JP2022031653A - Cea、muc1およびtertを含む免疫原性組成物 - Google Patents
Cea、muc1およびtertを含む免疫原性組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022031653A JP2022031653A JP2021175480A JP2021175480A JP2022031653A JP 2022031653 A JP2022031653 A JP 2022031653A JP 2021175480 A JP2021175480 A JP 2021175480A JP 2021175480 A JP2021175480 A JP 2021175480A JP 2022031653 A JP2022031653 A JP 2022031653A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- nucleotide sequence
- amino acid
- polypeptide
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 325
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 107
- 101100346932 Mus musculus Muc1 gene Proteins 0.000 title description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 536
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 465
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 437
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 146
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 138
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 81
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 53
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 669
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 669
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 308
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 308
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 290
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 272
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 272
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 130
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 89
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 83
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 70
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 66
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 30
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 22
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims description 21
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 20
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 18
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 16
- -1 IDO1 inhibitor Substances 0.000 claims description 13
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 11
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 claims description 11
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 11
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 10
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 229940043367 IDO1 inhibitor Drugs 0.000 claims description 9
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 8
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000012270 PD-1 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 239000012668 PD-1-inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 239000012271 PD-L1 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 229940121655 pd-1 inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 229940121656 pd-l1 inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 239000012275 CTLA-4 inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000017891 HER2 positive breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000035327 Oestrogen receptor positive breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007281 estrogen-receptor positive breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 66
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 64
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 64
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 abstract description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 272
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 271
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 214
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 102
- 101000655352 Homo sapiens Telomerase reverse transcriptase Proteins 0.000 description 90
- 102100032938 Telomerase reverse transcriptase Human genes 0.000 description 89
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 57
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 53
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 47
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 47
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 42
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 42
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 39
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 39
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 37
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 35
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 32
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 32
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 26
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 25
- 101100346929 Homo sapiens MUC1 gene Proteins 0.000 description 24
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 24
- 102000057860 human MUC1 Human genes 0.000 description 24
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 22
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 22
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 18
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 18
- 230000004044 response Effects 0.000 description 17
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 17
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 17
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 16
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 15
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 14
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 14
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 13
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 13
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 13
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 13
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 13
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 12
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 11
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 11
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 11
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 10
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 10
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 9
- 101100259716 Arabidopsis thaliana TAA1 gene Proteins 0.000 description 8
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 8
- 101100259832 Oryza sativa subsp. japonica TAR2 gene Proteins 0.000 description 8
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 8
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 8
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 8
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 8
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical class N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 8
- OSBSFAARYOCBHB-UHFFFAOYSA-N tetrapropylammonium Chemical compound CCC[N+](CCC)(CCC)CCC OSBSFAARYOCBHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 8
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 7
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 7
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 7
- 125000002987 valine group Chemical class [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 6
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 6
- 102000003998 progesterone receptors Human genes 0.000 description 6
- 108090000468 progesterone receptors Proteins 0.000 description 6
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 6
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 6
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical class O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 5
- 102100031132 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 5
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 5
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 5
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 5
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 5
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 210000005008 immunosuppressive cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 5
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 5
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 4
- 241000214054 Equine rhinitis A virus Species 0.000 description 4
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 description 4
- 229940022005 RNA vaccine Drugs 0.000 description 4
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 4
- 150000002244 furazanes Chemical class 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 4
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 4
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 4
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 4
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940123189 CD40 agonist Drugs 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 3
- 102100040061 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Human genes 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 3
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 201000011243 gastrointestinal stromal tumor Diseases 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 3
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 241000317943 Acute bee paralysis virus Species 0.000 description 2
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010062802 CD66 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102100024533 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 241001217856 Chimpanzee adenovirus Species 0.000 description 2
- 241000710127 Cricket paralysis virus Species 0.000 description 2
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 2
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 208000014770 Foot disease Diseases 0.000 description 2
- 102100035233 Furin Human genes 0.000 description 2
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 2
- 206010051066 Gastrointestinal stromal tumour Diseases 0.000 description 2
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 101001037256 Homo sapiens Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000617996 Human rotavirus Species 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 2
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Chemical group OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical group O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- 102000011016 Type 5 Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases Human genes 0.000 description 2
- 108010037581 Type 5 Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases Proteins 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 2
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 description 2
- 229960003005 axitinib Drugs 0.000 description 2
- RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N axitinib Chemical compound CNC(=O)C1=CC=CC=C1SC1=CC=C(C(\C=C\C=2N=CC=CC=2)=NN2)C2=C1 RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005773 cancer-related death Effects 0.000 description 2
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 2
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 2
- 108700020302 erbB-2 Genes Proteins 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 2
- KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N imatinib Chemical compound C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 2
- YGPSJZOEDVAXAB-UHFFFAOYSA-N kynurenine Chemical compound OC(=O)C(N)CC(=O)C1=CC=CC=C1N YGPSJZOEDVAXAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000003909 protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- BNRNXUUZRGQAQC-UHFFFAOYSA-N sildenafil Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(C)CC1 BNRNXUUZRGQAQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 229960000835 tadalafil Drugs 0.000 description 2
- IEHKWSGCTWLXFU-IIBYNOLFSA-N tadalafil Chemical compound C1=C2OCOC2=CC([C@@H]2C3=C([C]4C=CC=CC4=N3)C[C@H]3N2C(=O)CN(C3=O)C)=C1 IEHKWSGCTWLXFU-IIBYNOLFSA-N 0.000 description 2
- UXXQOJXBIDBUAC-UHFFFAOYSA-N tandutinib Chemical compound COC1=CC2=C(N3CCN(CC3)C(=O)NC=3C=CC(OC(C)C)=CC=3)N=CN=C2C=C1OCCCN1CCCCC1 UXXQOJXBIDBUAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 229960000241 vandetanib Drugs 0.000 description 2
- UHTHHESEBZOYNR-UHFFFAOYSA-N vandetanib Chemical compound COC1=CC(C(/N=CN2)=N/C=3C(=CC(Br)=CC=3)F)=C2C=C1OCC1CCN(C)CC1 UHTHHESEBZOYNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- COWAQTUWATVJAN-MRVPVSSYSA-N (3R)-3-(5-chloro-1H-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound ClC=1C=C2C(=CNC2=CC1)[C@@H]1C(NC(C1)=O)=O COWAQTUWATVJAN-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- MXKLDYKORJEOPR-MRVPVSSYSA-N (3R)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound FC=1C=C2C(=CNC2=CC1)[C@@H]1C(NC(C1)=O)=O MXKLDYKORJEOPR-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- VNQNEQQYAIPCAQ-MRVPVSSYSA-N (3r)-3-(1h-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C[C@@H]1C1=CNC2=CC=CC=C12 VNQNEQQYAIPCAQ-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VNQNEQQYAIPCAQ-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound O=C1NC(=O)CC1C1=CNC2=CC=CC=C12 VNQNEQQYAIPCAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGTCROZDHDSNIO-UHFFFAOYSA-N 3-(4-quinolinylmethylamino)-N-[4-(trifluoromethoxy)phenyl]-2-thiophenecarboxamide Chemical compound C1=CC(OC(F)(F)F)=CC=C1NC(=O)C1=C(NCC=2C3=CC=CC=C3N=CC=2)C=CS1 FGTCROZDHDSNIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASSGNCUADIFTFP-UHFFFAOYSA-N 3-(5,6-difluoro-1h-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound C1=2C=C(F)C(F)=CC=2NC=C1C1CC(=O)NC1=O ASSGNCUADIFTFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBVXHYJYKXXPET-UHFFFAOYSA-N 3-(5-bromo-1h-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound C12=CC(Br)=CC=C2NC=C1C1CC(=O)NC1=O WBVXHYJYKXXPET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COWAQTUWATVJAN-UHFFFAOYSA-N 3-(5-chloro-1h-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2NC=C1C1CC(=O)NC1=O COWAQTUWATVJAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MXKLDYKORJEOPR-UHFFFAOYSA-N 3-(5-fluoro-1h-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound C12=CC(F)=CC=C2NC=C1C1CC(=O)NC1=O MXKLDYKORJEOPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHVPBZIGWCANAK-UHFFFAOYSA-N 3-(6-chloro-1h-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione Chemical compound C=1NC2=CC(Cl)=CC=C2C=1C1CC(=O)NC1=O AHVPBZIGWCANAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIEAVVIJPFEHCX-UHFFFAOYSA-N 5-ethyl-2-[5-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]sulfonyl-2-propoxyphenyl]-7-propyl-4a,7a-dihydro-3H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one Chemical compound CCCOC1=CC=C(C=C1C1=NC2C(N(CC)C=C2CCC)C(=O)N1)S(=O)(=O)N1CCN(CCO)CC1 YIEAVVIJPFEHCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical compound C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 1
- OONFNUWBHFSNBT-HXUWFJFHSA-N AEE788 Chemical compound C1CN(CC)CCN1CC1=CC=C(C=2NC3=NC=NC(N[C@H](C)C=4C=CC=CC=4)=C3C=2)C=C1 OONFNUWBHFSNBT-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- GBJVVSCPOBPEIT-UHFFFAOYSA-N AZT-1152 Chemical compound N=1C=NC2=CC(OCCCN(CC)CCOP(O)(O)=O)=CC=C2C=1NC(=NN1)C=C1CC(=O)NC1=CC=CC(F)=C1 GBJVVSCPOBPEIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101100075831 Caenorhabditis elegans mab-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100025473 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Human genes 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000970 DNA cross-linking effect Effects 0.000 description 1
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- ZBNZXTGUTAYRHI-UHFFFAOYSA-N Dasatinib Chemical compound C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1Cl ZBNZXTGUTAYRHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 101001065501 Escherichia phage MS2 Lysis protein Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101150054472 HER2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 101000914326 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000576802 Homo sapiens Mesothelin Proteins 0.000 description 1
- 101001136592 Homo sapiens Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 1
- 101100313319 Homo sapiens TERT gene Proteins 0.000 description 1
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 101710120843 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 241000725296 JDV virus Species 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical group OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 1
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 description 1
- 239000002067 L01XE06 - Dasatinib Substances 0.000 description 1
- 239000002136 L01XE07 - Lapatinib Substances 0.000 description 1
- UIARLYUEJFELEN-LROUJFHJSA-N LSM-1231 Chemical compound C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3C(=O)NCC3=C2C2=CC=CC=C2N1[C@]1(C)[C@](CO)(O)C[C@H]4O1 UIARLYUEJFELEN-LROUJFHJSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 101150114927 MUC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000001396 Malus hupehensis Species 0.000 description 1
- 235000005057 Malus hupehensis Nutrition 0.000 description 1
- 102100025096 Mesothelin Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 101800001322 Mucin-1 subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 102400001154 Mucin-1 subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- WREVYQNUWGYMNA-UHFFFAOYSA-N NS(=O)(=O)NCCNC1=CN(ON1O)C1=CC(=C(C=C1)F)C#N Chemical compound NS(=O)(=O)NCCNC1=CN(ON1O)C1=CC(=C(C=C1)F)C#N WREVYQNUWGYMNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STKLDOOUJPRQFP-UHFFFAOYSA-N NS(=O)(=O)NCCNC1=CN(ON1O)C1=CC(=C(C=C1)F)Cl Chemical compound NS(=O)(=O)NCCNC1=CN(ON1O)C1=CC(=C(C=C1)F)Cl STKLDOOUJPRQFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000012661 PARP inhibitor Substances 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 244000203593 Piper nigrum Species 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 229940121906 Poly ADP ribose polymerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000283080 Proboscidea <mammal> Species 0.000 description 1
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- SECKRCOLJRRGGV-UHFFFAOYSA-N Vardenafil Chemical compound CCCC1=NC(C)=C(C(N=2)=O)N1NC=2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(CC)CC1 SECKRCOLJRRGGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 201000008395 adenosquamous carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000004397 aminosulfonyl group Chemical group NS(=O)(=O)* 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940045988 antineoplastic drug protein kinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 229960000307 avanafil Drugs 0.000 description 1
- WEAJZXNPAWBCOA-INIZCTEOSA-N avanafil Chemical compound C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1CNC1=NC(N2[C@@H](CCC2)CO)=NC=C1C(=O)NCC1=NC=CC=N1 WEAJZXNPAWBCOA-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229940043378 cyclin-dependent kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960002448 dasatinib Drugs 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- MVCOAUNKQVWQHZ-UHFFFAOYSA-N doramapimod Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1N1C(NC(=O)NC=2C3=CC=CC=C3C(OCCN3CCOCC3)=CC=2)=CC(C(C)(C)C)=N1 MVCOAUNKQVWQHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 229960002584 gefitinib Drugs 0.000 description 1
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002411 imatinib Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N lapatinib Chemical compound O1C(CNCCS(=O)(=O)C)=CC=C1C1=CC=C(N=CN=C2NC=3C=C(Cl)C(OCC=4C=C(F)C=CC=4)=CC=3)C2=C1 BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- MVYUCRDXZXLFSB-UHFFFAOYSA-N lodenafil Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N=2)=O)=C1NC=2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N(CC1)CCN1CCOC(=O)OCCN(CC1)CCN1S(=O)(=O)C(C=1)=CC=C(OCC)C=1C(N1)=NC(=O)C2=C1C(CCC)=NN2C MVYUCRDXZXLFSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- BMGQWWVMWDBQGC-IIFHNQTCSA-N midostaurin Chemical compound CN([C@H]1[C@H]([C@]2(C)O[C@@H](N3C4=CC=CC=C4C4=C5C(=O)NCC5=C5C6=CC=CC=C6N2C5=C43)C1)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 BMGQWWVMWDBQGC-IIFHNQTCSA-N 0.000 description 1
- 229950010895 midostaurin Drugs 0.000 description 1
- 229950002245 mirodenafil Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- RAHBGWKEPAQNFF-UHFFFAOYSA-N motesanib Chemical compound C=1C=C2C(C)(C)CNC2=CC=1NC(=O)C1=CC=CN=C1NCC1=CC=NC=C1 RAHBGWKEPAQNFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 1
- LBWFXVZLPYTWQI-IPOVEDGCSA-N n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(z)-(5-fluoro-2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C LBWFXVZLPYTWQI-IPOVEDGCSA-N 0.000 description 1
- ZAJXXUDARPGGOC-UHFFFAOYSA-N n-[4-(3-chloro-4-fluoroanilino)-7-[3-methyl-3-(4-methylpiperazin-1-yl)but-1-ynyl]quinazolin-6-yl]prop-2-enamide Chemical compound C1CN(C)CCN1C(C)(C)C#CC1=CC2=NC=NC(NC=3C=C(Cl)C(F)=CC=3)=C2C=C1NC(=O)C=C ZAJXXUDARPGGOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- HHZIURLSWUIHRB-UHFFFAOYSA-N nilotinib Chemical compound C1=NC(C)=CN1C1=CC(NC(=O)C=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)=CC(C(F)(F)F)=C1 HHZIURLSWUIHRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 201000007283 progesterone-receptor positive breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 208000014212 sarcomatoid carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 229960003310 sildenafil Drugs 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- IVDHYUQIDRJSTI-UHFFFAOYSA-N sorafenib tosylate Chemical compound [H+].CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1.C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 IVDHYUQIDRJSTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950007213 spartalizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 1
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229940034785 sutent Drugs 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940066453 tecentriq Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229950004288 tosilate Drugs 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 229940094060 tykerb Drugs 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229960000438 udenafil Drugs 0.000 description 1
- IYFNEFQTYQPVOC-UHFFFAOYSA-N udenafil Chemical compound C1=C(C=2NC=3C(CCC)=NN(C)C=3C(=O)N=2)C(OCCC)=CC=C1S(=O)(=O)NCCC1CCCN1C IYFNEFQTYQPVOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229950005972 urelumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 229960002381 vardenafil Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 229940023148 viral-based vaccine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055760 yervoy Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12N9/1276—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. reverse transcriptase or telomerase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12Y207/07049—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. telomerase or reverse-transcriptase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001157—Telomerase or TERT [telomerase reverse transcriptase]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
- A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Abstract
【課題】免疫療法に関し、新生物障害を処置または予防するためのワクチンおよび方法を提供する。【解決手段】(a)単離された免疫原性CEAポリペプチド;(b)(i)免疫原性CEAポリペプチド、(ii)免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性MUC1ポリペプチド、(iii)免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチド、または(iv)免疫原性CEAポリペプチド、免疫原性MUC1ポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチドをコードする単離された核酸分子;(c)単離された核酸分子を含む組成物;ならびに(d)免疫原性CEAポリペプチド、核酸分子および組成物の使用に関連する方法を提供する。【選択図】なし
Description
関連出願の参照
本願は、2017年7月11日に出願された米国特許仮出願第62/531,227号、および2018年6月7日に出願された米国特許仮出願第62/682,044号の利益を主張する。前述の(forgoing)出願のそれぞれの内容全体を参照により本明細書に組み込む。
本願は、2017年7月11日に出願された米国特許仮出願第62/531,227号、および2018年6月7日に出願された米国特許仮出願第62/682,044号の利益を主張する。前述の(forgoing)出願のそれぞれの内容全体を参照により本明細書に組み込む。
配列表の参照
本願は、電子フォーマットの配列表と共に出願されている。配列表は、2018年6月8日に作成された、963KBのサイズを有する、「PC72354A_FF_SeqList_ST25.txt」と題する.txtフォーマットのファイルとして提供される。.txtファイルに含有される配列表は、本明細書の一部であり、その全体(entity)を参照により本明細書に組み込む。
本願は、電子フォーマットの配列表と共に出願されている。配列表は、2018年6月8日に作成された、963KBのサイズを有する、「PC72354A_FF_SeqList_ST25.txt」と題する.txtフォーマットのファイルとして提供される。.txtファイルに含有される配列表は、本明細書の一部であり、その全体(entity)を参照により本明細書に組み込む。
発明の分野
本発明は、全般的には、免疫療法に関し、具体的には、新生物障害を処置または予防するためのワクチンおよび方法に関する。
本発明は、全般的には、免疫療法に関し、具体的には、新生物障害を処置または予防するためのワクチンおよび方法に関する。
がんは、世界中で死亡率の主要な原因である。がんは、膵臓、乳房、肺、胃、結腸および直腸等、種々の臓器および組織において発生し得る。膵がんは、米国におけるがんによる死亡の4番目に多い原因である。膵がんは、膵臓の外分泌または内分泌成分において発生し得る。外分泌がんは、(1)ずば抜けて最も一般的な型である膵腺癌、(2)外分泌膵がんの5%を占める腺房細胞癌、(3)膵がんの1%を占める嚢胞腺癌、ならびに(4)膵芽腫、腺扁平上皮癌、印環細胞癌、肝様癌、コロイド癌、未分化癌、および破骨細胞様巨細胞による未分化癌等の他の希少な形態のがんを含む。
乳がん(BrC)は、アメリカ人女性の間における別の一般的ながんであり、女性におけるがんによる死亡の2番目に多い原因である。エストロゲン受容体(ER)、プロゲステロン受容体(PR)およびヒト上皮増殖因子受容体2(HER2)等の様々な腫瘍マーカーに基づき、乳がんは、(1)ホルモン受容体陽性がん(がん細胞が、エストロゲン受容体またはプロゲステロン受容体のいずれかを含有する);(2)ホルモン受容体陰性がん(がん細胞が、エストロゲン受容体またはプロゲステロン受容体のどちらも有しない);(3)HER2/neu陽性(過剰なHER2/neuタンパク質またはHER2/neu遺伝子の余分なコピーを有するがん);(4)HER2/neu陰性がん(がんが、過剰なHER2/neuを有しない);(5)三重陰性がん(乳がん細胞が、エストロゲン受容体もプロゲステロン受容体も過剰なHER2も有しない);および(6)三重陽性がん(がんが、エストロゲン受容体陽性、プロゲステロン受容体陽性であり、過多のHER2を有する)等の主要なサブタイプに分類することができる。
肺がんは、がんによる死亡全体の4分の1超を占め、世界中でがん関連死亡率の主要な原因である。症例のおよそ85%は、非小細胞肺がん(NSCLC)として組織学的に分類される。NSCLCは、扁平細胞(類表皮)癌、腺癌、大細胞(未分化)癌、腺扁平上皮癌および肉腫様癌等のいくつかのサブタイプにさらに分類され得る。肺がんの2番目に多い型は、小細胞肺がん(SCLC)であり、これは、全肺がんの約10%~15%を占める。
胃がん(GaC)は、世界でがん関連死の3番目に多い原因である。胃がんの約90~95%は、腺癌である;他のより一般的でない型は、リンパ腫、GISTおよびカルチノイド腫瘍を含む。
結腸直腸がん(CRC)もまた、米国におけるがん関連死の主要な原因である。腺癌は、CRCの最も一般的な型であり、これは、結腸直腸がんの95%超を占める。CRCの他のより一般的でない型は、カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍(GIST)、リンパ腫および肉腫を含む。
がん管理の伝統的レジメンは、循環および固形がんの選択的な群の管理に成功した。しかし、がんの多くの型は、伝統的なアプローチに抵抗性である。近年、がんのための免疫療法、特に、がんワクチンおよび抗体療法が探索された。がん免疫療法の1つのアプローチは、標的がん細胞上の腫瘍関連抗原(TAA)に対する活性全身性免疫応答を生成するための免疫原を投与することを含む。多数の腫瘍関連抗原が同定され、それらの抗原の多くが、がんの処置または予防のためのウイルス、細菌、タンパク質、ペプチドまたはDNAに基づくワクチンとして探索されたが、大部分の臨床治験は、現在までに、治療用製品を産生することができていない。したがって、がんの処置または予防において使用することができる免疫原またはワクチンの必要がある。
本開示は、腫瘍関連抗原MUC1、CEAまたはTERTに由来する免疫原性ポリペプチド、かかる免疫原性ポリペプチドをコードする核酸分子、ワクチン等のかかる免疫原性ポリペプチドまたは核酸分子を含む組成物、ならびにポリペプチド、核酸分子および組成物の使用に関する。
ヒトムチン1タンパク質(MUC1;エピシアリン(episialin)、PEM、H23Ag、EMA、CA15-3およびMCAとしても知られる)は、単純上皮および腺上皮の頂端表面に発現される多形性膜貫通糖タンパク質である。MUC1遺伝子は、シグナルペプチド配列を含む単一のポリペプチド鎖前駆体をコードする。翻訳直後に、シグナルペプチド配列は除去され、MUC1前駆体の残っている部分は、2個のペプチド断片へとさらに切断される:長い方のN末端サブユニット(MUC1-NまたはMUC1α)および短い方のC末端サブユニット(MUC1-CまたはMUC1β)。成熟MUC1は、安定した水素結合を介して会合したMUC1-NおよびMUC1-Cを含む。細胞外ドメインであるMUC1-Nは、20アミノ酸残基の可変数タンデム反復(VNTR)を含有し、反復の数は、異なる個体において20から125に変動する。可変数タンデム反復で構成されるMUC1タンパク質の領域は、本開示において、「VNTR領域」とも称される。MUC1-Cは、短い細胞外領域(およそ53アミノ酸)、膜貫通ドメイン(およそ28アミノ酸)および細胞質尾部(およそ72アミノ酸)を含有する。MUC1の細胞質尾部(MUC1-CT)は、増殖因子受容体および細胞内キナーゼによってリン酸化される、高度に保存されたセリンおよびチロシン残基を含有する。ヒトMUC1は、MUC1 RNA選択的スプライシングの異なる型に起因する複数のアイソフォームで存在する。全長ヒトMUC1アイソフォーム1タンパク質前駆体(アイソフォーム1、Uniprot P15941-1)のアミノ酸配列は、配列番号1(「MUC1参照ポリペプチド」)に提示される。ヒトMUC-1の少なくとも16種の他のアイソフォームが、現在までに報告されており(Uniprot P15941-2からP15941-17)、これらは、アイソフォーム1の配列と比較して様々な挿入、欠失または置換を含む。これらのアイソフォームは、アイソフォーム2、3、4、5、6、Y、8、9、F、Y-LSP、S2、M6、ZD、T10、E2およびJ13として知られる(それぞれUniprot P15941-2からP15941-17)。全長ヒトMUC1アイソフォーム1前駆体タンパク質は、1255アミノ酸からなり、これは、アミノ酸1~23にシグナルペプチド配列を含む。成熟MUC1タンパク質のMUC1-NおよびMUC1-Cドメインは、それぞれアミノ酸24~1097および1098~1255からなる。
癌胎児抗原関連細胞接着分子(CEACAMとしても知られる)は、免疫グロブリン(Ig)スーパーファミリー群における糖タンパク質の群である。構造上、CEACAM群は、単一N末端ドメイン、およびC2型Igドメインと同様の最大6個のジスルフィド連結された内部ドメインからなる。この群は、12種のタンパク質(CEACAM1、3~8、16、18~21)を含有し、CEACAM1、CEACAM5およびCEACAM6等、そのうちいくつかは、メラノーマ、肺、結腸直腸および膵がん等の様々ながんにおける妥当な臨床マーカーおよび有望な治療標的とみなされた。CEAとしても本明細書で称され当技術分野で公知のCEACAM5の過剰発現は、ヒト癌の大部分にあることが判明した。CEACAM5は、(1)シグナルペプチド(アミノ酸1~34);(2)Nドメイン(アミノ酸35~144);(3)A1(アミノ酸146~237)、B1(アミノ酸238~322)、A2(アミノ酸324~415)およびB2(アミノ酸416~498)、A3(アミノ酸502~593)およびB3(アミノ酸594~677)と命名された6個の定常C2様ドメインを含む3個の反復単位;ならびに(4)プロペプチド(アミノ酸686~702)からなる702アミノ酸前駆体タンパク質として発現される。シグナルペプチドは、細胞表面への輸送の際に成熟タンパク質から切断除去される。全長ヒトCEA前駆体タンパク質のアミノ酸配列は、UniProt(受託番号P06731)で利用でき、本明細書において、配列番号2(「CEA参照ポリペプチド」)においても表記される。
テロメラーゼ逆転写酵素(またはTERT)は、テロメア反復TTAGGGの付加によるテロメア端の維持に関与するリボヌクレオタンパク質ポリメラーゼであるテロメラーゼの触媒成分である。TERTに加えて、テロメラーゼは、テロメア反復の鋳型として機能するRNA成分も含む。ヒトTERT遺伝子は、1132アミノ酸タンパク質をコードする。選択的スプライシングに起因するヒトTERTのいくつかのアイソフォームが存在する。アイソフォーム1、アイソフォーム2、アイソフォーム3およびアイソフォーム4のアミノ酸配列は、Uniprotで利用できる(<www.uniprot.org>;それぞれUniprot識別子O14746-1、O14746-2、O14746-3およびO14746-4)。ヒト全長TERTアイソフォーム1タンパク質(アイソフォーム1、Genbank AAD30037、Uniprot O14746-1)のアミノ酸配列は、本明細書において、配列番号3(「TERT参照ポリペプチド」)においても提示される。TERTアイソフォーム1(O14746-1)と比較して、アイソフォーム2(O14746-2)は、アミノ酸764~807の置き換え(STLTDLQPYM...LNEASSGLFD→LRPVPGDPAG...AGRAAPAFGG)およびC末端アミノ酸808~1132の欠失を有し、アイソフォーム3(O14746-3)は、アミノ酸885~947の欠失を有し、アイソフォーム4(O14746-4)は、アミノ酸711~722および808~1132の欠失ならびにアミノ酸764~807の置き換え(STLTDLQPYM...LNEASSGLFD→LRPVPGDPAG...AGRAAPAFGG)を有する。
一部の態様では、本開示は、例えば、in vivoでの(例えば、ヒトを含む動物における)免疫応答の誘発において、またはがんの処置のためのワクチンを含む医薬組成物における成分としての使用に有用な、腫瘍関連抗原(TAA)MUC1、CEAおよびTERTに由来する単離された免疫原性ポリペプチドを提供する。
他の態様では、本開示は、本開示によって提供される1種または複数の免疫原性ポリペプチドをそれぞれコードする核酸分子(「抗原構築物」とも称される)を提供する。一部の実施形態では、本開示は、2、3種以上の免疫原性TAAポリペプチドをそれぞれコードする多重抗原核酸構築物を提供する。
本開示はまた、本開示によって提供される1種または複数の核酸分子を含有するベクターを提供する。ベクターは、核酸分子によってコードされる免疫原性TAAポリペプチドのクローニングもしくは発現に、または宿主細胞へのまたは宿主動物もしくはヒトへのワクチン等の組成物中の核酸分子の送達に有用である。一態様では、本開示はまた、ワクチンとしてのまたはワクチンにおける使用のための、本開示によって提供される1種または複数の核酸分子を含有するベクターを提供する。
一部のさらなる態様では、本開示は、1種もしくは複数の免疫原性ポリペプチド、免疫原性TAAポリペプチドをコードする単離された抗原構築物、または1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物を含有するベクターもしくはプラスミドを含む、組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物は、マウス、イヌ、サルまたはヒト等の哺乳動物におけるTAAに対する免疫応答の誘発に有用な免疫原性組成物である。一部の実施形態では、組成物は、ヒト等の哺乳動物の免疫化に、異常細胞増殖の阻害に、がんの発症に対する保護の達成に(予防薬として使用)、またはがん、特に、膵、卵巣、肺、結腸直腸、胃および乳がん等のTAA過剰発現に関連する障害の処置に(治療薬として使用)有用なワクチン組成物である。
一部のさらなる態様では、本開示は、マウス、イヌ、サルまたはヒト等の哺乳動物におけるTAAに対する免疫応答を誘発する方法における使用のための、1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする単離された核酸分子、または本明細書に開示される1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子を含有するベクター(ウイルスベクターおよびプラスミドベクター等)を提供する。一部のさらなる態様では、本開示は、哺乳動物における異常細胞増殖を阻害する方法における使用のための、1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする単離された核酸分子、または本明細書に開示される1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子を含有するベクター(ウイルスベクターおよびプラスミドベクター等)を提供する。一部のさらなる態様では、本開示は、がんの発症に対する保護を達成する方法における使用のための、がんの処置のための、または哺乳動物におけるTAAの過剰発現に関連する障害の処置のための、1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする単離された核酸分子、または本明細書に開示される1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子を含有するベクター(ウイルスベクターおよびプラスミドベクター等)を提供する。
一部のさらなる態様では、本開示は、抗がん剤としての使用のための、1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする単離された核酸分子、または本明細書に開示される1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子を含有するベクターもしくはプラスミドを提供する。一部の特異的な態様では、がんは、膵、卵巣、肺、結腸直腸、胃または乳がんである。
また他の態様では、本開示は、免疫原性TAAポリペプチド、単離された核酸分子および組成物を使用する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるTAAに対する免疫応答を誘発する方法であって、標的TAAに対して免疫原性である本発明によって提供されるポリペプチドの有効量、かかる免疫原性ポリペプチドをコードする単離された核酸分子、またはかかる免疫原性ポリペプチドもしくはかかる免疫原性ポリペプチドをコードする単離された核酸分子を含む組成物の有効量を哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供する。ポリペプチドまたは核酸組成物は、1種または複数のアジュバントまたは免疫モジュレーターと共に使用することができる。
また他の態様では、本開示は、医薬としての使用のための、本明細書に開示される免疫原性TAAポリペプチド、単離された核酸分子および組成物を提供する。ポリペプチドまたは核酸組成物は、1種または複数のアジュバントまたは免疫モジュレーターと共に使用することができる。
本発明のある態様では、番号を付けた条項によってそれぞれ記載されている次の実施形態が企図される:
1.本明細書に開示される免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む抗原構築物。
2.本明細書に開示される免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、条項1に記載の抗原構築物。
3.本明細書に開示される免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、条項1または2に記載の抗原構築物。
4.本明細書に開示される免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、および本明細書に開示される免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、条項1に記載の抗原構築物。
5.本明細書に開示されるスペーサーヌクレオチド配列をさらに含む、条項2、3または4のいずれか一項に記載の抗原構築物。
6.スペーサーヌクレオチド配列が、2Aペプチドをコードする、条項5に記載の抗原構築物。
7.スペーサーヌクレオチド配列が、EMC2A、ERA2A、ERB2AおよびT2Aからなる群から選択される2Aペプチドをコードする、条項5に記載の抗原構築物。
8.免疫原性CEAポリペプチドが、
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(2)配列番号15のアミノ酸配列もしくは配列番号15のアミノ酸4~704を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(3)配列番号17のアミノ酸配列もしくは配列番号17のアミノ酸4~526を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(4)配列番号19の配列もしくは配列番号19のアミノ酸4~468を含むもしくはこれからなるポリペプチド、または
(5)上述の(1)~(4)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、条項1~7のいずれか一項に記載の抗原構築物。
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(2)配列番号15のアミノ酸配列もしくは配列番号15のアミノ酸4~704を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(3)配列番号17のアミノ酸配列もしくは配列番号17のアミノ酸4~526を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(4)配列番号19の配列もしくは配列番号19のアミノ酸4~468を含むもしくはこれからなるポリペプチド、または
(5)上述の(1)~(4)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、条項1~7のいずれか一項に記載の抗原構築物。
9.免疫原性TERTポリペプチドが、
(1)配列番号9のアミノ酸配列または配列番号9のアミノ酸2~893を含むポリペプチド、
(2)配列番号11のアミノ酸配列または配列番号11のアミノ酸3~791を含むポリペプチド、
(3)配列番号13のアミノ酸配列または配列番号13のアミノ酸4~594を含むポリペプチド、および
(4)上述の(1)~(3)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、条項3~8のいずれか一項に記載の抗原構築物。
(1)配列番号9のアミノ酸配列または配列番号9のアミノ酸2~893を含むポリペプチド、
(2)配列番号11のアミノ酸配列または配列番号11のアミノ酸3~791を含むポリペプチド、
(3)配列番号13のアミノ酸配列または配列番号13のアミノ酸4~594を含むポリペプチド、および
(4)上述の(1)~(3)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、条項3~8のいずれか一項に記載の抗原構築物。
10.免疫原性MUC1ポリペプチドが、
(1)配列番号5のアミノ酸配列または配列番号5のアミノ酸4~537を含むポリペプチド、
(2)配列番号7のアミノ酸配列または配列番号7のアミノ酸4~517を含むポリペプチド、および
(3)上述の(1)または(2)のポリペプチドの機能的バリアント
からなる群から選択される、条項2および4~9のいずれか一項に記載の抗原構築物。
(1)配列番号5のアミノ酸配列または配列番号5のアミノ酸4~537を含むポリペプチド、
(2)配列番号7のアミノ酸配列または配列番号7のアミノ酸4~517を含むポリペプチド、および
(3)上述の(1)または(2)のポリペプチドの機能的バリアント
からなる群から選択される、条項2および4~9のいずれか一項に記載の抗原構築物。
11.(1)配列番号31のアミノ酸配列または配列番号31のアミノ酸4~1088を含むアミノ酸配列、
(2)配列番号33のアミノ酸配列または配列番号33のアミノ酸4~1081を含むアミノ酸配列、
(3)配列番号35のアミノ酸配列または配列番号35のアミノ酸4~1085を含むアミノ酸配列、
(4)配列番号37のアミノ酸配列または配列番号37のアミノ酸4~1030を含むアミノ酸配列、
(5)配列番号39のアミノ酸配列または配列番号39のアミノ酸4~1381を含むアミノ酸配列、および
(6)配列番号41のアミノ酸配列または配列番号41のアミノ酸4~1441を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、条項1~10のいずれか一項に記載の抗原構築物。
(2)配列番号33のアミノ酸配列または配列番号33のアミノ酸4~1081を含むアミノ酸配列、
(3)配列番号35のアミノ酸配列または配列番号35のアミノ酸4~1085を含むアミノ酸配列、
(4)配列番号37のアミノ酸配列または配列番号37のアミノ酸4~1030を含むアミノ酸配列、
(5)配列番号39のアミノ酸配列または配列番号39のアミノ酸4~1381を含むアミノ酸配列、および
(6)配列番号41のアミノ酸配列または配列番号41のアミノ酸4~1441を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、条項1~10のいずれか一項に記載の抗原構築物。
12.(1)配列番号30のヌクレオチド配列または配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列、
(2)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列、
(3)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列、
(4)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列、
(5)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列、
(6)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列、および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、条項1~11のいずれか一項に記載の抗原構築物。
(2)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列、
(3)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列、
(4)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列、
(5)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列、
(6)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列、および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、条項1~11のいずれか一項に記載の抗原構築物。
13.(1)配列番号43のアミノ酸配列または配列番号43のアミノ酸4~2003を含むアミノ酸配列、
(2)配列番号45のアミノ酸配列または配列番号45のアミノ酸4~2001を含むアミノ酸配列、
(3)配列番号47のアミノ酸配列または配列番号47のアミノ酸4~2008を含むアミノ酸配列、
(4)配列番号49のアミノ酸配列または配列番号49のアミノ酸4~1996を含むアミノ酸配列、
(5)配列番号51のアミノ酸配列または配列番号51のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列、および
(6)配列番号53のアミノ酸配列または配列番号53のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、条項1~12のいずれか一項に記載の抗原構築物。
(2)配列番号45のアミノ酸配列または配列番号45のアミノ酸4~2001を含むアミノ酸配列、
(3)配列番号47のアミノ酸配列または配列番号47のアミノ酸4~2008を含むアミノ酸配列、
(4)配列番号49のアミノ酸配列または配列番号49のアミノ酸4~1996を含むアミノ酸配列、
(5)配列番号51のアミノ酸配列または配列番号51のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列、および
(6)配列番号53のアミノ酸配列または配列番号53のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、条項1~12のいずれか一項に記載の抗原構築物。
14.(1)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列、
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列、
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列、
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列、
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列、
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列、および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、条項1~13のいずれか一項に記載の抗原構築物。
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列、
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列、
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列、
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列、
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列、および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、条項1~13のいずれか一項に記載の抗原構築物。
15.(1)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列、または
(2)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアント
を含む、条項1~14のいずれか一項に記載の抗原構築物。
(2)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアント
を含む、条項1~14のいずれか一項に記載の抗原構築物。
16.(i)条項1~15のいずれか一項に記載の抗原構築物、および(ii)薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
17.ワクチンである、条項16に記載の医薬組成物。
18.有効量の条項16または条項17に記載の医薬組成物をヒトに投与するステップを含む、処置を必要とするヒトにおけるがんを処置する方法。
19.がんが、MUC1、CEAまたはTERTから選択される1種または複数の腫瘍関連抗原を過剰発現する、条項18に記載の方法。
20.がんが、膵がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、肺がんまたは結腸直腸がんである、条項18に記載の方法。
21.がんが、三重陰性乳がん、エストロゲン受容体陽性乳がんまたはHER2陽性乳がんである、条項18に記載の方法。
22.有効量の免疫モジュレーターを患者に投与するステップをさらに含む、条項18に記載の方法。
23.免疫モジュレーターが、CTLA-4阻害剤、IDO1阻害剤、PD-1阻害剤またはPD-L1阻害剤である、条項22に記載の方法。
24.アジュバントをヒトに投与するステップをさらに含む、条項18に記載の方法。
25.条項1~15のいずれか一項に記載の抗原構築物を含むベクター。
26.プラスミドベクターである、条項25に記載のベクター。
27.配列番号57、59、61、63、65、67、69、70、71、72、73および74のいずれかのヌクレオチド配列を含む、条項26に記載のベクター。
28.ウイルスベクターである、条項25に記載のベクター。
29.配列番号58、60、62、64、66および68のいずれかのヌクレオチド配列を含む、条項28に記載のベクター。
30.医薬としての使用のための、(1)条項1~15のいずれか一項に記載の抗原構築物、(2)条項16もしくは条項17に記載の医薬組成物、または(3)条項25~29のいずれか一項に記載のベクターの使用。
31.医薬が、がんの処置のためのものである、条項30に記載の使用。
32.がんの処置のための医薬の製造のための、(1)条項1~14のいずれか一項に記載の抗原構築物、または(2)条項25~29のいずれか一項に記載のベクターの使用。
A.定義
用語「アジュバント」は、ヒト等の宿主哺乳動物に投与されると、宿主におけるワクチンまたは免疫原によって誘発される抗原特異的免疫応答を増強、加速または延長することができる物質を指す。
用語「アジュバント」は、ヒト等の宿主哺乳動物に投与されると、宿主におけるワクチンまたは免疫原によって誘発される抗原特異的免疫応答を増強、加速または延長することができる物質を指す。
用語「アゴニスト」は、別の分子(受容体等)の活性を促進する(誘導する、引き起こす、増強するまたは増加させる)物質を指す。アゴニストという用語は、受容体に結合する物質、およびそれに結合することなく受容体機能を促進する物質を包含する。
用語「アンタゴニスト」または「阻害剤」は、別の分子または受容体の生物活性を部分的にまたは完全に遮断、阻害または中和する物質を指す。
用語「抗原」は、宿主哺乳動物に導入されると(直接的に、または例えばDNAワクチンなどでの発現後に)、抗体またはT細胞上の抗原受容体への結合等、宿主哺乳動物の免疫系によって認識され得る物質を指す。抗原は、タンパク質もしくはタンパク質断片、炭水化物、ガングリオシド、ハプテンまたは核酸であり得る。物質は、抗体またはT細胞抗原受容体等の免疫系の抗原認識分子と特異的に相互作用することができる場合、「抗原性」と命名される。用語「腫瘍関連抗原」または「TAA」は、腫瘍細胞によって特異的に発現される、または腫瘍細胞によって、同じ組織型の非腫瘍細胞よりも高い頻度もしくは密度で発現される抗原を指す。TAAは、宿主によって正常には発現されない分子、または宿主によって正常に発現される分子が突然変異、短縮、ミスフォールドもしくは他の形で異常に顕在化された分子であり得る。TAAの例として、CEA、TERTおよびMUC1が挙げられる。
用語「同時投与」は、処置レジメンの一部としての同じ対象への2種以上の薬剤の投与を指す。2種以上の薬剤は、単一製剤中に包含され得、よって、同時に投与され得る。あるいは、2種以上の薬剤は、物理的に別々の製剤中に存在し得、対象に逐次または同時のいずれかで別々に投与され得る。用語「同時に投与される」または「同時の投与」は、第1の薬剤の投与および第2の薬剤の投与が、互いに時間的に重複することを意味するが、用語「逐次に投与される」または「逐次の投与」は、第1の薬剤の投与および第2の薬剤の投与が、互いに時間的に重複しないことを意味する。
用語「サイトゾル」または「細胞質」は、特定のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、宿主細胞によって発現された後に、発現されたポリペプチドが、宿主細胞の内側に保持されると予想されることを意味する。
用語「縮重バリアント」は、塩基の置換を有するが、同じポリペプチドまたはアミノ酸配列をコードする核酸配列を指す。
用語「有効量」は、哺乳動物において所望の効果を引き起こすのに十分な、哺乳動物に投与される量を指す。
アミノ酸配列または免疫原性TAAポリペプチド(まとめると「参照ポリペプチド」)の「機能的バリアント」という用語は、参照(refrence)ポリペプチドのアミノ酸の数の90%~100%を含み、参照ポリペプチドのアミノ酸配列に対し100%よりも低いが95%よりも高い同一性を有し、参照ポリペプチドと同じまたは同様の免疫原性特性を保持する、アミノ酸配列またはポリペプチドを指す。
用語「同一」は、それぞれヌクレオチドまたはアミノ酸の全く同じ配列を共有する2種以上の核酸または2種以上のポリペプチドを指す。用語「パーセント同一性」は、2種以上の核酸またはポリペプチドの間の類似性のレベルについて記載する。2種の配列が、バイオインフォマティクスソフトウェアによって整列される場合、「パーセント同一性」は、配列間の正確なヌクレオチド/アミノ酸マッチの数に100を掛け、ギャップを含む整列された領域の長さで割ることにより計算される。例えば、整列された場合に10個のミスマッチを示す2種の100アミノ酸長ポリペプチドは、90%同一となる。
用語「免疫エフェクター細胞エンハンサー」または「IECエンハンサー」は、哺乳動物の免疫エフェクター細胞の1種または複数の型の数、品質および/または機能を増加および/または増強することができる物質を指す。免疫エフェクター細胞の例として、細胞溶解性樹状(Dendiritic)細胞、CD8 T細胞、CD4 T細胞、NK細胞およびB細胞が挙げられる。
用語「免疫モジュレーター」は、哺乳動物の自然、液性または細胞性免疫系のいずれかの成分の働きまたは機能を変更(例えば、阻害、減少、増加、増強または刺激)することができる物質を指す。よって、用語「免疫モジュレーター」は、本明細書に定義されている「免疫エフェクター細胞エンハンサー」および本明細書に定義されている「免疫抑制性細胞阻害剤」、ならびに哺乳動物の免疫系の他のいずれかの成分に影響を与える物質を包含する。
用語「免疫応答」は、細胞媒介性免疫応答(例えば、抗原特異的T細胞等のT細胞および免疫系の非特異的細胞によって媒介される応答)および液性免疫応答(例えば、抗体の生成ならびに血漿、リンパ液および/または組織液への分泌等、B細胞によって媒介される応答)を含む、宿主哺乳動物の適応免疫系による特定の物質(抗原または免疫原等)に対するいずれかの検出可能応答を指す。免疫応答の例として、サイトカイン(例えば、Th1、Th2またはTh17型サイトカイン)またはケモカインの放出の変更(例えば、増加)、マクロファージ活性化、樹状細胞活性化、T細胞(例えば、CD4+またはCD8+T細胞)活性化、B細胞応答(例えば、抗体産生)の誘導、細胞傷害性Tリンパ球(「CTL」)応答の誘導、および免疫系の細胞(例えば、T細胞およびB細胞)の増大(例えば、細胞の集団の成長)が挙げられる。
用語「免疫原性の」または「免疫原性」は、単独であれ担体に連結された場合であれ、アジュバントの存在または非存在下での、宿主哺乳動物における免疫応答を引き起こす、誘発する、刺激するもしくは誘導する、または既存の免疫応答を改善する、増強する、増加するもしくは延長する、宿主哺乳動物(ヒト等)への投与後の物質の能力を指す。かかる物質は、「免疫原」と称される。
用語「免疫原性組成物」は、免疫原性である組成物を指す。
用語「免疫原性MUC1ポリペプチド」は、ヒト天然MUC1タンパク質、またはヒト天然MUC1タンパク質を発現する細胞に対して免疫原性であるポリペプチドを指す。ポリペプチドは、ヒト天然MUC1タンパク質の配列と同じアミノ酸配列を有することができる、またはヒト天然MUC1タンパク質のアミノ酸配列と比較して、1個もしくは複数の突然変異を表示することができる。
用語「免疫原性CEAポリペプチド」は、ヒト天然CEAタンパク質、またはヒト天然CEAタンパク質を発現する細胞に対して免疫原性であるポリペプチドを指し、ヒト天然CEAタンパク質のアミノ酸配列と比較して、1個または複数のアミノ酸の欠失等の1個または複数の突然変異を表示する。
用語「免疫原性TERTポリペプチド」は、ヒト天然TERTタンパク質、またはヒト天然TERTタンパク質を発現する細胞に対して免疫原性であるポリペプチドを指す。ポリペプチドは、ヒト天然TERTタンパク質の配列と同じアミノ酸配列を有することができる、またはヒト天然TERTタンパク質のアミノ酸配列と比較して、1個もしくは複数の突然変異を表示する。
用語「免疫原性TAAポリペプチド」は、本明細書の上述にそれぞれ定義されている、「免疫原性CEAポリペプチド」、「免疫原性MUC1ポリペプチド」または「免疫原性TERTポリペプチド」を指す。
用語「免疫抑制性細胞阻害剤」または「ISC阻害剤」は、哺乳動物の免疫抑制性細胞の数および/または機能を低下および/または抑制することができる物質を指す。免疫抑制性細胞の例として、調節性T細胞(「Treg」)、骨髄系由来サプレッサー細胞および腫瘍関連マクロファージが挙げられる。
用語「哺乳動物」は、哺乳綱のいずれかの動物種を指す。哺乳動物の例として、ヒト;サル等の非ヒト霊長類;ラット、マウス、モルモット等の実験動物;ネコ、イヌ、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマおよびブタ等の飼育動物;ならびにライオン、トラ、ゾウその他等の捕獲野生動物が挙げられる。
用語「膜結合」は、特定のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、宿主細胞によって発現された後に、発現されたポリペプチドが、細胞の膜に結合される、これに取り付けられる、または他の形でこれに会合されることを意味する。
用語「新生物障害」は、細胞が、異常に速く制御されない速度で増殖する状態を指し、この速度は、周囲の正常組織の増殖速度を超え、これと非協調的である。それは通常、「腫瘍」として知られる固形の病変またはしこりを生じる。この用語は、良性および悪性新生物障害を包含する。本開示において用語「がん」と互換的に使用される用語「悪性新生物障害」は、身体の他の位置に拡散する腫瘍細胞の能力(「転移」として知られる)によって特徴付けられる新生物障害を指す。用語「良性新生物障害」は、腫瘍細胞が、転移する能力を欠く新生物障害を指す。
用語「突然変異」は、参照タンパク質またはポリペプチドのアミノ酸配列と比較した、タンパク質またはポリペプチドのアミノ酸配列におけるアミノ酸残基の欠失、付加または置換を指す。
用語「医薬組成物」は、所望の生理学的、薬理学的または治療的効果を誘発するための、対象(例えば、ヒト患者)への投与に適した固体または液体組成物を指す。1種または複数の活性成分の含有に加えて、医薬組成物は、1種または複数の薬学的に許容できる賦形剤を含有することができる。
用語「薬学的に許容できる賦形剤」は、活性成分(例えば、抗原、抗原コード核酸、免疫モジュレーターまたはアジュバント)以外の、ワクチン等の医薬組成物中の物質を指し、これは、活性成分と適合性であり、これが投与された対象において有意な有害効果を引き起こさない。
医薬組成物の文脈で使用される用語「賦形剤」は、一般に薬用特性がなく、薬物製品の製造を合理化する、ならびに/または活性薬物物質の安定化、送達および吸収を容易にする目的で組成物中に含まれる物質を指す。用語「薬学的に許容できる賦形剤」は、ワクチン組成物等の医薬組成物中の賦形剤を指し、これは、組成物中の活性成分(例えば、抗原または免疫原、抗原コード核酸、免疫モジュレーターまたはアジュバント)と適合性であり、これが投与された対象において有意な有害効果を引き起こさない。
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書で互換的に使用され、ペプチド結合によって一体に連結されたアミノ酸のポリマー形態を指す。これらの用語は、いかなる長さのものであってもよく、コードされたおよびコードされていないアミノ酸、化学もしくは生化学修飾されたまたは誘導体化されたアミノ酸を含むことができる。
用語「予防すること」または「予防する」は、(a)障害が発生するのを妨げること、(b)障害の発生もしくは障害の症状の発生を遅延させること、または(c)障害の発生率もしくは効果を最小化することを指す。
ポリペプチドの文脈における用語「分泌された」は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、宿主細胞によって発現された後に、発現されたポリペプチドが、宿主細胞の外側に分泌されることを意味する。
タンパク質キナーゼ阻害剤等の免疫モジュレーターの量の記載に使用される場合、用語「最適に満たない用量」は、免疫モジュレーターが患者に単独で投与される場合に処置されている疾患のための所望の治療的効果の産生に要求される最小量を下回る、免疫モジュレーターの用量を指す。
用語「処置すること」、「処置」または「処置する」は、障害を抑止すること、障害の重症度を低下させること、または障害の症状の重症度もしくは出現頻度を低下させることを指す。
用語「ワクチン」は、特定の抗原(単数または複数)に対する防御免疫応答を誘発するための、哺乳動物(ヒト等)への投与のための免疫原性組成物を指す。ワクチンの主要な活性成分は、免疫原(複数可)である。免疫原として免疫原性ポリペプチドを含むワクチンは、「ペプチドワクチン」とも称される。免疫原性ポリペプチドを含有しないが、むしろ免疫原性ポリペプチドをコードする核酸分子を含有するワクチンは、「DNAワクチン」または「RNAワクチン」(状況に応じて)と称される。宿主細胞へのDNAまたはRNAワクチンの送達後に、核酸分子によってコードされる免疫原性ポリペプチドは、宿主細胞によって発現され、防御免疫応答を生じる。DNAまたはRNAワクチン中の核酸分子は、ネイキッド核酸、プラスミドもしくはウイルスベクターの形態、または核酸の送達に適した他のいずれかの形態であり得る。
用語「ベクター」は、外来性核酸分子を宿主細胞に輸送または移入することができる、核酸分子または修飾された微生物を指す。外来性核酸分子は、「挿入物」または「導入遺伝子」と称される。ベクターは一般に、挿入物、およびベクターの骨格として機能するより大型の配列からなる。ベクターの構造または起源に基づき、ベクターの主要な型は、プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクター(ラムダファージ等)、ウイルスベクター(アデノウイルスベクター等)、人工染色体および細菌ベクターを含む。
B.免疫原性TAAポリペプチド
一部の態様では、本開示は、例えば、in vivo(例えば、ヒトを含む動物における)もしくはin vitroでの免疫応答の誘発、エフェクターT細胞の活性化、またはTAAに特異的な抗体の生成に、または膵、肺がん、結腸直腸がん、胃がんもしくは乳がん等のがんの処置のためのワクチンを含む医薬組成物中の成分としての使用に有用な、単離された免疫原性TAAポリペプチドを提供する。
一部の態様では、本開示は、例えば、in vivo(例えば、ヒトを含む動物における)もしくはin vitroでの免疫応答の誘発、エフェクターT細胞の活性化、またはTAAに特異的な抗体の生成に、または膵、肺がん、結腸直腸がん、胃がんもしくは乳がん等のがんの処置のためのワクチンを含む医薬組成物中の成分としての使用に有用な、単離された免疫原性TAAポリペプチドを提供する。
これらの免疫原性TAAポリペプチドは、本開示を踏まえて、当技術分野で公知の方法によって調製することができる。免疫応答を誘発するポリペプチドの能力は、in vitroアッセイまたはin vivoアッセイにおいて測定することができる。免疫応答を誘発するポリペプチドまたはDNA構築物の能力を決定するためのin vitroアッセイは、当技術分野で公知である。かかるin vitroアッセイの一例は、その開示が本願に組み込まれる米国特許第7,387,882号に記載されている通り、T細胞応答を刺激するポリペプチドまたはポリペプチドを発現する核酸の能力を測定することである。アッセイ方法は、(1)培養抗原提示細胞を抗原と接触させ、これにより、抗原提示細胞によって抗原が取り入れられプロセシングされ、1種または複数のプロセシングされた抗原を産生することができるステップ;(2)T細胞が、プロセシングされた抗原のうち1種または複数に応答するのに十分な条件下で、抗原提示細胞をT細胞と接触させるステップ;(3)T細胞が、プロセシングされた抗原のうち1種または複数に応答するか決定するステップを含む。使用されるT細胞は、CD8+T細胞またはCD4+T細胞であり得る。T細胞応答は、インターフェロン-ガンマおよびインターロイキン-2等の1種または複数のサイトカインの放出ならびに抗原提示細胞(腫瘍細胞)の溶解を測定することにより決定することができる。B細胞応答は、抗体の産生を測定することにより決定することができる。
B-1.免疫原性MUC1ポリペプチド
一態様では、本開示は、ヒト天然MUC1タンパク質に1個または複数の突然変異を導入することにより、ヒト天然MUC1に由来する免疫原性MUC1ポリペプチドを提供する。突然変異の例として、MUC1タンパク質のVNTR領域における20アミノ酸のタンデム反復の全てではなく一部の欠失、全体的なまたは部分的なシグナルペプチド配列の欠失、およびMUC1アイソフォームに見出される非コンセンサスアミノ酸配列のアミノ酸の欠失が挙げられる。よって、一部の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1タンパク質の20アミノ酸の3~30個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1の5~25個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1タンパク質の20アミノ酸の3~30個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列からなる。一部の特定の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1の5~25個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列からなる。一部のさらなる実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、細胞質形態(または「cMUC1」)である。用語「細胞質形態」は、ヒト天然MUC1タンパク質の分泌配列(アミノ酸1~23;「シグナルペプチド配列」としても知られる)を全体的にまたは部分的に欠く免疫原性MUC1ポリペプチドを指す。分泌配列のアミノ酸の欠失は、細胞内で発現される際にポリペプチドが分泌経路に進入するのを防ぐと予想される。一部の他の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、膜結合形態である。免疫原性MUC1ポリペプチドは、例えば、Uniprotアイソフォーム1、2、3、4、5、6、Y、8、9、F、Y-LSP、S2、M6、ZD、T10、E2およびJ13(それぞれUniprot P15941-1からP15941-17)を含む、当技術分野で公知のまたは将来発見されるヒトMUC1アイソフォームのいずれかのアミノ酸配列に由来する、これから構築するまたはこれから調製することができる。一部の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、ヒトMUC1アイソフォーム1の一部であるアミノ酸配列を含み、ヒトMUC1アイソフォーム1のアミノ酸配列は、配列番号1に表記されている。一部の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、ヒトMUC1アイソフォーム1の一部であるアミノ酸配列からなり、ヒトMUC1アイソフォーム1のアミノ酸配列は、配列番号1に表記されている。特定の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸22~225および946~1255を含む。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号5のアミノ酸配列(プラスミド1027ポリペプチド)を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(2)配列番号5のアミノ酸4~537を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(3)配列番号5のアミノ酸24~537を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(4)配列番号7のアミノ酸配列(プラスミド1197ポリペプチド)を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(5)配列番号7のアミノ酸4~517を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(6)配列番号7のアミノ酸4~517を含むまたはこれからなるポリペプチドであって、配列番号7における位置(positon)513のアミノ酸がTである、ポリペプチド;および
(7)上述の(1)~(6)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアント
から選択される免疫原性MUC1ポリペプチドを提供する。
一態様では、本開示は、ヒト天然MUC1タンパク質に1個または複数の突然変異を導入することにより、ヒト天然MUC1に由来する免疫原性MUC1ポリペプチドを提供する。突然変異の例として、MUC1タンパク質のVNTR領域における20アミノ酸のタンデム反復の全てではなく一部の欠失、全体的なまたは部分的なシグナルペプチド配列の欠失、およびMUC1アイソフォームに見出される非コンセンサスアミノ酸配列のアミノ酸の欠失が挙げられる。よって、一部の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1タンパク質の20アミノ酸の3~30個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1の5~25個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1タンパク質の20アミノ酸の3~30個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列からなる。一部の特定の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1の5~25個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列からなる。一部のさらなる実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、細胞質形態(または「cMUC1」)である。用語「細胞質形態」は、ヒト天然MUC1タンパク質の分泌配列(アミノ酸1~23;「シグナルペプチド配列」としても知られる)を全体的にまたは部分的に欠く免疫原性MUC1ポリペプチドを指す。分泌配列のアミノ酸の欠失は、細胞内で発現される際にポリペプチドが分泌経路に進入するのを防ぐと予想される。一部の他の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、膜結合形態である。免疫原性MUC1ポリペプチドは、例えば、Uniprotアイソフォーム1、2、3、4、5、6、Y、8、9、F、Y-LSP、S2、M6、ZD、T10、E2およびJ13(それぞれUniprot P15941-1からP15941-17)を含む、当技術分野で公知のまたは将来発見されるヒトMUC1アイソフォームのいずれかのアミノ酸配列に由来する、これから構築するまたはこれから調製することができる。一部の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、ヒトMUC1アイソフォーム1の一部であるアミノ酸配列を含み、ヒトMUC1アイソフォーム1のアミノ酸配列は、配列番号1に表記されている。一部の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、ヒトMUC1アイソフォーム1の一部であるアミノ酸配列からなり、ヒトMUC1アイソフォーム1のアミノ酸配列は、配列番号1に表記されている。特定の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、配列番号1のアミノ酸配列のアミノ酸22~225および946~1255を含む。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号5のアミノ酸配列(プラスミド1027ポリペプチド)を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(2)配列番号5のアミノ酸4~537を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(3)配列番号5のアミノ酸24~537を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(4)配列番号7のアミノ酸配列(プラスミド1197ポリペプチド)を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(5)配列番号7のアミノ酸4~517を含むまたはこれからなるポリペプチド;
(6)配列番号7のアミノ酸4~517を含むまたはこれからなるポリペプチドであって、配列番号7における位置(positon)513のアミノ酸がTである、ポリペプチド;および
(7)上述の(1)~(6)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアント
から選択される免疫原性MUC1ポリペプチドを提供する。
一部の特定の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、配列番号5(プラスミド1027ポリペプチド)または配列番号7(プラスミド1197ポリペプチド)のアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性MUC1ポリペプチドは、配列番号5(プラスミド1027ポリペプチド)または配列番号7(プラスミド1197ポリペプチド)のアミノ酸配列からなる。
一態様では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかの機能的バリアントを提供する。
B-2.免疫原性TERTポリペプチド
別の態様では、本開示は、TERTタンパク質の最大600個のN末端アミノ酸の欠失によりヒトTERTタンパク質に由来する免疫原性TERTポリペプチドを提供する。よって、免疫原性TERTポリペプチドは、いずれかのヒトTERTタンパク質アイソフォームの位置601から始まるC末端アミノ酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、免疫原性TERTポリペプチドは、配列番号3に表記されているTERTアイソフォーム1のアミノ酸配列を含み、TERTアイソフォーム1のアミノ酸配列のN末端(アミノ末端)から最大約600アミノ酸が存在しない。TERTアイソフォーム1のN末端から最大600個のいかなる数のアミノ酸も、免疫原性TERTポリペプチドにおいて存在しなくてもよい。例えば、配列番号3のTERTアイソフォーム1の位置1から位置50、100、50、200、250、300、350、400、450、500、550または600のN末端アミノ酸が、免疫原性TERTポリペプチドから存在しなくてもよい。よって、免疫原性TERTポリペプチドは、配列番号3のアミノ酸51~1132、101~1132、151~1132、201~1132、251~1132、301~1132、351~1132、401~1132、451~1132、501~1132または551~1132を含むことができる。一実施形態では、免疫原性TERTポリペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列のアミノ酸601~1132を含む。別の実施形態では、本開示は、配列番号3のアミノ酸配列のアミノ酸241~1132を含む免疫原性TERTポリペプチドを提供する。
別の態様では、本開示は、TERTタンパク質の最大600個のN末端アミノ酸の欠失によりヒトTERTタンパク質に由来する免疫原性TERTポリペプチドを提供する。よって、免疫原性TERTポリペプチドは、いずれかのヒトTERTタンパク質アイソフォームの位置601から始まるC末端アミノ酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、免疫原性TERTポリペプチドは、配列番号3に表記されているTERTアイソフォーム1のアミノ酸配列を含み、TERTアイソフォーム1のアミノ酸配列のN末端(アミノ末端)から最大約600アミノ酸が存在しない。TERTアイソフォーム1のN末端から最大600個のいかなる数のアミノ酸も、免疫原性TERTポリペプチドにおいて存在しなくてもよい。例えば、配列番号3のTERTアイソフォーム1の位置1から位置50、100、50、200、250、300、350、400、450、500、550または600のN末端アミノ酸が、免疫原性TERTポリペプチドから存在しなくてもよい。よって、免疫原性TERTポリペプチドは、配列番号3のアミノ酸51~1132、101~1132、151~1132、201~1132、251~1132、301~1132、351~1132、401~1132、451~1132、501~1132または551~1132を含むことができる。一実施形態では、免疫原性TERTポリペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列のアミノ酸601~1132を含む。別の実施形態では、本開示は、配列番号3のアミノ酸配列のアミノ酸241~1132を含む免疫原性TERTポリペプチドを提供する。
免疫原性TERTポリペプチドは、配列番号3のアミノ酸51~1132、101~1132、151~1132、201~1132、251~1132、301~1132、351~1132、401~1132、451~1132、501~1132または551~1132からなることができる。一実施形態では、免疫原性TERTポリペプチドは、配列番号3のアミノ酸配列のアミノ酸601~1132からなる。別の実施形態では、本開示は、配列番号3のアミノ酸配列のアミノ酸241~1132からなる免疫原性TERTポリペプチドを提供する。
免疫原性TERTポリペプチドは、他のTERTアイソフォームから構築することもできる。免疫原性TERTポリペプチドが、アイソフォーム2、3または4等、C末端短縮を有するTERTアイソフォームから構築される場合、より少ないアミノ酸が、タンパク質のN末端から欠失されることが好ましい。
一部のさらなる実施形態では、免疫原性TERTポリペプチドは、TERT触媒ドメインを不活性化する1個または複数のアミノ酸突然変異をさらに含む。かかるアミノ酸突然変異の例として、配列番号3の位置712におけるアラニンによるアスパラギン酸の置換(D712A)および配列番号3の位置713におけるイソロイシンによるバリンの置換(V713I)が挙げられる。一部の実施形態では、免疫原性TERTポリペプチドは、突然変異D712AおよびV713Iの両方を含む。ある実施形態では、前記突然変異は、配列番号3の位置712におけるアスパラギン酸の置換および/または配列番号3の位置713におけるバリンの置換(V713I)を含み、前記突然変異(複数可)は、TERT触媒ドメインを不活性化する。別の実施形態では、前記突然変異は、配列番号3の位置712におけるアスパラギン酸の置換および/または配列番号3の位置713におけるバリンの置換(V713I)からなり、前記突然変異(複数可)は、TERT触媒ドメインを不活性化する。また別の実施形態では、前記突然変異は、配列番号3の位置712におけるアラニンによるアスパラギン酸の置換(D712A)および/または配列番号3の位置713におけるイソロイシンによるバリンの置換(V713I)からなる。
一部の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号9のアミノ酸配列(プラスミド1112ポリペプチド)もしくは配列番号9のアミノ酸2~893を含むもしくはこれからなるポリペプチド;
(2)配列番号11のアミノ酸配列(プラスミド1326ポリペプチド)もしくは配列番号11のアミノ酸3~791を含むもしくはこれからなるポリペプチド;
(3)配列番号13のアミノ酸配列(プラスミド1330ポリペプチド)もしくは配列番号13のアミノ酸4~594を含むもしくはこれからなるポリペプチド;または
(4)上述の(1)~(3)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性TERTポリペプチドを提供する。
(1)配列番号9のアミノ酸配列(プラスミド1112ポリペプチド)もしくは配列番号9のアミノ酸2~893を含むもしくはこれからなるポリペプチド;
(2)配列番号11のアミノ酸配列(プラスミド1326ポリペプチド)もしくは配列番号11のアミノ酸3~791を含むもしくはこれからなるポリペプチド;
(3)配列番号13のアミノ酸配列(プラスミド1330ポリペプチド)もしくは配列番号13のアミノ酸4~594を含むもしくはこれからなるポリペプチド;または
(4)上述の(1)~(3)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性TERTポリペプチドを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性TERTポリペプチドのいずれかの機能的バリアントを提供する。
B-3.免疫原性CEAポリペプチド
別の態様では、本開示は、ヒト天然CEA前駆体タンパク質に1個または複数の突然変異を導入することにより、ヒト天然CEAに由来する単離された免疫原性CEAポリペプチドを提供する。導入される突然変異の例として、C2様ドメインのうち1、2、3、4または5個の欠失、全体的なまたは部分的なシグナルペプチド配列の欠失、およびプロペプチドのアミノ酸の一部または全ての欠失が挙げられる。よって、一部の実施形態では、本開示によって提供される免疫原性CEAポリペプチドは、(1)N-ドメインのアミノ酸配列、および(2)ヒトCEAタンパク質の1~5個のC2様ドメインのアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、(1)A2、B2、A3およびB3等の少なくとも4個のC2様ドメインのアミノ酸配列、ならびに(2)N-ドメインのアミノ酸配列を含む。一部のさらなる実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、細胞質形態(または「cCEA」)である。用語「細胞質形態」は、ヒト天然CEA前駆体タンパク質のシグナルペプチド配列(アミノ酸1~34)を全体的にまたは部分的に欠く免疫原性CEAポリペプチドを指す。シグナルペプチドのアミノ酸の欠失は、細胞内で発現される際にポリペプチドが分泌経路に進入するのを防ぐと予想される。一部の他の実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、膜結合形態(または「mCEA」)である。免疫原性mCEAポリペプチドは、シグナルペプチドのアミノ酸を含み、宿主細胞によって発現された後に、宿主細胞の膜に結合または他の形で会合されたままとなる。
別の態様では、本開示は、ヒト天然CEA前駆体タンパク質に1個または複数の突然変異を導入することにより、ヒト天然CEAに由来する単離された免疫原性CEAポリペプチドを提供する。導入される突然変異の例として、C2様ドメインのうち1、2、3、4または5個の欠失、全体的なまたは部分的なシグナルペプチド配列の欠失、およびプロペプチドのアミノ酸の一部または全ての欠失が挙げられる。よって、一部の実施形態では、本開示によって提供される免疫原性CEAポリペプチドは、(1)N-ドメインのアミノ酸配列、および(2)ヒトCEAタンパク質の1~5個のC2様ドメインのアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、(1)A2、B2、A3およびB3等の少なくとも4個のC2様ドメインのアミノ酸配列、ならびに(2)N-ドメインのアミノ酸配列を含む。一部のさらなる実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、細胞質形態(または「cCEA」)である。用語「細胞質形態」は、ヒト天然CEA前駆体タンパク質のシグナルペプチド配列(アミノ酸1~34)を全体的にまたは部分的に欠く免疫原性CEAポリペプチドを指す。シグナルペプチドのアミノ酸の欠失は、細胞内で発現される際にポリペプチドが分泌経路に進入するのを防ぐと予想される。一部の他の実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、膜結合形態(または「mCEA」)である。免疫原性mCEAポリペプチドは、シグナルペプチドのアミノ酸を含み、宿主細胞によって発現された後に、宿主細胞の膜に結合または他の形で会合されたままとなる。
本開示によって提供される免疫原性CEAポリペプチドは、当技術分野で公知のまたは将来発見されるヒトCEAアイソフォームのいずれかのアミノ酸配列に由来する、これから構築する、またはこれから調製することができる。一部の実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列を有するヒトCEAアイソフォーム1前駆体タンパク質の一部であるアミノ酸配列を含む。
一部の特定の実施形態では、本開示は、次の免疫原性CEAポリペプチドのいずれかを提供する:
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677を含むポリペプチド;
(2)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677からなるポリペプチド;
(3)配列番号15のアミノ酸(プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号15のアミノ酸4~704を含むポリペプチド;
(4)配列番号15のアミノ酸(プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号15のアミノ酸4~704からなるポリペプチド;
(5)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526を含むポリペプチド;
(6)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526からなるポリペプチド;
(7)配列番号19の配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468を含むポリペプチド;
(8)配列番号19の配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468からなるポリペプチド;または
(9)上述の(1)~(8)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド。
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677を含むポリペプチド;
(2)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677からなるポリペプチド;
(3)配列番号15のアミノ酸(プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号15のアミノ酸4~704を含むポリペプチド;
(4)配列番号15のアミノ酸(プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号15のアミノ酸4~704からなるポリペプチド;
(5)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526を含むポリペプチド;
(6)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526からなるポリペプチド;
(7)配列番号19の配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468を含むポリペプチド;
(8)配列番号19の配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468からなるポリペプチド;または
(9)上述の(1)~(8)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド。
一態様では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性TERTポリペプチドのいずれかの機能的バリアントを提供する。
C.1種または複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物
一部の態様では、本開示は、1、2、3種以上の別々の免疫原性TAAポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。かかる核酸分子は、本開示で「抗原構築物」とも称される。1種のみの免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子は、本明細書で、「単一抗原構築物」とも称され、1種より多い免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子は、「多重抗原構築物」とも称される。2種の異なる免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子は、「二重抗原構築物」とも称され、3種の異なる免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子は、「三重抗原構築物」とも称される。核酸分子は、デオキシリボ核酸(DNA)またはリボ核酸(RNA)であり得る。よって、核酸分子は、本明細書に開示されるヌクレオチド配列を含むことができ、チミジン(T)は、ウラシル(U)であってもよく、これは、DNAおよびRNAの化学構造の間の差を反映する。本開示におけるDNAのヌクレオチド配列に対応するRNAのヌクレオチド配列を参照すると、用語「対応する」または「対応すること」は、DNAヌクレオチド配列におけるチミジン(T)が、RNAヌクレオチド配列においてウラシル(U)に置き換えられていることを除いて、DNAの参照ヌクレオチド配列と同一であるRNAのヌクレオチド配列を指す。核酸分子は、修飾形態、一本鎖もしくは二本鎖形態、または直鎖状もしくは環状形態であり得る。
一部の態様では、本開示は、1、2、3種以上の別々の免疫原性TAAポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。かかる核酸分子は、本開示で「抗原構築物」とも称される。1種のみの免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子は、本明細書で、「単一抗原構築物」とも称され、1種より多い免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子は、「多重抗原構築物」とも称される。2種の異なる免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子は、「二重抗原構築物」とも称され、3種の異なる免疫原性TAAポリペプチドをコードする核酸分子は、「三重抗原構築物」とも称される。核酸分子は、デオキシリボ核酸(DNA)またはリボ核酸(RNA)であり得る。よって、核酸分子は、本明細書に開示されるヌクレオチド配列を含むことができ、チミジン(T)は、ウラシル(U)であってもよく、これは、DNAおよびRNAの化学構造の間の差を反映する。本開示におけるDNAのヌクレオチド配列に対応するRNAのヌクレオチド配列を参照すると、用語「対応する」または「対応すること」は、DNAヌクレオチド配列におけるチミジン(T)が、RNAヌクレオチド配列においてウラシル(U)に置き換えられていることを除いて、DNAの参照ヌクレオチド配列と同一であるRNAのヌクレオチド配列を指す。核酸分子は、修飾形態、一本鎖もしくは二本鎖形態、または直鎖状もしくは環状形態であり得る。
DNAおよびRNA構築物の両方を含む(inlcduing)抗原構築物は、本開示を踏まえて、当技術分野で公知の方法を使用して調製することができる。単一抗原構築物および多重抗原構築物を作製するための方法は、本明細書にさらに後述されている。その上、宿主細胞へのmRNAの注射が、コードされたタンパク質の発現および免疫学的応答をもたらすことが十分に確立されている。当技術分野で公知の様々なエレメント/システム(UTR、ポリA、キャッピングシステムおよびコドン最適化等)の使用により、in vitro転写されたmRNAを安定に産生することができ、コードされたタンパク質を効率的に翻訳することができる。さらに、mRNAコードされたポリペプチドへのリソソームまたはエンドソーム標的化シグナルの融合は、T細胞免疫応答を増強することができる。mRNAは、製剤化せずにまたはEPによりまたは脂質もしくは他の媒体中に製剤化して送達することができる。
C-1.CEA単一抗原構築物
一部の実施形態では、本開示は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする抗原構築物を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする抗原構築物を提供する。
一部の特定の実施形態では、抗原構築物は、
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677を含むポリペプチド;
(2)配列番号15のアミノ酸(プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号15のアミノ酸4~704を含むポリペプチド;
(3)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526を含むポリペプチド;
(4)配列番号19の配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468を含むポリペプチド;または
(5)上述の(1)~(4)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性CEAポリペプチドをコードする。
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677を含むポリペプチド;
(2)配列番号15のアミノ酸(プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号15のアミノ酸4~704を含むポリペプチド;
(3)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526を含むポリペプチド;
(4)配列番号19の配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468を含むポリペプチド;または
(5)上述の(1)~(4)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性CEAポリペプチドをコードする。
一部の特定の実施形態では、抗原構築物は、
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677からなるポリペプチド;
(2)配列番号15のアミノ酸(プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号15のアミノ酸4~704からなるポリペプチド;
(3)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526からなるポリペプチド;
(4)配列番号19の配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468からなるポリペプチド;または
(5)上述の(1)~(4)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性CEAポリペプチドをコードする。
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677からなるポリペプチド;
(2)配列番号15のアミノ酸(プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号15のアミノ酸4~704からなるポリペプチド;
(3)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526からなるポリペプチド;
(4)配列番号19の配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468からなるポリペプチド;または
(5)上述の(1)~(4)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
から選択される免疫原性CEAポリペプチドをコードする。
一部の特定の実施形態では、本開示は、DNAであり、
(1)配列番号14のヌクレオチド配列(プラスミド1361オープンリーディングフレーム)または配列番号14のヌクレオチド10~2112を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号16のヌクレオチド配列(プラスミド1386オープンリーディングフレーム)または配列番号16のヌクレオチド10~1578を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号18のヌクレオチド配列(プラスミド1390オープンリーディングフレーム)または配列番号18のヌクレオチド10~1404を含むヌクレオチド配列;および
(4)(1)~(3)のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。
(1)配列番号14のヌクレオチド配列(プラスミド1361オープンリーディングフレーム)または配列番号14のヌクレオチド10~2112を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号16のヌクレオチド配列(プラスミド1386オープンリーディングフレーム)または配列番号16のヌクレオチド10~1578を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号18のヌクレオチド配列(プラスミド1390オープンリーディングフレーム)または配列番号18のヌクレオチド10~1404を含むヌクレオチド配列;および
(4)(1)~(3)のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、DNAであり、
(1)配列番号14のヌクレオチド配列(プラスミド1361オープンリーディングフレーム)または配列番号14のヌクレオチド10~2112からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号16のヌクレオチド配列(プラスミド1386オープンリーディングフレーム)または配列番号16のヌクレオチド10~1578からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号18のヌクレオチド配列(プラスミド1390オープンリーディングフレーム)または配列番号18のヌクレオチド10~1404からなるヌクレオチド配列;および
(4)(1)~(3)のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる抗原構築物を提供する。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、RNAであり、
(1)配列番号14のヌクレオチド配列(プラスミド1361オープンリーディングフレーム)または配列番号14のヌクレオチド10~2112を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号16のヌクレオチド配列(プラスミド1386オープンリーディングフレーム)または配列番号16のヌクレオチド10~1578を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号18のヌクレオチド配列(プラスミド1390オープンリーディングフレーム)または配列番号18のヌクレオチド10~1404を含むヌクレオチド配列;および
(4)(1)~(3)のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。
(1)配列番号14のヌクレオチド配列(プラスミド1361オープンリーディングフレーム)または配列番号14のヌクレオチド10~2112からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号16のヌクレオチド配列(プラスミド1386オープンリーディングフレーム)または配列番号16のヌクレオチド10~1578からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号18のヌクレオチド配列(プラスミド1390オープンリーディングフレーム)または配列番号18のヌクレオチド10~1404からなるヌクレオチド配列;および
(4)(1)~(3)のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる抗原構築物を提供する。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、RNAであり、
(1)配列番号14のヌクレオチド配列(プラスミド1361オープンリーディングフレーム)または配列番号14のヌクレオチド10~2112を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号16のヌクレオチド配列(プラスミド1386オープンリーディングフレーム)または配列番号16のヌクレオチド10~1578を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号18のヌクレオチド配列(プラスミド1390オープンリーディングフレーム)または配列番号18のヌクレオチド10~1404を含むヌクレオチド配列;および
(4)(1)~(3)のヌクレオチド配列の縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。
C-2.多重抗原構築物
別の態様では、本開示は、2、3種以上の異なる免疫原性TAAポリペプチドをそれぞれコードする抗原構築物を提供する。
別の態様では、本開示は、2、3種以上の異なる免疫原性TAAポリペプチドをそれぞれコードする抗原構築物を提供する。
単一の核酸からの2種以上のポリペプチドの同時発現のためのベクター(当技術分野で「マルチシストロニック(multicistronic)ベクター」としても知られる)の構築のための方法および技法が、当技術分野で公知である。本開示によって提供される多重抗原構築物は、本開示を踏まえてかかる技法を使用して調製することができる。例えば、多重抗原構築物は、複数の独立したプロモーターを単一のプラスミドに取り込むことにより構築することができる(Huang,Y.、Z.Chenら(2008)「Design, construction, and characterization of a dual-promoter multigenic DNA vaccine directed against an HIV-1 subtype C/B’ recombinant.」J Acquir Immune Defic Syndr 47(4):403~411;Xu,K.、Z.Y.Lingら(2011)「Broad humoral and cellular immunity elicited by a bivalent DNA vaccine encoding HA and NP genes from an H5N1 virus.」Viral Immunol 24(1):45~56)。プラスミドは、それぞれa)エンハンサーエレメントありまたはなしの、RNAポリメラーゼ依存性転写を開始するための真核生物プロモーター、b)標的抗原をコードする遺伝子、およびc)転写ターミネーター配列からなる、複数の発現カセットを保有するように操作することができる。トランスフェクトされた細胞核へのプラスミドの送達後に、各プロモーターから転写が開始され、標的抗原の1種をそれぞれコードする別々のmRNAの産生をもたらす。mRNAは、独立して翻訳され、これにより、所望の抗原を産生する。
本開示によって提供される多重抗原構築物は、ウイルス2Aペプチドの使用により構築することもできる(Szymczak,A.L.およびD.A.Vignali(2005)「Development of 2A peptide-based strategies in the design of multicistronic vectors.」Expert Opin Biol Ther 5(5):627~638;de Felipe,P.、G.A.Lukeら(2006)「E unum pluribus: multiple proteins from a self-processing polyprotein.」Trends Biotechnol 24(2):68~75;Luke,G.A.、P.de Felipeら(2008)「Occurrence, function and evolutionary origins of ’2A-like’ sequences in virus genomes.」J Gen Virol 89(Pt 4):1036~1042;Ibrahimi,A.、G.Vande Veldeら(2009)「Highly efficient multicistronic lentiviral vectors with peptide 2A sequences.」Hum Gene Ther 20(8):845~860;Kim,J.H.、S.R.Leeら(2011)「High cleavage efficiency of a 2A peptide derived from porcine teschovirus-1 in human cell lines, zebrafish and mice.」PLoS One 6(4):e18556)。切断カセットまたはCHYSEL(シス作用性ヒドロラーゼエレメント)とも呼ばれるこれらのペプチドは、高度に保存されたカルボキシ末端D-V/I-EXNPGPモチーフを有するおよそ20アミノ酸長である。これらのペプチドは、実際希少であり、最も一般的には、口蹄疫ウイルス(FMDV)、A型ウマ鼻炎ウイルス(ERAV)、B型ウマ鼻炎ウイルス(ERBV)、脳心筋炎ウイルス(EMCV)、ブタテッショウウイルス(PTV)およびゾセア・アシグナ(Thosea asigna)ウイルス(TAV)等のウイルスに見出される(Luke,G.A.、P.de Felipeら(2008)「Occurrence, function and evolutionary origins of ’2A-like’ sequences in virus genomes.」J Gen Virol 89(Pt 4):1036~1042)。これらのペプチドのうちいくつかのアミノ酸配列は、表17に提示される。2Aに基づく多重抗原発現戦略により、複数の標的抗原をコードする遺伝子は、ウイルス2Aペプチドをコードする配列によって分けられて、単一のオープンリーディングフレーム(ORF)において一体に連結される。オープンリーディングフレーム全体は、単一のプロモーターおよびターミネーターを有するベクターにクローニングすることができる。宿主細胞への構築物の送達後に、複数の抗原をコードするmRNAは、単一のポリタンパク質として転写および翻訳される。2Aペプチドの翻訳の際に、リボソームは、C末端グリシンおよびプロリンの間の結合をスキップする。リボソームスキッピングは、2Aペプチドの上流のペプチド配列を下流の配列から放出する同時翻訳自己触媒「切断」のように作用する。2個のタンパク質抗原の間の2Aペプチドの取り込みは、上流ポリペプチドのC末端への約20アミノ酸および下流タンパク質のN末端への1アミノ酸(プロリン)の付加をもたらすことができる。この方法論の適応において、遍在性プロテアーゼが、上流タンパク質からカセットを切断するように、プロテアーゼ切断部位を2AカセットのN末端に取り込むことができる(Fang,J.、S.Yiら(2007)「An antibody delivery system for regulated expression of therapeutic levels of monoclonal antibodies in vivo.」Mol Ther 15(6):1153~1159)。本開示の多重抗原構築物の構築において使用することができる特定の2Aペプチド配列の例として、Andrea L.Szymczak&Darrio AA Vignali:Development of 2A peptide-based strategies in the design of multicistronic vectors. Expert Opinion Biol. Ther.(2005)5(5)627~638、およびその開示を参照により本明細書に組み込む国際特許出願WO2015/063674に開示されている配列が挙げられる。
多重抗原構築物の構築に使用することができる別の方法は、配列内リボソーム進入部位すなわちIRESの使用を含む。配列内リボソーム進入部位は、ある特定のRNA分子の5’非翻訳領域に見出されるRNAエレメントである(Bonnal,S.、C.Boutonnetら(2003)「IRESdb: the Internal Ribosome Entry Site database.」Nucleic Acids Res 31(1):427~428)。この部位は、RNAに真核生物リボソームを引きつけて、下流オープンリーディングフレームの翻訳を容易にする。正常な細胞7-メチルグアノシンキャップ依存性翻訳とは異なり、IRES媒介性翻訳は、RNA分子のはるかに内部のAUGコドンにおいて開始することができる。この高度に効率的なプロセスは、マルチシストロニック発現ベクターにおける使用に活用することができる(Bochkov,Y.A.およびA.C.Palmenberg(2006)「Translational efficiency of EMCV IRES in bicistronic vectors is dependent upon IRES sequence and gene location.」Biotechniques 41(3):283~284、286、288)。典型的に、2個の導入遺伝子は、IRESで分けられた2個の別々のオープンリーディングフレームとして、ベクターのプロモーターおよび転写ターミネーターの間に挿入される。宿主細胞への構築物の送達後に、両方の導入遺伝子をコードする単一の長い転写物が転写される。第1のORFは、IRESの上流の終止コドンで終結する、伝統的なキャップ依存性様式で翻訳される。第2のORFは、IRESを使用する、キャップ非依存性様式で翻訳される。このようにして、単一の発現カセットを有するベクターから転写された単一のmRNAから、2種の独立したタンパク質を産生することができる。IRES配列の例として、ポリオウイルス(PV)IRES、脳心筋炎ウイルス(EMCV)IRES、口蹄疫ウイルス(FMDV)IRES、A型肝炎ウイルスIRES、B型肝炎ウイルスIRES、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(KSHV)IRESおよび古典的ブタ熱ウイルスIRESが挙げられる。EMCV IRESのヌクレオチド配列は、WO2013/165754(図3)に開示されており、本開示の配列番号93に表記されている。最小EMCV IRESエレメントは、配列番号93のヌクレオチド配列の3’端の15ヌクレオチド(EMCV Lタンパク質の最初の5コドンを表す)を除外する。
核酸分子のオープンリーディングフレーム(ORF)における2個のコード配列または導入遺伝子の間に挿入され、核酸分子からの2種の別々の遺伝子産物の同時発現または翻訳を可能にするように機能するヌクレオチド配列は、本開示で「スペーサーヌクレオチド配列」と称される。多重抗原構築物において使用することができる特定のスペーサーヌクレオチド配列の例として、真核生物プロモーター、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列、および配列内リボソーム進入部位(IRES)配列が挙げられる。特定の2Aペプチドの例として、急性ハチ麻痺ウイルス(ABP2A)、コオロギ麻痺ウイルス(CrP2A)、A型ウマ鼻炎ウイルス(ERA2A)、B型ウマ鼻炎ウイルス(ERB2A)、脳心筋炎ウイルス(EMC2A)、口蹄疫ウイルス(FMD2AまたはF2A)、ヒトロタウイルス(HT2A)、感染性軟化病ウイルス(IF2A)、ブタテッショウウイルス(PT2AまたはP2A)、ブタロタウイルス(PR2A)およびゾセア・アシグナ(Thosea asigna)ウイルス(T2A、TA2AまたはTAV2A)の2Aペプチドが挙げられる。
一部の態様では、本開示は、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のコードヌクレオチド配列、および(ii)免疫原性TERTポリペプチド、免疫原性MUC1ポリペプチド、免疫原性MSLNポリペプチド、免疫原性PSAポリペプチド、免疫原性PSMAポリペプチドまたは免疫原性PSCAポリペプチド等、1種または複数の他の免疫原性TAAポリペプチドをコードする1種または複数のヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。
一部の実施形態では、本開示は、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のコードヌクレオチド配列、および(ii)免疫原性TERTポリペプチドまたは免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも1種のコードヌクレオチド配列を含む抗原構築物を提供する。免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、他のコードヌクレオチド配列の上流または下流のいずれかであり得る。構築物は、コードヌクレオチド配列の間にスペーサーヌクレオチド配列をさらに含むことができる。かかる二重抗原構築物の構造は、式(I)および式(II)に示されている:
TAA-スペーサー-CEA (I)
CEA-スペーサー-TAA (II)
式(I)および(II)のそれぞれにおいて、(i)CEAは、免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、(ii)TAAは、免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードするヌクレオチド配列を表し、(iii)スペーサーは、スペーサーヌクレオチド配列であり、存在しなくてもよい。二重抗原構築物に含まれ得るスペーサーヌクレオチド配列の例として、口蹄疫ウイルス2Aペプチド(FMD2AまたはFMDV2A)、A型ウマ鼻炎ウイルス2Aペプチド(ERA2A)、B型ウマ鼻炎ウイルス2Aペプチド(ERB2A)、脳心筋炎ウイルス2Aペプチド(EMC2AまたはEMCV2A)、ブタテッショウウイルス2Aペプチド(PT2A)およびゾセア・アシグナ(Thosea asigna)ウイルス2Aペプチド(T2A、TA2AまたはTAV2A)をコードするヌクレオチド配列が挙げられる。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
TAA-スペーサー-CEA (I)
CEA-スペーサー-TAA (II)
式(I)および(II)のそれぞれにおいて、(i)CEAは、免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、(ii)TAAは、免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードするヌクレオチド配列を表し、(iii)スペーサーは、スペーサーヌクレオチド配列であり、存在しなくてもよい。二重抗原構築物に含まれ得るスペーサーヌクレオチド配列の例として、口蹄疫ウイルス2Aペプチド(FMD2AまたはFMDV2A)、A型ウマ鼻炎ウイルス2Aペプチド(ERA2A)、B型ウマ鼻炎ウイルス2Aペプチド(ERB2A)、脳心筋炎ウイルス2Aペプチド(EMC2AまたはEMCV2A)、ブタテッショウウイルス2Aペプチド(PT2A)およびゾセア・アシグナ(Thosea asigna)ウイルス2Aペプチド(T2A、TA2AまたはTAV2A)をコードするヌクレオチド配列が挙げられる。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
一部の他の態様では、本開示は、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のコードヌクレオチド配列、(ii)免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする少なくとも1種のコードヌクレオチド配列、および(iii)免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のコードヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。一部の実施形態では、多重抗原構築物は、スペーサーヌクレオチド配列をさらに含む。多重抗原構築物の構造は、式(III)に示されている:
TAA1-スペーサー1-TAA2-スペーサー2-TAA3 (III)
式(III)において、(i)TAA1、TAA2およびTAA3はそれぞれ、免疫原性MUC1ポリペプチド、免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチドからなる群から選択される免疫原性TAAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、TAA1、TAA2およびTAA3は、異なる免疫原性TAAポリペプチドをコードし、(ii)スペーサー1およびスペーサー2はそれぞれ、スペーサーヌクレオチド配列を表し、(a)スペーサー1およびスペーサー2は、同じであっても異なっていてもよく、(b)スペーサー1およびスペーサー2の一方または両方は、存在しなくてもよい。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、独立して、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列またはGGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
TAA1-スペーサー1-TAA2-スペーサー2-TAA3 (III)
式(III)において、(i)TAA1、TAA2およびTAA3はそれぞれ、免疫原性MUC1ポリペプチド、免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチドからなる群から選択される免疫原性TAAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、TAA1、TAA2およびTAA3は、異なる免疫原性TAAポリペプチドをコードし、(ii)スペーサー1およびスペーサー2はそれぞれ、スペーサーヌクレオチド配列を表し、(a)スペーサー1およびスペーサー2は、同じであっても異なっていてもよく、(b)スペーサー1およびスペーサー2の一方または両方は、存在しなくてもよい。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、独立して、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列またはGGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
一部の実施形態では、本開示は、式(III)の多重抗原構築物を提供し、式(III)において、(i)TAA1は、免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(ii)TAA2は、免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(iii)TAA3は、免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、独立して、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列またはGGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
一部の他の実施形態では、本開示は、式(III)の多重抗原構築物を提供し、式(III)において、(i)TAA1は、免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(ii)TAA2は、免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(iii)TAA3は、免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、独立して、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列またはGGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
さらに他の実施形態では、本開示は、式(III)の多重抗原構築物を提供し、式(III)において、(i)TAA1は、免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(ii)TAA2は、免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(iii)TAA3は、免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、独立して、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列またはGGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
一部のさらなる実施形態では、本開示は、式(III)の多重抗原構築物を提供し、式(III)において、(i)TAA1は、免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(ii)TAA2は、免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(iii)TAA3は、免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、独立して、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列またはGGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
さらに他の実施形態では、本開示は、式(III)の多重抗原構築物を提供し、式(III)において、(i)TAA1は、免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(ii)TAA2は、免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(iii)TAA3は、免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、独立して、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列またはGGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
さらに他の実施形態では、本開示は、式(III)の多重抗原構築物を提供し、式(III)において、(i)TAA1は、免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(ii)TAA2は、免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、(iii)TAA3は、免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、独立して、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列またはGGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1およびスペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、スペーサー1は、GGSGGをコードするヌクレオチド配列であり、スペーサー2は、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
一部の特定の実施形態では、本開示は、
(1)MUC1-2A-CEA-2A-TERT (IV)
(2)MUC1-2A-TERT-2A-CEA (V)
(3)CEA-2A-MUC1-2A-TERT (VI)
(4)CEA-2A-TERT-2A-MUC1 (VII)
(5)TERT-2A-MUC1-2A-CEA (VIII)
(6)TERT-2A-CEA-2A-MUC1 (IX)
からなる群から選択される式の多重抗原構築物を提供し、式(IV)~(IX)のそれぞれにおいて、(i)MUC1、CEAおよびTERTは、それぞれ免疫原性MUC1ポリペプチド、免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、(ii)2Aは、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
(1)MUC1-2A-CEA-2A-TERT (IV)
(2)MUC1-2A-TERT-2A-CEA (V)
(3)CEA-2A-MUC1-2A-TERT (VI)
(4)CEA-2A-TERT-2A-MUC1 (VII)
(5)TERT-2A-MUC1-2A-CEA (VIII)
(6)TERT-2A-CEA-2A-MUC1 (IX)
からなる群から選択される式の多重抗原構築物を提供し、式(IV)~(IX)のそれぞれにおいて、(i)MUC1、CEAおよびTERTは、それぞれ免疫原性MUC1ポリペプチド、免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を表し、(ii)2Aは、2Aペプチドをコードするヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性CEAポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする。一部の実施形態では、抗原構築物は、本明細書に上述されている免疫原性MUC1ポリペプチドのいずれかをコードする。
二重抗原構築物および三重抗原構築物を含む多重抗原構築物にコードされる免疫原性CEAポリペプチド、免疫原性MUC1ポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチドは、膜結合形態または細胞質形態であり得る。一部の特定の実施形態では、免疫原性TAAポリペプチドは、細胞質形態である。
一部の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性CEAポリペプチドは、(1)N-ドメインのアミノ酸配列、および(2)ヒトCEAタンパク質の1、2、3、4または5個のC様ドメインのアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、(1)A2、B2、A3およびB3等の少なくとも4個のC様ドメインのアミノ酸配列、ならびに(2)N-ドメインのアミノ酸配列を含む。一部のさらなる実施形態では、免疫原性CEAポリペプチドは、細胞質形態(または「cCEA」)または膜結合形態(または「mCEA」)である。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性CEAポリペプチドは、
(1)(i)配列番号2のアミノ酸323~677もしくは(ii)配列番号2のアミノ酸35~144および323~677を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列;
(2)(i)配列番号2のアミノ酸323~702もしくは(ii)配列番号2のアミノ酸2~144および323~702を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列;
(3)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)(mCEA)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526;
(4)配列番号19のアミノ酸配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)(cCEA)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468;または
(5)上述の(1)~(4)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアント
から選択されるアミノ酸配列を含む。
(1)(i)配列番号2のアミノ酸323~677もしくは(ii)配列番号2のアミノ酸35~144および323~677を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列;
(2)(i)配列番号2のアミノ酸323~702もしくは(ii)配列番号2のアミノ酸2~144および323~702を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列;
(3)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)(mCEA)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526;
(4)配列番号19のアミノ酸配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)(cCEA)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468;または
(5)上述の(1)~(4)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアント
から選択されるアミノ酸配列を含む。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性CEAポリペプチドは、
(1)(i)配列番号2のアミノ酸323~677もしくは(ii)配列番号2のアミノ酸35~144および323~677を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列;
(2)(i)配列番号2のアミノ酸323~702もしくは(ii)配列番号2のアミノ酸2~144および323~702を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列;
(3)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)(mCEA)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526;
(4)配列番号19のアミノ酸配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)(cCEA)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468;または
(5)上述の(1)~(4)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアント
から選択されるアミノ酸配列からなる。
(1)(i)配列番号2のアミノ酸323~677もしくは(ii)配列番号2のアミノ酸35~144および323~677を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列;
(2)(i)配列番号2のアミノ酸323~702もしくは(ii)配列番号2のアミノ酸2~144および323~702を含むもしくはこれからなるアミノ酸配列;
(3)配列番号17のアミノ酸配列(プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列)(mCEA)もしくは配列番号17のアミノ酸4~526;
(4)配列番号19のアミノ酸配列(プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列)(cCEA)もしくは配列番号19のアミノ酸4~468;または
(5)上述の(1)~(4)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアント
から選択されるアミノ酸配列からなる。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、DNAであり、(1)配列番号14のヌクレオチド配列、(2)配列番号16のヌクレオチド配列、(3)配列番号18のヌクレオチド配列、または(4)配列番号14、16もしくは18のヌクレオチド配列の縮重バリアントを含む。一部の他の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、RNAであり、(1)配列番号14のヌクレオチド配列、(2)配列番号16のヌクレオチド配列、(3)配列番号18のヌクレオチド配列、または(4)配列番号14、16もしくは18のヌクレオチド配列の縮重バリアントに対応するヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1タンパク質の20アミノ酸の3~30個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列を含む。一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性MUC1ポリペプチドは、
(1)配列番号5のアミノ酸配列(プラスミド1027ポリペプチド);
(2)配列番号5のアミノ酸4~537を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号5のアミノ酸24~537を含むアミノ酸配列;
(4)配列番号7のアミノ酸配列(プラスミド1197ポリペプチド);
(5)配列番号7のアミノ酸4~517を含むアミノ酸配列;および
(6)位置(positon)513におけるアミノ酸がTであるという条件で、配列番号7のアミノ酸4~517を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
(1)配列番号5のアミノ酸配列(プラスミド1027ポリペプチド);
(2)配列番号5のアミノ酸4~537を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号5のアミノ酸24~537を含むアミノ酸配列;
(4)配列番号7のアミノ酸配列(プラスミド1197ポリペプチド);
(5)配列番号7のアミノ酸4~517を含むアミノ酸配列;および
(6)位置(positon)513におけるアミノ酸がTであるという条件で、配列番号7のアミノ酸4~517を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性MUC1ポリペプチドは、(1)ヒトMUC1タンパク質の20アミノ酸の3~30個のタンデム反復のアミノ酸配列、および(2)VNTR領域に隣接するヒトMUC1タンパク質のアミノ酸配列からなる。一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性MUC1ポリペプチドは、
(1)配列番号5のアミノ酸配列(プラスミド1027ポリペプチド);
(2)配列番号5のアミノ酸4~537を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号5のアミノ酸24~537を含むアミノ酸配列;
(4)配列番号7のアミノ酸配列(プラスミド1197ポリペプチド);
(5)配列番号7のアミノ酸4~517を含むアミノ酸配列;および
(6)位置(positon)513におけるアミノ酸がTであるという条件で、配列番号7のアミノ酸4~517を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
(1)配列番号5のアミノ酸配列(プラスミド1027ポリペプチド);
(2)配列番号5のアミノ酸4~537を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号5のアミノ酸24~537を含むアミノ酸配列;
(4)配列番号7のアミノ酸配列(プラスミド1197ポリペプチド);
(5)配列番号7のアミノ酸4~517を含むアミノ酸配列;および
(6)位置(positon)513におけるアミノ酸がTであるという条件で、配列番号7のアミノ酸4~517を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性MUC1ポリペプチドは、
(1)配列番号5のアミノ酸4~537からなるアミノ酸配列;
(2)配列番号5のアミノ酸24~537からなるアミノ酸配列;
(3)配列番号7のアミノ酸4~517からなるアミノ酸配列;および
(4)位置(positon)513におけるアミノ酸がTであるという条件で、配列番号7のアミノ酸4~517からなるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
(1)配列番号5のアミノ酸4~537からなるアミノ酸配列;
(2)配列番号5のアミノ酸24~537からなるアミノ酸配列;
(3)配列番号7のアミノ酸4~517からなるアミノ酸配列;および
(4)位置(positon)513におけるアミノ酸がTであるという条件で、配列番号7のアミノ酸4~517からなるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、DNAであり、(1)配列番号4のヌクレオチド配列、(2)配列番号6のヌクレオチド配列、または(3)配列番号4もしくは6のヌクレオチド配列の縮重バリアントを含む。一部の他の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、RNAであり、(1)配列番号4のヌクレオチド配列、(2)配列番号6のヌクレオチド配列、または(3)配列番号4もしくは6のヌクレオチド配列の縮重バリアントに対応するヌクレオチド配列を含む。
多重抗原構築物にコードされる免疫原性TERTポリペプチドは、全長TERTタンパク質、またはTERTタンパク質のいずれかの短縮もしくは突然変異形態であり得る。全長TERTタンパク質は、短縮形態よりも強い免疫応答を生成すると予想される。しかし、構築物の送達に選択された特定のベクターに応じて、ベクターは、全長TERTタンパク質をコードする遺伝子を保有する能力を有しない場合がある。したがって、導入遺伝子が特定のベクターに適合するように、タンパク質からのいくつかのアミノ酸の欠失をなすことができる。アミノ酸の欠失は、TERTタンパク質(例えば、配列番号3のTERTタンパク質由来の)の配列におけるN末端、C末端またはいずれかの場所からなすことができる。核局在化シグナルを除去し、これにより、ポリペプチドを細胞質型にし、細胞の抗原プロセシング/提示機構へのアクセスを増加させるために、追加的な欠失をなすことができる。一部の実施形態では、TERTタンパク質のN末端の位置200、300、400、500または600までのアミノ酸は、免疫原性TERTポリペプチド(例えば、配列番号3のTERTタンパク質由来の)から存在しない。
一部の特定の実施形態では、配列番号3のTERTタンパク質のN末端のアミノ酸1~343(TERT343)、1~240(TERT240)または1~541(TERT541)は、存在しない。よって、ある実施形態では、本発明の多重抗原構築物にコードされる免疫原性TERTポリペプチドのアミノ酸配列は、次のうちのいずれかである:
(1)配列番号3のアミノ酸51~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~50を欠く、アミノ酸配列;
(2)配列番号3のアミノ酸101~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~100を欠く、アミノ酸配列;
(3)配列番号3のアミノ酸151~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~150を欠く、アミノ酸配列;
(4)配列番号3のアミノ酸201~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~200を欠く、アミノ酸配列;
(5)配列番号3のアミノ酸241~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~240を欠く、アミノ酸配列;
(6)配列番号3のアミノ酸301~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~300を欠く、アミノ酸配列;
(7)配列番号3のアミノ酸351~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~350を欠く、アミノ酸配列;
(8)配列番号3のアミノ酸401~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~400を欠く、アミノ酸配列;
(9)配列番号3のアミノ酸451~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~450を欠く、アミノ酸配列;
(10)配列番号3のアミノ酸501~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~500を欠く、アミノ酸配列;
(11)配列番号3のアミノ酸551~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~550を欠くアミノ酸配列;または
(12)配列番号3のアミノ酸601~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~600を欠くアミノ酸配列。
(1)配列番号3のアミノ酸51~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~50を欠く、アミノ酸配列;
(2)配列番号3のアミノ酸101~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~100を欠く、アミノ酸配列;
(3)配列番号3のアミノ酸151~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~150を欠く、アミノ酸配列;
(4)配列番号3のアミノ酸201~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~200を欠く、アミノ酸配列;
(5)配列番号3のアミノ酸241~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~240を欠く、アミノ酸配列;
(6)配列番号3のアミノ酸301~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~300を欠く、アミノ酸配列;
(7)配列番号3のアミノ酸351~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~350を欠く、アミノ酸配列;
(8)配列番号3のアミノ酸401~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~400を欠く、アミノ酸配列;
(9)配列番号3のアミノ酸451~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~450を欠く、アミノ酸配列;
(10)配列番号3のアミノ酸501~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~500を欠く、アミノ酸配列;
(11)配列番号3のアミノ酸551~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~550を欠くアミノ酸配列;または
(12)配列番号3のアミノ酸601~1132を含み、配列番号3のアミノ酸1~600を欠くアミノ酸配列。
ある実施形態では、本発明の多重抗原構築物にコードされる免疫原性TERTポリペプチドのアミノ酸配列は、次のうちのいずれかである:
(1)配列番号3のアミノ酸51~1132、101~1132、151~1132、201~1132、251~1132、301~1132、351~1132、401~1132、451~1132、501~1132または551~1132からなるアミノ酸配列;
(2)配列番号3のアミノ酸601~1132からなるアミノ酸配列
(3)配列番号3のアミノ酸542~1132からなるアミノ酸配列
(4)配列番号3のアミノ酸344~1132からなるアミノ酸配列
(5)配列番号3のアミノ酸241~1132からなるアミノ酸配列。
(1)配列番号3のアミノ酸51~1132、101~1132、151~1132、201~1132、251~1132、301~1132、351~1132、401~1132、451~1132、501~1132または551~1132からなるアミノ酸配列;
(2)配列番号3のアミノ酸601~1132からなるアミノ酸配列
(3)配列番号3のアミノ酸542~1132からなるアミノ酸配列
(4)配列番号3のアミノ酸344~1132からなるアミノ酸配列
(5)配列番号3のアミノ酸241~1132からなるアミノ酸配列。
TERT触媒ドメインを不活性化するために、追加的なアミノ酸の突然変異を導入することができる。かかる突然変異の例として、D712A等の配列番号3の位置712におけるアスパラギン酸の置換、およびV713I等の配列番号3の位置713におけるバリンの置換が挙げられる。したがって、ある実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性TERTポリペプチドは、上に開示されているTERTポリペプチドのいずれかからなり、配列番号3のアスパラギン酸712に対応する位置における置換および/または配列番号3のバリン713に対応する位置における置換を有し、前記突然変異(複数可)は、TERT触媒ドメインを不活性化する。ある実施形態では、前記突然変異は、配列番号3の位置712に対応する位置(positon)におけるアスパラギン酸の置換、および配列番号3の位置713に対応する位置におけるバリンの置換からなり、前記突然変異(複数可)は、TERT触媒ドメインを不活性化する。ある実施形態では、前記突然変異は、配列番号3の位置712に対応する位置におけるアラニンによるアスパラギン酸の置換(D712A)、および配列番号3の位置713に対応する位置におけるイソロイシンによるバリンの置換(V713I)からなる。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性TERTポリペプチドは、
(1)配列番号9のアミノ酸配列(プラスミド1112ポリペプチド)もしくは配列番号9のアミノ酸2~893を含むアミノ酸配列;
(2)配列番号11のアミノ酸配列(プラスミド1326ポリペプチド)もしくは配列番号11のアミノ酸4~791を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号13のアミノ酸配列(プラスミド1330ポリペプチド)もしくは配列番号13のアミノ酸4~594を含むアミノ酸配列;または
(4)上述の(1)~(3)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
(1)配列番号9のアミノ酸配列(プラスミド1112ポリペプチド)もしくは配列番号9のアミノ酸2~893を含むアミノ酸配列;
(2)配列番号11のアミノ酸配列(プラスミド1326ポリペプチド)もしくは配列番号11のアミノ酸4~791を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号13のアミノ酸配列(プラスミド1330ポリペプチド)もしくは配列番号13のアミノ酸4~594を含むアミノ酸配列;または
(4)上述の(1)~(3)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性TERTポリペプチドは、
(1)配列番号9のアミノ酸配列(プラスミド1112ポリペプチド)もしくは配列番号9のアミノ酸2~893を含むアミノ酸配列;
(2)配列番号11のアミノ酸配列(プラスミド1326ポリペプチド)もしくは配列番号11のアミノ酸4~791を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号13のアミノ酸配列(プラスミド1330ポリペプチド)もしくは配列番号13のアミノ酸4~594を含むアミノ酸配列;または
(4)上述の(1)~(3)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
(1)配列番号9のアミノ酸配列(プラスミド1112ポリペプチド)もしくは配列番号9のアミノ酸2~893を含むアミノ酸配列;
(2)配列番号11のアミノ酸配列(プラスミド1326ポリペプチド)もしくは配列番号11のアミノ酸4~791を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号13のアミノ酸配列(プラスミド1330ポリペプチド)もしくは配列番号13のアミノ酸4~594を含むアミノ酸配列;または
(4)上述の(1)~(3)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物にコードされる免疫原性TERTポリペプチドは、
(1)配列番号9のアミノ酸2~893からなるアミノ酸配列;
(2)配列番号11のアミノ酸4~791からなるアミノ酸配列;
(3)配列番号13のアミノ酸4~594からなるアミノ酸配列;または
(4)上述の(1)~(3)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
(1)配列番号9のアミノ酸2~893からなるアミノ酸配列;
(2)配列番号11のアミノ酸4~791からなるアミノ酸配列;
(3)配列番号13のアミノ酸4~594からなるアミノ酸配列;または
(4)上述の(1)~(3)のアミノ酸配列のいずれかの機能的バリアントであるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。
一部の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、DNAであり、(1)配列番号8のヌクレオチド配列、(2)配列番号10のヌクレオチド配列、(3)配列番号12のヌクレオチド配列、または(4)配列番号8、配列番号10もしくは配列番号12のヌクレオチド配列の縮重バリアントを含む。一部の他の特定の実施形態では、多重抗原構築物は、RNAであり、(1)配列番号8のヌクレオチド配列、(2)配列番号10のヌクレオチド配列、(3)配列番号12のヌクレオチド配列、または(4)配列番号8、10もしくは12のヌクレオチド配列の縮重バリアントに対応するヌクレオチド配列を含む。
一部の特定の実施形態では、本開示は、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(ii)免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
(1)配列番号31のアミノ酸配列もしくは配列番号31のアミノ酸4~1088;
(2)配列番号33のアミノ酸配列もしくは配列番号33のアミノ酸4~1081;
(3)配列番号35のアミノ酸配列もしくは配列番号35のアミノ酸4~1085;
(4)配列番号37のアミノ酸配列もしくは配列番号37のアミノ酸4~1030;
(5)配列番号39のアミノ酸配列もしくは配列番号39のアミノ酸4~1381;または
(6)配列番号41のアミノ酸配列もしくは配列番号41のアミノ酸4~1441
を含むアミノ酸配列をコードする多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号31のアミノ酸配列もしくは配列番号31のアミノ酸4~1088;
(2)配列番号33のアミノ酸配列もしくは配列番号33のアミノ酸4~1081;
(3)配列番号35のアミノ酸配列もしくは配列番号35のアミノ酸4~1085;
(4)配列番号37のアミノ酸配列もしくは配列番号37のアミノ酸4~1030;
(5)配列番号39のアミノ酸配列もしくは配列番号39のアミノ酸4~1381;または
(6)配列番号41のアミノ酸配列もしくは配列番号41のアミノ酸4~1441
を含むアミノ酸配列をコードする多重抗原構築物を提供する。
一部の特定の実施形態では、本開示は、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(ii)免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
(1)配列番号31のアミノ酸配列もしくは配列番号31のアミノ酸4~1088;
(2)配列番号33のアミノ酸配列もしくは配列番号33のアミノ酸4~1081;
(3)配列番号35のアミノ酸配列もしくは配列番号35のアミノ酸4~1085;
(4)配列番号37のアミノ酸配列もしくは配列番号37のアミノ酸4~1030;
(5)配列番号39のアミノ酸配列もしくは配列番号39のアミノ酸4~1381;または
(6)配列番号41のアミノ酸配列もしくは配列番号41のアミノ酸4~1441
からなるアミノ酸配列をコードする多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号31のアミノ酸配列もしくは配列番号31のアミノ酸4~1088;
(2)配列番号33のアミノ酸配列もしくは配列番号33のアミノ酸4~1081;
(3)配列番号35のアミノ酸配列もしくは配列番号35のアミノ酸4~1085;
(4)配列番号37のアミノ酸配列もしくは配列番号37のアミノ酸4~1030;
(5)配列番号39のアミノ酸配列もしくは配列番号39のアミノ酸4~1381;または
(6)配列番号41のアミノ酸配列もしくは配列番号41のアミノ酸4~1441
からなるアミノ酸配列をコードする多重抗原構築物を提供する。
一部の特定の実施形態では、本開示は、DNAであり、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(ii)免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
(1)配列番号30のヌクレオチド配列もしくは配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド配列もしくは配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド配列もしくは配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド配列もしくは配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド配列もしくは配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド配列もしくは配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;または
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号30のヌクレオチド配列もしくは配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド配列もしくは配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド配列もしくは配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド配列もしくは配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド配列もしくは配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド配列もしくは配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;または
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の特定の実施形態では、本開示は、DNAであり、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(ii)免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
(1)配列番号30のヌクレオチド10~3264からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド10~3243からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド10~3255からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド10~3090からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド10~4143からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド10~4323からなるヌクレオチド配列;または
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号30のヌクレオチド10~3264からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド10~3243からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド10~3255からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド10~3090からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド10~4143からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド10~4323からなるヌクレオチド配列;または
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、RNA(例えば、mRNA)であり、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(ii)免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
(1)配列番号30のヌクレオチド配列もしくは配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド配列もしくは配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド配列もしくは配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド配列もしくは配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド配列もしくは配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド配列もしくは配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;または
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号30のヌクレオチド配列もしくは配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド配列もしくは配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド配列もしくは配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド配列もしくは配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド配列もしくは配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド配列もしくは配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;または
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、RNA(例えば、mRNA)であり、(i)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(ii)免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドのいずれかをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
(1)配列番号30のヌクレオチド10~3264からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド10~3243からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド10~3255からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド10~3090からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド10~4143からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド10~4323からなるヌクレオチド配列;または
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号30のヌクレオチド10~3264からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド10~3243からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド10~3255からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド10~3090からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド10~4143からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド10~4323からなるヌクレオチド配列;または
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の他の実施形態では、本開示は、(1)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、(2)免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(3)免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
(1)配列番号43のアミノ酸配列もしくは配列番号43のアミノ酸4~2003を含むアミノ酸配列;
(2)配列番号45のアミノ酸配列もしくは配列番号45のアミノ酸4~2001を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号47のアミノ酸配列もしくは配列番号47のアミノ酸4~2008を含むアミノ酸配列;
(4)配列番号49のアミノ酸配列もしくは配列番号49のアミノ酸4~1996を含むアミノ酸配列;
(5)配列番号51のアミノ酸配列もしくは配列番号51のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列;または
(6)配列番号53のアミノ酸配列もしくは配列番号53のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号43のアミノ酸配列もしくは配列番号43のアミノ酸4~2003を含むアミノ酸配列;
(2)配列番号45のアミノ酸配列もしくは配列番号45のアミノ酸4~2001を含むアミノ酸配列;
(3)配列番号47のアミノ酸配列もしくは配列番号47のアミノ酸4~2008を含むアミノ酸配列;
(4)配列番号49のアミノ酸配列もしくは配列番号49のアミノ酸4~1996を含むアミノ酸配列;
(5)配列番号51のアミノ酸配列もしくは配列番号51のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列;または
(6)配列番号53のアミノ酸配列もしくは配列番号53のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の他の実施形態では、本開示は、(1)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、(2)免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(3)免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、
(1)配列番号43のアミノ酸4~2003からなるアミノ酸配列;
(2)配列番号45のアミノ酸4~2001からなるアミノ酸配列;
(3)配列番号47のアミノ酸4~2008からなるアミノ酸配列;
(4)配列番号49のアミノ酸4~1996からなるアミノ酸配列;
(5)配列番号51のアミノ酸4~1943からなるアミノ酸配列;または
(6)配列番号53のアミノ酸4~1943からなるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号43のアミノ酸4~2003からなるアミノ酸配列;
(2)配列番号45のアミノ酸4~2001からなるアミノ酸配列;
(3)配列番号47のアミノ酸4~2008からなるアミノ酸配列;
(4)配列番号49のアミノ酸4~1996からなるアミノ酸配列;
(5)配列番号51のアミノ酸4~1943からなるアミノ酸配列;または
(6)配列番号53のアミノ酸4~1943からなるアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の特定の実施形態では、本開示は、(1)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、(2)免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(3)免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、DNAであり、
(1)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の特定の実施形態では、本開示は、(1)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、(2)免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(3)免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、DNAであり、
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、RNA(例えば、mRNA)であり、
(1)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、RNA(例えば、mRNA)であり、
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
また他の特定の実施形態では、本開示は、(1)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、(2)免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(3)免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、RNA(例えば、mRNA)であり、
(1)配列番号87のヌクレオチド配列;
(2)配列番号88のヌクレオチド配列;
(3)配列番号89のヌクレオチド配列;
(4)配列番号90のヌクレオチド配列;
(5)配列番号91のヌクレオチド配列;
(6)配列番号92のヌクレオチド配列;および
(7)配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91または配列番号92のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアント
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号87のヌクレオチド配列;
(2)配列番号88のヌクレオチド配列;
(3)配列番号89のヌクレオチド配列;
(4)配列番号90のヌクレオチド配列;
(5)配列番号91のヌクレオチド配列;
(6)配列番号92のヌクレオチド配列;および
(7)配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91または配列番号92のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアント
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を提供する。
また他の特定の実施形態では、本開示は、(1)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、(2)免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(3)免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物であって、RNA(例えば、mRNA)であり、
(1)配列番号87のヌクレオチド配列;
(2)配列番号88のヌクレオチド配列;
(3)配列番号89のヌクレオチド配列;
(4)配列番号90のヌクレオチド配列;
(5)配列番号91のヌクレオチド配列;
(6)配列番号92のヌクレオチド配列;および
(7)配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91または配列番号92のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアント
からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる多重抗原構築物を提供する。
(1)配列番号87のヌクレオチド配列;
(2)配列番号88のヌクレオチド配列;
(3)配列番号89のヌクレオチド配列;
(4)配列番号90のヌクレオチド配列;
(5)配列番号91のヌクレオチド配列;
(6)配列番号92のヌクレオチド配列;および
(7)配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91または配列番号92のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアント
からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる多重抗原構築物を提供する。
D.抗原構築物を含有するベクター
本発明の別の態様は、単一抗原構築物、二重抗原構築物、三重抗原構築物および他の多重抗原構築物を含む本開示によって提供される抗原構築物のいずれかのうち1種または複数を含有するベクターに関する。ベクターは、抗原構築物にコードされる免疫原性TAAポリペプチドのクローニングもしくは発現に、または宿主細胞へのもしくはヒト等の宿主動物へのワクチン等の組成物中の抗原構築物の送達に有用である。
本発明の別の態様は、単一抗原構築物、二重抗原構築物、三重抗原構築物および他の多重抗原構築物を含む本開示によって提供される抗原構築物のいずれかのうち1種または複数を含有するベクターに関する。ベクターは、抗原構築物にコードされる免疫原性TAAポリペプチドのクローニングもしくは発現に、または宿主細胞へのもしくはヒト等の宿主動物へのワクチン等の組成物中の抗原構築物の送達に有用である。
プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクターおよびウイルスベクター等、多種多様なベクターを、本開示によって提供される抗原構築物を含有および発現するように調製することができる。オープンリーディングフレーム(ORF)とも称される導入遺伝子挿入物配列(すなわち、本開示によって提供される単一抗原構築物または多重抗原構築物)に加えて、ベクターの構造は典型的に、複製起点、マルチクローニング部位および選択可能マーカー等、発現を可能にするまたは容易にする他の成分またはエレメントを含む。
一部の実施形態では、本開示は、本開示によって提供される抗原構築物を含有するプラスミドベクターを提供する。適したプラスミドベクターの例として、pBR325、pUC18、pSKF、pET23DおよびpGB-2が挙げられる。プラスミドベクターの他の例およびかかるベクターを構築する方法は、米国特許第5,589,466号、同第5,688,688号および同第5,814,482号に記載されている。単一抗原構築物、二重抗原構築物または三重抗原構築物を含む特定の例示的なプラスミドベクターの構築は、本開示にも記載されている。
一部の特定の実施形態では、本開示は、配列番号54、55、56、57、59、61、63、65、67、69、70、71、72、73および74のいずれかのヌクレオチド配列を含むプラスミドベクターを提供する。
他の実施形態では、本発明は、DNAウイルスおよびRNAウイルス(レトロウイルス)を含む、ウイルスから構築されたベクター(すなわち、ウイルスベクター)を提供する。ベクターの構築に使用することができるDNAウイルスの例として、単純ヘルペスウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルスおよびアデノウイルスが挙げられる。ベクターの構築に使用することができるRNAウイルスの例として、アルファウイルス、フラビウイルス、ペスチウイルス、インフルエンザウイルス、リッサウイルスおよびベシクロウイルスが挙げられる。様々なウイルスからのベクターの構築は、当技術分野で公知である。レトロウイルスベクターの例は、米国特許第5,716,613号、同第5,716,832号および同第5,817,491号に記載されている。アルファウイルスから生成することができるベクターの例は、米国特許第5,091,309号、同第5,843,723号および同第5,789,245号に記載されている。他のベクターの例として、(1)カナリアポックスウイルスまたはワクシニアウイルス等のポックスウイルス(米国特許第4,603,112号、同第4,769,330号および同第5,017,487号;WO89/01973);(2)SV40(Mulliganら、Nature 277:108~114、1979);(3)ヘルペス(Kit、Adv.Exp.Med.Biol.215:219~236、1989;米国特許第5,288,641号);および(4)HIV等のレンチウイルス(Poznansky,J.Virol.65:532~536、1991)が挙げられる。
一部の特定の実施形態では、本開示は、サルアデノウイルス等の非ヒト霊長類アデノウイルスに由来するアデノウイルスベクターを提供する。かかるアデノウイルスベクターの例およびその調製は、PCT出願公開WO2005/071093およびWO2010/086189に記載されており、ChAd3、ChAd4、ChAd5、ChAd7、ChAd8、ChAd9、ChAd10、ChAd11、ChAd16、ChAd17、ChAd19、ChAd20、ChAd22、ChAd24、ChAd26、ChAd30、ChAd31、ChAd37、ChAd38、ChAd44、ChAd63、ChAd68、ChAd82、ChAd55、ChAd73、ChAd83、ChAd146、ChAd147、PanAd1、Pan Ad2およびPan Ad3等のサルアデノウイルスから構築された非複製ベクター、ならびにアデノウイルスAd4またはAd7から構築された複製可能なベクターを含む。サルアデノウイルスからのアデノウイルスベクターの構築において、E1A、E1B、E2A、E2B、E3およびE4から選択されるウイルスのゲノム領域由来の初期遺伝子のうち1種または複数が、欠失される、または欠失もしくは突然変異によって非機能的にされることが好ましい。特定の実施形態では、ベクターは、ChAd68から構築される。チンパンジーアデノウイルスChAd68は、文献で、サルアデノウイルス25、C68、AdC68、Chad68、SAdV25、PanAd9またはPan9とも称される。多重抗原構築物を発現させるためにChAd68からベクターを構築する方法は、国際特許出願公開WO2015/063647に記載されている。発現ベクターは典型的に、発現させようとする核酸配列に作動可能に連結された1種または複数の制御エレメントを含む。用語「制御エレメント」は、レシピエント細胞におけるコード配列の複製、転写および翻訳をまとめてもたらす、プロモーター領域、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、上流調節性ドメイン、複製起点、配列内リボソーム進入部位(「IRES」)、エンハンサーその他をまとめて指す。選択されたコード配列が、適切な宿主細胞において複製、転写および翻訳され得る限りにおいて、これらの制御エレメントの全てが常に存在している必要はない。制御エレメントは、特定の宿主細胞および他のベクター成分の供給源または構造等、当業者に公知のいくつかの因子に基づき選択される。免疫原性TAAポリペプチドの発現を増強するため、免疫原性TAAポリペプチドをコードする配列の上流にコザック配列を配置することができる。脊椎動物に関して、公知のコザック配列は、(GCC)NCCATGGであり、ここで、Nは、AまたはGであり、GCCは保存性が低い。使用することができる例示的なコザック配列は、GAACATGG、ACCAUGGおよびACCATGGを含む。
一部の実施形態では、ベクターは、(i)少なくとも1種の免疫原性CEAポリペプチド、および(ii)少なくとも1種の免疫原性MUC1ポリペプチドまたは少なくとも1種の免疫原性TERTポリペプチドをコードする多重抗原構築物を含む。ベクターは、DNAプラスミドベクター、DNAウイルスベクター、RNAプラスミドベクターまたはRNAウイルスベクターであり得る。一部の特定の実施形態では、ベクターは、DNAベクターであり、
(1)配列番号30のヌクレオチド配列または配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含む。
(1)配列番号30のヌクレオチド配列または配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含む。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号30のヌクレオチド配列または配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むRNAベクターを提供する。
(1)配列番号30のヌクレオチド配列または配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むRNAベクターを提供する。
一部の他の実施形態では、ベクターは、(i)少なくとも1種の免疫原性MUC1ポリペプチド、(ii)少なくとも1種の免疫原性CEAポリペプチドおよび(iii)少なくとも1種の免疫原性TERTポリペプチドをコードする多重抗原構築物を含有する。ベクターは、DNAプラスミドベクター、DNAウイルスベクター、RNAプラスミドベクターまたはRNAウイルスベクターであり得る。一部の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号42のヌクレオチド配列もしくは配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド配列もしくは配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド配列もしくは配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド配列もしくは配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド配列もしくは配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;または
(6)配列番号52のヌクレオチド配列もしくは配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含むDNAベクターを提供する。
(1)配列番号42のヌクレオチド配列もしくは配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド配列もしくは配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド配列もしくは配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド配列もしくは配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド配列もしくは配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;または
(6)配列番号52のヌクレオチド配列もしくは配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含むDNAベクターを提供する。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むRNAベクターを提供する。
(1)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むRNAベクターを提供する。
一部の特定の実施形態では、本開示は、配列番号58、60、62、64、66および68のいずれかのヌクレオチド配列を含むDNAウイルスベクターを提供する。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号57、59、61、63、65、67、69、70、71、72、73および74のいずれかのヌクレオチド配列を含むDNAプラスミドベクターを提供する。
一部の特定の実施形態では、ベクターは、DNAベクターであり、
(1)配列番号30のヌクレオチド10~3264からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド10~3243からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド10~3255からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド10~3090からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド10~4143からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド10~4323からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含む。
(1)配列番号30のヌクレオチド10~3264からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド10~3243からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド10~3255からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド10~3090からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド10~4143からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド10~4323からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含む。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号30のヌクレオチド10~3264からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド10~3243からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド10~3255からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド10~3090からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド10~4143からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド10~4323からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むRNAベクターを提供する。
(1)配列番号30のヌクレオチド10~3264からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号32のヌクレオチド10~3243からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号34のヌクレオチド10~3255からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号36のヌクレオチド10~3090からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号38のヌクレオチド10~4143からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号40のヌクレオチド10~4323からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むRNAベクターを提供する。
一部の他の実施形態では、ベクターは、(i)少なくとも1種の免疫原性MUC1ポリペプチド、(ii)少なくとも1種の免疫原性CEAポリペプチドおよび(iii)少なくとも1種の免疫原性TERTポリペプチドをコードする多重抗原構築物を含有する。ベクターは、DNAプラスミドベクター、DNAウイルスベクター、RNAプラスミドベクターまたはRNAウイルスベクターであり得る。一部の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;または
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含むDNAベクターを提供する。
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;または
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む多重抗原構築物を含むDNAベクターを提供する。
一部の特定の実施形態では、本開示は、配列番号58、60、62、64、66および68のいずれかのヌクレオチド配列からなるDNAウイルスベクターを提供する。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号57、59、61、63、65、67、69、70、71、72、73および74のいずれかのヌクレオチド配列からなるDNAプラスミドベクターを提供する。
一部の他の特定の実施形態では、本開示は、
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むRNAベクターを提供する。
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含むRNAベクターを提供する。
E.抗原構築物またはベクターを含む組成物
本開示はまた、本開示によって提供される単離された核酸分子(すなわち、抗原構築物)またはベクターを含む組成物を提供する。組成物は、二重抗原構築物または三重抗原構築物等の1種のみの個々の抗原構築物を含むことができる。組成物は、単一抗原構築物および二重抗原構築物の組合せ、または異なる免疫原性TAAポリペプチドをコードする3種以上の単一抗原構築物の組合せ等の2種以上の異なる個々の抗原構築物を含むこともできる。組成物は、ヒトを含む哺乳動物におけるin vitroまたはin vivoでのTAAタンパク質に対する免疫応答の誘発に有用である。一部の実施形態では、組成物は、免疫原性組成物または医薬組成物である。一部の特定の実施形態では、組成物は、(1)異常な細胞増殖を阻害し、がんの発症に対する保護をもたらす(予防薬として使用される)、(2)TAA過剰発現に関連するがんを処置する(治療薬として使用される)、または(3)CEA、MUC1およびTERT等の特定のヒトTAAに対する免疫応答を誘発するための、ヒトへの投与のためのワクチン組成物である。
本開示はまた、本開示によって提供される単離された核酸分子(すなわち、抗原構築物)またはベクターを含む組成物を提供する。組成物は、二重抗原構築物または三重抗原構築物等の1種のみの個々の抗原構築物を含むことができる。組成物は、単一抗原構築物および二重抗原構築物の組合せ、または異なる免疫原性TAAポリペプチドをコードする3種以上の単一抗原構築物の組合せ等の2種以上の異なる個々の抗原構築物を含むこともできる。組成物は、ヒトを含む哺乳動物におけるin vitroまたはin vivoでのTAAタンパク質に対する免疫応答の誘発に有用である。一部の実施形態では、組成物は、免疫原性組成物または医薬組成物である。一部の特定の実施形態では、組成物は、(1)異常な細胞増殖を阻害し、がんの発症に対する保護をもたらす(予防薬として使用される)、(2)TAA過剰発現に関連するがんを処置する(治療薬として使用される)、または(3)CEA、MUC1およびTERT等の特定のヒトTAAに対する免疫応答を誘発するための、ヒトへの投与のためのワクチン組成物である。
一部の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、多重抗原構築物または多重抗原構築物を含むベクターを含み、多重抗原構築物は、2種以上の免疫原性TAAポリペプチドをコードする。例えば、多重抗原構築物は、次の組合せのいずれかにおいて2種以上の免疫原性TAAポリペプチドをコードすることができる:
(1)免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性MUC1ポリペプチド;
(2)免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチド;ならびに
(3)免疫原性CEAポリペプチド、免疫原性MUC1ポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチド。
(1)免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性MUC1ポリペプチド;
(2)免疫原性CEAポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチド;ならびに
(3)免疫原性CEAポリペプチド、免疫原性MUC1ポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチド。
一部の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、二重抗原構築物または二重抗原構築物を含むベクターを含み、二重抗原構築物は、
(1)配列番号31のアミノ酸配列または配列番号31のアミノ酸4~1088をコードするヌクレオチド配列;
(2)配列番号33のアミノ酸配列または配列番号33のアミノ酸4~1081をコードするヌクレオチド配列;
(3)配列番号35のアミノ酸配列または配列番号35のアミノ酸4~1085をコードするヌクレオチド配列;
(4)配列番号37のアミノ酸配列または配列番号37のアミノ酸4~1030をコードするヌクレオチド配列;
(5)配列番号39のアミノ酸配列または配列番号39のアミノ酸4~1381をコードするヌクレオチド配列;
(6)配列番号41のアミノ酸配列または配列番号41のアミノ酸4~1441をコードするヌクレオチド配列;
(7)配列番号30のヌクレオチド配列または配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(8)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(9)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(10)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(11)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(12)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;および
(13)上述の(1)~(12)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
(1)配列番号31のアミノ酸配列または配列番号31のアミノ酸4~1088をコードするヌクレオチド配列;
(2)配列番号33のアミノ酸配列または配列番号33のアミノ酸4~1081をコードするヌクレオチド配列;
(3)配列番号35のアミノ酸配列または配列番号35のアミノ酸4~1085をコードするヌクレオチド配列;
(4)配列番号37のアミノ酸配列または配列番号37のアミノ酸4~1030をコードするヌクレオチド配列;
(5)配列番号39のアミノ酸配列または配列番号39のアミノ酸4~1381をコードするヌクレオチド配列;
(6)配列番号41のアミノ酸配列または配列番号41のアミノ酸4~1441をコードするヌクレオチド配列;
(7)配列番号30のヌクレオチド配列または配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列;
(8)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列;
(9)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列;
(10)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列;
(11)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列;
(12)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列;および
(13)上述の(1)~(12)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
一部の他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、(1)三重抗原構築物、または(2)三重抗原構築物を含むベクターを含み、三重抗原構築物は、
(1)配列番号43のアミノ酸配列または配列番号43のアミノ酸4~2003をコードするヌクレオチド配列;
(2)配列番号45のアミノ酸配列または配列番号45のアミノ酸4~2001をコードするヌクレオチド配列;
(3)配列番号47のアミノ酸配列または配列番号47のアミノ酸4~2008をコードするヌクレオチド配列;
(4)配列番号49のアミノ酸配列または配列番号49のアミノ酸4~1996をコードするヌクレオチド配列;
(5)配列番号51のアミノ酸配列または配列番号51のアミノ酸4~1943をコードするヌクレオチド配列;
(6)配列番号53のアミノ酸配列または配列番号53のアミノ酸4~1943をコードするヌクレオチド配列;
(7)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(8)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(9)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(10)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(11)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;
(12)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(13)上述の(1)~(12)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
(1)配列番号43のアミノ酸配列または配列番号43のアミノ酸4~2003をコードするヌクレオチド配列;
(2)配列番号45のアミノ酸配列または配列番号45のアミノ酸4~2001をコードするヌクレオチド配列;
(3)配列番号47のアミノ酸配列または配列番号47のアミノ酸4~2008をコードするヌクレオチド配列;
(4)配列番号49のアミノ酸配列または配列番号49のアミノ酸4~1996をコードするヌクレオチド配列;
(5)配列番号51のアミノ酸配列または配列番号51のアミノ酸4~1943をコードするヌクレオチド配列;
(6)配列番号53のアミノ酸配列または配列番号53のアミノ酸4~1943をコードするヌクレオチド配列;
(7)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列;
(8)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列;
(9)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列;
(10)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列;
(11)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;
(12)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列;および
(13)上述の(1)~(12)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
一部の他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むベクターを含み、三重抗原構築物は、
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(7)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
(1)配列番号42のヌクレオチド10~6009からなるヌクレオチド配列;
(2)配列番号44のヌクレオチド10~6003からなるヌクレオチド配列;
(3)配列番号46のヌクレオチド10~6024からなるヌクレオチド配列;
(4)配列番号48のヌクレオチド10~5988からなるヌクレオチド配列;
(5)配列番号50のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;
(6)配列番号52のヌクレオチド10~5829からなるヌクレオチド配列;および
(7)上述の(1)~(7)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、RNA三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むRNAベクターを含み、三重抗原構築物は、(1)配列番号42、44、46、48、50、52の配列のいずれか、または(2)配列番号42、44、46、48、50、52のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列を含む。
他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、RNA三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むRNAベクターを含み、三重抗原構築物は、(1)配列番号42、44、46、48、50、52の配列のいずれか、または(2)配列番号42、44、46、48、50、52のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列に対応するヌクレオチド配列からなる。
また他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むベクターを含み、三重抗原構築物は、(1)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列、または(2)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアントを含む。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号57、59、61、63、65および67のいずれかのヌクレオチド配列を含むプラスミドを含む組成物を提供する。また他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号58、60、62、64、66および68のいずれかのヌクレオチド配列を含むベクターを含む組成物を提供する。
また他の特定の実施形態では、本開示によって提供される組成物は、三重抗原構築物または三重抗原構築物を含むベクターを含み、三重抗原構築物は、(1)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列、または(2)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアントからなる。一部の他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号57、59、61、63、65および67のいずれかのヌクレオチド配列からなるプラスミドを含む組成物を提供する。また他の特定の実施形態では、本開示は、配列番号58、60、62、64、66および68のいずれかのヌクレオチド配列からなるベクターを含む組成物を提供する。
医薬組成物またはワクチン組成物等の組成物は、薬学的に許容できる賦形剤をさらに含むことができる。DNAワクチンおよびRNAワクチン組成物を含む核酸組成物に適した薬学的に許容できる賦形剤は、当業者に周知である。かかる賦形剤は、水性または非水性溶液、懸濁液およびエマルションであり得る。非水性賦形剤の例として、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注射用有機エステルが挙げられる。水性賦形剤の例として、生理食塩水および緩衝培地を含む、水、アルコール性/水性溶液、エマルションまたは懸濁液が挙げられる。適した賦形剤は、ポリヌクレオチド分子の細胞取込みを補助する薬剤も含む。かかる薬剤の例は、(i)ブピバカイン等の細胞透過性を修飾する化学物質、(ii)ポリヌクレオチドの被包のためのリポソームもしくはウイルス粒子、または(iii)ポリヌクレオチドと会合するカチオン性脂質、もしくはシリカ、金もしくはタングステン微粒子である。アニオン性および中性リポソームは、当技術分野で周知であり(例えば、リポソームを作製するための方法の詳細な説明については、Liposomes: A Practical Approach、RPC New Ed、IRL press(1990)を参照)、ポリヌクレオチドを含む広範囲の産物の送達に有用である。
本開示によって提供される免疫原性組成物、医薬組成物またはワクチン組成物は、1種または複数の免疫モジュレーターと併せてまたはこれと組み合わせて使用することができる。組成物は、1種または複数のアジュバントと併せてまたはこれと組み合わせて使用することもできる。さらに、組成物は、1種または複数の免疫モジュレーターおよび1種または複数のアジュバントと併せてまたはこれと組み合わせて使用することができる。免疫モジュレーターまたはアジュバントは、抗原構築物もしくはベクターとは別々に製剤化することができる、または同じ組成物製剤の一部であり得る。よって、一部の実施形態では、本開示は、(1)本開示によって提供される抗原構築物またはかかる抗原構築物を含有するベクター、および(2)免疫モジュレーターを含む医薬組成物を提供する。一部のさらなる実施形態では、医薬組成物は、アジュバントをさらに含む。免疫モジュレーターおよびアジュバントの例は、本明細書に後述する。
ワクチン組成物を含む組成物は、液体形態(例えば、溶液、懸濁液またはエマルション)および固体形態(例えば、カプセル、錠剤または粉末)等のいずれか適した剤形で、当業者に公知の方法によって調製することができる。
F.抗原構築物、ベクターおよび組成物の使用
他の態様では、本開示は、(1)医薬としての抗原構築物、ベクターおよび組成物の使用、(2)TAAに対する免疫応答を誘発するための、異常な細胞増殖を阻害するための、またはがんを処置するための医薬の製造における抗原構築物、ベクターおよび組成物の使用、ならびに(3)抗原構築物、ベクターおよび組成物を使用する方法を提供し、抗原構築物、ベクターおよび組成物は、本明細書に上述されている通りである。
他の態様では、本開示は、(1)医薬としての抗原構築物、ベクターおよび組成物の使用、(2)TAAに対する免疫応答を誘発するための、異常な細胞増殖を阻害するための、またはがんを処置するための医薬の製造における抗原構築物、ベクターおよび組成物の使用、ならびに(3)抗原構築物、ベクターおよび組成物を使用する方法を提供し、抗原構築物、ベクターおよび組成物は、本明細書に上述されている通りである。
一態様では、本開示は、ヒト等の哺乳動物におけるTAAに対する免疫応答を誘発するための、(1)1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物、(2)かかる抗原構築物を含有するベクター、または(3)かかる(such as)抗原構築物もしくはベクターを含有する組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるTAAに対する免疫応答を誘発する方法であって、(1)1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物、または(2)1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物を含有するベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるCEAに対する免疫応答を誘発する方法であって、本開示によって提供される抗原構築物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、抗原構築物が、(1)免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(2)免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。一部の他の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるMUC1に対する免疫応答を誘発する方法であって、本開示によって提供される抗原構築物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、抗原構築物が、(1)免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(2)免疫原性CEAポリペプチドまたは免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。一部のさらなる実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるTERTに対する免疫応答を誘発する方法であって、本開示によって提供される抗原構築物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、抗原構築物が、(1)免疫原性TERTポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列、および(2)免疫原性MUC1ポリペプチドまたは免疫原性CEAポリペプチドをコードする少なくとも1種のヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、ヒト等の哺乳動物における異常な細胞増殖を阻害するための、(1)1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物、(2)かかる抗原構築物を含有するベクター、または(3)かかる(such as)抗原構築物もしくはベクターを含有する組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおける異常な細胞増殖を阻害する方法であって、(1)1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物、または(2)1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物を含有するベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、異常な細胞増殖が、腫瘍関連抗原CEA、MUC1またはTERTの過剰発現に関連する、方法を提供する。異常な細胞増殖は、乳房、胃、卵巣、肺、膀胱、大腸(例えば、結腸および直腸)、腎臓、膵臓および前立腺等のヒトのいずれかの臓器または組織に存することができる。一部の実施形態では、本方法は、乳房、卵巣、膵臓、結腸、肺、胃および直腸における異常な細胞増殖を阻害するためのものである。投与される組成物中の抗原構築物またはベクターは、過剰発現された腫瘍関連抗原に由来するまたはこれに対して免疫原性である少なくとも1種の免疫原性ポリペプチドをコードする。抗原構築物は、単一抗原構築物または二重抗原構築物もしくは三重抗原構築物等の多重抗原構築物であり得る。一部の特定の実施形態では、組成物は、免疫原性CEAポリペプチド、免疫原性MUC1ポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチドをコードする三重抗原構築物を含む。
さらなる態様では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるがんの処置のための医薬としての、(1)1種もしくは複数の免疫原性TAAポリペプチドをコードする抗原構築物、(2)かかる抗原構築物を含有するベクター、または(3)かかる(such as)抗原構築物もしくはベクターを含有する組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるがんを処置する方法であって、がんが、腫瘍関連抗原CEA、MUC1およびTERTのうち1種または複数の過剰発現に関連する、方法を提供する。本方法は、特定のがんにおいて過剰発現された腫瘍関連抗原に由来するまたはこれに対して免疫原性である少なくとも1種の免疫原性ポリペプチドをコードする抗原構築物を含む有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む。抗原構築物は、単一抗原構築物または二重抗原構築物もしくは三重抗原構築物等の多重抗原構築物であり得る。一部の特定の実施形態では、組成物は、免疫原性CEAポリペプチド、免疫原性MUC1ポリペプチドおよび免疫原性TERTポリペプチドをコードする三重抗原構築物を含む。腫瘍関連抗原MUC1、CEAおよび/またはTERTを過剰発現するいずれのがんも、本開示によって提供される方法によって処置することができる。がんの例として、乳がん、卵巣がん、肺がん(小細胞肺がんおよび非小細胞肺がん等)、結腸直腸がん、胃がんおよび膵がんが挙げられる。一部の特定の実施形態では、本開示は、ヒトにおけるがんを処置する方法であって、三重抗原構築物を含む有効量の組成物をヒトに投与するステップを含み、がんが、(1)エストロゲン受容体および/またはプロゲステロン受容体陽性乳がん、HER2陽性乳がんまたは三重陰性乳がん等の乳がん、(2)NSCLCまたはSCLC等の肺がん、(3)胃がん、(4)膵がん、または(5)結腸直腸がんである、方法を提供する。
一部の特定の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるTAAに対する免疫応答を誘発する方法、異常な細胞増殖を阻害する方法、またはがんを処置する方法であって、多重抗原構築物または多重抗原構築物を含むベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、多重抗原構築物が、配列番号43、45、47、49、51および53のアミノ酸配列のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。他の特定の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるTAAに対する免疫応答を誘発する方法、異常な細胞増殖を阻害する方法、またはがんを処置する方法であって、多重抗原構築物を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、多重抗原構築物が、配列番号42、44、46、48、50、52および87~92のいずれかのヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。他の特定の実施形態では、本開示は、哺乳動物、特にヒトにおけるTAAに対する免疫応答を誘発する方法、異常な細胞増殖を阻害する方法、またはがんを処置する方法であって、ベクターを含む有効量の組成物を哺乳動物に投与するステップを含み、ベクターが、配列番号57~68のいずれかのヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。
組成物は、当技術分野で公知のいくつかの適した方法によって、ヒトを含む哺乳動物に投与することができる。適した方法の例として、(1)筋肉内、真皮内、表皮内または皮下投与、(2)経口投与、および(3)外用適用(眼球、鼻腔内および腟内適用等)が挙げられる。核酸ワクチン組成物、特に、DNAプラスミドを含有する組成物の真皮内または表皮内投与の1つの特定の方法は、PowderMedによって販売される粒子媒介性表皮送達(PMED(商標))ワクチン送達デバイスを使用した遺伝子銃送達である。PMEDは、動物またはヒトにワクチンを投与する無針方法である。PMEDシステムは、顕微鏡レベルの金粒子上にDNAを沈殿させ、これを次いで、ヘリウムガスによって表皮内に推進させることを含む。DNAコーティングされた金粒子は、表皮のAPCおよびケラチノサイトに送達され、これらの細胞の核の内側に入ったら、DNAは、金から溶離し、転写的に活性になり、コードされたタンパク質を産生する。核酸ワクチンの筋肉内投与のための別の特定の方法は、エレクトロポレーションを含む。エレクトロポレーションは、制御された電気パルスを使用して、細胞膜に一時的なポアを作製し、これにより、筋肉中に注射された核酸ワクチンの細胞取込みが容易になる。CpGが核酸ワクチンと組み合わせて使用される場合、CpGおよび核酸ワクチンは、1種の製剤中に同時製剤化することができ、この製剤は、エレクトロポレーションによって筋肉内投与される。
所与の方法で投与されるべき組成物の有効量は、当業者によって容易に決定することができ、いくつかの因子に依存する。膵がん、卵巣がん、肺がん、結腸直腸がん、胃がんおよび乳がん等のがんを処置する方法において、有効量の決定において考慮され得る因子は、対象の免疫状態および健康を含む、処置されるべき対象、処置されるべきがんの重症度またはステージ、発現される特定の免疫原性TAAポリペプチド、所望の保護または処置の程度、投与方法およびスケジュール、ならびに使用される他の治療剤(アジュバントまたは免疫モジュレーター等)を含む。製剤化および送達の方法は、有効な免疫応答の誘発に要求される核酸の用量を決定するための特に鍵となる因子である。例えば、ワクチンが、水性溶液として製剤化され、真皮下針注射または空気圧注射によって投与される場合、ワクチン中の核酸の有効量は、2μg/用量~10mg/用量の範囲内であり得る一方、核酸が、コーティングされた金ビーズとして調製され、遺伝子銃技術を使用して送達される場合、僅か16ng/用量~16μg/用量が要求され得る。エレクトロポレーションによるワクチン中の核酸の用量範囲は一般に、0.5~10mg/用量の範囲内である。核酸ワクチンが、同時製剤中でエレクトロポレーションによってCpGと共に投与される場合、核酸ワクチンの用量は、0.5~5mg/用量の範囲内であり得、CpGの用量は典型的に、1人あたり0.05、0.2、0.6または1.2mg/用量等、0.05mg~5mg/用量の範囲内である。
本開示によって提供されるワクチン組成物は、予備刺激-追加免疫戦略において使用して、頑強で長続きする免疫応答を誘導することができる。同じ免疫原性構築物の反復注射に基づく予備刺激および追加免疫ワクチン接種プロトコールは周知されている。一般に、ワクチンの第1の用量は、防御免疫を産生することができず、免疫系の「予備刺激」のみを行う。防御免疫応答は、第2の、第3のまたはその後の用量(「追加免疫」)の後に生じる。追加免疫は、従来技法に従って行われ、投与のスケジュール、投与の経路、アジュバントの選択、用量、および別のワクチンと共に投与される場合は可能な順序の観点から経験的にさらに最適化することができる。一実施形態では、ワクチン組成物は、従来の同種予備刺激-追加免疫戦略において使用され、この戦略において、同じワクチンが、予備刺激および追加免疫用量の両方において動物に投与される。例えば、プラスミドベクターを含有する同じワクチン組成物は、初回用量(「予備刺激」)およびその後の用量(「追加免疫」)の両方において投与される。別の実施形態では、ワクチン組成物は、異種予備刺激-追加免疫ワクチン接種において使用され、このワクチン接種において、同じ免疫原性TAAポリペプチド(複数可)を発現するワクチンの異なる型が、所定の時間間隔で投与される。例えば、抗原構築物は、予備刺激用量においてプラスミドベクターの形態で、追加免疫用量においてウイルスベクターの形態で投与される、またはその逆もまた同じである。
ワクチン組成物は、1種または複数のアジュバントと共に使用することができる。適したアジュバントの例として、(1)MF59およびAS03等の水中油型エマルション製剤;(2)QS21およびIscomatrix(登録商標)(Commonwealth Serum Laboratories、オーストラリア)等のサポニンアジュバント;(3)フロイント完全アジュバント(CFA)およびフロイント不完全アジュバント(IFA);(4)インターロイキン(例えば、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12)、インターフェロン(例えば、ガンマインターフェロン)、マクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)および腫瘍壊死因子(TNF)等のサイトカイン;(5)モノホスホリルリピドA(MPL)または3-O-脱アシル化MPL(3dMPL);(6)CpGモチーフを含むオリゴヌクレオチド;ならびに(7)リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウム等のアルミニウム塩(ミョウバン)を含む金属塩が挙げられる。
さらに、ヒトを含む哺乳動物におけるがんを含む新生物障害の処置のため、組成物は、1種または複数の免疫モジュレーターと組み合わせて投与することができる。免疫モジュレーターは、免疫抑制性細胞阻害剤(ISC阻害剤)または免疫エフェクター細胞エンハンサー(IECエンハンサー)であり得る。さらに、1種または複数のISC阻害剤は、1種または複数のIECエンハンサーと組み合わせて使用することができる。免疫モジュレーターは、(1)静脈内、筋肉内または経口投与等の全身性投与、ならびに(2)真皮内および皮下投与等の局所的投与を含む、いずれか適した方法および経路によって投与することができる。適切な場合または適している場合、全身性投与よりも局所的投与が一般に好ましい。いずれかの免疫モジュレーターの局所的投与は、医薬品の局所的投与に適した哺乳動物の身体のいずれかの位置で実行することができる;しかし、これらの免疫モジュレーターは、ワクチン流入領域リンパ節のすぐ近くに局所的に投与されることがより好ましい。
ワクチン等の組成物は、使用される免疫モジュレーターのいずれかまたは全てと同時にまたは逐次に投与することができる。同様に、2種以上の免疫モジュレーターが使用される場合、これらは、互いに関して同時にまたは逐次に投与することができる。一部の実施形態では、ワクチンは、1種の免疫モジュレーターに関して同時に(例えば、混合物中で)、ただし、1種または複数の追加的な免疫モジュレーターに関して逐次に投与される。ワクチンおよび免疫モジュレーターの同時投与は、抗原および免疫モジュレーターが同時に投与されない場合であっても、同時的にワクチン流入領域リンパ節等の投与部位にそれぞれが存在するように、ワクチンおよび少なくとも1種の免疫モジュレーターが投与される場合を含むことができる。ワクチンおよび免疫モジュレーターの同時投与は、ワクチンまたは免疫モジュレーターが、投与部位から排除されるが、排除されたワクチンまたは免疫モジュレーターの少なくとも1種の細胞性効果が、少なくとも、1種または複数の追加的な免疫モジュレーターが投与部位に投与されるまで、ワクチン流入領域リンパ節等の投与部位で持続する場合を含むこともできる。核酸ワクチンが、CpGと組み合わせて投与される場合、ワクチンおよびCpGは、単一製剤中に含有されて、いずれか適した方法によって一緒に投与されてよい。一部の実施形態では、同時製剤(混合物)中の核酸ワクチンおよびCpGは、エレクトロポレーションと組み合わせた筋肉内注射によって投与される。
一部の実施形態では、免疫モジュレーターは、ISC阻害剤である。ISC阻害剤の例として、(1)イマチニブ、ソラフェニブ、ラパチニブ、BIRB-796およびAZD-1152、AMG706、ザクチマ(Zactima)(ZD6474)、MP-412、ソラフェニブ(BAY 43-9006)、ダサチニブ、CEP-701(レスタウルチニブ)、XL647、XL999、タイケルブ(ラパチニブ)、MLN518(以前はCT53518として知られる)、PKC412、ST1571、AEE 788、OSI-930、OSI-817、スニチニブリンゴ酸塩(スーテント)、アキシチニブ(AG-013736)、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、テムシロリムス(temsirolismus)およびニロチニブ(AMN107)等のタンパク質キナーゼ阻害剤。一部の特定の実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ、ソラフェニブ、またはスニチニブもしくはソラフェニブの薬学的に許容できる塩もしくは誘導体(リンゴ酸塩またはトシル酸塩等)である;(2)セレコキシブおよびロフェコキシブ等のシクロオキシゲナーゼ-2(COX-2)阻害剤;(3)アバナフィル、ロデナフィル(lodenafil)、ミロデナフィル(mirodenafil)、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィルおよびザプリナスト等のホスホジエステラーゼ5型(PDE5)阻害剤、(4)シクロホスファミド等のDNA架橋剤、(5)タラゾパリブ等のPARP阻害剤、ならびに(6)パルボシクリブ(palbocyclib)等のCDK阻害剤が挙げられる。
一部の実施形態では、核酸組成物と組み合わせて使用される免疫モジュレーターは、IECエンハンサーである。2種以上のIECエンハンサーを一緒に使用することができる。使用することができるIECエンハンサーの例として、(1)OX40、4-1BB(BMS-663513等)、GITR(TRX518等)およびCD40(CD40アゴニスト抗体等)のアゴニスト等のTNFRアゴニスト;(2)イピリムマブおよびトレメリムマブ等のCTLA-4阻害剤;(3)CpG 7909(5’TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT3’)、CpG 24555(5’TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT3’(CpG 24555);およびCpG 10103(5’TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT3’)等のTLRアゴニスト;(4)ニボルマブおよびペムブロリズマブ等のプログラム細胞死タンパク質1(PD-1)阻害剤;ならびに(5)アテゾリズマブ、デュルバルマブおよびアベルマブ(velumab)等のPD-L1阻害剤;ならびに(6)IDO1阻害剤が挙げられる。
一部の実施形態では、IECエンハンサーは、ヒト、ヒト化または一部ヒト型キメラ抗CD40抗体であり得る、CD40アゴニスト抗体である。特定のCD40アゴニスト抗体の例として、G28-5、mAb89、EA-5またはS2C6モノクローナル抗体、およびCP870,893が挙げられる。CP-870,893は、抗腫瘍療法として臨床研究された、完全ヒト型アゴニストCD40モノクローナル抗体(mAb)である。CP870,893の構造および調製は、WO2003041070に開示されている(そこでは、抗体は、内部同定された「21.4.1」によって同定され、抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号40および配列番号41に表記されている)。本開示の組成物と組み合わせた使用のため、CP-870,893は、真皮内、皮下または筋肉内注射等のいずれか適した経路によって投与することができる。CP870893の有効量は一般に、0.01~0.25mg/kgの範囲内である。一部の実施形態では、CP870893は、0.05~0.1mg/kgの量で投与される。
一部の他の実施形態では、IECエンハンサーは、イピリムマブおよびトレメリムマブ等のCTLA-4阻害剤である。YERVOYとして販売されるイピリムマブ(MEX-010またはMDX-101としても知られる)は、ヒト型抗ヒトCTLA-4抗体である。イピリムマブは、そのCAS登録番号477202-00-9によって参照することもでき、PCT公開番号WO01/14424において抗体10DIとして開示される。トレメリムマブ(CP-675,206としても知られる)は、完全ヒト型IgG2モノクローナル抗体であり、CAS番号745013-59-6を有する。トレメリムマブは、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第6,682,736号に開示されており、そこでは、これは、抗体11.2.1として同定されており、その重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号42および43に表記されている。本開示によって提供される組成物と組み合わせた使用のため、トレメリムマブは、局所的に、特に、真皮内または皮下に投与することができる。真皮内または皮下投与されるトレメリムマブの有効量は典型的に、1人あたり5~200mg/用量の範囲内である。一部の実施形態では、トレメリムマブの有効量は、用量あたり1人あたり10~150mg/用量の範囲内である。一部の特定の実施形態では、トレメリムマブの有効量は、1人あたり約10、25、50、75、100、125、150、175または200mg/用量である。
一部の他の実施形態では、免疫モジュレーターは、PD-1阻害剤またはPD-L1阻害剤である。PD-1阻害剤の例として、ニボルマブ(商品名Opdivo)、ペムブロリズマブ(商品名Keytruda)、RN888(抗PD-1抗体)、ピディリズマブ(Cure Tech、AMP-224(GSK)、AMP-514(GSK)およびPDR001(Novartis)が挙げられる。PD-L1阻害剤の例として、アテゾリズマブ(PD-L1特異的mAb;商品名Tecentriq)、デュルバルマブ(PD-L1特異的mAb;商品名Imfinzi)およびアベルマブ(PD-L1特異的mAb;商品名Bavencio)およびBMS-936559(BMS)が挙げられる。Okazaki Tら、International Immunology(2007);19、7:813~824およびSunshine Jら、Curr Opin Pharmacol.2015年8月;23:32~8)も参照されたい。一部の特定の実施形態では、PD-1阻害剤は、RN888である。RN888は、PD-1に特異的に結合するモノクローナル抗体である。RN888は、国際特許出願公開WO2016/092419に開示されており、そこでは、この抗体は、配列番号29の全長重鎖アミノ酸配列および配列番号39の全長軽鎖アミノ酸配列を有するmAb7として同定される。
他の実施形態では、免疫モジュレーターは、インドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼ1(「IDO1」としても知られる)の阻害剤である。IDO1は、抑制性表現型へと免疫細胞機能をモジュレートすることが判明しており、したがって、宿主免疫監視からの腫瘍回避を部分的に説明すると考えられた。この酵素は、必須アミノ酸トリプトファンをキヌレニンおよび他の代謝物へと分解する。これらの代謝物、およびトリプトファン不足が、エフェクターT細胞機能の抑制および調節性T細胞の分化増大をもたらすことが判明した。IDO1阻害剤は、抗体等の大分子、または化合物等の低分子であり得る。
一部の特定の実施形態では、本開示によって提供されるポリペプチドまたは核酸組成物は、WO2010/005958に開示されている1,2,5-オキサジアゾール誘導体IDO1阻害剤と組み合わせて使用される。特定の1,2,5-オキサジアゾール誘導体IDO1阻害剤の例として、次の化合物が挙げられる:
4-({2-[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-(3-ブロモ-4-フルオロフェニル)-N’-ヒドロキシ-1,2,5-オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)-N’-ヒドロキシ-1,2,5-オキサジアゾール3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-[4-フルオロ-3-(トリフルオロメチル)フェニル]-N’-ヒドロキシ-1,2,5オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N’-ヒドロキシ-N-[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-1,2,5オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-(3-シアノ-4-フルオロフェニル)-N’-ヒドロキシ-1,2,5-オキサジアゾール3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-[(4-ブロモ-2-フリル)メチル]-N’-ヒドロキシ-1,2,5オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド;または
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-[(4-クロロ-2-フリル)メチル]-N’-ヒドロキシ-1,2,5オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド。
4-({2-[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-(3-ブロモ-4-フルオロフェニル)-N’-ヒドロキシ-1,2,5-オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-(3-クロロ-4-フルオロフェニル)-N’-ヒドロキシ-1,2,5-オキサジアゾール3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-[4-フルオロ-3-(トリフルオロメチル)フェニル]-N’-ヒドロキシ-1,2,5オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N’-ヒドロキシ-N-[3-(トリフルオロメチル)フェニル]-1,2,5オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-(3-シアノ-4-フルオロフェニル)-N’-ヒドロキシ-1,2,5-オキサジアゾール3-カルボキシイミドアミド;
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-[(4-ブロモ-2-フリル)メチル]-N’-ヒドロキシ-1,2,5オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド;または
4-({2[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-[(4-クロロ-2-フリル)メチル]-N’-ヒドロキシ-1,2,5オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミド。
1,2,5-オキサジアゾール誘導体IDO1阻害剤は典型的に、1日に1回または2回経口投与され、経口投与による有効量は一般に、25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mgまたは1000mg等、患者あたり用量あたり25mg~1000mgの範囲内である。特定の実施形態では、本開示によって提供されるポリペプチドまたは核酸組成物は、用量あたり25mgまたは50mgで1日に2回経口投与される4-({2-[(アミノスルホニル)アミノ]エチル}アミノ)-N-(3-ブロモ-4-フルオロフェニル(fiuorophenyl))-N’-ヒドロキシ-1,2,5-オキサジアゾール-3-カルボキシイミドアミドと組み合わせて使用される。1,2,5-オキサジアゾール誘導体は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第8,088,803号に記載されている通りに合成することができる。
一部の他の特定の実施形態では、本開示によって提供されるポリペプチドまたは核酸組成物は、WO2015/173764に開示されているピロリジン-2,5-ジオン誘導体IDO1阻害剤と組み合わせて使用される。特定のピロリジン-2,5-ジオン誘導体阻害剤の例として、次の化合物が挙げられる:
3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
(3-2H)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
(-)-(R)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
3-(1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
(-)-(R)-3-(1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
3-(5-クロロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
(-)-(R)-3-(5-クロロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
3-(5-ブロモ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
3-(5,6-ジフルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;および
3-(6-クロロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン。
3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
(3-2H)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
(-)-(R)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
3-(1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
(-)-(R)-3-(1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
3-(5-クロロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
(-)-(R)-3-(5-クロロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
3-(5-ブロモ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;
3-(5,6-ジフルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン;および
3-(6-クロロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオン。
ピロリジン-2,5-ジオン誘導体IDO1阻害剤は典型的に、1日に1回または2回経口投与され、経口投与による有効量は一般に、125mg、250mg、500mg、750mgまたは1000mg等、患者あたり用量あたり50mg~1000mgの範囲内である。特定の実施形態では、本開示によって提供されるポリペプチドまたは核酸組成物は、患者あたり用量あたり125~100mgで1日に1回経口投与される3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)ピロリジン-2,5-ジオンと組み合わせて使用される。ピロリジン-2,5-ジオン誘導体は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許出願公開US2015329525に記載されている通りに合成することができる。
G.実施例
次の実施例は、本発明のある特定の実施形態を説明するために提供される。実施例は、決して本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。上の論述およびこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的特徴を確かめることができ、その精神および範囲から逸脱することなく、様々な利用および条件に適応させるために、本発明に様々な変更および修正をなすことができる。
次の実施例は、本発明のある特定の実施形態を説明するために提供される。実施例は、決して本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。上の論述およびこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的特徴を確かめることができ、その精神および範囲から逸脱することなく、様々な利用および条件に適応させるために、本発明に様々な変更および修正をなすことができる。
(実施例1)
単一抗原構築物または多重抗原構築物を含有するプラスミドの構築
実施例1は、単一抗原構築物、二重抗原構築物または三重抗原構築物を含有するプラスミドベクターの構築を説明する。特に断りがなければ、MUC1、CEAおよびTERTタンパク質のアミノ酸位置または残基の参照は、それぞれ、配列番号1に表記されているヒトMUC1アイソフォーム1前駆体タンパク質のアミノ酸配列、配列番号2に表記されているヒト癌胎児抗原(CEA)アイソフォーム1前駆体タンパク質のアミノ酸配列、および配列番号3に表記されているヒトTERTアイソフォーム1前駆体タンパク質のアミノ酸配列を指す。プラスミド構築において使用されるプライマーのいくつかの構造は、表16に提示される。
単一抗原構築物または多重抗原構築物を含有するプラスミドの構築
実施例1は、単一抗原構築物、二重抗原構築物または三重抗原構築物を含有するプラスミドベクターの構築を説明する。特に断りがなければ、MUC1、CEAおよびTERTタンパク質のアミノ酸位置または残基の参照は、それぞれ、配列番号1に表記されているヒトMUC1アイソフォーム1前駆体タンパク質のアミノ酸配列、配列番号2に表記されているヒト癌胎児抗原(CEA)アイソフォーム1前駆体タンパク質のアミノ酸配列、および配列番号3に表記されているヒトTERTアイソフォーム1前駆体タンパク質のアミノ酸配列を指す。プラスミド構築において使用されるプライマーのいくつかの構造は、表16に提示される。
1A.単一抗原構築物を含有するプラスミド
プラスミド1027(MUC1)。遺伝子合成および制限断片交換の技法を使用して、プラスミド1027を生成した。5×タンデム反復VNTR領域を有するヒトMUC1のアミノ酸配列を、遺伝子最適化および合成のためにGeneArtに入れた。ポリペプチドをコードする遺伝子を、発現に関して最適化し、合成し、クローニングした。MUC-1オープンリーディングフレームは、NheIおよびBglIIによる消化によってGeneArtベクターから切除し、同様に消化されたプラスミドpPJV7563に挿入した。プラスミド1027のオープンリーディングフレーム(ORF)ヌクレオチド配列は、配列番号4に表記されている。プラスミド1027にコードされるアミノ酸配列は、配列番号5に表記(set for)されている。
プラスミド1027(MUC1)。遺伝子合成および制限断片交換の技法を使用して、プラスミド1027を生成した。5×タンデム反復VNTR領域を有するヒトMUC1のアミノ酸配列を、遺伝子最適化および合成のためにGeneArtに入れた。ポリペプチドをコードする遺伝子を、発現に関して最適化し、合成し、クローニングした。MUC-1オープンリーディングフレームは、NheIおよびBglIIによる消化によってGeneArtベクターから切除し、同様に消化されたプラスミドpPJV7563に挿入した。プラスミド1027のオープンリーディングフレーム(ORF)ヌクレオチド配列は、配列番号4に表記されている。プラスミド1027にコードされるアミノ酸配列は、配列番号5に表記(set for)されている。
プラスミド1361(CEA)。遺伝子合成、PCRおよびシームレス(Seamless)クローニングの技法を使用して、プラスミド1361を構築した。第一に、CEA参照配列をコードする遺伝子を、DNA2.0における発現に関してコドン最適化した。アミノ酸2~702をコードする配列は、PCRによって、プライマーID1361-1362_PCRFおよびID1361-1362_PCRRを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1361のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号14に表記されている。プラスミド1361にコードされるアミノ酸配列は、配列番号15に表記(set for)されている。
プラスミド1386(mCEA)。膜結合型免疫原性CEAポリペプチド(mCEA)をコードするプラスミド1386は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、CEAアミノ酸2~144をコードする遺伝子断片は、PCRによって、プラスミド1361から、プライマーf pmed CEA SSおよびr CEA D1を用いて増幅した。第二に、CEAアミノ酸323~702をコードする遺伝子断片は、PCRによって、プラスミド1361から、プライマーf CEA D1-D4およびr pmed CEA GPIを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にライゲーションおよびクローニングした。プラスミド1386のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号16に表記されている。プラスミド1386にコードされるアミノ酸配列は、配列番号17に表記(set for)されている。
プラスミド1390(cCEA)。細胞質型免疫原性CEAポリペプチド(cCEA)をコードするプラスミド1390は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、CEAアミノ酸35~144をコードする遺伝子断片は、PCRによって、プラスミド1361から、プライマーf pmed CEA D1およびr CEA D1を用いて増幅した。第二に、CEAアミノ酸323~677をコードする遺伝子断片は、PCRによって、プラスミド1361から、プライマーf CEA D1-D4およびr pmed CEA D7を用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にライゲーションおよびクローニングした。プラスミド1390のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号18に表記されている。プラスミド1390にコードされるアミノ酸配列は、配列番号19に表記(set for)されている。
プラスミド1065(全長TERT D712A/V713I)。遺伝子合成および制限断片交換の技法を使用して、プラスミド1065を生成した。酵素活性を不活性化するように設計された、2個の突然変異(D712A/V713I)を有するヒトTERTのアミノ酸配列を、遺伝子最適化および合成のためにDNA2.0に入れた。ポリペプチドをコードする遺伝子を、発現に関して最適化し、合成し、クローニングした。TERTオープンリーディングフレームは、NheIおよびBglIIによる消化によってDNA2.0ベクターから切除し、同様に消化されたプラスミドpPJV7563に挿入した。プラスミド1065にコードされるアミノ酸配列は、配列番号81に表記(set for)されている。プラスミド1065のオープンリーディングフレーム(ORF)ヌクレオチド配列は、配列番号82に表記されている。
プラスミド1112(TERT240)。プラスミド1112は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、TERTアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1065から、プライマーf pmed TERT 241Gおよびr TERT co# pMedを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1112のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号8に表記されている。プラスミド1112にコードされるアミノ酸配列は、配列番号9に表記(set for)されている。
プラスミド1197(cMUC1)。細胞質型免疫原性MUC1ポリペプチド(cMUC1)をコードするプラスミド1197は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、MUC1アミノ酸22~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーID1197FおよびID1197Rを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1197のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号6に表記されている。プラスミド1197にコードされるアミノ酸配列は、配列番号7に表記(set for)されている。
プラスミド1326(TERT343)。プラスミド1326は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、TERTアミノ酸344~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーTertΔ343-FおよびTert-Rを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1326のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号10に表記されている。プラスミド1326にコードされるアミノ酸配列は、配列番号11に表記(set for)されている。
プラスミド1330(TERT541)。プラスミド1330は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、TERTアミノ酸542~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーTertΔ541-FおよびTert-Rを用いて増幅した。アンプリコンを、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1330のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号12に表記されている。プラスミド1330にコードされるアミノ酸配列は、配列番号13に表記(set for)されている。
1B.二重抗原構築物を含有するプラスミド
プラスミド1269(Muc1-Tert240)。プラスミド1269は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーf tg link Ter240およびr pmed Bgl Ter240を用いて増幅した。ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーf pmed Nhe Mucおよびr link mucを用いて増幅した。PCRは、Tertの5’端およびMuc1の3’端における重複するGGSGGリンカーの付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1269のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号20に表記されている。プラスミド1269にコードされるアミノ酸配列は、配列番号21に表記(set for)されている。
プラスミド1269(Muc1-Tert240)。プラスミド1269は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーf tg link Ter240およびr pmed Bgl Ter240を用いて増幅した。ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーf pmed Nhe Mucおよびr link mucを用いて増幅した。PCRは、Tertの5’端およびMuc1の3’端における重複するGGSGGリンカーの付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1269のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号20に表記されている。プラスミド1269にコードされるアミノ酸配列は、配列番号21に表記(set for)されている。
プラスミド1270(Muc1-ERB2A-Tert240)。プラスミド1270は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーf2 ERBV2A、f1 ERBV2A Ter240およびr pmed Bgl Ter240を用いて増幅した。ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーf pmed Nhe Mucおよびr ERB2A Bamh Mucを用いて増幅した。PCRは、Tertの5’端およびMuc1の3’端における重複するERBV 2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1270のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号22に表記されている。プラスミド1270にコードされるアミノ酸配列は、配列番号23に表記(set for)されている。
プラスミド1271(Tert240-ERB2A-Muc1)。プラスミド1271は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーf pmed Nhe Ter240およびr ERB2A Bamh Ter240を用いて増幅した。ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーf2 ERBV2A、f1 ERBV2A Mucおよびr pmed Bgl Mucを用いて増幅した。PCRは、Tertの3’端およびMuc1の5’端における重複するERBV 2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1271のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号24に表記されている。プラスミド1271にコードされるアミノ酸配列は、配列番号25に表記(set for)されている。
プラスミド1286(cMuc1-ERB2A-Tert240)。プラスミド1286は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーf2 ERBV2A、f1 ERBV2A Ter240およびr pmed Bgl Ter240を用いて増幅した。ヒトムチン-1アミノ酸22~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1197から、プライマーf pmed Nhe cytMucおよびr ERB2A Bamh Mucを用いて増幅した。PCRは、Tertの5’端およびMuc1の3’端における重複するERBV 2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1286のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号26に表記されている。プラスミド1286にコードされるアミノ酸配列は、配列番号27に表記(set for)されている。
プラスミド1287(Tert240-ERB2A-cMuc1)。プラスミド1287は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーf pmed Nhe Ter240およびr ERB2A Bamh Ter240を用いて増幅した。ヒトムチン-1アミノ酸22~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1197から、プライマーf2 ERBV2A、f1 ERBV2A cMucおよびr pmed Bgl Mucを用いて増幅した。PCRは、Tertの3’端およびMuc1の5’端における重複するERBV 2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1287のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号28に表記されている。プラスミド1287にコードされるアミノ酸配列は、配列番号29に表記(set for)されている。
プラスミド1409(Muc1-EMC2A-mCEA)。プラスミド1409は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーf pmed Nhe Mucおよびr EM2A Bamh Mucを用いて増幅した。CEAアミノ酸2~144、323~702をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1386から、プライマーf2 EMCV2A、f1 EMC2a CEAssおよびr pmed CEA GPIを用いて増幅した。PCRは、CEAの5’端およびMuc1の3’端における重複するEMCV 2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1409のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号30に表記されている。プラスミド1409にコードされるアミノ酸配列は、配列番号31に表記(set for)されている。
プラスミド1410(mCEA-T2A-Muc1)。プラスミド1410は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、CEAアミノ酸2~144、323~702をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1386から、プライマーf pmed CEA SSおよびr T2A CEAを用いて増幅した。ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーf2 T2A 63、f1 T2a Mucおよびr pmed Bgl Mucを用いて増幅した。PCRは、CEAの3’端およびMuc1の5’端における重複するT2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1410のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号32に表記されている。プラスミド1410にコードされるアミノ酸配列は、配列番号33に表記(set for)されている。
プラスミド1411(mCEA-フューリン-T2A-Muc1)。プラスミド1411は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、CEAアミノ酸2~144、323~702をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1386から、プライマーf pmed CEA SSおよびr T2AフューリンCEAを用いて増幅した。ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーf2 T2A 63、f1 T2a Mucおよびr pmed Bgl Mucを用いて増幅した。PCRは、CEAの3’端およびMuc1の5’端における重複するフューリン切断部位およびT2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1411のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号34に表記されている。プラスミド1411にコードされるアミノ酸配列は、配列番号35に表記(set for)されている。
プラスミド1431(Muc1-EMC2A-cCEA)。プラスミド1431は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1027から、プライマーf pmed Nhe Mucおよびr EM2A Bamh Mucを用いて増幅した。CEAアミノ酸35~144、323~677をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1390から、プライマーf2 EMCV2A、f EMC2a CEA d1およびr pmed CEA D7を用いて増幅した。PCRは、CEAの5’端およびMuc1の3’端における重複するEMCV 2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1431のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号36に表記されている。プラスミド1431にコードされるアミノ酸配列は、配列番号37に表記(set for)されている。
プラスミド1432(cCEA-T2A-Tert240)。プラスミド1432は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、CEAアミノ酸35~144、323~677をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1390から、プライマーf pmed CEA D1およびr T2a CEA D7を用いて増幅した。ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーf2 T2A 63、f1 T2A Tert240およびr pmed Bgl Ter240を用いて増幅した。PCRは、Tertの5’端およびCEAの3’端における重複するTAV 2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1432のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号38に表記されている。プラスミド1432にコードされるアミノ酸配列は、配列番号39に表記(set for)されている。
プラスミド1440(Tert240-ERA2A-mCEA)。プラスミド1440は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1112から、プライマーf pmed Nhe tert240およびr ERA2A Tertを用いて増幅した。CEAアミノ酸2~144、323~702をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1386から、プライマー f2 ERAV2A、f1 ERA2A ssCEAおよびr pmed CEA GPIを用いて増幅した。PCRは、Tertの3’端およびCEAの5’端における重複するERAV 2A配列の付加をもたらした。アンプリコンを一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1440のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号40に表記されている。プラスミド1440にコードされるアミノ酸配列は、配列番号41に表記(set for)されている。
1C.三重抗原構築物を含有するプラスミド
プラスミド1424(Muc1-ERB2A-Tert240-ERA2A-mCEA)。プラスミド1424は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255、ERBV 2AペプチドおよびヒトTert240のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1270から、プライマーf pmed Nhe Mucおよびr tert 1602-1579を用いて増幅した。Tert240のカルボキシ末端側半分、ERAV 2AペプチドおよびヒトCEAアミノ酸2~144、323~702をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1440から、プライマーf tert 1584-1607およびr pmed CEA GPIを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをDpnIで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1424のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号42に表記されている。プラスミド1424にコードされるアミノ酸配列は、配列番号43に表記(set for)されている。
プラスミド1424(Muc1-ERB2A-Tert240-ERA2A-mCEA)。プラスミド1424は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255、ERBV 2AペプチドおよびヒトTert240のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1270から、プライマーf pmed Nhe Mucおよびr tert 1602-1579を用いて増幅した。Tert240のカルボキシ末端側半分、ERAV 2AペプチドおよびヒトCEAアミノ酸2~144、323~702をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1440から、プライマーf tert 1584-1607およびr pmed CEA GPIを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをDpnIで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1424のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号42に表記されている。プラスミド1424にコードされるアミノ酸配列は、配列番号43に表記(set for)されている。
プラスミド1425(mCEA-T2A-Muc1-ERB2A-Tert240)。プラスミド1425は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトCEAアミノ酸2~144、323~702、TAV 2Aペプチドおよびヒトムチン-1のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1410から、プライマーf pmed CEA SSおよびr muc 986-963を用いて増幅した。ヒトムチン-1のカルボキシ末端側半分、ERBV 2Aペプチドおよびヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1270から、プライマーf Muc 960-983およびr pmed Bgl Ter240を用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをDpnIで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1425のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号44に表記されている。プラスミド1425にコードされるアミノ酸配列は、配列番号45に表記(set for)されている。
プラスミド1426(Tert240-ERB2A-Muc1-EMC2A-mCEA)。プラスミド1426は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132、ERBV 2Aペプチドおよびヒトムチン-1のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1271から、プライマーf pmed Nhe Ter240およびr muc 986-963を用いて増幅した。ヒトムチン-1のカルボキシ末端側半分、EMCV 2AペプチドおよびCEAアミノ酸2~144、323~702をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1409から、プライマーf Muc 960-983およびr pmed CEA GPIを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをDpnIで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1426のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号46に表記されている。プラスミド1426にコードされるアミノ酸配列は、配列番号47に表記(set for)されている。
プラスミド1427(Tert240-ERA2A-mCEA-T2A-Muc1)。プラスミド1427は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132、ERAV 2AペプチドおよびmCEAのアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1440から、プライマーf pmed Nhe Ter240およびR CEA SR2を用いて増幅した。mCEAのカルボキシ末端側半分、TAV 2Aペプチドおよびヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1410から、プライマーf cCEA 562-592およびr pmed Bgl Mucを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをDpnIで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1427のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号48に表記されている。プラスミド1427にコードされるアミノ酸配列は、配列番号49に表記(set for)されている。
プラスミド1428(Muc1-EMC2A-cCEA-T2A-Tert240)。プラスミド1428は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255、EMCV 2AペプチドおよびcCEAのアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1431から、プライマーf pmed Nhe Mucおよびr cCEA 849-820を用いて増幅した。cCEAのカルボキシ末端側半分、TAV 2Aペプチドおよびヒトテロメラーゼアミノ酸241~1132をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1432から、プライマーf CEA 833-855およびr pmed Bgl Ter240を用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをDpnIで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1428のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号50に表記されている。プラスミド1428にコードされるアミノ酸配列は、配列番号51に表記(set for)されている。
プラスミド1429(cCEA-T2A-Tert240-ERB2A-Muc1)。プラスミド1429は、PCRおよびシームレスクローニングの技法を使用して構築した。第一に、ヒトCEAアミノ酸35~144、323~677、TAV 2AペプチドおよびヒトTert240のアミノ末端側半分をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1432から、プライマーf pmed CEA D1およびr tert 1602-1579を用いて増幅した。ヒトTert240のカルボキシ末端側半分、ERBV 2Aペプチドおよびヒトムチン-1アミノ酸2~225、946~1255をコードする遺伝子は、PCRによって、プラスミド1271から、プライマーf tert 1584-1607およびr pmed Bgl Mucを用いて増幅した。部分的に重複するアンプリコンをDpnIで消化し、一体に混合し、シームレスクローニングによってpPJV7563のNheI/BglII部位にクローニングした。プラスミド1429のオープンリーディングフレームヌクレオチド配列は、配列番号52に表記されている。プラスミド1429にコードされるアミノ酸配列は、配列番号53に表記(set for)されている。
1D.ベクター構築
本実施例は、多重抗原構築物を保有するベクターの構築を説明する。プラスミド1424、1425、1426、1427、1428および1429のそれぞれによって保有されるものと同じ三重抗原構築物(オープンリーディングフレーム)を保有するベクターは、国際特許出願公開WO2015/063647に記載されているチンパンジーアデノウイルスAdC68ゲノム配列から構築した。これらのベクターは、それぞれAdC68Y-1424、AdC68Y-1425、AdC68Y-1426、AdC68Y-1427、AdC68Y-1428およびAdC68Y-1429と称される。これらのベクターの構成は、図1に提示される。
本実施例は、多重抗原構築物を保有するベクターの構築を説明する。プラスミド1424、1425、1426、1427、1428および1429のそれぞれによって保有されるものと同じ三重抗原構築物(オープンリーディングフレーム)を保有するベクターは、国際特許出願公開WO2015/063647に記載されているチンパンジーアデノウイルスAdC68ゲノム配列から構築した。これらのベクターは、それぞれAdC68Y-1424、AdC68Y-1425、AdC68Y-1426、AdC68Y-1427、AdC68Y-1428およびAdC68Y-1429と称される。これらのベクターの構成は、図1に提示される。
AdC68の全長ゲノム配列は、受託番号AC_000011.1を有するGenbankから入手でき、WO2015/063647にも提示されている。導入遺伝子なしのAdC68骨格(「空ベクター」)をin silicoで設計し、E1およびE3欠失をウイルスへと操作して、その複製能力をなくし、導入遺伝子挿入のための空間を作製した。塩基456~3256および27476~31831の欠失を有するベクターAdC68Yは、以前のAdC68ベクターよりも改善された成長特性を有するように操作した。in vitroオリゴ合成、ならびに大腸菌(Escherichia coli/E.coli)および/または酵母における人工染色体としてのその後の組換え媒介性中間アセンブリを利用した多段階プロセスにおいて、空ベクターを生化学的に合成した。様々な免疫原性TAAポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、PCRによって、それぞれプライマーセットMuc1-20bp-F-98/mCEA-20bp-R-100、Y-mCEA-S2/Y-Tert-A2、Y-Tert-S/Y-CEA-A、Y-Tert-S/Y-MUC-A、Y-MUC-S2/Y-Tert-A2およびcCEA-20bp-F-106/Muc1-20BP-R-108を使用して、プラスミド1424、1425、1426、1427、1428および1429から増幅した。次いで、アンプリコンを空ベクター骨格に挿入した。PacIによる消化により、組換えウイルスゲノムを細菌人工染色体から放出させ、直鎖化された核酸を、E1補完(complimenting)接着HEK293細胞株にトランスフェクトした。目に見える細胞壊死効果およびアデノウイルスフォーカス形成の後に、複数ラウンドの凍結/融解を行って細胞からウイルスを放出させることにより、培養物を収集した。標準技法によってウイルスを増幅および精製した。
(実施例2)
MUC1単一抗原構築物の免疫原性
HLA-A2/DR1マウスにおける試験
試験設計。12匹の雌雄混合HLA-A2/DR1マウスに、PMED方法を使用して、DNA構築物プラスミド1027(配列番号5の膜結合型免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする)またはプラスミド1197(配列番号7のサイトゾル型免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする)を0日目に予備刺激し、14日目に追加免疫した。21日目に、マウスを屠殺し、インターフェロン-ガンマ(IFN-γ)ELISpotおよび細胞内サイトカイン染色(ICS)アッセイにおいてMUC1特異的細胞性免疫原性に関して脾細胞を評価した。
MUC1単一抗原構築物の免疫原性
HLA-A2/DR1マウスにおける試験
試験設計。12匹の雌雄混合HLA-A2/DR1マウスに、PMED方法を使用して、DNA構築物プラスミド1027(配列番号5の膜結合型免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする)またはプラスミド1197(配列番号7のサイトゾル型免疫原性MUC1ポリペプチドをコードする)を0日目に予備刺激し、14日目に追加免疫した。21日目に、マウスを屠殺し、インターフェロン-ガンマ(IFN-γ)ELISpotおよび細胞内サイトカイン染色(ICS)アッセイにおいてMUC1特異的細胞性免疫原性に関して脾細胞を評価した。
粒子媒介性表皮送達(PMED)。PMEDは、動物または患者にワクチンを投与する無針方法である。PMEDシステムは、顕微鏡レベルの金粒子上にDNAを沈殿させ、これを次いで、ヘリウムガスによって表皮内に推進させることを含む。使い捨てデバイスであるND10は、内部シリンダーからの加圧ヘリウムを使用して、金粒子を送達し、リピーター送達デバイスであるX15は、高圧ホースを介してX15に接続された外部ヘリウムタンクを使用して、金粒子を送達する。これらのデバイスの両方を試験において使用して、MUC1 DNAプラスミドを送達した。金粒子は通常、1~3μmの直径であり、粒子は、金粒子1mgにつき2μgの抗原DNAプラスミドを含有するように製剤化した(Sharpe,M.ら:P. Protection of mice from H5N1 influenza challenge by prophylactic DNA vaccination using particle mediated epidermal delivery.Vaccine、2007、25(34):6392~98:Roberts LKら:Clinical safety and efficacy of a powdered Hepatitis B nucleic acid vaccine delivered to the epidermis by a commercial prototype device.Vaccine、2005;23(40):4867~78)。
IFN-γ ELISpotアッセイ。個々の動物由来の脾細胞を、IFN-γ ELISpotプレートにおいて、個々のAg特異的ペプチド(2~10ug/mlの各ペプチド、ウェルあたり2.5~5e5個の細胞)または15mer Ag特異的ペプチドのプール(11アミノ酸により重複、Ag特異的アミノ酸配列全体を網羅;表15を参照;2~5ug/mlの各ペプチド、ウェルあたり1.25~5e5個の細胞)と共に三連でコインキュベートした。プレートを約16時間、37℃、5%CO2でインキュベートし、次いで、製造業者の説明書に従って洗浄し発色させた。IFN-γスポット形成細胞(SFC)の数を、CTLリーダーで計数した。三連の平均を計算し、ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルの応答を減算した。次いで、SFC計数を正規化して、1e6個の脾細胞あたりの応答を表した。表中の抗原特異的応答は、Ag特異的ペプチドまたはペプチドプールに対する応答の和を表す。
ICSアッセイ。個々の動物由来の脾細胞を、U字底96ウェルプレート組織培養プレートにおいて、H-2b、HLA-A2またはHLA-A24拘束Ag特異的ペプチド(5~10ug/mlの各ペプチド、ウェルあたり1~2e6個の脾細胞)または15mer Ag特異的ペプチドのプール(11アミノ酸により重複、Ag特異的アミノ酸配列全体を網羅;表15を参照;2~5ug/mlの各ペプチド、ウェルあたり1~2e6個の脾細胞)と共にコインキュベートした。プレートを約16時間、37℃、5%CO2でインキュベートした。次いで、細胞を染色して、CD8+T細胞から細胞内IFN-γ発現を検出し、固定した。フローサイトメーターにおいて細胞を獲得した。ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルにおいて得られた応答の減算後のペプチド(複数可)AgまたはペプチドプールAg特異的IFN-γ+CD8+T細胞の頻度として、動物ごとにデータを提示した。
サンドイッチELISAアッセイ。Tecan Evo、Biomek FxPおよびBioTek 405 Select TS自動化装置を使用して、標準サンドイッチELISAアッセイを行った。384ウェルマイクロプレート(フラットウェル、高結合)を、25μl/ウェルで、1×PBS中1.0μg/mLヒトMUC1またはヒトCEAタンパク質(抗原)でコーティングし、一晩4℃でインキュベートした。翌朝、プレートを、0.05%Tween 20を含有するPBS(PBS-T)中の5%FBSにより1時間RTでブロッキングした。96U字底ウェルプレートにおいて、PBS-Tにおける1/100出発希釈においてマウス血清を調製した。Tecan Evoは、9個の希釈増分ポイントにわたりPBS-Tにおいて1/2対数系列希釈を行い、続いて、96ウェルプレートから384ウェルプレートへの25μl/ウェルの希釈血清のスタンピングを行った。384ウェルプレートを、600RPMの振盪機において1時間RTでインキュベートし、次いで、BioTek EL 405 Select TSプレート洗浄機を使用して、PBS-Tにおいてプレートを4回洗浄した。二次マウス抗IgG-HRP抗体を適切な希釈度に希釈し、Biomek FxPによって25μl/ウェルで384ウェルプレートへとスタンピングし、600RPMの振盪機において1時間RTでインキュベートし、続いて、5回の反復洗浄を行った。Biomek FxPを使用して、25μl/ウェルのRT TMB基質でプレートをスタンピングし、暗所にてRTで30分間インキュベートし、続いて、1N H2SO4酸の25μl/ウェルスタンピングを行って、酵素反応を終止した。Molecular Devices、Spectramax 340PC/384 Plusにおいて450nm波長でプレートを読み取った。データは、検出限界99.0によるOD1.0における計算された力価として報告した。抗原特異的市販モノクローナル抗体を各プレートにおいて陽性対照として使用して、プレート間の変動性能を追跡した;無関係ワクチン接種マウス血清を陰性対照として使用し、PBS-Tのみのウェルを使用して、非特異的結合バックグラウンドをモニターした。表中の力価は、個々の動物から誘発された抗原特異的IgG力価を表す。
結果。表1は、それぞれMUC1ペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15を参照)またはMUC1ペプチドaa516~530と共に培養されたHLA-A2/DR1脾細胞のELISpotおよびICSデータを示す。3番目の列の数は、MUC1ペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。4番目の列の数は、MUC1ペプチドaa516~530による再刺激およびバックグラウンド減算後の、IFN-γ+であるCD8+T細胞の頻度を表す。陽性応答は、SFC>100およびIFN-γ+CD8+T細胞の頻度>0.1%を有すると定義される。表1に示す通り、全長膜結合型(プラスミド1027)およびサイトゾル型(プラスミド1197)MUC1構築物により作製された免疫原性MUC1ポリペプチドは、HLA-A2拘束MUC1ペプチドaa516~530特異的CD8+T細胞応答を含むMUC1特異的T細胞応答を誘導することができた。サイトゾル型MUC1抗原フォーマットは、最高規模のT細胞応答を誘導した。重要なことに、MUC1ペプチドaa516~530に対するがん患者に由来するT細胞応答は、in vitroで抗腫瘍有効性と相関することが示され(Jochems Cら、Cancer Immunol Immunother(2014)63:161~174)、この特定のエピトープに対する細胞性応答を生じることの重要性を実証した。
HLA-A24マウスにおける試験
試験設計。雌雄混合HLA-A24マウスに、PMED投与によってDNA構築物プラスミド1027を0日目に予備刺激し、14、28および42日目に追加免疫した。21日目に、マウスを屠殺し、MUC1特異的細胞性免疫原性に関して脾細胞を評価した(ELISpot)。
試験設計。雌雄混合HLA-A24マウスに、PMED投与によってDNA構築物プラスミド1027を0日目に予備刺激し、14、28および42日目に追加免疫した。21日目に、マウスを屠殺し、MUC1特異的細胞性免疫原性に関して脾細胞を評価した(ELISpot)。
結果。表2は、MUC1ペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15を参照)と共に培養されたHLA-A24脾細胞のELISpotデータを示す。3番目の列の数は、MUC1ペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも1個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。陽性応答は、SFC>100を有すると定義される。表2に示す通り、膜結合型MUC1構築物は、MUC1特異的細胞性応答を誘導することができた。
サルにおける試験
試験設計。14匹の中国起源のカニクイザルに、2e11個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(総計1mL)により、サイトゾル型MUC1ポリペプチド(プラスミド1197にコードされるものと同じポリペプチド)または全長膜結合型MUC1ポリペプチド(プラスミド1027にコードされるものと同じポリペプチド)をコードするアデノウイルスベクターAdC68Wを予備刺激した。29日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達されるプラスミド1197またはプラスミド1027を追加免疫した(総計2mL)。抗CTLA-4を1日目(32mg)および29日目(50mg)に皮下投与した。最後の免疫化から14日後に、動物を出血させ、PBMCおよび血清を単離して、それぞれMUC1特異的細胞性(ELISpot、ICS)および液性(ELISA)応答を評価した。本開示の本実施例および他の実施例において使用したアデノウイルスベクターAdC68Wは、国際特許出願WO2015/063647に記載されている方法に従ってチンパンジーアデノウイルスAdC68から構築した。
試験設計。14匹の中国起源のカニクイザルに、2e11個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(総計1mL)により、サイトゾル型MUC1ポリペプチド(プラスミド1197にコードされるものと同じポリペプチド)または全長膜結合型MUC1ポリペプチド(プラスミド1027にコードされるものと同じポリペプチド)をコードするアデノウイルスベクターAdC68Wを予備刺激した。29日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達されるプラスミド1197またはプラスミド1027を追加免疫した(総計2mL)。抗CTLA-4を1日目(32mg)および29日目(50mg)に皮下投与した。最後の免疫化から14日後に、動物を出血させ、PBMCおよび血清を単離して、それぞれMUC1特異的細胞性(ELISpot、ICS)および液性(ELISA)応答を評価した。本開示の本実施例および他の実施例において使用したアデノウイルスベクターAdC68Wは、国際特許出願WO2015/063647に記載されている方法に従ってチンパンジーアデノウイルスAdC68から構築した。
NHP特異的免疫アッセイ
ELISpotアッセイ。個々の動物由来のPBMCを、二連で、IFN-y ELISpotプレートにおいて、2ug/mlの各ペプチド、ウェルあたり4e5細胞で、15mer Ag特異的ペプチドのプール(11アミノ酸により重複、Ag特異的アミノ酸配列全体を網羅)と共にコインキュベートした(表15を参照)。プレートを約16時間、37℃、5%CO2でインキュベートし、次いで、製造業者の説明書に従って洗浄し発色させた。IFN-γスポット形成細胞(SFC)の数をCTLリーダーにより計数した。二連の平均を計算し、ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルの応答を減算した。次いで、SFC計数を、1e6個のPBMCあたりの応答を表すように正規化した。表中の抗原特異的応答は、Ag特異的ペプチドプールに対する応答の和を表す。
ELISpotアッセイ。個々の動物由来のPBMCを、二連で、IFN-y ELISpotプレートにおいて、2ug/mlの各ペプチド、ウェルあたり4e5細胞で、15mer Ag特異的ペプチドのプール(11アミノ酸により重複、Ag特異的アミノ酸配列全体を網羅)と共にコインキュベートした(表15を参照)。プレートを約16時間、37℃、5%CO2でインキュベートし、次いで、製造業者の説明書に従って洗浄し発色させた。IFN-γスポット形成細胞(SFC)の数をCTLリーダーにより計数した。二連の平均を計算し、ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルの応答を減算した。次いで、SFC計数を、1e6個のPBMCあたりの応答を表すように正規化した。表中の抗原特異的応答は、Ag特異的ペプチドプールに対する応答の和を表す。
ICSアッセイ。個々の動物由来のPBMCを、U字底96ウェルプレート組織培養プレートにおいて、2ug/mLの各ペプチド、ウェルあたり1.5~2e6個のPBMCで、15mer MUC1ペプチドのプール(11アミノ酸により重複、天然全長MUC1アミノ酸配列全体を網羅;表15を参照)と共にコインキュベートした。プレートを約16時間、37℃、5%CO2でインキュベートし、次いで染色して、CD8 T細胞から細胞内IFN-γ発現を検出した。固定後に、フローサイトメーターにおいて細胞を獲得した。ペプチドを含有しなかった陰性対照ウェルにおいて得られた応答の減算および1e6個のCD8+T細胞に対する正規化後に、MUC1、CEAまたはTERT特異的IFN-γ+CD8+T細胞の数として、個々の動物ごとに結果を提示する。
サンドイッチELISAアッセイ。Tecan Evo、Biomek FxPおよびBioTek 405 Select TS自動化装置を使用して、標準サンドイッチELISAアッセイを行った。384ウェルマイクロプレート(フラットウェル、高結合)を、25μl/ウェルで、1×PBS中1.0μg/mLヒトMUC1またはヒトCEAタンパク質(抗原)でコーティングし、一晩4℃でインキュベートした。翌朝、プレートを、0.05%Tween 20を含有するPBS(PBS-T)中の5%FBSにより1時間RTでブロッキングした。96U字底ウェルプレートにおいて、PBS-Tにおける1/100出発希釈で、中国起源のカニクイザルから血清を調製した。Tecan Evoは、9個の希釈増分ポイントにわたりPBS-Tにおいて1/2対数系列希釈を行い、続いて、96ウェルプレートから384ウェルプレートへの25μl/ウェルの希釈血清のスタンピングを行った。384ウェルプレートを、600RPMの振盪機において1時間RTでインキュベートし、次いで、BioTek EL 405 Select TSプレート洗浄機を使用して、PBS-Tにおいてプレートを4回洗浄した。カニクイザルIgGと交差反応する二次アカゲザル抗IgG-HRP抗体を適切な希釈度に希釈し、Biomek FxPによって25μl/ウェルで384ウェルプレートへとスタンピングし、600RPMの振盪機において1時間RTでインキュベートし、続いて、5回の反復洗浄を行った。Biomek FxPを使用して、25μl/ウェルのRT TMB基質でプレートをスタンピングし、暗所にてRTで30分間インキュベートし、続いて、1N H2SO4酸の25μl/ウェルスタンピングを行って、酵素反応を終止した。Molecular Devices、Spectramax 340PC/384 Plusにおいて450nm波長でプレートを読み取った。データは、検出限界99.0によるOD1.0における計算された力価として報告した。抗原特異的市販モノクローナル抗体を各プレートにおいて陽性対照として使用して、プレート間の変動性能を追跡した;無関係ワクチン接種マウス血清を陰性対照として使用し、PBS-Tのみのウェルを使用して、非特異的結合バックグラウンドをモニターした。表中の力価は、個々の動物から誘発された抗原特異的IgG力価を表す。
結果。表3は、MUC1ペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15)と共に培養された中国起源のカニクイザルPBMCのELISpotおよびICSデータ、ならびに中国起源のカニクイザル血清のELISAデータを示す。3番目の列の数は、MUC1ペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/PBMC106個を表す。4番目の列の数は、MUC1ペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞106個を表す。5番目の列の数は、抗MUC1 IgG力価(光学密度(O.D)=1、検出限界(L.O.D)=99.0)を表す。陽性応答は、SFC>50、IFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞1e6個>50、およびIgG力価>99を有すると定義される。表3に示す通り、サイトゾル型(プラスミド1197)および天然全長膜結合型(プラスミド1027)MUC1構築物により作製された免疫原性MUC1ポリペプチドは、MUC1特異的TおよびB細胞応答を誘導することができた。天然全長膜結合型MUC1構築物(プラスミド1027)は、全体的な最良のMUC1特異的細胞性および液性応答を誘導することが示された。
(実施例3)
CEA単一抗原構築物の免疫原性
パスツール(Pasteur)(HLA-A2/DR1)マウスにおける免疫応答試験
試験設計。雌雄混合HLA-A2/DR1マウスに、エレクトロポレーションによって、ヒト膜結合型(プラスミド1386)またはサイトゾル型CEAポリペプチド(プラスミド1390)をコードする単一抗原構築物を保有するプラスミドを0日目に予備刺激し、14日目に追加免疫した。抗原特異的T細胞応答を、IFN-γ ELISpotおよびICSアッセイにおいて7日後に測定した。
CEA単一抗原構築物の免疫原性
パスツール(Pasteur)(HLA-A2/DR1)マウスにおける免疫応答試験
試験設計。雌雄混合HLA-A2/DR1マウスに、エレクトロポレーションによって、ヒト膜結合型(プラスミド1386)またはサイトゾル型CEAポリペプチド(プラスミド1390)をコードする単一抗原構築物を保有するプラスミドを0日目に予備刺激し、14日目に追加免疫した。抗原特異的T細胞応答を、IFN-γ ELISpotおよびICSアッセイにおいて7日後に測定した。
結果。表4は、構築物1386で免疫化されたマウスのためのaa1~699、およびプラスミド1390で免疫化されたマウスのためのaa37~679(シグナル配列およびGPI配列の除去)で構成されるCEAペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)と共に培養されたHLA-A2/DR1脾細胞のELISpotおよびICSデータを示す。3および4番目の列の数は、関連するCEAペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後に誘発される、#IFN-γ+スポット/脾細胞1e6個、およびIFN-γ+CD8+T細胞の頻度をそれぞれ表す。表5は、CEAペプチドaa693~701と共に培養されたHLA-A2/DR1脾細胞のELISpotデータを示す。陽性応答は、SFC>100、およびIFN-γ+CD8+T細胞の頻度>0.1%を有すると定義される。表4に示す通り、上の実施例1Aに記載されている膜結合型(プラスミド1386)およびサイトゾル型(プラスミド1390)CEA構築物により作製された免疫原性CEAポリペプチドは、CEA特異的T細胞応答を誘導することができた。膜結合型およびサイトゾル型CEA抗原フォーマットの両方によって、同等の規模のCEA特異的T細胞応答が誘導された。表5に示す通り、膜結合型構築物1386による免疫化は、HLA-A2によってプロセシングおよび提示されることが文献において示された(Conforti Aら、J Immunother(2009)32:744~754)、CEAペプチドaa693~701に対するHLA-A2拘束T細胞応答を誘導した。
HLA A24マウスにおける免疫応答試験
試験設計。16匹の雌雄混合HLA-A24マウスに、DNAエレクトロポレーションにより、ヒト膜結合型(プラスミド1386)またはサイトゾル型CEA(プラスミド1390)DNA構築物を0日目に予備刺激し、14日目に追加免疫した。CEA特異的T細胞応答を、IFN-γ ELISpotおよびICSアッセイにおいて、最後の免疫化の7日後に測定した。
試験設計。16匹の雌雄混合HLA-A24マウスに、DNAエレクトロポレーションにより、ヒト膜結合型(プラスミド1386)またはサイトゾル型CEA(プラスミド1390)DNA構築物を0日目に予備刺激し、14日目に追加免疫した。CEA特異的T細胞応答を、IFN-γ ELISpotおよびICSアッセイにおいて、最後の免疫化の7日後に測定した。
結果。表6は、CEAペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)と共に培養されたHLA-A24脾細胞のELISpotおよびICSデータを示す。3番目の列の数は、aa1~699を包含するCEAペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。4番目の列の数は、aa37~679を包含するCEAペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、IFN-γ+であるCD8+T細胞の頻度を表す。陽性応答は、SFC>100およびIFN-γ+CD8+T細胞の頻度>0.1%を有すると定義される。太字フォントの数は、検査した少なくとも1個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。表6に示す通り、膜結合型(プラスミド1386)およびサイトゾル型CEA(プラスミド1390)構築物により作製された免疫原性CEAポリペプチドは、ELISpotにより測定される場合に同等のCEA特異的細胞性応答を誘導することができた。しかし、サイトゾル型CEA構築物(プラスミド1390)によるワクチン接種は、ICSにより測定される、より高いCEA特異的IFN-γ+CD8+T細胞応答を誘導した。
(実施例4)
TERT単一抗原構築物の免疫原性
HLA-A2/DR1マウスにおける免疫応答試験
試験設計。6匹の雌雄混合HLA-A2/DR1マウスに、1e10個のウイルス粒子で、筋肉内注射(50ul)により、短縮(Δ240)サイトゾル型免疫原性TERTポリペプチド(プラスミド1112)をコードするAdC68Wアデノウイルスベクターを予備刺激した。28日後に、動物に、短縮(Δ240)サイトゾル型TERT抗原(プラスミド1112)をコードする、エレクトロポレーションにより両側性送達される50ug DNAを筋肉内に追加免疫した(2×20ul)。抗原特異的T細胞応答を、IFN-γ ELISpotおよびICSアッセイにおいて7日後に測定した。
TERT単一抗原構築物の免疫原性
HLA-A2/DR1マウスにおける免疫応答試験
試験設計。6匹の雌雄混合HLA-A2/DR1マウスに、1e10個のウイルス粒子で、筋肉内注射(50ul)により、短縮(Δ240)サイトゾル型免疫原性TERTポリペプチド(プラスミド1112)をコードするAdC68Wアデノウイルスベクターを予備刺激した。28日後に、動物に、短縮(Δ240)サイトゾル型TERT抗原(プラスミド1112)をコードする、エレクトロポレーションにより両側性送達される50ug DNAを筋肉内に追加免疫した(2×20ul)。抗原特異的T細胞応答を、IFN-γ ELISpotおよびICSアッセイにおいて7日後に測定した。
結果。表7は、それぞれTERTペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)またはTERTペプチドaa861~875と共に培養されたHLA-A2/DR1脾細胞のELISpotおよびICSデータを示す。3番目の列の数は、TERTペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。4番目の列の数は、TERTペプチドaa861~875による再刺激およびバックグラウンド減算後に、IFN-γ+であるCD8+T細胞の頻度を表す。陽性応答は、SFC>100およびIFN-γ+CD8+T細胞の頻度>0.1%を有すると定義される。表7に示す通り、短縮(Δ240)サイトゾル型TERT構築物により作製された免疫原性TERTポリペプチドは、HLA-A2拘束TERT特異的CD8 T細胞応答を誘導することができた。
HLA-A24マウスにおける免疫応答試験
試験設計。8匹の雌雄混合HLA-A24マウスに、総計1e10個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(各前脛骨筋に50ul)により、短縮(Δ240)サイトゾル型TERTポリペプチド(プラスミド1112にコードされるものと同じポリペプチド)をコードするAdC68Wアデノウイルスベクターを予備刺激した。14日後に、動物に、短縮(Δ240)サイトゾル型TERTポリペプチドをコードする、エレクトロポレーションにより両側性送達される50ug DNA(プラスミド1112)を筋肉内に追加免疫した(2×20ul)。抗原特異的T細胞応答を、IFN-γ ELISpotおよびICSアッセイにおいて7日後に測定した。
試験設計。8匹の雌雄混合HLA-A24マウスに、総計1e10個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(各前脛骨筋に50ul)により、短縮(Δ240)サイトゾル型TERTポリペプチド(プラスミド1112にコードされるものと同じポリペプチド)をコードするAdC68Wアデノウイルスベクターを予備刺激した。14日後に、動物に、短縮(Δ240)サイトゾル型TERTポリペプチドをコードする、エレクトロポレーションにより両側性送達される50ug DNA(プラスミド1112)を筋肉内に追加免疫した(2×20ul)。抗原特異的T細胞応答を、IFN-γ ELISpotおよびICSアッセイにおいて7日後に測定した。
結果。表8は、それぞれTERTペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)またはTERTペプチドaa841~855)と共に培養されたHLA-A24脾細胞のIFN-γ ELISpotおよびICSデータを示す。3番目の列の数は、TERTペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。4番目の列の数は、TERTペプチドaa841~855による再刺激およびバックグラウンド減算後の、IFN-γ+であるCD8+T細胞の頻度を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも1個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。陽性応答は、SFC>100およびIFN-γ+CD8+T細胞の頻度>0.1%を有すると定義される。表8に示す通り、短縮(Δ240)サイトゾル型TERT(プラスミド1112)構築物により作製された免疫原性TERTポリペプチドは、HLA-A24拘束TERT特異的CD8+T細胞応答を誘導することができる。
サルにおける免疫応答試験
試験設計。8匹の中国起源のカニクイザルに、2e11個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(総計1mL)により、短縮(Δ240)サイトゾル型TERT抗原をコードするAdC68Wアデノウイルスベクター(プラスミド1112)を予備刺激した。30および64日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される、短縮(Δ240)サイトゾル型TERT抗原をコードするDNA(プラスミド1112)を追加免疫した(総計2mL)。1日目(32mg)、31日目(50mg)および65日目(75mg)に、抗CTLA-4を皮下投与した。最後の免疫化から14日後に、動物を出血させ、PBMCを単離して、TERT特異的細胞性(ELISpot、ICS)応答を評価した。
試験設計。8匹の中国起源のカニクイザルに、2e11個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(総計1mL)により、短縮(Δ240)サイトゾル型TERT抗原をコードするAdC68Wアデノウイルスベクター(プラスミド1112)を予備刺激した。30および64日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される、短縮(Δ240)サイトゾル型TERT抗原をコードするDNA(プラスミド1112)を追加免疫した(総計2mL)。1日目(32mg)、31日目(50mg)および65日目(75mg)に、抗CTLA-4を皮下投与した。最後の免疫化から14日後に、動物を出血させ、PBMCを単離して、TERT特異的細胞性(ELISpot、ICS)応答を評価した。
結果。表9は、TERTペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)と共に培養された中国起源のカニクイザルのPBMCのELISpotおよびICSデータを示す。3番目の列の数は、TERTペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。4番目の列の数は、TERTペプチドプールによる再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞106個を表す。陽性応答は、SFC>50およびIFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞1e6個>50を有すると定義される。表9に示す通り、短縮(Δ240)サイトゾル型(プラスミド1112)TERT構築物により作製された免疫原性TERTポリペプチドは、TERT特異的T細胞応答を誘導することができた。
(実施例5)
二重抗原構築物の免疫原性
サルにおける免疫応答試験
試験設計。24匹の中国起源のカニクイザルに、2e11個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(総計1mL)により、ヒト天然全長膜結合型MUC1(MUC1)およびヒト短縮(Δ240)サイトゾル型TERT(TERTΔ240)ポリペプチドをコードする二重抗原アデノウイルスAdC68Wベクター(プラスミド1270、1271および1269)を予備刺激した。30および64日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される同じ2種の抗原をコードする二重抗原DNA構築物(プラスミド1270、1271および1269)を追加免疫した(総計2mL)。1日目(32mg)、31日目(50mg)および65日目(75mg)に、抗CTLA-4を皮下投与した。最後の免疫化から14日後に、動物を出血させ、PBMCおよび血清を単離して、それぞれMUC1およびTERT特異的細胞性(ELISpot、ICS)ならびにMUC1特異的液性(ELISA)応答を評価した。全体として、両方の抗原を同時発現した3種の異なる二重抗原ワクチン構築物を評定した:a)MUC1-2A-TERTΔ240(プラスミド1270)、2Aペプチドによって連結されたMUC1およびTERTをコードするAdC68WベクターおよびDNAプラスミド;b)TERTΔ240-2A-MUC1(プラスミド1271)、2Aペプチドによって連結されたTERTおよびMUC1をコードするAdC68WベクターおよびDNAプラスミド;c)MUC1-TERTΔ240(プラスミド1269)、MUC1-TERT融合タンパク質をコードするAdC68WベクターおよびDNAプラスミド。
二重抗原構築物の免疫原性
サルにおける免疫応答試験
試験設計。24匹の中国起源のカニクイザルに、2e11個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(総計1mL)により、ヒト天然全長膜結合型MUC1(MUC1)およびヒト短縮(Δ240)サイトゾル型TERT(TERTΔ240)ポリペプチドをコードする二重抗原アデノウイルスAdC68Wベクター(プラスミド1270、1271および1269)を予備刺激した。30および64日後に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される同じ2種の抗原をコードする二重抗原DNA構築物(プラスミド1270、1271および1269)を追加免疫した(総計2mL)。1日目(32mg)、31日目(50mg)および65日目(75mg)に、抗CTLA-4を皮下投与した。最後の免疫化から14日後に、動物を出血させ、PBMCおよび血清を単離して、それぞれMUC1およびTERT特異的細胞性(ELISpot、ICS)ならびにMUC1特異的液性(ELISA)応答を評価した。全体として、両方の抗原を同時発現した3種の異なる二重抗原ワクチン構築物を評定した:a)MUC1-2A-TERTΔ240(プラスミド1270)、2Aペプチドによって連結されたMUC1およびTERTをコードするAdC68WベクターおよびDNAプラスミド;b)TERTΔ240-2A-MUC1(プラスミド1271)、2Aペプチドによって連結されたTERTおよびMUC1をコードするAdC68WベクターおよびDNAプラスミド;c)MUC1-TERTΔ240(プラスミド1269)、MUC1-TERT融合タンパク質をコードするAdC68WベクターおよびDNAプラスミド。
結果。表10は、MUC1およびTERTペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)と共に培養された中国起源のカニクイザルPBMCのELISpotおよびICSデータ、ならびに中国起源のカニクイザル血清のELISAデータを示す。陽性応答は、SFC>50、IFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞1e6個>50およびIgG力価>99を有すると定義される。3および6番目の列の数は、それぞれMUC1およびTERTペプチドプールによる再刺激ならびにバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも1個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。4および7番目の列の数は、それぞれMUC1ペプチドプールおよびTERTペプチドプールによる再刺激ならびにバックグラウンド減算後の、#IFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞106個を表す。5番目の列の数は、抗MUC1 IgG力価を表す(光学密度(O.D)=1、検出限界(L.O.D)=99.0)。表10に示す通り、MUC1およびTERT発現二重抗原構築物(プラスミド1270、1271および1269)により作製された免疫原性MUC1およびTERTポリペプチドは、MUC1およびTERT特異的T細胞応答ならびにMUC1特異的B細胞応答を誘導することができた。MUC1-TERT融合タンパク質をコードする二重抗原構築物1269は、最も強い全体的MUC1特異的細胞性応答を誘導することが示された;対照的に、二重抗原構築物プラスミド1271(TERT-2A-MUC1)は、最も強い全体的TERT特異的細胞性応答を誘導することが示された。全3種の二重抗原構築物は、同等のMUC1特異的液性応答を誘導することが示された。
(実施例6)
三重抗原構築物の免疫原性
実施例6は、ヒト天然全長膜結合型MUC1ポリペプチド(MUC1)、ヒト膜結合型またはサイトゾル型CEAポリペプチド(mCEAまたはcCEA)およびヒト短縮(Δ240)サイトゾル型TERTポリペプチド(TERTΔ240)を発現する三重抗原構築物を保有するプラスミドおよびアデノウイルスベクターの、全3種のコードされるがん抗原に対するAg特異的TおよびB細胞応答を誘発する能力を説明する。
三重抗原構築物の免疫原性
実施例6は、ヒト天然全長膜結合型MUC1ポリペプチド(MUC1)、ヒト膜結合型またはサイトゾル型CEAポリペプチド(mCEAまたはcCEA)およびヒト短縮(Δ240)サイトゾル型TERTポリペプチド(TERTΔ240)を発現する三重抗原構築物を保有するプラスミドおよびアデノウイルスベクターの、全3種のコードされるがん抗原に対するAg特異的TおよびB細胞応答を誘発する能力を説明する。
DNAエレクトロポレーションを使用したC57BL/6Jマウスにおける免疫応答試験
試験設計。48匹の雌C57BL/6Jマウスを、ヒトMUC1、mCEAまたはcCEAおよびTERTΔ240をコードする三重抗原DNA構築物により免疫化した。三重抗原DNAワクチン(50ug)を、各ワクチン接種の間に2週間あけた予備刺激/追加免疫レジメンにおいて、同時的エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達した(各前脛骨筋に総計20ul)。MUC1、CEAおよびTERT特異的細胞性応答ならびにMUC1およびCEA特異的液性応答を、それぞれIFN-γ ELISpotアッセイおよびELISAアッセイにおいて、最後の免疫化の7日後に測定した。全体として、2Aペプチドによって連結された3個のTAAポリペプチドをそれぞれコードする三重抗原DNA構築物を保有する6種の異なるプラスミドを次の通りに使用した:MUC1-2A-TERTΔ240-2A-mCEA(プラスミド1424)、mCEA-2A-MUC1-2A-TERTΔ240(プラスミド1425)、TERTΔ240-2A-MUC1-2A-mCEA(プラスミド1426)、TERTΔ240-2A-mCEA-2A-MUC1(プラスミド1427)、MUC1-2A-cCEA-2A-TERTΔ240(プラスミド1428)、cCEA-2A-TERTΔ240-2A-MUC1(プラスミド1429)。
試験設計。48匹の雌C57BL/6Jマウスを、ヒトMUC1、mCEAまたはcCEAおよびTERTΔ240をコードする三重抗原DNA構築物により免疫化した。三重抗原DNAワクチン(50ug)を、各ワクチン接種の間に2週間あけた予備刺激/追加免疫レジメンにおいて、同時的エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達した(各前脛骨筋に総計20ul)。MUC1、CEAおよびTERT特異的細胞性応答ならびにMUC1およびCEA特異的液性応答を、それぞれIFN-γ ELISpotアッセイおよびELISAアッセイにおいて、最後の免疫化の7日後に測定した。全体として、2Aペプチドによって連結された3個のTAAポリペプチドをそれぞれコードする三重抗原DNA構築物を保有する6種の異なるプラスミドを次の通りに使用した:MUC1-2A-TERTΔ240-2A-mCEA(プラスミド1424)、mCEA-2A-MUC1-2A-TERTΔ240(プラスミド1425)、TERTΔ240-2A-MUC1-2A-mCEA(プラスミド1426)、TERTΔ240-2A-mCEA-2A-MUC1(プラスミド1427)、MUC1-2A-cCEA-2A-TERTΔ240(プラスミド1428)、cCEA-2A-TERTΔ240-2A-MUC1(プラスミド1429)。
結果。表11A~Cは、MUC1、CEAおよびTERTペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)と共に培養されたC57BL/6J脾細胞のELISpotデータ、TERTペプチドaa1025~1039と共に培養されたC57BL/6J脾細胞のICSデータ、ならびにC57BL/6Jマウス血清のELISAデータを示す。陽性応答は、SFC>100、IFN-γ+CD8+T細胞の頻度>0.1%、およびIgG力価>99を有すると定義される。表11A~Cの3番目の列の数は、それぞれMUC1、CEAまたはTERTペプチドプールによる再刺激、およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも1個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。表11A~Bの4番目の列の数は、それぞれ抗MUC1およびCEA IgG力価を表す(光学密度(O.D)=1、検出限界(L.O.D)=99.0)。表11Cの4番目の列の数は、TERT特異的ペプチドTERT aa1025~1039による再刺激およびバックグラウンド減算後の、IFN-γ+であるCD8+T細胞の頻度を表す。表11A~Cに示す通り、MUC1、CEAおよびTERT発現三重抗原構築物により作製された免疫原性MUC1、CEAおよびTERTポリペプチドは、全3種の抗原に対するT細胞応答、およびMUC1に対するB細胞応答を誘導することができた。対照的に、mCEA含有三重抗原構築物(プラスミド1424~1427)は、CEAに対するB細胞応答を誘導することができた一方、cCEA含有三重抗原構築物(プラスミド1428~1429)は、より弱いCEA特異的B細胞応答を誘導したまたは誘導しなかった。
アデノウイルスベクターを使用したC57BL/6Jマウスにおける免疫応答試験
試験設計。48匹の雌C57BL/6Jマウスに、1e10個のウイルス粒子で、筋肉内注射(各前脛骨筋に50ul)により、ヒトMUC1、mCEAまたはcCEA、およびTERTΔ240をコードする三重抗原アデノウイルスベクターを予備刺激した。14日後に、動物に、同時的エレクトロポレーションにより、両側性に筋肉内送達される(各前脛骨筋に20ul)三重抗原DNA構築物(50ug)を追加免疫した。MUC1、CEAおよびTERT特異的細胞性応答、ならびにMUC1およびCEA特異的液性応答を、それぞれIFN-γ ELISpotおよびICSアッセイならびにELISAアッセイにおいて、最後の免疫化の7日後に測定した。全体として、2Aペプチドによって連結されたMUC1、mCEAまたはcCEA、およびTERTΔ240をコードする6種の三重抗原アデノウイルスおよびDNA構築物を次の通りに使用した:MUC1-2A-TERTΔ240-2A-mCEA(プラスミド1424)、mCEA-2A-MUC1-2A-TERTΔ240(プラスミド1425)、TERTΔ240-2A-MUC1-2A-mCEA(プラスミド1426)、TERTΔ240-2A-mCEA-2A-MUC1(プラスミド1427)、MUC1-2A-cCEA-2A-TERTΔ240(プラスミド1428)、cCEA-2A-TERTΔ240-2A-MUC1(プラスミド1429)。
試験設計。48匹の雌C57BL/6Jマウスに、1e10個のウイルス粒子で、筋肉内注射(各前脛骨筋に50ul)により、ヒトMUC1、mCEAまたはcCEA、およびTERTΔ240をコードする三重抗原アデノウイルスベクターを予備刺激した。14日後に、動物に、同時的エレクトロポレーションにより、両側性に筋肉内送達される(各前脛骨筋に20ul)三重抗原DNA構築物(50ug)を追加免疫した。MUC1、CEAおよびTERT特異的細胞性応答、ならびにMUC1およびCEA特異的液性応答を、それぞれIFN-γ ELISpotおよびICSアッセイならびにELISAアッセイにおいて、最後の免疫化の7日後に測定した。全体として、2Aペプチドによって連結されたMUC1、mCEAまたはcCEA、およびTERTΔ240をコードする6種の三重抗原アデノウイルスおよびDNA構築物を次の通りに使用した:MUC1-2A-TERTΔ240-2A-mCEA(プラスミド1424)、mCEA-2A-MUC1-2A-TERTΔ240(プラスミド1425)、TERTΔ240-2A-MUC1-2A-mCEA(プラスミド1426)、TERTΔ240-2A-mCEA-2A-MUC1(プラスミド1427)、MUC1-2A-cCEA-2A-TERTΔ240(プラスミド1428)、cCEA-2A-TERTΔ240-2A-MUC1(プラスミド1429)。
結果。表12A~Cは、MUC1、CEAおよびTERTペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)と共に培養されたC57BL/6J脾細胞のELISpotデータ、TERTペプチドaa1025~1039と共に培養されたC57BL/6J脾細胞のICSデータ、ならびにC57BL/6Jマウス血清のELISAデータを示す。陽性応答は、SFC>100、IFN-γ+CD8+T細胞の頻度>0.1%、およびIgG力価>99を有すると定義される。表12A~Cにおける3番目の列の数は、それぞれMUC1、CEAまたはTERTペプチドプールによる再刺激、およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも1個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。表12Cにおける4番目の列の数は、TERT特異的ペプチドTERT aa1025~1039による再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞106個を表す。表12A~Bにおける4番目の列の数は、それぞれ抗MUC1および抗CEA IgG力価を表す(光学密度(O.D)=1、検出限界(L.O.D)=99.0)。表12A~Cに示す通り、MUC1、CEAおよびTERT発現三重抗原構築物により作製された免疫原性MUC1、CEAおよびTERTポリペプチドは、全3種の抗原に対するT細胞応答、およびMUC1に対するB細胞応答を誘導することができた。対照的に、mCEA含有三重抗原構築物(プラスミド1424~1427)は、CEAに対するB細胞応答を誘導することができた一方、cCEA含有三重抗原構築物(プラスミド1428~1429)は、より弱いCEA特異的B細胞応答を誘導したまたは誘導しなかった。
HLA-A24マウスにおける免疫応答試験
試験設計。16匹の雌雄混合HLA-A24マウスに、1e10個のウイルス粒子で、筋肉内注射(各前脛骨筋に50ul)により、ヒトMUC1、mCEAまたはcCEA、およびTERTΔ240をコードするアデノウイルスAdC68Y三重抗原構築物(プラスミド1426:TERTΔ240-2A-MUC1-2A-mCEAまたはプラスミド1428:MUC1-2A-cCEA-2A-TERTΔ240)を予備刺激した。14日後に、動物に、同じ3種の抗原をコードする50ug三重抗原DNA構築物(プラスミド1426または1428)を筋肉内に追加免疫した(同時的エレクトロポレーションにより20ulを各前脛骨筋に送達)。HLA-A24拘束MUC1特異的細胞性応答を、IFN-γ ELISpotアッセイにおいて、最後の免疫化の7日後に測定した。
試験設計。16匹の雌雄混合HLA-A24マウスに、1e10個のウイルス粒子で、筋肉内注射(各前脛骨筋に50ul)により、ヒトMUC1、mCEAまたはcCEA、およびTERTΔ240をコードするアデノウイルスAdC68Y三重抗原構築物(プラスミド1426:TERTΔ240-2A-MUC1-2A-mCEAまたはプラスミド1428:MUC1-2A-cCEA-2A-TERTΔ240)を予備刺激した。14日後に、動物に、同じ3種の抗原をコードする50ug三重抗原DNA構築物(プラスミド1426または1428)を筋肉内に追加免疫した(同時的エレクトロポレーションにより20ulを各前脛骨筋に送達)。HLA-A24拘束MUC1特異的細胞性応答を、IFN-γ ELISpotアッセイにおいて、最後の免疫化の7日後に測定した。
結果。表13は、MUC1ペプチドaa524~532と共に培養されたHLA-A24脾細胞のELISpotデータを示す。陽性応答は、SFC>50を有すると定義される。3番目の列の数は、MUC1ペプチドaa524~532による再刺激およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。表13に示す通り、MUC1、CEAおよびTERT発現三重抗原構築物1426および1428により作製された免疫原性MUC1ポリペプチドは、HLA-A24拘束MUC1ペプチドaa524~532特異的CD8+T細胞応答を誘導することができた。重要なことに、この特定のMUC1ペプチドに対するがん患者に由来するT細胞応答は、in vitroで抗腫瘍有効性と相関することが示され(Jochems Cら、Cancer Immunol Immunother(2014)63:161~174)、この特定のエピトープに対する細胞性応答を生じることの重要性を実証した。
サルにおける免疫応答試験
試験設計。42匹の中国起源のカニクイザルに、2e11個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(総計1mL)により、ヒト天然全長膜結合型MUC1(MUC1)、ヒト膜結合型または細胞質型CEA(mCEAまたはcCEA)、およびヒト短縮(Δ240)サイトゾル型TERT(TERTΔ240)抗原をコードするAdC68Yアデノウイルスベクターを1日目に予備刺激した。30日目および57日目に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される同じ3種の抗原をコードするDNAを追加免疫した(総計2mL)。1日目(32mg)、30日目(50mg)および57日目(75mg)に、抗CTLA-4を皮下投与した。最後の免疫化の15日後に、動物を出血させ、PBMCおよび血清を単離して、それぞれMUC1、CEAおよびTERT特異的細胞性(ELISpot、ICS)ならびにMUC1およびCEA特異的液性(ELISA)応答を評価した。全体として、2Aペプチドによって連結されたMUC1、mCEAまたはcCEA、およびTERTΔ240をコードする6種の三重抗原アデノウイルスおよびDNA構築物を評定した:MUC1-2A-TERTΔ240-2A-mCEA(プラスミド1424)、mCEA-2A-MUC1-2A-TERTΔ240(プラスミド1425)、TERTΔ240-2A-MUC1-2A-mCEA(プラスミド1426)、TERTΔ240-2A-mCEA-2A-MUC1(プラスミド1427)、MUC1-2A-cCEA-2A-TERTΔ240(プラスミド1428)、cCEA-2A-TERTΔ240-2A-MUC1(プラスミド1429)。
試験設計。42匹の中国起源のカニクイザルに、2e11個のウイルス粒子で、両側性筋肉内注射(総計1mL)により、ヒト天然全長膜結合型MUC1(MUC1)、ヒト膜結合型または細胞質型CEA(mCEAまたはcCEA)、およびヒト短縮(Δ240)サイトゾル型TERT(TERTΔ240)抗原をコードするAdC68Yアデノウイルスベクターを1日目に予備刺激した。30日目および57日目に、動物に、エレクトロポレーションにより両側性に筋肉内送達される同じ3種の抗原をコードするDNAを追加免疫した(総計2mL)。1日目(32mg)、30日目(50mg)および57日目(75mg)に、抗CTLA-4を皮下投与した。最後の免疫化の15日後に、動物を出血させ、PBMCおよび血清を単離して、それぞれMUC1、CEAおよびTERT特異的細胞性(ELISpot、ICS)ならびにMUC1およびCEA特異的液性(ELISA)応答を評価した。全体として、2Aペプチドによって連結されたMUC1、mCEAまたはcCEA、およびTERTΔ240をコードする6種の三重抗原アデノウイルスおよびDNA構築物を評定した:MUC1-2A-TERTΔ240-2A-mCEA(プラスミド1424)、mCEA-2A-MUC1-2A-TERTΔ240(プラスミド1425)、TERTΔ240-2A-MUC1-2A-mCEA(プラスミド1426)、TERTΔ240-2A-mCEA-2A-MUC1(プラスミド1427)、MUC1-2A-cCEA-2A-TERTΔ240(プラスミド1428)、cCEA-2A-TERTΔ240-2A-MUC1(プラスミド1429)。
結果。表14A、14Bおよび14Cは、MUC1、CEAおよびTERTペプチドライブラリーに由来するペプチドプール(表15も参照)と共に培養された中国起源のカニクイザルPBMCのELISpotおよびICSデータ、ならびに中国起源のカニクイザル血清のELISAデータを示す。陽性応答は、SFC>50、IFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞1e6個>50、およびIgG力価>99を有すると定義される。表14A~Cにおける3番目の列の数は、それぞれMUC1、CEAまたはTERTペプチドプールによる再刺激、およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γスポット/脾細胞106個を表す。太字フォントの数は、検査した少なくとも1個のペプチドプールが数え切れず、したがって、実数が少なくとも記述の値であることを示す。表14A~Cにおける4番目の列の数は、それぞれMUC1、CEAまたはTERTペプチドプールによる再刺激、およびバックグラウンド減算後の、#IFN-γ+CD8+T細胞/CD8+T細胞106個を表す。表14A~Bにおける5番目の列の数は、それぞれ抗MUC1および抗CEA IgG力価を表す(光学密度(O.D)=1、検出限界(L.O.D)=99.0)。表14A~Cに示す通り、MUC1、CEAおよびTERT発現三重Ag構築物により作製された免疫原性MUC1、CEAおよびTERTポリペプチドは、全3種の抗原に対する細胞性応答、およびMUC1に対する液性応答を誘導することができた。しかし、mCEAを含有する三重抗原構築物は、cCEAを含有するものよりも大きいCEA特異的B細胞応答を誘導した。
未加工の配列表(部分的)
配列番号42.プラスミド1424 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号43.プラスミド1424ポリペプチド
配列番号44.プラスミド1425 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号45.プラスミド1425ポリペプチド
配列番号46.プラスミド1426 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号47.プラスミド1426ポリペプチド
配列番号48.プラスミド1427 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号49.プラスミド1427ポリペプチド
配列番号50.プラスミド1428 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号51.プラスミド1428ポリペプチド
配列番号52.プラスミド1429 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号53.プラスミド1429ポリペプチド
配列番号65.プラスミド1428完全ベクター(ヌクレオチド配列)
配列番号66.AdC68Y 1428完全ベクター(ヌクレオチド配列)
配列番号87.プラスミド1424 ORF(RNA)
配列番号88.プラスミド1425 ORF(RNA)
配列番号89.プラスミド1426 ORF(RNA)
配列番号90.プラスミド1427 ORF(RNA)
配列番号91.プラスミド1428 ORF(RNA)
配列番号92.プラスミド1429 ORF(RNA)
配列番号42.プラスミド1424 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号43.プラスミド1424ポリペプチド
配列番号44.プラスミド1425 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号45.プラスミド1425ポリペプチド
配列番号46.プラスミド1426 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号47.プラスミド1426ポリペプチド
配列番号48.プラスミド1427 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号49.プラスミド1427ポリペプチド
配列番号50.プラスミド1428 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号51.プラスミド1428ポリペプチド
配列番号52.プラスミド1429 ORF(ヌクレオチド配列)
配列番号53.プラスミド1429ポリペプチド
配列番号65.プラスミド1428完全ベクター(ヌクレオチド配列)
配列番号66.AdC68Y 1428完全ベクター(ヌクレオチド配列)
配列番号87.プラスミド1424 ORF(RNA)
配列番号88.プラスミド1425 ORF(RNA)
配列番号89.プラスミド1426 ORF(RNA)
配列番号90.プラスミド1427 ORF(RNA)
配列番号91.プラスミド1428 ORF(RNA)
配列番号92.プラスミド1429 ORF(RNA)
Claims (32)
- 免疫原性CEAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む抗原構築物。
- 免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項1に記載の抗原構築物。
- 免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項1に記載の抗原構築物。
- 免疫原性MUC1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、および免疫原性TERTポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項1に記載の抗原構築物。
- スペーサーヌクレオチド配列をさらに含む、請求項2、3または4のいずれか一項に記載の抗原構築物。
- スペーサーヌクレオチド配列が、2Aペプチドをコードする、請求項5に記載の抗原構築物。
- スペーサーヌクレオチド配列が、EMC2A、ERA2A、ERB2AおよびT2Aからなる群から選択される2Aペプチドをコードする、請求項5に記載の抗原構築物。
- 免疫原性CEAポリペプチドが、
(1)配列番号2のアミノ酸2~702、配列番号2のアミノ酸323~702もしくは配列番号2のアミノ酸323~677を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(2)配列番号15のアミノ酸配列もしくは配列番号15のアミノ酸4~704を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(3)配列番号17のアミノ酸配列もしくは配列番号17のアミノ酸4~526を含むもしくはこれからなるポリペプチド、
(4)配列番号19の配列もしくは配列番号19のアミノ酸4~468を含むもしくはこれからなるポリペプチド、または
(5)上述の(1)~(4)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、請求項1から7のいずれか一項に記載の抗原構築物。 - 免疫原性TERTポリペプチドが、
(1)配列番号9のアミノ酸配列または配列番号9のアミノ酸2~893を含むポリペプチド、
(2)配列番号11のアミノ酸配列または配列番号11のアミノ酸3~791を含むポリペプチド、
(3)配列番号13のアミノ酸配列または配列番号13のアミノ酸4~594を含むポリペプチド、および
(4)上述の(1)~(3)のポリペプチドのいずれかの機能的バリアントであるポリペプチド
からなる群から選択される、請求項3から8のいずれか一項に記載の抗原構築物。 - 免疫原性MUC1ポリペプチドが、
(1)配列番号5のアミノ酸配列または配列番号5のアミノ酸4~537を含むポリペプチド、
(2)配列番号7のアミノ酸配列または配列番号7のアミノ酸4~517を含むポリペプチド、および
(3)上述の(1)または(2)のポリペプチドの機能的バリアント
からなる群から選択される、請求項2、4から9のいずれか一項に記載の抗原構築物。 - (1)配列番号31のアミノ酸配列または配列番号31のアミノ酸4~1088を含むアミノ酸配列、
(2)配列番号33のアミノ酸配列または配列番号33のアミノ酸4~1081を含むアミノ酸配列、
(3)配列番号35のアミノ酸配列または配列番号35のアミノ酸4~1085を含むアミノ酸配列、
(4)配列番号37のアミノ酸配列または配列番号37のアミノ酸4~1030を含むアミノ酸配列、
(5)配列番号39のアミノ酸配列または配列番号39のアミノ酸4~1381を含むアミノ酸配列、および
(6)配列番号41のアミノ酸配列または配列番号41のアミノ酸4~1441を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の抗原構築物。 - (1)配列番号30のヌクレオチド配列または配列番号30のヌクレオチド10~3264を含むヌクレオチド配列、
(2)配列番号32のヌクレオチド配列または配列番号32のヌクレオチド10~3243を含むヌクレオチド配列、
(3)配列番号34のヌクレオチド配列または配列番号34のヌクレオチド10~3255を含むヌクレオチド配列、
(4)配列番号36のヌクレオチド配列または配列番号36のヌクレオチド10~3090を含むヌクレオチド配列、
(5)配列番号38のヌクレオチド配列または配列番号38のヌクレオチド10~4143を含むヌクレオチド配列、
(6)配列番号40のヌクレオチド配列または配列番号40のヌクレオチド10~4323を含むヌクレオチド配列、および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の抗原構築物。 - (1)配列番号43のアミノ酸配列または配列番号43のアミノ酸4~2003を含むアミノ酸配列、
(2)配列番号45のアミノ酸配列または配列番号45のアミノ酸4~2001を含むアミノ酸配列、
(3)配列番号47のアミノ酸配列または配列番号47のアミノ酸4~2008を含むアミノ酸配列、
(4)配列番号49のアミノ酸配列または配列番号49のアミノ酸4~1996を含むアミノ酸配列、
(5)配列番号51のアミノ酸配列または配列番号51のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列、および
(6)配列番号53のアミノ酸配列または配列番号53のアミノ酸4~1943を含むアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の抗原構築物。 - (1)配列番号42のヌクレオチド配列または配列番号42のヌクレオチド10~6009を含むヌクレオチド配列、
(2)配列番号44のヌクレオチド配列または配列番号44のヌクレオチド10~6003を含むヌクレオチド配列、
(3)配列番号46のヌクレオチド配列または配列番号46のヌクレオチド10~6024を含むヌクレオチド配列、
(4)配列番号48のヌクレオチド配列または配列番号48のヌクレオチド10~5988を含むヌクレオチド配列、
(5)配列番号50のヌクレオチド配列または配列番号50のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列、
(6)配列番号52のヌクレオチド配列または配列番号52のヌクレオチド10~5829を含むヌクレオチド配列、および
(7)上述の(1)~(6)のヌクレオチド配列のいずれかの縮重バリアントであるヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載の抗原構築物。 - (1)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列、または
(2)配列番号87、88、89、90、91および92のいずれかのヌクレオチド配列の縮重バリアント
を含む、請求項1に記載の抗原構築物。 - (i)請求項1から15のいずれか一項に記載の抗原構築物、および(ii)薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物。
- ワクチンである、請求項16に記載の医薬組成物。
- 有効量の請求項16または請求項17に記載の医薬組成物をヒトに投与するステップを含む、処置を必要とするヒトにおけるがんを処置する方法。
- がんが、MUC1、CEAまたはTERTから選択される1種または複数の腫瘍関連抗原を過剰発現する、請求項18に記載の方法。
- がんが、膵がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、肺がんまたは結腸直腸がんである、請求項18に記載の方法。
- がんが、三重陰性乳がん、エストロゲン受容体陽性乳がんまたはHER2陽性乳がんである、請求項18に記載の方法。
- 有効量の免疫モジュレーターを患者に投与するステップをさらに含む、請求項18に記載の方法。
- 免疫モジュレーターが、CTLA-4阻害剤、IDO1阻害剤、PD-1阻害剤またはPD-L1阻害剤である、請求項22に記載の方法。
- アジュバントをヒトに投与するステップをさらに含む、請求項18に記載の方法。
- 請求項1から15のいずれか一項に記載の抗原構築物を含むベクター。
- プラスミドベクターである、請求項25に記載のベクター。
- 配列番号57、59、61、63、65、67、69、70、71、72、73および74のいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項26に記載のベクター。
- ウイルスベクターである、請求項25に記載のベクター。
- 配列番号58、60、62、64、66および68のいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項28に記載のベクター。
- 医薬としての、(1)請求項1から15のいずれか一項に記載の抗原構築物、(2)請求項16もしくは請求項17に記載の医薬組成物、または(3)請求項25から29のいずれか一項に記載のベクターの使用。
- 医薬が、がんの処置のためのものである、請求項30に記載の使用。
- がんの処置のための医薬の製造のための、(1)請求項1から14のいずれか一項に記載の抗原構築物、または(2)請求項25から29のいずれか一項に記載のベクターの使用。
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762531227P | 2017-07-11 | 2017-07-11 | |
US62/531,227 | 2017-07-11 | ||
US201862682044P | 2018-06-07 | 2018-06-07 | |
US62/682,044 | 2018-06-07 | ||
JP2020500687A JP7028953B2 (ja) | 2017-07-11 | 2018-07-03 | Cea、muc1およびtertを含む免疫原性組成物 |
PCT/IB2018/054926 WO2019012371A1 (en) | 2017-07-11 | 2018-07-03 | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS COMPRISING CEA MUC1 AND TERT |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020500687A Division JP7028953B2 (ja) | 2017-07-11 | 2018-07-03 | Cea、muc1およびtertを含む免疫原性組成物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022031653A true JP2022031653A (ja) | 2022-02-22 |
Family
ID=63720720
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020500687A Active JP7028953B2 (ja) | 2017-07-11 | 2018-07-03 | Cea、muc1およびtertを含む免疫原性組成物 |
JP2021175480A Pending JP2022031653A (ja) | 2017-07-11 | 2021-10-27 | Cea、muc1およびtertを含む免疫原性組成物 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020500687A Active JP7028953B2 (ja) | 2017-07-11 | 2018-07-03 | Cea、muc1およびtertを含む免疫原性組成物 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20190016775A1 (ja) |
EP (1) | EP3651792A1 (ja) |
JP (2) | JP7028953B2 (ja) |
KR (1) | KR20200027551A (ja) |
CN (1) | CN111065408A (ja) |
AU (1) | AU2018300295A1 (ja) |
BR (1) | BR112020000413A2 (ja) |
CA (1) | CA3069363A1 (ja) |
CO (1) | CO2020000231A2 (ja) |
IL (1) | IL271917A (ja) |
PE (1) | PE20200613A1 (ja) |
PH (1) | PH12020500087A1 (ja) |
RU (1) | RU2020100072A (ja) |
SG (1) | SG11202000197PA (ja) |
TW (1) | TW201920674A (ja) |
WO (1) | WO2019012371A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102020201219A1 (de) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | United Initiators Gmbh | Transport- und Lagerbehälter für Peroxide |
CN112552380B (zh) * | 2020-12-10 | 2021-12-24 | 武汉博沃生物科技有限公司 | 一种SARS-CoV-2病毒的免疫原及其应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050059624A1 (en) * | 2001-12-19 | 2005-03-17 | Ingmar Hoerr | Application of mRNA for use as a therapeutic against tumour diseases |
WO2016112195A1 (en) * | 2015-01-09 | 2016-07-14 | Etubics Corporation | Methods and compositions for combination immunotherapy |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4769330A (en) | 1981-12-24 | 1988-09-06 | Health Research, Incorporated | Modified vaccinia virus and methods for making and using the same |
US4603112A (en) | 1981-12-24 | 1986-07-29 | Health Research, Incorporated | Modified vaccinia virus |
US5288641A (en) | 1984-06-04 | 1994-02-22 | Arch Development Corporation | Herpes Simplex virus as a vector |
CA1341482C (en) | 1984-10-31 | 2005-05-10 | Paul A. Luciw | Process for preparing fragments of aids-associated retroviruses |
GB8508845D0 (en) | 1985-04-04 | 1985-05-09 | Hoffmann La Roche | Vaccinia dna |
US5091309A (en) | 1986-01-16 | 1992-02-25 | Washington University | Sindbis virus vectors |
WO1989001973A2 (en) | 1987-09-02 | 1989-03-09 | Applied Biotechnology, Inc. | Recombinant pox virus for immunization against tumor-associated antigens |
US5716826A (en) | 1988-03-21 | 1998-02-10 | Chiron Viagene, Inc. | Recombinant retroviruses |
US5591624A (en) | 1988-03-21 | 1997-01-07 | Chiron Viagene, Inc. | Retroviral packaging cell lines |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
US5817491A (en) | 1990-09-21 | 1998-10-06 | The Regents Of The University Of California | VSV G pseusdotyped retroviral vectors |
US6015686A (en) | 1993-09-15 | 2000-01-18 | Chiron Viagene, Inc. | Eukaryotic layered vector initiation systems |
US6962790B1 (en) | 1998-09-23 | 2005-11-08 | University Of Massachusetts Medical Center | Predictive assay for immune response |
US6682736B1 (en) | 1998-12-23 | 2004-01-27 | Abgenix, Inc. | Human monoclonal antibodies to CTLA-4 |
EP2829609A1 (en) | 1999-08-24 | 2015-01-28 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Human CTLA-4 antibodies and their uses |
TWI228718B (en) | 2001-11-05 | 2005-03-01 | Tdk Corp | Manufacturing method and device of mold plate for information medium |
LT2163260T (lt) | 2004-01-23 | 2017-06-26 | Msd Italia S.R.L. | Šimpanzės adenoviruso vakcinos nešikliai |
NZ576134A (en) * | 2006-10-12 | 2011-09-30 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Telomerase reverse transcriptase fusion protein, nucleotides encoding it, and uses thereof |
KR101783004B1 (ko) | 2008-07-08 | 2017-09-28 | 인사이트 홀딩스 코포레이션 | 인돌아민 2,3-디옥시게나아제의 억제제로서의 1,2,5-옥사디아졸 |
SG172935A1 (en) | 2009-02-02 | 2011-08-29 | Okairos Ag | Simian adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof |
US9128725B2 (en) | 2012-05-04 | 2015-09-08 | Apple Inc. | Load-store dependency predictor content management |
WO2014079886A1 (en) * | 2012-11-20 | 2014-05-30 | Sanofi | Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof |
JP2014161283A (ja) * | 2013-02-26 | 2014-09-08 | Shizuoka Prefecture | Ceacam5遺伝子のスプライシングバリアント |
SG11201510748PA (en) * | 2013-08-21 | 2016-03-30 | Curevac Ag | Composition and vaccine for treating lung cancer |
WO2015063674A1 (en) | 2013-10-28 | 2015-05-07 | Piramal Enterprises Limited | Herbal composition, process for its preparation and use thereof |
BR112016008806A2 (pt) | 2013-11-01 | 2017-10-03 | Pfizer | Vetores para expressão de antígenos associados à próstata |
MD20160118A2 (ro) | 2014-05-15 | 2017-04-30 | Iteos Therapeutics | Derivaţi ai pirolidin-2,5-dionei, compoziţii farmaceutice şi metode de utilizare ca inhibitori ai IDO1 |
TWI595006B (zh) | 2014-12-09 | 2017-08-11 | 禮納特神經系統科學公司 | 抗pd-1抗體類和使用彼等之方法 |
-
2018
- 2018-07-03 SG SG11202000197PA patent/SG11202000197PA/en unknown
- 2018-07-03 BR BR112020000413-8A patent/BR112020000413A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2018-07-03 WO PCT/IB2018/054926 patent/WO2019012371A1/en unknown
- 2018-07-03 RU RU2020100072A patent/RU2020100072A/ru unknown
- 2018-07-03 CA CA3069363A patent/CA3069363A1/en not_active Abandoned
- 2018-07-03 JP JP2020500687A patent/JP7028953B2/ja active Active
- 2018-07-03 KR KR1020207003864A patent/KR20200027551A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-07-03 PE PE2020000050A patent/PE20200613A1/es unknown
- 2018-07-03 EP EP18780215.2A patent/EP3651792A1/en not_active Withdrawn
- 2018-07-03 CN CN201880057887.4A patent/CN111065408A/zh active Pending
- 2018-07-03 AU AU2018300295A patent/AU2018300295A1/en not_active Abandoned
- 2018-07-06 TW TW107123509A patent/TW201920674A/zh unknown
- 2018-07-09 US US16/029,878 patent/US20190016775A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-01-08 IL IL271917A patent/IL271917A/en unknown
- 2020-01-10 PH PH12020500087A patent/PH12020500087A1/en unknown
- 2020-01-10 CO CONC2020/0000231A patent/CO2020000231A2/es unknown
-
2021
- 2021-10-27 JP JP2021175480A patent/JP2022031653A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050059624A1 (en) * | 2001-12-19 | 2005-03-17 | Ingmar Hoerr | Application of mRNA for use as a therapeutic against tumour diseases |
WO2016112195A1 (en) * | 2015-01-09 | 2016-07-14 | Etubics Corporation | Methods and compositions for combination immunotherapy |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CLIN. CANCER RES., 2008, VOL. 14, NO. 10, PP. 3060-3069, JPN6021013193, ISSN: 0005040844 * |
MOL. THER., 2011, VOL. 19, NO. 5, PP. 990-999, JPN6021013192, ISSN: 0005040843 * |
ONCOTARGET, 2015, VOL. 6, NO. 31, PP. 31344-31359, JPN6021013191, ISSN: 0005040842 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20190016775A1 (en) | 2019-01-17 |
BR112020000413A2 (pt) | 2020-07-21 |
JP7028953B2 (ja) | 2022-03-02 |
AU2018300295A1 (en) | 2020-01-23 |
RU2020100072A3 (ja) | 2021-08-11 |
CA3069363A1 (en) | 2019-01-17 |
KR20200027551A (ko) | 2020-03-12 |
PH12020500087A1 (en) | 2020-09-14 |
RU2020100072A (ru) | 2021-08-11 |
JP2020526202A (ja) | 2020-08-31 |
TW201920674A (zh) | 2019-06-01 |
CO2020000231A2 (es) | 2020-01-17 |
PE20200613A1 (es) | 2020-03-11 |
SG11202000197PA (en) | 2020-02-27 |
WO2019012371A1 (en) | 2019-01-17 |
CN111065408A (zh) | 2020-04-24 |
EP3651792A1 (en) | 2020-05-20 |
IL271917A (en) | 2020-02-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7014764B2 (ja) | 前立腺関連抗原を発現させるためのベクター | |
JP2022031653A (ja) | Cea、muc1およびtertを含む免疫原性組成物 | |
US20220323558A1 (en) | Cancer vaccines |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211027 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220928 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230419 |