など）を標的とする単剤療法、
－ＩＬ－１０又はペグ化ＩＬ－１０などのインターロイキンとの併用療法、
－好ましくはＣＴＬＡ４、ＰＤ１（ペムブロリズマブなど）、又はＰＤ－Ｌ１（ＬＹ３３０００５４など）を標的とするチェックポイントモジュレーターの化学療法との併用療法、
－シスプラチン又はカルボプラチンなどの化合物を使用する、好ましくはペメトレキセド又はゲムシタビンと組み合わせて使用する白金ベースの化学療法、
－抗体セツキシマブなどのＥＧＦＲシグナル伝達経路を標的とする化合物、又はエルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、又はオシメルチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤、
－クリゾチニブなどの化合物を使用する、ＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）及びＲＯＳ１（ｃ－ｒｏｓ癌遺伝子１）阻害剤として作用する化合物、又は
－抗体ベバシズマブなどの、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を標的とする化合物。
いくつかの実施形態では、本発明に係るｍＲＮＡ分子又は医薬組成物が投与される対象は、腫瘍又は癌疾患、好ましくはＣＲＣ（結腸直腸癌）、より好ましくはマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）又は非過剰変異性マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）癌のいずれかを有する進行性及び／又は転移性の過剰変異癌を有する、以下の治療の少なくとも１つが施される又は施された対象であり得る。
－手術、又は好ましくは原発性腫瘍の初回手術、
－化学療法、
－放射線療法、
－標的療法、
－免疫療法、
－手術、放射線療法、化学療法、標的療法、及び免疫療法の２つ以上の組合せ、
－術前（ネオアジュバント化学療法）及び／又は術後（アジュバント）化学療法、
－フルオロウラシル（５－ＦＵ、アドルシル）、カペシタビン（ゼローダ）、イリノテカン（カンプトサル）、オキサリプラチン（エロキサチン）、トリフルリジン／ティピラシル（ＴＡＳ－１０２、ロンサーフ）などの化合物を使用する化学療法、
－血管新生を停止又は低減させる化合物、例えば、ベバシズマブ（アバスチン）、
－上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を阻害する化合物、例えば、セツキシマブ（エルビタックス）又はパニツムマブ（ベクティビックス）、又は
－免疫チェックポイント、好ましくはＣＴＬＡ４、ＰＤ１、又はＰＤ－Ｌ１を標的とする化合物、例えば、ＰＤ－１受容体を標的とするペムブロリズマブ（キートルーダ）、ニボルマブ（オプジーボ）、又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＬＹ３３０００５４、
－ニボルマブとイピリムマブ（ヤーボイ）との併用。
いくつかの実施形態では、本発明に係るｍＲＮＡ分子又は医薬組成物が投与される対象は、腫瘍又は癌疾患、好ましくは膵臓癌、より好ましくは進行性及び／又は転移性の膵臓癌、より好ましくは膵臓腺癌を有する、以下の治療の少なくとも１つが施される又は施された対象であり得る。
－手術、又は好ましくは原発性腫瘍の初回手術、
－放射線療法、
－化学療法、
－手術、放射線療法、及び化学療法の組合せ、
－ＩＬ－１０又はペグ化ＩＬ－１０などのインターロイキンとの併用療法、
－術前（ネオアジュバント）及び／又は術後（アジュバント）の化学療法、
－ゲムシタビン又はフルオロウラシル（５－ＦＵ）、イリノテカン、オキサリプラチン、又はｎａｂ－パクリタキセルなどの化合物を使用する化学療法、
－エルロチニブなどの化合物を使用する、ＥＧＦＲシグナル伝達経路を標的とする化合物、
－ゲムシタビンとエルロチニブとの組合せ、
－プロトンポンプ阻害剤、Ｈ２アンタゴニスト、又はメトクロプラミドなどの化合物を使用する、消化器系をサポートする化合物、又は
－ペムブロリズマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、又はＬＹ３３０００５４などの免疫チェックポイントを標的とする化合物。
本発明のｍＲＮＡ分子若しくは医薬組成物又はキットは、当業者が臨床的に適切であると判断するレジメンによって、必要とする対象に投与することができる。
一実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約１、５、１０、２０、３０、４０、１００、３００、又は１０００μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約１μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約５μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約１０μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約２０μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約４０μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約１００μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約３００μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約１０００μｇの用量で対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＬＹ３３０００５４など）、又はペグ化ＩＬ－１０分子などの癌免疫療法剤と組み合わせて投与される。
一実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、３、４、５、６、１２、１８、又は２４ヶ月間の期間、対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、３ヶ月間の期間、対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、４ヶ月間の期間、対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、５ヶ月間の期間、対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、６ヶ月間の期間、対象に投与される。別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＬＹ３３０００５４）、又はペグ化ＩＬ－１０分子などの癌免疫療法剤と組み合わせて投与される。
別の実施形態では、本発明の１以上のｍＲＮＡ分子は、約１、５、１０、２０、３０、４０、１００、３００、又は１０００μｇの用量で、３、４、５、又は６ヶ月間の期間、対象に投与される。
本発明はまた、特に好ましくは医薬としての使用のための、ＣＴＬＡ４シグナルペプチドと、ＫＲＡＳバリアントペプチドと、ＰＡＤＲＥ由来Ｔヘルパーエピトープ配列と、ＣＴＬＡ４免疫応答活性化シグナル伝達タンパク質配列とを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子を提供する。好ましい実施形態では、ＫＲＡＳバリアントペプチドは、ＫＲＡＳバリアントペプチド配列の２９個の連続したアミノ酸残基を含む。
本発明はまた、癌の治療における使用のための、ＣＴＬＡ４シグナルペプチドと、ＫＲＡＳバリアントペプチドと、ＰＡＤＲＥ由来Ｔヘルパーエピトープ配列と、ＣＴＬＡ４免疫応答活性化シグナル伝達タンパク質配列とを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ分子を提供し、前記癌は、好ましくは固形腫瘍癌であり、特に好ましくは前記固形腫瘍癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃臓癌、精巣癌、甲状腺癌、又は子宮癌である。好ましい実施形態では、ＫＲＡＳバリアントペプチドは、ＫＲＡＳバリアントペプチド配列の２９個の連続したアミノ酸残基を含む。
更に好ましい態様において、本発明は、本発明のｍＲＮＡ分子又は医薬組成物、任意に液体ビヒクル、及び／又は任意にｍＲＮＡ分子又は組成物の適切な用法及び用量に関する情報を含む技術指示書を含むキットを提供する。
以下、本発明について詳細に記載するが、本発明は、本明細書に記載の特定の方法論、プロトコル、及び試薬に限定されず、これらは様々に変更し得ることことを理解すべきである。また、本明細書で使用される用語は、本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解すべきである。本明細書において特段の断りがない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語はいずれも、当業者によって通常理解される意味と同一の意味を有する。
本明細書及び以下の特許請求の範囲を通して、文脈上特段の求めがない限り、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載された部材、整数、又は工程を含み、記載されていない他の部材、整数、又は工程を除外しないことを意味すると理解される。用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」の特定の実施形態であり、他の記載されていない部材、整数、又は工程は除外される。本発明の文脈において、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」を包含する。したがって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなっていてもよく、追加の何かを含んでいてもよい。
用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」、並びに本発明の説明（特に、特許請求の範囲）において使用される同様の参照は、本明細書に指定されているか又は文脈上明示的に否定されていない限り、単数及び複数の両方を網羅すると解釈すべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、範囲内の各別個の値を個別に参照する簡易的な方法として機能することを意図する。本明細書において特に指定しない限り、各個別の値は、本明細書に個々に列挙されているかのように明細書に組み込まれる。明細書中のいずれの言語も、本発明の実施に必須の任意の請求されていない要素を示すと解釈されるべきではない。
数値ｘに関する用語「約」は、ｘ±１０％を意味する。
本発明においては、特段の断りがない限り、代替例及び実施形態の異なる特徴を互いに組み合わせることができる。
用語「ＨＬＡ」は、バリアントペプチドをＴ細胞受容体に提示する細胞表面分子であるヒト白血球抗原を意味する。用語「ＨＬＡタイピングされた対象」は、対象におけるヒト白血球抗原プロファイルが決定された対象を意味する。ＨＬＡタイプを決定する方法は、当業者によく知られており、例えば、Ｒａｊａｌｉｎｇａｍ Ｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ， Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ２０１０， ｐａｇｅｓ ３６７－３７９， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ； ａｎｄ Ｃｈｏｏ ＳＹ， Ｙｏｎｓｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ４８： １１ （２００７）に示されている。ＨＬＡ型を決定するための非限定的な方法としては、細胞タイピング、遺伝子シークエンシング、表現型タイピング、及びハプロタイピングが挙げられる。用語「ＨＬＡタイピングされた対象」及び用語「ヒト白血球抗原タイピングされた対象」は同義である。
ペプチド又はポリペプチドは、通常、ペプチド結合によって結合されたアミノ酸モノマーのポリマーである。通常、５０個未満のモノマー単位を含む。しかし、用語ペプチドは、５０個を超えるモノマー単位を有する分子を排除しない。長いペプチドはポリペプチドとも呼ばれ、通常、５０～６００個のモノマー単位を有する。
本明細書において、ＲＮＡは、リボ核酸を意味し、ｍＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡを意味する。本発明のｍＲＮＡは、固相ＲＮＡ合成などの化学合成及びＲＮＡインビトロ転写反応などのインビトロ法を含む当技術分野で知られた任意の方法を使用して調製することができる。好ましい実施形態では、人工ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡは、ＲＮＡインビトロ転写によって得られる。したがって、一実施形態では、本発明のＲＮＡは、インビトロ転写されたＲＮＡ、好ましくはインビトロ転写されたｍＲＮＡである。
用語「腫瘍タイピングされた対象」は、対象の腫瘍が示すＫＲＡＳ変異のタイプが決定された対象を意味する。一実施形態では、対象は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、又はＧ１３Ｄ変異のうちの１以上についてタイピングされている。ＫＲＡＳ腫瘍タイピングの方法は、当業者に知られている。例えば、Ｈｕｎｔｅｒ ＪＤ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １３： １３２５ （２０１５）、Ｐｒｉｏｒ ＩＡ， ｅｌ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１： ２４５７ （２０１２）、Ｔａｎ Ｃ ａｎｄ Ｄ Ｘｉａｎｇ， Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． １８： ５１７１ （２０１２）参照。
疾患の「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」又は「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、疾患を予防又は防御すること（即ち、臨床症状を発症させないこと）、疾患の抑制すること（即ち、臨床症状の発症の阻止又は抑制、及び／又は疾患の緩和（即ち、臨床症状を退行させること））を含む。
好ましい実施形態では、用語「対象」は、ヒトを意味する。
本発明は、ＫＲＡＳバリアントペプチドをコードするｍＲＮＡが取り込まれ、コードされたペプチドが処理され、変異体と野生型のＲＡＳ配列とを区別することができる既存のＴ細胞によって認識されるのに十分なレベルで抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって提示されるという知見に部分的に基づいている。Ｔ細胞の相互作用は、ＲＡＳ変異体腫瘍細胞を探し出し、殺滅することができる変異体ＲＡＳ特異的Ｔ細胞集団の増幅につながる。本発明は、ＭＨＣクラスＩ、特にＭＨＣクラスＩＩの経路と交差するエンドソーム経路に入るために、容易且つ反復的に内部移行される「高速リサイクリング」タンパク質として知られている細胞傷害性Ｔリンパ球タンパク質４（ＣＴＬＡ４）等の「ターゲティング」タンパク質のシグナル配列を利用する。ＫＲＡＳ由来の抗原を「ターゲティング」配列に融合させることにより、抗原は、標的細胞型とは独立して、ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩの処理コンパートメントに送られ、ＭＨＣＩ、特にＭＨＣＩＩの発現及び提示に影響を与えることができる。
その目的のために、ＫＲＡＳ由来の抗原／エピトープをコードするｍＲＮＡ分子を、適切な「ターゲティング」配列をコードする核酸配列と融合させる。「ターゲティング」配列は、典型的には、タンパク質の完全長アミノ酸配列、又は好ましくはその膜貫通（及び任意に細胞質）ドメインを、好ましくは適切なシグナルペプチドと共に含む又はからなる。ＫＲＡＳ由来の抗原をコードする核酸配列を、係る「ターゲティング」配列と融合させることにより、小胞体、エンドソーム、又はリソソームと同様に、ＫＲＡＳ由来の抗原／エピトープは、好ましくは、細胞膜に局在化され、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩの処理とローディングが行われる細胞コンパートメントにリサイクルされる。本明細書に示すターゲティング戦略は、免疫細胞の原形質膜に存在する免疫応答活性化シグナル伝達（ＩＲＳＴｅｐｍ）タンパク質のグループに由来するアミノ酸配列（特に、膜貫通ドメイン）によって与えられる高速リサイクル特性を利用する。バリアントペプチド又はタンパク質を原形質膜に効果的にルーティングし、そこでそれらの固定を行い、その後、融合したＩＲＳＴｅｐｍ由来タンパク質ドメインを介するＭＨＣプロセッシング及びローディング経路と交差する細胞コンパートメントにリサイクリングすることにより、レシピエント細胞におけるＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩによってコードされた抗原／エピトープの提示によって、核酸ベースのワクチンによる免疫原性エピトープ又は全抗原に対する抗原特異的免疫応答の誘導が、好ましくは上昇する。したがって、本明細書で提示されるターゲティングアプローチは、翻訳されたバリアントタンパク質又はペプチドを様々な輸送配列の融合を介して、エンドソーム／リソソームコンパートメントに直接導く現在の技術水準のアプローチの使用に代えて、膜結合ＩＲＳＴｅｐｍタンパク質の高速リサイクルの一般的経路を利用する。
用語「免疫応答活性化シグナル伝達」は、シグナルが受容体と相互作用し、セカンドメッセンジャー又は他の下流の標的のレベル又は活性の変化を引き起こし、最終的に、免疫応答の活性化又は永続化をもたらすプロセスのカスケードを意味する。
本明細書において、用語「（タンパク質／アミノ酸配列）バリアント」は、一般に、「配列バリアント」、即ち、レファレンス（又は「親」）タンパク質又は（ポリ）ペプチドのレファレンス（又は「親」）アミノ酸配列と少なくとも１つのアミノ酸残基が異なるアミノ酸配列を含むタンパク質又は（ポリ）ペプチドを意味する。「バリアント」タンパク質／（ポリ）ペプチドは、そのアミノ酸配列中に、そのそれぞれのレファレンス配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸の変異、置換、挿入、又は欠失を含む。
用語「ＫＲＡＳ由来のバリアントペプチド又はタンパク質」は、少なくとも１つの（機能的な）ＫＲＡＳエピトープ又はネオエピトープを提供することができる、（ポリ）ペプチドを意味する。ＫＲＡＳバリアントペプチド又はタンパク質は、野生型ＫＲＡＳペプチド又はタンパク質配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸残基の変異を示すものである。ＫＲＡＳＧ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及びＧ１３Ｄバリアントは、ＫＲＡＳバリアントペプチドに見られるＫＲＡＳバリアントの例である。
ＫＲＡＳ由来のバリアントペプチドは、選択されたドメイン又は高速リサイクリング免疫応答活性化シグナル伝達タンパク質ＣＴＬＡ４に由来する完全長タンパク質に融合される。シグナルペプチド及び膜貫通ドメインを含ませて、原形質膜の外部部位への輸送及び固定を最適化することができる。更に、適切なリンカーを含ませて、ＭＨＣクラスＩ及びクラスＩＩの各分子による免疫原性ペプチドの提示を容易にすることができる。Ｔヘルパー細胞エピトープを含ませて、コードされたＫＲＡＳ由来のエピトープに対する抗原特異的免疫応答の誘導を上昇させることができる。
用語「エピトープ」及び「ネオエピトープ」は、免疫系によって認識されるバリアントペプチド又はタンパク質（抗原）の一部又は断片を意味する。ネオエピトープは、疾患に特異的な標的として使用でき、疾患組織は、免疫監視を容易には逃れることができず、癌の場合には腫瘍制御が強化される。エピトープは、約５～約２０個又はそれ以上のアミノ酸を含み得る。エピトープは、「立体構造的」（又は「不連続」）、即ち、それらが由来するバリアントペプチド又はタンパク質のアミノ酸の不連続配列から構成されてもよいが、例えば、ＭＨＣ複合体の三次元構造においてまとまったもの（又は「線状」）、即ち、それらが由来するバリアントペプチド又はタンパク質のアミノ酸の連続配列からなっていてもよい。
本発明の好ましい実施形態によれば、ＫＲａｓ由来のバリアントペプチド又はタンパク質は、変異体ＫＲａｓに由来するネオエピトープを含む変異体ＫＲＡＳバリアントを含む又はからなる。変異体ＫＲａｓバリアントＧ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及びＧ１３Ｄの１以上に由来するネオエピトープが特に好ましい。
本発明の特に好ましい実施形態によれば、ｍＲＮＡ分子は、更に、少なくとも１つのシグナルペプチド、特に好ましくはＣＴＬＡ４に由来する少なくとも１つのシグナルペプチド、特にＣＴＬＡ４（ＮＭ＿００５２１４．４）のアミノ酸残基１～３５（配列番号３）の少なくとも１つのシグナルペプチドをコードし、これらのアミノ酸残基は、配列番号４、５、６、又は７の核酸配列のいずれかによってコードされる。
したがって、本発明のｍＲＮＡ分子は、配列番号３によって定義されるアミノ酸配列又はその断片、誘導体、又はバリアントを好ましくは含む又はからなる、少なくとも１つのシグナルペプチドをコードすることが好ましい。好ましくは、ＣＴＬＡ４に由来するシグナルペプチドをコードするｍＲＮＡ配列は、配列番号４、５、６、又は７のいずれに示される核酸配列を含む又はからなるが、配列番号５が特に好ましい。
本発明の特に好ましい実施形態によれば、ｍＲＮＡ分子は、更に、少なくとも１つの膜貫通ドメイン又はその一部、特に好ましくはＣＴＬＡ４に由来するもの、特にＣＴＬＡ４のアミノ酸残基１６２～２２３（配列番号４２）をコードし、これらのアミノ酸残基は、配列番号４３、４４、４５、４６、又は４７の核酸配列のいずれかによってコードされ得る。好ましい実施形態によれば、本発明に係るｍＲＮＡ分子の少なくとも１つのコード領域は、更に、少なくとも１つのリンカーをコードする。
用語「リンカー」は、ペプチドリンカー、即ち、典型的には短い（即ち、１～１５０アミノ酸、好ましくは１～５０アミノ酸、より好ましくは１～２０アミノ酸、更により好ましくは１５アミノ酸を含む）線状アミノ酸配列であり、２個のポリペプチド配列を接続又は連結する配列を意味する。好ましくは、リンカーは非免疫原性であり、即ち、免疫応答を誘発しない。リンカーは、本発明のｍＲＮＡ分子によってコードされるバリアント融合タンパク質の少なくとも２つの成分を接続又は連結するために用いられ得る。本発明に係るｍＲＮＡ分子のコード領域は、本明細書に記載されるように、少なくとも１つのリンカー、又は少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の同一又は異なる複数のリンカーをコードし得る。複数のリンカーがｍＲＮＡ分子によってコードされる場合、リンカーは、それらのアミノ酸配列及び／又はそれぞれのリンカーをコードする核酸配列が異なることが特に好ましい。
リンカーの非限定的な例は、国際公開第２００２／０１４４７８号、国際公開第２００１／００８６３６号、国際公開第２０１３／１７１５０５号、国際公開第２００８／０１７５１７号、及び国際公開第１９９７／０４７６４８号に開示されている。
好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ分子は、その少なくとも１つのコード領域において、好ましくは非免疫原性リンカー、好ましくは配列番号３５に係るアミノ酸配列を含む又はからなる非免疫原性リンカーである少なくとも１つのリンカーをコードする。
したがって、本発明のｍＲＮＡ分子は、好ましくは、その少なくとも１つのコード領域に、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、又は４１のいずれか、好ましくは配列番号３７、３８、又は３９のいずれかに係る核酸配列を含む又はからなる少なくとも１つの核酸配列を含む。
本発明の好ましい実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、更に、少なくとも１つのＴヘルパーエピトープをコードする。用語「Ｔヘルパーエピトープ」は、ＭＨＣ分子、好ましくはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができ、それによってＣＤ４＋Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞によって認識されるバリアント決定基を意味する。したがって、Ｔヘルパーエピトープは、ＣＤ４＋Ｔｈ細胞応答、ＣＴＬ応答（好ましくは、細胞性免疫の上昇及び、例えば抗腫瘍免疫応答の増強を含む）を誘導又は増強するために有利に使用され得る。
国際公開第９５／０７７０７号及びＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：７５１－７６１に記載される「ＰＡＤＲＥ」（ｐａｎＤＲエピトープペプチド）は、Ｃ末端及びＮ末端にＤアミノ酸を有する又は有さないが、本発明の文脈における好ましいＴヘルパーエピトープである。
好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ分子は、その少なくとも１つのコード領域において、少なくとも１つのＴヘルパーエピトープ、好ましくは配列番号３３をコードし、好ましくは配列番号３４のＲＮＡによってコードされる。
本発明に係るｍＲＮＡ分子は、モノシストロン性、バイシストロン性、又はマルチシストロン性であり得る。「バイシストロン性又はマルチシストロン性」ＲＮＡは、典型的には、２つ（バイシストロン性）又はそれ以上（マルチシストロン性）のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ分子は、「配列修飾」されていてもよく、即ち、以下に記載されるように、少なくとも１つの配列修飾を含んでいてもよい。
好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ分子は、そのグアノシン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含量を改変することにより、好ましくは少なくとも１つのコード配列のＧ／Ｃ含量を改変することにより、改変することができ、したがって安定化させることができる。
好ましい一実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子のリボソーム結合部位の環境におけるＡ／Ｕ含量は、そのそれぞれの野生型ｍＲＮＡのリボソーム結合部位の環境におけるＡ／Ｕ含量と比較して高い。この改変（リボソーム結合部位の周りの高いＡ／Ｕ含量）は、ｍＲＮＡ分子へのリボソーム結合の効率を高めることができる。リボソームのリボソーム結合部位（コザック配列）への効果的な結合は、本発明のｍＲＮＡ分子の効率的な翻訳という効果をもたらす。
好ましい一実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、不安定化させ得る配列エレメントに関して修飾することができる。特に、ｍＲＮＡ分子のコード配列及び／又は５’及び／又は３’非翻訳領域は、不安定化配列エレメントを含まないように、それぞれの野生型ｍＲＮＡ（又は他の野生型核酸）に対して修飾することができるが、修飾されたｍＲＮＡ分子のコードされたアミノ酸配列は、それぞれの野生型ｍＲＮＡに対して修飾されていないことが好ましい。
好ましい一実施形態では、本明細書に定義されるｍＲＮＡ分子は、いわゆる「５’キャップ」構造の付加によって修飾することができ、これは、本明細書に記載されるように、インビボでｍＲＮＡ分子を安定化させることが好ましい。更に、キャップ構造を含むｍＲＮＡは、インビボでの翻訳効率の上昇と自然免疫刺激の低下を特徴とする。「５’－キャップ」はエンティティであり、典型的には修飾ヌクレオチドエンティティであり、通常、成熟ｍＲＮＡの５’－末端を「キャップ」する。５’－キャップは、典型的には、修飾ヌクレオチド、特にグアニンヌクレオチドの誘導体によって形成され得る。好ましくは、５’－キャップは、５’－５’－三リン酸結合を介して５’－末端に結合する。５’－キャップはメチル化されていてもよく、例えば、ｍ７ＧｐｐｐＮであり、Ｎは、ｍＲＮＡの５’－キャップ、通常は、５’末端を有する核酸の末端５’ヌクレオチドである。５’－キャップ構造（例えば、ｍ７ＧｐｐｐＮ）は、ポリメラーゼＩＩによって転写されるｍＲＮＡに天然に存在する５’－キャップ構造であり、したがって、好ましくは、この文脈において「修飾された」ｍＲＮＡに含まれる修飾とはみなされない。したがって、用語「修飾された」ｍＲＮＡ分子は、５’－キャップ構造として、ｍ７ＧｐｐｐＮ、ＡＲＣＡ Ｃａｐ、Ｃａｐ１と、更に、本明細書に定義される少なくとも１つの更なる修飾を含むことができる。
５’－キャップは、５’－５’－三リン酸結合（例えば、下線が施された三リン酸結合：ｍ７ＧｐｐｐＮ）を使用して付加することができる。５’キャップ構造の更なる例としては、グリセリル、逆デオキシ脱塩基残基（部分）、４’，５’メチレンヌクレオチド、１－（ベータ－Ｄ－エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’－チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ－ヌクレオチド、アルファ－ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、トレオ－ペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’－セコヌクレオチド、非環式３，４－ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式３，５ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’－３’－反転ヌクレオチド部分、３’－３’－反転無塩基部分、３’－Ｔ－反転ヌクレオチド部分、３’－２’－反転無塩基部分、１，４－ブタンジオールホスフェート、３’－ホスホロアミデート、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’－ホスフェート、３’ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、又は架橋又は非架橋メチルホスホネート部分、ｃａｐ１（ｍ７Ｇの隣接ヌクレオチドのリボースのメチル化）、ｃａｐ２（ｍ７Ｇの２番目のヌクレオチド下流のリボースの更なるメチル化）、ｃａｐ３（ｍ７Ｇの３番目のヌクレオチド下流のリボースの更なるメチル化）、ｃａｐ４（ｍ７Ｇの４番目のヌクレオチド下流のリボースのメチル化）、ＡＲＣＡ（アンチリバースキャップアナログ、改変ＡＲＣＡ（例えば、ホスホチオエート修飾ＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１－メチル－グアノシン、２’－フルオロ－グアノシン、７－デアザ－グアノシン、８－オキソ－グアノシン、２－アミノ－グアノシン、ＬＮＡ－グアノシン、及び２－アジド－グアノシンが挙げられる。これらの修飾５’－キャップ構造は、本発明の文脈における少なくとも１つの「修飾」とみなすことができる。
したがって、好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡは、５’－キャップ構造、又は修飾された５’－キャップ構造を含むことができる。好ましくは、ｍＲＮＡ分子は、ｍ７ＧｐｐｐＮ、ＡＲＣＡ Ｃａｐ、又はＣａｐ１から選択される５’－Ｃａｐ構造を含むことができる。
好ましい実施形態では、５’－キャップ構造は、本明細書に定義されるＲＮＡインビトロ転写反応において、本明細書に定義されるキャップアナログを使用して、共転写により適切に付加することができる。本発明の文脈における好ましいキャップアナログは、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（ｍ７Ｇ）又は３’－Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇである。本発明の文脈における更に好ましいキャップアナログは、共転写により生成するｃａｐ１構造を生成するｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）（２’ＯＭｅＡ）ｐＧ又はｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）（２’ＯＭｅＧ）ｐＧである（例えば、ＣｌｅａｎＣａｐ（登録商標））。
好ましい一実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、ｃａｐ１構造を含み、前記ｃａｐ１構造は、共転写キャッピングによって得られる。ｃａｐ１構造を含むｍＲＮＡは、翻訳効率の上昇及び自然免疫系の刺激の低下を含む、本発明の文脈においていくつかの有利な特徴を有する。
更に好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ分子は、ポリ（Ａ）配列を含むことができる。「ポリ（Ａ）テール」又は「３’－ポリ（Ａ）テール」とも呼ばれる「ポリ（Ａ）配列」は、典型的には、アデノシンヌクレオチドの配列、例えば、最大約４００個のアデノシンヌクレオチドの配列、例えば、約２０～約４００個、好ましくは約５０～約４００個、より好ましくは約５０～約３００個、更により好ましくは約５０～約２５０個、最も好ましくは約６０～約２５０個のアデノシンヌクレオチドの配列であると理解される。本明細書において、ポリ（Ａ）配列は、約１０～２００個のアデノシンヌクレオチド、好ましくは約１０～１００個のアデノシンヌクレオチド、より好ましくは約４０～８０個のアデノシンヌクレオチド、又は更により好ましくは約５０～７０個のアデノシンヌクレオチドも含むことができる。ポリ（Ａ）配列は、通常、ＲＮＡ、特にｍＲＮＡの３’末端に位置する。
好ましい一実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、その３’末端に、典型的には約１０～２００個のアデノシンヌクレオチド、好ましくは約１０～１００個のアデノシンヌクレオチド、より好ましくは約４０～８０個のアデノシンヌクレオチド、又は更により好ましくは約５０～７０個のアデノシンヌクレオチドを含むことができる。
好ましい実施形態では、３’末端（例えば、本明細書で定義される３’ＵＴＲの下流）に位置する適切なポリ（Ａ）配列は、１０～５００個のアデノシンヌクレオチド、１０～２００個のアデノシンヌクレオチド、４０～２００個のアデノシンヌクレオチド、４０～１５０個のアデノシンヌクレオチド、又は３０～１５０個のアデノシンヌクレオチドを含む。特に好ましい実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、約６４個のアデノシンヌクレオチドを含む。更に特に好ましい実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、約７５個のアデノシンヌクレオチドを含む。別の好ましい実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、約１００個のアデノシンヌクレオチドを含む。
好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ分子は、典型的には、約１０～２００個のシトシンヌクレオチド、好ましくは約１０～１００個のシトシンヌクレオチド、より好ましくは約２０～７０個のシトシンヌクレオチド、又は更により好ましくは約２０～６０個又は更に１０～４０個のシトシンヌクレオチドのポリ（Ｃ）テールを３’末端に含むことができる。特に好ましい実施形態では、ポリ（Ｃ）配列は、約３０個のシトシンヌクレオチドを含む。
本明細書において、用語「ポリ（Ｃ）配列」は、当業者によって認識、理解され、例えば、典型的には、ＲＮＡの３’末端に位置する、最大約２００個のシトシンヌクレオチドのシトシンヌクレオチド配列であることが意図される。本発明の文脈において、ポリ（Ｃ）配列は、例えば転写によるＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡの生成のための鋳型（ＤＮＡテンプレート（例えば、プラスミドＤＮＡ又はＰＣＲ産物））として機能するＤＮＡなど、ｍＲＮＡ又は任意の他の核酸分子内に位置することができる。
特に好ましい実施形態では、本発明のコーディングＲＮＡは、本明細書で定義されるポリ（Ａ）配列、好ましくは３’末端に（正確に）位置する１００個のアデノシンヌクレオチドを含み、ポリ（Ｃ）配列を含まない。
好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ分子は、少なくとも１つの５’－及び／又は３’－ＵＴＲエレメントを含むことができる。「ＵＴＲエレメント」は、任意の天然の遺伝子の５’－又は３’－ＵＴＲに由来する又は遺伝子の５’－又は３’－ＵＴＲの断片、ホモログ、又はバリアントに核酸配列を含む又はからなる。
好ましい一実施形態では、本発明に係るｍＲＮＡ分子のコード領域は、本明細書に定義される５’ＵＴＲエレメントの下流及び／又は本明細書で定義される３’ＵＴＲエレメントの上流に位置することができる。好ましくは、本発明に係るｍＲＮＡ分子が少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメント及び少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントを含む場合、コード領域は、少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントと少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントとの間に位置することができる。
好ましくは、本発明のｍＲＮＡ分子は、遺伝子、好ましくはアルファグロビン遺伝子に由来する３’ＵＴＲエレメントを含むことができる。配列番号１の３’ＵＴＲエレメントが特に好ましい。
好ましい実施形態では、本発明の第１の態様のｍＲＮＡ分子は、少なくとも１つのヒストンステムループを含む。
本明細書において、用語「ヒストンステムループ」は、当業者によって認識、理解され、例えば、主にヒストンｍＲＮＡに存在する核酸配列を意味することが意図される。特に好ましいヒストンステムループ配列は、配列番号２によってコードされる。好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、配列番号５８～７２のいずれかに示されるＲＮＡ配列を含む又はからなる。特に好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、配列番号６３、６４、６５、６６、又は６７のいずれかに示されるＲＮＡ配列を含む又はからなる。いくつかの実施形態では、本発明のコーディングＲＮＡは、３’末端配列エレメントを含む。前記３’末端配列エレメントは、ポリ（Ａ）配列と、ヒストンステムループ配列とを含み、前記配列エレメントは、本発明のＲＮＡの３’末端（正確に３’末端）に位置する。特に好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、配列番号７３～１１２のいずれかに示されるＲＮＡ配列を含む又はからなる。
好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ分子は、「ネイキッド」の形態で、即ち、ｍＲＮＡ分子及び任意の他の核酸のトランスフェクション効率及び／又は免疫刺激特性を上昇させるための、更なるビヒクル、トランスフェクション又は複合体形成剤と会合されずに提供することができる。
好ましい一実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、組成物中に提供することができる。したがって、更なる態様において、本発明は、本発明に係る少なくとも１つのｍＲＮＡ分子と、任意に担体とを含む組成物を提供する。その中で、少なくとも１つのｍＲＮＡ分子は、ｍＲＮＡ分子のトランスフェクション及び／又は免疫刺激特性を上昇させるための、好適なビヒクル、トランスフェクション又は複合体形成剤と会合することができる。任意に、組成物は、以下に更に詳細に記載するように、医薬組成物であることができる。
本発明のｍＲＮＡ分子は、１以上の（ポリ）カチオン性化合物、好ましくは（ポリ）カチオン性ポリマー、（ポリ）カチオン性ペプチド又はタンパク質、例えば、プロタミン、（ポリ）カチオン性多糖、及び／又は［（ポリ）カチオン性］脂質と複合体化又は会合することができる。本明細書に記載の他の核酸も脂質と複合体を形成することによって、リポプレックス、リポソーム、又は好ましくは脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成する。
好ましい実施形態によれば、医薬組成物のｍＲＮＡ分子は、１以上の脂質と複合体を形成することによって、リポプレックス、リポソーム、又は好ましくは脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成することができる。
したがって、医薬組成物のｍＲＮＡ分子は、脂質ベースの製剤の形態で提供することができる。「ＬＮＰ」とも呼ばれる「脂質ナノ粒子」という用語は、特定の形態に限定されず、カチオン性脂質及び任意に１以上の更なる脂質が、例えば、水性環境及び／又はＲＮＡの存在下で組み合わされたときに生成される形態を含む。好ましくは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）という用語は、「リポソーム」、「脂質複合体」、及び「リポプレックス」という用語を含むと理解される。
本発明の文脈において、本明細書に記載の任意の他の核酸、例えば、免疫刺激性核酸などは、１以上の脂質と複合体を形成することによって、本発明の文脈において記載されるリポプレックス、リポソーム、又は好ましくは脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成することができることも想定される。更に、リポプレックス、リポソーム、又は好ましくは脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、本発明のｍＲＮＡ分子と、更に、本明細書に記載の任意の他の核酸とを含むことができる。
医薬組成物のｍＲＮＡ分子は、脂質（特にカチオン性及び／又は中性脂質）と複合体化又は会合して、１以上の脂質ナノ粒子を形成することができる。好ましくは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、（ａ）本発明の少なくとも１つのｍＲＮＡ分子、（ｂ）カチオン性脂質、（ｃ）凝集低減剤（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）脂質又はＰＥＧ修飾脂質など）、（ｄ）任意に、非カチオン性脂質（中性脂質など）、及び（ｅ）任意に、ステロールを含む。特に、ＬＮＰは、本発明の少なくとも１つのｍＲＮＡ分子に加えて、（ｉ）少なくとも１つのカチオン性脂質、（ｉｉ）中性脂質、（ｉｉｉ）ステロール、例えば、コレステロール、及び（ｉｖ）ＰＥＧ修飾脂質を含み、好ましくは約２０～６０％のカチオン性脂質：５～２５％の中性脂質：２５～５５％のステロール：０．５～１５％のＰＥＧ脂質のモル比で含む。
ＬＮＰは、通常、カチオン性脂質と、中性脂質、荷電脂質、ステロイド、及びポリマーコンジュゲート脂質（例えば、ペグ化脂質）から選択される１以上の賦形剤とを含む。本発明のｍＲＮＡ分子は、ＬＮＰの脂質部分、又はＬＮＰの一部又は全体の脂質部分によって囲まれた水性空間にカプセル化され得る。本発明のｍＲＮＡ分子は、ＬＮＰと会合、複合体化することもできる。ＬＮＰは、核酸が結合する粒子を形成することができる脂質、又は１以上の核酸がカプセル化された脂質を含むことができる。好ましくは、ＬＮＰは、１以上カチオン性脂質と、１以上の安定化脂質とを含む。安定化脂質は、中性脂質とペグ化脂質を含む。
ＬＮＰのカチオン性脂質は、カチオン化可能、即ち、脂質のイオン化可能基のｐＫ未満にｐＨが低下するとプロトン化されるが、より高いｐＨ値では次第により中性になる。ｐＫ未満のｐＨ値では、脂質は、負に帯電した核酸と会合することができる。特定の実施形態では、カチオン性脂質は、ｐＨ低下時に正電荷を帯びる両性イオン性脂質を含む。
（ｉ）カチオン性脂質
ＬＮＰは、脂質ナノ粒子を形成するのに適した任意のカチオン性脂質を含むことができる。好ましくは、カチオン性脂質は、ほぼ生理学的ｐＨで正味の正電荷を有する。
カチオン性脂質は、アミノ脂質であることができる。本明細書において、用語「アミノ脂質」は、１以上の脂肪酸又は脂肪アルキル鎖と、プロトン化されて生理学的ｐＨでカチオン性脂質を形成し得るアミノ頭部基（ａｍｉｎｏ ｈｅａｄ ｇｒｏｕｐ）（アルキルアミノ又はジアルキルアミノ基を含む）とを有する脂質を含むことが意図される。
カチオン性脂質は、例えば、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、１，２－ジオレオイルトリメチルアンモニウムプロパンクロリド（ＤＯＴＡＰ）（Ｎ－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド及び１，２－ジオレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパンクロリド塩としても知られる）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、１，２－ジ－イリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（γ－ＤＬｅｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルカルバモイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｃ－ＤＡＰ）、１，２－ジリノレイオキシ－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイオキシ－３－モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、１－リノレイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）又は３－（Ｎ，Ｎ－ジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオ（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）又はそのアナログ、（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）テトラヒドロ－３ａＨ－シクロペンタ－［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－アミン、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＭＣ３）、１，１’－（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチルアザンジイル）－ジドデカン－２－オール（Ｃ１２－２００）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ２－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－Ｍ－Ｃ３－ＤＭＡ）、３－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３ｌＺ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミン（ＭＣ３エーテル）、４－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－ブタン－１－アミン（ＭＣ４エーテル）、又は前記のいずれかの組合せであることができる。
他のカチオン性脂質としては、限定されるものではないが、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、３Ｐ－（Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル）コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ－２－（スペルミン－カルボキサミド）エチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、ジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン（ＤＯＧＳ）、１，２－ジレオイル－ｓｎ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ－（１，２－ジミリスチルオキシプロピル－３－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、及び２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＸＴＣ）が挙げられる。更に、例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（ＤＯＴＭＡ及びＤＯＰＥを含む、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから入手可能）、及びＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（ＤＯＳＰＡ及びＤＯＰＥを含む、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから入手可能）などのカチオン性脂質の市販調製物を使用することができる。
他の好適なカチオン性脂質は、国際公開第０９／０８６５５８号、同第０９／１２７０６０号、同第１０／０４８５３６号、同第１０／０５４４０６号、同第１０／０８８５３７号、同第１０／１２９７０９号、及び同第２０１１／１５３４９３号、米国特許公開第２０１１／０２５６１７５号明細書、同第２０１２／０１２８７６０号明細書、及び同第２０１２／００２７８０３号明細書、米国特許第８，１５８，６０１号明細書、並びにＬｏｖｅら，ＰＮＡＳ，１０７（５），１８６４－６９，２０１０に開示されている。
いくつかの実施形態では、脂質は、９８Ｎ１２－５、Ｃ１２－２００、及びｃｋｋ－Ｅ１２からなる群から選択される。
一実施形態では、更なるカチオン性脂質は、アミノ脂質である。代表的なアミノ脂質としては、限定されるものではないが、１，２－ジリノレイオキシ－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイオキシ－３モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、３－（Ｎ，Ｎジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、及び２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ジリノレイル－メチル－４－ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、ＭＣ３（ＵＳ２０１００３２４１２０）が挙げられる。
一実施形態では、少なくとも１つのｍＲＮＡ分子は、アミノアルコールリピドイド中で製することができる。本発明において使用できるアミノアルコールリピドイドは、米国特許第８，４５０，２９８号明細書に記載の方法により製造することができる。好適な（イオン化可能な）脂質は、表１、表２、及び表３に開示され、国際公開第２０１７／０７５５３１Ａ１号の請求項１から２４に定義される化合物であってもよい。
別の実施形態では、イオン化可能な脂質は、国際公開第２０１５／０７４０８５Ａ１号に開示される化合物（即ち、ＡＴＸ－００１～ＡＴＸ－０３２又は請求項１から２６に特定される化合物）、米国出願第６１／９０５，７２４号明細書及び同第１５／６１４，４９９号明細書又は米国特許第９，５９３，０７７号明細書及び同第９，５６７，２９６号明細書に開示される化合物であってもよい。
その文脈においては、一般式（ＬＮＰ－Ｉ）に由来する任意の脂質又はその薬学的に許容される塩を好適に用いることができる。
Figure 2022511977000006
 式中、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なっており、それぞれ、１～９個の炭素からなる直鎖又は分枝状のアルキル、２～１１個の炭素からなるアルケニル又はアルキニルであり、Ｌ１及びＬ２は、同一又は異なっており、それぞれ、５～１８個の炭素からなる直鎖アルキレン又はアルケニレンである、又はＮと複素環を形成し、Ｘ１は、結合である、又は－ＣＯ－Ｏ－であることにより－Ｌ２－ＣＯ－Ｏ－Ｒ２が形成され、Ｘ２は、Ｓ又はＯであり、Ｌ３は、結合である、又は１～６個の炭素からなる直鎖又は分枝状のアルキレン、又はＮと複素環を形成し、Ｒ３は、１～６個の炭素からなる直鎖又は分枝状のアルキレンであり、Ｒ４及びＲ５は、同一又は異なっており、それぞれ、水素又は１～６個の炭素からなる直鎖又は分枝状のアルキルである。
他の実施形態では、好適なカチオン性脂質は、国際公開第２０１７／１１７５３０Ａ１号に開示されている化合物（即ち、脂質１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は請求項に特定される化合物）であってもよい。
その文脈においては、一般式（ＬＮＰ－ＩＩ）：
Figure 2022511977000007
 に由来する任意の脂質又はその薬学的に許容される塩である。
式中、
Ｘは、直鎖又は分岐状のアルキレン又はアルケニレン、単環式、二環式、又は三環式のアレーン又はヘテロアレーンであり、
Ｙは、結合、エテン、又は非置換若しくは置換された芳香環又は複素芳香環であり、Ｚは、Ｓ又はＯであり、
Ｌは、炭素数が１～６の直鎖又は分枝状のアルキレンであり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、炭素数が１～６の直鎖又は分枝状のアルキルであり、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、炭素数が１～２０の直鎖又は分枝状のアルキル又はアルケニルであり、ｒは、０～６であり、
ｍ、ｎ、ｐ、及びｑは、独立して、１～１８であり、
ｎ＝ｑ、ｍ＝ｐ、及びＲ１＝Ｒ２であるとき、Ｘ及びＹは異なり、
Ｘ＝Ｙ、ｎ＝ｑ、ｍ＝ｐであるとき、Ｒ１及びＲ２は異なり、
Ｘ＝Ｙ、ｎ＝ｑ、及びＲ１＝Ｒ２であるとき、ｍ及びｐは異なり、
Ｘ＝Ｙ、ｍ＝ｐ、及びＲ１＝Ｒ２であるとき、ｎ及びｑは異なる。
好ましい実施形態では、Ｘが、結合、直鎖又は分枝状のアルキレン、アルケニレン、又は単環式、二環式、又は三環式アレーン又はヘテロアレーンであり、Ｙが、単環式、二環式、又は三環式アレーン又はヘテロアレーンであり、Ｚが、Ｓ又はＯであり、Ｌが、炭素数が１～６の直鎖又は分枝状のアルキレンであり、Ｒ３及びＲ４が、独立して、炭素数が１～６の直鎖又は分枝状のアルキルであり、Ｒ１及びＲ２が、独立して、炭素数が１～２０の直鎖又は分岐状のアルキル又はアルケニルであり、ｒが、０～６であり、ｍ、ｎ、ｐ、及びｑが、独立して、１～１８である式（ＬＮＰ－ＩＩ）に由来する脂質又はその薬学的に許容される塩を好適に用いることができる。
好ましい実施形態では、イオン化可能な脂質は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０７７５１７に開示される脂質化合物（即ち、ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０７７５１７の式Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩに由来する脂質化合物、又はＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０７７５１７の請求項１から１２に特定される脂質化合物）（ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０７７５１７の開示）から選択してもよい。その文脈においては、ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０７７５１７の表７に開示されている脂質化合物（例えば、式Ｉ－１～Ｉ－４１に由来する脂質化合物）及びＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０７７５１７の表８に開示されている脂質化合物（例えば、式ＩＩ－１～ＩＩ－３６）が、本発明の文脈において好適に用いることができる。（したがって、ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０７７５１７の式Ｉ－１～式Ｉ－４１及び式ＩＩ－１～式ＩＩ－３６、及びそれに関連する具体的な開示）。
特に好ましい実施形態では、好適な脂質は、式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）：
Figure 2022511977000008
 に係るカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩、互変異性体、プロドラッグ、若しくは立体異性体であることができる。
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｌ１、Ｌ２、Ｇ１、Ｇ２、及びＧ３は、以下の通りである。
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）は、更に、以下のように定義される：
Ｌ１又はＬ２の一方が、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、又は－ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｌ１又はＬ２の他方が、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、若しくは－ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ－、又は直接結合であり、
Ｇ１及びＧ２は、それぞれ独立して、非置換のＣ１－Ｃ１２アルキレン又はＣ１－Ｃ１２アルケニレンであり、
Ｇ３は、Ｃ１－Ｃ２４アルキレン、Ｃ１－Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ３－Ｃ８シクロアルケニレンであり、
Ｒａは、Ｈ又はＣ１－Ｃ１２アルキルであり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｃ６－Ｃ２４アルキル又はＣ６－Ｃ２４アルケニルであり、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＲ５、ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４、又は－ＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４であり、
Ｒ４は、Ｃ１－Ｃ１２アルキルであり、
Ｒ５は、Ｈ又はＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｘは、０、１、又は２である。
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述の実施形態のいくつかでは、脂質は、以下の構造（ＬＮＰ－ＩＩＩＡ）又は（ＬＮＰ－ＩＩＩＢ）のいずれかを有する。
Figure 2022511977000009
 式中、
Ａは、３～８員のシクロアルキル又はシクロアルキレン環であり、Ｒ６は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、又はＣ１－Ｃ２４アルキルであり、ｎは、１～１５の整数である。
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述の実施形態のいくつかでは、脂質は、構造（ＬＮＰ－ＩＩＩＡ）を有し、他の実施形態では、脂質は、構造（ＬＮＰ－ＩＩＩＢ）を有する。
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の他の実施形態では、脂質は、以下の構造（ＬＮＰ－ＩＩＩＣ）又は（ＬＮＰ－ＩＩＩＤ）のいずれかを有する。
Figure 2022511977000010
 式中、ｙ及びｚは、それぞれ独立して、１～１２の整数である。
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述の実施形態のいずれかでは、Ｌ１又はＬ２の一方は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ－Ｏ（Ｃ＝０）－である。前記いずれかのいくつかの異なる実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－又は－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、それぞれ－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－である。
好ましい実施形態では、ＬＮＰのカチオン性脂質は、
Ｌ１及びＬ２が、それぞれ独立して－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－又は（Ｃ＝Ｏ）－Ｏ－であり、
Ｇ３が、Ｃ１－Ｃ２４アルキレン又はＣ１－Ｃ２４アルケニレンであり、
Ｒ３が、Ｈ又はＯＲ５である式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の化合物である。
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）のいくつかの異なる実施形態では、脂質は、以下の構造（ＬＮＰ－ＩＩＩＥ）又は（ＬＮＰ－ＩＩＩＦ）のいずれかを有する。
Figure 2022511977000011
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述の実施形態のいくつかでは、脂質は、以下の構造（ＬＮＰ－ＩＩＩＧ）、（ＬＮＰ－ＩＩＩＨ）、（ＬＮＰ－ＩＩＩＩ）、又は（ＬＮＰ－ＩＩＩＪ）のいずれかを有する。
Figure 2022511977000012
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述の実施形態のいくつかでは、ｎは、２～１２、例えば、２～８又は２～４の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、３、４、５、又は６である。いくつかの実施形態では、ｎは、３である。いくつかの実施形態では、ｎは、４である。いくつかの実施形態では、ｎは、５である。いくつかの実施形態では、ｎは、６である。式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述のいくつかの他の実施形態では、ｙ及びｚは、それぞれ独立して、２～１０の整数である。例えば、いくつかの実施形態では、ｙ及びｚは、それぞれ独立して、４～９又は４～６の整数である。式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述の実施形態のいくつかでは、Ｒ６は、Ｈである。前述の他の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ１－Ｃ２４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ６は、ＯＨである。式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）のいくつかの実施形態では、Ｇ３は、非置換である。他の実施形態では、Ｇ３は、置換されている。様々な異なる実施形態では、Ｇ３は、直鎖Ｃ１～Ｃ２４アルキレン又は直鎖Ｃ１～Ｃ２４アルケニレンである。式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述した実施形態の他のいくつかでは、Ｒ１若しくはＲ２又は両方は、Ｃ６～Ｃ２４アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、以下の構造を有する。
Figure 2022511977000013
 式中、
Ｒ７ａ及びＲ７ｂは、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１－Ｃ１２アルキルであり、ａは、２～１２の整数であり、Ｒ７ａ、Ｒ７ｂ、及びａは、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して６～２０個の炭素原子を含むようにそれぞれ選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ａは、５から９又は８から１２の整数である。式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述の実施形態のいくつかでは、Ｒ７ａの少なくとも１つは、Ｈである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７ａは、いずれもＨである。前記の他の異なる実施形態では、Ｒ７ｂの少なくとも１つは、Ｃ１～Ｃ８アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｃ１～Ｃ８アルキルは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ヘキシル、又はｎ－オクチルである。
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の異なる実施形態では、Ｒ１若しくはＲ２又は両方は、以下の構造のいずれかを有する。
Figure 2022511977000014
好ましい実施形態では、ＬＮＰのカチオン性脂質は、式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の化合物であり、
式中
Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－又は（Ｃ＝Ｏ）－Ｏ－であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、以下の構造のいずれかを有する。
Figure 2022511977000015
式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の前述の実施形態のいくつかでは、Ｒ３は、ＯＨ、ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４、又は－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ４である。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、メチル又はエチルである。
好ましい実施形態では、ＬＮＰのカチオン性脂質は、Ｒ３がＯＨである式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の化合物である。
特に好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡは、１以上の脂質と複合体を形成することによって、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成し、ＬＮＰは、構造（ＬＮＰ－ＩＩＩ－１）～（ＬＮＰ－ＩＩＩ－３６）（本明細書中の表４）から選択される。
Figure 2022511977000016
Figure 2022511977000017
Figure 2022511977000018
Figure 2022511977000019
Figure 2022511977000020
Figure 2022511977000021
好ましい実施形態では、ＬＮＰは、式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の脂質と、本発明の少なくとも１つのｍＲＮＡ分子と、中性脂質、ステロイド、及びペグ化脂質から好ましくは選択される１以上の賦形剤とを含む。特に好ましい実施形態では、式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の脂質は、化合物（ＬＮＰ－ＩＩＩ－３）である。いくつかの実施形態では、式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の脂質は、化合物（ＬＮＰ－ＩＩＩ－７）である。
別の好ましい実施形態では、ＬＮＰは、以下から選択されるカチオン性脂質を含む。
Figure 2022511977000022
特に好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡは、１以上の脂質と複合体を形成することによって、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成し、ＬＮＰは、以下のカチオン性脂質（表４の式ＬＮＰ－ＩＩＩ－３に係る脂質）を含む。
Figure 2022511977000023
好ましい一実施形態では、本明細書に定義されるカチオン性脂質、好ましくは表４に開示されるカチオン性脂質、より好ましくはカチオン性脂質化合物ＬＮＰ－ＩＩＩ－３は、ＬＮＰ中に、ＬＮＰの合計脂質含有量に対して約３０～約９５モルパーセントの量で存在する。１超のカチオン性脂質がＬＮＰ内に含有される場合、係るパーセンテージは、合計したカチオン性脂質に適用される。
別の好ましい実施形態では、カチオン性脂質は、ＬＮＰ中に、約３０～約７０モルパーセントの量で存在する。一実施形態では、カチオン性脂質は、ＬＮＰ中に、約４０～約６０モルパーセント、例えば、それぞれ約４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、又は６０モルパーセントの量で存在する。実施形態では、カチオン性脂質は、ＬＮＰ中に、約４７～約４８モルパーセント、例えば、それぞれ約４７．０、４７．１、４７．２、４７．３、４７．４、４７．５、４７．６、４７．７、４７．８、４７．９、５０．０モルパーセントの量で存在し、４７．７モルパーセントが特に好ましい。
カチオン性脂質は、ＬＮＰ中に存在する合計脂質の約２０ｍｏｌ％～約７０若しくは７５ｍｏｌ％、又は約４５～約６５ｍｏｌ％、又は約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は約７０ｍｏｌ％の比で存在し得る。更なる実施形態では、ＬＮＰは、カチオン性脂質のモル基準で約２５％～約７５％、例えば、モル基準で、約２０～約７０％、約３５～約６５％、約４５～約６５％、約６０％、約５７．５％、約５７．１％、約５０％、又は約４０％（脂質ナノ粒子中の脂質の合計モル数１００％に基づく）含む。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質の核酸、好ましくは本発明のｍＲＮＡに対する比は、約３～約１５、例えば、約５～約１３又は約７～約１１である。好ましい一実施形態では、カチオン性脂質の核酸、好ましくは本発明のｍＲＮＡに対する比が約６である。
好ましい一実施形態では、ＬＮＰは、前記の任意の脂質の組合せ又は混合物を含む。
好ましい一実施形態では、本明細書に定義されるアミノ又はカチオン性脂質は、少なくとも１つのプロトン化可能又は脱プロトン化可能な基を有し、脂質は、生理学的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）以下のｐＨで正に帯電し、第２のｐＨ、好ましくは生理学的ｐＨ以上では中性である。言うまでもなく、ｐＨの関数としてのプロトンの付加又は除去は、平衡プロセスであり、荷電脂質又は中性脂質との言及は、優勢な種の性質を意味し、脂質の全てが荷電又は中性の形態で存在する必要があることを求めるものではないことが理解される。１超のプロトン化可能又は脱プロトン化可能な基を有する脂質、又は両性イオンである脂質は排除されず、本発明の文脈において同様に好適であり得る。
好ましい一実施形態では、プロトン化可能な脂質において、プロトン化可能な基のｐＫａが約４～約１１であり、例えば、ｐＫａが約５～約７である。
ＬＮＰは、２以上の（異なる）カチオン性脂質を含み得る。カチオン性脂質は、様々な有利な性質に寄与するように選択することができる。例えば、アミンｐＫａ、化学的安定性、循環半減期、組織中半減期、組織中の正味の蓄積、又は毒性などの性質が異なるカチオン性脂質を、ＬＮＰに使用することができる。特に、混合されたＬＮＰの性質が個々の脂質の単一ＬＮＰの性質よりも望ましいように、カチオン性脂質を選択することができる。
永続的にカチオン性の脂質又はリピドイドの量は、核酸カーゴの量を考慮して選択することができる。一実施形態では、これらの量は、ナノ粒子又は組成物のＮ／Ｐ比が約０．１～約２０の範囲になるように選択される。この文脈においては、Ｎ／Ｐ比は、カーゴとして使用されるＲＮＡのリン酸基（「Ｐ」）に対する、脂質又はリピドイドの塩基性窒素含有基の窒素原子（「Ｎ」）のモル比として定義される。Ｎ／Ｐ比は、例えば、ＲＮＡが塩基の統計学的分布を示すという条件で、例えば、１μｇのＲＮＡが、典型的には、約３ｎｍｏｌのリン酸残基を含むことに基づいて計算することができる。脂質又はリピドイドの「Ｎ」値は、その分子量と、永続的なカチオン性基及び、存在する場合には、カチオン化可能基の相対含有量に基づいて計算することができる。
ＬＮＰのインビボでの性質及び挙動は、親水性ポリマーコーティング、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を加えることによって変更することができ、ＬＮＰ表面に立体安定性を付与する。更に、ＬＮＰは、リガンド（例えば、抗体、ペプチド、及び炭水化物）を、その表面又は結合したＰＥＧ鎖の末端に（例えば、ペグ化脂質又はペグ化コレステロールを介して）結合させることにより、特定のターゲティングに使用することができる。
好ましい実施形態では、ＬＮＰは、ポリマーコンジュゲート脂質を含む。用語「ポリマーコンジュゲート脂質」は、脂質部分とポリマー部分との両方を含む分子を意味する。ポリマーコンジュゲート脂質の例は、ペグ化脂質又はＰＥＧ修飾脂質である。用語「ペグ化脂質又はペグ修飾脂質」は、脂質部分とポリエチレングリコール部分との両方を含む分子を意味する。ペグ化脂質は当技術分野で知られており、１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ｓ－ＤＭＧ）などが挙げられる。この文脈においては、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドは、ペグ化脂質として使用されることが特に好ましい。
他の好適なアミノ脂質には、アルキル置換基が異なる（例えば、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルアミノ－及びＮ－プロピル－Ｎ－エチルアミノ－）ものを含む、異なる脂肪酸基及び他のジアルキルアミノ基を有するものが挙げられる。一般に、低い飽和度のアシル鎖を有するアミノ脂質は、特に複合体をフィルター滅菌の目的で約０．３ミクロン未満のサイズにする必要がある場合に、より容易にサイズ調整できる。Ｃ１４～Ｃ２２の炭素鎖長を有する不飽和脂肪酸を含むアミノ脂質を使用することができる。他の足場を使用して、アミノ基と、アミノ脂質の脂肪酸又は脂肪族アルキル部分を分離することもできる。
アミノ又はカチオン性脂質は、少なくとも１つのプロトン化可能又は脱プロトン化可能な基を有していてもよく、脂質は、生理学的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）以下のｐＨで正に帯電し、第２のｐＨ、好ましくは生理学的ｐＨ以上では中性である。言うまでもなく、ｐＨの関数としてのプロトンの付加又は除去は、平衡プロセスであり、荷電脂質又は中性脂質との言及は、優勢な種の性質を意味し、脂質の全てが荷電又は中性の形態で存在する必要があることを求めるものではないことが理解される。１超のプロトン化可能又は脱プロトン化可能な基を有する脂質、又は両性イオンである脂質は、本発明における使用から排除されない。
プロトン化可能な脂質は、約４～約１１のプロトン化可能な基のｐＫａ、例えば、約５～約７のｐＫａを有することができる。好ましい一実施形態では、プロトン化可能な脂質における、プロトン化可能な基のｐＫａは、約６．０９であり得る。
ＬＮＰは、２以上のカチオン性脂質を含むことができる。カチオン性脂質は、様々な有利な性質に寄与するように選択することができる。例えば、アミンｐＫａ、化学的安定性、循環半減期、組織中半減期、組織中の正味の蓄積、又は毒性などの性質が異なるカチオン性脂質を、ＬＮＰに使用することができる。特に、混合されたＬＮＰの性質が個々の脂質の単一ＬＮＰの性質よりも望ましいように、カチオン性脂質を選択することができる。
カチオン性脂質は、ＬＮＰ中に存在する合計脂質の約２０ｍｏｌ％～約７０若しくは７５ｍｏｌ％、又は約４５～約６５ｍｏｌ％、又は約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は約７０ｍｏｌ％の比で存在し得る。ＬＮＰは、カチオン性脂質のモル基準で約２５％～約７５％、例えば、モル基準で、約２０～約７０％、約３５～約６５％、約４５～約６５％、約６０％、約５０％、又は約４０％（脂質ナノ粒子中の脂質の合計モル数１００％に基づく）含む。カチオン性脂質の核酸に対する比は、約３～約１５、例えば、約５～約１３又は約７～約１１であることができる。具体的には、国際公開第２０１３／００６８２５Ａ１号に記載されているように、リポソームは、カチオン性脂質中の窒素原子とＲＮＡ中のリン酸とのモル比（Ｎ：Ｐ比）が１：１～２０：１であることができる。或いは、リポソームは、２０：１超又は１：１未満のＮ：Ｐ比を有することができる。
（ｉｉ）中性脂質及び非カチオン性脂質
非カチオン性脂質は、中性脂質、アニオン性脂質、又は両親媒性脂質であることができる。中性脂質は、存在する場合、生理学的ｐＨで非荷電又は中性の両性イオン形態で存在する多くの脂質種のいずれかを選択することができる。このような脂質は、例えば、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、セファリン、及びセレブロシドを含む。本明細書に記載の粒子において使用するための中性脂質の選択は、一般に、例えば、ＬＮＰサイズ及び血流中のＬＮＰの安定性を考慮することによって決められる。好ましくは、中性脂質は、２つのアシル基を有する脂質（例えば、ジアシルホスファチジルコリン及びジアシルホスファチジルエタノールアミン）である。
中性脂質は、炭素鎖長がＣ１０～Ｃ２０の飽和脂肪酸を含むことができる。他の実施形態では、炭素鎖長がＣ１０～Ｃ２０のモノ不飽和脂肪酸又はジ不飽和脂肪酸を含む中性脂質が使用される。これに加えて又はこれに代えて、飽和及び不飽和脂肪酸鎖の混合物を有する中性脂質を使用することができる。
好適な中性脂質としては、限定されるものではないが、ジステアロイルホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジステアロイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ＳＭ、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、コレステロール、又はそれらの混合物が挙げられる。ＬＮＰにおける使用に好適なアニオン性脂質としては、限定されるものではないが、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシル－ホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ－ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－スクシニルホスファチジル－エタノールアミン、Ｎ－グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リシルホスファチジルグリセロール、及び他のアニオン性修飾基が結合した中性脂質が挙げられる。この文脈においては、中性脂質としてジステアロイルホスホコリン（ＤＳＰＣ）の使用が特に好ましい。
両親媒性脂質は、脂質材料の疎水性部分が疎水性相に向かって配向する一方で、親水性部分が水相に向かって配向する任意の好適な材料を意味する。このような化合物としては、限定されるものではないが、リン脂質、アミノ脂質、及びスフィンゴ脂質が挙げられる。代表的なリン脂質は、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイル－オレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスホコリン、又はジリノレオイルホスファチジルコリンが挙げられる。スフィンゴ脂質、スフィンゴ糖脂質ファミリー、ジアシルグリセロール、及びベータ－アシルオキシ酸などの他のリン欠乏化合物も使用できる。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥ、及びＳＭから選択される中性脂質を含む。各種実施形態では、カチオン性脂質対中性脂質のモル比は、約２：１～約８：１である。好ましい一実施形態では、カチオン性脂質対中性脂質のモル比は、約４：１～約５：１である。
好ましい実施形態では、中性脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である。カチオン性脂質対ＤＳＰＣのモル比は、約２：１～８：１であることができる。好ましい一実施形態では、カチオン性脂質対中性脂質のモル比は、約４：１～約５：１である。
非カチオン性脂質は、ＬＮＰ中に存在する合計脂質の約５ｍｏｌ％～約９０ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、又は約９０ｍｏｌ％の比で存在し得る。ＬＮＰは、中性脂質のモル基準で約０％～約１５％又は約４５％、例えば、約３％～約１２％又は約５％～約１０％含む。例えば、ＬＮＰは、モル基準で、約１５％、約１０％、約７．５％、又は約７．１％含む（ＬＮＰ中の脂質の合計モル数１００％に基づく）。１０ｍｏｌ％中性脂質としてのＤＳＰＣが特に好ましい。
（ｉｉｉ）ステロール
ステロールは、コレステロールであることが好ましい。
ステロールは、ＬＮＰの約１０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％又は約２５ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％の比で存在し得る。ステロールは、ＬＮＰ中に存在する合計脂質の約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、又は約６０ｍｏｌ％の比で存在し得る。ＬＮＰは、ステロールのモル基準で約５％～約５０％、例えば、モル基準で、約１５％～約４５％、約２０％～約４０％、約４８％、約４０％、約３８．５％、約３５％、約３４．４％、約３１．５％、又は約３１％含む（ＬＮＰ中の脂質の合計モル数１００％に基づく）。この文脈においては、４０．９ｍｏｌ％のコレステロールが特に好ましい。
（ｉｖ）凝集抑制剤
凝集抑制剤は、凝集を抑制することができる脂質であることができる。
係る脂質の例としては、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾脂質、モノシアロガングリオシドＧｍ１、及び米国特許第６，３２０，０１７号明細書に記載されるものなどのポリアミドオリゴマー（ＰＡＯ）が挙げられる。ＰＥＧ、Ｇｍ１、又はＡＴＴＡのような、組成物中の凝集を防止する、非荷電性で、親水性で、立体障害部分を有する他の化合物を、脂質に結合させることもできる。ＡＴＴＡ脂質は、例えば、米国特許第６，３２０，０１７号明細書に記載され、ＰＥＧ脂質コンジュゲートは、米国特許第５，８２０，８７３号明細書、同第５，５３４，４９９号明細書、及び同第５，８８５，６１３号明細書に記載されている。
凝集抑制剤としては、例えば、限定するものではないが、ＰＥＧ－ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＰＥＧ－ジアルキルグリセロール、ＰＥＧ－ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ－リン脂質、ＰＥＧ－セラミド（Ｃｅｒ）、又はそれらの混合物（例えば、ＰＥＧ－Ｃｅｒ１４又はＰＥＧ－Ｃｅｒ２０）を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－脂質から選択することができる。ＰＥＧ－ＤＡＡコンジュゲートは、例えば、ＰＥＧ－ジラウリルオキシプロピル（Ｃ１２）、ＰＥＧ－ジミリスチルオキシプロピル（Ｃ１４）、ＰＥＧ－ジパルミチルオキシプロピル（Ｃ１６）、又はＰＥＧ－ジステアリルオキシプロピル（Ｃ１８）であることができる。他のペグ化脂質としては、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール－ジジミリストイルグリセロール（Ｃ１４－ＰＥＧ又はＰＥＧ－Ｃ１４、ＰＥＧの平均分子量は２０００Ｄａ）（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、（Ｒ）－２，３－ビス（オクタデシルオキシ）プロピル－１－（メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）プロピルカルバメート）（ＰＥＧ－ＤＳＧ）、ＰＥＧ－カルバモイル－１，２－ジミリスチルオキシプロピルアミン（ＰＥＧの平均分子量は２０００Ｄａ）（ＰＥＧ－ｃＤＭＡ）、Ｎ－アセチルガラクトサミン－（（Ｒ）－２，３－ビス（オクタデシルオキシ）プロピル－１－（メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）プロピルカルバメート））（ＧａｌＮＡｃ－ＰＥＧ－ＤＳＧ）、ｍＰＥＧ（ｍｗ２０００）－ジステアロイルホスファチジル－エタノールアミン（ＰＥＧ－ＤＳＰＥ）、及びポリエチレングリコールジパルミトイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＰＧ）が挙げられる。
好ましくは、凝集抑制剤は、ＰＥＧ－ＤＭＧ又はＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡから選択することができる。
好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡは、１以上の脂質と複合体を形成することによって、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成し、ＬＮＰは、更に、式（ＬＮＰ－ＩＶ）を有するペグ化脂質、又はその薬学的に許容される塩、互変異性体、若しくは立体異性体を含む。
Figure 2022511977000024
 式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、１０～３０個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖であり、アルキル鎖には、任意に、１以上のエステル結合が介在していてもよく、ｗは、３０～６０の平均値を有する。
式（ＬＮＰ－ＩＶ）に係るペグ化脂質の前述の実施形態のいくつかでは、ｗが４２であるとき、Ｒ８及びＲ９の両方は、ｎ－オクタデシルではない。いくつかの実施形態では、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、１０～１８個の炭素原子を含む直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖である。いくつかの実施形態では、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、１２～１６個の炭素原子を含む直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖である。いくつかの実施形態では、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、１２個の炭素原子を含む直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖である。いくつかの実施形態では、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、１４個の炭素原子を含む直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖である。他の実施形態では、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、１６個の炭素原子を含む直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖である。更なる実施形態では、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、１８個の炭素原子を含む直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖である。更なる他の実施形態では、Ｒ８は、１２個の炭素原子を含む直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖であり、Ｒ９は、１４個の炭素原子を含む直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖である。
各種実施形態では、ｗは、式（ＬＮＰ－ＩＶ）に係るペグ化脂質のペグ部分が約４００～約６０００ｇ／ｍｏｌの平均分子量を有するように選択される範囲である。いくつかの実施形態では、平均ｗは、約５０である。好ましい実施形態では、式（ＬＮＰ－ＩＶ）によるペグ化脂質のＲ８及びＲ９は、飽和アルキル鎖である。
特に好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、１以上の脂質と複合体を形成することによって、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成し、ＬＮＰは、更に、ペグ化脂質を含み、ＰＥＧ脂質は、式（ＬＮＰ－ＩＶａ）で表される。
Figure 2022511977000025
 式中、ｎは、３０～６０の平均値、例えば、約２８～約３２、約３０～約３４、３２～約３６、約３４～約３８、３６～約４０、約３８～約４２、４０～約４４、約４２～約４６、４４～約４８、約４６～約５０、４８～約５２、約５０～約５４、５２～約５６、約５４～約５８、５６～約６０、約５８～約６２の平均値を有する。好ましい実施形態では、ｎは、約４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４である。最も好ましい実施形態では、ｎは、４９の平均値を有する。この文脈においては、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドが特に好ましい。この文脈においては、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドが特に好ましい。
他の実施形態では、ペグ化脂質は、以下の構造のいずれかを有する。
Figure 2022511977000026
 式中、ｎは、ペグ化脂質の平均分子量が約２５００ｇ／モルであるように選択される整数であり、最も好ましくはｎは、約４９である。
その文脈における好適なＰＥＧ脂質の更なる例は、米国特許出願公開第２０１５０３７６１１５Ａ１号明細書及び国際公開第２０１５１９９９５号に記載されている。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＬＮＰ中の脂質の合計モル数に基づいて、約３、２、又は１モルパーセント未満のＰＥＧ又はＰＥＧ修飾脂質を含む。更なる実施形態では、ＬＮＰは、モル基準で、約０．１％～約２０％のＰＥＧ修飾脂質、例えば、モル基準で、約０．５～約１０％、約０．５～約５％、約１０％、約５％、約３．５％、約３％、約２．５％、約２％、約１．５％、約１％、約０．５％、又は約０．３％のＰＥＧ修飾脂質を含む（ＬＮＰ中の脂質の合計モル数１００％に基づく）。好ましい実施形態では、ＬＮＰは、モル基準で、約１．０％～約２．０％のＰＥＧ修飾脂質、例えば、約１．２～約１．９％、約１．２～約１．８％、約１．３～約１．８％、約１．４％～約１．８％、約１．５～約１．８％、約１．６～約１．８％、特に、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％のＰＥＧ修飾脂質を含み、最も好ましくは１．７％のＰＥＧ修飾脂質を含む（ＬＮＰ中の脂質の合計モル数１００％に基づく）。この文脈においては、１．７ｍｏｌ％のＰＥＧ修飾脂質としての２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドが特に好ましい。
各種実施形態では、カチオン性脂質対ペグ化脂質のモル比は、約１００：１～約２５：１である。
ＬＮＰ組成は、特に、カチオン性脂質成分の選択、カチオン性脂質飽和度、ペグ化の性質、全成分の比、及びそのサイズなどの生物物理学的パラメータによって影響され得る。Ｓｅｍｐｌｅら（Ｓｅｍｐｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０ ２８：１７２－１７６）による一実施形態では、ＬＮＰ組成は、５７．１％のカチオン性脂質、７．１％のジパルミトイルホスファチジルコリン、３４．３％のコレステロール、及び１．４％のＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡから構成された（Ｂａｓｈａ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１１ １９：２１８６－２２００）。
ＬＮＰは、約３５～約４５％のカチオン性脂質、約４０％～約５０％のカチオン性脂質、約５０％～約６０％のカチオン性脂質、及び／又は約５５％～約６５％のカチオン性脂質を含むことができる。脂質対核酸の比は、約５：１～約２０：１、約１０：１～約２５：１、約１５：１～約３０：１、及び／又は少なくとも３０：１であることができる。
ＰＥＧ修飾脂質中のＰＥＧ部分の平均分子量は、約５００～約８，０００ダルトン（例えば、約１，０００～約４，０００ダルトン）であることができる。好ましい一実施形態では、ＰＥＧ部分の平均分子量は、約２，０００ダルトンである。
凝集抑制剤の濃度は、ＬＮＰ中の脂質の合計モル数１００％当たり、約０．１～約１５ｍｏｌ％であることができる。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＬＮＰ中の脂質の合計モル数に基づいて、約３、２、又は１モルパーセント未満のＰＥＧ又はＰＥＧ修飾脂質を含む。更なる実施形態では、ＬＮＰは、モル基準で、約０．１％～約２０％のＰＥＧ修飾脂質、例えば、モル基準で、約０．５～約１０％、約０．５～約５％、約１０％、約５％、約３．５％、約１．５％、約０．５％、又は約０．３％のＰＥＧ修飾脂質を含む（ＬＮＰ中の脂質の合計モル数１００％に基づく）。
モル基準（脂質ナノ粒子中の脂質の合計モル数に基づく）で、カチオン性脂質と、非カチオン性（又は中性）脂質と、ステロール（例えば、コレステロール）と、凝集抑制剤（例えば、ＰＥＧ修飾脂質）とを様々なモル比で含む各種ＬＮＰを、以下の表５に示す。好ましい実施形態では、本発明の脂質ナノ粒子製剤は、モル比で、約２０～７０％のカチオン性脂質：５～４５％の中性脂質：２０～５５％のコレステロール：０．５～１５％のペグ修飾脂質の脂質混合物から本質的になり、より好ましくは、モル比で、約２０～６０％のカチオン性脂質：５～２５％の中性脂質：２５～５５％のコレステロール：０．５～１５％のペグ修飾脂質の脂質混合物から本質的になる。
表５：脂質ベース製剤
Figure 2022511977000027
ＬＮＰは、以下に更に詳細に記載するように、リポソーム又はリポプレックスとして生成することができる。
好ましくは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、（ａ）少なくとも１つのｍＲＮＡ、（ｂ）カチオン性脂質、（ｃ）凝集抑制剤（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）脂質又はＰＥＧ修飾脂質）、（ｄ）任意に非カチオン性脂質（例えば、中性脂質）、及び（ｅ）任意にステロールを含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の脂質と、前記定義したｍＲＮＡと、中性脂質と、ステロイドと、ペグ化脂質とを含む。好ましい実施形態では、式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の脂質は脂質化合物（ＬＮＰ－ＩＩＩ－３）であり、中性脂質はＤＳＰＣであり、ステロイドはコレステロールであり、ペグ化脂質は式（ＬＮＰ－Ｉｖａ、例えば、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミド）である。
好ましい実施形態では、ＬＮＰは、（ｉ）少なくとも１つのカチオン性脂質、（ｉｉ）中性脂質、（ｉｉｉ）ステロール、例えば、コレステロール、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質、例えば、ＰＥＧ－ＤＭＧ又はＰＥＧ－ｃＤＭＡから、約２０～６０％のカチオン性脂質：５～２５％の中性脂質：２５～５５％のステロール：０．５～１５％のＰＥＧ脂質のモル比で本質的になる。
特に好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡは、１以上の脂質と複合体を形成することによって、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を形成し、ＬＮＰは、
（ｉ）本明細書で定義される少なくとも１つのカチオン性脂質、好ましくは式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）の脂質、より好ましくは脂質（ＬＮＰ－ＩＩＩ－３）、
（ｉｉ）本明細書で定義される中性脂質、好ましくは１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
（ｉｉｉ）本明細書で定義されるステロイド又はステロイドアナログ、好ましくはコレステロール、及び
（ｉｖ）本明細書で定義されるＰＥＧ脂質、例えば、ＰＥＧ－ＤＭＧ又はＰＥＧ－ｃＤＭＡ、好ましくは式（ＬＮＰ－Ｉｖａ、例えば、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミド）のペグ化脂質から本質的になり、
（ｉ）～（ｉｖ）は、約２０～６０％のカチオン性脂質：５～２５％の中性脂質：２５～５５％のステロール：０．５～１５％のＰＥＧ脂質のモル比であり、最も好ましくは、４７．７％のカチオン性脂質：１０％の中性脂質：４０．９％のステロール：１．７％のＰＥＧ脂質のモル比である。
好ましい一実施形態では、脂質ナノ粒子は、式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）のカチオン性脂質及び／又は式（ＬＮＰ－ＩＶ）のＰＥＧ脂質と、任意に、中性脂質、好ましくは１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）と、任意に、ステロイド、好ましくはコレステロールとを含み、カチオン性脂質対ＤＳＰＣのモル比は、任意に約２：１～８：１であり、カチオン性脂質対コレステロールのモル比は、任意に約２：１～１：１である。
特に好ましい実施形態では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、約５０：１０：３８．５：１．５、好ましくは４７．５：１０：４０．８：１．７、又はより好ましくは４７．４：１０：４０．９：１．７のモル比（即ち、カチオン性脂質（好ましくは、脂質ＬＮＰ－ＩＩＩ－３）、ＤＳＰＣ、コレステロール、及びＰＥＧ脂質（（好ましくはｎ＝４９の式（ＬＮＰ－ＩＶａ）のＰＥＧ脂質）の比（ｍｏｌ％）、エタノールに可溶）を有する。
脂質ナノ粒子中のｍＲＮＡの合計量は変化することがあり、例えば、合計脂質に対するＲＮＡのｗ／ｗ比に応じて決まる。本発明の一実施形態では、合計脂質に対するｍＲＮＡの比は、０．０６ｗ／ｗ未満であり、好ましくは０．０３ｗ／ｗ～０．０４ｗ／ｗである。
ＬＮＰサイズ
いくつかの実施形態によれば、ＬＮＰは、約５０ｎｍ～約３００ｎｍ、例えば、約５０ｎｍ～約２５０ｎｍ、例えば、約５０ｎｍ～約２００ｎｍのメジアン径サイズを有する。
いくつか実施形態によれば、より小さなＬＮＰを用いることができる。そのような粒子は、０．１ｕｍ未満で最大１００ｎｍの直径を有することができ、例えば、限定するものではないが、０．１ｕｍ未満、１．０ｕｍ未満、５ｕｍ未満、１０ｕｍ未満、１５ｕｍ未満、２０ｕｍ未満、２５ｕｍ未満、３０ｕｍ未満、３５ｕｍ未満、４０ｕｍ未満、５０ｕｍ未満、５５ｕｍ未満、６０ｕｍ未満、６５ｕｍ未満、７０ｕｍ未満、７５ｕｍ未満、８０ｕｍ未満、８５ｕｍ未満、９０ｕｍ未満、９５ｕｍ未満、１００ｕｍ未満、１２５ｕｍ未満、１５０ｕｍ未満、１７５ｕｍ未満、２００ｕｍ未満、２２５ｕｍ未満、２５０ｕｍ未満、２７５ｕｍ未満、３００ｕｍ未満、３２５ｕｍ未満、３５０ｕｍ未満、３７５ｕｍ未満、４００ｕｍ未満、４２５ｕｍ未満、４５０ｕｍ未満、４７５ｕｍ未満、５００ｕｍ未満、５２５ｕｍ未満、５５０ｕｍ未満、５７５ｕｍ未満、６００ｕｍ未満、６２５ｕｍ未満、６５０ｕｍ未満、６７５ｕｍ未満、７００ｕｍ未満、７２５ｕｍ未満、７５０ｕｍ未満、７７５ｕｍ未満、８００ｕｍ未満、８２５ｕｍ未満、８５０ｕｍ未満、８７５ｕｍ未満、９００ｕｍ未満、９２５ｕｍ未満、９５０ｕｍ未満、９７５ｕｍ未満である。別の実施形態では、より小さいＬＮＰを用いて核酸を送達することができ、このＬＮＰは、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１ｎｍ～約１０ｎｍ、約１ｎｍ～約２０ｎｍ、約１ｎｍ～約３０ｎｍ、約１ｎｍ～約４０ｎｍ、約１ｎｍ～約５０ｎｍ、約１ｎｍ～約６０ｎｍ、約１ｎｍ～約７０ｎｍ、約１ｎｍ～約８０ｎｍ、約１ｎｍ～約９０ｎｍ、約５ｎｍ～約１００ｎｍ、約５ｎｍ～約１０ｎｍ、約５ｎｍ～約２０ｎｍ、約５ｎｍ～約３０ｎｍ、約５ｎｍ～約４０ｎｍ、約５ｎｍ～約５０ｎｍ、約５ｎｍ～約６０ｎｍ、約５ｎｍ～約７０ｎｍ、約５ｎｍ～約８０ｎｍ、約５ｎｍ～約９０ｎｍ、約１０～約５０ｎＭ、約２０～約５０ｎｍ、約３０～約５０ｎｍ、約４０～約５０ｎｍ、約２０～約６０ｎｍ、約３０～約６０ｎｍ、約４０～約６０ｎｍ、約２０～約７０ｎｍ、約３０～約７０ｎｍ、約４０～約７０ｎｍ、約５０～約７０ｎｍ、約６０～約７０ｎｍ、約２０～約８０ｎｍ、約３０～約８０ｎｍ、約４０～約８０ｎｍ、約５０～約８０ｎｍ、約６０～約８０ｎｍ、約２０～約９０ｎｍ、約３０～約９０ｎｍ、約４０～約９０ｎｍ、約５０～約９０ｎｍ、約６０～約９０ｎｍ、及び／又は約７０～約９０ｎｍの直径を有することができる。
本明細書において、平均直径は、当技術分野で一般に知られている動的光散乱によって決定されるｚ平均で表すことができる。
いくつか実施形態によれば、ＬＮＰは、１００ｎｍ超、１５０ｎｍ超、２００ｎｍ超、２５０ｎｍ超、３００ｎｍ超、３５０ｎｍ超、４００ｎｍ超、４５０ｎｍ超、５００ｎｍ超、５５０ｎｍ超、６００ｎｍ超、６５０ｎｍ超、７００ｎｍ超、７５０ｎｍ超、８００ｎｍ超、８５０ｎｍ超、９００ｎｍ超、９５０ｎｍ超、又は１０００ｎｍ超の直径を有することができる。
本発明の別の好ましい実施形態では、脂質ナノ粒子は、それぞれ約５０ｎｍ～約３００ｎｍ、又は約６０ｎｍ～約２５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１５０ｎｍ、又は約６０ｎｍ～約１２０ｎｍの流体力学的直径を有する。
他の実施形態によれば、ＬＮＰは、単一モードの粒度分布を有する（即ち、二峰性又は多峰性ではない）。
ＬＮＰは、前記のものに加えて、１以上の脂質及び／又は他の成分を更に含むことができる。脂質の酸化を防止するため、又はリガンドをリポソーム表面に結合させるためなどの様々な目的で、他の脂質をリポソーム組成物に含有させることができる。両親媒性、中性、カチオン性、及びアニオン性の脂質を含む、多くの脂質のいずれかが、ＬＮＰ中に存在することができる。係る脂質は、単独で又は組み合わせて用いることができる。
ＬＮＰ中に存在し得る更なる成分は、ポリアミドオリゴマーなどの二重層安定化成分を含む（例えば、米国特許第６，３２０，０１７号明細書、ペプチド、タンパク質、及び洗浄剤を参照）。
一実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、脂質ナノ粒子として製せられる。
別の実施形態では、異なる変異体ＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする各ｍＲＮＡ分子が、脂質ナノ粒子に個別に製せられる。別の実施形態では、それぞれが異なる変異体ＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする１以上の個々のｍＲＮＡ分子が、脂質ナノ粒子として個別に製せられる。別の実施形態では、それぞれが異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする１、２、３、４、又は５つの個々のｍＲＮＡ分子が、脂質ナノ粒子として個別に製せられる。別の実施形態では、それぞれが異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする５つのｍＲＮＡ分子が、脂質ナノ粒子として個別に製せられる。
別の実施形態では、それぞれが異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする１以上の個々のｍＲＮＡ分子が、脂質ナノ粒子として製せられる前に混合される。別の実施形態では、それぞれが特定のＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする１、２、３、４、又は５つの個々のｍＲＮＡ分子は、脂質ナノ粒子として製せられる前に混合される。別の実施形態では、それぞれが異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする５つの個々のｍＲＮＡ分子は、脂質ナノ粒子として製せられる前に混合される。
一実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、本発明の１以上の人工核酸分子と、カチオン性脂質と、ホスホコリン（例えば、ジステアロイルホスホコリン）と、ペグ化脂質（例えば、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミド）と、ステロール（例えば、コレステロール）と、本明細書中の式（ＬＮＰ－ＩＩＩ）に由来する脂質（例えば、本明細書中の表４のＬＮＰＩＩＩ－３の脂質）とを含む。別の実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、本発明の１以上の人工核酸分子と、ジステアロイルホスホコリンと、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドと、コレステロールと、本明細書中の表４のＬＮＰＩＩＩ－３の脂質とを含む。
更なる態様において、本発明は、本発明に係るｍＲＮＡ分子及び／又は組成物と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、賦形剤、アジュバント、又は更なる成分とを含む医薬組成物を提供する。
本発明に係る医薬組成物は、少なくとも１つのｍＲＮＡ分子及び／又は本発明の組成物を「安全且つ治療上有効な量」で含む。
更に、「安全且つ治療上有効な量」は、治療される具体的な状態、及び治療される患者の年齢、身体状態、体重、性別、及び食事、状態の重篤度、治療期間、付随する治療の性質、使用される特定の薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤、治療計画、及び類似の要因に関連して変化する。それは、使用されるｍＲＮＡ分子が、モノシストロン性、バイシストロン性、又はマルチシストロン性であるかどうかによって更に変化し得る。
本発明の医薬組成物は、本明細書に記載されるように、更に、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、担体、アジュバント、又は更なる成分（例えば、更なる活性剤など）を含むことができる。
好ましくは、本発明に係る医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を含む。用語「薬学的に許容される」は、１以上の活性剤（ここでは、ｍＲＮＡ分子及び／又は組成物）と適合性があり、それらの薬学的活性を妨害及び／又は実質的に低下させない化合物又は剤を意味する。薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤は、好ましくは、治療される対象への投与に適するように十分に高い純度及び十分に低い毒性を有する。好適な薬学的賦形剤及び担体は当業者に知られており、非限定的な例が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ， ２２ｎｄ ｅｄ． （２０１２）， Ａ． Ｌｏｙｄ ｅｔ ａｈ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓに記載されている。
更なる実施形態によれば、本発明の医薬組成物は、更に、少なくとも１つのアジュバントを含むことができる。好適なアジュバントは当業者に知られており、非限定的な例が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２２ｎｄ ｅｄ． （２０１２）， Ａ． Ｌｏｙｄ ｅｔ ａｈ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓに記載されている。
最も広い意味での「アジュバント」又は「アジュバント成分」は、典型的には、他の活性剤、例えば、治療薬又はワクチンの効果を変化させることができる、例えば、向上させることができる薬理学的及び／又は免疫学的物質である。この文脈においては、「アジュバント」は、本発明に係る組成物の投与及び送達を支援するのに好適な任意の化合物として理解できる。具体的には、アジュバントは、好ましくは、それが添加される医薬組成物の免疫賦活性を向上させることができる。更に、そのようなアジュバントは、拘束されるものではないが、先天性免疫系の免疫応答、即ち、非特異的免疫応答を開始又は向上させることができる。
「アジュバント」は通常、適応免疫応答を誘発しない。その限りにおいて、「アジュバント」は抗原として機能しない。換言すれば、投与されると、医薬組成物は、典型的には、医薬組成物に含有されるｍＲＮＡの少なくとも１つのコード配列によってコードされるバリアントペプチド又はタンパク質による適応免疫応答を開始する。更に、医薬組成物中に存在するアジュバントは、（支援的な）先天性免疫応答を生じることができる。
好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物はアジュバントを含まない。
生物学的配列１～６７
Figure 2022511977000028
Figure 2022511977000029
Figure 2022511977000030
Figure 2022511977000031
Figure 2022511977000032
Figure 2022511977000033
Figure 2022511977000034
Figure 2022511977000035
Figure 2022511977000036
Figure 2022511977000037
Figure 2022511977000038
Figure 2022511977000039
Figure 2022511977000040
Figure 2022511977000041
Figure 2022511977000042

Claims (54)

  1. ＣＴＬＡ４シグナルペプチドと、ＫＲＡＳバリアントペプチドと、ＰＡＤＲＥ由来のＴヘルパーエピトープ配列と、ＣＴＬＡ４膜貫通ドメイン又はその一部とを含むアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡ配列を含むことを特徴とするｍＲＮＡ分子。
  2. 前記ＫＲＡＳバリアントペプチドは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃバリアントアミノ酸残基、ＫＲＡＳＧ１２Ｄバリアントアミノ酸残基、ＫＲＡＳＧ１２Ｖバリアントアミノ酸残基、ＫＲＡＳＧ１２Ｒバリアントアミノ酸残基、又はＫＲＡＳＧ１３Ｄバリアントアミノ酸残基を含む、請求項１に記載のｍＲＮＡ分子。
  3. 前記ｍＲＮＡ分子は、インターフェロン遺伝子刺激因子ペプチド又はポリペプチドをコードしない、請求項１から２のいずれかに記載のｍＲＮＡ。
  4. 更に、アルファグロビン３’ＵＴＲエレメントを含む、請求項１から３のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子。
  5. ＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする前記ｍＲＮＡは、前記アルファグロビン３’ＵＴＲエレメントの５’に位置する、請求項４に記載のｍＲＮＡ分子。
  6. 前記ＫＲＡＳバリアントペプチドは、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、又は配列番号１２の配列を含む、請求項１から５のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子。
  7. 前記分子は、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、又は配列番号５７を含む、請求項１から５のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子。
  8. 前記ｍＲＮＡは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、又は配列番号６７に示される、請求項１から５のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子。
  9. 前記ｍＲＮＡ分子は、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、又は配列番号６２に示される、請求項１から５のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子。
  10. 前記ｍＲＮＡ分子は、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、又は配列番号５２に示されるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする、請求項１から５のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子。
  11. 請求項１から１０のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子と、１以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含むことを特徴とする医薬組成物。
  12. 前記組成物は、１、２、３、４、又は５つの異なるｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする、請求項１１に記載の医薬組成物。
  13. 前記組成物は、単一のＫＲＡＳバリアントペプチドをコードするｍＲＮＡ分子を含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
  14. 前記組成物は、２つの異なるｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳ変異体ペプチドをコードする、請求項１１に記載の医薬組成物。
  15. 前記組成物は、３つのｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする、請求項１１に記載の医薬組成物。
  16. 前記組成物は、４つのｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする、請求項１１に記載の医薬組成物。
  17. 前記組成物は、５つのｍＲＮＡ分子を含み、各ｍＲＮＡ分子は、異なるＫＲＡＳバリアントペプチドをコードする、請求項１１に記載の医薬組成物。
  18. 更に、カチオン性脂質と、ステロールと、中性脂質と、ＰＥＧ脂質とを含む、請求項１３から１７のいずれかに記載の医薬組成物。
  19. 前記カチオン性脂質は、以下の式：
    Figure 2022511977000043
     （式中、Ｌ１又はＬ２は、それぞれ独立して、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、又は－ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ－であり、
    好ましくはＬ１又はＬ２は、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－又は－（Ｃ＝Ｏ）Ｏ－であり、
    Ｇ１及びＧ２は、それぞれ独立して、非置換のＣ１－Ｃ１２アルキレン又はＣ１－Ｃ１２アルケニレンであり、
    Ｇ３は、Ｃ１－Ｃ２４アルキレン、Ｃ１－Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキレン、又はＣ３－Ｃ８シクロアルケニレンであり、
    Ｒａは、Ｈ又はＣ１－Ｃ１２アルキルであり、
    Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｃ６－Ｃ２４アルキル又はＣ６－Ｃ２４アルケニルであり、
    Ｒ３は、Ｈ、ＯＲ５、ＣＮ、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４、又は－ＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４であり、
    Ｒ４は、Ｃ１－Ｃ１２アルキルであり、
    Ｒ５は、Ｈ又はＣ１－Ｃ６アルキルであり、
    ｘは、０、１、又は２である。）で表される、又はその薬学的に許容される塩である、請求項１８に記載の医薬組成物。
  20. Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－又は（Ｃ＝Ｏ）－Ｏ－であり、Ｇ３は、Ｃ１－Ｃ２４アルキレン又はＣ１－Ｃ２４アルケニレンであり、Ｒ３は、Ｈ又はＯＲ５である、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. Ｌ１及びＬ２は、それぞれ独立して、－Ｏ（Ｃ＝Ｏ）－又は（Ｃ＝Ｏ）－Ｏ－であり、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、以下の構造：
    Figure 2022511977000044
     のいずれかを有する、請求項１９から２０のいずれかに記載の医薬組成物。
  22. Ｒ３は、ＯＨである、請求項１８から２０のいずれかに記載の医薬組成物。
  23. 前記カチオン性脂質は、以下：
    Figure 2022511977000045
     である、請求項１９から２２のいずれかに記載の医薬組成物。
  24. 前記ＰＥＧ脂質は、以下の式：
    Figure 2022511977000046
     （式中、Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、１０～３０個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐状の飽和又は不飽和アルキル鎖であり、前記アルキル鎖には、任意に、１以上のエステル結合が介在していてもよく、ｗは、３０～６０の平均値を有する。）で表される、請求項１８に記載の医薬組成物。
  25. 前記ＰＥＧ脂質において、Ｒ８及びＲ９は、飽和アルキル鎖である、請求項２４に記載の医薬組成物。
  26. 前記ＰＥＧ脂質は、以下：
    Figure 2022511977000047
     （式中、ｎは、３０～６０の平均値を有し、好ましくは、ｎは、約４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４の平均値を有し、最も好ましくは、ｎは、４９の平均値を有する。）である、請求項１８、２４、及び２５のいずれかに記載の医薬組成物。
  27. 前記ＰＥＧ脂質は、２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドである、請求項１８又は２４から２６のいずれかに記載の医薬組成物。
  28. 前記中性脂質は、ジステアロイルホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）及びジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、１－ステアロイル－２－オレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、又は１，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（トランスＤＯＰＥ）である、請求項１８に記載の医薬組成物。
  29. 前記中性脂質は、ジステアロイルホスホコリンである、請求項１８及び２８のいずれかに記載の医薬組成物。
  30. 前記ジステアロイルホスホコリンは、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、請求項２９に記載の医薬組成物。
  31. 前記ステロールは、コレステロールである、請求項１８に記載の医薬組成物。
  32. 前記ＰＥＧ脂質は２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドであり、前記中性脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンであり、前記ステロールはコレステロールであり、前記カチオン性脂質は以下：
    Figure 2022511977000048
     である、請求項１８に記載の医薬組成物。
  33. モル比で、約２０～６０％のカチオン性脂質と、５～２５％の中性脂質と、２５～５５％のステロールと、０．５～１５％のＰＥＧ脂質とを含む、請求項１８から３２のいずれかに記載の医薬組成物。
  34. カチオン性脂質：中性脂質：コレステロール：ＰＥＧ脂質のモル比は、約５０：１０：３８．５：１．５、４７．５：１０：４０．８：１．７、又は４７．４：１０：４０．９：１．７ｍｏｌ％である、請求項３３に記載の医薬組成物。
  35. 配列番号６３～６７に示されるｍＲＮＡ分子の１以上と、
    コレステロールと、
    ２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドと、
    １，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンと、
    以下のカチオン性脂質：
    Figure 2022511977000049
     とを含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
  36. カチオン性脂質：１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン：コレステロール：２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドのモル比は、約５０：１０：３８．５：１．５、４７．５：１０：４０．８：１．７、又は４７．４：１０：４０．９：１．７ｍｏｌ％である、請求項３５に記載の医薬組成物。
  37. 配列番号５８～６２に示されるｍＲＮＡ分子の１以上と、
    コレステロールと、
    ２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドと、
    １，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンと、
    以下のカチオン性脂質：
    Figure 2022511977000050
     とを含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
  38. カチオン性脂質：１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン：コレステロール：２－ｍＰＥＧ２０００－ｎ，ｎジテトラデシルアセトアミドのモル比は、約５０：１０：３８．５：１．５、４７．５：１０：４０．８：１．７、又は４７．４：１０：４０．９：１．７ｍｏｌ％である、請求項３７に記載の医薬組成物。
  39. 請求項１から１７のいずれかに記載のｍＲＮＡと、任意に、前記ｍＲＮＡ分子の用法及び用量に関する情報を含む指示書とを含むことを特徴とするキット。
  40. 癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１から１７のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子又は請求項１８から３８のいずれかに記載の医薬組成物の有効量を投与することを含み、前記癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃臓癌、精巣癌、甲状腺癌、又は子宮癌である固形腫瘍癌であることを特徴とする方法。
  41. 前記癌は、結腸直腸癌、膵臓癌、又は肺癌である、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記肺癌は、非小細胞肺癌である、請求項４１に記載の方法。
  43. 対象は、腫瘍タイピングされている、請求項４０から４２のいずれかに記載の方法。
  44. 前記対象は、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｖ、又はＧ１３Ｄ変異の１以上について腫瘍タイピングされている、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記対象は、ＨＬＡタイピングされている、請求項４０から４２のいずれかに記載の方法。
  46. 前記対象は、腫瘍タイピング及びＨＬＡタイピングされている、請求項４０から４２のいずれかに記載の方法。
  47. 前記ｍＲＮＡ分子は、筋肉内投与される、請求項４０から４６のいずれかに記載の方法。
  48. 治療における使用のための、請求項１から１７のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子又は請求項１８から３８のいずれかに記載の医薬組成物。
  49. 膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃臓癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、又は尿路上皮癌である固形腫瘍癌である癌の治療における使用のための、請求項１から１７のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子又は請求項１８から３８のいずれかに記載の医薬組成物。
  50. 前記癌は、結腸直腸癌、膵臓癌、又は肺癌である、請求項４９の使用のためのｍＲＮＡ分子。
  51. 前記肺癌は、非小細胞肺癌である、請求項５０の使用のためのｍＲＮＡ分子。
  52. 膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃臓癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、又は尿路上皮癌である固形腫瘍癌である癌の治療のための医薬の製造のための、請求項１から１７のいずれかに記載のｍＲＮＡ分子又は請求項１８から３８のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
  53. 前記癌は、結腸直腸癌、膵臓癌、又は肺癌である、請求項５２に記載の使用。
  54. 前記肺癌は、非小細胞肺癌である、請求項５３に記載の使用。

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