JP2021525545A - 液体真菌胞子製剤用の新規担体流体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、定義されるような少なくとも1つのエトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体および真菌胞子を含む液体調製物、ならびに植物の内または上の植物病原性真菌、昆虫および/または線虫を制御するための方法、植物の成長を増強するための方法、または植物収量もしくは根の健康を増加させるための方法であって、有効量の本発明による液体調製物または液体組成物を前記植物に、または植物が成長しているかまたは成長することが意図される場所に施用することを含む方法に関する。

Description

生物的防除剤(Biological control agents:BCA)は、種々の菌類または昆虫害虫と戦うため、または植物の健康を改善するため、植物保護の分野においてますます重要になっている。生物的防除剤として使用することができるウイルスも利用可能であるが、主に細菌および真菌に基づくBCAがこの分野で使用される。真菌に基づく最も顕著な形態の生物的防除剤は芽胞子と同様に分生子と呼ばれる無性胞子であるが、(ミクロ)菌核、子嚢胞子、担子胞子、厚膜胞子または菌糸断片のような他の真菌繁殖体も有望な薬剤である可能性がある。
バチルス胞子のようなバクテリアに基づく多くの胞子とは異なり、多くの真菌胞子は、あまり強くなく、市販製品の要求、特にある温度での許容可能な貯蔵安定性を満たす形態で真菌胞子を提供することは困難であることが証明されている。
それにもかかわらず、生物的防除剤のための適切な製剤の提供は生物的防除剤の性質、温度安定性および貯蔵寿命、ならびに適用における製剤の効果など、最終製剤の効力に寄与する多くの要因のために、依然として課題を提起する。
好適な製剤は活性成分と不活性成分との均質で安定な混合物であり、これは、最終製品を標的に適用するためにより単純で、より安全で、より有効にする。
生物防除剤に通常用いられる製剤としては、WP(粉末状に微粉化され、典型的には水中に分散した後に懸濁粒子として適用される固体製剤)、WG(水中に崩壊および分散後に適用される顆粒からなる製剤)が挙げられる。WG製品の顆粒は、0.2〜4mmの範囲内の明確な粒子を有する。水分散性顆粒は、凝集、噴霧乾燥、または押出技術によって形成することができる。WP製剤はむしろ容易に製造されるが、それらはほこりっぽい。さらに、それらは、現場で投与するのが容易ではない。WG製剤は使用者にとって取り扱いが容易であり、一般に、WP製剤よりもダスト含有量が低い。
液体製剤の例は、SC(使用前に水で希釈することを通常意図した流体中の固体活性成分の水ベースの懸濁液)である。別の液体製剤タイプはEC(水に添加されるとエマルジョンを形成する水不溶性有機溶媒中の乳化剤などの界面活性剤と組み合わせた活性成分の溶液)である。
膨大な数の処方物が生物的防除剤の実験的製剤および商業的製剤において利用されている(より詳細な説明およびリストについては、Schisler等、Phytopathology、Vol94、No.11,2004を参照のこと)。一般に、処方物は、処方されたバイオマスの化学的、物理的、生理学的または栄養学的特性を改善する担体(充填剤、増量剤)または処方物のいずれかとして分類することができる。
安定性、特に室温または室温以上の温度での長期間にわたる真菌活性に基づくBCAの貯蔵安定性は、真菌分生子の繊細な性質のために、特に難題である。多くの生物と同様に、休眠状態の真菌分生子は例えば、水、空気(酸素)、温度、照射などの環境の影響に敏感である。いくつかの因子は発芽を誘発し得るが、他の因子は胞子生存率に有害な効果を有し得る。水を排除するために、白色鉱物(パラフィン系)油または植物油のような油が典型的には、液体真菌胞子製剤を調製するために使用される。これらの油の多くは真菌生物にいくらかの貯蔵寿命を提供するが、油に基づく調製物は長時間および/または高温にわたる胞子生存率にしばしば有害な効果を有する乳化剤を必要とする。
生物的防除剤の製剤の例は、Torres等、2003、J Appl Microbiol、94(2)、pp:330−9に記載されている。しかしながら、生物的防除剤、例えば真菌胞子の生存率を4℃で4ヶ月間70%を超えて保存する製剤は、現場での日常的な使用に適していないことは明らかである。むしろ、生物的防除剤の製剤は、冷蔵が不可能な条件下でも十分な貯蔵寿命を有することが望ましい。
Kim等、2010(J.S.Kim,Y.H.Je,J.Y.Roh,Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 2010,vol37(issue4),pp.419ff)は、Isaria fumosorosea菌の分生子が油(大豆、トウモロコシ、綿実、パラフィン油、オレイン酸メチル)中に分散させた場合、水中での分散と比較して、50℃で2時間および8時間改善された貯蔵寿命を示すことを開示している。
Mbarga等,2014(Biological Control 2014,vol.77,pp.15ff)は、異なる乳化剤を含む大豆油中に製剤化されたTrichoderma asperellumが水中の分生子の分散液と比較して改善された貯蔵寿命を示すことを見出した。
例えば、エトキシル化トリシロキサン(例えば、Break−Thru S240)のような他の液体は好適な代替物であり、例えば、P.Lilacinum(BioAct(登録商標)、WO2016/050726を参照のこと)を用いた安定な調製物を提供するが、このようなトリシロキサンの製造、したがって、製品自体は高価である。
真菌胞子を含有する油性懸濁液は、当該分野で公知である。そのような目的のために使用される油の典型的な例は、例えば植物油、パラフィン油または芳香族炭化水素である。WO2015/069708A1には、プラスチック表面上の残留物をより少なくする乳化剤の最大35%と共にパラフィン油に基づく微生物の液体製剤が記載されている。US2007/0141032A1は、乾燥剤および10%までの乳化剤を含有するパラフィン油に基づく微生物の製剤を記載している。
US20140143909A1は、真菌胞子を含有する液体または固体組成物中の「任意成分」または共配合物としての界面活性剤の一般的な使用を記載している。
界面活性剤はさらに、水性調製物に使用される。例えば、US2006/0247150およびUS2011/0033436A1には、微生物および種々の非イオン性、アニオン性、カチオン性および両性界面活性剤をも含む水ベースの製剤が記載されている。
WO2016/050726 WO2015/069708A1 US2007/0141032A1 US20140143909A1 US2006/0247150 US2011/0033436A1
Schisler等、Phytopathology、Vol94、No.11,2004 Torres等、2003、J Appl Microbiol、94(2)、pp:330−9 Kim等、2010(J.S.Kim,Y.H.Je,J.Y.Roh,Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 2010,vol37(issue4),pp.419ff) Mbarga等,2014(Biological Control 2014,vol.77,pp.15ff)
上述の欠点により、真菌活性物質に基づく生物的防除剤のための単純で、取り扱いが容易な製剤処方が依然として必要とされている。他の特性の中でも、そのような製剤は理想的には製剤濃縮物において良好な物理的安定性を提供し、特に高温(20℃以上)で、経時的に好適な貯蔵寿命を示し、良好な水混和性または懸濁性を提供する。
上述のように、油または有機ケイ素以外の有機流体を使用して、真菌胞子ベースのBCAの安定な農薬調製物を提供することができるという優先順位は非常に少ない。エトキシル化および/またはプロポキシル化界面活性剤は乳化特性を有することが知られており、したがって、これらの化合物は、典型的な量を使用する乳化剤として頻繁に使用される。驚くべきことに、多数の異なるエトキシル化および/またはプロポキシル化エトキシル化流体は主担体として使用した場合、高温(30℃およびそれ以上で8週間)での貯蔵後に、良好から優れた胞子生存率を提供することが見出された。
したがって、第1の態様では、本発明が以下の
a) 3〜10エチレンオキシド単位を有するエトキシル化脂肪酸トリグリセリド、ここで、前記脂肪酸トリグリセリドはヒマシ油および植物油からなる群から選択される;
b) 一般式:
Figure 2021525545
のブロックコポリマー(式中、a1、a2およびbは互いに独立して、1〜10の平均値を有する;またはa1およびa2が互いに独立して、1〜20の平均値を有し、bは15〜35の平均値を有する);および
c) 一般式:
Figure 2021525545
のポリマー(式中、XおよびYは独立して、水素、1〜24個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル、および2〜24個の炭素原子を有し、飽和または部分不飽和であり、ヒドロキシル官能基を有してもよい分岐または直鎖カルボニルから選択され;
mは0〜10の間の平均数であり;
nは0〜40、好ましくは0〜30、より好ましくは0〜20、最も好ましくは0〜15、さらには0〜10の平均数であり、m+nはゼロではない)
からなる群から選択される少なくとも1つのエトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体を含むか、
またはa)〜c)のいずれか1つの混合物を含み;
および真菌胞子
を含む液体調製物に関する。
本発明の範囲内にある真菌胞子は分生子と呼ばれる無性胞子および芽胞子を含むが、子嚢胞子、担子胞子、厚膜胞子のような他の真菌繁殖体も含む。(ミクロ)菌核は厳密な意味で胞子ではないが、本発明による液体調製物に添加することもできる。
a)およびb)のいずれか1つの混合物は、1:100〜100:1の範囲の比、好ましくは1:50〜50:1の範囲の比、より好ましくは1:25〜25:1の範囲の混合物、例えば1:20、1:15、1:10、1:5、1:2、1:1、2:1、5:1、10:1、15:1または20:1で存在することができる。さらに別の好ましい実施形態は、a)およびb)のいずれか1つの混合物を、1:20〜1:1の範囲の比率で、または1:1〜20:1の範囲の比率で含む。
a)およびc)のいずれか1つの混合物は、1:100〜100:1の範囲の比、好ましくは1:50〜50:1の範囲の比、より好ましくは1:25〜25:1の範囲の混合物、例えば1:20、1:15、1:10、1:5、1:2、1:1、2:1、5:1、10:1、15:1または20:1で存在することができる。さらに別の好ましい実施形態は、a)およびc)のいずれか1つの混合物を、1:20〜1:1の範囲の比率で、または1:1〜20:1の範囲の比率で含む。
b)〜c)のいずれか1つの混合物は、1:100〜100:1の範囲の比、好ましくは1:50〜50:1の範囲の比、より好ましくは1:25〜25:1の範囲の混合物、例えば1:20、1:15、1:10、1:5、1:2、1:1、2:1、5:1、10:1、15:1または20:1で存在することができる。さらに別の好ましい実施形態は、b)およびc)のいずれか1つの混合物を、1:20〜1:1の範囲の比率で、または1:1〜20:1の範囲の比率で含む。
a)およびb)およびc)のいずれか1つの混合物は、それぞれ1:1:100〜100:100:1、または1:100:1〜100:1:100、または100:1:1〜1:100:100の範囲で、好ましくは1:1:50〜50:50:1、または1:50:1〜50:1:50、または50:1:1〜1:50:50の範囲の比、より好ましくは1:1:25〜25:25:1、または1:25:1〜25:1:25、または25:1:1〜1:25:25の範囲の混合物、例えば1:20:1、1:15:1、1:10:1、1:5:1、1:1:1、20:1:1、15:1:1、10:1:1、5:1:1、1:1:20、1:1:15、1:1:10、1:1:5、5:20:1、5:15:1、5:10:1、1:20:5、1:15:5、1:10:5、20:1:5、15:1:5、10:1:5、20:5:1、15:5:1、10:5:1、1:5:20、1:5:15、1:5:10、5:1:20、5:1:15または5:1:10で存在することができる。さらに別の好ましい実施形態は、a)およびb)およびc)のいずれか1つの混合物を、1:20:1〜1:1:1の範囲の比、または20:1:1〜1:1:1の範囲の比、または1:1:20〜1:1:1の範囲の比で含む。
真菌胞子は分生子であることが好ましい。
好ましい実施形態では、a)による前記エトキシル化脂肪酸トリグリセリドがヒマワリ油、菜種油、大豆油、トウモロコシ油、ヤシ油、およびパーム油からなる群から選択される植物油に由来する。当該植物油の構成については、http://www.dgfett.de/material/fszus.phpを参照されたい。
別の好ましい実施形態では、a)による前記エトキシル化脂肪酸トリグリセリドがヒマシ油に由来する。エトキシル化ヒマシ油の選択された例は、例えば、Lucramul CO08(Castor oil ethoxylate 8EO)およびEtocas 10(Castor oil ethoxylate 10EO)が特に好ましい。
b)による前記エトキシル化およびプロポキシル化有機液体に関して、これは、好ましくは式H−O−[CH2−CH2−O−]a1−[CH2−CH(CH3)−O]b−[CH2−CH2−O−]a2−H(式中、a1およびa2は互いに独立して1〜20の平均値を有し、bは15〜35の平均値を有する)のブロックコポリマーからなる群から選択される。より好ましくは前記エトキシル化およびプロポキシル化有機液体がa1およびa2が互いに独立して1から16の間の平均値を有し、bが20から30の間の平均値を有するブロックコポリマーの群から選択される。b)による前記エトキシル化およびプロポキシ化有機液体は好ましくは約1000から約3000g/molの間、より好ましくは約1500g/molから約3000g/molの間、より好ましくは約2000g/molから約3000g/molの間の平均モル重量を有する。
例えば、a1およびa2の平均値が3〜16であり、bの平均値が25〜35であるブロックコポリマーについては、平均分子量は約2000〜約3000g/molの範囲であり得る。a1およびa2の平均値が2〜12であり、bの平均値が15〜25であるブロックコポリマーについては、平均分子量は約1400〜約2200g/molの範囲であり得る。a1およびa2の平均値が1〜12であり、bの平均値が10〜20であるブロックコポリマーについては、平均分子量は約1000〜約2000g/molの範囲であり得る。
b)によるエトキシル化およびプロポキシル化有機液体の選択された例は、特に好ましいSynperonic PE/L62、Synperonic PE/L64およびSynperonic PE/L44によって表される。
別の実施形態ではb)によるエトキシル化およびプロポキシル化有機液体が好ましくは式H−O−[CH2−CH2−O−]a1−[CH2−CH(CH3)−O]b−[CH2−CH2−O−]a2−H(式中、a1、a2およびbは互いに独立して、1〜8の平均値を有する)のブロックコポリマーからなる群から選択される。より好ましくは前記ブロックコポリマーが2〜8個のプロピレンオキシド単位および2〜12個のエチレンオキシド単位の平均量を有し、ここで、a1およびa2は互いに独立して、合計12を超えない値を有し得る。さらにより好ましくは前記ブロックコポリマーが2〜6個のプロピレンオキシド単位および2〜8個のエチレンオキシド単位の平均量を有し、ここで、a1およびa2は互いに独立して、合計8を超えない値を有し得る。
この実施形態では、b)による前記エトキシル化およびプロポキシル化有機液体が好ましくは約150〜約1500g/mol、より好ましくは約150g/mol〜約1200g/mol、より好ましくは約200g/mol〜約1000g/mol、さらに好ましくは約200〜約700g/molの平均モル質量を有する。
例えば、a1、a2およびbの平均値が互いに独立して1〜10である場合、平均分子量は約150〜約1500g/molの範囲であり得る。a1、a2およびbの平均値が互いに独立して1〜8である場合、平均分子量は約150〜約1200g/molの範囲であり得る。平均量が2〜8のプロピレンオキシド単位および2〜12のエチレンオキシド単位(ここで、a1およびa2は互いに独立して、合計で12を超えない値を有し得る)を有するブロックコポリマーについて、平均分子量は約200g/mol〜約1000g/molの範囲であり得る。平均量が2〜6のプロピレンオキシド単位および2〜8のエチレンオキシド単位(ここで、a1およびa2は互いに独立して、合計で8を超えない値を有し得る)を有するブロックコポリマーについて、平均分子量は約200〜約700g/molの範囲であり得る。
この実施形態では、b)による前記エトキシル化およびプロポキシル化有機液体において、a1およびa2が互いに独立して、1〜4の値を有し、bが2〜6の値を有することが最も好ましい。
好ましい実施形態では、c)のポリマーにおいて、Xは1〜18個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル、または2〜18個の炭素原子を有する分岐または直鎖カルボニルであり、飽和または部分不飽和であり、Yは水素、または1〜6個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル、または2〜6個の炭素原子を有する分岐または直鎖カルボニルであり、飽和または部分不飽和である。明確にするために、当業者は、分岐アルキル基またはカルボニル基が少なくとも3個の炭素原子を有するだけで存在し得ることを知っている。
代替の好ましい実施形態では、c)のポリマーにおいて、Xは水素、または1〜6個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル(本出願全体を通して明確にするために、分岐部分は少なくとも3個の炭素原子を有する必要がある)、または2〜6個の炭素原子を有する分岐または直鎖カルボニルであり、飽和または部分不飽和であり、任意選択でヒドロキシル官能基を有し、Yは1〜18個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル、または2〜18個の炭素原子を有する分岐または直鎖カルボニルであり、飽和または部分不飽和であり、任意選択でヒドロキシル官能基を有する。好ましい実施形態では、c)のポリマーにおいて、m+nは1〜30、より好ましくは1〜20、最も好ましくは1〜15である。代替の好ましい実施形態では、mは1〜9の範囲であり、nは0〜6の範囲であり、またはmは0〜5の範囲であり、nは3〜10の範囲である。さらに別の好ましい実施形態では、mは1〜5の範囲であり、ここでnはゼロに等しく、またはnは4〜10の範囲であり、ここでmはゼロに等しい。
上記において、カルボニルとは、以下に定義するアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニルをいう。
本出願の実施例に示されるように、かなり低い分子量を有する流体は本発明による安定化効果を依然として有するが、かなり低い分子量を有する他の構造的に類似した流体はこの効果を示さないことが見出された。出願人はいかなる科学的理論にも拘束されることを望むものではないが、かなり小さいアルキル鎖と特定の数のエチレンオキシド単位との組み合わせのような流体の特定の構造モチーフは真菌胞子を安定化させるのに適しておらず、反対の結果をもたらすと考えられる。驚くべきことに、この挙動は、非常に同じ小さなアルキル鎖が特定の数のプロピレンオキシド単位と組み合わされた場合には観察されない。したがって、別の好ましい実施形態では、c)のポリマーにおいて、mがゼロに等しい場合、前記少なくとも1つのエトキシル化有機液体の分子量(MW)は190質量単位以上、より好ましくは205質量単位以上、さらにより好ましくは220質量単位以上、例えば少なくとも235質量単位である。
当業者はどの液体が本発明の範囲内に入るかを定義することができるが、前記c)によるエトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体は、ポリエチレングリコール、例えば、Pluriol E300(ポリエチレングリコール−300);エトキシル化アルコール、例えば、Atplus 245(アルコールエトキシレート)、Berol 050(直鎖C12−C16エトキシル化アルコール、3EO)、Berol 260(C9−C11エトキシル化アルコール、4EO)、Ecosurf EH3(トリエチレングリコール−モノオクチルエーテル)、Lucramul L03(C12−C18エトキシル化アルコール、3EO)、Lucramul L05(C12−C18エトキシル化アルコール、5EO)、Lutensol AO3(C13−15−分岐および直鎖エトキシル化アルコール、3EO)、Lutensol AO7 (C13−15−分岐および直鎖エトキシル化アルコール、7EO)、トリエチレングリコールモノブチルエーテル;モノ−/ポリエチレンオキシドジエーテル、例えばTetraglyme(テトラエチレングリコールジエーテル);モノ−/ポリエチレンオキシドエーテル−エステル、例えばArlatone TV(ソルビトール−ヘプタオレート、40EO)、n−ブチルジグリコアセタト、Tween 20 (エトキシル化ソルビトールモノラウレート、20EO)、Tween−80(エトキシル化ソルビトールモノオレエート、20EO)、Tween−85(エトキシル化ソルビトールモノオレエート、20EO);エトキシル化カルボン酸、例えばAlkamuls A (ポリエチレングリコールモノオレエート)、Radiasurf 7402(ポリエチレングリコール−200モノオレエート)、Radiasurf 7423(ポリエチレングリコール−400モノラウレート);モノ−/ポリエチレンオキシドジエステル、例えばRadiasurf 7442(ポリエチレングリコール−400ジオレエート);ポリプロピレングリコール、例えばジプロピレングリコール;プロポキシル化アルコール、例えばDowanol DPM(ジプロピレングリコールモノメチルエーテル);モノ−/ポリプロピレンオキシドジエーテル、例えばジプロピレングリコールジメチルエーテル;モノ/ポリプロピレンオキシドエーテルエステル、例えばジプロピレングリコールメチルエーテルアセテート;プロポキシル化カルボン酸;モノー/ポリプロピレンオキシドジエステル、例えばプロピレングリコールジアセテート;アルコールプロポキシレートーエトキシレート、例えばAtlas G−5002L(アルコールプロポキシレート−エトキシレート)、Lucramul HOT 5902(アルコールプロポキシレート−エトキシレート)、カルボン酸プロポキシレート−エトキシレート;カルボン酸プロポキシレート−エトキシレートエーテル、例えばLeofat OC0503M(脂肪酸、プロポキシル化−エトキシル化、末端キャップメチル脂肪酸、プロポキシル化−エトキシル化、末端キャップメチル)からなる群から選択されることが好ましい。
別の好ましい実施形態において、および上記に加えて、エトキシル化アルコールブチルカルビトール、ブチルセロソルブ、ヘキシルセロソルブ、メトキシトリグリコールおよびプロピルセロソルブは、c)による液体の範囲内ではない。本発明の過程において、驚くべきことに、本明細書中に定義されるような特定の液体が、真菌胞子の貯蔵安定性を増加させるのに適していることが見出された。換言すれば、本発明による液体製剤中に存在する真菌胞子は、異なる製剤または純粋な形態で存在する真菌胞子と比較して、所与の時間後に改善された発芽率を示す。
別段の指示がない場合、本出願全体を通して使用される用語「%」は、重量(wt.)%に関する。
本発明に関連して、「改良された発芽率」とは休眠真菌構造または器官、好ましくは真菌胞子の発芽率を指し、前記胞子の産生後少なくとも2週間までに、それは冷却期間の終了後に、該発芽率は休眠真菌構造または器官、例えば、本発明の手順に従って処理されていないが、他は等しく処理された胞子(「対照胞子」)の発芽率よりも少なくとも10%高く、好ましくは少なくとも20%、より好ましくは少なくとも30%または少なくとも40%、最も好ましくは少なくとも50%高い。言い換えれば、「改良された発芽率」とは前記胞子の産生後少なくとも2週間までに、対照胞子の発芽率の少なくとも110%、好ましくは少なくとも120%、より好ましくは少なくとも130%または少なくとも140%、最も好ましくは少なくとも150%またはそれ以上の発芽率を意味する。好ましくは、前記改善された発芽率が生産後少なくとも3ヶ月、より好ましくは少なくとも4ヶ月、最も好ましくは少なくとも6ヶ月、例えば少なくとも8ヶ月、少なくとも10ヶ月、またはさらに12ヶ月以上まで、依然として目に見えるか、または増加さえする。したがって、本発明に従って処理された胞子の発芽率は、前記胞子の産生の3ヶ月後の対照胞子の発芽率の少なくとも200%であることが好ましい。別の好ましい実施形態では、発芽率が前記胞子の産生の6ヶ月後の対照胞子の発芽率の少なくとも300%または少なくとも400%、最も好ましくは少なくとも500%である。これに関連して、発芽率は、胞子が所与の時間後になお発芽する能力を示す。したがって、%発芽率は、所与の期間後に発芽することができる胞子の割合を意味する。発芽率を測定する方法は、当技術分野で周知である。例えば、胞子は寒天媒体の表面上に広げられ、菌管を発育させる胞子の割合は適切な生育温度でインキュベーション後、顕微鏡的に決定される(Oliveira等、A protocol for determination of conidial viability of the fungal entomopathogens Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae from commercial products. Journal of Microbiological Methods 119; pp: 44−52、およびその参考文献)。
特定の実施形態では、本発明が以下:
0,1〜40%の、好ましくは2,5〜30%の、最も好ましい5〜25%の、例えば10〜20%の真菌胞子、
99,9%までの、好ましくは70〜97,5%の、最も好ましい75〜95%の、例えば80〜90%の上記定義のエトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体、
0〜10%の;好ましい0〜8%の、最も好ましい0.1〜5%の界面活性剤(例えば、分散剤乳化剤);
0〜10%の、好ましくは0〜7%の、より好ましくは0.5〜5%のレオロジー調整剤、例えばヒュームドシリカ、アタパルジャイト;
0〜5%の、好ましくは0〜3%の、最も好ましくは0.1〜0.5%の各消泡剤、酸化防止剤、染料
を含む液体調製物を提供する。
他に定義されない限り、用語「アルキル」は、飽和直鎖または分岐炭化水素基、例えば(C1−C18)−、(C1−C6)−、または(C1−C4)−アルキルを指す。例:メチル、エチル、プロピル、1−メチルエチル、ブチルなど。
例(しかしこれに限定されない):(C1−C6)−アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、1−メチルエチル、ブチル、1−メチルプロピル、2−メチルプロピル、1,1−ジメチルエチル、ペンチル、1−メチルブチル、2−メチルブチル、3−メチルブチル、1,1−ジメチルプロピル、1,2−ジメチルプロピル、2,2ジメチルプロピル、1−エチルプロピル、ヘキシル、1−メチルペンチル、2−メチルペンチル、3−メチルペンチル、4−メチルペンチル、1,1−ジメチルブチル、1,2−ジメチルブチル、1,3−ジメチルブチル、2,2−ジメチルブチル、2,3−ジメチルブチル、3,3−ジメチルブチル、1−エチルブチル、2−エチルブチル、1,1,2−トリメチルプロピル、1,2,2−トリメチルプロピル、1−エチル−1−メチルプロピルおよび1−エチル−2−メチルプロピル。
他に定義されない限り、用語「アルケニル」は、少なくとも1つの二重結合を含む不飽和直鎖または分岐炭化水素基、例えば(C2−C18)−、(C2−C6)−または(C2−C4)−アルケニルを指す。例:エテニル、1−プロペニル、3−ブテニルなど。
例(しかしこれに限定されない):(C2−C6)−アルケニル、例えばエテニル、1−プロペニル、2−プロペニル、1−メチルエテニル、1−ブテニル、2−ブテニル、3−ブテニル、1−メチル−1−プロペニル、2−メチル−1−プロペニル、1−メチル−2−プロペニル、2−メチル−2−プロペニル、1−ペンテニル、2−ペンテニル、3−ペンテニル、4−ペンテニル、1−メチル−1−ブテニル、2−メチル−1−ブテニル、3−メチル−1−ブテニル、1−メチル−2−ブテニル、2−メチル−2−ブテニル、3−メチル−2−ブテニル、1−メチル−3−ブテニル、2−メチル−3−ブテニル、3−メチル−3−ブテニル、1,1−ジメチル−2−プロペニル,1,2−ジメチル−1−プロペニル、1,2−ジメチル−2−プロペニル、1−エチル−1−プロペニル、1−エチル−2−プロペニル、1−ヘキセニル、2−ヘキセニル、3−ヘキセニル、4−ヘキセニル、5−ヘキセニル、1−メチル−1−ペンテニル、2−メチル−1−ペンテニル、3−メチル−1−ペンテニル、4−メチル−1−ペンテニル、1−メチル−2−ペンテニル、2−メチル−2−ペンテニル、3−メチル−2−ペンテニル、4−メチル−2−ペンテニル、1−メチル−3−ペンテニル、2−メチル−3−ペンテニル、3−メチル−3−ペンテニル、4−メチル−3−ペンテニル、1−メチル−4−ペンテニル、2−メチル−4−ペンテニル、3−メチル−4−ペンテニル、4−メチル−4−ペンテニル、1,1−ジメチル−2−ブテニル、1,1−ジメチル−3−ブテニル、1,2−ジメチル−1−ブテニル、1,2−ジメチル−2−ブテニル、1,2−ジメチル−3−ブテニル、1,3−ジメチル−1−ブテニル、1,3−ジメチル−2−ブテニル、1,3−ジメチル−3−ブテニル、2,2−ジメチル−3−ブテニル、2,3−ジメチル−1−ブテニル、2,3−ジメチル−2−ブテニル、2,3−ジメチル−3−ブテニル、3,3−ジメチル−1−ブテニル、3,3−ジメチル−2−ブテニル、1−エチル−1−ブテニル、1−エチル−2−ブテニル、1−エチル−3−ブテニル、2−エチル−1−ブテニル、2−エチル−2−ブテニル、2−エチル−3−ブテニル、1,1,2−トリメチル−2−プロペニル、1−エチル−1−メチル−2−プロペニル、1−エチル−2−メチル−1−プロペニル、および1−エチル−2−メチル−2−プロペニル。
他に定義されない限り、用語「アルコキシ」(アルキル−O−)は、酸素原子(−O−)を介して足場に結合したアルキル基、例えば(C1−C18)−、(C1−C6)−または(C1−C4)−アルコキシを指す。例:メトキシ、エトキシ、プロポキシ、1−メチルエトキシなど。
例(しかしこれらに限定されない):(C1−C6)−アルコキシ、例えばメトキシ、エトキシ、1−メチルエトキシ、ブトキシ、1−メチルプロポキシ、2−メチルプロポキシ、1,1−ジメチルエトキシ、ペントキシ、1−メチルブトキシ、2−メチルブトキシ、3−メチルブトキシ、1,1−ジメチルプロポキシ、1,2−ジメチルプロポキシ、2,2−ジメチルプロポキシ、1−エチルプロポキシ、ヘキソキシ、1−メチルペントキシ、2−メチルペントキシ、3−メチルペントキシ、4−メチルペントキシ、1,1−ジメチルブトキシ、1,2−ジメチルブトキシ、1,3−ジメチルブトキシ、2,2−ジメチルブトキシ、2,3−ジメチルブトキシ、3,3−ジメチルブトキシ、1−エチルブトキシ、2−エチルブトキシ、1,1,2−トリメチルプロポキシ、1,2,2−トリメチルプロポキシ、1−エチル−1−メチルプロポキシ、および1−エチル−2−メチルプロポキシ。
同様に、他に定義されない限り、用語「アルケノキシ」および「アルキノキシ」は、それぞれ、−O−を介して足場に結合したアルケニル基またはアルキニル基、例えば(C2−C18)−、(C2−C6)−または(C2−C4)−アルケノキシ、またはそれぞれ、(C3−C10)−、(C3−C6)−または(C3−C4)−アルキノキシを指す。
他に定義されない限り、用語「アルキルカルボニル」(アルキル−C(=O)−)は、−C(=O)を介して足場に結合したアルキル基、例えば(C1−C18)−、(C1−C6)−または(C1−C4)−アルキルカルボニルを指す。したがって、C原子の数は、アルキルカルボニル基内のアルキル基を指す。
同様に、別に定義されない限り、用語「アルケニルカルボニル」および「アルキニルカルボニル」は、それぞれ、−C(=O)を介して足場に結合したアルケニルまたはアルキニル基、例えば(C2−C18)−、(C2−C6)−もしくは(C2−C4)−アルケニルカルボニル、またはそれぞれ(C2−C10)−、(C2−C6)−もしくは(C2−C4)−アルキニルカルボニルを指す。従って、C原子の数は、アルケニルカルボニル基またはアルキニルカルボニル基内のアルケニル基またはアルキニル基をそれぞれ意味する。
別段の定義がない限り、「アルコキシカルボニル」(アルキル−O−C(=O)−)という用語は、−O−C(=O)を介して足場に結合したアルキル基、例えば(C1−C18)−、(C1−C6)−または(C1−C4)−アルコキシ−カルボニルを指す。したがって、C原子の数は、アルコキシカルボニル基内のアルキル基を指す。
同様に、別に定義されない限り、用語「アルケノキシカルボニル」および「アルキノキシカルボニル」は、それぞれ、−O−C(=O)を介して足場に結合したアルケニル基またはアルキニル基、例えば(C2−C10)−、(C2−C6)−もしくは(C2−C4)−アルケノキシカルボニル、またはそれぞれ、(C3−C10)−、(C3−C6)−もしくは(C3−C4)−アルキノキシカルボニルを指す。したがって、C原子の数は、アルケノキシカルボニル基またはアルキノキシカルボニル基内のアルケニル基またはアルキニル基をそれぞれ指す。
他に定義されない限り、用語「アルキルカルボニルオキシ」(アルキル−C(=O)−O−)は、−C(=O)−O−を介して足場に結合したアルキル基、例えば(C1−C10)−、(C1−C6)−または(C1−C4)−アルキルカルボニルオキシを指す。したがって、C原子の数は、アルキルカルボニルオキシ基内のアルキル基を指す。
同様に、別に定義されない限り、「アルケニルカルボニルオキシ」および「アルキニルカルボニルオキシ」という用語は、それぞれ−C(=O)−Oを介して足場に結合したアルケニル基またはアルキニル基、例えば(C2−C10)−、(C2−C6)−または(C2−C4)−アルケニルカルボニルオキシ、または、それぞれ(C2−C10)−、(C2−C6)−または(C2−C4)−アルキニルカルボニルオキシを指す。したがって、C原子の数は、アルケニルカルボニルオキシまたはアルキニルカルボニルオキシ基内のアルケニル基またはアルキニル基をそれぞれ意味する。
好ましい実施形態において、本発明による組成物は、本質的に水を含まない。BCAは、休眠形態の生きている生物である。したがって、低濃度の水を含む、または本質的に水を含まない製剤は、BCAのための好ましい製剤タイプである。他方、特定のBCAはまた、より高い含水量で製剤され得る。水が存在する場合、このような水は主に、乾燥胞子粉末中の残留遊離水、または他の配合物中の微量の水に由来する。従って、これらの事実のために、0〜12重量%、好ましくは0〜8重量%の水濃度が可能であり、この範囲は「本質的に水を含まない」という定義内に入る。換言すれば、「本質的に水を含まない」という用語は、組成物中の水の濃度が12%以下、好ましくは8重量%以下であることを意味する。より好ましくは、水濃度が0〜6重量%、より好ましくは0〜4重量%、例えば2〜4重量%の範囲である。したがって、例示的な水濃度は、2重量%、3重量%、4重量%、5重量%、および6重量%を含む。
本発明による液体調製物において、前記エトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体はのより少ない量で、例えば少なくとも40重量%で存在してもよいと考えられるが、少なくとも50重量%の量で存在することが好ましい。一般に、前記エトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体は、99.9重量%まで、好ましくは70重量%〜97.5重量%、より好ましくは75重量%〜95重量%、最も好ましくは80重量%〜90重量%の範囲の濃度で存在することができる。
本発明による液体調製物は、好ましくは水混和性である。用語「水混和性」は、前記液体が、流体と水との1:200の比、好ましくは1:100の比、より好ましくは1:50の比で組み合わされる場合、均一な混合物を生じることを示す。
1つの好ましい実施形態では、組成物は本質的に油を含まない。本発明に関連して、油は水中で本質的に水混和性でないまたは自己乳化性でない任意の液体、例えば、パラフィン油、脂肪酸トリグリセリド、脂肪酸モノエステル、特定のシリコーン油、芳香族溶媒または他の水不混和性有機溶媒と定義される。「本質的に油を含まない」という用語は、5重量%以下、好ましくは4重量%以下、さらにより好ましくは3重量%以下、最も好ましくは2重量%以下、例えば1重量%、0.1重量%、0.05重量%、またはさらに0.01重量%の油の含有量を指す。本発明の組成物はその成分の製造プロセスのために、微量の油を含有することを排除することができない。本発明の製剤は、そのような痕跡を除いて油を含有しない。
任意の真菌種を本発明に適用することができる。しかしながら、前記真菌胞子は、植物に対して有益な効果を有する真菌種、例えば植物保護における生物的防除剤として有効であるか、または植物成長および/または植物健康を支持または促進するような植物健康促進剤として作用する真菌種に由来することが好ましい。より好ましくは、前記真菌は糸状菌である。
糸状菌は、当業者がよく知っているように、ほとんどの条件下で多細胞性の糸状型で増殖する傾向があることから、主として楕円形または楕円形の酵母細胞の単細胞増殖とは対照的に、酵母と区別される。
前記少なくとも1つの糸状菌は、植物保護または植物成長促進効果など、植物にプラスの効果を及ぼす任意の真菌であってもよい。したがって、前記真菌は、昆虫病原性真菌(an entomopathogenic fungus)、線虫捕食性真菌(a nematophagous fungus)、植物成長促進真菌、細菌または真菌植物病原体などの植物病原体に対して活性な真菌、または除草作用を有する真菌であってよい。
NRRLは、the Agricultural Research Service Culture Collectionの略称であり、特許手続きの目的で微生物の寄託の国際的な認識に関するブダペスト条約の下で微生物株の寄託を目的とする国際寄託機関であり、National Center for Agricultural Utilization Research,Agricultural Research service,U.S.Department of Agriculture,1815 North university Street,Peroira,Illinois 61604 USAに所在する。
ATCCはAmerican Type Culture Collectionの略で、特許手続上の微生物寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の下での微生物株の寄託を目的とする国際寄託機関であり、ATCC Patent Depository,10801 University Blvd.,Manassas,VA 10110 USAの住所を有する。
選択的除草活性を有する菌類はわずかしか知られていない、例えばF2.1 Phoma macrostroma、特に94−44B株;F2.2 Sclerotinia minor、特にIMI 344141株(例えば、Agrium Advanced TechnologiesによるSarritor);F2.3 Colletotrichum gloeosporioides、特にATCC 20358株(例えば、Agricultural Research InitiativesによるCollego(LockDownとしても知られる);F2.4 Stagonospora atriplicis;またはF2.5 Fusarium oxysporum、その異なる株は異なる植物種、例えば雑草Striga hermonthica(Fusarium oxysproum formae specialis strigae)に対して活性である。
植物成長/植物健康を支持し、促進し、または刺激する真菌の例示的な種は、E2.1 Talaromyces flavus、特にV117b株;E2.2 Trichoderma atroviride、特にCNCM I−1237株(例えば、Agrauxine、FRからのEsquive(登録商標)WP)、国際出願第PCT/IT2008/000196号に記載されるSC1株、株番号V08/002387、菌株番号NMI番号V08/002388、株番号NMI番号V08/002389、株番号NMI番号V08/002390、LC52株(例えば、Agrimm Technologies LimitedからのSentinel)、kd株(例えば、Andermatt BiocontrolからのT−Gro)、および/またはLUI32株(例えば、Agrimm Technologies LimitedからのTenet);E2.3 Trichoderma harzianum、特に、ITEM株 908またはT−22(例えば、KoppertからのTrianum−P);E2.4 Myrothecium verrucaria、特に、AARC−0255株(例えば、Valent BiosciencesからのDiTera(登録商標));E2.5 Penicillium bilaii、特に、ATCC 22348株(例えば、Acceleron BioAgからのJumpStart(登録商標))、および/または株ATCC20851;E2.6 Pythium oligandrum、特に、DV74株またはM1株(ATCC 38472;例えば、Bioprepraty、CZからのPolyversum);E2.7 Rhizopogon amylopogon(例えば、Helena Chemical CompanyからのMyco−Solに含まれる);E2.8 Rhizopogon fulvigleba(例えば、Helena Chemical CompanyからのMyco−Solに含まれる);E2.9 Trichoderma harzianum、特にTSTh20株、KD株,特にPlant Health Products, ZAからの製品Eco−T、または株1295−22;E2.10 Trichoderma koningii;E2.11 Glomus aggregatum;E2.12 Glomus clarum;E2.13 Glomus deserticola;E2.14 Glomus etunicatum;E2.15 Glomus intraradices;E2.16 Glomus monosporum;E2.17 Glomus mosseae;E2.18 Laccaria bicolor;E2.19 Rhizopogon luteolus;E2.20 Rhizopogon tinctorus;E2.21 Rhizopogon villosulus;E2.22 Scleroderma cepa;E2.23 Suillus granulatus;E2.24 Suillus punctatapies;E2.25 Trichoderma virens、特にGL−21株;およびE2.26株 Verticillium albo−atrum(以前はV.dahliae)、特にWCS850株(CBS 276.92;例えば、Tree Care InnovationsからのDutch Trig);E2.27 Trichoderma viride、例えば、B35株(Pietr等、1993、Zesz.Nauk.A R w Szczecinie 161:125−137)およびE2.28 Purpureocillium lilacinum(以前はPaecilomyces lilacinusとして知られていた)251株(AGAL 89/030550;例えば、Bayer CropScience Biologics GmbHからのBioAct)。
より好ましい実施形態では、植物の健康および/または成長に有益な効果を有する真菌株は、Talaromyces flavus、VII7b株;Trichoderma harzianum KD株または製品Eco−T中の菌株(Plant Health Products、SZ);Myrothecium verrucaria、特にAARC−0255株;Penicillium bilaii、ATCC22348株;およびPythium oligandrum、DV74株またはM1株(ATCC 38472);Trichoderma virideB35株;Trichoderma atroviride CNCM I−1237株;およびPurpureocillium lilacinum(以前にPaecilomyces lilacinusとして知られている)251株(AGAL 89/030550)から選択される。
さらにより好ましい実施形態において、植物の健康および/または成長に有益な効果を有する真菌株はPenicillium bilaiiATCC 22348株、Trichoderma viride、例えば、B35株、Trichoderma atroviride、CNCM I−1237株およびPurpureocillium lilacinum(以前にPaecilomyces lilacinusとして知られている)251株(AGAL 89/030550)から選択される。
殺細菌活性な真菌は例えば、A2.2 Aureobasidium pullulans、特にDSM14940株の胞胚胞子; A2.3 Aureobasidium pullulans、特にDSM14941株の胞胚胞子またはDSM14940株およびDSM14941株の胞胚胞子の混合物; A2.9 Scleroderma citrinumである。
真菌病原体に対して活性な真菌は、例えばB2.1 Coniothyrium minitans、特にCON/M/91−8株(受託番号DSM−9660;例えば、Bayer CropScience Biologics GmbHからのContans(登録商標));B2.2 Metschnikowia fructicola、特にNRRL Y−30752株;B2.3 Microsphaeropsis ochrace、特にP130A株(ATCC deposit 74412);B2.4 Muscodor albus、特にQST 20799株(受託番号NRL30547);B2.5 Trichoderma harzianum rifai、特にKRL−AG2株(T−22株、/ATCC 208479としても知られており、例えばPLANTSHIELD T−22G、Rootshield(登録商標)、およびBioWorks、USからのTurfShield)およびT39株(Makhteshim, USからのTrichodex(登録商標));B2.6 Arthrobotrys dactyloides;B2.7 Arthrobotrys oligospora;B2.8 Arthrobotrys superba;B2.9 Aspergillus flavus、特にNRRL 21882株(例えば、SyngentaからのAfla−Guard(登録商標))またはAF36株(例えば、Arizona Cotton Research and Protection Council、USからのAF36);B2.10 Gliocladium rosea(Clonostachys rosea f. roseaとしても知られている)、特にAdjuvants Plusからの321U株、Xue(Efficacy of Clonostachys rosea strain ACM941 and fungicide seed treatments for controlling root tot complex of field pea、Can Jour Plant Sci 83(3): 519−524)に開示されているACM941株、IK726株 (Jensen DF等、. Development of a biocontrol agent for plant disease control with special emphasis on the near commercial fungal antagonist Clonostachys rosea strain ‘IK726’;Australas Plant Pathol. 2007;36:95−101), 88−710株 (WO2007/107000),CR7株(WO2015/035504)またはCRrO,CRMおよびCRr2株(WO2017109802に開示されている);B2.11 Phlebiopsis(またはPhlebiaまたはPeniophora)gigantea、特にVRA 1835株(ATCC 90304)、VRA 1984株(DSM16201)、VRA 1985株(DSM16202)、VRA 1986株(DSM16203)、FOC PG B20/5株(IMI390096),FOC PG SP log6株(IMI390097)、FOC PG SP log5株(IMI390098)、FOC PG BU3株(IMI390099)、FOC PG BU4株(IMI390100)、FOC PG 410.3株(IMI390101)、 FOC PG 97/1062/116/1.1株(IMI390102) FOC PG B22/SP1287/3.1株(IMI390103)、 FOC PG SH1株(IMI390104)および/または FOC PG B22/SP1190/3.2株(IMI390105)(Phlebiopsis製品は、例えばVerderaおよびFINからの Rotstop(登録商標)、e−nema,DEからのPG−Agromaster(登録商標)、PG−Fungler(登録商標)、PG−IBL(登録商標)、PG−Poszwald(登録商標)およびRotex(登録商標));B2.12 Pythium oligandrum、特にDV74またはM1株(ATCC 38472;例えば Bioprepraty,CZからのPolyversum from);B2.13 Scleroderma citrinum;B2.14 Talaromyces flavus,特にV117b株;B2.15 Trichoderma asperellum、特にIsagroからのICC 012株またはSKT−1株(例えば、Kumiai Chemical Industry からのECO−HOPE(登録商標))、T34株(例えば、 Biobest Group NV からのASPERELLO(登録商標)およびBiocontrol Technologies S.L.,ESによるT34 BIOCONTROL(登録商標));B2.16 Trichoderma atroviride、特にCNCM I−1237株(例えば、Agrauxine,FRからのEsquive(登録商標)WP)、SC1株(国際出願番号PCT/IT2008/000196に記載されている)、77B株(Andermatt Biocontrol からのT77)、株番号V08/002387、株NMI番号V08/002388、株NMI番号V08/002389、株NMI番号V08/002390、LC52株(例えば、Agrimm Technologies LimitedからのSentinel)、LUI32株(例えば、Agrimm Technologies LimitedによるTenet)、ATCC 20476株 (IMI 206040)、T11株(IMI352941/CECT20498)、SKT−1株(FERM P−16510)、SKT−2株(FERM P−16511)、SKT−3株(FERM P−17021);B2.17 Trichoderma harmatum;;B2.18 Trichoderma harzianum、特に、KD株、T−22株(例えば、KoppertからのTrianum−P)、TH35株(例えば、MycontrolによるRoot−Pro)、DB 103株(例えば、 Dagutat BiolabによるT−Gro 7456);B2.19 Trichoderma virens(Gliocladium virensとしても知られている)、特にGL−21株(例えば、Certis,USによるSoilGard);B2.20 Trichoderma viride、特にTV1株(例えばKoppertによるTrianum−P)、B35株(Pietr等、1993,Zesz.Nauk.A R w Szczecinie 161:125−137);B2.21 Ampelomyces quisqualis、特にAQ 10株(例えば、CBC Europe, Italy によるAQ 10(登録商標));B2.22 Arkansas fungus 18,ARF;B2.23 Aureobasidium pullulans、特にDSM14940株の芽胞子、DSM 14941株の芽胞子またはDSM14940株およびDSM 14941株の芽胞子の混合物(例えば、bio−ferm,CHによるBotector(登録商標));B2.24 Chaetomium cupreum (例えば、AgriLifeによるBIOKUPRUM TM);B2.25 Chaetomium globosum(例えば、RivaleによるRivadiom);B2.26 Cladosporium cladosporioides、特にH39株(Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoekによる);B2.27 Dactylaria candida;B2.28 Dilophosphora alopecuri(例えば、Twist Fungus);B2.29 Fusarium oxysporum、特にFo47株(例えば、Natural Plant ProtectionによるFusaclean);B2.30 Gliocladium catenulatum(同義語:Clonostachys rosea f.catenulate)、特にJ1446株(例えば、LallemandによるPrestop(登録商標));B2.31 Lecanicillium lecanii(以前は、Verticillium lecaniiとして知られていた)、特にKV01株の分生子(例えば、Koppert/ArystaによるVertalec(登録商標));B2.32 Penicillium vermiculatum;;B2.33 Trichoderma gamsii (以前のT.viride)、特にICC080株(IMI CC 392151 CABI、例えばAGROBIOSOL DE MEXICO,S.A.DE C.V.によるBioDerma);B2.34 Trichoderma polysporum、特にIMI 206039株(例えば、BINAB Bio−Innovation AB,SwedenによるBinab TF WP);B2.35 Trichoderma stromaticum(例えば、Ceplac, BrazilによるTricovab);B2.36 Tsukamurella paurometabola、特にC−924株(例えば、HeberNem(登録商標));B2.37 Ulocladium oudemansii、特にHRU3株(例えば、Botry−Zen Ltd,NZによるBotry−Zen(登録商標));B2.38 Verticillium albo−atrum (以前はV.dahliae)、特にWCS850株(CBS 276.92;例えば、Tree Care InnovationsによるDutch Trig);B2.39 Muscodor roseus、特にA3−5株(Accession No.NRRL 30548);B2.40 Verticillium chlamydosporium;B2.41 Trichoderma asperellum ICC 012株およびTrichoderma gamsii株ICC 080の混合物(例えばBayer CropScience LP, USからのBIO−TAM(登録商標)として知られている製品),B2.42 Simplicillium lanosoniveumおよびB2.43 Trichoderma fertile (例えば、BASFからの製品TrichoPlus)。
好ましい実施形態において、殺菌活性を有する生物的防除剤はConiothyrium minitans、特にCON/M/91−8株(受託番号DSM−9660)Aspergillus flavus、NRRL21882株(SyngentaからAfla−Guard(登録商標)として入手可能)およびAF36株(Arizona Cotton Research and Protection Council、USから入手可能);Gliocladium roseum321U株、ACM941株、IK726株、88−710株(WO2007/107000)、CR7株(WO2015/035504);Gliocladium catenulatumJ1446株;Phlebiopsis(またはPhlebiaまたはPeniophora)gigantea、特にVRA 1835株(ATCC 90304)、VRA 1984株(DSM16201)、VRA 1985株(DSM16202)、VRA 1986株(DSM16203)、FOC PG B20/5株(IMI390096)、FOC PG SP log 6株(IMI390097)、FOC PG SP log5株(IMI390098)、FOC PG BU3株(IMI390099)、FOC PG BU4株(IMI390100)、FOC PG 410.3株(IMI39010101)、FOC PG 97/1062/116/1.1株(IMI390102)、FOC PG B22/SP1287/3.1株(IMI390103)、 FOC PG SH1株(IMI390104)、FOC PG B22/SP1190/3.2株(IMI390105)(VerderaおよびFINからRotstop(登録商標)として入手可能、e−nema,DEからPG−Agromaster(登録商標)、PG−Fungler(登録商標)、PG−IBL(登録商標)、PG−Poszwald(登録商標)、およびRotex(登録商標)として入手可能);Pythium oligandrum、DV74株またはM1株(ATCC 38472)(Bioprepraty、CZからPolyversumとして入手可能);Talaromyces flavus、VII7B株;Ampelomyces quisqualis、特にAQ 10株(CBC Europe、ItalyからAQ 10(登録商標)として入手可能);Gliocladium catenulatum(同義語:Clonostachys rosea f. catenulate)J1446株、Cladosporium cladosporioides、例えばH39株(Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoekによる)、Trichoderma virens(Gliocladium virensとしても知られる)、特にGL−21株(例えばCertis、USによるSoilGard)、Trichoderma atroviride CNCM I−1237株、77B株、LU132株またはSC1株(受託番号CBS 122089を有する)、Trichoderma harzianumT−22株(例えば、Andermatt BiocontrolまたはKoppertからのTrianum−P)、Trichoderma asperellum株SKT−1(受託番号FERM P−16510を有する)または株T34、Trichoderma virideB35株およびTrichoderma asperelloides JM41R(受託番号NRRL B−50759)から選択される。
より好ましい実施形態において、殺菌活性を有する真菌種は、Coniothyrium minitans、特にCON/M/91−8株(受託番号DSM−9660)(Prophyta、DEからContans(登録商標)として入手可能);Gliocladium roseum321U株、ACM941株またはIK726株;Gliocladium catenulatumJ1446株;Trichoderma virens(Gliocladium virensとしても知られる)GL−21株から選択される。前記真菌種はまた、好ましくは、Coniothyrium minitansCON/M/91−8株(受託番号DSM−9660)またはGliocladium catenulatumJ1446株またはTrichoderma atroviride CNCM I−1237株またはTrichoderma viride株B35であってもよい。
殺菌活性真菌の中では、Trichoderma属、特にTrichoderma virideおよびTrichoderma atroviride種が特に好ましい。それらには、Trichoderma atroviride CNCM I−1237株;Trichoderma atrovirideSC1株(受託番号CBS 122089を有する)、WO 2009/116106および米国特許第8,431,120号(Bi−PAから); Trichoderma atroviride77B株;Trichoderma atrovirideLU132株;Trichoderma virideB35株が含まれる。特に好ましいのは、Trichoderma atroviride CNCM I−1237株およびTrichoderma virideB35株である。
前記真菌種は昆虫病原性真菌である可能性がある。
昆虫に対して活性な真菌(昆虫病原性真菌)には、C2.1 Muscodor albus、特にQST 20799株(受託番号NRRL 30547);C2.2 Muscodor roseus、特にA3−5株(受託番号NRRL 30548);C2.3 Beauveria bassiana、特にATCC 74040株(例えば、Intrachem Bio ItaliaからのNaturalis(登録商標));GHA株(受託番号ATCC74250;例えば、Laverlam International CorporationからのBotaniGuard EsおよびMycotrol−O);ATP02株(受託番号DSM 24665);PPRI 5339株(例えばBASFからのBroadBand(登録商標));PPRI 7315株、R444株(たとえば、Andermatt BiocontrolからのBb−Protec)、IL197、IL12、IL236、IL10、IL131、IL116株(Jaronski、2007. Use of Entomopathogenic Fungi in Biological Pest Management, 2007: ISBN: 978−81−308−0192−6を参照)、Bv025株(例えば、Garcia等、Manejo Integrado de Plagas y Agroecologia (Costa Rica) No. 77を参照);BaGPK株;ICPE 279株、CG 716株(Novozymes
からのBoveMax(登録商標));C2.4 Hirsutella citriformis; C2.5 Hirsutella thompsonii (例えば、Agro Bio−tech Research Centre, INからのMycohit and ABTEC);C2.6 Lecanicillium lecanii株(以前はVerticillium lecaniiとして知られていた)、特にKV01株の分生子(Koppert/ArystaからのMycotal(登録商標)およびVertalec(登録商標))、DAOM198499株またはDAOM216596株;C2.9 Lecanicillium muscarium株(以前はVerticillium lecanii株)、特にVE 6/ CABI(=IMI)268317/ CBS102071/ ARSEF5128株(例えば、Koppert からのMycotal);C2.10 Metarhizium anisopliae var acridum、例えばGreenGuard by Becker Underwood, US からのARSEF324株または分離株IMI 330189 (ARSEF7486;例えば、Biological Control ProductsによるGreen Muscle);C2.11 Metarhizium brunneum、例えば、Cb 15株(例えば、BIOCAREからのATTRACAP(登録商標));C2.12 Metarhizium anisopliae、例えば、ESALQ 1037株(例えば、Metarril(登録商標) SP Organic由来)、E−9株(例えば、Metarril(登録商標)SP Organic由来)、M206077株、C4−B株(NRRL 30905)、ESC1株、15013−1株(NRRL 67073)、3213−1株(NRRL 67074)、C20091株、C20092株、F52株(DSM3884/ ATCC 90448;例えば、Bayer CropScience社によるBio 1020およびNovozymesによるMet52)またはICIPE 78;C2.15 Metarhizium robertsii 23013−3 (NRRL 67075);C2.13 Nomuraea rileyi;C2.14 Paecilomyces fumosoroseus(新:Isaria fumosorosea)、特にApopka 97株(Certis,USAからのPreFeRalとして入手可能)、Fe9901(Natural industries,USAからのNoFlyとして入手可能)、ARSEF 3581、ARSEF 3302、ARSEF 2679(ARS Collection of Entomopathogenic Fungal Cultures,Ithaca,USA)、IfB01(China Center for Type Culture Collection CCTCC M2012400)、ESALQ1296、ESALQ1364、ESALQ1409(ESALQ:University of Sao Paulo(Piracicaba,SP,Brazil))、CG1228(EMBRAPA Genetic Resources and Biotechnology(Brasilia,DF,Brazil))、KCH J2(Dymarska等、2017;PLoS one 12(10)):e0184885)、HIB−19、HIB−23、HIB−29、HIB−30(Gandarilla−Pacheco等、2018;Rev Argent Microbiol 50:81−89)、CHE−CNRCB 304、EH−511/3(Flores−Villegas等、2016;Parasites & Vectors 2016 9:176 doi:10.1186/s13071−016−1453−1)、CHE−CNRCB 303、CHE−CNRCB 305、CHE−CNRCB 307(Gallou等、2016;fungal biology 120(2016)414−423)、EH−506/3、EH−503/3、EH−520/3、PFCAM、MBP、PSMB1(National Center for Biololgical Control,Mexico;Castellanos−Moguel等、2013;Revista Mexicana De Micologia 38:23−33,2013),RCEF3304(Meng等、2015;Genet Mol Biol.2015 Jul−Sep; 38(3):381−389),PF01−N10(CCTCC No.M207088)、CCM 8367(Czech Collection of Microorganisms,Brno)、SFP−198 (Kim等、2010;Wiley Online:DOI 10.1002/ps.2020)、K3(Yanagawa等、2015; J Chem Ecol. 2015; 41(12): 118−1126)、CLO 55(Ansari Ali等、2011;PLoS One.2011;6(1):e16108.DOI:10.1371/journal.pone.0016108)、IfTS01、IfTS02、IfTS07(Dong等、2016/PLoS ONE 11(5):e0156087.doi:10.1371/journal.pone.0156087)、P1(Sun Agro Biotech Research Centre, India)、If−02、If−2.3、If−03(Farooq and Freed,2016;DOI:10.1016/j.bjm.2016.06.002)、Ifr AsC(Meyer等、2008;J. Invertebr.Pathol.99:96−102.10.1016/j.jip.2008.03.007)、PC−013(DSMZ 26931)、P43A、PCC(Carrillo−Perez等、2012;DOI 10.1007/s11274−012−1184−1)、Pf04、Pf59、Pf109(KimJun等、2013;Mycobiology 2013 Dec;41(4):221−224)、FG340(Han等、2014;DOI:10.5941/MYCO.2014.42.4.385)、Pfr1、Pfr8、Pfr9、Pfr10、Pfr11、Pfr12(Angel−Sahagun等、2005;Journal of Insect Science)、Ifr531(Daniel and Wyss,2009;DOI 10.1111/j.1439−0418.2009.01410.x)、IF−1106(Insect Ecology and Biocontrol Laboratory,Shanxi Agricultural University)、I9602、I7284(Hussain等、2016,DOI:10.3390/ijms17091518)、I03011(Patent US 4618578)、CNRCB1(Centro Nacional de Referencia de Control Biologico (CNRCB),Colima,Mexico),SCAU−IFCF01(Nian等、2015;DOI:10.1002/ps.3977)、PF01−N4(Engineering Research Center of Biological Control,SCAU,Guangzhou,P.R.China) Pfr−612(Institute of Biotechnology(IB−FCB−UANL),Mexico)、Pf−Tim、Pf−Tiz、Pf−Hal、Pf−Tic(Chan−Cupul等、2013,DOI:10.5897/AJMR12.493);C2.15 Aschersonia aleyrodis;C2.16 Beauveria brongniartii(例えば、Andermatt Biocontrol AGからのBeaupro);C2.17 Conidiobolus obscurus;C2.18 Entomophthora virulenta(例えば、EcomicからのVektor);C2.19 Lagenidium giganteum;C2.20 Metarhizium flavoviride;C2.21 Mucor haemelis(例えば、BioAvard from Indore Biotech Inputs & Research);C2.22 Pandora delphacis;C2.23 Sporothrix insectorum(例えば、Biocerto,BRからのSporothrix Es);C2.24 Zoophtora radicansを含む。
好ましい実施形態において、殺虫効果を有する真菌株はC2.3 Beauveria bassianaATCC74040株;GHA株(受託番号ATCC74250);株ATP02(受託番号DSM 24665);PPRI 5339株;PPRI 7315株、R444株、IL197株、IL12株、IL236株、IL10株、IL131株、IL116株;BaGPK株;ICPE 279株、CG 716株;C2.6 Lecanicillium lecanii(以前はVerticillium lecaniiとして知られていた)、特にKV01株の分生子、DAOM198499株またはDAOM216596株;C2.9 Lecanicillium muscarium(以前のVerticillium lecanii) VE 6株/CABI(=IMI) 268317株/CBS102071株/ARSEF5128株;C2.10 Metarhizium anisopliae var acridum ARSEF324株または分離株IMI 330189(ARSEF7486);C2.11 Metarhizium brunneum Cb 15株;C2.12 Metarhizium anisopliae、例えばESALQ 1037株、E−9株、M206077株、C4−B株(NRRL 30905)、ESC1株、15013−1株(NRRL 67073)、3213−1株(NRRL 67074)、C20091株、C20092株、F52株(DSM3884/ ATCC 90448)またはICIPE 78株;C2.14 Paecilomyces fumosoroseus(新:Isaria fumosorosea) Apopka 97株、Fe9901株、ARSEF 3581株、ARSEF 3302株、ARSEF 2679株、IfB01株(China Center for Type Culture Collection CCTCC M2012400)、ESALQ1296株、ESALQ1364株、ESALQ1409株、CG1228株、KCH J2株、HIB−19株、HIB−23株、HIB−29株、HIB−30株、CHE−CNRCB 304株、EH−511/3株、CHE−CNRCB 303株、CHE−CNRCB 305株、CHE−CNRCB 307株、EH−506/3株、EH−503/3株、EH−520/3株、PFCAM株、MBP株、PSMB1株、RCEF3304株、PF01−N10株(CCTCC No.M207088)、CCM 8367株、SFP−198株、K3株、CLO 55株、IfTS01株、IfTS02株、IfTS07株、P1株、If−02株、If−2.3株、If−03株、Ifr AsC株、PC−013株(DSMZ 26931)、P43A株、PCC株、Pf04株、Pf59株、Pf109株、FG340株、Pfr1株、Pfr8株、Pfr9株、Pfr10株、Pfr11株、Pfr12株、Ifr531株、IF−1106株、I9602株、I7284株、I03011株(Patent US 4618578)、CNRCB1株、SCAU−IFCF01株、PF01−N4株、Pfr−612株、Pf−Tim株、Pf−Tiz株、Pf−Hal株およびPf−Tic.株;およびC2.16 Beauveria brongniartii(例えば、Andermatt Biocontrol AGからのBeaupro)から選択される。
より好ましい実施形態において、殺虫効果を有する真菌株はC2.3 Beauveria bassianaATCC74040株;GHA株(受託番号ATCC74250);ATP02株(登録番号DSM 24665);PPRI 5339株;PPRI 7315株および/または株R444株;C2.6 Lecanicillium lecanii(以前はVerticillium lecaniiとして知られていた)、KV01株、DAOM198499株またはDAOM216596株の分生子;C2.9 Lecanicillium muscarium (以前のVerticillium lecanii)、特にVE 6株/CABI(=IMI) 268317株/CBS102071株/ARSEF5128株;C2.10 Metarhizium anisopliae var acridumARSEF324株または分離株IMI 330189(ARSEF7486);C2.11 Metarhizium brunneumCb 15株;C2.12 Metarhizium anisopliaeESALQ 1037株、E−9株、M206077株、C4−B株(NRL 30905)、ESC1株、15013−1株(NRL 67073)、3213−1株(NRL 67074)、C20091株、C20092株、F52株(DSM3884/ ATCC 90448)またはICIPE 78株;C2.14 Paecilomyces fumosoroseus(新規:Isaria fumosorosea)Apopka 97株およびFe9901、ならびにC2.16 Beauveria brongniartii(例えば、Andermatt Biocontrol AGからのBeaupro)から選択される。
前記真菌微生物はIsaria fumosorosea種の菌株であることがさらに好ましい。
Isaria fumosoroseaの好ましい株は、Apopka 97、Fe9901、ARSEF 3581、ARSEF 3302、ARSEF 2679、IfB01(China Center for Type Culture Collection CCTCC M2012400)、ESALQ1296、ESALQ1364、ESALQ1409、CG1228、KCH J2、HIB−19、HIB−23、HIB−29、HIB−30、CHE−CNRCB 304、EH−511/3、CHE−CNRCB 303、CHE−CNRCB 305、CHE−CNRCB 307、EH−506/3、EH−503/3、EH−520/3、PFCAM、MBP、PSMB1、RCEF3304、PF01−N10(CCTCC No. M207088)、CCM 8367、SFP−198、K3、CLO 55、IfTS01、IfTS02、IfTS07、P1、If−02、If−2.3、If−03、Ifr AsC、PC−013(DSMZ 26931)、P43A、PCC、Pf04、Pf59、Pf109、FG340、Pfr1、Pfr8、Pfr9、Pfr10、Pfr11、Pfr12、Ifr531、IF−1106、I9602、I7284、I03011(米国特許4618578)、CNRCB1、SCAU−IFCF01、PF01−N4、Pfr−612、Pf−Tim、Pf−Tiz、Pf−Hal、Pf−Ticからなる群から選択される。
前記Isaria fumosorosea株がApopka 97およびFe9901から選択されることが最も好ましい。特に好ましい株はAPOPKA97である。
また、特に好ましいのはMetarhizium属の昆虫病原性真菌である。Metahrizium属は、最近再分類されたいくつかの種で構成されている(概要についてはBischoff等、2009; Mycologia 101(4):512−530を参照のこと)。Metarhizium属のメンバーは、M.pingshaense、M.anisopliae、M.robertsii、M.brunneum(これらの4つはMetarhizium anisopliae複合体とも呼ばれる)、M.acridum、M.majus、M.guizouense、M.Lepidiotae、M.GlobosumおよびM.rileyi(以前はNomuraea rileyiとして知られている)。これらの中で、M.anisopliae、M.robertsii、M.brunneum、M.acridumおよびM.rileyiがさらに好ましく、一方でM.brunneumのものが最も好ましい。
特に好ましいMetarhiziumに属する例示的な株はMetarhizium acridum ARSEF324(BASFによる製品GreenGuard)または分離株IMI 330189(ARSEF7486;例えば、Biological Control ProductsによるGreen Muscle);Metarhizium brunneumCb 15株(例えば、BIOCAREからのATTRACAP(登録商標))、またはF52株(DSM3884/ ATCC90448;例えば、Bayer CropScienceによるBIO 1020およびNovozymesによるMet52);Metarhizium anisopliae複合株ESALQ 1037株またはESALQ E−9株(いずれもMetarril(登録商標) WP Organic由来)、M206077株、C4−B株(NRRL 30905)、ESC1株、15013−1株(NRRL 67073)、3213−1株(NRRL 67074)、C20091株、C20092株、またはICIPE 78株。最も好ましいのは、主に甲虫幼虫に感染し、元々Otiorhynchus sulcatusの防除のために開発された分離株F52(別名Met52)であるおよびイナゴ防除に商業的に使用されているARSEF324である。F52分離株に基づく市販製品は個々の分離株F52の継代培養物であり、以下の培養コレクションに含まれる: Julius Kuhn−Institute for Biological Control(以前はBBA)、Darmstadt,Germany:[M.a.43として];HRI,UK:[275−86(頭字語V275またはKVL 275)];KVL Denmark[KVL 99−112(Ma 275またはV 275)];Bayer,Germany[DSM 3884];ATCC,USA[ATCC 90448];USDA、Ithaca、USA[ARSEF 1095]。この分離株に基づく顆粒および乳化可能な濃縮製剤はいくつかの会社によって開発され、苗床の観葉植物およびソフトフルーツのキンケクチブトゾウムシ、他の甲虫(Coleoptera)、温室の観葉植物のミカンキイロアザミウマならびに芝生中のアメリカコバネナガカメムシに対して使用するためにE
Uおよび北米(米国およびカナダ)で登録されている。
Beauveria bassianaは大量生産され、コナジラミ、アザミウマ、アブラムシおよびゾウムシを含む多種多様な昆虫害虫の管理に用いられる。Beauveria bassianaの好ましい株としては、ATCC 74040株;GHA株(受託番号ATCC74250);ATP02株(受託番号DSM 24665);PPRI 5339株;PPRI 7315株、IL197株、IL12株、IL236株、IL10株、IL131株、IL116株、Bv025株;BaGPK株;ICPE 279株、CG 716株;ESALQPL63株、ESALQ447株およびESALQ1432株、CG1229株、IMI389521株、NPP111B005株、Bb−147株が挙げられる。Beauveria bassiana株は、ATCC 74040株およびGHA株(受託番号ATCC74250)を含むことが最も好ましい。前記真菌種が殺線虫活性真菌で請求項1〜17のいずれか1項に記載の液体製剤。
殺線虫活性真菌種には、D2.1 Muscodor albus、特にQST 20799株(受託番号NRRL 30547);D2.2 Muscodor roseus、特にA3−5株(受託番号NRRL 30548);D2.3 Purpureocillium lilacinum(以前はPaecilomyces lilacinusとして知られていた)、特にP.lilacinum251株(AGAL 89/030550;例えば、Bayer CropScience Biologics GmbHからのBioAct)、580株(LaverlamによるBIOSTAT(登録商標) WP(ATCC番号38740))、製品BIO−NEMATON(登録商標)(T.Stanes and Company Ltd.)中の菌株、製品MYSIS(登録商標)(Varsha Bioscience and Technology India Pvt Lt.)の菌株、製品BIOICONEMA(登録商標)(Nico Orgo Maures, India)中の菌株、製品NEMAT(登録商標)(Ballagro Agro Tecnologia Ltda,Brazil)中の菌株、および製品SPECTRUM PAE L(登録商標)(Promotora Tecnica Industrial,S.A.DE C.V.,Mexico)中の菌株;D2.4 Trichoderma koningii;D2.5 Harposporium anguillullae;D2.6 Hirsutella minnesotensis;D2.7 Monacrosporium cionopagum;D2.8 Monacrosporium psychrophilum;D2.9 Myrothecium verrucaria、特にAARC−0255株(例えば、Valent BiosciencesのDiTeraTM);D2.10 Paecilomyces variotii、Q−09株(Quimia, MXのNemaquim(登録商標));D2.11 Stagonospora phaseoli(例えば、Syngentaから);D2.12 Trichoderma lignorum、特にTL−0601株(例えば、Futureco Bioscience、ESからのMycotric);D2.13 Fusarium solani、Fs5株;D2.14 Hirsutella solani;D2.15 Monacrosporium drechsleri;D2.16 Monacrosporium gephyropagum;D2.17 Nematoctonus geogenius;D2.18 Nematoctonus leiosporus;D2.19 Neocosmospora vasinfecta;D2.20 Paraglomus sp,特にParaglomus brasilianum;D2.21 Pochonia chlamydosporia(Vercillium chlamydosporiumとしても知られている)、特にvar.catenulata(IMI SD 187;例えば、The National Center of Animal and Plant Health (CENSA),CUからのKlamiC);D2.22 Stagonospora heteroderae; D2.23 Meristacrum asterospermumおよびD2.24 Duddingtonia flagransを含む。
より好ましい実施形態において、殺線虫効果を有する真菌株は、Purpureocillium lilacinum、特にPlilacinum251株(AGAL 89/030550);Harposporium anguillullae;Hirsutella minnesotensis;Monacrosporium cionopagum;Monacrosporium psychrophilum;Myrothecium verrucaria、AARC−0255株;Paecilomyces variotii; Stagonospora phaseoli(Syngentaから市販されている);およびDuddingtonia flagransの胞子から選択される。
さらにより好ましい実施形態において、殺線虫効果を有する真菌株は、Purpureocillium lilacinum、特にP.lilacinum251株(AGAL 89/030550);およびDuddingtonia flagransの胞子から選択される。最も好ましくは、殺線虫効果を有する前記真菌株がPurpureocillium lilacinum種、特にP.lilacinum251株からである。
胞子を産生し、生物的防除剤および/または植物成長促進剤として作用する真菌微生物は当該分野で公知の方法に従って、または本出願に記載されるように、適切な基質上で、例えば、浸漬発酵または固体発酵によって、例えば、WO2005/012478またはWO1999/057239に開示されるようなデバイスおよび方法を使用して培養または発酵される。
ミクロ菌核(microsclerotia)(例えば、Jackson and Jaronski (2009). Production of microsclerotia of the fungal entomopathogen Metarhizium anisopliae and their potential for use as a biocontrol agent for soil−inhabiting insects;Mycological Research 113,pp.842−850を参照されたい)のような特定の真菌繁殖体は液体発酵技術によって産生され得るが、本発明による休眠構造または器官は固相発酵によって産生されることが好ましい。固相発酵技術は当技術分野で周知である(概要については、Gowthaman等、2001.Appl Mycol Biotechnol (1),p.305−352を参照されたい)。
発酵後、真菌胞子を基質から分離することができる。真菌胞子が存在する基質は、好ましくは任意の分離工程の前に乾燥される。微生物または真菌胞子は、分離後、例えば凍結乾燥、真空乾燥または噴霧乾燥を介して乾燥させることができる。乾燥胞子を調製する方法は当技術分野で周知であり、流動床乾燥、噴霧乾燥、真空乾燥および凍結乾燥を含む。分生子は2段階で乾燥され得る:固相発酵によって産生された分生子についてはまず、分生子で覆われた培養基質を乾燥させてから、乾燥された培養基質から分生子を収穫し、それによって純粋な分生子粉末を得る。次いで、分生子粉末はそれを貯蔵または製剤する前に、真空乾燥または凍結乾燥を使用してさらに乾燥される。
本発明による液体調製物は、界面活性剤、レオロジー調整剤、消泡剤、酸化防止剤および染料の群から選択される少なくとも1つの物質をさらに含み得る。
非イオン性および/またはアニオン性界面活性剤は、農薬に慣用的に使用することができるこのタイプの全ての物質である。可能な非イオン性界面活性剤は、ポリエチレンオキシド−ポリプロピレンオキシドブロックコポリマー、分岐または直鎖アルコールのポリエチレングリコールエーテル、脂肪酸または脂肪酸アルコールとエチレンオキシドおよび/またはプロピレンオキシドとの反応生成物、さらに分岐または直鎖アルキルエトキシレートおよびアルキルアリールエトキシレート(ここで、ポリエチレンオキシド−ソルビタン脂肪酸エステルが例として挙げられ得る)の群から選択される。上記の例の中から、選択されたクラスは場合により、リン酸処理され、塩基で中和され得る。アルキルスルホン酸またはアルキルリン酸ならびにアルキルアリールスルホン酸またはアルキルアリールリン酸のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩およびアンモニウム塩が好ましい。アニオン性界面活性剤または分散助剤のさらなる好ましい群は、ポリスチレンスルホン酸のアルカリ金属、アルカリ土類金属およびアンモニウム塩、ポリビニルスルホン酸の塩、アルキルナフタレンスルホン酸の塩、ナフタレンスルホン酸−ホルムアルデヒド縮合生成物の塩、ナフタレンスルホン酸、フェノールスルホン酸およびホルムアルデヒドの縮合生成物の塩、およびリグノスルホン酸の塩である。
レオロジー調整剤は、増粘剤、固化防止剤、粘度調整剤または構造化剤としても知られており、例えば(不可逆的な)沈降を防止するために、本発明の製剤に添加してもよい。レオロジー調整剤は、好ましくはミネラルから誘導される。これらのレオロジー制御剤は、製剤が静止状態または貯蔵状態にあるときに長期間の安定性を提供する。好適な化合物は、親水性および疎水化ヒュームドシリカ粒子および沈降シリカ粒子、ベントナイト、ヘクトライト、ラポナイト、アタパルジャイト、セピオライト、スメクタイトを含むゲル化粘土(gelling clays)、または疎水性/有機親和性変性ベントナイトからなる群から選択されるレオロジー調整剤である。本発明による液体調製物中のレオロジー調整剤の好適な範囲は、0〜10%、好ましくは0〜7%、より好ましくは0.5〜5%を含む。
他に定義されない限り、本出願における%は重量%を意味する。
所与の流体中にシリカまたは粘土増粘剤を分散させるためには、当技術分野で知られているように、ゲルを形成するために高剪断混合が望ましい。
ヒュームド(発熱性)親水性または疎水化シリカの主要な世界的生産者は、Evonik(商標名Aerosil(登録商標))、Cabot Corporation(商標名Cab−O−Sil(登録商標))、Wacker Chemie(HDK製品範囲)、Dow Corning、およびOCI(Konasil(登録商標))である。好適なレオロジー調整剤の別のクラスは沈降シリカであり、主要な世界的生産者は、Evonik(商標名Sipernat(登録商標)またはWessalon(登録商標))、Rhodia(Tixosil)およびPPG Industries(Hi−Sil)である。
レオロジー調整剤のための別のクラスの適切な例は、粘土増粘剤である。粘土増粘剤は一般に、広範囲の用途に有効な増粘剤であり得る微粉化層状ケイ酸塩である。それらは、典型的にはそれらの非疎水化または疎水化形態のいずれかで使用される。それらを非水性溶媒中に分散可能にするために、粘土表面は、通常、第四級アンモニウム塩で処理される。これらの変性粘土は、有機変性粘土増粘剤として知られている。場合により、少量の低分子量のアルコールまたは水を活性化剤として使用することができる。このような粘土ベースのレオロジー調整剤の例には、スメクタイト、ベントナイト、ヘクトライト、アタパルジャイト、セピオライトまたはモンモリロナイト粘土が含まれる。
好ましいレオロジー調整剤(b)は例えば、Bentone(登録商標)38およびSD3などの有機変性ヘクトライト粘土、Bentone(登録商標)34、SD1およびSD2などの有機変性ベントナイト粘土、Pangel(登録商標)B20などの有機変性セピオライト、Aerosil(登録商標)200などの親水性シリカ、Aerosil(登録商標)R972、R974およびR812Sなどの疎水化シリカ、Attagel(登録商標)50などのアタパルジャイトである。
レオロジー調整剤の別の好適な例は、変性水素化ヒマシ油(トリヒドロキシステアリン)に基づく有機レオロジー調整剤、またはThixcin(登録商標)RおよびThixatrol(登録商標)STなどのヒマシ油有機誘導体である。
選択されたレオロジー調整剤の物理的性質
Figure 2021525545
Figure 2021525545
好ましい実施形態では、レオロジー調整剤の濃度が0〜10重量%、例えば1〜7または3〜6重量%の範囲である。特に、レオロジー調整剤の濃度は0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、7、8または9重量%であり得、本質的に、生物的防除剤の物理的特性ならびに担体液体の物理的特性に依存する。一般に、本発明による製剤中のレオロジー調整剤の濃度はまた、生物的防除剤に依存し得る。
消泡剤は水で希釈する際の泡立ちを防止するために、本製剤に添加してもよい。好適な消泡剤は例えば、パラフィン油、植物油、シリコーン油(例えば、SolvayからのSilcolapse 411、Silcolapse 454、Silcolapse 482;WackerからのSilfoam SC1132、Silfoam SC132;DowからのXiameter ACP−0100)、または水性シリコーン油エマルジョン(例えば、SAG30、SAG1572/Momentive、Silcolapse 426R、Silcolapse 432/Solvay;Silfar SE4/Wacker;Antifoam 8830/Harcros Chemicals)である。好ましい実施形態では、消泡剤の濃度が0〜0.5重量%、例えば0.1〜0.3重量%の範囲である。特に、消泡剤の濃度は、0、0.1、0.2、0.3、0.4または0.5重量%またはその間の任意の値であり得る。
酸化分解プロセスを防止または遅くするために、本製剤に酸化防止剤を添加してもよい。好適な酸化防止剤は例えば、tert.−ブチルヒドロキシキノン(TBHQ)、ブチルヒドロキシトルオール(BHT)、ブチルヒドロキシアニソール(BHA)、パルミチン酸アスコルビル、酢酸トコフェリル、ステアリン酸アスコルビルまたはカロチノイドの群(例えば、β−カロチン)またはガラート(例えば、没食子酸エチル、没食子酸プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル)である。
使用され得る染料としては、無機顔料が挙げられ、例えば、酸化鉄、酸化チタンおよびプルシアンブルー、ならびに有機染料、例えば、アリザリン染料、アゾ染料および金属フタロシアニン染料が挙げられる。
異なる態様では、本発明は本発明による液体調製物を含む液体組成物に関する。
本発明はまた、植物の中または上の植物病原性真菌、昆虫および/または線虫を防除するための方法、植物の成長を増強するための方法、または植物の健康を改善するための方法に関し、植物収量または根成長を含み、上記の本発明による液体調製物または液体組成物の有効量を、植物に、または植物が成長しているかまたは成長することが意図されている場所に施用することを含む。
用語「植物の健康」は一般に、害虫または植物病原体の防除に関連しない植物の様々な種類の改善を含む。例えば、挙げることができる有利な特性は改良された作物特性であり、以下のものを含む:出芽、作物収量、タンパク質含有量、油含有量、デンプン含有量、より発達した根系、改良された根の成長、改良された根の大きさの維持、改良された根の有効性、改良されたストレス耐性(例えば、干ばつ、熱、塩、UV、水、冷気に対する)、減少したエチレン(減少した生産および/または受容の抑制)、分げつ増加、植物高さの増加、より大きな葉のブレード、より小さな死んだ基底葉、より強い分げつ、より緑の葉の色、色素含有量、光合成活性、より少ない必要とされる投入量(例えば、肥料または水)、より少ない種子、より生産性の高い分げつ、より早い開花、早い穀粒成熟、より少ない植物徘徊(倒伏)、増加したシュートの成長、植物の活力の強化、増加した植物の立ちおよび早期のより良い発芽。
改善された植物健康は、好ましくは以下に含まれる改善された植物の特徴を指す:作物収量、より発達した根系(改善された根の成長)、改善された根の大きさの維持、改善された根の有効性、分げつの増加、植物の高さの増加、より大きな葉のブレード、より少ない死んだ基底葉、より強い分げつ、より緑の葉の色、光合成活性、より生産性の高い分げつ、強化された植物の活力、および増加した植物の立ち。
本発明に関して、改善された植物健康は、特に好ましくは作物収量、より発達した根系、改善された根成長、改善された根の大きさの維持、改善された根の有効性、分げつの増加、および植物の高さの増加から選択される改善された植物特性を指す。
本明細書で定義されるような植物の健康に対する本発明による組成物の効果は同じ環境条件下で生育される植物を比較することによって決定することができ、それによって、前記植物の部分は本発明による液体調製物で処理され、前記植物の他の部分は本発明による液体調製物で処理されない。代わりに、前記他の部分は全く処理されないか、またはプラセボで処理される(すなわち、全ての活性成分を含まない施用(すなわち、本明細書中に記載されるような生物的防除剤を含まない)などの、本発明による液体調製物を含まない施用)。
本発明による液体調製物は種子コーティング、土壌浸漬の形態、および/または直接溝内、および/または葉面噴霧の形態など、任意の所望の様式で施用することができ、出芽前、出芽後、またはその両方のいずれかに施用することができる。言い換えれば、液体調製物は、種子、植物、または収穫された果物および野菜、または植物が成長している土壌、または成長が望まれる土壌(植物の成長場所)に施用することができる。通例の施用方法には、例えば、浸漬、噴霧(spraying)、噴霧(atomizing)、潅漑、蒸発、ダスティング、霧化、ばら撒き、発泡、塗装、塗布、散布、散水(drenching)および滴下潅漑が含まれる。
全ての植物および植物部分は、本発明に従って処理することができる。ここで、植物はすべての植物および植物部分、例えば望ましいおよび望ましくない野生植物または作物植物(天然に存在する作物植物を含む)を意味すると理解される。
本発明に従って処理され得る植物は、以下の主要な作物植物を含む:トウモロコシ、ダイズ、アルファルファ、ワタ、ヒマワリ、Brassica油糧種子、例えばBrassica napus(例えば、カノーラ、ナタネ)、Brassica rapa、B. juncea(例えば、(フィールド)マスタード)およびBrassica carinata、Arecaceae sp(例えば、オイルパルム、ココナッツ)、イネ、コムギ、テンサイ、サトウキビ、オーツムギ、ライムギ、オオムギ、キビおよびソルガム、ライコムギ、アマ、ナッツ、ブドウおよびつる植物、ならびに種々の植物分類群由来の種々の果実および野菜、例えばRosaceae sp.(例えば果実、例えばリンゴおよびナシ、さらに石果、例えばアンズ、サクランボ、アーモンド、プラム、モモ、および液果、例えばイチゴ、ラズベリー、赤および黒スグリおよびグースベリー)、Ribesioidae sp.、Juglandaceae sp.、Betulaceae sp.、Anacardiaceae sp.、Fagaceae sp.、Moraceae sp.、Oleaceae sp(例えば、オリーブ樹)、Actinidaceae sp.、Lauraceae sp.(例えば、アボカド、シナモン、クスノキ)、Musaceae sp.(例えば、バナナ樹およびプランテーション)、Rubiaceae sp.(例えば、コーヒー)、Theaceae sp.(例えば、チャ)、Sterculiceae sp.、Rutaceae sp.(例:レモン、オレンジ、マンダリン、グレープフルーツ);Solanaceae sp(例:トマト、ジャガイモ、ペッパー、トウガラシ、ナス、タバコ)、Liliaceae sp.、Compositae sp.(例:レタス、アーティチョーク、チコリールートチコリ、エンダイブまたはチコリー(common chicory)を含む)、Umbelliferae sp.(例:ニンジン、パセリ、セロリおよびセルリアック)、Cucurbitaceae sp.(例えば、キュウリーガーキン、カボチャ、スイカ、ヒョウタンおよびメロンを含む)、Alliaceae sp.(例えばネギおよびタマネギ)、Cruciferae sp.(例:ホワイトキャベツ、レッドキャベツ、ブロッコリー、カリフラワー、メキャベツ、パクチョイ、コ−ルラビ、ダイコン、セイヨウワサビ、クレス、ハクサイ)、Leguminosae sp.(例:ピーナッツ、エンドウマメ、レンズマメおよびマメー例えばインゲンマメおよびソラマメ)、Chenopodiaceae sp.(例:スイスチャード、飼料ビート、ホウレンソウ、ビートルート)、Linaceae sp.(例えば、アサ)、Cannabeacea sp.(例えば、タイマ)、Malvaceae sp.(例えば、オクラ、ココア)、Papaveraceae (例えば、ケシ)、Asparagaceae (例えば、アスパラガス);芝生(turf)、芝生(lawn)、芝草(grass)およびステビア・レバウディアナ(Stevia rebaudiana)を含む庭および森における有用な植物および鑑賞植物、並びにいずれの場合もこれらの植物の遺伝子組換え型。
作物植物は従来の繁殖および最適化方法によって、または生物工学的および遺伝子工学的方法またはこれらの方法の組み合わせによって得ることができる植物であってよく、トランスジェニック植物を含み、品種財産権によって保護することができるかまたは保護することができない植物品種を含む。植物は、種子、実生、若い(未熟である)植物から成熟植物までのすべての発育段階を意味するものと理解されるべきである。植物部分は地上および地下の植物の全ての部分および器官、例えば、芽、葉、花および根を意味すると理解されるべきであり、例として挙げられるのは、葉、針葉、茎(stalks)、茎(stems)、花、子実体、果実および種子、ならびに塊茎、根および根茎である。植物の部分はまた、収穫された植物または収穫された植物部分、ならびに栄養繁殖材料および生殖繁殖材料(例えば、実生、塊茎、根茎、挿し木および種子)を含む。
前記液体調製物または前記液体調製物を含む組成物による植物および植物部分の本発明による処理は、通常の処理方法によって、例えば、浸漬、噴霧、蒸発、霧化、ばら撒き、塗装、注入によって、および増殖材料の場合、特に種子の場合、1つ以上のコーティングを適用することによって、化合物を直接的に、または周囲、環境または貯蔵空間に作用させることによって実施される。
既に上述したように、本発明によれば、全ての植物およびそれらの部分を処理することが可能である。好ましい実施形態では、野生植物種および植物品種、または交配もしくはプロトプラスト融合などの従来の生物学的繁殖方法によって得られたもの、ならびにその一部も処理される。さらなる好ましい実施形態において、遺伝子工学的方法によって得られたトランスジェニック植物および植物品種は、適切であれば従来の方法(遺伝子改変された生物)およびその部分と組み合わせて、処理される。「部分」または「植物の部分」という用語は上記で説明されている。本発明がそれぞれの商業的に慣習的な栽培品種または使用されている栽培品種の植物を処理するために特に好ましく使用される。植物栽培品種が新しい特性(「形質」)を有し、慣習的な繁殖、突然変異誘発または組換えDNA技術によって得られた植物を意味すると理解されるべきである。それらは、栽培品種、品種、生物型または遺伝子型であり得る。
本発明に従って好適に処理されるトランスジェニック植物または植物品種(遺伝子工学によって得られるもの)は、遺伝子改変によって、これらの植物に特に有利な有用な特性(「形質」)を付与する遺伝物質を受け取ったすべての植物を含む。そのような特性の例は、より良好な植物成長、高温または低温に対する耐性の増大、干ばつまたは水または土壌塩分レベルに対する耐性の増大、開花性能の向上、より容易な収穫、促進された熟成、より高い収量、収穫された製品のより高い品質および/またはより高い栄養価、収穫された製品のより良好な貯蔵寿命および/または加工性である。このような特性のさらなる、および特に強調された例は、植物の害虫および微生物有害生物に対する増大した抵抗性であり、例えば、昆虫、クモ類、線虫、ダニ、ナメクジ、カタツムリに対して、例えば植物で形成された毒素、特に、Bacillus thuringiensis(例えば、遺伝子CryIA(a)、CryIA(b)、CryIA(c)、CryIIA、CryIIIA、CryIIIB2、Cry9c、Cry2Ab、Cry3BbおよびCryIFならびにそれらの組み合わせによって)からの遺伝物質によって植物で生成された毒素に対する植物の耐性を増加させ、さらに、例えば、全身獲得耐性(SAR)、システミン、ファイトアレキシン、エリシターならびに耐性遺伝子ならびに対応して発現されたタンパク質および毒素によって、植物病原性真菌、細菌および/またはウイルスに対する植物の増大した耐性であり、さらに、ある種の除草活性化合物、例えば、イミダゾリノン、スルホニル尿素、グリホサート、ホスフィノトリシン(例えば「PAT」)遺伝子)に対する植物の増大した耐性である。問題の所望の形質を付与する遺伝子はまた、トランスジェニック植物中に互いに組み合わせて存在してもよい。言及され得るトランスジェニック植物は重要な作物植物であり、例えば穀類(コムギ、イネ、ライコムギ、オオムギ、ライムギ、オートムギ)、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、テンサイ、サトウキビ、トマト、エンドウおよび他のタイプの野菜、ワタ、タバコ、アブラナおよび果実植物(果実リンゴ、ナシ、カンキツ果実およびブドウを含む)であり、特にトウモロコシ、ダイズ、コムギ、コムギ、イネ、ジャガイモ、ワタ、サトウキビ、タバコおよびアブラナが強調されている。特に強調されている形質は、昆虫、クモ類、線虫類、ナメクジウオおよびカタツムリに対する植物の抵抗性の増大である。
さらに、本発明は、植物保護剤としての、または植物の活力および/または植物の健康を促進するための、本発明による液体調製物または液体組成物の使用に関する。
以下の実施例は、非限定的な様式で本発明を例示する。
材料および方法
担体流体一覧:
Figure 2021525545
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実施例I(P.lilacinum)
3gのP.lilacinum株251純粋胞子粉末を、滅菌スプーンを用いて製剤容器(ウルトラターラックス(Ultra Turrax)のための分散ツールを有するIKA Type DT−20混合容器)に移した。12mLの流体をそれぞれの製剤容器に添加し、ウルトラターラックス管駆動制御を用いて3000rpmで1分間分散させ、30秒後に方向を変えた。この2.8mLを4つのサンプルボトル(Wheaton血清バイアル、タイプI)に移し、ヘッドスペースをほとんど残さず、クリンプネックキャップ(Macherey−Nagel N タイプ13)を用いて密閉した後、すべてのサンプルボトルを30℃に設定したインキュベーターに移し、所定の時間保存した。
規則的な間隔で、試料を貯蔵場所から回収し、胞子生存率について分析した。従って、元の試料を完全に均質化した。各サンプルの0,25gまたは250μLのアリコートを50mLファルコンチューブに移す。2% Tween 80を含有する滅菌水溶液を用いてチューブを25gまで満たし、ボルテックスにより均質化して、第1の希釈工程(1:100希釈)を達成した。この希釈液をさらに希釈し、寒天上にスポットするために使用する。
胞子発芽速度の評価のために、多重自動希釈(ピペッティングロボット、96ウェルプレート)によって達成される1:100希釈に基づいて1:30000希釈を調製する。その後、12×12cm寒天プレートを採取し、自動12チャネルピペットを使用して、各サンプルの10回5μLでスポットする。液体が寒天に浸されるまで待ち、寒天プレートをインキュベーターに移し、25℃で17時間インキュベートする。プレートを開き、顕微鏡の下に置く。スポット当たり1つの領域を無作為に選択し、指定された領域内にある発芽胞および非発芽胞の数を記録する。1試料あたり少なくとも200個の胞子を評価する必要がある。必要であれば、スポット当たり2つ以上の領域をカウントする。
胞子生存率の結果を表Iに示す。
Figure 2021525545
議論:
表Iに示される結果から、貯蔵後に良好な胞子生存率を提供するために、全ての流体が好適であるわけではないことが明らかになる。試料の製造直後(1日目)の胞子生存率は、一般に高く、多くの場合、80%以上、多くの場合、90%以上でさえある。本発明の範囲に属さない特定の流体はサンプルの調製後1日目であっても胞子生存率の急激な低下を示し、所定の条件下で貯蔵した後であってもさらに急激な低下を示す(表I、エントリー5、6、14、20、23)。BreakThru S240は、宿主真菌胞子への優れた流体として以前から記載されている。所与の試験条件下で、BreakThru S240(表I、エントリー33)は2月の貯蔵後に〜77%の胞子生存率を提供し、7月の貯蔵後に〜7%を提供する。本発明による実施例の中には、それぞれ2ヶ月または3ヶ月の貯蔵後に約53%以上の胞子生存率を示す流体が選択される。多くの場合、約80%以上の胞子生存率が検出された(表I、エントリー1、7、10、11、13、15、16、18、21、26、29)。選択された流体について、例外的な胞子生存率が、30℃で7ヶ月間の貯蔵後でさえ見出された(表I、エントリー25、27、32)。
実施例II(Isaria fumosorosea)
方法1:1,5gのIsaria fumosorosea純粋胞子粉末を、滅菌スプーンを用いて製剤容器(ウルトラターラックス(Ultra Turrax)のための分散ツールを有するIKA Type DT−20混合容器)に移した。13,5mLの流体をそれぞれの製剤容器に加え、ウルトラターラックス管駆動制御を用いて3000rpmで1分間分散させ、30秒後に方向を変えた。この2.8mLを4つのサンプルボトル(Wheaton血清バイアル、タイプI)に移し、ヘッドスペースをほとんど残さず、クリンプネックキャップ(Macherey−Nagel N タイプ13)を用いて密閉した後、すべてのサンプルボトルを30℃に設定したインキュベーターに移し、所定の時間保存した。
規則的な間隔で、試料を貯蔵場所から回収し、胞子生存率について分析した。従って、元の試料を完全に均質化した。各サンプルの0,25gまたは250μLのアリコートを50mLファルコンチューブに移す。2% Tween 80を含有する滅菌水溶液を用いてチューブを25gまで満たし、ボルテックスにより均質化して、第1の希釈工程(1:100希釈)を達成した。この希釈液をさらに希釈し、寒天上にスポットするために使用する。
胞子発芽速度の評価のために、多重自動希釈(ピペッティングロボット、96ウェルプレート)によって達成される1:100希釈に基づく1:15000希釈を調製した。その後、12×12cm寒天プレートを採取し、自動12チャネルピペットを使用して、各サンプルの10回5μLでスポットした。すべての液体を寒天に浸した後、寒天プレートを23℃で16時間インキュベートした。
方法2:0.5gのIsaria fumosoresea純粋胞子粉末を、滅菌スプーンを用いて三角フラスコに移した。24.5mLの流体を、Ultra−Turrax(IKA; タイプT 25 D)を用いて1分間、3,000rpmで分散させた。この後、2.0mLを20個のサンプル瓶(Wheaton血清バイアル、タイプI)に移し、ヘッドスペースをほとんど残さず、クリンプネックキャップ(Macherey−NagelタイプN 13)を用いて密閉した。その後、全てのサンプルボトルを30℃に設定したインキュベーターに移し、所定の時間保存した。
規則的な間隔で、試料を貯蔵場所から回収し、胞子生存率について分析した。この目的のために、元の試料を完全に均質化した。各サンプル0.5gのアリコートを100mL三角フラスコに移した。0.1% Break Thru(登録商標)S240(Evonik、Industries)を含有する滅菌水溶液を用いてフラスコを50gまで満たし、磁気撹拌機(Thermo Fisher Scientific: Cimarec(商標))上で750rpmで少なくとも15分間均質化して、第1の希釈工程(1:100希釈)を達成した。この希釈をさらに希釈するために使用した。
全てのサンプルが、0.1%Break Thru S240中で十分に混合されたわけではなく、全く混合されたわけでもない。これらの試料については、500μLのNeo−wett(Kwizda Agro GmbH)および/または少量(ナイフチップ)のMetaupon(登録商標)−OMT(LEUNA Tenside GmbH)も水溶液に添加した。
均質化後、1mLを1.5mLチューブに移し、14,000rpmで15分間遠心分離した(Thermo Fisher Scientific、Type Megafuge 8R)。上清(=上相)をピペットを用いて廃棄した。0.1% Neo−wettを含有する滅菌水溶液を使用して、チューブを1mLまで満たし、ボルテックスすることによって均質化した。
真菌の生存率を評価するために、フローサイトメトリーに基づく方法を使用した。
胞子の生存率の結果を表IIに示す。
Figure 2021525545
議論:
試料の製造直後(1日目)の胞子生存率は一般に高く、多くの場合、ネガティブ標準として使用された(すなわち、本発明に従わない)ButylcarbitolおよびCarbitol(表II、エントリー1、2)を除いて90%以上である。いくつかの実施例(表2、エントリー6/6a、7/7a、13/13a、14/14a、16/16a)で実証されるように、胞子生存率の決定のための両方の方法は、同等の結果を提供する。本発明による実施例の中で、貯蔵後1か月(表II、エントリー3−7、9−12、14、16、−1−20)で約60%以上、または貯蔵後30℃で7か月(表2、エントリー6、7、14、16、19、20)で約50%以上の胞子の生存率を示す流体が選択される。
実施例III(Beauveria Bassiana)
1,5gのBeauveria Bassiana純粋胞子粉末を、滅菌スプーンを用いて製剤容器(ウルトラターラックス(Ultra Turrax)のための分散ツールを有するIKA Type DT−20混合容器)に移した。13.5mLの流体をそれぞれの製剤容器に添加し、ウルトラターラックス管駆動制御を用いて3000rpmで1分間分散させ、30秒後に方向を変えた。この2.8mLを4つのサンプルボトル(Wheaton血清バイアル、タイプI)に移し、ヘッドスペースをほとんど残さず、クリンプネックキャップ(Macherey−Nagel N タイプ13)を用いて密閉した後、すべてのサンプルボトルを30℃に設定したインキュベーターに移し、所定の時間保存した。
規則的な間隔で、試料を貯蔵場所から回収し、胞子生存率について分析した。従って、元の試料を完全に均質化した。各サンプルの0,25gまたは250μLのアリコートを50mLファルコンチューブに移す。2% Tween 80を含有する滅菌水溶液を用いてチューブを25gまで満たし、ボルテックスにより均質化して、第1の希釈工程(1:100希釈)を達成した。この希釈液をさらに希釈し、寒天上にスポットするために使用する。
胞子発芽率の評価のために、多重自動希釈(ピペッティングロボット、96ウェルプレート)によって達成される1:100希釈に基づいて1:15000希釈を調製する。その後、12×12cm寒天プレートを採取し、自動12チャネルピペットを使用して、各サンプルを10回5μLでスポットする。液体が寒天に浸されるまで待ち、寒天プレートをインキュベーターに移し、20℃で17時間インキュベートする。プレートを開き、顕微鏡の下に置く。スポット当たり1つの領域を無作為に選択し、指定された領域内にある発芽胞および非発芽胞の数を記録する。1試料あたり少なくとも200個の胞子を評価する必要がある。必要に応じて、スポット当たり複数の領域をカウントする。胞子の生存率の結果を表IIIに示す。
Figure 2021525545
議論:
試料の製造直後(1日目)の胞子生存率は、一般に高く、多くの場合、80%以上、多くの場合、90%以上でさえある。本発明の範囲内に入らない流体は、所与の条件下での貯蔵後に胞子生存率の急激な低下を示す(表III、エントリー4、12)。本発明による実施例の中には、30℃で3週以上貯蔵した後に約50%以上の胞子生存率を示す流体が選択されている(表III、エントリー1、2、3、5、9、10、14、17)
例IV:Penicillium Bilaii
1,5gのPenicillium bilaii (ATCC 20851)純粋胞子粉末を、滅菌スプーンを用いて製剤容器(ウルトラターラックス(Ultra Turrax)用の分散ツールを有するIKA Type DT−20混合容器)に移した。それぞれ13,5mLの流体を製剤容器に加え、ウルトラターラックス管駆動制御を用いて3000rpmで1分間分散させ、30秒後に方向を変えた。この後、2.8mLを4つのサンプルボトル(Wheaton血清バイアル、タイプI)に移し、ヘッドスペースをほとんど残さず、クリンプネックキャップ(Macherey−Nagel タイプN 13)を用いて密閉した後、すべてのサンプルボトルを30℃に設定したインキュベーターに移し、所定の時間保存した。
規則的な間隔で、試料を貯蔵場所から回収し、胞子生存率について分析した。従って、元の試料を完全に均質化した。各サンプルの0,25gまたは250μLのアリコートを50mLファルコンチューブに移す。2% Tween 80を含有する滅菌水溶液を用いてチューブを25gまで満たし、ボルテックスによりホモジナイズして、第1の希釈工程(1:100希釈)を達成した。この希釈液をさらに希釈し、寒天上にスポットするために使用する。
胞子発芽率の評価のために、多重自動希釈(ピペッティングロボット、96ウェルプレート)によって達成される1:100希釈に基づいて1:15000希釈を調製する。その後、12×12cm寒天プレートを採取し、自動12チャネルピペットを使用して、各サンプルを10回5μLでスポットする。液体が寒天に浸されるまで待ち、寒天プレートをインキュベーターに移し、20℃で17時間インキュベートする。プレートを開き、顕微鏡の下に置く。スポット当たり1つの領域を無作為に選択し、指定された領域内にある発芽胞および非発芽胞の数を記録する。1試料あたり少なくとも200個の胞子を評価する必要がある。必要であれば、スポット当たり2つ以上の領域をカウントする。胞子の生存率の結果を表IVに示す。
Figure 2021525545
議論:
サンプルの製造直後(1日目)の胞子生存率は非常に可変であり;ほとんどの場合、生存率は50%以上、選択された場合はさらには90%以上である。本発明による実施例の中には、30℃で約3ヶ月間貯蔵した後に約50%以上の胞子生存率を示す流体が選択される(表IV、エントリー1、10、11、15〜17)。多くの場合、選択された流体中の胞子生存率は、30℃で約3ヶ月間貯蔵した後、対照として使用したBreak−Thru S240の生存率、すなわち約20%を超える。ここに示した条件下では、一部の液体は胞子の生存性に劣る。

Claims (27)

  1. 以下の
    a)3〜10エチレンオキシド単位を有するエトキシル化脂肪酸トリグリセリドであって、前記脂肪酸トリグリセリドがヒマシ油および植物油からなる群から選択される、前記エトキシル化脂肪酸トリグリセリド;
    b)一般式:
    Figure 2021525545

    のブロックコポリマー〔ここで、a1およびa2は互いに独立して、1〜20の間の平均値を有し、bは、15〜35の間の平均値を有する〕;
    c)一般式:
    Figure 2021525545

    のポリマー〔式中、XおよびYは独立して
    水素、
    1〜24個の炭素原子をもつ分岐または直鎖アルキル、および
    2〜24個の炭素原子を有し、飽和または部分的に不飽和であり、ヒドロキシル官能基を有してもよい、分枝または直鎖カルボニル
    から選択され;
    ここで、mは0〜10の間の平均数であり;
    ここで、nは0〜40の間の平均数であり;
    ここで、m+nはゼロではない〕
    または、a)〜c)のいずれか1つの混合物;
    からなる群から選択される少なくとも一つのエトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体
    および、真菌胞子
    を含む、本質的に水を含まない液体調製物。
  2. a)の前記エトキシル化脂肪酸トリグリセリドが、ヒマワリ油、菜種油、大豆油、トウモロコシ油、ヤシ油、およびパーム油からなる群から選択される植物油である、請求項1に記載の液体調製物。
  3. a)の前記エトキシル化脂肪酸トリグリセリドがヒマシ油である、請求項1に記載の液体調製物。
  4. b)の前記エトキシル化およびプロポキシル化有機液体が、約1000〜約3000g/molの平均モル重量を有し、a1およびa2が互いに独立して1〜20の平均値を有し、bが15〜35の平均値を有するブロックコポリマーからなる群から選択される、請求項1に記載の液体調製物。
  5. b)の前記エトキシル化およびプロポキシル化有機液体が、約1500〜約3000g/molの平均モル重量を有し、a1およびa2が互いに独立して10〜15の平均値を有し、bが20〜30の平均値を有するブロックコポリマーからなる群から選択される、請求項1および4に記載の液体調製物。
  6. b)の前記エトキシル化およびプロポキシル化有機液体が、約2000〜約3000g/molの平均分子量を有し、a1およびa2が互いに独立して3〜16の平均値を有し、bが25〜35の平均値を有するブロックコポリマー;および、約1400〜約2200g/molの平均分子量を有し、a1およびa2が互いに独立して2〜12の平均値を有し、bが15〜25の平均値を有するブロックコポリマーからなる群から選択される、請求項1、4および5のいずれか1項に記載の液体調製物。
  7. c)のポリマーにおいて、Xが1〜18個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル、または2〜18個の炭素原子を有し、飽和または部分不飽和であり、ヒドロキシル官能基を有してもよい分岐または直鎖カルボニルであり、Yが、水素または1〜6個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル、または2〜6個の炭素原子を有し、飽和または部分不飽和であり、ヒドロキシル官能基を有してもよい分岐または直鎖カルボニルである、請求項1に記載の液体調製物。
  8. c)のポリマーにおいて、Xが1〜6個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル、または1〜6個の炭素原子を有し、飽和または部分不飽和であり、ヒドロキシル官能基を有してもよい分岐または直鎖カルボニル、yが1〜18個の炭素原子を有する分岐または直鎖アルキル、または2〜18個の炭素原子を有し、飽和または部分不飽和であり、ヒドロキシル官能基を有してもよい分岐または直鎖カルボニルである、請求項1に記載の液体調製物。
  9. c)のポリマーにおいて、m+nが1〜30である、請求項1、7および8のいずれか1項に記載の液体調製物。
  10. c)のポリマーにおいて、m+nが、好ましくは1〜20である、請求項1および7〜9のいずれか1項に記載の液体調製物。
  11. c)のポリマーにおいて、m+nが、好ましくは1〜15である、請求項1および7〜10のいずれか1項に記載の液体調製物。
  12. c)のポリマーにおいて、mがゼロに等しい場合、前記少なくとも1つのエトキシル化有機液体の分子量(MW)が190質量単位以上である、請求項1および7〜11のいずれか1項に記載の液体調製物。
  13. mがゼロに等しい場合、前記少なくとも1つのエトキシル化有機液体の分子量(MW)が205質量単位以上である、請求項12に記載の液体調製物。
  14. 前記c)のエトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体が、ポリエチレンオキシド、エトキシル化アルコール、モノ−/ポリエチレンオキシドジエーテル、モノ−/ポリエチレンオキシドエーテルエステル、エトキシル化カルボン酸、モノ−/ポリエチレンオキシドジエステル、ポリプロピレンオキシド、プロポキシル化アルコール、モノ−/ポリプロピレンオキシドジエーテル、モノ−/ポリプロピレンオキシドエーテルエステル、プロポキシル化カルボン酸、モノ−/ポリプロピレンオキシドジエステル、アルコールプロポキシレート−エトキシレート、カルボン酸プロポキシレート−エトキシレートおよびカルボン酸プロポキシレート−エトキシレートエーテルからなる群より選択される、請求項1および7〜13のいずれか1項に記載の液体調製物。
  15. 前記エトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体が、少なくとも40重量%、好ましくは少なくとも50重量%の量で存在する、請求項1〜14のいずれか1項に記載の液体調製物。
  16. 水混和性である、請求項1〜15のいずれか1項に記載の液体調製物。
  17. 前記真菌胞子が、植物保護における生物的防除剤または植物健康増進剤として有効な真菌種に由来する、請求項1〜16のいずれか1項に記載の液体調製物。
  18. 前記真菌種が昆虫病原性真菌である、請求項1〜17のいずれか1項に記載の液体製剤。
  19. 前記真菌種が殺線虫活性真菌である、請求項1〜17のいずれか1項に記載の液体製剤。
  20. 前記真菌種が、Isaria fumosorosea、Penicillium bilaii、Metarhizium anisopliae、Purpureocillium lilacinum、Coniothyrium minitans、Beauveria bassianaおよびClonostachys roseaからなる群より選択される、請求項1〜19のいずれか1項に記載の液体調製物。
  21. 界面活性剤、レオロジー調整剤、消泡剤、酸化防止剤および染料の群から選択される少なくとも1つの物質をさらに含む、請求項1〜20のいずれか1項に記載の液体調製物。
  22. 前記レオロジー調整剤が、ヒュームド(疎水性/親水性)または沈降シリカ、天然起源のシリカ、アタパルジャイトベースのレオロジー調整剤、有機改質粘土、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項21に記載の液体調製物。
  23. 前記レオロジー調整剤がヒュームドシリカである、請求項22に記載の液体調製物。
  24. 0.1〜40重量%の真菌胞子、99.9%までの請求項1〜16のいずれか1項に記載の少なくとも1つのエトキシル化および/またはプロポキシル化有機液体および0〜10重量%の少なくとも1つの界面活性剤および/またはレオロジー調整剤を含む、先行する請求項のいずれか1項に記載の液体調製物。
  25. 請求項1〜24のいずれか1項に記載の液体調製物を含む液体組成物。
  26. 植物内または植物上の植物病原性真菌、昆虫および/または線虫を防除するための方法、植物の成長を増強するための方法、または植物の収量もしくは根の健康を増加させるための方法であって、先行する請求項のいずれかに記載の液体調製物または液体組成物の有効量を前記植物または植物が成長しているかまたは成長することが意図されている場所へ施用することを含む、前記方法。
  27. 植物保護剤としての、または植物の活力および/または植物の健康を促進するための、先行する請求項のいずれかに記載の液体調製物または液体組成物の使用。
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