JP2022085810A - 老化、フリーラジカルによるダメージを防止する卵殻膜発酵液及びその製造方法 - Google Patents
老化、フリーラジカルによるダメージを防止する卵殻膜発酵液及びその製造方法 Download PDFInfo
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Abstract
Description
本実施例では、卵殻膜発酵液を提供し、その製造方法は、復元培養されたストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus) grx90を2%の播種量で、卵殻膜を含有する培地に播種して発酵させることと、発酵完了後、6000gで10分間遠心して、上澄み液を取り、卵殻膜発酵液とすることを含み、具体的な発酵条件としては、42℃で培地において24時間静置培養した。
本実施例では、卵殻膜発酵液の製造方法を提供し、当該方法は、復元培養されたストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus) grx90を2%の播種量で、卵殻膜を含有する培地に播種して発酵させることと、発酵完了後、6000gで10分間遠心して、上澄み液を取り、卵殻膜発酵液とすることを含み、具体的な発酵条件としては、36℃で培地において24時間静置培養した。
本実施例では、卵殻膜発酵液の製造方法を提供し、当該方法は、復元培養されたストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus) grx90を2%の播種量で、卵殻膜を含有する培地に播種して発酵させることと、発酵完了後、6000gを10分間遠心して、上澄み液を取り、卵殻膜発酵液とすることを含み、具体的な発酵条件としては、50℃で培地において12時間静置培養した。
本比較例では卵殻膜発酵液を提供し、その製造方法と実施例1の製造方法との差異は、ストレプトコッカス・サーモフィルス (Streptococcus thermophilus) grx90をストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus) CGMCC NO. 1.1855に置き替えたことだけであり、播種量は2%である。
本比較例では卵殻膜エキスを提供し、その製造方法は下記の通りである。
(1)卵殻膜を粉砕して、100メッシュのふるいを通過させ、卵殻膜の粉末を得た;
(2)ステップ(1)で得られた卵殻膜の粉末を1g取り、その含水量が20%になるように調整し、スクリュー回転速度を100r/minとし、温度140℃の条件でエクストルージョン・クッキング処理を行い、得られた卵殻膜処理物を粉砕して60メッシュのふるいを通過させ、希アルカリ溶液でアルカリ処理を行った;温度30℃の条件で、エクストルージョン・クッキング、粉砕、篩分けを経た卵殻膜粉末と0.1M NaOHとを、1:15(w/w)の固液比で均一に混合し、一定温度で3時間攪拌して、混合物を得た。
(3)ステップ(2)で得られた混合物の温度を55℃に、pHを10に調整した後、アルカリ性プロテアーゼを加えて酵素的加水分解を行った;アルカリ性プロテアーゼの使用量は卵殻膜1gに対して8000Uであり、一定温度55℃で攪拌して、酵素的分解を6時間行い、最後に、90℃の条件で10分間、酵素を不活性化させ、卵殻膜の酵素的分解液を得た(アルカリ性プロテアーゼ:酵素活性が20万U/gである);
(4)遠心機を用いて、ステップ(3)で得られた卵殻膜の酵素的分解液を6000r/minで20分間遠心し、不溶性沈殿物を除去した後、上澄み液を集めた;
(5)セラミック膜を用いて、ステップ(4)で得られた上澄み液を精密ろ過して除菌し、卵殻膜の酵素的分解液を得、その体積を50mLになるように調整し、卵殻膜エキスとした。
本比較例では卵殻膜発酵液を提供し、その製造方法と実施例1の製造方法との差異は、ストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus) grx90を受託番号CGMCC NO.1.15608のラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)に置き替えたことだけである。
本比較例では、ストレプトコッカス・サーモフィルスによる発酵液を提供し、その製造方法は、復元培養されたストレプトコッカス・サーモ フィルス(Streptococcus thermophilus) grx90を2%の播種量でMRS培地に播種して発酵させることと、発酵完了後、6000gで10分間遠心して上澄み液を取り、ストレプトコッカス・サーモフィルスによる発酵液とすることを含み、具体的な発酵条件としては、42℃で培地において24時間静置培養した。
実施例1~3及び比較例1~4の発酵液またはエキスをそれぞれ精製水で100倍に希釈して試料とし、下記の実験を行った。
0.05mol/LのpH8.2のTris-HCl緩衝液を4.5mL取り、25℃の恒温水槽にて20min予熱し、試料1mL及び25mmol/Lのピロガロール溶液0.4mLをさらに加えて均一に混合した後、25℃の水浴において5min反応させ、8mol/LのHCl 1.0mLを加えて反応を停止させた。Tris-HCl緩衝液を標準液として、299nmの吸光度を測定した。空白対照として、試料の代わりに、試料の溶媒(即ち、25mmol/Lのピロガロール溶液)1mLを用いた。下記の式により消去率(D)を算出した。
スーパーオキシドアニオンラジカル消去率=[1-(A2/A1)]×100%
ここで、A1が空白対照の吸光度であり、A2が試料の吸光度である。
2mmol/LのFeSO43mL、1mmol/LのH2O2 3mLを順に25mLの比色管に加え、均一に振り混ぜ、そして6mmol/Lのサリチル酸を3mL加え、均一に振り混ぜて、37℃の水浴で15min加熱した後取り出し、その吸光度を測定した。濃度が一定である被測定液をそれぞれ加え、均一に振り混ぜ、引き続き水浴で15min加熱した後取り出し、その吸光度を測定した。下記の式により試料のヒドロキシルラジカル(・OH)消去率を算出した。
ヒドロキシルラジカル消去率=[A1-A2-(A1-A3)]/A1×100%
ここで、A1が試料を加える前の反応系の吸光度であり、A2が・OHを試料で消去した後の反応系の吸光度であり、A3が・OHを空白対照で消去した後の体系の吸光度である。
本実験では、実施例1~3及び比較例1~3の卵殻膜発酵液またはエキスにおける低分子活性成分の含有量を分析し、具体的には、下記の通りである。
本実験例では、実施例1~3以及比較例1~4の発酵液またはエキスによる皮膚の滋養・保湿効果を評価し、具体的な方法は、下記の通りである。
Claims (10)
- ストレプトコッカス・サーモフィルスを用いて卵殻膜を発酵させることを含む、卵殻膜発酵液の製造方法。
- 前記ストレプトコッカス・サーモフィルスが、受託番号CGMCC No:3622のストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus) grx90である、請求項1に記載の卵殻膜発酵液の製造方法。
- 前記ストレプトコッカス・サーモフィルスを、卵殻膜を含有する培地に播種して発酵させることと、
発酵完了後、上澄み液を取り、卵殻膜発酵液とすること、
を含む請求項1または2に記載の卵殻膜発酵液の製造方法。 - 前記卵殻膜を含有する培地における卵殻膜の含有量が0.1wt%~15wt%であり、1wt%~5wt%であってもよい、請求項3に記載の卵殻膜発酵液の製造方法。
- 前記卵殻膜を含有する培地が、卵殻膜1wt%~5wt%、グルコース5wt%~30wt%、ペプトン5wt%~15wt%、牛肉エキス粉末5wt%~15wt%、酵母エキス粉末2wt%~8wt%、リン酸水素二カリウム0.1wt%~0.5wt%、硫酸マグネシウム0.1wt%~0.5wt%、硫酸マンガン0.1wt%~0.3wt%を含む、請求項3に記載の卵殻膜発酵液の製造方法。
- 前記発酵の温度が35~50℃であり、42℃であってもよい、請求項1~5のいずれか一項に記載の卵殻膜発酵液の製造方法。
- 請求項1~6のいずれか一項に記載の製造方法により得られる、卵殻膜発酵液。
- 老化及び/またはフリーラジカルによるダメージを防止する化粧品、医薬品または食品の製造における、請求項7に記載の卵殻膜発酵液の使用。
- 請求項7に記載の卵殻膜発酵液を主な活性成分または唯一の活性成分とする化粧品、医薬品または食品。
- 卵殻膜を原料とする卵殻膜発酵液の製造における、受託番号CGMCC No:3622のストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus) grx90の使用。
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