CN112469275B - 用于液体真菌孢子制剂的新型载液 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种包含至少一种如所定义的羧酸酯和真菌孢子的液体制剂，以及一种防治植物中或植物上的植物病原性真菌、昆虫和/或线虫，增强植物生长，或增加植物产量或根部健康的方法，所述方法包括将有效量的根据本发明的液体制剂或液体组合物施用于所述植物或植物正在生长或意欲生长的场所。

Description

用于液体真菌孢子制剂的新型载液

无论是用于对抗各种真菌或昆虫病害还是用于改善植物健康，生物防治剂(BCA)在植物保护领域中都变得越来越重要。尽管也可获得可用作生物防治剂的病毒，但在该领域中使用的主要是基于细菌和真菌的BCA。基于真菌的生物防治剂的最突出的形式是称为分生孢子以及芽生孢子的无性孢子，但其他真菌繁殖体也可为有前景的防治剂，例如(微)菌核、子囊孢子、担子孢子、厚垣孢子或菌丝段。

与许多基于细菌的孢子(例如芽孢杆菌孢子)不同，许多真菌孢子不那么健壮，并且已证明难以以满足商业产品需要(特别是在一定温度下的可接受的储存稳定性)的形式提供真菌孢子。

然而，由于许多因素影响最终制剂的功效，例如生物防治剂的性质、温度稳定性和保存期限以及制剂在应用中的作用，因此提供生物防治剂的合适制剂仍然构成挑战。

合适的制剂是活性成分和惰性成分的均匀且稳定的混合物，其使最终产品更简单、更安全、且更有效地应用于靶标。

生物防治剂的常用制剂包括WP，其为一种微粉化成粉末形式并通常在水中分散后作为悬浮粒子施用的固体制剂，和WG，其为一种由在水中崩解和分散后施用的颗粒组成的制剂。WG产品的颗粒具有0.2至4mm范围内的不同粒子。水分散性颗粒可以通过附聚、喷雾干燥或挤出技术形成。WP制剂很容易制备，但它们粉尘多。此外，它们在现场不容易剂量给药。WG制剂对使用者而言更容易处理，并且粉尘含量通常低于WP制剂。

液体制剂的实例为SC，其为一种固体活性成分在流体中的水基悬浮液，通常在使用前用水稀释。另一种液体制剂类型为EC，其为一种活性成分与表面活性剂如乳化剂在水不溶性有机溶剂中的溶液，当添加到水中时其会形成乳液。

在生物防治剂的实验和商业制剂中已经使用了大量的制剂助剂(对于更详细的描述和列表，参见Schisler等人,Phytopathology,第94卷,第11期,2004)。通常，制剂助剂可以分为载体(填充剂、增量剂)或改善所配制的生物质的化学、物理、生理或营养特性的制剂助剂。

由于真菌分生孢子的脆弱性，基于真菌活性物的BCA在室温或高于室温的温度下在更长的时间段内的稳定性、特别是储存稳定性是特别的挑战。像许多活的生物一样，处于休眠状态的真菌分生孢子对环境影响敏感，例如水、空气(氧气)、温度、辐射等。一些因素可能会触发萌发，而其他因素可能会对孢子生存能力具有不利影响。为了排除水，通常使用油如矿物(石蜡)油或植物油制备液体真菌孢子制剂。这些油中的许多为真菌生物提供了一定的保存期限。植物油是天然来源的，基本上是由甘油和C12-C18饱和和不饱和脂肪酸组成的混合羧酸甘油三酯；它们还含有不同含量的天然蜡。植物油组成是可变的，取决于许多因素，如植物品种、环境因素(例如土壤、营养物)和天气，此处仅列举少数。因此，在若干年和/或地理上很难达到一个恒定的质量和组成。植物油工业用途的另一个限制因素是所有这些油都容易变得酸败，即当暴露在空气、光、水分或细菌作用下时，这会导致令人不愉快的气味、不受控制的聚合物残留的形成和游离脂肪酸的释放，从而进一步促进以自催化的方式分解。因此，需要采取预防措施，如排除光、氧气、高温和不想要的微生物污染，并必须采取对策，例如使用抗氧化剂、自由基清除剂或杀生物剂，以确保植物油基组合物的稳定性。

生物防治剂的制剂的实例记载于Torres等人,2003,J Appl Microbiol,94(2),第330-9页。然而，很明显，仅在4℃下保留超过70％的生物防治剂(例如真菌孢子)的生存能力4个月的制剂不适于在现场每日使用。相反，期望即使在不可能冷藏的条件下，生物防治剂的制剂也具有足够的保存期限。

Kim等人，2010年(J.S.Kim,Y.H.Je,J.Y.Roh,Journal of IndustrialMicrobiology&Biotechnology 2010,第37卷(第4期),第419页及其后页)公开了与分散在水中相比，当分散在油(大豆油、玉米油、棉籽油、石蜡油、油酸甲酯)中时，真菌玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)的分生孢子在50℃下进行2和8小时热处理的过程中表现出改善的稳定性。

Mbarga等人，2014(Biological Control 2014,第77卷,第15页及其后页)发现，与将分生孢子分散在水中相比，在大豆油中用不同的乳化剂配制的棘孢木霉(Trichodermaasperellum)表现出改善的保存期限。

其他液体，例如乙氧基化三硅氧烷(例如Break-Thru S240)，是合适的替代品并例如与淡紫拟青霉(P.Lilacinum)(参见WO2016/050726)提供稳定的制剂，然而，这种三硅氧烷的制备以及因此该产品本身的制备是昂贵的。

EP 1 886 570 A2记载了一种包含某种酯和表面活性剂的微生物孢子的农用化学品活性制剂。稳定性的绝对值表明具有良好的生存能力，但通过比较相对的生存能力可以显示总体稳定性并不是特别高：在40℃下储存8周后的孢子生存能力下降到5.86％的水平(表1，制剂4)。WO 2009/126473 A1记载了一种含有细菌和某些非水的可与水混溶的和/或不可与水混溶的添加剂的水基制剂。WO 2016/189329 A1记载了脂肪酸和脂肪酸衍生物与某些真菌种结合的用途。Begonya Vicedo等人(Archives of Microbiology,第184卷,第5期,第316ff页)记载了一种部分酯化的二元羧酸(即己二酸单乙酯，或AAME)防治由葡萄孢属(Boytritis sp.)引起的疾病。

由于上述缺点，仍然需要用于基于真菌活性物的生物防治剂的简单、易于处理的制剂。在各种性能中，尤其地，这类制剂应理想地在浓缩制剂中提供良好的物理稳定性；表现出适当的随时间的保存期限，特别是在高温(20℃或更高)下；并且提供良好的水混溶性或悬浮性。

如上所述，除了油或有机硅以外的其他有机流体可用于提供基于真菌孢子的BCA的稳定农业化学制剂的先前记载仅非常少。出人意料地发现许多液体羧酸酯在高温下储存(在30℃和更高的温度下5周)后提供了良好至优异的孢子生存能力。

因此，在第一方面，本发明涉及一种液体制剂，其包含

至少一种由羧酸部分和醇部分组成的羧酸酯，如式I所示

其中所述羧酸酯不是植物油中存在的羧酸甘油三酯；

和真菌孢子。该真菌应是一种对植物产生有益作用的真菌。

就本发明而言，羧酸酯既可以分离自天然来源，又可通过本领域中已知的任何方法生产，所述方法不限于根据式I的羧酸部分和醇部分下的相应的羧酸和醇的酯化。相反，术语“羧酸部分”和“醇部分”的使用用于澄清和定义根据本发明的羧酸酯的结构。当两部分结合时，它们在形式消除H₂O的情况下形成一个酯基。因此，羧酸部分也可以定义为羧酸的X-(C＝O)-基团，醇部分可以定义为醇的Y-O-基团。这种定义也被称为与本发明有关的“衍生自”。优选地，羧酸部分下的羧酸是下文进一步定义的一元羧酸或多元羧酸，醇部分下的醇是下文进一步定义的一元醇或多元醇。

本发明中使用的羧酸酯不是植物油中存在的羧酸甘油三酯。这种羧酸甘油三酯包含与脂肪酸结合的甘油，其中术语“脂肪酸”涉及具有12-18个C原子的直链羧酸。这种植物油包括例如室温下为液体的那些油，并优选由它们组成，如玉米油、向日葵油、大豆油、菜籽油、花生油、棉籽油、米糠油、红花油、橄榄油、亚麻籽油和蓖麻油。技术人员知道植物油中可含有哪些羧酸甘油三酯。植物油的定义可以在https://en.wikipedia.org/wiki/Vegetable_oil(如2018年7月20日)找到，这种羧酸甘油三酯的概述可以在http://www.dgfett.de/material/fszus.php(如2018年7月20日)找到。

除了以上例外，在一个实施方案中，本发明中使用的羧酸酯，特别是根据a)的羧酸酯，不是由C14-C18羧酸部分和基于甲醇的醇部分组成的羧酸酯。在另一个实施方案中，根据a)的羧酸酯不是由C14-C18羧酸部分和基于乙醇的醇部分组成的羧酸酯。在一个具体实施方案中，根据a)的羧酸酯不是由C14-C18羧酸部分和基于甲醇或乙醇的醇部分组成的羧酸酯。这种羧酸酯也被称为甲基化或乙基化种子油，在一些实施方案中，明确地不包括在本发明的范围内。

本发明范围内的真菌孢子包括被称为分生孢子以及芽生孢子的无性孢子，还包括其他真菌繁殖体，如子囊孢子、担子孢子、厚垣孢子。(微)菌核虽然不是严格意义上的孢子，但也可以加入到根据本发明的液体制剂中。优选地，真菌孢子是以下所述的对植物有益的那些真菌。

优选真菌孢子为分生孢子。

在一个实施方案中，所述至少一种羧酸酯由以下部分组成或含有以下部分或可从以下部分获得：

a)一元羧酸部分和一元醇部分

b)至少一个一元羧酸部分和多元醇部分，和/或

c)多元羧酸部分和至少一个一元醇部分；

其中所述一元醇部分为支链、直链、环状、无环或部分环状、饱和或部分不饱和的C1-C24一元醇部分；

其中所述一元羧酸部分为支链、直链、环状、无环或部分环状、饱和或部分不饱和的C2-C24一元羧酸部分，任选地携带至少一个OH官能团；

其中所述多元醇部分为支链、直链、环状、无环或部分环状、饱和或部分不饱和的二、三、四、五和/或六价C2-C20多元醇部分；和

其中所述至少一个多元羧酸部分为支链、直链、环状、无环或部分环状、饱和或部分不饱和的C2-C20多元羧酸部分，任选地携带至少一个OH官能团。

就本发明而言，术语“多元羧酸”包括具有两个以上羧基的羧酸。因此，在本发明的范围内的有二元羧酸、三元羧酸和四元羧酸。

液体制剂可包含根据a)至c)任一项的羧酸酯的混合物，例如a)和b)、a)和c)、或b)和c)。也可以使用a)、b)和c)全部三种的混合物。

a)和b)任一项的混合物可以以1:100至100:1的比值存在，优选以1:50至50:1的比值存在，更优选以1:25至25:1如1:20、1:15、1:10、1:5、1:2、1:1、2:1、5:1、10:1、15:1或20:1的混合物存在。又一个优选实施方案包含比值为1:20至1:1或比值为1:1至20:1的a)和b)任一项的混合物。

a)和c)任一项的混合物可以以1:100至100:1的比值存在，优选以1:50至50:1的比值存在，更优选以1:25至25:1如1:20、1:15、1:10、1:5、1:2、1:1、2:1、5:1、10:1、15:1或20:1的混合物存在。又一个优选实施方案包含比值为1:20至1:1或比值为1:1至20:1的a)和c)任一项的混合物。

b)和c)任一项的混合物可以以1:100至100:1的比值存在，优选以1:50至50:1的比值存在，更优选以1:25至25:1如1:20、1:15、1:10、1:5、1:2、1:1、2:1、5:1、10:1、15:1或20:1的混合物存在。又一个优选实施方案包含比值为1:20至1:1或比值为1:1至20:1的b)和c)任一项的混合物。

a)和b)和c)任一项的混合物可分别以1:1:100至100:100:1，或1:100:1至100:1:100，或100:1:1至1:100:100的范围存在，优选以1:1:50至50:50:1，或1:50:1至50:1:50，或50:1:1至1:50:50的比值存在，更优选以1:1:25至25:25:1，或1:25:1至25:1:25，或25:1:1至1:25:25，例如1:20:1、1:15:1、1:10:1、1:5:1、1:1:1、20:1:1、15:1:1、10:1:1、5:1:1、1:1:20、1:1:15、1:1:10、1:1:5、5:20:1、5:15:1、5:10:1、1:20:5、1:15:5、1:10:5、20:1:5、15:1:5、10:1:5、20:5:1、15:5:1、10:5:1、1:5:20、1:5:15、1:5:10、5:1:20、5:1:15或5:1:10的混合物存在。又一个优选的实施方案包含比值为1:20:1至1:1:1，或比值为20:1:1至1:1:1，或比值为1:1:20至1:1:1的a)和b)和c)任一项的混合物。

在一个实施方案中，a)、b)和/或c)任一项是由多个不同的一元醇、多元醇、一元羧酸或多元羧酸部分组成的酯的混合物。例如，根据a)的混合物可包含多个不同的一元羧酸和/或一元醇部分，根据b)的混合物可包含多个不同的一元羧酸和/或多元醇部分，和/或根据c)的混合物可包含多个不同的多元羧酸和/或一元醇部分。

在具体实施方案中，液体制剂可以既包含上述不同的一元醇、多元醇、一元羧酸或多元羧酸部分的混合物，又包含不同亚组a)至c)的混合物。

在一个优选的实施方案中，所述一元醇部分衍生自支链、直链、饱和或部分不饱和的C1-C20一元醇。示例性和优选的一元醇选自甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、1-戊醇、1-己醇、1-庚醇、2-乙基己烷-1-醇、辛醇、壬醇、异壬醇、癸醇、十一醇、十二醇、十三醇、异十三醇、十四醇、十五醇、十六醇、棕榈醇、十七醇、十八醇、油醇、十九醇、二十醇及任选地前述任一种的混合物。更优选的一元醇包括甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、1-戊醇、1-己醇、1-庚醇、2-乙基己烷-1醇、辛醇、壬醇、异壬醇、癸醇、十二醇、十三醇、异十三醇、十四醇、十六醇、棕榈醇、十八醇、油醇及任选地前述任一种的混合物。

在另一个优选的实施方案中，所述至少一个一元羧酸部分衍生自支链、直链、饱和或部分不饱和的C2-C20一元羧酸。示例性和优选的一元羧酸包括乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、癸酸、十二酸、十四酸、棕榈酸、十八酸、异十八酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、蓖麻油酸及任选地前述任一种的混合物。

在一个优选的实施方案中，至少一个多元醇部分衍生自选自以下的多元醇：乙二醇、1,3-丙二醇、1,4-丁二醇、1,5-戊二醇、1,6-己二醇、环己烷-1,2-二醇、异山梨醇、1,2-丙二醇、新戊二醇、丙三醇、三羟甲基丙烷、季戊四醇和根据式HOCH₂(CHOH)_nCH₂OH(n＝2、3或4)的糖醇及任选地其混合物。糖醇的实例包括乙二醇、丙三醇、赤醇、苏糖醇、阿糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、isomalt、麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽三糖醇(maltotriol)、麦芽四糖醇(maltotetraitol)、polyglycitol和脱水山梨糖醇。优选的糖醇为山梨糖醇和脱水山梨糖醇。更优选的多元醇为1,2-丙二醇、新戊二醇、丙三醇、1,3-丙二醇、三羟甲基丙烷和脱水山梨糖醇及任选地其混合物。甚至更优选的多元醇为1,2-丙二醇、丙三醇、1,3-丙二醇和脱水山梨糖醇及任选地其混合物。

在另一个优选的实施方案中，所述至少一个多元羧酸部分衍生自选自以下的多元羧酸：

(i)直链、饱和或部分不饱和的C2-C10二元羧酸

(ii)环状C5-C6二元羧酸，和

(iii)柠檬酸及其O-乙酰化衍生物，如O-乙酰基柠檬酸。

所述至少一个多元羧酸的非限制性优选的实例包括1,2-环己烷二元羧酸、草酸、丙二酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、2-羟基琥珀酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、O-乙酰基柠檬酸和柠檬酸。从实例中可以看出，1,2-环己烷二羧酸、己二酸、O-乙酰基柠檬酸和戊二酸(其中1,2-环己烷二羧酸、己二酸和O-乙酰基柠檬酸已根据本发明成功测试)是最优选的。

根据本发明的羧酸酯中包含的至少一个一元羧酸或至少一个多元羧酸可携带至少一个OH官能团。

在某些实施方案中，所述根据b)的至少一种羧酸酯包含的至少一种产生多元醇部分的多元醇可以部分或完全酯化。换言之，多元醇可以在其一个或多个官能OH基团上酯化，直到产生的多元醇部分中存在所有官能OH基团。因此，在包含三个官能OH基团的多元醇部分中，例如丙三醇中，一个或两个或所有三个OH基团可以用一元羧酸酯化，形成根据b)的羧酸酯，在包含两个官能OH基团的多元醇部分中，例如1,3-丙二醇中，一个或两个OH基团可以用一元羧酸酯化，形成根据b)的羧酸酯。

关于根据a)的羧酸酯，它优选由至少一个支链、直链、饱和或部分不饱和的C2-C20羧酸部分和至少一个支链、直链、饱和或部分不饱和的C1-C20一元醇部分组成。

优选地，根据a)的羧酸酯中C-原子数范围为13至28。

优选地，形成根据a)的醇部分的一元醇选自甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、1-戊醇、1-己醇、1-庚醇、2-乙基己烷-1-醇、辛醇、壬醇、异壬醇、癸醇、十一醇、十二醇、十三醇、异十三醇、十四醇、十五醇、十六醇、棕榈醇、十七醇、十八醇、油醇、十九醇、二十醇及任选地前述任一种的混合物。

在根据a)的羧酸酯中，所述一元羧酸部分优选衍生自选自以下的一元羧酸：乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、癸酸、十二酸、十四酸、棕榈酸、十八酸、异十八酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、蓖麻油酸及任选地前述任一种的混合物。更优选地，特别是关于上述一元羧酸，相应的一元醇部分衍生自选自以下的一元醇：甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、1-戊醇、1-己醇、1-庚醇、2-乙基己烷-1-醇、辛醇、壬醇、异壬醇、癸醇、十二醇、十三醇、异十三醇、十四醇、十六醇、棕榈醇、十八醇、油醇及任选地前述任一种的混合物。在一个更优选的实施方案中，上述甲基化和/或乙基种子油不包括在本发明的范围内。

特别优选的根据a)的羧酸酯包含衍生自选自以下的一元羧酸的一元羧酸部分：乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸和癸酸及任选地其混合物，和衍生自选自以下的一元醇的一元醇部分：十二醇、十三醇、异十三醇、十四醇、十六醇、棕榈醇、十八醇、油醇及任选地其混合物。

其他特别优选的根据a)的羧酸酯包含衍生自选自以下的一元羧酸的一元羧酸部分：十二酸、十四酸、棕榈酸、十八酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、蓖麻油酸及任选地其混合物，和衍生自选自以下的一元醇的一元醇部分：甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、1-戊醇、1-己醇、1-庚醇、2-乙基己烷-1-醇、辛醇、壬醇、异壬醇、癸醇及任选地其混合物。在一个更优选的实施方案中，上述甲基化和/或乙基种子油不包括在本发明的范围内。

如实施例所示，根据a)的羧酸酯为十二酸2-乙基己基酯、棕榈酸2-乙基己基酯、油酸2-乙基己基酯、蓖麻油酸甲酯和丙酸戊酯时，已被证明能产生根据本发明的稳定作用，因此特别优选。

优选的根据b)的羧酸酯包含衍生自选自以下的一元羧酸的一元羧酸部分：乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、癸酸、十二酸、十四酸、棕榈酸、十八酸、异十八酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、蓖麻油酸及任选地其混合物，和衍生自选自以下的多元醇的多元醇部分：1,2-乙二醇、1,3-丙二醇、1-4-丁二醇、1,5-戊二醇、1,6-己二醇、环己烷-1,2-二醇、异山梨醇、1,2-丙二醇、新戊二醇、丙三醇、季戊四醇、三羟甲基丙烷、糖醇及任选地其混合物。

在一个更优选的实施方案中，在所述根据b)的至少一种羧酸酯中，所述一元羧酸部分衍生自支链、直链、环状、无环或部分环状、饱和或部分不饱和的C2-C6一元羧酸，任选地携带至少一个OH官能团，优选C2至C5一元羧酸部分。在该优选的实施方案中，甚至更优选地，相应的多元醇部分衍生自1,2-丙二醇、新戊二醇、丙三醇、1,3-丙二醇、三羟甲基丙烷和脱水山梨糖醇及任选地其混合物。甚至更优选地，多元醇为1,2-丙二醇、丙三醇、1,3-丙二醇和脱水山梨糖醇及任选地其混合物。

在一个替代的更优选的实施方案中，在所述根据b)的至少一种羧酸酯中，所述一元羧酸部分衍生自选自以下的一元羧酸：乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸及任选地其混合物，所述多元醇部分衍生自选自以下的多元醇：新戊二醇、季戊四醇、三羟甲基丙烷及任选地其混合物。

在另一个更优选的可任选地与紧接在本实施方案上方的实施方案相结合的实施方案中，在所述根据b)的至少一种羧酸酯中，所述多元醇部分为

环状或部分环状、饱和或部分不饱和的C2-C20-二价、C3-C20-三价、C4-C20-四价、C-5-C20-五价或C6-C20-六价多元醇部分；或以下式II的多元醇

其中n为0至4的整数，

其中R1和R2彼此独立地为氢或羟基，

其中如果n＝1，R1＝OH，则R2为C1-C9烷基。

替代的更优选的根据b)的羧酸酯包含衍生自选自以下的一元羧酸的一元羧酸部分：乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、癸酸、十二酸、十四酸、棕榈酸、十八酸、异十八酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、蓖麻油酸及任选地其混合物，和衍生自选自以下的多元醇的多元醇部分：1,2-乙二醇、1,3-丙二醇、1-4-丁二醇、1,5-戊二醇、1,6-己二醇、环己烷-1,2-二醇、异山梨醇、1,2-丙二醇、丙三醇、糖醇及任选地其混合物。

优选地，根据b)的羧酸酯中C原子数范围为9至60个碳原子，更优选9至40个。

在根据b)的羧酸酯的一个特别优选的实施方案中，所述多元醇部分衍生自环状或部分环状、饱和或部分不饱和的C2-C20-二价、C3-C20-三价、C4-C20-四价、C-5-C20-五价或C6-C20-六价多元醇。在此处，甚至更优选地，所述环状或部分环状的多元醇部分衍生自上文进一步描述的糖醇，即包括乙二醇、丙三醇、赤醇、苏糖醇、阿糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、庚七醇、isomalt、麦芽糖醇、乳糖醇、麦芽三糖醇、麦芽四糖醇、polyglycitol和脱水山梨糖醇。

特别优选的包含在根据b)的羧酸酯中的多元醇部分衍生自1,2-乙二醇、1,2-丙二醇、新戊二醇、1,3-丙二醇和脱水山梨糖醇及任选地其混合物。例如，特别优选以丙三醇为多元醇，乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸和癸酸及任选地其混合物为一元羧酸形成羧酸部分。特别优选以二乙酰甘油为多元醇，乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、癸酸、十二酸、十四酸、棕榈酸、十八酸、异十八酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸和蓖麻油酸及任选地其混合物为羧酸形成羧酸部分。另一组特别优选的根据b)的羧酸酯衍生自新戊二醇、三羟甲基丙烷和季戊四醇为多元醇部分和乙酸为一元羧酸部分。

就与根据b)的羧酸酯有关的所有实施方案而言，通常优选地，如果多元醇部分衍生自新戊二醇，则一元羧酸部分不衍生自癸酸，和/或如果多元醇部分衍生自季戊四醇，则一元羧酸部分不衍生自2-乙基己酸和/或如果多元醇部分衍生自三羟甲基丙烷，则一元羧酸部分不衍生自正十八酸。

更优选地，关于根据b)的羧酸酯，只要多元醇部分衍生自新戊二醇、三羟甲基丙烷或季戊四醇，则一元羧酸部分不衍生自具有7至18个碳原子的一元羧酸。

如实施例所示，根据b)的羧酸酯为丙二醇二辛酸酯、丙二醇二癸酸酯、新戊二醇二椰油酸酯(neopentylglycol dicocoate)、甘油三乙酸酯、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、三羟甲基丙烷三椰油酸酯(trimethylolpropane tricocoate)、甘油三辛酸酯、甘油三癸酸酯、C12-C18羧酸甘油单酯二乙酸酯(C12-C18羧酸构成脂肪酸组)、三羟甲基丙烷三辛酸酯、三羟甲基丙烷三癸酸酯、三羟甲基丙烷三油酸酯和脱水山梨糖醇三油酸酯时，已被证明能产生根据本发明的稳定作用，因此特别优选。

至于根据c)的羧酸酯，所述多元羧酸部分优选衍生自直链、饱和或部分不饱和的C2-C10二元羧酸、环状C5-C6二元羧酸和O-乙酰基柠檬酸及任选地其混合物。更优选地，所述多元羧酸部分衍生自选自直链、饱和的C3-C8二元羧酸、1,2-环己烷二羧酸和O-乙酰基柠檬酸及任选地其混合物的多元羧酸。甚至更优选地，所述多元羧酸部分衍生自选自1,2-环己烷二羧酸、戊二酸、己二酸和O-乙酰基柠檬酸及任选地其混合物的多元羧酸。在另一个更优选的实施方案中，所述多元羧酸部分衍生自选自1,2-环己烷二羧酸、戊二酸和O-乙酰基柠檬酸及任选地其混合物的多元羧酸。

优选地，根据c)的羧酸酯中C-原子数范围为10至40，更优选10至30，甚至更优选10至20。

替代地或除表征根据c)的羧酸酯中多元羧酸部分的以上实施方案以外，根据c)的羧酸酯中一元醇部分衍生自选自以下的一元醇：甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基丁烷-1-醇、2-甲基丁烷-2-醇、3-甲基丁烷-1-醇、3-甲基丁烷-2-醇、2,2-二甲基丙烷-1-醇、1-己醇、1-庚醇、2-乙基己烷-1-醇、辛醇、壬醇、异壬醇、癸醇、十二醇、十三醇、异十三醇、十四醇、十六醇、棕榈醇、十八醇、油醇及任选地其混合物。

在根据c)的羧酸酯的一个优选的实施方案中，所述多元羧酸部分衍生自直链C3-C8二元羧酸，一元醇部分衍生自C1-C5一元醇。

在根据c)的羧酸酯的另一个优选的实施方案中，所述多元羧酸部分衍生自环状二元羧酸和三元羧酸，一元醇部分衍生自C1-C24一元醇。

在所有与根据c)的羧酸酯有关的实施方案中，特别优选的是，如果多元羧酸部分衍生自己二酸，则一元醇部分不衍生自异癸醇或2-庚基十一醇。在其他特别优选的实施方案中，根据c)的羧酸酯不衍生自己二酸和具有6至18个碳原子的一元醇部分。

替代地或除表征根据c)的羧酸酯的以上实施方案以外，与直链多元羧酸部分结合的一元醇部分选自甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇和异丁醇。

作为上述表征根据c)的羧酸酯的实施方案的另一个替代方案或者附加方案，与环状C5-C6二元羧酸和O-乙酰基柠檬酸或其混合物结合的一元醇部分选自甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、1-己醇、1-庚醇、2-乙基己烷-1-醇、辛醇、壬醇、异壬醇、癸醇、十二醇、十三醇、异十三醇、十四醇、十六醇、棕榈醇、十八醇、油醇及任选地其混合物。

如实施例所示，根据c)的羧酸酯为1,2-环己烷二羧酸二异壬酯、己二酸二正丁酯、己二酸二异丙酯和O-乙酰基柠檬酸三丁酯时，已被证明能产生根据本发明的稳定作用，因此特别优选。

如本申请的实施例所示，发现包含本文描述的羧酸酯的流体具有根据本发明的稳定作用，而其他结构相似的流体则不显示这种作用。虽然申请人不希望被任何科学理论所束缚，但据信某些流体(如低分子量的羧酸酯和提供高溶剂化能力的羧酸酯)的结构基序，不适合提供稳定的作用。因此，具有小于12个碳原子，优选小于9个碳原子，更优选小于6个碳原子的根据a)的羧酸酯，如衍生自选自乙酸、丙酸、丁酸、戊酸或己酸的羧酸与选自甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、1-戊醇和1-己醇的一元醇的组合的羧酸酯不被认为是根据本发明的。不根据本发明的低分子量羧酸酯的非限制性实例是乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸1-丙酯、乙酸2-丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯和戊酸甲酯。相比之下，在权利要求中定义的羧酸酯对真菌孢子有稳定作用。

出人意料地，在本发明作出的过程中发现本文定义的某些液体适合于提高真菌孢子的储存稳定性。换言之，与在不同制剂中或以纯形式存在的真菌孢子相比，在根据本发明的液体制剂中存在的真菌孢子在给定时间后显示出更高的萌发率。

就本发明而言，“提高的萌发率”是指直至在所述孢子生产之后至少2周，即在完成冷却期之后至少2周，休眠的真菌结构体或器官、优选真菌孢子的萌发率，比未根据本发明的程序处理但以其他方式同等处理的休眠的真菌结构体或器官如孢子(“对照孢子”)的萌发率高至少10％、优选至少20％、更优选至少30％或至少40％且最优选至少50％。换言之，“提高的萌发率”意指直至在所述孢子生产之后至少2周，萌发率为对照孢子的萌发率的至少110％、优选至少120％、更优选至少130％或至少140％且最优选至少150％或更高。优选地，所述提高的萌发率直至在孢子生产之后至少3个月、更优选至少4个月并且最优选在孢子生产之后至少6个月如至少8个月、至少10个月或甚至12个月或更长仍然可见或甚至增加。因此，优选的是，在所述孢子生产之后3个月，根据本发明处理的孢子的萌发率为对照孢子的萌发率的至少200％。在另一个优选的实施方案中，在所述孢子生产之后6个月，萌发率为对照孢子的萌发率的至少300％或至少400％、最优选至少500％。在这一点上，萌发率表示孢子在给定时间之后仍然萌发的能力。因此，萌发率％意指在给定时间之后能够萌发的孢子的百分比。测量萌发率的方法在本领域中是众所周知的。例如，将孢子铺到琼脂培养基的表面上，并在合适的生长温度下孵育之后，通过显微镜测定发育出萌发管的孢子的比例(Oliveira等人,2015.A protocol for determination of conidial viability of thefungal entomopathogens Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae fromcommercial products.Journal of Microbiological Methods 119；第44-52页，以及其中的参考文献)。

在一个具体实施方案中，本发明提供一种液体制剂，其包含

0.1-40％、优选2.5-30％、最优选5-25％，如10-20％的真菌孢子，

最高达99.9％、优选70至97.5％、最优选75至95％，如80-90％的至少一种如上文所定义的羧酸酯，

0-20％、优选0-15％、最优选0.1-10％的表面活性剂(例如分散剂乳化剂)；

0-10％、优选0-7％、更优选0.5-5％的流变改性剂，例如气相二氧化硅、凹凸棒石；

各自为0-5％、优选0-3％、最优选0.1-0.5％的消泡剂、抗氧化剂、染料。

特别地，优选液体制剂还包含表面活性剂，以产生可与水混溶的制剂，该可与水混溶的制剂在用适当的水量稀释后可施用于现场。

BCA是处于休眠形式的活的生物。因此，包含低浓度水或甚至基本上不含水的制剂是BCA的优选制剂类型。另一方面，某些BCA也可以以较高的水含量配制。如果存在水，则此类水主要来自干燥的孢子粉中残留的游离水或其他制剂助剂中的痕量水。因此，由于这些事实，水浓度可能为0至8％，那么这一范围将属于“基本上不含水”的定义范围。优选地，水浓度范围为0至6％、更优选0至4％，如2至4％。因此，示例性水浓度包括2％、3％、4％、5％和6％。

虽然据信在根据本发明的液体制剂中，所述至少一种羧酸酯可以较低的量存在，但优选以至少50重量％的量存在。通常，所述至少一种羧酸酯可以最高达99.9％、优选70重量％至97.5重量％范围内、更优选75重量％至95％、最优选80重量％至90重量％的浓度存在。

根据本发明的液体制剂优选为可与水混溶的。术语“可与水混溶的”表示如果将流体和水以1:200的比值、优选1:100的比值、更优选1:50的比值合并，那么所述液体将产生均匀的混合物。为了达到水混溶性，液体制剂优选还包含如上所述的表面活性剂。

任何真菌种均可用于本发明。然而，优选所述真菌孢子来自对植物有有益作用的真菌种，例如有效作为植物保护中的生物防治剂或作为植物健康促进剂的真菌种。更优选地，所述真菌为丝状真菌。

如技术人员众所周知的，丝状真菌与酵母的区别是其在大多数条件下倾向于以多细胞的丝状体形式生长，相比之下，卵形或椭圆形酵母细胞主要是单细胞生长。

所述至少一种丝状真菌可以是对植物施加积极作用如植物保护作用或植物生长促进作用的任何真菌。因此，所述真菌可以是昆虫病原性真菌(entomopathogenicfungus)、食线虫真菌、促植物生长真菌、对植物病原体(如细菌或真菌植物病原体)具有活性的真菌或具有除草作用的真菌。

NRRL是美国农业研究菌种保藏中心(Agricultural Research Service CultureCollection)的缩写，是一个在国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯公约之下的用于保藏微生物菌种的国际权威保存机构，其地址为美国伊利诺伊州，皮奥里亚市，北部大学街1815号，美国农业部农业研究服务局，农业应用研究国家中心，邮编61604。

ATCC是美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection)的缩写，是一个在国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯公约之下的用于保藏微生物菌种的国际权威保存机构，其地址为美国弗吉尼亚州马纳萨斯市大学林荫大道10801号ATCC专利保存中心，邮编10110。

已知具有选择性的除草活性的真菌数量很少，例如F2.1 Phoma macrostroma，特别是菌株94-44B；F2.2小核盘菌(Sclerotinia minor)，特别是菌株IMI 344141(例如Agrium Advanced Technologies的Sarritor)；F2.3胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)，特别是菌株ATCC 20358(例如Agricultural Research Initiatives的Collego(也称为LockDown))；F2.4 Stagonospora atriplicis；或F2.5尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，其不同的菌株对不同的植物种类具有活性，例如杂草独脚金(Striga hermonthica)(尖孢镰刀菌strigae专化型(Fusarium oxysproum formaespecialis strigae))。

支持、促进或刺激植物生长/植物健康的真菌的示例性的菌种为：E2.1黄色蠕形霉(Talaromyces flavus)，特别是菌株V117b；E2.2深绿木霉(Trichoderma atroviride)，特别是菌株CNCM I-1237(例如来自Agrauxine,FR的WP)，在国际申请号PCT/IT2008/000196)中记载的菌株SC1，菌株编号V08/002387，菌株编号NMI编号V08/002388，菌株编号NMI编号V08/002389，菌株编号NMI编号V08/002390，菌株LC52(例如来自AgrimmTechnologies Limited的Sentinel)，菌株kd(例如来自Andermatt Biocontrol的T-Gro)和/或菌株LUI32(例如来自Agrimm Technologies Limited的Tenet)；E2.3哈茨木霉(Trichoderma harzianum)，特别是菌株ITEM 908或T-22(例如来自Koppert的Trianum-P)；E2.4疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)，特别是菌株AARC-0255(例如来自ValentBiosciences的DiTera^TM)；E2.5拜莱青霉(Penicillium bilaii)，特别是菌株ATCC 22348(例如来自Acceleron BioAg的/>)和/或菌株ATCC20851；E2.6寡雄腐霉(Pythium oligandrum)，特别是菌株DV74或M1(ATCC 38472；例如来自Bioprepraty，CZ的Polyversum)；E2.7 Rhizopogon amylopogon(例如包含在来自Helena Chemical Company的Myco-Sol)；E2.8 Rhizopogon fulvigleba(例如包含在来自Helena Chemical Company的Myco-Sol)；E2.9哈茨木霉，特别是菌株TSTh20，菌株KD，来自Plant Health Products,ZA的产品Eco-T或菌株1295-22；E2.10康宁木霉(Trichoderma koningii)；E2.11聚丛球囊霉(Glomus aggregatum)；E2.12明球囊霉(Glomus clarum)；E2.13沙漠球囊霉(Glomusdeserticola)；E2.14幼套球囊霉(Glomus etunicatum)；E2.15根内球囊霉(Glomusintraradices)；E2.16单孢球囊霉(Glomus monosporum)；E2.17摩西球囊霉(Glomusmosseae)；E2.18双色蜡蘑(Laccaria bicolor)；E2.19浅黄根须腹菌(Rhizopogonluteolus)；E2.20 Rhizopogon tinctorus；E2.21 Rhizopogon villosulus；E2.22光硬皮马勃(Scleroderma cepa)；E2.23点柄乳牛肝菌(Suillus granulatus)；E2.24 Suilluspunctatapies；E2.25绿色木霉(Trichoderma virens)，特别是菌株GL-21；E2.26黑白轮枝孢(Verticillium albo-atrum)(原名黄萎病菌(V.dahliae))，特别是菌株WCS850(CBS276.92；例如来自Tree Care Innovations的Dutch Trig)；E2.27绿色木霉(Trichodermaviride)，例如菌株B35(Pietr等人,1993,Zesz.Nauk.A R w Szczecinie 161:125-137)和E2.28淡紫拟青霉(Purpureocillium lilacinum)(先前称为淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus))，菌株251(AGAL 89/030550；例如来自Bayer CropScience Biologics GmbH的BioAct)。

在一个更优选的实施方案中，对植物健康和/或生长具有有益作用的真菌菌株选自：黄色蠕形霉，菌株VII7b；哈茨木霉，菌株KD或来自Plant Health Products,SZ的产品Eco-T的菌株；疣孢漆斑菌，菌株AARC-0255；拜莱青霉，菌株ATCC 22348；寡雄腐霉，菌株DV74或M1(ATCC 38472)；绿色木霉，菌株B35；深绿木霉，菌株CNCM I-1237；和淡紫拟青霉(先前称为淡紫拟青霉)，菌株251(AGAL 89/030550)。

在一个甚至更优选的实施方案中，对植物健康和/或生长具有有益作用的真菌菌株选自：拜莱青霉，菌株ATCC 22348；绿色木霉，例如菌株B35；深绿木霉，菌株CNCM I-1237；和淡紫拟青霉(先前称为淡紫拟青霉)，菌株251(AGAL 89/030550)。

杀细菌活性真菌为，例如：A2.2出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)，特别是菌株DSM14940的芽生孢子；A2.3出芽短梗霉，特别是菌株DSM 14941的芽生孢子或菌株DSM14940和DSM14941的芽生孢子的混合物；A2.9黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum)。

对真菌病原体具有活性的真菌为：例如，B2.1盾壳霉(Coniothyriumminitans)，特别是菌株CON/M/91-8(登记号DSM-9660；例如来自Bayer CropScience Biologics GmbH的)；B2.2核果梅奇酵母(Metschnikowia fructicola)，特别是菌株NRRL Y-30752；B2.3赫色小球壳孢(Microsphaeropsis ochracea)，特别是菌株P130A(ATCC保藏号74412)；B2.4白黏帚菌(Muscodor albus)，特别是菌株QST 20799(登记号NRRL 30547)；B2.5哈茨木霉(Trichoderma harzianum rifai)，特别是菌株KRL-AG2(也称为菌株T-22/ATCC 208479，例如来自BioWorks，US的PLANTSHIELD T-22G、/>和TurfShield)和菌株T39(例如来自Makhteshim，US的/>)；B2.6指状节丛孢(Arthrobotrysdactyloides)；B2.7少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)；B2.8多孢节丛孢(Arthrobotrys superba)；B2.9黄曲霉(Aspergillus flavus)，特别是菌株NRRL 21882(例如来自Syngenta的/>)或菌株AF36(例如来自Arizona Cotton Research andProtection Council，US的AF36)；B2.10粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)(也称为Clonostachys rosea f.rosea)，特别是来自Adjuvants Plus的菌株321U，如Xue(Efficacyof Clonostachys rosea strain ACM941 and fungicide seed treatments forcontrolling the root rot complex of field pea,Can Jour Plant Sci 83(3):519-524)中所公开的菌株ACM941，菌株IK726(Jensen DF等人,Development of a biocontrolagent for plant disease control with special emphasis on the near commercialfungal antagonist Clonostachys rosea strain‘IK726’；Australas PlantPathol.2007；36:95–101)，菌株88-710(WO2007/107000)，菌株CR7(WO2015/035504)或WO2017109802公开的菌株CRrO、CRM和CRr2；B2.11大伏革菌(Phlebiopsis gigantea或Phlebia gigantea或Peniophora gigantea)，特别是菌株VRA 1835(ATCC 90304)，菌株VRA1984(DSM16201)，菌株VRA 1985(DSM16202)，菌株VRA 1986(DSM16203)，菌株FOC PG B20/5(IMI390096)，菌株FOC PG SP log6(IMI390097)，菌株FOC PG SP log5(IMI390098)，菌株FOC PG BU3(IMI390099)，菌株FOC PG BU4(IMI390100)，菌株FOC PG410.3(IMI390101)，菌株FOC PG 97/1062/116/1.1(IMI390102)，菌株FOC PG B22/SP1287/3.1(IMI390103)，菌株FOC PG SH1(IMI390104)和/或菌株FOC PG B22/SP1190/3.2(IMI390105)(Phlebiopsis产品为例如来自Verdera and FIN的/>来自e-nema，DE的/> 和/>)；B2.12寡雄腐霉，特别是菌株DV74或M1(ATCC 38472；例如来自Bioprepraty,CZ的Polyversum)；B2.13黄硬皮马勃；B2.14黄色蠕形霉，特别是菌株V117b；B2.15棘孢木霉，特别是来自Isagro的菌株ICC 012或菌株SKT-1(例如来自Kumiai Chemical Industry的/>)，菌株T34(例如来自Biobest Group NV的/>和Biocontrol Technologies S.L.,ES的T34)；B2.16深绿木霉，特别是菌株CNCM I-1237(例如来自Agrauxine,FR的/>WP)，在国际申请号PCT/IT2008/000196中记载的菌株SC1，菌株77B(来自Andermatt Biocontrol的T77)，菌株编号V08/002387，菌株NMI编号V08/002388，菌株NMI编号V08/002389，菌株NMI编号V08/002390，菌株LC52(例如来自Agrimm TechnologiesLimited的Sentinel)，菌株LUI32(例如Agrimm Technologies Limited的Tenet)，菌株ATCC20476(IMI206040)，菌株T11(IMI352941/CECT20498)，菌株SKT-1(FERM P-16510)，菌株SKT-2(FERM P-16511)，菌株SKT-3(FERM P-17021)；B2.17哈马木霉(Trichodermaharmatum)；B2.18哈茨木霉，特别是菌株KD，菌株T-22(例如来自Koppert的Trianum-P)，菌株TH35(例如Mycontrol的Root-Pro)，菌株DB 103(例如Dagutat Biolab的T-Gro7456)；B2.19绿色木霉(也称为绿色粘帚霉(Gliocladium virens))，特别是菌株GL-21(例如Certis，US的SoilGard)；B2.20绿色木霉，特别是菌株TV1(例如Koppert的Trianum-P)，菌株B35(Pietr等人,1993,Zesz.Nauk.A R w Szczecinie 161:125-137)；B2.21白粉寄生孢(Ampelomyces quisqualis)，特别是菌株AQ 10(例如CBC Europe,Italy的AQ/>)；B2.22阿肯色(Arkansas)真菌18，ARF；B2.23出芽短梗霉，特别是菌株DSM14940的芽生孢子，菌株DSM 14941的芽生孢子或菌株DSM14940和DSM 14941的芽生孢子的混合物(例如bio-ferm,CH的/>)；B2.24角毛壳菌(Chaetomium cupreum)(例如AgriLife的BIOKUPRUMTM)；B2.25球毛壳菌(Chaetomium globosum)(例如Rivale的Rivadiom)；B2.26枝状枝孢菌(Cladosporiumcladosporioides)，特别是菌株H39(Stichting Dienst LandbouwkundigOnderzoek)；B2.27 Dactylaria candida；B2.28 Dilophosphora alopecuri(例如TwistFungus)；B2.29尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，特别是菌株Fo47(例如Natural PlantProtection的Fusaclean)；B2.30链孢粘帚菌(Gliocladium catenulatum)(异名：链状粉红粘帚菌(Clonostachys rosea f.catenulate))，特别是菌株J1446(例如Lallemand的)；B2.31蜡蚧轮枝菌(Lecanicillium lecanii)(以前称为蜡蚧轮枝孢(Verticillium lecanii))，特别是菌株KV01的分生孢子(例如Koppert/Arysta的)；B2.32蠕形青霉菌(Penicillium vermiculatum)；B2.33盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)(原名绿色木霉(T.viride))，特别是菌株ICC080(IMI CC392151CABI，例如AGROBIOSOL DE MEXICO,S.A.DE C.V.的BioDerma)；B2.34多孢木霉(Trichoderma polysporum)，特别是菌株IMI 206039(例如BINAB Bio-Innovation AB,Sweden的Binab TF WP)；B2.35钩木霉(Trichoderma stromaticum)(例如Ceplac,Brazil的Tricovab)；B2.36微变冢村氏菌(Tsukamurella paurometabola)，特别是菌株C-924(例如)；B2.37奥德曼细基格孢(Ulocladium oudemansii)，特别是菌株HRU3(例如Botry-Zen Ltd,NZ的/>)；B2.38黑白轮枝孢(原名黄萎病菌)，特别是菌株WCS850(CBS 276.92，例如Tree Care Innovations的Dutch Trig)；B2.39粉红产气霉(Muscodor roseus)，特别是菌株A3-5(登记号NRRL 30548)；B2.40厚垣轮枝孢菌(Verticilliumchlamydosporium)；B2.41棘孢木霉菌株ICC 012和盖姆斯木霉菌株ICC080的混合物(产品已知为例如来自Bayer CropScience LP,US的BIO-TAM^TM)；B2.42Simplicillium lanosoniveum；和B2.43顶孢木霉(Trichoderma fertile)(例如来自BASF的产品TrichoPlus)。

在一个优选的实施方案中，具有杀真菌活性的生物防治剂选自：盾壳霉，特别是菌株CON/M/91-8(登记号DSM-9660)；黄曲霉，菌株NRRL 21882(可作为来自Syngenta的获得)和菌株AF36(可作为来自Arizona Cotton Research andProtection Council，US的AF36获得)；粉红粘帚霉，菌株321U，菌株ACM941，菌株IK726，菌株88-710(WO2007/107000)，菌株CR7(WO2015/035504)；链孢粘帚菌，菌株J1446；大伏革菌，特别是菌株VRA 1835(ATCC 90304)、VRA 1984(DSM16201)、VRA 1985(DSM16202)、VRA 1986(DSM16203)、FOC PG B20/5(IMI390096)、FOC PG SP log6(IMI390097)、FOC PG SP log5(IMI390098)、FOC PG BU3(IMI390099)、FOC PG BU4(IMI390100)、FOC PG 410.3(IMI390101)、FOC PG 97/1062/116/1.1(IMI390102)、FOC PG B22/SP1287/3.1(IMI390103)、FOC PG SH1(IMI390104)、FOC PG B22/SP1190/3.2(IMI390105)(可作为来自Verdera and FIN的/>获得，作为来自e-nema,DE的/> 和/>获得)；寡雄腐霉，菌株DV74或M1(ATCC38472)(可作为来自Bioprepraty,CZ的Polyversum获得)；黄色蠕形霉，菌株VII7b；白粉寄生孢，特别是菌株AQ 10(可作为CBC Europe,Italy的AQ/>获得)；链孢粘帚菌(异名：链状粉红粘帚菌)菌株J1446；枝状枝孢菌，例如菌株H39(Stichting DienstLandbouwkundig Onderzoek)；绿色木霉(也称为绿色粘帚霉)，特别是菌株GL-21(例如Certis,US的SoilGard)；深绿木霉，菌株CNCM I-1237，菌株77B，菌株LU132或菌株SC1(登记号CBS 122089)；哈茨木霉，菌株T-22(例如来自Andermatt Biocontrol或Koppert的Trianum-P)；棘孢木霉，菌株SKT-1(登记号FERM P-16510)或菌株T34；绿色木霉，菌株B35；和Trichoderma asperelloides，JM41R(登记号NRRL B-50759)。

在一个更优选的实施方案中，具有杀真菌活性的真菌种选自：盾壳霉，特别是菌株CON/M/91-8(登记号DSM-9660)(可作为来自Prophyta,DE的获得)；粉红粘帚霉，菌株321U，菌株ACM941，菌株IK726；链孢粘帚菌，特别是菌株J1446；和绿色木霉(也称为绿色粘帚霉)，特别是菌株GL-21。所述真菌种还可优选盾壳霉，菌株CON/M/91-8(登记号DSM-9660)；或链孢粘帚菌，菌株J1446；或深绿木霉，菌株CNCM I-1237；或绿色木霉，菌株B35。

在杀真菌活性真菌中，特别优选木霉属(Trichoderma)，特别是绿色木霉种和深绿木霉种。那些包括深绿木霉，菌株CNCM I-1237；深绿木霉，菌株SC1(登记号CBS 122089，WO2009/116106和美国专利号8,431,120(来自Bi-PA))；深绿木霉，菌株77B；深绿木霉，菌株LU132；绿色木霉，菌株B35。特别优选深绿木霉，菌株CNCM I-1237；和绿色木霉，菌株B35。

所述真菌种可为昆虫病原性真菌。

对昆虫具有活性的真菌(昆虫病原性真菌)包括：C2.1白黏帚菌，特别是菌株QST20799(登记号NRRL 30547)；C2.2粉红产气霉，特别是菌株A3-5(登记号NRRL 30548)；C2.3球孢白僵菌(Beauveria bassiana)，特别是菌株ATCC 74040(例如来自Intrachem BioItalia的)；菌株GHA(登记号ATCC74250；例如来自Laverlam InternationalCorporation的BotaniGuard Es和Mycontrol-O)；菌株ATP02(登记号DSM 24665)；菌株PPRI5339(例如来自BASF的BroadBand^TM)；菌株PPRI 7315，菌株R444(例如来自AndermattBiocontrol的Bb-Protec)，菌株IL197、IL12、IL236、IL10、IL131、IL116(全部参引Jaronski,2007.Use of Entomopathogenic Fungi in Biological Pest Management,2007:ISBN:978-81-308-0192-6)，菌株Bv025(参见例如Garcia等人,2006.ManejoIntegrado de Plagas y Agroecología(Costa Rica)第77期)；菌株BaGPK；菌株ICPE 279，菌株CG 716(例如来自Novozymes的/>)；C2.4桔形被毛孢(Hirsutellacitriformis)；C2.5汤普森被毛孢(Hirsutella thompsonii)(例如来自Agro Bio-techResearch Centre,IN的Mycohit和ABTEC)；C2.6蜡蚧轮枝菌(以前称为蜡蚧轮枝孢)，特别是菌株KV01(例如来自Koppert/Arysta的/>和/>)，菌株DAOM198499，或菌株DAOM216596的分生孢子；C2.9蜡蚧霉(Lecanicillium muscarium)(原名蜡蚧轮枝孢)，特别是菌株VE 6/CABI(＝IMI)268317/CBS102071/ARSEF5128(例如来自Koppert的Mycotal)；C2.10金龟子绿僵菌蝗变种(Metarhizium anisopliae var acridum)，例如来自BeckerUnderwood，US的GreenGuard的ARSEF324或分离株IMI 330189(ARSEF7486；例如BiologicalControl Products的Green Muscle)；C2.11棕色绿僵菌(Metarhizium brunneum)，例如菌株Cb 15(例如来自BIOCARE的/>)；C2.12金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)，例如菌株ESALQ 1037(例如来自/>SP Organic)，菌株E-9(例如来自/>SP Organic)，菌株M206077，菌株C4-B(NRRL 30905)，菌株ESC1，菌株15013-1(NRRL 67073)，菌株3213-1(NRRL 67074)，菌株C20091，菌株C20092，菌株F52(DSM3884/ATCC90448；例如Bayer CropScience的BIO 1020以及例如Novozymes的Met52)或菌株ICIPE78；C2.15罗伯茨绿僵菌(Metarhizium robertsii)23013-3(NRRL 67075)；C2.13莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)；C2.14玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)(新名：玫烟色棒束孢)，特别是菌株Apopka 97(可作为来自Certis,USA的PreFeRal获得)、Fe9901(可作为来自Natural industries,USA的NoFly获得)、ARSEF3581、ARSEF 3302、ARSEF 2679(ARSCollection of Entomopathogenic Fungal Cultures,Ithaca,USA)、IfB01(中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection)CCTCC M2012400)、ESALQ1296、ESALQ1364、ESALQ1409(ESALQ:University of/>Paulo(Piracicaba,SP,Brazil))、CG1228(EMBRAPA Genetic Resources and Biotechnology(Brasília,DF,Brazil))、KCH J2(Dymarska等人,2017；PLoS one 12(10)):e0184885)、HIB-19、HIB-23、HIB-29、HIB-30(Gandarilla-Pacheco等人,2018；Rev Argent Microbiol 50:81-89)、CHE-CNRCB 304、EH-511/3(Flores-Villegas等人,2016；Parasites&Vectors 2016 9:176doi:10.1186/s13071-016-1453-1)、CHE-CNRCB 303、CHE-CNRCB 305、CHE-CNRCB 307(Gallou等人,2016；fungal biology 120(2016)414-423)、EH-506/3、EH-503/3、EH-520/3、PFCAM、MBP、PSMB1(National Center for Biololgical Control,Mexico；Castellanos-Moguel等人,2013；Revista Mexicana De Micologia 38:23-33,2013)、RCEF3304(Meng等人,2015；Genet Mol Biol.2015Jul-Sep；38(3):381-389)、PF01-N10(CCTCC编号M207088)、CCM 8367(Czech Collection of Microorganisms,Brno)、SFP-198(Kim等人,2010；Wiley Online:DOI10.1002/ps.2020)、K3(Yanagawa等人,2015；J Chem Ecol.2015；41(12):118-1126)、CLO 55(Ansari Ali等人,2011；PLoS One.2011；6(1):e16108.DOI:10.1371/journal.pone.0016108)、IfTS01、IfTS02、IfTS07(Dong等人2016/PLoS ONE 11(5):e0156087.doi:10.1371/journal.pone.0156087)、P1(Sun Agro Biotech ResearchCentre,India)、If-02、If-2.3、If-03(Farooq and Freed,2016；DOI:10.1016/j.bjm.2016.06.002)、Ifr AsC(Meyer等人,2008；J.Invertebr.Pathol.99:96–102.10.1016/j.jip.2008.03.007)、PC-013(DSMZ 26931)、P43A、PCC(Carrillo-Pérez等人,2012；DOI10.1007/s11274-012-1184-1)、Pf04、Pf59、Pf109(KimJun等人,2013；Mycobiology 2013Dec；41(4):221-224)、FG340(Han等人,2014；DOI:10.5941/MYCO.2014.42.4.385)、Pfr1、Pfr8、Pfr9、Pfr10、Pfr11、Pfr12(Angel-Sahagún等人,2005；Journal of Insect Science)、Ifr531(Daniel and Wyss,2009；DOI 10.1111/j.1439-0418.2009.01410.x)、IF-1106(山西农业大学昆虫生态学和生物防治实验室(InsectEcology and Biocontrol Laboratory,Shanxi Agricultural University))、I9602、I7284(Hussain等人2016,DOI:10.3390/ijms17091518)、I03011(专利US 4618578)、CNRCB1(Centro Nacional de Referencia de Control Biologico(CNRCB),Colima,Mexico)、SCAU-IFCF01(Nian等人,2015；DOI:10.1002/ps.3977)、PF01-N4(中国广州华南农业大学生物防治工程研究中心(Engineering Research Center of Biological Control,SCAU,Guangzhou,P.R.China))Pfr-612(Institute of Biotechnology(IB-FCB-UANL),Mexico)、Pf-Tim、Pf-Tiz、Pf-Hal、Pf-Tic(Chan-Cupul等人2013,DOI:10.5897/AJMR12.493)；C2.15粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)；C2.16布氏白僵菌(Beauveria brongniartii)(例如来自Andermatt Biocontrol AG的Beaupro)；C2.17暗孢耳霉(Conidiobolus obscurus)；C2.18毒力虫霉(Entomophthora virulenta)(例如来自Ecomic的Vektor)；C2.19大链壶菌(Lagenidium giganteum)；C2.20黄绿绿僵菌(Metarhizium flavoviride)；C2.21冻土毛霉(Mucor haemelis)(例如来自Indore Biotech Inputs&Research的BioAvard)；C2.22飞虱虫疠霉(Pandora delphacis)；C2.23虫生簇孢(Sporothrix insectorum)(例如来自Biocerto，BR的Sporothrix Es)；C2.24圆孢虫疫霉(Zoophtora radicans)。

在一个优选的实施方案中，具有杀线虫作用的真菌菌株选自：C2.3球孢白僵菌，菌株ATCC 74040；菌株GHA(登记号ATCC74250)；菌株ATP02(登记号DSM 24665)，菌株PPRI5339；菌株PPRI 7315，菌株R444，菌株IL197、IL12、IL236、IL10、IL131、IL116；菌株BaGPK；菌株ICPE 279，菌株CG 716；C2.6蜡蚧轮枝菌(以前称为蜡蚧轮枝孢)，特别是菌株KV01，菌株DAOM198499或菌株DAOM216596的分生孢子；C2.9蜡蚧霉(原名蜡蚧轮枝孢)，菌株VE 6/CABI(＝IMI)268317/CBS102071/ARSEF5128；C2.10金龟子绿僵菌蝗变种，菌株ARSEF324或分离株IMI 330189(ARSEF7486)；C2.11棕色绿僵菌，菌株Cb 15；C2.12金龟子绿僵菌，菌株ESALQ 1037，菌株E-9，菌株M206077，菌株C4-B(NRRL 30905)，菌株ESC1，菌株15013-1(NRRL67073)，菌株3213-1(NRRL 67074)，菌株C20091，菌株C20092，菌株F52(DSM3884/ATCC90448)或菌株ICIPE 78；C2.14玫烟色拟青霉(新名：玫烟色棒束孢)，菌株Apopka 97、Fe9901、ARSEF 3581、ARSEF 3302、ARSEF 2679、IfB01(中国典型培养物保藏中心CCTCCM2012400)、ESALQ1296、ESALQ1364、ESALQ1409、CG1228、KCH J2、HIB-19、HIB-23、HIB-29、HIB-30、CHE-CNRCB 304、EH-511/3、CHE-CNRCB 303、CHE-CNRCB 305、CHE-CNRCB 307、EH-506/3、EH-503/3、EH-520/3、PFCAM、MBP、PSMB1、RCEF3304、PF01-N10(CCTCC编号M207088)、CCM 8367、SFP-198、K3、CLO 55、IfTS01、IfTS02、IfTS07、P1、If-02、If-2.3、If-03、IfrAsC、PC-013(DSMZ 26931)、P43A、PCC、Pf04、Pf59、Pf109、FG340、Pfr1、Pfr8、Pfr9、Pfr10、Pfr11、Pfr12、Ifr531、IF-1106、I9602、I7284、I03011(专利US 4618578)、CNRCB1、SCAU-IFCF01、PF01-N4、Pfr-612、Pf-Tim、Pf-Tiz、Pf-Hal和Pf-Tic；和C2.16布氏白僵菌(例如来自Andermatt Biocontrol AG的Beaupro)。

在一个更优选的实施方案中，具有杀昆虫作用的真菌菌株选自：C2.3球孢白僵菌，菌株ATCC 74040；菌株GHA(登记号ATCC74250)；菌株ATP02(登记号DSM 24665)；菌株PPRI5339；菌株PPRI 7315和/或菌株R444；C2.6蜡蚧轮枝菌(以前称为蜡蚧轮枝孢)，菌株KV01，菌株DAOM198499或菌株DAOM216596的分生孢子；C2.9蜡蚧霉(原名蜡蚧轮枝孢)，特别是菌株VE 6/CABI(＝IMI)268317/CBS102071/ARSEF5128；C2.10金龟子绿僵菌蝗变种，菌株ARSEF324或分离株IMI 330189(ARSEF7486)；C2.11棕色绿僵菌，菌株Cb 15；C2.12金龟子绿僵菌，菌株F52(DSM3884/ATCC 90448)；C2.14玫烟色拟青霉(新名：玫烟色棒束孢)，菌株Apopka 97和Fe9901；和C2.16布氏白僵菌(例如来自Andermatt Biocontrol AG的Beaupro)。

甚至更优选的是，所述真菌微生物是玫烟色棒束孢种的菌株。优选的玫烟色棒束孢的菌株选自Apopka 97、Fe9901、ARSEF 3581、ARSEF 3302、ARSEF 2679、IfB01(中国典型培养物保藏中心CCTCC M2012400)、ESALQ1296、ESALQ1364、ESALQ1409、CG1228、KCH J2、HIB-19、HIB-23、HIB-29、HIB-30、CHE-CNRCB 304、EH-511/3、CHE-CNRCB 303、CHE-CNRCB305、CHE-CNRCB 307、EH-506/3、EH-503/3、EH-520/3、PFCAM、MBP、PSMB1、RCEF3304、PF01-N10(CCTCC编号M207088)、CCM 8367、SFP-198、K3、CLO 55、IfTS01、IfTS02、IfTS07、P1、If-02、If-2.3、If-03、Ifr AsC、PC-013(DSMZ 26931)、P43A、PCC、Pf04、Pf59、Pf109、FG340、Pfr1、Pfr8、Pfr9、Pfr10、Pfr11、Pfr12、Ifr531、IF-1106、I9602、I7284、I03011(专利US4618578)、CNRCB1、SCAU-IFCF01、PF01-N4、Pfr-612、Pf-Tim、Pf-Tiz、Pf-Hal、Pf-Tic。

最优选的是，所述玫烟色棒束孢菌株选自Apopka 97和Fe9901。特别优选的菌株为APOPKA97。

还特别优选绿僵菌属(Metarhizium spp.)的昆虫病原性真菌。绿僵菌属包括若干种类，最近已经对其中一些进行了重新分类(概述参见Bischoff等人,2009，Mycologia 101(4):512-530)。绿僵菌属的成员包括：平沙绿僵菌(M.pingshaense)、金龟子绿僵菌、罗伯茨绿僵菌、棕色绿僵菌(这四种也被称为金龟子绿僵菌复合种)，蝗绿僵菌(M.acridum)、大孢绿僵菌(M.majus)、贵州绿僵菌(M.guizouense)、鳞翅目绿僵菌(M.Lepidiotae)、M.Globosum和莱氏绿僵菌(M.rileyi)(先前称为莱氏野村菌)。在这些当中，金龟子绿僵菌、罗伯茨绿僵菌、棕色绿僵菌、蝗绿僵菌和莱氏绿僵菌是甚至更优选的，而那些棕色绿僵菌是最优选的。

还特别优选的属于绿僵菌属的示例性的菌株为：蝗绿僵菌ARSEF324(BASF的产品GreenGuard)或分离株IMI 330189(ARSEF7486；例如Biological Control Products的Green Muscle)；棕色绿僵菌，菌株Cb 15(例如来自BIOCARE的)，或菌株F52(DSM3884/ATCC 90448；例如Bayer CropScience的BIO 1020以及例如Novozymes的Met52)；金龟子绿僵菌复合种，菌株ESALQ 1037或菌株ESALQ E-9(二者都来自/>WP Organic)，菌株M206077，菌株C4-B(NRRL 30905)，菌株ESC1，菌株15013-1(NRRL67073)，菌株3213-1(NRRL 67074)，菌株C20091，菌株C20092或菌株ICIPE 78。最优选的为分离株F52(也称为Met52)，其主要感染甲虫幼虫，并且其最初是为防治葡萄黑耳喙象(Otiorhynchus sulcatus)而开发的；和商业上用于蝗虫防治的ARSEF324。基于F52分离株的商业产品为单个分离株F52的继代培养物，并且在包括以下的几个培养物保藏中具有代表性：Julius Kühn-Institute for Biological Control(先前为BBA),Darmstadt,Germany:[as M.a.43]；HRI,UK:[275-86(缩略词V275或KVL 275)]；KVL Denmark[KVL 99-112(Ma 275或V 275)]；Bayer,Germany[DSM 3884]；ATCC,USA[ATCC 90448]；USDA,Ithaca,USA[ARSEF 1095]。数家公司已经开发了基于该分离株的颗粒浓缩制剂和乳油浓缩制剂，并已在欧盟和北美(美国和加拿大)注册，用于对抗苗圃观赏植物和软果中的葡萄黑象甲、其他鞘翅目(Coleoptera)、温室观赏植物中的西花蓟马和草坪中的麦小蝽(chinch bug)。

球孢白僵菌被大量生产，用于应对各种各样的害虫，包括粉虱、蓟马、蚜虫和象鼻虫。优选的球孢白僵菌菌株包括菌株ATCC 74040；菌株GHA(登记号ATCC74250)；菌株ATP02(登记号DSM 24665)；菌株PPRI 5339；菌株PPRI 7315，菌株IL197、IL12、IL236、IL10、IL131、IL116，菌株Bv025；菌株BaGPK；菌株ICPE 279，菌株CG 716；ESALQPL63，ESALQ447和ESALQ1432，CG1229，IMI389521，NPP111B005，Bb-147。最优选的是，球孢白僵菌菌株包括菌株ATCC74040和菌株GHA(登记号ATCC74250)。根据权利要求1-17中任一项所述的液体制剂，其中所述真菌种为杀线虫活性真菌。

杀线虫活性真菌种包括：D2.1白黏帚菌，特别是菌株QST 20799(登记号NRRL30547)；D2.2粉红产气霉，特别是菌株A3-5(登记号NRRL30548)；D2.3淡紫拟青霉(先前称为淡紫拟青霉)，特别是淡紫拟青霉菌株251(AGAL 89/030550；例如来自Bayer CropScienceBiologics GmbH的BioAct)，菌株580(Laverlam的WP(ATCC编号38740))，产品/>(T.Stanes and Company Ltd.)的菌株，产品/>(VarshaBioscience and Technology India Pvt Ltd.)的菌株，产品/>(NicoOrgo Maures,India)的菌株，产品/>(Ballagro Agro Tecnologia Ltda,Brazil)的菌株，和产品SPECTRUM PAE/>(Promotora Tecnica Industrial,S.A.DE C.V.,Mexico)的菌株；D2.4康宁木霉；D2.5 Harposporium anguillullae；D2.6明尼苏达被毛孢(Hirsutella minnesotensis)；D2.7柱捕单顶孢(Monacrosporium cionopagum)；D2.8Monacrosporium psychrophilum；D2.9疣孢漆斑菌，特别是菌株AARC-0255(例如ValentBiosciences的DiTeraTM)；D2.10多变拟青霉(Paecilomyces variotii)，菌株Q-09(例如来自Quimia，MX的/>)；D2.11菜豆壳多孢(Stagonospora phaseoli)(例如来自Syngenta)；D2.12木素木霉(Trichoderma lignorum)，特别是菌株TL-0601(例如来自Futureco Bioscience,ES的Mycotric)；D2.13腐皮镰刀菌(Fusarium solani)，菌株Fs5；D2.14洛斯里被毛孢(Hirsutella rhossiliensis)；D2.15掘氏单顶孢(Monacrosporiumdrechsleri)；D2.16哺噬单顶孢(Monacrosporium gephyropagum)；D2.17 Nematoctonusgeogenius；D2.18 Nematoctonus leiosporus；D2.19侵管新赤壳(Neocosmosporavasinfecta)；D2.20类球囊霉属种(Paraglomus sp)，特别是巴西类球囊霉(Paraglomusbrasilianum)；D2.21厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)(也称为厚垣轮枝孢菌(Vercillium chlamydosporium))，特别是var.catenulata(IMI SD 187；例如来自TheNational Center of Animal and Plant Health(CENSA),CU的KlamiC)；D2.22异皮壳多孢(Stagonospora heteroderae)；D2.23Meristacrum asterospermum；和D2.24Duddingtonia flagrans。

在一个更优选的实施方案中，具有杀线虫作用的真菌菌株选自：淡紫拟青霉，特别是淡紫拟青霉菌株251(AGAL 89/030550)的孢子；Harposporium anguillullae；明尼苏达被毛孢；柱捕单顶孢；Monacrosporium psychrophilum；疣孢漆斑菌，菌株AARC-0255；多变拟青霉；菜豆壳多孢(可从Syngenta市售获得)；和Duddingtonia flagrans。

在一个甚至更优选的实施方案中，具有杀线虫作用的真菌菌株选自：淡紫拟青霉，特别是淡紫拟青霉菌株251(AGAL 89/030550)的孢子；和Duddingtonia flagrans。最优选地，所述具有杀线虫作用的真菌菌株来自淡紫拟青霉种，特别是淡紫拟青霉菌株251。

产生孢子并且用作生物防治剂和/或植物生长促进剂的真菌微生物根据本领域中已知的方法或如本申请中所描述的那样在合适的底物上培养或发酵，例如通过深层发酵或固态发酵，例如使用如WO2005/012478或WO1999/057239中公开的设备和方法。

尽管特定的真菌繁殖体如微菌核(参见例如Jackson and Jaronski(2009),Production of microsclerotia of the fungal entomopathogen Metarhiziumanisopliae and their potential for use as a biocontaol agent for soil-inhabiting insects；Mycological Research 113,第842-850页)可通过液体发酵技术生产，但优选根据本发明的休眠的结构体或器官通过固态发酵法生产。固态发酵技术在本领域中是众所周知的(概述参见Gowthaman等人,2001.Appl Mycol Biotechnol(1),第305-352页)。

在发酵之后，可将真菌孢子与底物分离。优选在任何分离步骤之前，将真菌孢子占据的底物干燥。微生物或真菌孢子可在分离之后通过例如冷冻干燥法、真空干燥法或喷雾干燥法干燥。生产干燥孢子的方法在本领域中是众所周知的，并且包括流化床干燥法、喷雾干燥法、真空干燥法和冷冻干燥法。分生孢子可分2步干燥：对于通过固态发酵法生产的分生孢子，首先将分生孢子覆盖的培养底物干燥，之后从干燥的培养底物中收集分生孢子，从而获得纯的分生孢子粉末。然后使用真空干燥法或冷冻干燥法进一步干燥分生孢子粉末，之后将其储存或制成制剂。

根据本发明的液体制剂还可包括至少一种选自表面活性剂、流变改性剂、消泡剂、抗氧化剂和染料的物质。

非离子和/或阴离子表面活性剂为通常可用于农用化学试剂中的这种类型的所有物质。可能的非离子表面活性剂选自聚环氧乙烷-聚环氧丙烷嵌段共聚物，乙氧基化甘油单酯、甘油二酯和/或甘油三酯(其中可例如提及乙氧基化蓖麻油或乙氧基化植物油)，支链或直链醇的聚乙二醇醚，脂肪酸或脂肪酸醇与环氧乙烷和/或环氧丙烷的反应产物，以及支链或直链烷基芳基乙氧基化物(其中可例如提及聚环氧乙烷-脱水山梨糖醇脂肪酸酯)。在以上提及的实例中，所选择的种类可任选地被磷酸化并用碱基中和。可能的阴离子表面活性剂为通常可用于农用化学试剂中的这种类型的所有物质。优选烷基磺酸或烷基磷酸以及烷基芳基磺酸或烷基芳基膦酸的碱金属盐、碱土金属盐和铵盐。另一组优选的阴离子表面活性剂或分散助剂为聚苯乙烯磺酸的碱金属盐、碱土金属盐和铵盐，聚乙烯基磺酸的盐，烷基萘磺酸的盐，萘磺酸-甲醛缩合产物的盐，萘磺酸、苯酚磺酸和甲醛的缩合产物的盐，以及木质素磺酸的盐。另一组优选的阴离子表面活性剂或分散助剂为肌氨酸酯或牛磺酸酯的碱金属盐、碱土金属盐和铵盐。根据本发明的液体制剂中表面活性剂的合适的范围包括0-20％、优选0-15％、更优选0.5-10％。

可将流变改性剂(也称为增稠剂、抗结块剂、粘度改性剂或结构化剂)加入到本发明的制剂中，例如为了防止(不可逆的)沉降。流变改性剂优选衍生自矿物质。这些流变控制剂在制剂处于静止或储存时提供长期稳定性。合适的化合物是选自以下的流变改性剂：疏水性和亲水性气相和沉淀二氧化硅颗粒、胶凝粘土(包括膨润土、锂蒙脱石、锂藻土(laponite)、凹凸棒石、海泡石、蒙脱石或疏水/亲有机改性的膨润土)。根据本发明的液体制剂中流变改性剂的合适的范围包括0-10％、优选0-7％、更优选0.5-5％。

除非另有定义，本申请中的％指的是重量％。

为了将二氧化硅或粘土增稠剂分散在给定的流体中，如在本领域中已知的那样期望高剪切混合以形成凝胶。

气相(热解)亲水性或疏水性二氧化硅的全球主要生产商为Evonik(商品名)、Cabot Corporation(商品名/>)、Wacker Chemie(HDK产品系列)、Dow Corning和OCI/>另一类合适的流变改性剂为沉淀二氧化硅，全球主要生产商为Evonik(商品名/>或/>)、Rhodia(Tixosil)和PPGIndustries(Hi-Sil)。

流变改性剂的另一类合适的实例为粘土增稠剂。粘土增稠剂通常为微粉化的层状硅酸盐，其可为用于广泛应用中的有效增稠剂。它们通常以非疏水化或疏水化形式使用。为了使它们可分散在非水溶剂中，通常采用季铵盐处理粘土表面。这些改性粘土称为有机改性的粘土增稠剂。任选地，少量低分子量的醇或水可以用作活化剂。这种基于粘土的流变改性剂的实例包括蒙脱石、膨润土、锂蒙脱石、凹凸棒石、海泡石或蒙脱土粘土。优选的流变改性剂(b)为例如有机改性的锂蒙脱石粘土，例如38和SD3；有机改性的膨润土粘土，例如/>34、SD1和SD2；有机改性的海泡石，例如/>B20；亲水性二氧化硅，例如/>200；疏水性二氧化硅，例如/>R972、R974和R812S；凹凸棒石，例如/>50，

流变改性剂的另一类合适的实例为基于改性的氢化蓖麻油(三羟基硬脂精)或蓖麻油有机衍生物(如R和/>ST)的有机流变改性剂。

所选流变改性剂的物理性质

在一个优选的实施方案中，流变控制剂的浓度范围为0至10重量％，例如1至7或3至6重量％。特别地，流变控制剂的浓度可以为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、7、8或9重量％，并且基本上取决于生物防治剂以及那些载液的物理性质。通常，根据本发明的制剂中的流变控制剂的浓度还可取决于生物防治剂。

为了防止用水稀释后起泡可向本发明的制剂中添加消泡剂。合适的消泡剂为例如石蜡油、植物油、硅油(例如来自Solvay的Silcolapse 411、Silcolapse 454、Silcolapse482；来自Wacker的Silfoam SC1132、Silfoam SC132；来自Dow的Xiameter ACP-0100)或水性硅油乳液(例如SAG30、SAG1572/Momentive、Silcolapse 426R、Silcolapse 432/Solvay；Silfar SE4/Wacker；Antifoam 8830/Harcros Chemicals)。在一个优选的实施方案中，消泡剂的浓度范围为0至0.5重量％，例如0.1至0.3重量％。特别地，消泡剂的浓度可为0、0.1、0.2、0.3、0.4或0.5重量％或两者之间的任意值。

为了防止或减缓氧化降解过程，可在本发明的制剂中添加抗氧化剂。合适的抗氧化剂为例如叔丁基羟基醌(TBHQ)、丁基羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)、抗坏血酸棕榈酸酯、生育酚乙酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯或类胡萝卜素(例如β-胡萝卜素)或没食子酸酯(例如没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸十二酯)。在一个优选的实施方案中，抗氧化剂的浓度范围为0至0.5重量％，例如0.1至0.3重量％。特别地，抗氧化剂的浓度可以为0、0.1、0.2、0.3、0.4或0.5％重量或两者之间的任意值。

可使用的染料包括无机颜料，例如氧化铁、氧化钛和普鲁士蓝，以及有机染料，例如茜素染料、偶氮染料和金属酞菁染料。

在不同的方面，本发明涉及一种包含根据本发明的液体制剂的液体组合物。

本发明还涉及一种防治植物中或植物上的植物病原性真菌、昆虫和/或线虫，增强植物生长，或改善植物健康(包括植物产量或根部生长)的方法，该方法包括将有效量的如上所述的根据本发明的液体制剂或液体组合物施用于所述植物或植物正在生长或意欲生长的场所。

术语“植物健康”通常包括与病害或植物病原体防治无关的各种植物改进。例如，可提及的有利特性为改进的作物特性，包括：出苗、作物产量、蛋白含量、油含量、淀粉含量、更发达的根系、改进的根部生长、改进的根部尺寸维持、改善的根部效率、改进的胁迫耐受性(例如耐干旱、热、盐、紫外线、水、寒冷)、乙烯减少(减少产生和/或抑制接受)、分蘖增加、植物高度增加、更大的叶片、更少的死基生叶、更强壮的分蘖、更绿的叶片颜色、色素含量、光合活性、需要更少的输入(如肥料或水)、需要更少的种子、更高产的分蘖、开花更早、谷粒成熟更早、植物倒逆(倒伏)更少、枝条生长加快、增强的植物活力、增加的植物直立性以及早且更好的萌芽。

改进的植物健康优选是指改进的植物特性，包括：作物产量、更发达的根系(改进的根部生长)、改进的根部尺寸维持、改善的根部效率、分蘖增加、植物高度增加、更大的叶片、更少的死基生叶、更强壮的分蘖、更绿的叶片颜色、光合活性、更高产的分蘖、增强的植物活力及增加的植物直立性。

关于本发明，改进的植物健康尤其优选是指改进的植物特性，选自：作物产量、更发达的根系、改进的根部生长、改进的根部尺寸维持、改善的根部效率、分蘖增加以及植物高度增加。

此处所定义的根据本发明的组合物对植物健康的作用可通过比较在相同环境条件下生长的植物而确定，其中一部分所述植物用根据本发明的液体制剂处理而另一部分所述植物不用根据本发明的液体制剂处理。相反，所述另一部分完全没有处理或者用安慰剂处理(即无根据本发明的液体制剂情况下的施用，例如无任何活性成分(即，没有施用本文所述的生物防治剂)的施用。

根据本发明的液体制剂可以任何所需的方式施用，例如以种子包衣、土壤浸透的形式、和/或直接施用于犁沟中和/或作为叶面喷雾，并可在出苗前、出苗后或者出苗前后均施用。换言之，可将液体制剂施用于种子、植物或采收的果实及蔬菜，或施用于其中正生长有所述植物或期望生长所述植物的土壤(植物的生长场所)中。常规的施用方法包括例如浸渍、喷雾、雾化、灌溉、蒸发、撒粉、成雾、撒播、发泡、涂抹、铺展、浇水(浸透)和滴灌。

所有的植物和植物部位均可根据本发明进行处理。此处，植物应理解为意指所有的植物和植物部位，如需要的和不需要的野生植物或作物植物(包括天然存在的作物植物)。

可根据本发明处理的植物包括以下主要作物植物：玉米、大豆、苜蓿、棉花、向日葵、油菜(Brassica oil seeds)如甘蓝型油菜(Brassica napus)(例如加拿大油菜、油菜籽)、芜菁(Brassica rapa)、芥菜型油菜(B.juncea)(例如(野生)芥菜(mustard))和埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、槟榔科属种(Arecaceae sp.)(例如油棕、椰子)、稻、小麦、糖用甜菜、甘蔗、燕麦、黑麦、大麦、粟和高粱、黑小麦、亚麻、坚果、藤本植物(grapes)和藤蔓以及各种植物分类群的各种水果和蔬菜，例如蔷薇科属种(Rosaceae sp.)(例如仁果如苹果和梨，以及核果如杏、樱桃、扁桃、李子和桃，以及浆果如草莓、树莓、红醋栗、黑醋栗和圆醋栗)、Ribesioidae属种、胡桃科属种(Juglandaceae sp.)、桦木科属种(Betulaceae sp.)、漆树科属种(Anacardiaceae sp.)、山毛榉科属种(Fagaceae sp.)、桑科属种(Moraceaesp.)、木犀科属种(Oleaceae sp.)(如橄榄树)、猕猴桃科属种(Actinidaceae sp.)、樟科属种(Lauraceae sp.)(如鳄梨、肉桂、樟脑)、芭蕉科属种(Musaceae sp.)(例如香蕉树和大蕉)、茜草科属种(Rubiaceae sp.)(例如咖啡)、山茶科属种(Theaceae sp.)(例如茶)、梧桐科属种(Sterculiceae sp.)、芸香科属种(Rutaceae sp.)(例如柠檬、橙、柑橘和葡萄柚)；茄科属种(Solanaceae sp.)(例如番茄、马铃薯、胡椒、辣椒、茄子、烟草)、百合科属种(Liliaceae sp.)、菊科属种(Compositae sp.)(例如莴苣(lettuce)、朝鲜蓟(artichoke)和菊苣(chicory)——包括根菊苣(root chicory)、苣荬菜(endive)或普通菊苣(commonchicory))、伞形科属种(Umbelliferae sp.)(例如胡萝卜、欧芹(parsley)、芹菜(celery)和块根芹)、葫芦科属种(Cucurbitaceae sp.)(例如黄瓜——包括嫩黄瓜(gherkin)、南瓜、西瓜、葫芦类(calabash)和甜瓜类(melon))、葱科属种(Alliaceae sp.)(例如韭葱和洋葱)、十字花科属种(Cruciferae sp.)(例如白球甘蓝(white cabbage)、红球甘蓝(redcabbage)、西兰花(broccoli)、花椰菜(cauliflower)、抱子甘蓝(Brussels sprouts)、小白菜(pak choi)、球茎甘蓝(kohlrabi)、萝卜、山葵(horseradish)、水芹(cress)、大白菜)、豆科属种(Leguminosae sp.)(例如花生、豌豆类和菜豆类——如刀豆(common bean)和蚕豆(broad bean))、藜科属种(Chenopodiaceae sp.)(例如瑞士叶甜菜、饲用甜菜、菠菜、甜菜根)、亚麻科属种(Linaceae sp.)(例如大麻(hemp))、大麻科属种(Cannabeacea sp.)(例如印度大麻(cannabis))、锦葵科属种(Malvaceae sp.)(例如秋葵(okra)、可可豆(cocoa))、罂粟科(Papaveraceae)(例如罂粟花)、天门冬科(Asparagaceae)(例如芦笋(asparagus))；园艺和森林中的有用植物和观赏植物，包括草皮(turf)、草地(lawn)、草坪(grass)和甜叶菊(Stevia rebaudiana)；以及在每种情况下这些植物的遗传修饰型。

作物植物可以为可通过常规的育种和优化方法或者通过生物技术方法和基因工程方法或这些方法的组合而获得的植物，包括转基因植物以及可受或不受品种产权保护的植物变种。植物应理解为意指所有发育阶段，例如种子、幼苗和早期(未成熟)植物直至成熟植物。植物部位应理解为意指植物的地上和地下的所有部位和器官，如芽、叶、花和根，给出的实例为叶、针叶、茎、枝干、花、子实体、果实和种子，以及块茎、根和根茎。植物部位还包括采收植物或采收植物部位以及无性和有性繁殖的材料，例如幼苗、块茎、根茎、插条和种子。

根据本发明使用液体制剂或包含所述液体制剂的组合物对植物和植物部位进行的处理通过常规处理方法直接进行或使所述化合物作用于环境、生境或储存空间来进行，所述常规处理方法为例如浸渍、喷雾、蒸发、成雾、散布、涂抹、注入，以及在繁殖材料、尤其是种子的情况下，还通过施用一层或多层包衣来进行。

如上所述，可根据本发明处理所有植物及其部位。在一个优选实施方案中，处理野生植物品种和植物栽培种，或通过常规生物育种方法(如杂交或原生质体融合)而获得的那些植物及其部位。在另一个优选的实施方案中，处理通过基因工程方法—如果合适，与常规方法组合—而获得的转基因植物和植物栽培种(遗传修饰生物体)及其部位。术语“部位”或“植物的部位”或“植物部位”已在上文中作出解释。本发明用于特别优选处理各市售可得的常规栽培种的植物或正在使用的那些植物。植物栽培种应理解为意指具有新特性(“性状”)并且已通过常规育种、通过诱变或通过重组DNA技术获得的植物。它们可以是栽培种、变种、生物型或基因型。

根据本发明处理的优选的转基因植物或植物栽培种(通过基因工程获得的那些植物)包括通过基因修饰接受了赋予这些植物特别有利的有用特性(“性状”)的基因材料的所有植物。这些特性的实例为：更好的植物生长、对高温或低温的增强的耐受性、对干旱或对水或土壤盐度水平的增强的耐受性、提高的开花性能、更容易采收、加速成熟、更高的产量、采收产品的更高的品质和/或更高的营养价值、采收产品的更长的储存时间和/或更好的可加工性。这些特性的其他和特别强调的实例为：增强植物对动物害虫和微生物害虫(例如昆虫、蛛形纲动物、线虫、螨、蛞蝓以及腹足类动物)的抗性，这归因于例如在植物中形成的毒素、特别是通过苏云金芽孢杆菌的基因材料(例如通过基因CryIA(a)、CryIA(b)、CryIA(c)、CryIIA、CryIIIA、CryIIIB2、Cry9c、Cry2Ab、Cry3Bb和CryIF及其组合)在植物中形成的那些毒素，以及增强的植物对植物病原性真菌、细菌和/或病毒的抗性，这归因于例如通过系统获得的抗性(SAR)、系统素(systemin)、植物抗毒素、诱导子(elicitor)和抗性基因及相应表达的蛋白质和毒素，以及增强的植物对某些除草活性化合物的耐受性，所述除草活性化合物为例如咪唑啉酮类、磺酰脲类、草甘膦或草丁膦(phosphinothricin)(例如“PAT”基因)。赋予了所需性状的基因还可以互相结合的方式存在于转基因植物中。可提及的转基因植物的实例为重要的作物植物，例如谷物(小麦、稻、黑小麦、大麦、黑麦、燕麦)、玉米、大豆、马铃薯、糖用甜菜、甘蔗、番茄、豌豆和其他类型蔬菜、棉花、烟草、油菜，以及结果植物(果实为苹果、梨、柑橘类果实和葡萄)，特别强调的是玉米、大豆、小麦、稻、马铃薯、棉花、甘蔗、烟草和油菜。特别强调的性状是增强的植物对昆虫、蛛形纲动物、线虫和蛞蝓以及腹足类动物的抗性。

此外，本发明涉及根据本发明的液体制剂或液体组合物作为植物保护剂或用于促进植物活力和/或植物健康的用途。

以下实施例以非限制性方式示例说明本发明。

材料

实施例1(淡紫拟青霉)

用无菌勺将3g淡紫拟青霉纯孢子粉转移到制剂容器(IKA DT-20型混合容器，具有用于Ultra Turrax的分散工具)中。将12mL流体加入到相应的制剂容器中，并使用ultraturrax试管分散机(ultra turrax tube drive control)在3000rpm下分散1分钟；30秒后改变方向。在此之后，将2.8mL转移到四个样品瓶(Wheaton血清瓶，I型)中，留有很少的顶部空间，并使用crimpneck盖(Macherey–Nagel N 13型)将其密闭。然后，将所有样品瓶转移至设定为30℃的培养箱中，并储存给定时间。

定期从储存地点取回样品并分析孢子生存能力。为此，对原始样品进行充分均质。将每个样品的0.25g或250μL的等分试样转移到50mL falcon管中。用含有2％Tween 80的无菌水溶液将试管填充至25g，并通过涡旋均质，以实现第一稀释步骤(1:100稀释液)。该稀释液用于进一步稀释和在琼脂上点样。

并非所有样品都在2％Tween 80中很好地混合或完全混合。对于这些样品，采用一个替代的分散/稀释方法，其中首先从孢子中剥离油相：将0.25g或250μL样品装入2mLEppendorf管中，加入0.5mL 2％Tween 80，并将混合物转移到Eppendorf离心机中，其中在10000rpm下离心1分钟。用移液管丢弃上清液(＝上部的油相)。然后加入250μL BreakthruS 240，孢子分散良好。将250μL或0.25g的每个样品转移到无菌的50mL Falcon管中。用含有2％Tween 80的无菌水溶液将试管填充至25g，并通过涡旋均质，以实现第一稀释步骤(1:100稀释液)。该稀释液用于进一步稀释和在琼脂上点样。

为了评估孢子萌发率，基于实现的1:100稀释液通过多次自动稀释(移液自动装置，96孔板)，制备1:30000稀释液。然后，取12x12cm琼脂板，并使用自动的12-通道移液器用10乘5μL的每个样品点样。等到液体被琼脂吸收，将琼脂板转移到培养箱中，在25℃下孵育17小时。打开板并将其放在显微镜下。在每个点随机选择一个区域，记录在指定区域内的萌发和未萌发的孢子数。每个样品需要评估至少200个孢子。如果需要，每个点计数超过一个区域。

孢子生存能力的结果见表I。

表I.^*＝储存7个月后取；^#＝难以分散在水中以进行评估；^$＝比较实施例

讨论：对于绝大多数测试的流体，在配制样品后(第1天)直接测试的孢子生存能力通常在90％或以上。根据本发明的流体分别在30℃下储存2或3个月后，表现出约70％或以上的孢子生存能力。选择的流体已在30℃下储存7个月，并在储存后表现出约40％或以上的孢子生存能力(表I，第3、11、14、18、19行)。BreakThru S240先前已被描述为宿主真菌孢子的优良流体。作为比较，BreakThru S240(表1，第19行)在给定的测试条件下储存2个月后提供～77％的孢子生存能力，储存7个月后提供约7％的孢子生存能力。Mero(表I，第20行)，它是一种桶混添加剂，作为自乳化甲基化种子油的比较实施例，在储存3个月后只表现出约5％的边缘孢子生存能力。

实施例II(玫烟色棒束孢)

用无菌勺将1.5g玫烟色棒束孢纯孢子粉转移到制剂容器(IKA DT-20型混合容器，具有用于Ultra Turrax的分散工具)中。将13.5mL的流体加入到相应的制剂容器中，并使用ultra turrax试管分散机在3000rpm下分散1分钟；30秒后改变方向。在此之后，将2.8mL转移到四个样品瓶(Wheaton血清瓶，I型)中，留有很少的顶部空间，并使用crimpneck盖(Macherey–Nagel N 13型)将其密闭。然后，将所有样品瓶转移至设定为30℃的培养箱中，并储存给定时间。

定期从储存地点取回样品并分析孢子生存能力。因此，对原始样品进行充分均质。将每个样品的0.25g或250μL的等分试样转移到50mL falcon管中。用含有2％Tween 80的无菌水溶液将试管填充至25g，并通过涡旋均质，以实现第一稀释步骤(1:100稀释液)。该稀释液用于进一步稀释和在琼脂上点样。

并非所有样品都在2％Tween 80中很好地混合或完全混合。对于这些样品，采用一个替代的分散/稀释方法，其中首先从孢子中剥离油相：将0.25g或250μL样品装入2mLEppendorf管中，加入0.5mL 2％Tween 80，并将混合物转移到Eppendorf离心机中，其中在10000rpm下离心1分钟。用移液管丢弃上清液(＝上部的油相)。然后加入250μL BreakthruS 240，孢子分散良好。将250μL或0.25g的每个样品转移到无菌的50mL Falcon管中。用含有2％Tween 80的无菌水溶液将试管填充至25g，并通过涡旋均质，以实现第一稀释步骤(1:100稀释液)。该稀释液用于进一步稀释和在琼脂上点样。

为了评估孢子萌发率，基于实现的1:100稀释液通过多次自动稀释(移液自动装置，96孔板)，制备1:15000稀释液。然后，取12x12cm琼脂板，并使用自动的12-通道移液器用10乘5μL的每个样品点样。等到液体被琼脂吸收，将琼脂板转移到培养箱中，在23℃下孵育16小时。打开板并将其放在显微镜下。在每个点随机选择一个区域，记录在指定区域内的萌发和未萌发的孢子数。每个样品需要评估至少200个孢子。如果需要，每个点计数超过一个区域。孢子生存能力的结果见表II。

表II；^$＝比较实施例

讨论：

对于所有测试的流体，在配制孢子后(第1天)直接测试的孢子生存能力通常在约90％。根据本发明的流体在30℃下储存7个月后，表现出约60％或以上的孢子生存能力(表II，第2、3行)，从而与比较实施例(即BreakThru S240和Catenex T 121)(表2，第1、4行)的性能水平相当。

实施例III(球孢白僵菌)

用无菌勺将1.5g球孢白僵菌纯孢子粉转移到制剂容器(IKA DT-20型混合容器，具有用于Ultra Turrax的分散工具)中。将13.5mL的流体加入到相应的制剂容器中，并使用ultra turrax试管分散机在3000rpm下分散1分钟；30秒后改变方向。在此之后，将2.8mL转移到四个样品瓶(Wheaton血清瓶，I型)中，留有很少的顶部空间，并使用crimpneck盖(Macherey–Nagel N 13型)将其密闭。然后，将所有样品瓶转移至设定为30℃的培养箱中，并储存给定时间。

定期从储存地点取回样品并分析孢子生存能力。因此，对原始样品进行充分均质。将每个样品的0.25g或250μL的等分试样转移到50mL falcon管中。用含有2％Tween 80的无菌水溶液将试管填充至25g，并通过涡旋均质，以实现第一稀释步骤(1:100稀释液)。该稀释液用于进一步稀释和在琼脂上点样。

并非所有样品都在2％Tween 80中很好地混合或完全混合。对于这些样品，采用一个替代的分散/稀释方法，其中首先从孢子中剥离油相：将0.25g或250μL样品装入2mLEppendorf管中，加入0.5mL 2％Tween 80，并将混合物转移到Eppendorf离心机中，其中在10000rpm下离心1分钟。用移液管丢弃上清液(＝上部的油相)。然后加入250μL BreakthruS 240，孢子分散良好。将250μL或0.25g的每个样品转移到无菌的50mL Falcon管中。用含有2％Tween 80的无菌水溶液将试管填充至25g，并通过涡旋均质，以实现第一稀释步骤(1:100稀释液)。该稀释液用于进一步稀释和在琼脂上点样。

为了评估孢子萌发率，基于实现的1:100稀释液通过多次自动稀释(移液自动装置，96孔板)，制备1:15000稀释液。然后，取12x12cm琼脂板，并使用自动的12-通道移液器用10乘5μL的每个样品点样。等到液体被琼脂吸收，将琼脂板转移到培养箱中，在20℃下孵育17小时。打开板并将其放在显微镜下。在每个点随机选择一个区域，记录在指定区域内的萌发和未萌发的孢子数。每个样品需要评估至少200个孢子。如果需要，每个点计数超过一个区域。孢子生存能力的结果见表III。

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表III；^*＝储存21天后取；^#＝对难以在水中分散进行评估；^$＝比较实施例

讨论：在给定的测试条件下，在配制样品后(第1天)直接测试的孢子生存能力通常较高，在大多数情况下在75％或以上，在许多情况下甚至接近90％或以上。在根据本发明的实施例中，选择出的流体在30℃下储存5周或更长后，表现出约30％或以上的孢子生存能力。许多流体甚至提供～50％或以上的孢子生存能力，在一些情况下甚至～60％或以上的孢子生存能力(表III，第1、2、4、6、11行)。作为比较，BreakThru S240在第1天仅提供约53％的孢子生存能力，在储存5周后仅提供约20％的孢子生存能力(表III，第13行)。

实施例IV：拜莱青霉

用无菌勺将1.5g拜莱青霉纯孢子粉转移到制剂容器(IKA DT-20型混合容器，具有用于Ultra Turrax的分散工具)中。将13.5mL的流体加入到相应的制剂容器中，使用ultraturrax试管分散机在3000rpm下分散1分钟；30秒后改变方向。在此之后，将2.8mL转移到四个样品瓶(Wheaton血清瓶，I型)中，留有很少的顶部空间，并使用crimpneck盖(Macherey–Nagel N 13型)将其密闭。然后，将所有样品瓶转移至设定为30℃的培养箱中，并储存给定时间。

定期从储存地点取回样品并分析孢子生存能力。因此，对原始样品进行充分均质。将每个样品的0.25g或250μL的等分试样转移到50mL falcon管中。用含有2％Tween 80的无菌水溶液将试管填充至25g，并通过涡旋均质，以实现第一稀释步骤(1:100稀释液)。该稀释液用于进一步稀释和在琼脂上点样。

并非所有样品都在2％Tween 80中很好地混合或完全混合。对于这些样品，采用一个替代的分散/稀释方法，其中首先从孢子中剥离油相：将0.25g或250μL样品装入2mLEppendorf管中，加入0.5mL 2％Tween 80，并将混合物转移到Eppendorf离心机中，其中在10000rpm下离心1分钟。用移液管丢弃上清液(＝上部的油相)。然后加入250μL BreakthruS 240，孢子分散良好。将250μL或0.25g的每个样品转移到无菌的50mL Falcon管中。用含有2％Tween 80的无菌水溶液将试管填充至25g，并通过涡旋均质，以实现第一稀释步骤(1:100稀释液)。该稀释液用于进一步稀释和在琼脂上点样。

为了评估孢子萌发率，基于实现的1:100稀释液通过多次自动稀释(移液自动装置，96孔板)，制备1:15000稀释液。然后，取12x12cm琼脂板，并使用自动的12-通道移液器用10乘5μL的每个样品点样。等到液体被琼脂吸收，将琼脂板转移到培养箱中，在20℃下孵育17小时。打开板并将其放在显微镜下。在每个点随机选择一个区域，记录在指定区域内的萌发和未萌发的孢子数。每个样品需要评估至少200个孢子。如果需要，每个点计数超过一个区域。孢子生存能力的结果见表IV。

表IV；^$＝比较实施例

讨论：在配制样品后(第1天)直接测试的孢子生存能力通常较高，在90％或以上。根据本发明的实施例在30℃下储存约3个月后，表现出约42％或以上的孢子生存能力。在许多情况下流体表现出甚至约70％或以上的更高的孢子生存能力(表IV，第2、4-8、10行)。作为比较，BreakThru S240在此处给定的条件下储存后仅提供20％的孢子生存能力(表IV，第3行)。

Claims (10)

1.一种液体制剂，其包含至少一种由羧酸部分和醇部分组成的羧酸酯，和对植物产生有益作用的真菌的真菌孢子，

其中所述羧酸酯不是来自植物油的羧酸甘油三酯，

其中所述至少一种羧酸酯含有

a)一元羧酸部分和一元醇部分，其中所述一元羧酸部分衍生自选自以下的一元羧酸：十二酸、油酸、蓖麻油酸和丙酸，且其中所述一元醇部分衍生自选自以下的一元醇：2-乙基己烷-1-醇、甲醇和1-戊醇；

b)至少一个一元羧酸部分和多元醇部分，其中所述一元羧酸部分衍生自选自以下的一元羧酸：辛酸、癸酸和乙酸，且其中所述多元醇部分衍生自选自以下的多元醇：丙三醇、乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇和脱水山梨糖醇；或

c)多元羧酸部分和至少一个一元醇部分，其中所述多元羧酸部分衍生自选自以下的多元羧酸：柠檬酸及其O-乙酰基柠檬酸且其中所述一元醇部分衍生自1-丁醇、2-丁醇和异丁醇。

2.根据权利要求1所述的液体制剂，其中所述至少一种羧酸酯选自Radia 7127、Radialube 7130、Radia 7331、Radia 7081、丙酸戊酯、Radia7208、三醋精、Miglyol 812、Radia 7909、Radiasurf 7355和乙酰柠檬酸三丁酯。

3.根据权利要求1所述的液体制剂，其中所述真菌孢子来自有效作为植物保护中的生物防治剂或植物健康促进剂的真菌种。

4.根据权利要求3所述的液体制剂，其中所述真菌种为昆虫病原性真菌。

5.根据权利要求3所述的液体制剂，其中所述真菌种为杀线虫活性真菌。

6.根据权利要求3所述的液体制剂，其中所述真菌种选自玫烟色棒束孢、拜莱青霉、金龟子绿僵菌、淡紫拟青霉、盾壳霉、球孢白僵菌和粉红粘帚霉。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的液体制剂，其还包含至少一种选自表面活性剂、流变改性剂、消泡剂、抗氧化剂和染料的物质。

8.包含根据权利要求1至7中任一项所述的液体制剂的液体组合物。

9.一种防治植物中或植物上的植物病原性真菌、昆虫和/或线虫，增强植物生长，或增加植物产量或根部健康的方法，所述方法包括将有效量的根据权利要求1-7中任一项所述的液体制剂或权利要求8所述的液体组合物施用于所述植物或植物正在生长或意欲生长的场所。

10.根据权利要求1-7中任一项所述的液体制剂或权利要求8所述的液体组合物作为植物保护剂或用于促进植物活力和/或植物健康的用途。