CN102246750A - 一种玫烟色棒束孢油悬浮剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种玫烟色棒束孢油悬浮剂及其制备方法和应用。所述油悬浮剂中，按质量百分比计，玫烟色棒束孢孢子悬浮液1～40%，植物油1～20%，乳化剂3～8%，分散剂0.1～5%，稳定剂1～5%，防冻剂1～5%，余量为惰性矿物油或芳香烃溶剂。本发明所述的玫烟色棒束孢油悬浮剂的孢子存活期长，贮藏2年孢子萌发率为80%；经时稳定性良好，对农作物和环境安全，主要用于果树、蔬菜、小麦、水稻和花卉等作物的害虫防治，尤其对鳞翅目、双翅目高效，如如烟蚜、粉虱、菜青虫、小菜蛾等的防治方面有显著的效果。

Description

一种玫烟色棒束孢油悬浮剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于无公害农药制剂技术领域，具体涉及一种玫烟色棒束孢油悬浮剂及其制备方法和应用。 

背景技术

玫烟色棒束孢（Isaria fumosorosea）是一种子囊菌类虫生真菌，它广布全世界，寄主范围广泛，已记载有25个不同科的昆虫，包括小菜蛾、麦双尾蚜和烟粉虱等一些重要农业害虫。玫烟色棒束孢分生孢子主要通过分泌多种胞外水解酶降解昆虫体壁从而侵入寄主，具有不同于现有化学杀虫剂的作用机理，对环境无污染，无残留的特点。随着经济社会的发展和人们生活水平的提高，真菌杀虫剂的研究和使用受到到越来越多的重视，近年来在真菌杀虫剂的产业化方面取得较大进展。 

然而，包括玫烟色棒束孢在内的真菌都具有杀虫效果慢、受环境影响较大、效果不稳定的缺点。虽然针对这些问题可以对菌株进行遗传改良，通过基因工程方法人为提高真菌菌株的杀虫效率，但真菌杀虫剂的制剂性能也是影响药效的关键因素。 

害虫亲脂性表皮和兑水使用的药剂之间存在着很高的界面张力，让药剂很难与害虫和植物表面亲和。不合理的制剂，不仅造成部分菌体死亡或孢子失活，而且会将大大降低其效果发挥，从而影响持效性。制备稳定、效果好的新剂型是真菌杀虫剂制备的关键。而寻找在制剂中添加玫烟色棒束孢子的适宜技术方案、提供制剂各组分合适的配伍比例，使孢子免受胁迫因子伤害，提高孢子存活率，让制剂有更好的化学和物理稳定性，延长其使用期，是获得稳定、效果好的新剂型的关键。 

目前玫烟色棒束孢多为粉剂，直接喷洒使用，但这种制剂，玫烟色棒束孢杀虫效果慢、受环境影响较大、效果不稳定的缺点，且在这种制剂形态下，很难保证孢子高的存活率。 

发明内容

本发明的目的是克服现有玫烟色棒束孢农药制剂剂型的不足和玫烟色棒束孢在农药应用方面的不足，提供了一种玫烟色棒束孢油悬浮剂，所述油悬浮剂克服了微生物农药速效性差，效果不稳定的缺点，具有速效、高活性、化学和物理稳定性好的优点。 

本发明的另一个目的是提供所述玫烟色棒束孢油悬浮剂的制备方法。 

本发明还有一个目的是提供所述玫烟色棒束孢油悬浮剂的应用。 

本发明的目的通过以下技术方案予以实现： 

提供一种玫烟色棒束孢油悬浮剂，按质量百分比计，玫烟色棒束孢孢子悬浮液1～40%，植物油1～20%，乳化剂3～8%，分散剂0.1～5%，稳定剂1～5%，防冻剂1～5%，余量为惰性矿物油或芳香烃溶剂。

所述的玫烟色棒束孢油悬浮剂，优选的各组分按质量百分比计，玫烟色棒束孢孢子悬浮液20～30%，植物油10～15%，乳化剂3～5%，分散剂1%，稳定剂3%，防冻剂2～4%，余量为惰性矿物油或芳香烃溶剂。 

更为优选地，各组分按质量百分比计，玫烟色棒束孢孢子悬浮液30 %，植物油 15%，乳化剂 4%，分散剂 1%，稳定剂 3%，防冻剂4%，余量为惰性矿物油或芳香烃溶剂。 

所述玫烟色棒束孢菌株可采用市购常规的菌株或者现有文献公开的玫烟色棒束孢菌株。将菌转接到PDA平板，然后置于培养箱（25℃、12L∶12D）中培养7天（d），待产孢后，在平板上加入适量含有质量百分比浓度为0.03%吐温80的植物油，以接种针轻刮平板上的孢子，将配制的菌液倒入烧杯，磁力搅拌器搅拌30分钟，待孢子完全分散后，把孢子悬浮液滴到血球计数板上用显微镜观察，保证孢子含量为10～100亿个/mL。如果低于这个含量，继续添加孢子粉，如果高于这个含量，以同种植物油稀释，通过显微镜观察血球计数板使孢子含量为10～100亿个/ mL。其中，制备孢子悬浮液使用的植物油为大豆油、菜籽油、蓖麻油、玉米油、花生油或植物调和油中的一种，制备孢子悬浮液时使用植物油的量没有计算在前述“玫烟色棒束孢油悬浮剂中，各组分按质量百分比计，植物油1～20%，余量为惰性矿物油”中。 

所述玫烟色棒束孢油悬浮剂中占质量百分比为1～20%的植物油为大豆油、菜籽油、蓖麻油、玉米油、花生油、植物调和油中的一种或两种以上的组合，如果是两种以上的组合，组合比例不做严格限定。 

所述乳化剂是烷基酚聚氧乙烯醚、苯乙烯基酚聚氧乙烯醚、烷基芳基聚氧丙烯聚氧乙烯醚、烷芳基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、蓖麻油聚氧乙烯醚、烷基苯磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯磷酸盐、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酮、山梨糖醇酐酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、顺丁烯二酸二仲辛酯磺酸钠、多元醇脂肪酸酯及其环氧乙烷加成物、十二烷基硫酸钠中的两种或多种的组合；如果是两种以上的组合，组合比例不做严格限定。 

所述的稳定剂为2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚、环氧大豆油、环氧亚麻油、环氧脂、季戊四醇中的一种或两种的组合；如果是两种组合，组合比例不做严格限定。 

所述的分散剂是烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐、亚甲基双荼磺酸钠（NNO）或木质素磺酸钠中的一种或几种的混合；如果是两种以上的组合，组合比例不做严格限定。 

所述的防冻剂是乙二醇、丙二醇、丙三醇、二乙二醇中的一种或两种的组合；如果是两种组合，组合比例不做严格限定。 

所述的惰性矿物油为煤油、柴油、石蜡油或白矿油，所述的芳香烃溶剂油为Solvesso100、Solvesso150或Solvesso200。 

本发明同时提供了所述玫烟色棒束孢油悬浮剂的制备方法，包括以下步骤： 

（1）将玫烟色棒束孢菌株转接到PDA平板，置于培养箱培养产孢后，在平板上加入含有质量百分比浓度为0.03%吐温80的植物油，轻刮平板上的孢子，将所得的菌液搅拌分散后，把孢子悬浮液滴到血球计数板上用显微镜观察，保证孢子含量为10～100亿个/mL；

（2）将孢子悬浮液、植物油、乳化剂、分散剂、稳定剂、防冻剂和惰性矿物油或芳香烃溶剂按比例混合，加入到砂磨机中研磨即得。

优选地，研磨过程的环境温度不超过40℃，在1000～4000转/分钟条件下研磨30～60分钟即得成品。 

本发明所述玫烟色棒束孢油悬浮剂适用于果树、蔬菜、小麦、水稻或花卉等作物的害虫防治方面，尤其对鳞翅目、双翅目高效，如烟蚜、粉虱、菜青虫、小菜蛾等防治具有显著的效果。 

本发明的有益效果是： 

目前玫烟色棒束孢多为粉剂，直接喷洒使用，但玫烟色棒束孢杀虫效果慢、受环境影响较大、效果不稳定的缺点，且在这种制剂形态下，很难保证孢子高的存活率。本发明针对这些问题，通过乳化剂和植物油的结合来降低制剂界面张力，使药剂与害虫体壁和植物叶片有很好的亲和，耐雨水冲刷，本发明优化了制剂中各组分的配伍和比例，利用惰性矿物油或芳香烃溶剂与真菌对防治害虫产生增效作用，提高孢子存活率，结果是真菌侵染速率大幅提升，大大提高药剂的速效性和杀虫活性，同时，加入适宜比例的分散剂、稳定剂、防冻剂和矿物油或芳香烃溶剂，让制剂有更好的化学和物理稳定性，提高孢子存活率，延长其使用期，很好地满足农业生产和森林、草原害虫防治的需要。

本发明所述玫烟色棒束孢油悬浮剂高效、低毒、对环境无残留、人畜安全，对病害不易产生抗药性，非常适用于果树、蔬菜、小麦、水稻和花卉等作物的害虫防治，尤其对鳞翅目、双翅目高效，如烟蚜、粉虱、菜青虫、小菜蛾等防治。经检测，本发明所述油悬浮剂贮藏2年孢子萌发率为80%。 

具体实施方式

为了更好的理解本发明的实质，下面结合具体实施例进一步详细说明本发明，相同物质的简单替代不一一在实施例中赘述，但本发明的内容并不局限于此。除非特别说明，本发明采用的原料和试剂均为市购常规原料、试剂。 

实施例1 

本实施例采用的玫烟色棒束孢菌株来源于家白蚁Coptotermes formosanus Shiraki染菌虫体上分离得到的玫烟色棒束孢菌株PFCF-O（请见《玫烟色棒束孢的生物学特性与其对小菜蛾致病力的相关性》，《植物保护学报》第37卷，第3期，2010年6月，雷研圆等。），华南农业大学昆虫生态室以PDA斜面保存该菌株于-80℃冰箱中。所述菌株在PDA培养基上，菌落生长快，25℃下，菌落长绒毛状，形成孢子后呈肉红色，粉状，背面无色，粉红色的孢梗束单生或聚集成孢梗束，壁光滑，透明，大多由着生4～6个瓶梗组成轮生体的轮状分枝组成。瓶梗基部球状，或拟椭圆形膨大，上部细长，分生孢子柱形至梭形，光滑，透明至微淡红色，无厚垣孢子。

使用时，将菌转接到PDA平板，然后置于培养箱(25℃、12L∶12D)中培养7d，待产孢后，在平板上加入含有质量百分比浓度为0.03%吐温80的植物油，以接种针轻刮平板上的孢子，将配制的菌液倒入烧杯，磁力搅拌器搅拌30分钟，待孢子完全分散后，获得孢子悬浮液，显微镜观察观察血球计数板，要求孢子含量为10～100亿个/ mL。如果低于这个含量，继续添加孢子粉，如果高于这个含量，以同种植物油稀释，使孢子含量为10～100亿个/ mL。 

实施例2 

将市购的玫烟色棒束孢菌（例如上海富众生物科技发展有限公司或广州市微生物研究所提供的玫烟色棒束孢菌）转接到PDA平板，然后置于培养箱（25℃、12L∶12D）中培养7d，待产孢后，在平板上加入含有质量百分比浓度为0.03%吐温80的菜籽油或植物调和油，以接种针轻刮平板上的孢子，将配制的菌液倒入烧杯，磁力搅拌器搅拌30分钟，待孢子完全分散后，把孢子悬浮液滴到血球计数板上用显微镜观察，保证孢子含量为10～100亿个/mL。如果低于这个含量，继续添加孢子粉，如果高于这个含量，以同种植物油稀释，通过显微镜观察血球计数板，使孢子含量为10～100亿个/ mL。

实施例3 

1、称取10亿个/克的玫烟色棒束孢孢子悬浮液10.0g，花生油5.0g，蓖麻油聚氧乙烯醚3.0g，脂肪醇聚氧乙烯醚2.0，烷基酚甲醛树脂聚氧乙烯醚硫酸盐1.0g，环氧亚麻油2.0个，分散剂NNO和乙二醇4.0g，白矿油补足至100%，一起投到研磨机中，研磨过程中以水冷却，温度不能超过40℃，3000转/分钟研磨30分钟，制得质量百分比浓度为10%的玫烟色棒束孢油悬浮剂。

  2、10%玫烟色棒束孢油悬浮剂室内活性测定实验 

供试对象：菜青虫，室内饲养的敏感品系；

供试药剂：10%玫烟色棒束孢油悬浮剂，10%玫烟色棒束孢悬浮液；

条件：温度：25℃，湿度：RH70%，光照：L：D=12：12

试验方法：用电子分析天平分别准确称取供试药剂，用水稀释1000倍。

实验采用喷雾法进行处理，将培养皿中的油菜叶上接入健壮菜青虫20头，将稀释好的药液对准虫体喷雾，以纱布封盖放入培养箱中。以清水为空白对照，每个处理3次重复，96小时后检查死亡、活虫数。本发明10%玫烟色棒束孢油悬浮剂800倍药后96小时室内防治效果为85.6%，不加植物油和矿物油的相同含量的普通玫烟色棒束孢孢子悬浮液按照同样方法使用，药后96小时防治效果为60.2%，说明本发明对菜青虫的防效明显优于普通玫烟色棒束孢悬浮剂，结果见表1： 

表1

实施例4

1、称取50亿个/克的玫烟色棒束孢孢子悬浮液20.0g、蓖麻油10.0g、烷基酚聚氧乙烯醚2.0g、多元醇脂肪酸酯及其环氧乙烷加成物1.5g、抗氧剂264 2g、SOPA-270 1.0g和丙三醇4.0g， Solvesso200补足至100%，一起投到研磨机中，研磨过程中以水冷却，温度不能超过40℃，3000转/分钟研磨40分钟，制得20%玫烟色棒束孢油悬浮剂。

2、室内活性测定实验方法同实施例2。 

将上述20%玫烟色棒束孢油悬浮剂按1000倍稀释喷雾小菜蛾，药后96小时室内防治效果为87.6%，不加植物油和矿物油的相同含量的普通玫烟色棒束孢孢子悬浮液按照同样方法使用，药后96小时防治效果为60.02%。 

实施例5

1、称取80亿个/克的玫烟色棒束孢孢子悬浮液30.0g，大豆油15.0g，蓖麻油聚氧乙烯醚2.5g、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酮1.0g、脂肪醇聚氧乙烯醚0.5g、烷基酚甲醛树脂聚氧乙烯醚硫酸盐1.0g、环氧大豆油3.0g和丙三醇4.0g，柴油补足至100%，一起投到研磨机中，研磨过程中以水冷却，温度不能超过40℃，3000转/分钟研磨60分钟，制得30%玫烟色棒束孢油悬浮剂。

2、室内活性测定实验方法同实施例2。 

将所述30%玫烟色棒束孢油悬浮剂按1000倍稀释喷雾烟粉虱，药后96小时室内防治效果为88.6%，不加植物油和矿物油的相同含量的普通玫烟色棒束孢孢子悬浮液按照同样方法使用，药后96小时防治效果为64.0%，结果见表3： 

表3

实施例6

1、称取100亿个/克的玫烟色棒束孢孢子悬浮液40.0g，花生油20.0g，苯乙烯基酚聚氧乙烯醚3.0g、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酮2.0g、脂肪醇聚氧乙烯醚1.0g、木质素磺酸钠1.0g、环氧大豆油5.0g和丙三醇4.0g，白矿油补足至100%，一起投到研磨机中，研磨过程中以水冷却，温度不能超过40℃，3000转/分钟研磨60分钟，制得40%玫烟色棒束孢油悬浮剂。

2、室内活性测定实验方法同实施例2。 

将所述玫烟色棒束孢油悬浮剂按1500倍稀释喷雾烟蚜，药后96小时室内防治效果为95.6%，不加植物油和矿物油的相同含量的普通玫烟色棒束孢孢子悬浮液按照同样方法使用，药后96小时防治效果为61.2%，结果见表4： 

表4

实施例7

1、称取100亿个/克的玫烟色棒束孢孢子悬浮液1.0g，花生油1.0g，聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酮2.0g、脂肪醇聚氧乙烯醚1.0g、木质素磺酸钠1.0g、环氧大豆油4.0g和乙二醇4.0g，白矿油补足至100%，一起投到研磨机中，研磨过程中以水冷却，温度不能超过40℃，3000转/分钟研磨60分钟，制得1%玫烟色棒束孢油悬浮剂。

2、室内活性测定实验方法同实施例2。 

将所述玫烟色棒束孢油悬浮剂按600倍稀释喷雾烟蚜，药后96小时室内防治效果为80.0%，不加植物油和矿物油的相同含量的普通玫烟色棒束孢孢子悬浮液按照同样方法使用，药后96小时防治效果为50.5%，结果见表5： 

表5

实施例8

1、一种玫烟色棒束孢油悬浮剂，按质量百分比计，玫烟色棒束孢孢子悬浮液30 %，花生油 15%，聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酮2%，烷基酚聚氧乙烯醚1%，脂肪醇聚氧乙烯醚1%，烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐 1%，环氧大豆油 3%，丙三醇4%，余量为惰性矿物油或芳香烃溶剂补足至100%，一起投到研磨机中，研磨过程中以水冷却，温度不能超过40℃，3000转/分钟研磨50分钟，制得30%玫烟色棒束孢油悬浮剂。

2、室内活性测定实验方法同实施例2。 

将所述玫烟色棒束孢油悬浮剂按1500倍稀释喷雾烟蚜，药后96小时室内防治效果为97.6%，不加植物油和矿物油的相同含量的普通玫烟色棒束孢孢子悬浮液按照同样方法使用，药后96小时防治效果为60.2%，结果见表6： 

表6

Claims (10)

1.一种玫烟色棒束孢（Isaria fumosorosea）油悬浮剂，其特征在于各组分按质量百分比计，玫烟色棒束孢孢子悬浮液1～40%，植物油1～20%，乳化剂3～8%，分散剂0.1～5%，稳定剂1～5%，防冻剂1～5%，余量为惰性矿物油或芳香烃溶剂；

所述玫烟色棒束孢悬浮液中孢子含量为10～100亿个/克；

所述植物油为大豆油、菜籽油、蓖麻油、玉米油、花生油、植物调和油中的一种或两种以上的组合；

所述乳化剂是烷基酚聚氧乙烯醚、苯乙烯基酚聚氧乙烯醚、烷基芳基聚氧丙烯聚氧乙烯醚、烷芳基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、蓖麻油聚氧乙烯醚、烷基苯磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯磷酸盐、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酮、山梨糖醇酐酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、顺丁烯二酸二仲辛酯磺酸钠、多元醇脂肪酸酯及其环氧乙烷加成物、十二烷基硫酸钠中的两种或多种的组合；

所述的稳定剂为2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚、环氧大豆油、环氧亚麻油、环氧脂、季戊四醇中的一种或两种的组合；

所述的分散剂是烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐、亚甲基双荼磺酸钠、木质素磺酸钠中的一种或几种的混合；

所述的防冻剂是乙二醇、丙二醇、丙三醇、二乙二醇中的一种或两种的组合；

所述的惰性矿物油为煤油、柴油或白矿油，所述的芳香烃溶剂为Solvesso100、Solvesso150或Solvesso200。

2.根据权利要求1所述的玫烟色棒束孢油悬浮剂，其特征在于各组分按质量百分比计，玫烟色棒束孢孢子粉20～30%，植物油10～15%，乳化剂3～5%，分散剂1%，稳定剂3%，防冻剂2～4%，余量为惰性矿物油或芳香烃溶剂。

3.根据权利要求1所述的玫烟色棒束孢油悬浮剂，其特征在于各组分按质量百分比计，玫烟色棒束孢孢子粉30 %，植物油 15%，乳化剂 4%，分散剂 1%，稳定剂 3%，防冻剂4%，余量为惰性矿物油或芳香烃溶剂。

4.一种权利要求1、2或3所述玫烟色棒束孢油悬浮剂的应用，其特征在于应用于制备防治果树、蔬菜、小麦、水稻或花卉作物害虫的制剂方面。

5.根据权利要求4所述玫烟色棒束孢油悬浮剂的应用，其特征在于应用于制备防治鳞翅目或双翅目害虫的制剂方面。

6.根据权利要求4所述玫烟色棒束孢油悬浮剂的应用，其特征在于应用于制备防治菜青虫、烟蚜、粉虱、夜蛾、棉铃虫或小菜蛾的制剂方面。

7.一种权利要求1、2或3所述玫烟色棒束孢油悬浮剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将玫烟色棒束孢菌株转接到PDA平板，置于培养箱培养产孢后，在平板上加入含有质量百分比浓度为0.03%吐温80的植物油，轻刮平板上的孢子，将所得的菌液搅拌分散后，获得孢子悬浮液，孢子悬浮液中孢子含量为10～100亿个/mL；

（2）将孢子悬浮液、植物油、乳化剂、分散剂、稳定剂、防冻剂和惰性矿物油或芳香烃溶剂按比例混合，加入到砂磨机中进行研磨即得。

8.一种权利要求7所述制备方法制备得到的玫烟色棒束孢油悬浮剂的应用，其特征在于应用于制备防治果树、蔬菜、小麦、水稻或花卉作物害虫的制剂方面。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于应用于制备防治鳞翅目或双翅目害虫的制剂方面。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于应用于制备防治菜青虫、烟蚜、粉虱、夜蛾、棉铃虫或小菜蛾的制剂方面。