JP2021518766A - 単細胞を物理化学的に処理するマイクロ流体チップ、マイクロ流体装置及びそれらを用いて単細胞を物理化学的に処理する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)単細胞を細胞ローダに滴下し、負圧をオンにして単細胞をチップに吸い込むことと、
(2)細胞処理領域で前記細胞を捕捉した時、光ファイバーセンシングモジュールにより細胞センシング信号を検出すると、空気圧マイクロ弁群を制御することによって順に異なる割合の第1試薬、第2試薬及び高速の第3試薬を用いて前記細胞を物理化学的に処理する、物理化学的処理プロセスを起動することと、
(3)処理完了後、第3試薬を用いて細胞回収孔のマイクロウェルのところで捕捉さるまで前記細胞を細胞回収通路内に逆洗浄し、余分の第3試薬を排出し続け、残留体積が1マイクロリットルを超えないところまで排出した時、細胞回収孔栓を抜き、専用の細胞抽出ツールを用いて前記細胞を吸い出し、回収を完了させることと、を含む。
図2Bに示すように、該マイクロ流体チップを用いてヒト卵子を処理し、詳細な操作過程は以下のとおりである。
Claims (10)
- 単細胞を物理化学的に処理するマイクロ流体チップであって、
前記マイクロ流体チップの本体は、スイッチバック式単細胞処理回収通路、第1試薬流入通路、第2試薬流入通路、試薬混合通路、第3試薬流入通路、逆洗浄通路、及び負圧と廃液の共用通路を含む液体通路層と、
液体通路層の各通路の開放と閉鎖を制御する空気圧マイクロ弁群を含むガス通路層と、
液体通路層とガス通路層との間に挟まれた弾性薄膜と、
を含み、
第1試薬流入通路、第2試薬流入通路はそれぞれ試薬混合通路の入口に連通し、前記試薬混合通路、第3試薬流入通路、逆洗浄通路、及び負圧と廃液の共用通路はそれぞれスイッチバック式単細胞処理回収通路に連通し、第3試薬流入通路と逆洗浄通路はそれぞれ独立した通路又は共用通路である、
ことを特徴とするマイクロ流体チップ。 - スイッチバック式単細胞処理回収通路は細胞ローディング通路、細胞処理領域及び細胞回収通路を含み、
細胞ローディング通路と細胞回収通路は細胞処理領域上流の同じところで細胞処理領域に連通し、単細胞はローディング、処理及び回収の過程において通路に沿ってスイッチバック式に移動する、
ことを特徴とする請求項1に記載のマイクロ流体チップ。 - 細胞ローディング通路は外部の細胞ローダに連通する細胞吸込口に接続され、細胞回収通路は細胞を回収する細胞回収孔に接続されている、
ことを特徴とする請求項2に記載のマイクロ流体チップ。 - 前記細胞回収孔は細胞回収通路末端に設置されたマイクロウェルを含み、マイクロウェルは円形のマイクロ孔であり、その垂直深さは細胞回収通路より深く、又はそれと一致し、好ましくは細胞回収孔はさらにマイクロウェルを取り囲む環状マイクロピラーアレイを含む、
ことを特徴とする請求項3に記載のマイクロ流体チップ。 - 前記試薬混合通路、第3試薬流入通路、逆洗浄通路、及び負圧と廃液の共用通路と、それぞれのスイッチバック式単細胞処理回収通路との連通部にはいずれもマイクロピラーアレイが設置され、好ましくは細胞処理領域と、負圧と廃液の共用通路との連通部に円弧状のマイクロピラーアレイが設置されている、
ことを特徴とする請求項1〜4のいずれか1項に記載のマイクロ流体チップ。 - 負圧と廃液の共用通路は細胞ローディング過程において外部の負圧源に連通し、細胞処理と回収過程において廃液槽に連通する、
ことを特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に記載のマイクロ流体チップ。 - 空気圧マイクロ弁群は6つの空気圧マイクロ弁を含み、第1試薬流入通路、第2試薬流入通路及び試薬混合通路は1つの空気圧マイクロ弁(V1)を共用し、負圧と廃液の共用通路、細胞ローディング通路及び細胞回収通路はそれぞれ1つの空気圧マイクロ弁(V5、V3、V4)により制御され、第3試薬流入通路と逆洗浄通路がそれぞれ独立した通路である場合、それぞれ1つの空気圧マイクロ弁(V2、V6)により制御され、第3試薬流入通路と逆洗浄通路が共用通路である場合、1つの空気圧マイクロ弁(V2)は第3試薬の流れ込みを制御し、別の空気圧マイクロ弁(V6)により細胞処理領域に対する洗浄と逆洗浄の切り替えを実現する、
ことを特徴とする請求項1〜6のいずれか1項に記載のマイクロ流体チップ。 - 単細胞を物理化学的に処理する自動化マイクロ流体装置であって、
請求項1〜7のいずれか1項に記載のマイクロ流体チップ、気圧発生制御モジュール、ロジック制御回路及び光ファイバーセンシングモジュールを含む、
ことを特徴とするマイクロ流体装置。 - 光ファイバーセンシングモジュールは細胞の位置を監視するのに用いられ、ロジック制御回路は細胞センシング信号をリアルタイムに読み取ることによって細胞が所定位置に達したか否かを判断し、さらに次の操作を実行するか否かを判断する、
ことを特徴とする請求項8に記載のマイクロ流体装置。 - 請求項1〜7のいずれか1項に記載のマイクロ流体チップ或いは請求項8又は9に記載のマイクロ流体装置を用いて単細胞を物理化学的に処理する方法であって、
(1)単細胞を細胞ローダに滴下し、負圧をオンにして単細胞をチップに吸い込むことと、
(2)細胞処理領域で前記細胞を捕捉した時、光ファイバーセンシングモジュールにより細胞センシング信号を検出すると、空気圧マイクロ弁群を制御することによって順に異なる割合の第1試薬、第2試薬及び第3試薬を用いて前記細胞を物理化学的に処理する、物理化学的処理プロセスを起動することと、
(3)処理完了後、第3試薬を用いて細胞回収孔で捕捉されるまで前記細胞を細胞回収通路内に逆洗浄し、余分の第3試薬を排出し続け、残留体積が1マイクロリットルを超えないところまで排出した時、細胞回収孔栓を抜き、専用の細胞抽出ツールを用いて前記細胞を吸い出し、回収を完了させることと、
を含む、ことを特徴とする方法。
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