JP2022505257A - α－シヌクレイノパチー、タウオパチー、および他の障害を抑制および処置するための２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン - Google Patents

Abstract

α－シヌクレイノパチー、タウオパチー、ＡＬＳ、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷からなる群より選択される障害を処置または抑制する方法が、本明細書に開示され、この方法は、治療有効量の式：

Description

本出願は、全ての目的で参照によりその両方の内容全体が本明細書に組み込まれる、2,3,5-TRIMETHYL-6-NONYLCYCLOHEXA-2,5-DIENE-1,4-DIONE FOR SUPPRESSING AND TREATING ALZHEIMER'S DISEASE AND OTHER DISORDERSという名称の、２０１８年１０月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／７４７，０８０号、および2,3,5-TRIMETHYL-6-NONYLCYCLOHEXA-2,5-DIENE-1,4-DIONE FOR SUPPRESSING AND TREATING ALZHEIMER'S DISEASE AND OTHER DISORDERSという名称の、２０１８年１１月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／７７１，５７０号の、優先権および利益を主張する。

米国特許出願公開第２００７／００７２９４３号は、ある特定のキノン化合物、およびある特定のミトコンドリア障害を処置する方法について記載する。米国特許出願公開第２０１０／００６３１６１号は、化合物２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン、ならびに広汎発達障害および注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）を処置するための方法について記載する。

α－シヌクレイノパチー、タウオパチー、ＡＬＳ、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷を含むある特定の障害を処置または抑制するための改善された方法が、求められている。脳対身体の他のエリア（血漿など）への優れた脳透過および／または優先的な分配を有する化合物が、さらに求められている。

さらに、医薬組成物；医薬組成物の製造；ならびにα－シヌクレイノパチー、タウオパチー、ＡＬＳ、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷を処置または抑制するためを含む、障害を処置または抑制するための方法において使用することができる２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの安定な多形およびその粒子が、求められている。

米国特許出願公開第２００７／００７２９４３号明細書 米国特許出願公開第２０１０／００６３１６１号明細書

本発明の一態様は、α－シヌクレインパチー、タウオパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷からなる群より選択される障害を処置または抑制する方法であって、治療有効量の式：

の化合物またはそのヒドロキノン形態；またはその溶媒和物もしくは水和物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法である。一部の実施形態では、化合物は、溶媒和物でも水和物でもない。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、キノン形態にある。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、ヒドロキノン形態にある。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、α－シヌクレインパチーを処置または抑制するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、α－シヌクレインパチーは：パーキンソン病、認知症を伴うパーキンソン病（ＰＤＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、ゴーシェ病（ＧＤ）、脳の鉄蓄積を伴う神経変性（ＮＢＩＡ）、および神経軸索ジストロフィー（ＰＬＡ２Ｇ６関連神経変性）からなる群より選択される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、パーキンソン病は遺伝的である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、パーキンソン病は特発性である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、パーキンソン病を抑制または処置するための方法は、患者が、下記の遺伝子：ＭＡＰＴ（微小管関連タンパク質タウ）、ＰＲＫＮ（パーキン）、ＰＩＮＫ１（ＰＩＮＫ１）、ＬＲＲＫ２（ロイシンリッチリピートキナーゼ２）、ＧＢＡ（グルコセレブロシダーゼ）、ＳＮＣＡ（アルファシヌクレイン）、ＰＡＲＫ７（ＤＪ－１）、および／またはＵＣＨＬ１（ユビキチンカルボキシル－末端エステラーゼＬ１）の１つまたは複数に変異を有する場合のものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、タウオパチーを処置または抑制するためのものである。前述の実施形態を含む一部の実施形態では、タウオパチーは：アルツハイマー病、ボクサー認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ ｐｕｇｉｌｉｓｔｉｃａ）、グアムの筋萎縮性側索硬化症－パーキンソニズム－認知症（Ｇｕａｍ ＡＬＳ／ＰＤ）、ピック病、嗜銀顆粒性認知症、ニーマン－ピック病Ｃ型、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核神経節変性（Ｃｏｒｔｉｃｏｂａｓｏｇａｎｌｉｏｎｉｃ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、パーキンソニズム－１７を伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、脳炎後パーキンソニズム（ＰＥＰ）、および常染色体劣性パーキンソニズムからなる群より選択される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、アルツハイマー病を処置または抑制するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、パーキンソン病を処置または抑制するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、外傷性脳損傷を処置または抑制するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、虚血－再潅流関連損傷を処置または抑制するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、卒中を処置または抑制するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を処置または抑制するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、障害を処置するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、障害を抑制するためのものである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、経口投与される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、静脈内投与される。

別の態様は、アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷からなる群より選択される障害を処置または抑制する方法であって、治療有効量の式：

の化合物またはそのヒドロキノン形態、またはその溶媒和物もしくは水和物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法である。一部の実施形態では、化合物は：

またはそのヒドロキノン形態である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、キノン形態にある。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、ヒドロキノン形態にある。一部の実施形態では、方法は、アルツハイマー病を抑制または処置するためのものである。一部の実施形態では、方法は、パーキンソン病を抑制または処置するためのものである。一部の実施形態では、パーキンソン病を抑制または処置するための方法は、特発性パーキンソン病を処置または抑制することを含む。一部の実施形態では、パーキンソン病を抑制または処置するための方法は、家族性（即ち、遺伝的）パーキンソン病を処置または抑制することを含む。一部の実施形態では、パーキンソン病を抑制または処置するための方法は、患者が、下記の遺伝子：ＭＡＰＴ（微小管関連タンパク質タウ）、ＰＲＫＮ（パーキン）、ＰＩＮＫ１（ＰＩＮＫ１）、ＬＲＲＫ２（ロイシンリッチリピートキナーゼ２）、ＧＢＡ（グルコセレブロシダーゼ）、ＳＮＣＡ（アルファシヌクレイン）、ＰＡＲＫ７（ＤＪ－１）、および／またはＵＣＨＬ１（ユビキチンカルボキシル－末端エステラーゼＬ１）の１つまたは複数に変異を有する場合のものである。一部の実施形態では、方法は、外傷性脳損傷を抑制または処置するためのものである。一部の実施形態では、方法は、虚血－再潅流関連損傷を抑制または処置するためのものである。一部の実施形態では、虚血－再潅流関連損傷は、卒中である。一部の実施形態では、虚血－再潅流関連損傷は、虚血再潅流－関連網膜損傷である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、経口投与される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、注射によって投与される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、静脈内投与される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、障害を抑制する方法である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、障害を処置する方法である。

別の態様は、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの無水物の多形であり、多形に関する粉末Ｘ線回折パターンは、少なくとも下記の角度位置で特徴的ピークを含み、角度位置は、±０．２変動し得る：４．１０、１２．１２、および１６．１４。一部の実施形態では、データは、Ｃｕ Ｋα１供給源、１．５４０５９８Åの波長、および２３～２５℃の温度で得られる。一部の実施形態では、多形は、少なくとも下記の角度位置で特徴的ピークを含み、角度位置は、±０．２変動し得る：４．１０、１１．７７、１２．１２、および１６．１４。一部の実施形態では、多形は、少なくとも下記の角度位置で特徴的ピークを含み、角度位置は、±０．２変動し得る：４．１０、１１．７７、１２．１２、１６．１４、および２２．４１。一部のまたはいずれかの実施形態では、多形に関する粉末Ｘ線回折パターンは、下記の角度位置の少なくとも１つで特徴的ピークを含み、角度位置は、±０．２変動し得る：４．１０、１１．７７、１２．１２、１６．１４、および２２．４１。一部のまたはいずれかの実施形態では、多形に関する粉末Ｘ線回折パターンは、下記の角度位置の少なくとも２つで特徴的ピークを含み、角度位置は、±０．２変動し得る：４．１０、１１．７７、１２．１２、１６．１４、および２２．４１。一部のまたはいずれかの実施形態では、多形に関する粉末Ｘ線回折パターンは、下記の角度位置の少なくとも２つで特徴的ピークを含み、角度位置は、±０．２変動し得る：４．１０、１１．７７、１２．１２、および１６．１４。一部のまたはいずれかの実施形態では、多形に関する粉末Ｘ線回折パターンは、下記の角度位置の少なくとも２つで特徴的ピークを含み、角度位置は、±０．２変動し得る：４．１０、１２．１２、および１６．１４。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、角度位置は±０．１変動し得る。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、角度位置は±０．０５変動し得る。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は、実質的に図５、１１、１４、および１６のいずれか１つに示されるような粉末ｘ線回折パターンを有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は、実質的に図７に示されるような示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ＤＳＣサーモグラムは、約４７℃から約５３℃で単一の吸熱ピークを有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ＤＳＣサーモグラムは、約４９℃から約５３℃で単一の吸熱ピークを有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ＤＳＣサーモグラムは、約５０℃から約５２℃で単一の吸熱ピークを有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ＤＳＣサーモグラムは、約５０．５℃で単一の吸熱ピークを有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は、実質的に図８に示されるような熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラムを有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は、実質的に図６に示されるような^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの少なくとも約９５モル％は多形である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの少なくとも約９９モル％は多形である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、組成物のＨＰＬＣにより測定された少なくとも約９５％ａ／ａは、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、組成物のＨＰＬＣにより測定された少なくとも約９９％ａ／ａは、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンである。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの効力は、少なくとも約９５％である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの効力は、少なくとも約９９％である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は複数の粒子として存在し、粒子は、約１１：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は複数の粒子として存在し、粒子は、約７：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は、約７５～８５％のＩＰＡ／水を含む溶媒によって再結晶化された。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は、約８０～８５％のＩＰＡ／水を含む溶媒によって再結晶化された。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、多形は、約８５％のＩＰＡ／水を含む溶媒によって再結晶化された。

本発明の別の態様は、本明細書に記載される多形、または本明細書に記載される組成物、および薬学的に許容される溶媒、担体、もしくは賦形剤を含む医薬組成物、あるいは本明細書に記載される多形、または本明細書に記載される組成物、および薬学的に許容される溶媒、担体、もしくは賦形剤で調製された医薬組成物である。

別の態様は、α－シヌクレインパチー、タウオパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、外傷性脳損傷、または虚血－再潅流関連損傷を処置または抑制する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される多形または本明細書に記載される組成物を、それを必要とする個体に投与することを含む、方法である。

別の態様は、組成物から２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンを再結晶化させる方法であって、ａ）約４０～４５℃の温度で、組成物とＩＰＡおよび水とを接触させて、得られるＩＰＡの水に対する比が約７５～８７％のイソプロパノール（ＩＰＡ）／２５～１３％の水（ｖ：ｖ）になるようにすること；ｂ）混合物を約３２℃に冷却すること；およびｃ）２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンを混合物から濾過することを含む、方法である。一部の実施形態では、ステップ（ａ）は：ａ１）組成物とＩＰＡとを接触させること；ａ２）混合物を約４０～４５℃に温めること；およびａ３）水を混合物に添加して、ＩＰＡの水に対する比が約７５～８５％のＩＰＡ：２５～１５％の水（ｖ：ｖ）になるようにすることを含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ステップ（ａ）は、組成物が溶解するように撹拌することを含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ＩＰＡ：水の比は、約８０～８５％のＩＰＡ：２０～１５％の水（ｖ：ｖ）である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ＩＰＡ：水の比は、約８５％のＩＰＡ：１５％の水（ｖ：ｖ）である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ステップ（ａ３）は、混合物の温度を約４０～４５℃に戻すことを含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、ステップ（ａ）の後に混合物をポリッシュフィルタリング（ｐｏｌｉｓｈ ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ)することを含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ステップ（ｂ）は、約２～１０時間にわたって約３２℃に冷却することを含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ステップ（ｂ）は、約６時間にわたって約３２℃に冷却することを含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、ステップ（ｂ）の後に、混合物を約２～２４時間、約３２℃で保持することを含むステップ（ｂ１）を含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、ステップ（ｂ）の後に、混合物を約６時間、約３２℃で保持することを含むステップ（ｂ１）を含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、存在する場合にはステップ（ｂ）または（ｂ１）の後に、混合物を約０℃に冷却することを含むステップ（ｂ２）を含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ステップ（ｂ２）は、混合物を約３～２４時間にわたって約０℃に冷却することを含む。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、ステップ（ｂ２）は、混合物を約１時間、約０℃で保持することをさらに含む。

別の態様は、直前のパラグラフの方法により作製された、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンを含む組成物である。

別の態様は、医薬組成物を作製する方法であって、先行するパラグラフのいずれか１つに記載される多形または先行するパラグラフのいずれか１つの組成物を、液体またはエマルジョン形態に変換することを含む、方法である。一部の実施形態では、医薬組成物は、経口溶液、液体充填カプセル、または注射可能な溶液として提供される。これらの方法により生成された医薬組成物が提供される。

別の態様は、実質的に図３１に示されるようなＸＲＰＤプロットを有する、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの準安定融解非晶質形態である。

一態様は、アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷からなる群より選択される障害を処置または抑制する方法であって、治療有効量の、式：

の化合物、またはそのヒドロキノン形態；またはその溶媒和物もしくは水和物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法である。一部の実施形態では、化合物は：

またはそのヒドロキノン形態である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、キノン形態にある。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、ヒドロキノン形態にある。一部の実施形態では、方法は、アルツハイマー病を抑制または処置するためのものである。一部の実施形態では、方法は、パーキンソン病を抑制または処置するためのものである。一部の実施形態では、パーキンソン病を抑制または処置するための方法は、特発性パーキンソン病を処置または抑制することを含む。一部の実施形態では、パーキンソン病を抑制または処置するための方法は、家族性（即ち、遺伝的）パーキンソン病を処置または抑制することを含む。一部の実施形態では、パーキンソン病を抑制または処置するための方法は、患者が下記の遺伝子：ＭＡＰＴ（微小管関連タンパク質タウ）、ＰＲＫＮ（パーキン）、ＰＩＮＫ１（ＰＩＮＫ１）、ＬＲＲＫ２（ロイシンリッチリピートキナーゼ２）、ＧＢＡ（グルコセレブロシダーゼ）、ＳＮＣＡ（アルファシヌクレイン）、ＰＡＲＫ７（ＤＪ－１）、および／またはＵＣＨＬ１（ユビキチンカルボキシル－末端エステラーゼＬ１）の１つまたは複数で変異を有する場合のものである。一部の実施形態では、方法は、外傷性脳損傷を抑制または処置するためのものである。一部の実施形態では、方法は、虚血－再潅流関連損傷を抑制または処置するためのものである。一部の実施形態では、虚血－再潅流関連損傷は、卒中である。一部の実施形態では、虚血－再潅流関連損傷は、虚血再潅流関連網膜損傷である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、経口投与される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、注射によって投与される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、化合物は、静脈内投与される。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、障害を抑制する方法である。前述の実施形態のいずれかを含む一部の実施形態では、方法は、障害を処置する方法である。

前述の化合物の全てを含む本明細書に記載される化合物のいずれか１つまたは複数は、薬学的に許容される担体、薬学的に許容される賦形剤、または薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物に使用することができる。一部の実施形態では、組成物は、内部使用に製剤化される。前述の化合物の全てを含む本明細書に記載される化合物のいずれか１つまたは複数は、単位用量製剤に製剤化することができる。

本明細書に記載される化合物、組成物、製剤、および方法の全てに関し、キノン形態にある任意の化合物は、所望の場合、その還元形態（ヒドロキノン）で使用することもできる。即ち、シクロヘキサジエンジオン化合物（酸化キノン）形態として本明細書に挙げられた化合物は、所望されるようにそれらのベンゼンジオール（還元ヒドロキノン）形態で使用することもできる。

本明細書に記載される全ての化合物、組成物、および製剤、ならびに本明細書に記載される化合物または組成物または製剤を使用する全ての方法に関して、化合物または組成物は、列挙された構成成分もしくはステップのいずれかを含むことができるか、または列挙された構成成分もしくはステップ「から本質的になる」ことができるか、または列挙された構成成分もしくはステップ「からなる」ことができる。即ち、「含むこと（comprising）」または「含む（comprises）」という移行句は、「～から本質的になること（consisting essentially of）」または「～から本質的になる（consists essentially of）」という移行句によって置き換えることができる。あるいは、「含むこと（comprising）」または「含む（comprises）」という移行句は、一部または任意の実施形態では、「～からなること（consisting of）」または「～からなる（consists of）」という移行句によって置き換えることができる。組成物が列挙された構成成分「から本質的になる」と記載される場合、組成物は、列挙された構成成分を含有し、処置されている状態に実質的に影響を及ぼさない他の構成成分を含有していてもよいが、明らかに列挙されたそれらの構成成分以外に、処置されている状態に実質的に影響を及ぼす任意の他の構成成分を含有しないか；または組成物が処置されている状態に実質的に影響を及ぼす列挙されたもの以外の余分な構成成分を含有する場合、組成物は、処置されている状態に実質的に影響を及ぼす十分な濃度もしくは量の余分な構成成分を含有しない。方法が列挙したステップ「から本質的になる」と記載される場合、方法は、列挙されたステップを含有し、処置されている状態に実質的に影響を及ぼさない他のステップを含有していてもよいが、方法は、明らかに列挙されたそれらのステップ以外に、処置されている状態に実質的に影響を及ぼす任意の他のステップを含有しない。非限定的な具体的な例として、組成物が構成成分「から本質的になる」と記載された場合、組成物は、任意の量の薬学的に許容される担体、ビヒクル、賦形剤、または希釈剤、および処置されている状態に実質的に影響を及ぼさないような他の構成成分を、追加として含有していてもよい。

図１Ａは、化合物２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（「Ｃ９」）、２，３，５－トリメチル－６－オクチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（「Ｃ８」）、２，３，５－トリメチル－６－ヘプチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（「Ｃ７」）、またはビヒクルのみの、準化学量論的な比での存在下での、組換えヒトαシヌクレイン（αＳｙｎ）凝集の動態を示す。

図１Ｂは、Ｃ９、Ｃ８、またはＣ７の非存在（ビヒクル）または存在下での、フィブリル化のｔ＝２４時間での、αＳｙｎのフィブリル含量を示す。フィブリル含量は、相対的ＴｈＴ蛍光強度に基づいて評価した（１００％は、ビヒクルで処理したαＳｙｎ試料の平均の、ｔ＝４５．５時間でのエンドポイント値に設定した）。

図２は、９４時間のインキュベーション後の、タウ予備形成フィブリル含量に対する、ビヒクル、Ｃ９、Ｃ８、またはＣ７処理の効果を示す。

図３Ａは、Ｃ９、Ｃ８、またはＣ７同時処置の非存在または存在下での、ＲＳＬ３で処置したＮ２７ラットドーパミン作動性細胞における核および凝集αシヌクレインを示す。

図３Ｂは、Ｎ２７細胞での、ＲＳＬ３誘発型αシヌクレイン凝集に対する、Ｃ９、Ｃ８、またはＣ７処置の効果を示す。

図４Ａおよび４Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスのオープンフィールド自発運動アッセイにおける、１－メチル－４－フェニル－１，２，３，６－テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）で抑制された垂直活動（それぞれ、全体的な垂直カウントおよび垂直時間）に対する、Ｃ９投薬の効果を示す。 図４Ａおよび４Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスのオープンフィールド自発運動アッセイにおける、１－メチル－４－フェニル－１，２，３，６－テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）で抑制された垂直活動（それぞれ、全体的な垂直カウントおよび垂直時間）に対する、Ｃ９投薬の効果を示す。

図５は、長時間スキャン法により分析した、受け取ったままの材料（ＩＤ １－１）、パターンＡのＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。

図６は、ＭｅＯＤにおける、受け取ったままの材料（ＩＤ １－１）の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。

図７は、受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）の自立型ＤＳＣサーモグラムを示す。

図８は、受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）のＴＧＡおよびＤＣＳサーモグラムを示す。

図９Ａ（１００μｍスケールが、右下の隅に示される）および９Ｂ（２０μｍスケールが、右下の隅に示される）は、受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）の、それぞれ１００×および４００×倍率での顕微鏡画像を示す。 図９Ａ（１００μｍスケールが、右下の隅に示される）および９Ｂ（２０μｍスケールが、右下の隅に示される）は、受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）の、それぞれ１００×および４００×倍率での顕微鏡画像を示す。

図１０は、受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）に関するＤＶＳ等温線プロットを示す。

図１１は、ＤＶＳ機器での加湿サイクル後の固体（上）と比較した、受け取ったままの固体（ＩＤ－１－１）、パターンＡ（下）のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。

図１２は、受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

図１３は、ＩＤ １－１の熱処理後の、ＩＤ－１０－１のＤＳＣサーモグラムを示す。

図１４は、熱処理から回収された固体（ＩＤ １０－１）（上）と比較した、受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）、パターンＡ（下）のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す。

図１５は、安定性試料ＩＤ－４－１のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

図１６は、７５％ＲＨおよび４０℃で１週間後、固体形態安定性試料ＩＤ－４－１（上）と比較した、受け取ったままのＩＤ－１－１のＸＲＰＤディフラクトグラム（下）を示す。

図１７Ａ（１００μｍスケールが、右下の隅に示される）および１７Ｂ（２０μｍスケールが、右下の隅に示される）は、それぞれ１００×および４００×倍率での、ＩＤ－４－１の顕微鏡画像を示す。 図１７Ａ（１００μｍスケールが、右下の隅に示される）および１７Ｂ（２０μｍスケールが、右下の隅に示される）は、それぞれ１００×および４００×倍率での、ＩＤ－４－１の顕微鏡画像を示す。

図１８は、２５×倍率でのＩＤ－３８－１の顕微鏡画像を示し、５００μｍスケールが右下の隅に示される。

図１９は、１００×倍率でのＩＤ－３８－１の顕微鏡画像を示し、１００μｍスケールが右下の隅に示される。

図２０は、４００×倍率でのＩＤ－３８－１の顕微鏡画像を示し、２０μｍスケールが右下の隅に示される。

図２１は、２５×倍率でのＩＤ－３８－２の顕微鏡画像を示し、５００μｍスケールが右下の隅に示される。

図２２は、１００×倍率でのＩＤ－３８－２の顕微鏡画像を示し、１００μｍスケールが右下の隅に示される。

図２３Ａおよび２３Ｂは、４００×倍率でのＩＤ－３８－２の顕微鏡画像を示し、２０μｍスケールが右下の隅に示される。 図２３Ａおよび２３Ｂは、４００×倍率でのＩＤ－３８－２の顕微鏡画像を示し、２０μｍスケールが右下の隅に示される。

図２４は、２５×倍率で両方のロットＩＤ－３８－１（上）およびＩＤ－３８－２（下）を比較する、顕微鏡法を示し、５００μｍスケールが右下の隅に示される。

図２５は、１００×倍率で両方のロットＩＤ－３８－１（上）およびＩＤ－３８－２（下）を比較する、顕微鏡法を示し、１００μｍスケールが右下の隅に示される。

図２６は、４００×倍率で両方のロットＩＤ－３８－１（上）およびＩＤ－３８－２（下）を比較する、顕微鏡法を示し、２０μｍスケールが右下の隅に示される。

図２７および２８は、それぞれ、材料の実施例３Ａ、調製物１および２の代表的な実験に関する粒径分布を示す。 図２７および２８は、それぞれ、材料の実施例３Ａ、調製物１および２の代表的な実験に関する粒径分布を示す。

図２９および３０は、それぞれ、材料の実施例３Ｂ、調製物１および２の代表的な実験に関する粒径分布を示す。 図２９および３０は、それぞれ、材料の実施例３Ｂ、調製物１および２の代表的な実験に関する粒径分布を示す。

図３１は、室温に５分間冷却した液体Ｃ９のＸＲＰＤディフラクトグラムである。

図３２は、ストレスがそれほどない条件での、温度サイクル実験からのＤＳＣサーモグラムである。

本発明は、α－シヌクレイノパチー、タウオパチー、ＡＬＳ、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷を処置または抑制するための化合物、組成物、および方法を提供する。α－シヌクレイノパチーは、ニューロン、神経線維、またはグリア細胞におけるアルファ－シヌクレインタンパク質の凝集体の異常な蓄積によって特徴付けられる神経変性疾患である。タウオパチーは、アルツハイマー病など、ヒト脳における神経原線維またはグリオ原線維変化でのタウタンパク質の病理学的凝集に関連する神経変性疾患のクラスに属する（例えば、Cellular and Molecular Neurobiology (2018) 38:965-980を参照）。実施例に示されるように、特許請求される化合物は、アルファ－シヌクレインタンパク質の凝集体を低減させる際の、およびタウタンパク質の凝集を低減させる際の、有効性が示されている。理論に束縛されることを望まないが、それに対する効果が主張される疾患の場合、脳への薬物の浸透を有することが有益であり得、加えて他の組織に比べて脳へ薬物を優先的な分配させることが有益であり得る。例えば、これはオフターゲットおよび副作用を低減し得る。出願人は意外にも、特許請求される化合物が、血漿に対して脳への化合物の、優れた脳透過および優れた分配を有することを見出した。

本発明はさらに、化合物２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの固体形態、固体形態をより高い純度で含みより好ましい粒子モルホロジーおよび粒度分布などの好ましい特徴を有する組成物、ならびにこれを作製するためのプロセスを提供する。本明細書で提供される詳細な説明、実験セクション、および図に、より詳細に示されるように、組成物は、改善された純度（例えば、より低い銀含量）、改善された取扱い特徴（例えば、流動性）、および医薬品に製剤化するための改善された能力（例えば、ミリングするための改善された能力）など、有益な特性を有する。粒子は、初期のプロセスと比較して、良好な流動およびモルホロジー特性を有する。本粒子の使用は、薬物製品製造、例えばカプセル充填を容易にする。さらに、本発明の粒子を使用すれば、費用、時間、およびプロセスの効率に関して利点を提供する、薬物製品製造に必要とされる賦形剤の量を低減させることが、可能になり得る。事実、薬物物質が粘着性であるかまたは容易に流動しない場合、前記薬物物質の取扱いを改善するために、より多くの賦形剤が必要であり得る。また、薬物物質のミリングが必要である場合、粘着性の材料は、ミリング設備の表面での損失に起因して収率が低下し得、ミリングされた生成物はより多くのまたはより壊れにくい凝集体も形成し得る。これらの特徴は、薬物製品製造の処理において望ましくなく、記載されるプロセスで改善される。

本明細書で使用される略語は、他に指定されない限り、化学および生物学的技術分野内におけるそれらの従来の意味を有する。

本明細書で、「約（about）」値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする変動を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」への言及の記載は、「Ｘ」の記載を含む。

本明細書で使用される場合、他に指定されない限り、「約（about）」および「およそ（approximately）」という用語は、組成物または剤形の成分の温度、用量、量、または重量パーセントなどの様々な用語に関連して使用される場合、例えば、指定された温度 用量、量、または重量パーセントから得られたものと同等の効果をもたらすことが当業者により理解される温度、用量、量、または重量パーセントを意味する。具体的に、「約」および「およそ」という用語は、この文脈で使用される場合、指定された温度、用量、量、または重量パーセントなどの１５％以内、１０％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、または０．５％以内の温度、用量、量、または重量パーセントなどを企図する。

本明細書で使用される「ａ」または「ａｎ」という用語は、文脈が他のことを明示しない限り、１つまたは複数を意味する。

「被験体」、「個体」、または「患者」とは、個々の生体、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。

本明細書で論じられる化合物および方法で障害を「処置すること（treating）」とは、本明細書で論じられる化合物の１種または複数を、追加の治療剤と共にまたは追加の治療剤なしで、障害または障害の１つもしくは複数の症状のいずれかを低減または無くすために、あるいは障害または障害の１つもしくは複数の症状の進行を遅延させるために、あるいは障害または障害の１つもしくは複数の症状の重症度を低減させるために、投与することと定義される。本明細書で論じられる化合物および方法による障害の「抑制」は、本明細書で論じられる化合物の１種または複数を、追加の治療剤と共にまたは追加の治療剤なしで、障害の臨床的症状発現を抑制するために、または障害の有害症状の症状発現を抑制するために、投与することと定義される。処置と抑制との間の区別は、処置は、障害の有害症状が被験体で表れた後に行われ、一方、抑制は、障害の有害症状が被験体で表れる前に行われることである。抑制は、部分的、実質的に全体的、または全体的であってもよい。一部の実施形態では、遺伝子スクリーニングを使用して、障害のリスクのある患者を特定することができる。次いで本明細書に開示される化合物および方法は、任意の有害症状の出現を抑制するために、障害の臨床症状を発症するリスクのある無症候性患者に投与することができる。

本明細書で論じられる化合物の「治療的使用」は、本明細書で定義される障害を処置または抑制するために本明細書で論じられる化合物の１種または複数を使用することと定義される。化合物の「治療有効量」は、被験体に投与されたとき、障害または障害の１つもしくは複数の症状のいずれかを低減または無くすために、あるいは障害または障害の１つもしくは複数の症状の進行を遅延させるために、あるいは障害または障害の１つもしくは複数の症状の重症度を低減させるために、あるいは障害の臨床的症状発現を抑制するために、あるいは障害の有害症状の症状発現を抑制するために、十分な化合物の量である。治療有効量は、１回または複数の投与で与えることができる。

「２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン」および「Ｃ９」は、本明細書では同義で使用される。

「２，３，５－トリメチル－６－オクチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン」および「Ｃ８」は、本明細書では同義で使用される。

「２，３，５－トリメチル－６－ヘプチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン」および「Ｃ７」は、本明細書では同義で使用される。

「ヒドロキノン形態」は、キノン環の２電子還元が行われた場合の化合物の形態を示し、２個のオキソ基から２個のヒドロキシル基への正味の変換が提供される。例えば、キノン化合物：

のヒドロキノン形態は、下記：

である。

「アルファ－シヌクレイン」および「α－シヌクレイン」は、本明細書では同義で使用される。

本明細書の化合物の記載は、全ての同位体置換体（isotopologue）も含み、一部の実施形態では、本明細書の全ての化合物の部分的に重水素化されたまたは過重水素化された（perdeuterated）類似体を含む。

虚血－再潅流関連損傷には、限定するものではないが卒中および虚血再潅流関連網膜損傷が含まれる。

「卒中」には、虚血性脳卒中（非限定的な例には、血栓性脳卒中、塞栓性脳卒中が含まれる）、出血性脳卒中（非限定的な例には、脳内出血、くも膜下出血が含まれる）、および一過性虚血性発作が含まれる。一部の実施形態では、卒中は、虚血性脳卒中である。一部の実施形態では、卒中は、出血性脳卒中である。一部の実施形態では、卒中は、一過性虚血性発作である。

本明細書の特許請求の範囲に記載される全ての特徴付けデータ（例えば、ＸＲＰＤピーク、ＤＳＣ、ＴＧＡ、粒径分布など）に関し、一部の実施形態では、データは、実質的に本明細書で記載されるように行われる方法によって得られる（例えば、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、およびＴＧＡに関して、例えば具体的な方法論に関しては実施例７を参照）。「実質的に本明細書で記載されるように」は、当業者が、指定された方法から得られたものに実質的に等しい結果を提供するため当業者によって理解される方法を使用することができることを示す。

医薬製剤
特許請求される結晶形態に関し、残留溶媒は許容限度内にあり、医薬組成物への製剤化に十分適したものにする。固体状態の形態は、結晶化技法を介した精製を容易にすることも可能である。特許請求される結晶形態は、吸湿性でも水和物／溶媒和物でもなく、これは湿度曝露に関して特殊な取扱いを必要としないことを意味する。さらに、再結晶化プロセスから得られる改善されたモルホロジーは、製造中のより容易な取扱いを可能にする（本明細書で、より詳細に記載されるように）。本明細書に記載される化合物は、薬学的に許容される賦形剤、薬学的に許容される担体、および薬学的に許容されるビヒクルなどの添加剤との製剤化によって、医薬組成物として製剤化することができる。適切な薬学的に許容される賦形剤、担体、およびビヒクルには、加工剤（processing agent）および薬物送達改質剤および増強剤、例えば、一部の実施形態では、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、単糖、二糖、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、デキストロース、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、ポリビニルピロリドン、低融点ワックス、およびイオン交換樹脂など、ならびにこれらの２種またはそれよりも多くの組合せが含まれる。他の適切な薬学的に許容される賦形剤は、参照により本明細書に組み込まれる"Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Pub. Co., New Jersey (1991)、および"Remington: The Science and Practice of Pharmacy," Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 20th edition (2003) and 21st edition (2005)に記載される。

医薬組成物は、単位用量が治療効果を有するのに十分な用量である、単位用量製剤を含むことができる。

本発明の化合物を含有する医薬組成物は、一部の実施形態では、液剤、懸濁剤、またはエマルジョンを含む、意図される投与方法に適した任意の形態にあってもよい。液体担体は、典型的には、液剤、懸濁剤、およびエマルジョンを調製するのに使用される。本発明の実施における使用が企図される液体担体には、一部の実施形態では、水、食塩水、薬学的に許容される有機溶媒（複数可）、および薬学的に許容される油または脂肪など、ならびにこれらの２種またはそれよりも多くの混合物が含まれる。液体担体には、他の適切な薬学的に許容される添加剤、例えば、可溶化剤、乳化剤、栄養剤、緩衝液、保存剤、懸濁化剤、増粘剤、粘度調節剤、および安定化剤などが含有されてもよい。適切な有機溶媒には、一部の実施形態では、エタノールなどの１価アルコール、およびグリコールなどの多価アルコールが含まれる。適切な油には、一部の実施形態では、ゴマ油、ダイズ油、ココナツ油、オリーブ油、サフラワー油、および綿実油などが含まれる。非経口投与では、担体は、油状エステル、例えば、オレイン酸エチル、およびミリスチン酸イソプロピルなどとすることもできる。本発明の組成物は、微粒子、マイクロカプセル、およびリポソームカプセル化物質（liposomal encapsulate）など、ならびにこれらの任意の２種またはそれよりも多くの組合せの形態にあってもよい。

例えば：Lee, "Diffusion-Controlled Matrix Systems", pp. 155-198ならびにRon and Langer, "Erodible Systems", pp. 199-224, in "Treatise on Controlled Drug Delivery", A. Kydonieus Ed., Marcel Dekker, Inc., New York 1992に記載されるような、拡散制御マトリックス系または侵食系などの、時間放出または制御放出送達系を使用してもよい。マトリックスは、一部の実施形態ではｉｎ ｓｉｔｕおよびｉｎ ｖｉｖｏで自発的に、一部の実施形態では加水分解または酵素切断によって、例えば、プロテアーゼによって分解することができる、生分解性材料であってもよい。送達系は、一部の実施形態では、天然に存在するまたは合成のポリマーまたはコポリマーであってもよく、一部の実施形態では、ヒドロゲルの形態にあってもよい。切断可能な連結を有する例示的なポリマーには、ポリエステル、ポリオルトエステル、ポリ無水物、多糖、ポリ（ホスホエステル）、ポリアミド、ポリウレタン、ポリ（イミドカーボネート）、およびポリ（ホスファゼン）が含まれる。

本発明の化合物は、経腸的に、経口的に、非経口的に、舌下的に、吸入によって（例えば、ミストまたはスプレーとして）、直腸的に、または局所的に、従来の無毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを所望されるように含有する投薬単位製剤で投与されてもよい。一部の実施形態では、適切な投与様式には、経口、皮下、経皮、経粘膜、イオン導入、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内（例えば、鼻腔粘膜を介して）、硬膜下、直腸、および胃腸など、ならびに特定のまたは罹患した臓器または組織に直接が含まれる。局所投与用の製剤には、ローション剤、チンキ剤、クリーム剤、エマルジョン、軟膏、スプレー剤、およびゲル剤などが含まれてもよく、日焼け止め、保湿ローション剤およびクリーム剤、顔用ゲル剤およびクリーム剤など、他の適切な製剤にさらに製剤化されてもよい。これらの組成物では、活性生成物は、例えば、水、アセトン、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタン１，３ジオール、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、鉱油、およびこれらの混合物を含む１種または複数の不活性賦形剤と混合される。局所投与は、経皮投与、例えば経皮パッチまたはイオン導入デバイスの使用を含んでもよい。本明細書で使用される場合、非経口という用語には、皮下、静脈内、筋肉内、および胸骨内注射または注入技法が含まれる。化合物は、所望の投与経路に適切な、薬学的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルと混合される。経口投与が好ましい投与経路であり、経口投与に適した製剤が好ましい製剤である。局所投与が別の好ましい投与経路であり、局所投与に適した製剤が好ましい製剤である。本明細書での使用のために記載される化合物は、固体形態で、液体形態で、エアロゾル形態で、または錠剤、丸剤、粉末混合物、カプセル剤、顆粒剤、注射剤、クリーム剤、液剤、坐剤、浣腸、結腸洗浄、エマルジョン、分散物、食品プレミックスの形態で、および他の適切な形態で投与することができる。化合物は、リポソーム製剤で投与することもできる。追加の投与方法は、当技術分野で公知である。

局所投与用の組成物は、エマルジョンまたは滅菌液剤であることができる。溶媒またはビヒクルとして、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、特にオリーブ油、または注射可能な有機エステル、ある特定の実施形態では、オレイン酸エチルが使用されてもよい。これらの組成物は、アジュバント、特に湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤、および安定化剤を含有することもできる。滅菌は、いくつかの方式で、ある特定の実施形態では、細菌学的フィルターを使用して、放射線によって、または加熱によって実施することができる。それらは滅菌水または任意の他の注射可能な滅菌媒体での使用時に溶解することができる、滅菌固体組成物の形態で調製することもできる。

注射可能な調製物、一部の実施形態では滅菌の注射可能な水性または油性懸濁物は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の技術に従い製剤化されてもよい。滅菌の注射可能な調製物は、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌の注射可能な溶液または懸濁物、一部の実施形態では、プロピレングリコール中の溶液であってもよい。用いられ得る許容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンガー液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌の固定油は、溶媒または懸濁媒体として従来より用いられている。この目的のため、任意の無刺激の固定油は、合成モノ－またはジグリセリドを含めて用いられてもよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射剤の調製での使用を見出している。

経口投与用の固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤を含んでいてもよい。そのような固体剤形では、活性化合物は、スクロース、ラクトース、またはデンブンなどの少なくとも１種の不活性希釈剤と混ぜられてもよい。そのような剤形は、不活性希釈剤以外の追加の物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も含んでいてもよい。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、剤形は緩衝化剤も含んでいてもよい。錠剤および丸剤は、さらに、腸溶コーティングと共に調製することができる。

経口投与用の液体剤形は、水などの当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤を含有する薬学的に許容されるエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤を含んでいてもよい。そのような組成物は、アジュバント、例えば湿潤剤、乳化および懸濁化剤、シクロデキストリン、および甘味剤、矯味矯臭剤、および芳香剤も含んでいてもよい。

本発明の化合物は、リポソームの形態で投与することもできる。当技術分野で公知のように、リポソームは一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソームは、水性媒体中に分散された単層または多層水和液晶によって形成される。リポソームを形成することが可能な、任意の無毒性の生理学的に許容されるおよび代謝可能な脂質を、使用することができる。リポソーム形態にある本組成物は、本発明の化合物に加え、安定化剤、保存剤、および賦形剤などを含有することができる。好ましい脂質は、天然および合成の両方の、リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成する方法は、当技術分野で公知である。例えば、Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.W., p. 33 et seq. (1976)を参照されたい。

本発明の製剤は、本明細書に記載される２種またはそれよりも多くの化合物または組成物を含んでいてもよい。

本発明は、本明細書に記載される方法のいずれかでの使用のための、本発明の化合物のいずれか１種または複数を含む、製造物品およびキットも提供する。

単一剤形を生成するのに担体材料と組み合わせてもよい活性成分の量は、活性成分が投与される宿主および特定の投与様式に応じて変動する。しかしながら、任意の特定の個体に関する具体的な用量レベルは、用いられる特定の化合物の活性、患者の年齢、体重、体面積、ボディマス指数（ＢＭＩ）、全体的な健康、性別、および食事；投与時間、投与経路、排出率、または薬物の組合せ；ならびに特定の疾患または状態のタイプ、進行、および重症度を含む、様々な要因に依存することが理解されよう。選択される医薬品単位投薬量は、身体の標的領域で薬物の定められた最終濃度を提供するように製作され投与されてもよい。所与の状況に関する治療有効量は、通常の実験によって容易に決定することができ、通常の臨床医の技量および判断の範囲内にある。

使用することができる単回および複数回投薬量には、約０．１ｍｇ／ｋｇから約６００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１．０ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１．０ｍｇ／ｋｇから約４００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１．０ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１．０ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１．０ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１．０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１．０ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１．０ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇから約６００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇから約４００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重、または約５０ｍｇ／ｋｇから約１５０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１００ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇ体重、または約１５０ｍｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇ体重、または約２００ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇ体重、または約２５０ｍｇ／ｋｇから約３５０ｍｇ／ｋｇ体重、または約２００ｍｇ／ｋｇから約４００ｍｇ／ｋｇ体重、または約３００ｍｇ／ｋｇから約４００ｍｇ／ｋｇ体重、または約２５０ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇ体重、または約３００ｍｇ／ｋｇ体重から独立して選択される量が含まれる。本発明の化合物は、単一の１日用量で投与されてもよく、または１日当たりの総投薬量が、１日２回、３回、または４回の分割投薬量で投与されてもよい。

単回または複数回用量を投与することができる。一部の実施形態では、用量は、１回、２回、３回、４回、５回、または６回投与される。一部の実施形態では、用量は、１日当たり１回、１日当たり２回、１日当たり３回、または１日当たり４回投与される。一部の実施形態では、用量は、毎時間、２時間ごと、３時間ごと、４時間ごと、６時間ごと、１２時間ごと、または２４時間ごとに投与される。

本発明の化合物は、単独の活性医薬剤として投与することができるが、本明細書に記載される障害の処置または抑制に使用される１種または複数の他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。一部の実施形態では、本発明の化合物（複数可）は、治療有効量で存在する単独の活性医薬剤として投与される。

追加の活性剤が本発明の化合物と組み合わせて使用される場合、追加の活性剤は、一般に、Physicians' Desk Reference (PDR) 53rd Edition (1999)に示されるような治療量で、または当業者に公知であり得るような治療上有用な量で用いられてもよい。

本発明の化合物および他の治療上活性な薬剤または予防上有効な薬剤は、推奨される最大臨床投薬量でまたはより低い用量で投与することができる。本発明の組成物における活性化合物の投薬量レベルは、投与経路、障害の重症度、および個体の応答に応じて所望の応答が得られるように、変動し得る。他の治療または予防剤と組み合わせて投与される場合、治療剤もしくは予防剤は、同時にもしくは異なる時間で与えられる別々の組成物として製剤化することができるか、または治療剤もしくは予防剤は、単一組成物として与えることができる。

本発明の化合物の調製
本発明の化合物は、本明細書に提供される開示に鑑み当業者に明らかになる一般的な方法および手順を使用して、容易に入手可能な出発材料から調製することができる。典型的なまたは好ましいプロセス条件（即ち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が与えられる場合、他に記述しない限り、他のプロセス条件も使用することができることが理解されよう。最適な反応条件は、使用される特定の反応物または溶媒と共に変動し得るが、そのような条件は、通常の最適化手順によって当業者が決定することができる。Ｃ９の溶液は光感受性であり；室内照明は、理想的には波長＜４５０ｎｍを除去するようにフィルタリングされるべきである（暗室灯フィルター）。暗室照明が利用できない場合には、適切な制御、例えばアルミ箔のラッピング、琥珀色のガラス製品を使用して、溶液の光曝露を最小限に抑えるべきである。

本明細書に記載される化合物および方法の全てに関し、所望の場合、キノン形態をその還元（ヒドロキノン）形態で使用することもできる。同様に、ヒドロキノン形態は、所望の場合、その酸化（キノン）形態で使用することもできる。還元（ヒドロキノン）形態は、当技術分野で公知の方法を使用して、酸化（キノン）形態に容易に変換され得る。例えば、air, silica Miller et al ＰＣＴ国際出願２００６１３０７７５ 7 Dec 2006を参照されたい。酸化（キノン）形態は、当技術分野で公知の方法を使用して、還元ヒドロキノン形態に容易に変換され得る。例えば、Zn, AcOH Fuchs et al EJOC 6 (2009) 833-40を参照されたい。

本発明は、下記の非限定的な実施例および実施形態によってさらに記載される。

再結晶化。実施例１Ａおよび３Ａに示されるように、Ｃ９を作製するための合成方法は、高い銀含量、生成物の粘着性、ならびに望ましくない粒径および分布など、１つまたは複数の望ましくない特徴を有する生成物をもたらした。一般に、医薬品の使用では、狭い粒径分布を有する固体の生成物を有することが好ましい。実施例３Ａの生成物の粘着性は、ミリングを難しくすることおよび篩い分けが可能ではないことも含めて生成物の取扱いを難しくした。

再結晶化は、改善された特性、例えば、その後の製剤化中に生成物の性能を改善するために、生成物の固体から不純物を除去すること、ならびにより均質なサイズおよび分布の材料を生成することをもたらし得る。実施例に示されるように、再結晶化手順は、例えば：改善された純度、より高い融点、より低い銀含量、より良好な流動性、少ない粘着性、ならびにより均質な粒径および分布を含む、生成物の固体の品質の改善をもたらすことが発見された。さらに、再結晶化法は、種結晶を必要とせず、Ｃ９のオイリングアウトの問題もなかった。

再結晶化手順は一般に、Ｃ９を溶媒に溶解すること、約４０～４５℃に混合物を温めるて、Ｃ９を溶解すること、混合物を結晶化が生じる約３２℃に冷却すること、および生成物を濾過することを含む。

一部の実施形態では、再結晶化溶媒は、約７５～８５％のＩＰＡ／水である。一部の実施形態では、再結晶化溶媒は、約８０～８５％のＩＰＡ／水である。一部の実施形態では、再結晶化溶媒は、約８０～８７％のＩＰＡ／水である。一部の実施形態では、再結晶化溶媒は、約８３～８７％のＩＰＡ／水である。一部の実施形態では、再結晶化溶媒は、約８５％のＩＰＡ／水である。一部の実施形態では、比は、（ｖ：ｖ）と測定される。一部の実施形態では、比は、「重量：重量」と測定される。一部の実施形態では、再結晶化溶媒は、メタノールと水との組合せである。一部の実施形態では、再結晶化溶媒は、メタノールとヘプタンとの組合せである。

再結晶化溶媒がＩＰＡ／水である場合、一部の実施形態では、方法は、Ｃ９をＩＰＡに溶解すること（例えば、混合物を約４０～４５℃に加熱することによって）、次いで水を添加することを含む。水の添加後、混合物の温度を約４０～４５℃に戻してもよい。他の実施形態では、方法は、Ｃ９をＩＰＡ／水の混合物に溶解することを含む。

一部の実施形態では、溶解したＣ９を含有する混合物は、ポリッシュフィルタリングされる。ポリッシュフィルタリングは、約４０～４５℃で、またはＣ９を溶液で維持するのに必要な温度で行ってもよい。

一部の実施形態では、混合物を約３２℃に冷却することは、数時間にわたって、例えば約２～１０時間、または約４～８時間、または約６時間行われる。一部の実施形態では、混合物は次いで、Ｃ９を結晶化させるために約３２℃で数時間、例えば約２～２４時間、または約４～８時間、または約６時間保持される。

一部の実施形態では、混合物は次いで、さらに冷却される。一部の実施形態では、温度は、約－５℃から約５℃、または約０℃に冷却されてもよい。冷却は、単一ステップで、または複数のステップ（例えば、約２４℃に、次いで約１６℃に、次いで約０℃に冷却する）で行ってもよい。一部の実施形態では、混合物は、約３～２４時間の期間にわたって冷却される。一部の実施形態では、混合物は、約０℃で、例えば少なくとも１時間、または約１時間保持される。

再結晶化手順は、Ｃ９生成物の改善された純度をもたらした。様々な実施形態では、生成物は、ＨＰＬＣにより測定した場合、あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、少なくとも約９５％ａ／ａ、または少なくとも約９６％ａ／ａ、または少なくとも約９７％ａ／ａ、または少なくとも約９８％ａ／ａ、または少なくとも約９９％ａ／ａ、または少なくとも約９９．５％ａ／ａのＣ９を含む。

手順は、高純度の、特許請求される多形ももたらし得る。様々な実施形態では、あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの少なくとも約９５モル％、または少なくとも約９６モル％、または少なくとも約９７モル％、または少なくとも約９８モル％、または少なくとも約９９モル％、または少なくとも約９９．５モル％が多形である。

手順は、Ｃ９の高い効力ももたらし得る。効力＝（１００％－ＨＰＬＣによる総不純物）×（１００％－含水量％－全残留溶媒％－強熱残分％）。効力は、下記（ＨＰＬＣによる面積純度％／１００）×（１００－％ｗｔ／ｗｔ含水量（ＫＦ）－％ｗｔ／ｗｔ残留溶媒－％ｗｔ／ｗｔ＝強熱残分（ＲＯＩ））の通り計算され得る。様々な実施形態では、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの効力は、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％である。

手順は、より狭い粒径分布ももたらし得る。Ｄ１０は、１０％累積（０から１００％）篩下粒径分布に相当する粒子径を表す（即ち、Ｄ１０よりも小さい粒子のパーセンテージは１０％である）。Ｄ９０は、９０％累積（０から１００％）篩下粒径分布に相当する粒子径を表す（即ち、Ｄ９０よりも小さい粒子のパーセンテージは９０％である。一部の実施形態では、粒子は、約１１：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。一部の実施形態では、粒子は、約１０：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。一部の実施形態では、粒子は、約９：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。一部の実施形態では、粒子は、約８：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。一部の実施形態では、粒子は、約７：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。一部の実施形態では、粒子は、約６：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。一部の実施形態では、粒子は、約５：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。一部の実施形態では、粒子は、約４：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する。

（実施例１Ａ ２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（３）の合成）

温度計および撹拌子を備えた５０Ｌの反応器に、２，３，５－トリメチル－ベンゼン－１，４－ジオール（１）（１．３９ｋｇ、９．１ｍｏｌ）およびエーテル（１５Ｌ）を２３℃で添加した。３０分間撹拌した後、透明溶液になった。塩化第２鉄（５．６ｋｇ、３４．５ｍｏｌ）の水（２０Ｌ）中溶液を、３時間にわたって滴下添加した。反応混合物をさらに２時間、この温度で撹拌した。有機相を分離した。取り出された水性層をエーテルで抽出した（３×５Ｌ）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をジクロロメタン（ＤＣＭ）（１Ｌ）で希釈し、シリカゲルクロマトグラフィー（１カラム）で精製して、所望の生成物２（１．２７ｋｇ、９５％）を得た。ＴＬＣ（石油エーテル（ＰＥ）／酢酸エチル（ＥＡ）＝３０／１）。Ｒ_ｆ（化合物１）＝０．２。Ｒ_ｆ（生成物２）＝０．６。

温度計および撹拌子を備えた５０Ｌの反応器に、２，３，５－トリメチル－［１，４］ベンゾキノン（２）（７８０ｇ、５．２ｍｏｌ、１．０当量）、デカン酸（８９５ｇ、５．２ｍｏｌ、１．０当量）、およびアセトニトリル（１５Ｌ）を添加した。室温で３０分間撹拌した後、透明溶液になった。硝酸銀（８８２ｇ、５．２ｍｏｌ、１．０当量）を一度に添加した。反応混合物を、７５℃まで加熱した。過硫酸カリウム（１．５４ｋｇ、５．７ｍｏｌ、１．１当量）の水（３０Ｌ）中溶液を、２時間にわたって滴下添加した。添加後、反応物をさらに３時間、７５℃で撹拌した。溶液を室温に冷却した。水性層を取り出し１５Ｌの水中に加え、これを酢酸エチルで抽出した（３×５Ｌ）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮して黄色の残留物を得、これを高温メタノール（８００ｍＬ）で結晶化した。固体を濾過し、少量のメタノールおよびエーテルで洗浄し、真空中で乾燥して、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（３）（４４７ｇ）を黄色の結晶凝集体として得た。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル、１００：１）によって精製して、さらに１５５ｇの２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（３）（総量：６０２ｇ、４２％）を得た。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル（ＰＥ／ＥＡ）＝３０／１）。Ｒ_ｆ（化合物２）＝０．５。Ｒ_ｆ（生成物３）＝０．６。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 2.46 (s, 2H), 2.02-2.01(m, 9H), 1.35-1.26 (m, 22H), 0.88-0.86 (m, 5H).Ａｇ＝４５ｐｐｍ。融点４９．９。

生成物は高い銀含量を有しており、一方はＭｅＯＨからの粉砕から、他方はカラムクロマトグラフィーからの２つの単離の組合せに起因し、生成物は、微細な粒子ならびに大きな塊の化合物を含む不均質な混合物であった。

（実施例１Ｂ ２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（Ｃ９）の再結晶化）
概要。生成物を、ＮａＣｌ前処理後、２－プロパノール（ＩＰＡ）／水（Ｈ_２Ｏ）から再結晶化した後、消化、収集、ならびに空気および真空を介して乾燥することによって調製した。出発材料（実施例１Ａで調製されたＣ９、９９．９ｇ）は高いＡｇ含量（４５ｐｐｍ）を有しており、したがってブライン洗浄および２回の水洗浄を、Ｃ９化合物のメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）溶液に行った後、乾燥し再結晶化した。Ｃ９のＭＴＢＥ溶液を、２．７μｍのフィルターに通して濾過して、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）洗浄後に存在するいかなる微粒子も除去した。ＭＴＢＥから再結晶化溶媒ＩＰＡへの溶媒交換中、褐色の固体が溶液中に形成され、高温濾過して除去する必要があった。黄褐色の固体は、キノン溶液の光曝露から生じた可能性が高く、さらに分析しなかった。次いで濾過した鮮黄色の溶液を光から保護し、濃縮し、８５％のＩＰＡ／Ｈ_２Ｏ（４８６ｇ／９８ｇ）に４０℃で溶解した。熱を除去し、結晶が３５℃で形成した。スラリーを４８時間、１６℃で撹拌し、０℃に冷却し、固体を収集し、洗浄し、乾燥して、空気および真空下（約１２５ｍｍＨｇ）で一定の重量にして、８２．１ｇの微細な黄色の針を得た（８２．１％）。材料を、ＮＭＲ、ＵＰＬＣ、ＬＣＭＳ、ＩＲ、およびＭＰによって分析した。

ＮａＣｌ洗浄によるＡｇ除去。混合粉末および結晶の黄色の集合体としての粗製Ｃ９（実施例１Ａで調製した９９．９ｇ）を、５００ｍＬのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）に溶解し、小さな（１～２ｍｍ）黒色の薄片のある濁った黄色の液体を、ブライン（１００ｍＬ、Ｈ_２Ｏ中２０ｗｔ％ＮａＣｌ）で洗浄した。混濁した黄色の有機上層を保持し、残留層および無色透明な水性相を廃棄した。有機相を水で洗浄し（２×１００ｍＬ）、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４、３５ｇ）で乾燥させた。透明な黄色の溶液を、５５ｍｍのＷｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｄフィルター（２．７μｍ）の上部に積層された５５ｍｍのＷｈａｔｍａｎタイプ３フィルター（６μｍ）に通して濾過し、容器をＭＴＢＥですすいだ（２×２０ｍＬ）。ＩＰＡ（１００ｍＬ）を添加し、ロータリーエバポレーター（１２５～９０ｍｍＨｇ、４０～２５℃浴）を介して濃縮し、鮮黄色のスラリー（１８０ｇ）を得た。ＩＰＡ（３４８ｇ）を添加し、スラリーを２０分間加熱して透明にし（３５℃、１２０ｍｍＨｇ）、次いで圧力を６０ｍｍＨｇに低減し、結晶が形成し始めるまで体積を低減させた（約４５分）。得られたスラリーに、ＭＴＢＥの臭いはなかった。スラリーを３５℃で１８２ｇの重量に濃縮し、ＩＰＡ（４０４ｇ）を添加し、溶解するまで４０℃に加熱し、黄色の固体（３５ｍｍＨｇ）に濃縮した。ＩＰＡ（５００ｍＬ）を添加し、一晩撹拌した。

黄褐色の固体を除去するための濾過。褐色の薄片が、ＩＰＡ溶液中に認められ、積層された５５ｍｍのＷｈａｔｍａｎタイプ３（８μｍ）およびＷｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｄ（２．７μｍ）フィルターを通した高温濾過（約４０℃）によって除去した。粘着性の黄褐色の残留物をフィルター上に置き、透明な鮮黄色の溶液を、ロータリーエバポレーターを介して黄色の固体に濃縮した。

再結晶化。黄色の固体にＩＰＡ（４８６ｇ）を添加し、容器を４０℃に加熱し、水（９８ｇ）を透明な黄色の溶液に添加した。熱を２時間にわたって２１℃に下げて、針の鮮黄色のスラリーを得た。スラリーを１６℃で４８時間撹拌し、０℃に冷却し、濃厚な黄色のスラリーを濾過した（Ｗｈａｔｍａｎ ＃５４、１５０ｍｍ Ｂｕｃｈｎｅｒ）。微細な黄色の針を、氷冷８５％ＩＰＡ／Ｈ_２Ｏ（２×２５０ｍＬ、０℃）およびＩＰＡ（１００ｍＬ、０℃）ですすいだ。固体を吸引下に１時間置き、ニトリルダムをＢｕｃｈｎｅｒ漏斗上に設置し、ハウスバキュームの下で（約１００ｍｍＨｇ）一晩保持した。黄色の結晶（８８．９ｇ）は依然としてＩＰＡの臭いを有し、したがって新しいＢｕｃｈｎｅｒ／フィルターに移し（漏斗は、Ｃ９残留物で詰まるようになった）、真空下（１００ｍｍＨｇ、６時間）で保持して一定の重量にした（８２．１ｇ、８２．１％）。保存のため、５００ｍＬのＡｍｂｅｒタイプＩ Ｓｃｈｏｔｔ－Ｄｕｒａｎボトルに、室温で移した。結晶の体積は約２８０ｍＬ（８２．１ｇ）。

適格な方法によるＣｏＡ分析：含水量（ＫＦ）＝０．０５％；溶媒含量＝０．２３％；ＨＰＬＣ純度＝１００％ＡＵＣ；ＤＳＣによる融点＝５３．０℃；Ａｇ含量＜２．００ｐｐｍ；強熱残分＝０．０２％；効力（計算値）＝９９．７１％、パターンＡに一致した結晶形態。

効力は、下記の通り計算する（ＨＰＬＣによる面積純度％／１００）×（１００－％ｗｔ／ｗｔ含水量（ＫＦ）－％ｗｔ／ｗｔ残留溶媒－％ｗｔ／ｗｔ＝強熱残分（ＲＯＩ））。

（実施例２ 再結晶化スクリーニング）
実施例１Ａおよび３Ａに示されるように、Ｃ９を作製するための合成方法は、高い銀含量、生成物の粘着性、ならびに望ましくない粒径および分布など、１つまたは複数の望ましくない特徴を有する生成物をもたらした。上で論じたように、再結晶化は、生成物の特性を改善し得る。したがって、様々な溶媒を、Ｃ９の再結晶化における適切さに関してスクリーニングした。

１００ｍｇのＣ９を試験管に入れ、溶媒を添加し、あらゆる変化を記した。次いで試料を、ヒートガンで短時間加熱し（およそ４５～５０℃に加熱した）、溶解度を記し、室温に冷却し、溶解度を記し、次いで０℃に冷却し、溶解度を記した。結果は、以下の表にある。

下記の溶媒は、Ｃ９が低い温度で過剰に溶解するので、不適切であるとして廃棄した：ＭｅＣＮ、ＴＨＦ。

下記の溶媒は、Ｃ９がより高い温度で十分な溶媒ではないので、不適切であるとして廃棄した：水。

下記の溶媒は、溶解前にＣ９材料が融解したので、不適切であるとして廃棄した：８０％ＥｔＯＨ。これは溶液に懸濁した油を形成するので、好ましくない。冷却すると、結晶化し得るが、結晶は一般に均質ではなく、純度も高くならない。

９５％ＥｔＯＨは、医薬品として問題があり得るＭｅＯＨおよびアセトンを含有するので、不適切であるとして廃棄した。

メタノールおよびエタノールは、それらの低い沸点に起因してそれほど好ましくなかった。さらに、ＭｅＯＨからの長い針は、長い針の結晶が、よりコンパクトな粒子よりも移動および濾過するのが難しいので、それほど好ましくなかった。

エタノールは、高温の場合、ほぼ完全な可溶性材料を、低温の場合、部分的に可溶な材料を生成することに留意した。ＩＰＡは、類似の挙動も示したが、１００ｍｇ／ｍＬで高い温度で可溶であり、室温／低温では部分的に可溶であった。エタノール／水の混合物を、溶解度特性に関して最初に調査したが、Ｃ９化合物は＞４０℃でオイリングアウトするので却下した。ＩＰＡは、完全溶解の前により高い温度でオイリングアウトすることなく僅かに良好な溶解度を有し、ＩＰＡは良好な逆溶媒（Ｈ_２Ｏ）と混和できるので、エタノールが不適切であると分かった後に調査した。７０％ＩＰＡ／Ｈ_２Ｏは、融解の問題およびオイリングアウトをもたらし、それに対して１００％ＩＰＡは、低い温度で理想的に不溶性ではなかった。したがって、７０～１００％の間のＩＰＡの濃度を試験した。

１ｇスケールの試験溶液は、７５～８５％ＩＰＡ／水が、良好な溶解度（約１０：１ 体積：重量）の、濾過可能な微細な結晶および予測可能な融解／結晶化をもたらすように加熱および冷却することができる溶液を、もたらすことを決定した。播種は、必要であるように見えなかった。高温濾過は、溶液が室内灯に＞１時間曝露されたままである場合に褐色の材料が結晶化中に形成されるので、必要とされた。これは溶液が光に曝露された場合のみ観察された。回収は、微細な針に関して９２．７％であり、上清のＵＨＰＬＣ分析は、固体の９９％に対して９１％ａ／ａであり、上清が不純物を除去したことを示した。容易に濾過され洗浄され、良好な回収を有する、微細な黄色の針がもたらされた。ＵＨＰＬＣは、ＵＨＰＬＣ面積％の改善を示し、結晶は全て、サイズが類似しており、一旦乾燥させると容易に流動した。

（実施例３Ａ ２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの合成）

化合物１（２．０ｋｇ、１３．１５ｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（２０Ｌ）中撹拌溶液を、２３℃で３０分間撹拌した。塩化第２鉄（５．３３ｋｇ、３２．８８ｍｏｌ、２．５当量）の水（１９．０４Ｌ）中溶液を、２２時間にわたって滴下添加した。反応混合物をさらに２時間、この温度で撹拌した。ＨＰＬＣは、化合物１が完全に消費されたことを示した。有機相を分離した。取り出された水性層を、ジクロロメタンで抽出した（２×１０Ｌ）。合わせた有機相を、水（２×２０Ｌ）、ブライン（２×１０Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（約５ｋｇ）で乾燥させ、濃縮して粗製化合物２（１．９５ｋｇ、粗製）を得、これをさらに精製することなく次のステップで直接使用した。

化合物２（１．２５ｋｇ、８．３３ｍｏｌ、１．０当量）およびデカン酸（１．４４ｋｇ、８．３３ｍｏｌ、１．０当量）のアセトニトリル（２５Ｌ）中混合物を、室温で３０分間撹拌した。硝酸銀（３５３．９ｇ、２．０８ｍｏｌ、０．２５当量）を一度に添加した。反応混合物を７５℃まで加熱した。過硫酸カリウム（２．４８ｋｇ、９．１７ｍｏｌ、１．１当量）の水（１００ｍＬ）中溶液を滴下添加した。添加後、反応物を、７５℃でさらに３．５時間撹拌した。ＨＰＬＣは、化合物２が完全に消費されたことを示した。溶液を室温に冷却した。水性層を取り出し、５０Ｌの水中に加え、これを酢酸エチルで抽出した（３×１０Ｌ）。合わせた有機相を水性塩化ナトリウム（５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（約５ｋｇ）で乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮した。残留物を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ、ＰＥ／ＥＡ、５０／１）により精製して、粗製生成物を得た。生成物は、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣＣ）の後に油として得られた（静置後に凝固）。これを、凝固する前に素早く３つ口フラスコに投入した。油を撹拌し、撹拌により固体が形成された。固体を一晩（約１５時間）、室温（２０～３０℃）で、メタノールで粉砕し（カラム精製後、粗製生成物の量として、２体積、滴下添加した）、濾過した。得られたケーキをメタノール（５００ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥した：残留溶媒：アセトニトリル、メタノール、ジクロロメタン、および酢酸エチル）を除去するために、固体を、水浴（＜３０℃）内で、真空ポンプ（０．５ｍｍＨｇ）で２０Ｌのロータリーエバポレーターに、７日間、８時間／日で投入して、Ｃ９（１．２８ｋｇ、５６％）を黄色の結晶として得た。生成物をステンレス容器内に広げ、乳鉢で破砕して類似のサイズを得た。ミリングプロセスを数回繰り返した。固体を篩い分けしようとする試みに挑戦した。しかしながら固体は、生成物が篩（１００メッシュ）上に粘着したために篩い分けすることができなかった。この材料のミリングは難しいので、誘導された粒子は大きく、製剤化するのが難しくなる。

ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝３０／１）。Ｒ_ｆ（化合物２）＝０．５。Ｒ_ｆ（Ｃ９）＝０．８。ＬＣ－ＭＳ：ｎ／ａ。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 2.45-2.42 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.99-1.94 (m, 9H), 1.24 (m, 16H).

アッセイ＝ＨＰＬＣ ９２．２％ｗ／ｗ対参照標準。

（実施例３Ｂ ２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの再結晶化）
概要。この実施例は、１０ｇのエンジニアリングバッチ上でのＣ９の再結晶化、およびその後に続く２．４ｋｇのＣ９の再結晶化についてまとめる（両方の試料は実施例３Ａから提供された通りである）。材料を２－プロパノールに４０℃で溶解した後、水を添加して曇った溶液を達成し、これをジャケット付きフィルターに４０℃で通してポリッシュフィルタリングした。得られた透明溶液をゆっくりと３２℃に冷却し、それによって生成物は、微細な黄色の針として自発的に結晶化した。さらに段階的に１６℃に、次いで０℃に冷却することによりスラリーを得、これを濾過により収集し、水中８５％の２－プロパノールですすいだ。得られた固体を２５℃で真空乾燥して、一定の重量にして、８２％の回収で生成物（１．９７５ｋｇ）を得た。単離された固体を、ＤＳＣ、ＩＲ、および^１Ｈ ＮＭＲで試験し、合格であった。

考察

本明細書に記載される処理の利点は：オイリングなしに、真に結晶質の固体の制御された形成を可能にする；種結晶の必要なし；アッセイ／純度の上昇；良好な流動特性による粘着性の欠如；より緊密な粒径分布；ならびに単離および乾燥することがより容易な規則的な形状粒子、である。必要な場合、この材料のミリングは、単純になることが予想される。

供給されたＣ９（実施例３Ａに従い作製され、純度９２．２％）のＬＣＭＳ分析は、ＵＶ２５４で、または蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）では検出できない、全イオンカウント（ＴＩＣ）による主要な不純物を示した。不純物は、母液中の不純物の高い回収で、再結晶化した生成物において効率的にパージされた。

制定された冷却プロトコールは、オイリングアウトなしでまたは種結晶の使用を必要とせずに結晶を生成し、結晶化は３２℃で生じた。

最終生成物の単離は湿潤ケーキをもたらし、これを、ニトリルダムを使用せずに２５℃の乾燥オーブンに移した。

再結晶化（２．４ｋｇ）。

オーバーヘッド機械式撹拌子、アルゴン入口、およびＴｅｆｌｏｎコーティングされた温度プローブを備えた５０Ｌのジャケット付き反応器に、Ｃ９（２４００ｇ）および２－プロパノール（１５．６Ｌ、Ｆｉｓｈｅｒ Ａ４１６）を添加した。混合物をアルゴン下で７５ｒｐｍで撹拌し、反応器をアルミ箔で覆った。反応器のジャケットを４１℃に温め（内部温度４０℃）、６０分間撹拌すると、透明溶液になった。

反応物に、脱イオン水（２．５Ｌ、Ｒｉｃｃａ ９１５０－５）を添加し、溶液を９０分間撹拌した。溶液を、正のアルゴン圧力（８ｐｓｉ）を使用して、４０℃で、Ｐ４（１０～１６ｕｍ）焼結ガラスジャケット付き漏斗に通してポリッシュフィルタリングし、２０Ｌのガラスカーボイに収集した。

５０Ｌの反応器を、２－プロパノール（２Ｌ、Ｆｉｓｈｅｒ Ａ４１６）ですすぎ、液体を有機廃棄物として除去した。

透明な上清（３６℃）を、オーバーヘッド機械式撹拌子、アルゴン入口、およびＴｅｆｌｏｎコーティングされた温度プローブを備えた５０Ｌのジャケット付き反応器に戻し、４０℃に加熱し直した。溶液を７５ｒｐｍで撹拌し、６時間にわたって３２℃に冷却し、次いで３２℃でさらに６時間保持した。結晶が形成された。スラリーを、２４℃に１時間冷却し、さらに１６℃に１時間冷却し、０℃に１時間冷却した。

固体を、正のアルゴン圧力（８ｐｓｉ）を使用して、Ｐ４（１０～１６ｕｍ）焼結ガラス漏斗上に収集した。フィルターケーキを２－プロパノール／水（８５／１５ｖ／ｖ、２×６Ｌ）ですすぎ、アルゴン流下で２時間乾燥して、３４５０ｇの黄色の固体を得た。固体を真空オーブンに移し、２５℃で２４０時間、真空乾燥した。重量を、一定の重量が達成されるまで約２４時間の間隔でチェックして、最終生成物Ｃ９（１９７５ｇ、収率８２．２％）を自由に流動する黄色の結晶質固体として得た。固体のＤＳＣ分析は、４８．６６℃での融解の開始および５０．１３℃の融点を示した。ＨＰＬＣによるアッセイは、９９．４％ａ／ａの純度を示した。

母液を減圧下で濃縮して、４００ｇの赤色の油を得た。油の分析は、２５４ｎｍで認識可能な吸光度を有するようには見えない、ＴＩＣによる主要な不純物ピークを有する、いくらかの生成物を示した。不純物の分子量は、３７３であるように見えた（Ｍ＋Ｈ＝３７４ａｍｕ）。

適格な方法によるＣｏＡ分析：含水量（ＫＦ）＝０．０６％；溶媒含量＝０．２４％；ＨＰＬＣ純度＝１００％ＡＵＣ；ＤＳＣによる融点＝５３．０℃；Ａｇ含量＜２．００ｐｐｍ；強熱残分＝＜０．０１％；効力（計算値）＝９９．６９％、結晶形態は、形態Ａに一致する。

（実施例４ ２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの多形）
概要

受け取ったままのパターンＡおよびその融解物の概要を、以下に示す。

特徴付け

受け取ったままの固体（ＩＤ １－１、実施例１Ａおよび１Ｂに従い生成された）は、僅かに粘着性のある黄色の粉末であった。容器を、冷蔵庫内で５℃で保存した。材料は感光性であるので、容器および全ての試料バイアルは、琥珀色のまたは箔で覆われたバイアルにより光曝露から保護した。材料（ＩＤ １－１）のＸＲＰＤ分析は、材料が結晶質であり、４、１２、および１６°２θでの高い強度ピーク、ならびにいくつかの他のより低い強度ピークを有することを示し；このパターンをパターンＡと指定した（図５）。ｄ－間隔および強度を有するピークリストを、表２に示す。

材料（ＩＤ １－１）をＭｅＯＤに溶解し、^１Ｈ ＮＭＲによって分析した（図６）。ＮＭＲスペクトルは、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの構造に一致していた。これが無水物であり、溶媒和物ではないこととも一致している。

材料（ＩＤ １－１）のＤＳＣは、４８．７０℃で融解の開始を示した（図７）。同時のＴＧＡ／ＤＳＣは、０．２６％の重量損失の関連するステップにより、ＤＳＣに一致する融解の開始を示した（図８）。方法の詳細を含むＤＳＣデータの概要を、表３に示す。

受け取ったままの材料（ＩＤ １－１）の顕微鏡画像を、１００×（図９Ａ）および４００×（図９Ｂ）の倍率で獲得した。材料は、長方形の、プレート状モルホロジーを示した。

含水量に関するＫａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ（ＫＦ）滴定を、受け取ったままの材料（ＩＤ １－１）の２つの試料：第１は２４ｍｇ、および第２は４３ｍｇで行った；しかしながら、どちらの試料も、滴定装置による測定値を提供しなかった。このことは、材料の含水量が、機器に関する検出限界（＞１ｐｐｍ）の下にあることを示した。この結果は、無水物である材料と一致する。ｐｐｍ）。

受け取ったままの材料（ＩＤ １－１）を、動的蒸気収着（ＤＶＳ）機器によって加湿サイクルに供した。材料は、１５～７５％の相対湿度の範囲で０．０１％の質量変化、および２～９５％の相対湿度の全範囲にわたって０．０８％の質量変化を受けた。等温線プロットを図１０に示す。加湿サイクル後、固体をＸＲＰＤにより分析した。観察されたパターンは、受け取ったままの固体（ＩＤ １－１）、パターンＡから変化しなかった；ＸＲＰＤデータを図１１に示す。これらの結果は、材料が吸湿性ではないことを示す。

受け取ったままの固体の試料を、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度に溶解し、純度分析のためにＨＰＬＣにより注入した。不純物は観察されなかった。クロマトグラムを図１２に示す。

熱処理

１５ｍｇの受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）をＤＳＣパンに計量し、１０℃／分で６０℃に加熱し次いで２℃／分で１０℃に冷却する方法により、自立型ＤＳＣ機器上で熱処理に供した。得られた材料をパンから回収し、ＸＲＰＤ分析のためにプレーティングした（ＩＤ－１０－１）。４８．７４℃になると材料は融解し、２２．５８℃で発熱が生じると再結晶化した。回収された材料は、ＸＲＰＤによりパターンＡを示した。ＤＳＣ処理からのサーモグラムを図１３に示す。ＸＲＰＤデータを図１４に示す。

ホットステージ顕微鏡法

Ｌｉｎｋａｍホットステージシステムを用いて、融解中に受け取ったままの固体（ＩＤ－１－１）の画像を獲得した。少量の材料を、ホットステージ内の顕微鏡用スライド上に置き、温度上昇法を用いて、１℃／分の速度で３０℃から５５℃にした。一連の画像を、上昇中に２００×倍率で獲得した。モルホロジー変化は、融解まで観察されなかった（データは図示せず）。融解後、ホットステージを元の室温まで自然に冷まし、材料を、再結晶化に関して２００×倍率でモニターしたが、固体は観察されず；試料はガラスのように見えた。材料を、２１ゲージ針で操作して、結晶核生成を試みた。次いでスライドをホットステージから取り出し、２００×倍率で画像を獲得した；得られた材料は変化していないように見えた（データは図示せず）。このことは、化合物が、室温で融解液体形態（非晶質）として存在することができることを示す。

固体形態の安定性。

材料の固体形態の安定性を、１週間にわたって評価した。４９．０ｍｇのＩＤ－１－１を、箔で覆われた４ｍＬバイアルの内部に入れ、これをＫｉｍＷｉｐｅで覆った。このバイアルを、飽和水性塩化ナトリウムが入っている２０ｍＬバイアル内に入れた。バイアルを、４０℃で７日間、ホットプレート上に置き、系内に７５％相対湿度の雰囲気を創出した。７日後、固体をＨＰＬＣ用に試料採取した（ＩＤ－４－１）。

得られたクロマトグラムは、安定性試料においていかなる不純物も示さなかった。クロマトグラムを図１５に示す。ストレスがかかった材料の試料をプレーティングし、ＸＲＰＤにより分析した；観察されたパターンはパターンＡであった。ＸＲＰＤデータを図１６に示す。ＩＤ－４－１の顕微鏡画像を、１００×および４００×倍率で獲得した。画像を図１７Ａ（１００×）および図１７Ｂ（４００×）に示す。

固体形態の試料を、融解するまで５５℃で加熱し、次いで室温に５分間冷却し、ＸＲＰＤディフラクトグラムは、それが非晶質であることを示した（図３１）。２０℃で、融解物は、温度サイクルＤＳＣ実験に見られるように、最終的にはパターンＡに凝固した（図３２）。これは非晶質液体形態が準安定であり、パターンＡに変換されることを示す。

人工流体（ｓｉｍｕｌａｔｅｄ ｆｌｕｉｄ）および水への溶解度。

パターンＡおよび融解した固体の溶解度を、空腹時人工胃液（ＦａＳＳＧＦ）、摂食時人工腸液（ＦｅＳＳＩＦ）、および空腹時人工腸液（ＦａＳＳＩＦ）、水、および水中０．５％メチルセルロース＋２％ Ｔｗｅｅｎ８０で評価した。５つの箔で覆われた４ｍＬバイアルを、１１～１３ｍｇの受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）で調製し、１０ｍｍの撹拌棒を含めた。１１～１３ｍｇの間のＣ９が入っている５つの箔で覆われた４ｍＬバイアルを、ホットプレート上で、７０℃で１０分間融解し、室温に５分間冷却し、１０ｍｍの撹拌棒を含めた。

スラリーを、それぞれ２．５ｍＬの人工流体（水中０．５％メチルセルロース＋２％Ｔｗｅｅｎ８０を含む）または水中で、受け取ったままの材料ＩＤ－１－１（パターンＡ）および融解したＣ９で調製した。融解した活性医薬成分（ＡＰＩ）を含有する試料を、それらが材料の塊を含有するように見えたので、短時間超音波処理した。ｐＨおよび溶解度の両方を、３０分および２４時間で評価した。溶解度分析では、１ｍＬの各試料をシリンジフィルター内にピペットで移し、最初の０．５ｍＬをソースバイアル内に濾過し戻し、残りの０．５ｍＬを、低体積インサートによりＨＰＬＣバイアル内に濾過した。

較正点で計算された応答因子を使用して、人工流体および水におけるＡＰＩの濃度を決定した。較正試料は、ＡＣＮ中の受け取ったままの材料（ＩＤ－１－１）で調製した。各較正点に関する濃度およびピーク面積をプロットし、溶解度の評価のために、応答因子を計算した。

実験設計および得られたデータを表５に示す。各スラリーの残りを濾過し、ＸＲＰＤ分析のために、プレーティングした。観察された全てのパターンは、パターンＡであった（データは図示せず）。

ＵＰＬＣカラムで観察された高圧に起因して、異なるカラムおよび修正方法を、水中０．５％メチルセルロース＋２％Ｔｗｅｅｎ８０で２４時間データポイントに関して、水中で２４時間用いた（ＩＤ－３０－４、ＩＤ－３０－９、およびＩＤ－３０－１０）。ＩＤ－３０－４および３０－９のＨＰＬＣ試料（メチルセルロース／Ｔｗｅｅｎ８０混合物を含有するもの）を、ＡＣＮで１０×希釈した。これらの試料に、較正点の注入の新しい組を加えたものを分析し、新しい応答因子を決定し、残りの試料の溶解度を計算した（応答因子：８０８４．７９０８；Ｒ２：０．９９８９）。

（実施例５ 実施例３Ａおよび３ＢからのＣ９の結晶モルホロジー）
概要。

実施例３Ａおよび３Ｂに記載されるロットからの材料は、視覚的に黄色の、結晶質固体であった。

複数の顕微鏡画像を、３つの異なる倍率（２５×、１０×、４００×）で各ロットについて撮影して、画像を獲得するときのバイアスを回避した。第１のロット、ＩＤ－３８－１（実施例３Ｂ）は、顕微鏡法により、ほとんど、およそ１００μｍから６００μｍを越える範囲の大きい粒子を示した。全体として、粒子は規則的な形状の長方形であり、形状はいくらか平面状であり、良好な複屈折を示した。

第２のロット、ＩＤ－３８－２（実施例３Ａ）は、第１のロットと比較した場合、全体的に著しく小さい粒子を示した。およそ５０～３５０μｍの間の粒子の範囲が観察され、これらの粒子は形状がより顆粒状または不規則になる傾向があった。これらは、個々の粒子が一貫して観察される第１のロットとは異なって、より小さい粒子がより大きい粒子に粘着している注目すべき凝集も存在した。

結果。

顕微鏡法を、ＩＤ－３８－１（実施例３Ｂ）に対して、３つの異なる倍率：２５×、１００×、および４００×で実施した。Ｃ９のこの特定のロットは、顕微鏡法によって広範な粒径を示した。

図１８では、２５×倍率で、粒径および形状に分散を見ることが可能であった。主に、長方形のプレートが観察された；しかしながら、いくらかぎざぎざの２次元形状も存在した。１００×倍率の図１９で、長さはおよそ１００μｍ～６００μｍの範囲であり；複屈折が観察された。４００×倍率で、粒子は、枠内に適合するのに大き過ぎたが、滑らかな長方形の複屈折形状も同様に観察された（図２０）。

顕微鏡法は、ＩＤ－３８－２（実施例３Ａ）に対して、３つの異なる倍率：２５×、１００×、および４００×で実施した。Ｃ９のこの特定のロットは、ＩＤ－３８－１（実施例３Ｂ）と比較した場合、粒子が全体的により小さく、複屈折がより小さく、より小さい凝集粒子が、観察されたより大きい粒子の一部に「粘着している」ことを示した。

図２１では、小さい凝集粒子が２５×倍率で観察された。１００×倍率の図２２で、およそ５０μｍ～３５０μｍの範囲の顆粒形状粒子が、よりはっきりと視認可能になった。いくつかのより小さい凝集粒子も同様に観察された。４００×倍率の図２３Ａおよび２３Ｂで、粒子は、ＩＤ－３８－１（実施例３Ｂ）とは異なって枠内に観察された。半透明粒子が、球状のような形状で観察され、複屈折も、粒子の多くで観察された。複数の画像をこの倍率で獲得して、観察された広範な粒径を示すと共に、より大きい固体の一部に凝集したより小さい粒子を表示した。

ロットの比較。

ＩＤ－３８－１（実施例３Ｂ）およびＩＤ－３８－２（実施例３Ａ）の直接比較を、以下に示した。２５×倍率で、モルホロジーおよびサイズの差を、２つのロット間で素早く観察した、図２４。図２５では、１００×倍率で、小さい粒子がより大きい粒子に凝集しているのが観察されるＩＤ－３８－０２と比較した場合、より多くの個々の粒子がＩＤ－３８－１に関して観察された。４００×倍率の図２６で、粒子は、ＩＤ－３８－１（実施例３Ｂ）に関する枠内に適合するのに大き過ぎたが、滑らかなプレート状モルホロジーが明らかに観察され、それに対して、より大きい固体上の小さい凝集粒子が、ＩＤ－３８－２（実施例３Ａ）に関して再度観察された。

顕微鏡法

光学顕微鏡法を、２．５×、１０×、２０×、および４０×の対物レンズおよび偏光子を備えたＺｅｉｓｓ ＡｘｉｏＳｃｏｐｅ Ａ１デジタル撮像顕微鏡を使用して行った。画像は、内蔵Ａｘｉｏｃａｍ １０５デジタルカメラを通して獲得し、Ｚｅｉｓｓにより提供されるＺＥＮ ２（ブルーエディション）ソフトウェアを使用して処理する。

（実施例６ 実施例３Ａおよび３Ｂからの粒径分布Ｃ９）
概要。実施例３Ａ（粗製）および３Ｂ（再結晶化）からのＣ９に関する粒径分布を、Ｍａｌｖｅｒｎ ３０００ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒを使用して決定した。

実施例３Ａ、調製物１。２４．４ｍｇのＣ９試料をバイアルに計量した。およそ２０ｍＬの水を添加した。２０滴の５％オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ）水中溶液を、バイアルに添加した。溶液にキャップをし、穏やかに混合した。

実施例３Ａ、調製物２。２５．２ｍｇのＣ９試料をバイアルに計量した。およそ２０ｍＬの水を添加した。２０滴の５％ＩＧＥＰＡＬの水中溶液をバイアルに添加した。溶液にキャップをし、穏やかに混合した。

実施例３Ｂ、調製物１。２４．７ｍｇのＣ９試料をバイアルに計量した。およそ２０ｍＬの水を添加した。２０滴の５％ＩＧＥＰＡＬの水中溶液をバイアルに添加した。溶液にキャップをし、穏やかに混合した。

実施例３Ｂ、調製物２。２５．２ｍｇのＣ９試料をバイアルに計量した。およそ２０ｍＬの水を添加した。２０滴の５％ＩＧＥＰＡＬの水中溶液をバイアルに添加した。溶液にキャップをし、穏やかに混合した。

ＰＳＤ試料の目視観察。

実施例３Ａの試料は、非常に不均一な固体であることが観察された。多くの大きい粒子が試料中に観察された。両方の調製物は、類似の不均一性を含有していた。

非常に大きい結晶が、実施例３Ｂの試料で観察された。目視観察は、両方の試料の調製物において、非常に小さい結晶からより大きい結晶までのいずれかを示した。試料２の調製物は、試料１の調製物よりも視覚的に小さい／微細な粒子を含有していた。

粒径分布。

粒径分布を、Ｍａｌｖｅｒｎ ３０００ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒを使用するレーザー回折によって決定した。設定を表６に示す。同じ設定を、他の試料に関して使用した。結果を表７に示す。

表７に示されるように、両方の実施例は非常に大きい粒子から構成されるが、３Ｂは平均してかなり大きく：３Ａに関して平均ｄ（ｖ、０．５ｕｍ）＝２７８μｍ、３Ｂに関して４３３μｍである。しかしながら３Ａは、おそらくは部分的ミリングに起因して、より広いサイズ分布を有する（３Ａに関してｄ（ｖ、０．１から０．９）＝約６０μｍから９２５μｍ、それに対して３Ｂに関してｄ（ｖ、０．１から０．９）＝約１３３から８７８μｍ）。各分析の代表的な例を、図２７および２８（実施例３Ａの調製物１および２）ならびに図２９および３０（実施例３Ｂの調製物１および２）に示す。図２７および２９に見られるように、実施例３Ａの試料は、実施例３Ｂ（再結晶化）試料と比較して、より広い粒度分布を有し、二峰性特徴も有する。実施例３Ｂの試料のＤ９０とＤ１０との間には、実施例３Ａの試料（１５．５：１の比）と比較して、より狭い分布範囲がある（６．６：１の比）。Ｄ１０は、１０％累積（０から１００％）篩下粒径分布に相当する粒子径を表す（即ち、Ｄ１０よりも小さい粒子のパーセンテージは１０％である）。Ｄ９０は、９０％累積（０から１００％）篩下粒径分布に相当する粒子径を表す（即ち、Ｄ９０よりも小さい粒子のパーセンテージは９０％である）。各調製物の代表例を、図２７～３０に示す（それぞれ、実施例３Ａの調製物１、実施例３Ａの調製物２、実施例３Ｂの調製物１、実施例３Ｂの調製物２）。図２７～３０に見られるように、実施例３Ａの試料は、実施例３Ｂ（再結晶化）試料よりも広い粒径分布を有する。

（実施例７ パーキンソン病（ＰＤ）およびアルツハイマー病（ＡＤ）患者からのヒト皮膚線維芽細胞における化合物のスクリーニング）
初期スクリーニングを行って、ＰＤおよびＡＤの改善のための化合物の有効性を同定した。試験試料および溶媒対照を、Jauslin et al., Hum. Mol. Genet. 11(24):3055 (2002)、Jauslin et al., FASEB J. 17:1972-4 (2003)、および国際特許出願ＷＯ ２００４／００３５６５に記載されるものに類似の手法でＬ－ブチオニン－（Ｓ，Ｒ）－スルホキシミン（ＢＳＯ、ＧＳＨシンセターゼの特異的阻害剤）および鉄（例えば、クエン酸鉄）の添加によってストレスがかかったＰＤおよびＡＤ線維芽細胞をレスキューする能力に関して試験した。この特異的ＢＳＯ媒介細胞死は、本明細書に記載される化合物の投与によって予防または改善された。

ＡＤ実験を下記の通り行った。ＰＤ実験は、類似の手法で行った；ある特定の条件を以下の表１Ａに記す。

Ｅａｒｌｅ平衡塩（ＥＢＳ）を含むがフェノールレッドを含まない、ＭＥＭ（アミノ酸およびビタミンに富む培地）およびＭｅｄｉｕｍ １９９（Ｍ１９９）を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。ウシ胎仔血清をＣｏｒｎｉｎｇから得た。塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）および上皮増殖因子（ＥＧＦ）をＰｅｐｒｏＴｅｃｈから購入した。ペニシリン－ストレプトマイシン－グルタミンミックス、Ｌ－ブチオニン（Ｓ，Ｒ）－スルホキシミン、クエン酸鉄、およびウシ膵臓からのインスリンを、Ｓｉｇｍａから購入した。カルセインＡＭはＡｎａｓｐｅｃから購入した。細胞培養培地は、４５０ｍＬのＭＥＭ、５０ｍＬのウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、および１００マイクログラム／ｍＬのストレプトマイシンを合わせることによって調製した。アッセイ培地は、１２５ｍＬのＭ１９９、５０ｍＬのウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００マイクログラム／ｍＬのストレプトマイシン、２ｍＭのグルタミン、１０マイクログラム／ｍＬのインスリン、１０ｎｇ／ｍＬのＥＧＦ、および１０ｎｇ／ｍＬのｂＦＧＦを合わせることによって調製し；ＭＥＭを添加して体積を最大５００ｍＬにした。１０ｍＬのＢＳＯおよび１０ｍＭのクエン酸鉄溶液を、水中で調製し、その後、フィルター滅菌し、－２０℃で保存した。

試験試料を、１．５ｍＬのガラスバイアルまたはポリプロピレンバイアルに供給した。化合物をＤＭＳＯで希釈して、１ｍＭのストック溶液を得た。溶解したら、それらを－２０℃で保存した。

試験試料を、下記のプロトコールに従いスクリーニングした：

ＡＤまたはＰＤ患者由来の線維芽細胞の培養は、液体窒素中に保存されたおよそ５００，０００細胞を含むバイアルから開始した。細胞を細胞培養培地で増殖させ、３日ごとに、１：３の比でトリプシン処理によって継代培養した。コンフルエントになったら、線維芽細胞をトリプシン処理によって収集し、アッセイ培地に再懸濁し、標準の９６ウェル組織培養プレートのウェル当たり２，５００細胞／０．１ｍＬの最終細胞密度で播種した。プレートを、３７℃で５時間、９５％の湿度および５％のＣＯ_２の雰囲気中でインキュベートして、培養プレートに細胞を付着させ、次いでクエン酸鉄溶液（水中）を所望の最終濃度に添加した。

試験試料（ＤＭＳＯ中１ｍＭ）を１０％ＤＭＳＯ：水溶液中で５マイクロＭの最終濃度に希釈し、次いで１０％ＤＭＳＯ中で所望の濃度に系列希釈した。次いで細胞を様々な化合物希釈物で処置し、１％の最終ＤＭＳＯ濃度を得、次いで３７℃で、９５％の湿度および５％のＣＯ_２の雰囲気中で１８時間インキュベートした。

翌日、ＢＳＯ溶液をウェルに添加して、所望の最終濃度を得た。４８時間後、培地を廃棄し、残りの液体を、プレートをペーパータオル上に倒立させて軽く叩くことにより除去した。プレートを、ウェル当たり１００マイクロリットルの、カルシウムおよびマグネシウム（＋Ｃａ ＋Ｍｇ）を含有するＰＢＳで、１回洗浄した。

次いでＰＢＳ＋Ｃａ＋Ｍｇ中の１００マイクロリットルのカルセインＡＭ（１マイクロＭ）を、各ウェルに添加した。プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。その後、蛍光（励起／放出波長がそれぞれ４８５ｎｍおよび５２５ｎｍ）を、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ蛍光リーダーで読み取った。データを、標準の４パラメーター曲線当て嵌めアルゴリズム（ＸＬＦｉｔまたはＰｒｉｓｍ）を使用して分析して、各化合物のＥＣ_５０濃度を決定した。

溶媒（ＤＭＳＯ、水）には、非ＢＳＯ処置細胞の生存度に対する有害効果がなく、試験された最高濃度（１％）であってもＢＳＯおよび鉄で処置した線維芽細胞に対する有益な影響もなかった。

本明細書に記載される試験試料は、パーキンソン病およびアルツハイマー病患者からの線維芽細胞を、ＢＳＯおよび鉄誘発型酸化ストレスからレスキューすることが見出された。

表８に記載されるように、Ｃ９化合物（２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン）は、ＢＳＯおよび鉄媒介酸化ストレスからのＰＤ線維芽細胞のレスキューにおいて、Ｃ６およびＣ８類似体よりも大きい効力を有した。

Ｃ９化合物も、ＡＤ患者線維芽細胞の酸化ストレスからのレスキューにおいて活性を示した（表９）。

（実施例８ α－シヌクレイン凝集の阻害のための化合物のスクリーニング）
概要：化合物２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（「Ｃ９」）およびそのＣ８（２，３，５－トリメチル－６－オクチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン）およびＣ７（２，３，５－トリメチル－６－ヘプチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン）類似体を、タンパク質凝集の動態における誘導期の存在および程度によって測定される、αシヌクレイン凝集の阻害剤としてのそれらの機能に関して試験した。凝集体結合フルオロフォア、チオフラビンＴによる蛍光強度の変化を追跡して、時間の関数としてのタンパク質凝集に関して報告した。

実験方法：無細胞αシヌクレイン凝集アッセイを、１００μＭの化合物（ＤＭＳＯ中１０ｍＭストック溶液から）またはビヒクルとしての１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯの存在下、２００μＭの組換えヒトαシヌクレイン（Ｐｒｏｔｅｏｓ，Ｉｎｃ．）でセットアップした。全ての溶液は、タンパク質または化合物の添加前にマスターミックスとして調製した０．０３％（ｖ／ｖ）ＮａＮ_３および５μＭチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏのリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）緩衝液（ｐＨ７．４）中に調製した。次いでタンパク質マスターミックスを調製し、４本の管に分離した（条件当たり１本）。並行して、マスターミックスを、溶液にタンパク質が添加されないこと以外は同一の条件下で、バックグラウンド測定用に創出した。化合物またはＤＭＳＯを各試料にロードし、１０秒間ボルテックスし、３秒間遠心分離した。

次いでタンパク質溶液＋／－化合物およびバックグラウンド試料を、黒色の壁を備えた光学的に透明な９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ）のウェルにロードし、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）４８０シール（Ｒｏｃｈｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）でシールし、３７℃で１５分間インキュベートして平衡化し、その後、データ収集を開始した。Ｔｅｃａｎ Ｍ１０００分光計を使用して、ＴｈＴ蛍光（ｅｘ／ｅｍ ４５０／４９０ｎｍ）に関するデータポイントを３０分ごとに収集した。プレートを、蛍光の読取り間で振盪させることによってかき混ぜた。

データ分析および結果：蛍光強度データを、全ての試料に関して経時的に収集した。ビヒクルで処理したαＳｙｎ試料の平均の、エンドポイント蛍光強度単位（ＦＩＵ）値を１００％に設定し、他の全てのＦＩＵ値をそれに対して正規化した（図１Ａを参照）。最終結果を、時間に関して正規化したＴｈＴ蛍光（％）としてプロットした。

ｔ＝２４時間で正規化したＴｈＴ蛍光値（％ＦＩＵ）を使用して、試料を比較した（図１Ｂを参照）。少なくとも２つの技術的複製物を、条件ごとに使用した。試料の統計分析を、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ分析を介して行った。Ｔｕｋｅｙの多重比較検定を、全てのタンパク質含有試料に対して実行し、ビヒクルとＣ９で処理した試料との間で（ｐ＝０．００４１）、Ｃ９で処理した試料対Ｃ７で処理した試料（ｐ＝０．００８５）およびＣ９で処理した試料対Ｃ８で処理した試料（ｐ＝０．０４３７）の統計的有意性を示した。他の全ての比較は、ｐ＞０．０５で、統計的に有意ではなかった（即ち、ｎｓ）。

図１Ａおよび１Ｂに示されるように、Ｃ９化合物は、αシヌクレイン凝集に対して著しい阻害効果を有し、Ｃ７またはＣ８のいずれかの類似体よりも大きい阻害を示す。

（実施例９ タウＫ１８ＷＴ予備形成フィブリル脱凝集における２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（Ｃ９）およびその構造類似体の効力）
概要：化合物２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（Ｃ９）、２，３，５－トリメチル－６－オクチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（Ｃ８）、および２，３，５－トリメチル－６－ヘプチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（Ｃ７）を、経時的な凝集体結合フルオロフォア、チオフラビンＴの蛍光強度の減少によって測定される、ヒト野生型タウＫ１８断片の予備形成フィブリル（ＰＦＦ）を脱凝集するそれらの能力に関して試験した。

実験方法：ヒト組換えタウＫ１８ＷＴ断片の予備形成フィブリル（ＰＦＦ）を、Ｄｕｌｂｅｃｃｏのリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）緩衝液（ｐＨ７．４）中、還元剤として過剰な（５０×）トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の存在下、１：１の比でタウＫ１８モノマー（Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈｎｅ（登録商標））をナトリウムヘパリンと共にインキュベートすることによって発生させた。混合物を、３７℃で４日間、かき混ぜずにインキュベートして、ＰＦＦを、１００μＭの最終濃度で得た。

無細胞タウ脱凝集アッセイは、３０μＭの化合物（ＤＭＳＯ中１０ｍＭストックから）またはビヒクルとして０．３％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯの存在下、１０μＭのタウＰＦＦでセットアップした。全ての溶液は、タンパク質または化合物の添加前にマスターミックスとして調製した０．０３％（ｖ／ｖ）ＮａＮ_３および５μＭチオフラビンＴ（ＴｈＴ）を含むＤＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で調製した。タンパク質マスターミックスをアッセイ前日に最初に調製して、周囲温度および雰囲気で１０μＭのタウＰＦＦを予備平衡化させた。翌日、予備混合したタンパク質溶液を、４本の管に分離した（条件当たり１本）。化合物またはＤＭＳＯを各試料にロードし、１０秒間ボルテックスし、３秒間遠心分離した後、周囲温度で１５分間インキュベートした。並行して、マスターミックスを、タンパク質を添加しないこと以外は同一の条件下で、バックグラウンド測定用に創出した。

次いでタウＰＦＦ溶液＋／－化合物およびバックグラウンド試料を、黒色の壁を備えた光学的に透明な９６ウェルプレートのウェルにロードし、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）４８０シール（Ｒｏｃｈｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）でシールし、３７℃で１５分間インキュベートして平衡化し、データ収集を開始した。Ｔｅｃａｎ Ｍ１０００分光計を使用して、ＴｈＴ蛍光（ｅｘ／ｅｍ ４５０／４９０ｎｍ）に関するデータポイントを、かき混ぜずに３０分ごとに収集した。

データ分析および結果：ビヒクルで処理したタウ試料の最大蛍光強度単位（ＦＩＵ）値を１００％に設定し、それに対して他の全てのＦＩＵ値を相対的に正規化した。少なくとも２つの技術的反復を、条件当たりで使用した。アッセイ開始後９４時間の全ての試料のフィブリル含量のエンドポイント値を報告した（図２）。

試料の統計分析を、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ分析を介して行った。Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を、ビヒクルで処理したタウＰＦＦ試料対化合物で処理したタウＰＦＦ試料の間で実行し、ビヒクルとＣ９で処理した試料との間で統計的有意性を示した（ｐ＝０．０４７８）。

図２に示されるように、Ｃ９で処理した試料は、９４時間で、タウフィブリル含量に著しい低減があった。対照的に、Ｃ７およびＣ８で処理した試料は、９４時間でフィブリル含量に著しい低減がなかった。

（実施例１０ ＲＳＬ３誘発型αシヌクレイン凝集の阻害）
Ｎ２７ラットドーパミン作動性細胞（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入、ＳＣＣ０４８）を形質転換して、Ｏｒｉｇｅｎｅから得たプラスミド構築物（ＲＧ２２１４４６）で緑色の蛍光タンパク質（ＧＦＰ）と融合した切断型α－シヌクレインを安定的に過剰発現させた。細胞を、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＥＳ－００９－Ｂ）、１％（ｖ／ｖ）ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、１５１４０－１２２）、１％（ｖ／ｖ）Ｌ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ、２５０３０－０８１）、および５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ、１０１３１－０２７）を補充したＲＰＭＩ １６４０培地からなる選択培地中で維持した。

上述の切断型（１１２アミノ酸）ヒトαシヌクレイン－ＧＦＰ融合タンパク質を過剰発現するＮ２７ラットドーパミン作動性細胞を、上述の通常の培養条件で維持した。実験前日に、細胞を、９６ウェル光学底部黒色壁プレートに３，０００細胞／ウェルでプレーティングし、３７℃で２４時間維持した。実験は、Ｄ３００ｅ化合物プリンター（Ｔｅｃａｎ）を使用して、（１Ｓ，３Ｒ）－メチル２－（２－クロロアセチル）－１－（４－（メトキシカルボニル）フェニル）－２，３，４，９－テトラヒドロ－１Ｈ－ピリド［３，４－ｂ］インドール－３－カルボキシレート（１Ｓ，３Ｒ－ＲＳＬ３、Yang et al., Cell 156:317-331 (2014)により記載される）（６０ｎＭ）および７０ｎＭの化合物（２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（Ｃ９）、２，３，５－トリメチル－６－オクチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（Ｃ８）、または２，３，５－トリメチル－６－ヘプチルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオン（Ｃ７））で細胞を同時処置することによって開始し、インキュベーターに戻し３７℃で２４時間置いた。細胞を、４％のパラホルムアルデヒドで１５分間、室温で固定し、Ｄｕｌｂｅｃｃｏのリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）緩衝液で３回洗浄し、次いで室温で４８時間、１％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ１００溶液（ＤＰＢＳ中）と共にインキュベートして、凝集αシヌクレインの選択的標識を可能にした。次いで細胞を洗浄し、標準の免疫細胞化学（ＩＣＣ）法を用いて、全αシヌクレイン（マウス抗αシヌクレイン、１：２５０、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を標識した。細胞を一次抗体と共に一晩、４℃でインキュベートし、次いで翌日、ＤＰＢＳで３回洗浄した。次いで細胞を、室温で、蛍光的にコンジュゲートされた二次抗体（ヤギ抗マウスＡｌｅｘａ ６４７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共に２時間、室温でインキュベートした。１０ｎＭのＨｏｅｃｈｓｔも添加して核を標識し、細胞を、高含量イメージングプラットフォーム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＨＳＣ Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ Ａｒｒａｙｓｃａｎ）で撮像して、全凝集αシヌクレインを定量した（図３Ａを参照）。

図３Ｂは、化合物Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９による、ＲＳＬ３誘発型αシヌクレイン凝集の阻害を示す。試料の統計分析を、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定による通常の一元配置ＡＮＯＶＡ分析を介して行い、ＲＳＬ３のみで処置した細胞対ＲＳＬ３および化合物で処置した細胞を比較した。Ｃ７は、αシヌクレイン凝集のいかなる阻害も示さなかった（ｐ＞０．０５）。Ｃ８およびＣ９は、αシヌクレイン凝集の著しい阻害を示し（ｐ値はそれぞれ０．０１および０．０００３であり、Ｃ９は、Ｃ８よりもおよそ５．４５倍高いレベルの凝集阻害を示す。

（実施例１１ パーキンソン病のマウスＭＰＴＰモデルにおける２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの有効性）
概要

（１－メチル－４－フェニル－１，２，３，６－テトラヒドロピリジン）（ＭＰＴＰ）（６０ｍｇ／ｋｇ）による動物の処置は、文献の報告および内部検証研究に則して、線条体におけるドーパミンの著しい欠乏（約７４％）をもたらした。

Ｃ９（３００ｍｇ／ｋｇ）の投与は、垂直活動（図４Ａおよび４Ｂに示されるような、垂直カウントおよび時間）に対して、処置の著しい効果をもたらした。

序論

ＭＰＴＰは、ヒト、非ヒト霊長類、およびマウスにおけるパーキンソン病（ＰＤ）の神経病理学的特色の多くをもたらす、強力かつ選択的な黒質線条体ドーパミン作動性神経毒である。マウスでは、ＭＰＴＰは、黒質線条体ドーパミン作動性変性をもたらす。ドーパミン作動性機能を増大させるまたはＭＰＴＰの神経毒性を遮断する薬理学的薬剤は、ＭＰＴＰ関連自発運動不全も減衰させ、パーキンソン病を処置するための臨床において有用であった。さらにＭＰＴＰ媒介毒性は、疾患におけるドーパミン作動性損失に関連付けられたメカニズムとの関係を有することがあり、このモデルが、黒質線条体ドーパミン作動性損失を遅くまたは低減させる薬剤を同定するのに潜在的に有用でもあり得ることを示す。

この研究では、Ｃ９は、ＰＤのＭＰＴＰ誘発型モデルで試験した。研究のエンドポイントは、オープンフィールド試験での自発運動活性パラメーターであった。

実験手順

動物。種：マウス。系統：Ｃ５７Ｂｌ／６。動物の供給源：Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ。年齢：６から７週。性別：オス。無作為化：動物を、無作為に処置群に割り当てた。研究の盲検化：実験者は、実験処置に関して盲検化された。

収容および給餌。順化／条件付け：３日以上。収容：マウスを、１２時間の明／暗サイクル（６：００ＡＭに点灯）で収容した。ケージ当たりマウスは４匹以下。換気ケージラックシステム。食餌：適宜、標準的なげっ歯類固形飼料および水。

設計パラメーター。投与経路（複数可）：ＰＯ。用量体積：ＰＯ：５ｍＬ／ｋｇ。製剤（複数可）：ＢｉｏＥｌｅｃｔｒｏｎからの指示に従いＭｅｌｉｏｒにより製剤化。ビヒクル－ゴマ油（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ＮＦ Ｃａｔａｌｏｇ ＃ＳＥ１３０、ＣＡＳ＃８００８－７４－０）。用量レベル：３００ｍｇ／ｋｇ。用量頻度：ＱＤ開始－２日目（ＭＰＴＰ＝０日目）および７日目まで。研究継続期間：１１日。前処置時間（２時間まで）：０日目に関し（ＭＰＴＰ日）：３０分、オープンフィールドアッセイ／自発運動活性（ＯＦＡ／ＬＭＡ）アッセイに関する前処置時間：１時間。群の数：３。群当たりの動物数：１０。動物の総数：３０（研究において）、合計４２匹の動物（適正な検定力分析を確実にするため、少なくとも１０匹の動物／群とし、ＭＰＴＰで誘発された致死率がある場合の研究への影響を減じるために、ＭＰＴＰを受ける全ての群に関し、４匹の追加の動物を加えた）。

ＭＰＴＰ処置。ＭＰＴＰを、リン酸緩衝食塩水中に製剤化し、２０ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに３回（２０ｍＬ／ｋｇで送達される１ｍｇ／ｍＬ）、２時間の間隔で投与した（ＭＰＴＰの最終用量＝６０ｍｇ／ｋｇ）。

自発運動活性。ＭＰＴＰ投与の１日前（ベースライン）および７日後（（－１）日目および７日目）、マウスを、完全自動化オープンフィールド装置（Ｍｅｄ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ）を使用して様々な態様の自発運動機能に関してモニターした。装置は、ファンおよび屋内灯を備えた、音響減衰ボックスで囲まれた１０．７５”×１０．７５”の活動領域（ａｒｅｎａ）からなるものであった。活動領域は、位置追跡用にＸおよびＹ軸上に、および立ち上がり検出用にＺ軸上に位置させた３つの１６ビームＩＲアレイを備える。

全てのマウスに、投薬スケジュールに従って、オープンフィールドアッセイの１時間前に最終用量のＣ９またはビヒクル－ゴマ油を投薬した。ドーパミン作動性欠損に関連付けられた重要な自発運動パラメーターは、立ち上がり挙動（立ち上がり回数／１５分セッション）および移動した総距離（１５分当たり）を含んでいた。

データ分析。データを平均し、平均±ＳＥＭと表す。データを、一元配置ＡＮＯＶＡおよびその後の事後検定により分析した。０．０５未満のｐ値は、対照から統計的に有意であるとみなした。

結果

オープンフィールド自発運動アッセイに対する処置の効果（垂直カウント）。食塩水＋ビヒクル、ＭＰＴＰ＋ビヒクル、またはＭＰＴＰ＋Ｃ９で処置した動物におけるオープンフィールド装置での活動（垂直カウント）を、測定した。動物は、上で示したように処置を受けた。図４Ａに示されるように、食塩水＋ビヒクルで処置した動物と比較して、垂直カウントは、ＭＰＴＰ＋ビヒクルで処置した動物において減少した（ｐ＝０．０６）。ＭＰＴＰ負荷した動物のＣ９処置は、垂直カウントを、食塩水＋ビヒクル対照動物で観察されたものに回復させた（ＭＰＴＰ＋ビヒクル対ＭＰＴＰ＋Ｃ９、ｐ＜０．０１；食塩水＋ビヒクル対ＭＰＴＰ＋Ｃ９、ｐ＝０．３１２）。データは、平均＋ＳＥＭ、各群ｎ＝１２～１４として提示する。統計分析：多重比較に関する事後Ｔｕｋｅｙ検定による一元配置ＡＮＯＶＡ；^＊＊ｐ＜０．０１；ｎｓ、統計的に有意でない（ｐ＞０．０５）。

オープンフィールド自発運動アッセイに対する処置の効果（垂直時間）。食塩水＋ビヒクル、ＭＰＴＰ＋ビヒクル、またはＭＰＴＰ＋Ｃ９で処置した動物におけるオープンフィールド装置での活動（垂直時間）を、測定した。動物は、上で示したように処置を受けた。図４Ｂに示されるように、食塩水＋ビヒクルで処置した動物と比較して、垂直時間は、ＭＰＴＰ＋ビヒクルで処置した動物において減少した（ｐ＜０．０５）。ＭＰＴＰ負荷した動物のＣ９処置は、垂直時間を、食塩水＋ビヒクル対照動物で観察されたものに回復させた（ＭＰＴＰ＋ビヒクル対ＭＰＴＰ＋Ｃ９、ｐ＜０．００１；食塩水＋ビヒクル対ＭＰＴＰ＋Ｃ９、ｐ＝０．３１５）。データは、平均＋ＳＥＭ、各群ｎ＝１２～１４として提示する。統計分析：多重比較に関する事後Ｔｕｋｅｙ検定による一元配置ＡＮＯＶＡ；^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊＊、ｐ＜０．００１；ｎｓ、統計的に有意でない（ｐ＞０．０５）。

ＰＤのＭＰＴＰマウスモデルにおけるＣ９投薬は、線状体におけるドーパミン作動性機能を反映する２つの挙動測定基準である垂直カウントおよび時間により測定される自発運動活性の著しい改善を示した（Meredith and Rademacher, J Parkinsons Dis. 1(1):19-33 (2012)およびその中の参考文献）。

（実施例１２ オスＣ５７マウスへの急性経口投与後のＣ９のＰＫプロファイル）
３００ｍｇ／ｋｇ用量のＣ９を、４匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、経口強制給餌を介してゴマ油溶液として投与した。化合物投与の８時間後、血漿および脳の曝露を測定した（表１０）。

本発明の非限定的な実施形態は、下記を含む：

実施形態１． アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷からなる群より選択される障害を処置または抑制する方法であって、治療有効量の式：

の化合物またはそのヒドロキノン形態；またはその溶媒和物もしくは水和物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法。

実施形態２． 化合物が、溶媒和物でも水和物でもない、実施形態１の方法。

実施形態３． 化合物が、キノン形態にある、実施形態１または２の方法。

実施形態４． 化合物が、ヒドロキノン形態にある、実施形態１または２の方法。

実施形態５． アルツハイマー病を処置または抑制するためのものである、実施形態１～４のいずれか１つの方法。

実施形態６． パーキンソン病を処置または抑制するためのものである、実施形態１～４のいずれか１つの方法。

実施形態７． 外傷性脳損傷を処置または抑制するためのものである、実施形態１～４のいずれか１つの方法。

実施形態８． 虚血－再潅流関連損傷を処置または抑制するためのものである、実施形態１～４のいずれか１つの方法。

実施形態９． 卒中を処置または抑制するためのものである、実施形態１～４のいずれか１つの方法。

実施形態１０． 障害を処置するためのものである、実施形態１～９のいずれか１つの方法。

実施形態１１． 障害を抑制するためのものである、実施形態１～９のいずれか１つの方法。

実施形態１２． 化合物が、経口投与される、実施形態１～１１のいずれか１つの方法。

実施形態１３． 化合物が、静脈内投与される、実施形態１～１１のいずれか１つの方法。

引用を明らかにすることによって本明細書で言及される全ての刊行物、特許、特許出願、および公開特許出願の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

前述の発明は、理解を明瞭にする目的で、説明および例としていくらか詳細に記載してきたが、ある特定の少しの変化および修正が実施されることが当業者に明らかである。したがって、本記載および例は、本発明の範囲を限定すると解釈すべきではない。

Claims (62)

1. α－シヌクレインパチー、タウオパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、外傷性脳損傷、および虚血－再潅流関連損傷からなる群より選択される障害を処置または抑制する方法であって、治療有効量の式：
   

   

   の化合物またはそのヒドロキノン形態；またはその溶媒和物もしくは水和物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法。
2. 前記化合物が、溶媒和物でも水和物でもない、請求項１に記載の方法。
3. 前記化合物が、キノン形態にある、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記化合物が、ヒドロキノン形態にある、請求項１または２に記載の方法。
5. α－シヌクレインパチーを処置または抑制するためのものである、請求項１に記載の方法。
6. 前記α－シヌクレインパチーが：パーキンソン病、認知症を伴うパーキンソン病（ＰＤＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、ゴーシェ病（ＧＤ）、脳の鉄蓄積を伴う神経変性（ＮＢＩＡ）、および神経軸索ジストロフィー（ＰＬＡ２Ｇ６関連神経変性）からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
7. 前記パーキンソン病が、遺伝的である、請求項６に記載の方法。
8. 前記パーキンソン病が、特発性である、請求項６に記載の方法。
9. タウオパチーを処置または抑制するためのものである、請求項１に記載の方法。
10. 前記タウオパチーが：アルツハイマー病、ボクサー認知症、グアムの筋萎縮性側索硬化症－パーキンソニズム－認知症（Ｇｕａｍ ＡＬＳ／ＰＤ）、ピック病、嗜銀顆粒性認知症、ニーマン－ピック病Ｃ型、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核神経節変性、パーキンソニズム－１７を伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、脳炎後パーキンソニズム（ＰＥＰ）、および常染色体劣性パーキンソニズムからなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
11. アルツハイマー病を処置または抑制するためのものである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
12. パーキンソン病を処置または抑制するためのものである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
13. 外傷性脳損傷を処置または抑制するためのものである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
14. 虚血－再潅流関連損傷を処置または抑制するためのものである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
15. 卒中を処置または抑制するためのものである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
16. 筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を処置または抑制するためのものである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
17. 障害を処置するためのものである、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 障害を抑制するためのものである、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記化合物が、経口投与される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記化合物が、静脈内投与される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
21. ２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの無水物の多形であって、前記多形に関する粉末Ｘ線回折パターンが少なくとも次の角度位置：４．１０、１２．１２、および１６．１４で特徴的ピークを含み、前記角度位置が±０．２変動し得る、多形。
22. 少なくとも次の角度位置：４．１０、１１．７７、１２．１２、および１６．１４で特徴的ピークを含み、前記角度位置が、±０．２変動し得る、請求項２１に記載の多形。
23. 少なくとも次の角度位置：４．１０、１１．７７、１２．１２、１６．１４、および２２．４１で特徴的ピークを含み、前記角度位置が、±０．２変動し得る、請求項２１に記載の多形。
24. 前記角度位置が、±０．１変動し得る、請求項２１から２３のいずれか一項に記載の多形。
25. 前記角度位置が、±０．０５変動し得る、請求項２１から２３のいずれか一項に記載の多形。
26. 図５、１１、１４、および１６のいずれか１つで実質的に示されるような粉末ｘ線回折パターンを有する、請求項２１から２５のいずれか一項に記載の多形。
27. 図７に実質的に示されるような示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを有する、請求項２１から２６のいずれか一項に記載の多形。
28. ＤＳＣサーモグラムが、約４７から約５３℃で単一の吸熱ピークを有する、請求項２１から２７のいずれか一項に記載の多形。
29. 図８に実質的に示されるような熱重量分析（ＴＧＡ）サーモグラムを有する、請求項２１から２８のいずれか一項に記載の多形。
30. 図６に実質的に示されるような^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを有する、請求項２１から２９のいずれか一項に記載の多形。
31. 請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物であって、あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、前記２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの少なくとも約９５モル％が、前記多形である、組成物。
32. 請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物であって、あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、前記２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの少なくとも約９９モル％が、前記多形である、組成物。
33. あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、前記組成物のＨＰＬＣにより測定された少なくとも約９５％ａ／ａが、前記２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンである、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１もしくは３２に記載の組成物。
34. あらゆる溶媒、担体、または賦形剤を除き、前記組成物のＨＰＬＣにより測定された少なくとも約９９％ａ／ａが、前記２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンである、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１もしくは３２に記載の組成物。
35. 前記２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの効力が、少なくとも約９５％である、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１から３４のいずれか一項に記載の組成物。
36. 前記２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの効力が、少なくとも約９９％である、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１から３４のいずれか一項に記載の組成物。
37. 前記多形が、複数の粒子として存在し、前記粒子が、約１１：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１から３６のいずれか一項に記載の組成物。
38. 前記多形が、複数の粒子として存在し、前記粒子が、約７：１未満のＤ９０：Ｄ１０の比を有する、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１から３６のいずれか一項に記載の組成物。
39. 前記多形が、約７５～８５％のＩＰＡ／水を含む溶媒によって再結晶化された、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１から３８のいずれか一項に記載の組成物。
40. 前記多形が、約８０～８５％のＩＰＡ／水を含む溶媒によって再結晶化された、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１から３９のいずれか一項に記載の組成物。
41. 前記多形が、約８５％のＩＰＡ／水を含む溶媒によって再結晶化された、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形を含む組成物または請求項３１から３９のいずれか一項に記載の組成物。
42. 請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形、または請求項３１から４１のいずれか一項に記載の組成物、および薬学的に許容される溶媒、担体、もしくは賦形剤を含む医薬組成物、あるいは請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形、または請求項３１から４１のいずれか一項に記載の組成物、および薬学的に許容される溶媒、担体、もしくは賦形剤で調製される医薬組成物。
43. α－シヌクレインパチー、タウオパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、外傷性脳損傷、または虚血－再潅流関連損傷を処置または抑制する方法であって、治療有効量の請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形または請求項３１から４２のいずれか一項に記載の組成物を、それを必要とする個体に投与することを含む、方法。
44. 組成物から２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンを再結晶化させる方法であって、
    ａ）約４０～４５℃の温度で、前記組成物をＩＰＡおよび水と接触させて、得られるＩＰＡの水に対する比が、約７５～８７％のイソプロパノール（ＩＰＡ）／２５～１３％の水（ｖ：ｖ）になるようにすること、
    ｂ）混合物を約３２℃に冷却すること、および
    ｃ）前記２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンを前記混合物から濾過すること
    を含む、方法。
45. ステップ（ａ）が、
    ａ１）前記組成物をＩＰＡと接触させること、
    ａ２）前記混合物を約４０～４５℃に温めること、および
    ａ３）水を前記混合物に添加して、前記ＩＰＡの水に対する比が約７５～８５％のＩＰＡ：２５～１５％の水（ｖ：ｖ）になるようにすること
    を含む、請求項５４に記載の方法。
46. ステップ（ａ）が、前記組成物が溶解するように撹拌することを含む、請求項５４に記載の方法。
47. 前記ＩＰＡ：水の比が、約８０～８５％のＩＰＡ：２０～１５％の水（ｖ：ｖ）である、請求項５４から５６のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記ＩＰＡ：水の比が、約８５％のＩＰＡ：１５％の水（ｖ：ｖ）である、請求項５４から５６のいずれか一項に記載の方法。
49. ステップ（ａ３）が、前記混合物の温度を約４０～４５℃に戻すことを含む、請求項５４から５８のいずれか一項に記載の方法。
50. ステップ（ａ）後に前記混合物をポリッシュフィルタリングすることを含む、請求項５４から５８のいずれか一項に記載の方法。
51. ステップ（ｂ）が、約２～１０時間にわたって約３２℃に冷却することを含む、請求項５４から５９のいずれか一項に記載の方法。
52. ステップ（ｂ）が、約６時間にわたって約３２℃に冷却することを含む、請求項５４から５９のいずれか一項に記載の方法。
53. ステップ（ｂ）の後に、前記混合物を約２～２４時間、約３２℃で保持することを含むステップ（ｂ１）を含む、請求項５４から６１のいずれか一項に記載の方法。
54. ステップ（ｂ）の後に、前記混合物を約６時間、約３２℃で保持することを含むステップ（ｂ１）を含む、請求項５４から６１のいずれか一項に記載の方法。
55. 存在する場合にはステップ（ｂ）または（ｂ１）の後に、前記混合物を約０℃に冷却することを含むステップ（ｂ２）を含む、請求項５４から６３のいずれか一項に記載の方法。
56. ステップ（ｂ２）が、前記混合物を約３～２４時間にわたって約０℃に冷却することを含む、請求項５４から６３のいずれか一項に記載の方法。
57. ステップ（ｂ２）が、前記混合物を約１時間、約０℃で保持することをさらに含む、請求項６４から６５のいずれか一項に記載の方法。
58. 請求項５４から６７のいずれか一項に従って作製された２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンを含む組成物。
59. 医薬組成物を作製する方法であって、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の多形または請求項３１から４２もしくは６８のいずれか一項に記載の組成物を、液体形態またはエマルジョン形態に変換することを含む、方法。
60. 前記液体形態または前記エマルジョン形態が、経口溶液、液体充填カプセル、または注射可能な溶液として提供される、請求項６９に記載の方法。
61. 請求項６９または７０により生成された医薬組成物。
62. 図３１に実質的に示されるようなＸＲＰＤプロットを有する、２，３，５－トリメチル－６－ノニルシクロヘキサ－２，５－ジエン－１，４－ジオンの準安定融解非晶質形態。

Images