JP2021521793A - 抗ｃｄ２７および抗ｐｄ−ｌ１抗体ならびに二重特異性構築物 - Google Patents

抗ｃｄ２７および抗ｐｄ−ｌ１抗体ならびに二重特異性構築物 Download PDF

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Abstract

新規な抗ＣＤ２７および抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その結合ドメインおよび二重特異性構築物、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインが本明細書で提供される。Ｔ細胞活性を刺激する方法、免疫応答を誘発するか、または増強する方法、および疾患または状態（例えば、癌）を治療することが必要な患者に本明細書に記載される二重特異性構築物、抗体またはその抗原結合フラグメント、または組成物を投与することによって、それを行う方法も本明細書で提供される。

Description

関連出願
本出願は、米国特許仮出願第６２／６５８，８９９号（２０１８年４月１７日出願）および米国特許仮出願第６２／８２６，０９１号（２０１９年３月２９日出願）の優先権の利益を主張する。前述の出願の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
Ｔ細胞と抗原提示細胞との相互作用には、免疫応答の生成を促進する様々なアクセサリー分子が関与している。１つのそのような分子は、ＣＤ２７であり、これは、ＣＤ７０に結合し、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）スーパーファミリーに属する（Ｒａｎｈｅｉｍ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｂｌｏｏｄ，８５（１２）：３５５６−６５（非特許文献1））。ＣＤ２７は典型的には、多くの場合、２つのモノマーを連結するジスルフィド架橋を有するホモダイマーの形態である、グリコシル化されたＩ型膜貫通タンパク質として存在する。ジスルフィド架橋は、膜に近い細胞外ドメイン内にある（Ｃａｍｅｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：３１６５−６９（非特許文献2））。ＣＤ２７はまた、可溶性形態で発現することもある（例えば、ｖａｎ Ｏｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｌｏｏｄ ８２（１１）：３４３０−６（非特許文献3）およびＬｏｅｎｅｎ，Ｗ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２：４４７（非特許文献4）を参照されたい）。Ｔ細胞上のＣＤ２７抗原の架橋は、Ｔ細胞受容体の架橋と協調して、Ｔ細胞増殖および細胞免疫活性化を誘発することができる共刺激シグナルを提供する。
ＣＤ２７は、成熟胸腺細胞、ほとんどのＣＤ４＋およびＣＤ８＋末梢血Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ならびにＢ細胞で発現する（Ｋｏｂａｔａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２（２４）：１１２４９−５３（非特許文献5））。ＣＤ２７はまた、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞慢性リンパ性白血病でも高度に発現する（Ｒａｎｈｅｉｍ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｂｌｏｏｄ，８５（１２）：３５５６−６５（非特許文献1））。加えて、寄生虫感染、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染、サルコイドーシス、多発性硬化症およびＢ細胞慢性リンパ性白血病の血清または疾患活性部位で可溶性ＣＤ２７タンパク質のレベルの増加が確認されている（Ｌｏｅｎｅｎ，Ｗ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２２：４４７（非特許文献4））。
プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）は、妊娠、組織同種移植、自己免疫疾患および他の病状（肝炎など）などの特定の事象中に免疫系を抑制するのに主要な役割を果たすと推測されている、４０ｋＤａの１型膜貫通タンパク質である。通常、免疫系は、外因性または内因性の危険シグナルに関連する外来抗原に反応し、これが、抗原特異性ＣＤ８＋Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋ヘルパー細胞の増殖をトリガーする。ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合は、これらのＴ細胞の増殖を低減する抑制性シグナルを伝達し、またアポトーシスも誘発することができ、これは、遺伝子Ｂｃｌ−２のより低い制御によってさらに媒介される。ＰＤ−Ｌ１は、様々なヒト癌に大量に存在する（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７−９（非特許文献6））。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用は、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介性増殖の減少および癌細胞による免疫回避をもたらす（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１−７（非特許文献7）、Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７−３１４（非特許文献8）、Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５０９４−１００（非特許文献9））。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との局所的な相互作用を阻害することによって、免疫抑制を逆転させることができ、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用も同様に遮断した場合、この効果は、相加的である（Ｉｗａｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９９：１２２９３−７（非特許文献10）、Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７−６６（非特許文献11））。
集学的療法の進歩にも関わらず、（例えば、免疫応答の刺激が望まれる）状態または疾患を治療するための新たな改善された治療剤に対する必要性が当該技術分野に存在する。したがって、本発明の目的は、そのような状態または疾患（例えば、癌）を有する対象を治療するための改善された方法を提供することである。
Ｒａｎｈｅｉｍ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｂｌｏｏｄ，８５（１２）：３５５６−６５ Ｃａｍｅｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：３１６５−６９ ｖａｎ Ｏｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｌｏｏｄ ８２（１１）：３４３０−６ Ｌｏｅｎｅｎ，Ｗ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２：４４７ Ｋｏｂａｔａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２（２４）：１１２４９−５３ Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７−９ Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１−７ Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７−３１４ Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５０９４−１００ Ｉｗａｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９９：１２２９３−７ Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７−６６
新規な抗ＣＤ２７および抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ならびにそれらの結合ドメイン、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物および多重特異性構築物が本明細書で提供される。Ｔ細胞活性を刺激する方法、免疫応答を誘発するか、または増強する方法、および疾患または状態（例えば、癌）を治療することが必要な患者に、本明細書に記載の二重特異性もしくは多重特異性構築物、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント、または組成物を投与することによって、それを行う方法もまた本明細書で提供される。
例示的な抗ＣＤ２７抗体は、本明細書に記載の抗体３Ｃ２である。一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその結合ドメインは、抗体３Ｃ２の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１７に記載の配列を有する抗体３Ｃ２の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号１８に記載の配列を有する抗体３Ｃ２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号１、２および３に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号１７および配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＣＤ２７抗体は、本明細書に記載の抗体２Ｂ３である。一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその結合ドメインは、抗体２Ｂ３の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１９に記載の配列を有する抗体２Ｂ３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号２０に記載の配列を有する抗体３Ｃ２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号１９および配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体７Ｈ７である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体７Ｈ７の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７７に記載の配列を有する抗体７Ｈ７の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号７８に記載の配列を有する抗体７Ｈ７の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号７７および配列番号７８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体１Ｂ３である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体１Ｂ３の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７９に記載の配列を有する抗体１Ｂ３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８０に記載の配列を有する抗体１Ｂ３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号７９および配列番号８０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体３Ｂ６である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体３Ｂ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８１に記載の配列を有する抗体３Ｂ６の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８２に記載の配列を有する抗体３Ｂ６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号８１および配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体８Ｂ１である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体８Ｂ１の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８３に記載の配列を有する抗体８Ｂ１の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８４に記載の配列を有する抗体８Ｂ１の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号８３および配列番号８４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体４Ａ３である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体４Ａ３の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８５に記載の配列を有する抗体４Ａ３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８６に記載の配列を有する抗体４Ａ３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号８５および配列番号８６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体９Ｈ９である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体９Ｈ９の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８７に記載の配列を有する抗体９Ｈ９の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８８に記載の配列を有する抗体９Ｈ９の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号８７および配列番号８８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ２７または抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインのＣＤＲ１、２および／または３領域は、本明細書に開示される抗体３Ｃ２、２Ｂ３、７Ｈ７、１Ｂ３、３Ｂ６、８Ｂ１、４Ａ３および９Ｈ９とまさに同じアミノ酸配列を含み得る。別の実施形態では、抗体は、３Ｃ２、２Ｂ３、７Ｈ７、１Ｂ３、３Ｂ６、８Ｂ１、４Ａ３および９Ｈ９のまさにそのＣＤＲ配列からの誘導体を含むが、それでもＣＤ２７またはＰＤ−Ｌ１のいずれかに効果的に結合する能力を保持している。そのような配列修飾は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５または６つ）のアミノ酸の付加、欠失または置換、例えば、保存的配列修飾を含み得る。
別の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ２７または抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、例えば、抗体３Ｃ２、２Ｂ３、７Ｈ７、１Ｂ３、３Ｂ６、８Ｂ１、４Ａ３および９Ｈ９の１つ以上のＣＤＲと９０％、９５％、９８％または９９．５％同一である１つ以上のＣＤＲで構成され得る。上記に列挙される値の中間の範囲、例えば、上記の配列の１つ以上と９０〜９５％、９５〜９８％または９８〜１００％同一の同一性であるＣＤＲもまた、本発明によって包含されることが意図される。
抗体配列はまた、いくつかの抗体のコンセンサス配列もあり得る。例えば、一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、コンセンサス配列：（Ｔ，Ｓ）（Ｓ，Ｙ，Ｈ）ＷＭＳ（配列番号１６７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１６８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１６９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１７０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１７１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１７２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載の抗Ｃ２７および／または抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインと実質的に同一（例えば、前述の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列もまた、本発明によって包含される。一実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１７、配列番号１９、またはそれらと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１８、配列番号２０、またはそれらと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１９またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、またはそれらと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、またはそれらと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号７７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号７９またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８０またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号８１またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８２またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号８３またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８４またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号８５またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８６またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号８７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
本明細書に記載の抗体もしくはそれらの結合ドメインのいずれかと結合について競合するか、または本明細書に記載の抗体もしくはそれらの結合ドメインのいずれかと同じエピトープに結合する、抗ＣＤ２７および／もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの結合ドメインもまた使用に好適であり、本発明よって包含される。例えば、一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその結合ドメインは、本明細書に記載のように、抗体３Ｃ２および／または抗体２Ｂ３とＣＤ２７への結合について競合する。例えば、実施例２８に記載のように、本発明の抗体（例えば、抗体２Ｂ３）は、ヒトＣＤ２７（配列番号１８３）のＥＣＤのアミノ酸８０〜９５内の１つ以上の残基、例えば、ヒトＣＤ２７（配列番号１８３）のＥＣＤのアミノ酸８５〜８９、例えば、アミノ酸８５、８７、８８および／または８９内の１つ以上の残基に結合する。
別の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ２７の野生型ＥＣＤには結合するが、ヒトＣＤ２７（配列番号１８３）のＥＣＤのアミノ酸残基８５〜８９内の１つ以上の位置（例えば、Ａ８５Ｓ、Ｒ８７Ａ、Ｎ８８Ａおよび／またはＧ８９Ａ）にアミノ酸置換を有するＥＣＤの変異型には結合しない。例えば、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＤ２７（配列番号１８３）の野生型ＥＣＤには結合するが、以下のアミノ酸置換：Ａ８５Ｓ、Ｒ８７Ａ、Ｎ８８ＡおよびＧ８９Ａを有するヒトＣＤ２７の野生型ＥＣＤの変異型には結合しない。
別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体または結合ドメインは、本明細書に記載のように、抗体３Ｃ２および／または抗体２Ｂ３と同じＣＤ２７上のエピトープに結合する。別の実施形態では、抗体または抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、本明細書に記載のように、抗体７Ｈ７、１Ｂ３、３Ｂ６、８Ｂ１、４Ａ３および／または９Ｈ９とＰＤ−Ｌ１への結合について競合する。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または結合ドメインは、本明細書に記載のように、抗体７Ｈ７、１Ｂ３、３Ｂ６、８Ｂ１、４Ａ３および／または９Ｈ９と同じＰＤ−Ｌ１上のエピトープに結合する。
一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物（または多重特異性構築物）であって、
（ｉ）抗ＣＤ２７結合ドメインは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
ａ．コンセンサス配列（Ｔ，Ｓ）（Ｓ，Ｙ，Ｈ）ＷＭＳ（配列番号１６７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号１６８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号１６９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号１７０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号１７１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号１７２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、二重特異性構築物が提供される。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）抗ＣＤ２７結合ドメインは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
ａ．配列番号７７もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７８もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８０もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８２もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８４もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５もしくそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８６もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８８もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域を含む、二重特異性構築物。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、またはそれらの保存的配列修飾を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインおよび抗ＣＤ２７結合ドメインは、遺伝的に融合されている。二重特異性構築物は、例えば、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して遺伝子操作して、抗ＣＤ２７および抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインをコードする核酸を作動可能に連結することによって作製され得る融合タンパク質であり得る。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインおよび抗ＣＤ２７結合ドメインは、化学的に共役している。
例えば、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７および抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの化学的共役によって作製され得る化学的共役体であり得る。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの重鎖のＣ末端に連結されている。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、抗ＣＤ２７結合ドメインの重鎖のＣ末端に連結されている。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
特定の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、
ｇ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の特定の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、
ｃ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、
ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域、または
ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、
ｇ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、
ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域、または
ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、
ｃ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、
ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含み、
（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１抗体は、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、以下の機能的特徴：ＮＦκＢ活性化を誘発する、Ｔ細胞増殖を増加させる、ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発する、および／またはＩＬ−２産生を増加させる、といった機能的特徴のうちの１つ以上を有する。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体単独と比較して、ＩＬ−２産生を少なくとも約１．５倍（例えば、少なくとも２倍、２．５倍、３倍、３．５倍または４倍）増加させる。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体単独よりも、ＣＤ８ Ｔ細胞応答を少なくとも約２倍大きく（例えば、少なくとも２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８．０倍、８．５倍または９倍）誘発する。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体単独と比較して、生存を少なくとも約１．５倍長く（例えば、少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍または５倍）増加させる。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体単独または組み合わせと比較して、腫瘍重量を少なくとも約１．５倍（例えば、少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍または５倍）減少させる。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体単独または組み合わせと比較して、Ｔ細胞産生を少なくとも約１．５倍（例えば、少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８．０倍、８．５倍または９倍）増加させる。
特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７結合ドメインおよび抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの組み合わせの使用（すなわち、連結していない抗体の同時投与）と比較して、（例えば、インビボでの免疫応答の増強における）相乗効果を示す。
別の態様では、本明細書に記載の抗ＣＤ２７結合ドメインのいずれかを含む、新規な抗ＣＤ２７抗体またはそれらの抗原結合部分が提供される。一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴：Ｔ細胞媒介性免疫応答を誘発するか、もしくは増強する、ｓＣＤ７０のＣＤ２７への結合を（例えば、部分的もしくは完全に）遮断する、ＮＦκＢ活性化を誘発する、Ｔ細胞増殖を増加させる、平衡解離定数Ｋｄが１０−９Ｍ以下、もしくは平衡会合定数Ｋａが１０＋９Ｍ−１以上でヒトＣＤ２７に結合する、ＣＤ２７発現細胞の特異的補体媒介性細胞毒性（ＣＤＣ）を誘発する、ＣＤ２７発現細胞の抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）特異的溶解を誘発する、ワクチンもしくは内因性抗原と組み合わせてインビボで抗原特異的免疫応答を誘発するか、もしくは増強する、ワクチンもしくは内因性抗原と組み合わせてインビボで抗原特異的ＴＨ１免疫応答を誘発するか、もしくは増強する、ワクチンもしくは内因性抗原と組み合わせてインビボで抗原特異的Ｔ細胞増殖もしくは活性化を誘発するか、もしくは増強する、および／または同時、別個もしくは連続したＴＣＲ活性化と組み合わせたときに、Ｔ細胞活性を誘発するか、もしくは増強する、といった機能的特徴のうちの１つ以上を有する。
別の態様では、二重特異性構築物であって、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された本明細書に記載の抗ＣＤ２７抗体のいずれか１つを含む、二重特異性構築物が提供される。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、（ａ）配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、ならびに（ｆ）配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域からなる群から選択される。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７結合ドメインおよび抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの組み合わせの使用（すなわち、連結していない抗体の同時投与）と比較して、（例えば、インビボでの免疫応答の増強における）相乗効果を示す。
別の態様では、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインのいずれかを含む、新規な抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合部分が提供される。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７９またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８０またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８１またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８２またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８３またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８４またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８５またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８６またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴：（ａ）ＰＤ１のＰＤ−Ｌ１への結合を（例えば、部分的もしくは完全に）遮断する、（ｂ）ＮＦＡＴ経路活性化を誘発する、および／または（ｃ）混合リンパ球応答を誘発する、といった機能的特徴のうちの１つ以上を有する。
別の態様では、二重特異性構築物であって、抗ＣＤ２７結合ドメインに連結された本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれか１つを含む、二重特異性構築物が提供される。一実施形態では、抗Ｃ２７結合ドメインは、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＣＤ２７抗体を含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体を含む。別の実施形態では、抗Ｃ２７結合ドメインは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＣＤ２７抗体を含む。別の実施形態では、抗Ｃ２７結合ドメインは、配列番号１９またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、ＣＤ２７抗体を含む。一実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７結合ドメインおよび抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの組み合わせの使用（すなわち、連結していない抗体の同時投与）と比較して、（例えば、インビボでの免疫応答の増強における）相乗効果を示す。
別の態様では、本明細書に記載の二重特異性構築物（多重特異性構築物）、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む組成物が本明細書で提供される。本明細書に記載の二重特異性構築物（多重特異性構築物）、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれかと、使用のための指示書とを含むキットも提供される。
さらなる態様では、結合ドメイン、抗体、またはそれらの抗原結合部分をコードする単離された核酸分子、ならびに本明細書に記載の二重特異性または多重特異性構築物、ならびにそのような核酸を含む発現ベクターおよびそのような発現ベクターを含む宿主細胞も提供される。別の実施形態では、結合ドメイン、抗体、もしくはそれらの抗原結合部分のいずれかをコードする核酸分子、または本明細書に記載の二重特異性構築物が提供される。別の実施形態では、核酸分子は、発現ベクターの形態である。別の実施形態では、核酸分子は、インビボで対象に投与されると、結合ドメイン、抗体、もしくはその抗原結合部分を発現する発現ベクター、または二重特異性構築物の形態である。
一実施形態では、核酸分子は、抗体可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体可変領域は、配列番号１７、１８、１９、２０、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列の１つ以上と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、核酸分子は、配列番号２５、２６、２７、２８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２に記載のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列の１つ以上と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）のヌクレオチド配列を含む。
別の実施形態では、核酸分子は、抗体の重鎖および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１７および１８、配列番号１９および２０、配列番号７７および７８、配列番号７９および８０、配列番号８１および８２、配列番号８３および８４、配列番号８５および８６、もしくは配列番号８７および８８に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、Ｔ細胞活性を刺激する方法であって、Ｔ細胞と、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物、または本明細書に記載の組成物のいずれか１つとを接触させることを含む、方法が提供される。Ｔ細胞活性を刺激することは、例えば、ＩＦＮ−ガンマ産生を刺激することを含み得る。
さらに別の態様では、対象において（例えば、抗原に対する）免疫応答を誘発するか、または増強するための方法は、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物、または本明細書に記載の組成物のいずれか１つを、対象において（例えば、抗原に対する）免疫応答を誘発するか、または増強するのに有効な量で、対象に投与することを含む。
さらなる態様では、対象において状態または疾患を治療するための方法であって、方法が、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物、または本明細書に記載の組成物のいずれか１つを、状態または疾患を治療するのに有効な量で、対象に投与することを含む、方法が提供される。
別の態様では、対象において状態または疾患を治療するための方法であって、方法が、本明細書に記載の抗ＣＤ２７抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれか１つを、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれか１つと組み合わせて、対象に投与することを含む、方法が提供される。例えば、一実施形態では、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに（ｂ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択され、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｂ）それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｃ）それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｄ）それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｅ）それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに（ｆ）それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される。
別の実施形態では、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および（ｂ）配列番号１９と、配列番号２０または配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択され、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｂ）配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０とを含む、軽鎖可変領域を含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｃ）配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｄ）配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｅ）配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに（ｆ）配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される。
一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、別々に投与される。一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、連続して投与される。例えば、抗ＣＤ２７抗体もしくはその抗原結合フラグメントが最初に投与され、その後に（例えば、その直後に）抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントが投与され、またはその逆も可能である。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、一緒に投与される。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、同時に投与される。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、単一の製剤で同時に投与される。あるいは、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、別個の投与のために製剤化され、同時にまたは連続して投与される。そのような同時または連続した投与は、好ましくは両方の抗体が治療される患者に同時に存在することをもたらす。
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２７抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれかを、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれかと組み合わせて投与すると、いずれかの抗体を単独で使用した場合と比較して、（例えば、インビボでの免疫応答の増強における）相乗効果がもたらされる。
対象は、例えば、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患に罹患している者であり得る。一実施形態では、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患は、癌である。対象において（例えば、抗原に対する）免疫応答を誘発するか、または増強する方法は、抗原を対象に投与することをさらに含み得る。抗体もしくはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物、または本明細書に記載の組成物と同時投与することが好ましい抗原は、腫瘍抗原である。
ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２の組換えヒトＣＤ２７への結合を抗体濃度の関数として示すグラフである。 ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２の、組換えカニクイザルＣＤ２７への結合を示すグラフである。 ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２の、ＣＤ２７を表面に発現するラモス細胞への高レベルの結合を示すグラフである。 ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２のＴ細胞への高レベルの結合を示すグラフである。 抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、ＣＤ７０のＣＤ２７への結合を有意に遮断することを示すグラフである。 抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、有意なＮＦκＢ活性化を誘発したことを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、Ｔ細胞増殖を増加させることを示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合することを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体の、組換えカニクイザルＰＤ−Ｌ１への結合を示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ１への結合を有意に遮断することを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体の、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞への高レベルの結合を抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体のヒト樹状細胞への高レベルの結合を抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が細胞間のＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断し、ＮＦＡＴ経路活性化をもたらすことを示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、混合リンパ球応答を誘発することを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＣＤ２７軽鎖、抗ＣＤ２７重鎖、およびｃ末端抗ＰＤ−Ｌ１一本鎖（ＶＬ＋ＶＨ）ペプチドを含有する代表的なＤＮＡ発現ベクターである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結されている、ＣＤ２７／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体タンパク質の図である。 抗ＣＤ２７抗体が、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結されている、ＣＤ２７／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体タンパク質の図である。 代表的な抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物の表である。 ＨＰＬＣおよびゲル電気泳動による二重特異性抗体ＣＤＸ−５２７の特性評価を示す。 二機能性ＥＬＩＳＡを用いた、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物（ＢｓＡｂ）のＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１への結合を示すグラフである。 抗体１Ｆ５または２Ｂ３単独と比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物によって誘発されるＮＦκＢ活性化の増加を示すグラフである。 抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物が、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断し、ＮＦＡＴ経路活性化を誘発することを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗体ＡｂＸ（既知の抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体）、８Ｂ１、または９Ｈ９単独と比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物が、混合リンパ球反応におけるＩＬ−２産生／分泌を増加させることを示すグラフである。 図２０Ａおよび２０Ｂは、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）が、ＣＤ２７モノクローナル抗体単独と比較して、より高いＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発することを示すグラフである。 マウス腫瘍モデルにおいて単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスの改善された生存を示すカプランマイヤー曲線である。 単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスにおける腫瘍重量の減少を示すグラフである。 単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスにおけるＣＤ８Ｔ細胞の割合の増加を示すグラフである。 単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスにおけるＣＤ４Ｔ細胞の割合の増加を示すグラフである。 単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスにおける活性化ＣＤ８Ｔ細胞の増加を示すグラフである。 図２３Ａおよび２３Ｂは、抗ＣＤ２７ Ａｂ（例えば、ＣＤＸ−１１２７）が、腫瘍細胞および腫瘍浸潤細胞内のＰＤ−Ｌ１発現を上方制御することを示すグラフである。 二機能性ＥＬＩＳＡを用いた、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７のＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１への結合を示すグラフである。 抗体１Ｆ５または２Ｂ３単独（左のグラフ）および可溶性ＦｃγＲ１（右のグラフ）の存在下と比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７によって誘発されるＮＦκＢ活性化の増加を示すグラフである。 抗体２Ｂ３または９Ｈ９単独または組み合わせと比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７による混合リンパ球反応におけるＩＬ−２産生／分泌の増加を示すグラフである。 抗体２Ｂ３および９Ｈ９の組み合わせと比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７によるＴ細胞内のＩＬ−２産生／分泌の増加を示すグラフである。 ＮＨＰ薬物動態試験におけるＣＤＸ−５２７の血清レベルを示すグラフである。 ２Ｂ３ｘ９Ｈ９構成と比較して、９Ｈ９ｘ２Ｂ３構成によるＰＤ−１シグナル伝達の遮断の増加を示すグラフである。 ２Ｂ３ｘ９Ｈ９構成と比較して、９Ｈ９ｘ２Ｂ３構成によるＴ細胞活性化の増加を示すグラフである。 ２Ｂ３ｘＡｂＸと比較して、ＡｂＸｘ２Ｂ３によるワクチン誘発性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の刺激の増加を示すグラフである。 ２Ｂ３ｘＡｂＸと比較して、ＡｂＸｘ２Ｂ３による抗腫瘍活性の増加を示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＡｂＸおよび９Ｈ９によるＣＤ８０へのＰＤ−Ｌ１結合の遮断を示すグラフである。 野生型ｈｕＣＤ２７の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の配列、ならびに８５、８７、８８および８９位に置換を有する変異型を示す。 抗ＣＤ２７抗体２Ｂ３の、図３４に示される配列を有する野生型ｈｕＣＤ２７および変異型ｈｕＣＤ２７の両方への結合を示すグラフである。 元の（未修飾の）９Ｈ９ｘ２Ｂ３構築物と比較して、修飾９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）構築物の改善された産生（発現）を示すグラフである。
発明の詳細な説明
ＣＤ２７は、アゴニスト分子を使用する免疫療法に利用することができる重要な同時刺激受容体である。ＣＤ２７は、Ｔ細胞の生存、活性化およびエフェクター機能、ならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖および細胞毒性活性を含む、様々な免疫学的プロセスにおいて重要な役割を果たす。これらの事象は、リガンド（ＣＤ７０）とＣＤ２７との適切な相互作用に応答して発生し、ＮＦ−ｋＢの活性化および関連遺伝子の発現をもたらす細胞内シグナル伝達事象をもたらす。ほとんどの同時刺激分子と同様に、リガンドまたはアゴニスト抗体のいずれかでＴ細胞を効果的に刺激するには、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を通した同時刺激も必要である。
ほとんどのＣＤ２７アゴニスト分子は、その活性のために多量体化または架橋を必要とする。例えば、アゴニストである抗ＣＤ２７抗体は、シスまたはトランス相互作用を通したそれらのＦｃドメインとＦｃ受容体との相互作用を通して架橋される。インビトロでは、これは、二次抗Ｉｇ抗体を使用して、または抗体を固相マトリックスに吸着させることによって、人工的に実行することもできる。抗ＣＤ２７アゴニスト抗体のＦｃＲ相互作用の必要性は、Ｔ細胞刺激活性がＦｃＲ発現細胞の数に少なくとも部分的に依存していることを意味する。
ＦｃＲ相互作用の必要性を排除するために、１）ＣＤ２７以外の受容体（本明細書ではＣＤ２７超架橋剤と称される）との相互作用の必要性を排除するか、または２）ＦｃＲを発現しない異なる特定の細胞型であり得る交互の受容体（この交互の受容体（本明細書ではＣＤ２７多重特異性剤と称される）は、追加の機能も提供し得る）の相互作用を通して架橋を提供することができる、ＣＤ２７アゴニストが発明されている。
一態様では、本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントに連結された抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、二重特異性構築物（または多重特異性構築物）を提供する。ここで、本発明のそのような抗ＣＤ２７×抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性薬剤は、抗ＣＤ２７抗体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との同時投与と比較して、免疫パラメーターの増強および腫瘍成長の阻害などにおいて、インビボで相乗効果を示すことが示されている（実施例９および１０を参照されたい）。
本発明がより容易に理解され得るために、最初に特定の用語を定義する。追加の定義は、発明を実施するための形態全体を通して記載されている。
Ａ．定義
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。例えば、本発明の方法および組成物を使用して、免疫障害を有する対象を治療することができる。「非ヒト動物」という用語は、すべての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳動物および非哺乳動物を含む。
本明細書で使用される場合、「結合ドメイン」という用語は、抗原と相互作用するアミノ酸残基を含むタンパク質または抗体の部分を指す。結合ドメインには、抗体（例えば、完全長抗体）、ならびにそれらの抗原結合部分が含まれるが、これらに限定されない。結合ドメインは、結合剤に、抗原に対するその特異性および親和性を付与する。この用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインと相同または大部分が相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質も網羅する。そのようなタンパク質は、天然源に由来する場合もあれば、部分的または全体的に合成的に生成される場合もある。
本明細書で言及される場合、「抗体」という用語は、抗体全体および任意の抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部分」）またはその一本鎖型を含む。好ましい一実施形態では、「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖、またはその抗原結合部分を含む糖タンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３つのドメインで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が散在した、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分化することができる。本明細書で特定されるＣＤＲは、別段示されない限り、Ｋａｂａｔシステムによるものである。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、これらは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置されている。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合フラグメント」（または単に「抗体フラグメント」）という用語は、抗原（例えば、ヒトＣＤ２７）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントまたは部分を指す。そのような「フラグメント」は、例えば、長さが約８〜約１５００アミノ酸長、好適には約８〜約７４５アミノ酸長、好適には約８〜約３００、例えば、約８〜約２００アミノ酸長、または約１０〜約５０もしくは１００アミノ酸長である。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって実行され得ることが示されている。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、または（ｖｉｉ）任意で合成リンカーによって接合され得る、２つ以上の単離されたＣＤＲの組み合わせが含まれる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、それらを、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対になって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能する合成リンカーによって、組換え法を使用して接合されてもよい（一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）として知られており、例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。そのような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含されることが意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に既知の従来の技術を使用して得られ、フラグメントは、無傷抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって生成することができる。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す抗体を指す。したがって、「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、単一の結合特異性を提示し、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および任意の定常領域を有する抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られ、不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
本明細書で使用される場合、「組換えヒト抗体」という用語は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックもしくはトランス染色体性である動物（例えば、マウス）から単離された抗体、またはそれから調製されたハイブリドーマ、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製または単離された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作製または単離されたすべてのヒト抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列を利用する可変および定常領域を含み、生殖系列遺伝子によってコードされるが、例えば、抗体成熟中に発生するその後の再配置および変異を含む。当該技術分野で既知であるように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７−１１２５を参照されたい）、可変領域は、外来抗原に特異的な抗体を形成するように再配置される様々な遺伝子によってコードされる抗原結合ドメインを含有する。再配置に加えて、可変領域は、外来抗原に対する抗体の親和性を増加させるために、複数の単一アミノ酸変化（体細胞変異または超変異と称される）によってさらに修飾されてもよい。定常領域は、抗原に対するさらなる応答において変化する（つまり、アイソタイプスイッチ）。したがって、抗原に応答して軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再配置され、体細胞変異した核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有しない可能性があるが、代わりに実質的に同一であるか、または類似している（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。
「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列の可変および定常領域（存在する場合）を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含んでもよい（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異）（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）：８５６−８５９）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９−１０１、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３：６５−９３、およびＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ７６４：５３６−５４６を参照されたい）。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体（すなわち、キメラおよびヒト化抗体）を含まない。
本明細書で使用される場合、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ヒトＣＤ２７に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＣＤ２７以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まず、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、エピトープに特異的に結合する単離された抗体は、異なる種由来の同じ抗原に対して交差反応性を有する可能性がある。加えて、単離された抗体は、典型的には、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まない。
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、タンパク質の三次折り畳みによって並置された隣接アミノ酸または非隣接アミノ酸の両方から形成することができる。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持される一方で、三次折り畳みによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理すると失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造で少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体によって結合されるかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当該技術分野で周知であり、例えば、抗原由来の重複または隣接ペプチド（例えば、ＣＤ２７またはＰＤ−Ｌ１）が所与の抗体（例えば、抗ＣＤ２７または抗ＰＤ−Ｌ１抗体）との反応性について試験される、免疫ブロットおよび免疫沈降アッセイを含む。エピトープの空間立体構造を決定する方法には、当該技術分野および本明細書に記載の技術、例えば、Ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴が含まれる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい）。
別の抗体と「同じエピトープに結合する抗体」という用語は、ヒトＣＤ２７上の参照抗ＣＤ２７抗体と同じ構造領域と相互作用する、すなわち、それに結合する抗体を包含することが意図される。抗体が結合する「同じエピトープ」は、線状エピトープ、または抗原の三次折り畳みによって形成される立体構造エピトープであり得る。
「競合抗体」という用語は、ヒトＣＤ２７への結合について参照抗ＣＤ２７抗体と競合する、すなわち、参照抗ＣＤ２７抗体のＣＤ２７への結合を競合的に阻害する抗体を指す。「競合抗体」は、参照抗ＣＤ２７抗体と同じＣＤ２７上のエピトープに結合しても、重複エピトープに結合しても、参照抗ＣＤ２７抗体のＣＤ２７への結合を立体的に妨げてもよい。
同じエピトープを認識するか、または結合について競合する抗体は、通常の技術を使用して特定することができる。そのような技術には、例えば、ある抗体が別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力を示すイムノアッセイ、すなわち、競合的結合アッセイが含まれる。競合的結合は、試験される免疫グロブリンが、参照抗体の、ＣＤ２７などの共通抗原への特異的結合を阻害するアッセイで決定される。多数の種類の競合的結合アッセイ、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）を参照されたい）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照されたい）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照されたい）、Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照されたい）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０））および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））が既知である。典型的には、そのようなアッセイは、これらのいずれかを有する固体表面または細胞に結合した精製抗原、非標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンの使用を伴う。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、それは、参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％以上阻害する。
他の技術には、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線分析などのエピトープマッピング法が含まれる。他の方法は、抗体の、抗原配列内のアミノ酸残基の修飾による結合の喪失が、しばしばエピトープ成分の指標とみなされる、抗原フラグメントまたは抗原の変異変種への結合を監視する。加えて、エピトープマッピングのための計算的コンビナトリアル法も使用することができる。これらの方法は、目的の抗体がコンビナトリアルファージ提示ペプチドライブラリーから特定の短いペプチドを親和性単離する能力に依存する。次に、ペプチドは、ペプチドライブラリーのスクリーニングに使用される抗体に対応するエピトープの定義のリードとみなされる。エピトープマッピングのために、立体構造の非連続的なエピトープをマッピングすることが示されている計算的アルゴリズムも開発されている。
本明細書で使用される場合、「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」および「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原上のエピトープに結合する抗体を指す。典型的には、抗体は、ＢＩＡＣＯＲＥ２０００機器で（例えば、分析物として組換えヒトＣＤ２７を、リガンドとして抗体を使用して）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって測定して、約１０−８Ｍ、１０−９Ｍもしくは１０−１０Ｍ未満、またはそれ以下などの約１０−７Ｍ未満の平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に結合するその親和性よりも少なくとも２倍大きい親和性で所定の抗原に結合する。「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という語句は、本明細書では「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。
本明細書で使用される場合、「ＫＤ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指すことが意図される。典型的には、本発明のヒト抗体は、ＢＩＡＣＯＲＥ２０００機器で（例えば、分析物として組換えヒトＣＤ２７を、リガンドとして抗体を使用して）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定して、１０−９Ｍもしくは１０−１０Ｍ未満、またはそれ以下などの約１０−８Ｍ以下の解離平衡定数（ＫＤ）でＣＤ２７に結合する。
本明細書で使用される場合、「ｋｄ」という用語は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離のオフ速度定数を指すことが意図される。
本明細書で使用される場合、「ｋａ」という用語は、抗体と抗原との会合の速度定数を指すことが意図される。
本明細書で使用される場合、「ＥＣ５０」という用語は、インビトロまたはインビボアッセイのいずれかにおいて、最大応答の５０％、すなわち、最大応答とベースラインとの中間である応答を誘発する、抗体またはその抗原結合部分の濃度を指す。
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。一実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。別の実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプのものである。
本明細書で使用される場合、（例えば、ＣＤ７０のＣＤ２７へのおよび／またはＰＤ１のＰＤ−Ｌ１への結合の阻害／遮断を指す）「阻害する」または「遮断する」という用語は、互換的に使用され、部分的および完全な阻害／遮断の両方を包含する。阻害／遮断は、好ましくは阻害または遮断なしで結合が発生するときに発生する正常なレベルまたは種類の活性を低減するか、または変更する。阻害および遮断はまた、抗ＣＤ２７抗体と接触していないＣＤ７０と比較して、抗ＣＤ２７抗体と接触している場合のＣＤ７０の結合親和性の任意の測定可能な減少、例えば、ＣＤ７０の結合を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％阻害することを含むことが意図される。一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体は、ＣＤ７０の結合を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体は、ＣＤ７０の結合を少なくとも８０％阻害する。阻害および遮断はまた、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触していないＰＤ１と比較して、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触している場合のＰＤ１の結合親和性の任意の測定可能な減少、例えば、ＰＤ１の結合を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％阻害することを含むことが意図される。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ１の結合を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ１の結合を少なくとも８０％阻害する。
本明細書で使用される場合、「交差反応する」という用語は、本発明の抗ＣＤ２７結合ドメインまたは抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインがそれぞれ、異なる種由来のＣＤ２７またはＰＤ−Ｌ１に結合する能力を指す。例えば、ヒトＣＤ２７に結合する本発明のＣＤ２７結合ドメインはまた、別の種のＣＤ２７に結合し得る。同様に、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する本発明の抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインはまた、別の種のＰＤ−Ｌ１に結合し得る。本明細書で使用される場合、交差反応性は、結合アッセイ（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）における精製抗原との特異的反応性、またはＣＤ２７を生理学的に発現する細胞への結合もしくは他の方法での機能的な相互作用を検出することによって測定される。交差反応性を決定するための方法には、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２０００ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用するＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析による、またはフローサイトメトリー技術による、本明細書に記載の標準的な結合アッセイが含まれる。
本明細書で使用される場合、ある物体に適用される「天然に存在する」という用語は、物体が自然界に見出され得るという事実を指す。例えば、自然界の供給源から単離することができ、実験室で人間によって意図的に改変されていない、（ウイルスを含む）生物に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
本発明はまた、配列番号１〜１６０に記載の配列のいずれかの「保存的配列修飾」、すなわち、抗原に対するヌクレオチド配列によってコードされるか、または抗原に対するアミノ酸配列を含有する、ＶＨおよびＶＬ配列の結合を抑止しないヌクレオチドおよびアミノ酸配列修飾も包含する。そのような保存的配列修飾には、保存的ヌクレオチドおよびアミノ酸置換、ならびにヌクレオチドおよびアミノ酸の付加および欠失が含まれる。例えば、修飾は、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発などの当該技術分野で既知の標準的な技術によって、配列番号１〜１６０に導入することができる。保存的アミノ酸置換には、アミノ酸残基が、類似した側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものが含まれる。類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。したがって、抗ＣＤ２７抗体において予測される非必須アミノ酸残基は、好ましくは同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基で置き換えられる。抗原結合を排除しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を特定する方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０−１１８７（１９９３）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９−８８４（１９９９）およびＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４：４１２−４１７（１９９７）を参照されたい）。
特定の実施形態では、保存的アミノ酸配列修飾は、本明細書に記載のＣＤＲ配列に対する最大で１、２、３、４または５つの保存的アミノ酸置換を指す。例えば、そのような各ＣＤＲは、最大で５つの保存的アミノ酸置換、例えば、最大で４つ（すなわち、以下）の保存的アミノ酸置換、例えば、最大で３つ（すなわち、以下）の保存的アミノ酸置換、例えば、最大で２つ（すなわち、以下）の保存的アミノ酸置換、または１つ以下の保存的アミノ酸置換を含有し得る。
あるいは、別の実施形態では、変異は、飽和変異誘発などによって、抗ＣＤ２７または抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインコード配列の全部または一部に沿ってランダムに導入することができ、得られた修飾抗ＣＤ２７または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、結合活性についてスクリーニングすることができる。
核酸の場合、「実質的な相同性」という用語は、最適に整列させ、比較した場合に、２つの核酸またはそれらの指定された配列が、適切なヌクレオチド挿入または欠失を含めて、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、通常少なくともヌクレオチドの約９０％〜９５％およびより好ましくはヌクレオチドの少なくとも約９８％〜９９．５％同一であることを示す。あるいは、セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件下で鎖の補体にハイブリダイズする場合、実質的な相同性が存在する。
アミノ酸の場合、「実質的な相同性」という用語は、最適に整列させ、比較した場合に、２つのアミノ酸配列またはそれらの指定された配列が、適切なアミノ酸挿入または欠失を含めて、アミノ酸の少なくとも約８０％、通常少なくとも約９０％〜９５％およびより好ましくはアミノ酸の少なくとも約９８％〜９９％または９９．５％同一であることを示す。
２つの配列間の同一性の割合は、２つの配列の最適な整列のために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の数の合計×１００）。以下の非限定的な実施例で説明するように、配列の比較および２つの配列間の同一性の割合の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。
２つのヌクレオチド配列間の同一性の割合は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用し、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、ならびに４０、５０、６０、７０または８０のギャップ重みおよび１、２、３、４、５または６の長さ重みを使用して決定することができる。２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一性の割合は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７（１９８９））のアルゴリズムを使用し、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長さペナルティおよび４のギャップペナルティを使用して決定することもできる。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性の割合は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを使用し、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ重みおよび１、２、３、４、５または６の長さ重みを使用して決定することができる。
本発明の核酸およびタンパク質配列を、例えば、公開データベースに対して検索を実行するための「クエリ配列」としてさらに使用して、関連する配列を特定することができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２で実行して、本発明の核酸分子と同一のヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実行して、本発明のタンパク質分子と同一のアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップのある整列を得るために、ギャップのあるＢＬＡＳＴをＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載のように利用してもよい。ＢＬＡＳＴおよびギャップのあるＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
Ｂ．抗ＣＤ２７抗体およびそれらの結合ドメイン
新規な抗ＣＤ２７抗体およびそれらの結合ドメインが本明細書で提供される。「ＣＤ２７」（「ＣＤ２７分子」、「ＣＤ２７Ｌ受容体」、「Ｓ１５２１」、「Ｔ細胞活性化抗原ＣＤ２７」、「ＴＮＦＲＳＦ７」、「ＭＧＣ２０３９３」、「腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー７」、「Ｔ細胞活性化抗原Ｓ１５２」、「Ｔｐ５５」、「腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー７」、「ＣＤ２７抗原」および「Ｔ細胞活性化抗原ＣＤ２７」とも称される）は、リガンドＣＤ７０に結合するＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである受容体を指す。ＣＤ２７は、Ｔ細胞免疫の生成および長期維持に必要であり、Ｂ細胞活性化および免疫グロブリン合成の制御において重要な役割を果たす。「ＣＤ２７」という用語には、細胞によって天然に発現されるＣＤ２７の任意の変異体またはアイソフォームが含まれる（例えば、配列番号１７３に記載の受託番号ＡＡＨ１２１６０．１を有するＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）に寄託されたヒトＣＤ２７）。したがって、本発明のＣＤ２７結合ドメインは、ヒト以外の種由来のＣＤ２７と交差反応し得る。あるいは、ＣＤ２７結合ドメインは、ヒトＣＤ２７に特異的であり、他の種との交差反応性を示さない場合がある。ＣＤ２７またはその任意の変異体およびアイソフォームは、それらを天然に発現する細胞または組織から単離されても、当該技術分野で周知の技術および／または本明細書に記載の技術を使用して組換え的に産生されてもよい。好ましくは、ＣＤ２７結合ドメインは、正常なグリコシル化パターンを有するヒトＣＤ２７を標的とする。
「ＣＤ７０」（「ＣＤ７０分子」、「ＣＤ２７Ｌ」、「ＣＤ２７ＬＧ」、「ＴＮＦＳＦ７」、「腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーメンバー７」、「ＣＤ２７リガンド」、「ＣＤ７０抗原」、「表面抗原ＣＤ７０」、「腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリー、メンバー７」、「Ｋｉ−２４抗原」および「ＣＤ２７−Ｌ」とも称される）は、ＣＤ２７のリガンドを指す（例えば、Ｂｏｗｍａｎ ＭＲ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４ Ｆｅｂ １５；１５２（４）：１７５６−６１を参照されたい）。ＣＤ７０は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドファミリーに属するＩＩ型膜貫通タンパク質である。それは、同時刺激されたＴ細胞の増殖を誘発し、細胞傷害性Ｔ細胞の生成を増強し、Ｔ細胞の活性化に寄与する、活性化ＴおよびＢリンパ球上の表面抗原である。ＣＤ７０は、Ｂ細胞活性化、ナチュラルキラー細胞の細胞傷害性機能および免疫グロブリン合成の制御において役割を果たすことも示唆されている（Ｈｉｎｔｚｅｎ ＲＱ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４ Ｆｅｂ １５；１５２（４）：１７６２−７３）。Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）受託番号ＮＰ＿００１２４３は、ヒトＣＤ７０のアミノ酸配列（配列番号１７４）を報告している。
例示的な抗ＣＤ２７抗体は、本明細書に記載の抗体３Ｃ２である。一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその結合ドメインは、抗体３Ｃ２の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１７に記載の配列を有する抗体３Ｃ２の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号１８に記載の配列を有する抗体３Ｃ２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号１、２および３に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号１７および配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＣＤ２７抗体は、本明細書に記載の抗体２Ｂ３である。一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその結合ドメインは、抗体２Ｂ３の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１９に記載の配列を有する抗体２Ｂ３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号２０に記載の配列を有する抗体３Ｃ２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号１９および配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
本明細書に記載の抗Ｃ２７結合ドメインと実質的に同一（例えば、前述の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一（同一））の配列もまた提供される。一実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１７、配列番号１９、またはそれらと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１８、配列番号２０、またはそれらと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１９またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
本明細書に記載の抗ＣＤ２７抗体もしくはその結合ドメインのいずれかと結合について競合するか、または本明細書に記載の抗ＣＤ２７抗体もしくはその結合ドメインのいずれかと同じエピトープに結合する、抗ＣＤ２７抗体またはそれらの結合ドメインもまた使用に好適であり、本明細書で提供される。例えば、一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその結合ドメインは、抗体３Ｃ２（または抗体３Ｃ２に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）とＣＤ２７への結合について競合する。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその結合ドメインは、抗体２Ｂ３（または抗体２Ｂ３に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）とＣＤ２７への結合について競合する。別の実施形態では、抗体またはその抗ＣＤ２７結合ドメインは、抗体３Ｃ２（または抗体３Ｃ２に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）と同じＣＤ２７上のエピトープに結合する。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその結合ドメインは、抗体２Ｂ３（または抗体２Ｂ３に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）と同じＣＤ２７上のエピトープに結合する。
一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴：Ｔ細胞媒介性免疫応答を誘発するか、もしくは増強する、ｓＣＤ７０のＣＤ２７への結合を（例えば、部分的もしくは完全に）遮断する、ＮＦκＢ活性化を誘発する、Ｔ細胞増殖を増加させる、平衡解離定数Ｋｄが１０−９Ｍ以下、もしくは平衡会合定数Ｋａが１０＋９Ｍ−１以上でヒトＣＤ２７に結合する、ＣＤ２７発現細胞の特異的補体媒介性細胞毒性（ＣＤＣ）を誘発する、ＣＤ２７発現細胞の抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）特異的溶解を誘発する、ワクチンもしくは内因性抗原と組み合わせてインビボで抗原特異的免疫応答を誘発するか、もしくは増強する、ワクチンもしくは内因性抗原と組み合わせてインビボで抗原特異的ＴＨ１免疫応答を誘発するか、もしくは増強する、ワクチンもしくは内因性抗原と組み合わせてインビボで抗原特異的Ｔ細胞増殖もしくは活性化を誘発するか、もしくは増強する、および／または同時、別個もしくは連続したＴＣＲ活性化と組み合わせたときに、Ｔ細胞活性を誘発するか、もしくは増強する、といった機能的特徴のうちの１つ以上を有する。
Ｃ．抗ＰＤ−Ｌ１抗体および結合ドメイン
新規な抗ＰＤ−Ｌ１抗体それらの結合ドメインが本明細書で提供される。本明細書で使用される場合、「プログラム細胞死１リガンド１」、「ＰＤ−Ｌ１」、「ＰＤＣＤ１リガンド１」、「プログラム死リガンド１」、「Ｂ７相同体１」、「Ｂ７−Ｈ１」および「ＣＤ２７４」という用語は、互換的に使用され、変異体、アイソフォーム、ヒトＰＤ−Ｌ１の種相同体およびＰＤ−Ｌ１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。完全なＰＤ−Ｌ１配列は、配列番号１７６に記載のＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１２５４６３５に見出され得る。
プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）は、妊娠、組織同種移植、自己免疫疾患および他の病状（肝炎など）などの特定の事象中に免疫系を抑制するのに主要な役割を果たすと推測されている、４０ｋＤａの１型膜貫通タンパク質である。通常、免疫系は、外因性または内因性の危険シグナルに関連する外来抗原に反応し、これが、抗原特異性ＣＤ８＋Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋ヘルパー細胞の増殖をトリガーする。ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合は、これらのＴ細胞の増殖を低減する抑制性シグナルを伝達し、またアポトーシスも誘発することができ、これは、遺伝子Ｂｃｌ−２のより低い制御によってさらに媒介される。本明細書で使用される場合、「プログラム死１」、「プログラム細胞死１」、「タンパク質ＰＤ−１」、「ＰＤ−１」、「ＰＤ１」、「ＰＤＣＤ１」、「ｈＰＤ−１」および「ｈＰＤ−Ｉ」という用語は、互換的に使用され、変異体、アイソフォーム、ヒトＰＤ−１の種相同体およびＰＤ−１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。完全なＰＤ−１配列は、配列番号１７５に記載のＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９に見出され得る。
ＰＤ−Ｌ１は、様々なヒト癌に大量に存在する（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７−９）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用は、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介性増殖の減少および癌細胞による免疫回避をもたらす（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１−７、Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７−３１４、Ｋｏｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：５０９４−１００）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との局所的な相互作用を阻害することによって、免疫抑制を逆転させることができ、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用も同様に遮断した場合、この効果は、相加的である（Ｉｗａｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９９：１２２９３−７、Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７−６６）。
例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体７Ｈ７である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体７Ｈ７の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７７に記載の配列を有する抗体７Ｈ７の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号７８に記載の配列を有する抗体７Ｈ７の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号７７および配列番号７８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体１Ｂ３である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体１Ｂ３の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７９に記載の配列を有する抗体１Ｂ３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８０に記載の配列を有する抗体１Ｂ３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号７９および配列番号８０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体３Ｂ６である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体３Ｂ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８１に記載の配列を有する抗体３Ｂ６の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８２に記載の配列を有する抗体３Ｂ６の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号８１および配列番号８２に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体８Ｂ１である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体８Ｂ１の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８３に記載の配列を有する抗体８Ｂ１の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８４に記載の配列を有する抗体８Ｂ１の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号８３および配列番号８４に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体４Ａ３である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体４Ａ３の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８５に記載の配列を有する抗体４Ａ３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８６に記載の配列を有する抗体４Ａ３の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８６に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号８５および配列番号８６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
別の例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載の抗体９Ｈ９である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体９Ｈ９の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８７に記載の配列を有する抗体９Ｈ９の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインと、配列番号８８に記載の配列を有する抗体９Ｈ９の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインとを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的配列修飾とを含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、配列番号８８に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその結合ドメインは、それぞれ配列番号８７および配列番号８８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む。
抗体配列はまた、いくつかの抗体のコンセンサス配列もあり得る。例えば、一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、コンセンサス配列：（Ｔ，Ｓ）（Ｓ，Ｙ，Ｈ）ＷＭＳ（配列番号１６７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１６８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１６９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１７０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１７１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号１７２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびそれらの結合ドメインと実質的に同一（例えば、前述の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列もまた、本発明によって包含される。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、またはそれらと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、またはそれらと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号７７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号７９またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８０またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号８１またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８２またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号８３またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８４またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号８５またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８６またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、配列番号８７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはそれらの結合ドメインのいずれかと結合について競合するか、または本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはそれらの結合ドメインのいずれかと同じエピトープに結合する、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびそれらの結合ドメインもまた使用に好適であり、本明細書で提供される。例えば、一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体７Ｈ７（または抗体７Ｈ７に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）とＰＤ−Ｌ１への結合について競合する。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体７Ｈ７（または抗体７Ｈ７に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）と同じＰＤ−Ｌ１上のエピトープに結合する。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体１Ｂ３（または抗体１Ｂ３に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）とＰＤ−Ｌ１への結合について競合する。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体１Ｂ３（または抗体１Ｂ３に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）と同じＰＤ−Ｌ１上のエピトープに結合する。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体３Ｂ６（または抗体３Ｂ６に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）とＰＤ−Ｌ１への結合について競合する。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体３Ｂ６（または抗体３Ｂ６に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）と同じＰＤ−Ｌ１上のエピトープに結合する。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体８Ｂ１（または抗体８Ｂ１に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）とＰＤ−Ｌ１への結合について競合する。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体８Ｂ１（または抗体８Ｂ１に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）と同じＰＤ−Ｌ１上のエピトープに結合する。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体４Ａ３（または抗体４Ａ３に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）とＰＤ−Ｌ１への結合について競合する。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体４Ａ３（または抗体４Ａ３に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）と同じＰＤ−Ｌ１上のエピトープに結合する。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体９Ｈ９（または抗体９Ｈ９に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）とＰＤ−Ｌ１への結合について競合する。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその結合ドメインは、抗体９Ｈ９（または抗体９Ｈ９に対応する重鎖および軽鎖ＣＤＲならびに／もしくは重鎖および軽鎖可変領域配列を有する抗体）と同じＰＤ−Ｌ１上のエピトープに結合する。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合部分である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７９またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８０またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８１またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８２またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８３またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８４またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８５またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８６またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の機能的特徴：（ａ）ＰＤ１のＰＤ−Ｌ１への結合を（例えば、部分的もしくは完全に）遮断する、（ｂ）ＮＦＡＴ経路活性化を誘発する、および／または（ｃ）混合リンパ球応答を誘発する、といった機能的特徴のうちの１つ以上を有する。
Ｄ．二重特異性構築物
抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物が本明細書で提供される。１つ以上の追加の結合剤に連結されて、多重特異性構築物を形成する、そのような二重特異性構築物もまた提供される。
「二重特異性」または「二機能性」構築物は、２つの異なる結合ドメイン（例えば、重鎖／軽鎖）対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッドである。二重特異性構築物は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む様々な方法によって生成することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ＆Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「連結された」という用語は、２つ以上の分子の会合を指す。連結は、共有結合であっても、非共有結合であってもよい。連結はまた、遺伝的であっても（すなわち、組換え融合されていても）よい。そのような連結は、化学的共役および組換えタンパク質産生などの、当該技術分野で認識されている様々な技術を使用して達成することができる。
化学的共役の場合、２つ以上の部分、特に２つ以上の抗体またはそれらのフラグメントを一緒にカップリングするための好適な試薬および方法が当該技術分野で既知である。様々なカップリング剤または架橋剤が市販されており、それらを使用して、抗ＣＤ２７結合ドメインおよび抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインを共役させることができる。非限定的な例には、スルホ−ＳＭＣＣ、タンパク質Ａ、カルボジイミド、ジマレイミド、ジチオ−ビス−ニトロ安息香酸（ＤＴＮＢ）およびＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）が含まれる。スルホ−ＳＭＣＣ、ＳＰＤＰおよびＤＴＮＢが好ましい薬剤であり、スルホ−ＳＭＣＣが特に好ましい。成分（例えば、結合ドメイン）を架橋剤で架橋するための他の好適な手順は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６、Ｌｉｕ，Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ８２：８６４８、Ｓｅｇａｌ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ Ｐｅｒｅｚ，Ｐ．、米国特許第４，６７６，９８０号およびＢｒｅｎｎａｎ，Ｍ．（１９８６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：４２４を参照されたい。
遺伝子操作の場合、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して、抗ＣＤ２７結合ドメインをコードする核酸分子を適切な発現ベクターに挿入することができる。抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインをコードする核酸分子（複数可）もまた、同じ発現ベクターに挿入することができ、その結果、それは、ＣＤ２７結合ドメインに作動可能に連結され（例えば、インフレームクローニング）、それにより二重特異性構築物である融合タンパク質をコードする発現ベクターがもたらされる。好ましくは、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、抗ＣＤ２７結合ドメインの重鎖のＣ末端領域に作動可能に連結されている。本明細書に記載の二重特異性構築物を調製するための他の好適な発現ベクターおよびクローニング戦略は、当該技術分野で既知である。
宿主細胞内で二重特異性構築物を発現させるためには、結合ドメインのコード領域を、クローン化プロモーター配列、リーダー配列、翻訳開始配列、リーダー配列、定常領域配列、３’非翻訳配列、ポリアデニル化配列および転写終結と組み合わせて、発現ベクター構築物を形成する。これらの構築物を使用して、例えば、完全長ヒトＩｇＧ１κまたはＩｇＧ４κ抗体を発現させることができる。本明細書に記載の二重特異性構築物で使用される完全ヒト、ヒト化およびキメラ抗体には、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＤ抗体も含まれる。他の重鎖アイソタイプを発現させるために、またはラムダ軽鎖を含む抗体を発現させるために、類似したプラスミドを構築することができる。
二重特異性構築物をコードする発現ベクターを調製した後、標準的なトランスフェクション法を使用して、二重特異性構築物を宿主細胞内で組換え的に発現させることができる。例えば、一実施形態では、二重特異性構築物をコードする核酸は、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６およびＥＰ３３８８４１に開示されるＧＳ遺伝子発現系、または当該技術分野で周知の他の発現系によって使用されるものなどの真核生物発現プラスミドなどの発現ベクターに連結され得る。クローン化二重特異性構築物遺伝子を有する精製プラスミドは、ＣＨＯ細胞もしくはＮＳＯ細胞などの真核生物宿主細胞、または植物由来細胞、真菌もしくは酵母細胞などの他の真核生物細胞に導入することができる。これらの遺伝子を導入するために使用される方法は、電気穿孔、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅまたは他のものなどの当該技術分野に記載の方法であり得る。発現ベクターを宿主細胞内に導入した後、二重特異性構築物を発現する細胞を特定し、選択することができる。これらの細胞は、次にそれらの発現レベルについて増幅され、二重特異性構築物を産生するようにアップスケールされ得る、トランスフェクトーマを表している。あるいは、これらのクローン化二重特異性構築物は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの他の発現系または完全な生物において発現させても、合成的に発現させてもよい。組換え二重特異性構築物は、これらの培養上清および／または細胞から単離し、精製することができる。
本発明の二重特異性構築物は、化学的共役によって調製されるか遺伝子操作によって調製されるかに関わらず、当該技術分野で十分に確立されたタンパク質精製のための１つ以上の方法論を使用して単離し、精製することができる。単離および精製のための好ましい方法には、ゲル濾過クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィーなどが含まれるが、これらに限定されない。特に好ましい方法は、例えば、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラムを使用するゲル濾過クロマトグラフィーである。単離され、精製された二重特異性構築物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析などの標準的な方法を使用して評価することができる。
したがって、一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインおよび抗ＣＤ２７結合ドメインは、遺伝的に融合されている。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインおよび抗ＣＤ２７結合ドメインは、化学的に共役している。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの重鎖のＣ末端に連結されている。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、ｓｃＦｖである。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、抗ＣＤ２７結合ドメインの重鎖のＣ末端に連結されている。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
例示的な二重特異性構築物を以下の表１〜２に記載し、結合ドメインは、ＣＤＲ配列（表１）または可変領域配列（表２）によって定義される。
（表１）例示的な二重特異性構築物（ＣＤＲ）
Figure 2021521793
（表２）例示的な二重特異性構築物（ＶＲ）
Figure 2021521793
一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）抗ＣＤ２７結合ドメインは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
ａ．コンセンサス配列（Ｔ，Ｓ）（Ｓ，Ｙ，Ｈ）ＷＭＳ（配列番号１６７）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号１６８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号１６９を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号１７０を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号１７１を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号１７２を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、二重特異性構築物が提供される。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）抗ＣＤ２７結合ドメインは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
ａ．配列番号７７もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７８もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８０もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８２もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８４もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８６もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８８もしくはそれと少なくとも９５％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域を含む、二重特異性構築物が提供される。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、（ａ）配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ２７結合ドメインと、（ｂ）配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインとを含む。
特定の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、
ｇ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の特定の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、
ｃ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、または
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、
ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域、または
ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、
ｇ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、
ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域、または
ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、
ｃ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、
ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含み、
（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１抗体は、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含み、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体は、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む。
別の態様では、二重特異性構築物であって、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された本明細書に記載の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれか１つを含む、二重特異性構築物が提供される。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される。
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、（ａ）配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、（ｄ）配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、（ｅ）配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、ならびに（ｆ）配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域からなる群から選択される。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
別の態様では、二重特異性構築物であって、抗ＣＤ２７結合ドメインに連結された本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれか１つを含む、二重特異性構築物が提供される。一実施形態では、抗Ｃ２７結合ドメインは、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＣＤ２７抗体を含む。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、配列番号１７またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体を含む。別の実施形態では、抗Ｃ２７結合ドメインは、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＣＤ２７抗体を含む。別の実施形態では、抗Ｃ２７結合ドメインは、配列番号１９またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、ＣＤ２７抗体を含む。一実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、ｓｃＦｖである。別の実施形態では、抗ＣＤ２７結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む。
別の実施形態では、二重特異性構築物は、以下の機能的特徴：ＮＦκＢ活性化を誘発する、Ｔ細胞増殖を増加させる、ＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発する、および／またはＩＬ−２産生を増加させる、といった機能的特徴のうちの１つ以上を有する。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体単独と比較して、ＩＬ−２産生を少なくとも約１．５倍（例えば、少なくとも２倍、２．５倍、３倍、３．５倍または４倍）増加させる。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体単独よりも、ＣＤ８ Ｔ細胞応答を少なくとも約２倍大きく（例えば、少なくとも２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８．０倍、８．５倍または９倍）誘発する。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体単独と比較して、生存を少なくとも約１．５倍長く（例えば、少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍または５倍）増加させる。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体単独または組み合わせと比較して、腫瘍重量を少なくとも約１．５倍（例えば、少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍または５倍）減少させる。別の実施形態では、二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体単独または組み合わせと比較して、Ｔ細胞産生を少なくとも約１．５倍（例えば、少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８．０倍、８．５倍または９倍）増加させる。
特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性構築物は、抗ＣＤ２７結合ドメインおよび抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの組み合わせの使用（すなわち、連結していない抗体の同時投与）と比較して、（例えば、インビボでの免疫応答の増強における）相乗効果を示す。
Ｅ．組成物
組成物、例えば、担体（例えば、薬学的に許容される担体）と一緒に製剤化された、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、もしくはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物または多重特異性構築物のうちの１つまたは組み合わせを含む組成物もまた本明細書で提供される。
本明細書で使用される場合、「担体」および「薬学的に許容される担体」という用語は、生理学的に適合性のある、あらゆる溶媒、塩、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。好ましくは、担体は、（例えば、注射または注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与に好適である。投与経路に応じて、活性化合物（すなわち、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、もしくはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物または多重特異性構築物のいずれか）は、化合物を不活性化し得る酸および他の自然条件の作用から、化合物を保護するための材料でコーティングされてもよい。
本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、もしくはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物または多重特異性構築物とともに使用することができるアジュバントの例には、フロイント不完全アジュバントおよび完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｄｅｔｒｏｉｔ，Ｍｉｃｈ．）、Ｍｅｒｃｋアジュバント６５（Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．、Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＳ−２（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．）、水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）またはリン酸アルミニウムなどのアルミニウム塩、カルシウム、鉄または亜鉛の塩、アシル化チロシンの不溶性懸濁液、アシル化糖、陽イオン性または陰イオン性誘導体化多糖類、ポリホスファゼン、生分解性ミクロスフェア、ＧＭ−ＣＳＦ、インターロイキン−２、−７、−１２および他の同様の因子などのサイトカイン、３Ｄ−ＭＰＬ、ＣｐＧオリゴヌクレオチドならびにモノホスホリルリピドＡ、例えば、３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡが含まれるが、これらに限定されない。
ＭＰＬアジュバントは、Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である（Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ、例えば、米国特許第４，４３６，７２７号、同第４，８７７，６１１号、同第４，８６６，０３４号および同第４，９１２，０９４号を参照されたい）。（ＣｐＧジヌクレオチドがメチル化されていない）ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、周知であり、例えば、ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９９／３３４８８ならびに米国特許第６，００８，２００号および同第５，８５６，４６２号に記載されている。免疫刺激性ＤＮＡ配列はまた、例えば、Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７３：３５２，１９９６によって記載されている。
さらなる代替的なアジュバントには、例えば、Ｑｕｉｌ Ａなどのサポニン、またはＱＳ２１およびＱＳ７を含むその誘導体（Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，Ｍａｓｓ．）、エスチン、ジギトニン、またはＧｙｐｓｏｐｈｉｌａもしくはＣｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ ｑｕｉｎｏａサポニン、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ７２０（Ｓｅｐｐｉｃ、Ｆｒａｎｃｅ）、ＳＡＦ（Ｃｈｉｒｏｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ）、ＩＳＣＯＭＳ（ＣＳＬ）、ＭＦ−５９（Ｃｈｉｒｏｎ）、ＳＢＡＳシリーズのアジュバント（例えば、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ、Ｒｉｘｅｎｓａｒｔ，Ｂｅｌｇｉｕｍから入手可能なＳＢＡＳ−２またはＳＢＡＳ−４）、Ｄｅｔｏｘ（Ｅｎｈａｎｚｙｎ（商標））（Ｃｏｒｉｘａ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）、ＲＣ−５２９（Ｃｏｒｉｘａ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）および他のアミノアルキルグルコサミニド４−ホスフェート（ＡＧＰ）、ＷＯ９９／５２５４９Ａ１に記載のものなどのポリオキシエチレンエーテルアジュバント、イミキモド［Ｓ−２６３０８、Ｒ−８３７］（Ｈａｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ １９：１８２０−１８２６，２００１）およびレシキモド［Ｓ−２８４６３、Ｒ−８４８］（Ｖａｓｉｌａｋｏｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２０４：６４−７４，２０００）などの合成イミダゾキノリン、ツカレゾールなどの抗原提示細胞およびＴ細胞表面上で構成的に発現されるカルボニルおよびアミンのシッフ塩基（Ｒｈｏｄｅｓ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３７７：７１−７５，１９９５）、例えば、インターフェロン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータなどの炎症誘発性サイトカイン、インターフェロンガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８およびＩＬ−２１などのＴｈ１インデューサー、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３などのＴｈ２インデューサー、ならびにＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１アルファ、ＭＩＰ−１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＣＡ−３、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ４０Ｌなどの他のケモカインおよび同時刺激遺伝子を含む、タンパク質またはペプチドとしてのサイトカイン、ＣＴＬＡ−４およびＬ−セレクチンなどのリガンドを標的とする免疫刺激剤、Ｆａｓなどのアポトーシス刺激タンパク質およびペプチド、Ｖａｘｆｅｃｔｉｎ（Ｒｅｙｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ １９：３７７８−３７８６，２００１）、スクアレン、アルファ−トコフェロール、ポリソルベート８０、ＤＯＰＣおよびコレステロールなどの合成脂質系アジュバント、エンドトキシン、［ＬＰＳ］、（Ｂｅｕｔｌｅｒ，Ｂ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ３：２３−３０，２０００）、Ｔｏｌｌ受容体をトリガーして、合成マイコバクテリアリポタンパク質、マイコバクテリアタンパク質ｐ１９、ペプチドグリカン、タイコ酸およびリピドＡなどのＴｈ１誘発サイトカインを産生するリガンド、ならびにＣＴ（コレラ毒素、サブユニットＡおよびＢ）およびＬＴ（Ｅ．ｃｏｌｉ由来の熱不安定性エンテロトキシン、サブユニットＡおよびＢ）、熱ショックタンパク質ファミリー（ＨＳＰ）ならびにＬＬＯ（リステリオリシンＯ、ＷＯ０１／７２３２９）が含まれる。これらおよび様々なさらなるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストは、例えば、Ｋａｎｚｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｙ ２００７，Ｖｏｌ１３，Ｎｏ５に記載されている。
「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、いかなる望ましくない毒物学的効果も付与しない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。そのような塩の例には、酸付加塩および塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの非毒性無機酸、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸に由来するものが含まれる。塩基付加塩には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属、ならびにＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性有機アミンに由来するものが含まれる。
本発明の組成物は、当該技術分野で既知の様々な方法によって投与することができる。当業者によって理解されるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。活性化合物は、植込錠、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤などの、急速放出に対して化合物を保護する担体を用いて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤を調製するための多くの方法は、特許取得されているか、または一般に当業者に既知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
特定の投与経路によって本発明の化合物を投与するために、化合物をその不活性化を予防するための材料でコーティングするか、または化合物をそれとともに同時投与することが必要である場合がある。例えば、化合物は、適切な担体、例えば、リポソーム、または希釈剤中で対象に投与され得る。許容される希釈剤には、生理食塩水および緩衝水溶液が含まれる。リポソームには、水中油中水型ＣＧＦエマルジョンおよび従来のリポソームが含まれる（Ｓｔｒｅｊａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．７：２７）。
担体には、無菌注射可能溶液または分散液の即時調製のための無菌水溶液または分散液および無菌粉末が含まれる。薬学的に活性な物質のためのそのような培地および薬剤の使用は、当該技術分野で既知である。任意の従来の培地または薬剤が活性化合物と不適合性である場合を除いて、本発明の薬学的組成物中でのそれらの使用が企図される。補足的な活性化合物もまた、組成物に組み込まれてもよい。
治療組成物は、典型的には、製造および保管条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは高薬物濃度に好適な他の規則正しい構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合、必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを組成物に含めることが好ましいであろう。注射可能組成物の延長吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアレート塩およびゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。
無菌注射可能溶液は、適切な溶媒に必要な量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した成分のうちの１つまたは組み合わせとともに組み込み、その後に無菌化精密濾過することによって調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒および上に列挙したものからの必要な他の成分を含有する無菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射可能溶液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）であり、これにより、活性成分の粉末に加えて、以前に滅菌濾過されたその溶液からの任意の追加の所望の成分が得られる。
投薬計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスを投与しても、いくつかの分割された用量を経時的に投与しても、治療状況の緊急事態によって示される場合、用量を比例的に低減または増加させてもよい。例えば、本発明の抗体は、皮下もしくは筋肉内注射によって週に１回もしくは２回、または皮下もしくは筋肉内注射によって月に１回もしくは２回投与され得る。
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、単位剤形で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、治療される対象の単回投薬量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な薬学的担体と関連して所望の治療効果を生成するように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成されるべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体の感受性の治療のためのそのような活性化合物を化合する当該技術分野に固有の制限によって指示され、それに直接依存する。
薬学的に許容される抗酸化剤の例には、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤が含まれる。
治療組成物の場合、本発明の製剤には、経口、経鼻、局所（頬側および舌下を含む）、直腸、膣ならびに／または非経口投与に好適なものが含まれる。製剤は、好都合に単位剤形で提示することができ、薬学の分野で既知の任意の方法によって調製することができる。担体材料と組み合わせて、単回剤形を生成することができる有効成分の量は、治療される対象および特定の投与様式に応じて変化するであろう。担体材料と組み合わせて、単回剤形を生成することができる有効成分の量は一般に、治療効果を生成するその組成物の量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、活性成分の約０．００１パーセント〜約９０パーセント、好ましくは約０．００５パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは約０．０１パーセント〜約３０パーセントの範囲である。
膣内投与に好適な本発明の製剤には、腟坐薬、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたは当該技術分野で適切であることが既知であるような担体を含有するスプレー製剤も含まれる。本発明の組成物の局所または経皮投与のための剤形には、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入剤が含まれる。活性化合物は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体と、および必要とされ得る任意の防腐剤、緩衝液または噴射剤と混合することができる。
本明細書で使用される場合、「非経口投与」および「非経口投与される」という語句は、通常注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入を非限定的に含む。
本発明の薬学的組成物に用いられ得る好適な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの好適な混合物、オリーブオイルなどの植物油ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合、必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含有し得る。微生物の存在の予防は、上記の無菌化手順によって、ならびに様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることの両方によって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることが望ましい場合もある。加えて、注射可能な剤形の延長吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることによってもたらすことができる。
本発明の化合物が、医薬品としてヒトおよび動物に投与される場合、それらは、単独で、または例えば、０．００１〜９０％（より好ましくは０．０１〜３０などの０．００５〜７０％）の活性成分を薬学的に許容される担体と組み合わせて含有する薬学的組成物として与えることができる。
選択される投与経路に関わらず、好適な水和形態で使用され得る本発明の化合物、および／または本発明の薬学的組成物は、当業者に既知の従来の方法によって、薬学的に許容される剤形に製剤化される。
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、患者に毒性であることなく、特定の患者、組成物および投与様式の所望の治療応答を達成するのに有効な活性成分の量を得るように変化させることができる。選択される投薬量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物またはそれらのエステル、塩もしくはアミドの活性、用いられる特定の化合物の投与経路、投与時間、排泄速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康および以前の病歴、ならびに医学の分野で周知の同様の因子を含む様々な薬物動態学的因子に依存するであろう。当業者である医師または獣医師は、必要とされる有効量の薬学的組成物を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医師は、所望の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低いレベルで薬学的組成物に用いられる本発明の化合物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増加させることができる。一般に、本発明の組成物の好適な１日用量は、治療効果を生成するのに有効な最低用量である化合物の量である。そのような有効用量は一般に、上記の因子に依存するであろう。投与は、静脈内、筋肉内、腹腔内または皮下であることが好ましく、好ましくは標的部位の近位に投与される。必要に応じて、治療組成物の有効な１日用量は、１日を通して適切な間隔で、任意で単位剤形で別々に投与される２、３、４、５、６またはそれ以上の部分用量として投与され得る。本発明の化合物を単独で投与することは可能であるが、化合物を薬学的製剤（組成物）として投与することが好ましい。
治療組成物は、当該技術分野で既知の医療デバイスとともに投与することができる。例えば、好ましい実施形態では、本発明の治療組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号または同第４，５９６，５５６号に開示されるデバイスなどの無針皮下注射デバイスで投与することができる。本発明で有用な周知の植込錠およびモジュールの例には、調節された速度で薬物を分注するための植え込み型微量注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号、皮膚を通して薬物を投与するための治療デバイスを開示する米国特許第４，４８６，１９４号、正確な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号、連続的な薬物送達のための可変流量の植え込み型注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号、マルチチャンバー区画を有する浸透圧薬物送達系を開示する米国特許第４，４３９，１９６号および浸透圧薬物送達系を開示する米国特許第４，４７５，１９６号が含まれる。多くの他のそのような植込錠、送達系およびモジュールは、当業者に既知である。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、インビボでの適切な分布を確実にするように製剤化され得る。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を排除する。本発明の治療化合物が（必要に応じて）ＢＢＢを通過することを確実にするために、それらは、例えば、リポソーム中に製剤化することができる。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、同第５，３７４，５４８号および同第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または器官に選択的に輸送される１つ以上の部分を含み、したがって標的化された薬物送達を増強することができる（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照されたい）。例示的な標的化部分には、葉酸またはビオチン（例えば、Ｌｏｗらの米国特許第５，４１６，０１６号を参照されたい）、マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）、抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３５７：１４０、Ｍ．Ｏｗａｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）、その異なる種が本発明の製剤ならびに本発明の分子の成分を含み得る、界面活性剤タンパク質Ａ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）、ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が含まれ、Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３４６：１２３、Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ；Ｉ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２７３も参照されたい。本発明の一実施形態では、本発明の治療化合物は、リポソーム中に製剤化され、より好ましい実施形態では、リポソームは、標的化部分を含む。最も好ましい実施形態では、リポソーム中の治療化合物は、ボーラス注射によって、腫瘍または感染の近位の部位に送達される。組成物は、容易な注射可能性が存在する程度まで流動性でなければならない。それは、製造および保管条件下で安定していなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されていなければならない。
化合物が癌を阻害する能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価することができる。あるいは、組成物のこの特性は、化合物が阻害する能力を調べることによって（インビトロの阻害は、当業者に既知のアッセイによって）評価することができる。治療有効量の治療化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、または他の方法で対象の症状を寛解させることができる。当業者は、対象のサイズ、対象の症状の重症度および選択される特定の組成物または投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。
組成物は、組成物が注射器によって送達可能である程度まで無菌かつ流動性でなければならない。水に加えて、担体は、等張緩衝食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体エチレングリコールなど）ならびにそれらの好適な混合物であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合、必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトールまたはソルビトールなどの多価アルコール、および塩化ナトリウムを組成物に含めることが好ましい。注射可能な組成物の延長吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。
上記のように、活性化合物が好適に保護されている場合、化合物は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な食用担体とともに経口投与することができる。
Ｆ．核酸
本明細書で使用される場合、「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得るが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
ＣＤ２７および／またはＰＤ−Ｌ１に結合する結合ドメイン、抗体または抗体部分（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ３）をコードする核酸に関して本明細書で使用される場合、「単離された核酸分子」という用語は、結合ドメイン、抗体または抗体部分をコードするヌクレオチド配列が、ＣＤ２７および／またはＰＤ−Ｌ１以外の抗原に結合する結合ドメイン、抗体または抗体部分をコードする他のヌクレオチド配列を含まず、これらの他の配列が、ヒトゲノムＤＮＡの核酸に天然に隣接し得る、核酸分子を指すことが意図される。
核酸は、細胞全体、細胞溶解物、または部分的精製形態もしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当該技術分野で周知の他のものを含む標準的な技術によって、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば他の細胞核酸またはタンパク質から精製されたときに、「単離される」か、または「実質的に純粋になる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照されたい。
ｃＤＮＡ、ゲノムまたはそれらの混合物のいずれかに由来する本発明の核酸分子は、しばしば（修飾制限部位などを除いて）天然の配列であるが、標準的な技術に従って変異させて、遺伝子配列を提供することができる。コード配列の場合、これらの変異は、所望の場合、アミノ酸配列に影響を与えることができる。特に、本明細書に記載の天然Ｖ、Ｄ、Ｊ配列、定常配列、スイッチ配列および他のそのような配列と実質的に同一であるか、またはそれに由来するＤＮＡ配列が企図される（ここで、「由来」は、配列が同一であるか、または別の配列から修飾されていることを示す）。
核酸は、別の核酸配列との機能的な関係に置かれているときに、「動作可能に連結される」または「作動可能に連結される」。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を与える場合に、コード配列に動作可能に連結されている。転写制御配列に関して、動作可能に連結されるは、連結されているＤＮＡ配列が隣接しており、必要に応じて、隣接しておりかつ読み枠内にある２つのタンパク質コード領域を接合することを意味する。スイッチ配列の場合、動作可能に連結されるは、配列がスイッチ組換えをもたらすことができることを示す。
本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、またはそれらの抗原結合部分をコードする単離された核酸分子、二重特異性構築物および多重特異性構築物、ならびにそのような核酸を含む発現ベクターおよびそのような発現ベクターを含む宿主細胞も提供される。別の実施形態では、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、もしくはそれらの抗原結合部分のいずれかをコードする核酸分子、二重特異性構築物または多重特異性構築物が提供される。別の実施形態では、核酸分子は、発現ベクターの形態である。別の実施形態では、核酸分子は、インビボで対象に投与されると、結合ドメイン、抗体、もしくはその抗原結合部分を発現する発現ベクター、二重特異性構築物または多重特異性構築物の形態である。
一実施形態では、核酸分子は、抗体可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体可変領域は、配列番号１７、１８、１９、２０、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列の１つ以上と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、核酸分子は、配列番号２５、２６、２７、２８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２に記載のヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列の１つ以上と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一）のヌクレオチド配列を含む。
別の実施形態では、核酸分子は、抗体の重鎖および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１７および１８、配列番号１９および２０、配列番号７７および７８、配列番号７９および８０、配列番号８１および８２、配列番号８３および８４、配列番号８５および８６、もしくは配列番号８７および８８に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０％同一（例えば、前述の配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一）のアミノ酸配列を含む。
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図される。ベクターの１つの種類は、「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントが連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の種類は、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得る、ウイルスベクターである。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自律複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれることができ、それにより宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが機能的に連結されている遺伝子の発現を指向することができる。そのようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術で有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドが、最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、「プラスミド」および「ベクター」は、互換的に使用され得る。しかしながら、本発明は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などのそのような他の形態の発現ベクターを含むことが意図される。
本明細書で使用される場合、「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、組換え発現ベクターが導入されている細胞を指すことが意図される。そのような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指すことが意図されることを理解されたい。変異または環境の影響のいずれかにより、特定の修飾が後の世代で発生し得るため、そのような子孫は、実際には親細胞と同一ではない可能性があるが、本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。
Ｇ．併用療法
本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、それらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物および／または多重特異性構築物のいずれかは、追加の療法と組み合わせて、すなわち、他の薬剤と組み合わせて投与することができる。本明細書で使用される場合、「同時投与される」という用語は、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、それらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物または多重特異性構築物を、アジュバントおよび他の薬剤と組み合わせた、同時、別個、または連続した投与のいずれかまたはすべてを含む（投薬計画の一部としての投与を含む）。例えば、併用療法は、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、それらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物および／または多重特異性構築物のいずれかを、抗炎症剤、ＤＭＡＲＤ（疾患修飾性抗リウマチ薬）、免疫抑制剤、化学療法剤、放射線療法、他の抗体、細胞毒および／または薬物、ならびにアジュバント、免疫刺激剤および／または免疫抑制剤などの少なくとも１つ以上の追加の治療剤とともに投与することを含み得る。
腫瘍の治療において、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、それらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物および／または多重特異性構築物との同時投与に好適な化学療法剤には、例えば、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、ミトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシン、ならびにそれらの類似体または相同体が含まれる。さらなる薬剤には、例えば、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロランブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）およびテモゾロミドが含まれる。
例えば、免疫細胞（例えば、制御Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、骨髄由来抑制細胞、未成熟もしくは抑制樹状細胞）または腫瘍の局所微小環境（例えば、ＴＧＦβ、インドールアミン２，３ジオキシゲナーゼ−ＩＤＯ）内で腫瘍もしくは宿主細胞によって産生される抑制因子による免疫抑制活性を欠失させるか、または阻害する薬剤もまた、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、それらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物および／または多重特異性構築物とともに投与することができる。そのような薬剤には、抗体、および１メチルトリプトファンまたは誘導体などのＩＤＯ阻害剤などの小分子薬が含まれる。
そのような免疫障害の治療のための、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、それらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物および／または多重特異性構築物との同時投与に好適な薬剤には、例えば、ラパマイシン、シクロスポリンおよびＦＫ５０６などの免疫抑制剤、エタネルセプト、アダリムマブおよびインフリキシマブなどの抗ＴＮＦ剤、ならびにステロイドが含まれる。特定の天然および合成ステロイドの例には、例えば、アルドステロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、クロプレドノール、コルチゾン、コルチバゾール、デオキシコルトン、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、フルオロオクロン、ジフルオロコルトロン、フルクロロロン、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロン、フルオシノロン、フルオコルチンブチル、フルオロコルチゾン、フルオロコルトロン、フルオロメトロン、フルランドレノロン、フルチカゾン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾン、イコメタゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、チキソコルトールおよびトリアムシノロンが含まれる。
免疫応答の誘発または増強のための、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、それらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物および／または多重特異性構築物との同時投与に好適な薬剤には、例えば、アジュバントおよび／または免疫刺激剤が含まれ、これらの非限定的な例は、本明細書に既に開示されている。一実施形態では、免疫刺激剤は、ポリＩＣなどのＴＬＲ３アゴニストである。
本明細書で使用される場合、「免疫刺激剤」という用語は、樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージなどの抗原提示細胞（ＡＰＣ）を刺激することができる化合物を含むが、これらに限定されない。例えば、本発明で使用するのに好適な免疫刺激剤は、ＡＰＣを刺激することができ、その結果、ＡＰＣの成熟プロセスが加速し、ＡＰＣの増殖が増加し、かつ／または同時刺激分子（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＡＭ−１、ＭＨＣ分子およびＣＣＲ７）ならびに炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＦＮ−γ）の動員もしくは放出が上方制御される。好適な免疫刺激剤はまた、Ｔ細胞増殖も増加させることができる。そのような免疫刺激剤には、ＣＤ４０リガンド、ＦＬＴ３リガンド、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２などのサイトカイン、Ｇ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激因子）およびＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子）などのコロニー刺激因子、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗４１ＢＢ抗体または抗ＯＸ−４０抗体、ＬＰＳ（エンドトキシン）、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ桿菌（ＢＣＧ）、塩酸レバミゾール、ならびに静脈内免疫グロブリンが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、免疫刺激剤は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストであり得る。例えば、免疫刺激剤は、二本鎖イノシン：シトシンポリヌクレオチド（例えば、ＡｍｐｌｉｇｅｎＴＭ ｆｒｏｍ Ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｘ Ｂｉｐｈａｒｍａ，ＰＡ，ＵＳからＡｍｐｌｉｇｅｎ（商標）として入手可能なポリＩ：Ｃ）もしくはポリＡ：ＵなどのＴＬＲ３アゴニスト、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）もしくは（例えば、ＧＳＫ、ＵＫから入手可能な）ＲＣ−５２９などのＴＬＲ４アゴニスト、フラジェリンなどのＴＬＲ５アゴニスト、イミキモドＴＬＲ７もしくはＴＬＲ８アゴニスト、例えば、イミキモド（例えば、Ａｌｄａｒａ（商標））もしくは（例えば、３Ｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能な）レシキモドおよび関連するイミキモド剤などのＴＬＲ７もしくはＴＬＲ８アゴニスト、またはメチル化されていないＣｐＧモチーフ（いわゆる「ＣｐＧ」、例えば、Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌから入手可能）を有するデオキシヌクレオチドなどのＴＬＲ９アゴニストであり得る。そのような免疫刺激剤は、本明細書に記載の結合ドメイン、抗体、それらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物および／または多重特異性構築物と同時に、別々にまたは連続して投与することができる。
Ｈ．本発明の使用および方法
Ｔ細胞活性を刺激する方法、免疫応答を誘発するか、または増強する方法、および疾患または状態（例えば、癌）を治療することが必要な患者に、本明細書に記載の二重特異性構築物、多重特異性構築物、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントを投与することによって、それを行う方法が本明細書で提供される。
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞媒介性応答」または「Ｔ細胞活性」という用語は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）およびヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）を含むＴ細胞によって媒介される任意の応答を指す。Ｔ細胞媒介性応答には、例えば、Ｔ細胞細胞傷害性および増殖が含まれる。Ｔ細胞活性の刺激は、当該技術分野で既知のＴ細胞活性のいくつかの指標のいずれかを使用して評価することができる。例えば、ＯＫＴ３で刺激されたＴ細胞によるインターフェロン−ガンマ産生の増強を、Ｔ細胞活性化の尺度として使用することができる。Ｔ細胞活性の刺激はまた、ＣＤ２７発現細胞内でＮＦκＢ駆動レポーター遺伝子系を使用して評価することもできる。Ｔ細胞活性化の他の好適なアッセイは、当該技術分野で十分に確立されている。
「免疫応答を誘発する」および「免疫応答を増強する」という用語は、互換的に使用され、特定の抗原に対する免疫応答の刺激（すなわち、受動的または適応的のいずれか）を指す。
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」および「治療」という用語は、本明細書に記載の治療的または予防的手段を指す。「治療」方法は、そのような治療、本明細書に記載の二重特異性構築物、多重特異性構築物、抗体、その抗原結合フラグメントまたは組成物を必要とする対象、例えば、特定の抗原に対する免疫応答の増強を必要とする対象、または最終的にそのような障害を獲得し得る対象への投与を用いて、障害もしくは再発性障害の１つ以上の症状を予防、治癒、遅延、その重症度を低減、もしくは寛解させるか、またはそのような治療の不在下で予想される生存を超えて対象の生存を延長する。
「有効用量」または「有効投薬量」という用語は、所望の効果を達成するか、または少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。「治療有効用量」という用語は、既に疾患を患っている患者において、疾患およびその合併症を治癒するか、または少なくとも部分的に阻止するのに十分な量として定義される。この使用に有効な量は、治療される障害の重症度および患者自身の免疫系の一般的な状態に依存するであろう。
「患者」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物対象を含む。
本明細書で使用される場合、（例えば、細胞に言及して）「成長を阻害する」という用語は、細胞の成長の任意の測定可能な減少、例えば、細胞の成長の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％または１００％の阻害を含むことが意図される。
一態様では、Ｔ細胞活性を刺激する方法であって、Ｔ細胞と、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物、または本明細書に記載の組成物のいずれか１つとを接触させることを含む、方法が提供される。Ｔ細胞活性を刺激することは、例えば、ＩＦＮ−ガンマ産生を刺激することを含み得る。
別の態様では、対象において（例えば、抗原に対する）免疫応答を誘発するか、または増強するための方法は、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物、または本明細書に記載の組成物のいずれか１つを、対象において（例えば、抗原に対する）免疫応答を誘発するか、または増強するのに有効な量で、対象に投与することを含む。
別の態様では、対象において状態または疾患を治療するための方法であって、方法が、抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物、または本明細書に記載の組成物のいずれか１つを、状態または疾患を治療するのに有効な量で、対象に投与することを含む、方法が提供される。
別の態様では、対象において状態または疾患を治療するための方法であって、方法が、本明細書に記載の抗ＣＤ２７抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれか１つを、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれか１つと組み合わせて、対象に投与することを含む、方法が提供される。例えば、一実施形態では、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに（ｂ）それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択され、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｂ）それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｃ）それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｄ）それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｅ）それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに（ｆ）それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される。
別の実施形態では、
（ｉ）抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および（ｂ）配列番号１９と、配列番号２０または配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択され、
（ｉｉ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｂ）配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０とを含む、軽鎖可変領域を含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｃ）配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｄ）配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、（ｅ）配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに（ｆ）配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される。
一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、別々に投与される。一実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、連続して投与される。例えば、抗ＣＤ２７抗体もしくはその抗原結合フラグメントが、最初に投与され、その後に（例えば、その直後に）抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントが投与され、またはその逆も可能である。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、一緒に投与される。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、同時に投与される。別の実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、単一の製剤で同時に投与される。あるいは、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、別個の投与のために製剤化され、同時にまたは連続して投与される。そのような同時または連続した投与は、好ましくは両方の抗体が治療される患者に同時に存在することをもたらす。
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ２７抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれかを、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのいずれかと組み合わせて投与すると、いずれかの抗体を単独で使用した場合と比較して、（例えば、インビボでの免疫応答の増強における）相乗効果がもたらされる。
対象は、例えば、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患に罹患している者であり得る。一実施形態では、状態または疾患は、癌である。癌の種類には、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球前骨髄球骨髄単球性単球性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性赤血球増加症リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫、および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、脈絡癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、上皮内新生物、腎臓癌、喉頭癌、肝臓癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽腫；口腔癌（例えば、唇、舌、口および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌；呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌ならびに泌尿器系の癌が含まれるが、これらに限定されない。特定の癌には、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択されるＣＤ２７発現腫瘍が含まれる。
他の疾患の適応症には、細菌性、真菌性、ウイルス性および寄生虫性感染症が含まれる。
本明細書に記載の対象において（例えば、抗原に対する）免疫応答を誘発するか、または増強する方法は、抗原を対象に投与することをさらに含み得る。本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、タンパク質、ペプチド、ハプテン、多糖類および／または脂質などの任意の天然または合成の免疫原性物質を指す。本明細書に記載の二重特異性構築物、多重特異性構築物、抗体、その抗原結合フラグメントまたは組成物、および抗原は、同時に投与されてもよく、二重特異性構築物、多重特異性構築物、抗体、その抗原結合フラグメントまたは組成物は、抗原投与前または投与後に投与されてもよい。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性構築物、多重特異性構築物、抗体、その抗原結合フラグメントまたは組成物を、ワクチンと組み合わせて投与して、ワクチン抗原、例えば、腫瘍抗原（それにより腫瘍に対する免疫応答を増強するため）または感染性病原体由来の抗原（それにより感染性病原体に対する免疫応答を増強するため）に対する免疫応答を増強する。したがって、一実施形態では、ワクチン抗原は、例えば、腫瘍に対する、またはウイルス、細菌、寄生虫もしくは真菌などの感染症病原体に対する免疫応答を引き出すことができる抗原または抗原組成物を含むことができる。抗原（複数可）は、本明細書で以前に開示された様々な腫瘍抗原などの腫瘍に由来する。あるいは、抗原（複数可）は、ウイルス、細菌、寄生虫および／または真菌などの病原体に由来してもよい。
本明細書に記載の抗体もしくはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物または組成物と同時投与される好ましい抗原には、腫瘍抗原およびワクチン抗原（例えば、ワクチン接種の目的で、対象においてそれに対する防御免疫を生じせることが望ましい細菌、ウイルスまたは他の病原体抗原）が含まれる。好適な病原体抗原の追加の例には、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｇｐ１００またはＰｍｅｌ１７、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、メソセリン、ＣＥＡ、ＭＡＲＴ１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＵＣ−１、ＧＰＮＭＢ、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＴＩＭ１、ＲＯＲ１、ＣＤ１９の配列の全部または一部を含む配列を含むがこれらに限定されない、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、および生殖細胞由来の腫瘍抗原が含まれる。
他の好適な抗原には、ウイルス性疾患の予防または治療のためのウイルス抗原が含まれる。ウイルス抗原の例には、ＨＩＶ−１ ｅｎｖ、ＨＢｓＡｇ、ＨＰＶ、ＦＡＳ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ｐ１７、ＯＲＦ２およびＯＲＦ３抗原が含まれるが、これらに限定されない。加えて、ウイルス抗原または抗原決定基は、例えば、サイトメガロウイルス（特に、ｇＢまたはその誘導体などのヒト）、エプスタインバーウイルス（ｇｐ３５０など）、フラビウイルス（例えば、黄熱ウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）、Ｂ型肝炎ウイルス（例えば、ＥＰ−Ａ−４１４３７４、ＥＰ−Ａ−０３０４５７８およびＥＰ−Ａ−１９８４７４に記載のＰｒｅＳ１、ＰｒｅＳ２およびＳ抗原などのＢ型肝炎表面抗原）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびＥ型肝炎ウイルスなどの肝炎ウイルス、ＨＩＶ−１（ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐｌ２０またはｇｐｌ６０など）、ｇＤもしくはその誘導体などのヒトヘルペスウイルス、またはＨＳＶ１もしくはＨＳＶ２由来のＩＣＰ２７などの最初期タンパク質、ヒトパピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８）、インフルエンザウイルス（卵もしくはＭＤＣＫ細胞内で成長させた全生もしくは不活性化ウイルス、スプリットインフルエンザウイルス、またはベロ細胞もしくは全インフルエンザビロソーム（Ｇｌｕｃｋ，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９２，１０，９１５−９２０に記載）、またはそれらの精製もしくは組換えタンパク質（ＮＰ、ＮＡ、ＨＡもしくはＭタンパク質など））、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、パラインフルエンザウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器多核体ウイルス（ＦおよびＧタンパク質など）、ロタウイルス（弱毒生ウイルスを含む）、痘瘡ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（ｇｐＩ、ＩＩおよびＩＥ６３など）、ならびに子宮頚癌の原因となるＨＰＶウイルス（例えば、タンパク質Ｄ担体と融合して、ＨＰＶ１６からタンパク質Ｄ−Ｅ６もしくはＥ７融合体を形成する、初期タンパク質Ｅ６もしくはＥ７、またはそれらの組み合わせ、またはＥ６またはＥ７とＬ２との組み合わせ（例えば、ＷＯ９６／２６２７７を参照されたい）に由来し得る。
細菌抗原の例には、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉまたはＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍが含まれるが、これらに限定されない。細菌抗原は、炭疽、ボツリヌス中毒、破傷風、クラミジア、コレラ、ジフテリア、ライム病、梅毒および結核などの様々な細菌性疾患の治療または予防に使用することができる。細菌抗原または抗原決定基は、例えば、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓを含むＢａｃｉｌｌｕｓ菌種（例えば、ボツリヌス毒素）、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓを含むＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ菌種（例えば、パータクチン、百日咳毒素、繊維状赤血球凝集素、アデニル酸シクラーゼ、線毛）、Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｇａｒｉｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｆｚｅｌｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｈｅｒｍｓｉｉを含むＢｏｒｒｅｌｉａ菌種、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ（例えば、毒素、アドヘシンおよびインベイシン）およびＣ．ｃｏｌｉを含むＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ菌種、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉｅ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉを含むＣｈｌａｍｙｄｉａ菌種、Ｃ．ｔｅｔａｎｉ（破傷風毒素など）、Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ（例えば、ボツリヌス毒素）、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ（例えば、クロストリジウム毒素ＡまたはＢ）を含むＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ菌種、Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（例えば、ジフテリア毒素）を含むＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌種、Ｅ．ｅｑｕｉおよびヒト顆粒球エーリキア症の薬剤を含むＥｈｒｌｉｃｈｉａ菌種、Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉを含むＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ菌種、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍを含むＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ菌種、腸内毒性Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、コロニー形成因子、熱不安定性毒素もしくはその誘導体、または熱安定性毒素）、腸管出血性Ｅ．ｃｏｌｉ、腸管病原性Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、志賀毒素様毒素）を含むＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ菌種、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ型（例えば、ＰＲＰ）、判別不能Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、例えば、ＯＭＰ２６、高分子量アドヘシン、Ｐ５、Ｐ６、タンパク質Ｄおよびリポタンパク質Ｄ、ならびにフィンブリンおよびフィンブリン由来ペプチドを含むＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ菌種（例えば、ＵＳ５，８４３，４６４を参照されたい）、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉを含むＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ菌種（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞化毒素）、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含むＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌種、Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａを含むＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ菌種、Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓを含むＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ菌種、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを含むＬｉｓｔｅｒｉａ菌種、Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓとしても知られるＭ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓを含むＭｏｒａｘｅｌｌａ菌種（例えば、高分子量および低分子量のアドヘシンおよびインベイシン）、Ｍｏｒｅｘｅｌｌａ Ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ（その外膜小胞、およびＯＭＰ１０６（例えばＷ０９７／４１７３１を参照されたい）を含む）、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（例えば、ＥＳＡＴ６、抗原８５Ａ、Ｂまたは−Ｃ）、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓを含むＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌種、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａおよびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓを含むＮｅｉｓｓｅｒｉａ菌種（例えば、莢膜多糖類およびそれらの共役体、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、ＰｉｌＣ、アドヘシン）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｂ（その外膜小胞およびＮｓｐＡ（例えば、ＷＯ９６／２９４１２を参照されたい）を含む）、Ｓ．ｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ、Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓを含むＳａｌｍｏｎｅｌｌａ菌種、Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ、Ｓ．ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉｉを含むＳｈｉｇｅｌｌａ菌種、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを含むＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌種、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉｅ（例えば、莢膜多糖類およびそれらの共役体、ＰｓａＡ、ＰｓｐＡ、ストレプトライシン、コリン結合タンパク質）およびタンパク質抗原ニューモリシン（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１９８９，６７，１００７、Ｒｕｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，２５，３３７−３４２）、ならびにそれらの変異無毒化誘導体（例えば、ＷＯ９０／０６９５１、ＷＯ９９／０３８８４を参照されたい）を含むＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌種、Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ（例えば、外膜タンパク質）、Ｔ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｔ．ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅを含むＴｒｅｐｏｎｅｍａ菌種、Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ（例えば、外膜タンパク質）、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａ（例えば、コレラ毒素）を含むＶｉｂｒｉｏ菌種、ならびにＹ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ（例えば、Ｙｏｐタンパク質）、Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ、Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含むＹｅｒｓｉｎｉａ菌種に由来し得る。
寄生虫／真菌抗原または抗原決定基は、例えば、Ｂ．ｍｉｃｒｏｔｉを含むＢａｂｅｓｉａ菌種、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓを含むＣａｎｄｉｄａ菌種、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを含むＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌種、Ｅ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａを含むＥｎｔａｍｏｅｂａ菌種、Ｇ．ｌａｍｂｌｉａを含むＧｉａｒｄｉａ菌種、Ｌ．ｍａｊｏｒを含むＬｅｓｈｍａｎｉａ菌種、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ．ｆａｃｉｐａｒｕｍ（ＭＳＰ１、ＡＭＡ１、ＭＳＰ３、ＥＢＡ、ＧＬＵＲＰ、ＲＡＰ１、ＲＡＰ２、セクェストリン（Ｓｅｑｕｅｓｔｒｉｎ）、ＰｆＥＭＰ１、Ｐｆ３３２、ＬＳＡ１、ＬＳＡ３、ＳＴＡＲＰ、ＳＡＬＳＡ、ＰｆＥＸＰ１、Ｐｆｓ２５、Ｐｆｓ２８、ＰＦＳ２７／２５、Ｐｆｓｌ６、Ｐｆｓ４８／４５、Ｐｆｓ２３０およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ菌種におけるそれらの類似体）、Ｐ．ｃａｒｉｎｉｉを含むＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ菌種、Ｓ．ｍａｎｓｏｎｉを含むＳｃｈｉｓｏｓｔｏｍａ菌種、Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓを含むＴｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ菌種、Ｔ．ｇｏｎｄｉｉを含むＴｏｘｏｐｌａｓｍａ菌種（例えば、ＳＡＧ２、ＳＡＧ３、Ｔｇ３４）、Ｔ．ｃｒｕｚｉを含むＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ菌種に由来し得る。
本発明のこの態様によれば、抗原および抗原決定基は、多くの異なる形態で使用され得ることが理解されるであろう。例えば、抗原または抗原決定基は、単離されたタンパク質もしくはペプチドとして（例えば、いわゆる「サブユニットワクチン」において）、または例えば、細胞関連もしくはウイルス関連の抗原もしくは抗原決定基として（例えば、生病原菌株もしくは死菌病原菌株のいずれかにおいて）存在し得る。生病原体は、好ましくは既知の方法で弱毒化される。あるいは、抗原または抗原決定基は、（いわゆる「ＤＮＡワクチン接種」のように）抗原または抗原決定基をコードするポリヌクレオチドを使用することによって対象においてインサイチュで生成され得るが、このアプローチで使用され得るポリヌクレオチドは、ＤＮＡに限定されず、上記に論じたようにＲＮＡおよび修飾ポリヌクレオチドも含み得ることが理解されるであろう。
一実施形態では、ワクチン抗原はまた、例えば、特定の細胞型または特定の組織を標的とすることができる。例えば、ワクチン抗原は、例えば、ＷＯ２００９／０６１９９６（Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ）に論じられるＤＥＣ−２０５、または例えば、ＷＯ０３０４０１６９（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）に論じられるマンノース受容体（ＣＤ２０６）などのＡＰＣ表面受容体を標的とする抗体などの薬剤を使用することによって、抗原提示細胞を標的とすることができる。
Ｉ．キット
１つ以上の本明細書に記載の抗ＣＤ２７結合ドメイン、抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメイン、二重特異性構築物、多重特異性構築物または組成物を、任意で使用のための指示書とともに含むキット（例えば、診断キット）も提供される。キットはまた、情報パンフレット、例えば、試薬を使用して、本明細書に開示される方法を実施する方法を通知するパンフレットを含み得る。「パンフレット」という用語には、キット上もしくはそれとともに供給されるか、または他の方法でキットに付属している、任意の書面、マーケティング材料または記録された材料が含まれる。
本発明を、以下の実施例によってさらに説明し、実施例は、さらなる限定として解釈されるべきではない。図面の内容、ならびに本出願を通して引用されているすべての参考文献、特許および公開特許出願は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
実施例１：ＣＤ２７特異的ヒトモノクローナル抗体の生成
Ｈａｒｂｏｕｒ（登録商標）トランスジェニックマウスのＨ２Ｌ２株を可溶性ヒトＣＤ２７抗原で免疫化することによって、ヒト抗ＣＤ２７モノクローナル抗体を生成した。Ｈａｒｂｏｕｒ（登録商標）トランスジェニックマウスは、内因性マウス重鎖（ＨＣ）およびカッパ軽鎖（κ鎖）ＤＮＡ配列をノックアウトしてあり、ヒト可変（Ｖ）領域およびラット定常（Ｃ）領域の配列をマウスゲノムに安定して組み込んである。
抗原および免疫化：抗原は、Ｆｃタグを有するＣＤ２７細胞外ドメインを含む可溶性融合タンパク質であった（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）。抗原を、免疫化のためにＭＰＬに加えてＴＤＭアジュバント系（Ｓｉｇｍａ）と混合した。ＰＢＳ中の５〜２５マイクログラムの可溶性組換えＣＤ２７抗原を、アジュバントと１：１で混合した。２００マイクロリットルの調製した抗原を、１４日ごとにマウスの腹腔内に注射した。抗ＣＤ２７力価を発達した動物には、融合の３〜４日前に５〜１０マイクログラムの可溶性組換えＣＤ２７抗原の静脈内注射を与えた。マウスの脾臓を採取し、単離した脾臓細胞をハイブリドーマ調製に使用した。
ハイブリドーマ調製：Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８０）を融合に使用した。１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、骨髄腫細胞を培養した。最大１０％のハイブリドーマ増強補助剤（Ｓｉｇｍａ）、１０％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、０．１％のゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）をＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ、１．０×１０４Ｍのヒポキサンチン、４．０×１０−７Ｍのアミノプテリン、１．６×１０−５Ｍのチミジン培地）とともに含む追加の培地補助剤を、ハイブリドーマ成長培地に添加した。
脾臓細胞をＰ３ｘ６３Ａｇ８．６５３骨髄腫細胞と６：１の比率で混合し、遠心分離によってペレット化した。慎重に混合しながらポリエチレングリコールを滴加して、融合を促進した。目に見えるコロニーが確立されるまで、ハイブリドーマを１〜２週間成長させた。上清を採取し、ヒト可溶性ＣＤ２７融合タンパク質およびラットＦｃ特異的検出を使用するＥＬＩＳＡによるラットＩｇＧの初期スクリーニングに使用した。次に、ＩｇＧ陽性上清を、フローサイトメトリーを介してＣＤ２７特異性についてアッセイした。ハイブリドーマを、カニクイザルＣＤ２７との交差反応性についてもスクリーニングし、すべてが結合について陽性であった。
ハイブリドーマ細胞を増殖させ、ＲＮＡの単離および配列決定のために細胞ペレットを凍結した。ヒトモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬコード領域を、対応するハイブリドーマ由来のＲＮＡを使用して特定した。ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、Ｖコード領域をＰＣＲによって増幅し、ＰＣＲ産物を配列決定し、ヒトＩｇＧ１カッパベクターに挿入し、タンパク質Ａカラムクロマトグラフィーによって一過的に発現させ、精製し、これにより、特に目的の抗体の単離がもたらされ、これらの抗体を、２Ｂ３および３Ｃ２として指定した。
実施例２：ＣＤ２７に対するヒトモノクローナル抗体結合特徴を決定するためのアッセイ
マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の組換えヒトＣＤ２７−ＦＬＡＧ−ＨＩＳでコーティングし、次にＰＢＳ中の５％のウシ血清アルブミンで遮断した。タンパク質Ａ精製ヒトモノクローナル抗体を様々な濃度で添加し、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次に西洋ワサビペルオキシダーゼに共役したヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ特異的ポリクローナル試薬とともに３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＨＲＰ基質で発色させ、マイクロタイタープレートリーダーを使用してＯＤ４５０〜６５０ｎｍで分析した。図１は、抗ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、ヒトＣＤ２７に結合することを示す。
カニクイザルが抗ＣＤ２７モノクローナル抗体の試験に関連するモデルであることを確立するために、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の組換えカニクイザルＣＤ２７−ＦＬＡＧ−ＨＩＳでコーティングし、次にＰＢＳ中の５％のウシ血清アルブミンで遮断した。ハイブリドーマ上清またはラットＩｇＧ対照を添加し、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次に西洋ワサビペルオキシダーゼに共役したマウス抗ラットＩｇＧＦｃ特異的ポリクローナル試薬とともに３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＨＲＰ基質で発色させ、マイクロタイタープレートリーダーを使用してＯＤ４５０〜６５０ｎｍで分析した。図２は、抗ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、カニクイザルＣＤ２７に結合することを示している。
実施例３：ＣＤ２７細胞への結合
抗ＣＤ２７ヒトモノクローナル抗体がそれらの表面上にヒトＣＤ２７を発現する細胞上のＣＤ２７に結合する能力を、以下のようにフローサイトメトリーによって調査した。
抗体を、それらの表面上にヒトＣＤ２７を発現するヒト細胞株への結合について試験した。タンパク質Ａ精製ヒトモノクローナル抗体（３μｇ／ｍｌ）を、プレート振盪機でヒトＣＤ２７を発現するラモス細胞とともに室温でインキュベートした。２０分後、０．１％のＢＳＡおよび０．０５％のＮａＮ３（ＰＢＡ）を含有するＰＢＳで細胞を洗浄し、細胞をＰＥ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ特異的プローブとともにインキュベートすることによって結合した抗体を検出した。過剰なプローブをＰＢＡで細胞から洗い流し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（商標）機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）を製造業者の指示に従って使用して分析することによって、細胞に関連する蛍光を決定した。
図３に示されるように、抗ＣＤ２７ヒトモノクローナル抗体は、ヒトＣＤ２７を発現する細胞への高レベルの結合を示した。
実施例４：ヒトＴ細胞への結合
抗ＣＤ２７ヒトモノクローナル抗体がヒトＴ細胞上のＣＤ２７に結合する能力を、以下のようにフローサイトメトリーによって調査した。
抗体を、それらの表面上にヒトＣＤ２７を発現するヒトＣＤ３＋Ｔ細胞への結合について試験した。ヒト末梢血単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ分離を使用してバフィーコートから単離し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃの磁気ビーズ分離技術を使用して、ＣＤ３＋細胞をＰＢＭＣからさらに分離した。タンパク質Ａ精製ヒトモノクローナル抗体（３μｇ／ｍｌ）を、プレート振盪機上でＴ細胞とともに室温でインキュベートした。２０分後、０．１％のＢＳＡおよび０．０５％のＮａＮ３（ＰＢＡ）を含有するＰＢＳで細胞を洗浄し、細胞をＰＥ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ特異的プローブとともにインキュベートすることによって結合した抗体を検出した。過剰なプローブをＰＢＡで細胞から洗い流し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（商標）機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）を製造業者の指示に従って使用して分析することによって、細胞に関連する蛍光を決定した。
図４に示されるように、抗ＣＤ２７ヒトモノクローナル抗体は、ヒトＴ細胞への高レベルの結合を示した。
実施例５：ＣＤ７０結合の遮断
可溶性ＣＤ７０の、細胞表面上のＣＤ２７への結合に対するヒトモノクローナル抗体の効果を、フローサイトメトリーによって測定した。ＣＤ２７を発現するラモス細胞を、抗体（５０μｇ／ｍｌ）とともに室温で５分間インキュベートした後、プレート振盪機で室温で２０分間、ヒトＣＤ７０−ビオチン（［最終］＝０．５μｇ／ｍＬ）を添加した。ＣＤ２７で捕捉されたＣＤ７０を、ストレプトアビジンＰＥで検出し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（商標）機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）で分析した。図５は、抗ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、ＣＤ７０の、細胞上のＣＤ２７への結合を遮断することを示す。
実施例６：ＮＦκＢ活性化
ＣＤ２７を発現するルシフェラーゼレポーター細胞株を、様々な濃度のヒト抗ＣＤ２７抗体とともに、３７℃、６％のＣＯ２で、６時間インキュベートした。ルシフェラーゼは、活性化時に発現し、製造業者のガイドラインに従って、Ｐｒｏｍｅｇａのルシフェラーゼアッセイシステムで検出した。図６は、２Ｂ３および３Ｃ２抗体によって誘発される高レベルのＮＦκＢ活性化を抗体濃度の関数として示す。
実施例７：Ｔ細胞増殖
バフィーコート調製物およびＣＤ３＋細胞から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃの磁気ビーズ分離技術を使用して、ＰＢＭＣからさらに単離した。室温で５分間回転させながら、Ｔ細胞を１ｍＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。ＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣ（１×１０６）を、１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）および１０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２７抗体またはヒトＩｇＧ１対照でドライコーティングしたウェルに分注した。プレートを、３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。細胞を採取し、製造業者の指示に従って、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（商標）機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）でフローサイトメトリーによって分析した。図７は、抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、Ｔ細胞増殖を有意に増加させることを示す。
実施例８：ＰＤ−Ｌ１特異的ヒトモノクローナル抗体の生成
Ｈａｒｂｏｕｒ（登録商標）トランスジェニックマウスのＨ２Ｌ２株を可溶性ヒトＰＤ−Ｌ１抗原で免疫化することによって、ヒト抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体を生成した。Ｈａｒｂｏｕｒ（登録商標）トランスジェニックマウスは、内因性マウス重鎖（ＨＣ）およびカッパ軽鎖（κ鎖）ＤＮＡ配列をノックアウトしてあり、ヒト可変（Ｖ）領域およびラット定常（Ｃ）領域の配列をマウスゲノムに安定して組み込んである。
抗原および免疫化：抗原は、ＨＩＳタグを有するＰＤ−Ｌ１細胞外ドメインを含む可溶性融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、または組換えヒトＰＤ−Ｌ１−ｍｓＧ２ａキメラタンパク質（自社製）であった。抗原を、免疫化のためにＭＰＬに加えてＴＤＭアジュバント系（Ｓｉｇｍａ）と混合した。 ＰＢＳ中の５〜２５マイクログラムの可溶性組換えＰＤ−Ｌ１抗原を、アジュバントと１：１で混合した。２００マイクロリットルの調製した抗原を、１４日ごとにマウスの腹腔内に注射した。抗ＰＤ−Ｌ１力価を発達した動物には、融合の３〜４日前に５〜１０マイクログラムの可溶性組換えＰＤ−Ｌ１抗原の静脈内注射を与えた。マウスの脾臓を採取し、単離した脾臓細胞をハイブリドーマ調製に使用した。
ハイブリドーマ調製：Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８０）を融合に使用した。１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、骨髄腫細胞を培養した。最大１０％のハイブリドーマ増強補助剤（Ｓｉｇｍａ）、１０％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、０．１％のゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）をＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ、１．０×１０４Ｍのヒポキサンチン、４．０×１０−７Ｍのアミノプテリン、１．６×１０−５Ｍのチミジン培地）とともに含む追加の培地補助剤を、ハイブリドーマ成長培地に添加した。
脾臓細胞をＰ３ｘ６３Ａｇ８．６５３骨髄腫細胞と６：１の比率で混合し、遠心分離によってペレット化した。慎重に混合しながらポリエチレングリコールを滴加して、融合を促進した。目に見えるコロニーが確立されるまで、ハイブリドーマを１〜２週間成長させた。上清を採取し、ヒト可溶性ＰＤ−Ｌ１融合タンパク質およびラットＦｃ特異的検出を使用するＥＬＩＳＡによるラットＩｇＧの初期スクリーニングに使用した。次に、ＩｇＧ陽性上清を、フローサイトメトリーを介してＰＤ−Ｌ１特異性についてアッセイした。ハイブリドーマを、カニクイザルＰＤ−Ｌ１との交差反応性についてもスクリーニングし、すべてが結合について陽性であった。
ハイブリドーマ細胞を増殖させ、ＲＮＡの単離および配列決定のために細胞ペレットを凍結した。ヒトモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬコード領域を、対応するハイブリドーマ由来のＲＮＡを使用して特定した。ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、Ｖコード領域をＰＣＲによって増幅し、ＰＣＲ産物を配列決定し、ヒトＩｇＧ１カッパベクターに挿入し、タンパク質Ａカラムクロマトグラフィーによって一過的に発現させ、精製し、これにより、いくつかの特に目的の抗体の単離がもたらされ、これらの抗体を、１Ｂ３、３Ｂ６、４Ａ３、７Ｈ７、８Ｂ１および９Ｈ９として指定した。
実施例９：ＰＤ−Ｌ１に対するヒトモノクローナル抗体結合特徴を決定するためのアッセイ
マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の組換えヒトＰＤ−Ｌ１−ｍｓＦｃでコーティングし、次にＰＢＳ中の５％のウシ血清アルブミンで遮断した。タンパク質Ａ精製ヒトモノクローナル抗体を様々な濃度で添加し、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次に西洋ワサビペルオキシダーゼに共役したヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ特異的ポリクローナル試薬とともに３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＨＲＰ基質で発色させ、マイクロタイタープレートリーダーを使用してＯＤ４５０〜６５０ｎｍで分析した。図８は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ヒトＰＤ−Ｌ１に強く結合することを抗体濃度の関数として示す。
カニクイザルが抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体の試験に関連するモデルであることを確立するために、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の組換えカニクイザルＰＤ−Ｌ１−ＦＬＡＧ−ＨＩＳでコーティングし、次にＰＢＳ中の５％のウシ血清アルブミンで遮断した。ハイブリドーマ上清またはラットＩｇＧ対照を添加し、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次に西洋ワサビペルオキシダーゼに共役したマウス抗ラットＩｇＧＦｃ特異的ポリクローナル試薬とともに３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートをＨＲＰ基質で発色させ、マイクロタイタープレートリーダーを使用してＯＤ４５０〜６５０ｎｍで分析した。図９は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、カニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合することを示す。
実施例１０：ＰＤ１結合の遮断
可溶性ＰＤ１の、細胞表面上のＰＤ−Ｌ１への結合に対するヒトモノクローナル抗体の効果を、フローサイトメトリーによって測定した。ＰＤ−Ｌ１を発現する２９３細胞を、抗体とともに室温で５分間インキュベートした後、ヒトＰＤ１−ビオチン（［最終］＝０．５ｍｇ／ｍＬ）を添加した。ＰＤ−Ｌ１で捕捉されたＰＤ１を、ストレプトアビジンＰＥで検出し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（商標）機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）で分析した。図１０は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ１への結合を遮断することを抗体濃度の関数として示す。
実施例１１：ＰＤ−Ｌ１細胞への結合
抗ＰＤ−Ｌ１ヒトモノクローナル抗体がそれらの表面上にヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞上のＰＤ−Ｌ１に結合する能力を、以下のようにフローサイトメトリーによって調査した。
抗体を、それらの表面上にヒトＰＤ−Ｌ１を発現するヒト細胞株への結合について試験した。タンパク質Ａ精製ヒトモノクローナル抗体を、プレート振盪機でヒトＰＤ−Ｌ１を発現する２９３細胞とともに室温でインキュベートした。２０分後、０．１％のＢＳＡおよび０．０５％のＮａＮ３（ＰＢＡ）を含有するＰＢＳで細胞を洗浄し、細胞をＰＥ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ特異的プローブとともにインキュベートすることによって結合した抗体を検出した。過剰なプローブをＰＢＡで細胞から洗い流し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（商標）機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）を製造業者の指示に従って使用して分析することによって、細胞に関連する蛍光を決定した。
図１１に示されるように、抗ＰＤ−Ｌ１ヒトモノクローナル抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞への高レベルの結合を抗体濃度の関数として示した。
実施例１２：ヒト樹状細胞への結合
抗ＰＤ−Ｌ１ヒトモノクローナル抗体がヒト樹状細胞上のＰＤ−Ｌ１に結合する能力を、以下のようにフローサイトメトリーによって調査した。
抗体を、それらの表面上にヒトＰＤ−Ｌ１を発現するヒト樹状細胞への結合について試験した。樹状細胞を以下のように生成した。ＰＭＢＣをＴ１７５ｃｍ２フラスコに添加し、単球を３７℃、６％のＣＯ２で約２時間接着させた。非付着性細胞を除去し、１０％のＦＢＳ、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）および１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有するＲＰＭＩ中で単球を７日間培養した。非接着性細胞を採取し、ＣＤ１１ｃの発現により樹状細胞であることを確認した（図示せず）。タンパク質Ａ精製ヒトモノクローナル抗体を、プレート振盪機上で樹状細胞とともに室温でインキュベートした。２０分後、０．１％のＢＳＡおよび０．０５％のＮａＮ３（ＰＢＡ）を含有するＰＢＳで細胞を洗浄し、細胞をＰＥ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ特異的プローブとともにインキュベートすることによって結合した抗体を検出した。過剰なプローブをＰＢＡで細胞から洗い流し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（商標）機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ，ＵＳＡ）を製造業者の指示に従って使用して分析することによって、細胞に関連する蛍光を決定した。
図１２に示されるように、抗ＰＤ−Ｌ１ヒトモノクローナル抗体は、ヒト樹状細胞への高レベルの結合を抗体濃度の関数として示した。
実施例１３：Ｔ細胞ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１遮断バイオアッセイ
ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断に対するＰＤ−Ｌ１抗体の効果を、ＰｒｏｍｅｇａのＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１遮断アッセイを使用して決定した。２つの操作した細胞株、ＰＤ１エフェクター細胞およびＰＤ−Ｌ１ ａＡＰＣ／ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、抗体の存在下で６時間同時培養した。ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断は、ＴＣＲ活性化をもたらし、ＮＦＡＴ経路を介した発光を誘発する。Ｂｉｏ−Ｇｌｏ試薬の添加によって発光を検出し、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｖｉｃｔｏｒ Ｘルミノメーターで定量化した。図１３に示されるように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、細胞間のＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を効果的に遮断し、ＮＦＡＴ経路活性化をもたらす。
実施例１４：混合リンパ球反応
ヒト末梢血単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ分離を使用してバフィーコートから単離し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃの磁気ビーズ分離技術を使用して、ＣＤ４＋細胞をＰＢＭＣからさらに分離した。同種樹状細胞を以下のように生成した。ＰＭＢＣをＴ１７５ｃｍ２フラスコに添加し、単球を３７℃、６％のＣＯ２で約２時間接着させた。非付着性細胞を除去し、１０％のＦＢＳ、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）および１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有するＲＰＭＩ中で単球を７日間培養した。非接着性細胞を採取し、ＣＤ１１ｃの発現により樹状細胞であることを確認した（図示せず）。ＣＤ４＋細胞およびＤＣを、抗体希釈液の存在下、１０：１の比率で３日間同時インキュベートした。上清を採取し、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によってＩＬ−２産生について分析した。図１４に示されるように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、有意な混合リンパ球応答を誘発することができた。
実施例１５：二重特異性構築物の開発および機能試験
ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体の完全ヒトＩｇＧ１バックボーン、および重鎖のｃ末端に遺伝的に連結されたＣＤ２７モノクローナル抗体のｓｃＦｖを使用して、四価二重特異性構築物を開発した。ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体の完全ヒトＩｇＧ１バックボーン、およびＣＤ２７モノクローナル抗体のｓｃＦｖを使用して、代替的な二重特異性構築物も開発した。図１５Ａは、ＣＤ２７軽鎖、ＣＤ２７重鎖およびｃ末端ＰＤ−Ｌ１一本鎖Ｆｖ（ＶＬ＋ＶＨ）ポリペプチドを含有する代表的なベクターを示す。図１５Ｂおよび１５Ｃは、ＣＤ２７／ＰＤ−Ｌ１二重特異性形式の２つの代替的な描写である。図１５Ｂは、抗ＰＤ−Ｌ１がＣＤ２７ ｓｃＦｖ（本明細書では、抗ＰＤ−Ｌ１が９Ｈ９であり、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが２Ｂ３に由来する場合には「ＣＤＸ−５２７」、他の場合にはＡｂＸｘ２Ｂ３と称される）に連結されたＣＤ２７／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体タンパク質を示し、図１５Ｃは、抗ＣＤ２７抗体が抗ＰＤ−Ｌ１ｓｃＦｖに連結されたＣＤ２７／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体タンパク質を示す。図１５Ｄは、生成された代表的な抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物の表である。
完全９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＣＤＸ−５２７）重鎖配列は、以下のとおりであった（ＩｇＧ１定常領域配列を太字で示す）。
Figure 2021521793
９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＣＤＸ−５２７）軽鎖配列は、以下のとおりであった（定常領域配列を太字で示す）。
Figure 2021521793
実施例１６：二重特異性モノクローナル抗体結合特徴および機能的活性を決定するためのアッセイ
二重特異性構築物のＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１への結合を、二機能性ＥＬＩＳＡを使用して評価した。抗体ＡｂＸは、既知の抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体である。簡潔には、マイクロタイタープレートを、ヒトＣＤ２７−ＦＬＡＧ−ＨＩＳでコーティングした。ＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体で検出されたヒトＰＤ−Ｌ１−ｍｓＦｃを添加する前に、二重特異性構築物の希釈液を結合させた。３つの二重特異性構築物（ＣＤ２７ｘＡｂＸ、ＣＤ２７ｘ８Ｂ１およびＣＤ２７ｘ９Ｈ９）の代表的な結合曲線を、図１６に示す。３つすべての抗体が、ＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１への有意な結合を示した。
ＣＤ２７経路活性化を、ＮＦκＢ活性化を測定することによって評価した。簡潔には、ＣＤ２７をＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞株（Ｓｉｇｎｏｓｉｓ）にトランスフェクトした。細胞を、各二重特異性構築物または抗体（１Ｆ５ｘＡｂＸ、２Ｂ３ｘ８Ｂ１、２Ｂ３ｘ９Ｈ９、１Ｆ５、２Ｂ３またはｈｕＩｇＧ１）とともに６時間インキュベートし、ルシフェラーゼ発現を、Ｂｒｉｔｅ−Ｇｌｏ（商標）システム（Ｐｒｏｍｅｇａ）で検出した。注記：レポーター細胞株は、ヒトＰＤ−Ｌ１について陽性である。図１７は、抗体によって誘発されるＮＦκＢ活性化のレベルを濃度の関数として示す。加えて、二重特異性構築物１Ｆ５ｘＡｂＸ、２Ｂ３ｘ８Ｂ１および２Ｂ３ｘ９Ｈ９は、１Ｆ５または２Ｂ３単独よりも有意に高いＮＦκＢ活性化を示した。
ＮＦＡＴ経路活性化を測定することによって、ＰＤ−１シグナル伝達遮断を評価した。簡潔には、ＰＤ−１エフェクター細胞およびＰＤ−Ｌ１ ａＡＰＣ細胞を、各二重特異性構築物または対照抗体（ＣＤ２７ｘＡｂＸ、ＣＤ２７ｘ８Ｂ１、ＣＤ２７ｘ９Ｈ９またはｈｕＩｇＧ１）の希釈液の存在下で同時培養した。ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１遮断によるＮＦＡＴ経路の活性化を、Ｂｉｏ−Ｇｌｏ（商標）試薬の添加によって検出する。（Ｐｒｏｍｅｇａから市販されているキット）。図１８に示されるように、二重特異性構築物は、強力なＮＦＡＴ経路活性化を抗体濃度の関数として誘発した。
ＩＬ−２の産生／分泌もまた、混合リンパ球反応において測定した。簡潔には、ＣＤ４細胞を、同種樹状細胞および各二重特異性構築物または抗体（ＣＤ２７ｘＡｂＸ、ＣＤ２７ｘ８Ｂ１、ＣＤ２７ｘ９Ｈ９、ｈｕＩｇＧ１、ＡｂＸ、８Ｂ１または９Ｈ９）の希釈液の存在下で３日間インキュベートした。上清を採取し、ＩＬ−２レベルをＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって評価した。代表的なＩＬ−２濃度曲線を、図１９に示す。二重特異性構築物ＣＤ２７ｘＡｂＸ、ＣＤ２７ｘ８Ｂ１およびＣＤ２７ｘ９Ｈ９は、ＡｂＸ（既知の抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体）、８Ｂ１または９Ｈ９単独よりも有意に高いＩＬ−２産生／分泌を示した（例えば、約２倍より高いＩＬ−２産生）。
実施例１７：ＣＤ２７／ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物のインビボ活性を決定するためのアッセイ
ＨｕＣＤ２７−Ｔｇマウスに、各グラフのｘ軸に示されるように、０日目に０．１ｍｇの二重特異性ＣＤ２７ｘＡｂＸ構築物（ＢｓＡｂ）またはＣＤ２７単一特異性抗体（ｍＡｂ）、および５ｍｇの卵白アルブミンを注射した。７日目に脾臓細胞を採取し、細胞内サイトカインＩＦＮγおよびＩＬ２、ならびに細胞溶解酵素グランザイムＢ（ＧｒＢ）を、ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドのエクスビボ刺激の有無に関わらずフローサイトメトリー分析によって検出した。ＣＤ８Ｔ細胞内のＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＩＦＮ−γ＋およびＩＬ２＋の割合（図２０Ａ）、ならびにＳＩＩＮＦＥＫＬ刺激がない場合のＣＤ８Ｔ細胞内のＧｒＢ＋の割合（図２０Ｂ）を示し、これらは、ＣＤ２７ｘＡｂＸ二重特異性構築物が、ＣＤ２７モノクローナル抗体単独と比較して、有意なＣＤ８Ｔ細胞応答を誘発する（例えば、約２．５倍〜約８倍より高い応答）ことを示す。
腫瘍成長、生存および腫瘍浸潤数もまた、ＢｓＡｂまたはｍＡｂで治療したマウスにおいて測定した。ＨｕＣＤ２７−Ｔｇマウスに、０日目にＢＣＬ１細胞（５×１０６）を静脈内注射した。抗体または二重特異性構築物を、５日目に腹腔内注射した（０．２ｍｇ）。マウスを、２つの群に分割した。１つの群を使用して、生存を測定した（ｎ＝８）。図２１は、ＣＤ２７モノクローナル抗体、ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体、ＣＤ２７＋ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体の組み合わせおよびＣＤ２７ｘＡｂＸ ＢｓＡｂのいずれかで治療したマウスの経時的な生存の割合を示す。ＣＤ２７＋ＰＤ−Ｌ１抗体で治療したマウスは、ＣＤ２７モノクローナル抗体、ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体またはＨｕ ＩｇＧ１単独で治療したマウスよりも有意に長く（例えば、１．５倍〜２倍より長く）生存した。さらに、ＣＤ２７ｘＡｂＸ ＢｓＡｂで治療したマウスは、単独または組み合わせて試験した他の抗体のいずれかで治療したマウスよりも有意に長く生存した。実際には、ＣＤ２７ｘＡｂＸ ＢｓＡｂで治療したマウスの７０％〜８０％は、腫瘍接種後８０日後も依然として生存していた一方で、他の群のマウスは、すべて死亡していた。生存した３匹のマウスを、１８０日間の経過観察後に同数のＢＣＬ１細胞で再負荷し、それらを、再負荷から保護した。
第２の群のマウスを使用して、１１日目に腫瘍重量およびＴ細胞レベルを測定した。図２２Ａ〜２２Ｄはそれぞれ、腫瘍重量、ＣＤ８ Ｔ細胞の割合、ＣＤ４ Ｔ細胞の割合、ならびにＩＦＮγおよびＧｒＢの二重陽性ＣＤ８Ｔ細胞の割合を示す。生存データと同様に、ＣＤ２７ｘＡｂＸ ＢｓＡｂは、単独または組み合わせのいずれかで試験した他の抗体のいずれと比較しても、腫瘍重量を有意に（例えば、１．５倍〜３倍より少なく）低減し、Ｔ細胞数および活性を有意に（例えば、１．５倍〜４倍より大きく）増加させた。図２３Ａおよび２３Ｂは、ＣＤ２７ ｍＡｂ治療（ＣＤＸ−１１２７）時のＢＣＬ１リンパ腫細胞（図２３Ａ）および腫瘍微小環境浸潤細胞（図２３Ｂ）の表面上のＰＤ−Ｌ１発現レベルの上方制御を示し、これは、抗ＣＤ２７および抗ＰＤ−Ｌ１の組み合わせまたはＢｓＡｂの理論的根拠を提供する。
実施例１８：二機能性ＥＬＩＳＡ
（実施例１５のように調製した）二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７の特性評価および結合を分析した。図１５Ｅは、ＨＰＬＣおよびゲル電気泳動（還元条件）による二重特異性抗体ＣＤＸ−５２７の特性評価を示す。一般に実施例１６に記載のように二機能性ＥＬＩＳＡを使用して、ＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１の両方への結合を決定した。結果を図２４に示し、この図から、ＣＤＸ−５２７がＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１への有意な結合を示したことを理解することができる。
実施例１９：二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７によるＮＦｋＢの活性化
（実施例１５のように調製した）二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７によるＮＦκＢの活性化を、ＢｒｉｔｅＧｌｏ（商標）の代わりにＰｒｏｍｅｇａのＳｔｅａｄｙＧｌｏ（商標）試薬を使用したことを除いて、一般に実施例１６に記載のように決定した。
結果を図２５に示し、この図は、単一特異性抗ＣＤ２７抗体１Ｆ５および２Ｂ３単独と比較して、ＣＤＸ−５２７によるより高いレベル活性化を示す。活性化を、可溶性ＦｃγＲ１の存在下でも測定し、ＦｃγＲ１の存在は、示されるようにＮＦκＢ活性化をさらに増加させた。
実施例２０：混合リンパ球反応
（実施例１５のように調製した）二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７が混合リンパ球応答を誘発する能力を、ＩＬ−２について試験して、一般に実施例１４に記載の方法によって決定した。
結果を図２６に示し、この図から、ＣＤＸ−５２７は、この場合も単独または組み合わせて使用した場合の単一特異性抗体２Ｂ３および９Ｈ９の混合リンパ球応答よりも有意に大きい、有意な混合リンパ球応答を誘発することができたことを理解することができる。
実施例２１：Ｔ細胞活性化
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、バフィーコート調製物から単離し、ＣＤ３＋細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃの磁気ビーズ分離技術を使用して、ＰＢＭＣからさらに分離した。ＣＤ３＋細胞（１×１０５）を、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）および可溶性ヒトＰＤ−Ｌ１でコーティングしたウェルに分注した。抗体２Ｂ３および９Ｈ９または（実施例１５のように調製した）ＣＤＸ−５２７を、０．１ｎＭ〜１０ｎＭの間の濃度で細胞に添加した。プレートを３７℃、５％のＣＯ２で７２時間インキュベートし、その時点で上清中のＩＬ−２レベルを測定した。
結果を図２７に示し、この図から、ＣＤＸ−５２７が、Ｔ細胞を有意に活性化し、組み合わせて使用した場合の単一特異性抗体２Ｂ３および９Ｈ９よりも有意に大きな程度まで活性化したことを理解することができる。
実施例２２：薬物動態
ＣＤＸ−５２７の薬物動態を、７．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルおよび３．０ｍｌ／ｋｇの体積で非ヒト霊長類（ＮＨＰ）において研究した。２１日間の研究中、いずれの臨床パラメーターにおける有意な変化も観察されなかった。ＣＤＸ−５２７の血清レベルを、ＥＬＩＳＡによって決定した。
結果を図２８に示す。薬物動態分析は、約１１０時間のＴ１／２をもたらした。
実施例２３：細胞に基づくＰＤ１／ＰＤＬ１遮断アッセイ
二重特異性抗体９Ｈ９ｘ２Ｂ３および反対の構成２Ｂ３ｘ９Ｈ９を、一般に実施例１３に記載のように細胞に基づくＰＤ１／ＰＤＬ１遮断アッセイで比較した。
結果を図２９に示し、この図から、９Ｈ９ｘ２Ｂ３構成は、２Ｂ３ｘ９Ｈ９構成よりもＰＤ−１シグナル伝達の遮断においてより強力であったことを理解することができる。
実施例２４：混合リンパ球反応
二重特異性抗体９Ｈ９ｘ２Ｂ３および反対の構成２Ｂ３ｘ９Ｈ９を、一般に実施例１４に記載のように混合リンパ球反応で比較した。
結果を図３０に示し、この図から、９Ｈ９ｘ２Ｂ３構成は、２Ｂ３ｘ９Ｈ９構成よりもＴ細胞活性化において強力であることを理解することができる。
実施例２５：ワクチン誘発性ＣＤ８Ｔ細胞応答
二重特異性抗体ＡｂＸｘ２Ｂ３および反対の構成２Ｂ３ｘＡｂＸを、一般に実施例１７に記載のようにＴ細胞応答のワクチンモデルで比較した。
結果を図３１に示し、この図から、ワクチン誘発性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の刺激においてＡｂＸｘ２Ｂ３が２Ｂ３ｘＡｂＸよりも強力であることを理解することができる。
実施例２６：ＢＣＬ１腫瘍モデル
二重特異性抗体ＡｂＸｘ２Ｂ３および反対の構成２Ｂ３ｘＡｂＸを、一般に実施例１７に記載のようにＢＣＬ１腫瘍モデルで比較した。
結果を図３２に示し、この図から、ＡｂＸｘ２Ｂ３が２Ｂ３ｘＡｂＸよりも大きな抗腫瘍活性を有したことを理解することができる。
実施例２７：ＣＤ８０へのＰＤ−Ｌ１結合の遮断
マイクロタイタープレートを組換えヒトＣＤ８０でコーティングし、次に遮断した。ビオチン化ｈｕＰＤ−Ｌ１を、５０ｕｇ／ｍＬのｈｕＩｇＧ１対照または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＡｂＸもしくは９Ｈ９）とともに室温で１時間プレインキュベートし、次にプレートに添加した。ストレプトアビジン−ＨＲＰを使用して、ＰＤ−Ｌ１のＣＤ８０への結合を検出した。
結果を図３３に示し、この図から、抗ＰＤ−Ｌ１抗体がＣＤ８０へのＰＤ−Ｌ１結合を完全に遮断したことを理解することができる。
実施例２８：ｈｕＣＤ２７への２Ｂ３結合
変異アミノ酸８５、８７、８８および８９（Ａ８５Ｓ、Ｒ８７Ａ、Ｎ８８ＡおよびＧ８９Ａ、図３４を参照されたい）を有するヒトＣＤ２７またはヒトＣＤ２７の完全長野生型細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をプレートにコーティングし、遮断した。ｍＡｂ ２Ｂ３を発現する一過的にトランスフェクトした細胞由来の上清を添加し、ＨＲＰ共役ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃポリクローナル抗体で結合を検出した。
結果を図３５に示し、この図から、抗ＣＤ２７抗体２Ｂ３が変異ＣＤ２７ ＥＣＤに結合しなかったことを理解することができる。したがって、これは、抗体２Ｂ３が、ヒトＣＤ２７（配列番号１８３）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のアミノ酸８０〜９５、例えば、ヒトＣＤ２７（配列番号１８３）のＥＣＤのアミノ酸８５、８７、８８および／または８９内の１つ以上の残基、例えば、アミノ酸８５〜８９内の、１つ以上の残基を伴うか、またはそれを含むヒトＣＤ２７上のエピトープに結合することを示す。
実施例２９：タンパク質操作による９Ｈ９ｘ２Ｂ３発現の増加：９Ｈ９−２Ｂ３（ＤＤ）
二重特異性産物の発現を増加させるために、２Ｂ３重鎖のＦＲ３内のＨ７２の希少バリン（Ｖ）残基および２Ｂ３軽鎖のＦＲ３内のＬ８２の希少アスパラギン（Ｎ）残基をそれぞれアスパラギン酸（Ｄ）残基（すなわち、それぞれＶ７２ＤおよびＮ８２Ｄ）に変化させた。
修飾２Ｂ３重鎖配列は、以下のとおりであった（ＣＤＲには下線を引き、ＦＲ３の修飾残基には二重下線を引く）。
Figure 2021521793
修飾２Ｂ３軽鎖配列は、以下のとおりであった（ＣＤＲには下線を引き、ＦＲ３の修飾残基には二重下線を引く）。
Figure 2021521793
これらの配列（２Ｂ３（ＤＤ）と指定）を、９Ｈ９抗体の重鎖のＣ末端に遺伝的に連結されたｓｃＦｖ形式で使用した。得られた９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）二重特異性抗体を、９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）として指定した。
完全９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）重鎖配列は、以下のとおりであった（ＩｇＧ１定常「バックボーン」配列を太字で示す）。
Figure 2021521793
９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）重鎖配列は、以下のとおりであった（定常領域を太字で示す）。
Figure 2021521793
９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）可変ドメイン配列のＤＮＡ配列は、以下のとおりであった。
Figure 2021521793
９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）ｓｃＦｖドメイン配列のＤＮＡ配列は、以下のとおりであった（コネクタ配列およびリンカー配列を太字で示す）。
Figure 2021521793
９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）軽鎖可変配列のＤＮＡ配列は、以下のとおりであった。
Figure 2021521793
図３６から理解することができるように、一過的なトランスフェクションは、元の（未修飾の）９Ｈ９−２Ｂ３構築物と比較して、９Ｈ９−２Ｂ３（ＤＤ）修飾構築物の改善された産生（発現）を示した。
配列表の概要
Figure 2021521793
Figure 2021521793
Figure 2021521793
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Figure 2021521793
同等物
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの同等物を認識するか、または通常の実験のみを使用して確認することができるであろう。そのような同等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
対象は、例えば、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患に罹患している者であり得る。一実施形態では、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患は、癌である。対象において（例えば、抗原に対する）免疫応答を誘発するか、または増強する方法は、抗原を対象に投与することをさらに含み得る。抗体もしくはそれらの抗原結合フラグメント、二重特異性構築物、多重特異性構築物、または本明細書に記載の組成物と同時投与することが好ましい抗原は、腫瘍抗原である。
[本発明1001]
抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７結合ドメインは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
ａ．コンセンサス配列（Ｔ，Ｓ）（Ｓ，Ｙ，Ｈ）ＷＭＳ（配列番号１６７）、もしくはそれらの保存的配列修飾から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号１６８もしくはその保存的配列修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号１６９もしくはその保存的配列修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号１７０もしくはその保存的配列修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号１７１もしくはその保存的配列修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号１７２もしくはその保存的配列修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３と、を含む、二重特異性構築物。
[本発明1002]
抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７結合ドメインは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
ａ．配列番号７７もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７８もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８０もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８２もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８４もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５もしくそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８６もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８８もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域を含む、二重特異性構築物。
[本発明1003]
前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1004]
前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1005]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1006]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1007]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1008]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０を含む軽鎖可変領域と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1009]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1010]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1011]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1012]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1013]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1014]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1015]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1016]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、を含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1017]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1018]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1019]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1020]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1021]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1022]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1023]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1024]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1025]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1026]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1027]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1028]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1029]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1030]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1031]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1032]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1033]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1034]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1035]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1036]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1037]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1038]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1039]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1040]
ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む、本発明1001または1002の二重特異性構築物。
[本発明1041]
（ａ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインがヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含むか、または（ｂ）前記抗ＣＤ２７結合ドメインがヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む、本発明1001〜1040のいずれかの二重特異性構築物。
[本発明1042]
（ａ）前記抗ＣＤ２７結合ドメインが前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの重鎖のＣ末端に連結されているか、または（ｂ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが前記抗ＣＤ２７結合ドメインの重鎖のＣ末端に連結されている、本発明1001〜1041のいずれかの二重特異性構築物。
[本発明1043]
前記抗ＣＤ２７結合ドメインがｓｃＦｖであるか、または（ｂ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインがｓｃＦｖである、本発明1001〜1042のいずれかの二重特異性構築物。
[本発明1044]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインおよび前記抗ＣＤ２７結合ドメインが遺伝的に融合されている、本発明1001〜1043のいずれかの二重特異性構築物。
[本発明1045]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインおよび前記抗ＣＤ２７結合ドメインが化学的に共役している、本発明1001〜1044のいずれかの二重特異性構築物。
[本発明1046]
抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、
ｇ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
[本発明1047]
抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、
ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域、または
ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、
ｇ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
[本発明1048]
抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
[本発明1049]
抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
[本発明1050]
抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
[本発明1051]
抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
[本発明1052]
抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体は、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、
ｃ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含む、二重特異性構築物。
[本発明1053]
抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体は、
ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域、または
ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、
ｃ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、
ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、または
ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域を含む、二重特異性構築物。
[本発明1054]
抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体が、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖが、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、二重特異性構築物。
[本発明1055]
抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体が、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む、二重特異性構築物。
[本発明1056]
抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体が、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、二重特異性構築物。
[本発明1057]
抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体が、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む、二重特異性構築物。
[本発明1058]
抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体が、ヒトＣＤ２７の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（配列番号１８３）のアミノ酸残基８５〜８９内の１つ以上の残基に結合する、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1059]
抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体が、ヒトＣＤ２７の野生型ＥＣＤ（配列番号１８３）に結合するが、以下のアミノ酸置換Ａ８５Ｓ、Ｒ８７Ａ、Ｎ８８ＡおよびＧ８９Ａを有する前記ヒトＣＤ２７の野生型ＥＣＤの変異型には結合しない、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1060]
抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1061]
抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１７またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1062]
抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1063]
抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１９またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1064]
前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の特徴：
ａ．Ｔ細胞性免疫応答を誘発するか、または増強し、
ｂ．ＣＤ２７に対するｓＣＤ７０の結合を遮断し、
ｃ．平衡解離定数Ｋｄが１０ −９ Ｍ以下、または平衡解離定数Ｋａが１０ ＋９ Ｍ −１ 以上でヒトＣＤ２７に結合し、
ｄ．ＣＤ２７を発現する細胞の特定の補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を誘発し、
ｅ．ＣＤ２７を発現する細胞の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に特有の溶解を誘発し、
ｆ．ワクチンまたは内因性抗原と組み合わせて、インビボで抗原特異性免疫応答を誘発するか、または増強し、
ｇ．ワクチンまたは内因性抗原と組み合わせて、インビボで抗原特異性ＴＨ１免疫応答を誘発するか、または増強し、
ｈ．ワクチンまたは内因性抗原と組み合わせて、インビボで抗原特異性Ｔ細胞増殖または活性化を誘発するか、または増強し、および／または
ｉ．同時、別個または連続したＴＣＲ活性化と組み合わせたとき、Ｔ細胞活性を誘発するか、または増強する、といった特徴のうち１つ以上を有する、本発明1058〜1063のいずれかの抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1065]
抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された、本発明1058〜1063のいずれかの抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントを含む二重特異性構築物。
[本発明1066]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される、本発明1064の二重特異性構築物。
[本発明1067]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、
ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、ならびに
ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域からなる群から選択される、本発明1065または1066の二重特異性構築物。
[本発明1068]
前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインがｓｃＦｖである、本発明1064〜1066のいずれかの二重特異性構築物。
[本発明1069]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1070]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号７７またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７８またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1071]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1072]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号７９またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８０またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1073]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1074]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号８１またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８２またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1075]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1076]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号８３またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８４またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1077]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1078]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号８５またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８６またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1079]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1080]
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号８７またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８８またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1081]
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の特徴：
ａ．ＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ１の結合を遮断し、
ｂ．ＮＦＡＴ経路活性化を誘発し、および／または
ｃ．混合リンパ球応答を誘発する、といった特徴のうちの１つ以上を有する、本発明1069〜1080のいずれかの抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
[本発明1082]
抗ＣＤ２７結合ドメインに連結された、本発明1069〜1080のいずれかの抗ＰＤ−Ｌ１抗原結合フラグメントを含む二重特異性構築物。
[本発明1083]
前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む抗ＣＤ２７抗体、および
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む抗ＣＤ２７抗体からなる群から選択される、本発明1082の二重特異性構築物。
[本発明1084]
前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、
ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ２７抗体、および
ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ２７抗体からなる群から選択される、本発明1082または1083の二重特異性構築物。
[本発明1085]
前記抗ＣＤ２７結合ドメインがヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む、本発明1082〜1084のいずれかの二重特異性構築物。
[本発明1086]
Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む多重特異性抗体であって、少なくとも１つの抗ＣＤ２７抗体結合ドメインが前記Ｆｃドメインに結合する、多重特異性抗体。
[本発明1087]
Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む多重特異性抗体であって、少なくとも１つの抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖペプチドが前記Ｆｃドメインに結合する、多重特異性抗体。
[本発明1088]
Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む多重特異性抗体であって、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖペプチドが、抗体重鎖の少なくとも１つのカルボキシ末端に結合する、多重特異性抗体。
[本発明1089]
Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む多重特異性抗体であって、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖペプチドが、抗体重鎖の少なくとも１つのカルボキシ末端に結合し、さらなるｓｃＦｖペプチドが、他方の重鎖のカルボキシ末端に結合する、多重特異性抗体。
[本発明1090]
本発明1001〜1057、1065〜1068および1082〜1085のいずれかの二重特異性構築物、または本発明1058〜1064および1069〜1081のいずれかの抗体またはその抗原結合フラグメント、または本発明1086〜1089のいずれかの多重特異性抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
[本発明1091]
本発明1001〜1057、1066〜1069および1082〜1085のいずれかの二重特異性構築物、または本発明1058〜1064および1069〜1081のいずれかの抗体またはその抗原結合フラグメント、または本発明1086〜1089のいずれかの多重特異性抗体、または本発明1090の組成物と、使用のための指示書とを含む、キット。
[本発明1092]
抗体可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子であって、前記抗体可変領域が、配列番号１７、１８、１９、２０、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８に示されるアミノ酸配列を含む、単離された核酸分子。
[本発明1093]
配列番号２５、２６、２７、２８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２に示されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
[本発明1094]
抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域が、それぞれ、配列番号１７および１８、配列番号１９および２０、配列番号７７および７８、配列番号７９および８０、配列番号８１および８２、配列番号８３および８４、配列番号８５および８６、または配列番号８７および８８に示されるアミノ酸配列を含む、単離された核酸分子。
[本発明1095]
本発明1001〜1057、1065〜1068および1082〜1085のいずれかの二重特異性構築物をコードする核酸分子。
[本発明1096]
発現ベクターの形態の本発明1092〜1095のいずれかの核酸分子。
[本発明1097]
インビボで対象に投与されると前記二重特異性構築物を発現する、発現ベクターの形態の本発明1092〜1096のいずれかの核酸分子。
[本発明1098]
Ｔ細胞活性を刺激する方法であって、本発明1001〜1057、1065〜1068および1082〜1085のいずれかの二重特異性構築物、または本発明1058〜1064および1069〜1081のいずれかの抗体またはその抗原結合フラグメント、または本発明1086〜1089のいずれかの多重特異性抗体、または本発明1090の組成物とＴ細胞とを接触させることを含む、方法。
[本発明1099]
対象において免疫応答を誘発するか、または増強するための方法であって、本発明1001〜1057、1065〜1068および1082〜1085のいずれかの二重特異性構築物、または本発明1058〜1064および1069〜1081のいずれかの抗体またはその抗原結合フラグメント、または本発明1086〜1089のいずれかの多重特異性抗体、または本発明1090の組成物を、前記対象において免疫応答を誘発するか、または増強するのに有効な量で、前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1100]
対象において状態または疾患を治療するための方法であって、前記方法が、本発明1001〜1057、1065〜1068および1082〜1085のいずれかの二重特異性構築物、または本発明1058〜1064および1069〜1081のいずれかの抗体またはその抗原結合フラグメント、または本発明1086〜1089のいずれかの多重特異性抗体、または本発明1088の組成物を、前記状態または疾患を治療するのに有効な量で、前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1101]
対象において状態または疾患を治療するための方法であって、前記方法が、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントを、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて、前記対象に投与することを含み、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、
ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および
ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択され、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、および
ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される、方法。
[本発明1102]
対象において状態または疾患を治療するための方法であって、前記方法が、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントを、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて、前記対象に投与することを含み、
（ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および
ｂ．配列番号１９と、配列番号２０または配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択され、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、および
ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される、方法。
[本発明1103]
前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、別々に投与される、本発明1101または1102の方法。
[本発明1104]
前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、一緒に投与される、本発明1101または1102の方法。
[本発明1105]
前記対象が、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患に罹患している、本発明1098〜1104のいずれかの方法。
[本発明1106]
前記状態または疾患が癌である、本発明1105の方法。
[本発明1107]
前記癌が、大腸癌、卵巣癌、腎細胞癌、頭頸部扁平上皮癌および膠芽腫からなる群から選択される、本発明1106の方法。
[本発明1108]
二重特異性四価抗体であって、
ｉ）２つのＩｇＧ重鎖と、
ｉｉ）２つの軽鎖と、
ｉｉｉ）２つの一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ドメインと、を含み、
前記２つのＩｇＧ重鎖と２つの軽鎖が、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＩｇＧ部分を形成し、前記２つのｓｃＦｖドメインはそれぞれヒトＣＤ２７に特異的に結合し、各ｓｃＦｖドメインが、コネクタ配列によって前記ＩｇＧ重鎖の１つのＣ末端残基に結合する、二重特異性四価抗体。
[本発明1109]
前記ＩｇＧ重鎖が、ＩｇＧ１重鎖である、本発明1108の二重特異性四価抗体。
[本発明1110]
前記軽鎖が、カッパ軽鎖である、本発明1108または本発明1109の二重特異性四価抗体。
[本発明1111]
各ｓｃＦｖドメインが、ｉ）Ｎ末端可変重鎖ドメイン−リンカー−可変軽鎖ドメイン−Ｃ末端、またはｉｉ）Ｎ末端可変軽鎖ドメイン−リンカー−可変重鎖ドメイン−Ｃ末端のいずれかの構造順序を有し、それぞれの場合において、前記リンカーが、（Ｇ ４ Ｓ） ｍ のアミノ酸配列を含み、ｍが少なくとも３の整数である、本発明1108〜1110のいずれかの二重特異性四価抗体。
[本発明1112]
前記コネクタ配列が、Ｇ ４ Ｓのアミノ酸配列を含む、本発明1108〜1111のいずれかの二重特異性四価抗体。
[本発明1113]
前記コネクタ配列が、ＧＳ ２ Ｇ ４ Ｓのアミノ酸配列を含む、本発明1108〜1112のいずれかの二重特異性四価抗体。
[本発明1114]
前記リンカー配列が、（Ｇ ４ Ｓ） ４ のアミノ酸配列を含む、本発明1108〜1113のいずれかの二重特異性四価抗体。
[本発明1115]
前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖドメインの少なくとも１つが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、本発明1108〜1114のいずれかの二重特異性四価抗体。
[本発明1116]
前記抗ＰＤ−Ｌ１ ＩｇＧ重鎖の少なくとも１つが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、前記抗ＰＤ−Ｌ１軽鎖の少なくとも１つが、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、もしくはそれらの保存的配列修飾を含む、本発明1108〜1115のいずれかの二重特異性四価抗体。
[本発明1117]
本発明1108〜1116のいずれかの二重特異性四価抗体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
[本発明1118]
本発明1108〜1116のいずれかの二重特異性四価抗体または本発明1117の組成物と、使用のための指示書とを含む、キット。
[本発明1119]
Ｔ細胞活性を刺激する方法であって、Ｔ細胞と、本発明1108〜1116のいずれかの二重特異性四価抗体または本発明1117の組成物とを接触させることを含む、方法。
[本発明1120]
対象において免疫応答を誘発するか、または増強するための方法であって、本発明1108〜1116のいずれかの二重特異性四価抗体または本発明1117の組成物を、前記対象において免疫応答を誘発するか、または増強するのに有効な量で、前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1121]
対象において状態または疾患を治療するための方法であって、前記方法が、本発明1108〜1116のいずれかの二重特異性四価抗体または本発明1117の組成物を、前記状態または疾患を治療するのに有効な量で、前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1122]
前記対象が、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患に罹患している、本発明1119〜1121のいずれかの方法。
[本発明1123]
前記状態または疾患が癌である、本発明1122の方法。
[本発明1124]
前記癌が、大腸癌、卵巣癌、腎細胞癌、頭頸部扁平上皮癌および膠芽腫からなる群から選択される、本発明1123の方法。
ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２の組換えヒトＣＤ２７への結合を抗体濃度の関数として示すグラフである。 ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２の、組換えカニクイザルＣＤ２７への結合を示すグラフである。 ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２の、ＣＤ２７を表面に発現するラモス細胞への高レベルの結合を示すグラフである。 ＣＤ２７抗体２Ｂ３および３Ｃ２のＴ細胞への高レベルの結合を示すグラフである。 抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、ＣＤ７０のＣＤ２７への結合を有意に遮断することを示すグラフである。 抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、有意なＮＦκＢ活性化を誘発したことを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗体２Ｂ３および３Ｃ２が、Ｔ細胞増殖を増加させることを示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合することを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体の、組換えカニクイザルＰＤ−Ｌ１への結合を示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ１への結合を有意に遮断することを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体の、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞への高レベルの結合を抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体のヒト樹状細胞への高レベルの結合を抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が細胞間のＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断し、ＮＦＡＴ経路活性化をもたらすことを示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、混合リンパ球応答を誘発することを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗ＣＤ２７軽鎖、抗ＣＤ２７重鎖、およびｃ末端抗ＰＤ−Ｌ１一本鎖（ＶＬ＋ＶＨ）ペプチドを含有する代表的なＤＮＡ発現ベクターである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結されている、ＣＤ２７／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体タンパク質の図である。 抗ＣＤ２７抗体が、抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結されている、ＣＤ２７／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体タンパク質の図である。 代表的な抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物の表である。 ＨＰＬＣおよびゲル電気泳動による二重特異性抗体ＣＤＸ−５２７の特性評価を示す。 二機能性ＥＬＩＳＡを用いた、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物（ＢｓＡｂ）のＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１への結合を示すグラフである。 抗体１Ｆ５または２Ｂ３単独と比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物によって誘発されるＮＦκＢ活性化の増加を示すグラフである。 抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物が、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断し、ＮＦＡＴ経路活性化を誘発することを抗体濃度の関数として示すグラフである。 抗体ＡｂＸ（既知の抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体）、８Ｂ１、または９Ｈ９単独と比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物が、混合リンパ球反応におけるＩＬ−２産生／分泌を増加させることを示すグラフである。 図２０Ａおよび２０Ｂは、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）が、ＣＤ２７モノクローナル抗体単独と比較して、より高いＣＤ８ Ｔ細胞応答を誘発することを示すグラフである。 マウス腫瘍モデルにおいて単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスの改善された生存を示すカプランマイヤー曲線である。 単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスにおける腫瘍重量の減少を示すグラフである。 単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスにおけるＣＤ８Ｔ細胞の割合の増加を示すグラフである。 単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスにおけるＣＤ４Ｔ細胞の割合の増加を示すグラフである。 単独または組み合わせて投与されたＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、二重特異性構築物（例えば、ＣＤ２７ｘＡｂＸ）で治療したマウスにおける活性化ＣＤ８Ｔ細胞の増加を示すグラフである。 図２３Ａおよび２３Ｂは、抗ＣＤ２７ Ａｂ（例えば、ＣＤＸ−１１２７）が、腫瘍細胞および腫瘍浸潤細胞内のＰＤ−Ｌ１発現を上方制御することを示すグラフである。 二機能性ＥＬＩＳＡを用いた、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７のＣＤ２７およびＰＤ−Ｌ１への結合を示すグラフである。 抗体１Ｆ５または２Ｂ３単独（左のグラフ）および可溶性ＦｃγＲ１（右のグラフ）の存在下と比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７によって誘発されるＮＦκＢ活性化の増加を示すグラフである。 抗体２Ｂ３または９Ｈ９単独または組み合わせと比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７による混合リンパ球反応におけるＩＬ−２産生／分泌の増加を示すグラフである。 抗体２Ｂ３および９Ｈ９の組み合わせと比較して、抗ＣＤ２７／抗ＰＤ−Ｌ１二重特異性構築物ＣＤＸ−５２７によるＴ細胞内のＩＬ−２産生／分泌の増加を示すグラフである。 ＮＨＰ薬物動態試験におけるＣＤＸ−５２７の血清レベルを示すグラフである。 ２Ｂ３ｘ９Ｈ９構成と比較して、９Ｈ９ｘ２Ｂ３構成によるＰＤ−１シグナル伝達の遮断の増加を示すグラフである。 ２Ｂ３ｘ９Ｈ９構成と比較して、９Ｈ９ｘ２Ｂ３構成によるＴ細胞活性化の増加を示すグラフである。 ２Ｂ３ｘＡｂＸと比較して、ＡｂＸｘ２Ｂ３によるワクチン誘発性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の刺激の増加を示すグラフである。 ２Ｂ３ｘＡｂＸと比較して、ＡｂＸｘ２Ｂ３による抗腫瘍活性の増加を示すグラフである。 抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＡｂＸおよび９Ｈ９によるＣＤ８０へのＰＤ−Ｌ１結合の遮断を示すグラフである。 図３４（配列番号１８３）は、野生型ｈｕＣＤ２７の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の配列、ならびに８５、８７、８８および８９位に置換を有する変異型を示す。 抗ＣＤ２７抗体２Ｂ３の、図３４に示される配列を有する野生型ｈｕＣＤ２７および変異型ｈｕＣＤ２７の両方への結合を示すグラフである。 元の（未修飾の）９Ｈ９ｘ２Ｂ３構築物と比較して、修飾９Ｈ９ｘ２Ｂ３（ＤＤ）構築物の改善された産生（発現）を示すグラフである。
配列表の概要
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Claims (124)

  1. 抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７結合ドメインは、
    ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
    ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
    ａ．コンセンサス配列（Ｔ，Ｓ）（Ｓ，Ｙ，Ｈ）ＷＭＳ（配列番号１６７）、もしくはそれらの保存的配列修飾から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、
    ｂ．配列番号１６８もしくはその保存的配列修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、
    ｃ．配列番号１６９もしくはその保存的配列修飾を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、
    ｄ．配列番号１７０もしくはその保存的配列修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、
    ｅ．配列番号１７１もしくはその保存的配列修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、
    ｆ．配列番号１７２もしくはその保存的配列修飾を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３と、を含む、二重特異性構築物。
  2. 抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された抗ＣＤ２７結合ドメインを含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７結合ドメインは、
    ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
    ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、
    ａ．配列番号７７もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７８もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
    ｂ．配列番号７９もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８０もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
    ｃ．配列番号８１もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８２もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
    ｄ．配列番号８３もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８４もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、
    ｅ．配列番号８５もしくそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８６もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域、または
    ｆ．配列番号８７もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８８もしくはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域を含む、二重特異性構築物。
  3. 前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  4. 前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  5. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  6. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  7. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  8. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  9. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  10. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  11. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  12. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  13. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  14. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  15. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  16. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  17. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  18. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  19. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  20. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  21. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  22. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  23. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  24. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  25. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  26. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  27. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  28. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  29. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  30. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  31. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  32. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  33. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  34. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  35. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  36. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  37. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  38. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  39. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  40. ａ．前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
    ｂ．前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１または２に記載の二重特異性構築物。
  41. （ａ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインがヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含むか、または（ｂ）前記抗ＣＤ２７結合ドメインがヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の二重特異性構築物。
  42. （ａ）前記抗ＣＤ２７結合ドメインが前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインの重鎖のＣ末端に連結されているか、または（ｂ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが前記抗ＣＤ２７結合ドメインの重鎖のＣ末端に連結されている、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の二重特異性構築物。
  43. 前記抗ＣＤ２７結合ドメインがｓｃＦｖであるか、または（ｂ）前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインがｓｃＦｖである、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の二重特異性構築物。
  44. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインおよび前記抗ＣＤ２７結合ドメインが遺伝的に融合されている、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の二重特異性構築物。
  45. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインおよび前記抗ＣＤ２７結合ドメインが化学的に共役している、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の二重特異性構築物。
  46. 抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、
    ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
    ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
    ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
    ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
    ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
    ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
    ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
    ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、
    ｇ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
  47. 抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖは、
    ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域、または
    ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、
    ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
    ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
    ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
    ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
    ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、または
    ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、
    ｇ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
  48. 抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
  49. 抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
  50. 抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
  51. 抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖに連結された抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖが、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含む、二重特異性構築物。
  52. 抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体は、
    ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
    ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、
    ｃ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、
    ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
    ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
    ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
    ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、
    ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、または
    ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾、ならびにそれぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾を含む、二重特異性構築物。
  53. 抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体は、
    ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域および配列番号１８を含む軽鎖可変領域、または
    ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域および配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、
    ｃ．ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、
    ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
    ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
    ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
    ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
    ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、または
    ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域を含む、二重特異性構築物。
  54. 抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体が、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖが、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、二重特異性構築物。
  55. 抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体が、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む、二重特異性構築物。
  56. 抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体が、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、二重特異性構築物。
  57. 抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖに連結された抗ＣＤ２７抗体を含む二重特異性構築物であって、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体が、配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと、を含み、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１ ｓｃＦｖは、配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む、二重特異性構築物。
  58. 抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体が、ヒトＣＤ２７の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（配列番号１８３）のアミノ酸残基８５〜８９内の１つ以上の残基に結合する、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
  59. 抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体が、ヒトＣＤ２７の野生型ＥＣＤ（配列番号１８３）に結合するが、以下のアミノ酸置換Ａ８５Ｓ、Ｒ８７Ａ、Ｎ８８ＡおよびＧ８９Ａを有する前記ヒトＣＤ２７の野生型ＥＣＤの変異型には結合しない、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
  60. 抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
  61. 抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１７またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
  62. 抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
  63. 抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１９またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
  64. 前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の特徴：
    ａ．Ｔ細胞性免疫応答を誘発するか、または増強し、
    ｂ．ＣＤ２７に対するｓＣＤ７０の結合を遮断し、
    ｃ．平衡解離定数Ｋｄが１０−９Ｍ以下、または平衡解離定数Ｋａが１０＋９Ｍ−１以上でヒトＣＤ２７に結合し、
    ｄ．ＣＤ２７を発現する細胞の特定の補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を誘発し、
    ｅ．ＣＤ２７を発現する細胞の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に特有の溶解を誘発し、
    ｆ．ワクチンまたは内因性抗原と組み合わせて、インビボで抗原特異性免疫応答を誘発するか、または増強し、
    ｇ．ワクチンまたは内因性抗原と組み合わせて、インビボで抗原特異性ＴＨ１免疫応答を誘発するか、または増強し、
    ｈ．ワクチンまたは内因性抗原と組み合わせて、インビボで抗原特異性Ｔ細胞増殖または活性化を誘発するか、または増強し、および／または
    ｉ．同時、別個または連続したＴＣＲ活性化と組み合わせたとき、Ｔ細胞活性を誘発するか、または増強する、といった特徴のうち１つ以上を有する、請求項５８〜６３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント。
  65. 抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインに連結された、請求項５８〜６３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントを含む二重特異性構築物。
  66. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、
    ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに
    ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される、請求項６４に記載の二重特異性構築物。
  67. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインが、
    ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域および配列番号７８を含む軽鎖可変領域、
    ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
    ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
    ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域および配列番号８４を含む軽鎖可変領域、
    ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８６を含む軽鎖可変領域、ならびに
    ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域からなる群から選択される、請求項６５または６６に記載の二重特異性構築物。
  68. 前記抗ＰＤ−Ｌ１結合ドメインがｓｃＦｖである、請求項６４〜６６のいずれか一項に記載の二重特異性構築物。
  69. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  70. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号７７またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７８またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  71. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  72. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号７９またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８０またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  73. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  74. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号８１またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８２またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  75. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  76. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号８３またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８４またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  77. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  78. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号８５またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８６またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  79. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  80. 抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号８７またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８８またはそれと少なくとも９５％同一の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  81. 前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の特徴：
    ａ．ＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ１の結合を遮断し、
    ｂ．ＮＦＡＴ経路活性化を誘発し、および／または
    ｃ．混合リンパ球応答を誘発する、といった特徴のうちの１つ以上を有する、請求項６９〜８０のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  82. 抗ＣＤ２７結合ドメインに連結された、請求項６９〜８０のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗原結合フラグメントを含む二重特異性構築物。
  83. 前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、
    ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む抗ＣＤ２７抗体、および
    ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む抗ＣＤ２７抗体からなる群から選択される、請求項８２に記載の二重特異性構築物。
  84. 前記抗ＣＤ２７結合ドメインが、
    ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ２７抗体、および
    ｂ．配列番号１９を含む重鎖可変領域と、配列番号２０を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ２７抗体からなる群から選択される、請求項８２または８３に記載の二重特異性構築物。
  85. 前記抗ＣＤ２７結合ドメインがヒトＩｇＧ１定常ドメインをさらに含む、請求項８２〜８４のいずれか一項に記載の二重特異性構築物。
  86. Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む多重特異性抗体であって、少なくとも１つの抗ＣＤ２７抗体結合ドメインが前記Ｆｃドメインに結合する、多重特異性抗体。
  87. Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む多重特異性抗体であって、少なくとも１つの抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖペプチドが前記Ｆｃドメインに結合する、多重特異性抗体。
  88. Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む多重特異性抗体であって、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖペプチドが、抗体重鎖の少なくとも１つのカルボキシ末端に結合する、多重特異性抗体。
  89. Ｆｃドメインを有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む多重特異性抗体であって、抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖペプチドが、抗体重鎖の少なくとも１つのカルボキシ末端に結合し、さらなるｓｃＦｖペプチドが、他方の重鎖のカルボキシ末端に結合する、多重特異性抗体。
  90. 請求項１〜５７、６５〜６８および８２〜８５のいずれか一項に記載の二重特異性構築物、または請求項５８〜６４および６９〜８１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、または請求項８６〜８９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
  91. 請求項１〜５７、６６〜６９および８２〜８５のいずれか一項に記載の二重特異性構築物、または請求項５８〜６４および６９〜８１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、または請求項８６〜８９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体、または請求項９０に記載の組成物と、使用のための指示書とを含む、キット。
  92. 抗体可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子であって、前記抗体可変領域が、配列番号１７、１８、１９、２０、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７または８８に示されるアミノ酸配列を含む、単離された核酸分子。
  93. 配列番号２５、２６、２７、２８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２に示されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
  94. 抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域が、それぞれ、配列番号１７および１８、配列番号１９および２０、配列番号７７および７８、配列番号７９および８０、配列番号８１および８２、配列番号８３および８４、配列番号８５および８６、または配列番号８７および８８に示されるアミノ酸配列を含む、単離された核酸分子。
  95. 請求項１〜５７、６５〜６８および８２〜８５のいずれか一項に記載の二重特異性構築物をコードする核酸分子。
  96. 発現ベクターの形態の請求項９２〜９５のいずれか一項に記載の核酸分子。
  97. インビボで対象に投与されると前記二重特異性構築物を発現する、発現ベクターの形態の請求項９２〜９６のいずれか一項に記載の核酸分子。
  98. Ｔ細胞活性を刺激する方法であって、請求項１〜５７、６５〜６８および８２〜８５のいずれか一項に記載の二重特異性構築物、または請求項５８〜６４および６９〜８１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、または請求項８６〜８９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体、または請求項９０に記載の組成物とＴ細胞とを接触させることを含む、方法。
  99. 対象において免疫応答を誘発するか、または増強するための方法であって、請求項１〜５７、６５〜６８および８２〜８５のいずれか一項に記載の二重特異性構築物、または請求項５８〜６４および６９〜８１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、または請求項８６〜８９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体、または請求項９０に記載の組成物を、前記対象において免疫応答を誘発するか、または増強するのに有効な量で、前記対象に投与することを含む、方法。
  100. 対象において状態または疾患を治療するための方法であって、前記方法が、請求項１〜５７、６５〜６８および８２〜８５のいずれか一項に記載の二重特異性構築物、または請求項５８〜６４および６９〜８１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、または請求項８６〜８９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体、または請求項８８に記載の組成物を、前記状態または疾患を治療するのに有効な量で、前記対象に投与することを含む、方法。
  101. 対象において状態または疾患を治療するための方法であって、前記方法が、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントを、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて、前記対象に投与することを含み、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、
    ａ．それぞれ配列番号１、２および３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４、５および６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および
    ｂ．それぞれ配列番号７、８および９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択され、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
    ａ．それぞれ配列番号２９、３０および３１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３２、３３および３４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｂ．それぞれ配列番号３５、３６および３７に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号３８、３９および４０に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｃ．それぞれ配列番号４１、４２および４３に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号４４、４５および４６に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｄ．それぞれ配列番号４７、４８および４９に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５０、５１および５２に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｅ．それぞれ配列番号５３、５４および５５に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号５６、５７および５８に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、および
    ｆ．それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される、方法。
  102. 対象において状態または疾患を治療するための方法であって、前記方法が、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントを、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて、前記対象に投与することを含み、
    （ｉ）前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントは、
    ａ．配列番号１７を含む重鎖可変領域と、配列番号１８を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメント、および
    ｂ．配列番号１９と、配列番号２０または配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択され、
    （ｉｉ）前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
    ａ．配列番号７７を含む重鎖可変領域と、配列番号７８を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｂ．配列番号７９を含む重鎖可変領域と、配列番号８０を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｃ．配列番号８１を含む重鎖可変領域と、配列番号８２を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｄ．配列番号８３を含む重鎖可変領域と、配列番号８４を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、
    ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域と、配列番号８６を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、および
    ｆ．配列番号８７を含む重鎖可変領域と、配列番号８８を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントからなる群から選択される、方法。
  103. 前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、別々に投与される、請求項１０１または１０２に記載の方法。
  104. 前記抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合フラグメントと、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、一緒に投与される、請求項１０１または１０２に記載の方法。
  105. 前記対象が、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患に罹患している、請求項９８〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
  106. 前記状態または疾患が癌である、請求項１０５に記載の方法。
  107. 前記癌が、大腸癌、卵巣癌、腎細胞癌、頭頸部扁平上皮癌および膠芽腫からなる群から選択される、請求項１０６に記載の方法。
  108. 二重特異性四価抗体であって、
    ｉ）２つのＩｇＧ重鎖と、
    ｉｉ）２つの軽鎖と、
    ｉｉｉ）２つの一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ドメインと、を含み、
    前記２つのＩｇＧ重鎖と２つの軽鎖が、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＩｇＧ部分を形成し、前記２つのｓｃＦｖドメインはそれぞれヒトＣＤ２７に特異的に結合し、各ｓｃＦｖドメインが、コネクタ配列によって前記ＩｇＧ重鎖の１つのＣ末端残基に結合する、二重特異性四価抗体。
  109. 前記ＩｇＧ重鎖が、ＩｇＧ１重鎖である、請求項１０８に記載の二重特異性四価抗体。
  110. 前記軽鎖が、カッパ軽鎖である、請求項１０８または請求項１０９に記載の二重特異性四価抗体。
  111. 各ｓｃＦｖドメインが、ｉ）Ｎ末端可変重鎖ドメイン−リンカー−可変軽鎖ドメイン−Ｃ末端、またはｉｉ）Ｎ末端可変軽鎖ドメイン−リンカー−可変重鎖ドメイン−Ｃ末端のいずれかの構造順序を有し、それぞれの場合において、前記リンカーが、（Ｇ４Ｓ）ｍのアミノ酸配列を含み、ｍが少なくとも３の整数である、請求項１０８〜１１０のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体。
  112. 前記コネクタ配列が、Ｇ４Ｓのアミノ酸配列を含む、請求項１０８〜１１１のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体。
  113. 前記コネクタ配列が、ＧＳ２Ｇ４Ｓのアミノ酸配列を含む、請求項１０８〜１１２のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体。
  114. 前記リンカー配列が、（Ｇ４Ｓ）４のアミノ酸配列を含む、請求項１０８〜１１３のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体。
  115. 前記抗ＣＤ２７ ｓｃＦｖドメインの少なくとも１つが、それぞれ配列番号７、８および９に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、もしくはそれらの保存的配列修飾と、それぞれ配列番号１０、１１および１２に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、もしくはそれらの保存的配列修飾とを含む、請求項１０８〜１１４のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体。
  116. 前記抗ＰＤ−Ｌ１ ＩｇＧ重鎖の少なくとも１つが、それぞれ配列番号５９、６０および６１に記載の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、もしくはそれらの保存的配列修飾を含み、前記抗ＰＤ−Ｌ１軽鎖の少なくとも１つが、それぞれ配列番号６２、６３および６４に記載の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、もしくはそれらの保存的配列修飾を含む、請求項１０８〜１１５のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体。
  117. 請求項１０８〜１１６のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
  118. 請求項１０８〜１１６のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体または請求項１１７に記載の組成物と、使用のための指示書とを含む、キット。
  119. Ｔ細胞活性を刺激する方法であって、Ｔ細胞と、請求項１０８〜１１６のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体または請求項１１７に記載の組成物とを接触させることを含む、方法。
  120. 対象において免疫応答を誘発するか、または増強するための方法であって、請求項１０８〜１１６のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体または請求項１１７に記載の組成物を、前記対象において免疫応答を誘発するか、または増強するのに有効な量で、前記対象に投与することを含む、方法。
  121. 対象において状態または疾患を治療するための方法であって、前記方法が、請求項１０８〜１１６のいずれか一項に記載の二重特異性四価抗体または請求項１１７に記載の組成物を、前記状態または疾患を治療するのに有効な量で、前記対象に投与することを含む、方法。
  122. 前記対象が、免疫応答の刺激が望まれる状態または疾患に罹患している、請求項１１９〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
  123. 前記状態または疾患が癌である、請求項１２２に記載の方法。
  124. 前記癌が、大腸癌、卵巣癌、腎細胞癌、頭頸部扁平上皮癌および膠芽腫からなる群から選択される、請求項１２３に記載の方法。
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