JP2022088411A - Ｐｄ－１アゴニスト抗体およびその使用 - Google Patents

Abstract

【課題】抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体、およびリウマチ性関節炎などの自己免疫障害を治療するため、または移植された細胞および／もしくは組織の拒絶を減少させるための、その使用方法を提供する。【解決手段】重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、ヒトＰＤ－１に結合する抗体であって、前記ＨＣＶＲがそれぞれ特定のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲががそれぞれ特定のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、前記抗体がＩｇＧ１である、抗体を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、医薬の分野に属する。より具体的には、本発明は、ヒトプログラム死１（Ｐ
Ｄ－１、ＣＤ２７９としても知られている）に対するアゴニスト抗体、そのような抗ヒト
ＰＤ－１アゴニスト抗体を含む組成物、および自己免疫障害または移植拒絶の治療のため
にそのような抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体を使用する方法に関する。

免疫チェックポイント経路は、自己免疫応答および抗癌免疫応答の両方を調節する（Ｉ
ｓａｋｏｖ，Ｎ．，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ２０１６；２（２
）：１７）。自己免疫疾患療法では、免疫応答が抑制されるように、免疫阻害経路の効果
を促進する、すなわち、アゴナイズすることが望ましい。逆に、癌療法では、免疫応答が
抑制解除、または刺激されるように、免疫阻害経路の効果を阻害すること、すなわち、ア
ンタゴナイズすることが望ましい。

ＰＤ－１は、Ｉ型細胞膜タンパク質である。ＰＤ－１は、細胞外ＩｇＶドメイン、続い
て膜貫通および細胞内ドメインを含有する拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリーに属す
る。ＰＤ－１経路の活性化は、細胞増殖の低減、細胞生存の低減、および炎症性サイトカ
イン（例えば、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、およびＩＬ－２）の阻害などの免疫細胞活性化の阻
害につながる。ＰＤ－１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、単球、および樹状細胞などの
最近活性化された免疫細胞に発現し、その発現は、厳しく制御される。ヒト免疫応答の調
節におけるＰＤ－１媒介性シグナル伝達の重要性は、アンタゴニストＰＤ－１抗体での癌
患者の治療の成功で実証された。ＰＤ－１アンタゴニスト抗体で治療された癌患者は、治
療の副作用として異なる自己免疫症状を有する傾向がある（Ｃａｐｐｅｌｌｉ，Ｌ．Ｃ．
，ｅｔ ａｌ．，２０１７、Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，２０１６）。加えて
、自己免疫疾患活性とＰＤ－１経路との間に他の既知の相関がある。例えば、再発中のＳ
ＬＥ患者は、低いＰＤ－Ｌ１発現（Ｍｏｚａｆｆａｒｉａｎ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，２０
０８）およびＰＤ－１に対する自己抗体（Ｓｈｉ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，２０１７）を有
する傾向がある。

したがって、ＰＤ－１媒介性シグナル伝達を増加させることは、現在の免疫調節療法に
対して重要な安全性の利点と共に、重大な疾患修飾および応答の持続性につながり得る自
己免疫障害を管理する潜在的なアプローチを構成する。これらの現在の療法は、一般的に
言って、体の免疫系を広く下方制御する（例えば、コルチコステロイドおよびシクロホス
ファミド）。しかしながら、ＰＤ－１は、主に活性化免疫細胞上で発現する。したがって
、抗ＰＤ－１抗体は、治療中に活性化される細胞を選択的に標的化し、免疫細胞レパート
リーの残りをインタクトなままにする可能性を有する。

分野は、ＰＤ－１アゴニスト抗体を送達するのに苦労している（Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．ａ
ｎｄ Ｐａｕｋｅｎ，Ｅ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２
０１７））。難しいことはは、少なくとも部分的に、インビトロまたはインビボでの生理
学的環境においてＰＤ－１アゴニズムを達成するために必要な複雑な細胞相互作用の結果
であると考えられる。したがって、治療抗体を同定するために使用されるアッセイまたは
モデルの文脈は、ＰＤ－１アゴニスト抗体活性を評価する際に明らかに重要である。

米国特許出願公開ＵＳ２０１７／００８８６１８は、抗ヒトＰＤ－１抗体を開示し、こ
れは、いくつかの実施形態では、および特定のインビトロアッセイでは、ＰＤ－１細胞外
ドメインに関する会合および解離速度でアゴニストとして挙動し、１９～２２ｎＭのＫ_Ｄ
値（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００を用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によっ
て決定される）をもたらす。

よって、１）最適なアゴニスト活性のために望ましい会合および解離速度でヒトＰＤ－
１に結合し、２）インビボ有効性を達成する免疫学的に適切な文脈においてヒトＰＤ－１
をアゴナイズし、３）自己免疫障害の治療および／もしくは予防または移植拒絶の予防の
ための単剤療法として十分な効力を示し、４）自己免疫障害の治療および／もしくは予防
、または移植拒絶の予防のための他の治療剤との併用療法の一部として望ましい活性を示
し、ならびに／あるいは５）別の抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体での自己免疫障害の治療
中に、少なくとも１つの有害事象および／または非有効性（特に、有効性の抗薬物抗体（
ＡＤＡ）媒介性低減）のために治療が中断される場合に、薬物切り替えに効果的な代替を
提供する、代替の抗ヒトＰＤ－１抗体の必要性が存在する。

したがって、本発明は、新規ヒト化抗ヒトＰＤ－１アゴニストＩｇＧ１抗体を提供する
。本発明の抗体は、これらに限定されないが、以下：１）それらが、ヒトＰＤ－１（およ
びカニクイザルＰＤ－１）に、望ましい会合および解離速度で結合すること、２）それら
が、低用量または低頻度の投与で治療上有効であり得ること、３）それらが、インビトロ
での初代ヒトＴ細胞増殖を阻害すること、４）それらが、ヒトＰＤ－１細胞表面発現を制
御すること、５）それらが、インビトロＮＦＡＴレポーター細胞アッセイにおいてＴ細胞
受容体シグナル伝達活性を阻害すること、６）それらが、低い治療タンパク質免疫原性（
すなわち、抗薬物抗体（ＡＤＡ））の可能性を有すること、７）それらが、ヒト化ＧｖＨ
Ｄモデルにおいて疾患活性を低減すること、ならびに／または８）ループス腎炎インビボ
モデルにおいて、それらが、免疫細胞活性化を、
ａ）有意および／もしくは検出可能な補体依存性細胞毒性なしに、
ｂ）ヒトＰＤ－１への結合についてヒトＰＤ－Ｌ１／２と競合することなしに、
ｃ）インビトロアッセイにおいて有意および／もしくは検出可能なサイトカイン放出を
誘導することなしに、阻害すること、を含む、様々な理由で、先行技術の抗ＰＤ－１抗体
に対して特に有利である。

さらに、本発明の例示的な抗ヒトＰＤ－１アゴニストＩｇＧ１抗体はまた、これらに限
定されないが、熱安定性、溶解性、低い自己会合、ならびに自己免疫障害および／または
移植拒絶（すなわち、移植片対宿主病）の治療における開発および／または使用に許容さ
れる薬物動態特性を含む、インビボ安定性、物理的および化学的安定性を示す。加えて、
本発明の例示的な抗ヒトＰＤ－１アゴニストＩｇＧ１抗体をコードする本明細書に開示さ
れるポリヌクレオチド配列は、ＣＨＯなどの好ましい哺乳動物細胞株発現系における抗体
の発現を有意に改善するために好ましいコドンを使用するように操作された。

本発明は、有意に操作された抗ヒトＰＤ－１アゴニストＩｇＧ１抗体を用いた免疫チェ
ックポイント刺激を通した自己免疫および／または免疫寛容関連障害の予防、下方制御、
または改善に有用な組成物および方法を提供することによって、先行技術に対する進歩を
提供する。本発明の抗ヒトＰＤ－１アゴニストＩｇＧ１抗体は、好ましくは、免疫応答の
適応性アームの阻害、抗原特異的免疫プロセスの廃止、およびそれによって、基礎疾患病
理に直接対処することを通して、免疫病理を改善または回復することができる。そのよう
な抗体の臨床的な使用は、治療される疾患（複数可）の長期持続性または寛解につながる
ことを証明し得る。

本開示は、１）配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸
配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含む重鎖可変
領域（ＨＣＶＲ）と、２）配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号９の
アミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ
３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を提供し、抗体は、
ＩｇＧアイソタイプサブクラス１（ＩｇＧ１）である。

いくつかの実施形態では、本開示は、１）配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ
と、２）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を
提供し、抗体は、ＩｇＧ１である。

いくつかの実施形態では、本開示は、１）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
２）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を提供する
。

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重鎖お
よび配列番号２のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなる、抗ヒトＰＤ－１抗体を提供
する。

本開示はまた、１）配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミ
ノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含むＨＣ
ＶＲと、２）配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列
を有するＬＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含むＬＣ
ＶＲと、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現することができる哺乳動物細胞を提供し、抗
体は、ＩｇＧ１である。

いくつかの実施形態では、本開示は、１）配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ
と、２）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を
発現することができる哺乳動物細胞を提供し、抗体は、ＩｇＧ１である。

いくつかの実施形態では、本開示は、１）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
２）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現する
ことができる哺乳動物細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、抗ヒトＰＤ
－１抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重鎖および配列番号２のアミノ酸
配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。

本開示はまた、抗ヒトＰＤ－１抗体を産生するためのプロセスであって、ａ）抗体を発
現することができる哺乳動物細胞を培養することであって、抗体が、１）配列番号５のア
ミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番
号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含むＨＣＶＲと、２）配列番号８のアミノ酸配
列を有するＬＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号
１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含むＬＣＶＲと、を含み、抗体が、ＩｇＧ１で
ある、培養することと、ｂ）抗体を回収することと、を含む、プロセスを提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗ヒトＰＤ－１抗体を産生するためのプロセスで
あって、ａ）抗体を発現することができる哺乳動物細胞を培養することであって、抗体が
、１）配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、２）配列番号４のアミノ酸配列を
有するＬＣＶＲと、を含み、抗体が、ＩｇＧ１である、培養することと、ｂ）抗体を回収
することと、を含む、プロセスを提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗ヒトＰＤ－１抗体を産生するためのプロセスで
あって、ａ）抗体を発現することができる哺乳動物細胞を培養することであって、抗体が
、１）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖と、２）配列番号２のアミノ酸配列を有す
る軽鎖と、を含む、培養することと、ｂ）抗体を回収することと、を含む、プロセスを提
供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体を産生するための
プロセスであって、ａ）抗体を発現することができる哺乳動物細胞を培養することであっ
て、抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重鎖および配列番号２のアミノ酸
配列を有する２つの軽鎖を含む、培養することと、ｂ）抗体を回収することと、を含む、
プロセスを提供する。

本開示はまた、前述のプロセスによって産生された抗ヒトＰＤ－１抗体を提供する。

本開示はまた、前述のプロセスによって産生された抗ヒトＰＤ－１抗体と、許容される
担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物を提供する。

本開示はまた、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１１および１２の配列を
有するポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。本開示はまた、配列番号１１、配
列番号１２、または配列番号１１および１２の配列を有するポリヌクレオチドを含むＤＮ
Ａ分子を含む哺乳動物細胞を提供する。

本開示は、１）ａ）配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミ
ノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含むＨＣ
ＶＲと、ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列
を有するＬＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含むＬＣ
ＶＲと、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体と、ここで抗体はＩｇＧ１である、２）許容される
担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、１）ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣ
ＶＲと、ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗
体と、ここで抗体はＩｇＧ１である、２）許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を
含む、薬学的組成物を提供する。

本開示は、１）ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖と、ｂ）配列番号２のアミ
ノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体と、２）許容される担体、希釈剤
、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態では、前述の
薬学的組成物の抗ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重鎖お
よび配列番号２のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなる。

本明細書で使用される場合、「ＰＤ－１」は、細胞外ＩｇＶドメイン、続いて膜貫通お
よび細胞内ドメインを含有する拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリーに属するＩ型細胞
膜タンパク質である、プログラム死１（ＰＤ－１、ＣＤ２７９）としても知られる、プロ
グラム細胞死１を指す。

本明細書で使用される場合、「ｈＰＤ－１」または「ヒトＰＤ－１」は、野生型ヒトＰ
Ｄ－１、好ましくは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を有する野生型ヒトＰＤ－１
（すなわち、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００５００９．２）を指す。

「ｃｙｎｏ（カニクイザル）」、「ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ（カニクイザル）」、または
「ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ（カニクイザル）」という用語は、本明細書では
互換的に使用される。ＰＤ－１ポリペプチドに関して使用される場合、用語は、野生型カ
ニクイザルＰＤ－１、好ましくは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有する野生型
カニクイザルＰＤ－１を指すことが意図される。

ＰＤ－１ポリペプチド「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、膜貫通および細胞質ド
メインを本質的に含まないＰＤ－１ポリペプチドの形態を指す。好ましくは、ＰＤ－１
ＥＣＤは、膜貫通および細胞質ドメインの１％未満を有し、より好ましくは、ＰＤ－１
ＥＣＤは、そのようなドメインの０．５％未満を有する。さらにより好ましくは、ヒトＰ
Ｄ－１ ＥＣＤポリペプチドは、配列番号１４に示されるとおりであり、カニクイザルＰ
Ｄ－１ ＥＣＤポリペプチドは、配列番号１６に示されるとおりである。ＰＤ－１ポリペ
プチドＥＣＤは、当該技術分野で知られる方法を使用して調製され得る。あるいは、ヒト
ＰＤ－１ポリペプチドＥＣＤは、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃ
ｈｉｎａ、参照＃１０３７７－Ｈ０８）およびＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐ
ｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ、ｃａｔ．＃８９８６－ＰＤ）などの様々な販売業者から商業的
に購入され得る。カニクイザルＰＤ－１ポリペプチドＥＣＤは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ
（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ、ｃａｔ．＃８５０９－ＰＤ）から商業的に購
入され得る。

本明細書で使用される場合、「抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体」は、ヒトＰＤ－１に結
合する抗体を指し、インビボで投与される場合、抗二本鎖ＤＮＡ（ｄｓ－ＤＮＡ）力価の
低減、疾患スコアの低減、または炎症性サイトカインの低減などの少なくとも１つの有意
に低下した自己免疫活性をもたらす。

本明細書で使用される場合、「抗体１」は、１）配列番号５のＨＣＤＲ１アミノ酸配列
、配列番号６のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号７のＨＣＤＲ３アミノ酸を有するＨＣ
ＶＲと、２）配列番号８のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号９のＬＣＤＲ２アミノ酸配
列、配列番号１０のＬＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号３のＨＣＶＲアミノ酸配列、配列
番号４のＬＣＶＲアミノ酸配列、配列番号１のＨＣアミノ酸配列、および配列番号２のＬ
Ｃアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、ヒトＰＤ－１結合抗体を指す。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、重鎖および軽鎖がジスルフィド結合によ
って相互接続されるように、２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）を有する、操
作された天然に存在しないポリペプチド複合体を指し、抗体は、ＩｇＧアイソタイプ抗体
である。本発明の抗体に関して本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、Ｉｇ
Ｇアイソタイプサブクラス１（すなわち、ＩｇＧ１）であり、鎖内および鎖間ジスルフィ
ド結合を介して架橋される「重」鎖および「軽」鎖を有する抗体を指す。軽鎖はそれぞれ
重鎖とジスルフィド結合を形成し、２つの重鎖は互いの間で２つのジスルフィド結合を形
成する。各重鎖は、Ｎ末端ＨＣＶＲおよび重鎖定常領域（「ＨＣＣＲ」）からなる。各軽
鎖は、Ｎ末端ＬＣＶＲおよび軽鎖定常領域（「ＬＣＣＲ」）からなる。ある特定の生物系
で発現されるとき、天然のヒトＦｃ配列を有する抗体はＦｃ領域においてグリコシル化さ
れる。典型的には、グリコシル化は、高度に保存されたＮ－グリコシル化部位の抗体のＦ
ｃ領域に生じる。Ｎ－グリカンは、典型的には、アスパラギンに結合する。抗体は、他の
位置でもグリコシル化され得る。

好ましくは、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１サブタイプであるＦｃ部分を含有する。ヒ
トＩｇＧ１がＦｃ－ガンマ受容体ファミリー（ＦｃγＲ）およびＣ１ｑに結合することは
周知である。これらの受容体との相互作用は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補
体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導し得る。

重鎖の定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含む。ＣＨ１は、ＨＣＶ
Ｒの後にあり、ＣＨ１およびＨＣＶＲは、Ｆａｂの重鎖部分を形成する。ＣＨ２は、ヒン
ジ領域の後にあり、ＣＨ３の前にある。ＣＨ３はＣＨ２の後にあり、重鎖のカルボキシ末
端にある。軽鎖の定常領域は、１つのドメインＣＬを含む。ＣＬは、ＬＣＶＲの後にあり
、ＣＬおよびＬＣＶＲは、Ｆａｂの軽鎖部分を形成する。好ましくは、本発明の抗ヒトＰ
Ｄ－１アゴニスト抗体のＣＬ領域は、ヒトカッパサブタイプ（例えば、配列番号１８）の
ものである。

本発明のＤＮＡ分子は、本発明の抗体中のポリペプチド（例えば、重鎖、軽鎖、可変重
鎖、および可変軽鎖）のうちの少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコ
ードする天然に存在しないポリヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ分子である。

本発明の抗体のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ領域は、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と呼
ばれる、より保存されている領域が点在する、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と呼ばれる
、超可変性の領域にさらに細分することができる。各ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、以下の
ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順でアミノ末端から
カルボキシ末端へと配置している３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。本明細書では
、重鎖の３つのＣＤＲを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の
３つのＣＤＲを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗
原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。ＫａｂａｔのＣＤＲ定義（Ｋ
ａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））は、抗体配列変異性
に基づく。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，“Ｃａｎｏｎ
ｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅ
ｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉ
ｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌ
ｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２
７－９４８（１９９７））は、抗体の３次元構造およびＣＤＲループのトポロジーに基づ
く。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義は、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２を除いて、Ｋａｂａｔ
のＣＤＲ定義と同一である。ＮｏｒｔｈのＣＤＲの定義（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，“
Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏ
ｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））は、多数の結晶構造を有する親和性伝搬クラ
スタ化（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）に基づい
ている。本発明の目的で、本発明の抗体のＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲドメイ
ンへのアミノ酸の割り当ては、周知のＫａｂａｔ番号付け規則（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ
．，Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２－９３（１９７１）、Ｋａｂａｔ
ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔ
ｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕ
ｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１））、およびＮｏｒｔｈ番号付け
規則（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６：２２８－２５６（２０１１））に基づいて
いる。本発明の抗体の軽鎖ＣＤＲの場合、ＮｏｒｔｈのＣＤＲ定義が使用される。重鎖で
は、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ３の両方もＮｏｒｔｈの定義を使用する。ＨＣＤＲ２は、
ＮｏｒｔｈおよびＫａｂａｔの定義のハイブリッドを使用する。Ｎｏｒｔｈの定義は、開
始Ｎ末端部位を識別するために使用されるが、Ｋａｂａｔは、最後の位置を定義するため
に使用される。

ＨＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＨＣＶＲをコードするＤＮＡを、重鎖定常領
域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に
変換され得る。ヒトおよび他の哺乳動物の重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野に
おいて既知である。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、例えば、標準的なＰ
ＣＲ増幅によって取得され得る。

ＬＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＬＣＶＲをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領
域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子に
変換され得る。ヒトおよび他の哺乳動物の軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野に
おいて既知である。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅
によって取得され得る。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。好ま
しくは、本発明の抗体について、軽鎖定常領域は、カッパ定常領域である。

本発明のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列に作動可能に連結された後に宿主細
胞において発現し得る。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または宿主染色体Ｄ
ＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般に、発現ベ
クターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にするために、
選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、およびジヒドロ葉酸レダクタ
ーゼを含有する。

本発明の抗体は、哺乳動物細胞において容易に産生することができ、この非限定的な例
は、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３、またはＣＯＳ細胞を含む。宿主細胞は、当該技術分
野において周知の技法を使用して培養される。

目的のポリヌクレオチド配列（例えば、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドおよび発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて異なる周知
の方法によって宿主細胞に導入され得る。

これに限定されないが、抗体を含む、タンパク質を精製するために、タンパク質精製の
様々な方法が使用され得、そのような方法は、当該技術分野で知られている。

本発明の別の実施形態では、抗体または抗体をコードする核酸は単離形態で提供される
。本明細書で使用する場合、「単離」という用語は、細胞環境に見出される任意の他の高
分子種を含まないか、または実質的に含まない、タンパク質、ペプチド、または核酸を指
す。「実質的に含まない」とは、本明細書中で使用する場合、目的のタンパク質、ペプチ
ド、または核酸が（モル基準で）８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％
超の対象の高分子種を含むことを意味する。

本発明の抗体、またはそれを含む薬学的組成物は、非経口経路によって投与され得、こ
の非限定的な例は、皮下投与および静脈内投与である。本発明の抗体は、単独で薬学的に
許容される担体、希釈剤、または賦形剤と一緒に単回用量または複数回用量で患者に投与
され得る。本発明の薬学的組成物は、当該技術分野で周知の方法によって調製することが
でき（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２^ｎｄ ｅｄ．（２０１２），Ａ．Ｌｏｙｄ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ）、本明細書に開示される抗体、およ
び１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。

本明細書で使用される場合、「自己免疫疾患」または「自己免疫障害」という用語は、
本明細書で互換的に使用され、自己細胞および／もしくは組織または移植細胞および／も
しくは組織に対する不適切なまたは望ましくない免疫応答から生じる望ましくない状態を
指す。「自己免疫疾患」または「自己免疫障害」という用語は、体液性または細胞性免疫
応答によって媒介されるかにかかわらず、そのような状態を含むことを意味する。例示的
な自己免疫疾患または障害は、これらに限定されないが、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、
固形臓器移植拒絶、血管炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ
）、多発性硬化症（ＭＳ）、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）、乾癬（ＰｓＯ）、乾癬性関節炎
（ＰｓＡ）、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ
）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、シェーグレン症候群（ＳｊＳ）、自己免疫性肝炎、強皮症、
セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天性性
腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧血、慢性アレルギー
性疾患（喘息、花粉症、またはアレルギー性鼻炎など）、クローン病、男性または女性不
妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、リウマチ性多発筋痛症（Ｐ
ＭＲ）、自然流産、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、
慢性ウイルス感染症、および重症筋無力症を含む。本開示の目的のために、好ましい自己
免疫疾患は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、固形臓器移植拒絶、血管炎、全身性エリテマ
トーデス（ＳＬＥ）、１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）、多発性硬化症（ＭＳ）、巨細胞性動脈炎
（ＧＣＡ）、乾癬（ＰｓＯ）、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、炎
症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、シェーグレン症
候群（ＳｊＳ）、自己免疫性肝炎、および強皮症である。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、記述された値または値の範囲のプラ
スまたはマイナス１０パーセントを意味する。例えば、「約」１２は、１０．８（これを
含める）～１３．２（これを含める）の範囲の値を含み、約１０重量パーセントは、９（
これを含める）～１１（これを含める）重量パーセントなどを含む形式を包含する。

ヒトＰＤ－１（配列番号１３）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ、好ましくは、配列番号１
４に示されるヒトＰＤ－１ ＥＣＤについての抗ヒトＰＤ－１アゴニストＩｇＧ１抗体の
親和性に関して本明細書で使用される「結合する」とは、他に示されない限り、これに限
定されないが、２５℃または３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの
使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に
記載される方法によって決定されるように、約１×１０^－７Ｍの、約１ｘ１０^－８Ｍの、
約１ｘ１０^－９Ｍの、約５ｘ１０^－９Ｍの、または約１ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄを意味する
ことが意図される。より好ましくは、本発明の抗ヒトＰＤ－１アゴニストＩｇＧ１抗体は
、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号１３）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列
番号１４）に、２５℃または３７℃でのＳＰＲバイオセンサーの使用を含む、当該技術分
野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって
決定されるように、約１ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。さらによ
り好ましくは、そのような抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号１３）またはヒト
ＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号１４）についての、２５℃または３７℃でのＳＰＲ
バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本
質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約５ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ
１０^－１０Ｍの親和性を有するであろう。さらにより好ましくは、そのような抗体は、そ
れぞれ（本質的に本明細書に記載されるＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）８Ｋを使用するＳＰ
Ｒによって決定されるように）、約１．０ｘ１０^－４～約１．０ｘ１０^－３および約１．
３ｘ１０^５～約２．０×１０^５のヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号１４）のＫｏ
ｎおよびＫｏｆｆ値を有するであろう。

モノクローナル抗体の文脈において、「ヒト」、「ヒト化」、および「完全ヒト」とい
う用語は、当業者に周知である（Ｗｅｉｎｅｒ ＬＪ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０
０６；２９：１－９、Ｍａｌｌｂｒｉｓ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ａｅｓｔｈ
ｅｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１６；９：１３－１５）。

本明細書で使用される場合、「適応性免疫」という用語は、免疫応答のアームを含み、
これは、免疫応答の生来のアームとは対照的に、抗原特異的であり、同じ抗原での再刺激
時に増強された二次抗原特異的免疫応答を示す。

「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（または「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「
治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」）という用語は、既存の症状、障害、状態、または疾患の
進行または重症度を遅延、妨害、抑制、緩和、停止、軽減、または反転させることを指す
。

「有効量」とは、研究者、医師、または他の臨床医によって求められている組織、系、
動物、哺乳動物、またはヒトの生物学的もしくは医学的応答、またはそれに対する所望の
治療効果を誘発するであろう本発明の抗ヒトＰＤ－１アゴニストＩｇＧ１抗体、またはそ
のような抗体を含む薬学的組成物の量を意味する。抗体の有効量は、個体の病状、年齢、
性別、および体重、ならびに抗体が個体において所望の応答を誘発する能力などの因子に
応じて変動し得る。有効量はまた、抗体の任意の毒性効果または有害効果よりも治療的に
有益な効果が上回る量である。そのような利点は、移植臓器の免疫寛容の増加、安定した
自己免疫疾患もしくは障害、または自己免疫障害の徴候もしくは症状を改善することなど
のうちの任意の１つ以上を含む。有効量は、当業者によって、既知の技法の使用によって
、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって、容易に決定することがで
きる。患者のための有効量を決定する際には、これらに限定されないが、患者のサイズ、
年齢、および全体的な健康状態；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の程度
、または関与、または重症度；個々の患者の応答；投与される特定の化合物；投与の様式
；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択される投薬計画；付随する医薬品の使用
；ならびに他の関連する状況を含む、多数の因子が担当診断医によって考慮される。

本明細書で使用される場合、患者の「有効応答」、または治療に対する患者の「応答性
」という用語は、本開示の抗体の投与の際に患者に付与される臨床上または治療上の利益
を指す。そのような利点は、移植臓器の免疫寛容の増加、安定した自己免疫疾患もしくは
障害、または自己免疫障害の徴候もしくは症状を改善することなどのうちの任意の１つ以
上を含む。

本明細書に開示される方法の潜在的な利点は、許容される忍容性、毒性、および／また
は有害事象を含む許容される安全性プロファイルで自己免疫障害に罹患している患者にお
いて著しいおよび／または長期の緩和をもたらす可能性であり、したがって患者は、全体
的な治療方法から利点を得る。本開示の治療の有効性は、これらに限定されないが、Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）２０、ＡＣ
Ｒ５０、ＡＣＲ７０、Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ Ａｒｅａ ａｎｄ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｉｎ
ｄｅｘ（ＰＡＳＩ）５０、ＰＡＳＩ７５、ＰＡＳＩ９０、ＰＡＳＩ１００、Ｓｙｓｔｅｍ
ｉｃ Ｌｕｐｕｓ Ｅｒｙｔｈｍａｔｏｓｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉ
ｎｄｅｘ（ＳＬＥＤＡＩ）を含む、様々な自己免疫障害のための治療を評価する際に一般
的に使用される様々なエンドポイントによって測定することができる。例えば、免疫細胞
活性化マーカー、炎症の尺度、細胞周期依存性バイオマーカー測定視覚化、および／また
は疼痛評価を通した応答の測定を含む、本発明の任意の特定の療法の有効性を決定するこ
とへの様々な他のアプローチを任意に使用することができる。

生物製剤に対する抗薬物抗体形成は、中和抗体の形成またはより速い薬物動態により、
治療の有効性を低減し得る。いくつかの稀な例では、ＡＤＡはまた、安全性の問題と関連
付けられ得る。自己免疫疾患は、慢性であり、長期治療を必要とする。したがって、治療
生物学的薬物（例えば、治療抗体）が機能しなくなる場合、代替治療が必要になることが
多い。時間に伴う免疫原性の課題を克服するために、生物製剤、同じ標的を標的とするも
のでも、例えば、ＴＮＦ阻害剤の連続使用は、自己免疫空間において広く受け入れられ、
利用されている治療方法である（例えば、Ｌｌｏｙｄ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．（２０１０）
Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ａｎｔｉ－ＴＮＦα ｔｈｅｒａｐｉｅ
ｓ ｗｈｅｎ ｕｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａ
ｒｔｈｒｉｔｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎ
ｄ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，４９：２３１３－２１を
参照されたい）。

本開示は、
１）配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有す
るＨＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含むＨＣＶＲと、
２）配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を有す
るＬＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含むＬＣＶＲと
、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を提供し、抗体は、ＩｇＧ１である。好ましくは、そのよ
うな抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号１３）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例
えば、配列番号１４）に、これに限定されないが、２５℃または３７℃での表面プラズモ
ン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、
および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約１×１
０^－７Ｍの、約１ｘ１０^－８Ｍの、約１ｘ１０^－９Ｍの、約５ｘ１０^－９Ｍの、または約
１ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。好ましくは、そのような抗体は、ヒトＰＤ－１（す
なわち、配列番号１３）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号１４）に、これ
に限定されないが、２５℃または３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサ
ーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細
書に記載される方法によって決定されるように、約１ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０Ｍ
のＫ_Ｄで結合する。より好ましくは、そのような抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列
番号１３）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号１４）に、これに限定されな
いが、２５℃または３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含
む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載され
る方法によって決定されるように、約５ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合
する。

いくつかの実施形態では、本開示は、
１）配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、
２）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を提
供し、抗体は、ＩｇＧ１である。好ましくは、そのような抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわ
ち、配列番号１３）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号１４）に、これに限
定されないが、２５℃または３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの
使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に
記載される方法によって決定されるように、約１×１０^－７Ｍの、約１ｘ１０^－８Ｍの、
約１ｘ１０^－９Ｍの、約５ｘ１０^－９Ｍの、または約１ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する
。より好ましくは、そのような抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号１３）または
ヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号１４）に、これに限定されないが、２５℃また
は３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野
で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決
定されるように、約１ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。さらにより
好ましくは、そのような抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号１３）またはヒトＰ
Ｄ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号１４）に、これに限定されないが、２５℃または３７
℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知ら
れる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定され
るように、約５ｘ１０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。

いくつかの実施形態では、本開示は、
１）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
２）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む抗ヒトＰＤ－１抗体を提供する
。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重鎖お
よび配列番号２のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなる、抗ヒトＰＤ－１抗体を提供
する。好ましくは、そのような抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号１３）または
ヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、配列番号１４）に、これに限定されないが、２５℃また
は３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野
で知られる方法によって、および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決
定されるように、約１×１０^－７Ｍの、約１ｘ１０^－８Ｍの、約１ｘ１０^－９Ｍの、約５
ｘ１０^－９Ｍの、または約１ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。より好ましくは、そのよ
うな抗体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号１３）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例
えば、配列番号１４）に、これに限定されないが、２５℃または３７℃での表面プラズモ
ン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、
および／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約１ｘ１
０^－８Ｍ～約５ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。さらにより好ましくは、そのような抗
体は、ヒトＰＤ－１（すなわち、配列番号１３）またはヒトＰＤ－１ ＥＣＤ（例えば、
配列番号１４）に、これに限定されないが、２５℃または３７℃での表面プラズモン共鳴
（ＳＰＲ）バイオセンサーの使用を含む、当該技術分野で知られる方法によって、および
／または本質的に本明細書に記載される方法によって決定されるように、約５ｘ１０^－８
Ｍ～約５ｘ１０^－１０ＭのＫ_Ｄで結合する。

本開示は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列
を有するＨＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号８のアミ
ノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配
列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現するこ
とができる哺乳動物細胞を提供し、抗体は、ＩｇＧ１である。

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよ
び配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む抗ヒトＰＤ－１抗体を発現すること
ができる哺乳動物細胞を提供し、抗体は、ＩｇＧ１である。

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖および配
列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現することができ
る哺乳動物細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸
配列を有する２つの重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなる、
抗ヒトＰＤ－１抗体を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現することができる哺乳動物細胞を
提供する。

本開示は、抗ヒトＰＤ－１抗体を産生するためのプロセスであって、１）配列番号５の
アミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列
番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ
１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列
を有するＬＣＤＲ３を含み、ＩｇＧ１である、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現することができ
る哺乳動物細胞を培養することと、２）抗体を回収することと、を含む、プロセスを提供
する。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗ヒトＰＤ－１抗体を産生するためのプロセスで
あって、１）配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号４のアミノ酸配
列を有するＬＣＶＲを含み、ＩｇＧ１である、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現することができ
る哺乳動物細胞を培養することと、２）抗体を回収することと、を含む、プロセスを提供
する。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗ヒトＰＤ－１抗体を産生するためのプロセスで
あって、１）配列番号１のアミノ酸配列を有する１つの重鎖および配列番号２のアミノ酸
配列を有する１つの軽鎖を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現することができる哺乳動物細
胞を培養することと、２）抗体を回収することと、を含む、プロセスを提供する。いくつ
かの実施形態では、本開示は、抗ヒトＰＤ－１抗体を産生するためのプロセスであって、
１）配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を有
する２つの軽鎖からなる、抗ヒトＰＤ－１抗体を発現することができる哺乳動物細胞を培
養することと、２）抗体を回収することと、を含む、プロセスを提供する。本開示はまた
、プロセスによって産生された抗ヒトＰＤ－１抗体、および許容される担体、希釈剤、ま
たは賦形剤を提供する。

本開示は、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１１および１２の配列を有す
るポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。本開示はまた、配列番号１１、配列番
号１２、または配列番号１１および１２の配列を有するポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分
子を含む哺乳動物細胞を提供する。

本開示は、１）配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸
配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号８の
アミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、およ
び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む抗ヒトＰＤ－１抗体と、ここで
抗体はＩｇＧ１である、２）許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的
組成物を提供する。いくつかの実施形態では、抗ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号３のアミ
ノ酸配列を有するＨＣＶＲと、配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含み、
抗体は、ＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、抗ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号１
のアミノ酸配列を有する１つの重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を有する１つの軽鎖
を含む。いくつかの実施形態では、抗ヒトＰＤ－１抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を
有する２つの重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなる。

免疫性のチェックポイントとしてのＰＤ－１経路の役割は、広く研究されている。ＰＤ
－１経路が刺激されると、免疫系活性は一般に減少し、これは自己免疫疾患の治療に利用
され、免疫寛容を誘導し、および／または移植片対宿主病を低減し得ることが知られてい
る。

本開示は、自己免疫障害を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の
、１）配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有す
るＨＣＤＲ２、配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含むＨＣＶＲと、２）配
列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＤ
Ｒ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含むＬＣＶＲと、を含む
、抗ヒトＰＤ－１抗体を投与することを含み、抗体が、ＩｇＧ１である、方法を提供する
。いくつかの実施形態では、本開示は、自己免疫障害を治療する方法であって、それを必
要とする患者に、有効量の、１）配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、２）配
列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を投与するこ
とを含み、抗体が、ＩｇＧ１である方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は
、自己免疫障害を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、１）配列
番号１のアミノ酸配列を有する重鎖と、２）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、
を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形
態では、本開示はまた、抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重鎖および配
列番号２のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。そのような実施形
態では、本開示はまた、自己免疫障害が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ
、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己
免疫性肝炎、強皮症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎
／悪性貧血、後天性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性
貧血、慢性アレルギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性鼻炎など）、クロー
ン病、男性もしくは女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、
ＰＭＲ、自然流産、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、
慢性ウイルス感染症、または重症筋無力症であることを提供する。

いくつかの実施形態では、本開示はまた、抗体が自己免疫障害の治療に使用される他の
治療剤と組み合わせて投与されることを提供する。

本開示は、療法における使用のための、本発明の抗ヒトＰＤ－１抗体を提供する。いく
つかの実施形態では、本開示は、療法における使用のための、１）配列番号３のアミノ酸
配列を有するＨＣＶＲと、２）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、
抗ヒトＰＤ－１抗体を提供し、抗体は、ＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、本開
示は、療法における使用のための、１）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列
番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を提供する。いくつ
かの実施形態では、本開示はまた、抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重
鎖および配列番号２のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。いくつ
かの実施形態では、本開示は、療法が自己免疫障害の治療のためのものであることを提供
する。いくつかの実施形態では、本開示は、自己免疫障害が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒
絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、
ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、強皮症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレー
ブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、
クームス陽性溶血性貧血、慢性アレルギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性
鼻炎など）、クローン病、男性もしくは女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫
症、心筋炎、筋炎、ＰＭＲ、自然流産、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎
、水疱性類天疱瘡、慢性ウイルス感染症、または重症筋無力症であることを提供する。い
くつかの実施形態では、本開示は、抗体が、自己免疫障害を治療するための別の治療剤と
組み合わせて投与される（またはその予定である）ことを提供する。いくつかの実施形態
では、本開示はまた、抗体が、自己免疫障害を治療するための別の治療剤と同時に、別々
に、または逐次的に組み合わせて投与される（またはその予定である）ことを提供する。

本開示は、自己免疫障害の治療のための医薬品の製造のための、本発明の抗ヒトＰＤ－
１抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、自己免疫障害の治療のための医
薬品の製造のための、１）配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、２）配列番号
４のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を提供し、抗体は、
ＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、本開示は、自己免疫障害の治療のための医薬
品の製造のための、１）配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖と、２）配列番号２のア
ミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗ヒトＰＤ－１抗体を提供する。いくつかの実施形
態では、本開示はまた、抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有する２つの重鎖および配
列番号２のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖からなることを提供する。一実施形態では、
本開示は、医薬品が、自己免疫障害の治療のためのものであることを提供する。いくつか
の実施形態では、本開示は、医薬品が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、
Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免
疫性肝炎、強皮症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／
悪性貧血、後天性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧
血、慢性アレルギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性鼻炎など）、クローン
病、男性もしくは女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、Ｐ
ＭＲ、自然流産、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、慢
性ウイルス感染症、または重症筋無力症の治療のためのものであることを提供する。

投薬計画は、最適な所望の反応（例えば、治療効果）を提供するように調整され得る。
安全性および有効性を最適化するために処置投与量を滴定し得る。静脈内（ｉ．ｖ．）も
しくは非静脈内投与、皮下（ｓ．ｃ．）局所もしくは全身、またはそれらの組み合わせの
ための投与スケジュールは、典型的には、単回ボーラス投薬または連続注入から１か月あ
たり複数回皮下投与、好ましくは、１日あたり１回以下、より好ましくは、１週間あたり
１回以下、さらにより好ましくは２週間毎に１回以下、さらにより好ましくは、１か月あ
たり１回以下、または治療する医師および患者の状態によって示されるものまでの範囲で
あろう。投与量および頻度は、患者を治療する医師（複数可）によって決定され得る。

実施例１：抗体発現および精製
重鎖および軽鎖の可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列、抗体１の完全重鎖および軽鎖アミ
ノ酸配列、ならびにそれらをコードするヌクレオチド配列は、「アミノ酸およびヌクレオ
チド配列」と題するセクションにおいて以下に列挙される。加えて、抗体１の軽鎖、重鎖
、ＬＣＶＲ、およびＨＣＶＲのアミノ酸配列の配列番号は、以下の表１（ａ）に示される
。さらに、抗体１のＨＣ可変領域およびＬＣ可変領域のＣＤＲのアミノ酸配列の配列番号
は、表１（ａ）に示される。

これに限定されないが、抗体１を含む、本発明の抗体は、本質的に以下のとおり作製お
よび精製することができる。これに限定されないが、ＨＥＫ ２９３またはＣＨＯなどの
適切な宿主細胞は、例えば、重鎖および軽鎖の発現をコードする単一のベクター、重鎖を
コードする、および軽鎖をコードする２つのベクター（最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター
比（１：３または１：２など）を使用する）を使用して、抗体を分泌するための発現系で
一時的または安定的のいずれかでトランスフェクトすることができる。

哺乳動物細胞における治療抗体の効率的な発現は、治療抗体の商業的成功にとって重要
な因子であることが多いため、抗体１をコードするｃＤＮＡは、シグナル配列および可変
領域の市販のコドン最適化サービスから取得したものを含む、複数のコドン変異体を試験
することによって最適化した。それぞれ、抗体１の重鎖および軽鎖をコードする配列番号
１１および１２に示されるポリヌクレオチドを使用して、配列番号１２に示されるポリヌ
クレオチドおよび安定なＣＨＯ細胞株におけるコドン使用に関して最適化されなかった抗
体１の重鎖をコードするポリヌクレオチドを発現する同様のＣＨＯ細胞株と比較して、増
加した力価（例えば、好ましくは、最大約６倍、より好ましくは、最大約７倍、さらによ
り好ましくは、最大約８倍、さらにより好ましくは、最大約９倍、さらにより好ましくは
、最大１０倍、さらにより好ましくは、最大１１倍超）を効率的に生成する細胞株を生成
した。

抗体１が分泌された培地は、多くの一般的に使用される技法のいずれかを使用して精製
され得る。例えば、培地は、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）などの適合した緩衝液
で平衡化された、Ｆａｂフラグメント用のＭａｂＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔ
ｈｃａｒｅ）またはＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適
用され得る。カラムは、非特異的結合構成成分を除去するために洗浄され得る。結合抗体
は、例えば、ｐＨ勾配（１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ３．０に対して、２
０ｍＭのＴｒｉｓ緩衝液、ｐＨ７、または１００ｍＭのグリシン緩衝液、ｐＨ３．０に対
して、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４など）によって溶出され得る。抗体画分は、Ｕ
Ｖ吸収またはＳＤＳ－ＰＡＧＥなどによって検出され得、次いでプールされ得る。可溶性
凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、マルチモーダル、ま
たはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技法によって効果的に除去
され得る。抗体は、一般的な技法を使用して濃縮、緩衝液交換、および／または滅菌濾過
され得る。産生物は、４～５℃で保存されるか、または－８０℃で直ちに凍結されるか、
または凍結乾燥され得る。

実施例２：抗体１は細胞表面上のヒトおよびカニクイザルＰＤ－１に結合する
細胞表面ヒトまたはカニクイザルＰＤ－１に結合する本明細書に開示される抗ヒトＰＤ
－１アゴニスト抗体の能力は、フローサイトメトリーアッセイを使用して測定することが
できる。ヒトおよびカニクイザルＰＤ－１（すなわち、それぞれ、配列番号１３および１
５に示される）発現安定細胞は、確立されたプロトコルに従ってエレクトロポレーション
システム（Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ Ｘｃｅｌｌ、ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ヒトまた
はカニクイザルＰＤ－１プラスミドＤＮＡをチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ－
ｋ１、Ｌｏｎｚａ）にトランスフェクトすることによって生成する。安定な細胞を、培養
培地において５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使
用して単一の単離細胞から選択する。フローサイトメトリーのために、細胞を１ｘ１０^５
細胞／ウェルの密度で９６ウェルＶ底プレートに移す。細胞を１ｘＦＡＣＳ緩衝液（Ｂｅ
ｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ＃５５４６５６）で洗浄する。抗体１、または対照ヒトＩ
ｇＧ１（１００マイクログラム／ｍＬで開始して、抗体の３倍１２点滴定においてＦＡＣ
Ｓ緩衝液で希釈）を加え（１００マイクロリットル）、細胞を４℃で３０分間インキュベ
ートする。

ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄後、ＦＩＴＣコンジュゲートＦ（ａｂ’）^２フラグメントヤ
ギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγフラグメント特異的二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲ
ｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ １０９－０９６－１７０）を１：２００希
釈で加え、細胞を４℃で３０分間インキュベートする。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄後、製
造業者のプロトコルに従ってＳｙｔｏｘＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ｓ３４８５
７）を使用して、生／死細胞染色を行う。細胞を、Ｆｏｒｔｅｓｓａ、Ｆｏｒｔｅｓｓａ
Ｆｘ、またはＬＳＲＩＩフローサイトメトリー装置で処理する。フローサイトメトリー
データを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析する。幾何平均蛍光強度（ＧＭＦＩ
）値を使用して、４パラメータロジスティック回帰に基づく相対ＥＣ_５０を計算する。

本質的に以上に記載されるように行われた実験では、抗体１は、細胞膜発現ヒトまたは
カニクイザルＰＤ－１に、それぞれ、１．３０＋／－０．１６μｇ／ｍＬおよび１．０９
＋／－０．３０μｇ／ｍＬの平均ＥＣ_５０で結合することができた。このデータは、抗体
１が、ヒトおよびカニクイザル両方の膜結合ＰＤ－１と同様の親和性で結合することがで
きることを示す。

実施例３：ヒトおよびカニクイザルＰＤ－１ ＥＣＤについての抗体１結合キネティク
ス／親和性
ヒトおよびカニクイザルＰＤ－１ ＥＣＤへの本発明の抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体
の結合キネティクスは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）２０００、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商
標）３０００、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）８Ｋ、またはＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ
１００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）などの表面プラズ
モン共鳴バイオセンサーの使用によって決定され得る。簡単に記載すると、ＢＩＡｃｏｒ
ｅ（登録商標）８Ｋ装置を使用して、２５℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を介した
ヒトおよびカニクイザルＰＤ１－細胞外ドメイン（ＥＣＤ）－Ｈｉｓへの抗体１について
の結合キネティクスを測定する。試料を１倍ＨＢＳ－ＥＰ＋ランニング緩衝液（Ｔｅｋｎ
ｏｖａ ｃａｔ．＃Ｈ８０２２）に溶解し、タンパク質Ａ結合ＣＭ５シリーズＳセンサー
チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃａｔ＃２９１３９１３１－ＡＡ）を使用してｍ
Ａｂを捕捉する。Ｃ末端８ｘヒスチジンタグを含有するヒトおよびカニクイザルＰＤ１－
ＥＣＤタンパク質をＣＨＯ細胞で発現させ、ニッケル荷電ＩＭＡＣによって精製し、続い
でサイズ排除を行う。

結合は、複数の分析サイクルを使用して評価する。各サイクルは、ｍＡｂ捕捉について
１０μｌ／分、ならびにリガンド会合および解離について３０μｌ／分の流速で、２５℃
で行う。各サイクルは、次のステップ：フローセル２上での約２２０ＲＵの捕捉レベルを
目標とした６０秒の接触時間にわたる２μｇ／ｍｌのｍＡｂの注入、ヒトまたはカニクイ
ザルＰＤ１－ＥＣＤ－ｈｉｓ（４倍段階希釈による４００ｎＭ～１．６ｎＭの濃度範囲）
の１５０秒の注入、続いて６００秒の解離段階、および３０秒の接触時間にわたる１０ｍ
Ｍのグリシン塩酸塩、ｐＨ１．５を使用する再生からなる。各サイクルの会合（すなわち
、Ｋｏｎ）および解離速度（すなわち、Ｋｏｆｆ）は、標準的な二重参照を使用して評価
し、パラレルキネティクスバッチモードでのＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋ評価において「１：１
（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合」モデルに適合する。親和性（Ｋ_Ｄ）を、関係Ｋ_Ｄ＝Ｋｏｆｆ
／Ｋｏｎに従って結合キネティクスから算出する。

その後の実験では、Ｂｉａｃｏｒｅを使用して、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００
による３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を介したヒトおよびカニクイザルＰＤ１
－細胞外ドメイン（ＥＣＤ）－Ｈｉｓへの抗体１の結合キネティクスを測定した。３７℃
での分析について、結合は、複数の分析サイクルを使用して評価する。各サイクルは、ｍ
Ａｂ捕捉について１０μｌ／分、ならびにリガンド会合および解離について１００μｌ／
分の流速で、３７℃で行う。各サイクルは、次のステップ：フローセル２上での約２２０
ＲＵの捕捉レベルを目標とした２．５μｇ／ｍｌのｍＡｂの注入、ヒトまたはカニクイザ
ルＰＤ１－ＥＣＤ－ｈｉｓ（２倍段階希釈による１０００ｎＭ～１．６ｎＭの濃度範囲）
の１８０秒の注入、続いて６００秒の解離段階、および３０秒の接触時間にわたる１０ｍ
Ｍのグリシン塩酸塩、ｐＨ１．５を使用する再生からなる。Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫ
Ｄは、本質的に以上に記載されるように計算する。親和性データは、３つの独立した実験
における３通りの測定から決定された平均および標準偏差として報告する（平均±ＳＤ、
ｎ＝９）。

本質的に以上に記載されるように行われた実験では、２５℃（ｎ＝１）および３７℃（
ｎ＝９）で、ならびに表２に示されるように、Ｂｉａｃｏｒｅによって決定されるように
、抗体１は、ヒトおよびカニクイザルＰＤ１－ＥＣＤ－ｈｉｓに結合する。

表２に示されるように、抗体１は、ヒトおよびカニクイザルの両方のＰＤ－１ ＥＣＤ
にナノモルの親和性で結合し、ヒトおよびカニクイザルの両方のＰＤ－１ ＥＣＤで同様
の結合キネティクスを示す。

実施例４：抗体１はＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２への結合を遮断しない
ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２へのＰＤ－１結合を遮断する本発明の抗体の能力は、以下
のように決定することができる。簡単に記載すると、確立されたプロトコルに従ってエレ
クトロポレーションシステム（Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ Ｘｃｅｌｌ、ＢｉｏＲａｄ）を
使用して、ヒトＰＤ－１プラスミドＤＮＡをＣＨＯ－ｋ１細胞（Ｌｏｎｚａ）にトランス
フェクトすることによって、ヒトＰＤ－１発現安定細胞を生成する。安定な細胞を、培養
培地において５００μｇ／ｍＬのＧ４１８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使
用して単一の単離細胞から選択する。２００μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体を試験するか、ま
たは１００μｇ／ｍＬで開始し、続いてＦＡＣＳ緩衝液での１２倍７点抗体滴定を４℃で
３０分間インキュベートする。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄する。細胞を、２０μ
ｇ／ｍＬのビオチン化ヒトＰＤ－Ｌ１（Ａｃｒｏｓ、＃ＰＤ－１－Ｈ８２Ｆ３）またはＰ
Ｄ－Ｌ２（Ａｂｃａｍ、ａｂ１９８７６４）を含む５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し
、４℃で３０分間インキュベートする。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ
緩衝液中に１：２００希釈でストレプトアビジン－ＡＰＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｓｅ
ｓ、＃５５４０６７）を含む１００マイクロリットルのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、４℃
で３０分間インキュベートする。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄後、製造業者のプロトコルに
従ってＳｙｔｏｘＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ｓ３４８５７）を使用して、生／
死細胞染色を行う。細胞を、Ｆｏｒｔｅｓｓａ、Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｆｘ、またはＬＳＲ
ＩＩフローサイトメトリー装置で処理する。フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪ
ｏソフトウェアを使用して分析する。平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を使用して、４パラメー
タロジスティック回帰に基づく相対ＩＣ_５０を計算する。

本質的に以上に記載されるように行われる実験では、抗体１およびアイソタイプ対照抗
体は、ＰＤ－Ｌ１結合もＰＤ－Ｌ２結合も遮断せず、陽性対照抗体、ＰＤ－１特異的アン
タゴニスト抗体（ニボルマブのホモログ）のＩＣ_５０は、ＰＤ－Ｌ１について０．２２＋
／－０．０２μｇ／ｍＬ、およびＰＤ－Ｌ２について０．４２＋／－０．１２μｇ／ｍＬ
であった。これらのデータは、抗体１が、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２へのＰＤ－１結合
を遮断しないことを示す。

実施例５：抗体１はＴ細胞受容体活性化誘導性ＮＦＡＴシグナル伝達を阻害する
ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）は、炎症性サイトカイン、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－
２、およびいくつかの細胞表面受容体をコードする遺伝子の発現を調節することによって
免疫応答に対するＴ細胞受容体活性化を媒介することにおいて重要な役割を果たす転写因
子である。Ｔ細胞受容体活性化誘導性ＮＦＡＴシグナル伝達を阻害する本明細書に開示さ
れる抗体の能力は、以下のように測定することができる。

簡単に記載すると、ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターおよびヒトＰＤ－１（Ｐｒｏｍ
ｅｇａ）の両方をトランスフェクトしたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、ヒトＣＤ３抗体および
ＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ（登録商標））で活性化する。ＴＨＰ－１細胞（４０，０００
細胞／ウェル）を１００μｌで白い９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３９１７）
に播種する。２μｇ／ｍＬの抗ヒトＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、
＃１６－００３７）および最終濃度２０μｇ／ｍＬの治療抗体（抗体１またはアイソタイ
プ対照抗体）または１０μｇ／ｍＬで開始する５倍７点抗体滴定を、ＴＨＰ－１細胞に加
える。細胞および抗体の混合物を、３７℃、５％ＣＯ_２で３０分間インキュベートする。
ＰＤ－１を発現するＮＦＡＴ－ルシフェラーゼＪｕｒｋａｔレポーター細胞（５０，００
０細胞／ウェル）を、９６ウェルプレート上のＴＨＰ－１細胞、ＣＤ３抗体、および治療
抗体混合物に加え、３７℃、５％ＣＯ_２で５時間インキュベートする。インキュベーショ
ンの終わりに、プレートを１０分間室温にする。８０マイクロリットルのＢｉｏＧｌｏ試
薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｇ７９４０）をウェルに加え、室温で１０分間インキュベートす
る。発光は、ＬＭａｘＩＩ３８４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）またはＥｎｖ
ｉｓｉｏｎ ２１０５（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によって準備ができている。

本質的に以上に記載されるように行われた実験では、抗体１およびアイソタイプ対照抗
体は、ヒトＰＤ－１ ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞活性を、７５．２＋／－
３７．６ｎｇ／ｍＬの４つの独立した実験からの平均ＩＣ_５０で阻害したが、アイソタイ
プ対照抗体は、ＮＦＡＴシグナル伝達を有意に阻害しなかった。これらのデータは、抗体
１がＴ細胞受容体活性化誘導性ＮＦＡＴシグナル伝達を阻害することができることを示す
。

実施例６：抗体１はヒト初代Ｔ細胞増殖を阻害する
Ｔ細胞受容体活性化によって誘導されるＴ細胞増殖を阻害する本明細書に開示される抗
体の能力は、以下のように測定することができる。簡単に記載すると、ヒト末梢血単核細
胞（ＰＢＭＣ）は、５０ｍＬのコニカルチューブにおいて１５ｍＬの３７℃のＦｉｃｏｌ
ｌ（Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃１７１４４
００２）上に３５ｍＬの希釈血液（カルシウムまたはマグネシウムを含まないＰＢＳでの
１０倍希釈）を重ねることによって、健康なヒトＴｒｉｍａ ＬＲＳ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から単離する。チューブを室温
で３０分間９００ｘＧで遠心分離する。細胞界面を新たな５０ｍＬのコニカルチューブに
移す。最終体積を、室温のＰＢＳ（カルシウムまたはマグネシウムを含まない）で５０ｍ
Ｌに調節する。ＰＢＳで２回洗浄後、細胞を完全ＣＴＳ培地（Ｇｉｂｃｏ、＃Ａ１０４８
５０１、＃Ａ１０４８４－０２）に再懸濁する。

単離ヒトＰＢＭＣを、ＣＦＳＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，ｃａｔ．＃７９８９８）で標識
する。ＰＢＭＣを無血清ＲＰＭＩで３回洗浄する。ＣＦＳＥ標識を、無血清培地において
、１μＭのＣＦＳＥの存在下、３７℃、５％ＣＯ_２で２０分間行う。ＣＦＳＥを完全ＣＴ
Ｓ培地でクエンチし、続いて洗浄ステップを行う。

ＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣ（１５０，０００細胞／ウェル）を、抗体１またはアイソタイプ
対照抗体を含有する各９６ウェル丸底ウェルに加える。細胞を４ｎｇ／ｍＬのスーパー抗
原（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ、ＳＥＢ）（Ｔｏｘｉｎ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＢＴ２０２１ＭＧ）で、３７℃、５％ＣＯ_２で７２時間刺激
する。

インキュベーション後のプレートを、ＦＡＣＳ緩衝液（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅ
ｃ、＃１３０－０９１－２２１）で洗浄し、ヒトＦｃ遮断試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉ
ｏｔｅｃ、＃１３０－０５９－９０１）で１０分間インキュベートし、次いでＣＤ４に対
する標識抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、＃３１７４２６）およびＰＤ－１（ｅＢｉｏｓｃｉ
ｅｎｃｅ、＃１７－２７９９－４２）で３０分間氷上で染色する。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄
後、製造業者のプロトコルに従ってＳｙｔｏｘＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ｓ３
４８５７）を使用して、生／死細胞染色を行う。細胞を、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ Ｂｅ
ａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ｃ３６９５０）の存在下でＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ２０
フローサイトメトリー装置で処理して、細胞数を定量化する。フローサイトメトリーデー
タを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析する。絶対分裂ＣＤ４陽性細胞数は、Ｃ
ＦＳＥ染色およびＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔビーズを使用して計算する。

本質的に以上に記載されるように行った実験では、抗体１は、ヒト初代Ｔ細胞増殖を８
の異なるドナーについて１７５＋／－１２８ｎｇ／ｍＬの平均ＩＣ_５０で阻害することが
できたが、アイソタイプ対照抗体は、初代Ｔ細胞増殖を阻害しなかった。これらのデータ
は、抗体１がインビトロでＴ細胞増殖を阻害することができることを示す。

実施例７：インビトロサイトカイン放出研究
この研究の目的は、抗体１が未刺激ヒトＰＢＭＣからのサイトカイン放出を誘導するか
を試験することである。

簡単に記載すると、健康な対象から新たに単離されたＰＢＭＣは、０．５μｇ～１．５
μｇの滴定範囲にわたって、プレート結合抗体１、または対照抗体と、２４時間インキュ
ベートする。陽性対照は、市販の抗ヒトＣＤ３ε抗体、ＯＫＴ３、およびＣＤ２８特異的
スーパーアゴニスト治療抗体のホモログ、ＴＧＮ１４１２である。両方の抗体は、生命を
脅かし得る全身性炎症反応症候群の一形態である、サイトカイン放出症候群を引き起こす
ことが知られている。陰性対照は、ヒトＩｇＧ１野生型（ＷＴ）アイソタイプ対照抗体で
ある。Ｍｅｓｏｓｃａｌｅプラットフォームに基づく市販のマルチプレックスアッセイを
使用して、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、およびＴＮＦ－αを含む、５
つのサイトカインは、細胞培養上清において測定される。

本質的に以上に記載されるように行われた実験では、ヒトＰＢＭＣの抗体１とのインキ
ュベーションは、０．５、１、または１．５μｇ／ウェルの濃度でＩＦＮ－γ、ＩＬ－２
、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、およびＴＮＦ－αについてのサイトカイン放出の有意なレベル
をもたらさなかった。対照的に、ＰＢＭＣのウェルあたり１μｇの抗ＣＤ３εおよびＴＧ
Ｎ１４１２陽性対照抗体とのインキュベーションは、ほとんどのドナーにおいてＩＬ－２
、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１０、およびＴＮＦ－αのロバストな産生をもたらした。

実施例８：マウス移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）インビボモデル
ヒトＰＢＭＣが注射された免疫不全株に基づく異種ＧｖＨＤのヒト化マウスモデル（「
Ｈｕ－ＰＢＭＣマウス」）は、インビボでヒト免疫機能を研究するための重要なツールで
ある。マウスをＧｖＨＤから保護する本明細書に開示される抗体の能力は、Ｈｕ－ＰＢＭ
Ｃマウスモデルにおいて評価される。

簡単に記載すると、雌ＮＳＧマウス（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇ
ｔｍ１Ｗｊｌ ／ ＳｚＪ、ＪＡＸ Ｌａｂｓ、ストック＃０５５５７）は、７２℃、１
２時間の明：暗サイクル下でケージあたり３匹収容され、飼料および水を自由に摂取させ
る（ｎ＝７８）。ヒトＰＢＭＣは、製造業者の指示（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ）に従ってＳｅｐＭａｔｅ ５０ Ｆｉｃｏｌｌ
調製チューブを使用して、２人のドナー（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ）
から入手されるＬＲＳチューブから単離する。新たに単離されたＰＢＭＣを、ＰＢＳに１
．２ｘ１０^８細胞／ｍＬで懸濁し、マウスに１００μＬのＰＢＭＣ懸濁液を０日目に静脈
内移植し（１．２ｘ１０^７／マウス）、３６匹のマウスはドナー１から、３６匹はドナー
２からＰＢＭＣを受け、６匹のマウスは未移植対照のままであった。その後各ドナーにつ
いて同一のプロトコルに従う。１日目に、マウスを４つの体重が一致する群／ドナーに分
け、アイソタイプ対照または抗体１を０．１、１．０、または１０．０ｍｇ／ｋｇで皮下
投与する（２００μＬ／マウス）。投与を、実験の残りの間、週に２回続ける。健康診断
および体重測定を定期的に行う。それらの開始体重の２０％を喪失した、または明らに苦
しんでいるマウスを安楽死させる。アイソタイプ対照マウスの大部分が疾患の進行により
安楽死を必要としている場合、全てマウスを犠死させる。全ての安楽死させたマウスにつ
いて、イソフルラン麻酔下で心臓穿刺によって血液をＦＡＣＳ分析のためにＥＤＴＡチュ
ーブに収集し、血漿分析のために遠心分離によって清澄化する。体重および臨床観察：Ｂ
ＳＬ２フードにおいてマウスの体重を量り、苦痛の臨床徴候について２～３回／週で評価
する。このモデルに共通する臨床徴候は、ボサボサの毛、丸まった体、衰弱、および呼吸
または運動困難である。体重変化を、それらのベースライン体重のパーセンテージ：（日
（ｘ）体重／０日目体重）＊１００として計算する。

血漿分析：心臓穿刺からの血液は、ＥＤＴＡコーティングされたチューブに収集し、遠
心分離によって清澄化し、得られた血漿は、今後の処理のために－８０℃で保存する。血
漿サイトカインは、製造業者の指示に従ってＭｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
Ｈｕｍａｎ Ｔｈ１／Ｔｈ２ １０－Ｖｐｌｅｘ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ）を使用して測定する。

統計：データをグラフ化し、Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して統計を計算する。群間の体重の差を、Ｔｕｋｅｙの事
後検定を伴う２－ｗａｙ ＲＭ－ＡＮＯＶＡによって決定する。終末血漿サイトカインレ
ベルの差は、Ｔｕｋｅｙの事後検定を伴う１－ｗａｙ ＡＮＯＶＡによって決定する。ｐ
＜０．０５の場合、試験群間の差は、有意であるとみなされる。

本質的に以上に記載されるように行われた実験では、ドナー１またはドナー２からのヒ
トＰＢＭＣの生着は、ＮＳＧマウスにおける著しい衰弱によって証明されるようにＧｖＨ
Ｄを誘発した。疾患進行は、それぞれ、２６および４０日目に有意な体重減少によって研
究を終了したドナー１と比較して、ドナー２ ＰＢＭＣが生着したマウスにおいてより急
速であった。抗体１での治療は、いずれかのドナーが生着したマウスにおける体重減少の
低減によって測定されるように、疾患進行を有意に弱めた。加えて、抗体１は、疾患進行
に関連する血漿ヒトＴｈ１（ＩＦＮ－γ）およびＴｈ２（ＩＬ－１３）サイトカインの明
白な増加を阻害した。したがって、抗体１は、ヒト化ＧｖＨＤモデルにおいて疾患進行を
有意に低減する。

実施例９：ループス腎炎のｈＰＤ－１ ＫＩ～Ｂｍ１２慢性ＧｖＨＤマウスモデル
自己抗体の発生およびヒトループス腎炎と同様の病態を特徴とする慢性ＧｖＨＤ（ｃＧ
ｖＨＤ）は、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンド上にヒトＰＤ－１を発現するドナーマウス
から脾細胞を注入することによって、Ｂｍ１２マウスにおいて誘導することができる。こ
の実施例９に記載される研究では、ｈＰＤ－１ ＫＩマウス（Ｃ５７ＢＬ／６－Ｐｄｃｄ
１＜ｔｍ１６０６．１）からの脾細胞を、Ｂ６（Ｃ）－Ｈ２－Ａｂ１ｂｍ１２／ＫｈＥｇ
Ｊ（Ｂｍ１２）マウスに注入する。その後、宿主マウスは、腎臓におけるｄｓＤＮＡに対
する自己抗体の発生および免疫複合体の沈着を特徴とする、緩徐進行性ＳＬＥのような疾
患を発症する。よって、ＰＤ－１アゴニスト抗体の活性は、このループス腎炎モデルにお
いて以下のように評価され得る。

簡単に記載すると、雄ヒトＰＤ－１ノックインマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ）は、到着時に９週齢であり、雄Ｂｍ１２マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、到着時に１１週齢である。全てのマウスを、ケージあたり４匹
収容し、研究開始前に１週間馴化させる。マウスに、Ｔｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ Ｒｏ
ｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ２０１４（Ｈａｒｌａｎ）および水を自由に摂取させる。マウスを
、周囲温度を６８～７９°Ｆに設定した、１２時間の明／暗サイクルに収容する。研究開
始の４日前に、マウスを体重に基づいてランダムに選別し、７５μｌの全血を尾の切れ目
から収集する。血清を、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分離することによって全血から
分離し、抗ｄｓＤＮＡ力価を定量化するために使用する。マウスを次いで以下の治療群：
（１）１０．０ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧ１アイソタイプ対照、（２）１．０ｍｇ／ｋｇの抗
体１、（３）１０．０ｍｇ／ｋｇの抗体１に分配する。マウスに、ヒトＩｇＧ１アイソタ
イプ対照または抗体１を、０日目に開始して週２回皮下投与する。血清試料を、治療開始
の４２日後の研究終了まで、２週間毎にマウスから尾の切れ目を介して収集する。

血清抗ｄｓＤＮＡレベルを、カスタムＥＬＩＳＡによって測定する。プレート（９６ウ
ェル）を、１０μｇ／ｍｌのウシ胸腺ＤＮＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で４℃で一晩コ
ーティングする。ＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（０．０５％）での洗浄後、２μｌの試料を加え（
１：１００希釈）、段階的に１：３に希釈する。ＲＴでの２時間のインキュベーション後
、プレートを洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒ
ｃｈ）を１：２０００希釈で９０分間加える。プレートを洗浄し、Ｕｌｔｒａ－ＴＭＢ（
ＴｈｅｒｍｏＳｃｉ Ｐｉｅｒｃｅ）を１５分間加え、反応を１Ｎ Ｈ２ＳＯ４で停止す
る。ＯＤを４５０ｎｍ波長で読み取り、ＥＣ_５０値を計算する。

本質的に実施例９において以上に記載されるように行われた実験では、二本鎖ＤＮＡ（
抗ｄｓＤＮＡ）力価に対する自己抗体は、研究の経過中に用量依存的に抗体１治療で低減
させた。１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの抗体１の用量で、抗ｄｓＤＮＡレベルの低
減は、２８および４２日目にヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照群から統計的に有意であった
。抗ｄｓＤＮＡ ＡＵＣも、抗体１によって用量依存的に低減させた。１０ｍｇ／ｋｇの
抗体１は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照から有意に抗ｄｓＤＮＡ ＡＵＣを低減するこ
とができた。したがって、抗体１は、ループスのｃＧｖＨＤモデルにおいて疾患進行を有
意に低減することができる。

アミノ酸およびヌクレオチド配列
抗体１の重鎖（配列番号１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳＷＶＲＱＡ
ＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭ
ＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
ＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷ
ＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹ
ＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ
ＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹ
ＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥ
ＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬ
ＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬ
ＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ
ＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

抗体１の軽鎖（配列番号２）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＰＮＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰ
ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＤＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ
ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＮＮＹＹＶＧＰＶＳＹＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩ
ＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧ
ＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴ
ＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

抗体１の重鎖可変領域（配列番号３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳＷＶＲＱＡ
ＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＥＤＴＳＴＤＴＡＹＭ
ＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

抗体１の軽鎖可変領域（配列番号４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＰＮＮＬＬＡＷＹＱＱＫＰ
ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＤＬＰＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ
ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＮＮＹＹＶＧＰＶＳＹＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

抗体１のＨＣＤＲ１（配列番号５）
ＫＶＳＧＹＳＬＳＫＹＤＭＳ

抗体１のＨＣＤＲ２（配列番号６）
ＩＩＹＴＳＧＹＴＤＹＡＱＫＦＱＧ

抗体１のＨＣＤＲ３（配列番号７）
ＡＴＧＮＰＹＹＴＮＧＦＮＳ

抗体１のＬＣＤＲ１（配列番号８）
ＱＡＳＱＳＰＮＮＬＬＡ

抗体１のＬＣＤＲ２（配列番号９）
ＹＧＡＳＤＬＰＳ

抗体１のＬＣＤＲ３（配列番号１０）
ＱＮＮＹＹＶＧＰＶＳＹＡ

抗体１の重鎖をコードするＤＮＡ（配列番号１１）
ｃａａｇｔｇｃａｇｔｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｇｇｇｇｇｃａｇａａｇｔｇａａａａａｇｃ
ｃｃｇｇｃｇｃｔｔｃｇｇｔｇａａａｇｔｇｔｃｃｔｇｃａａａｇｔｇｔｃｃｇｇｃｔａ
ｔｔｃｔｔｔｇｔｃｃａａａｔａｃｇａｃａｔｇｔｃａｔｇｇｇｔｃａｇａｃａｇｇｃｔ
ｃｃｃｇｇａａａｇｇｇｔｃｔｇｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇｇａｔｔａｔｃｔａｔａｃａｔ
ｃｃｇｇｃｔａｃａｃｃｇａｔｔａｃｇｃｃｃａａａａｇｔｔｃｃａｇｇｇｇａｇａｇｔ
ｃａｃｃａｔｇａｃｔｇａｇｇａｔａｃｇｔｃｃａｃｃｇａｃａｃｃｇｃｃｔａｃａｔｇ
ｇａａｃｔｇｔｃｃａｇｃｃｔｇｃｇｇｔｃｃｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｇｇｔｇｔａｃｔ
ａｃｔｇｃｇｃｇａｃｃｇｇａａａｃｃｃａｔａｃｔａｃａｃｃａａｔｇｇａｔｔｃａａ
ｔａｇｃｔｇｇｇｇａｃａｇｇｇｔａｃｔｃｔｔｇｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｃａｇｃｇｃｃ
ｔｃｃａｃｃａａｇｇｇｃｃｃａｔｃｇｇｔｃｔｔｃｃｃｇｃｔａｇｃａｃｃｃｔｃｃｔ
ｃｃａａｇａｇｃａｃｃｔｃｔｇｇｇｇｇｃａｃａｇｃｇｇｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔ
ｇｇｔｃａａｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａａｃｃｇｇｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｇｔｇｇ
ａａｃｔｃａｇｇｃｇｃｃｃｔｇａｃｃａｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｇｇ
ｃｔｇｔｃｃｔａｃａｇｔｃｃｔｃａｇｇａｃｔｃｔａｃｔｃｃｃｔｃａｇｃａｇｃｇｔ
ｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃｔｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇａｃｃｔａｃ
ａｔｃｔｇｃａａｃｇｔｇａａｔｃａｃａａｇｃｃｃａｇｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｇ
ａｃａａｇａａａｇｔｔｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｔｇｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃ
ａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｃｇ
ｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａ
ｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａ
ｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃ
ｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃ
ｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔ
ｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇ
ｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｃａ
ｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａ
ａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｃｇａｇｃｔｇ
ａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔ
ｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇ
ｇｃａｇｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｃｃｃｃｇｔｇｃｔｇ
ｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｔａｇｃａａｇｃｔｃａｃｃｇ
ｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇ
ｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇ
ａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｇｇｇｔａａａ

抗体１の軽鎖をコードするＤＮＡ（配列番号１２）
ｇａｃａｔｃｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｔｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｇｃａｔ
ｃｔｇｔｇｇｇａｇａｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃａ
ｇａｇｃｃｃｔａａｔａａｃｃｔｃｃｔｇｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａａｃｃａ
ｇｇｇａａａｇｃｃｃｃｔａａｇｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｔｇｇｔｇｃａｔｃｃｇａｔｃ
ｔｇｃｃａｔｃｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｔｃａａｇｇｔｔｃａｇｔｇｇｃａｇｔｇｇａｔｃ
ｔｇｇｇａｃａｇａｔｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇｔｃｔｇｃａａｃｃｔ
ｇａａｇａｔｔｔｔｇｃａａｃｔｔａｃｔａｃｔｇｔｃａｇａａｃａａｔｔａｔｔａｔｇ
ｔｇｇｇａｃｃａｇｔｇａｇｃｔａｔｇｃｔｔｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｃｃａａｇｇｔ
ｇｇａｇａｔｃａａｇｃｇｇａｃｃｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃ
ｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔ
ｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃ
ｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔ
ａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａ
ｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃ
ａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃ
ｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａ
ｇｇｇｇａｇａｇｔｇｃ

ヒトＰＤ－１のアミノ酸配列（配列番号１３）
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡ
ＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡ
ＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴ
ＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰ
ＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩ
ＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰ
ＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥ
ＤＧＨＣＳＷＰＬ

ヒトＰＤ－１ ＥＣＤのアミノ酸配列（配列番号１４）
ＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶ
ＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲ
ＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶ
ＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱ

カニクイザルＰＤ－１のアミノ酸配列（配列番号１５）
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＥＳＰＤＲＰＷＮＡＰＴＦＳＰＡ
ＬＬＬＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＡＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡ
ＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＲＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴ
ＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰ
ＲＰＡＧＱＦＱＡＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＱＧＴＩ
ＥＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＡＰ
ＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＬＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＰＲＰＬＲＰＥ
ＤＧＨＣＳＷＰＬ

カニクイザルＰＤ－１ ＥＣＤのアミノ酸配列（配列番号１６）
ＬＥＳＰＤＲＰＷＮＡＰＴＦＳＰＡＬＬＬＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＡＳＥＳＦＶ
ＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＲＬＰＮＧＲ
ＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶ
ＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱ

ヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列（配列番号１７）：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ
ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ
ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ
ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ
ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ
ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

野生型ヒトカッパのアミノ酸配列（配列番号１８）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱ
ＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥ
ＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

野生型ヒトラムダのアミノ酸配列（配列番号１９）
ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶ
ＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫ
ＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ

投薬計画は、最適な所望の反応（例えば、治療効果）を提供するように調整され得る。安全性および有効性を最適化するために処置投与量を滴定し得る。静脈内（ｉ．ｖ．）もしくは非静脈内投与、皮下（ｓ．ｃ．）局所もしくは全身、またはそれらの組み合わせのための投与スケジュールは、典型的には、単回ボーラス投薬または連続注入から１か月あたり複数回皮下投与、好ましくは、１日あたり１回以下、より好ましくは、１週間あたり１回以下、さらにより好ましくは２週間毎に１回以下、さらにより好ましくは、１か月あたり１回以下、または治療する医師および患者の状態によって示されるものまでの範囲であろう。投与量および頻度は、患者を治療する医師（複数可）によって決定され得る。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．１）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、２）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、ヒトＰＤ－１に結合する抗体であって、前記ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号５であり、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号６であり、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号７であり、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号８であり、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号９であり、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号１０であり、前記抗体が、ＩｇＧ１である、抗体。
２．前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号３であり、前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号４である、上記１に記載の抗体。
３．１）ＨＣと、２）ＬＣと、を含み、前記ＨＣのアミノ酸配列が、配列番号１であり、前記ＬＣのアミノ酸配列が、配列番号２である、上記２に記載の抗体。
４．２つのＨＣおよび２つのＬＣを含み、前記ＨＣの各々のアミノ酸配列が、配列番号１であり、前記ＬＣの各々のアミノ酸配列が、配列番号２である、上記３に記載の抗体。５．前記抗体が、自己免疫障害または移植拒絶のインビボモデルにおいて決定されるヒトＰＤ－１のアゴニストである、上記１～４のいずれかに記載の抗体。
６．前記インビボモデルが、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、または強皮症についてのモデルである、上記５に記載の抗体。
７．前記インビボモデルが、ＧＶＨＤおよび／またはループス腎炎についてのマウスモデルである、上記５に記載の抗体。
８．上記１～７のいずれかに記載の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
９．自己免疫疾患を治療することを必要とする患者に、有効量の上記１～７のいずれかに記載の抗体を投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法。
１０．前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、強皮症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧血、慢性アレルギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性鼻炎など）、クローン病、男性もしくは女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、ＰＭＲ、自然流産、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、慢性ウイルス感染症、または重症筋無力症である、上記９に記載の方法。
１１．前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、または強皮症である、上記１０に記載の方法。
１２．前記抗体が、自己免疫疾患の治療のために有効な別の治療剤と組み合わせて投与される、上記９～１１のいずれかに記載の方法。
１３．療法における使用のための、上記１～７のいずれかに記載の抗体。
１４．自己免疫疾患の治療における使用のための、上記１～７のいずれかに記載の抗体。１５．前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、強皮症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧血、慢性アレルギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性鼻炎など）、クローン病、男性もしくは女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、ＰＭＲ、自然流産、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、慢性ウイルス感染症、または重症筋無力症である、上記１４に記載の使用のための抗体。
１６．前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、または強皮症である、上記１５に記載の使用のための抗体。
１７．前記抗体が、自己免疫疾患の治療のために有効な別の治療剤と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与される、上記１４～１６のいずれかに記載の使用のための抗体。
１８．自己免疫疾患の治療のための医薬品の製造のための、上記１～７のいずれかに記載の抗体の使用。
１９．前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、強皮症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧血、慢性アレルギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性鼻炎など）、クローン病、男性もしくは女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、ＰＭＲ、自然流産、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、慢性ウイルス感染症、または重症筋無力症である、上記１８に記載の使用。
２０．前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、または強皮症である、上記１９に記載の使用。
２１．前記抗体が、自己免疫疾患の治療のために有効な別の治療剤と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与される、上記１８または１９に記載の使用。

Claims (21)

1. １）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、２）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、ヒトＰ
   Ｄ－１に結合する抗体であって、前記ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣ
   ＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、前
   記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号５であり、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が、
   配列番号６であり、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号７であり、前記ＬＣＤＲ
   １のアミノ酸配列が、配列番号８であり、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号９
   であり、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号１０であり、前記抗体が、ＩｇＧ１
   である、抗体。
2. 前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号３であり、前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が、
   配列番号４である、請求項１に記載の抗体。
3. １）ＨＣと、２）ＬＣと、を含み、前記ＨＣのアミノ酸配列が、配列番号１であり、前
   記ＬＣのアミノ酸配列が、配列番号２である、請求項２に記載の抗体。
4. ２つのＨＣおよび２つのＬＣを含み、前記ＨＣの各々のアミノ酸配列が、配列番号１で
   あり、前記ＬＣの各々のアミノ酸配列が、配列番号２である、請求項３に記載の抗体。
5. 前記抗体が、自己免疫障害または移植拒絶のインビボモデルにおいて決定されるヒトＰ
   Ｄ－１のアゴニストである、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。
6. 前記インビボモデルが、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、Ｍ
   Ｓ、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、ま
   たは強皮症についてのモデルである、請求項５に記載の抗体。
7. 前記インビボモデルが、ＧＶＨＤおよび／またはループス腎炎についてのマウスモデル
   である、請求項５に記載の抗体。
8. 請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希
   釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
9. 自己免疫疾患を治療することを必要とする患者に、有効量の請求項１～７のいずれか一
   項に記載の抗体を投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法。
10. 前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ
    、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、強皮
    症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天
    性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧血、慢性アレル
    ギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性鼻炎など）、クローン病、男性もしく
    は女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、ＰＭＲ、自然流産
    、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、慢性ウイルス感染
    症、または重症筋無力症である、請求項９に記載の方法。
11. 前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ
    、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、また
    は強皮症である、請求項１０に記載の方法。
12. 前記抗体が、自己免疫疾患の治療のために有効な別の治療剤と組み合わせて投与される
    、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 療法における使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
14. 自己免疫疾患の治療における使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体
    。
15. 前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ
    、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、強皮
    症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天
    性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧血、慢性アレル
    ギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性鼻炎など）、クローン病、男性もしく
    は女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、ＰＭＲ、自然流産
    、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、慢性ウイルス感染
    症、または重症筋無力症である、請求項１４に記載の使用のための抗体。
16. 前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ
    、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、また
    は強皮症である、請求項１５に記載の使用のための抗体。
17. 前記抗体が、自己免疫疾患の治療のために有効な別の治療剤と同時に、別々に、または
    逐次的に組み合わせて投与される、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の使用のため
    の抗体。
18. 自己免疫疾患の治療のための医薬品の製造のための、請求項１～７のいずれか一項に記
    載の抗体の使用。
19. 前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ
    、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、強皮
    症、セリアック病、アディソン病、橋本病、グレーブス病、萎縮性胃炎／悪性貧血、後天
    性性腺機能低下症／不妊症、副甲状腺機能低下症、クームス陽性溶血性貧血、慢性アレル
    ギー性疾患（喘息、花粉症、もしくはアレルギー性鼻炎など）、クローン病、男性もしく
    は女性不妊症、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、心筋炎、筋炎、ＰＭＲ、自然流産
    、白斑、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性膵炎、水疱性類天疱瘡、慢性ウイルス感染
    症、または重症筋無力症である、請求項１８に記載の使用。
20. 前記自己免疫疾患が、ＧＶＨＤ、固形臓器移植拒絶、血管炎、ＳＬＥ、Ｔ１ＤＭ、ＭＳ
    、ＧＣＡ、ＰｓＯ、ＰｓＡ、ＲＡ、ＩＢＤ、ＵＣ、ＡＳ、ＳｊＳ、自己免疫性肝炎、また
    は強皮症である、請求項１９に記載の使用。
21. 前記抗体が、自己免疫疾患の治療のために有効な別の治療剤と同時に、別々に、または
    逐次的に組み合わせて投与される、請求項１８または１９に記載の使用。