JP2022000467A - Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 - Google Patents
Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022000467A JP2022000467A JP2021158585A JP2021158585A JP2022000467A JP 2022000467 A JP2022000467 A JP 2022000467A JP 2021158585 A JP2021158585 A JP 2021158585A JP 2021158585 A JP2021158585 A JP 2021158585A JP 2022000467 A JP2022000467 A JP 2022000467A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- masp
- antibody
- subject
- inhibitor
- complement
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 101710117460 Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 title claims abstract description 544
- 102100026046 Mannan-binding lectin serine protease 2 Human genes 0.000 title claims abstract description 544
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 273
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 title claims abstract description 136
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 title claims abstract description 86
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims abstract description 209
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 187
- 208000034841 Thrombotic Microangiopathies Diseases 0.000 claims abstract description 121
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 114
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims abstract description 29
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 27
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 177
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 129
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 118
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 94
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 83
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 83
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 83
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 68
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 62
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 61
- 101001056015 Homo sapiens Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 claims description 52
- 102000054960 human MASP2 Human genes 0.000 claims description 50
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 47
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 46
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 43
- 239000004074 complement inhibitor Substances 0.000 claims description 43
- 229940124073 Complement inhibitor Drugs 0.000 claims description 41
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 41
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 40
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 39
- 108010034753 Complement Membrane Attack Complex Proteins 0.000 claims description 37
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 35
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 35
- 201000007023 Thrombotic Thrombocytopenic Purpura Diseases 0.000 claims description 34
- 208000022774 Congenital thrombotic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 32
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 claims description 28
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 claims description 27
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 26
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 claims description 24
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 23
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 23
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 21
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 21
- 229960002224 eculizumab Drugs 0.000 claims description 19
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 17
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 claims description 13
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 11
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 11
- 102100023661 Coiled-coil domain-containing protein 115 Human genes 0.000 claims description 10
- 101710155594 Coiled-coil domain-containing protein 115 Proteins 0.000 claims description 10
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 8
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 claims description 6
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 claims description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 84
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 31
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 10
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 abstract description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 151
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 151
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 148
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 100
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 86
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 80
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 66
- 102100022133 Complement C3 Human genes 0.000 description 60
- 101000901154 Homo sapiens Complement C3 Proteins 0.000 description 58
- 206010043561 Thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 56
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 52
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 51
- 230000006870 function Effects 0.000 description 47
- 208000032759 Hemolytic-Uremic Syndrome Diseases 0.000 description 44
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 40
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 37
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 36
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 34
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 34
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 29
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 28
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 28
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 27
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 27
- 108010053085 Complement Factor H Proteins 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 238000011161 development Methods 0.000 description 25
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 25
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 25
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 23
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 21
- 102100031506 Complement C5 Human genes 0.000 description 20
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 20
- 108091005670 ADAMTS13 Proteins 0.000 description 19
- 206010064281 Malignant atrophic papulosis Diseases 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 19
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 19
- 101000941598 Homo sapiens Complement C5 Proteins 0.000 description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 18
- 102100032290 A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 13 Human genes 0.000 description 17
- 102000016550 Complement Factor H Human genes 0.000 description 17
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 description 17
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 17
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 16
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 16
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 16
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 15
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 15
- 108090000062 ficolin Proteins 0.000 description 15
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 15
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 14
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 14
- 108010079723 Shiga Toxin Proteins 0.000 description 14
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 14
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 14
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 description 14
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 14
- 101100006976 Mus musculus C4b gene Proteins 0.000 description 13
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 13
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 13
- 102000016574 Complement C3-C5 Convertases Human genes 0.000 description 12
- 108010067641 Complement C3-C5 Convertases Proteins 0.000 description 12
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 12
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 12
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 12
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 12
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 12
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 12
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 11
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 11
- 102100026061 Mannan-binding lectin serine protease 1 Human genes 0.000 description 11
- 102000004528 Mannose-Binding Protein-Associated Serine Proteases Human genes 0.000 description 11
- 108010042484 Mannose-Binding Protein-Associated Serine Proteases Proteins 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 11
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 11
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 11
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 description 11
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 11
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 102100024521 Ficolin-2 Human genes 0.000 description 10
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 10
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 10
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 10
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 10
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 10
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- 101100326461 Mus musculus C1ra gene Proteins 0.000 description 9
- 101100326462 Mus musculus C1rb gene Proteins 0.000 description 9
- 101001056014 Mus musculus Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 description 9
- 101001018257 Rattus norvegicus Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 description 9
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 9
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 9
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 9
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 8
- 108010089414 Anaphylatoxins Proteins 0.000 description 8
- 108090000056 Complement factor B Proteins 0.000 description 8
- 102000003712 Complement factor B Human genes 0.000 description 8
- 102100035432 Complement factor H Human genes 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100030386 Granzyme A Human genes 0.000 description 8
- 101001009599 Homo sapiens Granzyme A Proteins 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 8
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 8
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 8
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 8
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 8
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 8
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 8
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 8
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 8
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 8
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 101100329495 Mus musculus C1sa gene Proteins 0.000 description 7
- 101100329496 Mus musculus C1sb gene Proteins 0.000 description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 7
- 229920000392 Zymosan Polymers 0.000 description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 7
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 7
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 description 7
- -1 C2-C9 Proteins 0.000 description 6
- 102100024508 Ficolin-1 Human genes 0.000 description 6
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710117390 Mannan-binding lectin serine protease 1 Proteins 0.000 description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 6
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 6
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 6
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 6
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 6
- 210000002565 arteriole Anatomy 0.000 description 6
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 6
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 6
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 6
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 208000035913 Atypical hemolytic uremic syndrome Diseases 0.000 description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 5
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 5
- 241001646719 Escherichia coli O157:H7 Species 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101001055956 Homo sapiens Mannan-binding lectin serine protease 1 Proteins 0.000 description 5
- 101000961414 Homo sapiens Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 5
- 208000037549 Shiga toxin-associated hemolytic uremic syndrome Diseases 0.000 description 5
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 5
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 5
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 5
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 5
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 150000007970 thio esters Chemical group 0.000 description 5
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 5
- 208000017271 typical hemolytic-uremic syndrome Diseases 0.000 description 5
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 5
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 4
- 108010034358 Classical Pathway Complement C3 Convertase Proteins 0.000 description 4
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 4
- 102100024331 Collectin-11 Human genes 0.000 description 4
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 4
- 102100040132 Complement factor H-related protein 1 Human genes 0.000 description 4
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 4
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 4
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 4
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 4
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 208000004451 Membranoproliferative Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 4
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700022034 Opsonin Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 4
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 4
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 4
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 description 4
- 241001672981 Purpura Species 0.000 description 4
- LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N Quinine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N 0.000 description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 4
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 4
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 4
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 4
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 206010062198 microangiopathy Diseases 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 210000005063 microvascular endothelium Anatomy 0.000 description 4
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 4
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 4
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 4
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 4
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 4
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 4
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 208000005590 Choroidal Neovascularization Diseases 0.000 description 3
- 206010060823 Choroidal neovascularisation Diseases 0.000 description 3
- 108700017374 Complement Factor H Deficiency Proteins 0.000 description 3
- 102100035321 Complement factor H-related protein 3 Human genes 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 3
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 101000890732 Homo sapiens Complement factor H-related protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000878136 Homo sapiens Complement factor H-related protein 3 Proteins 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000005777 Lupus Nephritis Diseases 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 108010087870 Mannose-Binding Lectin Proteins 0.000 description 3
- 102000009112 Mannose-Binding Lectin Human genes 0.000 description 3
- 102100039373 Membrane cofactor protein Human genes 0.000 description 3
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 3
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 3
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 206010030302 Oliguria Diseases 0.000 description 3
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 3
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 3
- 102000023852 carbohydrate binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091008400 carbohydrate binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 3
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 3
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 3
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000003990 molecular pathway Effects 0.000 description 3
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 3
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 3
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 3
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 3
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000264 venule Anatomy 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 101710131943 40S ribosomal protein S3a Proteins 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 108010003529 Alternative Pathway Complement C3 Convertase Proteins 0.000 description 2
- 102000005590 Anaphylatoxin C5a Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010059426 Anaphylatoxin C5a Receptor Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037157 Azotemia Diseases 0.000 description 2
- 239000005528 B01AC05 - Ticlopidine Substances 0.000 description 2
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 2
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 235000001258 Cinchona calisaya Nutrition 0.000 description 2
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 2
- 108010078804 Classical Pathway Complement C5 Convertase Proteins 0.000 description 2
- 101710172562 Cobra venom factor Proteins 0.000 description 2
- 108090000909 Collectins Proteins 0.000 description 2
- 102000004405 Collectins Human genes 0.000 description 2
- 102100035431 Complement factor I Human genes 0.000 description 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 2
- 206010018370 Glomerulonephritis membranoproliferative Diseases 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000897400 Homo sapiens CD59 glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 101000764535 Homo sapiens Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 2
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 description 2
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 description 2
- 208000035888 Immune-mediated thrombotic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 2
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 2
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 101001089108 Lotus tetragonolobus Anti-H(O) lectin Proteins 0.000 description 2
- 108700033009 MASP2 Deficiency Proteins 0.000 description 2
- 206010027527 Microangiopathic haemolytic anaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000004221 Multiple Trauma Diseases 0.000 description 2
- 208000023637 Multiple injury Diseases 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000005877 Peptide Initiation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010044843 Peptide Initiation Factors Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 108010005642 Properdin Proteins 0.000 description 2
- 102100038567 Properdin Human genes 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 101100400474 Rattus norvegicus Masp2 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010061481 Renal injury Diseases 0.000 description 2
- 206010063897 Renal ischaemia Diseases 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010045168 Tumour embolism Diseases 0.000 description 2
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 description 2
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 description 2
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 208000004886 acquired thrombotic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 2
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 2
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 2
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 230000000739 chaotic effect Effects 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 201000003278 cryoglobulinemia Diseases 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 208000037902 enteropathy Diseases 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 2
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 2
- 206010022694 intestinal perforation Diseases 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000013167 light transmission aggregometry Methods 0.000 description 2
- 210000004924 lung microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 201000008350 membranous glomerulonephritis Diseases 0.000 description 2
- 201000008265 mesangial proliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 2
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 2
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 229940127264 non-peptide agonist Drugs 0.000 description 2
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 2
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 2
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 2
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 2
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 208000011511 primary membranoproliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 229960000948 quinine Drugs 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 2
- PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N ticlopidine Chemical compound ClC1=CC=CC=C1CN1CC(C=CS2)=C2CC1 PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005001 ticlopidine Drugs 0.000 description 2
- 230000008359 toxicosis Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 2
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710112984 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150085726 ADAMTS13 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N Alanine Chemical compound CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- 235000012905 Brassica oleracea var viridis Nutrition 0.000 description 1
- 244000064816 Brassica oleracea var. acephala Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000009079 Bronchial Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000014181 Bronchial disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006482 Bronchospasm Diseases 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 101800001654 C5a anaphylatoxin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 102000016917 Complement C1 Human genes 0.000 description 1
- 108010028774 Complement C1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000955 Complement C2 Proteins 0.000 description 1
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 1
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 1
- 108010028773 Complement C5 Proteins 0.000 description 1
- 101710184994 Complement control protein Proteins 0.000 description 1
- 102100025680 Complement decay-accelerating factor Human genes 0.000 description 1
- 101710101151 Complement factor H-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100035324 Complement factor H-related protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 206010011086 Coronary artery occlusion Diseases 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 101150018425 Cr1l gene Proteins 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 101100372758 Danio rerio vegfaa gene Proteins 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012741 Diarrhoea haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000257465 Echinoidea Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 101000689463 Escherichia phage HK022 26 kDa repressor protein Proteins 0.000 description 1
- 206010053172 Fatal outcomes Diseases 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000270 Ficain Proteins 0.000 description 1
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010018372 Glomerulonephritis membranous Diseases 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000032456 Hemorrhagic Shock Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000909536 Homo sapiens Collectin-11 Proteins 0.000 description 1
- 101000856022 Homo sapiens Complement decay-accelerating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000878133 Homo sapiens Complement factor H-related protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001056128 Homo sapiens Mannose-binding protein C Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 206010058558 Hypoperfusion Diseases 0.000 description 1
- 208000024781 Immune Complex disease Diseases 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 1
- 206010022680 Intestinal ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010022822 Intravascular haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 101150047867 MASP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000018721 Macroglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010091934 Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101710146216 Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 101710159910 Movement protein Proteins 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 208000007201 Myocardial reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588677 Neisseria meningitidis serogroup B Species 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 206010039203 Road traffic accident Diseases 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 206010053879 Sepsis syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- 206010049771 Shock haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 208000035868 Vascular inflammations Diseases 0.000 description 1
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 101150030763 Vegfa gene Proteins 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 101710090398 Viral interleukin-10 homolog Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 208000012998 acute renal failure Diseases 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical class CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027119 bilirubin metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 125000001314 canonical amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002820 chemotaxin Substances 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 229940126681 complement 5a receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011340 continuous therapy Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002895 emetic Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 108010071253 factor H-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- POTUGHMKJGOKRI-UHFFFAOYSA-N ficin Chemical compound FI=CI=N POTUGHMKJGOKRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019836 ficin Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 210000000585 glomerular basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003904 glomerular cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005255 gram-positive cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 201000001505 hemoglobinuria Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 230000009215 host defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000057770 human C3 Human genes 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 208000036796 hyperbilirubinemia Diseases 0.000 description 1
- 208000024326 hypersensitivity reaction type III disease Diseases 0.000 description 1
- 201000004108 hypersplenism Diseases 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000006749 inflammatory damage Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003903 intestinal lesions Effects 0.000 description 1
- 244000000074 intestinal pathogen Species 0.000 description 1
- 229940008228 intravenous immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000037906 ischaemic injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011862 kidney biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000004777 loss-of-function mutation Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 101150011109 mbl gene Proteins 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 231100000855 membranous nephropathy Toxicity 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000036473 myasthenia Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 1
- 230000031978 negative regulation of complement activation Effects 0.000 description 1
- 210000000885 nephron Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229940127234 oral contraceptive Drugs 0.000 description 1
- 239000003539 oral contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007119 pathological manifestation Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000001443 photoexcitation Effects 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 1
- 201000008171 proliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000007026 protein scission Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003214 pyranose derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000015139 regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000019254 respiratory burst Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 208000026775 severe diarrhea Diseases 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 201000009225 splenic sequestration Diseases 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 208000022218 streptococcal pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 208000025883 type III hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009852 uremia Diseases 0.000 description 1
- 230000036325 urinary excretion Effects 0.000 description 1
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 238000007631 vascular surgery Methods 0.000 description 1
- 230000006442 vascular tone Effects 0.000 description 1
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Photoreceptors In Electrophotography (AREA)
Abstract
Description
本願に関連する配列表はハードコピーの代わりにテキスト形式で提供され、本明細書に参照により組み入れられる。配列表を含むテキストファイルの名前は、MP_1_0220_PCT_Sequence_Listing_20141015_ST25.txtである。このテキストファイルは115 KBであり、2014年10月15日に作成され、本明細書の出願と共にEFS-Webを介して提出されている。
補体系は、ヒトおよび他の脊椎動物において微生物感染症および他の急性侵襲に対する免疫応答を開始、増幅、および組織化するための初期作用機構を提供する(M.K. Liszewski and J. P. Atkinson, 1993, in Fundamental Immunology, Third Edition, W.E, Paul編, Raven Press, Ltd., New York)。補体活性化は潜在的な病原体に対する有益な第一線の防御を提供するが、防御免疫応答を促進する補体の活性は宿主にとって潜在的な脅威となることもある(K.R, Kalli, et al., Springer Semin. Immunopathol. 15:417-431, 1994; B.P. Morgan, Eur. J. Clinical Investig. 24:219-228, 1994)。例えば、C3およびC5タンパク質分解産物は好中球を動員および活性化する。活性化好中球は宿主防御に不可欠であるが見境なく破壊酵素を放出し、臓器損傷を引き起こすことがある。さらに、補体活性化によって、近くの宿主細胞ならびに微生物標的の表面に溶解性補体成分が沈着し、その結果、宿主細胞が溶解する場合がある。
本概要は、以下の詳細な説明においてさらに説明される幅広い概念を簡単な形で紹介するために提供される。本概要は、特許請求の範囲に記載された対象の重要な特徴を特定することを意図されていることも、また、特許請求の範囲に記載された対象の範囲の決定を助けるものとして用いられることを意図されていることもない。
[本発明1001]
血栓性微小血管症(TMA)に罹患している対象または該TMAを発症するリスクを有する対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法であって、MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害物質を含む組成物を該対象に投与する工程を含み、該TMAが、(i)癌に続発するTMA;(ii)化学療法に続発するTMA;または(iii)移植に続発するTMAのうちの少なくとも1つである、方法。
[本発明1002]
前記対象が、癌に続発するTMAに罹患しているかまたは該TMAを発症するリスクを有し、かつ前記MASP-2阻害物質が、TMAを発症するリスクを低下させるのにまたはTMAの重篤度を減少させるのに有効な量で該対象に全身投与される、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記対象が、化学療法に続発するTMAに罹患しているかまたは該TMAを発症するリスクを有し、かつ前記MASP-2阻害物質が、TMAを発症するリスクを低下させるのにまたはTMAの重篤度を減少させるのに有効な量で化学療法の前、最中、または後に該対象に全身投与される、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記対象が、移植に続発するTMAに罹患しているかまたは該TMAを発症するリスクを有し、かつ前記MASP-2阻害物質が、TMAを発症するリスクを低下させるのにまたはTMAの重篤度を減少させるのに有効な量で移植処置の前、最中、または後に該対象に全身投与される、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記MASP-2阻害物質が抗MASP-2抗体またはその断片である、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記MASP-2阻害物質が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合する抗MASP-2モノクローナル抗体またはその断片である、本発明1001の方法。
[本発明1007]
前記対象が、補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子による治療を以前に受けたことがあるかまたは現在受けている、本発明1001の方法。
[本発明1008]
補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子を前記対象に投与する工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1009]
前記終末補体阻害因子がヒト化抗C5抗体またはその抗原結合断片である、本発明1008の方法。
[本発明1010]
前記終末補体阻害因子がエクリズマブである、本発明1008の方法。
[本発明1011]
前記抗体またはその断片が、組換え抗体、低下したエフェクター機能を有する抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群より選択される、本発明1008の方法。
[本発明1012]
前記組成物が、皮下に、筋肉内に、動脈内に、静脈内に、または吸入剤として投与される、本発明1001の方法。
[本発明1013]
前記移植が同種造血幹細胞移植である、本発明1001の方法。
[本発明1014]
MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害物質を含む組成物を、アップショー・シュールマン症候群(USS)に罹患している対象または該USSを発症するリスクを有する対象に投与する工程を含む、該対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法。
[本発明1015]
USSを発症するリスクを有する対象を治療する工程を含み、TTPに関連する1つまたは複数の臨床症状を寛解させるのにまたは予防するのに有効な量のMASP-2阻害物質を、該臨床症状を寛解させるのにまたは予防するのに有効な期間にわたって投与する工程を含む、本発明1014の方法。
[本発明1016]
前記MASP-2阻害物質が抗MASP-2抗体またはその断片である、本発明1014または1015の方法。
[本発明1017]
前記MASP-2阻害物質が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合する抗MASP-2モノクローナル抗体またはその断片である、本発明1016の方法。
[本発明1018]
前記対象が、補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子による治療を以前に受けたことがあるかまたは現在受けている、本発明1014の方法。
[本発明1019]
補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子を前記対象に投与する工程をさらに含む、本発明1014の方法。
[本発明1020]
前記終末補体阻害因子がヒト化抗C5抗体またはその抗原結合断片である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記終末補体阻害因子がエクリズマブである、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記対象を定期的にモニタリングする工程、および、貧血、血小板減少症、またはクレアチニン増加が存在するとの判定に基づいて前記MASP-2阻害物質を投与する工程をさらに含む、本発明1015の方法。
[本発明1023]
前記対象を定期的にモニタリングする工程、および、TTP臨床症状の誘発に関連することが公知である事象の存在に基づいて前記MASP-2阻害物質を投与する工程をさらに含む、本発明1015の方法。
[本発明1024]
MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害物質を含む組成物を、デゴス病に罹患している対象に投与する工程を含む、該対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法。
[本発明1025]
前記MASP-2阻害物質が抗MASP-2抗体またはその断片である、本発明1024の方法。
[本発明1026]
前記MASP-2阻害物質が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合する抗MASP-2モノクローナル抗体またはその断片である、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記対象が、補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子による治療を以前に受けたことがあるかまたは現在受けている、本発明1024の方法。
[本発明1028]
補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子を前記対象に投与する工程をさらに含む、本発明1024の方法。
[本発明1029]
前記終末補体阻害因子がヒト化抗C5抗体またはその抗原結合断片である、本発明1028の方法。
[本発明1030]
前記終末補体阻害因子がエクリズマブである、本発明1028の方法。
[本発明1031]
前記抗体またはその断片が、組換え抗体、低下したエフェクター機能を有する抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群より選択される、本発明1025の方法。
[本発明1032]
前記組成物が、皮下に、筋肉内に、動脈内に、静脈内に、または吸入剤として投与される、本発明1024の方法。
[本発明1033]
MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害物質を含む組成物を、劇症型抗リン脂質抗体症候群(CAPS)に罹患している対象に投与する工程を含む、該対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法。
[本発明1034]
前記MASP-2阻害物質が抗MASP-2抗体またはその断片である、本発明1033の方法。
[本発明1035]
前記MASP-2阻害物質が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合する抗MASP-2モノクローナル抗体またはその断片である、本発明1034の方法。
[本発明1036]
前記対象が、補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子による治療を以前に受けたことがあるかまたは現在受けている、本発明1034の方法。
[本発明1037]
補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子を前記対象に投与する工程をさらに含む、本発明1034の方法。
[本発明1038]
前記終末補体阻害因子がヒト化抗C5抗体またはその抗原結合断片である、本発明1037の方法。
[本発明1039]
前記終末補体阻害因子がエクリズマブである、本発明1037の方法。
[本発明1040]
前記抗体またはその断片が、組換え抗体、低下したエフェクター機能を有する抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群より選択される、本発明1034の方法。
[本発明1041]
前記組成物が、皮下に、筋肉内に、動脈内に、静脈内に、または吸入剤として投与される、本発明1033の方法。
[本発明1042]
MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害抗体またはその抗原結合断片を、非典型溶血性尿毒症症候群(aHUS)に罹患している対象に投与する工程を含む、該対象における血栓形成を阻害する方法。
[本発明1043]
前記MASP-2阻害抗体が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片である、本発明1042の方法。
[本発明1044]
前記MASP-2阻害抗体が、10nMまたはそれ未満のKDでヒトMASP-2を結合させる、本発明1042の方法。
[本発明1045]
前記MASP-2阻害抗体が、MASP-2のCCP1ドメイン中のエピトープを結合させる、本発明1042の方法。
[本発明1046]
前記MASP-2阻害抗体が、インビトロアッセイ法において1%ヒト血清中でのC3b沈着を10nMまたはそれ未満のIC50で阻害する、本発明1042の方法。
[本発明1047]
前記MASP-2阻害抗体が、90%ヒト血清中でのC3b沈着を30nMまたはそれ未満のIC50で阻害する、本発明1042の方法。
[本発明1048]
前記MASP-2阻害抗体が、Fv、Fab、Fab'、F(ab)2、およびF(ab')2からなる群より選択される抗体断片である、本発明1042の方法。
[本発明1049]
前記MASP-2阻害抗体が単鎖分子である、本発明1042の方法。
[本発明1050]
前記MASP-2阻害抗体が、IgG1分子、IgG2分子、およびIgG4分子からなる群より選択される、本発明1042の方法。
[本発明1051]
前記IgG4分子がS228P変異を含む、本発明1050の方法。
[本発明1052]
前記MASP-2阻害抗体が古典経路を実質的に阻害しない、本発明1042の方法。
[本発明1053]
前記MASP-2阻害抗体が、aHUSに罹患している対象由来の血清中での血栓形成を未処理血清と比較して少なくとも40%阻害する、本発明1042の方法。
[本発明1054]
前記MASP-2阻害抗体が、aHUSに罹患している対象由来の血清中での血栓形成を、同対象由来の血清中でのC5b-9沈着に対する該抗体の阻害効果よりも少なくとも20%高いレベルで阻害する、本発明1042の方法。
[本発明1055]
前記対象が、aHUSの急性期にある、本発明1042の方法。
[本発明1056]
前記対象が、aHUSの寛解期にある、本発明1042の方法。
[本発明1057]
MASP-2阻害モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、
(a)(i)SEQ ID NO:67の31〜35のアミノ酸配列を含む重鎖CDR-H1;および(ii)SEQ ID NO:67の50〜65のアミノ酸配列を含む重鎖CDR-H2;および(iii)SEQ ID NO:67の95〜102のアミノ酸配列を含む重鎖CDR-H3を含む、重鎖可変領域、ならびに
(b)(i)SEQ ID NO:70の24〜34のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR-L1;および(ii)SEQ ID NO:70の50〜56のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR-L2;および(iii)SEQ ID NO:70の89〜97のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR-L3を含む、軽鎖可変領域
を含む、本発明1043の方法。
[本発明1058]
前記MASP-2阻害モノクローナル抗体が、SEQ ID NO:67に示した重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:70に示した軽鎖可変領域を含む、本発明1043の方法。
[本発明1059]
前記MASP-2阻害抗体またはその抗原結合断片が、SEQ ID NO:67に示した重鎖可変領域とSEQ ID NO:70に示した軽鎖可変領域とを含む参照抗体によって認識されるエピトープの少なくとも一部を特異的に認識する、本発明1043の方法。
SEQ ID NO:1 ヒトMAp19 cDNA
SEQ ID NO:2 ヒトMAp19タンパク質(リーダーあり)
SEQ ID NO:3 ヒトMAp19タンパク質(成熟)
SEQ ID NO:4 ヒトMASP-2 cDNA
SEQ ID NO:5 ヒトMASP-2タンパク質(リーダーあり)
SEQ ID NO:6 ヒトMASP-2タンパク質(成熟)
SEQ ID NO:7 ヒトMASP-2 gDNA(エキソン1-6)
抗原:(MASP-2成熟タンパク質を基準にした)
SEQ ID NO:8 CUBI配列(aa1〜121)
SEQ ID NO:9 CUBEGF配列(aa1〜166)
SEQ ID NO:10 CUBEGFCUBII(aa1〜293)
SEQ ID NO:11 EGF領域(aa122〜166)
SEQ ID NO:12 セリンプロテアーゼドメイン(aa429〜671)
SEQ ID NO:13 セリンプロテアーゼドメイン不活性(Ser618からAlaへの変異を有するaa610〜625)
ペプチド阻害因子:
SEQ ID NO:20 MBL完全長cDNA
SEQ ID NO:21 MBL完全長タンパク質
SEQ ID NO:22 OGK-X-GP(コンセンサス結合)
発現阻害因子:
SEQ ID NO:30 CUBI-EGFドメインのcDNA(SEQ ID NO:4のヌクレオチド22〜680)
SEQ ID NO:31
MASP-2翻訳開始点を含むSEQ ID NO:4のヌクレオチド12〜45(センス)
SEQ ID NO:32
MASP-2 MBL結合部位を含む領域をコードするSEQ ID NO:4のヌクレオチド361〜396(センス)
SEQ ID NO:33
CUBIIドメインを含む領域をコードするSEQ ID NO:4のヌクレオチド610〜642
クローニングプライマー:
SEQ ID NO:38〜47は、ヒト化抗体用のクローニングプライマーである。
SEQ ID NO:48は、9aaペプチド結合である。
発現ベクター:
SEQ ID NO:49は、MASP-2ミニ遺伝子インサートである。
SEQ ID NO:50は、マウスMASP-2 cDNAである。
SEQ ID NO:51は、マウスMASP-2タンパク質(w/リーダー)である。
SEQ ID NO:52は、成熟マウスMASP-2タンパク質である。
SEQ ID NO:53は、ラットMASP-2 cDNAである。
SEQ ID NO:54は、ラットMASP-2タンパク質(w/リーダー)である。
SEQ ID NO:55は、成熟ラットMASP-2タンパク質である。
SEQ ID NO:56〜59は、ヒトMASP-2Aを生成するために用いられるヒトMASP-2の部位特異的変異誘発用オリゴヌクレオチドである。
SEQ ID NO:60〜63は、マウスMASP-2Aを生成するために用いられるマウスMASP-2の部位特異的変異誘発用オリゴヌクレオチドである。
SEQ ID NO:64〜65は、ラットMASP-2Aを生成するために用いられるラットMASP-2の部位特異的変異誘発用オリゴヌクレオチドである。
SEQ ID NO:66 17D20_dc35VH21N11VL(OMS646)重鎖可変領域(VH)(シグナルペプチドなし)をコードするDNA
SEQ ID NO:67 17D20_dc35VH21N11VL(OMS646)重鎖可変領域(VH)ポリペプチド
SEQ ID NO:68 17N16mc重鎖可変領域(VH)ポリペプチド
SEQ ID NO:69: 17D20_dc35VH21N11VL(OMS646)軽鎖可変領域(VL)をコードするDNA
SEQ ID NO:70: 17D20_dc35VH21N11VL(OMS646)軽鎖可変領域(VL)ポリペプチド
SEQ ID NO:71: 17N16_dc17N9軽鎖可変領域(VL)ポリペプチド
本発明は、古典経路を完全な状態のままにしておきながら、レクチン媒介MASP-2経路を阻害することが可能だという本発明者らによる驚くべき発見に基づく。本発明はまた、免疫系の古典的(C1q依存性)経路成分を完全な状態のままにしておきながら、レクチン媒介補体経路活性化に関連した細胞障害を阻害するための治療標的としてのMASP-2の使用について説明する。
本明細書において特に定義がない限り、本明細書において用いられる全ての用語は、本発明の当業者によって理解されるものと同じ意味を有する。本発明を説明するために明細書および特許請求の範囲において用いられる用語をわかりやすくするために、以下の定義が提供される。
レクチン(MBL、M-フィコリン、H-フィコリン、L-フィコリン、およびCL-11)は先天的補体系を誘発する特異的認識分子であり、この系は、レクチン開始経路、およびレクチンによって開始される終末補体エフェクター分子活性化を増幅する関連する終末経路増幅ループを含む。C1qは後天的補体系を誘発する特異的認識分子であり、この系は、古典的開始経路、およびC1qによって開始される終末補体エフェクター分子活性化を増幅する関連する終末経路増幅ループを含む。本発明者らは、これらの2つの主要な補体活性化系を、それぞれ、レクチン依存性補体系およびC1q依存性補体系と呼ぶ。
概説
血栓性微小血管症(TMA)は小さな血管中の血餅を特徴とする病態である(Benz. K.; et al., Curr Opin Nephrol Hypertens 19(3):242-7(2010))。基礎をなす血管内皮に対するストレスまたは損傷が一次ドライバー(primary driver)であると考えられている。TMAの臨床および実験室での所見には、血小板減少症、貧血、紫斑病、および腎不全が含まれる。古典的なTMAは溶血性尿毒症症候群(HUS)および血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)である。TMAの特徴的な基礎をなす病理学的特徴は、細動脈および細静脈における血小板活性化および微小血栓形成である。微小血管内皮に対する損傷またはストレスによって少なくとも部分的に開始された補体活性化はまた、劇症型抗リン脂質抗体症候群(CAPS)、全身デゴス病、ならびに、癌に続発するTMA、癌化学療法に続発するTMA、および移植に続発するTMAを含む他のTMAに関与している。
非典型溶血性尿毒症症候群(aHUS)は、「血栓性微小血管症」と呼ばれる一群の状態の一部である。非典型HUS(aHUS)において、この疾患は不完全な補体調節に関連し、散発性または家族性であり得る。家族性aHUS症例は、補体因子H、I因子、B因子、メンブレンコファクターCD46、ならびに補体因子H関連タンパク質1(CFHR1)および補体因子H関連タンパク質3(CFHR3)を含む、補体活性化タンパク質または補体調節タンパク質をコードする遺伝子の変異に関連する(Zipfel, P.F., et al., PloS Genetics 3(3):e41(2007))。aHUSに関連する、この広範な遺伝子変異の統合的な特徴は、細胞表面または組織表面における補体活性化の増強の素因である。従って、本発明の一局面は、有効量のMASP-2阻害物質を投与することによって、H因子欠損に関連したaHUSに罹患している患者を治療することを含む。本発明の別の局面は、有効量のMASP-2阻害物質を投与することによって、I因子、B因子、メンブレンコファクターCD46、CFHR1、またはCFHR3の欠損に関連したHUSに罹患している患者を治療することを含む。
非典型HUSと同様に、典型HUSは、TMAの臨床および実験室での所見を全て示す。しかしながら、典型HUSは、多くの場合、小児疾患であり、通常、家族要素も、補体遺伝子変異との直接的な関連性もない。典型HUSの原因は、ある特定の腸病原体の感染症と密接に関連している。患者は、典型的には、急性腎不全、ヘモグロビン尿症、および血小板減少症を呈し、典型的には、血性下痢のエピソードをたどる。この状態は、志賀赤痢菌(Shigella dissenteria)、サルモネラ属(Salmonella)、または志賀毒素様産生腸管出血性大腸菌株、例えば、大腸菌O157:H7の腸感染症によって引き起こされる。これらの病原体は、汚染された食品または水供給から得られる。HUSは医学的緊急事態であり、死亡率は5〜10%である。生存者のかなりの部分が慢性腎臓疾患を発症し(Corrigan and Boineau, Pediatr Rev 22(11):365-9(2011))、腎臓移植を必要とする場合がある。
血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)は、凝固カスケードまたは補体系を活性化する自己免疫または遺伝性機能不全によって引き起こされる、命にかかわる血液凝固系障害である(George, JN, N Engl J Med; 354:1927-35(2006))。これは、体中の小さな血管における、非常に多くの微少な血塊すなわち血栓症の原因となる。赤血球は、赤血球膜を傷つける、ずり応力に供され、これは血管内溶血を引き起こす。結果として生じる血流減少および内皮損傷は、脳、心臓、および腎臓を含む臓器損傷の原因となる。TTPは、臨床的に、血小板減少症、微小血管障害性溶血性貧血、神経学的変化、腎不全、および発熱を特徴とする。血漿交換前の時代、急性エピソード中の死亡率は90%であった。血漿交換を用いても6ヶ月における生存は約80%である。
悪性萎縮性丘疹症としても公知のデゴス病は、皮膚、胃腸管、およびCNSの小さな血管の内皮を冒す極めて珍しいTMAである。この脈管障害は細静脈および細動脈(artiole)の閉塞を引き起こし、その結果として皮膚病変、腸管虚血、ならびに脳卒中、てんかん、および認知障害を含むCNS障害をもたらす。皮膚における結合組織壊死は小さな動脈の血栓性閉塞によるものである。しかしながら、デゴス病の原因は不明である。脈管炎、凝固障害、または原発性内皮細胞機能不全が結び付けられてきた。デゴス病の50%生存率は2〜3年しかない。デゴス病に有効な治療法はないが、症状を軽減するために抗血小板薬物、抗凝血剤、および免疫抑制剤が利用される。
劇症型抗リン脂質抗体症候群(CAPS)は抗リン脂質抗体(APLA)症候群の極端な異型である。CAPSは病原性抗体による静脈血栓症および動脈血栓症を特徴とする。CAPSは、多臓器血栓症、虚血、および臓器不全を伴うTMAである。他のTMAと同様に、様々な臓器にある小さな血管の閉塞を特徴とする。CAPSの死亡率は約50%と高く、感染症または外傷に関連することが多い。患者は、抗リン脂質抗体、一般的にはIgGを有する。
あらゆるタイプの全身悪性腫瘍がTMAの臨床的および病理的な症状発現の原因となり得る(例えば、Batts and Lazarus, Bone Marrow Transplantation 40:709-719, 2007を参照されたい)。癌関連TMAは肺で認められることが多く、腫瘍塞栓に関連するように思われる(Francis KK et al., Commun Oncol 2:339-43, 2005)。腫瘍塞栓は血流を低下させ、従って、罹患した小動脈および細静脈において低灌流状態をまねくことがある。結果として生じた組織ストレスおよび損傷は補体のレクチン経路を局所的に活性化すると予想される。次に、活性化レクチン経路はプロトロンビンからトロンビンへのMASP-2依存的切断を介して凝固カスケードを活性化して、TMAに特有の血栓形成促進状態をまねくことがある。この状況でMASP-2を阻害すると局所的なトロンビン活性化が低下し、それによって、血栓形成促進状態を軽減すると予想される。
化学療法後TMA(chemotherapy-associated TM)は、化学療法剤、例えば、ゲムシタビン(gemcytabin)、マイトマイシン、オキサリプラチンなどで治療した悪性新生物の病歴を有する患者の2〜10%において発症する、血小板減少症、微小血管性溶血性貧血、および腎臓機能不全を伴う状態である。化学療法後TMAは高い死亡率、不良な臨床成績に関連する(例えば、Blake-Haskins et al., Clin Cancer Res 17(18):5858-5866, 2011を参照されたい)。
移植後TMA(transplantation-associated TMA)(TA-TMA)は、移植患者、例えば、同種造血幹細胞移植レシピエントにおいて起こり得る破滅的な症候群である(例えば、Batts and Lazarus, Bone Marrow Transplantation 40:709-719, 2007を参照されたい)。この状態の原因は十分に理解されていないが、結果として内皮細胞損傷になる応答の集まりが関与する可能性が高い(Laskin B.L. et al., Blood 118(6):1452-62, 2011)。前記で議論したように、内皮細胞損傷は、レクチン経路の活性化および血栓形成促進環境の生成のための典型的な刺激である。
腎臓状態
補体系の活性化は、メサンギウム増殖性糸球体腎炎(IgA腎症、ベルジェ病)(Endo, M., et al., Clin. Nephrology 55:185-191, 2001)、膜性糸球体腎炎(Kerjashki, D., Arch B Cell Pathol. 58:253-71, 1990; Brenchley, P.E., et al., Kidney Int., 41:933-7, 1992; Salant, D.J., et al., Kidney Int. 55:976-84, 1989)、膜性増殖性糸球体腎炎(メサンギウム毛細管性糸球体腎炎)(Bartlow, B.G.. et al., Kidney Int. 15:294-300, 1979; Meri, S. et al., J. Exp. Med. 175:939-50, 1992)、急性感染後糸球体腎炎(連鎖球菌感染後糸球体腎炎)、クリオグロブリン血症糸球体腎炎(Ohsawa, I., et al., Clin Immunol, 101:59-66, 2001)、ループス腎炎(Gatenby, P.A., Autoimmunity 11:61-6, 1991)、およびヘーノホ・シェーンライン紫斑病腎炎(Endo, M., et al., Am. J. Kidney Dis. 35:401-407, 2000)を含む多種多様な腎臓病の発生に関係している。数十年間にわたって腎臓病における補体の関与が認められてきたが、腎臓病の発病期、発症期、および回復期におけるその正確な役割については、いまだに重大な議論となっている。正常条件下での補体の寄与は宿主にとって有益であるが、補体の不適切な活性化および沈着が組織損傷の一因となる場合がある。
敗血症は、侵入微生物に対する患者の抑えきれないほど激しい反応によって引き起こされる。補体系の主な機能は、侵入細菌および他の病原体に対する炎症反応を組織化することである。この生理学的役割と一致して、非常に多くの研究において、補体活性化は敗血症の発生において主要な役割を有することが示されている(Bone, R.C., Annals. Internal, Med. 115:457-469, 1991)。敗血症の臨床徴候の定義は絶えず発展している。敗血症は、通常、感染症に対する全身宿主反応と定義される。しかしながら、何度も、敗血症症状を有する患者において感染症の臨床証拠(例えば、陽性の細菌血液培養)は発見されていない。この矛盾は、1992年にConsensus Conferenceにおいて初めて考慮に入れられ、この際に、「全身炎症反応症候群」(SIRS)という用語が確立され、これには細菌感染症の定義可能な存在が必要とされなくなった(Bone, R.C., et al., Crit. Care Med. 20:724-726, 1992)。現在、敗血症およびSIRSには炎症反応の調節不能が伴うという一般的な合意がある。これを簡単に見直すために、本発明者らは、敗血症の臨床上の定義を、重篤な敗血症、敗血症ショック、およびSIRSも含むと考える。
播種性血管内凝固(「DIC」)、例えば、著しい身体外傷に続発するDICにおける補体系の役割について証拠が得られてきた。
一局面において、本発明は、血栓性微小血管症に罹患している対象または該血栓性微小血管症を発症するリスクを有する対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法を提供する。MASP-2阻害物質は、生きている対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量で投与される。本発明のこの局面の実施において、代表的なMASP-2阻害物質には、MASP-2の生物学的活性を阻害する分子(例えば、低分子阻害因子、抗MASP-2抗体、またはMASP-2と相互作用するか、もしくはタンパク質間相互作用を妨害する遮断ペプチド)、ならびに、MASP-2発現を減少させ、それによって、MASP-2がレクチン補体経路を活性化しないようにする分子(例えば、MASP-2アンチセンス核酸分子、MASP-2特異的RNAi分子、およびMASP-2リボザイム)が含まれる。MASP-2阻害物質は一次療法として単独で用いられてもよく、他の医学的処置の治療利益を向上させる補助療法として他の治療剤と併用されてもよい。
本発明のこの局面の一部の態様において、MASP-2阻害物質は、MASP-2依存性補体活性化系を阻害する抗MASP-2抗体を含む。本発明のこの局面において有用な抗MASP-2抗体は、任意の抗体産生哺乳動物に由来するポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、または組換え抗体を含み、多重特異的、キメラ、ヒト化、抗イディオタイプ、および抗体断片でもよい。抗体断片には、本明細書においてさらに説明されるように、Fab、Fab'、F(ab) 2、F(ab') 2、Fv断片、scFv断片、および単鎖抗体が含まれる。
本発明のこの局面の一部の態様では、古典的補体経路の活性化から生じ得る炎症を緩和するために、抗MASP-2抗体は低下したエフェクター機能を有するる。IgG分子が古典的補体経路を誘発する能力は、この分子のFc部分内にあることが示されている(Duncan, A.R.. et al., Nature 332:738-740 1988)。この分子のFc部分が酵素切断によって除去されているIgG分子には、このエフェクター機能がない(Harlow, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1988を参照されたい)。従って、エフェクター機能を最小化する遺伝子操作Fc配列を有することによって、またはヒトIgG2もしくはIgG4アイソタイプにすることによって、この分子のFc部分を欠いた結果としてエフェクター機能が低下した抗体を作製することができる。
抗MASP-2抗体は、MASP-2ポリペプチド(例えば、完全長MASP-2)または抗原性MASP-2エピトープ含有ペプチド(例えば、MASP-2ポリペプチドの一部)を用いて作製することができる。免疫原性ペプチドは5アミノ酸残基と小さくてもよい。例えば、本発明の方法において有用な抗MASP-2抗体を誘導するために、SEQ ID NO:6の全アミノ酸配列を含むMASP-2ポリペプチドが用いられてもよい。タンパク質間相互作用に関与することが公知である特定のMASP-2ドメイン、例えば、CUBIおよびCUBIEGFドメイン、ならびにセリン-プロテアーゼ活性部位を含む領域が、実施例3に記載のように組換えポリペプチドとして発現され、抗原として用いられてもよい。さらに、MASP-2ポリペプチド(SEQ ID NO:6)の少なくとも6アミノ酸の部分を含むペプチドもまた、MASP-2抗体を誘導するのに有用である。MASP-2抗体を誘導するのに有用なMASP-2由来抗原のさらなる例を以下の表2に示した。抗体を産生させるのに用いられるMASP-2ペプチドおよびポリペプチドは、実施例5〜7においてさらに述べられるように、天然ポリペプチドまたは組換えペプチドもしくは合成ペプチドおよび触媒的に不活性な組換えポリペプチド、例えば、MASP-2Aとして単離されてもよい。本発明のこの局面の一部の態様において、抗MASP-2抗体は、実施例8および9に記載のように、ならびに以下でさらに述べられるようにトランスジェニックマウス系統を用いて得られる。
MASP-2に対するポリクローナル抗体は、当業者に周知の方法を用いて、動物をMASP-2ポリペプチドまたはその免疫原性部分で免疫することによって調製することができる。例えば、Green et al.,「Production of Polyclonal Antisera」, Immunochemical Protocols(Manson, ed.), 105頁を参照されたい。実施例6においてさらに述べられる。MASP-2ポリペプチドの免疫原性は、ミネラルゲル、例えば、水酸化アルミニウムまたはフロイントアジュバント(完全もしくは不完全)、界面活性物質、例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、およびジニトロフェノールを含むアジュバントを用いて高まることができる。ポリクローナル抗体は、典型的には、動物、例えば、ウマ、ウシ、イヌ、ニワトリ、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ヤギ、またはヒツジにおいて産生される。または、本発明において有用な抗MASP-2抗体はまた、ヒトに近い霊長類に由来してもよい。ヒヒにおいて診断および治療に有用な抗体を産生するための一般的な技法は、例えば、Goldenberg et al.,国際特許公報WO91/11465、およびLosman, M.J., et al., Int. J. Cancer 46:310, 1990において見られ得る。次いで、免疫学的に活性な抗体を含有する血清が、当技術分野において周知の標準的な手順を用いて、このような免疫動物の血液から生成される。
一部の態様において、MASP-2阻害物質は抗MASP-2モノクローナル抗体である。抗MASP-2モノクローナル抗体は、単一のMASP-2エピトープに対して作製されているので高度に特異的である。本明細書で使用する「モノクローナル」という修飾語は、抗体が実質的に均一な抗体集団から得られているという特徴を示し、特定の方法による抗体の作製を必要とすると解釈してはならない。モノクローナル抗体は、連続培養細胞株による抗体分子の作製を提供する任意の技法、例えば、Kohler, G., et al., Nature 256:495, 1975に記載のハイブリドーマ法を用いて得ることができる。または、モノクローナル抗体は、組換えDNA法(例えば、Cabillyに対する米国特許第4,816,567号を参照されたい)によって作製されてもよい。モノクローナル抗体は、Clackson, T., et al., Nature 352:624-628, 1991、およびMarks, J.D., et al., J. Mol Biol. 222:581-597, 1991に記載の技法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。このような抗体は、IgG、IgM、IgE、IgA、IgDを含む任意の免疫グロブリンクラスおよびその任意のサブクラスの抗体でよい。
本発明の方法において有用なモノクローナル抗体には、重鎖および/または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であるが、鎖の残りが、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である、キメラ抗体、ならびに、このような抗体の断片が含まれる(Cabillyに対する米国特許第4,816,567号;およびMorrison, S.L., et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 81:6851-6855, 1984)。
抗MASP-2抗体は組換え法を用いて作製することもできる。例えば、ヒト抗体断片(VH、VL、Fv、Fd、Fab、またはF(ab') 2)を作製するようにヒト免疫グロブリン発現ライブラリー(例えば、Stratagene, Corp., La Jolla, CAから入手可能)を用いてヒト抗体を作製することができる。次いで、キメラ抗体の作製法に類似した技法を用いて、これらの断片を用いてヒト抗体全体を構築する。
望ましい阻害活性を有する抗MASP-2抗体が特定されたら、これらの抗体を用いて、当技術分野において周知の技法を用いてMASP-2の一部に似ている抗イディオタイプ抗体を生成することができる。例えば、Greenspan, N.S., et al., FASEB J. 7:437, 1993を参照されたい。例えば、MASP-2に結合し、補体活性化に必要とされるMASP-2タンパク質相互作用を完全に阻害する抗体を用いて、MASP-2タンパク質上のMBL結合部位に似ている、従って、MASP-2の結合リガンド、例えば、MBLに結合し、これを中和する抗イディオタイプを生成することができる。
本発明の方法において有用なMASP-2阻害物質は、インタクトな免疫グロブリン分子だけでなく、抗体断片から形成された、Fab、Fab'、F(ab) 2、F(ab') 2、およびFv断片、scFv断片、ダイアボディ、直鎖抗体、単鎖抗体分子、ならびに多重特異性抗体を含む周知の断片も包含する。
代替的に、重鎖Fv領域および軽鎖Fv領域が接続されている、MASP-2に特異的なペプチド単鎖結合分子を作製することができる。Fv断片は、単鎖抗原結合タンパク質(scFv)を形成するようにペプチドリンカーで接続されてもよい。これらの単鎖抗原結合タンパク質は、オリゴヌクレオチドで接続されている、VHおよびVLドメインをコードするDNA配列を含む、構造遺伝子を構築することによって調製される。構造遺伝子は発現ベクターに挿入され、その後に、大腸菌などの宿主細胞に導入される。組換え宿主細胞は、2つのVドメインを架橋するリンカーペプチドを有する1本のポリペプチド 鎖を合成する。scFvを作製するための方法は、例えば、Whitlow, et al.,「Methods:A Companion to Methods in Enzymology」2:97, 1991; Bird, et al., Science 242:423, 1988; Ladnerに対する米国特許第4,946,778号; Pack, P., et al., Bio/Technology 11:1271, 1993に記載されている。
本発明のこの局面の一部の態様において、MASP-2阻害物質は、MASP-2依存性補体活性化系を阻害する、単離された天然ペプチド阻害因子および合成ペプチド阻害因子を含む単離されたMASP-2ペプチド阻害因子を含む。本明細書で使用する「単離されたMASP-2ペプチド阻害因子」という用語は、MASP-2に結合することによって、レクチン経路の別の認識分子(例えば、MBL、H-フィコリン、M-フィコリン、もしくはL-フィコリン)への結合についてMASP-2と競合することによって、および/またはMASP-2と直接相互作用してMASP-2依存性補体活性化を阻害することによって、MASP-2依存性補体活性化を阻害するペプチドを指し、該ペプチドは実質的に純粋であり、かつ天然で一緒に見出され得る他の物質を現実的でかつ目的の用途に適した程度まで本質的に含まない。
本発明のこの局面の方法において有用なMASP-2阻害ペプチドは、MASP-2機能に重要な標的領域を模倣するアミノ酸配列によって例示される。本発明の方法の実施において有用な阻害ペプチドはサイズが約5アミノ酸〜約300アミノ酸に及ぶ。表3は、本発明のこの局面の実施において有用であり得る例示的な阻害ペプチドのリストを提供する。例えば、レクチン特異的C4切断アッセイ法(実施例2に記載)およびC3b沈着アッセイ法(実施例2に記載)を含む、いくつかのアッセイ法の1つにおいて、候補MASP-2阻害ペプチドがMASP-2阻害物質として機能する能力を試験することができる。
内にあることを特定した(Wallis, R. et al., J. Biol Chem. 279:14065, 2004)。このMASP-2結合部位領域はまたヒトH-フィコリンおよびヒトL-フィコリンにおいても高度に保存されている。アミノ酸配列「OGK-X-GP」(SEQ ID NO:22)を含む、3種類全てのレクチンタンパク質において存在し、文字「O」がヒドロキシプロリンを表しかつ文字「X」が疎水残基である、コンセンサス結合部位が記載されている(Wallis et al., 2004, 前記)。従って、一部の態様において、本発明のこの局面において有用なMASP-2阻害ペプチドは長さが少なくとも6個のアミノ酸であり、SEQ ID NO:22を含む。アミノ酸配列
を含む、MBLに由来するペプチドは、インビトロでMASP-2に結合することが示されている(Wallis, et al., 2004, 前記)。MASP-2との結合を増強するために、天然のMBLタンパク質において見られるような三重らせんの形成を増強する、各末端に2個のGPOトリプレットが隣接するペプチドを合成することができる
(Wallis, R., et al., J. Biol. Chem. 279:14065, 2004においてさらに説明される)。
を含む、ヒトH-フィコリンに由来してもよい。L-フィコリンのコンセンサスMASP-2結合領域に由来する配列
を含む、ヒトL-フィコリン由来ペプチドも含まれる。
などのC4切断部位に由来してもよい(Glover, G.I., et al., Mol. Immunol. 25:1261(1988))。
MASP-2の重要な結合領域の分子構造を模倣し、MASP-2の補体活性を阻害するペプチドを生成およびスクリーニングするために、分子モデリングおよび合理的分子設計も使用することができる。以前に述べられたように、モデリングに用いられる分子構造には、抗MASP-2モノクローナル抗体のCDR領域、ならびに二量体化に必要な領域、MBLとの結合に関与する領域、およびセリンプロテアーゼ活性部位を含む、MASP-2機能に重要なことが公知の標的領域が含まれる。ある特定の標的に結合するペプチドを特定する方法は当技術分野において周知である。例えば、ある特定の分子に結合する巨大分子構造、例えば、ペプチドの新規構築のために分子インプリンティングを使用することができる。例えば、Shea, K.J.,「Molecular Imprinting of Synthetic Network Polymers:The De Novo synthesis of Macromolecular Binding and Catalytic Sties」, TRIP 2(5) 1994を参照されたい。
MASP-2阻害ペプチドは、当技術分野において周知の技法、例えば、J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-2154, 1963においてMerrifieldによって最初に述べられた固相合成技法を用いて調製することができる。自動合成は、例えば、Applied Biosystems 431 A Peptide Synthesizer(Foster City, Calif.)を用いて、製造業者により提供される説明書に従って実現することができる。他の技法は、例えば、Bodanszky, M., et al., Peptide Synthesis, 第二版, John Wiley & Sons, 1976ならびに当業者に公知の他の参照文献において見られ得る。
一部の態様において、MASP-2阻害物質は、低分子量を有する天然物質および合成物質を含む低分子阻害因子、例えば、ペプチド、ペプチドミメティック、および非ペプチド阻害因子(オリゴヌクレオチドおよび有機化合物を含む)である。MASP-2低分子阻害因子は、抗MASP-2抗体の可変領域の分子構造に基づいて作製することができる。
他の適切なMASP-2阻害物質は、当業者に公知の技法を用いて作製することができるMASP-2可溶性受容体を含むと考えられる。
本発明のこの局面の別の態様において、MASP-2阻害物質は、MASP-2依存性補体活性化を阻害することができるMASP-2発現阻害因子である。本発明のこの局面の実施において、代表的なMASP-2発現阻害因子には、MASP-2アンチセンス核酸分子(例えば、アンチセンスmRNA、アンチセンスDNA、またはアンチセンスオリゴヌクレオチド)、MASP-2リボザイム、およびMASP-2 RNAi分子が含まれる。
投薬
別の局面において、本発明は、治療的有効量のMASP-2阻害物質および薬学的に許容される担体を含む組成物を対象に投与することを含む、本明細書において開示された疾患または状態に罹患している対象におけるMASP-2依存性補体活性化の副作用を阻害するための組成物を提供する。MASP-2依存性補体活性化に関連した状態を治療または寛解させるために、MASP-2阻害物質を、治療上有効な用量で、それを必要とする対象に投与することができる。治療上有効な用量は、疾患または状態に関連した症状を寛解させるのに十分なMASP-2阻害物質の量を指す。
MASP-2阻害物質を含む組成物および方法は、任意で、MASP-2阻害物質の活性を増大し得る1種類または複数種のさらなる治療用物質、または関連する治療機能を相加的もしくは相乗的に提供する1種類または複数種のさらなる治療用物質を含んでもよい。例えば、ADAM-TS13の阻害因子が陽性である、TTPに罹患している対象を治療する状況において、1種類または複数種のMASP-2阻害物質は1種類または複数種の免疫抑制剤と組み合わせて(同時投与を含めて)投与されてもよい。適切な免疫抑制剤には、コルチコステロイド、リツキサン、シクロスポリンなどが含まれる。HUSもしくはaHUSに罹患している対象または該HUSもしくは該aHUSを発症するリスクを有する対象を治療する状況において、1種類または複数種のMASP-2阻害物質は適切な抗生物質と組み合わせて(同時投与を含めて)投与されてもよい。aHUSに罹患している対象または該aHUSを発症するリスクを有する対象を治療する状況において、1種類または複数種のMASP-2阻害物質は、他の補体阻害物質、例えば、エクリズマブ(Soliris)、TT-30、B因子に対する抗体、または終末補体成分もしくは第二経路増幅を阻害する他の作用物質と組み合わせて(同時投与を含めて)投与されてもよい。
一般的に、他の任意の選択された治療用物質と組み合わされた本発明のMASP-2阻害物質組成物は、適宜、薬学的に許容される担体中に含まれる。担体は、無毒で、生体適合性があり、MASP-2阻害物質(およびそれと組み合わされた他の任意の治療用物質)の生物学的活性に悪影響を及ぼさないように選択される。ペプチド用の例示的な薬学的に許容される担体は、Yamadaに対する米国特許第5,211,657号に記載されている。本発明において有用な抗MASP-2抗体および阻害ペプチドは、経口投与、非経口投与、または外科的投与を可能にする、固体、半固体、ゲル、液体、または気体の形をした調製物、例えば、錠剤、カプセル、散剤、顆粒、軟膏、溶液、デポジトリ(depository)、吸入剤、および注射剤に処方されてもよい。本発明はまた、医療装置などをコーティングすることによる組成物の局所投与も意図する。
抗MASP-2抗体および阻害ペプチドに関してより具体的には、例示的な製剤を、水、油、食塩水、グリセロール、またはエタノールなどの滅菌液体でもよい薬学的担体と共に、生理学的に許容される希釈剤に溶解した化合物の注射投与量の溶液または懸濁液として非経口投与することができる。さらに、抗MASP-2抗体および阻害ペプチドを含む組成物中には、補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、界面活性剤、pH緩衝物質などが存在してもよい。薬学的組成物のさらなる成分には、石油(例えば、動物由来、野菜由来、または合成由来の石油)、例えば、ダイズ油および鉱油が含まれる。一般的に、グリコール、例えば、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールが注射液に好ましい液体担体である。
本発明の方法において有用な発現阻害因子に関してより具体的には、前記の発現阻害因子および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む組成物が提供される。該組成物はコロイド分散系をさらに含んでもよい。
MASP-2阻害物質を含む薬学的組成物は、局所投与方法または全身投与方法が、治療されている状態に最も適しているかどうかに応じて多くのやり方で投与することができる。さらに、体外再灌流法に関して本明細書において前述したように、MASP-2阻害物質は、本発明の組成物の導入を介して再循環血液または血漿に投与することができる。さらに、本発明の組成物を移植可能な医療装置の表面に、または移植可能な医療装置にコーティングするかまたは組み込むことによって、本発明の組成物を送達することができる。
本明細書で使用する「全身送達」および「全身投与」という用語は、筋肉内(IM)投与経路、皮下投与経路、静脈内(IV)投与経路、動脈内投与経路、吸入投与経路、舌下投与経路、頬投与経路、局部投与経路、経皮投与経路、鼻投与経路、直腸投与経路、腟投与経路、および送達作用物質を1つまたは複数の目的の治療作用部位に効果的に分散させる他の投与経路を含む、経口経路および非経口経路を含むが、これに限定されないことが意図される。本組成物の好ましい全身送達経路には、静脈内経路、筋肉内経路、皮下経路、および吸入経路が含まれる。本発明の特定の組成物において用いられる選択された作用物質の正確な全身投与経路は、部分的には、ある特定の投与経路に関連した代謝変換経路に対する作用物質感受性を説明するように決定されることが理解されると考えられる。例えば、ペプチド物質は、最も適切には、経口以外の経路によって投与することができる。
本明細書で使用する「局所」という用語は、目的の限局作用の部位の中に、または目的の限局作用の部位の周囲に薬物を適用することを包含し、例えば、皮膚または他の患部組織への局部送達、眼送達、くも膜下腔内(IT)、脳室内(ICV)、関節内、洞内、頭蓋内、もしくは小胞内の投与、留置、または灌注を含んでもよい。局所投与は、低用量の投与が全身副作用を回避するために、ならびに局所送達部位に活性物質を送達および濃縮するタイミングをより正確に制御するために好ましい場合がある。局所投与は、代謝、血流などの患者間のばらつきに関係なく標的部位において既知濃度を供給する。改善された投与量制御は直接的な送達方法によっても提供される。
MASP-2阻害物質、例えば、抗体および阻害ペプチドは、移植可能なまたは取り付け可能な医療装置の表面上(表面の中)に固定化されてもよい。改変された表面は典型的には動物身体への移植の後に生組織と接触する。「移植可能なまたは取り付け可能な医療装置」とは、装置(例えば、ステントおよび移植可能な薬物送達装置)の通常の手術中に動物身体の組織に移植されるかまたは動物身体の組織に取り付けられる任意の装置が意図される。このような移植可能なまたは取り付け可能な医療装置は、例えば、ニトロセルロース、ジアゾセルロース、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、Sepharose、寒天、デンプン、ナイロン、ステンレス鋼、チタン、ならびに生分解性および/または生体適合性ポリマーから作製することができる。タンパク質と装置との連結は、連結されたタンパク質の生物学的活性を破壊しない任意の技法によって、例えば、タンパク質のN末端残基、C末端残基の一方または両方を装置に取り付けることによって実現することができる。タンパク質の1つまたは複数の内部部位において取り付けが行われてもよい。複数の取り付け(タンパク質の内部および末端)も使用することができる。タンパク質固定化のために官能基(例えば、カルボキシル、アミド、アミノ、エーテル、ヒドロキシル、シアノ、ニトリド、スルファナミド(sulfanamido)、アセチリニック(acetylinic)、エポキシド、シラニック(silanic)、アンヒドリック(anhydric)、スクシニミック(succinimic)、アジド)を含めるように、移植可能なまたは取り付け可能な医療装置の表面を改変することができる。カップリング化学には、MASP-2抗体または阻害ペプチド上において利用可能な官能基とのエステル、エーテル、アミド、アジドおよびスルファナミド誘導体、シアナート(cyanate)、ならびに他の連結の形成が含まれるが、これに限定されない。MASP-2抗体または阻害断片はまた、アフィニティタグ配列を、タンパク質、例えば、GST(D.B. Smith and K.S. Johnson, Gene 67:31, 1988)、ポリヒスチジン(E. Hochuli et al., J. Chromatog. 411:77, 1987)、またはビオチンに付加することによって非共有結合によって取り付けることもできる。このようなアフィニティタグは、タンパク質と装置とを可逆的に取り付けるために用いられてもよい。
予防用途では、薬学的組成物は、MASP-2依存性補体活性化に関連した状態にかかりやすい対象、またはそうでなければ該状態のリスクを有する対象に、該状態の症状を発症するリスクを排除するのにまたは低下させるのに十分な量で投与される。治療用途では、薬学的組成物は、MASP-2依存性補体活性化に関連した状態に罹患していると疑われる対象、または該状態に既に罹患している対象に、状態の症状を軽減するのに、または少なくとも部分的に緩和するのに十分な治療的有効量で投与される。予防レジメンおよび治療レジメンの両方において、MASP-2阻害物質を含む組成物は、対象において十分な治療成績が得られるまで、いくつかの投与量に分けて投与されてもよい。本発明のMASP-2阻害組成物の適用は、急性状態、例えば、再灌流傷害もしくは他の外傷の治療の場合は、組成物の単回投与によって、または限定された一連の投与によって行われてもよい。または、組成物は、慢性状態、例えば、関節炎または乾癬の治療の場合は、長期間にわたって定期的な間隔で投与されてもよい。
以下の実施例は、本発明の実施について意図された最良の形態の単なる例示であり、本発明を限定すると解釈してはならない。本明細書中の全ての文献引用が明確に参照により組み入れられる。
本実施例は、MASP-2が欠損しているが(MASP-2-/-)MAp19は十分な(MAp19+/+)マウス系統の生成について述べる。
本実施例はレクチン経路を介した補体活性化にはMASP-2が必要であることを証明する。
レクチン経路特異的C4切断アッセイ法:C4切断アッセイ法は、Petersen, S.V., et al., J. Immunol Methods 257:107(2001)によって述べられており、L-フィコリンに結合する黄色ブドウ球菌由来リポテイコ酸(LTA)に起因するレクチン経路活性化を測定する。下記のようにプレートをLPSおよびマンナンまたはザイモサンでコーティングした後に、MASP-2-/-マウスに由来する血清を添加することによって、Petersen et al., (2001)に記載のアッセイ法がMBLを介したレクチン経路活性化を測定するように適合化された。このアッセイ法を、古典経路によるC4切断の可能性を取り除くようにも変更した。これは、レクチン経路認識成分とそのリガンドとの高親和性結合を可能にするが、内因性C4の活性化を阻止し、それによって、C1複合体を解離することによって古典経路の関与を排除する、1M NaClを含有する試料希釈緩衝液を使用することによって達成された。簡単に述べると、変更されたアッセイ法では、血清試料(高塩(1M NaCl)緩衝液で希釈した)をリガンドコーティングプレートに添加した後に、生理学的濃度の塩を含む緩衝液に溶解した一定量の精製C4を添加した。MASP-2を含有する結合した認識複合体はC4を切断し、その結果、C4bが沈着する。
(1)Nunc Maxisorbマイクロタイタープレート(Maxisorb, Nunc, カタログ番号442404, Fisher Scientific)を、コーティング緩衝液(15mM Na2CO3, 35mM NaHCO3, pH9.6)で希釈した1μg/mlマンナン(M7504 Sigma)または他の任意のリガンド(例えば、以下の列挙したリガンド)でコーティングした。
a.マンナン(100μlコーティング緩衝液中に1μg/ウェルのマンナン(M7504 Sigma));
b.ザイモサン(100μlコーティング緩衝液中に1μg/ウェルのザイモサン(Sigma));
c.LTA(100μlコーティング緩衝液中に1μg/ウェルまたは20μlメタノール中に2μg/ウェル);
d.コーティング緩衝液中に1μgのH-フィコリン特異的Mab 4H5;
e.エロコッカス・ビリダンス(Aerococcus viridans)に由来するPSA(100μlコーティング緩衝液中に2μg/ウェル);
f.コーティング緩衝液中に100μl/ウェルのホルマリン固定黄色ブドウ球菌DSM20233(OD550=0.5)。
MASP-2の非存在がMASP-2-/-マウスにおけるレクチン経路依存性C4活性化消失の直接の原因であることを証明するために、血清試料への組換えMASP-2タンパク質の添加の効果を前記のC4切断アッセイ法において調べた。機能的に活性なマウスMASP-2組換えタンパク質および触媒不活性マウスMASP-2A(セリンプロテアーゼドメイン中の活性部位セリン残基がアラニン残基で置換された)組換えタンパク質を以下の実施例3に記載のように産生および精製した。4匹のMASP-2-/-マウスからプールされた血清を、漸増タンパク質濃度の組換えマウスMASP-2または不活性組換えマウスMASP-2Aとプレインキュベートし、C4コンバターゼ活性を前記のようにアッセイした。
本実施例は、組換え完全長ヒトMASP-2、ラットおよびマウスのMASP-2、MASP-2に由来するポリペプチド、ならびに触媒不活化変異型MASP-2の組換え発現およびタンパク質産生について述べる。
ヒトMASP-2の完全長cDNA配列(SEQ ID NO:4)を、CMVエンハンサー/プロモーター領域の制御下で真核生物発現を駆動する哺乳動物発現ベクターpCI-Neo(Promega)にもサブクローニングした(Kaufman R.J. et al., Nucleic Acids Research 19:4485-90, 1991; Kaufman, Methods in Emymology, 185:537-66(1991)に記載)。完全長マウスcDNA(SEQ ID NO:50)およびラットMASP-2 cDNA(SEQ ID NO:53)をそれぞれpED発現ベクターにサブクローニングした。次いで、Maniatis et al., 1989に記載の標準的なリン酸カルシウムトランスフェクション手順を用いて、MASP-2発現ベクターを、付着性のチャイニーズハムスター卵巣細胞株DXB1にトランスフェクトした。これらの構築物でトランスフェクトされた細胞は非常にゆっくりと増殖した。このことは、コードされたプロテアーゼが細胞傷害性であることを意味する。
原理:認識小成分MBLまたはフィコリン(L-フィコリン、H-フィコリン、もしくはM-フィコリンのいずれか)がそれぞれの炭水化物パターンに結合した後に、MASP-2は自己触媒切断によって活性化される。血清からのMASP-2の単離手順中に、または組換え発現後の精製中に、MASP-2を活性化する自己触媒切断が起こることが多い。抗原として使用するための、より安定したタンパク質調製物を得るために、ラットではプロテアーゼドメインの触媒三残基(catalytic triad)に存在するセリン残基をアラニン残基で(SEQ ID NO:55 Ser617からAla617)、またはマウスでは(SEQ ID NO:52 Ser617からAla617)で;ヒトでは(SEQ ID NO:3 Ser618からAla618)で置換することによって、MASP-2Aと呼ばれる触媒不活性型MASP-2を作製した。
MASP-2の様々なドメインを分泌させるために、MASP-2シグナルペプチド(SEQ ID NO:5の残基1-15)を用いて以下の構築物を作製する。MASP-2(SEQ ID NO:6)の残基1〜121をコードする領域(N末端CUBIドメインに対応する)を増幅するPCRによって、ヒトMASP-2 CUB1ドメイン(SEQ ID NO:8)を発現する構築物を作製する。MASP-2(SEQ ID NO:6)の残基1〜166をコードする領域(N末端CUB1EGFドメインに対応する)を増幅するPCRによって、ヒトMASP-2 CUBIEGFドメイン(SEQ ID NO:9)を発現する構築物を作製する。MASP-2(SEQ ID NO:6)の残基1〜293をコードする領域(N末端CUBIEGFCUBIIドメインに対応する)を増幅するPCRによって、ヒトMASP-2 CUBIEGFCUBIIドメイン(SEQ ID NO:10)を発現する構築物を作製する。確立されたPCR法に従って、VentRポリメラーゼおよび鋳型としてpBS-MASP-2を用いたPCRによって前述のドメインを増幅する。センスプライマーの5'プライマー配列
は、PCR産物の5'末端にBamHI制限部位(下線)を導入する。以下の表5に示した、それぞれのMASP-2ドメインのアンチセンスプライマーは、それぞれのPCR産物の末端に停止コドン(太字体)の後にEcoRI部位(下線)を導入するように設計されている。DNA断片を増幅したら、BamHIおよびEcoRIで消化し、pFastBac1ベクターの対応する部位にクローニングする。結果として生じた構築物を制限酵素マッピングによって特徴決定し、dsDNA配列決定によって確認する。
標準的なリン酸カルシウムトランスフェクション手順(Maniatis et al., 1989)を用いて、前記のMASP-2発現構築物およびMASP-2A発現構築物をDXB1細胞にトランスフェクトした。調製物が他の血清タンパク質で確実に汚染されないようにするために、MASP-2Aを無血清培地中で産生させた。1日おきに(計4回)、培地をコンフルエント細胞から回収した。組換えMASP-2Aレベルの平均は、3種類の種それぞれについて培地1リットルにつき約1.5mgであった。
組換えMASP-2およびMASP2A由来ポリペプチドを産生するための別の方法は、Thielens, N.M., et al., J. Immunol 166:5068-5077, 2001に記載されている。簡単に述べると、ヨトウガ(Spodoptera frugiperda)昆虫細胞(Novagen, Madison, WIから得たReady-Plaque Sf9細胞)を、50IU/mlペニシリンおよび50mg/mlストレプトマイシン(Life Technologies)を添加したSf900II無血清培地(Life Technologies)中で増殖および維持する。イラクサギンウワバ(Trichoplusia ni)(High Five)昆虫細胞(Jadwiga Chroboczek, Institut de Biologie Structurale, Grenoble, Franceにより提供された)を、50 IU/mlペニシリンおよび50mg/mlストレプトマイシンで添加した、10%FCS(Dominique Dutscher, Brumath, France)を含有するTC100培地(Life Technologies)中で維持する。組換えバキュロウイルスを、Bac-to-Bacシステム(Life Technologies)を用いて生成する。バクミドDNAを、Qiagen midiprep精製系(Qiagen)を用いて精製し、製造業者のプロトコールに記載のようにSf900 II SFM培地(Life Technologies)に溶解したセルフェクション(cellfectin)を用いてSf9昆虫細胞をトランスフェクトするのに使用する。組換えウイルス粒子を4日後に収集し、ウイルスプラークアッセイ法によって滴定し、King and Possee, The Baculovirus Expression System:A Laboratory Guide, Chapman and Hall Ltd., London, pp.111-114, 1992に記載のように増幅する。
本実施例はMASP-2ポリペプチドに対するポリクローナル抗体を作製する方法について述べる。
MASP-2抗原:以下の単離されたMASP-2ポリペプチドを用いてウサギを免疫することによって、ポリクローナル抗ヒトMASP-2抗血清を作製する:血清から単離されたヒトMASP-2(SEQ ID NO:6);実施例3に記載の組換えヒトMASP-2(SEQ ID NO:6)、不活性プロテアーゼドメイン(SEQ ID NO:13)を含有するMASP-2A;ならびに前記の実施例3に記載のように発現された、組換えCUBI(SEQ ID NO:8)、CUBEGFI(SEQ ID NO:9)、およびCUBEGFCUBII(SEQ ID NO:10)。
本実施例は、ラットMASP-2ポリペプチドまたはヒトMASP-2ポリペプチドに対するマウスモノクローナル抗体を作製するための方法について述べる。
雄A/Jマウス(Harlan, Houston, Tex.)、8〜12週齢に、完全フロイントアジュバント(Difco Laboratories, Detroit, Mich.)を含む200μlのリン酸緩衝食塩水(PBS)pH7.4に溶解したヒトまたはラットのrMASP-2またはrMASP-2Aポリペプチド(実施例3に記載のように作った)100μgを皮下注射する。2週間の間隔で2回、マウスに、不完全フロイントアジュバントに溶解したヒトまたはラットのrMASP-2またはrMASP-2Aポリペプチド50μgを皮下注射する。4週目に、マウスに、PBSに溶解したヒトまたはラットのrMASP-2またはrMASP-2Aポリペプチド50μgを注射し、4日後に融合する。
前記のMASP-2 ELISAアッセイ法の試験において陽性と判定された培養上清を、MASP-2に対するMASP-2阻害物質の結合親和性を決定するために結合アッセイ法において試験することができる。阻害物質が補体系の他の抗原に結合するかどうか判定するために類似アッセイ法も使用することができる。
本実施例は、ヒト化マウス抗MASP-2抗体および抗体断片の生成および作製について述べる。
RNAzolを用いて製造業者のプロトコール(Biotech, Houston, Tex.)に従って、総RNAを、抗MASP-2 MoAbを分泌するハイブリドーマ細胞(実施例7に記載のように得た)から単離する。プライマーとしてオリゴdTを用いて第一鎖cDNAを総RNAから合成する。免疫グロブリン定常C領域に由来する3'プライマー、および5'プライマーとしてリーダーペプチドまたはマウスVH遺伝子もしくはVK遺伝子の最初のフレームワーク領域に由来する縮重プライマーセットを用いてPCRを行う。アンカーPCRは、Chen and Platsucas(Chen, P.F., Scand. J. Immunol. 35:539-549, 1992)に記載のように行う。VK遺伝子をクローニングするために、Not1-MAK1プライマー
を用いて二本鎖cDNAを調製する。アニーリングされたアダプターAD1
およびAD2
を二本鎖cDNAの5'末端および3'末端の両方に連結する。3'末端にあるアダプターをNot1消化によって除去する。次いで、消化産物を、5'プライマーとしてAD1オリゴヌクレオチドおよび3'プライマーとしてMAK2
を使用するPCRにおける鋳型として使用する。約500bpのDNA断片をpUC19にクローニングする。クローニングされた配列が、予想されたマウス免疫グロブリン定常領域を含むことを確認するために、配列分析用に、いくつかのクローンを選択する。Not1-MAK1およびMAK2オリゴヌクレオチドはVK領域に由来し、それぞれ、Cκ遺伝子の最初の塩基対から182bpおよび84bp下流にある。完全なVKおよびリーダーペプチドを含むクローンを選択する。
を用いて二本鎖cDNAを調製する。アニーリングされたアダプターAD1およびAD2を、二本鎖cDNAの5'末端および3'末端の両方に連結する。3'末端にあるアダプターをNot1消化によって除去する。消化産物を、プライマーとしてAD1オリゴヌクレオチドおよびMAG2
を使用するPCRにおける鋳型として使用する。長さが500〜600bpのDNA断片をpUC19にクローニングする。Notl-MAG1およびMAG2オリゴヌクレオチドはマウスCγ.7.1領域に由来し、それぞれ、マウスCγ.7.1遺伝子の最初の塩基対から180bp下流および93bp下流にある。完全なVHおよびリーダーペプチドを含むクローンを選択する。
Kozakコンセンサス配列をヌクレオチド配列の5'末端に付加し、スプライスドナーを3'末端に添加するためのPCR反応の鋳型として、前記のクローニングされたVH遺伝子およびVK遺伝子を使用する。PCRエラーが存在しないことを確認するために配列を分析した後に、VH遺伝子およびVK遺伝子を、それぞれ、ヒトC.γ1を含有する発現ベクターカセットおよびヒトC.κを含有する発現ベクターカセットに挿入して、pSV2neoVH-huCγ1およびpSV2neoV-huCγを得る。重鎖ベクターおよび軽鎖ベクターのCsCl勾配精製プラスミドDNAを用いて、エレクトロポレーションによってCOS細胞をトランスフェクトする。48時間後に、約200ng/mlのキメラIgGの存在を確認するために、培養上清をELISAによって試験する。細胞を回収し、総RNAを調製する。プライマーとしてオリゴdTを用いて、総RNAから第一鎖cDNAを合成する。Fd DNA断片およびκDNA断片を生成するために、このcDNAをPCRにおける鋳型として使用する。Fd遺伝子の場合、5'プライマーとして
およびCH1由来3'プライマー
を用いてPCRを行う。DNA配列は、ヒトIgG1の完全なVHドメインおよびヒトCH1ドメインを含有することが確認される。適切な酵素で消化した後に、Fd DNA断片を、発現ベクターカセットpSV2dhfr-TUSのHindIII制限部位およびBamHI制限部位に挿入して、pSV2dhfrFdを得る。pSV2プラスミドは市販されており、様々な供給源に由来するDNAセグメントからなる。pBR322DNA(薄い線)は、pBR322のDNA複製起点(pBRori)およびラクタマーゼアンピシリン耐性遺伝子(Amp)を含有する。幅広のハッチングによって表され、印が付けられているSV40 DNAは、SV40 DNA複製起点(SV40ori)、初期プロモーター(dhfr遺伝子およびneo遺伝子の5'側)、ならびにポリアデニル化シグナル(dhfr遺伝子およびneo遺伝子の3'側)を含有する。SV40由来ポリアデニル化シグナル(pA)もFd遺伝子の3'末端に配置される。
およびCK由来3'プライマー
を用いてPCRを行う。DNA配列は、完全なVK領域およびヒトCK領域を含有することが確認される。適切な制限酵素を用いた消化後に、κDNA断片を発現ベクターカセットpSV2neo-TUSのHindIII制限部位およびBamHI制限部位に挿入して、pSV2neoKを得る。Fd遺伝子およびκ遺伝子の発現は、HCMV由来エンハンサーおよびプロモーターエレメントによって駆動される。Fd遺伝子は、鎖間ジスルフィド結合に関与するシステインアミノ酸残基を含まないので、この組換えキメラFabは、非共有結合により連結された重鎖および軽鎖を含有する。このキメラFabはcFabと呼ばれる。
キメラ抗MASP-2 IgGを分泌する細胞株を生成するために、NSO細胞を、エレクトロポレーションによってpSV2neoVH-huC.γ1およびpSV2neoV-huCκの精製プラスミドDNAでトランスフェクトする。トランスフェクト細胞を、0.7mg/ml G418の存在下で選択する。細胞を、血清含有培地を用いて250mlスピナーフラスコ中で増殖させる。
キメラ抗MASP-2 Fabを分泌する細胞株を生成するために、CHO細胞を、エレクトロポレーションによってpSV2dhfrFd(またはpSV2dhfrFd/9aa)およびpSV2neoκの精製プラスミドDNAでトランスフェクトする。トランスフェクト細胞をG418およびメトトレキセートの存在下で選択する。選択された細胞株を漸増濃度のメトトレキセートの中で増幅する。細胞を限界希釈によってシングルセルサブクローニングする。次いで、高産生シングルセルサブクローニング細胞株を、無血清培地を用いて100mlスピナーフラスコ中で増殖させる。
本実施例は、L-フィコリン/P35、H-フィコリン、M-フィコリン、またはマンナンを介したMASP-2依存性補体活性化を遮断することができるMASP-2阻害物質を特定するための機能スクリーニングとして用いられるインビトロC4切断アッセイ法について述べる。
以下のアッセイ法は、野生型マウスおよびMASP-2-/-マウスにおける古典経路活性化の存在を証明する。
以下のアッセイ法を用いて、免疫複合体によって古典経路が開始する条件下でMASP-2阻害物質の効果を分析することによって、MASP-2阻害物質が古典経路を遮断するかどうか試験する。
本実施例はMASP-2活性を遮断する高親和性抗MASP-2 Fab2抗体断片の特定について述べる。
1.レクチン経路C3コンバターゼ形成の阻害を測定するためのアッセイ法:
背景:レクチン経路C3コンバターゼは、C3を2つの強力な炎症誘発断片であるアナフィラトキシンC3aおよびオプソニンC3bにタンパク分解によって切断する酵素複合体(C4bC2a)である。C3コンバターゼの形成は、炎症を媒介する点でレクチン経路の重要な段階であるように思われる。MASP-2はレクチン経路C3コンバターゼ(C4bC2a)の構造成分ではない。従って、抗MASP-2抗体(またはFab2)は、既にあるC3コンバターゼの活性を直接阻害しない。しかしながら、レクチン経路C3コンバターゼを構成する2つのタンパク質成分(C4b、C2a)を生成するために、MASP-2セリンプロテアーゼ活性が必要とされる。従って、MASP-2機能活性を阻害する抗MASP-2 Fab2(すなわち、遮断抗MASP-2 Fab2)はレクチン経路C3コンバターゼの新規形成を阻害する。C3は、その構造の一部として、珍しく、かつ高反応性のチオエステル基を含有する。このアッセイ法ではC3がC3コンバターゼによって切断されると、C3b上のチオエステル基は、エステル結合またはアミド結合を介してプラスチックウェルの底に固定化された巨大分子上のヒドロキシル基またはアミノ基と共有結合を形成することができ、従って、ELISAアッセイ法におけるC3bの検出が容易になる。
96ウェルCostar Medium Bindingプレートを、1ug/50Tl/ウェルで、50mM炭酸緩衝液、pH9.5で希釈したマンナンと5℃で一晩インキュベートした。一晩のインキュベーション後、200Tl PBSで各ウェルを3回洗浄した。次いで、ウェルを、PBSに溶解した100Tl/ウェルの1%ウシ血清アルブミンでブロックし、穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。次いで、各ウェルを200TlのPBSで3回洗浄した。抗MASP-2 Fab2試料を、5Cで、Ca++およびMg++を含有するGVB緩衝液(4.0mMバルビタール、141mM NaCl、1.0mM MgCl2、2.0mM CaCl2、0.1%ゼラチン、pH7.4)で選択された濃度まで希釈した。0.5%ラット血清を5Cで前記の試料に添加し、100Tlを各ウェルに移した。プレートに蓋をし、補体活性化を可能にするために37C水浴中で30分間インキュベートした。37C水浴から、氷と水の混合物を含む容器にプレートを移すことによって、反応を止めた。各ウェルを、PBS-Tween20(0.05%Tween20を含むPBS)で200Tlで5回洗浄し、次いで、200TlのPBSで2回洗浄した。2.0mg/mlウシ血清アルブミンを含有するPBSに溶解した100Tl/ウェルの一次抗体(ウサギ抗ヒトC3c、DAKO A0062)1:10,000希釈液を添加し、穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルを5×200TlのPBSで洗浄した。2.0mg/mlウシ血清アルブミンを含有するPBSに溶解した、100Tl/ウェルの二次抗体(ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギIgG, American Qualex A102PU)1:10,000希釈液を添加し、シェーカーに載せて穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルをPBSで200Tlで5回洗浄した。100Tl/ウェルのペルオキシダーゼ基質TMB(Kirkegaard & Perry Laboratories)を添加し、室温で10分間インキュベートした。100Tl/ウェルの1.0M H3PO4を添加することによってペルオキシダーゼ反応を止め、OD450を測定した。
背景:MASP-2のセリンプロテアーゼ活性は高度に特異的であり、MASP-2のタンパク質基質はC2およびC4の2種類しか特定されていない。C4の切断によってC4aおよびC4bが生成される。抗MASP-2 Fab2は、C4切断に直接関与するMASP-2上の構造エピトープ(例えば、C4のMASP-2結合部位;MASP-2セリンプロテアーゼ触媒部位)に結合し、それによって、MASP-2のC4切断機能活性を阻害する可能性がある。
背景:MASP-2は、通常、特異的レクチン分子(マンノース結合タンパク質(MBL)およびフィコリン)も含むMASP-2二量体複合体として血漿中に存在する。従って、抗MASP-2 Fab2と生理学的に関連する形態のMASP-2との結合の研究に興味があるのであれば、精製組換えMASP-2ではなく、Fab2と血漿中の「天然」MASP-2との相互作用が用いられる結合アッセイ法を開発することが重要である。この結合アッセイ法では、最初に、10%ラット血清に由来する「天然」MASP-2-MBL複合体をマンナンコーティングウェルに固定化した。次いで、標準的なELISA法を用いて、固定化「天然」MASP-2に対する様々な抗MASP-2 Fab2の結合親和性を研究した。
ELISAスクリーニングのために、高親和性でラットMASP-2タンパク質と反応した約250個の異なるFab2を選んだ。異なる抗体のユニークさを決定するために、これらの高親和性Fab2を配列決定した。さらなる分析のために、50個のユニークな抗MASP-2抗体を精製した。それぞれの精製Fab2抗体250μgを、MASP-2結合親和性の特徴決定および補体経路の機能試験に使用した。この分析の結果を以下の表6に示した。
本実施例は、実施例10に記載のように生成された遮断抗ラットMASP-2 Fab2抗体のいくつかのエピトープマッピングについて述べる。
図10に示したように、全てN末端6×Hisタグを有する以下のタンパク質を、pED4ベクターを用いてCHO細胞において発現させた:
ラットMASP-2A、活性中心にあるセリンをアラニンに変えることによって不活性化された完全長MASP-2タンパク質(S613A);
ラットMASP-2K、自己活性化を低下させるように変えられた完全長MASP-2タンパク質(R424K);
CUBI-II、CUBIドメイン、EGF様ドメイン、およびCUBIIドメインしか含まないラットMASP-2 N末端断片;ならびに
CUBI/EGF様、CUBIドメインおよびEGF様ドメインしか含まないラットMASP-2 N末端断片。
前述したおよび図10に示した5個の組換えMASP-2ポリペプチドの段階希釈液(ならびにCCPII-セリンプロテアーゼポリペプチドの陰性対照としてチオレドキシンポリペプチド)をニトロセルロース膜上にスポットした。スポットされたタンパク質の量は5倍段階で100ng〜6.4pgであった。後の実験において、スポットされたタンパク質の量は、再度、5倍段階で50ng〜16pgであった。膜を、TBS(ブロッキング緩衝液)に溶解した5%スキムミルク粉末でブロックし、次いで、ブロッキング緩衝液(5.0mM Ca2+を含有する)に溶解した1.0μg/mlの抗MASP-2 Fab2とインキュベートした。結合しているFab2を、HRP結合抗ヒトFab(AbD/Serotec;1/10,000に希釈した)およびECL検出キット(Amersham)を用いて検出した。1枚の膜を、陽性対照としてポリクローナルウサギ抗ヒトMASP-2 Ab(Stover et al., J Immunol 163:6848-59(1999)に記載)とインキュベートした。この場合、結合しているAbを、HRP結合ヤギ抗ウサギIgG(Dako; 1/2,000に希釈した)を用いて検出した。
ELISAプレートを、炭酸緩衝液(pH9.0)に溶解した1.0μg/ウェルの組換えMASP-2AまたはCUBI-IIポリペプチドで4℃において一晩コーティングした。ウェルを、TBSに溶解した1%BSAでブロックし、次いで、5.0mM Ca2+を含有するTBSに溶解した抗MASP-2 Fab2の段階希釈液を添加した。プレートをRTで1時間インキュベートした。TBS/tween/Ca2+で3回洗浄した後、TBS/Ca2+で1/10,000に希釈したHRP結合抗ヒトFab(AbD/Serotec)を添加し、プレートをRTでさらに1時間インキュベートした。結合している抗体を、TMBペルオキシダーゼ基質キット(Biorad)を用いて検出した。
Fab2と様々なMASP-2ポリペプチドとの反応性を証明したドットブロット分析の結果を以下の表7に示した。表7に示した数値は、ほぼ最大半量のシグナル強度を得るのに必要とされる、スポットされたタンパク質の量を示す。示したように、(チオレドキシン融合パートナー単独を除く)全てのポリペプチドが、陽性対照Ab(ポリクローナル抗ヒトMASP-2血清、ウサギにおいて産生された)によって認識された。
経路活性が第2週および第3週にわたって観察され、抗MASP-2 MoAb投与後17日までにマウスにおいてレクチン経路が完全に回復した。NR=反応なし。陽性対照抗体は、ウサギにおいて産生されたポリクローナル抗ヒトMASP-2血清である。
本実施例はマウス腎臓虚血/再灌流モデルにおけるMASP-2-/-マウスの分析について述べる。
MASP-2(-/-)マウスを実施例1に記載のように生成し、少なくとも10世代にわたってC57B1/6と戻し交配した。6匹の雄MASP-2(-/-)および6匹の野生型(+/+)マウス、体重22〜25gに、Hypnovel(6.64 mg/kg; Roche products Ltd. Welwyn Garden City, UK)の腹腔内注射を投与し、その後に、イソフルラン(Abbott Laboratories Ltd., Kent, UK)吸入によって麻酔をかけた。イソフルランは、肝毒性がほとんどない穏やかな吸入麻酔薬であるので選択された。濃度は正確に作製され、長期麻酔の後でも動物は速やかに回復する。Hypnovelは動物において神経遮断性鎮痛の状態を生じ、少量のイソフルランが投与される必要があることを意味するので投与された。一定の体温を維持するために動物の真下に暖かいパッドを敷いた。次に、腹部縦切開を行い、一対の開創器を用いて体腔を開いた。右腎および左腎の腎静脈および腎動脈の上部および下部にある結合組織を取り除き、毛細血管瘤鉗子を55分間、適用することによって腎茎をきつく締めた。この虚血期間は、当初、この研究室で行われた先行研究に基づいた(Zhou et al., J. Clin. Invest. 105:1363-71(2000))。さらに、虚血滴定(ischemic titration)後に55分の標準的な虚血時間が選択され、55分で、5%未満の低い死亡率で、可逆的でもある損傷が一貫して得られることが見出された。閉塞後、0.4mlの暖かい食塩水(37℃)を腹腔に入れ、次いで、虚血期間に腹部を閉じた。毛細血管瘤鉗子を取り外した後、腎臓に血液が再び流れ始めたことを示す色の変化まで腎臓を観察した。さらに0.4mlの暖かい食塩水を腹腔に入れ、開口部を縫合した。その後、動物をケージに戻した。鉗子を取り外して24時間後に尾血液試料を採取し、48時間でマウスを屠殺し、さらなる血液試料を収集した。
本実施例はマウス黄斑変性モデルにおけるMASP-2-/-の結果について述べる。
MASP-2-/-マウスを実施例1に記載のように生成し、10世代にわたってC57Bl/6と戻し交配した。本研究では、新生血管AMDの促進モデルであるレーザー誘導性CNVの経過においてMASP-2(-/-)雄マウスおよびMASP-2(+/+)雄マウスを評価した場合の結果を、組織損傷の尺度としての走査型レーザー共焦点顕微鏡観察によるレーザー誘導性CNVの体積、ならびにレーザー損傷後のELISAによる網膜色素上皮(RPE)/脈絡膜におけるCNVに関与する強力な血管新生因子であるVEGFレベルの決定に焦点を当てて比較した。
VEGFレベルの評価:
図13Aは、0日目にC57Bl6野生型マウスおよびMASP-2(-/-)マウスから単離されたRPE-脈絡膜複合体におけるVEGFタンパク質レベルを図示する。図13Aに示したように、VEGFレベルの評価は、C57bl野生型対照マウスに対するMASP-2(-/-)マウスにおけるVEGFベースラインレベルの減少を示す。図13Bは、レーザー誘導性損傷の3日後に測定されたVEGFタンパク質レベルを図示する。図13Bに示したように、VEGFレベルはレーザー誘導性損傷の3日後に野生型(+/+)マウスでは有意に増加し、発表された研究(Nozaki et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:2328-33(2006))と一致する。しかしながら、驚いたことに、MASP-2(-/-)マウスでは非常に低レベルのVEGFが見られた。
レーザー誘導性黄斑変性後のVEGFレベルの低下に加えて、レーザー損傷の前後にCNV面積が求められた。図14は、レーザー誘導性損傷後7日目にC57bl野生型マウスおよびMASP-2(-/-)マウスにおいて測定されたCNV体積を図示する。図14に示したように、MASP-2(-/-)マウスは、レーザー誘導性損傷後7日目に野生型対照マウスと比較してCNV面積の約30%の縮小を示した。
本実施例は、トロンビン活性化が生理学的条件下でレクチン経路活性化後に起こることを証明し、MASP-2が関与する程度を証明する。正常ラット血清中で、レクチン経路が活性化されると、補体が活性化されると同時に(C4沈着として評価される)、トロンビンが活性化される(トロンビン沈着として評価される)。図15Aおよび図15Bから分かるように、この系におけるトロンビン活性化はMASP-2遮断抗体(Fab2形式)によって阻害され、補体活性化の阻害濃度反応曲線(図15A)と一致する阻害濃度反応曲線(図15B)を示す。これらのデータから、外傷において発生するようにレクチン経路が活性化されると、MASP-2に完全に依存するプロセスにおいて補体系および凝固系が活性化されることが示唆される。推論によって、MASP2遮断抗体は、過度の全身凝固、例えば、重大な外傷症例における死亡につながる顕著な特徴の1つである播種性血管内凝固の症例の緩和において有効であると判明する可能性がある。
本実施例は、播種性血管内凝固(「DIC」)におけるレクチン経路の役割を評価するために、MASP-2-/-欠損マウスおよびMASP-2+/+十分マウスにおけるDICの限局性シュワルツマン反応モデルを用いて得られた結果を提供する。
前記のように、MASP-2の遮断はレクチン経路活性化を阻害し、アナフィラトキシンであるC3aおよびC5aの生成を減少させる。C3aアナフィラトキシンはインビトロでは強力な血小板凝集因子であることが示され得るが、インビボにおいて、これらの関与はあまり明確でなく、創傷治癒における血小板物質およびプラスミンの放出は二次的にしか補体C3を必要としない可能性がある。本実施例では、播種性血管内凝固を生成するためにはC3活性化の長期増大が必要かどうかを取り扱うために、レクチン経路の役割をMASP-2(-/-)マウスおよびWT(+/+)マウスにおいて分析した。
この研究において用いられるMASP-2(-/-)マウスを実施例1に記載のように生成し、少なくとも10世代にわたってC57Bl/6と戻し交配した。
本実施例はマウス腎臓移植モデルにおけるMASP-2(-/-)マウスの分析について述べる。
腎臓移植の機能的帰結におけるMASP-2の役割をマウスモデルを用いて評価した。
腎臓移植の機能的帰結を、6匹のWT(+/+)移植レシピエント(B6)および6匹のMASP-2(-/-)移植レシピエントを用いた一側性腎摘出レシピエントマウスへの単一腎臓同系移植を用いて評価した。移植された腎臓の機能を評価するために、移植して5日後に、残っている元からある腎臓をレシピエントから取り出し、24時間後に血中尿素窒素(BUN)レベルを測定することによって腎機能を評価した。
図17は、WT(+/+)レシピエントおよびMASP-2(-/-)レシピエントにおける腎臓移植6日後の腎臓の血中尿素窒素(BUN)レベルを図示する。図17に示したように、腎不全を示すBUNレベルのかなりの増大がWT(+/+)(B6)移植レシピエントにおいて観察された(マウスの正常BUNレベルは<5mMである)。対照的に、MASP-2(-/-)同系移植レシピエントマウスは実質的に低いBUNレベルを示した。このことは腎機能の改善を示唆している。これらの結果はWT(+/+)腎臓ドナー由来の移植片を用いて得られたことに注目する。このことから、治療利益を実現するためには、移植レシピエントだけに機能的レクチン経路が存在しないことで十分であることが示唆される。
本実施例は、MASP-2(-/-)マウスがマウス複数菌敗血症腹膜炎(Polymicrobial Septic Peritonitis)モデルにおける敗血症ショックに対して耐性があることを証明する。
感染症におけるMASP-2(-/-)の潜在的な効果を評価するために、複数菌敗血症腹膜炎モデルである腸管穿孔(CLP)モデルを評価した。このモデルは、ヒト敗血症腹膜炎の経過を最も正確に模倣すると考えられている。腸管穿孔(CLP)モデルは、盲腸を結紮し、針で穴を開け、細菌が腹腔に連続して漏出し、リンパドレナージを通って血液に到達し、次いで、全ての腹部臓器に分配され、多臓器不全および敗血症ショックを引き起こすモデルである(Eskandari et al.,J Immunol 148(9):2724-2730(1992))。CLPモデルは患者において観察される敗血症の経過を模倣し、初期の超炎症反応の後に顕著な低炎症期を誘導する。この期間、動物は細菌曝露に対して高感受性になる(Wichterman et al., J. Surg. Res. 29(2):189-201(1980))。
腸管穿孔(CLP)モデルを用いた複数菌感染症の死亡率をWT(+/+)(n=18)およびMASP-2(-/-)(n=16)マウスにおいて測定した。簡単に述べると、MASP-2欠損マウスおよびその野生型同腹仔に麻酔をかけ、盲腸を体外に出し、遠位端の30%上側で結紮した。その後に、盲腸に0.4mm直径の針で1回、穴を開けた。次いで、盲腸を腹腔の元の場所に戻し、皮膚を鉗子で閉じた。CLPに供されたマウスの生存を、CLP後、14日間にわたってモニタリングした。細菌量を測定するために、CLPの16時間後にマウスにおいて腹膜洗浄液を収集した。腹膜洗浄液の段階希釈液をPBSで調製し、ミュラー・ヒントンプレートに接種し、その後に、嫌気条件下で37℃において24時間インキュベートした。この後に細菌量を求めた。
図18は、CLP手順後の日数の関数としてのCLP処置動物の生存率パーセントを図示する。図18に示したように、MASP-2(-/-)マウスにおけるレクチン経路欠損は、腸管穿孔モデルを用いた複数菌感染症後のマウス死亡率をWT(+/+)マウスと比較して増加させない。しかしながら、図19に示したように、MASP-2(-/-)マウスは、WT(+/+)同腹仔と比較した場合にCLP後に腹膜洗浄液中に有意に多い細菌量(細菌数の約1000倍の増加)を示した。これらの結果により、MASP-2(-/-)欠損マウスは敗血症ショックに対して耐性があることが示される。C3沈着がMASP-2依存性であると証明されたので、このモデルにおけるMASP-2欠損マウスの細菌クリアランスの低下は、C3bによって媒介される食作用の障害が原因である可能性がある。
本実施例は、マウス鼻腔内感染モデルにおけるMASP-2(-/-)マウスの分析について述べる。
緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)は、広範囲の感染、特に、免疫無防備状態の個体における広範囲の感染の原因となるグラム陰性日和見性ヒト細菌病原体である。緑膿菌は、後天的な院内感染症、特に、院内肺炎の主な原因である。緑膿菌はまた嚢胞性線維症(CF)患者における高い罹病率および死亡率の原因でもある。緑膿菌肺感染症は、広範囲の組織損傷をもたらす強力な好中球動員および激しい肺炎症を特徴とする(Palanki M.S. et al., J. Med. Chem 51:1546-1559(2008))。
22匹のWT(+/+)マウス、22匹のMASP-2(-/-)マウス、および11匹のC3(-/-)マウスに緑膿菌細菌株が鼻腔内投与された。マウスを感染後6日にわたってモニタリングし、生存率パーセントを示すカプラン・マイヤープロットを構築した。
図20は、感染6日後のWT(+/+)、MASP-2(-/-)、またはC3(-/-)マウスの生存率パーセントのカプラン・マイヤープロットである。図20に示したように、MASP-2(-/-)マウス対WT(+/+)マウスにおいて差違は観察されなかった。しかしながら、C3(-/-)マウスにおいて古典的(C1q)経路を除去すると、細菌感染に対する重篤な感受性が生じた。これらの結果により、MASP-2阻害は細菌感染に対する感受性を増加させないことが証明され、古典的補体経路を用いて感染症と闘う患者の能力を損なうことなく、MASP-2を阻害することによって、外傷患者における望ましくない炎症性合併症を減少させることが可能であることが示される。
本実施例は、実施例10に記載のように特定された代表的な高親和性抗MASP-2 Fab2抗体の薬力学的分析について述べる。
実施例10に記載のように、ラットレクチン経路を遮断する高親和性抗体を特定するために、ラットMASP-2タンパク質を用いてファージディスプレイライブラリーをパンニングした。このライブラリーは大きな免疫学的多様性を提供するように設計され、完全ヒトイムノグロビン(immunoglobin)遺伝子配列を用いて構築された。実施例10に記載のように、ラットMASP-2タンパク質と高親和性で結合する約250個の個々のファージクローンをELISAスクリーニングによって特定した。これらのクローンの配列決定によって、50個のユニークなMASP-2抗体コードファージが特定された。これらのクローンからFab2タンパク質を発現させ、精製し、MASP-2結合親和性およびレクチン補体経路機能阻害について分析した。
実施例10に記載のように、ラットMASP-2タンパク質を用いてFabファージディスプレイライブラリーをパンニングした。これから、Fab2#11を特定した。ラットIgG2cおよびマウスIgG2a完全長抗体アイソタイプ変種はFab2#11から得られた。ラットIgG2cおよびマウスIgG2a完全長抗体アイソタイプを、以下の通り薬力学パラメータについてインビボで特徴決定した。
インビボでの血漿レクチン経路活性に対する抗MASP-2抗体投与の効果を調べるために、マウスにおいて薬力学的研究を行った。この研究では、0.3mg/kgまたは1.0mg/kgのマウス抗MASP-2 MoAb(Fab2#11に由来するマウスIgG2a完全長抗体アイソタイプ)の皮下(sc)投与後および腹腔内(ip)投与後の様々な時点で、C4沈着をレクチン経路アッセイ法においてエクスビボで測定した。
本実施例は、加齢黄斑変性のマウスモデルにおける有効性についてのFab2#11に由来するマウス抗MASP-2 Moabの分析について述べる。
実施例10に記載のように、ラットMASP-2タンパク質を用いてFabファージディスプレイライブラリーをパンニングした。これから、Fab2#11を機能的に活性な抗体として特定した。ラットIgG2cおよびマウスIgG2aアイソタイプの完全長抗体はFab2#11から得られた。実施例19に記載のように、マウスIgG2aアイソタイプの完全長抗MASP-2抗体の薬力学パラメータについて特徴決定した。本実施例では、Fab2#11に由来するマウス抗MASP-2完全長抗体を、Bora P.S. et al., J Immunol 174:491-497(2005)に記載の加齢黄斑変性(AMD)のマウスモデルにおいて分析した。
実施例19に記載のようにFab2#11に由来するマウスIgG2a完全長抗MASP-2抗体アイソタイプを、以下の変更を加えて実施例13に記載のように加齢黄斑変性(AMD)のマウスモデルにおいて試験した。
アイソタイプ対照MoAb処置と一緒に、2つの異なる用量(0.3mg/kgおよび1.0mg/kg)のマウス抗MASP-2 MoAbをCNV誘導の16時間前にWT(+/+)マウス(n=8マウス/群)にip注射した。
実施例13に記載のように、脈絡膜血管新生(CNV)の誘導およびCNV体積の測定をレーザー光凝固を用いて行った。
図23は、アイソタイプ対照MoAbまたはマウス抗MASP-2 MoAb(0.3mg/kgおよび1.0mg/kg)で処置されたマウスにおけるレーザー損傷の7日後に測定されたCNV面積を図示する。図23に示したように、1.0mg/kg抗MASP-2 MoAbで前処置されたマウスでは、レーザー処置の7日後に統計的に有意な(p<0.01)約50%のCNV縮小が観察された。図23にさらに示したように、0.3mg/kg用量の抗MASP-2 MoAbがCNV縮小において有効でないことが観察された。実施例19に記載のように、およびに図21に示したように、0.3mg/kg用量の抗MASP-2 MoAbは、皮下投与後に部分的および一過的なC4b沈着阻害を有すると示されたことに注目する。
本実施例は、MASP-2欠損マウスが髄膜炎菌の感染の後の髄膜炎菌誘導死から保護され、野生型対照マウスと比較して菌血症のクリアランスを増強したことを証明する。
MASP-2ノックアウトマウスを実施例1に記載のように生成し、少なくとも10世代にわたってC57Bl/6と戻し交配した。400mg/kgの鉄デキストランに溶解した投与量5×108cfu/100μl、2×108cfu/100μl、または3×107cfu/100μlの髄膜炎菌血清群A Z2491を用いた静脈内注射によって、10週齢MASP-2 KOマウス(n=10)および野生型C57/B6マウス(n=10)に接種した。感染後のマウスの生存を、72時間の期間にわたってモニタリングした。感染を検証し、血清からの細菌クリアランスの割合を決定するために、感染後1時間おきにマウスから血液試料を採取し、分析して、髄膜炎菌の血清レベル(log cfu/ml)を求めた。
図24Aは、感染用量5×108/100μl cfuの髄膜炎菌を投与した後のMASP-2 KOマウスおよびWTマウスの生存率パーセントを図示する。図24Aに示したように、最高用量5×108/100μl cfuの髄膜炎菌に感染させた後、感染後72時間の期間全体を通じてMASP-2 KO マウスの100%が生存した。対照的に、感染24時間後にWTマウスのうち20%しか生存していなかった。これらの結果から、MASP-2欠損マウスは髄膜炎菌誘導死から保護されることが証明される。
これらの結果により、MASP-2欠損マウスは髄膜炎菌誘導死から保護され、WTマウスと比較して菌血症のクリアランスを増強したことが示される。従って、これらの結果を考慮して、MASP-2 MoAbなどのMASP-2阻害因子の治療適用は、髄膜炎菌細菌の感染症(すなわち、敗血症およびDIC)を治療するのに、予防するのに、またはその影響を軽減するのに有効であると予想される。さらに、これらの結果によって、MASP-2 MoAbなどのMASP-2阻害因子の治療適用が、対象に髄膜炎菌感染症にかかるリスクを増大させないことが示される。
本実施例は、新規レクチン経路媒介のおよびMASP-2依存性のC4バイパス補体C3活性化の発見について述べる。
補体活性化阻害因子を用いて心筋虚血/再灌流傷害(MIRI)を制限する主な治療利益は、20年前に、心筋梗塞の実験ラットモデルにおいて説得力をもって証明された。細胞表面補体受容体1型(CR1)の可溶性切断型誘導体である組換えsCR1が静脈内投与され、その効果がMIRIのラットインビボモデルにおいて評価された。sCR1による治療は梗塞体積を40%超縮小させた(Weisman, H.F., et al., Science 249:146-151(1990))。その後、この組換え阻害因子の治療可能性は臨床試験において証明され、MI患者にsCR1を投与すると虚血後心臓における収縮不全が阻止されることが示された(Shandelya, S., et al., Circulation 87:536-546(1993))。しかしながら、虚血組織における補体活性化につながる主な機構は、適切な実験モデルが無く、酸素欠乏細胞の補体活性化につながる分子プロセスならびに異なる補体活性化経路間のクロストークおよび相乗作用が十分に理解されていないことが主な原因で最終的に明確にされていない。
MASP-2欠損マウスは肉眼的異常を示さない
MASP-2欠損マウスを実施例1に記載のように生成した。ヘテロ(+/-)MASP-2欠損マウスおよびホモ(-/-)MASP-2欠損マウスはいずれも健康であり、かつ生殖能力があり、肉眼的異常を示さない。それらの平均余命はWT同腹仔の平均余命(>18ヶ月)とほぼ同じである。疾患実験モデルにおいてこれらのマウスの表現型を試験する前に、本発明者らのMASP-2-/-系統を11世代にわたってC57BL/6バックグラウンドと戻し交配した。MASP-2 mRNAが全く存在しないことが、ポリA+で選択された肝臓RNA調製物のノザンブロッティングによって確認されたのに対して、MAp19またはsMAP(MASP2遺伝子の切断型オルタナティブスプライシング産物)をコードする1.2kb mRNAは豊富に発現していた。
MASP-2はレクチン経路機能活性に不可欠である
実施例2に記載のように、および図5に示したように、MASP-2-/-血漿のインビトロ分析から、C4活性化のためにマンナンコーティング表面およびザイモサンコーティング表面を活性化した場合に、レクチン経路機能活性を全く有さないことが分かった。同様に、MASP-2-/-血漿中には、N-アセチルグルコサミンでコーティングされた表面上においてレクチン経路依存性のC4切断もC3切断も検出できなかった。N-アセチルグルコサミンはMBL A、MBL C、およびフィコリンAに結合し、これらを介して活性化を誘発する(データ示さず)。
MIRIへのレクチン経路機能活性の寄与を研究するために、本発明者らは、冠状動脈左前下行枝(LAD)の一過的な結紮および再灌流後のMIRIモデルにおいてMASP-2-/-マウスおよびWT同腹仔対照を比較した。補体C4の有無はMIRIにおける虚血組織消失の程度に影響を及ぼさない。本発明者らは、実験MIRI後の心筋壊死域に対するC4欠損の影響を評価した。図27Aおよび図27Bに示したように、C4欠損マウスおよびそのWT同腹仔の両方において同一の心筋壊死域が観察された。図27Aは、C4-/-マウス(n=6)および対応するWT同腹仔対照(n=7)におけるLAD結紮および再灌流後のMIRI誘導性組織消失を図示する。図27BはAARの関数としてのINFを図示し、C4-/-マウスがWT対照(破線)と同程度にMIRIを受けやすいことをはっきりと証明している。
C4欠損モルモット血清中にC4バイパス活性化経路が存在することを示した歴史的報告に勇気づけられて(May, J.E., and M Frank, J. Immunol. 111:1671-1677(1973))、本発明者らは、C4欠損マウスに、残存する古典経路機能活性またはレクチン経路機能活性があり得るかどうかを分析し、第二経路の寄与を排除する経路特異的アッセイ条件下でC3活性化をモニタリングした。
本実施例に記載の結果から、MASP-2機能活性は、C4存在下およびC4非存在下の両方でレクチン経路を介したC3活性化に不可欠なことが強く示唆される。さらに、この新規のレクチン経路特異的なC4バイパスC3活性化経路が働くためにはC2およびMASP-1が必要とされる。MASP-2-/-血漿ならびにC4-/-血漿におけるレクチン経路機能活性の比較分析から、以前は認められていなかった、C4非依存性であるが、MASP-2依存性の補体C3活性化経路の存在が明らかになり、C4が全く存在しなくてもレクチン経路依存形式でC3を活性化できることが分かった。この新規のMASP-2依存性C3コンバターゼの詳細な分子組成および活性化事象の順序はまだ解明されていないが、本発明者らの結果は、このC4バイパス活性化経路がさらに補体C2ならびにMASP-1の存在を必要とすることを意味する。C4およびMASP-1/3複合欠損を有するマウスの血漿中で、レクチン経路を介したC3切断活性が失われたのは、MASP-1がMASP-2を直接切断し、活性化することによってMASP-2依存性補体活性化を増強するという、ごく最近、述べられた役割から説明がつく可能性がある(Takahashi, M., et al., J. Immunol. 180:6132-6138(2008))。同様に、MASP-1は、C2を切断する能力によってMASP-2機能活性を助ける可能性がある(Moller-Kristensen, et al., Int. Immunol. 19:141-149(2007))。両活性が、MASP-1/3欠損血漿がレクチン活性化経路を介してC3を切断する速度の低下と、C4バイパス活性化経路を介してC3変換を維持するのにMASP-1が必要とされ得る理由の説明となる可能性がある。
本実施例は、WT(+/+)、MASP-2(-/-)、F11(-/-)、F11/C4(-/-)、およびC4(-/-)マウスにおけるトロンビン基質によるC3活性化およびマンナン上へのC3沈着について述べる。
実施例14に記載のように、トロンビン活性化は、生理学的条件下でレクチン経路活性化後に起こり、かつ、MASP-2が関与する程度を証明することが判明した。C3は補体系活性化において中心的な役割を果たす。C3活性化は古典補体活性化経路および第二補体活性化経路の両方に必要とされる。C3がトロンビン基質によって活性化されるかどうかを判定するために、実験を行った。
トロンビン基質によるC3活性化
C3活性化を、以下の活性化型トロンビン基質の存在下で測定した:ヒトFCXIa、ヒトFVIIa、ウシFXa、ヒトFXa、ヒト活性化タンパク質C、およびヒトトロンビン。C3を様々なトロンビン基質とインキュベートし、次いで、10%SDS-ポリアクリルアミドゲル上で還元条件下で分離した。セルロース膜を用いた電気泳動移動後に、膜をモノクローナルビオチン結合ラット抗マウスC3とインキュベートし、ストレプトアビジン-HRPキットを用いて検出し、ECL試薬を用いて発色させた。
C3の活性化には、インタクトなa鎖が切断型a'鎖および可溶性C3aに切断されることが必要である(図30に示していない)。図30は、トロンビン基質によるヒトC3活性化に関するウエスタンブロット分析の結果を示す。切断されていないC3α鎖および活性化産物a'鎖を矢印で示した。図30に示したように、インビトロで、C3を活性化型ヒト凝固因子XIおよび第X因子ならびに活性化ウシ凝固因子Xとインキュベートすると、補体プロテアーゼの非存在下でC3を切断することができる。
WT、MASP-2(-/-)、F11(-/-)、F11(-/-)/C4(-/-)、およびC4(-/-)から得られた血清試料に対してC3沈着アッセイ法を行った。F11は、凝固因子XIをコードする遺伝子である。C3活性化を測定するために、マイクロタイタープレートをマンナン(1μg/ウェル)でコーティングし、次いで、TBS/tween/Ca2+に溶解したヒツジ抗HSA血清(2μg/ml)を添加した。プレートを、TBSに溶解した0.1%HSAでブロックし、前記のように洗浄した。血漿試料を、4mMバルビタール、145mM NaCl、2mM CaCl2、1mM MgCl2、pH7.4で希釈し、プレートに添加し、37℃で1.5時間インキュベートした。洗浄後、結合しているC3bを、ウサギ抗ヒトC3c(Dako)を用いて、その後にアルカリホスファターゼ結合ヤギ抗ウサギIgGおよびpNPPを用いて検出した。
図31は、WT、MASP-2(-/-)、F11(-/-)、F11(-/-)/C4(-/-)、およびC4(-/-)から得られた血清試料に対するC3沈着アッセイ法の結果を示す。図31に示したように、C4が全く存在しなくても機能的レクチン経路がある。さらに図31に示したように、この新規のレクチン経路依存性補体活性化は凝固因子XIを必要とする。
この実験において得られた結果の前に、補体のレクチン経路は活性のためにC4を必要とすると当業者に考えられていた。従って、C4ノックアウトマウス(およびC4欠損ヒト)由来のデータは、このような生物が(古典経路欠損に加えて)レクチン経路を欠損していると仮定して解釈された。本結果から、この考えは間違っていると証明された。従って、C4欠損動物の表現型に基づいて、ある特定の疾患状況においてレクチン経路が重要でないことを示唆した過去の研究の結論は間違っている可能性がある。本実施例に記載のデータにより、全血清の生理学的な文脈の中で、レクチン経路は凝固カスケードの成分を活性化できることも示される。従って、MASP-2が関与する、補体と凝固との間のクロストークがあることが証明される。
本実施例は、発作性夜間血色素尿症(PNH)患者から得られた血液試料に由来する赤血球の溶解に対する抗MASP-2抗体の効果を評価する方法について述べる。
発作性夜間血色素尿症(PNH)はマルキアファーヴァ・ミケーリ症候群とも呼ばれ、補体誘導性の血管内溶血性貧血を特徴とする、後天的な、潜在的に命にかかわる血液疾患である。PNHの顕著な特徴は、補体第二経路が無秩序に活性化した結果である慢性的な血管内溶血である。Lindorfor, M.A., et al., Blood 115(11)(2010)。PNHにおける貧血は血流中の赤血球の破壊が原因である。PNHの症状には、尿中のヘモグロビンの出現による赤色尿、および血栓症が含まれる。PNHは自然発症することがあり、これは「一次PNH」と呼ばれるか、または再生不良性貧血などの他の骨髄障害の状況では「二次PNH」と呼ばれる。PNHの治療には、貧血の場合は輸血、血栓症の場合は血液凝固阻止、および補体系を阻害することによって免疫破壊から血球を保護するモノクローナル抗体エクリズマブ(Soliris)の使用(Hillmen P. et al., N. Engl. J. Med. 350(6) 552-9(2004))が含まれる。しかしながら、エクリズマブで治療されたPNH患者のかなりの部分には、臨床的に意義のある免疫を介した溶血性貧血が残る。なぜなら、この抗体は補体第二経路の活性化を遮断しないからである。
試薬:
正常ドナーに由来する赤血球およびPNHに罹患している患者(Solirisで治療されていない)に由来する赤血球を静脈穿刺によって得て、本明細書に参照により組み入れられる、Wilcox, L.A., et al., Blood 78:820-829(1991)に記載のように調製する。レクチン経路の機能遮断活性を有する抗MASP-2抗体は、実施例10に記載のように生成することができる。
PNH患者に由来する赤血球の溶血を遮断する能力に対する抗MASP-2抗体の効果を判定するための方法は、Lindorfer, M.A., et al., Blood 15(11):2283-91(2010)およびWilcox, L.A., et al., Blood 78:820-829(191)に記載の方法を用いて行われる。両参照文献とも本明細書に参照により組み入れられる。Lindorfer et al.に記載のように、PNH患者試料に由来する赤血球を遠心分離し、バフィーコートを吸引し、それぞれの実験の前に細胞をゼラチンベロナール緩衝液(GVB)で洗浄する。以下のように、赤血球を、APCを介した溶解に対する感受性について試験する。ABO型が同じ正常ヒト血清を、0.15mM CaCl2および0.5mM MgCl2を含有するGVB(GVB+2)で希釈し、pH6.4まで酸性化し(酸性化NHS、aNHS)、これを用いて、赤血球を50%aNHSに溶解して1.6%のヘマトクリットまで再構成する。次いで、混合物を37℃でインキュベートし、1時間後、赤血球を遠心分離によってペレット化する。回収された上清のアリコートの光学密度を405nMで測定し、これを用いて溶解パーセントを算出する。酸性化血清-EDTA中で再構成された試料を同様に処理し、これを用いて、バックグラウンドの補体によって媒介されなかった溶解(典型的には、3%未満)を規定する。完全溶解(100%)は、赤血球を蒸留水中でインキュベートした後に求められる。
本実施例は、クリオグロブリン血症に罹患している患者から得られた血液試料中のクリオグロブリンによる補体活性化に対する抗MASP-2遮断抗体の効果を評価する方法について述べる。
クリオグロブリン血症は血清中のクリオグロブリンの存在を特徴とする。クリオグロブリンは、低温で可逆的に凝集する1種類または混合性の免疫グロブリン(典型的にはIgM抗体)である。凝集は、古典経路の補体活性化および血管床、特に、周辺部における炎症につながる。クリオグロブリン血症の臨床症状には脈管炎および糸球体腎炎が含まれる。
クリオグロブリン血症の副作用を遮断する能力に対する抗MASP-2抗体の効果を判定するための方法は、本明細書に参照により組み入れられるNg Y.C. et al., Arthritis and Rheumatism 31(1):99-107(1988)に記載のように液相C3変換アッセイ法を用いて行われる。Ng et al.,に記載のように、本態性混合型クリオグロブリン血症(EMC)では、モノクローナルリウマチ因子(mRF)、通常、IgMはポリクローナルIgGと複合体を形成して、特徴的な寒冷沈降物免疫複合体(IC)(II型クリオグロブリン)を形成する。免疫グロブリンおよびC3は、皮膚、神経、および腎臓などの患部組織の血管壁にあることが証明されている。Ng et al.,に記載のように、125I標識mRFを、血清(正常ヒト血清およびクリオグロブリン血症に罹患している患者から得られた血清)に添加し、37℃でインキュベートし、赤血球との結合を測定する。
本実施例は、貧血として現れた寒冷凝集素症を有する患者から得られた血液試料に対する抗MASP-2抗体の効果を評価する方法について述べる。
寒冷凝集素症(CAD)は自己免疫性溶血性貧血の一種である。寒冷凝集素抗体(通常、IgM)は低温によって活性化され、赤血球に結合し、赤血球を凝集させる。寒冷凝集素抗体は補体と一緒になって、赤血球の表面にある抗原を攻撃する。これは、細網内皮系による赤血球クリアランスを誘発する赤血球オプソニン化(opsoniation)(溶血)を引き起こす。凝集が起こる温度は患者ごとに異なる。
試薬:
正常ドナーに由来する赤血球およびCADに罹患している患者を静脈穿刺によって得る。レクチン経路の機能遮断活性を有する抗MASP-2抗体は実施例10に記載のように生成することができる。
本実施例は、非典型溶血性尿毒症症候群(aHUS)マウスから得られた血液試料中の赤血球の溶解に対する抗MASP-2抗体の効果を評価する方法について述べる。
非典型溶血性尿毒症症候群(aHUS)は、溶血性貧血、血小板減少症、ならびに腎臓および他の臓器の微小循環中の血小板血栓によって引き起こされる腎不全を特徴とする。aHUSは不完全な補体調節に関連し、散発性または家族性であり得る。aHUSは、補体因子H、メンブレンコファクターBおよびI因子、ならびに補体因子H関連1(CFHR1)および補体因子H関連3(CFHR3)を含む補体活性化をコードする遺伝子の変異に関連する。Zipfel, P.F., et al., PloS Genetics 3(3):e41(2007)。本実施例は、aHUSマウスから得られた血液試料に由来する赤血球の溶解に対する抗MASP-2抗体の効果を評価する方法について述べる。
内因性マウスfH遺伝子が、aHUS患者においてよく見られる変異体型fHをコードするヒトホモログで置換されている、この疾患のマウスモデルにおいて、抗MASP-2抗体がaHUSを治療する効果を判定することができる。本明細書に参照により組み入れられる、Pickering M.C. et al., J. Exp. Med. 204(6):1249-1256(2007)を参照されたい。Pickering et al.,に記載のように、このようなマウスはaHUS様の病態を発症する。aHUS治療のための抗MASP-2抗体の効果を評価するために、抗MASP-2抗体を変異aHUSマウスに投与し、抗MASP-2 ab処置対照および未処置対照から得られた赤血球の溶解を比較する。抗MASP-2抗体が、レクチン経路活性化を遮断することが示されているという事実を考慮して、抗MASP-2抗体は、aHUSに罹患している哺乳動物対象における赤血球の溶解の遮断において有効だと予想される。
本実施例は緑内障治療のために抗MASP-2抗体の効果を評価する方法について述べる。
制御されていない補体活性化は、緑内障における網膜神経節細胞(RGC)、RGCのシナプス、およびRGCの軸索に対する変性損傷の進行の一因となることが示されている。Tezel G. et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 51:5071-5082(2010)を参照されたい。例えば、ヒト組織の病理組織学的研究および様々な動物モデルを用いたインビボ研究から、緑内障網膜においてC1qおよびC3を含む補体成分が合成され、終末補体複合体が形成されることが証明されている(Stasi K. et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 47:1024-1029(2006)、Kuehn M.H. et al., Exp Eye Res 83:620-628(2006)を参照されたい)。Kuehn M.H. et al., Experimental Eye Research 87:89-95(2008)においてさらに記載されるように、補体の合成および沈着は網膜I/Rによって誘導され、補体カスケードの破壊はRGC変性を遅延する。この研究において、補体成分C3が標的破壊されたマウスは、正常動物と比較した場合に一過的な網膜I/R後にRGC変性の遅延を示すことが見出された。
RGC変性に対する抗MASP-2抗体の効果を判定するための方法は、本明細書に参照により組み入れられる、Kuehn M.H. et al., Experimental Eye Research 87:89-95(2008)に記載のように網膜I/Rの動物モデルにおいて行われる。Kuehn et al.,に記載のように、網膜虚血は、動物に麻酔をかけ、次いで、リン酸緩衝食塩水を含有するリザーバーとつながっている30ゲージ針を角膜に通して眼の前眼房に挿入することによって誘導される。次いで、網膜脈管構造を通る循環を完全に阻止するのに十分な104mmHgの眼内圧となるように、食塩水リザーバーを持ち上げる。眼内虚血の増大は虹彩および網膜の脱色(blanching)によって確認され、虚血は左眼のみで45分間維持される。右目は対照として役立ち、カニューレ処置を受けない。次いで、虚血発作の1週間後または3週間後にマウスを安楽死させる。虚血発作前に投与される抗MASP抗体の効果を評価するために、抗MASP-2抗体をマウスの眼に局所投与するか、全身投与する。
Kuehn et al.に記載のように、正常対照マウスでは、一過的な網膜虚血が、視神経の変成変化ならびに免疫組織化学により検出可能なC1qおよびC3の網膜沈着をもたらす。対照的に、C3欠損マウスは軸索変性の著しい減少を示し、誘導の1週間後に、ごくわずかなレベルの視神経損傷しか示さなかった。これらの結果に基づいて、このアッセイ法がMASP-2ノックアウトマウスにおいて行われた場合、および抗MASP-2抗体が虚血発作前に正常マウスに投与された場合には同様の結果が観察されると予想される。
本実施例は、抗MASP-2抗体などのMASP-2阻害因子が放射線曝露の治療および/または急性放射線症候群の治療、寛解、もしくは予防に有効であることを証明する。
高線量の電離放射線に曝露されると、2つの主な機構:骨髄に対する毒性および胃腸症候群によって死が引き起こされる。骨髄毒性は全ての血液細胞を減少させ、生物は感染症および出血によって死亡しやすくなる。胃腸症候群の方がひどく、消化管上皮層が破壊され、腸内分泌機能が失われることが原因で腸のバリア機能が失われることで誘導される。これは、死を招き得る敗血症および関連する全身炎症反応症候群につながる。
材料 この研究において用いられた試験物品は、トランスフェクトされた哺乳動物細胞において産生されたレクチン補体経路のMASP-2タンパク質成分を遮断する、(i)高親和性抗マウスMASP-2抗体(mAbM11)および(ii)高親和性抗ヒトMASP-2抗体(mAbH6)であった。投与濃度は、1mg/kgの抗マウスMASP-2抗体(mAbM11)、5mg/kgの抗ヒトMASP-2抗体(mAbH6)、または滅菌食塩水であった。それぞれの投与セッションのために、十分な量の新鮮な投与溶液を調製した。
7.0Gy曝露群および6.5Gy曝露群のカプラン・マイヤー生存率プロットを、それぞれ、図32Aおよび図32Bに示し、以下の表9にまとめた。全体的に見て、照射前に抗マウスMASP-2 ab(mAbM11)で処置すると、ビヒクル処置された照射対照動物と比較して照射マウスの生存率が6.5Gy(20%増加)および7.0Gy(30%増加)曝露レベルの両方において増加した。6.5Gy曝露レベルでは、照射後に抗マウスMASP-2 abで処置すると、ビヒクル対照照射動物と比較して生存率が中程度に(15%)増加した。
急性放射線症候群は、3つの規定された亜症候群(subsyndrome)からなる:造血亜症候群、胃腸亜症候群、および脳血管亜症候群。観察される症候群は放射線線量によって決まり、造血影響は、1Gyを超える著しい部分的放射線曝露または全身放射線曝露を受けたヒトにおいて観察される。造血症候群は、免疫系に対する損傷と同時に発生する、血球数、赤血球および白血球ならびに血小板の変化を伴う汎血球減少につながる重篤な骨髄機能低下を特徴とする。底が発生した場合に、末梢血に好中球および血小板はほとんど存在せず、好中球減少症、発熱、敗血症の合併症、および制御できない出血が死につながる。
本実施例は、MASP-2欠損マウスが、髄膜炎菌血清群Aまたは髄膜炎菌血清群Bに感染した後に髄膜炎菌誘導死から保護されることを証明する。
MASP-2ノックアウトマウス(MASP-2 KOマウス)を実施例1に記載のように生成した。100μl体積で投与量2.6×107CFUの髄膜炎菌血清群A Z2491を腹腔内(i.p.)注射することによって、10週齢MASP-2 KOマウス(n=10)および野生型(WT)C57/BL6マウス(n=10)に接種した。感染用量を、最終濃度400mg/kgの鉄デキストランと一緒にマウスに投与した。72時間の期間にわたって感染後のマウスの生存をモニタリングした。
図33は、感染用量2.6×107cfuの髄膜炎菌血清群A Z2491を投与させた後のMASP-2 KOマウスおよびWTマウスの生存率パーセントを図示したカプラン・マイヤープロットである。図33に示したように、感染後72時間の期間全体を通じて100%のMASP-2 KOマウスが生存した。対照的に、感染24時間後、WTマウスの80%しか生存しておらず(p=0.012)、感染72時間後、WTマウスの50%しか生存していなかった。これらの結果から、MASP-2欠損マウスは髄膜炎菌血清群A Z2491誘導死から保護されることが証明される。
本実施例は、髄膜炎菌の感染の後の抗MASP-2抗体投与が髄膜炎菌に感染したマウスの生存率を増加させることを証明する。
実施例10に記載のように、ラットMASP-2タンパク質を用いてFabファージディスプレイライブラリーをパンニングした。これから、Fab2#11を、機能的に活性な抗体として特定した。ラットIgG2cおよびマウスIgG2aアイソタイプの完全長抗体はFab2#11から生成された。(実施例19に記載のように)マウスIgG2aアイソタイプの完全長抗MASP-2抗体の薬力学パラメータについて特徴決定した。
前記のように生成された、Fab2#11に由来するマウスIgG2a完全長抗MASP-2抗体アイソタイプを、以下のように髄膜炎菌感染のマウスモデルにおいて試験した。
高用量(4×106cfu)の髄膜炎菌血清群B MC58株によるi.p.注射の3時間後に、9週間齢C57/BL6 Charles Riverマウスを、阻害性マウス抗MASP-2抗体(1.0mg/kg)(n=12)または対照アイソタイプ抗体(n=10)で処置した。
図37は、感染用量4×106cfuの髄膜炎菌血清群B MC58株を投与した後、感染3時間後に阻害性抗MASP-2抗体(1.0mg/kg)または対照アイソタイプ抗体を投与したマウスの生存率パーセントを図示したカプラン・マイヤーである。図37に示したように、感染後72時間の期間全体を通じて抗MASP-2抗体で処置されたマウスの90%は生存した。対照的に、感染後72時間の期間全体を通じてアイソタイプ対照抗体で処置されたマウスの50%しか生存しなかった。記号「*」は、2つの生存曲線の比較によって求められた場合、p=0.0301を示す。
本実施例は、抗MASP-2抗体の投与がヒト血清中の髄膜炎菌感染症を治療するのに有効であることを証明する。
機能的MBLの血清レベルが低い患者は反復性の細菌感染および真菌感染に対して高い感受性を示す(Kilpatrick et al., Biochim Biophys Acta 1572:401-413(2002))。髄膜炎菌はMBLによって認識されることが公知であり、MBL欠損血清はナイセリア属を溶解しないことが示されている。
1.様々な補体欠損ヒト血清におけるおよびヒト抗MASP-2抗体で処理されたヒト血清における血清殺菌活性
この実験では、以下の補体欠損ヒト血清および対照ヒト血清を使用した。
図38は、表11に示したヒト血清試料中の様々な時点で回収された髄膜炎菌血清群B-MC58の生菌数のlog cfu/mLを図示する。表12は図38のスチューデントt検定結果を示す。
この実験では、以下の補体欠損マウス血清および対照マウス血清を使用した。
図39は、表13に示したマウス血清試料中の様々な時点で回収された髄膜炎菌血清群B-MC58の生菌数のlog cfu/mLを図示する。図39に示したように、MASP-2-/-マウス血清の髄膜炎菌に対する殺菌活性レベルはWTマウス血清よりも高い。記号「**」はp=0.0058を示す。記号「***」はp=0.001を示す。表14は図39のスチューデントt検定結果を示す。
本実施例は、発作性夜間血色素尿症(PNH)のマウスモデルから得られた血液試料に由来する赤血球の溶解に対するMASP-2欠損の阻害作用を証明する。
発作性夜間血色素尿症(PNH)はマルキアファーヴァ・ミケーリ症候群とも呼ばれ、補体誘導性の血管内溶血性貧血を特徴とする、後天的な、潜在的に命にかかわる血液疾患である。PNHの顕著な特徴は、補体制御因子CD55およびCD59がPNH赤血球上に存在しないために補体第二経路が無秩序に活性化した結果である慢性的な補体媒介性血管内溶血と、その後に起こるヘモグロビン尿症および貧血である。Lindorfer, M.A., et al., Blood 115(11)(2010)、Risitano, A.M, Mini-Reviews in Medicinal Chemistry, 11:528-535(2011)。PNHにおける貧血は血流中の赤血球の破壊が原因である。PNHの症状には、尿中のヘモグロビンの出現による赤色尿、背部痛、疲労、息切れ、および血栓症が含まれる。PNHは自然発症することがあり、これは「一次PNH」と呼ばれるか、または再生不良性貧血などの他の骨髄障害の状況では「二次PNH」と呼ばれる。PNHの治療には、貧血の場合は輸血、血栓症の場合は血液凝固阻止、および補体系を阻害することによって免疫破壊から血球を保護するモノクローナル抗体エクリズマブ(Soliris(登録商標))の使用(Hillmen P. et al., N. Engl. J. Med. 350(6) 552-9(2004))が含まれる。エクリズマブ(Soliris(登録商標))は、補体成分C5を標的とし、C5コンバターゼによるC5切断を遮断し、それによって、C5aの産生およびMACの集合を阻止するヒト化モノクローナル抗体である。エクリズマブによるPNH患者の治療は、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)によって測定されるように血管内溶血を減少させ、そのため、患者の約半分におけるヘモグロビン安定化および輸血非依存性につながった(Hillmen P, et al., Mini-Reviews in Medicinal Chemistry, vol11(6)(2011))。エクリズマブ療法を受けているほぼ全員の患者においてLDHレベルが正常またはほぼ正常になったが(血管内溶血の管理のため)、患者の約1/3しか11gr/dL超のヘモグロビン値に達せず、エクリズマブを服用した残りの患者は中程度から重度の(すなわち、輸血依存性)貧血をほぼ同じ割合で示し続ける(Risitano A.M. et al., Blood 113:4094-100(2009))。Risitano et al., Mini-Reviews in Medicinal Chemistry 11:528-535(2011)に記載のように、エクリズマブを服用しているPNH患者は、PNH赤血球のかなりの部分に結合しているC3断片を含んだ(が、未治療患者は含んでいなかった)ことが証明された。このことから、膜に結合しているC3はPNH赤血球に対してオプソニンとして働き、その結果、特異的C3受容体を介して細網内皮細胞内に閉じ込められ、その後に、血管外溶血が起こるという結論が導かれた。従って、C3断片を介した血管外溶血を発症している患者は赤血球輸血を必要とし続けるので、これらの患者には、エクリズマブの使用の他に治療方針が必要とされる。
PNH動物モデル:
血液試料を、CrryおよびC3が欠損している遺伝子ターゲティングマウス(Crry/C3-/-)ならびにCD55/CD59欠損マウスから得た。これらのマウスには、それぞれの表面補体制御因子がなく、従って、これらのマウスの赤血球はPNHヒト血球と同様に自発的な補体自己溶解を受けやすい。
1日目、マウスRBC(±マンナンコーティング)の調製
含まれる材料:新鮮なマウス血液、BBS/Mg2+/Ca2+(4.4mMバルビツール酸、1.8mMナトリウムバルビトン、145mM NaCl、pH7.4、5mM Mg2+、5mM Ca2+)、塩化クロム、CrCl3・6H2O(BBS/Mg2+/Ca2+に溶解して0.5mg/mL)、およびマンナン、BBS/Mg2+/Ca2+に溶解して100μg/mL。
材料は、BBS/ゼラチン/Mg2+/Ca2+(前記)、試験血清、96ウェル丸底プレートおよび96ウェル平底プレート、ならびに410〜414nmで96ウェルプレートを読み取る分光光度計を含んだ。
CD55/CD59二重欠損マウスおよびCrry/C3二重欠損マウスの血液から新鮮血を得て、前記のプロトコールに詳述したように赤血球を調製した。細胞を分け、細胞の半分をマンナンでコーティングし、もう半分を処理せずにしておき、最終濃度を1×108/mLまで調整した。このうち100μlを溶血アッセイ法において使用した。溶血アッセイ法は前記のように行った。
初期実験において、非コーティングWTマウス赤血球は、いかなるマウス血清中でも溶解されないことが判明した。さらに、マンナンコーティングCrry-/-マウス赤血球はWTマウス血清中ではゆっくりと溶解されるが(37℃で3時間超)、MBLヌル血清中では溶解されないことが判明した(データ示さず)。
マンナンコーティングCrry-/-マウス赤血球は、MBLを含まない高度に希釈したヒト血清ではなく、MBLを含む高度に希釈したヒト血清の中で非常によく溶解される。試験した全ての血清濃度における効率的な溶解は、第二経路がこの溶解に関与せず、必要もされないことを意味している。MBL欠損マウス血清およびヒト血清がマンナンコーティングCrry-/-マウス赤血球を溶解できないことにより、古典経路も、観察された溶解と全く関係がないことが示される。レクチン経路認識分子(すなわち、MBL)が必要とされるので、この溶解はレクチン経路によって媒介される。
Crry/C3二重欠損マウスおよびCD55/CD59二重欠損マウスから新鮮血を得て、マンナンコーティングCrry-/-マウス赤血球を、前記のように溶血アッセイ法において以下の血清の存在下で分析した:MBLヌル;WT;ヒト抗MASP-2抗体で前処理されたNHS;および対照として熱失活NHS。
マンナンコーティングCrry-/-マウス赤血球と共にNHSを、1/640まで(すなわち、1/40、1/80、1/160、1/320、および1/640に)希釈された希釈液、ヒトMBL-/-血清、抗MASP-2mAbで前処理されたNHS、および対照として熱失活NHSの中でインキュベートした。
非コーティングCrry-/-マウス赤血球における、Crry/C3二重欠損マウスおよびCD55/CD59二重欠損マウスから得られた新鮮血を、前記のように溶血アッセイ法において、以下の血清の存在下で分析した:MBL-/-;WT血清;抗MASP-2抗体で前処理されたNHS、および対照として熱失活NHS。
図41は、熱失活(HI)NHS、MBL-/-、抗MASP-2抗体で前処理されたNHS、およびNHS対照由来の血清における、ある範囲の血清濃度のヒト血清による非コーティングマウス赤血球の溶血(溶解WTマウス赤血球から上清へのヘモグロビン放出によって測定した。測光法によって測定した)を図示する。図41に示したように、阻害性MASP-2は非感作WTマウス赤血球の補体媒介性溶解を阻害することが証明された。
本実施例は、実施例29において前述された研究に対する後続の研究について述べ、MASP-2抗体などのMASP-2阻害因子が、放射線曝露の治療および/または急性放射線症候群の治療、寛解、もしくは予防に有効であるという、さらなる証拠を提供する。
研究Aのデザイン:
Swiss Websterマウス(n=50)を電離放射線(8.0Gy)に曝露させた。放射線曝露の18時間前および2時間後に実施され、その後、毎週、実施された抗MASP-2抗体療法(mAbH6 5mg/kg)の死亡率に対する効果を評価した。
図43に示したように、抗MASP-2抗体mAbH6の投与によって、8.0Gyに曝露されたマウスの生存率が増加し、調整された生存率中央値はビヒクル対照を与えたマウスと比較して4日から6日へと増加し、死亡率はビヒクル対照を与えたマウスと比較して12%減少した(ログランク検定、p=0.040)。
Swiss Websterマウス(n=50)を、以下の群において、電離放射線(8.0Gy)に曝露させた:(I:ビヒクル)食塩水対照;(II:低)抗MASP-2抗体mAbH6(5mg/kg)を照射18時間前および照射2時間後に投与;(III;高)mAbH6(10mg/kg)を照射18時間前および照射2時間後に投与;ならびに(IV:高、照射後)mAbH6(10mg/kg)を照射2時間後のみ投与。
照射前および照射後の抗MASP-2抗体の投与は、ビヒクル対照を与えた動物と比較して生存平均を4日から5日に調節した。抗MASP-2抗体処置マウスにおける死亡率はビヒクル対照マウスと比較して6〜12%減少した。さらに、重大で有害な治療効果は観察されなかったことに注目する(データ示さず)。
この研究は、LPS(リポ多糖)誘導性血栓症のマウスモデルにおいてMASP-2-欠損の効果を調べる。
志賀毒素を産生する大腸菌に感染することによって引き起こされる溶血性尿毒症症候群(HUS)は、小児における急性腎不全の第1位の原因である。本実施例では、MASP-2阻害が血管内血栓の形成を阻害または予防するのに有効であるかどうか判定するために、MASP-2-/-(KO)マウスにおいてLPS誘導性血栓症(微小血管凝固)のシュワルツマンモデルを行った。
MASP-2-/-(n=9)およびWT(n=10)マウスをLPS誘導性血栓症(微小血管凝固)のシュワルツマンモデルにおいて分析した。マウスにセラチアLPSを投与し、経時的に血栓形成をモニタリングした。微小血栓およびLPS誘導性微小血管凝固の発生率の比較を行った。
とりわけ、セラチアLPS後に、試験された全てのMASP-2-/-マウス(9/9)が血管内血栓を形成しなかった。対照的に、同時に試験された10匹のWTマウスのうち7匹に微小血栓が検出された(p=0.0031、フィッシャー直接確率法)。図44に示したように、MASP-2-/-マウスおよびWTマウスにおいてLPS感染後の微小血管閉塞の発病までの時間を測定した。60分にわたって測定された血栓形成を伴うWTマウスのパーセントを示し、血栓形成が約15分と早い段階で検出された。WTマウスの80%までが60分で血栓形成を示した。対照的に、図44に示したように、どのMASP-2-/-にも60分で血栓形成がなかった(ログランク:p=0.0005)。
本実施例は、精製志賀毒素2(STX2)+LPSの腹腔内同時注射を用いたHUSマウスモデルにおける抗MASP-2抗体の効果について述べる。
精製志賀毒素2(STX2)+LPSの腹腔内同時注射を用いてHUSマウスモデルを開発した。マウス腎臓の生化学分析およびマイクロアレイ分析から、STX2+LPS曝露は、どちらか一方の作用物質単独の効果とは異なることが明らかになった。これらのマウスの血液分析および血清分析から、好中球増加症、血小板減少症、赤血球溶血、ならびに血清クレアチニンおよび血中尿素窒素の増加が示された。さらに、マウス腎臓の組織学分析および電子顕微鏡から、糸球体フィブリン沈着、赤血球うっ血、微小血栓形成、および糸球体の超微細変化が証明された。このHUSモデルは、C57BL/6マウスにおいて、ヒト疾患を規定する血小板減少症、溶血性貧血、および腎不全を含むヒトHUS病態の全ての臨床症状を誘導することが証明された(J. Immunol. 187(1):172-80(2011))。
体重が18〜20gのC57BL/6雌マウスをCharles River Laboratoriesから購入し、2つの群に分けた(各群に5匹のマウス)。一方のマウス群を、総体積150μl食塩水で希釈した組換え抗MASP-2抗体mAbM11(100μg/マウス;5mg/kg体重の最終濃度に相当する)による腹腔内(i.p.)注射によって前処置した。対照群には、いかなる抗体も含まない食塩水を与えた。抗MASP-2抗体 mAbM11のi.p注射の6時間後に、全てのマウスに、総体積150μlに溶解した、致死未満量(3μg/動物;150μg/kg体重に相当する)の霊菌(Serratia marcescens)LPS(L6136; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)および4.5ng/動物の用量の(225ng/kgに相当する)のSTX2(LD50用量の2倍)の複合i.p.注射を与えた。対照には食塩水注射を使用した。
それぞれのマウス腎臓の1/3を4%パラホルムアルデヒドで24時間、固定し、処理し、パラフィン包埋した。厚さが3マイクロメートルの切片を切断し、後でHE染色液で染色するために帯電スライドの上に置いた。
腎臓の中央部分を約1〜2mm3のブロックに切断し、1×PBSに溶解した2.5%グルタルアルデヒドで4℃において一晩固定した。その後、レスター大学電子顕微鏡施設(University of Leicester Electron Microscopy Facility)が固定組織を処理した。
腎臓の残りの1/3を約1〜2mm3のブロックに切断し、液体窒素で瞬間凍結し、クリオスタット切片用およびmRNA分析用に-80℃に保った。
図45は、STX/LPSによって誘導されるモデルにおける、食塩水処置対照マウス(n=5)および抗MASP-2抗体処置マウス(n=5)の経時的(時間)な生存率パーセントを図示する。とりわけ、図45に示したように、全ての対照マウスが42時間までに死亡した。きわだって対照的に、100%の抗MASP-2抗体処置マウスが実験の時間経過全体を通じて生存した。図45に示した結果と一致して、死亡した、または重篤な疾患の徴候により間引かなければならなかった未処置マウスの全てに重大な糸球体損傷があったのに対して、全ての抗MASP-2処置マウスの糸球体は正常にみえたことが観察された(データ示さず)。これらの結果から、血栓性微小血管症(TMA)、例えば、溶血性尿毒症症候群(HUS)、非典型HUS(aHUS)、もしくは血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)に罹患している対象、またはTMA、例えば、HUS、aHUS、もしくはTTPを発症するリスクを有する対象を治療するために、抗MASP-2抗体などのMASP-2阻害因子が使用できることが証明される。
本実施例は、血栓症のマウスFITC-デキストラン/光誘導性内皮細胞損傷モデルにおけるMASP-2欠損およびMASP-2阻害の効果について述べる。
生体顕微鏡観察
Frommhold et al., BMC Immunology 12:56-68, 2011に記載のように生体顕微鏡観察用にマウスを調製した。簡単に述べると、ケタミン(125mg/kg体重, Ketanest, Pfitzer GmbH, Karlsruhe, Germany)およびキシラジン(12.5mg/kg体重; Rompun, Bayer, Leverkusen, Germany)を腹腔内(i.p.)注射することによってマウスを麻酔し、体温を37℃に維持するためにヒーティングパッドの上に置いた。生体顕微鏡観察は、食塩水液浸系対物レンズ(saline immersion objective)(SW40/0.75開口数, Zeiss, Jena, Germany)を備えた正立顕微鏡(Leica, Wetzlar, Germany)上で行った。呼吸しやすくするために、PE90チューブ(Becton Dickson and Company, Sparks, MD, USA)を用いてマウスに挿管した。血液サンプリングおよび全身モノクローナル抗体(mAb)投与のために、PE10チューブ(Becton Dickson and Company, Sparks, MD, USA)を用いて左頚動脈にカニューレ処置した。
Sperandio et al., Blood, 97:3812-3819, 2001に記載のように、生体顕微鏡観察用に精巣挙筋を外科的に調製した。簡単に述べると、陰嚢を切り開き、精巣挙筋を固定化した。縦方向に切開し、カバーガラス上で筋肉を広げた後に、精巣上体および精巣を動かし、ピンで側面に留めて、顕微鏡で精巣挙筋の微小循環が全て見えるようにした。Panasonic S-VHSレコーダーに搭載されているCCDカメラ(CF8/1; Kappa, Gleichen, Germany)によって精巣挙筋の細静脈を記録した。Frommhold et al., BMC Immunology 12:56-68, 20112011により以前に述べられたように、温度管理された(35℃重炭酸緩衝食塩水)を精巣挙筋に灌流させた。
精巣挙筋細静脈および小動脈の内皮の制御された光線量依存的な血管損傷を、光毒性(FITC)-デキストラン(カタログ番号FD150S, Sigma Aldrich, Poole, U.K.)の光励起によって誘導した。この処置は局所的な血栓症を引き起こす。光毒性試薬として、FITC-デキストランの10%w/v溶液60μLを、左頚動脈アクセスを通して注射し、10分間、循環血液全体にわたって均質に広げた。十分に灌流された細静脈を選択した後に、再現性のある管理されたやり方で血栓症を刺激するために、FITC-デキストラン蛍光と内皮表面に対する低〜中程度の光毒性を誘導するように低〜中強度(800〜1500)のハロゲン光を関心対象の血管に集中させた。ハロゲンランプ(12V, 100W, Zeiss, Oberkochen, Germany)を用いて、FITC-デキストランの励起に必要な光毒性光強度を発生させた。蛍光色素の光誘導性励起に起因する光毒性は、ある閾値の光強度および/または照射期間を必要とし、内皮表面を直接加熱することによって、またはSteinbauer et al., Langenbecks Arch Surg 385:290-298, 2000に記載のように反応性酸素ラジカルを発生させることによって引き起こされる。
盲検試験デザインを用いて、生体顕微鏡観察の精巣挙筋モデルにおける血栓症の光毒性誘導の16時間前に、9週齢の雄C57BL/6 WT同腹子マウスに、MASP-2機能活性阻害因子である組換えモノクローナルヒトMASP-2抗体(mAbH6)(10mg/kg体重の最終濃度で与えた)または等量のアイソタイプ対照抗体(MASP-2阻害活性なし)をi.p.注射した。血栓症誘導の1時間前にmAbH6または対照抗体をもう1回投与した。このモデルではMASP-2ノックアウト(KO)マウスも評価した。
図46は、FITC/デキストランUVモデルにおいて、FITC/デキストラン注射の16時間前および1時間前に投与されるアイソタイプ対照またはヒトMASP-2抗体mAbH6(10mg/kg)で処置した後の、損傷誘導後の時間の関数としての微小血管閉塞を有するマウスのパーセントを図示する。図46に示したように、アイソタイプ対照抗体を与えた野生型マウスの85%が30分またはそれ未満で閉塞したのに対して、ヒトMASP-2抗体(mAbH6)で前処置した野生型マウスの19%しか同じ期間内に閉塞しなかった。ヒトMASP-2抗体処置群において最終的に閉塞したマウスにおいて閉塞までの時間は延びた。さらに、MASP-2 mAbH6処置マウスのうち3匹は60分間の観察期間内に全く閉塞しなかった(すなわち、血栓性閉塞から保護された)ことが留意される。
本実施例の結果から、レクチン経路を遮断するMASP-2阻害物質(例えば、MASP-2機能を遮断する抗体)は、TMAマウスモデルにおける多数の微小血管障害のうちの顕著な特徴である微小血管凝固および血栓症を阻害することがさらに証明される。従って、HUS、aHUS、TTP、または他の微小血管障害に罹患している患者においてMASP-2阻害物質、例えば、MASP-2阻害抗体の投与が有効な療法であり、微小血管凝固および血栓症を防止すると期待される。
本実施例は、血小板が豊富なヒト血漿中で、ヒトMASP-2阻害抗体(mAbH6)が血小板機能に影響を及ぼさないことを証明した試験について述べる。
溶液中での凝集パーセントを5分間にわたって測定した。結果を以下の表13に示した。
本実施例は、TMAマウスモデルにおける血栓形成および血管閉塞に対するMASP-2阻害の効果について述べる。
血栓形成の開始
図49は、漸増量のヒトMASP-2阻害抗体(2mg/kg、10mg/kg、もしくは20mg/kgのmAbH6)またはアイソタイプ対照抗体で処置したFITC-デキストラン誘導性血栓性微小血管症マウスにおける時間の関数としての血栓を有するマウスのパーセントを示したカプラン・マイヤープロットである。図49に示したように、血栓形成の開始は対照処置マウスと比べてmAbH6処置マウスにおいて用量依存的に遅延した。
事象=観察された発現までの時間
中央値(分)およびその95%CIはカプラン・マイヤー推定法に基づいた。
NE=推定不能
*p値はダネット・フ(Dunnett-Hsu)多重比較によって調整した。
図51は、漸増量のヒトMASP-2阻害抗体(2mg/kg、10mg/kg、もしくは20mg/kgのmAbH6)またはアイソタイプ対照抗体で処置したFITC-デキストラン誘導性血栓性微小血管症マウスにおける時間の関数としての微小血管閉塞を有するマウスのパーセントを示したカプラン・マイヤープロットである。図51に示したように、mAbH6処置群における完全微小血管閉塞は対照マウスと比較して遅延した。
事象=観察された閉塞までの時間
中央値(分)およびその95%CIはカプラン・マイヤー推定法に基づいた。
NE=推定不能
*p値はダネット・フ多重比較によって調整した。
表18にまとめたように、血栓形成の開始は対照処置マウスと比べてmAbH6処置マウスにおいて用量依存的に遅延した(発現までの時間の中央値10.4〜17.7分対6.8分)。完全閉塞までの時間の中央値は、対照処置群と比べて全mAbH6処置群において有意に遅延した(表18)。
本実施例は、免疫系の古典的(C1q依存的)経路および第二経路成分を完全な状態のままにしておきながら、MASP-2に結合し、かつレクチンを介した補体活性化を阻害する完全ヒトscFv抗体をファージディスプレイを用いて特定することについて述べる。
ファージディスプレイライブラリーをスクリーニングすることによって完全ヒト高親和性MASP-2抗体を特定した。抗体の可変軽鎖断片および可変重鎖断片をscFv形式および完全長IgG形式で単離した。ヒトMASP-2抗体は、免疫系の古典的(C1q依存的)経路成分を完全な状態のままにしておきながら、レクチン経路を介した補体第二経路活性化に関連する細胞損傷を阻害するのに有用である。一部の態様において、このMASP-2阻害抗体は、以下の特徴を有する:(a)ヒトMASP-2に対する親和性が高い(例えば、10nMまたはそれ未満のKD)、および(b)30nMまたはそれ未満のIC50で90%ヒト血清中でMASP-2依存性補体活性を阻害すること。
完全長触媒不活性MASP-2の発現:
ヒトMASP-2ポリペプチドをコードするヒトMASP-2完全長cDNA配列(SEQ ID NO:4)とリーダー配列(SEQ ID NO:5)を哺乳動物発現ベクターpCI-Neo(Promega)にサブクローニングした。哺乳動物発現ベクターpCI-Neo(Promega)は、CMVエンハンサー/プロモーター領域の制御下で真核生物において発現を駆動する(Kaufman R.J. et al., Nucleic Acids Research 19:4485-90, 1991; Kaufman, Methods in Enzymology, 185:537-66 (1991)に記載)。
ヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列のファージディスプレイライブラリーを抗原パニングに供し、その後に、ヒトMASP-2タンパク質に対する高親和性scFv抗体を特定するために自動抗体スクリーニングおよび選択を行った。HIS-タグ化MASP-2Aまたはビオチン-タグ化MASP-2Aに対するscFvファージライブラリーパニングを3回行った。3回目のパニングを最初にMBLで溶出させ、次いでTEA(アルカリ性)で溶出させた。標的MASP-2Aに対するscFv断片を示すファージの特異的濃縮をモニタリングするために、固定化MASP-2Aに対するポリクローナルファージELISAを行った。3回目のパニングからのscFv遺伝子をpHOG発現ベクターにクローニングし、MASP-2Aに対する特異的クローンを探すためにスモールスケールフィルタースクリーニングに供した。
レクチン経路C3コンバターゼ形成の阻害を測定する機能アッセイ法を用いて、MASP-2 scFv候補クローンの「ブロッキング活性」を評価した。レクチン経路C3コンバターゼを構成する2つのタンパク質成分(C4b、C2a)を生成するためにはMASP-2セリンプロテアーゼ活性が必要とされる。従って、MASP-2機能活性を阻害するMASP-2 scFv(すなわち、ブロッキングMASP-2 scFv)はレクチン経路C3コンバターゼの新規形成を阻害する。C3は、その構造の一部として珍しい高反応性のチオエステル基を含有する。このアッセイ法においてC3コンバターゼによりC3が切断されると、C3b上にあるチオエステル基は、エステル結合またはアミド結合を介して、プラスチックウェルの底に固定化された高分子上にあるヒドロキシル基またはアミノ基と共有結合を形成することができ、従って、ELISAアッセイ法におけるC3b検出が容易になる。
前記のように特定した45個の候補クローンを発現させ、精製し、同じストック濃度まで希釈し、確実に全クローンに等量の緩衝液があるように、Ca++およびMg++を含有するGVB緩衝液(4.0mMバルビタール、141mM NaCl、1.0mM MgCl2、2.0mM CaCl2、0.1%ゼラチン、pH7.4)で再希釈した。scFvクローンをそれぞれ、2μg/mLの濃度で3つ組で試験した。陽性対照はOMS100 Fab2であり、0.4μg/mLで試験した。scFv/IgGクローンの存在下および非存在下でC3c形成をモニタリングした。
カットオフ基準に基づいて、合計13個のクローンがMASP-2活性を妨げることが見出された。>50%の経路抑制を生じた13個全てのクローンを選択および配列決定して、10個のユニークなクローンを得た。10個全てのクローンが同じ軽鎖サブクラス、λ3を有することが見出されたが、3つの異なる重鎖サブクラス:VH2、VH3、およびVH6を有することが見出された。機能アッセイ法において、10個の候補scFvクローンから5個が、0.5%ヒト血清を用いて、25nM目標基準よりも少ないIC50nM値を示した。
方法:
膜侵襲複合体(MAC)沈着に及ぼすOMS646の影響を、レクチン経路、古典経路、および第二経路の経路特異的条件を用いて分析した。この目的のために、Wieslab Comp300補体スクリーニングキット(Wieslab, Lund, Sweden)を製造業者の説明書に従って使用した。
図53Aは、レクチン経路特異的アッセイ条件下、抗MASP-2抗体(OMS646)の存在下または非存在下でのMAC沈着レベルを図示する。図53Bは、古典経路特異的アッセイ条件下、抗MASP-2抗体(OMS646)の存在下または非存在下でのMAC沈着レベルを図示する。図53Cは、第二経路特異的アッセイ条件下、抗MASP-2抗体(OMS646)の存在下または非存在下でのMAC沈着レベルを図示する。
マウスにおける28日間の単回投与PK/PD試験においてOMS646の薬物動態学(PK)および薬物動力学(PD)を評価した。この試験では、5mg/kgおよび15mg/kgの用量レベルの皮下(SC)投与OMS646ならびに5mg/kgの用量レベルの静脈内(IV)投与OMS646を試験した。
本実施例により、MASP-2阻害抗体(OMS646)は、非典型溶血性尿毒症症候群(aHUS)の急性期および寛解期中に得たこの疾患を有する患者由来の血清に曝露された後の活性化ヒト微小血管内皮細胞(HMEC-1)表面におけるaHUS血清誘導性補体C5b-9沈着を阻害することが証明される。
患者:この試験のために、国際HUS/TTP登録簿(International Registry of HUS/TTP)に収められ、Mario Negri研究所、移植・希少疾患免疫学・遺伝学研究室(Laboratory of Immunology and Genetics of Transplantation and Rare Diseases of the Mario Negri Institute)によって遺伝子型が同定されたaHUS患者の中から、疾患の急性期および寛解中に試験する4人のaHUS患者を選択した。1人のaHUS患者はヘテロ接合性p.R1210C補体因子H(CFH)変異を有しており、1人のaHUS患者は抗CFH自己抗体を有していたが、他の2人のaHUS患者にはCFHの変異も抗体も見出されなかった。
4人のaHUS患者由来の血清を用いた補体沈着分析の結果を以下の表25Aにまとめた。4人の健常対象由来の血清を用いた結果を以下の表25Bにまとめた。
急性期:
sCR1(150μg/ml):C5b-9沈着における91%減少
OMS646(100μg/ml):C5b-9沈着における40%減少
寛解期:
sCR1(150μg/ml):C5b-9沈着における91%減少
OMS646(100μg/ml):C5b-9沈着における54%減少
本実施例により、MASP-2阻害抗体(OMS646)は、aHUSの(1)急性期中および(2)寛解期中に得たaHUS患者血清に曝露された後の活性化ヒト微小血管内皮細胞(HMEC-1)表面におけるaHUS血清誘導性血小板凝集および血栓形成を阻害することが証明される。
患者:3人のaHUS患者(実施例41の表23、表24、表25A、および表25Bに記載の患者番号1、番号2、および番号4)(1人の患者はヘテロ接合性p.R1210C CFH変異を有していたが、他の2人の患者には変異も抗CFH抗体も見出されなかった)を疾患の急性期および寛解中に試験した。この試験のために、国際HUS/TTP登録簿に収められ、Mario Negri研究所、移植・希少疾患免疫学・遺伝学研究室によって遺伝子型が同定された患者の中から患者を選択した。灌流実験の血液ドナーとして5人の健常対象も選択した。
3人のaHUS患者由来の血清を用いた血栓形成実験の結果を以下の表26Aにまとめた。5人の健常対象由来の血清を用いた結果を表26Bにまとめた。
急性期:
sCR1(150μg/ml):60%減少
OMS646(100μg/ml):57%減少
OMS646(20μg/ml):45%減少
寛解期:
sCR1(150μg/ml):85%減少
OMS646(100μg/ml):79%減少
OMS646(20μg/ml):89%減少
本実施例における結果から、MASP-2阻害抗体、例えば、(実施例40に記載のように作製された)OMS646はHMEC-1細胞におけるaHUS血清誘導性血栓形成に対して強力な阻害効果を有することが証明される。驚いたことに、血栓形成に対するOMS646の阻害効果は、(実施例41に記載のように)HMEC-1において誘導されたC5b-9沈着に対する効果よりも大きかった。100μg/mlおよび20μg/ml用量のOMS646を、寛解時に収集したaHUS患者血清に添加することで血栓形成がほぼ完全に阻害されたことも驚くべきことである。別の驚くべき発見は、OMS646は急性期および寛解中いずれも、広範囲のかつほぼ完璧な補体系阻害因子である陽性対照sCR1と同じくらいの効果があったことが観察されたことである(Weisman H. et al., Science 249:146-151, 1990; Lazar H. et al., Circulation 100:1438-1442, 1999)。
結論として、MASP-2阻害抗体、例えば、OMS646の観察された抗血栓効果は、(実施例41に記載し、図56に示したように)この実験系において観察されたC5b-9沈着に対するOMS646の阻害効果に基づいて予想されたものよりもかなり大きいように見える。例えば、「C5a/C5aR interaction mediates complement activation and thrombosis on endothelial cells in atypical hemolytic uremic syndrome (aHUS)」という表題のGastoldi et al., Immunobiology 217:1129-1222 Abstract 48 (2012)に記載のように、C5b-9沈着を阻害(60%減少)するC5抗体の添加によって、HMEC-1における血栓形成が同等の程度(60%減少)まで制限されたことが決定された。対照的に、MASP-2阻害抗体(100μg/mLのOMS646)は(急性期=40%減少;寛解期=54%減少)の平均値でC5b-9沈着を阻害し、これよりもかなり高いパーセント(急性期=57%減少;寛解期=79%減少)で血栓形成を阻害した。比較すると、OMS646は陽性対照の補体阻害因子(150μg/mLのsCR1、C5b-9沈着の急性期阻害=91%減少;寛解期=91%減少)よりも低いパーセントで補体沈着を阻害したが、血栓形成阻害の点では陽性対照であるsCR1 (150μg/mLのsCR1、急性期=60%減少;寛解期=85%減少)と同じぐらい有効であった。これらの結果から、MASP-2阻害抗体(例えば、OMS646)は、急性期と寛解期の両期中のaHUS対象から得た血清中での血栓形成の阻害において驚くべき効果があることが証明される。
本実施例により、ヒトMASP-2阻害抗体(OMS646)は、真皮由来初代ヒト微小血管内皮細胞(MVEC)において、TMA患者血漿を介したアポトーシス誘導を阻害できることが証明される。
TMAの病態生理は、様々な要因によって誘導される内皮細胞損傷と、それに続く、血小板血栓および/またはフィブリン血栓による細い血管(例えば、細い小動脈および毛細血管)の閉塞を伴うことが公知である(Hirt-Minkowsk P. et al., Nephron Clin Pract 114:c219-c235, 2010; Goldberg R.J. et al., Am J Kidney Dis 56(6):1168-1174, 2010)。MVECは、TMA関連障害を有する患者由来の血漿にインビトロで曝露された場合にアポトーシス損傷を受けることが示されている(Stefanescu et al., Blood Vol 112 (2):340-349, 2008; Mitra D. et al., Blood 89:1224-1234, 1997を参照されたい)。TMAに関連するアポトーシス損傷は、このような患者の組織生検材料(皮膚、骨、骨髄、脾臓、腎臓、回腸)から得たMVECにおいて実証されている。MVECに対するアポトーシス傷害はMVEC中の膜結合型補体調節タンパク質のレベルを低下させることも示されている(例えば、Mold and Morris, Immunology 102:359-364, 2001; Christmas et al., Immunology 119:522, 2006を参照されたい)。
本明細書に参照により組み入れられる、Stefanescu R. et al., Blood Vol 112 (2):340-349, 2008に記載のように、真皮由来初代ヒトMVECにおけるTMA患者血漿を介したアポトーシス誘導を遮断するMASP-2阻害抗体(OMS646)の有効性を分析するためにインビトロアッセイ法を行った。このアッセイ法において使用した血漿試料は、健常対照対象のコレクションから、および急性期または回復期の血栓性微小血管症を有する個体から得た。TMA患者における細小血管症の存在は、末梢血スミア上に分裂赤血球を検出することによって評価した。さらに、Stefanescu R. et al., Blood Vol 112 (2):340-349, 2008に記載のようにTTPを評価した。
Stefanescuらに記載のように、真皮由来初代ヒトMVECはScienCell Research Labs (San Diego, CA)から購入した。MVECは継代数5および6回までCD34を発現した(Blood 89:1224-1234, 1997)。MVECは、内皮細胞増殖補助剤、ペニシリン、ストレプトマイシンおよび15%胎仔ウシ血清を含有するECM1001培地(ScienCell Research Labs)に溶解した0.1%ゼラチン水溶液でコーティングしたポリスチレンフラスコ中で維持した。全MVECを継代数2〜6回において使用した。継代培養は0.25%トリプシン-EDTAへの5〜10分間の曝露を伴った。
TTP/HUS血漿誘導性アポトーシスに対して感受性であることが公知である代表的な真皮由来初代ヒトMVECをリン酸緩衝食塩水(PBS)で洗浄し、0.1%ゼラチン水溶液でコーティングした12ウェルプレートのチャンバーに0.15×106生細胞/mLでプレートした。プレートされたMVEC細胞を完全培地中で24時間、飢餓状態にし、次いで、MASP-2 mAb OMS646(150μg/mL)の存在下または非存在下で様々な濃度(2%〜20%v/v)のTMA患者血漿試料または健常ドナー血漿に18時間、曝露し、次いで、細胞をトリプシン処理によって収集した。各TMA患者試料を2つ組で分析した。血漿を介したアポトーシスの程度を、ヨウ化プロピジウム(PI)染色を用いて評価した。>5×103の細胞をサイトフルオログラフ(cytofluorograph)で分析し、A0ピークをコンピュータソフトウェア(MCycle Av, Phoenix Flow Systems, San Diego, CA)によって明らかにした。酵素結合免疫測定法(ELISA)ベースの細胞溶解産物由来細胞質ヒストン結合DNA断片の定量も製造業者(Roche Diagnostics, Mannheim, Germany)の指示に従って行った。
MASP-2 mAb(OMS646)の存在下でのTMA患者血漿誘導性MVECアポトーシスアッセイ法の結果を以下の表27に示した。
表27において使用した略語:
「APLA」=劇症型抗リン脂質抗体症候群(CAPS)に関連する抗リン脂質抗体
「SLE」=全身性エリテマトーデス
「CVA」=脳血管発作(脳卒中)
排他的な権利または特権を主張する本発明の態様は、添付の特許請求の範囲で規定される。
Claims (59)
- 血栓性微小血管症(TMA)に罹患している対象または該TMAを発症するリスクを有する対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法であって、MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害物質を含む組成物を該対象に投与する工程を含み、該TMAが、(i)癌に続発するTMA;(ii)化学療法に続発するTMA;または(iii)移植に続発するTMAのうちの少なくとも1つである、方法。
- 前記対象が、癌に続発するTMAに罹患しているかまたは該TMAを発症するリスクを有し、かつ前記MASP-2阻害物質が、TMAを発症するリスクを低下させるのにまたはTMAの重篤度を減少させるのに有効な量で該対象に全身投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記対象が、化学療法に続発するTMAに罹患しているかまたは該TMAを発症するリスクを有し、かつ前記MASP-2阻害物質が、TMAを発症するリスクを低下させるのにまたはTMAの重篤度を減少させるのに有効な量で化学療法の前、最中、または後に該対象に全身投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記対象が、移植に続発するTMAに罹患しているかまたは該TMAを発症するリスクを有し、かつ前記MASP-2阻害物質が、TMAを発症するリスクを低下させるのにまたはTMAの重篤度を減少させるのに有効な量で移植処置の前、最中、または後に該対象に全身投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害物質が抗MASP-2抗体またはその断片である、請求項1に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害物質が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合する抗MASP-2モノクローナル抗体またはその断片である、請求項1に記載の方法。
- 前記対象が、補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子による治療を以前に受けたことがあるかまたは現在受けている、請求項1に記載の方法。
- 補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記終末補体阻害因子がヒト化抗C5抗体またはその抗原結合断片である、請求項8に記載の方法。
- 前記終末補体阻害因子がエクリズマブである、請求項8に記載の方法。
- 前記抗体またはその断片が、組換え抗体、低下したエフェクター機能を有する抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群より選択される、請求項8に記載の方法。
- 前記組成物が、皮下に、筋肉内に、動脈内に、静脈内に、または吸入剤として投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記移植が同種造血幹細胞移植である、請求項1に記載の方法。
- MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害物質を含む組成物を、アップショー・シュールマン症候群(USS)に罹患している対象または該USSを発症するリスクを有する対象に投与する工程を含む、該対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法。
- USSを発症するリスクを有する対象を治療する工程を含み、TTPに関連する1つまたは複数の臨床症状を寛解させるのにまたは予防するのに有効な量のMASP-2阻害物質を、該臨床症状を寛解させるのにまたは予防するのに有効な期間にわたって投与する工程を含む、請求項14に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害物質が抗MASP-2抗体またはその断片である、請求項14または15に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害物質が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合する抗MASP-2モノクローナル抗体またはその断片である、請求項16に記載の方法。
- 前記対象が、補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子による治療を以前に受けたことがあるかまたは現在受けている、請求項14に記載の方法。
- 補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項14に記載の方法。
- 前記終末補体阻害因子がヒト化抗C5抗体またはその抗原結合断片である、請求項19に記載の方法。
- 前記終末補体阻害因子がエクリズマブである、請求項19に記載の方法。
- 前記対象を定期的にモニタリングする工程、および、貧血、血小板減少症、またはクレアチニン増加が存在するとの判定に基づいて前記MASP-2阻害物質を投与する工程をさらに含む、請求項15に記載の方法。
- 前記対象を定期的にモニタリングする工程、および、TTP臨床症状の誘発に関連することが公知である事象の存在に基づいて前記MASP-2阻害物質を投与する工程をさらに含む、請求項15に記載の方法。
- MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害物質を含む組成物を、デゴス病に罹患している対象に投与する工程を含む、該対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法。
- 前記MASP-2阻害物質が抗MASP-2抗体またはその断片である、請求項24に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害物質が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合する抗MASP-2モノクローナル抗体またはその断片である、請求項25に記載の方法。
- 前記対象が、補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子による治療を以前に受けたことがあるかまたは現在受けている、請求項24に記載の方法。
- 補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項24に記載の方法。
- 前記終末補体阻害因子がヒト化抗C5抗体またはその抗原結合断片である、請求項28に記載の方法。
- 前記終末補体阻害因子がエクリズマブである、請求項28に記載の方法。
- 前記抗体またはその断片が、組換え抗体、低下したエフェクター機能を有する抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群より選択される、請求項25に記載の方法。
- 前記組成物が、皮下に、筋肉内に、動脈内に、静脈内に、または吸入剤として投与される、請求項24に記載の方法。
- MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害物質を含む組成物を、劇症型抗リン脂質抗体症候群(CAPS)に罹患している対象に投与する工程を含む、該対象におけるMASP-2依存性補体活性化を阻害する方法。
- 前記MASP-2阻害物質が抗MASP-2抗体またはその断片である、請求項33に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害物質が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合する抗MASP-2モノクローナル抗体またはその断片である、請求項34に記載の方法。
- 前記対象が、補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子による治療を以前に受けたことがあるかまたは現在受けている、請求項34に記載の方法。
- 補体タンパク質C5の切断を阻害する終末補体阻害因子を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項34に記載の方法。
- 前記終末補体阻害因子がヒト化抗C5抗体またはその抗原結合断片である、請求項37に記載の方法。
- 前記終末補体阻害因子がエクリズマブである、請求項37に記載の方法。
- 前記抗体またはその断片が、組換え抗体、低下したエフェクター機能を有する抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群より選択される、請求項34に記載の方法。
- 前記組成物が、皮下に、筋肉内に、動脈内に、静脈内に、または吸入剤として投与される、請求項33に記載の方法。
- MASP-2依存性補体活性化を阻害するのに有効な量のMASP-2阻害抗体またはその抗原結合断片を、非典型溶血性尿毒症症候群(aHUS)に罹患している対象に投与する工程を含む、該対象における血栓形成を阻害する方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、SEQ ID NO:6の一部に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片である、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、10nMまたはそれ未満のKDでヒトMASP-2を結合させる、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、MASP-2のCCP1ドメイン中のエピトープを結合させる、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、インビトロアッセイ法において1%ヒト血清中でのC3b沈着を10nMまたはそれ未満のIC50で阻害する、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、90%ヒト血清中でのC3b沈着を30nMまたはそれ未満のIC50で阻害する、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、Fv、Fab、Fab'、F(ab)2、およびF(ab')2からなる群より選択される抗体断片である、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が単鎖分子である、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、IgG1分子、IgG2分子、およびIgG4分子からなる群より選択される、請求項42に記載の方法。
- 前記IgG4分子がS228P変異を含む、請求項50に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が古典経路を実質的に阻害しない、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、aHUSに罹患している対象由来の血清中での血栓形成を未処理血清と比較して少なくとも40%阻害する、請求項42に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体が、aHUSに罹患している対象由来の血清中での血栓形成を、同対象由来の血清中でのC5b-9沈着に対する該抗体の阻害効果よりも少なくとも20%高いレベルで阻害する、請求項42に記載の方法。
- 前記対象が、aHUSの急性期にある、請求項42に記載の方法。
- 前記対象が、aHUSの寛解期にある、請求項42に記載の方法。
- MASP-2阻害モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、
(a)(i)SEQ ID NO:67の31〜35のアミノ酸配列を含む重鎖CDR-H1;および(ii)SEQ ID NO:67の50〜65のアミノ酸配列を含む重鎖CDR-H2;および(iii)SEQ ID NO:67の95〜102のアミノ酸配列を含む重鎖CDR-H3を含む、重鎖可変領域、ならびに
(b)(i)SEQ ID NO:70の24〜34のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR-L1;および(ii)SEQ ID NO:70の50〜56のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR-L2;および(iii)SEQ ID NO:70の89〜97のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR-L3を含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項43に記載の方法。 - 前記MASP-2阻害モノクローナル抗体が、SEQ ID NO:67に示した重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:70に示した軽鎖可変領域を含む、請求項43に記載の方法。
- 前記MASP-2阻害抗体またはその抗原結合断片が、SEQ ID NO:67に示した重鎖可変領域とSEQ ID NO:70に示した軽鎖可変領域とを含む参照抗体によって認識されるエピトープの少なくとも一部を特異的に認識する、請求項43に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361892283P | 2013-10-17 | 2013-10-17 | |
US61/892,283 | 2013-10-17 | ||
US201462020845P | 2014-07-03 | 2014-07-03 | |
US62/020,845 | 2014-07-03 | ||
JP2019201984A JP6953498B2 (ja) | 2013-10-17 | 2019-11-07 | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019201984A Division JP6953498B2 (ja) | 2013-10-17 | 2019-11-07 | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022000467A true JP2022000467A (ja) | 2022-01-04 |
JP7397037B2 JP7397037B2 (ja) | 2023-12-12 |
Family
ID=52828769
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016523966A Pending JP2016539919A (ja) | 2013-10-17 | 2014-10-17 | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 |
JP2019201984A Active JP6953498B2 (ja) | 2013-10-17 | 2019-11-07 | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 |
JP2021158585A Active JP7397037B2 (ja) | 2013-10-17 | 2021-09-29 | Masp-2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016523966A Pending JP2016539919A (ja) | 2013-10-17 | 2014-10-17 | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 |
JP2019201984A Active JP6953498B2 (ja) | 2013-10-17 | 2019-11-07 | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20150166675A1 (ja) |
EP (2) | EP3750919A1 (ja) |
JP (3) | JP2016539919A (ja) |
KR (2) | KR20220053057A (ja) |
CN (2) | CN111588855A (ja) |
AU (2) | AU2014337047B2 (ja) |
BR (1) | BR112016008409B1 (ja) |
CA (1) | CA2926385A1 (ja) |
CL (2) | CL2016000908A1 (ja) |
CY (1) | CY1123776T1 (ja) |
DK (1) | DK3057993T3 (ja) |
ES (1) | ES2829913T3 (ja) |
HR (1) | HRP20201733T1 (ja) |
HU (1) | HUE051746T2 (ja) |
IL (2) | IL283373B1 (ja) |
LT (1) | LT3057993T (ja) |
MX (2) | MX2016005017A (ja) |
NZ (2) | NZ757986A (ja) |
PL (1) | PL3057993T3 (ja) |
PT (1) | PT3057993T (ja) |
RS (1) | RS61351B1 (ja) |
RU (2) | RU2020111211A (ja) |
SI (1) | SI3057993T1 (ja) |
WO (1) | WO2015058143A1 (ja) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8840893B2 (en) | 2004-06-10 | 2014-09-23 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation |
US9644035B2 (en) | 2011-04-08 | 2017-05-09 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation |
DK2694108T3 (en) | 2011-04-08 | 2018-08-20 | Univ Leicester | METHODS OF TREATING DISEASES ASSOCIATED WITH MASP-2 DEPENDENT COMPLEMENT ACTIVATION |
MX2016005017A (es) | 2013-10-17 | 2016-11-07 | Omeros Corp | Metodos para el tratamiento de condiciones asociadas con la activacion del complemento dependiente de masp-2. |
US20170137537A1 (en) * | 2015-11-09 | 2017-05-18 | Omeros Corporation | Methods for Treating Conditions Associated with MASP-2 Dependent Complement Activation |
IL294411A (en) | 2016-01-05 | 2022-08-01 | Omeros Corp | masp-2 suppressors for use in suppressing fibrosis |
CA3018774C (en) * | 2016-03-31 | 2023-02-28 | Omeros Corporation | Methods for inhibiting angiogenesis in a subject in need thereof |
JOP20170170B1 (ar) * | 2016-08-31 | 2022-09-15 | Omeros Corp | صيغ لجسم مضاد تثبيطية لـ masp-2 بتركيز عالي ولزوجة منخفضة وأطقم، وطرق |
JOP20190068A1 (ar) * | 2016-10-13 | 2019-04-01 | Omeros Corp | طرق لتقليل البول البروتيني في خاضع بشري يعاني من الاعتلال الكلوي a الناتج عن الجلوبيولين المناعي |
TWI818919B (zh) | 2017-08-15 | 2023-10-21 | 美商歐米諾斯公司 | 用於治療和/ 或預防與造血幹細胞移植有關的移植物抗宿主病和/ 或瀰漫性肺泡出血和/ 或靜脈閉塞性病的方法 |
MA49960A (fr) * | 2017-08-25 | 2021-06-02 | Omeros Corp | Formulations d'anticorps inhibiteurs de masp-2 hautement concentrées à faible viscosité, kits et méthodes de traitement de sujets souffrant d'un syndrome hémolytique atypique |
CN108171772B (zh) * | 2017-12-28 | 2021-11-19 | 中国地质调查局西安地质调查中心 | 利用mapGIS、CJKCOOR_Ver和DELF3D提取河流边界的方法 |
SG11202012627UA (en) * | 2018-06-22 | 2021-01-28 | Omeros Corp | Compositions and methods of inhibiting masp-2 for the treatment of various thrombotic diseases and disorders |
WO2020121282A1 (en) * | 2018-12-13 | 2020-06-18 | Argenx Bvba | Antibodies to human complement factor c2b and methods of use |
CN111134250A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-05-12 | 海南大学 | 一种草地贪夜蛾幼虫食用人工饲料的配方和制作方法 |
MX2022006750A (es) | 2019-12-04 | 2022-06-14 | Omeros Corp | Inhibidores de masp-2 y metodos de uso. |
WO2021113686A1 (en) | 2019-12-04 | 2021-06-10 | Omeros Corporation | Masp-2 inhibitors and methods of use |
WO2021113698A1 (en) | 2019-12-04 | 2021-06-10 | Omeros Corporation | Masp-2 inhibitors and methods of use |
CN115052862A (zh) | 2019-12-04 | 2022-09-13 | 奥默罗斯公司 | Masp-2抑制剂和使用方法 |
CN115215937B (zh) * | 2021-04-15 | 2023-05-26 | 上海麦济生物技术有限公司 | 抗人masp-2抗体及其制备方法和应用 |
CN115300608B (zh) * | 2021-05-06 | 2023-06-02 | 四川大学 | 一种利用甘露糖结合凝集素阻断新冠病毒感染的方法 |
WO2023108028A2 (en) * | 2021-12-10 | 2023-06-15 | Omeros Corporation | Therapeutic antibodies that bind to the serine protease domain of masp-2 and uses thereof |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012508262A (ja) * | 2008-11-10 | 2012-04-05 | アレクシオン ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 補体関連障害を処置するための方法および組成物 |
WO2012139081A2 (en) * | 2011-04-08 | 2012-10-11 | University Of Leicester | Methods for treating conditions associated with masp-2 dependent complement activation |
WO2012151481A1 (en) * | 2011-05-04 | 2012-11-08 | Omeros Corporation | Compositions for inhibiting masp-2 dependent complement acitivation |
US20130266559A1 (en) * | 2004-06-10 | 2013-10-10 | University Of Leicester | Methods for Treating Conditions Associated with MASP-2 Dependent Complement Activation |
Family Cites Families (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4331647A (en) | 1980-03-03 | 1982-05-25 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled antibody fragments specific to tumor-associated markers |
US4394370A (en) | 1981-09-21 | 1983-07-19 | Jefferies Steven R | Bone graft material for osseous defects and method of making same |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4526909A (en) | 1984-01-09 | 1985-07-02 | Regents Of The University Of California | Polymethylmethacrylate delivery system for bone morphogenetic protein |
US4563489A (en) | 1984-02-10 | 1986-01-07 | University Of California | Biodegradable organic polymer delivery system for bone morphogenetic protein |
JPH0662679B2 (ja) | 1985-06-21 | 1994-08-17 | 新田ゼラチン株式会社 | 組織親和性コラ−ゲンとその製法 |
US5453566A (en) | 1986-03-28 | 1995-09-26 | Calgene, Inc. | Antisense regulation of gene expression in plant/cells |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US4987071A (en) | 1986-12-03 | 1991-01-22 | University Patents, Inc. | RNA ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods |
MC2115A1 (fr) | 1987-12-15 | 1991-07-05 | Gene Shears Pty Ltd | Ribozynes |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
GB8822492D0 (en) | 1988-09-24 | 1988-10-26 | Considine J | Apparatus for removing tumours from hollow organs of body |
US5211657A (en) | 1988-11-07 | 1993-05-18 | The United States Government As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Laminin a chain deduced amino acid sequence, expression vectors and active synthetic peptides |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5549910A (en) | 1989-03-31 | 1996-08-27 | The Regents Of The University Of California | Preparation of liposome and lipid complex compositions |
EP0438803B1 (en) | 1990-01-26 | 1997-03-12 | Immunomedics, Inc. | Vaccines against cancer and infectious diseases |
JP3218637B2 (ja) | 1990-07-26 | 2001-10-15 | 大正製薬株式会社 | 安定なリポソーム水懸濁液 |
US5789573A (en) | 1990-08-14 | 1998-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense inhibition of ICAM-1, E-selectin, and CMV IE1/IE2 |
JP2958076B2 (ja) | 1990-08-27 | 1999-10-06 | 株式会社ビタミン研究所 | 遺伝子導入用多重膜リポソーム及び遺伝子捕捉多重膜リポソーム製剤並びにその製法 |
IL108367A0 (en) | 1993-01-27 | 1994-04-12 | Hektoen Inst For Medical Resea | Antisense polynzcleotide inhibition of human growth factor-sensitive cancer cells |
US5801154A (en) | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
US5856121A (en) | 1994-02-24 | 1999-01-05 | Case Western Reserve University | Growth arrest homebox gene |
US5741516A (en) | 1994-06-20 | 1998-04-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Sphingosomes for enhanced drug delivery |
JPH10510540A (ja) | 1994-12-12 | 1998-10-13 | オメロス メディカル システムズ,インコーポレーテッド | 灌注用溶液並びに疼痛、炎症及びけいれんの抑制法 |
US5795587A (en) | 1995-01-23 | 1998-08-18 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
US5738868A (en) | 1995-07-18 | 1998-04-14 | Lipogenics Ltd. | Liposome compositions and kits therefor |
US5739119A (en) | 1996-11-15 | 1998-04-14 | Galli; Rachel L. | Antisense oligonucleotides specific for the muscarinic type 2 acetylcholine receptor MRNA |
ES2308985T3 (es) | 1999-07-21 | 2008-12-16 | Omeros Corporation | Disoluciones y procedimientos para la inhibicion del dolor, inflamacion y degradacion del cartilago. |
US6649592B1 (en) | 2000-01-14 | 2003-11-18 | Science & Technology Corporation @ Unm | Peptide inhibitors of LFA-1/ICAM-1 interaction |
SG98393A1 (en) | 2000-05-19 | 2003-09-19 | Inst Materials Research & Eng | Injectable drug delivery systems with cyclodextrin-polymer based hydrogels |
KR20040094413A (ko) | 2002-02-01 | 2004-11-09 | 오메로스 코포레이션 | 연골 분해를 전신 억제하기 위한 조성물 및 방법 |
KR101101261B1 (ko) | 2002-07-19 | 2012-01-04 | 인스티튜트 오브 머티어리얼스 리서치 & 엔지니어링 | 생체분해성 삼블럭 공중합체, 이의 합성 방법, 및이로부터 제조된 하이드로겔 및 생체물질 |
EP2374819B1 (en) * | 2003-05-12 | 2017-03-22 | Helion Biotech ApS | Antibodies to MASP-2 |
US20050169921A1 (en) | 2004-02-03 | 2005-08-04 | Leonard Bell | Method of treating hemolytic disease |
US7919094B2 (en) | 2004-06-10 | 2011-04-05 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation |
US8840893B2 (en) | 2004-06-10 | 2014-09-23 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation |
LT2446900T (lt) | 2004-06-10 | 2017-07-25 | Omeros Corporation | Ligų, susijusių su nuo masp-2 priklausomu komplemento aktyvavimu, gydymo būdai |
CN102712687A (zh) | 2009-07-17 | 2012-10-03 | 丹麦国家医院 | 作为补体激活的抑制剂的masp同种型 |
ES2617920T3 (es) * | 2009-10-16 | 2017-06-20 | Omeros Corporation | Métodos para el tratamiento de la coagulación intravascular diseminada mediante la inhibición de la activación del complemento dependiente de MASP-2 |
KR20130009784A (ko) | 2010-03-01 | 2013-01-23 | 알렉시온 파마슈티칼스, 인코포레이티드 | 악성 위축성 구진증을 치료하는 방법 및 조성물 |
US20150166676A1 (en) | 2011-04-08 | 2015-06-18 | Omeros Corporation | Methods for Treating Conditions Associated with MASP-2 Dependent Complement Activation |
US9644035B2 (en) * | 2011-04-08 | 2017-05-09 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation |
JP2013030593A (ja) | 2011-07-28 | 2013-02-07 | J Devices:Kk | 半導体装置、該半導体装置を垂直に積層した半導体モジュール構造及びその製造方法 |
CN109908352A (zh) | 2012-06-18 | 2019-06-21 | 奥默罗斯公司 | 抑制masp-1和/或masp-2和/或masp-3的组合物和方法 |
JP6538561B2 (ja) | 2012-10-25 | 2019-07-03 | バイオベラティブ・ユーエスエイ・インコーポレイテッド | 抗補体C1s抗体とそれらの用途 |
EP3046581B1 (en) | 2013-09-16 | 2020-04-01 | Children's Hospital Medical Center | Compositions and methods for treatment of hsct-associated thrombotic microangiopathy |
MX2016005017A (es) | 2013-10-17 | 2016-11-07 | Omeros Corp | Metodos para el tratamiento de condiciones asociadas con la activacion del complemento dependiente de masp-2. |
US20170137537A1 (en) | 2015-11-09 | 2017-05-18 | Omeros Corporation | Methods for Treating Conditions Associated with MASP-2 Dependent Complement Activation |
-
2014
- 2014-10-17 MX MX2016005017A patent/MX2016005017A/es unknown
- 2014-10-17 AU AU2014337047A patent/AU2014337047B2/en active Active
- 2014-10-17 CA CA2926385A patent/CA2926385A1/en active Pending
- 2014-10-17 DK DK14853910.9T patent/DK3057993T3/da active
- 2014-10-17 RU RU2020111211A patent/RU2020111211A/ru unknown
- 2014-10-17 SI SI201431703T patent/SI3057993T1/sl unknown
- 2014-10-17 JP JP2016523966A patent/JP2016539919A/ja active Pending
- 2014-10-17 NZ NZ757986A patent/NZ757986A/en unknown
- 2014-10-17 RU RU2016118769A patent/RU2718850C2/ru active
- 2014-10-17 US US14/517,750 patent/US20150166675A1/en not_active Abandoned
- 2014-10-17 IL IL283373A patent/IL283373B1/en unknown
- 2014-10-17 NZ NZ719476A patent/NZ719476A/en unknown
- 2014-10-17 PL PL14853910T patent/PL3057993T3/pl unknown
- 2014-10-17 HU HUE14853910A patent/HUE051746T2/hu unknown
- 2014-10-17 CN CN202010267076.6A patent/CN111588855A/zh active Pending
- 2014-10-17 EP EP20183794.5A patent/EP3750919A1/en active Pending
- 2014-10-17 CN CN201480057024.9A patent/CN105683219B/zh active Active
- 2014-10-17 ES ES14853910T patent/ES2829913T3/es active Active
- 2014-10-17 BR BR112016008409-8A patent/BR112016008409B1/pt active IP Right Grant
- 2014-10-17 RS RS20201362A patent/RS61351B1/sr unknown
- 2014-10-17 KR KR1020227013267A patent/KR20220053057A/ko active IP Right Grant
- 2014-10-17 LT LTEP14853910.9T patent/LT3057993T/lt unknown
- 2014-10-17 WO PCT/US2014/061236 patent/WO2015058143A1/en active Application Filing
- 2014-10-17 EP EP14853910.9A patent/EP3057993B1/en active Active
- 2014-10-17 PT PT148539109T patent/PT3057993T/pt unknown
- 2014-10-17 KR KR1020167012842A patent/KR20160062186A/ko not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-04-14 IL IL245115A patent/IL245115B/en unknown
- 2016-04-15 CL CL2016000908A patent/CL2016000908A1/es unknown
- 2016-04-18 MX MX2021008044A patent/MX2021008044A/es unknown
-
2018
- 2018-06-12 CL CL2018001557A patent/CL2018001557A1/es unknown
-
2019
- 2019-07-11 US US16/509,336 patent/US11525011B2/en active Active
- 2019-11-07 JP JP2019201984A patent/JP6953498B2/ja active Active
-
2020
- 2020-06-05 AU AU2020203748A patent/AU2020203748B2/en active Active
- 2020-10-27 HR HRP20201733TT patent/HRP20201733T1/hr unknown
- 2020-11-11 CY CY20201101069T patent/CY1123776T1/el unknown
-
2021
- 2021-09-29 JP JP2021158585A patent/JP7397037B2/ja active Active
-
2022
- 2022-11-02 US US18/051,993 patent/US20240124611A1/en active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20130266559A1 (en) * | 2004-06-10 | 2013-10-10 | University Of Leicester | Methods for Treating Conditions Associated with MASP-2 Dependent Complement Activation |
JP2012508262A (ja) * | 2008-11-10 | 2012-04-05 | アレクシオン ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 補体関連障害を処置するための方法および組成物 |
WO2012139081A2 (en) * | 2011-04-08 | 2012-10-11 | University Of Leicester | Methods for treating conditions associated with masp-2 dependent complement activation |
WO2012151481A1 (en) * | 2011-05-04 | 2012-11-08 | Omeros Corporation | Compositions for inhibiting masp-2 dependent complement acitivation |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
INDIAN JOURNAL OF DERMATOLOGY VENEREOLOGY, AND LEPROLOGY, vol. 77, no. 2, JPN6022045765, 2011, pages 219 - 221, ISSN: 0004908305 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6953498B2 (ja) | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 | |
JP6893539B2 (ja) | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 | |
JP6814802B2 (ja) | Masp−2依存性補体活性化に関連した状態を治療するための方法 | |
US20240076409A1 (en) | Methods for Treating Conditions Associated with MASP-2 Dependent Complement Activation | |
TWI818919B (zh) | 用於治療和/ 或預防與造血幹細胞移植有關的移植物抗宿主病和/ 或瀰漫性肺泡出血和/ 或靜脈閉塞性病的方法 | |
JP2023503611A (ja) | 造血幹細胞移植に関連する特発性肺炎症候群(ips)および/または毛細血管漏出症候群(cls)および/または生着症候群(es)および/または体液過剰(fo)を治療および/または予防するための方法 | |
EA042534B1 (ru) | Способы лечения состояний, связанных с masp-2 зависимой активацией комплемента |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211027 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211027 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220408 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221031 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230111 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230425 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230705 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231002 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20231120 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231130 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7397037 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |