BR112020000413A2

BR112020000413A2 - composições imunogênicas compreendendo cea muc1 e tert

Info

Publication number: BR112020000413A2
Application number: BR112020000413-8A
Authority: BR
Inventors: Joseph John BINDER; Helen Kim Cho; Paul Jason Cockle; Derek John Falconer; Siradanahalli Guru; Marianne Marcela Andrea Martinic
Original assignee: Pfizer Inc.
Priority date: 2017-07-11
Filing date: 2018-07-03
Publication date: 2020-07-21
Also published as: SG11202000197PA; PH12020500087A1; WO2019012371A1; IL271917A; CO2020000231A2; CN111065408A; JP2020526202A; US20190016775A1; JP2022031653A; PE20200613A1; TW201920674A; KR20200027551A; CA3069363A1; AU2018300295A1; JP7028953B2; EP3651792A1; RU2020100072A3; RU2020100072A

Abstract

A presente invenção fornece: (a) polipeptídeos de CEA imunogênicos isolados; (b) moléculas de ácido nucleico isoladas que codificam (i) um polipeptídeo de CEA imunogênico, (ii) um polipeptídeo de CEA imunogênico e um polipeptídeo de MUC1 imunogênico, (iii) um polipeptídeo de CEA imunogênico e um polipeptídeo de TERT imunogênico ou (iv) um polipeptídeo de CEA imunogênico, um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e um polipeptídeo de TERT imunogênico; (c) composições compreendendo uma molécula de ácido nucleico isolada; e (d) métodos relacionados às utilizações dos polipeptídeos de CEA imunogênicos, moléculas de ácido nucleico e composições.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES IMUNOGÊNICAS COMPREENDENDO CEA MUC1 E TERT".

REFERÊNCIA A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. Nº 62/531.227, apresentado em 11 de julho de 2017 e do Pedido Provisório U.S. nº 62/682.044, depositado em 7 de junho de 2018. Todo o conteúdo de cada um dos pedidos anteriores é incorporado aqui por referência.

REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[002] Este pedido está sendo apresentado juntamente com uma listagem de sequências em formato eletrônico. A listagem de sequência é fornecida como um arquivo no formato .txt intitulado "PC72354A FF SeqList ST25.txt", criado em 8 de junho de 2018 e com um tamanho de 963 KB. A listagem de sequências contida no arquivo .txt faz parte da especificação e é aqui incorporada por referência em sua entidade.

CAMPO DE INVENÇÃO

[003] A presente invenção refere-se geralmente à imunoterapia e especificamente a vacinas e métodos para o tratamento ou prevenção de distúrbios neoplásicos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[004] Os cânceres são uma das principais causas de mortalidade em todo o mundo. Eles podem ocorrer em uma variedade de órgãos e tecidos, como pâncreas, mamas, pulmões, estômago, cólon e reto. O câncer de pâncreas é a quarta causa mais comum de morte por câncer nos Estados Unidos. O câncer de pâncreas pode ocorrer no componente exócrino ou endócrino do pâncreas. Os cânceres exócrinos incluem (1) adenocarcinoma pancreático, que é de longe o tipo mais comum, (2) carcinoma de células acinares, que representa 5

% dos cânceres pancreáticos exócrinos, (3) cistadenocarcinomas, que representam 1 % dos cânceres pancreáticos, e (4) outras formas raras de câncer, como pancreatoblastoma, carcinomas adenoescamosos, carcinomas de células do anel de sinete, carcinomas hepatoides, carcinomas coloides, carcinomas indiferenciados e carcinomas indiferenciados com células gigantes do tipo osteoclastos.

[005] O câncer de mama (BrC) é outro câncer comum entre mulheres americanas e a segunda principal causa de morte por câncer em mulheres. Com base em vários marcadores tumorais, como receptor de estrogênio (ER), receptor de progesterona (PR) e receptor de fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2), os cânceres de mama podem ser classificados em subtipos principais, como (1) cânceres positivos para receptores hormonais (onde as células cancerígenas contêm receptores de estrogênio ou progesterona); (2) cânceres negativos para receptores hormonais (onde as células cancerígenas não possuem receptores de estrogênio ou progesterona); (3) HER2/neu positivo (em que cancros que possuem excesso de proteína HER2/neu ou cópias extras do gene HER2/neu); (4) câncer de HER2/neu negativo (onde o câncer não tem excesso de HER2/neu); (5) cânceres triplos negativos (em que as células de câncer de mama não possuem receptores de estrogênio, nem receptores de progesterona, nem HER2 excessivo); e (6) câncer triplo positivo (onde os cânceres são positivos para o receptor de estrogênio, positivos para o receptor de progesterona e têm muito HER2).

[006] O câncer de pulmão é responsável por mais de um quarto de todas as mortes por câncer e é a principal causa de mortalidade relacionada ao câncer em todo o mundo. Aproximadamente 85 % dos casos são classificados histologicamente como câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). O CPCNP pode ainda ser classificado em vários subtipos, como carcinoma de células escamosas (epidermoide), adenocarcinoma, carcinoma de células grandes (não diferenciado), carcinoma adenoescamoso e carcinoma sarcomatoide. O segundo tipo comum de câncer de pulmão é o câncer de pequenas células (SCLC), responsável por cerca de 10 % a 15 % de todos os cânceres de pulmão.

[007] O câncer gástrico (GaC) é a terceira causa mais comum de morte por câncer no mundo. Aproximadamente 90-95 % dos cânceres gástricos são adenocarcinomas; outros tipos menos comuns incluem linfoma, GISTs e tumores carcinoides.

[008] O câncer colorretal (CRC) também é uma das principais causas de mortes relacionadas ao câncer nos Estados Unidos. Os adenocarcinomas são o tipo mais comum de CRC, responsável por mais de 95 % dos cânceres colorretais. Outros tipos menos comuns de CRC incluem tumores carcinoides, tumores estromais gastrointestinais (GISTs), linfomas e sarcomas.

[009] Os regimes tradicionais de gerenciamento de câncer têm sido bem-sucedidos no gerenciamento de um grupo seletivo de cânceres circulantes e sólidos. No entanto, muitos tipos de câncer são resistentes às abordagens tradicionais. Nos últimos anos, a imunoterapia para cânceres tem sido explorada, principalmente vacinas contra o câncer e terapias com anticorpos. Uma abordagem da imunoterapia contra o câncer envolve a administração de um imunógeno para gerar uma resposta imune sistêmica ativa contra um antígeno associado ao tumor (TAA) na célula cancerígena alvo. Embora um grande número de antígenos associados a tumores tenha sido identificado e muitos desses antígenos tenham sido explorados como vacinas virais, bacterianas, proteicas, peptídicas ou baseadas em DNA para o tratamento ou prevenção de câncer, na maioria dos ensaios clínicos, até agora não conseguiram produzir um produto terapêutico. Portanto, existe a necessidade de um imunogênio ou vacina que possa ser usada no tratamento ou prevenção de cânceres.

[0010] A presente descrição referese a polipeptídeos imunogênicos derivados dos antígenos MUC1, CEA ou TERT associados ao tumor, moléculas de ácido nucleico que codificam esses polipeptídeos imunogênicos, composições compreendendo esse polipeptídeo imunogênico ou molécula de ácido nucleico, como vacinas, e usos dos polipeptídeos, moléculas de ácido nucleico e composições.

[0011] A proteína mucina 1 humana (MUC1; também conhecida como episialina, PEM, H23Ag, EMA, CA1I5-3 e MCA) é uma glicoproteína transmembranar polimórfica expressa nas superfícies apicais dos epitélios simples e glandular. O gene MUC1 codifica um único precursor da cadeia polipeptídica que inclui uma sequência peptídica de sinal. Imediatamente após a tradução, a sequência do peptídeo de sinal é removida e a porção restante do precursor da MUC1 é ainda clivada em dois fragmentos peptídicos: a subunidade N- terminal mais longa (MUC1-N ou MUC1a) e a subunidade C-terminal mais curta (MUC1-C ou MUC1B). A MUC1 madura compreende um MUC1-N e um MUC1-C associados através de ligações de hidrogênio estáveisó. O MUC1-N, que é um domínio extracelular, contém repetições em tandem de número variável (VNTR) de 20 resíduos de aminoácidos, com o número de repetições variando de 20 a 125 em indivíduos diferentes. A região da proteína MUC1 que é composta pelo número variável de repetições em tandem também é referida na presente descrição como "região VNTR". MUC1-C contém uma região extracelular curta (aproximadamente 53 aminoácidos), um domínio transmembranar (aproximadamente 28 aminoácidos) e uma cauda citoplasmática (aproximadamente 72 aminoácidos) A cauda citoplasmática de MUC1 (MUC1-CT) contém resíduos de serina e tirosina altamente conservados que são fosforilados por receptores de fator de crescimento e cinases intracelulares. A MUC1 humana existe em múltiplas isoformas resultantes de diferentes tipos de splicing alternativo de MUC1 de RNA. A sequência de aminoácidos do precursor da proteína isoforma 1 da MUC1 humana de comprimento total (isoforma 1, Uniprot P15941-1) é fornecida na SEQ ID NO: 1 ("Polipeptídeo de Referência de MUC1"). Pelo menos 16 outras isoformas da MUC-1 humana foram relatadas até agora (Uniprot P15941-2 a P15941-17), que incluem inserções, deleções ou substituições diversas em comparação com a sequência da isoforma

1. Essas isoformas são conhecidas como isoforma 2, 3,4, 5,6, Y,8,9, F, Y-LSP, S2, M6, ZD, T10, E2 e J13 (Uniprot P15941-2 a P15941-17, respectivamente). A proteína precursora da isoforma 1 de MUC1 humana de comprimento total consiste em 1255 aminoácidos, que inclui uma sequência peptídica de sinal nos aminoácidos 1-23. Os domínios MUC1-N e MUCT1-C da proteína madura MUC1 consistem nos aminoácidos 24-1097 e 1098-1255, respectivamente.

[0012] As moléculas de adesão celular relacionadas ao antígeno carcinoembrionário (também conhecidas como CEACAMs) são um grupo de glicoproteínas no grupo da superfamília da imunoglobulina (lg). Estruturalmente, o grupo CEACAM consiste em um único domínio N-terminal e no máximo seis domínios internos ligados a dissulfeto semelhantes aos domínios |g do tipo C2. O grupo contém 12 proteínas (CEACAM1, 3-8, 16, 18-21), várias das quais, como CEACAM1, CEACAM5 e CEACAMG6, foram consideradas marcadores clínicos válidos e alvos terapêuticos promissores em vários tipos de câncer, como melanoma, pulmão, câncer colorretal e pancreático. A superexpressão de CEACAMS5, também aqui referida e conhecida na técnica como CEA, foi encontrada na maioria dos carcinomas humanos. A CEACAMSB5 é expressa como uma proteína precursora de

702 aminoácidos que consiste em: (1) um peptídeo de sinal (aminoácidos 1-34); (2) o domínio N (aminoácidos 35-144); (3) três unidades de repetição compreendendo seis domínios constantes do tipo C2 denominados A1 (aminoácidos 146-237), B1 (aminoácidos 238 - 322), A2 (aminoácidos 324-415) e B2 (aminoácidos 416 - 498), A3 (aminoácidos 502 - 593) e B3 (aminoácidos 594 - 677); e (4) um propeptídeo (aminoácidos 686-702). O peptídeo de sinal é separado da proteína madura durante o transporte para a superfície celular. À sequência de aminoácidos de uma proteína precursora de CEA humana de comprimento total está disponível na UniProt (número de acesso PO6731) e também é apresentada aqui na SEQ ID NO: 2 ("Polipeptídeo de referência CEA").

[0013] A transcriptase reversa da telomerase (ou TERT) é o componente catalítico da telomerase, que é uma polimerase da ribonucleoproteína responsável pela manutenção das extremidades dos telômeros pela adição da repetição de telômeros TTAGGG. Além da TERT, a telomerase também inclui um componente de RNA que serve como modelo para a repetição de telômeros. O gene de TERT humano codifica uma proteína de aminoácido 1132. Existem várias isoformas da TERT humana, que resultam de emendas alternativas. As sequências de aminoácidos da isoforma 1, isoforma 2, isoforma 3 e isoforma 4 estão disponíveis na Uniprot (<www.uniprot.org>; identificadores Uniprot O14746-1, 014746-2, 014746-3 e 0147464, respectivamente). A sequência de aminoácidos da proteína TERT isoforma 1 humana de comprimento total (isoforma 1, Genbank AAD30037, Uniprot O14746-1) também é fornecida aqui na SEQ ID NO: 3 ("Polipeptídeo de Referência TERT"). Em comparação com a TERT isoforma 1 (O14746-1), a isoforma 2 (O14746-2) possui a substituição — dos aminoácidos 764-807 (STLTDLOPYM .. LNEASSGLFD — LRPVPGDPAG ... AGRAAPAFGG) e a exclusão dos aminoácidos de C-terminais 808- 1132), a isoforma 3 (O14746-3) possui a exclusão dos aminoácidos 885-947, e isoforma 4 (014746-4) possui deleções dos aminoácidos 711-722 e 808-1132 e substituição dos aminoácidos 764-807 (STLTDLQPYM .. LNEASSGLFD — LRPVPGDPAG ... AGRAAPAFGG).

SUMARIO DA INVENÇÃO

[0014] Em alguns aspectos, a presente descrição fornece polipeptídeos imunogênicos isolados derivados do antígeno associado ao tumor (TAA) MUC1, CEA e TERT, o que é útil, por exemplo, na obtenção de uma resposta imune in vivo (por exemplo, em um animal, incluindo seres humanos), ou para uso como componente em composições farmacêuticas, incluindo vacinas, para o tratamento de câncer.

[0015] Em outros aspectos, a presente descrição fornece moléculas de ácido nucleico (também referidas como "construções de antígeno") que codificam cada um ou mais polipeptídeos imunogênicos fornecidos pela presente descrição. Em algumas modalidades, a presente descrição fornece construções de ácido nucleico de múltiplos antígenos que codificam dois, três ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos.

[0016] A descrição também fornece vetores contendo uma ou mais moléculas de ácido nucleico fornecidas pela presente descrição. Os vetores são úteis para clonar ou expressar os polipeptídeos de TAA imunogênicos codificados pelas moléculas de ácido nucleico ou para distribuir as moléculas de ácido nucleico em uma composição, como uma vacina, a uma célula hospedeira ou a um animal hospedeiro ou humano. Em um aspecto, a descrição também fornece vetores contendo uma ou mais moléculas de ácido nucleico fornecidas pela presente descrição para uso como, ou em uma vacina.

[0017] Em alguns aspectos adicionais, a presente descrição fornece composições compreendendo um ou mais polipeptídeos imunogênicos, construções de antígeno isoladas que codificam polipeptídeos de TAA imunogênicos ou vetores ou plasmídeos contendo uma construção de antígeno que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos. Em algumas modalidades, a composição é uma composição imunogênica útil para provocar uma resposta imune contra um TAA em um mamífero, como um camundongo, cachorro, macaco ou humano. Em algumas modalidades, a composição é uma composição de vacina útil para imunização de um mamiífero, como um humano, para inibir a proliferação celular anormal, para fornecer proteção contra O desenvolvimento de câncer (usado como profilático) ou para tratamento de distúrbios (usado como terapêutico) associado à super expressão do TAA, como câncer, particularmente câncer de pâncreas, ovário, pulmão, colorretal, gástrico e de mama.

[0018] Em alguns aspectos adicionais, a presente descrição fornece uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, ou vetores (como vetores virais e vetores plasmídicos) que contêm uma molécula de ácido nucleico que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, conforme descrito aqui para uso em um método de obter uma resposta imune contra um TAA em um mamiífero, como um rato, cachorro, macaco ou humano. Em alguns aspectos adicionais, a presente descrição fornece uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, ou vetores (como vetores virais e vetores plasmídicos) que contêm uma molécula de ácido nucleico que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, conforme descrito aqui para uso um método para inibir a proliferação celular anormal em um mamífero. Em alguns aspectos adicionais, a presente descrição fornece uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, ou vetores (como vetores virais e vetores plasmídicos) que contêm uma molécula de ácido nucleico que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, conforme descrito aqui para uso em um método de fornecer proteção contra o desenvolvimento de câncer, para tratamento de câncer ou para tratamento de distúrbios associados à superexpressão de um TAA em um mamífero.

[0019] Em alguns aspectos adicionais, a presente descrição fornece uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, ou vetores ou plasmídeos contendo uma molécula de ácido nucleico que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, conforme descrito aqui para uso como um agente anticâncer. Em alguns aspectos específicos, o câncer é câncer de pâncreas, ovário, pulmão, colorretal, gástrico ou de mama.

[0020] Ainda em outros aspectos, a presente descrição fornece métodos de uso de polipeptídeos de TAA imunogênicos, moléculas de ácido nucleico isoladas e composições. Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método para obter uma resposta imune contra um TAA em um mamífero, particularmente um humano, compreendendo administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de um polipeptídeo fornecido pela invenção que é imunogênico contra o TAA alvo, uma quantidade eficaz de uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica esse polipeptídeo imunogênico, ou uma composição compreendendo esse polipeptídeo imunogênico ou uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica esse polipeptídeo imunogênico. As composições de polipeptídeo ou ácido nucleico podem ser usadas em conjunto com um ou mais adjuvantes ou moduladores imunes.

[0021] Ainda em outros aspectos, a presente descrição fornece os polipeptídeos de TAA imunogênicos, moléculas isoladas de ácido nucleico e composições aqui descritaspara utilização como medicamento. As composições polipeptídicas ou de ácido nucleico podem ser utilizadas em conjunto com um ou mais adjuvantes ou moduladores imunes.

[0022] Em um aspecto da presente invenção, as seguintes modalidades, cada uma descrita por uma cláusula numerada, são consideradas:

[0023] 1. Uma construção de antígeno, compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, como aqui descrito.

[0024] 2. A construção de antígeno de acordo com a cláusula 1, compreendendo ainda uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico, como aqui descrito.

[0025] 3. A construção de antígeno de acordo com a cláusula 1 ou 2, compreendendo ainda uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico aqui descrito.

[0026] 4. A construção de antígeno, de acordo com a cláusula 1, compreendendo ainda uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico como aqui descrito e uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico como aqui descrito.

[0027] 5. A construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das cláusulas 2, 3 ou 4, compreendendo ainda uma sequência de nucleotídeo espaçadora, como aqui descrito.

[0028] 6. A construção de antígeno, de acordo com a cláusula 5, em que a sequência de nucleotídeo espaçadora codifica um peptídeo 2A.

[0029] 7. A construção de antígeno, de acordo com a cláusula 5, em que a sequência de nucleotídeo espaçadora codifica um peptídeo 2A selecionado do grupo que consiste em EMC2A, ERAZ2A, ERB2A e

T2A.

[0030] 8. A construção de antígeno de acordo com qualquer uma das cláusulas 1 a 7, em que o polipeptídeo de CEA imunogênico é selecionado a partir do grupo que consiste em:

[0031] (1) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo nos aminoácidos 2-702 da SEQ ID NO: 2, aminoácidos 323-702 da SEQ ID NO: 2 ou aminoácidos 323-677 da SEQ ID NO: 2;

[0032] (2) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15 ou nos aminoácidos 4- 704 da SEQ ID NO: 15;

[0033] (3) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17 ou nos aminoácidos 4- 526 da SEQ ID NO: 17;

[0034] (4) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência da SEQ ID NO: 19 ou nos aminoácidos 4-468 da SEQ ID NO: 19; ou

[0035] (5) um polipeptídeo que é uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (4) acima.

[0036] 9. A construção de antígeno de acordo com qualquer uma das cláusulas 3-8, em que o polipeptídeo de TERT imunogênico é selecionado do grupo que consiste em:

[0037] (1) um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 ou dos aminoácidos 2-893 da SEQ ID NO: 9;

[0038] (2) um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 ou dos aminoácidos 3-791 da SEQ ID NO: 11;

[0039] (3) um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 ou os aminoácidos 4-594 da SEQ ID NO: 13; e

[0040] (4) um polipeptídeo que é uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (3) acima.

[0041] 10. A construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das cláusulas 2 e 4-9, em que o polipeptídeo de MUC1 imunogênico é selecionado do grupo que consiste em:

[0042] (1) um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 ou os aminoácidos 4-537 da SEQ ID NO: 5;

[0043] (2) um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 ou os aminoácidos 4-517 da SEQ ID NO:7;e

[0044] (3) uma variante funcional do polipeptídeo de (1) ou (2) acima.

[0045] 11. A construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das cláusulas 1-10, que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em:

[0046] (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1088 da SEQ ID NO: 31;

[0047] (2) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1081 da SEQ ID NO: 33;

[0048] (3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1085 da SEQ ID NO: 35;

[0049] (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoácidos que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1030 da SEQ ID NO: 37;

[0050] (5) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 39 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1381 da SEQ ID NO: 39; e

[0051] (6) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1441 da SEQ ID NO: 41.

[0052] 12. A construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das cláusulas 1-11, que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[0053] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[0054] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[0055] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[0056] (4) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[0057] (5) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[0058] (6) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 40 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; e

[0059] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[0060] 13. A construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das cláusulas 1-12, que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em:

[0061] (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2003 da SEQ ID NO: 43;

[0062] (2) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2001 da SEQ ID NO: 45;

[0063] (3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2008 da SEQ ID NO: 47;

[0064] (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 49 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1996 da SEQ ID NO: 49;

[0065] (5) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 51; e

[0066] (6) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 53.

[0067] 14. A construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das cláusulas 1-13, que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[0068] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 42 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[0069] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 44 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[0070] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[0071] (4) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 48 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[0072] (5) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 50 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50;

[0073] (6) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 52 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[0074] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[0075] 15. A construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das cláusulas 1-14, que compreende:

[0076] (1) uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID NOS: 87, 88, 89, 90, 91 e 92; ou

[0077] (2) uma variante degenerada de uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID NOS: 87, 88, 89, 90, 91 e

92.

[0078] 16. Composição farmacêutica compreendendo: (i) uma construção de antígeno de acordo com qualquer uma das cláusulas 1- e (ii) um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0079] 17. A composição farmacêutica de acordo com a cláusula 16, que é uma vacina.

[0080] 18. Um método de tratamento de câncer em um ser humano necessitado de tratamento, compreendendo administrar ao ser humano uma quantidade eficaz da composição farmacêutica de acordo com a cláusula 16 ou cláusula 17.

[0081] 19. O método de acordo com a cláusula 18, em que o câncer superexpressa um ou mais antígenos associados a tumores selecionados de MUC1, CEA ou TERT.

[0082] 20. O método de acordo com a cláusula 18, em que o câncer é câncer de pâncreas, câncer de ovário, câncer de mama, câncer gástrico, câncer de pulmão ou câncer colorretal.

[0083] 21. O método de acordo com a cláusula 18, em que o câncer é câncer de mama triplo negativo, câncer de mama positivo para receptor de estrogênio ou câncer de mama positivo para HER2.

[0084] 22. O método de acordo com a cláusula 18, compreendendo ainda administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um modulador imune.

[0085] 23. O método de acordo com a cláusula 22, em que o modulador imune é um inibidor de CTLA-4, um inibidor de IDO1, um inibidor de PD-1 ou um inibidor de PD-L1.

[0086] 24. O método de acordo com a cláusula 18, compreendendo ainda administrar ao ser humano um adjuvante.

[0087] 25. Um vetor, compreendendo uma construção de antígeno de acordo com qualquer uma das cláusulas 1-15.

[0088] 26. O vetor de acordo com a cláusula 25, que é um vetor de plasmídeo.

[0089] 27. O vetor de acordo com a cláusula 26, que compreende uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID NOs: 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 70, 71,72, 73 e 74.

[0090] 28. O vetor de acordo com a cláusula 25, que é um vetor viral.

[0091] 29. O vetor de acordo com a cláusula 28, que compreende uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOs:

58, 60, 62, 64, 66 e 68.

[0092] 30. Uso de (1) a construção de antígeno de acordo com qualquer uma das cláusulas 1-15, (2) uma composição farmacêutica de acordo com a cláusula 16 ou 17, ou (3) um vetor de acordo com qualquer uma das cláusulas 25-29 para uso como um medicamento.

[0093] 31. O uso de acordo com a cláusula 30, em que o medicamento é para o tratamento de um câncer.

[0094] 32. Uso de (1) a construção de antígeno de acordo com qualquer uma das cláusulas 1-14 ou (2) um vetor de acordo com qualquer uma das cláusulas 25-29 para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0095] FIGURA 1. O diagrama representando a organização dos vetores AdC68 transportando uma construção de antígeno triplo (ou seja, referidos como vetores AdC68Y-1424, AdC68Y-1425, AdC68Y- 1426, AdC68Y-1427, AdC68Y-1428 e AdC68Y-1429). A cadeia principal do vetor AdC68 excluído de E1 e E3 foi projetada a partir da sequência de referência do Genbank AC 000011.1. As estruturas de leitura aberta do transgene foram inseridos na região E1, entre o estimulador/promotor precoce imediato do CMV e o terminador poli À SV40. Uma sequência do operador tet foi inserida após o promotor. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO. A. DEFINIÇÕES

[0096] O termo "adjuvante" refere-se a uma substância que, quando administrada a um mamífero hospedeiro, como o humano, é capaz de melhorar, acelerar ou prolongar uma resposta imune específica ao antígeno provocada por uma vacina ou um imunogênio no hospedeiro.

[0097] O termo "agonista" refere-se a uma substância que promove (induz, causa, melhora ou aumenta) a atividade de outra molécula (como um receptor). O termo agonista abrange substâncias que se ligam a um receptor e substâncias que promovem a função do receptor sem se ligar a ele.

[0098] O termo "antagonista" ou "inibidor" refere-se a uma substância que parcial ou totalmente bloqueia, inibe ou neutraliza uma atividade biológica de outra molécula ou receptor.

[0099] O termo "antígeno" refere-se a uma substância que, quando introduzida em um mamífero hospedeiro (diretamente ou mediante expressão como em, por exemplo, vacinas de DNA), é capaz de ser reconhecida pelo sistema imune do mamífero hospedeiro, como a ligação a um anticorpo ou receptores de antígenos nas células T. Os antígenos podem ser proteínas ou fragmentos de proteínas, carboidratos, gangliosídeos, haptenos ou ácidos nucleicos. Uma substância é denominada "antigênica" quando é capaz de interagir especificamente com uma molécula de reconhecimento de antígeno do sistema imune, como anticorpo ou receptor de antígeno de célula T. O termo "antígeno associado a tumor" ou "TAA" refere-se a um antígeno que é especificamente expresso por células tumorais ou expresso com maior frequência ou densidade por células tumorais do que por células não tumorais do mesmo tipo de tecido. O TAA pode ser moléculas que normalmente não são expressas pelo hospedeiro, ou mutadas, truncadas, dobradas ou manifestações anormais de moléculas normalmente expressas pelo hospedeiro. Exemplos de TAA incluem CEA, TERT e MUC1.

[00100] O termo "coadministração" refere-se à administração de dois ou mais agentes no mesmo indivíduo como parte de um regime de tratamento. Os dois ou mais agentes podem ser englobados em uma única formulação e, assim, ser administrados simultaneamente. Alternativamente, os dois ou mais agentes podem estar em formulações físicas separadas e administradas separadamente,

sequencialmente ou simultaneamente ao indivíduo. O termo "administrado — simultaneamente" ou "administração simultânea" significa que a administração do primeiro agente e de um segundo agente se sobrepõe no tempo entre si, enquanto o termo "administrado sequencialmente" ou "administração sequencial" significa que a administração do primeiro agente e o de um segundo agente não se sobrepõem no tempo entre si.

[00101] O termo "citosólico" ou "citoplasmático" significa que após uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo específico ser expressa por uma célula hospedeira, espera-se que o polipeptídeo expresso seja retido dentro da célula hospedeira.

[00102] O termo "variantes degeneradas" refere-se a sequências de ácidos nucleicos que possuem substituições de bases, mas que codificam a mesma sequência de polipeptídeo ou aminoácido.

[00103] O termo "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade administrada a um mamífero que é suficiente para causar o efeito desejado no mamífero.

[00104] O termo "variante funcional" de um sequenciador de aminoácidos ou um polipeptídeo imunogênico de TAA (coletivamente "polipeptídeo de referência") refere-se a uma sequência de aminoácidos ou um polipeptídeo que compreende de 90 % a 100 % do número de aminoácidos do polipeptídeo de referência, possui identidade inferior a 100 % mas superior a 95 % à sequência de aminoácidos do polipeptídeo de referência e possui as mesmas propriedades imunogênicas iguais ou similares do polipeptídeo de referência.

[00105] O termo "idêntico" refere-se a dois ou mais ácidos nucleicos, ou dois ou mais polipeptídeos, que compartilham a mesma sequência exata de nucleotídeos ou aminoácidos, respectivamente. O termo "porcentagem de identidade" descreve o nível de similaridade entre dois ou mais ácidos nucleicos ou polipeptídeos. Quando duas sequências são alinhadas pelo software de bioinformática, a "porcentagem de identidade" é calculada multiplicando o número exato de correspondências nucleotídicas/aminoácidos entre as sequências por 100 e dividindo pelo comprimento da região alinhada, incluindo lacunas. Por exemplo, dois polipeptídeos de 100 aminoácidos de comprimento que exibem 10 não pareamentos quando alinhados seriam 90 % idênticos.

[00106] O termo "realçador de células imunoefetoras" ou "realçador de IEC" refere-se a uma substância capaz de aumentar e/ou realçar o número, a qualidade e/ou a função de um ou mais tipos de células efetoras imunes de um mamífero. Exemplos de células efetoras imunes incluem células Dendríticas citolíticas, células T CD8, células T CDA, células NK e células B.

[00107] O termo "modulador imune" refere-se a uma substância capaz de alterar (por exemplo, inibir, diminuir, aumentar, realçar ou estimular) o funcionamento ou a função de qualquer componente do sistema imune inato, humoral ou celular de um mamífero. Assim, o termo "modulador imune" abrange o "ativador de células imunoefetoras", conforme definido aqui e o "inibidor de células imunossupressoras", conforme definido aqui, bem como a substância que afeta quaisquer outros componentes do sistema imune de um mamífero.

[00108] O termo "resposta imune" refere-se a qualquer resposta detectável a uma substância específica (como um antígeno ou imunogênio) pelo sistema imune adaptativro de um mamífero hospedeiro, incluindo respostas imunes mediadas por células (por exemplo, respostas mediadas por células T, como células T específicas de antígeno e células não específicas do sistema imune) e respostas imunes humorais (por exemplo, respostas mediadas por células B, como geração e secreção de anticorpos no plasma, linfa e/ou fluidos teciduais). Exemplos de respostas imunes incluem uma alteração (por exemplo, aumento) na liberação de citocinas (por exemplo, citocinas do tipo Th1, Th2 ou Th17) ou quimiocina, ativação de macrófagos, ativação de células dendríticas, ativação de células T (por exemplo, célula T CD4+ ou CD8+), indução da resposta de células B (por exemplo, produção de anticorpos), indução de uma resposta de linfócitos T citotóxicos ("CTL") e expansão (por exemplo, crescimento de uma população de células) de células do sistema imune (por exemplo, células T e B células).

[00109] O termo "imunogênico" ou "imunogenicidade" refere-se à capacidade de uma substância, após a administração a um mamífero hospedeiro (como um humano), causar, provocar, estimular ou induzir uma resposta imune, ou melhorar, realçar, aumentar ou prolongar uma resposta imune preexistente, no mamífero hospedeiro, sozinho ou quando ligado a um veículo, na presença ou na ausência de um adjuvante. Essa substância é conhecida como "imunogênio".

[00110] O termo "composição imunogênica" refere-se a uma composição que é imunogênica.

[00111] O termo "polipeptídeo de MUC1 imunogênico" refere-se a um polipeptídeo imunogênico contra uma proteína MUC1 nativa humana ou contra células que expressam a proteína MUC1 nativa humana. O polipeptídeo pode ter a mesma sequência de aminoácidos que a de uma proteína MUC1 nativa humana ou exibir uma ou mais mutações em comparação com a sequência de aminoácidos de uma proteína MUC1 nativa humana.

[00112] Otermo "polipeptídeo de CEA imunogênico" refere-se a um polipeptídeo imunogênico contra uma proteína CEA nativa humana ou contra células que expressam uma proteína CEA nativa humana e exibe uma ou mais mutações, como a exclusão de um ou mais aminoácidos, em comparação com a sequência de aminoácidos da proteína CEA nativa humana.

[00113] O termo "polipeptídeo de TERT imunogênico" refere-se a um polipeptídeo imunogênico contra uma proteína TERT nativa humana ou contra células que expressam uma proteína TERT nativa humana. O polipeptídeo pode ter a mesma sequência de aminoácidos que a de uma proteína TERT nativa humana ou exibe uma ou mais mutações em comparação com a sequência de aminoácidos de uma proteína TERT nativa humana.

[00114] O termo "polipeptídeo imunogênico de TAA" refere-se a um polipeptídeo de CEA imunogênico, um polipeptideco de MUC1 imunogênico ou um "polipeptídeo imunogênico de TERT", cada um como definido aqui acima.

[00115] O termo "inibidor de células imunossupressoras" ou "inibidor de ISC" refere-se a uma substância capaz de reduzir e/ou suprimir o número e/ou a função das células imunossupressoras de um mamífero. Exemplos de células imunossupressoras incluem células T reguladoras ("Tregs"), células supressoras derivadas de mieloides e macrófagos associados a tumores.

[00116] O termo "mamífero" refere-se a qualquer espécie animal da classe Mammalia. Exemplos de mamíferos incluem: humanos; primatas não humanos, como macacos; animais de laboratório como ratos, camundongos, porquinhos da índia; animais domésticos como gatos, cães, coelhos, gado, ovelhas, cabras, cavalos e porcos; e animais selvagens em cativeiro, como leões, tigres, elefantes e similares.

[00117] O termo "ligado à membrana" significa que, após uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo específico é expressa por uma célula hospedeira, o polipeptídeo expresso é ligado à membrana da célula, ligada a ela ou ligada a ela.

[00118] O termo "distúrbio neoplásico" refere-se a uma condição na qual as células proliferam a uma taxa anormalmente alta e descontrolada, a taxa excedente e descoordenada com a dos tecidos normais circundantes. Geralmente, resulta em uma lesão sólida ou nódulo conhecido como "tumor". Esse termo abrange distúrbios neoplásicos benignos e malignos. O termo "distúrbio neoplásico maligno", que é usado de forma intercambiável com o termo "câncer" na presente descrição, referese a um distúrbio neoplásico caracterizado pela capacidade das células tumorais se espalharem para outros locais do corpo (conhecido como "metástase"). O termo "distúrbio neoplásico benigno" refere-se a um distúrbio neoplásico no qual as células tumorais não têm a capacidade de metástase.

[00119] O termo "mutação" refere-se à exclusão, adição ou substituição de resíduos de aminoácidos na sequência de aminoácidos de uma proteína ou polipeptídeo, em comparação com a sequência de aminoácidos de uma proteína ou polipeptídeo de referência.

[00120] O termo "composição farmacêutica" refere-se a uma composição sólida ou líquida adequada para administração a um indivíduo (por exemplo, um paciente humano) para provocar um efeito fisiológico, farmacológico ou terapêutico desejado. Além de conter um ou mais ingredientes ativos, uma composição farmacêutica pode conter um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[00121] O termo "excipiente farmaceuticamente aceitável" refere-se a uma substância na composição farmacêutica, como uma vacina, que não os ingredientes ativos (por exemplo, antígeno, ácido nucleico codificador de antígeno, modulador imune ou adjuvante) que seja compatível com os ingredientes ativos e não cause efeito indesejável significativo em indivíduos a quem é administrado.

[00122] O termo "excipienter, usado no contexto de uma composição farmacêutica, refere-se a uma substância que geralmente não possui propriedades medicinais e está incluída na composição com a finalidade de racionalizar a fabricação do fármaco e/ou facilitar a estabilização, liberação e absorção da substância ativa. O termo "excipiente farmaceuticamente aceitável" refere-se a um excipiente em uma composição farmacêutica, como uma composição de vacina, que é compatível com os ingredientes ativos (por exemplo, antígeno ou imunogênio, ácido nucleico codificador de antígeno, modulador imune ou adjuvante) na composição e não causa efeitos indesejáveis significativos nos indivíduos a quem é administrada.

[00123] Os termos "peptídeo", "polipeptídeo" e "proteína" são usados aqui de forma intercambiável e referem-se a uma forma polimérica de aminoácidos ligados entre si por ligações peptídicas. Eles podem ter qualquer comprimento e podem incluir aminoácidos codifcados e não codificados, aminoácidos quimicamente, bioquimicamente modificados ou derivados.

[00124] O termo "prevenção" ou "prevenir" refere-se a (a) impedir que um distúrbio ocorra, (b) retardar o início de um distúrbio ou o aparecimento de sintomas de um distúrbio ou (c) minimizar a incidência ou os efeitos de um distúrbio.

[00125] O termo "segretado" no contexto de um polipeptídeo significa que após uma sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo é expressa por uma célula hospedeira, o polipeptídeo expresso é secretado fora da célula hospedeira.

[00126] O termo "dose subideal" quando usado para descrever a quantidade de um modulador imune, como um inibidor de proteína cinase, refere-se a uma dose do modulador imune que está abaixo da quantidade mínima necessária para produzir o efeito terapêutico desejado para a doença que está sendo tratada quando o modulador imune é administrado sozinho a um paciente.

[00127] O termo "tratando", "tratamento" ou "tratar" refere-se a revogar um distúrbio, reduzir a gravidade de um distúrbio ou reduzir a gravidade ou a frequência de ocorrência de um sintoma de um distúrbio.

[00128] O termo "vacina" refere-se a uma composição imunogênica para administração a um mamífero (como um humano) para provocar uma resposta imune protetora contra um antígeno ou antígenos específicos. O principal ingrediente ativo de uma vacina é o imunogênio (s) Uma vacina que compreende um polipeptídeo imunogênico como imunógeno também é chamada de "vacina peptídica". Uma vacina que não contém um polipeptídeo imunogênico, mas contém uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo imunogênico, é denominada "vacina de DNA" ou "vacina de RNA" (dependendo do caso). Após a liberação da vacina de DNA ou RNA nas células hospedeiras, o polipeptídeo imunogênico codificado pela molécula de ácido nucleico será expresso pelas células hospedeiras, produzindo uma resposta imune protetora. A molécula de ácido nucleico em uma vacina de DNA ou RNA pode estar na forma de vetor de ácido nucleico, plasmídeo ou vírus nu, ou qualquer outra forma adequada para administrar o ácido nucleico.

[00129] O termo "vetor" refere-se a uma molécula de ácido nucleico, ou um microorganismo modificado, capaz de transportar ou transferir uma molécula de ácido nucleico estranha para uma célula hospedeira. A molécula de ácido nucleico estranha é referida como "inserção" ou "transgene". Um vetor geralmente consiste em uma inserção e uma sequência maior que serve como cadeia principal do vetor. Com base na estrutura ou origem dos vetores, os principais tipos de vetores incluem vetores plasmídicos, vetores cosmídeos, vetores de fagos (como fago lambda), vetores virais (como vetores de adenovírus), cromossomas artificiais e vetores bacterianos. B. POLIPEPTÍDEOS DE TAA IMUNOGÊNICOS

[00130] Em alguns aspectos, a presente descrição fornece polipeptídeos de TAA imunogênicos isolados, que são úteis, por exemplo, para obter uma resposta imune in vivo (por exemplo, em um animal, incluindo humanos) ou in vitro, ativando células T efetoras ou gerando anticorpos específicos para o TAA ou para uso como componente em uma composição farmacêutica, incluindo uma vacina, para o tratamento de um câncer, como pancreático, câncer de pulmão, câncer colorretal, câncer gástrico ou câncer de mama.

[00131] Estes polipeptídeos de TAA imunogênicos podem ser preparados por métodos conhecidos na técnica à luz da presente descrição. A capacidade dos polipeptídeos de provocar uma resposta imune pode ser medida em ensaios in vitro ou ensaios in vivo. Os ensaios in vitro para determinar a capacidade de um polipeptídeo ou construção de DNA para induzir respostas imunes são conhecidos na técnica. Um exemplo de tais ensaios in vitro é medir a capacidade do polipeptídeo ou ácido nucleico que expressa um polipeptídeo para estimular a resposta das células T, conforme descrito na Patente US

7.387.882, cuja descrição é incorporada neste pedido. O método de ensaiocompreende as etapas de: (1) entrar em contato com células apresentadoras de antígeno em cultura com um antígeno, desse modo, o antígeno pode ser absorvido e processado pelas células apresentadoras de antígeno, produzindo um ou mais antígenos processados; (2) contatar as células apresentadoras de antígeno com células T em condições suficientes para as células T responderem a um ou mais dos antígenos processados; (3) determinar se as células T respondem a um ou mais dos antígenos processados. As células T utilizadas podem ser células T CD8+ ou células T CD4+. A resposta das células T pode ser determinada medindo a liberação de uma ou mais citocinas, como interferon-gama e interleucina-2, e a lise das células apresentadoras de antígeno (células tumorais). A resposta das células B pode ser determinada medindo a produção de anticorpos. B-1. Polipeptídeos de MUC1 imunogênicos

[00132] Emum aspecto, a presente descrição fornece polipeptídeos de MUC1 imunogênicos derivados de um MUC1 nativo humano, introduzindo uma ou mais mutações na proteína MUC1 nativa humana. Exemplos de mutações incluem a exclusão de algumas, mas não todas, as repetições em tandem de 20 aminoácidos na região VNTR da proteína MUC1, a exclusão da sequência peptídica de sinal no todo ou em parte e a exclusão de aminoácidos de sequências de aminoácidos sem consenso encontradas nas isoformas MUC1. Assim, em algumas modalidades, os polipeptídeos imunogênicos de MUC1 compreendem (1) a sequência de aminoácidos de 3 a 30 repetições em tandem de 20 aminoácidos de uma proteína MUC1 humana e (2) as sequências de aminoácidos da proteina MUC1 humana que flanqueiam a região VNTR. Em algumas modalidades particulares, os polipeptídeos imunogênicos da MUC1 compreendem (1) a sequência de aminoácidos de 5 a 25 repetições em tandem da MUC1 humana e (2) as sequências de aminoácidos da proteína MUC1 humana que flanqueiam a região VNTR. Em algumas modalidades, os polipeptídeos de MUC1 imunogênicos consistem em (1) a sequência de aminoácidos de 3 a 30 repetições em tandem de 20 aminoácidos de uma proteína MUC1 humana e (2) nas sequências de aminoácidos da proteina MUC1 humana que flanqueiam a região VNTR. Em algumas modalidades particulares, os polipeptídeos imunogênicos da MUC1 consistem em (1) a sequência de aminoácidos de 5 a 25 repetições em tandem da MUC1 humana e (2) nas sequências de aminoácidos da proteína MUC1 humana que flanqueiam a região VNTR. Em algumas modalidades adicionais, os polipeptídeos imunogênicos da MUC1 estão na forma citoplasmática (ou "c-MUC1"). O termo "forma citoplasmática" refere-se a um polipeptídeo de MUC1 imunogênico que carece total ou parcialmente da sequência secretora (aminoácidos 1-23; também conhecida como "sequência peptídica de sinal") da proteína MUC1 nativa humana. Espera-se que a deleção de aminoácidos da sequência secretora impeça que o polipeptídeo entre na via secretora, uma vez que é expresso nas células. Em algumas outras modalidades, os polipeptídeos de MUC1 imunogênicos estão na forma ligada à membrana. Os polipeptídeos imunogênicos de MUC1 podem ser derivados, construídos ou preparados a partir da sequência de aminoácidos de qualquer uma das isoformas de MUC1 humanas conhecidas na técnica ou descobertas no futuro, incluindo, por exemplo, isoformas Uniprot1, 2, 3, 4, 5, 6, Y, 8, 9, F, Y-LSP, S2, M6, ZD, T10, E2 e J13 (Uniprot P1I5941-1 a P15941-17, respectivamente)... Em algumas modalidades, os polipeptídeos imunogênicos de MUC1 compreendem uma sequência de aminoácidos que faz parte da isoforma 1 de MUC1 humana, em que a sequência de aminoácidos da isoforma 1 de MUC1 humana é apresentada na SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades, os polipeptídeos de imunoglobulina MUC1 consistem em uma sequência de aminoácidos que faz parte da isoforma MUC1 humana 1, em que a sequência de aminoácidos da isoforma MUC1 humana 1 é apresentada na SEQ ID NO: 1. Em uma modalidade específica, o polipeptídeo de MUC1 imunogênico compreende os aminoácidos 22- 225 e 946-1255 da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um polipeptídeo de MUC1 imunogênico selecionado de:

[00133] (1) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 (Polipeptídeo de plasmídeo 1027);

[00134] (2) um polipeptíideo compreendendo ou consistindo nos aminoácidos 4-537 da SEQ ID NO: 5;

[00135] (3) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo nos aminoácidos 24-537 da SEQ ID NO: 5;

[00136] (4) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 (Polipeptídeo de plasmídeo 1197);

[00137] (5) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo nos aminoácidos 4-517 da SEQ ID NO: 7;

[00138] (6) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo nos aminoácidos 4-517 da SEQ ID NO: 7, em que na SEQ ID NO: 7 o aminoácido na posição 513 é T; e

[00139] (7) uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (6) acima.

[00140] Em algumas modalidades específicas, os polipeptídeos imunogênicos de MUC1 compreendem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 (polipeptídeo de plasmídeo 1027) ou SEQ ID NO: 7 (polipeptíideo de plasmídeo 1197) Em algumas modalidades específicas, os polipeptídeos imunogênicos da MUC1 consistem na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 (polipeptídeo de plasmídeo 1027) ou SEQ ID NO: 7 (polipeptídeo de plasmídeo 1197).

[00141] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos. B-2. Polipeptídeos de TERT imunogênicos

[00142] Em outro aspecto, a presente descrição fornece polipeptídeos de TERT imunogênicos derivados de uma proteína TERT humana por exclusão de até 600 dos aminoácidos N-terminais da proteína TERT. Assim, o polipeptídeo de TERT animunogênico pode compreender a sequência de aminoácidos de C-terminal a partir da posição 601 de qualquer isoforma da proteína TERT humana. Em algumas modalidades, os polipeptídeos de TERT imunogênicos compreendem a sequência de aminoácidos da isoforma TERT 1 apresentada na SEQ ID NO: 3, em que até cerca de 600 aminoácidos do N-terminal (terminal amino) da sequência de aminoácidos da isoforma TERT 1 estão ausentes. Qualquer número de aminoácidos até 600 do N-terminal da isoforma TERT 1 pode estar ausente no polipeptídeo de TERT imunogênico. Por exemplo, os aminoácidos do N-terminal da posição 1 à posição 50, 100, 50, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550 ou 600 da isoforma TERT 1 da SEQ ID NO: 3 podem estar ausente do polipeptídeo de TERT imunogênico. Assim, um polipeptídeo de TERT imunogênico pode compreender os aminoácidos 51-1132, 101-1132, 151-1132, 201-1132, 251-1132, 301- 1132, 3551-1132, 401-1132, 451-1132, 501-1132, ou 551-1132 da SEQ ID NO: 3. Em uma modalidade, o polipeptídeo de TERT imunogênico compreende os aminoácidos 601-1132 da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. Em outra modalidade, a presente descrição fornece um polipeptideco de TERT imunogênico que compreende os aminoácidos 241-1132 da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

3.

[00143] Um polipeptídeo de TERT imunogênico pode consistir nos aminoácidos 51-1132, 101-1132, 151-1132, 201-1132, 251-1132, 301- 1132, 351-1132, 401-1132, 451-1132, 501-1132 ou 551-1132 da SEQ ID NO: 3. Em uma modalidade, o polipeptídeo de TERT imunogênico consiste nos aminoácidos 601-1132 da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. Em outra modalidade, a presente descrição fornece um polipeptídeo de TERT imunogênico que consiste nos aminoácidos 241-1132 da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

[00144] Os polipeptídeos de TERT imunogênicos também podem ser construídos a partir de outras isoformas TERT. Quando os polipeptídeos de TERT imunogênicos são construídos a partir de isoformas TERT com truncamentos C-terminais, como isoforma 2, 3 ou

4, é preferível que menos aminoácidos sejam excluídos do N-terminal da proteína.

[00145] Em algumas modalidades adicionais, o polipeptídeo de TERT imunogênico compreende ainda uma ou mais mutações de aminoácidos que inativam o domínio catalítico de TERT.

[00146] Exemplos de tais mutações de aminoácidos incluem a substituição de ácido aspártico por alanina na posição 712 da SEQ ID NO: 3 (D712A) e a substituição de valina por isoleucina na posição 713 da SEQ ID NO: 3 (V713l)). Em algumas modalidades, o polipeptídeo de TERT imunogênico compreende ambas as mutações D712A e V713l. Em uma modalidade, as referidas mutações incluem uma substituição do ácido aspártico na posição 712 da SEQ ID NO: 3 e/ou substituição de valina na posição 713 da SEQ ID NO: 3 (V713]) em que a referida mutação (s) inativa o domínio catalítico de TERT. Em outra modalidade, a referida mutação consiste em uma substituição de ácido aspártico na posição 712 da SEQ ID NO: 3 e/ou substituição de valina na posição 713 da SEQ ID NO: 3 (V713I)) em que as referidas mutação (ões) inativa(m) o domínio catalítico de TERT. Em ainda outra modalidade, a referida mutação consiste em uma substituição de ácido aspártico por alanina na posição 712 da SEQ ID NO: 3 (D712A) e/ou uma substituição de valina por isoleucina na posição 713 da SEQ ID NO: 3 (V713]).

[00147] Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece um polipeptídeo de TERT imunogênico selecionado a partir de:

[00148] (1) um polipeptídeo que compreende ou consiste na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 (plasmídeo 1112 polipeptídeo) ou nos aminoácidos 2-893 da SEQ ID NO: 9;

[00149] (2) um polipeptídeo que compreende ou consiste na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 (plasmídeo 1326 polipeptídeo) ou nos aminoácidos 3-791 da SEQ ID NO: 11;

[00150] (3) um polipeptídeo que compreende ou consiste na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 (polipeptídeo de plasmídeo 1330) ou nos aminoácidos 4-594 da SEQ ID NO: 13; ou

[00151] (4) um polipeptídeo que é uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (3) acima.

[00152] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos. B-3 Polipeptídeos de CEA imunogênicos

[00153] Em outro aspecto, a presente descrição fornece polipeptídeos de CEA imunogênicos isolados derivados de um CEA nativo humano através da introdução de uma ou mais mutações na proteína precursora de CEA nativa humana. Exemplos das mutações introduzidas incluem a exclusão de um, dois, três, quatro ou cinco dos domínios do tipo C2, a exclusão da sequência do peptídeo de sinal no todo ou em parte, e a exclusão de alguns ou de todos os aminoácidos do propeptídeo. Assim, em algumas modalidades, os polipeptídeos de CEA imunogênicos fornecidos pela presente descrição compreendem (1) a sequência de aminoácidos do domínio N e (2) a sequência de aminoácidos de 1 a 5 domínios do tipo C2 de uma proteína CEA humana. Em algumas modalidades particulares, os polipeptídeos de CEA imunogênicos compreendem (1) a sequência de aminoácidos de pelo menos quatro domínios do tipo C2, como A2, B2, A3 e B3, e (2) a sequência de aminoácidos do domínio N. Em algumas modalidades adicionais, os polipeptídeos de CEA imunogênicos estão na forma citoplasmática (ou "cCEA"). O termo "forma citoplasmática" refere-se a um polipeptídeo de CEA imunogênico que carece total ou parcialmente da sequência peptídica de sinal (aminoácidos 1-34) da proteína precursora CEA nativa humana. Espera-se que a deleção de aminoácidos do peptídeo de sinal impeça o polipeptídeo de entrar na via secretora, como é expresso nas células. Em algumas outras modalidades, os polipeptídeos de CEA imunogênicos estão na forma ligada à membrana (ou "MCEA"). Um polipeptídeo de mCEA imunogênico inclui aminoácidos do peptídeo de sinal e, depois de expresso por uma célula hospedeira, permanece ligado à membrana da célula hospedeira ou associado a ela de outra forma.

[00154] Os polipeptíideos de CEA imunogênicos fornecidos pela presente descrição podem ser derivados, construídos ou preparados a partir da sequência de aminoácidos de qualquer uma das isoformas de CEA humanas conhecidas na técnica ou descobertas no futuro. Em algumas modalidades, os polipeptídecos de CEA imunogênicos compreendem uma sequência de aminoácidos que faz parte da proteína precursora da isoforma 1 de CEA humana com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

[00155] Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece qualquer um dos seguintes polipeptíidecos de CEA imunogênicos:

[00156] (1) um polipeptídeo compreendendo os aminoácidos 2-702 da SEQ ID NO: 2, aminoácidos 323-702 da SEQ ID NO: 2 ou aminoácidos 323-677 da SEQ ID NO: 2;

[00157] (2) um polipeptídeo consistindo nos aminoácidos 2-702 da SEQ ID NO: 2, aminoácidos 323-702 da SEQ ID NO: 2 ou aminoácidos 323-677 da SEQ ID NO: 2;

[00158] (3) um polipeptídeo compreendendo os aminoácidos da SEQ ID NO: 15 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1361) ou os aminoácidos 4-704 da SEQ ID NO: 15;

[00159] (4) um polipeptídeo que consiste nos aminoácidos da SEQ ID NO: 15 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1361) ou nos aminoácidos 4-704 da SEQ ID NO: 15;

[00160] (5) um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1386) ou os aminoácidos 4-526 da SEQ ID NO: 17;

[00161] (6) um polipeptídeo que consiste na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1386) ou nos aminoácidos 4-526 da SEQ ID NO: 17;

[00162] (7) um polipeptídeo compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 19 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1390) ou os aminoácidos 4-468 da SEQ ID NO: 19;

[00163] (8) um polipeptídeo que consiste na sequência da SEQ ID NO: 19 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1390) ou nos aminoácidos 4-468 da SEQ ID NO: 19; ou

[00164] (9) um polipeptídeo que é uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (8) acima.

[00165] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos. C. CONSTRUÇÕES DE ANTÍGENOS QUE CODIFICAM UM OU MAIS

POLIPEPTÍDEOS DE TAA IMUNOGÊNICOS

[00166] Em alguns aspectos, a presente descrição fornece uma molécula de ácido nucléico isolada que codifica um, dois, três ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos separados. Essa molécula de ácido nucleico também é referida como "construção de antígeno" na presente descrição. Uma molécula de ácido nucleico que codifica apenas um polipeptídeo de TAA imunogênico também é aqui referida como uma "construção de antígeno único" e uma molécula de ácido nucleico que codifica mais de um polipeptídeo de TAA imunogênico também é referida como "construção de múltiplos antígenos". Uma molécula de ácido nucleico que codifica dois polipeptídeos de TAA imunogênicos diferentes também é referida como "construção de antígeno duplo" e uma molécula de ácido nucleico que codifica três polipeptídeos de TAA imunogênicos diferentes também é chamada de "construção de antígeno triplo". As moléculas de ácido podem ser ácidos desoxirribonucleicos (DNA) ou ácidos ribonucleicos (RNA). Assim, uma molécula de ácido nucleico pode compreender uma sequência de nucleotídeos aqui descrita, em que a timidina (T) também pode ser uracila (U), o que reflete as diferenças entre as estruturas químicas do DNA e do RNA. Em referência a uma sequência de nucleotídeo de um RNA que corresponde a uma sequência de nucleotídeo de um DNA na presente descrição, o termo "corresponde" ou "correspondente" refere-se a uma sequência de nucleotídeo do RNA que é idêntica à sequência de nucleotídeo de referência da DNA, exceto que a timidina (T) na sequência de nucleotídeos do DNA é substituída por uracila (U) na sequência de nucleotídeos do RNA. As moléculas de ácido nucleico podem estar em formas modificadas, formas de fita simples ou dupla ou formas lineares ou circulares.

[00167] As construções de antígeno, incluindo construções de DNA e RNA, podem ser preparadas usando métodos conhecidos na técnica à luz da presente descrição. O método para preparar construções de antígeno único e construções de antígeno é ainda descrito aqui abaixo. Além disso, está bem estabelecido que a injeção de MRNA nas células hospedeiras leva à expressão de proteínas codificadas e respostas imunes. O mRNA transcrito in vitro pode ser produzido de forma estável e a proteína codificada pode ser transladada eficientemente através do uso de vários elementos/sistemas conhecidos na técnica (como UTR's, PoIyA, sistema de capeamento e otimização de códons) Além disso, a fusão de sinais de direcionamento lisossômicos ou endossômicos com polipeptídeos codificados por MRNA pode melhorar as respostas imunes das células

T. O mMRNA pode ser liberado não formulado ou por meio de EP ou formulado em lipídeos ou outros veículos. C-1. Construções de antígeno único de CEA

[00168] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece construções de antígeno que codificam qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima.

[00169] Em algumas modalidades específicas, a construção de antígeno codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico selecionado a partir de:

[00170] (1) um polipeptídeo compreendendo os aminoácidos 2-702 da SEQ ID NO: 2, aminoácidos 323-702 da SEQ ID NO: 2 ou aminoácidos 323-677 da SEQ ID NO: 2;

[00171] (2) um polipeptídeo compreendendo os aminoácidos da SEQ ID NO: 15 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1361) ou os aminoácidos 4-704 da SEQ ID NO: 15;

[00172] (3) um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1386) ou os aminoácidos 4-526 da SEQ ID NO: 17;

[00173] (4) um polipeptídeo compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 19 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1390) ou os aminoácidos 4-468 da SEQ ID NO: 19; ou

[00174] (5) um polipeptíideo que é uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (4) acima.

[00175] Em algumas modalidades específicas, a construção de antígeno codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico selecionado a partir de:

[00176] (1) um polipeptídeo consistindo nos aminoácidos 2-702 da SEQ ID NO: 2, aminoácidos 323-7/02 da SEQ ID NO: 2 ou aminoácidos 323-677 da SEQ ID NO: 2;

[00177] (2) um polipeptídeo que consiste nos aminoácidos da SEQ

ID NO: 15 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1361) ou nos aminoácidos 4-704 da SEQ ID NO: 15;

[00178] (3) um polipeptídeo que consiste na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1386) ou nos aminoácidos 4-526 da SEQ ID NO: 17;

[00179] (4) um polipeptídeo que consiste na sequência da SEQ ID NO: 19 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1390) ou nos aminoácidos 4-468 da SEQ ID NO: 19; ou

[00180] (5) um polipeptídeo que é uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (4) acima.

[00181] Em algumas modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que é um DNA e compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00182] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 14 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1361) ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10 - 2112 da SEQ ID NO: 14;

[00183] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 16 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1386) ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-1578 da SEQ ID NO: 16;

[00184] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 18 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1390) ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-1404 da SEQ ID NO: 18; e

[00185] (4) uma sequência de nucleotídeo que é uma variante degenerada das sequências nucleotídicas de (1) - (3).

[00186] Em algumas outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que é um DNA e consiste em uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00187] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 14 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1361) ou uma sequência de nucleotídeo que consiste nos nucleotídeos 10 - 2112 da SEQ ID NO: 14;

[00188] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 16 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1386) ou uma sequência de nucleotídeo que consiste nos nucleotídeos 10 - 1578 da SEQ ID NO: 16;

[00189] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 18 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1390) ou uma sequência de nucleotídeo que consiste nos nucleotídeos 10-1404 da SEQ ID NO: 18 e

[00190] (4) uma sequência de nucleotídeo que é uma variante degenerada das sequências nucleotídicas de (1) - (3). Em algumas outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que é um RNA e compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00191] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 14 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1361) ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10 - 2112 da SEQ ID NO: 14;

[00192] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 16 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1386) ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10 - 1578 da SEQ ID NO: 16;

[00193] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 18 (estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1390) ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-1404 da SEQ ID NO: 18; e

[00194] (4) uma sequência de nucleotídeo que é uma variante degenerada das sequências nucleotídicas de (1) - (3). C-2. Construções de múltiplos antígenos

[00195] Em outro aspecto, a presente descrição fornece construções de antígeno que codificam dois, trêê ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos diferentes.

[00196] Métodos e técnicas para construção de vetores para coexpressão de dois ou mais polipeptídeos a partir de um único ácido nucleico — (também — conhecido na técnica como "vetores multicistrônicos"”) são conhecidos na técnica. As construções de múltiplos antígenos fornecidas pela presente descrição podem ser preparadas usando essas técnicas à luz da descrição.

[00197] Por exemplo, uma construção de múltiplos antígenos pode ser construída incorporando várias promo independentespromoo múltiplo independente de um único plasmídeo (Huang, Y., Z. Chen, et al. (2008). "Design, construction, and characterization of a dual- promoter multigenic DNA vaccine directed against an HIV-1 subtype C/B' recombinant." J Acquir Immune DeficSyndr 47(4): 403-411; Xu, K., Z. Y. Ling, et al. (2011). "Broad humoral and cellular immunity elicited by a bivalent DNA vaccine encoding HA and NP genes from an HSN1 virus." Viral Immunol 24(1): 45-56). O plasmídeo pode ser construído para transportar múltiplos cassetes de expressão, cada uma consistindo em a) um promotor eucariótico para iniciar a transcrição dependente de RNA polimerase, com ou sem um elemento realçador, b) um gene que codifica um antígeno alvo ec) uma sequência terminadora de transcrição. Após liberação do plasmídeo ao núcleo celular transfectado, a transcrição será iniciada a partir de cada promotor, resultando na produção de mMRNAs separados, cada um codificando um dos antígenos alvo. Os mRNAs serão traduzidos independentemente, produzindo assim os antígenos desejados.

[00198] As construções de antígenos múltiplos fornecidas pela presente descrição também podem ser construídas através do uso de peptídeos virais 2A (Szymczak, AL e DA Vignali (2005). "Development of 2A peptide-based strategies in the design of multicistronic vectors." Expert OpinBiolTher 5(5): 627-638; de Felipe, P., G. A. Luke, et al. (2006). "E unum pluribus: multiple proteins from a self-processing polyprotein." Trends Biotechnol 24(2): 68-75; Luke, G. A., P. de Felipe, et al. (2008)."Occurrence, function and evolutionary origins of '2A-like' sequences in virus genomes."J GenVirol 89(Pt 4): 1036-1042; Ibrahimi, A., G. Vande Velde, et al. (2009). "Highly efficient multicistronic lentiviral vectors with peptide 2A sequences." Hum Gene Ther 20(8): 845-860; Kim, J. H., S. R. Lee, et al. (2011). "High cleavage efficiency of a 2A peptide derived from porcine teschovirus-1 in human cell lines, zebrafish and mice." PLoS One 6(4): e18556). Esses peptídeos, também chamados cassetes de clivagem ou CHYSELs (elementos da hidrolase de ação cis), têm aproximadamente 20 aminoácidos de comprimento, com um motivo D-V/I-EXNPGP carboxi altamente conservado. Esses peptídeos são raros por natureza, mais comumente encontrados em vírus como o vírus da doença pé-boca (FMDV), vírus da rinite A equina (ERAV), vírus da rinite B equina (ERBV), vírus da encefalomiocardite (EMCV), teschovírus porcino (PTV) e Thoseaasigna virus (TAV) (Luke, GA, P. de Felipe, et al. (2008). "Occurrence, function and evolutionary origins of '2A-like' sequences in virus genomes." J Gen Virol 89(Pt 4): 1036-1042). Uma sequência de aminoácidos de alguns desses peptídeos é fornecida na Tabela 17. Com uma estratégia de expressão de antígeno baseada em 2A, os genes que codificam múltiplos antígenos alvo são ligados juntos em uma única estrutura de leitura aberta (ORF), separada por sequências que codificam peptídeos 2A virais. Toda a estrutura de leitura aberta pode ser clonada em um vetor com um único promotor e terminador. Após a liberação das construções a uma célula hospedeira, o mMRNA que codifica os múltiplos antígenos será transcrito e transladado como uma única poliproteína. Durante a translação dos peptídeos 2A, os ribossomas pulam a ligação entre a glicina C-terminal e a prolina. O salto ribossômico atua como uma "clivagem" autocatalítica cotranslacional que libera as sequências peptídicas a montante do peptídeo 2A a partir da corrente descendente. A incorporação de um peptídeo 2A entre dois antígenos protéicos pode resultar na adição de — 20 aminoácidos no C-terminal do polipeptídeo a montante e 1 aminoácido (prolina) no N-terminal da proteína a jusante. Em uma adaptação dessa metodologia, os sítios de clivagem de protease podem ser incorporados no N-terminal do cassete 2A, de modo que as proteases ubíquas separem a cassete da proteína a montante (Fang, J., S. Yi, et al. (2007). "An antibody delivery system for regulated expression of therapeutic levels of monoclonal antibodies in vivo."MolTher 15(6): 1153-1159). Exemplos de sequências específicas de peptídeos 2A que podem ser usados na construção de construções de antígenos múltiplos da a presente descrição inclui aquelas que são descritas em Andrea L. Szymczak e Darrio AA Vignali: Development of 2A peptide-based strategies in the design of multicistronic vectors. Expert Opinion Biol. Ther. (2005)5(5) 627-638, bem como no pedido de patente internacional WO?2015/063674, cuja descrição é aqui incorporada por referência.

[00199] Outro método que pode ser usado para construir construções de múltiplos antígenos envolve o uso de um sítio de entrada ribossômico interno, ou IRES. Sítios de entrada ribossômicos interna são elementos de RNA encontrados nas regiões não transladadas em 5' de certas moléculas de RNA (Bonnal, S., C.

Boutonnet, et al. (2003). "IRESdb: the Internal Ribosome Entry Site database." Nucleic Acids Res 31(1): 427-428). Eles atraem ribossomas eucarióticos para o RNA para facilitar a translação de estruturas de leitura abertas a jusante.

Diferentemente da translação dependente de estrutura de 7-metilguanosina celular normal, a translação mediada por IRES pode iniciar em códons de AUG dentro de uma molécula de RNA.

O processo altamente eficiente pode ser explorado para uso em vetores de expressão multicistrônicos (Bochkov, YA e AC Palmenberg (2006). "Translational efficiency of EMCV IRES in bicistronic vectors is dependent upon IRES sequence and gene location." Biotechniques 41(3): 283-284, 286, 288). Tipicamente, dois transgenes são inseridos em um vetor entre um promotor e um terminador de transcrição como duas estruturas de leitura abertas separadas por uma IRES.

Após a liberação das construções a uma célula hospedeira, será transcrita uma única transcrição longa que codifica ambos os transgenes.

A primeira ORF será transladada da maneira tradicional dependente de estrutura, terminando em um códon de parada a montante da IRES.

À segunda ORF será transladada de maneira independente da estrutura usando o IRES.

Dessa maneira, duas proteínas independentes podem ser produzidas a partir de um único mMRNA transcrito de um vetor com um cassete de expressão única.

Exemplos de sequências de IRES incluem IRES de poliovírus (PV), IRES de poliovírus (PV), vírus de encefalomiocardite (EMCV), vírus de febre aftosa (FMDV) IRES, vírus da hepatite A IRES, vírus da hepatite B IRES, herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV) IRES e vírus clássico da peste suína IRES.

Uma sequência de nucleotídeo do EMCV IRES é descrita no documento WO2013/165754 (Figura 3) e é apresentada na SEQ ID NO: 93 na presente descrição.

O elemento mínimo EMCV IRES exclui os 15 nucleotídeos da extremidade 3' (que representam os 5 primeiros códons da proteína EMCV L) da sequência de nucleotídeos da SEQ ID

NO: 93.

[00200] A sequência de nucleotídeo que é inserida entre duas sequências codificadoras ou transgenes em uma estrutura de leitura aberta (ORF) de uma molécula de ácido nucleico e funciona para permitir a coexpressão ou translação de dois produtos gênicos separados da molécula de ácido nucleico é referido como "sequência de nucleotídeo espaçadora" na presente descrição. Exemplos de sequências de nucleotídeo espaçadoras específicas que podem ser usadas nas construções de múltiplos antígenos incluem promotores eucarióticos, sequências de nucleotídeo que codificam um peptídeo 2A e sequências do sítio de entrada ribossômico interno (IRES). Exemplos de peptídeos 2A específicos incluem peptídeos 2A do vírus da paralisia aguda das abelhas (ABP2A), vírus da paralisia do críquete (CrP2A), vírus da rinite A equina (ERAZA), vírus da rinite equina B (ERB2A), vírus da encefalomiocardite (EMC2A), vírus da doença pé- boca (FMD2A ou F2A), rotavírus humano (HT2A), vírus flacherie infeccioso (IF2A), teschovírus porcino (PT2A ou P2A), rotavírus porcino (PR2A) e vírus Thoseaasigna (T2A, TA2A ou TAV2A).

[00201] Em alguns aspectos, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que compreende (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeo de codificação que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico e (ii) uma ou mais sequências de nucleotídeo que codificam um ou mais outros polipeptídeos de TAA imunogênicos, como um polipeptídeo de TERT imunogênico, um polipeptídeo de MUC1 imunogênico, um polipeptídeo de MSLN imunogênico, um polipeptíideo de PSA imunogênico, um polipeptíideco de PSMA imunogênico ou um polipeptídeo de PSCA imunogênico.

[00202] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que compreende (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeo codificadora que codifica um polipeptídeo de

CEA imunogênico e (ii) pelo menos uma sequência de nucleotídeo codificadora que codifica um polipeptídeo de TERT imune ou um polipeptídeo de MUC1 imunogênico.

A sequência de nucleotídeo que codifica o polipeptídeo de CEA imunogênico pode estar a montante ou a jusante da outra sequência de nucleotídeo de codificação.

À construção pode ainda compreender uma sequência de nucleotídeo espaçadora entre as sequências de nucleotídeo codificadoras.

A estrutura dessa construção de antígeno duplo é mostrada na fórmula (1) e na fórmula (Il): TAA-ESPAÇADOR-CEA (|) CEA-ESPAÇADOR-TAA (Il)

em que em cada uma das fórmulas (1) e (Il): (1) CEA representa uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico; (ii) TAA representa uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico; e (iii) ESPAÇADOR é uma sequência de nucleotídeo espaçadora e pode estar ausente.

Exemplos de sequências de nucleotídeos espaçadoras que podem ser incluídas nas construções de antígeno duplo incluem sequências de nucleotídeos que codificam um peptídeo do vírus da doença pé-boca 2A (FMD2A ou FMDV?A), peptídeo do vírus 2A da rinite A equina (ERAZA), peptídeo do vírus 2A da rinite equina A (ERB2A), peptídeo do vírus 2A da encefalomiocardite (EMC2A ou EMCV?2A), peptídeo do teschovirus 2A porcino (PT2A) e peptídeo do vírus 2A Thosea asigna (T2A, TA2A ou TAV2A). Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima.

Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos acima.

Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00203] Em alguns outros aspectos, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos compreendendo (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeos codificadora que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, (ii) pelo menos uma sequência de nucleotídeo codificadora que codifica uma polipeptídeo de MUC1 imunogênico e (ili) pelo menos uma sequência de nucleotídeo de codificação que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico. Em algumas — modalidades, a construção de múltiplos antígenos compreende ainda uma sequência de nucleotídeo espaçadora. A estrutura de uma construção de múltiplos antígenos é mostrada na fórmula (Ill): TAAI-ESPAÇADOR1-TAA2-ESPAÇADORZ2-TAA3 (111) em que na fórmula (III): () TAA1I, TAA2 e TAA3 representam cada uma, uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TAA imunogênico selecionado do grupo que consiste em um polipeptideo de MUC1 imunogênico, um polipeptídeo de CEA imunogênico e um polipeptídeo de TERT imune, em que TAA1I, TAA2 e TAA3 codificam diferentes polipeptídeos de TAA imunogênicos; e (ii) ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 representam cada uma uma sequência de nucleotídeo espaçadora, em que (a) ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 podem ser iguais ou diferentes e (b) um ou ambos de ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 podem estar ausentes.

[00204] Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR2 são, independentemente, uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A ou uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00205] Em algumas modalidades, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos da fórmula (Ill), em que na fórmula (III): (1) TAM é uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico; (ii) TAA2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico; e (iii) TAA3 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR2 são, independentemente, uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A ou uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00206] Em algumas outras modalidades, a presente descrição fornece uma construção de antígeno de fórmula (Ill), em que na fórmula (III): (1) TAM é uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico; (ii) TAA2 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico; e (iii) TAA3 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR2 são, independentemente, uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A ou uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00207] Em ainda outras modalidades, a presente descrição fornece uma construção de antígeno de fórmula (Ill), em que na fórmula (III): (i) TAA1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico; (ii) TAA2 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico; e (iii) TAA3 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1I e ESPAÇADOR2 são, independentemente, uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A ou uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeo que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00208] Em algumas modalidades adicionais, a presente descrição fornece uma construção de antígeno de fórmula (Ill), em que na fórmula (Ill): (1) TAM é uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico; (ii) TAA2 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico; e (iii) TAA3 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR2 são, independentemente, uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A ou uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00209] Em ainda outras modalidades, a presente descrição fornece uma construção de antígeno de fórmula (Ill), em que na fórmula (III): (i) TAA1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico; (ii) TAA2 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico; e (iii) TAA3 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1I e ESPAÇADOR2 são, independentemente, uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A ou uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00210] Em ainda outras modalidades, a presente descrição fornece uma construção de antígeno de fórmula (Ill), em que na fórmula (Ill): (i) TAA1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico; (ii) TAA2 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico; e (iii) TAA3 é uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1I e ESPAÇADOR2 são, independentemente, uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A ou uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 e ESPAÇADOR?2 são uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG. Em algumas modalidades, ESPAÇADOR1 é uma sequência de nucleotídeos que codifica GGSGG e ESPAÇADOR2 é uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de CEA imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de TERT imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00211] Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos de uma fórmula selecionada do grupo que consiste em: (1) MUC1-2A-CEA-2A-TERT (IV) (2) MUC1-2A-TERT-2A-CEA (V) (3) CEA-2A-MUC1-2A-TERT (VI) (4) CEA-2A-TERT-2A-MUC1 (VII) (5) TERT-2A-MUC1-2A-CEA (VIII) (6) TERT-2A-CEA-2A-MUC1 (IX) em que em cada uma das fórmulas (IV) - (IX): (()) MUC1, CEA e TERT representam uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptíideo de MUC1 imunogênico, um polipeptídeo de CEA imunogênico e um polipeptidio de TERT imunogênico, respectivamente; e (ii) 2A é uma sequência de nucleotídeo que codifica um peptídeo 2A. Em algumas modalidades, a construção de antígeno “codifica qualquer um dos polipeptíidcos de CEA imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de

TERT imunogênicos aqui descritos acima. Em algumas modalidades, a construção de antígeno codifica qualquer um dos polipeptídeos de MUC1 imunogênicos aqui descritos acima.

[00212] O polipeptídeo de CEA imunogênico, polipeptídeo de MUC1 imunogênico e polipeptídeo de TERT imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos, incluindo construções de antígeno duplo e construções de antígeno triplo, podem estar na forma ligada à membrana ou na forma citoplasmática. Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo imunogênico de TAA está na forma citoplasmática.

[00213] Em algumas modalidades, o polipeptideco de CEA imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos compreende (1) a sequência de aminoácidos do domínio Ne (2) a sequência de aminoácidos de 1, 2, 3, 4 ou 5 domínios do tipo C de uma proteína CEA humana. Em algumas modalidades particulares, os polipeptídeos de CEA imunogênicos compreendem (1) a sequência de aminoácidos de pelo menos quatro domínios do tipo C, como A2, B2, A3 e B3, e (2) a sequência de aminoácidos do domínio N. Em algumas modalidades adicionais, os polipeptídeos de CEA imunogênicos estão na forma citoplasmática (ou "cCCEA") ou na forma ligada à membrana (ou "MCEA'").

[00214] Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo de CEA imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de:

[00215] (1) uma sequência de aminoácidos que compreende ou consistindo em (i) aminoácidos 323-677 da SEQ ID NO: 2 ou (ii) aminoácidos 35-144 e 323-677 da SEQ ID NO: 2;

[00216] (2) uma sequência de aminoácidos que compreende ou consistindo em (i) aminoácidos 323-702 da SEQ ID NO: 2 ou (ii)

aminoácidos 2-144 e 323-702 da SEQ ID NO: 2;

[00217] (3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1386 (mCEA) ou dos aminoácidos 4-526 da SEQ ID NO: 17;

[00218] (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (sequência de aminoácidos codificada no plasmídeo 1390 (cCEA) ou nos aminoácidos 4-468 da SEQ ID NO: 19; ou

[00219] (5) uma variante funcional de qualquer uma das sequências de aminoácidos de (1) - (4) acima.

[00220] Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo de CEA imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de:

[00221] (1) uma sequência de aminoácidos que compreende ou consistindo em (i) aminoácidos 323-677 da SEQ ID NO: 2 ou (ii) aminoácidos 35-144 e 323-677 da SEQ ID NO: 2;

[00222] (2) uma sequência de aminoácidos que compreende ou consistindo em (i) aminoácidos 323-702 da SEQ ID NO: 2 ou (ii) aminoácidos 2-144 e 323-702 da SEQ ID NO: 2;

[00223] (3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17 (sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1386 (mCEA) ou dos aminoácidos 4-526 da SEQ ID NO: 17;

[00224] (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (sequência de aminoácidos codificada no plasmídeo 1390 (cCEA) ou nos aminoácidos 4-468 da SEQ ID NO: 19; ou

[00225] (5) uma variante funcional de qualquer uma das sequências de aminoácidos de (1) - (4) acima.

[00226] Em algumas modalidades particulares, a construção de múltiplos antígenos é um DNA e compreende (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 14, (2) a sequência de nucleotídeos da

SEQ ID NO: 16, (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 18 ou (4) uma variante degenerada da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 14, 16 ou 18. Em algumas outras modalidades particulares, a construção de antígenos múltiplos é um RNA e compreende uma sequência de nucleotídeo que corresponde a (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 14, (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 16, (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 18 ou (4) uma variante degenerada da sequência de nucleotídeo de SEQ ID NO: 14, 16 ou 18.

[00227] Em algumas modalidades, o polipeptíideco de MUC1 imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos compreende (1) uma sequência de aminoácidos de 3 a 30 repetições em tandem de 20 aminoácidos de uma proteína MUC1 humana e (2) as sequências de aminoácidos da proteina MUC1 humana que flanqueiam a região VNTR. Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo de MUC1 imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em:

[00228] (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 (polipeptídeo de plasmídeo 1027);

[00229] (2) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-537 da SEQ ID NO: 5;

[00230] (3) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 24-537 da SEQ ID NO: 5;

[00231] (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 (polipeptídeo de plasmídeo 1197);

[00232] (5) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-517 da SEQIDNO:7; e

[00233] (6) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-517 da SEQ |D NO: 7, com a condição de que o aminoácido na posição 513 seja T.

[00234] Em algumas modalidades, o polipeptideco de MUC1 imunogênico codificado por uma construção de antígeno consiste em (1) uma sequência de aminoácidos de 3 a 30 repetições em tandem de aminoácidos de uma proteína MUC1 humana e (2) nas sequências de aminoácidos do humano Proteína MUC1 que flanqueia a região VNTR. Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo de MUC1 imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos consiste uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em:

[00235] (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 (polipeptídeo de plasmídeo 1027);

[00236] (2) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-537 da SEQ ID NO: 5;

[00237] (3) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 24-537 da SEQ ID NO: 5;

[00238] (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 (polipeptídeo de plasmídeo 1197);

[00239] (5) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-517 da SEQ ID NO: 7; e

[00240] (6) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-517 da SEQ ID NO: 7, com a condição de que o aminoácido na posição 513 seja T.

[00241] Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo de MUC1 imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em:

[00242] (1) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-537 da SEQ ID NO: 5;

[00243] (2) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 24-537 da SEQ ID NO: 5;

[00244] (3) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-517 da SEQID NO:7; e

[00245] (4) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-517 da SEQ ID NO: 7, com a condição de que o aminoácido na posição 513 seja T.

[00246] Em algumas modalidades particulares, a construção de múltiplos antígenos é um DNA e compreende (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 4, (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 6 ou (3) uma variante degenerada da sequência de nucleotídeo de SEQ ID NO: 4 ou 6. Em algumas outras modalidades particulares, a construção de múltiplos antígenos é um RNA e compreende uma sequência de nucleotídeo que corresponde a (1) a sequência de nucleotídeo de SEQ ID NO: 4, (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 6 ou (3) uma variante degenerada da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 4 ou 6.

[00247] O polipeptídeo de TERT imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos pode ser a proteína TERT completa ou qualquer forma truncada ou mutada da proteína TERT. Espera-se que a proteína TERT completa gere respostas imunes mais fortes do que uma forma truncada. No entanto, dependendo do vetor específico escolhido para liberar a construção, o vetor pode não ter a capacidade de transportar o gene que codifica a proteína TERT completa. Portanto, deleções de alguns aminoácidos da proteína podem ser feitas de modo que os transgenes se encaixem em um vetor específico. As deleções de aminoácidos podem ser feitas a partir do N- terminal, C-terminal ou em qualquer lugar da sequência da proteína TERT (por exemplo, a partir da proteína TERT da SEQ ID NO: 3). Podem ser feitas deleções adicionais para remover o sinal de localização nuclear, tornando citoplasmáticos os polipeptídeos,

aumentando o acesso ao mecanismo de processamento/apresentação de antígeno celular. Em algumas modalidades, os aminoácidos até a posição 200, 300, 400, 500 ou 600 do N-terminal da proteína TERT estão ausentes nos polipeptídecos de TERT imunogênicos (por exemplo, na proteína TERT da SEQ ID NO: 3).

[00248] Em algumas modalidades específicas, os aminoácidos 1- 343 (TERT343), 1-240 (TERT240) ou 1-541 (TERT541) do N-terminal da proteína TERT da SEQ ID NO: 3 estão ausentes. Assim, em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do polipeptídeo de TERT imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos da invenção é uma das seguintes:

[00249] (1) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 51-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 50 da SEQ ID NO: 3;

[00250] (2) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 101-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 100 da SEQ ID NO: 3;

[00251] (3) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 151-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 150 da SEQ ID NO: 3;

[00252] (4) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 201-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 200 da SEQ ID NO: 3;

[00253] (5) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 241-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 240 da SEQ ID NO: 3;

[00254] (6) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 301-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 300 da SEQ ID NO: 3;

[00255] (7) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 351-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 350 da SEQ ID NO: 3;

[00256] (8) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 401-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 400 da SEQ ID NO: 3;

[00257] (9) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 451-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 450 da SEQ ID NO: 3;

[00258] (10) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 501-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 500 da SEQ ID NO: 3;

[00259] (11) uma sequência de aminoácidos que compreende aminoácidos 551-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1 a 550 da SEQ ID NO: 3; ou

[00260] (12) uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 601-1132 da SEQ ID NO: 3 e sem os aminoácidos 1-600 da SEQ ID NO: 3.

[00261] Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do polipeptídeo de TERT imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos da invenção é uma das seguintes:

[00262] (1) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 51-1132, 101-1132, 151-1132, 201-1132, 251-1132, 301- 1132, 351-1132, 401-1132, 451-1132, 501-1132 ou 551-1132 da SEQ ID NO: 3;

[00263] (2) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 601-1132 de SEQ ID NO: 3.

[00264] (3) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 542-1132 da SEQ ID NO: 3

[00265] (4) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 344-1132 da SEQ ID NO: 3.

[00266] (5) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 241-1132 da SEQ ID NO: 3.

[00267] Mutações de aminoácidos adicionais podem ser introduzidas para inativar o domínio catalítico de TERT. Exemplos de tais mutações incluem a substituição de ácido aspártico na posição 712 da SEQ ID NO: 3, como D712A, e a substituição de valina na posição 713 da SEQ ID NO: 3, como a V713I. Portanto, em uma modalidade, o polipeptídeo de TERT imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos consiste em qualquer um dos polipeptídeos de TERT descritos acima, onde uma substituição na posição correspondente ao ácido aspártico 712 da SEQ ID NO: 3 e/ou substituição na posição correspondente à valina 713 de SEQ ID NO: 3 e em que as referidas mutações inativam o domínio catalítico de TERT. Em uma modalidade, a referida mutação consiste em uma substituição de ácido aspártico na posição correspondente à posição 712 da SEQ |D NO: 3 e substituição de valina na posição correspondente à posição 713 da SEQ ID NO: 3, em que as referidas mutações inativam o domínio catalítico de TERT. Em uma modalidade, a referida mutação consiste em uma substituição de ácido aspártico por alanina na posição correspondente à posição 712 da SEQ ID NO: 3 (D712A) e uma substituição de valina por isoleucina na posição correspondente à posição 713 da SEQ ID NO: 3 (V713])

[00268] Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo de TERT imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em:

[00269] (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 (plasmídeo 1112 polipeptídeo) ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 2-893 da SEQ ID NO: 9;

[00270] (2) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11

(polipeptídeo de plasmídeo 1326) ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-791 da SEQ ID NO: 11;

[00271] (3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 (polipeptídeo de plasmídeo 1330) ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-594 da SEQ ID NO: 13; ou

[00272] (4) uma sequência de aminoácidos que é uma variante funcional de qualquer uma das sequências de aminoácidos de (1) - (3) acima.

[00273] Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo de TERT imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em:

[00274] (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 (plasmídeo 1112 polipeptídeo) ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 2-893 da SEQ ID NO: 9;

[00275] (2) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 (plasmídeo 1326 polipeptídeo) ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-791 da SEQ ID NO: 11;

[00276] (3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 (polipeptídeo de plasmídeo 1330) ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-594 da SEQ ID NO: 13; ou

[00277] (4) uma sequência de aminoácidos que é uma variante funcional de qualquer uma das sequências de aminoácidos de (1) - (3) acima.

[00278] Em algumas modalidades específicas, o polipeptídeo de TERT imunogênico codificado por uma construção de múltiplos antígenos consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em:

[00279] (1) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 2-893 da SEQ ID NO: 9;

[00280] (2) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-791 da SEQ ID NO: 11;

[00281] (3) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-594 da SEQ ID NO: 13; ou

[00282] (4) uma sequência de aminoácidos que é uma variante funcional de qualquer uma das sequências de aminoácidos de (1) - (3) acima.

[00283] Em algumas modalidades particulares, a construção de múltiplos antígenos é um DNA e compreende (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 8, (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 10, (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 12, ou (4) uma variante degenerada da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 12. Em algumas outras modalidades particulares, a construção de múltiplos antígenos é um RNA e compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 8, (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 10, (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 12 ou (4) uma variante degenerada da sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 8, 10 ou 12.

[00284] Em algumas modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos que compreende (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico e (ii) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que o construção de múltiplos antígenos codifica uma sequência de aminoácidos que compreende:

[00285] (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31 ou dos aminoácidos 4-1088 da SEQ ID NO: 31;

[00286] (2)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 ou dos aminoácidos 4-1081 da SEQ ID NO: 33;

[00287] (3)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35 ou dos aminoácidos 4-1085 da SEQ ID NO: 35;

[00288] (4)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37 ou dos aminoácidos 4-1030 da SEQ ID NO: 37;

[00289] (5)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 39 ou dos aminoácidos 4-1381 da SEQ ID NO: 39; ou

[00290] (6)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 ou dos aminoácidos 4-1441 da SEQ ID NO: 41.

[00291] Em algumas modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos que compreende (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico e (ii) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que o de múltiplos antígenos A construção codifica uma sequência de aminoácidos que consiste em:

[00292] (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31 ou dos aminoácidos 4-1088 da SEQ ID NO: 31;

[00293] (2)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 ou dos aminoácidos 4-1081 da SEQ ID NO: 33;

[00294] (3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35 ou dos aminoácidos 4-1085 da SEQ ID NO: 35;

[00295] (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37 ou dos aminoácidos 4-1030 da SEQ ID NO: 37;

[00296] (5)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 39 ou dos aminoácidos 4-1381 da SEQ ID NO: 39; ou

[00297] (6)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 ou dos aminoácidos 4-1441 da SEQ ID NO: 41.

[00298] Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos que é um DNA e compreende (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico e (ii) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de um antígeno compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00299] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00300] (2)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00301] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00302] (4)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[00303] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[00304] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 40 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; ou

[00305] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00306] Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos que é um DNA e compreende (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico e (ii) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de um antígeno compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00307] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00308] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00309] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00310] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[00311] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[00312] (6) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; ou

[00313] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00314] Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos que é um RNA (por exemplo, mRNA) e compreende (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico e (ii) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de um antígeno compreende uma sequência de nucleotídeo que corresponde a uma sequência de nucleotídeo selecionada do grupo que consiste em:

[00315] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00316] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00317] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00318] (4)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[00319] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[00320] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 40 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; ou

[00321] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00322] Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos que é um RNA (por exemplo, mRNA) e compreende (i) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico e (ii) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de um antígeno compreende uma sequência de nucleotídeo que corresponde a uma sequência de nucleotídeo selecionada do grupo que consiste em:

[00323] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00324] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00325] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00326] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[00327] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[00328] (6) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; ou

[00329] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00330] Em algumas outras modalidades, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que compreende (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e (3) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de múltiplos antígenos compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em:

[00331] (1)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2003 da SEQ ID NO: 43;

[00332] (2) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2001 da SEQ ID NO: 45;

[00333] (3)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2008 da SEQ ID NO: 47;

[00334] (4)asequênciade aminoácidos da SEQ ID NO: 49 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1996 da SEQ ID NO: 49;

[00335] (5)a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 51; ou

[00336] (6)asequênciade aminoácidos da SEQ ID NO: 53 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 53.

[00337] Em algumas outras modalidades, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que compreende (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e (3) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de múltiplos antígenos compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em:

[00338] (1) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-2003 da SEQ ID NO: 43;

[00339] (2) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-2001 da SEQ ID NO: 45;

[00340] (3) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-2008 da SEQ ID NO: 47;

[00341] (4) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-1996 da SEQ ID NO: 49;

[00342] (5) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 51; ou

[00343] (6) uma sequência de aminoácidos que consiste nos aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 53.

[00344] Em algumas modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que compreende (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e (3) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de antígenos múltiplos é um DNA e compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00345] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 42 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00346] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 44 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00347] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00348] (4)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 48 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00349] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 50 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50;

[00350] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 52 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00351] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00352] Em algumas modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de antígeno que compreende (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e (3) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de antígenos múltiplos é um DNA e compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00353] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00354] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00355] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00356] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00357] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50;

[00358] (6) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00359] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00360] Em algum outro pmodalidades articulares, a presente descrição fornece uma construção de múltiplos antígenos, em que a construção de múltiplos antígenos é um RNA (por exemplo, mRNA) e compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00361] (1)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 42 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00362] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 44 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00363] (3)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00364] (4)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 48 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00365] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 50 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50;

[00366] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 52 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00367] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00368] Em algumas outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de antígenos múltiplos, em que a construção de múltiplos antígenos é um RNA (por exemplo, mRNA) e compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00369] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00370] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00371] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00372] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00373] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50;

[00374] (6) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00375] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00376] Em ainda outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de antígenos múltiplos (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e (3) pelo menos um sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que o construção de antígenos múltiplos é anRNA (por exemplo, mRNA) e compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00377] (1)asequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 87;

[00378] (2) asequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 88;

[00379] (3)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 89;

[00380] (4)asequênciade nucleotídeos da SEQ ID NO: 90;

[00381] (5) asequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 91;

[00382] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 92; e

[00383] (7) uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeo da SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91 ou SEQ ID NO: 92.

[00384] Em ainda outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma construção de antígenos múltiplos (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e (3) pelo menos um sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico, em que a construção de antígenos múltiplos é um RNA (por exemplo, mRNA) e consiste em uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00385] (1)asequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 87;

[00386] (2)asequênciade nucleotídeos da SEQ ID NO: 88;

[00387] (3)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 89;

[00388] (4)asequênciade nucleotídeos da SEQ ID NO: 90;

[00389] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 91;

[00390] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 92; e

[00391] (7) uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeo da SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91 ou SEQ ID NO: 92. D. VETORES QUE CONTÊM UMA CONSTRUÇÃO DE ANTÍGENOS

[00392] Outro aspecto da invenção refere-se a vetores contendo uma ou mais das construções de antígeno fornecidas pela presente descrição, incluindo construções de antígeno único, construções de antígeno duplo, construções de antígeno triplo e outras construções de múltiplos antígenos. Os vetores são úteis para clonar ou expressar os polipeptídeos de TAA imunogênicos codificados pelas construções de antígeno, ou para liberar a construção de antígeno em uma composição, como uma vacina, a uma célula hospedeira ou a um animal hospedeiro, como um humano.

[00393] “Uma grande variedade de vetores pode ser preparada para conter e expressar uma construção de antígeno fornecida pela presente descrição, como vetores plasmídicos, vetores cosmídeos, vetores fágicos e vetores virais. Além da sequência de inserção do transgene (isto é, a construção de antígeno único ou construções de antígeno fornecidas pela presente descrição), que também é chamada de estrutura de leitura aberta (ORF), a estrutura de um vetor compreende tipicamente outros componentes ou elementos que ativam ou facilitam a expressão, como origem da replicação, sítio de múltiplas clonagens e um marcador selecionável.

[00394] Em algumas modalidades, a descrição fornece um vetor de plasmídeo contendo uma construção de antígeno fornecida pela presente descrição. Exemplos de vetores plasmídicos adequados incluem pBR325, puUC18, pSKF, pET23D e pGB-2. Outros exemplos de vetores plasmídicos, bem como o método de construção de tais vetores, são descritos na Patente US 5.589.466, 5.688.688 e

5.814.482. A construção de vetores plasmídicos exemplares específicos compreendendo uma construção de antígeno único, construção de antígeno duplo ou construção de antígeno triplo também é descrita na presente descrição.

[00395] Em algumas modalidades específicas, a descrição fornece um vetor de plasmídeo que compreende uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 54, 55, 56, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 70, 71,72, 713 e 74

[00396] Em outras modalidades, a presente invenção fornece vetores que são construídos a partir de vírus (isto é, vetores virais), incluindo vírus de DNA e vírus de RNA (retrovírus). Exemplos de vírus de DNA que podem ser usados para construir um vetor incluem vírus do herpes simples, parvovírus, vírus da vacínia e adenovírus. Exemplos de vírus de RNA que podem ser usados para construir um vetor incluem alfavírus, flavivírus, pestivírus, influenzavírus, Iyssavírus e vesiculovírus. A construção de vetores de vários vírus é conhecida na técnica. Exemplos de vetores retrovirais são descritos na Patente U.S. 5.716.613, 5.716.832 e 5.817.491. Exemplos de vetores que podem ser gerados a partir de vírus alfavares são descritos na Patente U.S. 5.091.309, 5.843.723 e 5.789.245. Exemplos de outros vetores incluem: (1) vírus da varíola, como o vírus da varíola canária ou vírus da vaccinia (Patentes U.S. Nos. 4.603.112, 4.769.330 e 5.017.487; WO 89/01973); (2) SV40 (Mulligan et a/., Nature 277: 108-114, 1979); (3) herpes (Kit, Adv. Exp. Med. Biol. 215: 219-236, 1989; Patente U.S. No. 5.288.641); e (4) lentivífus como o HIV (Poznansky, J. Virol. 65: 532-536, 1991).

[00397] Em algumas modalidades particulares, a presente descrição fornece vetores adenovirais derivados de adenovírus de primatas não humanos, tais como adenovírus símios. Exemplos desses vetores adenovirais, bem como sua preparação, são descritos nas publicações de pedidos PCT WO2005/071093 e WO2010/086189, e incluem vetores não replicantes construídos a partir de adenovírus símios, como ChAd3, ChAd4, ChAd5, ChAd7, ChAd8ê, ChAd9., ChAd10, ChAd11, ChAd16, ChAdi7, ChAd19, ChAd20, ChAd22, ChAd24, ChAd26, ChAd30, ChAd31, ChAd37, ChAd38, ChAd44, ChAd63, ChAd68, ChAd82, ChAd55, ChAd73, ChAd8ê3, ChAd146, ChAd147, PanAd1, PanAd1i e Pan Ad3, e vetores competentes para replicação construídos a partir de adenovírus Ad4 ou Ad7. É preferível que, na construção dos vetores adenovirais dos adenovírus símios, um ou mais dos primeiros genes da região genômica do vírus selecionado de E1A, E1B, E2A, E2B, E3 e E4 sejam excluídos ou tornados não funcionais por exclusão ou mutação. Em uma modalidade particular, o vetor é construído a partir de ChAd68. O adenovírus chimpanzé ChAd68 também é referido na literatura como adenovírus símio 25, C68, AdC68, Chad68, SAdV25, PanAd9 ou Pan9. Um método de construção de vetores de ChAd68 para expressar construções de múltiplos antígenos é descrito na publicação de pedido de patente internacional WO2015/063647. Os vetores de expressão incluem tipicamente um ou mais elementos de controle que estão operacionalmente ligados à sequência de ácido nucleico a ser expressa. O termo "elementos de controle" refere-se coletivamente a regiões promotoras, sinais de poliadenilação,y sequências de terminação de transcrição, domínios reguladores a montante, origens de replicação, sítios de entrada de ribossoma internos ("IRES"), realçadores e similares, que coletivamente fornecem a replicação, transcrição e translação de uma sequência de codificação em uma célula receptora. Nem todos esses elementos de controle precisam estar sempre presentes, desde que a sequência de codificação selecionada seja capaz de ser replicada, transcrita e transladada em uma célula hospedeira apropriada. Os elementos de controle são selecionados com base em vários fatores conhecidos daqueles versados na técnica, como as células hospedeiras específicas e a fonte ou estruturas de outros componentes do vetor. Para melhorar a expressão de um polipeptídeo de TAA imunogênico, uma sequência Kozak pode ser fornecida a montante da sequência que codifica o polipeptídeo de TAA imunogênico. Para vertebrados, uma sequência Kozak conhecida é (GCC) NCCATGG, em que N é A ou G e GCC é menos conservado. Sequências de Kozak exemplificativas que podem ser usadas incluem GAACATGG, ACCAUGG e ACCATGG.

[00398] Em algumas modalidades, o vetor compreende uma construção de múltiplos antígenos que codifica (i) pelo menos um polipeptídeo de CEA imunogênico e (ii) pelo menos um polipeptídeo de MUC1 imunogênico ou pelo menos um polipeptídeo de TERT imunogênico. O vetor pode ser um vetor de plasmídeo de DNA, vetor de vírus de DNA, vetor de plasmídeo de RNA ou vetor de vírus de RNA. Em algumas modalidades específicas, o vetor é um vetor de DNA e compreende uma construção de múltiplos antígenos compreendendo uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00399] (1)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00400] (2)a sequência de nucleotídeoe da SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00401] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00402] (4)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[00403] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[00404] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 40 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; e

[00405] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00406] Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor de RNA, que compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em:

[00407] (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00408] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00409] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00410] (4)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[00411] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[00412] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 40 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; e

[00413] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00414] Em algumas outras modalidades, o vetor contém uma construção de múltiplos antígenos que codifica (i) pelo menos um polipeptídeo de MUC1 imunogênico, (ii) pelo menos um polipeptídeo de CEA imunogênico e (iii) pelo menos um polipeptídeo de TERT imunogênico. O vetor pode ser um vetor de plasmídeo de DNA, vetor de vírus de DNA, vetor de plasmídeo de RNA ou vetor de vírus de

RNA. Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor de DNA, que compreende uma construção de antígenos múltiplos compreendendo uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00415] (1)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 42 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00416] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 44 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00417] (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00418] (4)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 48 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00419] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 50 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50; ou

[00420] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 52 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00421] (6) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00422] Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor de RNA, que compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00423] (1)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 42 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00424] (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 44 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00425] (3)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00426] (4)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 48 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00427] (5)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 50 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50;

[00428] (6)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 52 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00429] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00430] Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor viral de DNA que compreende uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 64, 66 e

68. Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor de plasmídeo de DNA compreendendo a uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID NOs: 57, 59, 61,63, 65, 67, 69, 70, 71,72, 73 e 74.

[00431] Em algumas modalidades específicas, o vetor é um vetor de DNA e compreende uma construção de múltiplos antígenos compreendendo uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00432] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00433] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00434] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00435] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[00436] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[00437] (6) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; e

[00438] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00439] Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor de RNA, que compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste em:

[00440] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00441] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00442] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00443] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36;

[00444] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38;

[00445] (6) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; e

[00446] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00447] Em algumas outras modalidades, o vetor contém uma construção de múltiplos antígenos que codifica (i) pelo menos um polipeptídeo de MUC1 imunogênico, (ii) pelo menos um polipeptídeo de CEA imunogênico e (iii) pelo menos um polipeptídeo de TERT imunogênico. O vetor pode ser um vetor de plasmídeo de DNA, vetor de vírus de DNA, vetor de plasmídeo de RNA ou vetor de vírus de RNA. Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor de DNA, que compreende uma construção de antígenos múltiplos compreendendo uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00448] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00449] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00450] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00451] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00452] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50; ou

[00453] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00454] (6) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

[00455] Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor viral de DNA que consiste em uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 64, 66 e

68. Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um plasmídeo de DNA vetor que consiste na sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 70, 71,72, 73 e 74.

[00456] Em algumas outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um vetor de RNA, que compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00457] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00458] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00459] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00460] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00461] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50;

[00462] (6) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00463] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima. E. COMPOSIÇÕES QUE COMPREM UM VETOR OU UMA

CONSTRUÇÃO DE ANTÍGENO

[00464] A presente descrição também fornece composições, que compreendem a molécula de ácido nucleico isolada (isto é, uma construção de antígeno) ou um vetor fornecido pela presente descrição. Uma composição pode compreender apenas uma construção de antígeno individual, como uma construção de antígeno duplo ou uma construção de antígeno triplo. Também pode compreender duas ou mais construções individuais de antígeno diferentes, como uma combinação de uma construção de antígeno único e uma construção de antígeno duplo, ou uma combinação de três ou mais construções de antígeno único que codificam diferentes polipeptídeos de TAA imunogênicos. As composições são úteis para provocar uma resposta imune contra uma proteína TAA in vitro ou in vivo em um mamífero, incluindo um humano. Em algumas modalidades, as composições são composições imunogênicas ou composições farmacêuticas. Em algumas modalidades particulares, a composição é uma composição de vacina para administração em humanos para (1) inibir a proliferação celular anormal, fornecendo proteção contra o desenvolvimento de câncer (usado como profilático), (2) tratamento de câncer (usado como terapêutico) associado à super expressão do TAA ou (3) desencadear uma resposta imune a um TAA humano específico, como CEA, MUC1 e TERT.

[00465] Em algumas modalidades, uma composição fornecida pela presente descrição compreende uma construção de múltiplos antígenos ou um vetor compreendendo uma construção de múltiplos antígenos, em que a construção de múltiplos antígenos codifica dois ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos. Por exemplo, uma construção de múltiplos antígenos pode codificar dois ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos em qualquer uma das seguintes combinações:

[00466] (1) um polipeptídeo de CEA imunogênico e um polipeptídeo de MUC1 imunogênico;

[00467] (2) um polipeptíideo de CEA imunogênico e umn

TERTpolipeptídeo imunogênico; e

[00468] (3) um polipeptídeo de CEA imunogênico, um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e um polipeptídeo de TERT imunogênico.

[00469] Em algumas modalidades particulares, a composição fornecida pela presente descrição compreende uma construção de antígeno duplo ou um vetor compreendendo uma construção de antígeno duplo, em que a construção de antígeno duplo compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00470] (1) uma sequência de nucleotídeo que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31 ou dos aminoácidos 4-1088 da SEQ ID NO: 31;

[00471] (2) uma sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 ou os aminoácidos 4- 1081 da SEQ ID NO: 33;

[00472] (3) uma sequência de nucleotídeo que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35 ou os aminoácidos 4-1085 da SEQ ID NO: 35;

[00473] (4)uma sequência de nucleotídeo que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37 ou os aminoácidos 4-1030 da SEQ ID NO: 37;

[00474] (5) uma sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 39 ou dos aminoácidos 4- 1381 da SEQ ID NO: 39;

[00475] (6) uma sequência de nucleotídeo que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 ou dos aminoácidos 4-1441 da SEQ ID NO: 41;

[00476] (7) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30;

[00477] (8) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32;

[00478] (9)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34;

[00479] (10) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10- 3090 da SEQ ID NO: 36;

[00480] (11) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10- 4143 da SEQ ID NO: 38;

[00481] (12) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 40 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10- 4323 da SEQ ID NO: 40; e

[00482] (13) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (12) acima.

[00483] Em algumas outras modalidades particulares, as composições fornecidas pela presente descrição compreendem (1) uma construção de triplo antígeno ou (2) um vetor compreendendo uma construção de triplo antígeno, em que a construção de triplo antígeno compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00484] (1) uma sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 ou os aminoácidos 4- 2003 da SEQ ID NO: 43;

[00485] (2) uma sequência de nucleotídeos que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45 ou os aminoácidos 4- 2001 da SEQ ID NO: 45;

[00486] (3) uma sequência de nucleotídeo que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47 ou os aminoácidos 4-2008 da SEQ ID NO: 47;

[00487] (4) uma sequência de nucleotídeo que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 49 ou os aminoácidos 4-1996 da SEQ ID NO: 49;

[00488] (5) uma sequência de nucleotídeo que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51 ou os aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 51;

[00489] (6) uma sequência de nucleotídeo que codifica a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 ou dos aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 53;

[00490] (7)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 42 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00491] (8)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 44 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00492] (9)a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00493] (10) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 48 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10- 5988 da SEQ ID NO: 48;

[00494] (11) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 50 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10- 5829 da SEQ ID NO: 50;

[00495] (12) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 52 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10- 5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00496] (13) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (12) acima.

[00497] Em algumas outras modalidades particulares, as composições fornecidas pela presente descrição compreendem uma construção de triplo antígeno ou um vetor compreendendo uma construção de triplo antígeno, em que a construção de triplo antígeno compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em:

[00498] (1) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42;

[00499] (2) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44;

[00500] (3) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

[00501] (4) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48;

[00502] (5) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50;

[00503] (6) uma sequência de nucleotídeos que consiste nos nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e

[00504] (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (7 acima.

[00505] Em outras modalidades particulares, as composições fornecidas pela presente descrição compreendem uma construção de antígeno triplo de RNA ou um vetor de RNA compreendendo uma construção de antígeno triplo, em que a construção de antígeno triplo compreende uma sequência de nucleotídeos que corresponde a (1) qualquer uma das sequências das SEQ ID NOs: 42, 44, 46, 48, 50, 52 ou (2) uma sequência de nucleotídeos que é uma variação degeneradant de qualquer uma das sequências de nucleotídeo de SEQ ID NOs: 42, 44, 46, 48, 50, 52.

[00506] Em outras modalidades particulares, as composições fornecidas pela presente descrição compreendem uma construção de antígeno triplo de RNA ou um vetor de RNA compreendendo uma construção de antígeno triplo, em que a construção de antígeno triplo consiste em uma sequência de nucleotídeos que corresponde a (1) qualquer um dos sequências de SEQ ID NOs: 42, 44, 46, 48, 50, 52 ou (2) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeo de SEQ ID NOs: 42, 44, 46, 48, 50, 52

[00507] Em ainda outras modalidades particulares, as composições fornecidas pela presente descrição compreendem uma construção de antígeno triplo ou um vetor compreendendo uma construção de antígeno triplo, em que a construção de antígeno triplo compreende (1) uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 87, 88, 89, 90, 91 e 92 ou (2) variante degenerada de uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 87, 88, 89, 90, 91 e 92. Em algumas outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma composição compreendendo um plasmídeo, em que o plasmídeo compreende uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID Nos: 57, 59, 61, 63, 65 e 67. Em ainda outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma composição compreendendo um vetor, em que o vetor compreende uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID Nos: 58, 60, 62, 64, 66 e 68.

[00508] Em ainda outras modalidades particulares, as composições fornecidas pela presente descrição compreendem uma construção de antígeno triplo ou um vetor compreendendo uma construção de antígeno triplo, em que a construção de antígeno triplo consiste em (1) uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 87, 88, 89, 90, 91 e 92 ou (2) variante degenerada de uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID NOS: 87, 88, 89, 90, 91 e

92. Em algumas outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma composição compreendendo um plasmídeo, em que o plasmídeo consiste em uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID Nos: 57, 59, 61, 63, 65 e 67. Em ainda outras modalidades particulares, a presente descrição fornece uma composição compreendendo um vetor, em que o vetor consiste em uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID Nos: 58, 60, 62, 64, 66 e 68.

[00509] As composições, tais como uma composição farmacêutica ou uma composição de vacina, podem ainda compreender um excipiente farmaceuticamente aceitável. Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados para composições de ácido nucleico, incluindo vacina de DNA e composições de vacina de RNA, são bem conhecidos daqueles versados na técnica. Esses excipientes podem ser soluções aquosas ou não aquosas, suspensões e emulsões. Exemplos de excipientes não aquosos incluem propileno glicol, polietileno glicol, óleos vegetais como azeite e ésteres orgânicos injetáveis como oleato de etila. Exemplos de excipiente aquoso incluem água, soluções alcoólicas/aquosas, emulsões ou suspensões, incluindo solução salina e meio tamponado. Excipientes adequados também incluem agentes que auxiliam na captação celular da molécula de polinucleotídeo. Exemplos de tais agentes são (i) produtos químicos que modificam a permeabilidade celular, como bupivacaína, (ii) ipossomas ou partículas virais para encapsulação do polinucleotídeo ou (iii) lipídeos catiônicos ou micropartículas de sílica, ouro ou tungstênio que se associam a polinucleotídeos. Os lipossomas aniônicos e neutros são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Lipossomas: uma abordagem prática, RPC New Ed, IRL press (1990), para uma descrição detalhada dos métodos para a produção de lipossomas) e são úteis para fornecer uma grande variedade de produtos, incluindo polinucleotídeos.

[00510] Uma composição imunogênica, composição farmacêutica ou composição de vacina fornecida pela presente descrição pode ser usada em conjunto ou em combinação com um ou mais moduladores imunes. A composição também pode ser usada em conjunto ou combinação com um ou mais adjuvantes. Além disso, a composição pode ser usada em conjunto ou em combinação com um ou mais moduladores imunes e um ou mais adjuvantes. Os moduladores ou adjuvantes imunes podem ser formulados separadamente da construção ou vetor de antígeno, ou podem fazer parte da mesma formulação de composição. Assim, em algumas modalidades, a presente descrição fornece uma composição farmacêutica que compreende (1) uma construção de antígeno fornecida pela presente descrição ou vetor contendo essa construção de antígeno e (2) um modulador imune. Em algumas modalidades adicionais, a composição farmacêutica compreende ainda um adjuvante. Exemplos de moduladores e adjuvantes imunes são fornecidos abaixo.

[00511] As composições, incluindo composições de vacina, podem ser preparadas em qualquer forma de dosagem adequada, como formas líquidas (por exemplo, soluções, suspensões ou emulsões) e formas sólidas (por exemplo, cápsulas, comprimidos ou pó) e por métodos conhecidos por uma pessoa versada na técnica. F. USOS DE CONSTRUÇÕES, VETORES E COMPOSIÇÕES DE

ANTÍGENO

[00512] Em outros aspectos, a presente descrição fornece (1) uso das construções, vetores e composições de antígeno como medicamento, (2) uso das construções de antígeno, vetores e composições na fabricação de um medicamento para provocar uma resposta imune contra um TAA, para inibir a proliferação celular anormal ou para tratar um câncer e (3) métodos de utilização das construções de antígeno, vetores, e composições, em que as construções, vetores e composições de antígeno são como aqui descritos acima.

[00513] Em um aspecto, a presente descrição fornece o uso de (1) uma construção de antígeno que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, (2) um vetor contendo essa construção de antígeno ou (3) uma composição contendo tal como construção de antígeno ou vetor para desencadear uma resposta imune contra um TAA em um mamífero, como um humano. Em algumas modalidades, a descrição fornece um método para obter uma resposta imune contra um TAA em um mamífero, particularmente um humano, cujo método compreende administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo (1) uma construção de antígeno que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos ou (2) um vetor contendo uma construção de antígeno que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos. Em algumas modalidades, a descrição fornece um método para obter uma resposta imune contra CEA em um mamífero, particularmente um humano, compreendendo administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo uma construção de antígeno fornecida pela presente descrição, em que a construção de antígeno compreende (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico e (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptideo de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico. Em algumas outras modalidades, a descrição fornece um método para obter uma resposta imune contra

MUC1 em um mamífero, particularmente um humano, compreendendo administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo uma construção de antígeno fornecida pela presente descrição, em que a construção de antígeno compreende (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico ou um polipeptídeo de TERT imunogênico. Em algumas modalidades adicionais, a descrição fornece um método para obter uma resposta imune contra TERT em um mamífero, particularmente um humano, compreendendo administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo uma construção de antígeno fornecida pela presente descrição, em que a construção de antígeno compreende (1) pelo menos uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico e (2) pelo menos uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptideco de MUC1 imunogênico ou um polipeptídeo de CEA imunogênico.

[00514] Em outro aspecto, a presente descrição fornece o uso de (1) uma construção de antígeno que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, (2) um vetor contendo essa construção de antígeno ou (3) uma composição que contém tais como construção de antígeno ou vetor para inibição anormal proliferação celular em mamíferos, como humanos. Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método para inibir a proliferação celular anormal em um mamífero, particularmente um humano, compreendendo administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição que compreende (1) uma construção de antígeno que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos ou (2) um vetor contendo uma construção de antígeno que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, em que a proliferação celular anormal está associada à superexpressão do antígeno CEA, MUC1 ou TERT associado ao tumor. A proliferação celular anormal pode estar em qualquer órgão ou tecido de um ser humano, como mama, estômago, ovários, pulmões, bexiga, intestino grosso (por exemplo, cólon e reto), rins, pâncreas e próstata. Em algumas modalidades, o método é para inibir a proliferação celular anormal na mama, ovários, pâncreas, cólon, pulmão, estômago e reto. A construção ou vetor de antígeno na composição administrada codifica pelo menos um polipeptídeo imunogênico que é derivado ou imunogênico contra o antígeno associado ao tumor superexpresso. A construção de antígeno pode ser uma construção de antígeno único ou uma construção de múltiplos antígenos, como uma construção de antígeno duplo ou uma construção de antígeno triplo. Em algumas modalidades específicas, a composição compreende uma construção de triplo antígeno que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, um polipeptídeo imunogênico MUC1 e um polipeptídeo de TERT imunogênico.

[00515] Em um aspecto adicional, a presente descrição fornece o uso de (1) uma construção de antígeno que codifica um ou mais polipeptídeos de TAA imunogênicos, (2) um vetor contendo essa construção de antígeno ou (3) uma composição que contém tais como construção de antígeno ou vetor como um medicamento para tratamento de um câncer em um mamífero, particularmente um humano. Em algumas modalidades, a presente descrição fornece um método de tratamento de um câncer em um ser humano, em que o câncer está associado à superexpressão de um ou mais antígenos CEA, MUC1 e TERT associados ao tumor. O método compreende a administração ao ser humano uma quantidade eficaz de uma composição que compreende uma construção de antígeno que codifica pelo menos um polipeptídeo imunogênico que é derivado ou imunogênico contra o antígeno associado ao tumor superexpresso no câncer em particular. A construção de antígeno pode ser uma construção de antígeno único ou uma construção de múltiplos antígenos, como uma construção de antígeno duplo ou uma construção de antígeno triplo. Em algumas modalidades específicas, a composição compreende uma construção de triplo antígeno que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico, um polipeptídeo imunogênico MUC1 e um polipeptídeo de TERT imunogênico. Qualquer câncer que superexpresse o antígeno associado ao tumor MUC1, CEA e/ou TERT pode ser tratado por um método fornecido pela presente descrição. Exemplos de câncer incluem câncer de mama, câncer de ovário, câncer de pulmão (como câncer de pulmão de pequenas células e câncer de pulmão de células não pequenas), câncer colorretal, câncer gástrico e câncer de pâncreas. Em algumas modalidades particulares, a presente descrição fornece um método de tratamento de câncer em um ser humano, que compreende administrar ao ser humano uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo uma construção de triplo antígeno, em que o câncer é (1) câncer de mama, como câncer de mama positivo para receptor de estrogênio e/ou receptor de progesterona, câncer de mama positivo para HER2 ou câncer de mama triplo negativo, (2) câncer de pulmão, como NSCLC ou SCLC, (3) câncer gástrico, (4) câncer de pâncreas ou (5) câncer colorretal.

[00516] Em algumas modalidades específicas, a presente descrição fornece um método para obter uma resposta imune contra um TAA, um método para inibir a proliferação celular anormal ou um método para tratar um câncer em um mamífero, particularmente um humano, cujo método compreende administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo uma construção ou vetor de múltiplos antígenos compreendendo uma construção de múltiplos antígenos, em que a construção de múltiplos antígenos compreende uma sequência de nucleotídeo que codifica qualquer sequência de aminoácidos das SEQ ID Nos: 43, 45, 47, 49, 51 e 53. Em outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um método para obter uma resposta imune contra um TAA, um método para inibir a proliferação celular anormal ou um método para tratar um câncer em um mamífero, particularmente um humano, cujo método compreende administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo uma construção de múltiplos antígenos, em que a construção de múltiplos antígenos compreende uma sequência de nucleotídeo de quaisquer dentre SEQ ID Nos: 42, 44, 46, 48, 50, 52 e 87-92. Em outras modalidades específicas, a presente descrição fornece um método para obter uma resposta imune contra um TAA, um método para inibir a proliferação celular anormal ou um método para tratar um câncer em um mamífero, particularmente um humano, cujo método compreende administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um vetor, em que o vetor compreende uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID Nos: 57-68.

[00517] As composições podem ser administradas a um mamífero, incluindo humano, por um número de métodos adequados conhecidos na técnica. Exemplos de métodos adequados incluem: (1) administração — intramuscular, — intradérmica, — intraepidérmica — ou subcutânea, (2) administração oral e (3) aplicação tópica (como aplicação ocular, intranasal e intravaginal). Um método particular de administração intradérmica ou intraepidérmica de uma composição de vacina de ácido nucleico, particularmente composição contendo um plasmídeo de DNA, é a liberação de pistolas gênicas usando o dispositivo de liberação de vacina Parmed Mediated Epidermal Delivery (PMED'Y) comercializado pela PowderMed. O PMED é um método sem agulha de administrar vacinas a animais ou humanos. O sistema PMED envolve a precipitação de DNA em partículas microscópicas de ouro que são então impulsionadas pelo gás hélio para a epiderme. As partículas de ouro revestidas de DNA são liberados às APCs e queratinócitos da epiderme e, uma vez dentro dos núcleos dessas células, o DNA elui do ouro e se torna transcricionalmente ativo, produzindo proteína codificada. Outro método particular para administração intramuscular de uma vacina de ácido nucleico envolve eletroporação. A eletroporação usa pulsos elétricos controlados para criar poros temporários na membrana celular, o que facilita a captação celular da vacina de ácido nucleico injetada no músculo. Quando uma CpG é usada em combinação com uma vacina de ácido nucleico, a vacinação com CpG e ácido nucleico deve ser formulada em uma formulação e a formulação é administrada intramuscularmente por eletroporação.

[00518] A quantidade eficaz da composição a ser administrada em um determinado método pode ser prontamente determinada por uma pessoa versada na técnica e dependerá de vários fatores. Em um método de tratamento de câncer, como câncer de pâncreas, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer colorretal, câncer gástrico e câncer de mama, fatores que podem ser considerados na determinação da quantidade eficaz incluem o indivíduo a ser tratado, incluindo o estado imune do indivíduo e saúde, a gravidade ou statusdo câncer a ser tratado, os polipeptídeos imunogênicos específicos de TAA expressos, o grau de proteção ou tratamento desejado, o método e o horário de administração e outros agentes terapêuticos (como adjuvantes ou moduladores imunes) usados. O método de formulação e liberação está entre os principais fatores para determinar a dose de ácido nucleico necessária para obter uma resposta imune eficaz. Por exemplo, as quantidades efetivas de ácido nucleico em uma vacina podem estar na faixa de 2 ug/dose - 10 mg/dose quando a vacina é formulada como uma solução aquosa e administrada por injeção hipodérmica com agulha ou injeção pneumática, enquanto apenas 16 ng/dose - 16 ug/dose podem ser necessários quando o ácido nucleico é preparado como contas de ouro revestidas e administrado usando uma tecnologia de arma genética. O intervalo de doses de um ácido nucleico em uma vacina por eletroporação geralmente varia de 0,5 a mg/dose. No caso em que a vacina de ácido nucleico é administrada juntamente com um CpG por eletroporação em uma coformulação, a dose da vacina de ácido nucleico pode estar na faixa de 0,5 - 5 mg/dose e a dose de CpGis normalmente na faixa de 0,05 mg a 5 mg/dose, como 0,05, 0,2, 0,6 ou 1,2 mg/dose por pessoa.

[00519] As composições de vacina fornecidas pela presente descrição podem ser usadas em uma estratégia de reforço prncipal para induzir resposta imune robusta e duradoura. Os protocolos de iniciação e reforço da vacinação com base em injeções repetidas da mesma construção imunogênica são bem conhecidos. Em geral, a primeira dose da vacina pode não ser capaz de produzir imunidade protetora, mas apenas "inicia" o sistema imune. Uma resposta imune protetora se desenvolve após a segunda, terceira ou subsequente dose (os "reforços"). Os reforços são realizados de acordo com técnicas convencionais e podem ser ainda mais otimizados empiricamente em termos de cronograma de administração, via de administração, escolha de adjuvante, dose e sequência potencial quando administrados com outra vacina. Em uma modalidade, as composições de vacina são usadas em uma estratégia convencional de reforço prncipal homólogo, na qual a mesma vacina é administrada ao animal nas doses prncipal e de reforço. Por exemplo, a mesma composição de vacina contendo um vetor plasmídico é administrada nas doses iniciais ("principal") e nas doses subsequentes ("reforço"). Em outra modalidade, as composições de vacina são usadas em uma vacinação de reforço prncipal heteróloga, na qual diferentes tipos de vacinas que expressam o mesmo polipeptídeo de TAA imunogênico são administrados em intervalos de tempo predeterminados. Por exemplo, uma construção de antígeno é administrada na forma de um vetor de plasmídeo na dose principal e na forma de um vetor viral nas doses de reforço, ou vice-versa.

[00520] As composições de vacina podem ser usadas em conjunto com um ou mais adjuvantes. Exemplos de adjuvantes adequados incluem: (1) formulações de emulsão de óleo em água, como MF59 e ASO3; (2) adjuvantes de saponina, como QS21 e Iscomatrix& (Commonwealth Serum Laboratories, Australia); (3) Adjuvante completo de Freund (CFA) e Adjuvante incompleto de Freund (IFA); (4) citocinas, como interleucinas (por exemplo, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL- 6, IL-7, 11-12, interferons (por exemplo, gama interferon), fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF) e fator de necrose tumoral (TNF); (5) monofosforil lipídeo A (MPL) ou MPL desacilado com 3-O (3dMPL); (6) oligonucleotídeos compreendendo motivos CpG; e (7) sal metálico, incluindo alumínio sais (alúmen), como fosfato de alumínio e hidróxido de alumínio.

[00521] Além disso, para o tratamento de um distúrbio neoplásico, incluindo um câncer, em um mamiífero, inclusive humano, as composições podem ser administradas em combinação com um ou mais moduladores imunes. O modulador imune pode ser um inibidor de células imunossupressoras (inibidor de ISC) ou um realçador de células imunoefetoras (realçador de IEC). Além disso, um ou mais inibidores de ISC podem ser usados em combinação com um ou mais realçadores de IEC. Os moduladores imunes podem ser administrados por quaisquer métodos e vias adequados, incluindo (1) administração sistêmica, como administração intravenosa, intramuscular ou oral, e (2) administração local como administração intradérmica e subcutânea. Onde apropriado ou adequado, a administração local é geralmente preferida à administração sistêmica. A administração local de quaisquer moduladores imunes pode ser realizada em qualquer local do corpo do mamífero que seja adequado para administração local de produtos farmacêuticos; no entanto, é mais preferível que esses moduladores imunes sejam administrados localmente próximo ao linfonodo que drena a vacina.

[00522] As composições, como uma vacina, podem ser administradas simultaneamente ou sequencialmente com qualquer um ou todos os moduladores imunes utilizados. Da mesma forma, quando dois ou mais moduladores imunes são usados, eles podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente um em relação ao outro. Em algumas modalidades, uma vacina é administrada simultaneamente (por exemplo, em uma mistura) em relação a um modulador imune, mas sequênciasespecialmente em relação a um ou mais moduladores imunes adicionais. A coadministração da vacina e dos moduladores imunes pode incluir casos em que a vacina e pelo menos um modulador imune são administrados para que cada um esteja presente no sítio de administração, como linfonodo que drena a vacina, ao mesmo tempo, mesmo que o antígeno e os moduladores imunes não sejam administrados simultaneamente. A administração concomitante da vacina e dos moduladores imunes também pode incluir casos em que a vacina ou o modulador imune é liberado do sítio de administração, mas pelo menos um efeito celular da vacina liberada ou do modulador imune persiste no sítio de administração, como linfonodo de drenagem da vacina, pelo menos até que um ou mais moduladores imunes adicionais sejam administrados ao sítio de administração. Nos casos em que uma vacina de ácido nucleico é administrada em combinação com uma CpG, a vacina e a CpG podem estar contidas em uma única formulação e administradas juntas por qualquer método adequado. Em algumas modalidades, a vacina de ácido nucleico e CpG em uma coformulação (mistura) são administradas por injeção intramuscular em combinação com eletroporação.

[00523] Em algumas modalidades, o modulador imune é um inibidor de ISC. Exemplos de inibidores de ISC incluem (1) inibidores de proteína cinase, como asimatinibe, sorafenibe, lapatinibe, BIRB-796 e AZD-1152, AMG706, Zactima (ZD6474), MP-412, sorafenibe (BAY 43- 9006), dasatinibe, CEP -701 (lestaurtinib), XL647, XL999, Tykerb (lapatinibe), MLN518, (anteriormente conhecido como CT53518), PKC412, ST1571, AEE 788, OSI-930, OSI-817, malato de sunitinibe (Sutent), axitinibe (AG-013736), erlotinibe, gefitinibe, axitinibe, bosutinibe, tensirolismo e nilotinibe (AMN107) Em algumas modalidades particulares, o inibidor de tirosina-cinase é sunitinibe, sorafenibe ou um sal ou derivado farmaceuticamente aceitável (como um malato ou um tosilato) de sunitinibe ou sorafenibe; (2) inibidores da ciclooxigenase-2 (COX-2), tais como celecoxibe e rofecoxibe; (3) inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (PDE5), como avanafil, lodenafil, mirodenafil, sildenafil, tadalafil, vardenafil, udenafil e zaprinaste, (4) reticuladores de DNA, como ciclofosfamida, (5) inibidores da PARP, como talazoparibe, e (6) inibidores de CDK, como palbocicliclibe.

[00524] Em algumas modalidades, o modulador imune que é usado em combinação com uma composição de ácido nucleico é um realçador de IEC. Dois ou mais realçadores de IEC podem ser usados juntos. Exemplos de realçadores de IEC que podem ser utilizados incluem: (1) agonistas de TNFR, como agonistas de OX40, 4-1BB (como BMS-663513), GITR (como TRX518) e CD40 (como anticorpos agonísticos de CD40); (2) inibidores de CTLA-4, como Ipilimumabe e Tremelimumabebe; (3) agonistas de TLR, como CpG 7909 (5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTTS'), CcpG 24555 (5'

TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT3' (CpG 24555); e CpG 10103 (5' TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT3'); (4) inibidores de proteína 1 de morte — celular programada — (PD-1)) como nivolumabe e pembrolizumabe; e (5) inibidores de PD-L1, como atezolizumabe, durvalumabe e velumabe; e (6) inibidores de IDO1.

[00525] Em algumas modalidades, o realçador de IEC é o anticorpo agonista de CD40, que pode ser um anticorpo anti-CD40 quimérico humano, humanizado ou parcialmente humano. Exemplos de anticorpos agonistas de CD40 específicos incluem o anticorpo monoclonal G28-5, mAb89, EA-5 ou S2C6 e CP870,893. CP-870,893 é um anticorpo monoclonal CD40 agonístico totalmente humano (mAb) que foi investigado clinicamente como uma terapia antitumoral. À estrutura e preparação de CP870.893 é descrita no documento WO2003041070 (em que o anticorpo é identificado pelo "21.4.1" identificado interno e as sequências de aminoácidos da cadeia pesada e da cadeia leve do anticorpo são estabelecidas na SEQ ID NO: 40 e SEQ |D NO: 41, respectivamente). Para uso em combinação com uma composição presente na descrição, o CP-8/0.893 pode ser administrado por qualquer via adequada, como injeção intradérmica, subcutânea ou intramuscular. A quantidade eficaz de CP870893 está geralmente na faixa de 0,01 - 0,25 mg/kg. Em alguma modalidade, o CP870893 é administrado em uma quantidade de 0,05 - 0,1 mg/kg.

[00526] Em algumas outras modalidades, o realçador de IEC é um inibidor de CTLAH4, como lIpilimumabe e Tremelimumabebe. O ipilimumabe (também conhecido como MEX-010 ou MDX-101), comercializado como YERVOY, é um anticorpo CTLA-4 anti-humano humano. O ipilimumabe também pode ser referido pelo seu registro CAS nº 477202-00-9 e é descrito como anticorpo 10DI na publicação PCT nº WO 01/14424. O tremelimumabe (também conhecido como CP-675.206) é um anticorpo monoclonal de IgG2 totalmente humano e possui o número CAS 745013-59-6. O tremelimumabe é descrito na Patente US No: 6.682.736, incorporada aqui por referência na sua totalidade, onde é identificado como anticorpo 11.2.1 e as sequências de aminoácidos de sua cadeia pesada e cadeia leve são estabelecidas nas SEQ ID NOs: 42 e 43, respectivamente. Para uso em combinação com uma composição fornecida pela presente descrição, Oo Tremelimumabe pode seroadministrada localmente, particularmente por via intradérmica ou subcutânea. A quantidade eficaz de tremelimumabe administrada por via intradérmica ou subcutânea está tipicamente na faixa de 5 a 200 mg/dose por pessoa. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz de Tremelimumabe está na faixa de - 150 mg/dose por pessoa, por dose. Em algumas modalidades particulares, a quantidade eficaz de Tremelimumabe é de cerca de 10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 ou 200 mg/dose por pessoa.

[00527] Em algumas outras modalidades, o modulador imune é um inibidor de PD-1 ou inibidor de PD-L1. Exemplos de inibidores de PD-1 incluem nivolumabe (nome comercial Opdivo), pembrolizumabe (nome comercial Keytruda), RN888 (anticorpo anti-PD-1), pidilizumabe (Cure Tech, AMP-224 (GSK), AMP-514 (GSK), e PDROO01 (Novartis). Os exemplos de inibições de PD-L1 incluem atezolizumabe (mAbs específicos para PD-L1; nome comercial Tecentriq), durvalumabe (mAbs específicos para PD-L1; nome comercial Imfinzi) e avelumabe (mAbs específicos para PD-L1 ; nome comercial Bavencio) e BMS- 936559 (BMS) .Veja também Okazaki T et al, International Immunology (2007); 19,7: 813-824 e Sunshine J et al, CurrOpinPharmacol. 2015 ago; 23: 32 -8). Em alguma modalidade específica, o inibidor de PD-1 é RN888. O RN888 é um anticorpo monoclonal que se liga especificamente ao PD-1. O RN888 é descrito na publicação do pedido de patente internacional WO2016/092419, na qual o anticorpo é identificado como mAb7 tendo uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de SEQ ID NO: 29 e sequência de aminoácidos de cadeia leve de SEQ ID NO: 39

[00528] Em outras modalidades, o modulador imune é um inibidor da indoleamina 2,3-dioxigenase 1 (também conhecido como "IDO1"). Verificou-se que o IDO1 modula a função das células imunes para um fenótipo supressor e, portanto, acredita-se que seja parcialmente responsável pela fuga de tumores da vigilância imune do hospedeiro. A enzima degrada o aminoácido essencial triptofano em quinurenina e outros metabólitos. Verificou-se que esses metabólitos e a escassez de triptofano levam à supressão da função efetiva das células Te à diferenciação aumentada das células T reguladoras. Os inibidores de IDO1 podem ser moléculas grandes, como um anticorpo, ou uma molécula pequena, como um composto químico.

[00529] Em algumas modalidades particulares, a composição de polipeptídeo ou ácido nucleico fornecida pela presente descrição é usada em combinação com um inibidor de IDO1 derivado de 1,2,5- oxadiazol descrito em WO2010/005958. Exemplos de inibidores específicos de IDO1 derivado de 1,2,5-oxadiazol| incluem os seguintes compostos:

[00530] — 4-((2-[(aminossulfonil)amino] etilkamino)-N-(3-bromo-4- fluorofenil)-N'-hidróxi-1,2,5-oxadiazo|-3-carboximidamida;

[00531] 4((2 [(aminossulfonil)amino] etilkamino)-N-(3-cloro-4- fluorofenil)-N'-hidróxi-1,2,5-oxadiazol 3-carboximidamida;

[00532] 4-((2 [(aminossulfoni)amino] etillamino)-N-[4-fluoro-3- (trifluorometil) fenil]-N'-hidróxi-1,2,5 oxadiazol-3-carboximidamida;

[00533] 4-((2 [(aminossulfonil)amino] etilkamino)-N'-hidróxi-N-[3- (trifluorometil) fenil]-1,2,5 oxadiazol-3-carboximidamida;

[00534] 4-((2 [(aminossulfonijamino] etilkamino)-N-(3-ciano-4- fluorofenil)-N'-hidróxi-1,2,5-oxadiazol 3-carboximidamida;

[00535] 4-(62 [(aminossulfonil)amino] etil<kamino)-N-[(4-bromo-2-furil)

metil]-N'-hidróxi-1,2,5 oxadiazol-3-carboximidamida; ou

[00536] 4-(62 [(aminossulfonil)amino] etilkamino)-N-[(4-cloro-2-furil) metil]-N'-hidróxi-1,2,5 oxadiazol-3-carboximidamida.

[00537] Os inibidores de IDO1 do derivado de 1,2,5-0xadiazol são normalmente administrados por via oral uma ou duas vezes por dia e a quantidade eficaz por administração oral está geralmente na faixa de mg a 1000 mg por dose por paciente, como 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg ou 1000 mg. Em uma modalidade específica, a composição de polipeptídeo ou ácido nucleico fornecida pela presente descrição é usada em combinação com 4-((2-[(aminosulfonil)amino] etilkamino)-N-(3-bromo- 4-fluorofenil)-N'-hidróxi-1,2,5-0xadiazol-3-carboximidamida administrada por via oral duas vezes por dia a 25 mg ou 50 mg por dose. Os derivados de 1,2,5-oxadiazol podem ser sintetizados como descrito na Patente U.S. No. 8.088.803, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade.

[00538] Em algumas outras modalidades específicas, a composição de polipeptídeo ou ácido nucleico fornecida pela presente descrição é usada em combinação com um inibidor de IDO1 derivado de pirrolidina-2,5-diona descrito em WOZ2015/173764. Exemplos de inibidores específicos de derivados de pirrolidina-2,5-diona incluem os seguintes compostos:

[00539] —3-(5-fluoro-1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona;

[00540] — (3-2H)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona;

[00541] — (-)-(R)-3-(5-fluoro-1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona;

[00542] —3-(1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona;

[00543] — (-)-(R)-3-(1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona;

[00544] —3-(5-cloro-1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona;

[00545] — (-)-(R)-3-(5-cloro-1H-indol-3-il)pirrolidino-2,5-diona;

[00546] 3-(5-bromo-1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona;

[00547] — 3-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona; e

[00548] — 3-(6-cloro-1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona.

[00549] Os inibidores de IDO1 do derivado da pirrolidina-2,5-diona são tipicamente administrados por via oral uma ou duas vezes por dia e a quantidade eficaz por administração por via oral está geralmente na faixa de 50 mg - 1000 mg por dose por paciente, como 125 mg, 250 mg, 500 mg, 750 mg ou 1000 mg. Em uma modalidade específica, a composição de polipeptídeo ou ácido nucleico fornecida pela presente descrição é usada em combinação com 3-(5-fluoro-1H-indol-3- i)pirrolidina-2,5-diona administrada por via oral uma vez por dia a 125 -100 mg por dose por paciente. Os derivados de pirrolidina-2,5-diona podem ser sintetizados como descrito na publicação do pedido de patente U.S. US2015329525, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. G. EXEMPLOS

[00550] Os exemplos a seguir são fornecidos para ilustrar certas modalidades da invenção. Eles não devem ser interpretados de forma a limitar o escopo da invenção. A partir da discussão acima e desses exemplos, alguém versado na técnica pode determinar as características essenciais da invenção e, sem se afastar do espírito e do escopo, pode fazer várias alterações e modificações da invenção para adaptá-la a vários usos e condições. EXEMPLO 1. CONSTRUÇÃO DE PLASMÍDEOS QUE CONTÊM UMA

CONSTRUÇÃO DE ANTÍGENO ÚNICO OU CONSTRUÇÃO DE MÚLTIPLOS ANTÍGENOS

[00551] O Exemplo 1 ilustra a construção de vetores plasmídicos contendo uma construção de antígeno único, uma construção de antígeno duplo ou uma construção de antígeno triplo. A menos que indicado de outra forma, a referência a posições ou resíduos de aminoácidos da proteína MUC1, CEA e TERT refere-se à sequência de aminoácidos da proteína precursora da isoforma 1 da MUC1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 1, a sequência de aminoácidos da carcinoembrionária humana proteína precursora da isoforma 1 do antígeno (CEA), conforme estabelecido na SEQ ID NO: 2, e a sequência de aminoácidos da proteína precursora da isoforma 1 de TERT humana, conforme apresentado na SEQ ID NO: 3, respectivamente. As estruturas de alguns dos iniciadores utilizados nas construções de plasmídeos são fornecidas na Tabela 16. 1A. PLASMÍDEOS QUE CONTÊM UMA CONSTRUÇÃO DE

ANTÍGENO ÚNICO

[00552] —Plasmídeo 1027 (MUC1). O plasmídeo 1027 foi gerado utilizando as técnicas de síntese gênica e permuta de fragmentos de restrição. A sequência de aminoácidos da MUC1 humana com uma região VNTR de repetição em tandem 5X foi submetida ao GeneArt para otimização e síntese gênica. O gene que codifica o polipeptídeo foi otimizado para expressão, sintetizado e clonado. A estrutura de leitura aberta da MUC-1 foi excisada do vector GeneArt por digestão com Nhel e Bglll e inserida no plasmídeo pPJV7563 de digestão semelhante. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta (ORF) do plasmídeo 1027 é apresentada na SEQ ID NO: 4. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1027 é definida na SEQ ID NO: 5.

[00553] —Plasmídeo 1361 (CEA). O plasmídeo 1361 foi construído utilizando as técnicas de síntese gênica, PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica a sequência de referência CEA foi otimizado para códon para expressão em DNA2.0. A sequência que codifica os aminoácidos 2-702 foi amplificada por PCR com os iniciadores ID1361-1362 PCRF e ID1361-1362 PCRR. O amplicon foi clonado nos sítios Nhel/Bglll de pPJV7563 por clonagem Seamless. À sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo

1361 é apresentada na SEQ ID NO: 14. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1361 é definida na SEQ ID NO: 15.

[00554] —Plasmídeo 1386 (mMCEA). O plasmídeo 1386, que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico ligado à membrana (mCEA), foi construído usando as técnicas de PCR e clonagem Seamiless. Primeiro, o fragmento de gene que codifica os aminoácidos de CEA 2- 144 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1361 com os iniciadores f pmed CEA SS e r CEA D1. Em segundo lugar, o fragmento de gene que codifica os aminoácidos de CEA 323-702 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1361 com os iniciadores de CEA D1-D4 e CEA GPI rmedido. Os amplicons foram ligados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1386 é apresentada na SEQ ID NO: 16. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1386 é definida na SEQ ID NO: 17.

[00555] —Plasmídeo 1390 (cCEA). O plasmídeo 1390, que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico citoplasmático (cCEA), foi construído usando as técnicas de PCR e clonagem Seamiless. Primeiro, o fragmento de gene que codifica os aminoácidos de CEA 35-144 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1361 com os iniciadores f pmed CEA D1 er CEA D1. Em segundo lugar, o fragmento de gene que codifica os aminoácidos de CEA 323-677 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1361 com os iniciadores f CEA D1-D4 e CEA D7 reduzidos. Os amplicons foram ligados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1390 é apresentada na SEQ ID NO: 18. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1390 é definida na SEQ ID NO: 19.

[00556] Plasmídeo 1065 (Comprimento total TERT D712A/V713I). O plasmídeo 1065 foi gerado utilizando as técnicas de síntese gênica e permuta de fragmentos de restrição. A sequência de aminoácidos do TERT humano com duas mutações (D712A/V713I) projetadas para inativar a atividade enzimática foi submetida ao DNA2.0 para otimização e síntese gênica. O gene que codifica o polipeptídeo foi otimizado para expressão, sintetizado e clonado. A estrutura de leitura aberta TERT foi excisada do vector DNA2.0 por digestão com Nhel e Balll e inserida no plasmídeo pPJV7563, digerido de forma semelhante. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1065 é definida na SEQ ID NO: 81. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta (ORF) do plasmídeo 1065 é apresentada na SEQ ID NO: 82.

[00557] —Plasmídeo 1112 (TERT240). O plasmídeo 1112 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos de TERT 241-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1065 com os iniciadores f pmed TERT 241G e r TERT co & pMed. O amplicon foi clonado nos sítios Nhel/Bglll de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1112 é apresentada na SEQ |D NO: 8. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1112 é definida na SEQ ID NO: 9.

[00558] —Plasmídeo 1197 (cCMUC1). O plasmídeo 1197, que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico citoplasmático (CMUC1), foi construído usando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos de MUC1 22-225, 946- 1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1027 com os iniciadores ID1197F e ID1197R. O amplicon foi clonado nos sítios Nhel/Bglll de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1197 é apresentada na SEQ |D NO: 6. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1197 é definida na SEQ ID NO: 7.

[00559] — Plasmídeo 1326 (TERT343). O plasmídeo 1326 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos de TERT 344-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1112 com os iniciadores TertA343-F e Tert-R. O amplicon foi clonado nos sítios Nhel/Bglll de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1326 é apresentada na SEQ ID NO: 10. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1326 é definida na SEQ ID NO: 11.

[00560] Plasmídeo 1330 (TERT541). O plasmídeo 1330 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos de TERT 542-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1112 com os iniciadores TertA541-F e Tert-R. O amplicon foi clonado nos sítios Nhel/Bglll de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1330 é apresentada na SEQ ID NO: 12. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1330 é definida na SEQ ID NO: 13. 1B. PLASMÍDEOS QUE CONTÊM UMA CONSTRUÇÃO DUPLO

ANTÍGENO

[00561] Plasmídeo 1269 (Muc1-Tert240). O plasmídeo 1269 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1112 com os iniciadores f tg link Ter240 e r pmed Bal Ter240. O gene que codifica os aminoácidos humanos da mucina-2 2-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1027 com os iniciadores f pmed Nhe Muc e r link muc. A PCR resultou na adição de um ligante GGSGG sobreposto na extremidade 5' de Tert e na extremidade 3' de Muc1. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl |l de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1269 é apresentada na SEQ ID NO: 20. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1269 é definida na SEQ ID NO: 21.

[00562] Plasmídeo 1270 (Muc1 - ERB2A - Tert240). O plasmídeo 1270 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1112 com os iniciadores f2 ERBV2A, f1 ERBV2A Ter240 e r pmed Bgl Ter240. O gene que codifica os aminoácidos humanos da mucina-2 2-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1027 com os iniciadores f pmed Nhe Muc e r ERB2A Bamh Muc. A PCR resultou na adição de sequências ERBV 2A sobrepostas na extremidade 5' de Tert e na extremidade 3' de Muc1. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1270 é apresentada na SEQ ID NO: 22. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1270 é definida na SEQ ID NO: 23.

[00563] Plasmídeo 1271 (Tert240 - ERB2A - Muc1). O plasmídeo 1271 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1112 com os iniciadores f pmed Nhe Ter240 e r ERB2A Bamh Ter240. O gene que codifica os aminoácidos humanos da mucina-2 2-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1027 com os iniciadores f2 ERBV2A, f1 ERBV2A Muc e r pmed BglMuc. A PCR resultou na adição de sequências ERBV 2A sobrepostas na extremidade 3' de Tert e na extremidade 5' de Muc1. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1271 é apresentada na SEQ ID NO: 24. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1271 é definida na SEQ ID NO: 25.

[00564] —Plasmídeo 1286 (cMuc1 - ERB2A - Tert240). O plasmídeo 1286 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1112 com os iniciadores f2 ERBV2A, f1 ERBV2A Ter240 e r pmed Bgl Ter240. O gene que codifica os aminoácidos humanos da mucina-1 22-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1197 com os iniciadores f pmed Nhe cytMuc e r ERB2A Bamh Muc. A PCR resultou na adição de sequências ERBV 2A sobrepostas na extremidade 5' de Tert e na extremidade 3' de Muc1. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1286 é apresentada na SEQ ID NO: 26. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1286 é definida na SEQ ID NO: 27.

[00565] —Plasmídeo 1287 (Tert240 - ERB2A - cMuc1). O plasmídeo 1287 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1112 com os iniciadores f pmed Nhe Ter240 e r ERB2A Bamh Ter240. O gene que codifica os aminoácidos humanos da mucina-1 22-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1197 com os iniciadores f2 ERBV2A, f1 ERBV2A cMuc e r pmed BglMuc. A PCR resultou na adição de sequências ERBV 2A sobrepostas na extremidade 3' de Tert e na extremidade 5' de Muc1. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1287 é apresentada na SEQ ID NO: 28. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1287 é definida na SEQ ID NO: 29.

[00566] Plasmídeo 1409 (Muc1 - EMC2A - mCEA). O plasmídeo 1409 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos da mucina-1 humana 2-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1027 com os iniciadores f pmed Nhe Muc e r EM2A Bamh Muc. O gene que codifica os aminoácidos de CEA 2-144, 323-702 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1386 com os iniciadores f2 EMCV?A, f1 EMC2a CEAss e CEA GPI rm pmed. A PCR resultou na adição de sequências EMCV 2A sobrepostas na extremidade 5' de CEA e na extremidade 3' de Muc1. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1409 é apresentada na SEQ ID NO: 30. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1409 é definida na SEQ ID NO: 31.

[00567] — Plasmídeo 1410 (mMCEA - T2A - Muc1). O plasmídeo 1410 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamiless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos de CEA 2-144, 323-702 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1386 com os iniciadores f pmed CEA SS e r T2A CEA. O gene que codifica os aminoácidos humanos da mucina-2 2-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1027 com os iniciadores f2 T2A 63, f1 T2a Mucer pmed Bgl Muc. A PCR resultou na adição de sequências T2A sobrepostas na extremidade 3' de CEA e na extremidade 5' de Muc1.

Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1410 é apresentada na SEQ ID NO: 32. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1410 é definida na SEQ ID NO: 33.

[00568] Plasmídeo 1411 (mMCEA - Furina - T2A - Muc1). O plasmídeo 1411 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos de CEA 2-144, 323-702 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1386 com os iniciadores f pmed CEA SS e r T2A furina CEA. O gene que codifica os aminoácidos humanos da mucina-2 2-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1027 com os iniciadores f2 T2A 63, f1 T2a Muc e r pmed BalMuc. A PCR resultou na adição do sítio de clivagem da furina sobreposto e sequências T2A na extremidade 3' da CEA e na extremidade 5' da Muc1. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1411 é apresentada na SEQ ID NO: 34. À sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1411 é definida na SEQ ID NO: 35.

[00569] Plasmídeo 1431 (Muc1 - EMC2A - cCEA). O plasmídeo 1431 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos da mucina-1 humana 2-225, 946-1255 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1027 com os iniciadores f pmed Nhe Muc e r EM2A Bamh Muc. O gene que codifica os aminoácidos de CEA 35-144, 323-677 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1390 com os iniciadores f2 EMCV?2A, f EMC2a CEA di e r pmed CEA D7. A PCR resultou na adição de sequências EMCV 2A sobrepostas na extremidade 5' de CEA e na extremidade 3' de Muc1. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1431 é apresentada na SEQ ID NO: 36. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1431 é definida na SEQ ID NO: 37.

[00570] Plasmídeo 1432 (cCEA - T2A - Tert240). O plasmídeo 1432 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos de CEA 35-144, 323-677 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1390 com os iniciadores f pmed CEA D1 er r T2a CEA D7. O gene que codifica os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foi amplificado por PCR do plasmídeo 1112 com os iniciadores f2 T2A 63, f1 T2A Tert40 e r pmed Bgl Ter240. A PCR resultou na adição de sequências de TAV 2A sobrepostas na extremidade 5' de Tert e na extremidade 3' de CEA. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1432 é apresentada na SEQ ID NO: 38. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1432 é definida na SEQ ID NO: 39.

[00571] — Plasmídeo 1440 (Tert240 - ERAZA - mCEA). O plasmídeo 1440 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, o gene que codifica os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1112 com os iniciadores f pmed Nhe tert240 e r ERA2A Tert. O gene que codifica os aminoácidos de CEA 2-144, 323-702 foi amplificado por PCR a partir do plasmídeo 1386 com os iniciadores f2 ERAV?2A, f1 ERA2ZA ssCEA e CEA GPI remetido. A PCR resultou na adição de sequências de ERAV 2A sobrepostas na extremidade 3' de Tert e na extremidade 5' de CEA. Os amplicons foram misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl 1l de pPJV7563 por clonagem Seamless.

A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1440 é apresentada na SEQ ID NO: 40. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1440 é definida na SEQ ID NO: 41. 1C. PLASMÍDEOS QUE CONTÊM UMA CONSTRUÇÃO DE

ANTÍGENOS TRIPLOS

[00572] Plasmídeo 1424 (Muci - ERB2A - Tert240 - ERAZA - mCEA). O plasmídeo 1424 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, os genes que codificam os aminoácidos de Mucina-1 humana 2-225, 946-1255, um peptídeo de ERBV 2A e a metade do terminal amino do Tert240 humano foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1270 com os iniciadores f pmed Nhe Muc e o código 1602-1579. Os genes que codificam a metade do terminal carbóxi de Tert240, um peptídeo de ERAV 2A e os aminoácidos de CEA 2-144, 323-702 humanos foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1440 com os iniciadores f tert 1584 -1607 e r pmed CEA GPI. Os amplicons parcialmente sobrepostos foram digeridos com Dpnl, misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1424 é apresentada na SEQ ID NO: 42. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1424 está definida na SEQ ID NO: 43.

[00573] Plasmídeo 1425 (mCEA - T2A - Muc1i - ERB2A - Tert240). O plasmídeo 1425 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, os genes que codificam os aminoácidos de CEA humano 2-144, 323-702, um peptídeo de TAV 2A e a metade do terminal amino da mucina-1 humana foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1410 com os iniciadores de CEA SS e r muc 986 -

963. Os genes que codificam a metade do terminal carbóxi da mucina- 1 humana, um peptídeo de ERBV 2A e os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1270 com os iniciadores fMuc 960 - 983 e r pmed Bgl Ter240. Os amplicons parcialmente sobrepostos foram digeridos com Dprnl, misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl |l de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1425 é apresentada na SEQ ID NO: 44. À sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1425 é definida na SEQ ID NO: 45.

[00574] Plasmídeo 1426 (Tert240 - ERB2A - Muc1i - EMC2A - mCEA). O plasmídeo 1426 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, os genes que codificam os aminoácidos da telomerase humana 241-1132, um peptídeo de ERBV 2A e a metade do terminal amino da mucina-1 humana foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1271 com os iniciadores f pmed Nhe Ter240 e r muc 986 - 963. Os genes que codificam a metade do terminal carbóxi da Mucin-1 humana, um peptídeo de EMCV 2A e os aminoácidos de CEA 2-144, 323-702 foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1409 com os iniciadores f Muc 960 - 983 e CEA GPI rmed. Os amplicons parcialmente sobrepostos foram digeridos com Dpnl, misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1426 é apresentada na SEQ ID NO: 46. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1426 é definida na SEQ ID NO: 47.

[00575] Plasmídeo 1427 (Tert240 - ERA2A - mCEA - T2A - Muc1). O plasmídeo 1427 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, os genes que codificam os aminoácidos da telomerase humana 241-1132, um peptídeo ERAV 2A e a metade do terminal amino do mCEA foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1440 com os iniciadores f pmed Nhe Ter240 e R CEA SR2.

Os genes que codificam a metade do terminal carbóxi do mMCEA, um peptídeo de TAV 2A e aminoácidos da mucina-1 humana 2-225, 946- 1255 foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1410 com os iniciadores f cCEA 562-592 e r pmed BaglMuc. Os amplicons parcialmente sobrepostos foram digeridos com Dpnl, misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1427 é apresentada na SEQ ID NO: 48. A sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1427 é definida na SEQ ID NO: 49.

[00576] Plasmídeo 1428 (Muc1i - EMC2A - cCEA - T2A - Tert240). O plasmídeo 1428 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, os genes que codificam aminoácidos de Mucina-1 humana 2-225, 946-1255, um peptídeo de EMCV 2A e a metade do terminal amino de cCEA foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1431 com os iniciadores f pmed Nhe Mucand r cCEA 849-820. Os genes que codificam a metade do terminal carbóxi do cCEA, um peptídeo de TAV 2A e os aminoácidos da telomerase humana 241-1132 foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1432 com os iniciadores f CEA 833-855 e r pmed Bal Ter240. Os amplicons parcialmente sobrepostos foram digeridos com Dprnl, misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl |l de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1428 é apresentada na SEQ ID NO: 50. À sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1428 é definida na SEQ ID NO: 51.

[00577] Plasmídeo 1429 (cCEA - T2A - Tert240 - ERB2A - Muc1). O plasmídeo 1429 foi construído utilizando as técnicas de PCR e clonagem Seamless. Primeiro, os genes que codificam os aminoácidos de CEA humano 35-144, 323-677, um peptídeo de TAV 2A e a metade do terminal amino de Tert240 humano foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1432 com os iniciadores f CEM D1 e r tert 1602-

1579. Os genes que codificam a metade do terminal carbóxi de Tert240 humano, um peptídeo de ERBV 2A e os aminoácidos humanos Mucin-1 2-225, 946-1255 foram amplificados por PCR a partir do plasmídeo 1271 com os iniciadores f tert 1584 -1607 e r pmed Bgl Muc. Os amplicons parcialmente sobrepostos foram digeridos com Dpnl, misturados e clonados nos sítios Nhel/Bgl Il de pPJV7563 por clonagem Seamless. A sequência de nucleotídeo da estrutura de leitura aberta do plasmídeo 1429 é apresentada na SEQ ID NO: 52. À sequência de aminoácidos codificada pelo plasmídeo 1429 é definida na SEQ ID NO: 53. 1D. CONSTRUÇÃO VETORIAL

[00578] Este exemplo ilustra a construção de vetores transportando uma construção de antígenos múltiplos. Os vetores portadores da mesma construção de antígeno triplo (estrutura de leitura aberta) que o transportado por cada um dos plasmídeos 1424, 1425, 1426, 1427, 1428 e 1429 foram construídos a partir de sequências genômicas AdC68 de adenovírus de chimpanzé, conforme descrito na publicação de pedido de patente internacional WO2015/063647. Esses vetores são referidos como AdC68Y-1424, AdC68Y-1425, AdC68Y-1426, AdC68Y-1427, AdC68Y-1428 e AdC68Y-1429, respectivamente. As organizações desses vetores são fornecidas na FIGURA 1

[00579] A sequência genômica de tamanho natural de AdC68 está disponível no Genbank com o Número de Acesso AC 000011.1 e também é fornecida no documento WOZ2015/063647. A cadeia principal AdC68 sem transgenes (o "vetor vazio") foi projetado in silico com deleções E1 e E3 projetadas no vírus para tornar sua replicação incompetente e criar espaço para a inserção de transgene. O vetor AdC68Y, com deleções das bases 456-3256 e 27476-31831, foi projetado para ter melhores propriedades de crescimento em relação aos vetores AdC68 anteriores. O vetor vazio foi sintetizado bioquimicamente em um processo de múltiplos estágios utilizando a síntese de oligo in vitro e a montagem intermediária subsequente mediada por recombinação como cromossomas artificias em Escherichia coli (E. coli) e/ou levedura. As estruturas de leitura abertas que codificam os vários polipeptídeos de TAA imunogênicos foram amplificados por PCR a partir dos plasmídeos 1424, 1425, 1426, 1427, 1428 e 1429, usando os conjuntos de iniciadores Muc1-20bp-F- 98/MCEA-20bp-R-100, Y-MCEA- S2/Y-Tert-A2, Y-Tert-S/Y-CEA-A, Y- Tert-S/Y-MUC-A, Y-MUC-S2/Y-Tert-A2 e cCEA-20bp-F -106/Muc1- 20BP-R-108, respectivamente. Os amplicons foram então inseridos na cadeia principal do vetor vazio. Os genomas virais recombinantes foram liberados dos cromossomas artificiais bacterianos por digestão com Pacl e os ácidos nucleicos linearizados foram transfectados para uma linhagem celular HEK293 aderente que complementa E1. Após efeitos citopáticos visíveis e formação de focos de adenovírus, as culturas foram colhidas por várias rodadas de congelamento/descongelamento para liberar o vírus das células. Os vírus foram amplificados e purificados por técnicas padrão. EXEMPLO 2. IMUNOGENICIDADE DE CONSTRUÇÕES DE ANTÍGENOS ÚNICOS DE MUC1 Estudo em Camundongos HLA-A2/DR1

[00580] Plano de estudo. Doze camundongos HLA-A2/DR1 de gênero misto foram iniciados no dia O e potencializados no dia 14 com a construção de DNA Plasmídeo 1027 (que codifica o polipeptídeo de MUC1 imunogênico ligado à membrana da SEQ ID NO: 5) ou Plasmídeo 1197 (que codifica o polipeptíideo de MUC1 imunogênico citosólico da SEQ ID NO: 7) usando o método PMED. No dia 21, os camundongos foram sacrificados e os esplenócitos avaliados quanto à imunogenicidade celular específica de MUC1 em um ELISpot interferon-gama (IFN-y) e no ensaio de manchamento por citocina intracelular (ICS).

[00581] Liberação epidérmica mediada por partículas (PMED). A PMED é um método sem agulha de administrar vacinas a animais ou a pacientes. O sistema PMED envolve a precipitação de DNA em partículas microscópicas de ouro que são então impulsionadas pelo gás hélio para a epiderme. O ND10, um dispositivo de uso único, usa hélio pressurizado de um cilindro interno para fornecer partículas de ouro e o X15, um dispositivo de liberação repetidora, usa um tanque de hélio externo que é conectado ao X15 por meio de mangueira de alta pressão para fornecer as partículas de ouro. Ambos estes dispositivos foram utilizados em estudos para liberar os plasmídeos de DNA de MUC1. A partícula de ouro tinha geralmente 1-3 um de diâmetro e as partículas foram formuladas para conter 2 ug de plasmídeos de DNA de antígeno por 1 mg de partículas de ouro. (Sharpe, M. et al.: P. Protection of mice from H5N1 influenza challenge by prophylactic DNA vaccination using particle mediated epidermal delivery. Vaccine, 2007, 25(34): 6392-98: Roberts LK, et al.: Clinical safety and efficacy of a powdered Hepatitis B nucleic acid vaccine delivered to the epidermis by a commercial prototype device. Vaccine, 2005; 23(40):4867-78).

[00582] Ensaio IFN-y ELISpot Os esplenócitos de animais individuais foram coincubados em triplicata com peptídeos específicos de Ag individuais (cada peptídeo a 2-10ug/ml, 2,5-5e5 células por cavidade) ou conjuntos de peptídeos específicos de Ag de 15mer (sobreposição de 11 aminoácidos, cobrindo a sequência de aminoácidos específica de Ag inteira; consulte a Tabela 15; cada peptídeo a 2-5 pg/ml, 1,25-5e5 células por cavidade) em placas IFN- ELISpot. As placas foram incubadas por — 16 horas a 37 (C, 5% de

CO», depois lavadas e desenvolvidas, conforme as instruções do fabricante. O número de células formadoras de ponto IFN-y (SFC) foi contado com um leitor CTL. A média das triplicatas foi calculada e a resposta das cavidades de controle negativo, que não continham peptídeos, subtraída. As contagens de SFC foram então normalizadas para descrever a resposta por 1e6 esplenócitos. As respostas específicas de antígeno nas tabelas representam a soma das respostas aos peptídeos específicos de Ag ou conjuntos de peptídeos.

[00583] Ensaio ICS. Os esplenócitos de animais individuais foram coincubados com peptídeos específicos de Ag restritos a H-2b-, HLA- A2- ou HLA-A2A4 (cada peptídeo a 5-10 ug/ml, 1-2e6 esplenócitos por cavidade) ou grupos de 15mer Peptídeos específicos de Ag (sobreposição de 11 aminoácidos, cobrindo toda a sequência de aminoácidos específicos de Ag; consulte a Tabela 15; cada peptídeo a 2-5 pg/ml, 1-2e6 esplenócitos por cavidade) nas placas de cultura de tecidos em placa de 96 cavidades de fundo em U. As placas foram incubadas — 16 horas a 37 C, 5 % de CO». As células foram então coradas para detectar a expressão de IFN-y intracelular a partir de células T CD8* e fixadas. As células foram adquiridas em um citômetro de fluxo. Os dados foram apresentados por animal como frequência de células T IFN-y/ CD8* específicas de Ag de pool de peptídeo ou de Ag de peptídeo (s) após subtração das respostas obtidas nas cavidades de controle negativo, que não continham peptídeo.

[00584] “Ensaio ELISA sanduíche. O teste ELISA sanduíche padrão foi realizado usando os instrumentos de automação TecanEvo, BiomekFxP" e BioTek 405 Select TS. As microplacas de 384 cavidades (cavidade plana, alta ligação) foram revestidas em 25 ul/cavidade com 1,0 ug/mL de proteína MUC1 humana ou CEA humana (antígeno) em 1X de PBS e incubadas durante a noite a 4 CC. Na ma nhã seguinte, as placas foram bloqueadas por uma hora em Temperatura Ambiente com 5 % de FBS em PBS com 0,05 % de Tween 20 (PBS-T). O soro de camundongo foi preparado a uma diluição inicial de 1/100 em PBS- T em placas de 96 cavidades com fundo em U. O Tecan Evo realizou diluições em série de 74 log em PBS-T ao longo de 9 pontos de incremento de diluição, seguido de carimbo de 25 ul/cavidade de soro diluído das placas de 96 cavidades para placas de 384 cavidades. As placas de 384 cavidades foram incubadas por 1 hora em Temperatura Ambiente em um agitador em 600 RPM; depois, usando a lavadora de placas BioTek EL 405 Select TS, as placas foram lavadas 4 vezes em PBS-T. O anticorpo secundário anti-lgG-HRP de camundongo foi diluído para uma diluição apropriada e carimbada por Biomek Fx” em ul/cavidade em placas de 384 cavidades, e incubado por 1 hora em Temperatura Ambiente em um agitador a 600 RPM, seguido de 5 lavagens repetidas. Utilizando o Biomek Fx”, as placas foram carimbadas em 25 ul/cavidade de substrato RT TMB e incubadas no escuro em Temperatura Ambiente por 30 minutos, seguidas por 25 ul/cavidade de carimbo de ácido H2SO,s 1N para interromper a reação enzimática. As placas foram lidas no Molecular Devices, Spectramax 340PC/384 Plus em 450 nm de comprimento de onda. Os dados foram relatados como títulos calculados em OD de 1,0 com um limite de detecção de 99,0. O anticorpo monoclonal comercial específico de antígeno foi utilizado em cada placa como um controle positivo para rastrear o desempenho da variação de placa a placa; soro de camundongo vacinado irrelevante foi usado como um controle negativo, e apenas cavidades de PBS-T foram usadas para monitorar o antecedente da ligação não específica. Os títulos nas tabelas representam títulos de IgG específicos de antígeno obtidos de animais individuais.

[00585] Resultados. A Tabela 1 mostra os dados de ELISpot e ICS dos esplenócitos HLA-A2/DR1 cultivados com pools de peptídeos derivados da biblioteca de peptídeos de MUC1 (ver Tabela 15) ou peptídeo MUC1 aa516-530, respectivamente.

Os números na coluna 3 representam pontos ft IFN-y/10º esplenócitos após a re-estimulação com pools de peptídeos de MUC1 e subtração antecedente.

Os números na coluna 4 representam a frequência de células T CD8* sendo IFN-y* após re-estimulação com o peptídeo MUC1 aa516-530 e subtração antecedente.

Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >100 e uma frequência de células T CD8* IFN-y* > 0,1 %. Como mostrado na Tabela 1, os polipeptídeos de MUC1 imunogênicos feitos com as construções de MUC1 ligadas à membrana (Plasmídeo 1027) e citosólicas (Plasmídeo 1197) de tamanho natural foram capazes de induzir respostas de células T específicas para MUC1, incluindo as respostas de células T CD8* específicas de peptídeo MUC1 aa516- 530 restritas a HLA-A2. O formato do antígeno MUC1 citosólico induziu a maior magnitude de respostas das células T.

É importante ressaltar que as respostas das células T derivadas de pacientes com câncer contra o peptídeo MUC1 aa516-530 demonstraram correlação com a eficácia antitumoral in vitro (Jochems C et al., Cancer Immunol Immunother (2014) 63:161-174) demonstrando a importância de aumentar as respostas celulares contra este epítopo específico.

Tabela 1. Resposta das células T induzida pelas construções de DNA de MUC1 de antígeno único (Plasmídeo 1027 e Plasmídeo 1197) em camundongos HLA-A2/DR1

Pontos * IFN- ID da % de células T

47106 Construção CD8* sendo IFN-y/

ae aa

Plasmídeo 1027

Pontos * IFN- ID da % de células T - 10º Construção CD8* sendo IFN-y" o e Rs Es mm a E o às E jm se Estudo em Camundongos HLA-A24

[00586] Projeto de estudo. Os camundongos HLA-A24 de gênero misto foram iniciados no dia O e reforçados nos dias 14, 28 e 42 com o construção de DNA Plasmídeo 1027 por administração de PMED. No dia 21, os camundongos foram sacrificados e os esplenócitos avaliados quanto à imunogenicidade celular específica para MUC1 (ELISpot).

[00587] Resultados. A Tabela 2 mostra os dados de ELISpot dos esplenócitos HLA-A2Z24 cultivados com pools de peptídeo derivados da biblioteca de peptídeo MUC1 (ver Tabela 15). Os números na coluna 3 representam pontos * IFN-y/10º esplenócitos após re-estimulação com pools de peptídeos de MUC1 e subtração antecedente. O número em negrito indica que pelo menos 1 pool de peptídeo testado era muito numeroso para contar, portanto, a figura real é pelo menos o valor indicado. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >100. Como mostrado na Tabela 2, a construção de MUC1 ligada à membrana foi capaz de induzir respostas celulares específicas para MUC1.

Tabela 2. Resposta de célula T induzida pela construção de DNA de antígeno único Plasmídeo 1027 que codifica o antígeno MUC1 ligado à membrana de tamanho natural nativo humano em camundongos HLA- A24 ID da (cormenção — ANITA penosa tonetatos

RE & Rm Estudo em Macacos

[00588] Projeto de estudo. 14 Macacos de cinomolgos de origem Chinesa foram iniciados com um vetor de adenovírus AdC68W que codifica o polipeptíideo de MUC1 citosólico (mesmo polipeptídeo codificado pelo Plasmídeo 1197) ou polipeptídeo de MUC1 ligado à membrana de tamanho natural (mesmo polipeptídeo codificado pelo Plasmídeo 1027) pelas partículas virais 2811 por injeção intramuscular bilateral (1mL total). 29 Dias depois, os animais foram reforçados com o Plasmídeo 1197 ou Plasmídeo 1027, liberado intramuscularmente bilateralmente por eletroporação (2 mL total). O anti-CTLAHA foi administrado subcutaneamente nos dias 1 (32 mg) e 29 (50 mg). 14 Dias após a última imunização, os animais foram sangrados e as PBMCs e os soros foram isolados para avaliar as respostas celulares específicas para MUC1 (ELISpot, ICS) e humorais (ELISA), respectivamente. O vetor de adenovírus AdC68W usado neste e em outros exemplos da presente descrição foi construído a partir do adenovírus de chimpanzé AdC68 de acordo com o método descrito no pedido de patente internacional WO2015/063647. Ensaios imunes específicos para NHP.

[00589] Ensaio ELISpot. As PBMC de animais individuais foram coincubadas em duplicado com pools de peptídeos específicos para Ag de 15mer (sobreposição de 11 aminoácidos, abrangendo toda a sequência de aminoácido específica para Ag), cada peptídeo em 2 ug/ml, células 4€5 por cavidade, em placas IFN-y ELISpot (ver Tabela 15). As placas foram incubadas por — 16 horas a 37ºC, 5 % de CO,, depois lavadas e desenvolvidas, conforme as instruções do fabricante. O número de células formadoras de ponto IFN-y (SFC) foi contado com uma leitorora CTL. A média das duplicatas foi calculada e a resposta das cavidades de controle negativo, que não continham peptídeos, subtraída. As contagens de SFC foram, então, normalizadas para descrever a resposta por 1e6 PBMCs. As respostas específicas de antígeno nas tabelas representam a soma das respostas aos pools de peptídeos específicos de Ag.

[00590] Ensaio ICS. As PBMCs de animais individuais foram coincubadas com pools de peptídeos de MUC1 de 15mer (sobreposição de 11 aminoácidos, abrangendo toda a sequência de aminoácido de MUC1 de tamanho natural nativa; ver Tabela 15), cada peptídeo em 2ug/mL, 1,5-226 PBMCs por cavidade, em placas de cultura de tecido de 96 cavidades com fundo em U. As placas foram incubadas por -16 horas a 37 CT, CO2 a 5 %, e depois coradas para detectar a expressão IFN-y intracelular de células T CD8. Após a fixação, as células foram adquiridas em um citômetro de fluxo. Os resultados são apresentados por animal individual como número de células T CD8* IFN-y” específicas para MUC1, CEA ou TERT após subtração das respostas obtidas nos cavidades de controle negativo, que não continham peptídeo, e normalizadas para células T CD8* 1e6.

[00591] Ensaio ELISA sanduíche. O teste ELISA sanduíche padrão foi realizado usando os instrumentos de automação Tecan Evo, BiomekFxº e BioTek 405 Select TS.

As microplacas de 384 cavidades (cavidade plana, alta ligação) foram revestidas em 25 ul/cavidade com 1,0 ug/mL de proteína MUC1 humana ou CEA humana (antígeno) em 1X de PBS e incubadas durante a noite a 4(C.

Na man hã seguinte, as placas foram bloqueadas por uma hora em Temperatura Ambiente com 5 % de FBS em PBS com 0,05 % de Tween 20 (PBS-T). Os soros de macacos cinomolgos de origem Chinesa foram preparados em uma diluição inicial de 1/100 em PBS-T em placas de 96 cavidades com fundo em U.

O Tecan Evo realizou diluições em série de 74 log em PBS-T ao longo de 9 pontos de incremento de diluição, seguido de carimbo de 25 ul/cavidade de soro diluído das placas de 96 cavidades para placas de 384 cavidades.

As placas de 384 cavidades foram incubadas por 1 hora em Temperatura Ambiente em um agitador em 600 RPM; depois, usando a lavadora de placas BioTek EL 405 Select TS, as placas foram lavadas 4 vezes em PBS-T.

O anticorpo anti-lgG- HRP rhesus secundário, que reage cruzadamente com o IgG de cinomolgos, foi diluído para uma diluição apropriada e carimbado por BiomekFxP em 25 pul/cavidade em placas de 384 cavidades, e incubado por 1 hora em Temperatura Ambiente em um agitador a 600 RPM, seguido por 5 lavagens repetidas.

Utilizando o BiomekFx”, as placas foram carimbadas em 25 ul/cavidade de substrato RT TMB e incubadas no escuro em Temperatura Ambiente por 30 minutos, seguidas por carimbo de 25 ul/cavidade de ácido H2SOs.

IN para interromper a reação enzimática.

As placas foram lidas no Molecular Devices, Spectramax 340PC/384 Plus a 450 nm de comprimento de onda.

Os dados foram relatados como títulos calculados em OD de 1,0 com um limite de detecção de 99,0. O anticorpo monoclonal comercial específico de antígeno foi utilizado em cada placa como um controle positivo para rastrear o desempenho da variação de placa a placa;

soro de camundongo vacinado irrelevante foi usado como um controle negativo, e apenas cavidades de PBS-T foram usadas para monitorar o antecedente de ligação não específico. Os títulos nas tabelas representam títulos de IgG específicos para o antígeno obtidos de animais individuais.

[00592] Resultados. A Tabela 3 mostra os dados de ELISpot e ICS de PBMCs de macacos cinomolgos de origem Chinesa cultivados com pools de peptídeos derivados da biblioteca de peptídeo de MUC1 (Tabela 15) e os dados de ELISA dos soros de macacos cinomolgos de origem Chinesa. Os números na coluna 3 representam pontos IFN-y/10º PBMCs após re-estimulação com pools de peptídeos de MUC1 e subtração antecedente. Os números na coluna 4 representam células T CD8* * IFN-y/106 células T CD8* após re-estimulação com pools de peptídeos de MUC1 e subtração antecedente. Os números na coluna 5 representam o título de IgG anti-MUC (Densidade Ótica (O.D) = 1, Limite de Detecção (L.O.D) = 99,0). Uma resposta positiva é definida como tendo SFC > 50, células T CD8* IFN-y*/1e6 células T CD8* >50, e títulos de IgG >99. Como mostrado na Tabela 3, os polipeptídeos de MUC1 imunogênicos produzidos com as construções de MUC1 citosólicas (Plasmídeo 1197) e ligadas à membrana de tamanho natural nativas (Plasmídeo 1027) foram capazes de induzir respostas de células T e B específicas para MUC1. A construção de MUC1 ligada à membrana de tamanho natural nativa (Plasmídeo 1027) demonstrou induzir a melhor resposta celular e humoral específica para MUC1 em geral. Tabela 3. Respostas de células T e B induzidas pelo vetor AGdC68W adenoviral de antígeno único e construções de DNA de antígeno único (Plasmídeo 1197; Plasmídeo 1027) em macacos cinomolgos de origem Chinesa

ID da pontos * IFN- | células T CD8* , Construção 4y1106 HIFN//1e6 Título de * esplenócitos | células T CD8* sô ra asse7 oo ses asse [ss fas jon esse | EXEMPLO 3. IMUNOGENICIDADE DE CONSTRUÇÕES DE

ANTÍGENO ÚNICO DE CEA Estudo da Resposta Imune em Camundongos Pasteur (HLA-A2/DR1)

[00593] Projeto de estudo. Camundongos HLA-A2/DR1 de gênero misto foram iniciados no dia O e reforçados no dia 14 com um plasmídeo contendo uma construção de antígeno único que codifica o polipeptídeo de CEA ligado à membrana (Plasmídeo 1386) ou citosólico (Plasmídeo 1390) humano por eletroporação. A resposta das células T específicas para o antígeno foi medida sete dias depois em um ensaio IFN-y ELISpot e ICS.

[00594] Resultados. A Tabela 4 mostra os dados de ELISpot e ICS dos esplenócitos HLA-A2/DR1 cultivados com pools de peptídeo derivados da biblioteca de peptídeos de CEA composta por aa1-699 para camundongos imunizados com a construção 1386 e aa37-679 (remoção da sequência sinal e sequência GPI) para camundongos imunizados com o Plasmídeo 1390 (ver também a Tabela 15). Os números nas colunas 3 e 4 representam pontos f& IFN-y/1e6 esplenócitos e a frequência de células T IFN-y' CD8* respectivamente, provocados após a re-estimulação com pools de peptídeos de CEA relevantes e subtração antecedente. A Tabela 5 mostra os dados de ELISpot de esplenócitos HLA-A2/DR1 cultivados com o peptídeo de CEA aa693-701. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >100 e uma frequência de células T CD8* IFN-y' > 0,1 %. Como mostrado na Tabela 4, os polipeptídeos de CEA imunogênicos feitos com as construções de CEA ligadas à membrana (Plasmídeo 1386) e citosólicas (Plasmídeo 1390) descritas no Exemplo 1A acima foram capazes de induzir respostas de célula T específicas de CEA. Magnitudes comparáveis de respostas de célula T específicas para CEA foram induzidas por ambos formatos de antígeno de CEA citosólico e ligado à membrana. Como mostrado na Tabela 5, a imunização com a construção 1386 ligada à membrana induziu uma resposta de célula T restrita ao HLA-A2 contra o peptídeo de CEA aa693-701, que demonstrou na literatura como sendo processado e apresentado por HLA-A2 (Conforti A et al. al., J. Inmunother (2009) 32:744-754).

Tabela 4. Resposta de célula T induzida por construções de DNA de antígeno único (Plasmídeos 1386 e 1390) que codificam o polipeptídeo de CEA citosólico humano ou ligado à membrana humano em camundongos HLA-A2/DR1

ID da pontos FIFNY | o, qo células T Construção no CD8* sendo IFN-y”

esplenócitos

Fo vsoaemiado

Tabela 5. Respostas de células T específicas do peptídeo de CEA aa693-701 restritas a HLA-A2 induzidas por construção de DNA de antígeno único que codifica polipeptídeo de CEA ligado à membrana humano (Plasmídeo 1386; mMCEA) em camundongos HLA-A2 [10 8 Consirução [ ArimalA | pontos FIFNIOTesplenáaios. | Plasmídeo 1386

[16 de Gonstração | Amimald T pontas AFIM splenónicos. | Estudo da Resposta Imune em Camundongos HLA A24

[00595] Projetos de estudo. Dezesseis camundongos HLA-A24 de gênero misto foram iniciados no dia O e reforçados no dia 14 com construções de DNA ligadas à membrana (Plasmídeo 1386) ou de CEA citosólico (Plasmídeo 1390) humanas por eletroporação de DNA. As respostas de célula T específicas para CEA foram medidas 7 dias após a última imunização em um ensaio IFN-y ELISpot e ICS.

[00596] Resultados. A Tabela 6 mostra os dados de ELISpot e ICS dos esplenócitos HLA-A24 cultivados com pools de peptídeos derivados da biblioteca de peptídeo de CEA (ver também a Tabela 15). Os números na coluna 3 representam pontos * IFN-y/10º esplenócitos após re-estimulação com pools de peptídeo de CEA abrangendo aa1- 699 e subtração antecedente. Os números na coluna 4 representam a frequência de células T CD8* sendo IFN-y* após a re-estimulação com pools de peptídeo de CEA, abrangendo aa37-679 e subtração antecedente. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >100 e uma frequência de células T CD8* IFN-y > 0,1 %. O número em negrito indica que pelo menos 1 pool de peptídeo testado era muito numeroso para contar, portanto, a figura real é pelo menos o valor indicado. Como mostrado na Tabela 6, os polipeptídeos de CEG imunogênicos feitos com as construções ligadas à membrana (Plasmídeo 1386) e de CEA citosólicas (Pplasmídeo 1390) foram capazes de induzir respostas celulares específicas para CEA comparáveis, conforme medido por ELISpot. A vacinação com a construção de CEA citosólica (Plasmídeo 1390), no entanto, induziu respostas de células T CD8* IFN-y? específicas para CEA mais elevadas medidas por ICS. Tabela 6. Resposta das células T induzida pelas construções de DNA de antígeno único em camundongos HLA-A24 pontos t+ IFN- ID da % de células T . 41106 Construção CD38* sendo IFN-y" EXEMPLO 4. IMUNOGENICIDADE DE CONSTRUÇÕES DE

ANTÍGENO ÚNICO TERT Estudo de Respostas Imunes em Camundongos HLA-A2/DR1

[00597] Projeto de estudo. Seis camundongos HLA-A2/DR1 de gênero misto foram iniciados com um vetor de adenovírus AdC68W que codifica o polipeptídeo de TERT imunogênico citosólico truncado (A240) (Plasmídeo 1112) nas partículas virais 1e10 por injeção intramuscular (50 uL). 28 Dias depois, os animais foram reforçados intramuscularmente com 50 ug de DNA liberado bilateralmente por eletroporação (2 x 20 ul) que codifica o antígeno de TERT citosólico truncado (A 240) (Plasmídeo 1112). A resposta da célula T específicas para o antígeno foi medida sete dias depois em um ensaio IFN-y ELISpot e ICS.

[00598] Resultados. A Tabela 7 mostra os dados de ELISpot e ICS dos esplenócitos HLA-A2/DR1 cultivados com pools de peptídeo derivados da biblioteca de peptídeo de TERT (ver também Tabela 15) ou peptídeo de TERT aa861-875, respectivamente. Os números na coluna 3 representam pontos ft IFN-y/10º esplenócitos após re- estimulação com pools de peptídeo de TERT e subtração antecedente. Os números na coluna 4 representam a frequência de células T CD8* sendo IFN-y* após re-estimulação com o peptídeo de TERT aa861-875 e subtração antecedente. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >100 e uma frequência de células T CD8* IFN-y >0,1 %. Como mostrado na Tabela 7, o polipeptídeo de TERT imunogênico produzido com a construção de TERT citosólica truncada (A 240) foi capaz de induzir respostas de célula T CD8 específicas para TERT restritas a HLA-A2. Tabela 7. Resposta de célula T induzida pelas construções de DNA de antígeno único e de AdC68W adenoviral de antígeno único (Plasmídeo 1112) que codificam o antígeno de TERT citosólico truncado (A240) humano em camundongos HLA-A2/DR1

ID da pontos * IFN-y/10º | % células T CD8* (comômição E lmmenóétas aeee Estudo de Respostas Imunes em Camundongos HLA-A24

[00599] Projetos de estudo. Oito camundongos HLA-A24 de gênero misto foram iniciados com um vetor de adenovírus AdC68W codificando o polipeptídeo de TERT citosólico truncado (A240) (o mesmo polipeptídeo codificado pelo Plasmídeo 1112) em 1e10 partículas virais totais por injeção intramuscular bilateral (50 ul em cada músculo anterior da tíbia). 14 Dias depois, os animais foram aumentados intramuscularmente com DNA de 50 ug (Plasmídeo 1112) liberado bilateralmente por eletroporação (2 x 20 ul) que codifica o polipeptídeo de TERT citosólico truncado (A 240). A resposta das células T específicas para o antígeno foi medida sete dias depois em um ensaio IFN-A ELISpot e ICS.

[00600] Resultados. A Tabela 8 mostra os dados de IFN-y ELISpot e ICS dos esplenócitos HLA-A24 cultivados com pools de peptídeos derivados da biblioteca de peptídeos de TERT (ver também Tabela 15) ou peptídeo de TERT aa841-855), respectivamente. Os números na coluna 3 representam pontos * IFN-y/10º esplenócitos após re- estimulação com pools de peptídeo de TERT e subtração antecedente. Os números na coluna 4 representam a frequência de células T CD8* sendo IFN-y* após re-estimulação com os peptídeos de TERT aa841- 855 e subtração antecedente. Os números em negrito indicam que pelo menos 1 pool de peptídeo testado era muito numeroso para contar; portanto, a figura real é pelo menos o valor indicado. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >100 e uma frequência de células T CD8* IFN-y >0,1 %. Como mostrado na Tabela 8, o polipeptídeo de TERT imunogênico feito com a construção de TERT citosólica truncada (7240) (Plasmídeo 1112) é capaz de induzir respostas de células T CD8* específicas para TERT restritas a HLA- A2A. Tabela 8. Resposta das células T induzida pelo vetor AdC68W adenoviral de antígeno único e pelas construções de DNA de antígeno único (Plasmídeo 1112) que codificam o antígeno de TERT citosólico truncado (A240) humano em camundongos HLA-A24 ID da pontos * IFN-y/10º | % de células T Sominção A enmeásts LOnsendo EI Fome E 2 ss — Estudo de Respostas Imunes em Macacos

[00601] Projeto de estudo. Oito macacos cinomolgos de origem Chinesa foram iniciados com um vetor de adenovírus AdC68W que codifica o antígeno de TERT citosólico truncado (A240) (Plasmídeo 1112) nas partículas virais 2811 por injeção intramuscular bilateral (1 mL total). 30 e 64 Dias depois, os animais foram reforçados com DNA (Plasmídeo 1112) que codifica o antígeno de TERT citosólico truncado

(A 240) liberado intramuscularmente bilateralmente por eletroporação (2 mL total). O anti-CTLA-4 foi administrado subcutaneamente nos dias 1 (32 mg), 31 (50 mg) e 65 (75 mg). 14 Dias após a última imunização, os animais foram sangrados e as PBMCs isoladas para avaliar as respostas celulares específicas para TERT (ELISpot, ICS).

[00602] Resultados. A Tabela 9 mostra os dados de ELISpot e ICS das PBMCs de macacos cinomolgos de origem Chinesa cultivadas com pools de peptídeos derivados da biblioteca de peptídeo de TERT (ver também a Tabela 15). Os números na coluna 3 representam pontos * IFN-y/10º esplenócitos após a re-estimulação com pools de peptídeo de TERT e subtração antecedente. Os números na coluna 4 representam células T CD8* t IFN-y///106 células T CD8* após re- estimulação com pools de peptídeo de TERT e subtração antecedente. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >50 e células T CD8* IFN-y*/1e6 células T CD8* > 50. Como mostrado na Tabela 9, o polipeptídeo de TERT imunogênico produzido com a construção de TERT citosólica truncada (A240) (Plasmídeo 1112) TERT foi capaz de induzir respostas de células T específicas para TERT.

Tabela 9. Resposta das células T induzida pelas construções de DNA de antígeno único de TERT e de AdC68W adenoviral de antígeno de TERT (Plasmídeo 1112) em macacos cinomolgos de origem Chinesa Emas 157º fgttt [o Construção t y110º esplenócitos | 7'//1e6 células T CD8*

EXEMPLO 5. IMUNOGENICIDADE DE CONSTRUÇÕES DE

ANTÍGENO DUAL Estudo da Resposta Imune em Macacos

[00603] Projeto de estudo. 24 Macacos cinomolgos de origem Chinesa foram iniciados com vetores AdC68W adenoviral de antígeno dual que codificam polipeptídecos de MUC1 (MUC1) ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos (MUC1) e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos (TERTa240) (Plasmídeos 1270, 1271 e 1269) em partículas virais 2e11 por injeção intramuscular bilateral (1mL total). 30 e 64 Dias depois, os animais foram reforçados com construções de DNA de antígeno dual (Plasmídeos 1270, 1271 e 1269) codifcando os mesmos dois antígenos liberados intramuscularmente bilateralmente por eletroporação (2mL total). O anti-CTLA- foi administrado por via subcutânea nos dias 1 (32 mg), 31 (50 mg) e 65 (75 mg). 14 Dias após a última imunização, os animais foram sangrados e as PBMCs e o soro isolados para avaliar as respostas celulares específicas para MUC1 e TERT (ELISpot, ICS) e humorais específicas para MUC1 (ELISA), respectivamente. No total, foram avaliadas três construções de vacina de antígeno dual diferentes, que coexpressaram ambos os antígenos: a) MUC1-2A- TERTa240 (Plasmídeo 1270), um vetor AdC68W e um plasmídeo de DNA que codifica MUC1 e TERT ligados por um peptídeo 2A ; b) TERTa240-2A-MUC1 (Plasmídeo 1271), um vetor AdC68W e plasmídeo de DNA que codifica TERT e MUC1 ligados por um peptídeo 2A; c) MUC1-TERT 1240 (Plasmídeo 1269), um vetor AdC68W e plasmídeo de DNA que codifica a proteína de fusão MUC1-TERT.

[00604] Resultados. A Tabela 10 mostra os dados de ELISpot e ICS de PBMCs de macaco cinomolgo de origem Chinesa cultivadas com pools de peptídeos derivados das bibliotecas de peptídeo de MUC1 e TERT (veja também a Tabela 15) e os dados de ELISA dos soros de macaco cinomolgo de origem Chinesa. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >50, células T CD8* IFN-y*/1e6 células T CD8* >50, e títulos de IgG >99. Os números nas colunas 3 e 6 representam pontos * IFN-y/10º esplenócitos após re-estimulação com pools de peptídeos de MUC1 e TERT e subtração antecedente, respectivamente. Os números em negrito indicam que pelo menos 1 pool de peptídeo testado era muito numeroso para contar, portanto, a figura real é pelo menos o valor indicado. Os números nas colunas 4 e 7 representam células T CD8* ft IFN-///108º células T CD8* após re- estimulação com pools de peptídeo de MUC1 e pools de peptídeo de TERT, respectivamente, e subtração antecedente. Os números na coluna 5 representam o título de IgG anti-MUC1 (Densidade Ótica (DO) = 1, Limite de Detecção (L.O.D) = 99,0). Conforme mostrado na Tabela 10, os polipeptideos de MUC1 e TERT imunogênicos produzidos com as contruções de antígeno dual de expressão de MUC1 e TERT (Plasmídeos 1270, 1271 e 1269) foram capazes de induzir respostas de células T específicas para MUC1 e TERT e respostas de células B específicas para MUC1. A construção de antígeno dual 1269 que codifica uma proteína de fusão MUC1-TERT demonstrou induzir a resposta celular específica para MUC1 total mais forte; por outro lado, demonstrou-se que a construção de antígeno dual Plasmídeo 1271 (TERT-2A-MUC1) induz a resposta celular específica de TERT total mais forte. Todas as três construções de antígeno dual demonstraram induzir uma resposta humoral específica para MUC1 comparável.

Tabela 10. Respostas de células T e B induzidas pelas construções de DNA de antígeno único e de AdC68W adenoviral de antígeno dual (Plasmídeo 1270, 1271 e 1269) que codificam um polipeptídeo de MUC1 e TERT imunogênico em macacos cinomolgos de origem Chinesa

ID da Células T Construção pontos Células T CD8* Título de pontos % IFN- | CD8* H£ IFN- IFN-y/106 $IFN-y"/1e6 196 y1os ye6 esplenócitos | células T CD8* esplenócitos | células T se Te Te Ta Tiso e Ts me ar Ter es e ee E Tr E e a em Er rr seas e E e se x es Te Tra a rs pe E qe E) EXEMPLO 6. IMUNOGENICIDADE DE CONSTRUÇÕES DE

ANTÍGENO TRIPLO

[00605] O exemplo 6 ilustra a capacidade de vetores de plasmídeo e adenovirais que carregam uma construção de antígeno triplo que expressa o polipeptídeo de MUC1 ligado à membrana de tamanho natural nativo humano (MUC1), polipeptídeo de CEA citosólico ou ligado à membrana humano (mCEA ou cCEA) e polipeptídeo de TERT citosólico truncado (A240) humano (TERTa240) para induzir respostas de células T e B específicas para Ag a todos os três antígenos de câncer codificados. Estudo da Resposta Imune em Camundongos C57BL/6J Usando Eletroporação de DNA

[00606] Projeto de estudo. 48 Camundongos C57BL/6J fêmeas foram imunizados com construções de DNA de antígeno triplo que codificam MUC1, mCEA ou cCEA e TERT 240 humanos. A vacina de DNA de antígeno triplo (50 ug) foi liberada intramuscularmente bilateralmente (20 ul total em cada músculo anterior da tíbia) com eletroporação concomitante em um regime principal/reforço, com duas semanas de intervalo entre cada vacinação. As respostas celulares específicas para MUC1, CEA e TERT e as respostas humorais específicas para MUC1 e CEA foram medidas 7 dias após a última imunização em um ensaio IFN-y ELISpot e ELISA, respectivamente. No total, seis plasmídeos diferentes que transportam construções de DNA de antígeno triplo, cada qual codificando três polipeptídeos de TAA ligados por peptídeos 2A, foram utilizados da seguinte maneira: MUC1-2A-TERTa240-2A-MCEA (Plasmídeo 1424), mMCEA-2A-MUC1- 2A-TERTa240 — (Plasmídeo 1425), TERTa240-2A-MUC1-2A-MCEA (Plasmídeo 1426), TERTa20-2A-MCEA-2A-MUC1 (Plasmídeo 1427), MUC1-2A-cCEA-2A-TERT s240 (Plasmídeo 1428), cCEA-2A-TERT n240- 2A-MUC1 (Plasmídeo 1429).

[00607] Resultados. As tabelas 11A-C mostram os dados de ELISpot dos esplenócitos de C57BL/6J cultivados com pools de peptídeo derivados das bibliotecas de peptídeo de MUC1, CEA e TERT (ver também a Tabela 15), os dados de ICS dos esplenócitos de

C57BL/6J cultivados com peptídeo de TERT aa1025-1039, e os dados de ELISA dos soros de camundongo C57BL/6J.

Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >100, uma frequência de células T CD8* IFN-/ >0,1 % e títulos de IgG >99. Os números na coluna 3 das Tabelas 11A-C representam pontos * IFN-y/10º esplenócitos após re- estimulação com pools de peptídeo de MUC1, CEA ou TERT e subtração antecedente, respectivamente.

Os números em nedgrito indicam que pelo menos 1 pool de peptídeo testado era muito numeroso para contar; portanto, a figura real é pelo menos o valor indicado.

Os números na coluna 4 das Tabelas 11A-B representam o título de IgG anti-MUC1 e CEA, respectivamente (Densidade Ótica (O.D) = 1, Limite de Detecção (L.O.D) = 99,0). Os números na coluna 4 da Tabela 11C representam a frequência de células T CD8* sendo IFN-y* após a re-estimulação com o peptídeo específico para TERT, TERT aa1025-1039, e subtração antecedente.

Como mostrado nas Tabelas 11A-C, os polipeptidecos de MUC1I, CEA e TERT imunogênicos produzidos com as construções de antígeno triplo de expressão de TERT MUC1-, CEA e TERT foram capazes de induzir respostas de células T contra todos os três antígenos e respostas de células B contra MUC1. Em contraste, enquanto as construções de antígeno triplo contendo mMCEA (Plasmídeos 1424-1427) foram capazes de induzir respostas de células B contra CEA, as construções de antígeno triplo contendo cCEA (Plasmídeos 1428-1429) induziram respostas de células B não específicas para CEA ou mais fracas.

Tabela 11 A.

Respostas de células T e B específicas para MUC1 induzidas pelas construções de DNA de antígeno triplo (Plasmídeos 1424-1429) que codificam polipeptíidecos de MUC1 ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citosólicos ou ligados à membrana humanos e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em camundongos C57BL/6J

MUC1 ID da pontos * IFN-y/10º Construção Título de IgG esplenócitos 1077 4110 1043 2280 120 2060 Plasmídeo 1424 1133 3400 PF Te 357 884 Plasmídeo 1425 9 [857 ÚÚÚÚÚj 689 = 1608 4050 Plasmídeo 1426 1512 1090 1332 2650 1909 2030 Plasmídeo 1427 esplenócitos ER e E e E e Plasmídeo 1428 [6e ae NBBTO Ee a E je Tabela 11B.

Respostas de células T e B específicas para CEA induzidas pelas construções de DNA de antígeno triplo (1424-1429) que codificam polipeptíideos de MUC1 ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citosólicos ou ligados à membrana humano, e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em camundongos C57BL/6J ID da . pontos f IFN-y/10º ; Construção Título de IgG esplenócitos 1147 5530 1147 10700 Plasmídeo 1424 1031 15400 ; 13100 Plasmídeo 1425 2309 13500 Plasmídeo 1426 2169 10000 1760 15700 1751 21800 esplenócitos Plasmídeo 1427 qo BB zo |

FE Plasmídeo 1428 E CL

EF E E

E E mm Plasmídeo 1429 76 as ag To fe

EE Tabela 11C. Respostas de células T específicas para TERT induzidas pelas construções de DNA de antígeno triplo (1424-1429) que codificam polipeptídeos de MUC1 ligados a membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citosólicos ou ligados à membrana humano, e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em camundongos C57BL/6J ID da pontos ft IFN-y/10º | % de células T CD8*

Construção oa a ESSES [Lo

Fe sean

ID da - esplenócitos sendo IFN-y/ 6 o a eee nsossemendo

Estudo da Resposta Imune em Camundongos C57BL/6J Usando Vetores Adenovirais

[00608] Projeto de Estudo. 48 Camundongos C57BL/6J fêmeas foram iniciados com vetores adenovirais de antígeno triplo que codificam MUC1, mCEA ou cCEA e TERTa2o humanos, em 1e10 partículas virais por injeção intramuscular (50 ul em cada músculo anterior da tíbia). 14 Dias depois, os animais foram reforçados com construções de DNA de antígeno triplo (50 ug) liberados intramuscularmente bilateralmente (20 ul em cada músculo anterior da tíbia) com eletroporação concomitante. As respostas celulares específicas para MUC1, CEA e TERT, e as respostas humorais específicas para MUC1 e CEA foram medidas 7 dias após a última imunização em um ensaio IFN-y ELISpot e ICS, e um ensaio ELISA, respectivamente. No total, seis construções de DNA e adenovirais de antígeno triplo que codificam MUC1, mCEA ou cCEA e TERTa240 ligados por peptídeos 2A foram usadas da seguinte maneira: MUC1- 2A-TERTa240-2A-MCEA (Plasmid 1424), MCEA-2A-MUC1-2A-TERT a240 (Plasmídeo 1425), TERTa240-2A-MUC1-2A-mCEA (Plasmídeo 1426), TERTa240-2A-MCEA-2A-MUC1 (Plasmídeo 1427), MUC1-2A-cCEA-2A- TERTa240 (Plasmídeo 1428), CCEA-2A-TERTa240-2A-MUC1 (Plasmídeo 1429).

[00609] Resultados. As tabelas 12A-C mostram os dados de ELISpot dos esplenócitos de C57BL/6J cultivados com pools de peptídeos derivados das bibliotecas de peptídeo de MUC1, CEA e TERT (ver também a Tabela 15), os dados d ICS dos esplenócitos de C57BL/6J cultivados com o peptídeo de TERT aa1025 -1039 e os dados de ELISA dos soros de camundongo C57BL/6J. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >100, uma frequência de células T CD8* IFN-y* >0,1 % e títulos de IgG >99. Os números na coluna 3 nas Tabelas 12A-C representam pontos * IFN-y/10º esplenócitos após re-

estimulação com pools de peptídeo de MUC1, CEA ou TERT, e subtração antecedente, respectivamente.

Os números em negrito indicam que pelo menos 1 pool de peptídeo testado era muito numeroso para contar, portanto, a figura real é pelo menos o valor indicado.

Os números na coluna 4 da Tabela 12C representam células T CD8* ft IFN-///10º células T CD8* após re-estimulação com o peptídeo específico para TERT, TERT aa1025-1039, e subtração antecedente.

Os números na coluna 4 das Tabelas 12A-B representam o título de IgG anti-MUC1 e anti-CEA, respectivamente (Densidade Ótica (O.D) = 1, Limite de Detecção (L.O.D) = 99,0). Como mostrado nas Tabelas 12A-C, os polipeptídeos de MUC1, CEA e TERT imunogênicos feitos com construções de antígeno triplo de expressão de MUC1, CEA e TERT foram capazes de induzir respostas de células T contra todos os três antígenos, e respostas de células B contra MUC1. Em contraste, enquanto as construções de antígeno triplo contendo mCEA (Plasmídeos 1424-1427) foram capazes de induzir respostas de células B contra CEA, as contruções de antígeno triplo contendo cCEA (Plasmídeos 1428-1429) induziram respostas de células B não específicas para CEA ou mais fracas.

Tabela 12A.

Respostas de células T e B específicas para MUC1 induzidas pelas construções de DNA e de AdC68y adenoviral de antígeno triplo (Plasmídeos 1424-1429) que codificam polipeptídeos de MUC1 ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citosólicos ou ligados à membrana humanos, e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em camundongos C57BL/6J.

ID da lama A SEI fas esplenócitos

ID da esplenócitos Fe qm E E e

ID da esplenócitos 8 mo am e me emo Tabela 12B.

Respostas das células T e B específicas para ECA induzidas pelas construções de DNA e de AdC68Y adenoviral de antígeno triplo (Plasmídeos 1424-1429) que codificam polipeptídeos de MUC1 ligados à membrana nativos humanos, de CEA citosólicos ou ligados à membrana humanos, e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em camundongos C57BL/6J

ID da En 17 A ris esplenócitos

ID da esplenócitos

EB Fe E poe e

E E Em E Tm e Tabela 12C. Respostas de células T específicas de TERT induzidas pelas construções de DNA e de AdC68Y adenoviral de antígeno triplo (Plasmídeos 1424-1429) que codificam polipeptídeos de MUC1 ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citosólicos ou ligados à membrana humano, e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em camundongos C57BL/6J ID da - Ee EEE esplenócitos CD8* sendo IFN-y” E e

ID da . pontos % IFN-y/10º | % de células T Construção na 1 mt EE se e no ja se E em e Fr teams Estudo da Resposta Imune em Camundongos HLA-A24

[00610] Projeto de estudo. Dezesseis camundongos HLA-A24 de gênero misto foram iniciados com uma construção de antígeno triplo AdC68Y adenoviral (Plasmídeo 1426: TERTA240-2A-MUC1-2A-mMCEA ou Plasmídeo 1428: MUC1-2A-cCEA-2A-TERTAZ240) que codifica MUC1, mCEA ou cCEA e TERTa240o humanos em 1e10 partículas virais por injeção intramuscular (50 ul em cada músculo anterior da tíbia). 14 Dias depois, os animais foram reforçados intramuscularmente com 50ug de construção de DNA de antígeno triplo (Plasmídeo 1426 ou 1428) que codificam os mesmos três antígenos (20 ul liberados em cada músculo anterior da tíbia com eletroporação concomitante). As respostas celulares específicas para MUC1 restritas a HLA-A24 foram medidas 7 dias após a última imunização em um ensaio IFN-y ELISpot.

[00611] Resultados. A Tabela 13 mostra os dados de ELISpot de esplenócitos HLA-A24 cultivados com o peptídeo de MUC1 aa524-

532. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >50. Os números na coluna 3 representam pontos * IFN-y/10º esplenócitos após re-estimulação com o peptídeo de MUC1 aa524-532 e subtração antecedente. Como mostrado na Tabela 13, os polipeptídeos de MUC1 imunogênicos produzidos com as construções de antígeno triplo de expressão de MUC1, CEA e TERT 1426 e 1428 foram capazes de induzir respostas de células T CD8* específicas para o peptídeo de MUC1 aa524-532 restrito a HLA-A24. É importante ressaltar que as respostas das células T derivadas de pacientes com câncer contra este peptídeo de MUC1 específico correlacionaram-se com a eficácia antitumoral in vitro (Jochems C et al. Cancer Immunollmmunother (2014) 63:161-174) demonstrando a importância de aumentar as respostas celulares contra este epítopo específico.

Tabela 13. Respostas de células T específicas para peptídeo de MUC1 aa524-532 restrito a HLA-A24 induzidas pelas construções de DNA e adenovirais de antígeno triplo Plasmídeo 1426 (TERTa240-2A- MUC1-2A-mCEA) e Plasmídeo 1428 (MUC1-2A -cCCEA-2A-TERT n240)

que codifica polipeptídeos de MUC1 ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citosólicos ou ligados à membrana humanos e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em camundongos HLA-A24 pontos ft IFN-y/10º ID da Construção Pneneemaeneto me Ge

FER Plasmídeo 1426

FE

FR : 8 & Plasmídeo 1428

ERR Estudo da Resposta Imune em Macacos

[00612] Projeto de estudo. 42 Macacos cinomolgos de origem Chinesa foram preparados no dia 1 com vetores adenovirais AdC68Y que codificam antígenos MUC1 (MUC1) ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, CEA citoplasmáticos ou ligados à membrana humanos (mCEA ou cCEA) e TERT citosólicos truncados

(A240) humanos (TERTa240) nas partículas virais 2811 por injeção intramuscular bilateral (1mL total). Nos dias 30 e 57, os animais foram reforçados com DNA que codifica os mesmos três antígenos liberados intramuscularmente bilateralmente por eletroporação (2 mL total). O anti-CTLA- foi administrado subcutaneamente nos dias 1 (32 mg), 30 (50 mg) e 57 (75 mg). 15 Dias após a última imunização, os animais foram sangrados e as PBMCs e o soro isolados para avaliar as respostas celulares específicas para MUC1, CEA e TERT (ELISpot, ICS) e humorais (ELISA) específicas para MUC1 e CEA, respectivamente. No total, seis construções de DNA e adenovirais de antígeno triplo que codificam MUC1, mCEA ou cCEA e TERTA240 ligadas por peptídeos 2A foram avaliadas: MUC1-2A-TERT a240-2A- mCEA (Plasmídeo 1424), MCEA-2A-MUC1-2A-TERT 240 (Plasmídeo 1425), TERT a240-2A-MUC1-2A-mCEA (Plasmídeo 1426), TERTa240-2A- mMCEA-2A-MUC1 (Plasmídeo 1427), MUC1-2A-cCEA-2A-TERT 240 (Plasmídeo 1428), CCEA-2A-TERTa240-2A-MUC1 (Plasmídeo 1429).

[00613] Resultados. As Tabelas 14A, 14B e 14C mostram os dados de ELISpot e ICS de PBMCs de macacos cinomolgos de origem Chinesa cultivadas com pools de peptídeo derivados das bibliotecas de peptídeo de MUC1, CEA e TERT (ver também a Tabela 15) e os dados de ELISA de soros de macaco cinomolgo de origem Chinesa. Uma resposta positiva é definida como tendo SFC >50, células T CD8* IFN-y/1e6 células T CD8* >50 e títulos de IgG >99. Os números na coluna 3 nas Tabelas 14A-C representam pontos ft IFN-y/10º esplenócitos após re-estimulação com pools de peptídeo de MUC1, CEA ou TERT e subtração antecedente, respectivamente. Os números em negrito indicam que pelo menos 1 pool de peptídeo testado era muito numeroso para contar, portanto, a figura real é pelo menos o valor indicado. Os números na coluna 4 das Tabelas 14A-C representam células T CD8* t& IFN-///10º células T CD8* após re-

estimulação com pools de peptídeo de MUC1, CEA ou TERT, respectivamente, e subtração antecedente.

Os números na coluna 5 das Tabelas 14A-B representam o título de IgG anti-MUC1 e anti-CEA (Densidade Ótica (O.D) = 1, Limite de Detecção (L.O.D) = 99,0), respectivamente.

Como “mostrado nas Tabelas 14A-C, os polipeptideos MUC1, CEA e TERT imunogênicos feitos com construções de Ag triplo de expressão de MUC1-, CEA e TERT foram capazes de induzir respostas celulares contra todos os três antígenos e respostas humorais contra MUC1. No entanto, as construções de antígeno triplo contendo mCEA induziram maiores respostas de células B específicas para CEA do que aquelas contendo cCEA.

Tabela 14A.

Respostas de células T e B específicas para MUC1 induzidas pelas construções de DNA e de AdC68y adenoviral de antígeno triplo (Plasmídeos 1424-1429) que codificam polipeptídeos de MUC1 ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citoplasmáticos ou ligados à membrana humanos e TERT citosólicos truncados (A240) humanos em macacos cinomolgos de origem Chinesa ID da - pontos * IFN- Células T CD8* t Título de Construção 710º IFN-///1e6 células T | IgG esplenócitos CD38*

[1001 fase jo “lero |

[1005 das do 1760 Plasmídeo 1424

[1501 Joe o 1 18ro |

[15025 das jo —=/22ro |

[2001 663 do —"J1oroo |

[2002 jJas = jo 1720 Plasmid1425

[2004 “fas o "újl20200 |

ID da - pontos * IFN- Células T CD8* t Título de Construção 6 + , 110 IFN-///1e6 células T | IgG esplenócitos CD38* lasor am o jeo | [2502 joa jo [13800 so as da [5002 a o 22100 | s008 7% ho "1670 | Plasmidt426 [3000 —Jerr jo ==" |25900 3505 60 ho -""la10o | la0o1 Jaz jo [16800 lar a o agro | 1290,0 11300 Plasmídeo 1427 lasor jo do — jesso | 13300 [6001 ao == 1193 ==> Jeso 6178,6 11100 s083 ar o —j180 | Plasmídeo 28200 1428 [6501 as = do [1200 10680,4 15300 6001 300,1 19600 6003 28 o [1120 Plasmídeo [6004 ag “o 12700 | 1429 6esot o o [12600 [6502 “Jess “o [36600 6sos — 11755 lo “11690 Tabela 14B.

Respostas das células T e B específicas para CEA induzidas pelas construções de DNA e de AdC68Y adenoviral de antígeno triplo (Plasmídeos 1424-1429) que codificam polipeptídeos de MUC1 ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citoplasmáticos ou ligados à membrana humanos, de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em macacos cinomolgos de origem Chinesa ID da pontos IFN- | Células T CD8* Construção 410º HIFNÍ/1e6 Título de IgG esplenócitos células T CD8* pe Tan Plasmídeo

ESSE ALL 1424 pe am Plasmídeo [2a das e 7 1425 Plasmídeo 1426 3501 2383 [o 64400 asc ame e laesco 3503 1673 [o] 177000 Plasmídeo [4001 2065 46600,1 48200 e doa e am

ID da pontos IFN- | Células T CD8* Construção 710º HIFN//1e6 Título de IgG esplenócitos células T CD8* o Te Tas Plasmídeo 1428 a Te ag Plasmídeo 1429 Tabela 14C.

Respostas de células T específicas para TERT induzidas pelas construções de DNA e de AdC68Y adenoviral de antígeno triplo (Plasmídeos 1424-1429) que codificam de MUC1 ligados à membrana de tamanho natural nativos humanos, de CEA citoplasmáticos ou ligados à membrana humanos e de TERT citosólicos truncados (A240) humanos em macacos cinomolgos de origem Chinesa

TERT ID da Pontos * IFN- Células T CD8* Construção 41106 IFN-// 1e6 células T esplenócitos CD38* 100 18549 1002 e. oa da e Plasmídeo 1004 1762 9865,4 1424 1501 1413 11844,9 1502 1890 15520,3 2002 1512 263,9 Plasmídeo 1425

SI 2502 — | 1808 DR 2503 A 3001 2798 37114,7 3002 Bs 3003 1458 32332,1 Plasmídeo 1426 3501 1878 6543,9 3502 2957 33410,8 3503 1958 5418,9 40 375 Plasmídeo 4002 1237 4109,2 1427 4003 1438,5 4004 196.

ID da Pontos * IFN- Células T CD8* & Construção 41106 IFN-// 1e6 células T esplenócitos CD38* Plasmídeo Plasmídeo ma ae a e am e Tabela 15. Pools de Peptídeo Derivados do Antígeno Associado ao Tumor Humano (TAA) MUC1, CEA e TERT MUC1 | 116 peptídeos de 15-mer sequenciais, sobrepostos por 11 aminoácidos, abrangendo os aminoácidos 1-224 e 945- 1255 (excluindo todos, exceto 1 de 20 repetições de aminoácidos) da proteína precursora de MUC1 da SEQ ID NO: 1

Pools de Peptídeo CEA 125 peptídeos de 15-mer sequenciais, sobrepostos por 11 aminoácidos, abrangendo a sequência da proteína de CEA dos aminoácidos 1-147 e aminoácidos 325-699 (excluindo os domínios 2-3) da SEQ ID NO: 2 TERT 1221 peptídeos de 15-mer sequenciais, sobrepostos por 11 aminoácidos, abrangendo a sequência de proteína de TERTa24o0 da SEQ ID NO: 10 (aminoácidos 241-1134, total de 894 aminoácidos), excluindo os primeiros 240 aminoácidos da proteína de TERT de tamanho natural nativa da SEQ ID NO: 3 Tabela 16. Iniciadores para Construção de Plasmídeo

GTTGAAGATTCTGCCGGATCCCAGGTTGGCG EMCV Muc1 R -35 Antissenso enero Demo ue |

GCTACTTCGCCGACCTGCTGATCCACGACAT EMCV2A F - 34 Senso ee aeee E

GGTCGGCGAAGTAGCCGGCGTAGTGGGCGET EMCV2A R - 36 Antissenso eres Once E |

ACCCTGTGACGAACATGGCTAGCACAGGCTC f pmedNhecytMuc Senso

TGGCCACGCCAG

ACCCTGTGACGAACATGGCTAGCACCCCTG f pmedNheMuc Senso

GAACCCAGAGCC

ACCCTGTGACGAACATGGCTAGCGGAGCTG f pmedNhe Ter240 Senso

CCCCGGAGCCEGG ftert 1584 -1607 TCTCACCGACCTCCAGCCTTACAT

TGGGAGGCTCCGGCGGAGGAGCTGCCCCG ftg link Ter240 Senso

GAGCCGG

CCTGCTGATCCACGACATCGAGACAAACCCT f1 EM2A Muc Senso

GGCCCCACCCCTGGAACCCAGAGCC TGGCCGGCGACGTGGAACTGAACCCTGGCC

TGGCCGGCGACGETGGAACTGAACCCTGGCC f1 ERBV2A Muc Senso

TGGCCGGCGACGTGGAACTGAACCCTGGCC f1 ERBV2A Ter d342 Senso

CTAGCTTCCTCCTGTCGTCGCTCA

TGGCCGGCGACGTGGAACTGAACCCTGGCC f1 ERBV2A Ter240 Senso

CTGGAGCTGCCCCGGAGCCGG

TGGCCGGCGACGTGGAACTGAACCCTGGCC f1 ERBV2A Tert d541 Senso

CTGCCAAATTTCTGCATTGGCTGATG

TGGAAGAGAACCCTGGCCCTACCCCTGGAA f1 PTV2A Muc Senso

CCCAGAGCC

GCGACGTGGAAGAGAACCCTGGCCCCAGCT f1 T2A Tert d342 Senso

TCCTCCTGTCGTCGCTCA

GCGACGTGGAAGAGAACCCTGGCCCCGCCA f1 T2A Tert d541 Senso

AATTTCTGCATTGGCTGATG

GCGACGTGGAAGAGAACCCTGGCCCCGGAG f1 T2A Tert240 Senso

AGAATCTTCAACGCCCACTACGCCGGCTACT f2 EMCV2A Senso eme — TCGCCGACCTGCTGATCCACGACATCGA E

TGTCTGAGGGCGCCACCAACTTCAGCCTGCT f2 ERBV2A Senso

TTCAGCCTGCTGAAACAGGCCGGCGACGTG f2 PTV2A Senso

CCGGCEAGGGCAGAGGCAGCCTGCTGACAT f2T2A Senso

ACGAACATGGCTAGCACCCCTGGAACCCAG PMED MUC1 F - 31 Senso

AGCCCCTTC

TGGTGGCECCCTCAGACAGGATTGTGCCGG r ERB2A BamhMuc Antissenso

ATCCCAGGTTGGCGGAGGCAGCG

TGGTGGCECCCTCAGACAGGATTGTGCCGG r ERB2A Bambh Ter240 Antissenso

ATCCGTCCAAGATGGTCTTGAAATCTGA

TCCGCCGGAGCCTCCCAGGTTGGCGGAGEC r link muce Antissenso

AGCG

TCCGCCGGAGCCTCCGTCCAAGATGGTCETT r link Tert240 Antissenso

GAAATCTGA rmuc 986 - 963 AAGGACAGAAAGAAGAATGAGACG r pmedBglMuc TTGTTTTGTTAGGGCCCAGATCTTCACAGGTT

TTGTTTTGTTAGGGCCCAGATCTTCAGTCCAA r pmedBgl Ter240 Antissenso

GATGGTCTTGAAATCTGA

CTGTTTCAGCAGGCTGAAATTGGTGGCGCCG r PTV2A BamhMuc Antissenso

GATCCCAGGTTGGCGGAGGCAGCG

TGCCTCTGCCCTCGCCGGATCCGTCCAAGAT r T2A Tert240 Antissenso

GGTCTTGAAATCTGA rtert 1602 -1579 AGGCTGGAGGTCGGTGAGAGTGGA

AGGGTTCTCTTCCACGTCGCCACATGTCAGC r2T2A Antissenso

AGGCTGCCTCTGCCCTCGCCGGATCC

ACGAACATGGCTAGCTTCCTCCTGTCGTCGC TertA343-F Senso

TCAGACCGAG

TTGTTTTGTTAGGGCCCAGATCTTCAGTCCAA Tert-R Antissenso

GATGGTCTTGAAATC

ACGAACATGGCTAGCGCCAAATTTCTGCATT TertA541-F Senso

TTGTTTTGTTAGGGCCCAGATCTTCAGTCCAA r TERT cott pMed Antissenso

GATGGTCTTGAAATC

ACCCTGTGACGAACATGGGAGCTGCCCCGG f pmed TERT 241G Senso

AGCCGGAGA ID1197F ACCCTGTGACGAACATGGCTAGC ID1197R AGATCTGGGCCCTAACA f cCEA 562-592 TCCGTGGACCACAGCGACCCTGTGATCCTGA f CEA 833-855 CTGTCAAAACTATCACTGTGTCC f EMC2a CEA d1 CTTCGCCGACCTGCTGATCCACGACATCGAG | Senso

ACAAACCCTGGCCCCAAGCTGACCATTGAGA

GCACTCCCTTCAAC f pmed CEA D1 ACCCTGTGACGAACATGGCTAGCAAGCTGAC | Senso

CATTGAGAGCACTCCCTTCAACGTG f pmed CEA SS ACCCTGTGACGAACATGGCTAGCGAATCGCC | Senso

AAGCGCACCCCCTCATCGGTGGTGCATCCCT

TGGCAACGC f1 EMC2a CEAss CTTCGCCGACCTGCTGATCCACGACATCGAG | Senso

ACAAACCCTGGCCCCGAATCGCCAAGCGCA

CCCCCTCATCGGTEG f1 ERAZA ssCEA AAGCTGGCCGGCGACGTGGAATCTAACCCT | Senso

GGCCCTGAATCGCCAAGCGCACCCCCTCAT

LO fas f1 T2a Muc TGTGGCGACGTGGAAGAGAACCCTGGCCCC | Senso oi | feceerosmccctanaomaamemam f2 ERAV2A TCCGGCCAGTGCACCAATTACGCCCTGCTGA | Senso [oii Aoeroccceaearea f2T2A63 GGATCCGGCGAGGGCAGAGGCAGCCTGCTG | Senso

ACATGTGGCGACGTGGAAGAGAACCCTGGC cce f CEA D1-D4 AGGGTGTACCCCGAACTCCCTAAGCCGTTCA | Senso [e pu Toner ID1361-1362 PCRF ACCCTGTGACGAACATGGCTAGCGAATCGCC | Senso MA a r EM2A BamhMuc GTGGGCGTTGAAGATTCTGCCGGATCCCAG | Antissenso A omososanenes | r ERAZA Tert ATTGGTGCACTGGCCGGATCCGTCCAAGATG | Antissenso A orem PS r pmed CEA D7 TTGTTTTGTTAGGGCCCAGATCTTCAGGACG | Antissenso A o ccoctcommeaTemata r pmed CEA GPI TTGTTTTGTTAGGGCCCAGATCTTCAGATCA Antissenso A rr Tsosoerocaeanae o | rT2a CEA TCTGCCCTCGCCGGATCCEGATCAGGGCCAC | Antissenso A JTecanatetsaaa | rT2a CEA D7 TCTGCCCTCGCCGGATCEGGACGCCGACAC | Antissenso A Jsgrecemet r T2A furin CEA TCTGCCCTCGCCGGATCCTCTTCTCTTCCOTG | Antissenso Ds Aretcccotcrocorosncatae asa E r CEA D1 GAGTTCGGGGTACACCCTGAATTGGCCGGT | Antissenso MN Sa ID1361-1362 PCRR TTGTTAGGGCCCAGATCTTCAGATCAGGGCC | Antissenso MM a Muc1-20bp-F-98 CCGCTAGGGTACCGCGATCACCATGGCTAG | Senso rr ercccoraameostatececemte MCEA-20bp-R-100 TTATGATCAGCTCGAGGTGCGTCAGATCAGG | Antissenso ra sconerecancanacacao o PEFRRERATA T —— Y-Tert-A2 GATCAGCTCGAGGTGCGTCAGTCCAAGATG | Antissenso o ITememmeatcaat | Y-Tert-S GATCCGCTAGGGTACCGCGATCACCATGGC | Senso Mr a Y-CEA-A GATCAGCTCGAGGTGCGATTCAGATCAGGG | Antissenso A Cetera o | Y-MUC-A GATCAGCTCGAGGTGCGATTCACAGGTTGG | Antissenso Mr A Y-MUC-S2 GATCCGCTAGGGTACCGCGATCACCATGGC | Senso A TscNcccoreameceneeDRET o CCEA-20bp-F-106 GATCCGCTAGGGTACCGCGATCACCATGGC | Senso srs rAscmcTaacoameneaBaAto o | Muc1-20BP-R-108 GATTATGATCAGCTCGAGGTGCGTCACAGGT | Antissenso A so rascsatoscmranaenaaaenãa | Table 17. Sequências de 2A-peptídeo Encefalomielite murina de Theiler GD7 (TME- | KAVRGYHADYYKQRLIHDVEMNPG [aon US mes mi a vu SS SS

Table 18. Índice de Sequência

SEQ Descrição

Dm E

1 Sequência de aminoácido da proteína precursora da Isoforma 1 de MUC1 humana (Polipeptídeo de Referência; Uniprot P15941-1)

2 Sequência de aminoácido da proteína precursora da Isoforma 1 de CEA humana (Polipeptídeo de Referência; Uniprot PO6731-1 (702 aa)

3 Sequência de Aminoácido da proteína precursora da Isoforma 1 de TERT humana (Polipeptídeo de Referência; Genbank AAD30037, Uniprot 014746-1)

4 Plasmídeo 1027 (MUC1)- sequência de nucleotídeo de

É aa O mess SS

Plasmídeo 1027 (MUC1) - sequência de aminoácido o aa SAS SSsó Plasmídeo 1197 (cMUC1)- sequência de nucleotídeo de

É ares O ee Sta

7 Plasmídeo 1197 (cMUC1) - sequência de aminoácido o uau PE PESO osso Plasmídeo 1112 (TERT240)- sequência de nucleotídeo de o ares Sn Plasmídeo 1112 (TERT240) - sequência de aminoácido oo ua SS STS

Plasmídeo 1326 (TERT343)- sequência de nucleotídeo de o ara SS

E Plasmídeo 1326 (TERT343)- sequência de aminoácido o aa O TS OSS S SS

12 Plasmídeo 1330 (TERT541) - sequência de nucleotídeo de

O aa o

SEQ Descrição o E 13 Plasmídeo 1330 (TERT541) - sequência de aminoácido o ua SS SS 14 Plasmídeo 1361 (CEA) - sequência de nucleotídeo de ORF oa e SS SS SO Plasmídeo 1361 (CEA) - sequência de aminoácido o ua SS SS 16 Plasmídeo 1386 (mCEA) - sequência de nucleotídeo de oa o oO CSS 17 Plasmídeo 1386 (mCEA) - sequência de aminoácido o uação TO SS SS 18 Plasmídeo 1390 (cCEA) - sequência de nucleotídeo de oa o SS SeSSSÓ 19 Plasmídeo 1390 (cCEA) - sequência de aminoácido So goarção 9 SS Ss Plasmídeo 1269 (Muci - Tert240) - sequência de mea 21 Plasmídeo 1269 (Muci - Tert240) - sequência de emana 22 Plasmídeo 1270 (Muc1 - ERB2A - Tert240) - sequência de

CC A 23 Plasmídeo 1270 (Muc1 - ERB2A - Tert240) - sequência de o ommeactcaames 24 Plasmídeo 1271 (Tert240 - ERB2A - Muc1) - sequência de AS o Plasmídeo 1271 (Tert240 - ERB2A - Muc1) - sequência de CE jenmáatncaátaã 26 Plasmídeo 1286 (cMuc1 - ERB2A - Tert240) - sequência de

PP A

SEQ Descrição

Be 27 Plasmídeo 1286 (cMuc1 - ERB2A - Tert240) - sequência de amanita 28 Plasmídeo 1287 (Tert240 - ERB2A - cMuc1) - sequência de É mea ara 29 Plasmídeo 1287 (Tert240 - ERB2A - cMuc1) - sequência de o A Plasmídeo 1409 (Muc1 - EMC2A - mCEA) - sequência de O nmeameaa 31 Plasmídeo 1409 (Muc1 - EMC2A - mCEA) - sequência de emana 32 Plasmídeo 1410 (mMCEA - T2A - Muc1) - sequência de É nmeameaam 33 Plasmídeo 1410 (mMCEA - T2A - Muc1) - sequência de E jenmmáatncaatã 34 Plasmídeo 1411 (mCEA - Furin - T2A - Muc1) - sequência amami aorE Plasmídeo 1411 (mCEA - Furin - T2A - Muc1) - sequência CU eeemmedatmatat 36 Plasmídeo 1431 (Muc1i - EMC2A - cCEA) - sequência de CU neeamedam o 37 Plasmídeo 1431 (Muc1 - EMC2A - cCEA) - sequência de fommoascocamas O 38 Plasmídeo 1432 (cCEA - T2A - Tert240) - sequência de o nssenaname o 39 Plasmídeo 1432 (cCEA - T2A - Tert240) - sequência de C enmactncaams 40 Plasmídeo 1440 (Tert240 - ERA2A - mCEA) - sequência de O lmmaaRea

SEQ Descrição

Pro OU 41 Plasmídeo 1440 (Tert240 - ERA2A - mCEA) - sequência de mma 42 Plasmídeo 1424 (Muc1-ERB2A -Tert240- ERA2A- mCEA) - CU seamcntememma ABORTO 43 Plasmídeo 1424 (Muc1- ERB2A - Tert240 -ERA2A- mCEA) - A o 44 Plasmídeo 1425 (mMCEA- T2A - Muc1 - ERB2A - Tert240) - É seamanteme ABORTO 45 Plasmídeo 1425 (mCEA -T2A - Muc1 - ERB2A -Tert240) - O onincece mania 46 Plasmídeo 1426 (Tert240 - ERB2A- Muc1- EMC2A - mCEA) semana mc OO 47 Plasmídeo 1426 (Tert240 - ERB2A - Muc1 - EMC2A - nom seen ce ammetcncaáta 48 Plasmídeo 1427 (Tert240 - ERA2A - mCEA - T2A - Muc1) - O sepamandemamms dO 49 Plasmídeo 1427 (Tert240 - ERA2A - mCEA - T2A - Muc1) - O onincecemeáadncaáta 50 Plasmídeo 1428 (Muc1 - EMC2A - cCEA - T2A - Tert240) - seems ABORTO 51 Plasmídeo 1428 (Muc1 - EMC2A - cCEA - T2A - Tert240) - o renandnemmeletncaáto 52 Plasmídeo 1429 (cCEA - T2A - Tert240 - ERB2A - Muc1) - O oneedemeala ORE 53 Plasmídeo 1429 (cCEA - T2A - Tert240 - ERB2A - Muc1) - O ente ce metaancaát 54 Plasmídeo 1361 - sequência de nucleotídeo de vetor É leme TT

SEQ Descrição Pro 55 Plasmídeo 1390 - sequência de nucleotídeo de vetor am 56 Plasmídeo 1386 - sequência de nucleotídeo de vetor E da 57 Plasmídeo 1424 - sequência de nucleotídeo de vetor am 58 AdC68-1424 - sequência de nucleotídeo de vetor completa ag SAS SS TES 59 Plasmídeo 1425 - sequência de nucleotídeo de vetor o a

AdC68-1425 - sequência de nucleotídeo de vetor completa ag SAS SS TES 61 Plasmídeo 1426 - sequência de nucleotídeo de vetor SS a 62 AdC68-1426 - sequência de nucleotídeo de vetor completa ag OSS STS TES 63 Plasmídeo 1427 sequência de nucleotídeo de vetor mm 64 AdC68-1427 - sequência de nucleotídeo de vetor completa ag O CSS SS TES 65 Plasmídeo 1428 - sequência de nucleotídeo de vetor mea o SS

AdC68-1428 - sequência de nucleotídeo de vetor completa o ja CSS SS SO 67 Plasmídeo 1429 - sequência de nucleotídeo de vetor ane

AdC68-1429 - sequência de nucleotídeo de vetor completa o ja Tt e o

SEQ Descrição Bro

Plasmídeo 1409 - sequência de nucleotídeo de vetor ame 7O Plasmídeo 1410 - sequência de nucleotídeo de vetor amena o TI Plasmídeo 1411 - sequência de nucleotídeo de vetor o amena oo USC 72 Plasmídeo 1431 - sequência de nucleotídeo de vetor amena 73 Plasmídeo 1432 - sequência de nucleotídeo de vetor amena o O 74 Plasmídeo 1440 - sequência de nucleotídeo de vetor amena SS 75 sequência de nucleotídeo de vetor Vazio AdC68Y (sem a o aa 76 Sequência de aminoácido do Vírus da Encefalomiocardite ore o o SAS TT Sequência de aminoácido do vírus da rinite A equina 2A o eme o SS SS SSSSO 78 Sequência de aminoácido do Vírus da Rinite B Equina 2A oem o SS 79 Sequência de aminoácido de Teschovírus Porcino 2A o eras SS SPSS

Sequência de aminoácido do Vírus ThoseaAsigna 2A aí SS 81 Plasmídeo 1065 (TERT D712A/V713l) - sequência de Jandaia

SEQ Descrição 53 a [55 pa 5 sont sema Ss 5R RS | [5 IA rr CRER | [55 mae A sont Sema Ss 5RF RN | 93 Sequência de IRES do vírus da Encefalomiocardite (EMCV) o Cie ist) LISTAGEM DE SEQUÊNCIA BRUTA (PARCIAL)

SEQ ID NO:42. ORF de Plasmídeo 1424 (sequência de nucleotídeo) atggctagcacccecectagaaccecagagecccttettecttetactactactgacegtactaactategt gacaggctctggecacgccagetetacacctageggegagaaagagacaagegecacecag agaagcagcgtgccaagcagcacegagaagaacgccgtatecatgaccagetecgtactaag cagccactetectageageggcageagcacaacacagggcecaggatgtgacactaggeccecta ccacagaacctacctetagatetacegecacetagggacaggacataacaagegtgecagtga ccagacctgcectaggactetacaacacecectgeecacgatgtgaccagegeccectgataacaa gcectgeceetggaageacageccectecageteataggegtgacetetgececagataccagaccea gececaggatctacagececacecegcacacagegtgacaagtgcccctagacacaagacecge tccaggctetactactectectacecatagegtgacaagegetecegatacaaggecagetecta gctecacagcaccaccagcacatggcgtgacatcagetecegacactagaccetgcteceggate aaccgctecaccageteacggegtgaccagegeacctgataccagacctgctetaggaageac cgcecetecegtgcacaatgtgacatctgcttecaggcagegecageggctetaccetetacactagt gcacaacggcaccagegecagagecacaacaaccecagecageaagageaccecccetteag catccetagecaccacagegacacceccetacceacactggecagecactecaccaagacegata 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tctatatagtateaccggecaggecagcagaagaggcaaccagectegagggagegttatetag aaccagacattcccacecegteggtaggceggcageaccacgegagaccacegitecacticoag accegecacggcecatgggacaccccttgecegectatatatacegagactaaacacttcctgatact catccggagacaaggaacagctteggccagtecttectectategtegeteagacegagectgace ggagcacgcagattggtagaaactatcttccttagateacgatecatagatgccaggtaccecacga gegectecegegecteeccacagagatactagcagatgcgacctetattcctagaattactaggaa accacgctceagtgecegtacggagtectacteaagacteactgcectetaagggeggcggteact ceggeggeeggagtgtacgcacgggagaagececagggaagegtggcagetecggaagag gaggacaccgatccegegecgcectegtgcaacttetacgccagcactectegecetageaagteta cggattegtecgegectacetagcacegectagtacegectaggactetaggagtteceggcataaca agcgccegcettectgagaaatactaagaagtttateteacttggaaaacatgccaagttategetae aagaactcacgtagaagatgtcagtcegegattgcgectagetacacegetegecaggegatega gtatattccagctgcagaacacegectgagagaagaaattctagccaaatttetacattggactgat gtcagtgatacgtagtegagcetgactgacactcectttttetacgteactgagactacctttecaaaagaace goectattettctaccgcaaatctatatagagcaagctgcagtcaateggcattegecagcatetgaa gaggagtgcagctgcaggaacttteecgaggcagaagteegecageacegggaggeceggeeg gegcetteteacgtegegtetgagatttratececaaagecegacgggcetaaggacctategteaacata gattacgtegtaggcgctegcacctttegecgtaaaaagegggeegaacacttigaccteacagat gaaggccctettetecgtgctgaactacgagagagcaagacggcectagectactaggagetteg gtgctgggactagacgatatccacegagettggcagacctttattetecgggtaagageccaaga cectecgecggaactatacttegtaaaggatagegatcaceggagcectatgatactatticecgcaag atcgactcacegaagtceategectegateateaaacegeagaacacttactgcateaggcagtac gccegtggtecagaaggeegegcatggecacgtaagaaaggacatticaagtcgcacgtatecact ctcacegacctecagcecttacatgaggcaattegttacacatttacaagagacttegecectagaga gatgcggtagtcategagcagagctecagectagaacgaagegagcagegatetatttaacatatt cetecgcettcatatateateacgeggtgcgaatcaggggaaaatcatacgtgcagtgccaggagaa tceccacaaggcagocattetategactetettatattcectttactacggegatatagaaaacaageta ttegctaggatragacgggacgagattactactcagactagtagacgacttcctactagtgacteca cacctcacteacgccaaaacctttetecgcactetagtaaggggagtaccagaatacgagctatat gatcaatctecggaaaactgatagtgaatttecctategaggatgaggcacteggaggaacegcat ttatecaaatgccagcacatggcectatteccatagtacgagtetactactagacaccegaactettiga agtgcagtcegactactecagetatacceggacgagcatecegegecagecteacttteaategeg gctttaaggecggacgaaacatgcgcagaaagctttteggagtectecggcettaaataccatticac tetttetegatetecaagteaattegetacagacegtatacacgaacatctacaagatcetgctgcte caagcctaccegattecacgcttgegtacttcagetacegtttraccaacaggatatagaagaacecg accttctttetacaggateattagegatactacceteccetatattactcaatecteaaggecaaagaacge cggaatgategctagatacgaaaggagecgeggagacctettectagegaagegatgcagtggcte tgccaccaggctttectectaaagetgaccaggcacagagtgacctacgatecegetactaggcte gctgegcactgcacagaccecagctatetagaaaacteceeggcaceacectgacegetetaga agcegecgecaacecagceattgecgteagattteaagaccatettggacggateeggecagtae accaattacgccectgctaaagetggecggegacgtagaatctaaccctaggecctgaategecaa gegcacececteateggtagtacatecetiggeaacgaccetectectgacegecteactgactaacttt ctggaaccegeegaccacegeaaagetgaccattgagagcacteccetticaacatagetaaggg gaaggagatgactactectagtgcacaatetgccecagcacctatticagatactectagtacaagg gagaacgcgtagacgggaaceggcagatcataggctacateateggaacecageaggecac acceggtecagegtacageggecgggagattatetaccegaacgaccetecetactgatecaaaac atcatccagaacgacaccggtttetacactcetacacatgattaagtcagatctggteaacgaagag gecaceggccaatteagggatatacceegaactecetaagecgttcateacetegaacaacagea acceggtegaggatgaagatgcggtggccttgacgtacgaacctgagatccagaacaccaccet acttgtggtaggatgaacaatcagagcectaccagtetececacgactecagetgategaacgacaa caggaccctgactttactatecgtgacteggaacgacgatagacccttatgaatacagtatccagaa caagctgtccgtggaccacagegaccctatgatcctgaacatecttitacgggecggacgacece accatttcecegtegtacacttactaccggecegagegtgaacctatecetategtgccacgactaccet ccaatcegecggeecagtactectagcteategacggaaacatccagcageacacecaagaa ctatteatctecaacattaccgagaaaaactceggagactttacacctgteaagecaacaattecgec agcggccactecegeacceactateaaaactateactatgtecgeegaactecegaageceagea tcagctecaacaactegaagecegtggaggataaggacactategegtticaccetataaaccaga ggcacagaataccacctacctttagtaggteaacggacagteccetaccetateteacegagactae agctgtcaaacgggaataggactctgaccttgtttaacgteacceggaacgacgecegggceta cgtgtgcagcatccagaactecgtgagegeaaaceggtetgacecagtgacccetagatgatactat acggccecegacactecgateattteacececegatteatectacetatecggegetaaceteaace tctcatgccactecgcatecaacecceagecegreaatattegtagegeattaacggaattecteage aacatacccaggtectattcattgcgaagatcacecetaacaacaacagaacctacgcctacttta tgtcaaacctggccactagtagaaacaactcecategtgaagitecattacegtgteggegtecgga acttcccegggcetaagegecggegecacegtgagaattataateggcatactegtaggaagtag cectgate SEQ ID NO: 43. Polipeptídeo de Plasmídeo 1424

MASTPGTQSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSV PSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQGQDVTLAPATEPASGSA ATWGQDVTSVPVTRPALGSTTPPAHDVTSAPDNKPAPGSTAPPAHG VTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPD TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPALG STAPPVHNVTSASGSASGSASTLVHNGTSARATTTPASKSTPFSIPS HHSDTPTTLASHSTKTDASSTHHSSVPPLTSSNHSTSPQLSTGVSFF FLSFHISNLQFNSSLEDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKQAGGFLGLSNI KFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVS VSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCAQCRR KNYGQLDIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSA GNGGSSLSYTNPAVAAASANLGSGTILSEGATNFSLLKLAGDVELNP GPGAAPEPERTPVGQGSWAHPGRTRGPSDRGFCVVSPARPAEEAT SLEGALSGTRHSHPSVGRQHHAGPPSTSRPPRPWDTPCPPVYAETK HFLYSSGDKEQLRPSFLLSSLRPSLTGARRLVETIFLGSRPWMPGTP RRLPRLPQRYWQMRPLFLELLGNHAQCPYGVLLKTHCPLRAAVTPA AGVCAREKPQGSVAAPEEEDTDPRRLVQLLRQHSSPWQVYGFVRA CLRRLVPPGLWGSRHNERRFLRNTKKFISLGKHAKLSLQELTWKMSYV RDCAWLRRSPGVGCVPAAEHRLREEILAKFLHWLMSVYVVELLRSFF YVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLQSIGIRQHLKRVQLRELSEAEVRQ HREARPALLTSRLRFIPKPDGLRPIVNMDYVVGARTFRREKRAERLTS RVKALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRAWRTFVLRVRAQDPP PELYFVKVAITGAYDTIPQDRLTEVIASIIKPQNTYCVRRYAVVQOKAAH GHVRKAFKSHVSTLTDLQPYMRQFVAHLQETSPLRDAVVIEQSSSLN EASSGLFDVFLRFMCHHAVRIRGKSYVQCQAGIPQGSILSTLLCSLCYG DMENKLFAGIRRDGLLLRLVDDFLLVTPHLTHAKTFLRTLVRGVPEYG CVVNLRKTVVNFPVEDEALGGTAFVQMPAHGLFPWCGLLLDTRTLE VQOSDYSSYARTSIRASLTFNRGFKAGRNMRRKLFGVLRLKCHSLFLD LQVNSLQTVCTNIYKILLLOAYRFHACVLQLPFHQQVWKNPTFFLRVI SDTASLCYSILKAKNAGMSLGAKGAAGPLPSEAVQWLCHQAFLLKLT RHRVTYVPLLGSLRTAQTALSRKLPGTTLTALEAAANPALPSDFKTIL DGSGQCTNYALLKLAGDVESNPGPESPSAPPHRWCIPWOQRLLLTAS LLTFWNPPTTAKLTIESTPFNVAEGKEVLLLVHNLPQHLFGYSWYKGE RVDGNRQIIGYVIGTAQATPGPAYSGREIIYPNASLLIQNIIQNDTGFYT LHVIKSDLVNEEATGQFRVYPELPKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEP EIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLOQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGPYEC GIQNKLSVDHSDPVILNVLYGPDDPTISPSYTYYRPGVNLSLSCHAAS NPPAQYSWLIDGNIQQHTQELFISNITEKNSGLYTCAQANNSASGHSRT TVKTITVSAELPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLWWV NGQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFENVTRNDARAYVCGIQNSVSANRS DPVTLDVLYGPDTPIISPPDSSYLSGANLNLSCHSASNPSPQYSWRIN GIPQQHTQVLFIAKITPNNNGTYACFVSNLATGRNNSIVKSITVSASGT

SPGLSAGATVGIMIGVLVGVALI SEQ ID NO: 44. ORF de Plasmídeo 1425 (sequência de nucleotídeo) atggctagcgaategeccaagegeacceccecteateggtggtgcatececttageaacgcectectect gaccgccteactgctgactttetagaaccegeegacceacegeaaagetgaccattaagageact cectteaacgtaggectaagaggaaggagatactactectagtacacaatctgccecagceacctatt cgggtactcectagtacaagggagaacgcgtgagacgggaaceggacagatcataggctacatcat cggaacccagcaggcecacacecegatecagegtacageggecaggagattatetaccegaacga cetecetgctgatecaaaacatcatccagaacgacaccggtttetacactetacacgatgattaagte agatctggteaacgaagaggcecaceggccaattcragggtatacccegaactecetaagecatte atcacctegaacaacagcaacceggtegaggatgaagatagcgagtagectigacatacgaacct gagatccagaacaccacctacttgtagtgggtgaacaatcagagectgccagtetececacgac tccagctategaacgacaacaggaccctgactttactatecgtaacteggaacgacgataggaccect tatgaatgcggtatccagaacaagcetgatecgtagaccacagegaccctatgatcctgaacatectt tacgggccggacgaccccaccatttececgtegtacacttactaccagecgggegtgaacctate cetgtegtgccacgcetacetecaateegecggeecagtactectageteategacggaaacatec agcagcacacccaagaactattcatetecaacattaccgagaaaaactegagactttacacctat caagccaacaattcegecageggecactecegeacceactateaaaactatcactatatecgecag aactccegaageccagcateagetecaacaactegaagecegtggaggataaggacactate gegttcacctataaaccagaggcacagaataccacctacctttagtaggteaacggacagteccet gcctateteacegagactgcagcetateaaacgggaataggactctgaccttatitaacgteacecga gaacgacgccegggcectacgtgtacggcatecagaactecgtgagegeaaacegatetgacec agtgaccctagatgtgctatacggeccegacactecgatcattteaceececgattcatectaceta tecggcegetaaceteaaceteteatagecacteegeateeaaceceagecegeaatattegtageg cattaacggaattccteagcaacatacccagatectattcattgcgaagatcaccecectaacaaca acggaacctacgcctactttatateaaacctggccactagtagaaacaactccatcegtgaagtec attaccgtgteggegtecggaacttececgggectagagegecggegecacegtgggaattatgat cggcgtgactegtaggagtggcectgateggatteggegaggageagaggcagcectactgacatgat ggcgacgtagaagagaaccctagececacecetagaacecagagecccttettecttetactact gctgaccecgtgactgactgtegtgacaggctetagecacgcecagcetetacacctageggegagaaa gagacaagcgccacccagagaagcagegtigecaageageacegagaagaacgaccgtatec atgaccagctcegtgctagagcagecactetectageageggcageageacaacacagggeca 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taggcctgctaggagcetteggatactaggactagacgatatccacegagettageggacctttattete cgggtgagagcccaagaccctecgeeggaactatacttegtaaaggtagegatcaceggagec tatgatactattcecgcaagatcegacteacegaagteategectegateateaaacegeagaacac ttactgcgtcaggceagtacgcegtggtecagaaggecgegeatggecacgtaagaaaggcatte aagtcegcacgtgtecacteteacegacetecagecttacatagaggacaattegttacacatttacaag agacttegecectgagagatacagtagtcategageagagcetecagectgaacgaagegagea gcegatetatttgacgatattcctecgcttcatgtateateacgeggtgcgaatrcaggggaaaatcatac gtgcagtgccagggaatcccacaaggacagocattetategactcetettgtattecetttactacageg atatggaaaacaagctattegctaggatecagacgggacagattgctactcagactagtagacga cttcctgctagtgactecgcaceteacteacgecaaaacctttetecgcactetagtaagaggagta ccagaatacggctatatagtcaatctecggaaaactatagtgaatttecctategaggataaggea cteggaggaaccgcatttatecaaatgccagcacatggcctattcecatagtacgagtetactacta gacacccgaactcttgaagtgcagtecgactactecagetatagceccggacgagcatcegegeca gccteacttteaategeggctttaaggecggacgaaacatgcegcagaaagctttteggagtectec ggcttaaataccattegetetttetegatetecaagteaattegetacagacegtgtacacgaacatc tacaagatcctactactecaagectacegattecacacttacatacttcagetgccgttteaccaac aggtgtggaagaaccecgaccttetttetacagateattagegatactgccteccetatattacteaate ctcaaggcaaagaacgaceggaatategetagatacgaaaggagecgegggacctettectage gaagcggtacagtagctetgccaccaggctttectectagaagetgaccaggcacagagtgacct acgtcecegetgctaggetegetgegeactacacagacecagcetatetagaaaactececggeac caccctgacegetetagaagecgecegecaacecagoeattgcegteagatttraagaccatettgg ac SEQ ID NO: 45. Polipeptídeo de Plasmídeo 1425

MASESPSAPPHRWCIPWQRLLLTASLLTFWNPPTTAKLTIESTPFENVA EGKEVLLLVHNLPQHLFGYSWYKGERVDGNRQ!IIGYVIGTAQATPGP AYSGREIIYPNASLLIQNIQNDTGFYTLHVIKSDLVNEEATGQFRVYPE LPKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEPEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPR LQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGPYECGIQNKLSVDHSDPVILNVLYGPD DPTISPSYTYYRPGVNLSLSCHAASNPPAQYSWLIDGNIQQHTQELFI SNITEKNSGLYTCQANNSASGHSRTTVKTITVSAELPKPSISSNNSKP VEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLWWVNGQOSLPVSPRLQLSNGNRTLTL FNVTRNDARAYVCGIQNSVSANRSDPVTLDVLYGPDTPIISPPDSSYL SGANLNLSCHSASNPSPQYSWRINGIPQQHTQVLFIAKITPENNNGTYA CFVSNLATGRNNSIVKSITVSASGTSPGLSAGATVGIMIGVLVGVALIG SGEGRGSLLTCGDVEENPGPTPGTQOSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHAS STPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQ GQDVTLAPATEPASGSAATWGQDVTSVPVTRPALGSTTPPAHDVTS APDNKPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRP APGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTA PPAHGVTSAPDTRPALGSTAPPVHNVTSASGSASGSASTLVHNGTS ARATTTPASKSTPFSIPSHHSDTPTTLASHSTKTDASSTHHSSVPPLT SSNHSTSPQLSTGVSFFFLSFHISNLQFNSSLEDPSTDYYQELQRDIS EMFLQIYKAGGFLGLSNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFN QYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCV LVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGR YVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAAASANLGSGTILSEG ATNFSLLKLAGDVELNPGPGAAPEPERTPVGQGSWAHPGRTRGPSD RGFCVVSPARPAEEATSLEGALSGTRHSHPSVGRQHHAGPPSTSRP PRPWDTPCPPVYAETKHFLYSSGDKEQLRPSFLLSSLRPSLTGARRL VETIFLGSRPWMPGTPRRLPRLPQRYWQMRPLFLELLGNHAQCPYG VLLKTHCPLRAAVTPAAGVCAREKPQGSVAAPEEEDTDPRRLVQLLR QHSSPWQVYGFVRACLRRLVPPGLWGSRHNERRFLRNTKKFISLGK HAKLSLQELTWKMSVRDCAWLRRSPGVGCVPAAEHRLREEILAKFL HWLMSVYVVELLRSFFYVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLOQSIGIRQH LKRVOQLRELSEAEVRQHREARPALLTSRLRFIPKPDGLRPIVNMDYVV GARTFRREKRAERLTSRVKALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIH RAWRTFVLRVRAQDPPPELYFVKVAITGAYDTIPQDRLTEVIASIIKPQ NTYCVRRYAVVQKAAHGHVRKAFKSHVSTLTDLQPYMRQFVAHLQE TSPLRDAVVIEQSSSLNEASSGLFDVFLRFMCHHAVRIRGKSYVQCQ GIPQGSILSTLLCSLCYGDMENKLFAGIRRDGLLLRLVDDFLLVTPHLT HAKTFLRTLVRGVPEYGCVVNLRKTVVNFPVEDEALGGTAFVQMPA HGLFPWCGLLLDTRTLEVOSDYSSYARTSIRASLTFNRGFKAGRNMR RKLFGVLRLKCHSLFLDLQVNSLQTVCTNIYKILLLOAYRFHACVLQLP FHQQVWKNPTFFLRVISDTASLCYSILKAKNAGMSLGAKGAAGPLPS EAVQWLCHQAFLLKLTRHRVTYVPLLGSLRTAQTALSRKLPGTTLTA LEAAANPALPSDFKTILD

SEQ ID NO: 46. ORF de Plasmídeo 1426 (sequência de nucleotídeo)

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Polipeptídeo de Plasmídeo 1426

MASGAAPEPERTPVGAQGSWAHPGRTRGPSDRGFCVVSPARPAEEA TSLEGALSGTRHSHPSVGRQHHAGPPSTSRPPRPWDTPCPPVYAET KHFLYSSGDKEQLRPSFLLSSLRPSLTGARRLVETIFLGSRPWMPGT PRRLPRLPQRYWQMRPLFLELLGNHAQCPYGVLLKTHCPLRAAVTP AAGVCAREKPQGSVAAPEEEDTDPRRLVQLLRQHSSPWQVYGFVR ACLRRLVPPGLWGSRHNERRFLRNTKKFISLGKHAKLSLQELTWKMS VRDCAWLRRSPGVGCVPAAEHRLREEILAKFLHWLMSVYVVELLRS FFYVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLQSIGIRQHLKRVQLRELSEAEVR QHREARPALLTSRLRFIPKPDGLRPIVNMDYVVGARTFRREKRAERL TSRVKALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRAWRTFVLRVRAQD PPPELYFVKVAITGAYDTIPQDRLTEVIASIIKPQNTYCVRRYAVVQKA AHGHVRKAFKSHVSTLTDLQPYMRQFVAHLQETSPLRDAVVIEQSSS LNEASSGLFDVFLRFMCHHAVRIRGKSYVQCQGIPQGSILSTLLCSLC YGDMENKLFAGIRRDGLLLRLVDDFLLVTPHLTHAKTFLRTLVRGVPE YGCVVNLRKTVVNFPVEDEALGGTAFVQMPAHGLFPWCGLLLDTRT LEVQSDYSSYARTSIRASLTFNRGFKAGRNMRRKLFGVLRLKCHSLF LDLQVNSLQTVCTNIYKILLLAOAYRFHACVLALPFHQQVWKNPTFFLR VISDTASLCYSILKAKNAGMSLGAKGAAGPLPSEAVQWLCHQAFLLK LTRHRVTYVPLLGSLRTAQTQLSRKLPGTTLTALEAAANPALPSDFKT ILDGSGTILSEGATNFSLLKLAGDVELNPGPTPGTQSPFFLLLLLTVLT VVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNAVSMTSSVLSSHS PGSGSSTTAGQADVTLAPATEPASGSAATWGQDVTSVPVTRPALGST TPPAHDVTSAPDNKPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHG VTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPD TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPALGSTAPPVHNVTSASGSASGSA STLVHNGTSARATTTPASKSTPFSIPSHHSDTPTTLASHSTKTDASST HHSSVPPLTSSNHSTSPQLSTGVSFFFLSFHISNLQFNSSLEDPSTDY YQELQRDISEMFLQIYKAGGFLGLSNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTIN VHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGAGVPGW GIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYHPMSE YPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAAASAN LGSGRIFNAHYAGYFADLLIHDIETNPGPESPSAPPHRWCIPWOQRLLL TASLLTFWNPPTTAKLTIESTPFNVAEGKEVLLLVHNLPQHLFGYSWY KGERVDGNRQIIGYVIGTAQATPGPAYSGREIIYPNASLLIQNIIQNDT GFYTLHVIKSDLVNEEATGQFRVYPELPKPFITSNNSNPVEDEDAVAL TCEPEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGP YECGIQNKLSVDHSDPVILNVLYGPDDPTISPSYTYYRPGVNLSLSCH AASNPPAQYSWLIDGNIQQHTQELFISNITEKNSGLYTCQANNSASGH SRTTVKTITVSAELPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLW WVNGQOSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDARAYVCGIQNSVSAN RSDPVTLDVLYGPDTPIISPPDSSYLSGANLNLSCHSASNPSPQYSW RINGIPQOQHTQVLFIAKITPNNNGTYACFVSNLATGRNNSIVKSITVSA

SGTSPGLSAGATVGIMIGVLVGVALI SEQ ID NO: 48. ORF de Plasmídeo 1427 (sequência de nucleotídeo) atggctagcggagctgcceceggagecggagaggacccccegttagecaggagategtaggecea tcegggacgcaccaggggaccatcegacaggaggattctatatagtateaccggecaggecage agaagaggcaaccagcctegagggagegttgtetagaaccagacatteccacecgteggtagg ceggcagcaccacgeggagaccacegtecactticcagacegecacggecatagggacacccctt gecegoectatatatacegagactaaacacttcectatacteateecggagacaaggaacagcettegg cegtecttectectategtegeteagacegagectgaceggagcacgacagattagtggaaactatc ttecttaggteacgatecatagataccaggtaccccacagegectecegegecteceacagagata ctaggcagatgagcggcectetattcetagaattgctaggaaaccacgcteagtgccegtacggagtect gctcaagactceactgceccetetagagggeggeagteactecggeggeeggagtgatacacacgaga gaagccccagggaagegtagcagetecggaagaggaggacacegatcegegecgectegta caacttctgcgccagceactectegecetageaagtetacagattegtecgegectacetaegecge ctagtgcegectgggetetaggagtteceggcataacgagegcecgcttectgagaaatactaagaa gtttatctcacttagaaaacatgccaagttategetacaagaacteacgatagaagatgtcagtecg ecgattgegectagetacgcegetegecgggcategagtatattecagectacagaacacegectga 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SEQ ID NO: 49. Polipeptídeo de Plasmídeo 1427

MASGAAPEPERTPVGQGSWAHPGRTRGPSDRGFCVVSPARPAEEA TSLEGALSGTRHSHPSVGRQHHAGPPSTSRPPRPWDTPCPPVYAET KHFLYSSGDKEQLRPSFLLSSLRPSLTGARRLVETIFLGSRPWMPGT PRRLPRLPQRYWQMRPLFLELLGNHAQCPYGVLLKTHCPLRAAVTP AAGVCAREKPQGSVAAPEEEDTDPRRLVQLLRQHSSPWQVYGFVR ACLRRLVPPGLWGSRHNERRFLRNTKKFISLGKHAKLSLQELTWKMS VRDCAWLRRSPGVGCVPAAEHRLREEILAKFLHWLMSVYVVELLRS FFYVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLQSIGIRQHLKRVOQLRELSEAEVR QHREARPALLTSRLRFIPKPDGLRPIVNMDYVVGARTFRREKRAERL TSRVKALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRAWRTFVLRVRAQD PPPELYFVKVAITGAYDTIPQDRLTEVIASIIKPQNTYCVRRYAVVQKA AHGHVRKAFKSHVSTLTDLAPYMRQFVAHLQETSPLRDAVVIEQSSS LNEASSGLFDVFLRFMCHHAVRIRGKSYVQCQGIPQGSILSTLLCSLC YGDMENKLFAGIRRDGLLLRLVDDFLLVTPHLTHAKTFLRTLVRGVPE YGCVVNLRKTVVNFPVEDEALGGTAFVQMPAHGLFPWCGLLLDTRT LEVOSDYSSYARTSIRASLTFNRGFKAGRNMRRKLFGVLRLKCHSLF LDLQVNSLQTVCTNIYKILLLAOAYRFHACVLALPFHQOQVWKNPTFFLR VISDTASLCYSILKAKNAGMSLGAKGAAGPLPSEAVQWLCHQAFLLK LTRHRVTYVPLLGSLRTAQTQLSRKLPGTTLTALEAAANPALPSDFKT ILDGSGQCTNYALLKLAGDVESNPGPESPSAPPHRWCIPWOQRLLLTA SLLTFWNPPTTAKLTIESTPFNVAEGKEVLLLVHNLPQHLFGYSWYKG ERVDGNRQIIGYVIGTAQATPGPAYSGREIIYPNASLLIQNIIQNDTGFY TLHVIKSDLVNEEATGQFRVYPELPKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCE PEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLOQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGPYEC GIQNKLSVDHSDPVILNVLYGPDDPTISPSYTYYRPGVNLSLSCHAAS NPPAQYSWLIDGNIQQHTQELFISNITEKNSGLYTCAQANNSASGHSRT TVKTITVSAELPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLWWV NGQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFENVTRNDARAYVCGIQNSVSANRS DPVTLDVLYGPDTPIISPPDSSYLSGANLNLSCHSASNPSPQYSWRIN GIPQQHTQAVLFIAKITPNNNGTYACFVSNLATGRNNSIVKSITVSASGT SPGLSAGATVGIMIGVLVGVALIGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPTPG TQSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEK NAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTAQGQDVTLAPATEPASGSAATWGQ DVTSVPVTRPALGSTTPPAHDVTSAPDNKPAPGSTAPPAHGVTSAPD TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPG STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPALGSTAPPV HNVTSASGSASGSASTLVHNGTSARATTTPASKSTPFSIPSHHSDTP TTLASHSTKTDASSTHHSSVPPLTSSNHSTSPQLSTGVSFFFLSFHIS NLQFNSSLEDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKAGGFLGLSNIKFRPGS VVVQOLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPF PFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCACRRKNYGQL DIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSS

LSYTNPAVAAASANL SEQ ID NO: 50. ORF de Plasmídeo 1428 (sequência de nucleotídeo) atggctagcacccectggaaccecagagocecccttettecttetactgctactgacegtactgactategt gacaggctctggccacgcecagcetetacacctageggegagaaagagacaagegecacecag agaagcagcgtgccaagcagcacegagaagaacgccgtatecatgaccagetecatactaag cagccactcectectageageggcagecagcacaacacagggecaggatgtgacactagececta ccacagaacctgcctetagatetacegecacetagggacaggacgatgacaagegtgccagtga ccagacctgcectaggactetacaacacecectgeecacgatgtgaccagegeccectgataacaa gectgcccctagaageacagecectecageteatagegtgacetetaceccagataccagacea gccecaggatcetacagececacecgecacacggcegtgacaagitgecectgacacaagaceege tecaggctetactgctectectgcecatagegtgacaagegetecegatacaaggecagetecta gctecacagcaccaccagcacatggegtgacatcagcetecegacactagaccetacteceggate aaccgcetecaccageteacggegtagaccagegcaccectgataccagacctactetaggaageac cgccececetecegtgcacaatgtgacatctgcttecggcagegecageggctetgcectetacactagt gcacaacggcaccagegecagagecacaacaaccecagecageaagageaccecccetteag catccetagecaccacagegacacceccetacceacactggecagecactecaccaagacegata 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Polipeptídeo de Plasmídeo 1428

MASTPGTQSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSV PSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQAGQDVTLAPATEPASGSA ATWGQDVTSVPVTRPALGSTTPPAHDVTSAPDNKPAPGSTAPPAHG VTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPD TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPALG STAPPVHNVTSASGSASGSASTLVHNGTSARATTTPASKSTPFSIPS HHSDTPTTLASHSTKTDASSTHHSSVPPLTSSNHSTSPQLSTGVSFF FLSFHISNLQOFNSSLEDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKAGGFLGLSNI KFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVS VSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCAQCRR KNYGQLDIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSA GNGGSSLSYTNPAVAAASANLGSGRIFNAHYAGYFADLLIHDIETNPG PKLTIESTPFNVAEGKEVLLLVHNLPQHLFGYSWYKGERVDGNRQA!IIG YVIGTAQATPGPAYSGREIIYPNASLLIQNIIQNDTGFYTLHVIKSDLVN EEATGQFRVYPELPKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEPEIQNTTYLW WVNNQSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGPYECGIQNKLSVDH SDPVILNVLYGPDDPTISPSYTYYRPGVNLSLSCHAASNPPAQYSWLI DGNIQQHTQELFISNITEKNSGLYTCAQANNSASGHSRTTVKTITVSAE LPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLWWVNGQSLPVSP RLQLSNGNRTLTLFNVTRNDARAYVCGIQNSVSANRSDPVTLDVLYG PDTPIISPPDSSYLSGANLNLSCHSASNPSPQYSWRINGIPQQHTAVL FIAKITPNNNGTYACFVSNLATGRNNSIVKSITVSASGSGEGRGSLLTC GDVEENPGPGAAPEPERTPVGQGSWAHPGRTRGPSDRGFCVVSPA RPAEEATSLEGALSGTRHSHPSVGRQHHAGPPSTSRPPRPWDTPC PPVYAETKHFLYSSGDKEQLRPSFLLSSLRPSLTGARRLVETIFLGSR PWMPGTPRRLPRLPQRYWQMRPLFLELLGNHAQCPYGVLLKTHCPL RAAVTPAAGVCAREKPQGSVAAPEEEDTDPRRLVQLLRQHSSPWQ VYGFVRACLRRLVPPGLWGSRHNERRFLRNTKKFISLGKHAKLSLQE LTWKMSVRDCAWLRRSPGVGCVPAAEHRLREEILAKFLHWLMSVYV VELLRSFFYVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLOQSIGIRQHLKRVQLREL SEAEVRQHREARPALLTSRLRFIPKPDGLRPIVNMDYVVGARTFRRE KRAERLTSRVKALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRAWRTFVL RVRAQDPPPELYFVKVAITGAYDTIPQDRLTEVIASI!IKPQNTYCVRRY AVVQOKAAHGHVRKAFKSHVSTLTDLQPYMRQFVAHLQETSPLRDAV VIEQSSSLNEASSGLFDVFLRFMCHHAVRIRGKSYVQCQGIPQGSILS TLLCSLCYGDMENKLFAGIRRDGLLLRLVDDFLLVTPHLTHAKTFLRTL VRGVPEYGCVVNLRKTVVNFPVEDEALGGTAFVQMPAHGLFPWCGL LLDTRTLEVASDYSSYARTSIRASLTFNRGFKAGRNMRRKLFGVLRL KCHSLFLDLQVNSLQTVCTNIYKILLLAAYRFHACVLQLPFHQQVWKN PTFFLRVISDTASLCYSILKAKNAGMSLGAKGAAGPLPSEAVQWLCH QAFLLKLTRHRVTYVPLLGSLRTAQTQLSRKLPGTTLTALEAAANPAL

PSDFKTILD SEQ ID NO: 52. ORF de Plasmídeo 1429 (sequência de nucleotídeo) atggctagcaagctgaccattgagagcactceccttcaacatagctaaggggaaggagatactac tcectagtgcacaatetgceccagcacctattcaggtactectagtacaagggagaacgacgatagac gggaaccggcagatcataggctacgteateggaacecageaggecacaccecggtecagegta cagcggcegggagattatetaccegaacgacctecetgctgatccaaaacatcatecagaacgac accggtttetacactetacacgtgattaagtcagatctggteaacgaagaggecaceggaccaatte agggtataccecgaactecetaagecgttcateacetegaacaacageaacecgagtegaggatg aagatgcggtagccttgacgatacgaacctgagatccagaacaccacctacttgtagtagataaa caatcagagcctaccagtetececacgactecagetategaacgacaacaggaccctgacttta ctatecegtgacteggaacgacataggcccttataaatgcagtatccagaacaagcetatecgtaga ccacagegaccctatagatcetaaacatectttacgggceggacgaceccaccattteceegtegta cacttactaccggcegggcgtgaacctatecetategtaccacgetacetecaateegecggece agtactcectggcteategacggaaacatecagcagcacaccecaagaactattcatctecaacatt accgagaaaaactcegggactttacacctgteaagecaacaatteegecageggecactecege accactgatcaaaactatcactatatecgcegaactecegaageccagcatceagetecaacaact 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cagaccagcccecaggatcetacagececacecgcacacagegtgacaagtgccecetgacacaa gaccegcetecaggctetactactectectacecatagegtagacaagegetecegatacaaggeca gctectggetecacageaccaccageacatagegtgacatcagetecegacactagaccectacte ccecggatcaacegetecaceageteacggegtgacceagegeacetgataccagacctactetgg gaagcacegceccecetecegtgcacaatgatagacatcetacttecggcagegecagegactetgectet acactggtgcacaacggcaccagegecagagecacaacaaccccagecageaagageace ccecetteageatecetagecaceacagegacacecetaceacactggecagecactecaceaag acegatgcctetagecacecaceactecagegtgececetetgaccageageaaccacageaca agcceceagcetatetaceggcagteteattettetttetatecttecacatecagcaacetacagtteaac agcagcctggaagatcccagcacegactactaccaggaactagcageggagatatctagegagat gttectgcaaatctacaagcagggacggcttectagacctgagcaacatcaagtteagacecage agcgtagtagtgcagctgaccctagettitecgggaaggcaccatcraacatacacgacgatagaaa cccagttecaaccagtacaagacegaggecgecagecggtacaacctgaccatctecgatgatate cgtgtceegacgtgaccectteccattetetgcecagtetagegcaggegtaccaggatagagaattgct ctgctaggtactegtatacatactagtagcecctagecategtatatctagattigecctagecgtatacea gtgceggeggaagaattacagecagetagacatcetteccegecagagacacetaccacecceat gagcgagtaccecacataccacaccecacggcagatacgtgccaccecagetecacegacagat cecectacgagaaagtatetaceggeaacaggeggcagcetecetgagetacacaaatcctagcegt ggcegetaccetecgecaaceta SEQ ID NO: 53. Polipeptídeo de Plasmídeo 1429

MASKLTIESTPFNVAEGKEVLLLVHNLPQHLFGYSWYKGERVDGNRQ IGYVIGTAQATPGPAYSGREIIYPNASLLIQNIIQNDTGFYTLHVIKSDL VNEEATGQFRVYPELPKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEPEIQNTTYL WWVNNQOSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGPYECGIQNKLSV DHSDPVILNVLYGPDDPTISPSYTYYRPGVNLSLSCHAASNPPAQYS WLIDGNIQQHTQELFISNITEKNSGLYTCQANNSASGHSRTTVKTITVS AELPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLWWVNGOQOSLPV SPRLQLSNGNRTLTLFEFNVTRNDARAYVCGIQNSVSANRSDPVTLDVL YGPDTPIISPPDSSYLSGANLNLSCHSASNPSPQYSWRINGIPQQHTA VLFIAKITPENNNGTYACFVSNLATGRNNSIVKSITVSASGSGEGRGSLL TCGDVEENPGPGAAPEPERTPVGQGSWAHPGRTRGPSDRGFCVVS PARPAEEATSLEGALSGTRHSHPSVGRQHHAGPPSTSRPPRPWDTP CPPVYAETKHFLYSSGDKEQLRPSFLLSSLRPSLTGARRLVETIFLGS RPWMPGTPRRLPRLPQRYWQMRPLFLELLGNHAQCPYGVLLKTHC PLRAAVTPAAGVCAREKPQGSVAAPEEEDTDPRRLVQLLRQHSSPW QVYGFVRACLRRLVPPGLWGSRHNERRFLRNTKKFISLGKHAKLSLQ ELTWKMSVRDCAWLRRSPGVGCVPAAEHRLREEILAKFLHWLMSVY VVELLRSFFYVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLQSIGIRQHLKRVQLRE LSEAEVRQHREARPALLTSRLRFIPKPDGLRPIVNMDYVVGARTFRR EKRAERLTSRVKALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRAWRTFV LRVRAQDPPPELYFVKVAITGAYDTIPQDRLTEVIAS!IKPQNTYCVRR YAVVOKAAHGHVRKAFKSHVSTLTDLQPYMRQFVAHLQETSPLRDA VVIEQSSSLNEASSGLFDVFLRFMCHHAVRIRGKSYVQCQGIPQAGSIL STLLCSLCYGDMENKLFAGIRRDGLLLRLVDDFLLVTPHLTHAKTFLR TLVRGVPEYGCVVNLRKTVVNFPVEDEALGGTAFVQMPAHGLFPWC GLLLDTRTLEVOSDYSSYARTSIRASLTFNRGFKAGRNMRRKLFGVL RLKCHSLFLDLQVNSLQTVCTNIYKILLLAAYRFHACVLALPFHQOQVW KNPTFFLRVISDTASLCYSILKAKNAGMSLGAKGAAGPLPSEAVQWL CHQAFLLKLTRHRVTYVPLLGSLRTAQTQLSRKLPGTTLTALEAAANP ALPSDFKTILDGSGTILSEGATNFSLLKLAGDVELNPGPTPGTQOSPFFL LLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQORSSVPSSTEKNAVSMTS SVLSSHSPGSGSSTTAQGQDVTLAPATEPASGSAATWGQDVTSVPVT RPALGSTTPPAHDVTSAPDNKPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGS TAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPAH GVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPALGSTAPPVHNVTSAS GSASGSASTLVHNGTSARATTTPASKSTPFSIPSHHSDTPTTLASHST KTDASSTHHSSVPPLTSSNHSTSPQLSTGVSFFFLSFHISNLQFNSSL EDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKAGGFLGLSNIKFRPGSVVVQLTLA FREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSG AGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFPARDT YHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAV

AAASANL SEQ ID NO: 65. Vetor completo de Plasmídeo 1428 (sequência de nucleotídeo) ggcgtaatgctctaccagtgattacaaccaattaaccaattctgattagaaaaactcategagcate aaatgaaactgacaatttattcatatcaggattatcaataccatatttttyaaaaagccgtttetataata aaggagaaaactcaccgaggcagttcecataggatggcaagatcctagtatcgagtetgcgattce gactegtcecaacatcaatacaacctattaatttcccctegtcaaaaataaggttatcaagtgagaa atcaccatgagtgacgactgaatccggtgagaatggcaaaagcttatgacatttetttecagacttatt caacaggccagccattacgactegtcatcaaaateactegeateaaceaaaccgttattcattcgta attgcgcctgagegagacgaaatacgcgatcgctattaaaaggacaattacaaacaggaatca aatgcaaccggegcaggaacactgccagegcateaacaatatttteacctgaatcaggatattett ctaatacctggaatgctatttteceggggategcagtggtgagtaaccatgcatcatcaggagtac ggataaaatgcttgatagteggaagaggcataaattccegteagecagtttagtctgaccateteate tataacatcattggcaacgctacctttaccatattteagaaacaactcetagegcateggagcetteccat acaatcgatagattgtegcaccetgattaceegacattategegageccatttatacccatataaate agcatccatattggaatttaategeggcectegagcaagacatttecegttgaatatggcteataaca 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Vetor completo de AdC68Y 1428 (sequência de nucleotídeo) ccatcectteaataatataccteaaactttttatacacattaatatacaaatgagacatttaaatttaggga ggaagggcggtgattggtegagggatgagegaccegttaggggeggggcgagigacatitigatg acgtagttacgaggaggagcecagtttacaagttctegtaggaaaagigacgtraaacgagatot gatttgaacacggaaatactcaattttecegegetetetaacaggaaatgaggtatttetaggegga tgcaagtgaaaacgggccattttegcgcgaaaactgaatgaggaagitgaaaatctgagtaattte gcgtttatagcagggaggagtatttaccgagggcegagtagactttgacegattacgtagagattt cgattaccgtattttteacetaaatttecgegtacggtateaaagtecgatatttttactactataatagt aatcaattacggggtcattagttcatagcecatatatagagttcegegttacataacttacggtaaat ggccegectggetagacegeceaacgacececgceccattgacgateaataatgacgtatattcccat agtaacgccaatagggactttecattgacatcaatagggtagagtatttacggtaaactgccecactta gcagtacatcaagtgatatcatataccaagtacgcceccectattgacateaatgacggtaaatagece gcectagcattatgcecagtacatgaccttatgggactttectactiggcagtacatctacgatattagte atcgctattaccatagtgatgcagttttagcagtacatcaataggcatagatagcggtttaacteacg 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ORF de Plasmídeo 1424 (RNA) auggcuagcaccccuggaacecagagecceuucuuceuucugeugeugeugacegugeu gacugucgugacaggcucuggccacgecageucuacaccuggeggegagaaagagaca agcgccacecagagaagcagegugecaageageacegagaagaacgeceguguecauga ccagcucegugeugageagecacucuceuggcageggcageageacaacacagggecag gaugugacacuggcceccugecacagaaccecugecucuggaucugecgecaceugaggaca ggacgugacaagegugecagugaccagaccugeceugggeucuacaacacececugece acgaugugaccagegececcugauaacaagecugececuggaageacagececuccageu cauggcgugaccucugececagauaccagaccagecccaggaucuacagececacecge acacggcgugacaagugccccugacacaagaccegeuccaggeucuacugeuceuceug cceauggegugacaagegeuceegauacaaggecageuceuggeuccacageaceacea gcacauggegugacaucageucecgacacuagaccugeucecggaucaacegeuceace agcucacggegugaccagegeaceugauaccagaccugeucugggaageacegececue cegugeacaaugugacaucugeuuceggeagegecageggeucugecucuacacuggu gcacaacggcaccagegecagagecacaacaacceccagecageaagageacececuuca gcaucceccuagecaccacagegacaceceuaceacacuggecagecacuccaceaagace gaugccucuagcaceccaceacuceagegugecececcucugaccageageaaceacageac 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ORF de Plasmídeo 1425 (RNA) auggcuagegaaucgecaagegeacececucaucgguggugeaucecuuggeaacgecu cceuceugacegecucacugecugacuuucuggaaceegecgaccacegeaaageugacea uugagagcacucceuucaacguggcugaggggaaggaggugeugeuceuggugeacaa ucugceceageaceuguueggguacuccugguacaagggagaacgeguggacgggaac cggcagaucauaggcuacgucaucggaacccageaggecacacecgguecageguaca geggeegggagauuaucuaccegaacgecucecugeugaucraaaacaucauccagaa cgacaccgguuucuacacucugcacgugauuaagucagaucuggucaacgaagaggeo acceggccaauucaggguguaccecgaacucecuaagecguucaucaccucgaacaacag caacceggucegaggaugaagaugegguggecuugacgugegaaccugagauccagaac accaccuacuuguggugggugaacaaucagagecugecagueuceccacgacuccage ugucgaacgacaacaggacccugacuuugeugueegugacucggaacgacgugggece uuaugaaugegguauccagaacaageuguceguggaccacagegacceugugauceug aacguccuuuacgggceggacgaceecaceauuucecegueguacacuuacuaceggee gaggegugaaceugueceuguegugecacgeugecuccaaucegecggecraguacuceu ggcucaucgacggaaacauccagcageacacecaagaacuguucaucucceaacauuac cgagaaaaacucgggacuuuacaccugucaagecaacaauucegecageggecacucec 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ORF de Plasmídeo 1426 (RNA) auggcuageggagcugececggagecggagaggaceceeguuggecagggaucguggg cceaucegggacgeaccraggggaccaucegacaggggauucuguguggugucacegge caggccagcagaagaggcaaccagecucgagggageguugucuggaaccagacauuce caccegueggugggecggcageaceacgegggacceaceguecacuuccagacegecacg gecaugggacaceceuugecegecuguguaugecgagacuaaacacuuccuguacuca uccggagacaaggaacageuucggecguceuuceuceugueguegeucagacegagecu gaccggagcacgcagauugguggaaacuaucuuceuugggucacguceguggaugeca gguaccecacggegecuceegegecucrcacagagauacuggcagaugeggecucuguu ccuggaauugeugggaaaccacgeucagugeceguacggaguecugeucaagacucac ugccecucugagggeggeggucacuceggeggceggagugugegeacgggagaagecee agggaageguggcageuceggaagaggaggacacegaucegegecgecuegugeaacu ucugegecageacuceucgeceuggeaagueuacggguucgucegegecugecugeges gecuggugecgecugggeucugggguucceggcauaacgagegecgeuuceugagaaa uacuaagaaguuuaucucacuuggaaaacaugecaaguuguegeugeaagaacucacg uggaagaugucagucegegauugegecuggcugegecgeuegecgggeguegggugug uuccagcugcagaacacegecugagagaagaaauucuggccaaauuucugeauuggeu 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ORF de Plasmídeo 1427 (RNA) auggcuageggageugeceeggagecggagaggacecceguuggecagggaucguggg cceaucegggacgeaccraggggaccaucegacaggggauucuguguggugucacegge caggccagcagaagaggcaaccagecucgagggageguugucuggaaccagacauuce caccegueggugggecggcageaceacgegggacceaceguecacuuccagacegecacg gecaugggacaceceuugecegecuguguaugecgagacuaaacacuuceuguacuca uceggagacaaggaacagcuucggecguceuuceuceugueguegeucagacegagecu gaccggagcacgcagauugguggaaacuaucuuceuugggucacguceguggaugeca gguaccecacggegecuceegegecucrcacagagauacuggcagaugeggecucuguu ccuggaauugeugggaaaccacgeucagugeceguacggaguecugeucaagacucac ugccecucugagggeggeggucacuceggeggceggagugugegeacgggagaagecee agggaageguggcageuceggaagaggaggacacegaucegegecgecuegugeaacu ucugegecageacuceucgeceuggeaagueuacggguucgucegegecugecugeges gecuggugecgecugggeucugggguucceggcauaacgagegecgeuuceugagaaa uacuaagaaguuuaucucacuuggaaaacaugecaaguuguegeugeaagaacucacg uggaagaugucagucegegauugegecuggcugegecgeuegecgggeguegggugug uuccagcugcagaacacegecugagagaagaaauucuggecaaauuucugeauuggeu 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ORF de Plasmídeo 1428 (RNA) auggcuagcaccecuggaacecagagecceuucuuceuucugeugeugeugacegugeu gacuguegugacaggcucuggccacgecageucuacaccuggeggegagaaagagaca agcgecaccecagagaageagegugecaageageacegagaagaacgecgugucecauga ccagcucegugeugageagecacucuceuggcageggcageageacaacacagggecag gaugugacacuggccecugecacagaaceugecucuggaucugecgecaceuggggaca ggacgugacaagegugecagugaccagaccugeccugggeucuacaacacececugece acgaugugaccagegececugauaacaagecugececuggaageacagececuccageu cauggcgugaccucugececagauaccagaccagececaggaucuacagececacecge acacggcgugacaagugecccugacacaagaccegeuceaggeucuacugeuceuceug cceauggegugacaagegeucecegauacaaggecageuccuggcuccacageaceacea gcacauggegugacaucageucecgacacuagaccugeucecggaucaacegeuceace agcucacggegugaccagegeaceugauacceagaccugeucugggaageacegececue cegugcacaaugugacaucugeuuceggcagegecageggeucugecucuacacuggu gcacaacggcaccagegecagagecacaacaaccccagecageaagageacececuuca gcaucccuagecacceacagegacaceceuaceacacuggecagecacuccaceaagace gaugccucuagcacecaceacuceagegugececoucugaccageageaaceacageac 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ORF de Plasmídeo 1429 (RNA) auggcuagcaagcugaccauugagageacucecuucaacguggcugaggggaaggaga ugeugeuceuggugeacaaucugececageaceuguueggguacuccugguacaaggg agaacgeguggacgggaaccggcagaucavuaggeuacgucaucggaacecageagges acaccegguccageguacageggecgggagauuaucuaccegaacgecucecugeugau ccaaaacaucauccagaacgacaccegguuucuacacucugcacgugauuaagucagau cuggucaacgaagaggccaceggecaauucaggguguacceegaacucecuaagecgu ucaucaccucgaacaacagcaaccegguegaggaugaagaugegguggecuugacgug cgaaccugagauccagaacaccaccuacuuguggugggugaacaaucagagecugeca gucuceccacgacuccageuguegaacgacaacaggacceugacuuugeuguecgugac ucggaacgacgugggcccuuaugaaugegguauccagaacaageuguceguggaceac agegaccecugugauccugaacguccuuuacgggecggacgaccccaceauuucecegue guacacuuacuaccggecegggegugaaccugueceuguegugecacgeugecucraauc cgceggeceaguacuccuggcucaucgacggaaacauccageageacacccaagaacug Uucaucuccaacauvacegagaaaaacucgggacuuuacaccugucaagecaacaauu cegecageggecacucecgcaceacuguceaaaacuaucacugugucegecgaacucecg aagcccageaucageuccaacaacucgaageceguggaggauaaggacgeuguegegu 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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Construção de antígeno, caracterizada pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de CEA imunogênico.

2. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico.

3. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico.

4. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de MUC1 imunogênico e uma sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo de TERT imunogênico.

5. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 2, 3 ou 4, caracterizada pelo fato de que compreende ainda uma sequência de nucleotídeo espaçadora.

6. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que a sequência de nucleotídeo espaçadora codifica um peptídeo 2A.

7. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que a sequência de nucleotídeo espaçadora codifica um peptídeo 2A selecionado do grupo que consiste em EMC2A, ERAZA, ERB2A e T2A.

8. Construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo de CEA imunogênico é selecionado a partir do grupo que consiste em: (1) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo nos aminoácidos 2-702 da SEQ ID NO: 2, aminoácidos 323-702 da SEQ ID

NO: 2 ou aminoácidos 323-677 da SEQ ID NO: 2; (2) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15 ou nos aminoácidos 4- 704 da SEQ ID NO: 15; (3) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17 ou nos aminoácidos 4- 526 da SEQ ID NO: 17; (4) um polipeptídeo compreendendo ou consistindo na sequência da SEQ ID NO: 19 ou nos aminoácidos 4-468 da SEQ ID NO: 19; ou (5) um polipeptídeo que é uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (4) acima.

9. Construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 8, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo de TERT imunogênico é selecionado a partir do grupo que consiste em: (1) um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9 ou dos aminoácidos 2-893 da SEQ ID NO: 9; (2) um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 ou dos aminoácidos 3-791 da SEQ ID NO: 11; (3) um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 ou os aminoácidos 4-594 da SEQ ID NO: 13; e (4) um polipeptídeo que é uma variante funcional de qualquer um dos polipeptídeos de (1) - (3) acima.

10. Construção de antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2, 4 a 9, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo de MUC1 imunogênico é selecionado a partir do grupo que consiste em: (1) um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 ou os aminoácidos 4-537 da SEQ ID NO: 5; (2) um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 ou os aminoácidos 4-517 da SEQ ID NO:7;e (3) uma variante funcional do polipeptídeo de (1) ou (2) acima.

11. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: (1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1088 da SEQ ID NO: 31; (2) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1081 da SEQ ID NO: 33; (3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1085 da SEQ ID NO: 35; (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37 ou uma sequência de aminoácidos que compreende uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1030 da SEQ ID NO: 37; (5) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 39 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1381 da SEQ ID NO: 39; e (6) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1441 da SEQ ID NO: 41.

12. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste em: (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3264 da SEQ ID NO: 30; (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3243 da SEQ ID NO: 32; (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3255 da SEQ ID NO: 34; (4) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 36 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-3090 da SEQ ID NO: 36; (5) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 38 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4143 da SEQ ID NO: 38; (6) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 40 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-4323 da SEQ ID NO: 40; e (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

13. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em:

(1) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2003 da SEQ ID NO: 43; (2) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 45 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2001 da SEQ ID NO: 45; 3) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 47 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-2008 da SEQ ID NO: 47; (4) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 49 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1996 da SEQ ID NO: 49; (5) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 51 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 51; e (6) a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 53 ou uma sequência de aminoácidos que compreende os aminoácidos 4-1943 da SEQ ID NO: 53.

14. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeo selecionada a partir do grupo que consiste em: (1) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 42 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6009 da SEQ ID NO: 42; (2) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 44 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6003 da SEQ ID NO: 44; (3) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-6024 da SEQ ID NO: 46;

(4) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 48 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5988 da SEQ ID NO: 48; (5) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 50 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 50; (6) a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO: 52 ou uma sequência de nucleotídeos que compreende os nucleotídeos 10-5829 da SEQ ID NO: 52; e (7) uma sequência de nucleotídeos que é uma variante degenerada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de (1) - (6) acima.

15. Construção de antígeno, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende: (1) uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID NOS: 87, 88, 89, 90, 91 e 92; ou (2) uma variante degenerada de uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das SEQ ID NOS: 87, 88, 89, 90, 91 e

92.

16. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) uma construção de antígeno como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15 e (ii) um veículo farmaceuticamente aceitável.

17. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que é uma vacina.

18. Método de tratamento de câncer em humanos com necessidade de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de maneira compreensiva ao ser humano uma quantidade eficaz da composição farmacêutica como definida na reivindicação 16 ou 17.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o câncer superexpressa um ou mais antígenos associados a tumores selecionados de MUC1, CEA ou TERT.

20. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer de pâncreas, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de estômago, câncer de pulmão ou câncer colorretal.

21. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer de mama triplo negativo, câncer de mama positivo para receptores de estrogênio ou câncer de mama positivo para HER2.

22. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração ao paciente de uma quantidade eficaz de um modulador imune.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o modulador imune é um inibidor de CTLA-4, um inibidor de IDO1, um inibidor de PD-1 ou um inibidor de PD-L1.

24. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração ao ser humano de um adjuvante.

25. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende uma construção de antígeno como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.

26. Vetor de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de ser um vetor plasmidial.

27. Vetor de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 70, 71,72,

73 e74.

28. Vetor de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de ser um vetor viral.

29. Vetor de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 64, 66 e 68.

30. Uso de (1) a construção de antígeno como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, (2) uma composição farmacêutica como definida na reivindicação 16 ou 17, ou (3) um vetor como definido em qualquer uma das reivindicações 25 a 29, caracterizado pelo fato de que é como um medicamento.

31. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o medicamento é para o tratamento de um câncer.

32. Uso de (1) a construção de antígeno como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 ou (2) um vetor como definido em qualquer uma das reivindicações 25 a 29, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

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