JP2022062113A5 - - Google Patents

Claims (20)

1. 配列番号１７２において記載されるポリペプチド配列を含む操作されたトランスアミナーゼ、あるいは
   ポリペプチド配列において少なくとも１つの置換または置換セットを含む配列番号１８、２０、３０、１１０または１１２において記載されるポリペプチド配列を含む操作されたトランスアミナーゼであって、
   前記ポリペプチド配列のアミノ酸位置は、配列番号１８、２０、３０、１１０または１１２に関して番号付けされており、
   ここで、前記ポリペプチド配列における前記少なくとも１つの置換または置換セットが、以下：
   ａ）配列番号１８に関して番号付けされた前記ポリペプチド配列のアミノ酸位置：Ｅ３１６ＷおよびＩ３１４Ｒ；
   ｂ）配列番号２０に関して番号付けされた前記ポリペプチド配列のアミノ酸位置：Ｉ３１４Ｒ／Ｍ３１６Ｗ／Ｃ４１４Ｖ／Ｇ４１６Ａ／Ｖ４２２ＡおよびＭ３１６Ｗ；
   ｃ）配列番号３０に関して番号付けされた前記ポリペプチド配列のアミノ酸位置：Ｒ１４６Ｈ；
   ｄ）配列番号１１０に関して番号付けされた前記ポリペプチド配列のアミノ酸位置：Ｃ２６０Ｔ／Ｓ２８６Ｇ／Ｃ４２４Ａ；
   ｅ）配列番号１１２に関して番号付けされた前記ポリペプチド配列のアミノ酸位置：Ｆ１９Ｈ／Ｋ８６Ｎ、Ｋ６６Ｐ、Ｇ３９４ＰおよびＹ１７Ｍ
   より選択される１つまたは複数の位置にある、操作されたトランスアミナーゼ。
2. 配列番号１７２において記載されるバリアントである操作されたトランスアミナーゼである、請求項１に記載の操作されたトランスアミナーゼ。
3. 配列番号１７２において記載されるポリペプチド配列を含む、請求項１に記載の操作されたトランスアミナーゼ。
4. 野生型Ｖ．ｆｌｕｖｉａｌｉｓトランスアミナーゼと比較して、少なくとも１つの改善された特性を含む、請求項１から３のいずれかに記載の操作されたトランスアミナーゼ。
5. 前記改善された特性が、基質に対する改善された活性を含む、請求項４に記載の操作されたトランスアミナーゼ。
6. 前記基質が化合物（１）
   

   

   
   を含む、請求項５に記載の操作されたトランスアミナーゼ。
7. 前記改善された特性が、改善された熱安定性を含む、請求項４から６のいずれかに記載の操作されたトランスアミナーゼ。
8. 精製される、請求項１から６のいずれかに記載の操作されたトランスアミナーゼ。
9. 請求項１から８のいずれかに記載の操作されたトランスアミナーゼを含む、組成物。
10. 請求項１から８のいずれかに記載の少なくとも１つの操作されたトランスアミナーゼをコードする、ポリヌクレオチド。
11. 少なくとも１つの操作されたトランスアミナーゼをコードするポリヌクレオチドであって、配列番号１７１において記載される配列を含む、ポリヌクレオチド。
12. 配列番号１７２において記載される配列を含む少なくとも１つの操作されたトランスアミナーゼをコードするポリヌクレオチド。
13. 制御配列に作動可能に連結されている、請求項１１または１２に記載のポリヌクレオチド。
14. コドン最適化されている、請求項１０から１３のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
15. 請求項１０から１４のいずれかに記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
16. 請求項１５に記載の少なくとも１つの発現ベクターを含む宿主細胞。
17. 請求項１０から１４のいずれかに記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
18. 宿主細胞において操作されたトランスアミナーゼを生成する方法であって、請求項１６および／または１７に記載の宿主細胞を、少なくとも１つの操作されたトランスアミナーゼが生成されるような適切な条件下で培養するステップを含む、方法。
19. 少なくとも１つの操作されたトランスアミナーゼを培養物および／または前記宿主細胞から回収するステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記少なくとも１つの操作されたトランスアミナーゼを精製するステップをさらに含む、請求項１８または１９に記載の方法。