JP2022501371A - ステロールの精製 - Google Patents

Abstract

本発明は、ステロールエステル及び脂質ナノ粒子の製造方法に利用することができる精製ステロールの製造方法に関する。【選択図】なし

Description

本開示は、ステロールの精製に関する。

近年、核酸はますます有望な治療薬として注目されている。メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）は、多くの用途向けの多種多様なポリペプチドをコードするように設計することができることから、ｍＲＮＡの治療目的の使用が特に求められている。例えば、嚢胞性線維症を含む多くの疾患、障害、及び疾病が、異常なタンパク質の活性及び／またはタンパク質の欠乏を特徴とする。適当なｍＲＮＡの導入が細胞内で翻訳されてポリペプチドを産生し、異常な種を置換する、破壊する、またはその他の形態で異常な種と戦うことができると理論付けられている。ｍＲＮＡ送達システムを用いて、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などの重要なポリペプチドを調節することもでき、一過性の且つ標的化されたＶＥＧＦの発現は、腎血管構造における狭窄と戦うことが仮定されている。非翻訳性ｍＲＮＡの導入による翻訳機構の破壊も実現の可能性がある。しかしながら、ＲＮＡが比較的不安定であること及びＲＮＡの細胞透過性が低いことによって、治療用ＲＮＡの細胞への送達は困難になる。

したがって、特に安全性、有効性、及び特異性の改善に関して、ｍＲＮＡなどのＲＮＡの細胞への送達を助長にするための方法及び脂質含有組成物を開発する必要性が存在する。

本発明は、ステロールエステルならびに脂質ナノ粒子（例えばＲＮＡの送達用の）の製造方法に利用することができる精製β−シトステロール、カンペステロール、及びシトスタノールを製造するための合成方法を特徴とする。

一態様において、本発明は、式Ｉ：

（式中、
点線は任意選択の二重結合を表し、
Ｒ^１は、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、４−メチルフェニル、４−カルボン酸フェニル、３−カルボン酸プロピル、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルであり、
Ｒ^２は水素もしくはメチルである）、
または薬学的に許容されるその塩
の構造を有する化合物を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、上記化合物は、構造：

を有する。
いくつかの実施形態において、Ｒ^２は水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ^２はメチルである。

いくつかの実施形態において、Ｒ^１はトリフルオロメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１はトリクロロメチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１はイソプロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１はｔｅｒｔ−ブチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は４−メチルフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は４−カルボン酸フェニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は３−カルボン酸プロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_２１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、４−メチルフェニル、

である。
いくつかの実施形態において、上記化合物は表１の化合物１〜３３のいずれか１種である。

別の態様において、本発明は、上記化合物のいずれかの化合物及び賦形剤を含む組成物を特徴とする。
別の態様において、本発明は、
（ａ）β−シトステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
（ｂ）β−シトステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で上記試料を反応させることと、
（ｃ）上記β−シトステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから分離して、β−シトステロールエステルの試料を生成させることと、
（ｄ）上記β−シトステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記β−シトステロールエステルの試料を反応させることと
を含み、
それによって精製β−シトステロールを生成させる、精製β−シトステロールの製造方法を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記方法は、（ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、上記β−シトステロールエステルは、式ＩＩ：

（式中、Ｒ^３は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
または薬学的に許容されるその塩
の構造を有する。

いくつかの実施形態において、Ｒ^３はＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^３は、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、

である。
別の態様において、本発明は、
（ａ）カンペステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
（ｂ）カンペステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で上記試料を反応させることと、
（ｃ）上記カンペステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、カンペステロールエステルの試料を生成させることと、
（ｄ）上記カンペステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記カンペステロールエステルの試料を反応させることと
を含み、
それによって精製カンペステロールを生成させる、精製カンペステロールの製造方法を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記方法は、（ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、上記カンペステロールエステルは、式ＩＩＩ：

（式中、Ｒ^４は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
または薬学的に許容されるその塩
の構造を有する。

いくつかの実施形態において、Ｒ^４はＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^４は、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、

である。
別の態様において、本発明は、
（ａ）シトスタノール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
（ｂ）シトスタノールエステルを生成させるのに十分な条件下で上記試料を反応させることと、
（ｃ）上記シトスタノールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから分離して、シトスタノールエステルの試料を生成させることと、
（ｄ）上記シトスタノールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記シトスタノールエステルの試料を反応させることと
を含み、
それによって精製シトスタノールを生成させる、精製シトスタノールの製造方法を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記方法は、（ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、上記シトスタノールエステルは、式ＩＶ：

（式中、Ｒ^５は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
または薬学的に許容されるその塩
の構造を有する
いくつかの実施形態において、Ｒ^５はＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、

である。
別の態様において、本発明は、
（ａ）スティグマステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
（ｂ）スティグマステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で上記試料を反応させることと、
（ｃ）上記スティグマステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから分離して、スティグマステロールエステルの試料を生成させることと、
（ｄ）上記スティグマステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記スティグマステロールエステルの試料を反応させることと
を含み、
それによって精製スティグマステロールを生成させる、精製スティグマステロールの製造方法を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記方法は、（ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、上記スティグマステロールエステルは、式Ｖ：

（式中、Ｒ^６は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
または薬学的に許容されるその塩
の構造を有する。

いくつかの実施形態において、Ｒ^６はＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^６は、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、

である。
別の態様において、本発明は、
（ａ）カンペスタノール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
（ｂ）カンペスタノールエステルを生成させるのに十分な条件下で上記試料を反応させることと、
（ｃ）上記カンペスタノールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから分離して、カンペスタノールエステルの試料を生成させることと、
（ｄ）上記カンペスタノールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記カンペスタノールエステルの試料を反応させることと
を含み、
それによって精製カンペスタノールを生成させる、精製カンペスタノールの製造方法を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記方法は、（ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、上記カンペスタノールエステルは、式ＶＩ：

（式中、Ｒ^７は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
または薬学的に許容されるその塩
の構造を有する。

いくつかの実施形態において、Ｒ^７はＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^７は、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、

である。
別の態様において、本発明は、
（ａ）ブラシカステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
（ｂ）ブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で上記試料を反応させることと、
（ｃ）上記ブラシカステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから分離して、ブラシカステロールエステルの試料を生成させることと、
（ｄ）上記ブラシカステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記ブラシカステロールエステルの試料を反応させることと
を含み、
それによって精製ブラシカステロールを生成させる、精製ブラシカステロールの製造方法を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記方法は、（ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、上記ブラシカステロールエステルは、式ＶＩＩ：

（式中、Ｒ^８は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
または薬学的に許容されるその塩
の構造を有する。

いくつかの実施形態において、Ｒ^８はＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^８は、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、

である。
別の態様において、本発明は、
（ａ）フコステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
（ｂ）フコステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で上記試料を反応させることと、
（ｃ）上記フコステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから分離して、フコステロールエステルの試料を生成させることと、
（ｄ）上記フコステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記フコステロールエステルの試料を反応させることと
を含み、
それによって精製フコステロールを生成させる、精製フコステロールの製造方法を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記方法は、（ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む。
いくつかの実施形態において、上記フコステロールエステルは、式ＶＩＩＩ：

（式中、Ｒ^９は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
または薬学的に許容されるその塩
の構造を有する。

いくつかの実施形態において、Ｒ^９はＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^９は、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、

である。
上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な上記条件は、（ｉ）酸無水物及び塩基、（ｉｉ）カルボン酸及びカルボキシル活性化剤、または（ｉｉｉ）塩化アシルを含む。

上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な上記条件は、酸無水物及び塩基（例えば、トリエチルアミンなどの有機塩基）を含む。

上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な上記条件は、カルボン酸及びカルボキシル活性化剤（例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）を含む。

上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに上分な上記条件は塩化アシルを含む。

上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに上分な上記条件は、４−（ジメチルアミノ）ピリジンをさらに含む。

上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、上記分離することは順相精製を含む。上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、上記分離することは逆相精製を含む。

上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、上記β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを加水分解するのに十分な上記条件は、水、アルコール（例えば２−プロパノール）、及び塩基（例えば、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムなどの無機塩基）を含む。

上記方法のいずれかのいくつかの実施形態において、β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルの上記精製試料の純度は少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％）である。

別の態様において、本発明は、
（ｉ）請求項９〜３４のいずれか１項に記載の方法によって、精製β−シトステロール、カンペステロール、シトスタノール、スティグマステロール、カンペスタノール、フコステロール、及び／またはブラシカステロールを調製することと、
（ｉｉ）脂質ナノ粒子を形成するのに十分な条件下で、上記精製β−シトステロール、カンペステロール、シトスタノール、スティグマステロール、カンペスタノール、フコステロール、及び／またはブラシカステロールとイオン性脂質とを接触させることと
を含み、
それによって脂質ナノ粒子を生成させる、脂質ナノ粒子の製造方法を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記方法は、上記β−シトステロール、カンペステロール、シトスタノール、スティグマステロール、カンペスタノール、フコステロール、及び／またはブラシカステロールならびに上記イオン性脂質を、非イオン性ヘルパー脂質及び／またはＰＥＧ脂質と接触させることをさらに含む。

いくつかの実施形態において、上記方法は、上記脂質ナノ粒子を、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡと、上記脂質ナノ粒子が上記ｍＲＮＡをカプセル化するのに十分な条件下で接触させることをさらに含む。

別の態様において、本発明は、２種以上のステロールを含む組成物であって、上記２種以上のステロールがβ−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールが上記組成物中の上記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールが上記組成物中の上記ステロールの０．１〜５％を構成する、上記組成物を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記組成物は、シトスタノールをさらに含む。いくつかの実施形態において、β−シトステロールは上記組成物中の上記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールは０．０５〜４．９５％を構成する。

別の態様において、本発明は、２種以上のステロールを含む組成物であって、上記２種以上のステロールがβ−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールが上記組成物中の上記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、シトスタノールが上記組成物中の上記ステロールの０．１〜５％を構成する、上記組成物を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記組成物はカンペステロールをさらに含む。いくつかの実施形態において、β−シトステロールは上記組成物中の上記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールは０．０５〜４．９５％を構成する。

別の態様において、本発明は、複数種の脂質ナノ粒子を含む組成物であって、上記複数種の脂質ナノ粒子がイオン性脂質及び２種以上のステロールを含み、上記２種以上のステロールがβ−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールが上記組成物中の上記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールが上記組成物中の上記ステロールの０．１〜５％を構成する、上記組成物を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記２種以上のステロールはシトスタノールをさらに含む。いくつかの実施形態において、β−シトステロールは上記組成物中の上記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールは０．０５〜４．９５％を構成する。

別の態様において、本発明は、複数種の脂質ナノ粒子を含む組成物であって、上記複数種の脂質ナノ粒子がイオン性脂質及び２種以上のステロールを含み、上記２種以上のステロールがβ−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールが上記組成物中の上記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、シトスタノールが上記組成物中の上記ステロールの０．１〜５％を構成する、上記組成物を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記２種以上のステロールはカンペステロールをさらに含む。いくつかの実施形態において、β−シトステロールは上記組成物中の上記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールは０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールは０．０５〜４．９５％を構成する。

いくつかの実施形態において、上記複数種の脂質ナノ粒子は非イオン性ヘルパー脂質及び／またはＰＥＧ脂質をさらに含む。
一態様において、本発明は、
（ｉ）イオン性脂質と、
（ｉｉ）構造成分と
を含み、上記構造成分が、上記化合物のいずれかの構造を有する化合物を含む脂質ナノ粒子を特徴とする。

いくつかの実施形態において、上記脂質ナノ粒子は核酸分子をさらに含む。
一態様において、本発明は、
（ｉ）イオン性脂質と、
（ｉｉ）構造成分と、
（ｉｉｉ）任意選択で、非カチオン性ヘルパー脂質と、
（ｉｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質と、
（ｖ）核酸分子と
を含み、上記構造成分が、上記化合物のいずれかの構造を有する化合物、及び任意選択で構造脂質を含む脂質ナノ粒子を特徴とする
いくつかの実施形態において、上記脂質ナノ粒子は、上記の化合物のいずれかの化合物を、上記化合物を含まない脂質ナノ粒子と比較して、上記核酸分子の細胞への送達を高める量で含む。

いくつかの実施形態において、上記構造成分は、１種以上の構造脂質またはそれらの塩をさらに含む。
いくつかの実施形態において、上記１種以上の構造脂質はステロールである。

いくつかの実施形態において、上記１種以上の構造脂質はフィトステロールである。いくつかの実施形態において、上記フィトステロールは、β−シトステロール、カンペステロール、シトスタノール、スティグマステロール、カンペスタノール、フコステロール、もしくはブラシカステロール、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態において、上記フィトステロールはβ−シトステロールである。

いくつかの実施形態において、上記１種以上の構造脂質はズーステロールである。いくつかの実施形態において、上記ズーステロールはコレステロールである。
いくつかの実施形態において、上記１種以上の構造脂質のｍｏｌ％は、上記脂質ナノ粒子中に存在する上記化合物のいずれかの構造を有する化合物のｍｏｌ％の約１％〜５０％である。

いくつかの実施形態において、上記１種以上の構造脂質のｍｏｌ％は、上記脂質ナノ粒子中に存在する上記化合物のいずれかの構造を有する化合物のｍｏｌ％の約１０％〜４０％である。

いくつかの実施形態において、上記１種以上の構造脂質のｍｏｌ％は、上記脂質ナノ粒子中に存在する上記化合物のいずれかの構造を有する化合物のｍｏｌ％の約２０％〜３０％である。

いくつかの実施形態において、上記１種以上の構造脂質のｍｏｌ％は、上記脂質ナノ粒子中に存在する上記化合物のいずれかの構造を有する化合物のｍｏｌ％の約３０％である。

いくつかの実施形態において、上記脂質ナノ粒子は１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質を含む。
いくつかの実施形態において、上記１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質、脂肪酸、またはそれらの任意の組み合わせである。

いくつかの実施形態において、上記リン脂質は、ホスホコリン部分、ホスホエタノールアミン部分、またはリン（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）−１−グリセロール部分を含むリン脂質である。

いくつかの実施形態において、上記リン脂質は、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、または
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン
である。

いくつかの実施形態において、上記リン脂質はＤＳＰＣである。
いくつかの実施形態において、上記リン脂質は、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、または
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）
である。

いくつかの実施形態において、上記リン脂質はスフィンゴミエリンである。
いくつかの実施形態において、上記脂肪酸は長鎖脂肪酸である。いくつかの実施形態において、上記脂肪酸は中鎖脂肪酸である。

いくつかの実施形態において、上記脂肪酸は、パルミチン酸、ステアリン酸、パルミトレイン酸、またはオレイン酸である。いくつかの実施形態において、上記脂肪酸はオレイン酸である。いくつかの実施形態において、上記脂肪酸はステアリン酸である。

いくつかの実施形態において、上記脂質ナノ粒子は１種以上のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの実施形態において、上記１種以上のＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、またはそれらの混合物である。

いくつかの実施形態において、上記１種以上のＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質である。

いくつかの実施形態において、上記１種以上のＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧである。
いくつかの実施形態において、上記脂質ナノ粒子は、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％の１種以上のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％の１種以上のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％の構造成分、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％の１種以上のＰＥＧ脂質を含む。

いくつかの実施形態において、上記脂質ナノ粒子は、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％の１種以上のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％の構造成分、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％の１種以上のＰＥＧ脂質を含む。

いくつかの実施形態において、上記脂質ナノ粒子は、約５０ｍｏｌ％の１種以上のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％の構造成分、及び１．５ｍｏｌ％の１種以上のＰＥＧ脂質を含む。

いくつかの実施形態において、上記核酸分子はＲＮＡまたはＤＮＡである。
いくつかの実施形態において、上記核酸はＤＮＡである。
いくつかの実施形態において、上記核酸分子はｓｓＤＮＡである。いくつかの実施形態において、上記核酸はＣＲＩＳＰＲを含むＤＮＡである。

いくつかの実施形態において、上記核酸はＲＮＡである。
いくつかの実施形態において、上記核酸分子は、ショートマー、アンタゴミール、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。

いくつかの実施形態において、上記核酸分子はｍＲＮＡである。
いくつかの実施形態において、上記ｍＲＮＡは、１種以上の修飾核酸塩基を含む修飾ｍＲＮＡである。

いくつかの実施形態において、上記ｍＲＮＡは、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び５’キャップ構造のうちの１種以上を含む。
いくつかの実施形態において、上記構造成分は式Ｉの化合物を含む。いくつかの実施形態において、上記構造成分は式ＩＩの化合物を含む。いくつかの実施形態において、上記構造成分は式ＩＩＩの化合物を含む。いくつかの実施形態において、上記構造成分は式ＩＶの化合物を含む。いくつかの実施形態において、上記構造成分は式Ｖの化合物を含む。いくつかの実施形態において、上記構造成分は式ＶＩの化合物を含む。いくつかの実施形態において、上記構造成分は式ＶＩＩの化合物を含む。いくつかの実施形態において、上記構造成分は式ＶＩＩＩの化合物を含む。

いくつかの実施形態において、上記構造成分は、表１の化合物１〜３３のいずれか１種の構造を有する化合物を含む。
いくつかの実施形態において、上記脂質ナノ粒子は、上記化合物のいずれか１種の構造を有するさらなる化合物をさらに含む。

用語の定義
本明細書では、対象となる１つ以上の値に適用される用語「おおよそ」及び「約」とは、記載された基準となる値と類似の値をいう。特定の実施形態において、上記用語「およそ」または「約」とは、別段の明記がない限り、または文脈上それに反することが明白でない限り、記載された基準となる値の、いずれの方向（基準となる値よりも大きいもしくは小さい）であっても、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下以内に入る範囲の値をいう（かかる数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。例えば、組成物の脂質成分中の所与の化合物の量の文脈で用いられる場合、「約」は、記載された値の±１０％を意味することができる。例えば、約４０％の所与の化合物を有する脂質成分を含む組成物は、３０〜５０％の当該化合物を含んでいてよい。

本明細書では、用語「クロマトグラフィー」とは、混合物（例えば、化合物の混合物）の分離方法を意味する。この方法には、「移動相」及び「固定相」が含まれる。上記混合物（例えば上記化合物の混合物）を移動相に溶解する。この移動相によって上記混合物は固定相を通過する。この移動相が液体の場合、このクロマトグラフィー法は「液体クロマトグラフィー」または「ＬＣ」と呼ばれる。いくつかの実施形態において、上記液体クロマトグラフィーは高圧を利用し、「高速液体クロマトグラフィー」または「ＨＰＬＣ」と呼ばれる。

本明細書では、用語「化合物」とは、描かれている構造のすべての幾何異性体及び同位体による置換体を包含することを意図する。「同位体」とは、原子番号は同一であるが、原子核中の中性子の数が異なるために質量数が異なる原子をいう。例えば、水素の同位体としては三重水素及び重水素が挙げられる。さらに、本開示の化合物、塩、または複合体を、通常の方法によって、溶媒分子または水分子と結合させて調製して、溶媒和物または水和物を形成させてもよい。

本明細書では、用語「接触させる」とは、２つ以上の実体の間の物理的接続を確立することを意味する。例えば、哺乳動物細胞を組成物と接触させるとは、当該哺乳動物細胞とナノ粒子が物理的接続を共有するようにすることを意味する。インビボ及びエクスビボの両方において、細胞を外部実体と接触させる方法は、生物学の分野で周知である。例えば、組成物と哺乳動物内に位置する哺乳動物細胞とを接触させることは、様々な投与の経路（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、及び皮下投与）によって実施することができ、様々な量の組成物を伴っていてもよい。さらに、２種以上の哺乳動物細胞に組成物を接触させてもよい。

本明細書では、用語「送達する」とは、実体を目的の箇所に供給することを意味する。例えば、対象にｍＲＮＡを送達することは、当該の対象にｍＲＮＡを含む組成物を投与することを含んでいてもよい（例えば、静脈内経路、筋肉内経路、皮内経路、または皮下経路による）。哺乳動物または哺乳動物細胞への組成物の投与は、１種以上の細胞を当該組成物と接触させることを含んでいてよい。

本明細書では、「カプセル化」とは、完全な、実質的な、もしくは部分的な封入、閉込め、取り囲み、または内包をいう場合がある。
本明細書では、「ｍＲＮＡ」とは、天然にまたは非天然に存在していてもよいメッセンジャーリボ核酸をいう。例えば、ｍＲＮＡは、１種以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーなどの修飾された及び／または天然に存在しない成分を含んでいてもよい。ｍＲＮＡは、キャップ構造、鎖終結ヌクレオシド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。ｍＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有していてもよい。ｍＲＮＡの翻訳、例えば、哺乳動物細胞内のｍＲＮＡのインビボ翻訳によって、目的のポリペプチドを産生することができる。

本明細書では、「非カチオン性ヘルパー脂質」とは、少なくとも８個の炭素原子（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の炭素原子）を含む少なくとも１つの脂肪酸鎖、及び少なくとも１つの極性頭部基部分を含む脂質をいう。いくつかの実施形態において、上記非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質またはリン脂質代替物である。いくつかの実施形態において、上記非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ類似体、ＤＳＰＣ代替物、オレイン酸、またはオレイン酸類似体である。

本明細書では、「ＰＥＧ脂質」または「ＰＥＧ化脂質」とは、ポリエチレングリコール成分を含む脂質をいう。
本明細書では、「薬学的に許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内で、合理的な利益／リスク比に見合った、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、もしくはその他の問題、または合併症を起こすことがなく、ヒト及び動物の組織と接触させる使用に適した化合物、材料、組成物、ならびに／あるいは剤形をいう。

本明細書では、「薬学的に許容される賦形剤」とは、本明細書に記載の化合物以外の、患者において実質的に非毒性且つ非炎症性であるという特性を有する任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁、錯化、または溶解することができるビヒクル）をいう。賦形剤としては、例えば、付着防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮成型助剤、崩壊剤、色素（着色料）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、フィルム形成剤またはコーティング剤、香味料、香料、滑剤（流動促進剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味料、及び水和水を挙げることができる。例示的な賦形剤としては、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）、クエン酸、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ（α−トコフェロール）、ビタミンＣ、キシリトール、及び本明細書に開示される他の種を挙げることができるが、これらに限定はされない。

本明細書では、「薬学的に許容される塩」とは、本開示の化合物の誘導体であって、その親化合物を、存在する酸部分または塩基部分をその塩形態に変換することによって（例えば、当該の遊離塩基基を適宜の有機酸と反応させることによって）変化させた、上記誘導体をいう。本発明の組成物は、１種以上の化合物の薬学的に許容される塩を含んでいてもよい。薬学的に許容される塩としては、アミンなどの塩基性残基の鉱酸または有機酸の塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるが、これらに限定はされない。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンフル酸塩、カンフルスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含む、但しこれらに限定されない、非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、及びアミンカチオンが挙げられる。本開示の薬学的に許容される塩としては、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される、親化合物の従来の非毒性の塩が挙げられる。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性部分または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、かかる塩は、遊離酸または遊離塩基形態のこれらの化合物を、水もしくは有機溶媒中で、または上記２種の混合液中で（一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい）、化学量論量の適宜の塩基または酸と反応させることによって調製することができる。好適な塩の一覧が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １７ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， ３０ １９８５， ｐ． １４１８， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ： Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ， Ｐ．Ｈ． Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ． Ｗｅｒｍｕｔｈ （ｅｄｓ．）， Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ， ２００８，及びＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ６６， １−１９ （１９７７）に記載され、これらのそれぞれは、その全体が本明細書に援用される。

本明細書では、用語「ポリペプチド」または「目的のポリペプチド」とは、天然に生成する（例えば、単離もしくは精製される）または合成的に生成することができる、一般的にはペプチド結合によって結合したアミノ酸残基のポリマーをいう。

本明細書では、組成物の文脈における「粒度」または「平均粒度」とは、組成物の平均径をいう。
本明細書では、「ステロール」とは、ステロイドアルコールとしても知られるステロイドの下位群であって、その塩またはエステルを含む上記下位群をいう。ステロールは通常２つの種別、すなわち、１）植物ステロール（例えばフィトステロール）、及び２）動物ステロール（例えばズーステロール）に分けられる。動物ステロールとしてはコレステロールが挙げられるが、これに限定はされない。

本明細書では、「スタノール」とは、ステロール環構造中に二重結合をもたない飽和ステロールの種別をいう。
用語「治療薬」とは、対象に投与される際に、治療上の、診断上の、及び／もしくは予防上の効果を有し、且つ／または所望の生物学的及び／もしくは薬理学的効果を誘発する任意の薬剤をいう。

本明細書では、用語「治療有効量」とは、送達される薬剤（例えば、核酸、薬物、組成物、治療薬、診断薬、予防薬など）の量であって、感染症、疾患、障害、及び／または疾病に罹患している、またはそれらに罹患しやすい対象に投与される際に、上記感染症、疾患、障害、及び／または疾病を治療する、それらの症状を改善する、それらを診断する、予防する、及び／またはそれらの発症を遅延させるのに十分な上記薬剤の量をいう。

本明細書では、用語「治療する」とは、特定の感染症、疾患、障害、及び／もしくは疾病の１つ以上の症状または特徴を、部分的または完全に緩和する、改善する、向上させる、和らげる、それらの発症を遅延させる、それらの進行を抑制する、それらの重症度を低減する、ならびに／あるいはそれらの発生頻度を低減することをいう。例えば、がんを「治療する」とは、腫瘍の生存、増殖、及び／または拡大を抑制することをいう場合がある。治療は、疾患、障害、及び／もしくは疾病の兆候を示さない対象、ならびに／または疾患、障害、及び／もしくは疾病の初期の兆候のみを示す対象に、上記疾患、障害、及び／または疾病に関連する病状の発症のリスクを低減する目的で施してもよい。

本明細書では、「ゼータ電位」とは、例えば粒子組成物中の脂質の動電学的電位である。
化学用語
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することを目的としており、限定することを意図するものではないことを理解されたい。

本明細書では、用語「アシル」とは、本明細書において定義されるカルボニル基を介して親分子の基に結合する水素または明細書で定義されるアルキル基を表し、例としてホルミル（すなわち、カルボキシアルデヒド基）、アセチル、トリフルオロアセチル、プロピオニル、及びブタノイルが挙げられる。例示的な非置換アシル基には、１〜６、１〜１１、または１〜２１個の炭素が含まれる。

本明細書では、用語「アルキル」とは、１〜２０個の炭素原子（例えば、１〜１６個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、または１〜６個の炭素原子）の分岐または直鎖の一価の飽和脂肪族炭化水素ラジカルをいう。アルキレンは二価のアルキル基である。

本明細書において、単独でまたは他の基との組み合わせで使用される用語「アルケニル」とは、炭素−炭素二重結合を有し、２〜２０個の炭素原子（例えば、２〜１６個の炭素原子、２〜１０個の炭素原子、２〜６個、または２個の炭素原子）を有する直鎖または分岐の炭化水素残基をいう。

本明細書において、単独でまたは他の基との組み合わせで使用される用語「アルキニル」とは、炭素−炭素三重結合を有し、２〜２０個の炭素原子（例えば、２〜１６個の炭素原子、２〜１０個の炭素原子、２〜６個、または２個の炭素原子）を有する直鎖または分岐の炭化水素残基をいう。

本明細書では、用語「アリール」とは、少なくとも１つの芳香環を有する６〜１２個の炭素原子の芳香族の単環または多環の炭素環式ラジカルをいう。アリール基としては、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、１，２−ジヒドロナフチル、インダニル、及び１Ｈ−インデニルが挙げられるが、これらに限定はされない。

本明細書では、用語「アリールアルキル」とは、アリール基で置換されたアルキル基を表す。例示的な非置換アリールアルキル基は、７〜３０個の炭素からなり（例えば、７〜１６個または７〜２０個の炭素からなり、例えば、Ｃ_１〜６アルキルＣ_６〜１０アリール、Ｃ_１〜１０アルキルＣ_６〜１０アリール、またはＣ_１〜２０アルキルＣ_６〜１０アリール）、例えばベンジル及びフェネチルである。いくつかの実施形態において、上記アルキル及び上記アリールはそれぞれ、１、２、３、または４個の、それぞれの基について本明細書で規定される置換基でさらに置換されていてもよい。

本明細書では、用語「カルボシクリル」とは、非芳香族のＣ_３〜Ｃ_２０の単環式、二環式、または三環式構造であって、該構造において当該の環が炭素原子によって形成される上記構造をいう。カルボシクリル構造としては、シクロアルキル基及び不飽和カルボシクリルラジカルが挙げられる。

本明細書では、用語「シクロアルキル」とは、３〜２０個、好ましくは３〜１０個または３〜６個の炭素原子の、飽和、非芳香族、一価の単環または多環炭素環式ラジカルをいう。この用語の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びアダマンチルなどのラジカルがさらに挙げられる。

本明細書では、用語「シクロアルケニル」とは、３〜２０個、好ましくは３〜１０個または３〜６個の炭素原子の、不飽和、非芳香族、一価の単環または多環の炭素環式ラジカルをいう。この用語の例としては、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、及びノルボルニルなどのラジカルがさらに挙げられる。

用語「多環シクロアルキル」とは、２個以上の共通の原子を有する２つ以上のシクロアルキル部分からなる構造を意味する。当該シクロアルキル部分がちょうど２個の共通の原子を有する場合、それらの部分は「縮合している」と呼ばれる。当該シクロアルキル部分が３個以上の共通の原子を有する場合、それらの部分は「架橋されている」と呼ばれる。

本明細書では、用語「ハロ」とは、フッ素（フルオロ）、塩素（クロロ）、臭素（ブロモ）、またはヨウ素（ヨード）ラジカルを意味する。
本明細書では、用語「ヘテロアルキル」とは、１個以上の構成炭素原子が窒素、酸素、または硫黄で置換されている、本明細書で定義されるアルキル基をいう。いくつかの実施形態において、上記ヘテロアルキル基は、アルキル基に関して本明細書に記載される１、２、３、または４個の置換基でさらに置換されていてもよい。ヘテロアルキル基としては、本明細書でアルキル−Ｏ−（例えば、メトキシ及びエトキシ）を指す「アルコキシ」が挙げられるが、これに限定はされない。ヘテロアルキレンは二価のヘテロアルキル基である。

本明細書では、用語「ヘテロシクリル」とは、Ｎ、Ｏ、もしくはＳから選択される１、２、３、または４個の環ヘテロ原子を含む少なくとも１つの環であって、いずれも芳香族ではない上記環を有する、３〜１２個の原子を有する単環式または多環式ラジカルを意味する。ヘテロシクリル基としては、モルホリニル、チオモルホリニル、フリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、及び１，３−ジオキサニルが挙げられるが、これらに限定はされない。

本明細書では、用語「ヘテロシクリルアルキル」とは、ヘテロシクリル基で置換されたアルキル基を表す。例示的な非置換ヘテロシクリルアルキル基は、７〜３０個の炭素からなる（例えば、７〜１６個または７〜２０個の炭素からなり、例えば、Ｃ_１〜６アルキルＣ_２〜９ヘテロシクリル、Ｃ_１〜１０アルキルＣ_２〜９ヘテロシクリル、またはＣ_１〜２０アルキルＣ_２〜９ヘテロシクリル）。いくつかの実施形態において、上記アルキル及び上記ヘテロシクリルはそれぞれ、それぞれの基について本明細書で定義される１、２、３、または４個の置換基でさらに置換されていてもよい
本明細書では、用語「ヒドロキシル」とは−ＯＨ基を表す。

上記アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、カルボシクリル（例えばシクロアルキル）、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリル基は、置換されていてもよく、または非置換であってもよい。置換されている場合には、別段の明記がない限り、一般に１〜４個の置換基が存在することとなる。置換基としては、例えば、アリール（例えば、置換及び非置換フェニル）、カルボシクリル（例えば、置換及び非置換シクロアルキル）、ハロゲン（例えばフルオロ）、ヒドロキシル、ヘテロアルキル（例えば、置換及び非置換メトキシ、エトキシ、またはチオアルコキシ）、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アミノ（例えば、ＮＨ_２またはモノもしくはジアルキルアミノ）、アジド、シアノ、ニトロ、またはチオールが挙げられる。アリール、カルボシクリル（例えばシクロアルキル）、ヘテロアリール、及びヘテロシクリル基もまたアルキルで置換されていてもよい（非置換及び置換アリールアルキル（例えば、置換及び非置換ベンジル）など）。

本発明の化合物は、１つ以上の不斉炭素原子を有していてもよく、光学的に純粋な鏡像異性体、例えばラセミ体などの鏡像異性体の混合物、光学的に純粋なジアステレオ異性体、ジアステレオ異性体の混合物、ジアステレオ異性体のラセミ体、またはジアステレオ異性体のラセミ体の混合物の形態で存在していてもよい。上記の光学活性な形態は、例えば、ラセミ体の分割、不斉合成、または不斉クロマトグラフィー（キラル吸着剤またはキラル溶離液を用いたクロマトグラフィー）によって得ることができる。すなわち、開示された化合物のいくつかは、様々な立体異性体の形態で存在していてもよい。立体異性体とは、それらの空間配置のみが異なる化合物である。鏡像異性体とは、それらの鏡像を重ね合わせることができない立体異性体の対であり、鏡像を重ね合わせることができない最も一般的な理由は、キラル中心として機能する不斉に置換された炭素原子を含むことである。「鏡像異性体」とは、互いに鏡像であり、重ね合わせることができない一対の分子の一方を意味する。ジアステレオマーは、鏡像とは関係しない立体異性体であり、その最も一般的な理由は、２つ以上の不斉に置換された炭素原子を含み、１つ以上のキラル炭素原子の周りの置換基の配置を示すことである。化合物の鏡像異性体は、例えば、キラルクロマトグラフィー及びそれに基づく分離方法などの１種以上の周知の技法及び方法を使用して、ラセミ体から鏡像異性体を分離することによって調製することができる。本明細書に記載の化合物の鏡像異性体をラセミ混合物から分離するのに適した技法及び／または方法は、当業者であれば容易に決定することができる。「ラセミ体」または「ラセミ混合物」とは、２種の鏡像異性体を含む化合物の混合物であって、光学活性を示さない、すなわち、偏光面を回転させない上記混合物を意味する。「幾何異性体」とは、炭素−炭素二重結合、シクロアルキル環、または架橋二環系に関連して置換基原子の向きが異なる異性体を意味する。炭素−炭素二重結合のそれぞれの側の原子（Ｈ以外）は、Ｅ（置換基が炭素−炭素二重結合の反対側にある）またはＺ（置換基が同一側を向いている）の配置になっていてもよい。「Ｒ」、「Ｓ」、「Ｓ＊」、「Ｒ＊」、「Ｅ」、「Ｚ」、「ｃｉｓ」、及び「ｔｒａｎｓ」は、コア分子に対する相対的な配置を示す。開示される化合物のいくつかは、アトロプ異性形態で存在する場合がある。アトロプ異性体とは、単結合の周りの回転が妨げられることから生じる立体異性体であって、回転に対する立体ひずみの障壁が十分に高く、当該の配座異性体の単離が可能になる、上記立体異性体である。本発明の化合物は、異性体特異的合成または異性体混合物からの分割のいずれかによって、個別の異性体として調製することができる。従来の分割技法としては、光学活性な酸を使用して、異性体の対のそれぞれの異性体の遊離塩基の塩を形成すること（それに続いて、分別結晶化及び上記遊離塩基の再生）、光学活性なアミンを使用して、異性体の対のそれぞれの異性体の酸形態の塩を形成すること（それに続いて、分別結晶化及び上記遊離酸の再生）、光学的に純粋な酸、アミン、もしくはアルコールを使用して、異性体の対のそれぞれの異性体のエステルまたはアミドを形成すること（それに続いて、クロマトグラフィーによる分離及びキラル補助剤の除去）、あるいは種々の周知のクロマトグラフィー法を使用して、出発物質または最終生成物のいずれかの異性体混合物を分割することが挙げられる。開示される化合物の立体化学が構造によって命名されるまたは描かれる場合、当該の命名されるまたは描かれる立体異性体は、他の立体異性体との対比で、少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９９重量％、または９９．９重量％である。単一の鏡像異性体が構造によって命名されるまたは描かれる場合、当該の描かれるまたは命名される鏡像異性体の光学純度は、少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９９重量％、または９９．９重量％である。単一のジアステレオマーが構造によって命名されるまたは描かれる場合、当該の描かれるまたは命名されるジアステレオマーの純度は、少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９９重量％、または９９．９重量％である。パーセントで表した光学純度は、当該鏡像異性体の重量とその光学異性体の重量の和に対する当該鏡像異性体の重量の比率である。重量でのジアステレオマー純度は、すべてのジアステレオマーの重量に対する１種のジアステレオマーの重量の比率である。開示される化合物の立体化学が構造によって命名されるまたは描かれる場合、当該の命名されるまたは描かれる立体異性体の純度は、他の立体異性体との対比で、少なくとも６０モル％、７０モル％、８０モル％、９０モル％、９９モル％、または９９．９モル％である。単一の鏡像異性体が構造によって命名されるまたは描かれる場合、当該の描かれるまたは命名される鏡像異性体の光学純度は、少なくとも６０モル％、７０モル％、８０モル％、９０モル％、９９モル％、または９９．９モル％である。単一のジアステレオマーが構造によって命名されるまたは描かれる場合、当該の描かれるまたは命名されるジアステレオマーの純度は、少なくとも６０モル％、７０モル％、８０モル％、９０モル％、９９モル％、または９９．９モル％である。モルパーセントで表した純度は、当該鏡像異性体のモルとその光学異性体のモルの和に対する当該鏡像異性体のモルの比率である。同様に、モルパーセントで表した純度は、当該ジアステレオマーのモルとその異性体のモルの和に対する当該ジアステレオマーのモルの比率である。開示される化合物が立体化学を示すことなく構造によって命名されるかまたは描かれ、且つ当該化合物が少なくとも１つのキラル中心を有する場合、その名称または構造は、その対応する光学異性体を含まない当該化合物の鏡像異性体、該化合物のラセミ混合物、または一方の鏡像異性体がその対応する光学異性体に比較して濃縮された混合物のいずれかを包含することが理解されよう。開示される化合物が立体化学を示すことなく構造によって命名されるかまたは描かれ、且つ２つ以上のキラル中心を有する場合、その名称または構造は、他のジアステレオマーを含まないジアステレオマー、他のジアステレオマー対を含まないいくつかのジアステレオマー、ジアステレオマーの混合物、ジアステレオマー対の混合物、１種のジアステレオマーが他のジアステレオマー（複数可）に比較して濃縮されたジアステレオマーの混合物、または１種以上のジアステレオマーが他のジアステレオマーに比較して濃縮されたジアステレオマーの混合物を包含することが理解されよう。本発明は、これらの形態のすべてを包含する。

本明細書では、ステロールエステルならびに、脂質ナノ粒子の製造方法に利用することができる精製β−シトステロール、カンペステロール、及びシトスタノールを製造するための合成方法が提供される。

ステロールエステル
本発明の化合物は、式Ｉ：

または薬学的に許容されるその塩に係る構造を有する化合物を含む。例示的な式Ｉの化合物は表１の化合物１〜３３である。
精製β−シトステロール、カンペステロール、及びシトスタノール
精製β−シトステロールの調製方法は、β−シトステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、β−シトステロールエステルを生成させることと、β−シトステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、β−シトステロールエステルの試料を生成させることと、上記β−シトステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記β−シトステロールエステルを反応させて、精製β−シトステロールを生成させることとを含む。

上記β−シトステロールエステルは、式ＩＩ：

の構造を有していてもよい。
精製カンペステロールの調製方法は、カンペステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、カンペステロールエステルを生成させることと、カンペステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、カンペステロールエステルの試料を生成させることと、上記カンペステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記カンペステロールエステルを反応させて、精製カンペステロールを生成させることとを含む。

上記カンペステロールエステルは、式ＩＩＩ：

の構造を有していてもよい。
精製シトスタノールの調製方法は、シトスタノール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、シトスタノールエステルを生成させることと、上記シトスタノールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、シトスタノールエステルの試料を生成させることと、上記シトスタノールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記シトスタノールエステルを反応させて、精製シトスタノールを生成させることとを含む。

上記シトスタノールエステルは、式ＩＶ：

の構造を有していてもよい。
精製スティグマステロールの調製方法は、スティグマステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、スティグマステロールエステルを生成させることと、上記スティグマステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、スティグマステロールエステルの試料を生成させることと、上記スティグマステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記スティグマステロールエステルを反応させて、精製スティグマステロールを生成させることとを含む。

上記スティグマステロールエステルは、式Ｖ：

の構造を有していてもよい。
精製カンペスタノールの調製方法は、カンペスタノール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、カンペスタノールエステルを生成させることと、上記カンペスタノールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、カンペスタノールエステルの試料を生成させることと、上記カンペスタノールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記カンペスタノールエステルを反応させて、精製カンペスタノールを生成させることとを含む。

上記カンペスタノールエステルは、式ＶＩ：

の構造を有していてもよい。
精製ブラシカステロールの調製方法は、ブラシカステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、ブラシカステロールエステルを生成させることと、上記ブラシカステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、ブラシカステロールエステルの試料を生成させることと、上記ブラシカステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記ブラシカステロールエステルを反応させて、精製ブラシカステロールを生成させることとを含む。

上記ブラシカステロールエステルは、式ＶＩＩ：

の構造を有していてもよい。
精製フコステロールの調製方法は、フコステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、フコステロールエステルを生成させることと、上記フコステロールエステルを上記試料中の上記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、フコステロールエステルの試料を生成させることと、上記フコステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で上記フコステロールエステルを反応させて、精製フコステロールを生成させることとを含む。

上記フコステロールエステルは、式ＶＩＩ：

の構造を有していてもよい。
いくつかの実施形態において、化合物（例えば、β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、またはシトスタノールエステル）を、上記化合物及び１種以上の化合物（例えば１種以上のステロール）を含む混合物から実質的に分離することは、クロマトグラフィーを利用することによって、それぞれの化合物を上記混合物から分離することを含む。

いくつかの実施形態において、上記クロマトグラフィーは液体クロマトグラフィーである。
いくつかの実施形態において、上記液体クロマトグラフィーは逆相である。いくつかの実施形態において、上記液体クロマトグラフィーは順相である。

いくつかの実施形態において、移動相は１種以上の有機溶媒を含む。
いくつかの実施形態において、移動相は水を含む。
いくつかの実施形態において、移動相は、一定の比率の１種以上の溶媒を含む。例えば、移動相は、１種の溶媒（例えば、ジクロロメタン、ヘキサン、またはメタノール）を含んでいてもよい。移動相は、１：１、１：２、１：３、１：４、２：３、または１：５の比率の２種の溶媒（例えば、水とアセトニトリル、ヘキサンと酢酸エチル、ジクロロメタンとジエチルエーテル、または水とメタノール）を含んでいてもよい。さらに別の例において、移動相は、３種の溶媒（例えば、水、アセトニトリル、及びメタノール、またはヘキサン、ジクロロメタン、及び酢酸エチル）を１：１：１、１：１：２、１：１：３、または１：１：４の比率で含んでいてもよい。

いくつかの実施形態において、移動相は、２種以上の溶媒の勾配を含む。例えば、移動相は、２種の溶媒（例えば、水とアセトニトリル、ヘキサンと酢酸エチル、ジクロロメタンとジエチルエーテル、または水とメタノール）であって、その比率が、クロマトグラフィー法が進行するのにつれて、０：１→１：９→１：４→３：７→２：３→１：１→３：２→７：３→４：１→９：１→１：０と徐々に変化する上記２種の溶媒を含んでいてもよい。

いくつかの実施形態において、上記１種以上の溶媒は１種以上の添加剤（例えば、トリフルオロ酢酸、酢酸、またはトリエチルアミン）を含んでいてもよい。
いくつかの実施形態において、上記液体クロマトグラフィーは高速液体クロマトグラフィーである。

いくつかの実施形態において、化合物（例えば、β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、またはシトスタノールエステル）を、上記化合物及び１種以上の化合物（例えば１種以上のステロール）を含む混合物から実質的に分離することは、結晶化を利用することによって、それぞれの化合物を上記混合物から分離することを含む。

脂質ナノ粒子
本発明は、一態様において、ｍＲＮＡを細胞中に送達するための脂質含有組成物及び／または該組成物の合成方法に利用することができるステロールエステルを特徴とする。脂質含有組成物は、種々のＲＮＡの細胞及び／または細胞内区画中への輸送用ビヒクルとして有効であることが判明している。これらの組成物は一般に、１種以上の「カチオン性」及び／またはイオン性脂質、構造脂質（例えば、ステロールまたはステロール類似体）、ならびにポリエチレングリコールを含む脂質（ＰＥＧ脂質）を含む。カチオン性及び／またはイオン性脂質としては、例えば、容易にプロトン化することができるアミン含有脂質が挙げられる。

イオン性脂質
本発明の脂質ナノ粒子は、１種以上のイオン性脂質を含む。例えば、脂質ナノ粒子はイオン性脂質を含む。本明細書に記載のイオン性脂質は、細胞（例えば哺乳動物細胞）への核酸分子の送達のための本発明の脂質ナノ粒子において、有利に使用することができる。

イオン性脂質としては、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザオクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、４−（ジメチルアミノ）ブタン酸ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ （２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ （２Ｓ））が挙げられるが、これらに限定はされない。これらに加えて、イオン性脂質はまた、環状アミンを含む脂質であってもよい。

イオン性脂質としては、国際公開第ＷＯ２０１５／１９９９５２号、第ＷＯ２０１７／０７５５３１号、及び／または第ＷＯ２０１７／０４９２４５号に開示のイオン性脂質が挙げられるが、これらに限定はされない。

イオン性脂質は、生理学的ｐＨにおいて正電荷または部分的な正電荷を有することができる。かかるイオン性脂質は、カチオン性脂質及び／またはイオン性脂質と呼ぶことができる。イオン性脂質は双性イオン性であってもよい。

いくつかの実施形態において、イオン性脂質は、以下の構造：

（式中、Ｒ^ｉ１はＨもしくは任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_１０アルキルであり、Ｒ^ｉ２及びＲ^ｉ５のそれぞれは独立に、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_５０アルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_５０ヘテロアルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_５０アルケニルであり、Ｒ^ｉ３及びＲ^ｉ４のそれぞれは独立に、ＨもしくはＣ_３〜Ｃ_１０アルキルであり、ａは５〜２０の整数である）、またはその塩を有する。式Ａに係る構造を有するイオン性脂質の例としては、

またはその塩が挙げられる。
本明細書に開示の脂質ナノ粒子は、本明細書に開示のイオン性脂質に加えて、本発明に記載の上記方法のいずれかによって精製された、β−シトステロール、カンペステロール、及び／またはシトスタノールを含む。本明細書に開示の脂質ナノ粒子は、任意選択で、非カチオン性ヘルパー脂質、ＰＥＧ脂質、構造脂質、及び／もしくは核酸分子、またはそれらの任意の組み合わせを含んでいてもよい。

構造脂質
本発明の脂質ナノ粒子は、１種以上の構造脂質を含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１種の構造脂質または１種以上の構造脂質（例えば、２種以上の構造脂質、３種以上の構造脂質、４種以上の構造脂質、もしくは５種以上の構造脂質）を含んでいてもよい。本明細書に記載のイオン性脂質は、細胞（例えば哺乳動物細胞）への核酸分子の送達のための本発明の脂質ナノ粒子において、有利に使用することができる。

本明細書では、「構造脂質」とは、ステロイド及び／またはステロイド部分を含む脂質（例えば、ステロール及び／またはステロール部分を含む脂質）をいう。脂質ナノ粒子に構造脂質を導入することにより、脂質ナノ粒子中の他の脂質の凝集の軽減を助長することができる。

構造脂質としては、ステロール（例えば、フィトステロールまたはズーステロール）を挙げることができるが、これらに限定はされない。ステロールとしては、コレステロール、β−シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソル酸、またはα−トコフェロールを挙げることができるが、これらに限定はされない。

非カチオン性ヘルパー脂質
本発明の脂質ナノ粒子は、１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質（例えばリン脂質）を含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１種の非カチオン性ヘルパー脂質または１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、２種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、３種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、４種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、または５種以上の非カチオン性ヘルパー脂質）を含んでいてもよい。本明細書に記載のイオン性脂質は、細胞（例えば哺乳動物細胞）への核酸分子の送達のための本発明の脂質ナノ粒子において、有利に使用することができる。

非カチオン性ヘルパー脂質としては、リン脂質（例えば多価不飽和リン脂質）及び脂肪酸（例えばオレイン酸）が挙げられるが、これらに限定はされない。
リン脂質はリン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含む。例えば、リン脂質は式：

に係る脂質であって、
式中、Ｒ_ｐはリン脂質部分を表し、Ｒ_１ｐ及びＲ_２ｐは、同一であってももしくは異なっていてもよい、飽和または不飽和の脂肪酸部分を表す、上記脂質であってよい。リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群より選択されてもよい。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、α−リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群より選択されてもよい。分岐、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾ならびに置換を伴う天然種を含む非天然種も企図される。

リン脂質としては、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、またはＤＳＰＣとＤＯＰＥの両方が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明の組成物及び方法において有用なリン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＥ、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群より選択されてもよい。

脂肪酸としては、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）、長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）、または極長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）が挙げられるが、これらに限定はされない。

短鎖脂肪酸としては、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、及びイソ吉草酸が挙げられるが、これらに限定はされない。中鎖脂肪酸としては、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、及びラウリン酸が挙げられるが、これらに限定はされない。長鎖脂肪酸としては、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキジン酸、ヘネイコシル酸、ベヘン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、ゴンドイン酸、エルカ酸、サピエン酸、パウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、バクセン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、リノレイド酸、ドクサヘキサエン酸、ミリスチン酸、またはリノール酸が挙げられるが、これらに限定はされない。極長鎖脂肪酸としては、トリコシル酸、イグノセリン酸、セロチン酸、ネルボン酸、ペンタコシル酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、またはヘナトリアコンチル酸が挙げられるが、これらに限定はされない。

ＰＥＧ脂質
本発明の脂質ナノ粒子は、１種以上のＰＥＧ脂質を含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１種のＰＥＧ脂質または１種以上のＰＥＧ脂質（例えば、２種以上のＰＥＧ脂質、３種以上のＰＥＧ脂質、４種以上のＰＥＧ脂質、または５種以上のＰＥＧ脂質）を含んでいてもよい。本明細書に記載のＰＥＧ脂質は、細胞（例えば哺乳動物細胞）への核酸分子の送達のための本発明の脂質ナノ粒子において、有利に使用することができる。

ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ−セラミドコンジュゲート、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾１，２−ジアシルオキシプロパン−３−アミン、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールであってよい。ＰＥＧ脂質としては、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ−ジステリルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＳＧ）、ＰＥＧ−ジパルメトレイル、ＰＥＧ−ジオレイル、ＰＥＧ−ジステアリル、ＰＥＧ−ジアシルグリカミド（ＰＥＧ−ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ）、ＰＥＧ−１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ）、Ｒ−３−［（ω−メトキシポリ（エチレングリコール）_２０００）カルバモイル）］−１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ）、ＰＥＧ−１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＬＰＥ）、ＰＥＧ−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＭＰＥ）、ＰＥＧ−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＥＧ−ＤＰＰＣ）、１−Ｏ−（２’−（ω−メトキシポリエチレングリコール）スクシノイル）−２−Ｎ−ミリストイルスフィンゴシン（ＰＥＧ−ＣｅｒＣ１４）、または１−Ｏ−（２’−（ω−メトキシポリエチレングリコール）スクシノイル）−２−Ｎ−アラキドイルスフィンゴシン（ＰＥＧ−ＣｅｒＣ２０）が挙げられるが、これらに限定はされない。

上記ＰＥＧ脂質の脂肪族鎖はそれぞれ、１４〜２２個の炭素（例えば、１４〜１６、１６〜１８、１４〜２０、または１４〜１８個の炭素）を有していてもよい。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ部分、例えば、ｍＰＥＧ−ＮＨ_２は、約１０００、２０００、５０００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ドルトンの大きさを有する。いくつかの実施形態において、上記ＰＥＧ脂質はＰＥＧ_２ｋ−ＤＭＧである。

本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、非拡散性ＰＥＧであるＰＥＧ脂質を含んでいてもよい。非拡散性ＰＥＧの非限定的な例としては、ＰＥＧ−ＤＳＧ及びＰＥＧ−ＤＳＰＥが挙げられる。

ＰＥＧ脂質としては、米国特許第８，１５８，６０１号及び国際公開第ＷＯ２０１５／１３０５８４号及び第ＷＯ２０１２／０９９７５５号に記載されるＰＥＧが挙げられる。本明細書に記載のＰＥＧ脂質は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０００１２９号に記載のようにして合成することができる。

いくつかの実施形態において、上記ＰＥＧ脂質は改変形態のＰＥＧ−ＤＭＧである。ＰＥＧ−ＤＭＧは以下の構造：

を有する。
特定の実施形態において、本発明で有用なＰＥＧ脂質はＰＥＧ化脂肪酸である。
一実施形態において、本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、約０．１ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％、または約１ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％の範囲である。

一実施形態において、本明細書に開示の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量、約２ｍｏｌ％である。一実施形態において、本明細書に開示の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は約１．５ｍｏｌ％である。

一実施形態において、本明細書に開示の脂質組成物中のＰＥＧ脂質の量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５ｍｏｌ％である。

いくつかの態様において、本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物はＰＥＧ脂質を含まない。
その他の成分
本発明の組成物は、以前の節に記載される成分に加えて、１種以上の成分を含んでいてもよい。例えば、組成物は、ビタミン（例えば、ビタミンＡもしくはビタミンＥ）またはステロールなどの１種以上の疎水性の小分子を含んでいてもよい。

組成物はまた、１種以上の透過性向上剤分子、炭水化物、ポリマー、治療薬、表面改変剤、または他の成分も含んでいてよい。透過性向上剤分子は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６４号に記載される分子であってもよい。炭水化物としては、単糖（例えばグルコース）及び多糖（例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及び類似体）を挙げることができる。

ポリマーが組成物中に含まれていてもよく、且つ／または組成物をカプセル化または部分的にカプセル化するために使用されてもよい。ポリマーは生分解性及び／または生体適合性であってよい。ポリマーは、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバミン酸エステル、ポリ尿素、ポリカーボナート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアナート、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリアクリロニトリル、及びポリアクリル酸エステルから選択されてもよく、但しこれらに限定はされない。例えば、ポリマーとしては、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリＬ−乳酸（ＰＬＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−共−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−共−グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリＤ，Ｌ−ラクチド（ＰＤＬＡ）、ポリＬ−ラクチド（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−共−カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−共−カプロラクトン−共−グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−共−ＰＥＯ−共−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−共−ＰＰＯ−共−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリシアノアクリル酸アルキル、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）、メタクリル酸ヒドロキシプロピル（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリヒドロキシ酸、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリエステルアミド、ポリアミド、ポリエステルエーテル、ポリカーボナート、ポリエチレン及びポリプロピレンなどのポリアルキレン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリアルキレングリコール）、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリエチレンテレフタラートなどのポリアルキレンテレフタラート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリ酢酸ビニルなどのポリビニルエステル、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）などのポリハロゲン化ビニル、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリウレタン、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどの誘導体化セルロース、ポリ（メチル（メタ）アクリル酸）（ＰＭＭＡ）、ポリ（メタ）アクリル酸エチル、ポリ（メタ）アクリル酸ブチル、ポリ（メタ）アクリル酸イソブチル、ポリ（メタ）アクリル酸ヘキシル、ポリ（メタ）アクリル酸イソデシル、ポリ（メタ）アクリル酸ラウリル、ポリ（メタ）アクリル酸フェニル、ポリアクリル酸メチル、ポリアクリル酸イソプロピル、ポリアクリル酸イソブチル、ポリアクリル酸オクタデシル、及びそれらのコポリマー及び混合物などのアクリル酸のポリマー、ポリジオキサノン及びそのコポリマー、ポリヒドロキシアルカン酸、ポリプロピレンフマラート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポリオキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ酪酸、ポリ吉草酸、ポリ（ラクチド−共−カプロラクトン）、ならびにトリメチレンカーボナート、ポリビニルピロリドンを挙げることができる。

治療薬としては、細胞毒性剤、化学療法剤、及び他の治療薬を挙げることができるが、これらに限定はされない。細胞毒性剤としては、例えば、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、プロマイシン、メイタンシノイド、ラケルマイシン、及びそれらの類似体を挙げることができる。放射性イオンもまた治療薬として使用することができ、放射性イオンとしては、例えば、放射性のヨウ素、ストロンチウム、リン、パラジウム、セシウム、イリジウム、コバルト、イットリウム、サマリウム、及びプラセオジムを挙げることができる。他の治療薬としては、例えば、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、及び５−フルオロウラシル、及びｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、ラケルマイシン、メルファラン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならびにｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）、及びシスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン）、ならびに抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、及びメイタンシノイド）を挙げることができる。

界面活性剤としては、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、ジメチルジオクタデシル−アンモニウムブロムイドなどのカチオン性界面活性剤）、糖または糖誘導体（例えばシクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール、及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、アセチルシステイン、ヨモギ、ブロメライン、パパイン、クレロデンドルム、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトスタイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルソリン、チモシンβ４、ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、及びエルドステイン）、ならびにＤＮアーゼ（例えばｒｈＤＮアーゼ））が挙げられるが、これらに限定はされない。表面改変剤は、ナノ粒子内及び／または組成物の表面上に配置することができる（例えば、コーティング、吸着、共有結合、または他のプロセスによって）。

本発明の組成物は、これらの成分に加えて、医薬組成物において有用な任意の物質を含んでいてもよい。例えば、本組成物は、１種以上の溶媒、分散媒体、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、造粒助剤、崩壊剤、充填剤、滑剤、液体ビヒクル、結合剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤もしく乳化剤、緩衝剤、滑沢剤、油、防腐剤、及び他の種などの、但しこれらに限定されない、１種以上の薬学的に許容される賦形剤または副成分を含んでいてもよい。ワックス、バター、着色料、コーティング剤、香味料、及び芳香剤などの賦形剤も挙げることができる。薬学的に許容される賦形剤は当技術分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１^ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ａ． Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， ＭＤ， ２００６を参照されたい）。

希釈剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉砂糖、及び／もしくはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。造粒剤及び分散剤は、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、クレー、アルギン酸、グアーガム、柑橘パルプ、寒天、ベントナイト、セルロース及び木質製品、天然カイメン、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）、カルボキシメチルスターチナトリウム（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（デンプン１５００）、微結晶デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第四級アンモニウム化合物、ならびに／またはそれらの組み合わせからなる非限定的な一覧から選択することができる。

界面活性剤及び／または乳化剤としては、天然乳化剤（例えば、アラビアガム、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイド状クレー（例えば、ベントナイト（ケイ酸アルミニウム）及びＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、ｔｒｉａｃｅｔｉｎ ｍｏｎｏｓｔｅａｒａｔｅ、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリル、及びモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、モノパルミチン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、モノステアリン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）６０］、トリステアリン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）６５］、モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、モノステアリン酸ポリオキシエチレン［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油、ポリエトキシル化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシメチレン、及びＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリビニルピロリドン、モノラウリン酸ジエチレングリコール、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュサートナトリウム、及び／またはそれらの組み合わせを挙げることができるが、これらに限定はされない。

結合剤は、デンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプンペースト）、ゼラチン；糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然及び合成のガム（例えば、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモスのエキス、パンワーガム（ｐａｎｗａｒ ｇｕｍ）、ガティガム、ｉｓａｐｏｌ ｈｕｓｋの粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、酢酸セルロース、ポリビニルピロリドン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、及びカラマツ由来のアラビノガラクタン）；アルギン酸塩；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリル酸エステル；ワックス；水；アルコール；及びそれらの組み合わせ、または任意の他の適宜の結合剤であってよい。

防腐剤としては、抗酸化剤、キレート剤、抗菌性防腐剤、抗真菌性防腐剤、アルコール防腐剤、酸性防腐剤、及び／または他の防腐剤が挙げられるが、これらに限定はされない。抗酸化剤としては、α−トコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ亜硫酸水素カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、及び／または亜硫酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定はされない。キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／またはエデト酸三ナトリウムが挙げられる。抗菌性防腐剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／またはチメロサールが挙げられるが、これらに限定はされない。抗真菌性防腐剤としては、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／またはソルビン酸が挙げられるが、これらに限定はされない。アルコール防腐剤としては、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、ベンジルアルコール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシ安息香酸、及び／またはフェニルエチルアルコールが挙げられるが、これらに限定はされない。酸性防腐剤としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β−カロチン、クエン酸、酢酸、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／またはフィチン酸が挙げられるが、これらに限定はされない。他の防腐剤としては、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム、セトリミド、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、亜硫酸水素ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ亜硫酸水素カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、及び／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定はされない。

緩衝剤としては、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプチン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、水酸化リン酸カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、アミノスルホン酸緩衝液（例えばＨＥＰＥＳ）、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱因子を含まない水、等張食塩水、リンガー溶液、エチルアルコール、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、水素化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせからなる非限定的な群より選択することができる。

油としては、アーモンド油、アンズ核油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、クロスグリ種子油、ルリジサ油、カデ油、カモミール油、キャノーラ油、キャラウェイ油、カルナバ油、ヒマシ油、シナモン油、カカオ脂、ヤシ油、肝油、コーヒー油、トウモロコシ油、綿実油、エミュー油、ユーカリ油、マツヨイグサ油、魚油、アマニ油、ゲラニオール、ウリ油、ブドウ種子油、ヘーゼルナッツ油、ヒソップ油、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバンジン油、ラベンダー油、レモン油、アオモジ油、マカデミアナッツ油、ゼニアオイ油、マンゴー種子油、メドウフォーム種子油、ミンク油、ナツメグ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、パーム油、パーム核油、モモ核油、ピーナッツ油、ケシ油、カボチャ種子油、ナタネ油、米ぬか油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャクダン油、サスカナ（ｓａｓｑｕａｎａ）油、セイボリー油、サジー油、ゴマ油、シアバター、シリコーン油、大豆油、ヒマワリ油、チャノキ油、アザミ油、ツバキ油、ベチバ油、クルミ油、及び小麦胚芽油、ならびにステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、シメチコン、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定はされない。

ＲＮＡ
ＲＮＡはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であってよい。ｍＲＮＡは、天然に存在するまたは天然に存在しないｍＲＮＡであってよい。ｍＲＮＡは、１つ以上の修飾された核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含んでいてもよい。ｍＲＮＡの核酸塩基は、プリンもしくはピリミジンまたはそれらの誘導体などの有機塩基である。核酸塩基は、カノニカルな塩基（例えば、アデニン、グアニン、ウラシル、及びシトシン）、あるいは、アルキル、アリール、ハロ、オキソ、ヒドロキシル、アルキルオキシ、及び／もしくはチオによる置換を含む、但しこれらに限定されない１つ以上の置換または修飾；１つ以上の環の縮合または開環；酸化；及び／または還元を含む非カノニカルなあるいは修飾された塩基であってもよい。したがって、核酸塩基は、アデニン、グアニン、ウラシル、シトシン、７−メチルグアニン、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、チミン、シュードウラシル、ジヒドロウラシル、ヒポキサンチン、及びキサンチンからなる非限定的な群より選択することができる。

ｍＲＮＡのヌクレオシドは、核酸塩基との組み合わせで糖分子（例えば、ペントース、リボース、アラビノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、もしくはそれらのデオキシ誘導体などの５炭糖または６炭糖）を含む化合物である。ヌクレオシドは、カノニカルなヌクレオシド（例えば、アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン、５−メチルウリジン、デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシシチジン、デオキシウリジン、及びチミジン）またはその類似体であってもよく、上記核酸塩基及び／もしくは糖成分の、アルキル、アリール、ハロ、オキソ、ヒドロキシル、アルキルオキシ、及び／またはチオによる置換を含む、但しこれらに限定されない１つ以上の置換または修飾；１つ以上の環の縮合または開環；酸化；及び／または還元を含んでいてもよい。

ｍＲＮＡのヌクレオチドは、ヌクレオシド及びリン酸基またはそれに代わる基（例えば、ボラノリン酸、チオリン酸、セレノリン酸、ホスホン酸、アルキル基、アミダート、及びグリセロール）を含む化合物である。ヌクレオチドは、カノニカルなヌクレオチド（例えば、アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン、５−メチルウリジン、デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシシチジン、デオキシウリジン、及びチミジンモノリン酸）またはその類似体であってよく、上記核酸塩基、糖、及び／もしくはリン酸またはそれに代わる成分の、アルキル、アリール、ハロ、オキソ、ヒドロキシル、アルキルオキシ、及び／またはチオによる置換を含む、但しこれらに限定されない１つ以上の置換または修飾；１つ以上の環の縮合または開環；酸化；及び／または還元を含んでいてもよい。ヌクレオチドは、１つ以上のリン酸基またはそれに代わる基を含んでいてもよい。例えば、ヌクレオチドは、ヌクレオシド及び三リン酸基を含んでいてもよい。「ヌクレオシド三リン酸」（例えば、グアノシン三リン酸、アデノシン三リン酸、シチジン三リン酸、及びウリジン三リン酸）は、カノニカルなヌクレオシド三リン酸またはその類似体もしくは誘導体を指してもよく、本明細書に記載の１つ以上の置換または修飾を含んでいてもよい。例えば、「グアノシン三リン酸」は、カノニカルなグアノシン三リン酸、７−メチルグアノシン三リン酸、または本明細書に包含される他の任意の定義を含むと解されるべきである。

ｍＲＮＡは、５’非翻訳領域、３’非翻訳領域、及び／またはコード配列もしくは翻訳配列を含んでいてもよい。ｍＲＮＡは、数十、数百、または数千の塩基対を含む、任意の数の塩基対を含んでいてもよい。任意の数（例えば、すべて、一部、もしくはゼロ個）の核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドが、カノニカルな種の類似体であってよく、置換されていても、修飾されていても、または他の形態で天然に存在しなくてもよい。特定の実施形態において、特定の核酸塩基の種類のすべてが修飾されていてもよい。例えば、ｍＲＮＡ中のすべてのシトシンが５−メチルシトシンであってもよい。

いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。
キャップ構造またはキャップ種は、リンカーによって連結された２つのヌクレオシド部分を含む化合物であり、天然に存在するキャップ、天然に存在しないキャップ、またはキャップアナログ、もしくは抗リバースキャップアナログ（ＡＲＣＡ）から選択することができる。キャップ種は、１つ以上の修飾ヌクレオシド及び／またはリンカー部分を含んでいてもよい。例えば、天然のｍＲＮＡキャップは、グアニンヌクレオチド及び７位でメチル化されたグアニン（Ｇ）ヌクレオチドであって、その５’位で三リン酸結合によって結合された上記ヌクレオチド、例えば、一般的にはｍ^７ＧｐｐｐＧと記述されるｍ^７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含んでいてもよい。キャップ種はまた、抗リバースキャップアナログであってもよい。キャップ種としては、ｍ^７ＧｐｐｐＧ、ｍ^７Ｇｐｐｐｍ^７Ｇ、ｍ^７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ３’}ＧｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ３’}ＧｐｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ２’}ＧｐｐｐｐＧ、ｍ^７Ｇｐｐｐｍ^７Ｇ、ｍ^７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ３’}ＧｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ３’}ＧｐｐｐｐＧ、及びｍ_２ ^{７，Ｏ２’}ＧｐｐｐｐＧが挙げられる。

これに代えて、またはこれに加えて、ｍＲＮＡは鎖終結ヌクレオシドを含んでいてもよい。例えば、鎖終結ヌクレオシドとしては、ヌクレオシドであって、それらの糖基の２’及び／または３’位で脱酸素化されたヌクレオシドを挙げることができる。かかる種としては、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−デオキシウリジン、３’−デオキシシトシン、３’−デオキシグアノシン、３’−デオキシチミン、及び２’，３’−ジデオキシヌクレオシド、例えば、２’，３’−ジデオキシアデノシン、２’，３’−ジデオキシウリジン、２’，３’−ジデオキシシトシン、２’，３’−ジデオキシグアノシン、及び２’，３’−ジデオキシチミンを挙げることができる。

これに代えて、またはこれに加えて、ｍＲＮＡはヒストンステムループなどのステムループを含んでいてもよい。ステムループは、１、２、３、４、５、６、７、８個、またはそれを超えるヌクレオチド塩基対を含んでいてもよい。例えば、ステムループは、４、５、６、７、または８個のヌクレオチド塩基対を含んでいてもよい。ステムループは、ｍＲＮＡの任意の領域に位置していてもよい。例えば、ステムループは、非翻訳領域（５’非翻訳領域もしくは３’非翻訳領域）、コード領域、もしくはポリＡ配列中、その前、またはその後に位置していてもよく、あるいはテールであってもよい。

これに代えて、またはこれに加えて、ｍＲＮＡはポリＡ配列及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。ポリＡ配列は、完全にまたは大部分がアデニンヌクレオチドまたはそれらの類似体もしくは誘導体から構成されていてもよい。ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に隣接して位置するテールであってもよい。ｍＲＮＡは、天然に存在するかもしくは天然に存在しない、または他の形態で修飾されたポリペプチドを含む、任意の目的のポリペプチドをコードしていてもよい。ｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドは、任意の大きさのポリペプチドであってよく、任意の二次構造または活性を有していてもよい。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドは、細胞中で発現される場合、治療効果を有していてもよい。

組成物
本発明の脂質ナノ粒子はイオン性脂質及び本発明に記載の上記方法のいずれかによって精製された、β−シトステロール、カンペステロール、及び／またはシトスタノールを含む。上記脂質ナノ粒子は、１種以上の構造脂質、１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、１種以上のＰＥＧ脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％の本発明に記載の上記方法のいずれかによって精製された、β−シトステロール、カンペステロール、及び／またはシトスタノール、ならびに約１．５％のＰＥＧ脂質を含んでいてもよい。上記脂質ナノ粒子は核酸分子（例えばｍＲＮＡ）をさらに含んでいてもよい。

本発明の組成物は、１つ以上の特定の用途または標的に向けて設計することができる。例えば、組成物は、腎系などの哺乳動物の体内の特定の細胞、組織、器官、またはそれらの系もしくは群にｍＲＮＡを送達するように設計することができる。特定の身体上の標的に対する選択性を高めるために、組成物の物理化学的特性を変化させることができる。例えば、種々の器官の開窓の大きさに基づいて、粒度を調整してもよい。組成物に含まれるｍＲＮＡも、所望の送達標的または複数の標的に依拠する。例えば、ｍＲＮＡは、特定の適応症、疾病、疾患、もしくは障害に向けて、及び／または特定の細胞、組織、器官、またはそれらの系もしくは群への送達（例えば、局所的または特異的な送達）に向けて選択することができる。組成物は、１種以上の目的のポリペプチドをコードする１種以上のｍＲＮＡ分子を含んでいてよい。

組成物中のｍＲＮＡの量は、当該ｍＲＮＡの大きさ、配列、及び他の特性に依存していてよい。組成物中のｍＲＮＡの量はまた、当該組成物の粒度、組成、所望の標的、及び他の特性にも依存していてよい。ｍＲＮＡと他の要素（例えば脂質）との相対的な量もまた変化してよい。いくつかの実施形態において１種以上のイオン性脂質、本発明に記載の上記方法のいずれかによって精製された、β−シトステロール、カンペステロール、及び／もしくはシトスタノール、１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、１種以上のＰＥＧ脂質、またはそれらの任意の組み合わせの、組成物中のｍＲＮＡに対するｗｔ／ｗｔ比は、約５：１〜約５０：１、例えば、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、及び５０：１であってよい。例えば、１種以上のイオン性脂質、本発明に記載の上記方法のいずれかによって精製された、β−シトステロール、カンペステロール、及び／もしくはシトスタノール、１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、１種以上のＰＥＧ脂質、またはそれらの任意の組み合わせの、ｍＲＮＡに対するｗｔ／ｗｔ比は、約１０：１〜約４０：１であってよい。組成物中のｍＲＮＡの量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外−可視光分光法）を使用して測定することができる。

いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡ、脂質ナノ粒子、及びそれらの量は、特定のＮ：Ｐ比を与えるように選択してもよい。本組成物のＮ：Ｐ比とは、ｍＲＮＡ中のリン酸基の数に対する１種以上の脂質中の窒素原子のモル比をいう。一般に、より低いＮ：Ｐ比が好ましい。上記ｍＲＮＡ、脂質ナノ粒子、及びそれらの量は、約２：１〜約８：１、例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、及び８：１のＮ：Ｐ比を与えるように選択してもよい。特定の実施形態において、上記Ｎ：Ｐ比は約２：１〜約５：１であってよい。

物理的特性
組成物の特性は該組成物の成分に依存する場合がある。同様に、組成物の特性は、その成分の絶対量または相対量に依存する場合がある。例えば、より高いモル分率のカチオン性脂質を含む組成物は、より低いモル分率のカチオン性脂質を含む組成物とは異なる特性を有する場合がある。特性はまた、当該組成物の調製の方法及び条件に応じて変化する場合がある。

組成物は様々な方法でキャラクタライズすることができる。例えば、顕微鏡法（例えば、透過型電子顕微鏡法または走査型電子顕微鏡法）を使用して、組成物の形態学及び粒度分布を調べることができる。動的光散乱法または電位差測定法（例えば電位差滴定法）を使用して、ゼータ電位を測定することができる。動的光散乱法を利用して粒度を測定することもできる。Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ， Ｍａｌｖｅｒｎ， Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， ＵＫ）などの機器を使用して、粒度、多分散性指数、及びゼータ電位などの組成物の複数の特性を測定することもできる。

本発明の組成物の平均粒度は、数十ｎｍ〜数百ｎｍであってよい。例えば、上記平均粒度は、約４０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、例えば、約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍであってよい。いくつかの実施形態において、組成物の上記平均粒度は約８０ｎｍ〜約１２０ｎｍであってよい。特定の実施形態において、上記平均粒度は約９０ｎｍであってよい。

本発明の組成物は比較的に均一であることができる。多分散性指数を用いて、組成物の均一性、例えば、本組成物の粒度分布を示すことができる。小さい（例えば０．３未満の）多分散性指数は一般に狭い粒度分布を示す。本発明の組成物は、約０〜約０．１８、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、または０．１８の多分散性指数を有していてもよい。いくつかの実施形態において、組成物の多分散性指数は、約０．１３〜約０．１７であってよい。

組成物のゼータ電位を使用して、本組成物の動電学的電位を示すことができる。例えば、ゼータ電位は組成物の表面電荷を表すことができる。より高いレベルで荷電した種は、細胞、組織、及び体内の他の要素と望ましくない相互作用をする可能性があることから、正にしても負にしても、比較的低電荷の組成物が一般に望ましい。いくつかの実施形態において、本発明の組成物のゼータ電位は、約−１０ｍＶ〜約＋２０ｍＶであってよい。

ｍＲＮＡのカプセル化の効率は、与えられた当初の量に対する、調製後にカプセル化されたまたは他の形態で組成物に結び付いたｍＲＮＡの量を表す。上記カプセル化効率は高い（例えば１００％に近い）ことが望ましい。上記カプセル化効率は、例えば、当該組成物を１種以上の有機溶媒または界面活性剤で分離させる前後で、当該組成物を含む溶液中のｍＲＮＡの量を比較することによって測定することができる。蛍光を用いて、溶液中の遊離ｍＲＮＡの量を測定することができる。本発明の組成物に関しては、ｍＲＮＡのカプセル化効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であってよい。いくつかの実施形態において、上記カプセル化効率は少なくとも８０％であってよい。特定の実施形態において、上記カプセル化効率は少なくとも９０％であってよい。

本発明の組成物は、任意選択で、１種以上のコーティングを備えていてもよい。例えば、組成物は、コーティングを有するカプセル剤、フィルム剤、または錠剤に製剤化されてもよい。本発明の組成物を含むカプセル剤、フィルム剤、または錠剤は、任意の有用な大きさ、引張強さ、硬さ、または密度を有していてもよい。

医薬組成物
本発明の脂質ナノ粒子は、全体をまたは一部を、医薬組成物として製剤化してもよい。本発明の医薬組成物は１種以上の組成物を含んでいてもよい。例えば、医薬組成物は、１種以上の異なるｍＲＮＡを含む１種以上の組成物を含んでいてもよい。本発明の医薬組成物は、本明細書に記載されるものなどの１種以上の薬学的に許容される賦形剤または副成分をさらに含んでいてもよい。医薬組成物及び薬剤の製剤及び製造に関する概括的な指針は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１^ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ａ． Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， ＭＤ， ２００６において利用可能である。いずれかの従来の賦形剤または副成分が本発明の組成物の１種以上の成分と不適合の可能性がある場合を除いて、従来の賦形剤及び副成分を本発明のいずれかの医薬組成物に使用することができる。賦形剤または副成分は、それを組成物の成分と組み合わせることによって、望ましくない生物学的影響または他の形態の有害な影響が生じる可能性がある場合、組成物の当該成分と適合性がない場合がある。

いくつかの実施形態において、１種以上の賦形剤または副成分は、本発明の組成物を含む医薬組成物の総質量または総体積の５０％超を構成していてもよい。例えば、上記１種以上の賦形剤または副成分は、医薬組成物の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上を構成していてもよい。いくつかの実施形態において、薬学的に許容される賦形剤の純度は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％である。いくつかの実施形態において、賦形剤は、ヒトにおける使用及び獣医学的使用が認可されている。いくつかの実施形態において、賦形剤は、米国食品医薬品局によって認可されている。いくつかの実施形態において、賦形剤は医薬品グレードである。いくつかの実施形態において、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／または国際薬局方の基準を満たす。

本開示に係る医薬組成物中の上記１種以上の組成物、上記１種以上の薬学的に許容される賦形剤、及び／または任意のさらなる成分の相対的な量は、治療を受ける対象の個々のアイデンティティー、背格好、及び／または状態に応じて、さらには当該組成物が投与される経路に応じて変化することとなる。例として、医薬組成物は、０．１％〜１００％（ｗｔ／ｗｔ）の１種以上の組成物を含んでいてもよい。

組成物及び／または１種以上の組成物を含む医薬組成物は、腎系などの１種以上の特定の細胞、組織、器官、またはそれらの系もしくは群にｍＲＮＡを送達することによって提供される治療効果から利益を受けることができる患者または対象を含む、任意の患者または対象に投与することができる。本明細書でなされる組成物及び組成物を含む医薬組成物の説明は、主としてヒトへの投与に適した組成物を対象とするが、当業者であれば、かかる組成物が概括的には任意の他の哺乳動物への投与に適していることを理解しよう。ヒトへの投与に適した組成物を、当該組成物を様々な動物への投与に適したものにするために改変することは十分に理解されており、通常の熟練した獣医薬理学者であれば、もしあれば、単に通常の実験によってかかる改変を設計及び／または実行することができる。組成物の投与が企図される対象としては、ヒト、他の霊長動物、ならびにウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／またはラットなどの商業的に関連する哺乳動物が挙げられるが、これらに限定はされない。

１種以上の組成物を含む医薬組成物は、薬理学の分野において公知の、または今後開発される任意の方法によって調製することができる。かかる調製方法は、概括的には、有効成分を賦形剤及び／または１種以上の他の副成分と組み合わせること、次いで、それが望ましいまたは必要な場合には、製品を所望の単回投与単位または複数回投与単位に分割、賦形、及び／または包装することを含む。

本開示に係る医薬組成物は、バルクで、単回単位用量として、及び／もしくは複数の単回単位用量として、調製、包装、ならびに／または販売されてもよい。本明細書では、「単位用量」とは、所定量の有効成分（例えば組成物）を含む医薬組成物の量である。上記有効成分の量は、一般には、対象に投与される有効成分の投与量、及び／またはかかる投与量の利便性のよい一部分、例えば、かかる投与量の２分の１または３分の１に等しい。

本発明の医薬組成物は、様々な投与経路及び投与方法に適した様々な形態で調製することができる。例えば、本発明の医薬組成物は、液体剤形（例えば、乳液剤、マイクロエマルション剤、ナノエマルション剤、溶液剤、懸濁液剤、シロップ剤、及びエリキシル剤）、注射剤形態、固体剤形（例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び顆粒剤）、局所投与及び／または経皮投与用剤形（例えば、軟膏、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、粉末剤、溶液剤、スプレー剤、吸入剤、及びパッチ剤）、懸濁液剤、粉末剤、及び他の形態で製剤化することができる。

経口投与及び非経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容される乳液剤、マイクロエマルション剤、ナノエマルション剤、溶液剤、懸濁液剤、シロップ剤、及び／またはエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定はされない。液体剤形は、有効成分に加えて、例えば、水または、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボナート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの混合物などの他の溶媒、可溶化剤、ならびに乳化剤などの当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含んでいてもよい。経口用組成物は、不活性希釈剤に加えて、湿潤剤、乳化剤、及び懸濁剤などのアジュバント、甘味料、香味料、及び／または芳香剤を含んでいてもよい。非経口投与用の特定の実施形態において、組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／またはそれらの組み合わせなどの可溶化剤と混合される。

注射用製剤、例えば、無菌の注射用の水性または油性懸濁液剤は、適宜の分散剤、湿潤剤、及び／または懸濁剤を使用し、公知の技術に従って製剤化することができる。無菌注射用製剤は、例えば、１，３−ブタンジオール溶液としての、非毒性の非経口投与に許容される希釈剤及び／または溶媒中の無菌の注射用溶液剤、懸濁液剤、及び／または乳液剤であってよい。使用できる許容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水、リンガー溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。無菌の不揮発性油が従来より溶媒または懸濁媒体として使用されている。この目的のためには、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の刺激のない不揮発性油を用いることができる。オレイン酸などの脂肪酸を注射剤の製剤化に使用することができる。

注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通してろ過することによって、及び／あるいは使用前に滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体に溶解または分散することができる殺菌固体組成物の形態で殺菌剤を導入することによって、滅菌することができる。

有効成分の効果を長く維持するために、多くの場合、皮下注射または筋肉内注射による有効成分の吸収を遅延させることが望ましい。水溶性の低い結晶性または非晶性物質の懸濁液を使用することによって、これを実現することができる。その場合、薬物の吸収速度はその溶解速度に依存し、次いで溶解速度は結晶径及び結晶形態に依存する場合がある。あるいは、非経口投与された剤形の遅延吸収は、当該薬物を油性ビヒクルに溶解または懸濁させることによって実現される。注射用デポ剤は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中の薬物のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって作成される。ポリマーに対する薬物の比率及び使用する特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーとしてはポリオルトエステル及びポリ無水物が挙げられる。デポ注射用製剤は、体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルション中に薬物を封入することによって製剤化される。

直腸投与または膣投与用の組成物は、一般的には、組成物を、周囲温度では固体であるが体温では液体であり、したがって直腸腔もしくは膣腔中で融解し、有効成分を放出するカカオ脂、ポリエチレングリコール、または坐剤用ワックスなどの適宜の非刺激性賦形剤と混合することによって製剤化することができる坐剤である。

経口投与用の固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、フィルム剤、散剤、及び顆粒剤が挙げられる。かかる固体剤形においては、有効成分は、少なくとも１種の、不活性であり薬学的に許容される、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの賦形剤、及び／または充填剤もしくは増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、及びアラビアガム）、吸湿剤（例えばグリセロール）、崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（例えばパラフィン）、吸収促進剤（例えば第四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール）、吸収剤（例えば、カオリン及びベントナイトクレー、ケイ酸塩）、及び滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、ならびにそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合、これらの剤形は緩衝剤を含んでいてもよい。

類似の種類の固体組成物を、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、軟質及び硬質の充填ゼラチンカプセル剤の充填剤として使用することができる。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、及び顆粒剤の固体剤形は、腸溶性コーティング及び医薬製剤分野で周知の他のコーティングなどのコーティングならびにシェルを用いて製剤化されてもよい。上記固体剤形は、任意選択で乳濁剤を含んでいてもよく、腸管の特定の部分のみにおいて、または腸管の特定の部分において優先的に有効成分を（任意選択で遅延形態で）放出する組成物であってもよい。用いることができる包埋用組成物としては高分子物質及びワックスが挙げられるが、これらに限定はされない。類似の種類の固体組成物を、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用して、軟質及び硬質の充填ゼラチンカプセル剤の充填剤として使用することができる。

組成物の局所及び／または経皮投与のための剤形としては、軟膏、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、粉末剤、溶液剤、スプレー剤、吸入剤、及び／またはパッチ剤を挙げることができる。概括的には、有効成分を無菌条件下で薬学的に許容される賦形剤及び／または任意の必要な防腐剤及び／または必要に応じて緩衝剤と混合する。さらに、本開示は、経皮パッチ剤の使用を企図しており、多くの場合、経皮パッチ剤は身体への化合物の制御された送達を提供するというさらなる利点を有する。かかる剤形は、例えば、本化合物を適宜の媒体中に溶解及び／または分配することによって製剤化することができる。あるいはまたはそれに加えて、速度制御膜を設けることによって、及び／または本化合物をポリマーマトリクス及び／またはゲル中に分散させることによって、速度を制御してもよい。

本明細書に記載の皮内医薬組成物を送達する際に使用するのに適した装置としては、米国特許４，８８６，４９９、５，１９０，５２１、５，３２８，４８３、５，５２７，２８８、４，２７０，５３７、５，０１５，２３５、５，１４１，４９６、及び５，４１７，６６２に記載されるものなどの、短針装置が挙げられる。皮内組成物は、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／３４８５０及びその機能的等価物に記載されるものなど、皮膚中への針の有効貫通長さを制限する装置によって投与することができる。液体ジェットインジェクターを介して、及び／または角質層を貫通し、真皮に到達するジェットを生み出す針を介して、液体組成物を真皮に送達するジェット注射装置が好適である。ジェット注射装置は、例えば、米国特許５，４８０，３８１、５，５９９，３０２、５，３３４，１４４、５，９９３，４１２、５，６４９，９１２、５，５６９，１８９、５，７０４，９１１、５，３８３，８５１、５，８９３，３９７、５，４６６，２２０、５，３３９，１６３、５，３１２，３３５、５，５０３，６２７、５，０６４，４１３、５，５２０，６３９、４，５９６，５５６、４，７９０，８２４、４，９４１，８８０、４，９４０，４６０、及びＰＣＴ公開ＷＯ９７／３７７０５及びＷＯ９７／１３５３７に記載される。圧縮ガスを使用して粉末形態のワクチンを皮膚の外層から真皮まで加速する弾道粉末／粒子送達装置が好適である。あるいはまたはそれに加えて、従来の注射器を皮内投与の古典的なマントー法で使用することができる。

局所投与に好適な製剤としては、塗布剤、ローション剤、クリーム剤、軟膏、及び／もしくはペースト剤などの油中水型及び／もしくは水中油型乳液剤、及び／または溶液剤及び／または懸濁液剤などの液体ならびに／あるいは半液体製剤が挙げられるが、これらに限定はされない。局所投与製剤は、例えば、約１％〜約１０％（ｗｔ／ｗｔ）の有効成分を含んでいてもよい。但し、有効成分の濃度は、当該溶媒中の当該有効成分の溶解度の限度と同程度に高くてもよい。局所投与用製剤は、本明細書に記載の１種以上の更なる成分をさらに含んでいてもよい。

医薬組成物は、口腔を介した肺投与に適した製剤で、製剤化、包装、及び／または販売されてもよい。かかる製剤は、有効成分を含み、径が約０．５ｎｍ〜約７ｎｍまたは約１ｎｍ〜約６ｎｍの範囲である乾燥粒子を含んでいてもよい。かかる組成物は、利便性の点では、噴射剤の流れが送り込まれ、粉末を分散させる乾燥粉末リザーバを備える装置を使用する、ならびに／または密閉容器中の低沸点噴射剤に溶解及び／もしくは懸濁させた有効成分を備える装置などの、自己噴射性溶媒／粉末分配容器を使用する投与のための乾燥粉末の形態である。かかる粉末は、粒子であって、該粒子の重量で少なくとも９８％の径が０．５ｎｍより大きく、該粒子の数で少なくとも９５％の径が７ｎｍ未満である上記粒子を含む。あるいは、上記粒子の重量で少なくとも９５％の径が１ｎｍよりも大きく、上記粒子の数で少なくとも９０％の径が６ｎｍ未満である。乾燥粉末組成物は、糖などの固体微粉末希釈剤を含んでいてもよく、単位剤形で利便性よく提供される。

低沸点噴射剤としては、一般に、大気圧での沸点が６５°Ｆ未満である液体噴射剤が挙げられる。一般に、上記噴射剤は本組成物の５０％〜９９．９％（ｗｔ／ｗｔ）を構成していてもよく、有効成分は本組成物の０．１％〜２０％（ｗｔ／ｗｔ）を構成していてもよい。噴射剤は、液体の非イオン性界面活性剤及び／もしくは固体のアニオン性界面活性剤ならびに／または（粒度が、有効成分を含む粒子と同一オーダーであってよい）固体希釈剤などの、さらなる成分をさらに含んでいてもよい。

肺送達用に製剤化される医薬組成物は、溶液及び／または懸濁液の液滴の形態で有効成分を提供してもよい。かかる製剤は、有効成分を含む、任意選択で滅菌された、水性及び／もしくは希薄なアルコール溶液及び／または懸濁液として、製剤化、包装、ならびに／あるいは販売することができ、任意の噴霧（ｎｅｂｕｌｉｚａｔｉｏｎ）及び／または噴霧（ａｔｏｍｉｚａｔｉｏｎ）装置を使用して利便性よく投与することができる。かかる製剤は、サッカリンナトリウムなどの香味料、揮発性油、緩衝剤、界面活性剤、及び／またはヒドロキシ安息香酸メチルなどの防腐剤を含む、但しこれらに限定されない１種以上のさらなる成分をさらに含んでいてもよい。この投与経路によって提供される液滴の平均径は、約１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲であってよい。

肺送達に有用であるとして本明細書に記載される製剤は、医薬組成物の鼻腔内送達にも有用である。鼻腔内投与に好適な別の製剤は、有効成分を含み、平均粒子径が約０．２μｍ〜５００μｍである粗粉である。かかる製剤は、嗅ぎタバコを吸うやり方で、すなわち、鼻の近くに保持した粉末の容器から鼻腔を通して素早く吸入することによって投与される。

経鼻投与に好適な製剤は、例えば、わずか約０．１％（ｗｔ／ｗｔ）から１００％（ｗｔ／ｗｔ）という高濃度までの有効成分を含んでいてもよく、本明細書に記載の１種以上のさらなる成分を含んでいてもよい。医薬組成物は、頬側投与に適した製剤で製剤化、包装、及び／または販売されてもよい。かかる製剤は、例えば、従来の方法を用いて製造された錠剤及び／またはロゼンジ剤の形態であってもよく、例えば、０．１％〜２０％（ｗｔ／ｗｔ）の有効成分を含んでいてもよく、その残りの部分は、溶解性及び／または分解性組成物、ならびに任意選択で、本明細書に記載の１種以上のさらなる成分を含んでいてよい。あるいは、頬側投与に適した製剤は、有効成分を含む粉末ならびに／あるいはエアロゾル化及び／もしくは噴霧化された溶液及び／または懸濁液を含んでいてもよい。かかる粉末化、エアロゾル化、及び／もしくは噴霧化された製剤の平均粒子径ならびに／または平均液滴径は、分散させた場合、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲であってよく、また上記製剤は、１種以上の任意の本明細書に記載のさらなる成分をさらに含んでいてもよい。

医薬組成物は、眼科投与に好適な製剤で製剤化、包装、及び／または販売されてもよい。かかる製剤は、例えば、０．１／１．０％（ｗｔ／ｗｔ）の有効成分の、水性もしくは油性の液体賦形剤中の溶液及び／または懸濁液を含む点眼薬の形態であってよい。かかる点眼薬は、緩衝剤、塩、及び／または１種以上の本明細書に記載の任意のさらなる成分をさらに含んでいてもよい。有用な他の眼科投与用製剤としては、微結晶形態及び／またはリポソーム調製物中に有効成分を含む眼科投与用製剤が挙げられる。点耳薬及び／または点眼薬は、本開示の範囲内であることが企図される。

実施例１ ステロールのエステル化 − 方法Ａ

ステロールｉ−１（２００ｍｇ、０．４８２ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（ＤＣＭ、２ｍＬ）溶液にカルボン酸Ｒ^ＡＣＯＯＨ（１．１当量）を添加した。これに４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ、１１．８ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ、０．２当量）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ、１２０．８ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ、１．５当量））を添加した。この反応混合物を４０℃で撹拌し、ＴＬＣ及び／またはＬＣ／ＭＳで監視した。出発物質の転化が完結した後に、この反応混合物を室温に冷却し、必要に応じてＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ_３水溶液及びＮａＣｌ水溶液でクエンチした。有機層を無水硫酸ナトリウム上で脱水し、濃縮して、所望の生成物を得た。

化合物１〜３、５〜９、１１〜１６、及び１８〜１９を、上記の方法Ａで説明したプロトコル及び表２に示す適宜のカルボン酸（Ｒ^ＡＣＯＯＨ）を使用して合成した。

実施例２ ステロールのエステル化 − 方法Ｂ

ステロールｉ−１（２００ｍｇ、０．４８２ｍｍｏｌ、１当量）のトルエン（２ｍＬ）溶液に無水物Ｒ^Ｂ（１．６６当量）を添加した。これにトリエチルアミン（ＴＥＡ、１６．９μＬ、０．１２１ｍｍｏｌ、０．２５当量）を加えた。この反応混合物を６０℃で撹拌し、ＬＣ／ＭＳで監視した。出発物質の転化が完結した後に、この反応混合物を室温に冷却し、必要に応じてＤＣＭで希釈し、３ｍＬの水でクエンチし、ＤＣＭ（３×）で抽出した。有機層を１０ｍＬの２Ｎ ＨＣｌ（３×）、次いで１０ｍＬの水（３×）で洗浄した。次に、有機層を１０ｍＬの飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で脱水し、濃縮して、所望の生成物を得た。

化合物３１〜３３を、上記の方法Ｂで説明したプロトコルと、表３に示す適宜の無水物（Ｒ^Ｂ）を使用して合成した。

実施例３ ステロールエステルの加水分解

ステロールエステルｉ−２（１０．６ｇ、１８．８３ｍｍｏｌ、１当量）の２−プロパノール（１００ｍＬ）溶液に、水酸化カリウム（２．２ｇ、３９．５５ｍｍｏｌ、２．１当量）及び水（１００ｍＬ）を添加した。この反応混合物を８０℃に加熱し、ＬＣ／ＭＳで監視した。出発物質の転化が完結した後に、この反応混合物を室温に冷却し、必要に応じて３００ｍＬのＤＣＭで希釈し、２００ｍＬの５％食塩水でクエンチした。有機層を３００ｍＬの５％炭酸水素ナトリウム溶液（３×）で洗浄し、濃縮して、所望の生成物を得た。

その他の実施形態
本発明をその特定の実施形態との関連で説明してきたが、本発明はさらなる修正が可能であり、本出願は、概して本発明の原理に従い、本発明が関係する技術分野内における公知のもしくは慣用的な実施に該当するような、及び本明細書で上述の本質的な特徴に適用される可能性があるような本発明からの逸脱を含む、本発明の任意の変更、使用、または適合化を包含することを意図する。他の実施形態は特許請求の範囲内にある。

Claims (115)

1. 式Ｉ：
   

   

   
   （式中、
   点線は任意選択の二重結合を表し、
   Ｒ^１は、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、４−メチルフェニル、４−カルボン酸フェニル、３−カルボン酸プロピル、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルであり、
   Ｒ^２は水素もしくはメチルである）、
   または薬学的に許容されるその塩
   の構造を有する化合物。
2. 構造：
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
3. 構造：
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
4. 構造：
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
5. 構造：
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
6. 構造：
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
7. 構造：
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
8. 構造：
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
9. 構造：
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
10. 構造：
    

    

    
    を有する、請求項１に記載の化合物。
11. 構造：
    

    

    
    を有する、請求項１に記載の化合物。
12. Ｒ^２が水素である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
13. Ｒ^２がメチルである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
14. Ｒ^１が、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、４−メチルフェニル、
    

    

    
    である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
15. 請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物及び賦形剤を含む組成物。
16. （ａ）β−シトステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
    （ｂ）β−シトステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で前記試料を反応させることと、
    （ｃ）前記β−シトステロールエステルを前記試料中の前記１種以上の他のステロールから分離して、β−シトステロールエステルの試料を生成させることと、
    （ｄ）前記β−シトステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で前記β−シトステロールエステルの試料を反応させることと
    を含み、
    それによって精製β−シトステロールを生成させる、精製β−シトステロールの製造方法。
17. （ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
18. 前記β−シトステロールエステルが、式ＩＩ：
    

    

    
    （式中、Ｒ^３は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
    または薬学的に許容されるその塩
    の構造を有する、請求項１６または１７に記載の方法。
19. Ｒ^３が、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、
    

    

    
    である、請求項１８に記載の方法。
20. （ａ）カンペステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
    （ｂ）カンペステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で前記試料を反応させることと、
    （ｃ）前記カンペステロールエステルを前記試料中の前記１種以上の他のステロールから実質的に分離して、カンペステロールエステルの試料を生成させることと、
    （ｄ）前記カンペステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で前記カンペステロールエステルの試料を反応させることと
    を含み、
    それによって精製カンペステロールを生成させる、精製カンペステロールの製造方法。
21. （ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む、請求項２０に記載の方法。
22. 前記カンペステロールエステルが、式ＩＩＩ：
    

    

    
    （式中、Ｒ^４は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
    または薬学的に許容されるその塩
    の構造を有する、請求項２０または２１に記載の方法。
23. Ｒ^４が、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、
    

    

    
    である、請求項２２に記載の方法。
24. （ａ）シトスタノール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
    （ｂ）シトスタノールエステルを生成させるのに十分な条件下で前記試料を反応させることと、
    （ｃ）前記シトスタノールエステルを前記試料中の前記１種以上の他のステロールから分離して、シトスタノールエステルの試料を生成させることと、
    （ｄ）前記シトスタノールエステルを加水分解するのに十分な条件下で前記シトスタノールエステルの試料を反応させることと
    を含み、
    それによって精製シトスタノールを生成させる、精製シトスタノールの製造方法。
25. （ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
26. 前記シトスタノールエステルが、式ＩＶ：
    

    

    
    （式中、Ｒ^５は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
    または薬学的に許容されるその塩
    の構造を有する、請求項２４または２５に記載の方法。
27. Ｒ^５が、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、
    

    

    
    である、請求項２６に記載の方法。
28. （ａ）スティグマステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
    （ｂ）スティグマステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で前記試料を反応させることと、
    （ｃ）前記スティグマステロールエステルを前記試料中の前記１種以上の他のステロールから分離して、スティグマステロールエステルの試料を生成させることと、
    （ｄ）前記スティグマステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で前記スティグマステロールエステルの試料を反応させることと
    を含み、
    それによって精製スティグマステロールを生成させる、精製スティグマステロールの製造方法。
29. （ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
30. 前記スティグマステロールエステルが、式Ｖ：
    

    

    
    （式中、Ｒ^６は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
    または薬学的に許容されるその塩
    の構造を有する、請求項２８または２９に記載の方法。
31. Ｒ^６が、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、
    

    

    
    である、請求項３０に記載の方法。
32. （ａ）カンペスタノール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
    （ｂ）カンペスタノールエステルを生成させるのに十分な条件下で前記試料を反応させることと、
    （ｃ）前記カンペスタノールエステルを前記試料中の前記１種以上の他のステロールから分離して、カンペスタノールエステルの試料を生成させることと、
    （ｄ）前記カンペスタノールエステルを加水分解するのに十分な条件下で前記カンペスタノールエステルの試料を反応させることと
    を含み、
    それによって精製カンペスタノールを生成させる、精製カンペスタノールの製造方法。
33. （ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む、請求項３２に記載の方法。
34. 前記カンペスタノールエステルが、式ＶＩ：
    

    

    
    （式中、Ｒ^７は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
    または薬学的に許容されるその塩
    の構造を有する、請求項３２または３３に記載の方法。
35. Ｒ^７が、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、
    

    

    
    である、請求項３４に記載の方法。
36. （ａ）ブラシカステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
    （ｂ）ブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で前記試料を反応させることと、
    （ｃ）前記ブラシカステロールエステルを前記試料中の前記１種以上の他のステロールから分離して、ブラシカステロールエステルの試料を生成させることと、
    （ｄ）前記ブラシカステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で前記ブラシカステロールエステルの試料を反応させることと
    を含み、
    それによって精製ブラシカステロールを生成させる、精製ブラシカステロールの製造方法。
37. （ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
38. 前記ブラシカステロールエステルが、式ＶＩＩ：
    

    

    
    （式中、Ｒ^８は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
    または薬学的に許容されるその塩
    の構造を有する、請求項３６または３７に記載の方法。
39. Ｒ^８が、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、
    

    

    
    である、請求項３８に記載の方法。
40. （ａ）フコステロール及び１種以上の他のステロールを含む試料を得ることと、
    （ｂ）フコステロールエステルを生成させるのに十分な条件下で前記試料を反応させることと、
    （ｃ）前記フコステロールエステルを前記試料中の前記１種以上の他のステロールから分離して、フコステロールエステルの試料を生成させることと、
    （ｄ）前記フコステロールエステルを加水分解するのに十分な条件下で前記フコステロールエステルの試料を反応させることと
    を含み、
    それによって精製フコステロールを生成させる、精製フコステロールの製造方法。
41. （ｅ）ステップ（ｄ）で生成した生成物を再結晶することをさらに含む、請求項４０に記載の方法。
42. 前記フコステロールエステルが、式ＶＩＩＩ：
    

    

    
    （式中、Ｒ^９は、任意選択で置換されたＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロアリール、任意選択で置換されたＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_６〜Ｃ_１０アリール、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルＣ_２〜Ｃ_９ヘテロシクリル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ_３〜Ｃ_８シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルキル、もしくは任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_２１アルケニルである）、
    または薬学的に許容されるその塩
    の構造を有する、請求項４０または４１に記載の方法。
43. Ｒ^９が、−（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３、−ＣＦ_３、−ＣＣｌ_３、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、フェニル、４−メチルフェニル、
    

    

    
    である、請求項４２に記載の方法。
44. β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な前記条件が、（ｉ）酸無水物及び塩基、（ｉｉ）カルボン酸及びカルボキシル活性化剤、または（ｉｉｉ）塩化アシルを含む、請求項１６〜４３のいずれか１項に記載の方法。
45. β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な前記条件が、酸無水物及び塩基を含む、請求項４４に記載の方法。
46. 前記塩基が有機アミン塩基である、請求項４５に記載の方法。
47. 前記有機アミン塩基がトリエチルアミンである、請求項４６に記載の方法。
48. β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な前記条件が、カルボン酸及びカルボキシル活性化剤を含む、請求項４４に記載の方法。
49. 前記カルボキシル活性化剤が１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドである、請求項４８に記載の方法。
50. β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを生成させるのに十分な前記条件が塩化アシルを含む、請求項４４に記載の方法。
51. β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、またはシトスタノールエステルを生成させるのに十分な前記条件が４−（ジメチルアミノ）ピリジンをさらに含む、請求項４４〜５０のいずれか１項に記載の方法。
52. 前記分離することが順相精製を含む、請求項１６〜５１のいずれか１項に記載の方法。
53. 前記分離することが逆相精製を含む、請求項１６〜５１のいずれか１項に記載の方法。
54. 前記β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルを加水分解するのに十分な前記条件が、水、アルコール、及び塩基を含む、請求項１６〜５３のいずれか１項に記載の方法。
55. β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルの精製試料の純度が少なくとも９０％である、請求項１６〜５４のいずれか１項に記載の方法。
56. β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルの前記精製試料の純度が少なくとも９５％である、請求項５５に記載の方法。
57. β−シトステロールエステル、カンペステロールエステル、シトスタノールエステル、スティグマステロールエステル、カンペスタノールエステル、フコステロールエステル、またはブラシカステロールエステルの前記精製試料の純度が少なくとも９９％である、請求項５６に記載の方法。
58. （ｉ）請求項１６〜５７のいずれか１項に記載の方法によって、精製β−シトステロール、カンペステロール、シトスタノール、スティグマステロール、カンペスタノール、フコステロール、及び／またはブラシカステロールを調製することと、
    （ｉｉ）脂質ナノ粒子を形成するのに十分な条件下で、前記精製β−シトステロール、カンペステロール、シトスタノール、スティグマステロール、カンペスタノール、フコステロール、及び／またはブラシカステロールとイオン性脂質とを接触させることと
    を含み、
    それによって脂質ナノ粒子を生成させる、脂質ナノ粒子の製造方法。
59. 前記β−シトステロール、カンペステロール、シトスタノール、スティグマステロール、カンペスタノール、フコステロール、及び／またはブラシカステロールならびに前記イオン性脂質を、非イオン性ヘルパー脂質及び／またはＰＥＧ脂質と接触させることをさらに含む、請求項５８に記載の方法。
60. 前記脂質ナノ粒子を、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡと、前記脂質ナノ粒子が前記ｍＲＮＡをカプセル化するのに十分な条件下で接触させることをさらに含む、請求項５８または５９に記載の方法。
61. ２種以上のステロールを含む組成物であって、前記２種以上のステロールがβ−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールが前記組成物中の前記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールが前記組成物中の前記ステロールの０．１〜５％を構成する、前記組成物。
62. シトスタノールをさらに含む、請求項６１に記載の組成物。
63. 請求項６２に記載の組成物であって、β−シトステロールが前記組成物中の前記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールが０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールが０．０５〜４．９５％を構成する、前記組成物。
64. ２種以上のステロールを含む組成物であって、前記２種以上のステロールがβ−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールが前記組成物中の前記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、シトスタノールが前記組成物中の前記ステロールの０．１〜５％を構成する、前記組成物。
65. カンペステロールをさらに含む、請求項６４に記載の組成物。
66. 請求項６５に記載の組成物であって、β−シトステロールが前記組成物中の前記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールが０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールが０．０５〜４．９５％を構成する、前記組成物。
67. 複数種の脂質ナノ粒子を含む組成物であって、前記複数種の脂質ナノ粒子がイオン性脂質及び２種以上のステロールを含み、前記２種以上のステロールがβ−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールが前記組成物中の前記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールが前記組成物中の前記ステロールの０．１〜５％を構成する、前記組成物。
68. 前記２種以上のステロールがシトスタノールをさらに含む、請求項６７に記載の組成物。
69. 請求項６８に記載の組成物であって、β−シトステロールが前記組成物中の前記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールが０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールが０．０５〜４．９５％を構成する、前記組成物。
70. 複数種の脂質ナノ粒子を含む組成物であって、前記複数種の脂質ナノ粒子がイオン性脂質及び２種以上のステロールを含み、前記２種以上のステロールがβ−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールが前記組成物中の前記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、シトスタノールが前記組成物中の前記ステロールの０．１〜５％を構成する、前記組成物。
71. 前記２種以上のステロールがカンペステロールをさらに含む、請求項７０に記載の組成物。
72. 請求項７１に記載の組成物であって、β−シトステロールが前記組成物中の前記ステロールの９５〜９９．９％を構成し、カンペステロールが０．０５〜４．９５％を構成し、シトスタノールが０．０５〜４．９５％を構成する、前記組成物。
73. 前記複数種の脂質ナノ粒子が非イオン性ヘルパー脂質及び／またはＰＥＧ脂質をさらに含む、請求項７０〜７２のいずれか１項に記載の組成物。
74. （ｉ）イオン性脂質と、
    （ｉｉ）構造成分と
    を含み、前記構造成分が、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物を含む脂質ナノ粒子。
75. 核酸分子をさらに含む、請求項７４に記載の脂質ナノ粒子。
76. （ｉ）イオン性脂質と、
    （ｉｉ）構造成分と、
    （ｉｉｉ）任意選択で、非カチオン性ヘルパー脂質と、
    （ｉｖ）任意選択で、ＰＥＧ脂質と、
    （ｖ）核酸分子と
    を含み、前記構造成分が、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物、及び任意選択で構造脂質を含む脂質ナノ粒子。
77. 請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物を、前記化合物を含まない脂質ナノ粒子と比較して、前記核酸分子の細胞への送達を高める量で含む、請求項７４〜７６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
78. 前記構造成分が１種以上の構造脂質またはそれらの塩をさらに含む、請求項７４〜７７のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
79. 前記１種以上の構造脂質がステロールである、請求項７４〜７８のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
80. 前記１種以上の構造脂質がフィトステロールである、請求項７４〜７９のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
81. 前記フィトステロールが、β−シトステロール、カンペステロール、シトスタノール、スティグマステロール、カンペスタノール、フコステロール、もしくはブラシカステロール、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項８０に記載の脂質ナノ粒子。
82. 前記１種以上の構造脂質がズーステロールである、請求項７４〜８１のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
83. 前記ズーステロールがコレステロールである、請求項８２に記載の脂質ナノ粒子。
84. 請求項７８〜８３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子であって、前記１種以上の構造脂質のｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子中に存在する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物のｍｏｌ％の約１％〜５０％である、前記脂質ナノ粒子。
85. 請求項７８〜８４のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子であって、前記１種以上の構造脂質のｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子中に存在する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物のｍｏｌ％の約１０％〜４０％である、前記脂質ナノ粒子。
86. 請求項７８〜８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子であって、前記１種以上の構造脂質のｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子中に存在する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物のｍｏｌ％の約２０％〜３０％である、前記脂質ナノ粒子。
87. 請求項７８〜８６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子であって、前記１種以上の構造脂質のｍｏｌ％が、前記脂質ナノ粒子中に存在する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物のｍｏｌ％の約３０％である、前記脂質ナノ粒子。
88. １種以上の非カチオン性ヘルパー脂質を含む、請求項７４〜８７のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
89. 前記１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質が、リン脂質、脂肪酸、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項８８に記載の脂質ナノ粒子。
90. 前記リン脂質が、ホスホコリン部分、ホスホエタノールアミン部分、またはリン（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）−１−グリセロール部分を含むリン脂質である、請求項８９に記載の脂質ナノ粒子。
91. 前記リン脂質が、
    １，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
    １，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
    １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
    １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
    １，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
    １，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
    １−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
    １，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ Ｄｉｅｔｈｅｒ ＰＣ）、
    １−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
    １−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
    １，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
    １，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、または
    １，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン
    である、請求項８９または９０に記載の脂質ナノ粒子。
92. 前記リン脂質がＤＳＰＣである、請求項９１に記載の脂質ナノ粒子。
93. 前記リン脂質が、
    １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
    １，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、
    １，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
    １，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
    １，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
    １，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
    １，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、または
    １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）
    である、請求項９１または９２に記載の脂質ナノ粒子。
94. 前記リン脂質がスフィンゴミエリンである、請求項９０に記載の脂質ナノ粒子。
95. 前記脂肪酸が長鎖脂肪酸である、請求項８９に記載の脂質ナノ粒子。
96. 前記脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項９５に記載の脂質ナノ粒子。
97. 前記脂肪酸がオレイン酸である、請求項９６に記載の脂質ナノ粒子。
98. 前記脂肪酸がステアリン酸である、請求項９６に記載の脂質ナノ粒子。
99. １種以上のＰＥＧ脂質を含む、請求項７４〜９８のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
100. 前記１種以上のＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、またはそれらの混合物である、請求項９９に記載の脂質ナノ粒子。
101. 前記１種以上のＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質である、請求項９９または１００に記載の脂質ナノ粒子。
102. 前記１種以上のＰＥＧ脂質がＰＥＧ−ＤＭＧである、請求項１０１に記載の脂質ナノ粒子。
103. 約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％の１種以上のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％の構造成分、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％の１種以上のＰＥＧ脂質を含む、請求項７４〜１０２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
104. 約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％の１種以上のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％の構造成分、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％の１種以上のＰＥＧ脂質を含む、請求項７４〜１０３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
105. 約５０ｍｏｌ％の１種以上のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の１種以上の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％の構造成分、及び１．５ｍｏｌ％の１種以上のＰＥＧ脂質を含む、請求項７４〜１０４のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
106. 前記核酸分子がＲＮＡまたはＤＮＡである、請求項７５〜１０５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
107. 核酸がＤＮＡである、請求項７５〜１０６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
108. 前記核酸分子がｓｓＤＮＡである、請求項１０７記載の脂質ナノ粒子。
109. 前記核酸がＣＲＩＳＰＲを含むＤＮＡである、請求項１０７に記載の脂質ナノ粒子。
110. 核酸がＲＮＡである、請求項７５〜１０６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
111. 前記核酸分子が、ショートマー、アンタゴミール、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、請求項１１０に記載の脂質ナノ粒子。
112. 前記核酸分子がｍＲＮＡである、請求項１１０または１１１に記載の脂質ナノ粒子。
113. 前記ｍＲＮＡが、１種以上の修飾核酸塩基を含む修飾ｍＲＮＡである、請求項１１２に記載の脂質ナノ粒子。
114. 前記ｍＲＮＡが、ステムループ、連鎖停止ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び５’キャップ構造のうちの１種以上を含む、請求項１１２または１１３に記載の脂質ナノ粒子。
115. 請求項１〜１４のいずれか１項に記載のさらなる化合物をさらに含む、請求項７４〜１１４のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。