JP2021518348A - 医薬併用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、（ａ）プログラム死１（ＰＤ−１）に結合する少なくとも１つの抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）と、（ｂ）ＨＤＭ２−ｐ５３相互作用阻害剤とを含む医薬併用であって、増殖性疾患の処置における使用のための同時、個別または逐次投与のための医薬併用、かかる併用を含む医薬組成物；前記併用の、それを必要としている対象への投与を含む、増殖性疾患を有する対象を処置する方法；増殖性疾患の処置のためのかかる併用の使用；およびかかる併用を含む市販用パッケージに関し、前記増殖性疾患は、ＴＰ５３野生型腫瘍、詳細にはＴＰ５３野生型腎細胞癌（ＲＣＣ）またはＴＰ５３野生型結腸直腸癌（ＣＲＣ）である。

Description

配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表は、全体として参照により本明細書に援用される。前記ＡＳＣＩＩ複製物は、ＰＡＴ０５８０９５＿ＳＬ．ＴＸＴという名称であり、サイズが１９０，３８１バイトである。
本発明は、（ａ）本明細書では「ＰＤ−１阻害剤」とも称される、プログラム死１（ＰＤ−１）に結合する少なくとも１つの抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）と、（ｂ）本明細書では「ＨＭＤ２阻害剤」とも称される、ＨＤＭ２−ｐ５３相互作用阻害剤とを含む医薬併用であって、増殖性疾患の処置における使用のための同時、個別または逐次投与のための医薬併用、かかる併用を含む医薬組成物；前記併用の、それを必要としている対象への投与を含む、増殖性疾患を有する対象を処置する方法；増殖性疾患の処置のためのかかる併用の使用；およびかかる併用を含む市販用パッケージに関し、前記増殖性疾患は、腫瘍、詳細にはＴＰ５３野生型腫瘍、詳細にはＴＰ５３野生型固形腫瘍、詳細にはＴＰ５３野生型腎細胞癌（ＲＣＣ）または結腸直腸癌（ＣＲＣ）である。
ｐ５３は、異常な増殖シグナル、ＤＮＡ損傷、紫外線およびプロテインキナーゼ阻害剤等の多くの潜在的な腫瘍形成過程により誘発されて活性化され（Ｍｉｌｌａｒｄ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓｉｇｎ ２０１１；１７：５３６−５５９）、細胞増殖停止、ＤＮＡ修復、アポトーシスおよび血管新生を制御する遺伝子を調節する（Ｂｕｌｌｏｃｋ ＡＮ＆Ｆｅｒｓｈｔ ＡＲ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ２００１；１：６８−７６；Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ２０１０；３（９）：６）。
ヒト二重微小染色体−２（ＨＤＭ２）は、ｐ５３の最も重要な調節因子の１つである。ＨＤＭ２は、ｐ５３に直接結合し、ｐ５３のトランス活性化を阻害し、その後、ｐ５３を細胞質分解に導く（Ｚｈａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２０１０；３８：６５４４−６５５４）。
ｐ５３は、ＴＰ５３遺伝子の直接変異（全てのヒト癌の約５０％で見られる）（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，Ｂ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２０００；４０８：３０７−３１０）またはＨＤＭ２の過剰発現等の抑制機序（Ｚｈａｏ Ｙ，ｅｔ ａｌ．ＢｉｏＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ２０１３；８：４）のいずれかを介してヒト癌で最も頻繁に不活性化されるタンパク質の１つである。
ＨＤＭ２−ｐ５３相互作用の強力かつ選択的な阻害剤（ＨＤＭ２阻害剤またはＭＤＭ２阻害剤とも称される）（例えば、ＮＶＰ−ＨＤＭ２０１）は、前臨床細胞モデルおよびインビボモデルにおいてｐ５３の機能を回復させることが分かっている（Ｈｏｌｚｅｒ Ｐ，ｅｔ ａｌ．ＡＡＣＲ ２０１６，Ａｂｓｔｒａｃｔ ＃４８５５で発表されたポスター）。
Ｔ細胞が抗原に対する免疫応答を媒介可能であるには、２つの個別的なシグナル伝達相互作用が必要である（Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ４：６６６−６７５；Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９７−３３９）。第一に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上にアレイ化された抗原が抗原特異的ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞に提示される。かかる提示により、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）経由で、提示された抗原に特異的な免疫応答を開始するようにＴ細胞を仕向けるシグナルが送られる。第二に、ＡＰＣと個別的なＴ細胞表面分子との間の相互作用を通じて媒介される様々な共刺激および抑制シグナルは、Ｔ細胞の活性化および増殖、最終的にその阻害を惹起する。
プログラム死１（ＰＤ−１）タンパク質は、Ｔ細胞調節因子の拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーの抑制性メンバーである（Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４：３９１７７９−８２；Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：７１１−８）。ＣＤ２８ファミリーの他のメンバーには、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡが含まれる。ＰＤ−１は、多くの腫瘍が免疫系による攻撃を逃れるために用いる免疫チェックポイント経路における標的部位の１つである。ＰＤ−１は、他のＣＤ２８ファミリーメンバーに特徴的な対をなさないシステイン残基を欠いており、単量体として存在することが示唆されている。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞および単球に発現する。
腫瘍に対する免疫応答の調節における免疫チェックポイント経路の重要性を考えると、ＰＤ−１などの免疫抑制タンパク質の活性をモジュレートし、従って免疫系の活性化につながる新規併用療法を開発する必要がある。かかる薬剤は、例えば、癌免疫療法および他の病態の処置に使用することができる。
結腸直腸癌（ＣＲＣ）は、２０１２年に約１４０万人が診断された、世界で３番目に多く見られる癌であり、死亡は、６９４，０００例であり、癌による死亡原因として４番目に多く見られる（Ｗｏｒｌｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｐｏｒｔ ２０１４）。ＣＲＣ患者の転帰は、腫瘍の免疫浸潤と関係があり、免疫応答を刺激する療法がＣＲＣの利益となり得ることが示唆される（Ｆｒｉｄｍａｎ ＷＨ，Ｇａｌｏｎ Ｊ，Ｐａｇｅｓ Ｆ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｉｎｔｒａ−ａｎｄ ｐｅｒｉｔｕｍｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．ｐ．５６０１−５）。しかしながら、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１のチェックポイント阻害剤による予備的経験は、ミスマッチ修復欠損集団を除いて期待外れであった（Ｌｅ ＤＴ，Ｕｒａｍ ＪＮ，Ｗａｎｇ Ｈ，ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＰＤ−１ Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ ｗｉｔｈ Ｍｉｓｍａｔｃｈ−Ｒｅｐａｉｒ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．ｐ．２５０９−２０；および他の参考文献Ｒｉｂａｓ ｅｔ ａｌ．２００５；Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１０；Ｂｒａｈｍｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０；Ｔｏｐａｌｉａｎ ｅｔ ａｌ．２０１２；Ｂｒａｈｍｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１２）。有効性の欠如の理由は、不明である（Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ，Ｇａｌｌｕｚｚｉ Ｌ，Ｌａｕｒｅｎｃｅ Ｚｉｔｖｏｇｅｌ Ｌ，ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ｆｏｕｎｄ ｔｏ ｂｅ ｕｎｄｅｒ ｉｍｍｕｎｏｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｏｎｅ ｔｏ ｒｅｓｐｏｎｄ ｔｏ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ？ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４：７，ｅ１０５８５９７−１−３）。
腎細胞癌（ＲＣＣ）は、世界での新生物関連死亡原因の第１６位であり、２０１２年には世界で１４３，０００例の死亡がある（Ｆｅｒｌａｙ ｅｔ ａｌ ２０１５）。米国では、２０１６年に腎癌による６２，０００例を超える新規症例および１４，０００例を超える死亡が見込まれている（Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ ２０１６）。ＲＣＣでの使用にニボルマブが承認されている（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）の医薬品表示（２０１４年））。ニボルマブは、ＲＣＣ患者でエベロリムスと比較して第一選択療法を超えて２５ヵ月のＯＳ中央値を示しており、ニボルマブの投与を受ける患者に５．４ヵ月の利益となっている（Ｍａｚｚａ Ｃ，Ｅｓｃｕｄｉｅｒ Ｂ，Ａｌｂｉｇｅｓ Ｌ．（２０１７）Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｌａｔｅｓｔ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｍｅｄ Ｏｎｃｏｌ．ｐ．１７１−１８１）。現在、少なくとも３１件の研究がＲＣＣにおけるＴＰ５３の発現について調査している。２５１９例のＲＣＣ腫瘍のメタ分析では、ＴＰ５３陽性頻度は、２４．５％であった（Ｎｏｏｎ ＡＰ，Ｖｌａｔｋｏｖｉｃ Ｎ，Ｐｏｌａｎｓｋｉ Ｒ，ｅｔ．ａｌ（２０１０）ｐ５３ ａｎｄ ＭＤＭ２ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ？Ｃａｎｃｅｒ．ｐ．１１６：７８０−９０）。
現在開発中の免疫療法は、従来の処置が無効な患者を含め、黒色腫癌患者に大きい利益をもたらし始めている。最近になって、２つのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用阻害剤、ペンブロリズマブおよびニボルマブがそれぞれ商標名Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）およびＯｐｄｉｖｏ（登録商標）としてＮＳＣＬＣおよび黒色腫への使用を承認されている。
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用阻害剤は、良好に耐容され、著しく広範囲にわたる種類の癌で何らかの活性が実証されているが、処置の奏効率および持続性を増加させるため、他の治療用薬剤によってこの治療を補完することが依然として必要とされている。
ＨＤＭ２阻害剤に関して様々な投与レジメンが説明されており、臨床研究で試験された。
例えば、米国特許出願公開第２０１３／０２４５０８９号明細書には、癌に罹患している患者を処置する方法であって、この患者に、２８日の処置サイクルの１〜７日目に、最大約７日の投与期間にわたり約８００〜約３０００ｍｇ／日の量で４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸を投与し、その後の約２１〜約２３日の休止期間により患者を処置する方法が開示されている。
Ｂ．ＨｉｇｇｉｎｓらによるＣｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈでの論文（２０１４年５月）には、２８日サイクルスケジュールであって、ＲＧ７３８８が週１回で３回投与され、その後、１３日の休止が続く（２８日サイクルスケジュール）か、またはこの薬剤が２８日スケジュールの５日連続にわたり投与される、２８日サイクルスケジュールが開示されている。ＨＤＭ２阻害剤の更なる投与レジメンが国際公開第２０１５／１９８２６６号パンフレットに開示されている。
特定の治療セッティング（単剤療法または併用療法、適応疾患の種類）において、特異的ＨＤＭ２阻害剤に安全でありながら有効な用量および投薬レジメンを見出すことは、依然としてこれらの阻害剤の臨床使用に向けた大きい課題である。
本発明は、ＴＰ５３野生型癌、特にＴＰ５３野生型固形腫瘍である癌の処置における使用のための、ＰＤ−１阻害剤との併用における成分としての化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶を提供する。
化合物Ａは、以下のプロジェクト番号、化学名および構造の化合物である。
ＨＤＭ２０１（ＩＮＮ：シレマドリン）、即ち（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン、別名（６Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン
Figure 2021518348
好ましくは、ＨＤＭ２０１は、コハク酸共結晶形態である。より好ましくは、ＨＤＭ２０１は、１：１（モル比）のコハク酸共結晶形態である。
本発明は、（ａ）プログラム死１（ＰＤ−１）に結合する少なくとも１つの抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）、特に以下に記載するとおりの例示的抗体分子と、（ｂ）化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶であるＨＤＭ２−ｐ５３阻害剤とを含む医薬併用を提供する。この医薬併用は、増殖性疾患、詳細にはＴＰ５３野生型癌、より詳細にはＴＰ５３野生型固形腫瘍を処置するための同時、個別または逐次投与に用いられ得る。
本発明は、
（Ａ）化合物Ａ（ＨＤＭ２０１、シレマドリン）またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶であるＨＤＭ２−ｐ５３阻害剤；および
（Ｂ）表１に記載されるとおりのＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、以下の表１に記載されるとおりのＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む、ヒトプログラム死−１（ＰＤ−１）への結合能を有する単離抗体分子であって、好ましくは、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＤＲ００１（スパルタリズマブ）である、単離抗体分子
を含む医薬併用にも関する。
また、かかる併用を含む医薬組成物；前記併用の、それを必要としている対象への投与を含む、増殖性疾患を有する対象を処置する方法；増殖性疾患の処置のためのかかる併用の使用；およびかかる併用を含む市販用パッケージも提供される。
ＰＤ−１阻害剤は、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＰＤ−１ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第１４／６０４，４１５号明細書および国際公開第２０１５／１１２９００号パンフレット（両方とも全体として参照により援用される）に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子である。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、重鎖からの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および軽鎖からの３つのＣＤＲを含む、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−ＤまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択されるか；あるいは表１に記載されるとおりのもしくは表１にあるヌクレオチド配列；または前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一の）配列によってコードされる抗体からの少なくとも１つの抗原結合領域、例えば可変領域またはその抗原結合断片を含む。
例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に示されるとおりの、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ ＣＤＲ１もしくはＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ超可変ループ１またはこれらの組み合わせを含むことができる。一実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１のＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組み合わせは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨ（配列番号２２４）またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、１つ以上のアミノ酸変化であるが、２、３または４つ以下の変化（例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換）を有する）を含む。抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に示されるとおりの、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ ＣＤＲ２〜３およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＬ ＣＤＲ１〜３を例えば更に含むことができる。従って、一部の実施形態において、フレームワーク領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．により定義されるＣＤＲと、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．により定義される超可変ループとの組み合わせに基づいて定義される。例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に示されるとおりの、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ超可変ループ１に基づいて定義されるＶＨ ＦＲ１と、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ ＣＤＲ１〜２に基づいて定義されるＶＨ ＦＲ２とを含むことができる。抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ ＣＤＲ２〜３に基づいて定義されるＶＨ ＦＲ３〜４と、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によってＶＬ ＣＤＲ１〜３に基づいて定義されるＶＬ ＦＲ１〜４とを更に含むことができる。
本発明の併用においてプログラム死１（ＰＤ−１）に結合する好ましい抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）は、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅである例示的抗体分子であり、好ましいアミノ酸配列は、本明細書の表１に記載される（ＶＨ：配列番号３８；ＶＬ：配列番号７０）。好ましい抗体分子は、本明細書では抗体Ｂ、またはスパルタリズマブ（ＩＮＮ）、またはＰＤＲ００１とも称される。
本発明は、増殖性疾患の処置における使用のための、同時、個別または逐次投与のための、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶であるＨＤＭ２−ｐ５３阻害剤と、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子とを含む医薬併用を更に提供する。
本発明は、特に増殖性疾患の処置における使用のための本発明の併用に関する。
本発明は、増殖性疾患、特に癌の処置のための本発明の併用の使用も提供する。詳細には、本発明の併用は、ＴＰ５３野生型、詳細にはＴＰ５３固形腫瘍である癌の処置に有用であり得、詳細には、前記ＴＰ５３固形腫瘍は、腎細胞癌（ＲＣＣ）および結腸直腸癌（ＣＲＣ）から選択される。
本発明は、増殖性疾患、特に癌、特にＴＰ５３野生型、詳細にはＴＰ５３固形腫瘍である癌の処置用薬物の調製のための本発明の併用の使用も提供し、詳細には、前記ＴＰ５３固形腫瘍は、腎細胞癌（ＲＣＣ）および結腸直腸癌（ＣＲＣ）から選択される。
本発明は、増殖性疾患を処置する方法であって、本発明の併用を、前記増殖性疾患に対して合わせて治療上有効となる分量において、それを必要としている対象に同時、個別または逐次投与することを含む方法も提供する。
本発明は、増殖性疾患に対して合わせて治療上有効となる分量の本発明の併用と、任意選択で少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物または併用製剤も提供する。
本発明は、増殖性疾患の処置における使用のための、（ａ）化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩であるＨＤＭ２阻害剤の１つ以上の投薬量単位と、（ｂ）抗ＰＤ−１抗体分子とを含む併用製剤も提供する。
本発明は、増殖性疾患、特にＴＰ５３野生型である固形腫瘍の処置における使用のための、活性成分としての本発明の併用と、本発明の併用の、それを必要としている患者への同時、個別または逐次投与に関する説明書とを含む市販用パッケージも提供する。
本発明は、化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、錯体または共結晶であるＨＤＭ２阻害剤と、抗ＰＤ−１抗体分子と、増殖性疾患の処置における同時、個別または逐次使用に関する説明書とを含む市販用パッケージも提供する。
別の態様において、本発明は、本明細書に記載される抗体分子および／または低分子量活性成分と使用説明書とを含む診断または治療キットを特徴とする。
本発明は、ＰＤ−１阻害剤およびＨＤＭ２阻害剤の投与に関する用量範囲および投与レジメンも提供する。
詳細には、本発明は、癌の処置における使用のための、本明細書に記載されるとおりのＰＤ−１阻害剤とＨＤＭ２阻害剤ＨＤＭ２０１との併用を提供し、ここで、ＰＤ−１阻害剤は、４週間に１回（ｑ４ｗ）投与され、ＨＤＭ２０１は、４週間処置サイクルの１日目および６日目〜１４日目のいずれか１日、好ましくは６日目〜１０日目のいずれか１日、より好ましくは８日目（ｄ１ｄ８ｑ４ｗ）に投与される。
ＰＤ−１阻害剤の１日用量は、１００〜４００ｍｇ、好ましくは２００〜４００ｍｇ、より好ましくは３００〜４００ｍｇであり、更により好ましくは、１日用量は、４００ｍｇであり、およびＨＤＭ２０１の１日用量は、３０〜１２０ｍｇであり、好ましくは、１日用量は、４０〜１２０ｍｇであり、より好ましくは、１日用量は、６０〜１２０ｍｇであり、更により好ましくは、１日用量は、６０ｍｇ〜９０ｍｇであり、更により好ましくは、１日用量は、６０〜８０ｍｇである。本明細書において、ＨＤＭ２０１の１日用量とは、遊離形態、即ち任意の塩、溶媒和物、錯体または共結晶形成体の質量を含まない、例えばＨＤＭ２０１コハク酸共結晶の場合にコハク酸の質量を含まないものを指す。
本明細書において言及される刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、全て全体として参照により援用される。
本発明の他の特徴、目的および利点は、説明および図面ならびに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
図１は、マウス抗ＰＤ−１ ｍＡｂ ＢＡＰ０４９の軽鎖および重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。上の配列および下の配列は、２つの独立した分析からのものであった。Ｋａｂａｔ付番に基づく軽鎖および重鎖ＣＤＲ配列に下線を付す。Ｃｈｏｔｈｉａ付番に基づく軽重鎖ＣＤＲ配列は、太字斜体で示す。軽鎖配列の１０２位における対をなさないＣｙｓ残基は、囲み線を付す。配列は、掲載順にそれぞれ配列番号８、２２８、１６および２２９として開示される。 図２：図２Ａは、生殖系列配列とアラインメントしたマウス抗ＰＤ−１ ｍＡｂ ＢＡＰ０４９の軽鎖および重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。上の配列および下の配列は、それぞれ生殖細胞系列（ＧＬ）配列およびＢＡＰ０４９（Ｍｕ ｍＡｂ）配列である。Ｋａｂａｔ付番に基づく軽鎖および重鎖ＣＤＲ配列に下線を付す。Ｃｈｏｔｈｉａ付番に基づく軽重鎖ＣＤＲ配列は、太字斜体で示す。「−」は、同一のアミノ酸残基を意味する。掲載順にそれぞれ配列番号２３０、８、２３１および１６として開示される配列。図２Ｂは、マウスκ Ｊ２遺伝子の配列およびマウス抗ＰＤ−１ ｍＡｂ ＢＡＰ０４９における対応する突然変異を示す。「−」は、同一のヌクレオチド残基を意味する。掲載順にそれぞれ配列番号２３３、２３２、２３４および２３５として開示される配列。 （上記のとおり。） 図３：図３Ａ〜３Ｂは、蛍光標識マウス抗ＰＤ−１ ｍＡｂ ＢＡＰ０４９（Ｍｕ ｍＡｂ）と３つのキメラバージョンのＢＡＰ０４９（Ｃｈｉ ｍＡｂ）との間の競合結合を示す。実験は、２回実施しており、結果は、それぞれ図３Ａおよび図３Ｂに示す。３つのキメラＢＡＰ０４９抗体（Ｃｈｉ ｍＡｂ（Ｃｙｓ）、Ｃｈｉ ｍＡｂ（Ｔｙｒ）およびＣｈｉ ｍＡｂ（Ｓｅｒ））は、それぞれ軽鎖可変領域の１０２位にＣｙｓ、ＴｙｒおよびＳｅｒ残基を有する。Ｃｈｉ ｍＡｂ（Ｃｙｓ）、Ｃｈｉ ｍＡｂ（Ｔｙｒ）およびＣｈｉ ｍＡｂ（Ｓｅｒ）は、それぞれＢＡＰ０４９−ｃｈｉ、ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−ＹおよびＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−Ｓとしても知られる。 （上記のとおり。） 図４は、１６個のヒト化ＢＡＰ０４９クローン（ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１〜ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６）についてのＦＡＣＳ結合分析の結果を示す棒グラフである。抗体濃度は、試験したｍＡｂ毎に一番左側のバーから一番右側のバーに２００、１００、５０、２５および１２．５ｎｇ／ｍｌである。 図５は、ヒト化ＢＡＰ０４９クローンの構造解析を示す（ａ、ｂ、ｃ、ｄおよびｅは、各種のフレームワーク領域配列を表す）。試料中のｍＡｂの濃度も示す。 図６：図６Ａ〜６Ｂは、一定濃度のＡｌｅｘａ ４８８標識マウスｍＡｂ ＢＡＰ０４９、試験抗体の段階希釈物およびＰＤ−１発現３００．１９細胞を使用する競合結合アッセイで測定されたヒト化ＢＡＰ０４９ ｍＡｂの結合親和性および特異性を示す。実験は、２回実施しており、結果は、それぞれ図６Ａおよび図６Ｂに示す。 （上記のとおり。） 図７は、ＦＡＣＳデータ、競合結合および構造解析に基づくヒト化ＢＡＰ０４９クローンの順位付けを示す。試料中のｍＡｂの濃度も示す。 図８：図８Ａ〜８Ｂは、選択されたヒト化ＢＡＰ０４９クローンによるＰＤ−１へのリガンド結合の遮断を示す。ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１−ＩｇおよびＰＤ−Ｌ２−Ｉｇ結合の遮断を図８Ａに示す。ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２−Ｉｇ結合の遮断を図８Ｂに示す。ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０およびＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１を評価した。マウスｍＡｂ ＢＡＰ０４９および軽鎖可変領域の１０２位にＴｙｒを有するキメラｍＡｂもこの分析に含めた。 （上記のとおり。） 図９：図９Ａ〜９Ｂは、１６個のヒト化ＢＡＰ０４９クローンおよびＢＡＰ０４９キメラ（ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ）についての重鎖可変ドメイン配列のアラインメントを示す。図９Ａには、全ての配列を示す（掲載順にそれぞれ配列番号２２、３８、３８、３８、３８、３８、３８、３８、３８、３８、５０、５０、５０、５０、８２、８２および８６）。図９Ｂには、マウス配列と異なるアミノ酸配列のみを示す（掲載順にそれぞれ配列番号２２、３８、３８、３８、３８、３８、３８、３８、３８、３８、５０、５０、５０、５０、８２、８２および８６）。 （上記のとおり。） 図１０：図１０Ａ〜１０Ｂは、１６個のヒト化ＢＡＰ０４９クローンおよびＢＡＰ０４９キメラ（ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ）についての軽鎖可変ドメイン配列のアラインメントを示す。図１０Ａには、全ての配列を示す（掲載順にそれぞれ配列番号２４、６６、６６、６６、６６、７０、７０、７０、５８、６２、７８、７４、４６、４６、４２、５４および５４）。図１０Ｂには、マウス配列と異なるアミノ酸配列のみを示す（掲載順にそれぞれ配列番号２４、６６、６６、６６、６６、７０、７０、７０、５８、６２、７８、７４、４６、４６、４２、５４および５４）。 （上記のとおり。） 図１１は、本明細書に開示される併用療法が標的とする抗原プロセシングおよび提示、エフェクター細胞応答および免疫抑制経路を概説する概略図である。 図１２は、患者が同じ用量の例示的抗ＰＤ−１抗体分子の投与を受ける間の異なる体重にわたる予測Ｃｔｒｏｕｇｈ（Ｃｍｉｎ）濃度を示す。 図１３は、Ｃｍｉｎ濃度の実測値対モデル予測値（集団または個体ベース）を示す。 図１４は、薬物動態の分析に使用したモデルの蓄積、経時変化および対象間変動を示す。 図１５は、レジメン１Ｂにより１２０ｍｇで処置された患者に関して推定された１回のサイクル当たりの平均濃度を示す。コホート１：１２０ｍｇ、コホート２：１２０ｍｇ、新規のバリアント。破線：腫瘍停滞（ＳＪＳＡ−１細胞株）、点線：腫瘍停滞（脂肪肉腫細胞株）。個々の患者を円で表す。 図１６は、幾何平均濃度−期間プロファイル（レジメン１Ａ、サイクル１、１日目）（ＰＡＳ）を示す。 図１７は、第１のサイクル中の個々のヒト平均ＮＶＰ−ＨＤＭ２０１濃度を示す（ＤＤＳ）。個々のＣ（平均）＝サイクル１の持続期間（時間単位）で除算された、サイクル１の終了時での個々のＡＵＣモード。平均用量レベル＝サイクル１の持続期間（日単位）で除算された、サイクル１の終了時での総累積用量。 図１８は、各レジメンで試験された下記の用量に基づいてモデル化された血小板動態プロファイルを示す：（上から下へ順に）Ｒｅｇ２Ｃ（（Ｄ１〜７ Ｑ４ｗｋ）：２５ｍｇ（６．２５ｍｇ／日）；Ｒｅｇ２Ａ（Ｄ１〜１４ Ｑ４ｗｋ）：２０ｍｇ（１０ｍｇ／日）；Ｒｅｇ１Ｂ（１日目、８日目 Ｑ４ｗｋ）：１５０ｍｇ（１０．７ｍｇ／日）；Ｒｅｇ１Ａ（Ｄ１ Ｑ３ｗｋ）：３５０ｍｇ（１６．７ｍｇ／日）。 図１９は、血液学的腫瘍を有する患者に関する、第１の処置サイクル中の個々の平均濃度対１レジメン当たりの用量を示す。１２０ｎｇ／ｍＬでの直線＝ヒトＳＪＳＡ−１異種移植ラットからの９５％腫瘍退縮。４１ｎｇ／ｍＬでの直線＝ヒトＳＪＳＡ−１（骨肉腫）異種移植ラットにおいてＴＧＩ ＰＫ／ＰＤモデリングから得られた腫瘍停滞の平均濃度。１９ｎｇ／ｍＬでの直線＝ヒトＨＳＡＸ２６５５（脂肪肉腫）ＰＤＸラットにおいてＴＧＩ ＰＫ／ＰＤモデリングから得られた腫瘍停滞の平均濃度。
Figure 2021518348
図２０は、レジメン１Ｂに従ってＨＤＭ２０１で処置された肉腫（脂肪肉腫および他の肉腫）患者に関する、直径の合計および最高の全奏効でのベースラインからの最高百分率変化を示す（２０１７年９月）。ＰＤ：進行性疾患、ＳＤ：安定疾患、ＰＲ：部分奏効。 図２１は、ａｌｂ／ｃマウスにおけるＣｏｌｏｎ２６腫瘍のＨＤＭ２０１モジュレート免疫細胞浸潤（７６２８ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤ）である。ＨＤＭ２０１は、Ｃｏｌｏｎ ２６腫瘍の免疫細胞プロファイルをモジュレートした。％ＣＤ１１ｃ＋／ＣＤ４５＋骨髄系細胞（Ａ）、％ＣＤ８＋／ＣＤ４５＋ Ｔ細胞（Ｂ）、ＣＤ４５−細胞中のＰＤＬ１ ＭＦＩ（Ｃ）および％ＰＤ１＋／ＣＤ４５＋リンパ球（ｄ）の増加。Ｂａｌｂ／ｃマウスの右側腹部にＣｏｌｏｎ ２６細胞を移植した。腫瘍が約６０ｍｍ３に達したところでマウスを無作為化し、０および７日目に４０ｍｇ／ｋｇのＨＤＭ２０１で３時間毎に３回処置した。初回投与後５および１２日目にマウスを安楽死させ、腫瘍を採取し、ＦＡＣＳ分析のために処理した。 図２２は、ＤＭ２０１がＣｏｌｏｎ ２６腫瘍および流入領域リンパ節でＤＣ機能、Ｔ細胞プライミングおよびＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を増強した（８０６３ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤ）ことを示す。ＨＤＭ２０１は、Ｃｏｌｏｎ ２６腫瘍の免疫細胞プロファイルをモジュレートした。％ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｃ＋ＤＣ（Ａ）、％Ｔｂｅｔ＋ＥＯＭＥＳ−ＣＤ８＋／ＣＤ４５＋Ｔ細胞（Ｂ）およびＣＤ８／Ｔｒｅｇ比（Ｃ）の増加。Ｂａｌｂ／ｃマウスの右側腹部にＣｏｌｏｎ ２６細胞を移植した。腫瘍が約１００ｍｍ３に達したところでマウスを無作為化し、０日目および７日目に４０ｍｇ／ｋｇのＨＤＭ２０１で３時間毎に３回処置した。初回投与後５および１２日目にマウスを安楽死させた；腫瘍および流入領域リンパ節を採取し、ＦＡＣＳ分析のために処理した。 図２３は、体重変化率（８０２０ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＥＦ）である。体重変化率。Ｂａｌｂ／ｃマウスに２×１０５個のＣｏｌｏｎ ２６細胞を皮下移植した。細胞移植後１２、１９および２６日目にマウスを４０ｍｇ／ｋｇ×３のＨＤＭ２０１で３時間毎にｐｏ処置し、１２、１５、１９および２２日目に５ｍｇ／ｋｇ ｉｐのａＰＤ−１抗体で処置した。体重を週２回記録し、実施例３の対応する節に記載される式に基づいて身体変化率を計算した。 図２４は、エンドポイントまでの時間（８０２０ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＥＦ）である。エンドポイントまでの時間。Ｂａｌｂ／ｃマウスに２×１０５個のＣｏｌｏｎ ２６細胞を皮下移植した。細胞移植後１２、１９および２６日目にマウスを４０ｍｇ／ｋｇ×３のＨＤＭ２０１で３時間毎にｐｏ処置し、１２、１５、１９および２２日目に５ｍｇ／ｋｇ ｉｐのａＰＤ−１抗体で処置した。エンドポイントは、１０００ｍｍ３以上の腫瘍容積として定義した。ログランク、ｐ＜０．０５。 図２５は、個別腫瘍成長曲線（８０２０ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＥＦ）である。個別腫瘍成長曲線。Ｂａｌｂ／ｃマウスに２×１０５個のＣｏｌｏｎ ２６細胞を皮下移植した。細胞移植後１２、１９および２６日目にマウスを４０ｍｇ／ｋｇ×３のＨＤＭ２０１で３時間毎にｐｏ処置し、１２、１５、１９および２２日目に５ｍｇ／ｋｇ ｉｐのａＰＤ−１抗体で処置した。エンドポイントは、１０００ｍｍ３以上の腫瘍容積として定義した。水平の破線は、腫瘍エンドポイント腫瘍サイズ（１０００ｍｍ３）を示す。 図２６は、マウスがＣｏｌｏｎ ２６細胞に対して長期特異的記憶を生じたが、４Ｔ１細胞に対して生じなかった（８０２０ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＥＦ）ことを示す。ＨＤＭ２０１とａＰＤ１抗体との併用で予め処置したＣＲマウスにおいて長期特異的記憶が生じた。Ａ）ＨＤＭ２０１＋ａＰＤ１抗体処置後にＣＲを達成していた全てのマウスがＣｏｌｏｎ ２６細胞の２回目の注射を拒絶した。ナイーブマウス（ｎ＝５）およびＣＲマウス（ＨＤＭ２０１＋ａＰＤ１ Ａｂ、ｎ＝５）の左側腹部に２×１０５個のＣｏｌｏｎ ２６細胞を移植した。毎週、腫瘍容積を測定した。ＣＲのマウスでは３４日目まで腫瘍が観察されなかった。Ｂ）６週間後、ナイーブマウス（ｎ＝５）およびＣＲマウス（ＨＤＭ２０１＋ａＰＤ１ Ａｂ、ｎ＝５）の乳房脂肪パッドに４Ｔ１細胞を移植した。腫瘍容積を測定し、全てのマウスに４Ｔ１腫瘍が生じ、４Ｔ１細胞移植後１４日目に安楽死させた。 図２７は、動物をｃｏｌｏｎ ２６および４Ｔ１細胞で再チャレンジすることによる記憶効果の実証である。 図２８は、抗腫瘍記憶Ｔ細胞応答の実証である。ＨＤＭ２０１またはＨＤＭ２０１と抗ＰＤ１抗体との併用で処置したマウスの脾臓におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞頻度は、Ｈ２Ｌｄ−ＡＨ１デキストラマーによって検出したとき奏効例を誘導した。 図２９は、抗腫瘍記憶Ｔ細胞応答の実証である。ＣＤ８＋Ｔ細胞内でのＣＤ４４＋ＡＨ１＋頻度。 図３０は、ｐ５３ノックアウトｃｏｌｏｎ ２６クローンのインビトロでの特徴付けである。 図３１は、臨床試験ＣＰＤＲ００１Ｘ２１０２の試験期間である。
表の簡単な説明
表１は、マウス、キメラおよびヒト化抗ＰＤ−１抗体分子のアミノ酸およびヌクレオチド配列の概要である。これらの抗体分子には、マウスｍＡｂ ＢＡＰ０４９、キメラｍＡｂのＢＡＰ０４９−ｃｈｉおよびＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−Ｙならびにヒト化ｍＡｂのＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１〜ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６およびＢＡＰ０４９−クローン−Ａ〜ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅが含まれる。この表には、重鎖および軽鎖ＣＤＲのアミノ酸およびヌクレオチド配列、重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列ならびに重鎖および軽鎖のアミノ酸およびヌクレオチド配列が示される。
表２は、ヒト化ｍＡｂのＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１〜ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６およびＢＡＰ０４９−クローン−Ａ〜ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅについての重鎖および軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸およびヌクレオチド配列を示す。
表３は、ヒトＩｇＧ重鎖およびヒトκ軽鎖の定常領域アミノ酸配列を示す。
表４は、ヒト化ｍＡｂのＢＡＰ０４９−クローン−Ａ〜ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅについての重鎖および軽鎖リーダー配列のアミノ酸配列を示す。
表５は、フラット投与スケジュールに基づく例示的ＰＫパラメータを示す。
ＨＤＭ２阻害剤
用語「ＨＤＭ２阻害剤」、別名「ＨＤＭ２ｉ」、「Ｈｄｍ２ｉ」、「ＭＤＭ２阻害剤」、「ＭＤＭ２ｉ」、「Ｍｄｍ２ｉ」は、本明細書では、時間分解蛍光エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）アッセイにより測定したＩＣ５０が１０μＭ未満、好ましくは１μＭ未満、好ましくはｎＭ範囲でＨＤＭ−２／ｐ５３またはＨＤＭ−４／ｐ５３相互作用を阻害する任意の化合物を意味する。ｐ５３−Ｈｄｍ２相互作用およびｐ５３−Ｈｄｍ４相互作用の阻害は、時間分解蛍光エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）により測定される。蛍光エネルギー移動（またはＦｏｅｒｓｔｅｒ共鳴エネルギー移動）は、ドナー蛍光分子とアクセプター５蛍光分子との間のエネルギー移動を説明する。このアッセイの場合、Ｃ末端ビオチン部分でタグ付けされたＭＤＭ２タンパク質（アミノ酸２〜１８８）およびＭＤＭ４タンパク質（アミノ酸２〜１８５）を、ドナーフルオロフォアとして作用するユーロピウム標識ストレプトアビジン（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）と組み合わせて使用する。ｐ５３由来のＣｙ５標識ペプチドＣｙ５−ＴＦＳＤＬＷＫＬＬ（ｐ５３ ａａ１８−２６）は、エネルギーアクセプターである。３４０ｎｍでのドナー１０分子の励起時、ＭＤＭ２またはＭＤＭ４とこのｐ５３ペプチドとの間の結合相互作用は、６６５ｎｍでのアクセプター発光波長において、エネルギー移動および増強された応答を誘発する。ＭＤＭ２またはＭＤＭ４のｐ５３結合部位に結合する阻害剤分子に起因するｐ５３−ＭＤＭ２複合体またはｐ５３−ＭＤＭ４複合体の形成の阻害により、６１５ｎｍでのドナー発光が増加する。レシオメトリックＦＲＥＴアッセイの読み取り値は、時間分解モードで測定された２つの異なる蛍光シグナルの１５個の生データから算出される（カウント値６６５ｎｍ／カウント値６１５ｎｍ×１０００）。このアッセイを下記の手順に従って実施し得る：９０％ＤＭＳＯ／１０％Ｈ２Ｏで希釈した化合物１００ｎｌ（３．２％最終ＤＭＳＯ濃度）と、反応緩衝液（ＰＢＳ、１２５ｍＭ ＮａＣｌ、０．００１％Ｎｏｖｅｘｉｎ（炭水化物ポリマー（Ｎｏｖｅｘｉｎポリマー）とからなり、タンパク質の溶解性および安定性を増加させるように設計されている；Ｎｏｖｅｘｉｎ Ｌｔｄ．，ａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）、ゼラチン０．０１％、０．２％プルロニック（エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのブロックコポリマー、ＢＡＳＦ，Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、１ｍＭ ＤＴＴ）中のユーロピウム２０標識ストレプトアビジン２μｌ（最終濃度２．５ｎＭ）とを組み合わせ、その後、アッセイ緩衝液で希釈したＭＤＭ２−ＢｉｏまたはＭＤＭ４−Ｂｉｏ ０．５μｌ（最終濃度１０ｎＭ）を添加することにより、３．１μｌの総体積で白色１５３６ｗマイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅ ＧｍｂＨ，Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中において試験を実施する。この溶液を室温で１５分にわたりプレインキュベートした後、アッセイ緩衝液中のＣｙ５−ｐ５３ペプチド０．５μｌ（最終濃度２０ｎＭ）を添加する。１０分にわたり室温でインキュベートした後、プレートを読み取る。試料の測定のために、下記の設定３０を有するＡｎａｌｙｓｔ ＧＴマルチモードマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用する：ダイクロイックミラー３８０ｎｍ、励起３３０ｎｍ、発光ドナー６１５ｎｍおよび発光アクセプター６６５ｎｍ。ＸＬｆｉｔを使用する曲線の当てはめにより、ＩＣ５０値を算出する。明記されていない場合、試薬をＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡから購入している。
本発明に係る好ましいＨＤＭ２阻害剤は、ＨＤＭ２０１、即ち（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン、別名（６Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン
Figure 2021518348
である。
ＨＤＭ２０１は、遊離分子として、溶媒和物（水和物を含む）としてまたは酸バリアントとして存在し得る。溶媒和物は、エタノール溶媒和物（エタノレート）であり得る。酸バリアントは、ＨＤＭ２０１が酸と共に形成する塩、またはＨＤＭ２０１酸錯体、またはＨＤＭ２０１酸共結晶であり得、好ましくは、ＨＤＭ２０１は、共結晶として存在する。好ましくは、酸は、コハク酸である。最も好ましくは、ＨＤＭ２０１は、コハク酸共結晶として存在する。
ＨＤＭ２０１およびその水和物、溶媒和物および酸バリアントならびにこれらの製造方法については、国際公開第２０１３／１１１１０５号パンフレット（例えば、実施例１０２、フォームＡ、ＢおよびＣ）に記載されている。
ＰＤ−１に対する抗体分子
一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＰＤ−１ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国特許出願公開第１４／６０４，４１５号明細書および国際公開第２０１５／１１２９００号パンフレット（両方とも全体として参照により援用される）に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子である。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、重鎖からの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および軽鎖からの３つのＣＤＲを含む、本明細書に記載される抗体、例えばＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−クローン−Ａ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｃ、ＢＡＰ０４９−クローン−ＤまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択されるか；あるいは表１に記載されるとおりのもしくは表１にあるヌクレオチド配列；または前記配列のいずれかと実質的に同一の（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一の）配列によってコードされる抗体からの少なくとも１つの抗原結合領域、例えば可変領域またはその抗原結合断片を含む。
例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に示されるとおりの、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ ＣＤＲ１もしくはＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ超可変ループ１またはこれらの組み合わせを含むことができる。一実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１のＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組み合わせは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨ（配列番号２２４）またはそれと実質的に同一のアミノ酸配列（例えば、１つ以上のアミノ酸変化であるが、２、３または４つ以下の変化（例えば、置換、欠失または挿入、例えば保存的置換）を有する）を含む。抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に示されるとおりの、例えばＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ ＣＤＲ２〜３およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＬ ＣＤＲ１〜３を更に含むことができる。従って、一部の実施形態において、フレームワーク領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．により定義されるＣＤＲと、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．により定義される超可変ループとの組み合わせに基づいて定義される。例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に示されるとおりの、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ超可変ループ１に基づいて定義されるＶＨ ＦＲ１と、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ ＣＤＲ１〜２に基づいて定義されるＶＨ ＦＲ２とを含むことができる。抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＨ ＣＤＲ２〜３に基づいて定義されるＶＨ ＦＲ３〜４と、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によるＶＬ ＣＤＲ１〜３に基づいて定義されるＶＬ ＦＲ１〜４とを更に含むことができる。
本発明の併用におけるプログラム死１（ＰＤ−１）に結合する好ましい抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）は、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅである例示的抗体分子であり、好ましいアミノ酸配列は、本明細書の表１に記載される（ＶＨ：配列番号３８；ＶＬ：配列番号７０）。この特に好ましい抗体分子は、本明細書ではＰＤＲ００１またはスパルタリズマブ（ＩＮＮ）とも称される。
本発明は、増殖性疾患、特にＴＰ５３野生型固形腫瘍の処置のための同時、個別または逐次投与のための、（ａ）プログラム死１（ＰＤ−１）に結合する少なくとも１つの抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）、特に本明細書に記載されるとおりの例示的抗体分子と、（ｂ）化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶などのＨＤＭ２阻害剤とを含む医薬併用に更に関する。
一実施形態において、本発明は、対象の障害、例えば過剰増殖病態または障害（例えば、癌）を処置する（例えば、阻害、低減または改善する）方法を特徴とする。本方法は、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば本明細書に記載される好ましい抗ＰＤ−１抗体分子を約３００ｍｇ〜４００ｍｇの用量で３週間に１回または４週間に１回、ＨＤＭ２阻害剤と併用して対象に投与することを含む。特定の実施形態において、例えば、好ましい抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇの用量で３週間に１回投与される。他の実施形態において、例えば、好ましい抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与される。一部の実施形態において、増殖性障害は、癌である。一部の実施形態において、増殖性障害は、ＴＰ５３野生型腫瘍、詳細にはＴＰ５３野生型固形腫瘍である。
ＴＰ５３野生型と見なされるには、試験薬物の初回投与前３６ヵ月以内に採取された腫瘍試料において最低でも腫瘍にエクソン５、６、７および８に検出される突然変異があってはならない。ＨＤＭ２のゲノム増幅（＞４コピー数として定義される、日付不問）を有するとの過去の証拠書類がある腫瘍について、ＴＰ５３ＷＴ状態の確認は不要である。
一部の実施形態において、増殖性障害は、ＴＰ５３野生型ＲＣＣである。
一部の実施形態において、増殖性障害は、ＴＰ５３野生型ＣＲＣ、詳細にはＭＳＳ ＣＲＣとも称されるマイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）ＣＲＣである。
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば約２５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、約３００ｍｇ〜４００ｍｇ、約２５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ〜４５０ｍｇまたは約３００ｍｇもしくは約４００ｍｇの用量（例えば、フラット用量）で注射（例えば、皮下または静脈内）によって投与される。投与スケジュール（例えば、フラット投与スケジュール）は、例えば、週１回〜２、３、４、５または６週間に１回で異なり得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば例示的抗体分子は、約３００ｍｇ〜４００ｍｇの用量で３週間に１回または４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇの用量で３週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば例示的抗体分子は、約３００ｍｇからの用量で４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば例示的抗体分子は、約４００ｍｇからの用量で３週間に１回投与される。
別の態様において、本発明は、過剰増殖（例えば、癌）細胞の活性（例えば、成長、生存率もしくは生存能または全て）を低下させる方法を特徴とする。本方法は、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体分子を細胞に接触させることを含む。本方法は、対象において、例えばｃ−Ｒａｆ受容体型チロシンキナーゼ阻害剤と併用した治療プロトコルの一環として、例えば約３００ｍｇ〜４００ｍｇの用量の抗ＰＤ−１抗体分子で３週間に１回または４週間に１回実施することができる。特定の実施形態において、用量は、３週間に１回の約３００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子である。他の実施形態において、用量は、４週間に１回の約４００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子である。
別の態様において、本発明は、抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子）を含む組成物（例えば、１つ以上の組成物または投薬形態）を特徴とする。抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子）を含む製剤、例えば投薬製剤およびキット、例えば治療用キットも本明細書に記載される。特定の実施形態において、本組成物または製剤は、３００ｍｇまたは４００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子）を含む。一部の実施形態において、本組成物または製剤は、３週間に１回または４週間に１回投与または使用される。かかる組成物は、多くの場合にＲＣＣまたはＣＲＣの処置のため、特にＲＣＣまたはＭＳＳ ＣＲＣを有する患者を処置するため、ＨＤＭ２阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶と併用して、同時、個別または逐次投与に使用される。
別の態様において、本発明は、ＲＣＣまたはＣＲＣの処置における使用のための抗ＰＤ−１抗体を提供し、ここで、抗ＰＤ−１抗体は、ＨＤＭ２阻害剤と共に個別、同時もしくは逐次投与されるか、またはそうした投与のために調製される。本発明は、ＲＣＣまたはＣＲＣの処置における使用のためのＨＤＭ２阻害剤も提供し、ここで、ＨＤＭ２阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体と共に個別、同時もしくは逐次投与されるか、またはそうした投与のために調製される。
典型的には、抗ＰＤ−１抗体は静脈内投与され、従って好ましくは経口投与されるＨＤＭ２阻害剤とは個別にまたは逐次的に投与される。ＨＤＭ２阻害剤および抗ＰＤ−１抗体の投与の好適な方法、経路、投薬量および頻度については、本明細書に記載される。
本明細書に開示される併用は、単一の組成物で一緒に投与することができるか、または２つ以上の異なる組成物、例えば本明細書に記載されるとおりの組成物もしくは投薬形態で個別に投与することができる。治療用薬剤の投与は、いかなる順序でもあり得る。第１の薬剤と追加の薬剤（例えば、第２および第３の薬剤）とは、同じ投与経路によって投与されるかまたは異なる投与経路によって投与され得る。
本明細書に記載される医薬併用、詳細には本発明の医薬併用は、２つ以上の別個の投薬形態として同時、個別または逐次投与される自由併用製品、即ち２つ以上の活性成分、例えば化合物Ａと、本明細書に記載される例示的抗体分子（抗体Ｂ）との併用であり得る。
自由併用製品は、（ａ）単一のパッケージまたはキットに一緒に包装された２つ以上の個別の薬物製品であり得るか、または（ｂ）その表示によれば他の個々に指定される薬物と併せた使用に限られる個別に包装された薬物製品であって、各薬物は、その使用目的、指示または効果の達成に必要である、薬物製品であり得る。
本発明は、（ａ）１つ以上の投薬量単位のＨＤＭ２阻害剤化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩と、（ｂ）１つ以上の投薬量単位の、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体とを含む併用製剤も提供する。
更なる実施形態において、本発明は、特に増殖性疾患、特に癌を処置する方法に関する。一実施形態において、本発明は、増殖性疾患、特に癌の処置用薬物の調製のための本発明の併用の使用に関する。一実施形態において、本発明の併用は、増殖性疾患、特に癌の処置用薬物の調製における使用のためのものである。
本発明は、本明細書に記載される医薬併用、例えば（ａ）化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶と、（ｂ）表１に記載されるとおりのＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ならびに以下の表１に記載されるとおりのＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトプログラム死−１（ＰＤ−１）への結合能を有する単離抗体分子とを含む、ＴＰ５３野生型固形腫瘍の処置における使用のための医薬併用も提供する。
併用療法の使用
本明細書に開示される併用は、抗原提示の増加、エフェクター細胞機能（例えば、Ｔ細胞増殖、ＩＦＮ−γ分泌または細胞溶解機能の１つ以上）の増加、調節性Ｔ細胞機能の阻害、調節性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞およびＮＫ細胞などの複数の細胞型の活性に対する効果）、腫瘍浸潤リンパ球の増加、Ｔ細胞受容体媒介性増殖の増加および癌性細胞による免疫回避の低下の１つ以上を生じさせることができる。一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤を併用で使用すると、ＰＤ−１の１つ以上の活性が阻害されるか、減少するかまたは中和され、免疫チェックポイントの遮断または減少が生じる。従って、対象の免疫応答を増強することが望ましい障害を、かかる併用を用いて処置または予防することができる。
従って、別の態様において、対象の免疫応答をモジュレートする方法が提供される。本方法は、本明細書に開示される併用（例えば、治療有効量の抗ＰＤ−１抗体分子と、治療有効量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶とを含む併用）を対象に投与することを含み、それにより対象の免疫応答がモジュレートされる。一実施形態において、抗体分子は、対象の免疫応答を増強するか、刺激するかまたは増加させる。対象は、哺乳類、例えば霊長類、好ましくは高等霊長類、例えばヒト（例えば、本明細書に記載される障害を有するかまたはそれを有するリスクがある患者）であり得る。一実施形態において、対象は、免疫応答の増強を必要としている。一実施形態において、対象は、本明細書に記載される障害、例えば本明細書に記載されるとおりの癌または感染性障害を有するかまたはそれを有するリスクがある。特定の実施形態において、対象は、免疫無防備状態であるかまたはそうであるリスクがある。例えば、対象は、化学療法処置および／または放射線療法を受けているかまたはそれを受けたことがある。代わりにまたは組み合わせにおいて、対象は、感染の結果として免疫無防備状態であるかまたはそうであるリスクがある。
一態様において、ＴＰ５３野生型である固形腫瘍、詳細にはＲＣＣまたはＣＲＣである増殖性疾患を処置する（例えば、低減するか、阻害するかまたはその進行を遅延させることの１つ以上の）方法である。別の態様において、対象におけるＴＰ５３野生型である固形腫瘍、詳細にはＲＣＣまたはＣＲＣである増殖性疾患を処置する（例えば、低減するか、阻害するかまたはその進行を遅延させることの１つ以上の）方法が提供される。本方法は、本明細書に開示される併用（例えば、治療有効量の抗ＰＤ−１抗体分子と治療有効量の化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶とを含む併用）を対象に投与することを含む。
本明細書に記載されるとおりの併用は、対象に全身的に（例えば、経口的に、非経口的に、皮下に、静脈内に、経直腸的に、筋肉内に、腹腔内に、鼻腔内に、経皮的にまたは吸入もしくは腔内導入により）、局所的にまたは鼻、咽頭および気管支などの粘膜への適用により投与することができる。
投薬量および治療レジメン
本明細書に開示される治療用薬剤の投薬量および治療レジメンは、当業者が決定し得る。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇの用量で注射（例えば、皮下または静脈内）によって投与される。投与スケジュールは、例えば、週１回〜２、３または４週間に１回で異なり得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間おきに投与される。
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば約２５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、約３００ｍｇ〜４００ｍｇ、約２５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ〜４５０ｍｇまたは約３００ｍｇもしくは約４００ｍｇの用量（例えば、フラット用量）で注射（例えば、皮下または静脈内）によって投与される。投与スケジュール（例えば、フラット投与スケジュール）は、例えば、週１回〜２、３、４、５または６週間に１回で異なり得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇ〜４００ｍｇの用量で３週間に１回または４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇの用量で３週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇの用量で４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で３週間に１回投与される。
化合物Ａの総１日用量は、単回用量で（即ち１日１回）または１日２回投与され得る。例えば、化合物Ａは、１２００ｍｇの用量で１日１回または４００ｍｇで１日２回投与され得る。
化合物ＡであるＨＤＭ２阻害剤は、４週間処置サイクルの１日目および８日目に約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０ｍｇの１日用量で投与され得、好ましい抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で３週間に１回投与される。
化合物ＡであるＨＤＭ２阻害剤は、４週間処置サイクルの１日目および８日目に約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０ｍｇの１日用量で投与され得、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与される。
化合物Ａは、詳細には、４週間処置サイクルの１日目および８日目に約４０、６０、８０、１００、１２０ｍｇの１日用量で１日１回（ＱＤ）投与され得る。
好ましい実施形態において、例示的抗ＰＤ−１分子は、４００ｍｇの用量で４週間に１回投与され得、化合物Ａは、４週間処置サイクルの１日目および８日目に６０、８０、１００または１２０ｍｇの１日用量で投与され得る。
更なる併用療法
本明細書に記載される方法および併用は、他の薬剤または治療モダリティと組み合わせて用いることができる。一実施形態において、本明細書に記載される方法は、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体分子を薬剤または治療手技もしくはモダリティとの組み合わせで含む併用を障害の処置または予防に有効な量で対象に投与することを含む。抗ＰＤ−１抗体分子と、薬剤または治療手技もしくはモダリティとは、任意の順序で同時または逐次投与することができる。抗ＰＤ−１抗体分子と、他の治療用薬剤、手技またはモダリティ（例えば、本明細書に記載されるとおりの）との任意の組み合わせおよび順序を用いることができる。抗体分子および／または他の治療用薬剤、手技またはモダリティは、障害が活動期にある間または寛解期もしくは疾患が低活動期にある間に投与することができる。抗体分子は、他の処置前、処置と同時、処置後または障害の寛解中に投与することができる。
特定の実施形態において、本明細書に記載される方法および組成物は、他の抗体分子、化学療法、他の抗癌療法（例えば、標的抗癌療法、遺伝子療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、骨髄移植、ナノ療法もしくは腫瘍崩壊性薬物）、細胞傷害性薬剤、免疫ベースの療法（例えば、サイトカインもしくは細胞ベースの免疫療法）、外科手技（例えば、乳腺腫瘍摘出術もしくは乳房切除術）もしくは放射線手技の１つ以上または前述のいずれかの組み合わせと併用して投与される。追加の治療は、アジュバントまたはネオアジュバント療法の形態であり得る。一部の実施形態において、追加の治療は、酵素阻害剤（例えば、小分子酵素阻害剤）または転移阻害剤である。併用して投与することのできる例示的細胞傷害性薬剤としては、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、インターカレート剤、シグナル伝達経路への干渉能を有する薬剤、アポトーシスを促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤および放射線照射（例えば、局所または全身照射（例えば、ガンマ線照射）が挙げられる。他の実施形態において、追加の治療は、外科手術もしくは放射線照射またはこれらの組み合わせである。他の実施形態において、追加の治療は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路の１つ以上を標的化する治療、ＨＳＰ９０阻害剤またはチューブリン阻害剤である。
代わりにまたは前記併用と組み合わせて、本明細書に記載される方法および組成物は、免疫調節薬（例えば、共刺激分子の活性化剤または抑制分子、例えば免疫チェックポイント分子の阻害剤）；ワクチン、例えば治療用癌ワクチン；または他の形態の細胞免疫療法の１つ以上と併用して投与することができる。
一実施形態において、本明細書に開示される併用、例えば抗ＰＤ−１抗体分子を含む併用は、肺癌、例えば非小細胞肺癌を処置するため化学療法と併用して使用される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、肺癌を処置するため、標準的な肺、例えばＮＳＣＬＣ化学療法、例えばプラチナダブレット療法と共に使用される。癌は、初期、中期または後期であり得る。
一実施形態において、本明細書に開示される併用、例えば抗ＰＤ−１抗体分子を含む併用は、皮膚癌、例えば黒色腫を処置するため化学療法と併用して使用される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、皮膚癌を処置するため、標準的な皮膚、例えば黒色腫化学療法、例えばプラチナダブレット療法と共に使用される。癌は、初期、中期または後期であり得る。
抗ＰＤ−１抗体分子と他の治療用薬剤、手技またはモダリティ（例えば、本明細書に記載されるとおりの）との任意の組み合わせおよび順序を用いることができる。抗体分子および／または他の治療用薬剤、手技またはモダリティは、障害が活動期にある間または寛解期もしくは疾患が低活動期にある間に投与することができる。抗体分子は、他の処置前、処置と同時、処置後または障害の寛解中に投与することができる。
本明細書では、少なくとも一部には、プログラム死１（ＰＤ−１）に高い親和性および特異性で結合する抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）が開示される。この抗体分子をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞およびこの抗体分子の作製方法も提供される。この抗体分子を含む医薬組成物および投与製剤も提供される。本明細書に開示される抗ＰＤ−１抗体分子は、癌性障害（例えば、固形腫瘍および軟部組織腫瘍）などの障害の処置、予防および／または診断に（単独でまたは他の薬剤もしくは治療モダリティと併用して）使用することができる。従って、ＰＤ−１を検出するための組成物および方法ならびに抗ＰＤ−１抗体分子を使用して癌を含めた様々な障害を処置する方法が本明細書に開示される。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、フラット用量または固定用量で投与または使用される。
定義
以下においてかつ本願全体を通じて、更なる用語を定義する。
本明細書で使用されるとき、冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の指示対象の１つまたは２つ以上（例えば、少なくとも１つ）を指す。
用語「または」は、本明細書では、文脈上特に明らかに指示されない限り、用語「および／または」を意味して使用され、かつそれと同義的に使用される。
「約」および「近似的に」は、概して、測定の性質または精度を所与として測定された分量についての許容できる誤差の程度を意味するものとする。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には１０％以内およびより典型的には５％以内である。
「併用」または「〜と併用して」とは、その療法または治療用薬剤を同じ時点で投与しなければならず、かつ／または一緒に送達するために製剤化しなければならないことを含意するように意図するものではないが、しかし、そうした送達方法は、本明細書に記載される範囲内にある。本併用における治療用薬剤は、１つ以上の他の追加の療法または治療用薬剤と同時、その前またはその後に投与することができる。治療用薬剤または療法プロトコルは、いかなる順序でも投与することができる。一般に、各薬剤は、その薬剤について決められた用量および／またはタイムスケジュールで投与されることになる。更に、この併用に利用される追加の治療用薬剤は、単一の組成物で一緒に投与されるかまたは異なる組成物で個別に投与され得ることが理解されるであろう。一般に、併用に利用される追加の治療用薬剤は、それが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが予想される。一部の実施形態において、併用に利用されるレベルは、個々に利用されるレベルよりも低くなるであろう。
実施形態において、追加の治療用薬剤は、治療量または治療量未満で投与される。特定の実施形態において、阻害、例えば成長阻害を実現するために必要な第２の治療用薬剤の濃度は、第２の治療用薬剤が第１の治療用薬剤、例えば抗ＰＤ−１抗体分子と併用して投与される場合、第２の治療用薬剤が個々に投与される場合よりも低い。特定の実施形態において、阻害、例えば成長阻害を実現するために必要な第１の治療用薬剤の濃度は、第１の治療用薬剤が第２の治療用薬剤と併用して投与される場合、第１の治療用薬剤が個々に投与される場合よりも低い。特定の実施形態において、併用療法では、阻害、例えば成長阻害を実現するために必要な第２の治療用薬剤の濃度は、単剤療法としての第２の治療用薬剤の治療量よりも低く、例えば１０〜２０％、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％または８０〜９０％低い。特定の実施形態において、併用療法では、阻害、例えば成長阻害を実現するために必要な第１の治療用薬剤の濃度は、単剤療法としての第１の治療用薬剤の治療量よりも低く、例えば１０〜２０％、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％または８０〜９０％低い。
用語「阻害」、「阻害剤」または「アンタゴニスト」は、例えば、免疫チェックポイント阻害剤など、所与の分子の特定のパラメータ、例えば活性の低下を含む。例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％またはそれを超える活性、例えばＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性の阻害がこの用語に含まれる。従って、阻害は、１００％である必要はない。
用語「活性化」、「活性化剤」または「アゴニスト」は、所与の分子、例えば共刺激分子の特定のパラメータ、例えば活性の増加を含む。例えば、少なくとも５％、１０％、２５％、５０％、７５％またはそれを超える活性、例えば共刺激活性の増加がこの用語に含まれる。
用語「癌」は、異常細胞の急激な無制御の成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的にまたは血流およびリンパ系を通じて体の他の部位に広がり得る。本明細書で使用されるとき、用語「癌」または「腫瘍」には、前悪性ならびに悪性の癌および腫瘍が含まれる。
本明細書で使用されるとき、用語「処置する」、「処置」および「処置している」は、１つ以上の療法の投与によってもたらされる、障害、例えば増殖性障害の進行、重症度および／もしくは持続期間の低減もしくは改善または障害の１つ以上の症状（好ましくは１つ以上の認識できる症状）の改善を指す。具体的な実施形態において、用語「処置する」、「処置」および「処置している」は、必ずしも患者が認識できるとは限らない、腫瘍の成長など、増殖性障害の少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善を指す。他の実施形態において、用語「処置する」、「処置」および「処置している」は、例えば、認識できる症状の安定化による物理的な、例えば物理的パラメータの安定化による生理学的なまたは両方のいずれかの増殖性障害の進行の阻害を指す。他の実施形態において用語「処置する」、「処置」および「処置している」は、腫瘍サイズまたは癌性細胞数の減少または安定化を指す。
用語「単離された」は、本明細書で使用されるとき、その元のまたは在来の環境（例えば、それが天然に存在する場合には自然環境）から取り出されている材料を指す。例えば、生きている動物に認められる天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されていないが、自然系で共存する材料の一部または全てから人間の介入によって分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。かかるポリヌクレオチドは、ベクターの一部であることもあり、かつ／またはかかるポリヌクレオチドもしくはポリペプチドは、組成物の一部であることもあり、かかるベクターまたは組成物が、自然中においてそれが見られる環境の一部でない点でなおも単離されている。
本発明の様々な態様を以下に更に詳細に説明する。本明細書全体を通じて更なる定義が示される。
抗体分子
一実施形態において、抗体分子は、哺乳類、例えばヒトＰＤ−１に結合する。例えば、抗体分子は、ＰＤ−１上のエピトープ、例えば線状または立体エピトープ（例えば、本明細書に記載されるとおりのエピトープ）に特異的に結合する。
本明細書で使用されるとき、用語「抗体分子」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖またはその断片を指す。用語「抗体分子」には、例えば、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）が含まれる。ある実施形態において、抗体分子は、完全長抗体または完全長免疫グロブリン鎖を含む。ある実施形態において、抗体分子は、完全長抗体または完全長免疫グロブリン鎖の抗原結合断片または機能性断片を含む。ある実施形態において、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対して結合特異性を有し、かつ複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対して結合特異性を有する。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列とによって特徴付けられる。
ある実施形態において、抗体分子は、単一特異性抗体分子であり、単一のエピトープに結合する。例えば、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を有し、その各々が同じエピトープに結合する単一特異性抗体分子である。
ある実施形態において、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対して結合特異性を有し、かつ複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対して結合特異性を有する。ある実施形態において、第１および第２のエピトープは、同じ抗原上、例えば同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態において、第１および第２のエピトープは、オーバーラップしている。ある実施形態において、第１および第２のエピトープは、オーバーラップしていない。ある実施形態において、第１および第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、第３、第４または第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子または四重特異性抗体分子である。
ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列とによって特徴付けられる。ある実施形態において、第１および第２のエピトープは、同じ抗原上、例えば同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態において、第１および第２のエピトープは、オーバーラップしている。ある実施形態において、第１および第２のエピトープは、オーバーラップしていない。ある実施形態において、第１および第２のエピトープは、異なる抗原上、例えば異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列とを含む。ある実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体とを含む。ある実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体またはその断片と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体またはその断片とを含む。ある実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖまたはその断片と、第２のエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖまたはその断片とを含む。ある実施形態において、第１のエピトープは、ＰＤ−１上に位置し、かつ第２のエピトープは、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２上に位置する。
ある実施形態において、抗体分子には、ダイアボディおよび単鎖分子ならびに抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ）が含まれる。例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列（本明細書ではＶＨと省略する）と、軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列（本明細書ではＶＬと省略する）とを含み得る。ある実施形態において、抗体分子は、重鎖と軽鎖とを含むかまたはそれからなる（本明細書において半抗体と称される）。別の例において、抗体分子は、２つの重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列と、２つの軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列とを含み、それにより２つの抗原結合部位、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、シングル可変ドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二重特異性）およびキメラ（例えば、ヒト化）抗体などを形成し、これらは、全抗体の修飾によって作製され得るか、または組換えＤＮＡ技術を用いてデノボ合成されたものであり得る。これらの機能性抗体断片は、そのそれぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持している。抗体および抗体断片は、限定はされないが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含め、任意の抗体クラスおよび抗体の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）であり得る。抗体分子の製剤は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体分子は、ヒト、ヒト化、ＣＤＲグラフトまたはインビトロ生成抗体でもあり得る。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有し得る。抗体は、例えば、κまたはλから選択される軽鎖も有し得る。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書では用語「抗体」と同義的に使用される。
抗体分子の抗原結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）断片；（ｖｉ）ラクダ科動物またはラクダ科動物化可変ドメイン；（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、例えばＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）；（ｖｉｉｉ）シングルドメイン抗体が挙げられる。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を用いて入手され、および断片は、有用性に関してインタクトな抗体と同じようにスクリーニングされる。
用語「抗体」には、インタクトな分子およびその機能性断片が含まれる。抗体の定常領域は、抗体の特性が修飾されるように（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能の１つ以上が増加または減少するように）変化させる、例えば突然変異させることができる。
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲまたはＦＷ）と呼ばれるより保存されている領域が間に散在する「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性領域に更に分けることができる。
フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、幾つもの方法によって正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；およびＯｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェアによって使用されるＡｂＭ定義を参照されたい。概略的には、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。
用語「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」は、本明細書で使用されるとき、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内にあるアミノ酸配列を指す。一般に、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）および各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。
所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）によって記載されるものを含め、幾つもの周知のスキームのいずれかを用いて決定することができる。本明細書で使用されるとき、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号スキームにより定義されるＣＤＲは、ときに「超可変ループ」と称されることもある。
例えば、Ｋａｂａｔに基づけば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基は、３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基は、２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａに基づけば、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は、２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５６（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；およびＶＬのアミノ酸残基は、２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）および９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることにより、ＣＤＲは、ヒトＶＨのアミノ酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）ならびにヒトＶＬのアミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）からなる。
概して、具体的に指示されない限り、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に記載される、１つ以上のＫａｂａｔ ＣＤＲおよび／またはＣｈｏｔｈｉａ超可変ループの任意の組み合わせを含み得る。一実施形態において、表１に記載される抗ＰＤ−１抗体分子には、以下の定義：ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方を組み合わせたＣＤＲ定義によるＨＣＤＲ１ならびにＫａｂａｔのＣＤＲ定義によるＨＣＣＤＲ２〜３およびＬＣＣＤＲ１〜３が用いられる。いずれの定義においても、各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４に並んだ３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。
本明細書で使用されるとき、「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成し得るアミノ酸配列を指す。例えば、この配列は、天然に存在する可変ドメインのアミノ酸配列の全てまたは一部を含み得る。例えば、この配列は、１つ、２つもしくはそれを超えるＮ末端もしくはＣ末端アミノ酸を含むことももしくは含まないこともあるか、またはタンパク質構造の形成と適合性のある他の変化を含み得る。
用語「抗原結合部位」は、ＰＤ−１ポリペプチドまたはそのエピトープに結合する接合部分を形成する決定基を含む抗体分子の一部を指す。タンパク質（またはタンパク質模倣体）に関して、抗原結合部位は、典型的には、ＰＤ−１ポリペプチドに結合する接合部分を形成する（少なくとも４つのアミノ酸またはアミノ酸模倣体の）１つ以上のループを含む。典型的には、抗体分子の抗原結合部位は、少なくとも１つもしくは２つのＣＤＲおよび／もしくは超可変ループまたはより典型的には少なくとも３、４、５もしくは６つのＣＤＲおよび／もしくは超可変ループを含む。
用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、本明細書で使用されるとき、単一分子組成の抗体分子の製剤を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によるか、またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え方法）によって作製することができる。
ヒト化またはＣＤＲグラフト抗体は、少なくとも１つまたは２つ、しかし概して３つ全てのレシピエントＣＤＲ（重鎖および／または軽鎖免疫グロブリン鎖の）がドナーＣＤＲによって置き換えられたものを有することになる。抗体は、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部分によって置き換えられ得るか、またはＣＤＲの一部のみが非ヒトＣＤＲによって置き換えられ得る。ヒト化抗体がＰＤ−１に結合するのに必要な数のＣＤＲを置き換えるのみでよい。好ましくは、ドナーがげっ歯類抗体、例えばラットまたはマウス抗体となり、レシピエントがヒトフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークとなるであろう。典型的には、ＣＤＲを提供する免疫グロブリンが「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供する免疫グロブリンが「アクセプター」と呼ばれる。一実施形態において、ドナー免疫グロブリンは、非ヒト（例えば、げっ歯類）である。アクセプターフレームワークは、天然に存在する（例えば、ヒト）フレームワークもしくはンセンサスフレームワークまたはそれと約８５％以上、好ましくは９０％、９５％、９９％以上同一の配列である。
例示的ＰＤ−１阻害剤
ＰＤ−１は、例えば、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞、ＴｒｅｇおよびＢ細胞上に発現するＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーメンバーである。これは、エフェクターＴ細胞シグナル伝達および機能を負に調節する。ＰＤ−１は、腫瘍浸潤Ｔ細胞上に誘導され、機能枯渇または機能不全をもたらし得る（Ｋｅｉｒ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７−７０４；Ｐａｒｄｏｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １２（４）：２５２−６４）。ＰＤ−１は、その２つのリガンド、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）またはプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）のいずれか一方に結合すると共抑制シグナルを送出する。ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、上皮細胞、血管内皮細胞を含めた幾つもの細胞型および多くの腫瘍型に発現する。マウスおよびヒト腫瘍におけるＰＤ−Ｌ１の高発現が種々の癌における臨床転帰不良と関係付けられている（Ｋｅｉｒ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７−７０４；Ｐａｒｄｏｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １２（４）：２５２−６４）。ＰＤ−Ｌ２は、樹状細胞、マクロファージおよび一部の腫瘍に発現する。癌免疫療法に向けてＰＤ−１経路の遮断についての前臨床および臨床検証が行われている。前臨床試験および臨床試験の両方で、抗ＰＤ−１遮断がエフェクターＴ細胞の活性を回復させることができ、ロバストな抗腫瘍応答をもたらすことが実証されている。例えば、ＰＤ−１経路の遮断は、枯渇した／機能不全のエフェクターＴ細胞機能（例えば、増殖、ＩＦＮ−γ分泌または細胞溶解機能）を回復させ、かつ／またはＴｒｅｇ細胞機能を阻害することができる（Ｋｅｉｒ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７−７０４；Ｐａｒｄｏｌｌ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １２（４）：２５２−６４）。ＰＤ−１経路の遮断は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／もしくはＰＤ−Ｌ２の抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドによって達成することができる。
本明細書で使用されるとき、用語「プログラム死１」または「ＰＤ−１」には、アイソフォーム、哺乳類、例えばヒトＰＤ−１、ヒトＰＤ−１の種ホモログおよびＰＤ−１との少なくとも１つの共通エピトープを含む類似体が含まれる。ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のアミノ酸配列は、当技術分野において公知である。例えば、Ｓｈｉｎｏｈａｒａ Ｔ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ２３（３）：７０４−６；Ｆｉｎｇｅｒ ＬＲ，ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ（１９９７）１９７（１−２）：１７７−８７。
本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載される方法において、単独でまたは本明細書に記載される１つ以上の追加の薬剤と併用して使用することができる。特定の実施形態において、本明細書に記載される併用は、本明細書に記載されるとおりのＰＤ−１阻害剤、例えば抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）を含む。
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ａ）配列番号４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｂ）配列番号１から選択されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１０のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃ）配列番号４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｄ）配列番号１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１０のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ
を含む。
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ａ）配列番号４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｂ）配列番号１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１０のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃ）配列番号２２４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｄ）配列番号２２４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１０のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ
を含む。
特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ｉ）配列番号１、配列番号４または配列番号２２４から選択されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）配列番号１０のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、
（ｉ）配列番号１、配列番号４または配列番号２２４から選択されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）配列番号１３のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
前記抗体分子の実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。更に他の実施形態において、配列番号２２４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列である。
実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１４７、１５１、１５３、１５７、１６０、１６２、１６６または１６９のいずれかのアミノ酸配列あるいはそれと少なくとも９０％同一の、または配列番号１４７、１５１、１５３、１５７、１６０、１６２、１６６もしくは１６９のいずれかのアミノ酸配列と比較して２つ以下のアミノ酸置換、挿入もしくは欠失を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１つのフレームワーク（ＦＷ）領域を含む重鎖可変領域を有する。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１４７、１５１、１５３、１５７、１６０、１６２、１６６または１６９のいずれかのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を有する。
更に他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１４７、１５１、１５３、１５７、１６０、１６２、１６６または１６９のいずれかのアミノ酸配列を含む少なくとも２、３または４つのフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を有する。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１４７または１５１のＶＨＦＷ１アミノ酸配列、配列番号１５３、１５７または１６０のＶＨＦＷ２アミノ酸配列および配列番号１６２または１６６のＶＨＦＷ３アミノ酸配列を含み、かつ任意選択で配列番号１６９のＶＨＦＷ４アミノ酸配列を更に含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４、１７７、１８１、１８３、１８５、１８７、１９１、１９４、１９６、２００、２０２、２０５または２０８のいずれかのアミノ酸配列あるいはそれと少なくとも９０％同一の、または１７４、１７７、１８１、１８３、１８５、１８７、１９１、１９４、１９６、２００、２０２、２０５もしくは２０８のいずれかのアミノ酸配列と比較して２つ以下のアミノ酸置換、挿入もしくは欠失を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１つのフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を有する。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４、１７７、１８１、１８３、１８５、１８７、１９１、１９４、１９６、２００、２０２、２０５または２０８のいずれかのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を有する。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４、１７７、１８１、１８３、１８５、１８７、１９１、１９４、１９６、２００、２０２、２０５または２０８のいずれかのアミノ酸配列を含む少なくとも２、３または４つのフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を有する。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１７４、１７７、１８１、１８３または１８５のＶＬＦＷ１アミノ酸配列、配列番号１８７、１９１または１９４のＶＬＦＷ２アミノ酸配列および配列番号１９６、２００、２０２または２０５のＶＬＦＷ３アミノ酸配列を含み、かつ任意選択で配列番号２０８のＶＬＦＷ４アミノ酸配列を更に含む。
他の実施形態において、前記抗体は、配列番号３８、５０、８２または８６のいずれかと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８、５０、８２または８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４または７８のいずれかと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４または７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５２または配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）から選択される。
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、κまたはλの軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による２２８位または配列番号２１２もしくは２１４の１０８位に突然変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による２２８位または配列番号２１２もしくは２１４の１０８位にセリンからプロリンへの突然変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による２９７位または配列番号２１６の１８０位にアスパラギンからアラニンへの突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による２６５位または配列番号２１７の１４８位にアスパラギン酸からアラニンへの突然変異およびＥＵ付番による３２９位または配列番号２１７の２１２位にプロリンからアラニンへの突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＥＵ付番による２３４位または配列番号２１８の１１７位にロイシンからアラニンへの突然変異およびＥＵ付番による２３５位または配列番号２１８の１１８位にロイシンからアラニンへの突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域とκ軽鎖定常領域とを含む。
他の実施形態において、前記抗体分子は、約０．２ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でヒトＰＤ−１に結合する能力を有する。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、約０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭまたは０．０２ｎＭ未満、例えば約０．１３ｎＭ〜０．０３ｎＭ、例えば約０．０７７ｎＭ〜０．０８８ｎＭ、例えば約０．０８３ｎＭのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する。
他の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、約０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭまたは０．０２ｎＭ未満、例えば約０．１１ｎＭ〜０．０８ｎＭ、例えば約０．０９３ｎＭのＫＤでカニクイザルＰＤ−１に結合する。
特定の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、ヒトＰＤ−１およびカニクイザルＰＤ−１の両方に、同様の、例えばｎＭ範囲のＫＤで結合する。一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定したとき、約０．１ｎＭ、０．０７５ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭまたは０．０１ｎＭ未満、例えば約０．０４ｎＭのＫＤでヒトＰＤ−１−Ｉｇ融合タンパク質に結合する。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定したとき、約０．１ｎＭ、０．０７５ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭまたは０．０１ｎＭ未満、例えば約０．０６ｎＭのＫＤでヒトＰＤ−１を発現するジャーカット細胞（例えば、ヒトＰＤ−１トランスフェクトジャーカット細胞）に結合する。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定したとき、約１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭまたは０．１ｎＭ未満、例えば約０．４ｎＭのＫＤでカニクイザルＴ細胞に結合する。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定したとき、約１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭまたは０．０１ｎＭ未満、例えば約０．６ｎＭのＫＤでカニクイザルＰＤ−１を発現する細胞（例えば、カニクイザルＰＤ−１をトランスフェクトした細胞）に結合する。
特定の実施形態において、前記抗体分子はマウスまたはラットＰＤ−１と交差反応性でない。他の実施形態において、前記抗体は、アカゲザルＰＤ−１と交差反応性である。例えば、交差反応性は、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）を用いてＢｉａｃｏｒｅ法または結合アッセイによって測定することができる。他の実施形態において、前記抗体分子は、ＰＤ−１の細胞外Ｉｇ様ドメインに結合する。
他の実施形態において、前記抗体分子は、ＰＤ−１によるＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２もしくは両方またはＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２もしくは両方を発現する細胞への結合を低下させる能力を有する。一部の実施形態において、前記抗体分子は、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）へのＰＤ−Ｌ１結合を約１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．８ｎＭ、０．６ｎＭ、０．４ｎＭ、０．２ｎＭまたは０．１ｎＭ未満、例えば約０．７９ｎＭ〜約１．０９ｎＭ、例えば約０．９４ｎＭまたは約０．７８ｎＭ以下、例えば約０．３ｎＭのＩＣ５０で低下させる（例えば、遮断する）。一部の実施形態において、前記抗体は、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）へのＰＤ−Ｌ２結合を約２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭまたは０．２ｎＭ未満、例えば約１．０５ｎＭ〜約１．５５ｎＭまたは約１．３ｎＭ以下、例えば約０．９ｎＭのＩＣ５０で低下させる（例えば、遮断する）。
他の実施形態において、前記抗体分子は、抗原特異的Ｔ細胞応答を増強する能力を有する。
実施形態において、抗体分子は、単一特異性抗体分子または二重特異性抗体分子である。実施形態において、抗体分子は、ＰＤ−１に対する第１の結合特異性と、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する第２の結合特異性とを有する。実施形態において、抗体分子は、抗体の抗原結合断片、例えば半抗体または半抗体の抗原結合断片を含む。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＳＥＢ Ｔ細胞活性化アッセイまたはヒト全血エキソビボアッセイで測定したとき、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）（例えば、２５μｇ／ｍＬ）によって活性化された細胞からのＩＬ−２の発現を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用した場合のＩＬ−２の発現と比較して少なくとも約２、３、４、５倍、例えば約２〜３倍、例えば約２〜２．６倍、例えば約２．３倍増加させる。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定したとき、抗ＣＤ３（例えば、０．１μｇ／ｍＬ）によって刺激されたＴ細胞からのＩＦＮ−γの発現を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用した場合のＩＦＮ−γの発現と比較して少なくとも約２、３、４、５倍、例えば約１．２〜３．４倍、例えば約２．３倍増加させる。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定したとき、ＳＥＢ（例えば、３ｐｇ／ｍＬ）によって活性化されたＴ細胞からのＩＦＮ−γの発現を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用した場合のＩＦＮ−γの発現と比較して少なくとも約２、３、４、５倍、例えば約０．５〜４．５倍、例えば約２．５倍増加させる。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定したとき、ＣＭＶペプチドで活性化されたＴ細胞からのＩＦＮ−γの発現を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用した場合のＩＦＮ−γの発現と比較して少なくとも約２、３、４、５倍、例えば約２〜３．６倍、例えば約２．８倍増加させる。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、少なくともｎ回（例えば、ｎ＝２または４）の細胞分裂を経過したＣＤ８＋ Ｔ細胞の割合によって測定したとき、ＣＭＶペプチドで活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用した場合のＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖と比較して少なくとも約１、２、３、４、５倍、例えば約１．５倍増加させる。
特定の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、サルで測定したとき、約１００μｇ／ｍＬ〜約５００μｇ／ｍＬ、約１５０μｇ／ｍＬ〜約４５０μｇ／ｍＬ、約２５０μｇ／ｍＬ〜約３５０μｇ／ｍＬまたは約２００μｇ／ｍＬ〜約４００μｇ／ｍＬ、例えば約２９２．５μｇ／ｍＬのＣｍａｘを有する。
特定の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、サルで測定したとき、約２５０時間〜約６５０時間、約３００時間〜約６００時間、約３５０時間〜約５５０時間または約４００時間〜約５００時間、例えば約４６５．５時間のＴ１／２を有する。
一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、５×１０−４、１×１０−４、５×１０−５または１×１０−５ｓ−１、例えば約２．１３×１０−４ｓ−１よりも遅いＫｄでＰＤ−１に結合する。一部の実施形態において、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したとき、１×１０４、５×１０４、１×１０５または５×１０５Ｍ−１ｓ−１、例えば約２．７８×１０５Ｍ−１ｓ−１よりも速いＫａでＰＤ−１に結合する。
一部の実施形態において、前記抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＤ−１のＣ鎖、ＣＣ’ループ、Ｃ’鎖およびＦＧループの範囲内にある１つ以上の残基に結合する。ＰＤ−１のドメイン構造については、例えば、Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ １ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１３，２８８：１１７７１−１１７８５に記載されている。Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．に記載されるとおり、Ｃ鎖は、残基Ｆ４３〜Ｍ５０を含み、ＣＣ’ループは、Ｓ５１〜Ｎ５４を含み、Ｃ’鎖は、残基Ｑ５５〜Ｆ６２を含み、かつＦＧループは、残基Ｌ１０８〜Ｉ１１４を含む（アミノ酸付番は、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．、前掲による）。従って、一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１の範囲Ｆ４３〜Ｍ５０、Ｓ５１〜Ｎ５４、Ｑ５５〜Ｆ６２およびＬ１０８〜Ｉ１１４の１つ以上にある少なくとも１つの残基に結合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されるとおりの抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１の範囲Ｆ４３〜Ｍ５０、Ｓ５１〜Ｎ５４、Ｑ５５〜Ｆ６２およびＬ１０８〜Ｉ１１４の２つ、３つまたは４つ全てにある少なくとも１つの残基に結合する。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の一方または両方に対する結合部位の一部でもあるＰＤ−１の残基に結合する。
別の態様において、本発明は、前記抗体分子のいずれかをコードする単離核酸分子、そのベクターおよび宿主細胞を提供する。
任意の前記抗体分子の抗体重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域または両方をコードする単離核酸も提供される。
一実施形態において、単離核酸は、重鎖ＣＤＲ１〜３をコードし、ここで、前記核酸は、配列番号１０８〜１１２、２２３、１２２〜１２６、１３３〜１３７または１４４〜１４６のヌクレオチド配列を含む。
別の実施形態において、単離核酸は、軽鎖ＣＤＲ１〜３をコードし、ここで、前記核酸は、配列番号１１３〜１２０、１２７〜１３２または１３８〜１４３のヌクレオチド配列を含む。
他の実施形態において、前記核酸は、重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号３９、５１、８３、８７、９０、９５または１０１のいずれかと少なくとも８５％同一である。
他の実施形態において、前記核酸は、重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号３９、５１、８３、８７、９０、９５または１０１のいずれかを含む。
他の実施形態において、前記核酸は、重鎖をコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号４１、５３、８５、８９、９２、９６または１０３のいずれかと少なくとも８５％同一である。
他の実施形態において、前記核酸は、重鎖をコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号４１、５３、８５、８９、９２、９６または１０３のいずれかを含む。
他の実施形態において、前記核酸は、軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号４５、４９、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、９４、９８、１００、１０５または１０７のいずれかと少なくとも８５％同一である。
他の実施形態において、前記核酸は、軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号４５、４９、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、９４、９８、１００、１０５または１０７のいずれかを含む。
他の実施形態において、前記核酸は、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号４５、４９、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、９４、９８、１００、１０５または１０７のいずれかと少なくとも８５％同一である。
他の実施形態において、前記核酸は、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を更に含み、ここで、前記ヌクレオチド配列は、配列番号４５、４９、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、９４、９８、１００、１０５または１０７のいずれかを含む。
特定の実施形態において、前記核酸を含む１つ以上の発現ベクターおよび宿主細胞が提供される。
抗体分子またはその断片の作製方法であって、遺伝子発現に好適な条件下で本明細書に記載されるとおりの宿主細胞を培養することを含む方法も提供される。
一態様において、本発明は、本明細書に記載される抗体分子を提供する方法を特徴とする。この方法は、ＰＤ−１抗原（例えば、ＰＤ−１エピトープの少なくとも一部分を含む抗原）を提供すること；ＰＤ−１ポリペプチドに特異的に結合する抗体分子を入手すること；および抗体分子がＰＤ−１ポリペプチドに特異的に結合するかどうかを評価することまたはＰＤ−１の活性のモジュレーション、例えば阻害における抗体分子の有効性を評価することを含む。この方法は、抗体分子を対象、例えばヒトまたは非ヒト動物に投与することを更に含み得る。
別の態様において、本発明は、薬学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤と、治療用薬剤、例えば本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体分子の少なくとも１つとを含む組成物、例えば医薬組成物を提供する。一実施形態において、本組成物、例えば医薬組成物は、本抗体分子と、本明細書に記載されるとおりの１つ以上の薬剤、例えば治療用薬剤または他の抗体分子との併用を含む。一実施形態において、抗体分子は、標識または治療用薬剤にコンジュゲートされる。
特定の実施形態において、本明細書に記載される併用は、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ）、ピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＭＥＤＩ０６８０（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、ＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ）、ＰＦ−０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＢＧＢ−Ａ３１７（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＢＧＢ−１０８（Ｂｅｉｇｅｎｅ）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）またはＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）から選択されるＰＤ−１阻害剤を含む。
医薬組成物およびキット
別の態様において、本発明は、薬学的に許容可能な担体と共に製剤化された、本明細書に記載される抗体分子を含む組成物、例えば薬学的に許容可能な組成物を提供する。本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容可能な担体」には、生理的に適合性のあるあらゆる溶媒、分散媒、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、直腸、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適であり得る。
本発明の組成物は、種々の形態であり得る。形態としては、例えば、液体溶液（例えば、注射用および注入用溶液）、分散液または懸濁液、リポソームおよび坐薬など、液体、半固体および固体投薬形態が挙げられる。好ましい形態は、意図される投与方法および治療適用に依存する。典型的な好ましい組成物は、注射用または注入用溶液の形態である。好ましい投与方法は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい実施形態において、抗体は、静脈内注入または注射によって投与される。別の好ましい実施形態において、抗体は、筋肉内または皮下注射によって投与される。
語句「非経口投与」および「非経口的に投与される」は、本明細書で使用されるとき、経腸および局所投与以外の、通常、注射による投与方法を意味し、限定なしに、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入が挙げられる。
治療組成物は、典型的には無菌であり、製造および保管条件下において安定していなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソームまたは他の高い抗体濃度に好適な秩序構造物として製剤化することができる。滅菌注射用溶液は、所要量の活性化合物（即ち抗体または抗体部分）を適切な溶媒中に、必要に応じて上記に挙げた成分の１つまたは組み合わせと共に配合し、続いて滅菌ろ過することにより調製し得る。概して、分散液は、塩基性分散媒および上記に挙げたものからの必要な他の成分を含有する無菌媒体に活性化合物を配合することにより調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分＋任意の追加の所望成分の粉末を予め滅菌ろ過されたその溶液から生じさせる真空乾燥および凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合に必要な粒径の維持および界面活性剤の使用によって維持することができる。吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物に含めることにより、注射用組成物の持続的吸収をもたらすことができる。
抗体分子は、当技術分野において公知の種々の方法によって投与することができるが、しかし、多くの治療適用について、好ましい投与経路／方法は、静脈内注射または注入である。例えば、抗体分子は、静脈内注入により２０ｍｇ／分、例えば２０〜４０ｍｇ／分および典型的には４０ｍｇ／分以上の速度で投与して、約３５〜４４０ｍｇ／ｍ２、典型的には約７０〜３１０ｍｇ／ｍ２およびより典型的には約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ２の用量に達することができる。実施形態において、抗体分子は、静脈内注入により１０ｍｇ／分未満；好ましくは５ｍｇ／分以下の速度で投与して、約１〜１００ｍｇ／ｍ２、好ましくは約５〜５０ｍｇ／ｍ２、約７〜２５ｍｇ／ｍ２およびより好ましくは約１０ｍｇ／ｍ２の用量に達することができる。当業者が理解するであろうとおり、投与経路および／または方法は、所望の結果に応じて異なり得る。特定の実施形態において、活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化デリバリーシステムを含めた、制御放出製剤など、化合物の急速な放出を防ぐ担体と共に調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類およびポリ乳酸など、生分解性、生体適合性ポリマーが用いられ得る。かかる製剤の調製方法の多くは、特許化されているかまたは概して当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
特定の実施形態において、抗体分子は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な食用担体と共に経口投与することができる。化合物（および必要に応じて他の成分）はまた、ハードまたはソフトシェルゼラチンカプセルに封入されるか、錠剤に圧縮されるか、または対象の食事に直接配合され得る。経口治療投与について、化合物は、賦形剤と共に配合されて、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、オブラートなどの形態で使用され得る。本発明の化合物を非経口投与以外によって投与するには、その不活性化を防ぐ材料で化合物をコーティングするか、またはそれと化合物を共投与する必要があり得る。治療組成物は、当技術分野において公知の医療器具でも投与され得る。
投薬量レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）がもたらされるように調整される。例えば、単回ボーラスが投与され得るか、数回の分割用量が時間をかけて投与され得るか、または治療状況の切迫性が示すところに従って用量が比例的に減量もしくは増量され得る。特に、投与の簡便さおよび投薬量の均一性のため、非経口組成物を投薬量単位形態で製剤化することが有利である。投薬量単位形態とは、本明細書で使用されるとき、治療する対象への単位投薬量として適した物理的に個別の単位を指す。各単位は、所望の治療効果を生じるように計算された所定の分量の活性化合物を必要な医薬担体と併せて含有する。本発明の投薬量単位形態に関する仕様は、（ａ）活性化合物のユニークな特性および実現しようとする詳細な治療効果、および（ｂ）個体の感受性を治療するためのかかる活性化合物の化合技術に固有の制約によって左右され、かつそれに直接依存する。
抗体分子の治療または予防有効量の例示的な非限定的範囲は、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜２５ｍｇ／ｋｇである。抗ＰＤ−１抗体分子の投薬量および治療レジメンは、当業者が決定し得る。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約１〜４０ｍｇ／ｋｇ、例えば１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、５〜１５ｍｇ／ｋｇ、１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、１５〜２５ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇの用量で注射によって（例えば、皮下または静脈内に）投与される。投与スケジュールは、例えば、週１回〜２、３または４週間に１回で異なり得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、１週間おきに約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
別の例として、抗体分子の治療または予防有効量の非限定的範囲は、２００〜５００ｍｇ、より好ましくは３００〜４００ｍｇ／ｋｇである。抗ＰＤ−１抗体分子の投薬量および治療レジメンは、当業者が決定し得る。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約２００ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば約２５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、約３００ｍｇ〜４００ｍｇ、約２５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ〜４５０ｍｇまたは約３００ｍｇもしくは約４００ｍｇの用量（例えば、フラット用量）で注射によって（例えば、皮下または静脈内に）投与される。投与スケジュール（例えば、フラット投与スケジュール）は、例えば、週１回〜２、３、４、５または６週間に１回で異なり得る。一実施形態において抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇ〜４００ｍｇの用量で３週間に１回または４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇからの用量で３週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇからの用量で４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇからの用量で４週間に１回投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇからの用量で３週間に１回投与される。理論によって拘束されることを望むものではないが、一部の実施形態において、フラット用量または固定用量は、例えば、薬物供給の節約となり、かつ調剤過誤が軽減されるため、患者に有益であり得る。
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子のクリアランス（ＣＬ）は、約６〜１６ｍＬ／ｈ、例えば約７〜１５ｍＬ／ｈ、約８〜１４ｍＬ／ｈ、約９〜１２ｍＬ／ｈまたは約１０〜１１ｍＬ／ｈ、例えば約８．９ｍＬ／ｈ、１０．９ｍＬ／ｈまたは１３．２ｍＬ／ｈである。
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子のＣＬに対する体重の指数項は、約０．４〜０．７、約０．５〜０．６または０．７以下、例えば０．６以下または約０．５４である。
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子の定常状態分布容積（Ｖｓｓ）は、約５〜１０Ｖ、例えば約６〜９Ｖ、約７〜８Ｖまたは約６．５〜７．５Ｖ、例えば約７．２Ｖである。
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子の半減期は、約１０〜３０日、例えば約１５〜２５日、約１７〜２２日、約１９〜２４日または約１８〜２２日、例えば約２０日である。
一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子のＣｍｉｎ（例えば、８０ｋｇの患者について）は、少なくとも約０．４μｇ／ｍＬ、例えば少なくとも約３．６μｇ／ｍＬ、例えば約２０〜５０μｇ／ｍＬ、例えば約２２〜４２μｇ／ｍＬ、約２６〜４７μｇ／ｍＬ、約２２〜２６μｇ／ｍＬ、約４２〜４７μｇ／ｍＬ、約２５〜３５μｇ／ｍＬ、約３２〜３８μｇ／ｍＬ、例えば約３１μｇ／ｍＬまたは約３５μｇ／ｍＬである。一実施形態において、Ｃｍｉｎは、抗ＰＤ−１抗体分子を約４００ｍｇの用量で４週間に１回受けている患者において決定される。別の実施形態において、Ｃｍｉｎは、抗ＰＤ−１抗体分子を約３００ｍｇの用量で３週間に１回受けている患者において決定される。特定の実施形態において、Ｃｍｉｎは、例えば、ＳＥＢエキソビボアッセイでＩＬ−２変化に基づいて決定したとき、抗ＰＤ−１抗体分子のＥＣ５０より少なくとも約５０倍高く、例えば少なくとも約６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍または１００倍、例えば少なくとも約７７倍高い。他の実施形態において、Ｃｍｉｎは、例えば、ＳＥＢエキソビボアッセイでＩＬ−２変化に基づいて決定したとき、抗ＰＤ−１抗体分子のＥＣ９０より少なくとも５倍高く、例えば少なくとも６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍、例えば少なくとも約８．６倍高い。
抗体分子は、静脈内注入により２０ｍｇ／分超、例えば２０〜４０ｍｇ／分および典型的には４０ｍｇ／分以上の速度で投与して、約３５〜４４０ｍｇ／ｍ２、典型的には約７０〜３１０ｍｇ／ｍ２およびより典型的には約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ２の用量に達することができる。実施形態において、約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ２の注入速度が約３ｍｇ／ｋｇのレベルを達成する。他の実施形態において、抗体分子は、静脈内注入により１０ｍｇ／分未満、例えば５ｍｇ／分以下の速度で投与して、約１〜１００ｍｇ／ｍ２、例えば約５〜５０ｍｇ／ｍ２、約７〜２５ｍｇ／ｍ２または約１０ｍｇ／ｍ２の用量に達することができる。一部の実施形態において、抗体は、約３０分の時間をかけて注入される。投薬量の値は、改善しようとする病態のタイプおよび重症度に伴って異なり得ることに留意すべきである。更に、任意の特定の対象について、具体的な投薬量レジメンは、時間の経過に伴って個々の必要性および組成物の投与者または投与監視者の専門的な判断に基づいて調整されなければならないことと、明細書に示される投薬量範囲は、例示に過ぎず、特許請求される組成物の範囲または実施を限定する意図はないこととが理解されるべきである。
本発明の医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分の「治療有効量」または「予防有効量」を含み得る。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するのに必要な投薬量および期間でそれを達成するのに有効な量を指す。修飾抗体または抗体断片の治療有効量は、個体の病状、年齢、性別および体重ならびにその抗体または抗体部分が個体において所望の応答を引き出す能力などの要因に応じて異なり得る。治療有効量は、修飾抗体または抗体断片のいかなる毒性または有害効果にも治療上有益な効果が優るものである。「治療上有効な投薬量」は、好ましくは、測定可能なパラメータ、例えば腫瘍成長速度を未治療の対象と比べて少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、更により好ましくは少なくとも約６０％および更により好ましくは少なくとも約８０％阻害する。化合物が測定可能なパラメータ、例えば癌を阻害する能力は、ヒト腫瘍における有効性の予測となる動物モデル系で評価することができる。代わりに、組成物のこの特性は、化合物の阻害能力、当業者に公知のアッセイによるインビトロでのかかる阻害を調べることにより評価され得る。
「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するのに必要な投薬量および期間でそれを達成するのに有効な量を指す。典型的には、予防用量は、対象において疾患に先立ちまたは疾患の初期段階で使用されるため、予防有効量は、治療有効量よりも少なくなり得る。
また、本明細書に記載される抗体分子を含むキットも本発明の範囲内にある。このキットは、使用説明書；他の試薬、例えば標識、治療用薬剤またはキレート化もしくは他のカップリングに有用な薬剤、標識もしくは治療用薬剤に対する抗体または放射線防護組成物；抗体を投与のために調製するための装置または他の材料；薬学的に許容可能な担体；および対象への投与のための装置または他の材料を含めた１つ以上の他の要素を含み得る。
併用療法の更なる使用
本明細書に開示される併用、例えば抗ＰＤ−１抗体分子には、インビトロおよびインビボ診断上ならびに治療および予防上の有用性がある。例えば、これらの分子は、癌および感染性障害など、種々の障害を処置、予防および／または診断するため、インビトロまたはエキソビボで培養下の細胞またはヒト対象に投与することができる。
従って、一態様において、本発明は、対象の免疫応答を修飾する方法であって、本明細書に記載される併用を対象に投与することを含み、それにより対象の免疫応答が修飾される方法を提供する。一実施形態において、免疫応答は、増強、刺激または上方制御される。
本明細書で使用されるとき、用語「対象」は、異常なＰＤ−１機能によって特徴付けられる障害または病態を有するヒト患者である。
本願の文章全体を通じて、本明細書の文章と配列表との間に相違があった場合、本明細書の文章が優先するものとする。
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本発明の理解に役立つように以下に実施例を示すが、これは、決してその範囲を限定することを意図するものではなく、かつそのように解釈されてはならない。
実施例１：抗ＰＤ−１抗体分子のフラット投与スケジュール
薬物動態（ＰＫ）モデリングに基づけば、フラット用量の利用は、患者に適切なＣｍｉｎ濃度での曝露をもたらすものと予想される。９９．５％を超える患者がＥＣ５０を上回ることになり、９３％を超える患者がＥＣ９０を上回ることになる。３００ｍｇで３週間に１回（Ｑ３Ｗ）または４００ｍｇで４週間に１回（Ｑ４Ｗ）のいずれかを利用した例示的抗ＰＤ−１抗体分子の予測定常状態平均Ｃｍｉｎは、平均して２０ｕｇ／ｍＬを上回ると予想される（最高体重、１５０ｋｇ）。
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いずれの用量／レジメン（３００ｍｇ ｑ３ｗまたは４００ｍｇ ｑ４ｗ）で観察される例示的抗ＰＤ−１抗体分子の予想平均定常状態Ｃｍｉｎ濃度も、ＥＣ５０（０．４２ｕｇ／ｍＬ）より少なくとも７７倍高く、かつＥＣ９０より約８．６倍高くなることになる。エキソビボ力価は、ＳＥＢエキソビボアッセイにおけるＩＬ−２の変化に基づく。
３００ｍｇ Ｑ３Ｗまたは４００ｍｇ Ｑ４Ｗのいずれについても、患者の１０％未満が３．６ｕｇ／ｍＬ未満のＣｍｉｎ濃度を達成するものと予想される。３００ｍｇ Ｑ３Ｗまたは４００ｍｇ Ｑ４Ｗのいずれについても、患者の０．５％未満が０．４μｇ／ｍＬ未満のＣｍｉｎ濃度を達成するものと予想される。
同じ用量の例示的抗ＰＤ−１抗体分子を投与される間の患者に関する異なる体重にわたる予測Ｃｔｒｏｕｇｈ（Ｃｍｉｎ）濃度を図１２に示す。体重換算用量を固定用量と比較する（３．７５ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗ対３００ｍｇ Ｑ３Ｗおよび５ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｗ対４００ｍｇ Ｑ４Ｗ）。図１２は、例示的抗ＰＤ−１抗体分子のフラット投与を裏付けている。
ＰＫモデルを更に検証する。図１３に示すとおり、実測濃度とモデル予測濃度とは、一致した線上にある。図１４は、このモデルが蓄積、経時変化および対象内変動を捉えることを示す。
実施例２：ＨＤＭ２０１の用量および投与レジメン
この実施例は、第１相試験ＣＨＤＭ２０１Ｘ２１０１における、固形腫瘍を有する患者の場合の単剤ＨＤＭ２０１に関する本発明の用量およびレジメンを裏付ける臨床での安全性および薬物動態（ＰＫ）のデータの概要を提供する。
ここで、データは、標準的な治療で増悪しているかまたは標準的な治療が存在しないＴＰ５３野生型（ＷＴ）進行性固形腫瘍を有する患者でのＨＤＭ２０１のこの多施設、非盲検、ヒトで初めての第Ｉ相研究から開示されている（ＮＣＴ０２１４３６３５）。
４週間サイクルの１日目および８日目に投与したＨＤＭ２０１ １２０ｍｇが好ましいことを発見した（レジメン１Ｂ）。このデータは、データカットオフ日が２０１６年９月１９日である単剤療法試験からである。
この研究の第Ｉ相の主な目的は、最大耐量（ＭＴＤ）を決定し、かつ／またはＨＤＭ２０１の好ましい用量を明らかにすることである。この試験設計により、複数の固形悪性腫瘍にわたるＨＤＭ２０１の下記の２種の広範な投与戦略の安全性、耐容性および臨床活性の並行調査が可能となった：断続的な高用量レジメン（レジメン１Ａおよび１Ｂ）ならびに長期にわたる低用量レジメン（レジメン２Ａおよび２Ｃ）。表Ｅｘ２．１は、固形腫瘍患者で評価された各カテゴリーでの投与レジメンの概要を示す。表Ｅｘ２．２は、この研究に参加した患者のベースライン特性を示す。
この主な目的の終点は、処置の最初のサイクル中の用量制限毒性（ＤＬＴ）の発症率である。一次解析では、ＤＬＴ率に基づいてＭＴＤを推定するが、最終の好ましい用量決定では、サイクル１のＤＬＴ率を超える追加データ（例えば、後期のサイクルの耐容性、ＰＫ、ＰＤおよび抗腫瘍活性）を利用する。
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患者集団
この研究に参加した患者を下記の基準により特徴付ける。
標準的治療にもかかわらず増悪していたかまたは有効な標準的治療が存在しない、局所進行性または転移性の固形悪性腫瘍を有する１８歳以上の患者
スクリーニングの３６ヶ月以内に採取した腫瘍生検から得られた、ＴＰ５３ ＷＴ状態（最低でもエクソン５〜８中に変異がない）が実証された腫瘍
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１に従って測定可能または測定不能な（しかしながら評価可能な）疾患
Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス≦２
ｐ５３−ＨＤＭ２相互作用を阻害する化合物（例えば、ＲＧ７３８８またはＮＶＰ−ＣＧＭ０９７）による事前の処置がない
処置を研究する２週間前以内に、骨髄細胞系列を標的とする増殖因子（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）による処置がない
絶対好中球数＞１，５００個／μＬ、血小板数＞１００，０００個／μＬ、ヘモグロビン＞９．０ｇ／ｄＬ
表Ｅｘ２．２は、この研究に参加した患者のベースライン特性を示す。
Figure 2021518348
統計解析
用量漸増の決定を過量管理原則による漸増（ＥＷＯＣ）を有するＢａｙｅｓｉａｎロジスティック回帰モデル（ＢＬＲＭ）により導いた。
決定は、この研究で評価された全ての用量レベルおよびレジメンから入手可能なデータ（例えば、用量制限毒素、処置の最初のサイクル中の全てのＣｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＴＣＡＥ）Ｇｒａｄｅ≧２毒性データならびに評価可能な患者からの薬物動態データおよび薬力学データ）の合成をベースとした。
サイクル２の血液学的毒性も用量漸増およびレジメン選択のために考慮に入れた。
用量／レジメンの正当化
単剤ＨＤＭ２０１により固形腫瘍で評価した４種の投与レジメンのうち、断続的な高用量レジメン１Ｂ（４週間サイクルの１日目および８日目）が最も好ましい治療指数を有することを発見した。グレード３／４の血小板減少症は、試験した全ての用量にわたりこのレジメンで最低であり、１２０ｍｇの選択されたＲＤＥで処置された患者では発症しなかった（表Ｅｘ２．３−１を参照されたい）。最も頻繁な非血液学的毒性は、胃腸であったが、４種のレジメンの全てにわたって評価した用量レベルのいずれでも用量制限的ではなかった。薬物動態データは、前臨床データのＰＫ／ＰＤモデリングに基づいて、治療的に適切な曝露がレジメン１Ｂの場合に１２０ｍｇの用量レベルで達成されたことを実証し、この用量で処置された患者における臨床的有効性の観察により更に裏付けられた（長期にわたるＰＲを有する１例の患者、未確認のＰＲを有する１例の患者およびＳＤを有する１例の患者）。１２０ｍｇの用量も、用量増大を裏付けるＢａｙｅｓｉａｎロジスティック回帰モデル（ＢＬＲＭ）により推奨される好ましい用量の範囲内であった。従って、１２０ｍｇの用量でのレジメン１Ｂを最も好ましい用量およびレジメンと見なした。
詳細な臨床概要
データカットオフ時（２０１６年９月１９日）に、固形腫瘍を有する８５例の患者を評価した４種の投与レジメンにわたりＨＤＭ２０１で処理している（表Ｅｘ２．１を参照されたい）。評価した全てのレジメンにわたる用量制限毒性は、骨髄抑制に主に関連していた。
全ての用量制限血球減少症のうち、グレード３／４の好中球減少症および血小板減少症をレジメン全体にわたり最も一般的に観測した（表Ｅｘ２．３）。従って、４種のレジメンにわたるグレード３／４の血球減少症（最も重要なのは血小板減少症）の発症率の比較は、レジメンおよび拡大のための用量の選択を知らせる重要な要素であった。
この研究中、ＨＤＭ２０１により誘発される骨髄抑制の発症を（サイクル１を超えて）遅らせ得ることを発見した。従って、非結合感受性モデルを使用して、サイクル２で発症する用量制限血液学的毒性もこの研究の経過中の用量漸増の決定に含めた。表Ｅｘ２．４は、固形腫瘍で評価した全てのレジメンにわたるサイクル１中の用量制限毒性およびサイクル２での用量制限血液学的毒性の数の概要を示す。
断続的な高用量レジメン１Ａと長期にわたる低容量レジメン２Ａとを用量漸増で最初に評価した。両方のレジメンは、予測される治療的に適切な曝露を達成する用量レベルにおいて好ましくないＤＬＴ率および遅延した血液学的毒性を有した。従って、下記の２種の追加のレジメンを調査するコホートを開始した：断続的な高用量レジメン１Ｂおよび長期にわたる低用量レジメン２Ｃ。レジメン２Ｃでは、ＰＫ／ＰＤモデリングに基づいて有効であると予測されるものを曝露が下回る用量レベルでＤＬＴを観測した。
３種の異なる用量レベル（１２０ｍｇ、１５０ｍｇおよび２００ｍｇ）でレジメン１Ｂに従って２０例の患者を処置した。レジメン１Ｂでの研究処置に起因して疑わしいと報告された最も頻繁なＡＥ（全てのグレード）は、悪心（１２例の患者、６０．０％）、血小板減少症／血小板数の減少（９例の患者、４５．０％）、好中球減少症／好中球数の減少（８例の患者、４０．０％）および嘔吐（５例の患者、２５．０％）であった。この群の９例の患者（４５．０％）は、処置に関連すると疑われる少なくとも１種のＣＴＣＡＥグレード３／４のＡＥを経験した。研究処置に起因して疑わしいと考えられる３種の最も頻繁なＣＴＣＡＥグレード３／４のＡＥは、下記であった：好中球減少症／好中球数の減少（６例の患者、３０．０％）、リパーゼの増加（３例の患者、１５％）および血小板減少症／血小板数の減少（２例の患者、１０．０％）。１５０ｍｇの用量で処置された１例の患者で、ＤＬＴ基準を満たす長期にわたる好中球減少症（２２日目に発症して１８日間続く）の１つの事象を観測した。更なる詳細について表Ｅｘ２．５を参照されたい。評価した４種のレジメンのうち、レジメン１Ｂは、グレード３／４の血小板減少症の全体的な発症率が最低であった（表Ｅｘ２．３）。
１２０ｍｇの好ましい用量では（レジメン１Ｂ）、グレード３／４の血小板減少症ＡＥの症例はなかった（表Ｅｘ２．３−１を参照されたい）。この用量レベルでは血小板減少症に起因する投与の中断または中止はなく、血小板輸血を必要とする患者はいなかった。グレード３／４の好中球減少症の発症率は、全てのレジメンにわたり類似しており、１２０ｍｇの用量レベルで９例の患者の２例で観測した。この用量レベルでは、非血液学的な用量制限毒性またはグレード３／４のＡＥは、存在しなかった。
重要なことに、１２０ｍｇの好ましい用量で有意の臨床活性を観測した（レジメン１Ｂ）。この用量で処置された９例の患者のうち、軟組織肉腫を有する患者で１例のＰＲ（１８週間続き、カットオフ日に依然として進行中である）が存在し、脂肪肉腫を有す患者で１例の未確認のＰＲおよび１例のＳＤ（８週間続く）の両方が存在し、これは、この用量およびスケジュールで治療的に適切な曝露が達成されることを示す。
Figure 2021518348
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Figure 2021518348
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安全性
サイクル２中に概して発症する用量制限毒性は、好中球減少症および血小板減少症であった。
試験薬に関連する全てのグレードの有害事象（ＡＥ；全患者の≧１０％で発症する）を表Ｅｘ２．６に表す。
Figure 2021518348
最も高頻度の非血液学的毒性は、胃腸であったが、これは、４種のレジメンにわたり評価した用量レベルのいずれでも用量を制限するものではなかった。全てのグレードの胃腸ＡＥで最も多く見られたのは、悪心（４４／８５例、５２％）であり、その重症度は、大部分が軽度〜中程度であった。
特に関心のある、試験薬に関連するグレード３／４のＡＥを表Ｅｘ２．３に示す。試験薬に関連すると疑われるグレード３／４の血液学的毒性が全ての治療レジメンに認められ、患者の最大約３５％に発生した。グレード３／４血小板減少症は、レジメン１Ｂで最も低かった。
臨床ＰＫ
用量漸増の経過を通して薬物動態データを評価した。研究の経過中、２種のＨＤＭ２０１剤バリアントを評価した（更なる詳細に関しては、プロトコルを参照されたい）。非コンパートメントＰＫ解析は、用量範囲（２〜３５０ｍｇ）にわたり２．０〜５．８時間の範囲の最大血漿濃度を達成するまでの時間の中央値を示した。予備的な用量比例評価は、研究した用量範囲全体にわたってほぼ用量比例的なＰＫ（ＡＵＣｌａｓｔおよびＣｍａｘ）を示した。用量コホートの大部分では、ＡＵＣｌａｓｔおよびＣｍａｘに関する患者間変動性（ＣＶ％幾何平均）は、低〜中程度（６〜５８．５％）であった。更に、母集団アプローチを使用して、全ての利用可能なＨＤＭ２０１濃度の統合解析を行った。ＨＤＭ２０１のＰＫは、遅延したゼロ次吸収過程および一次吸収過程ならびに線形クリアランスを有する１コンパートメントＰＫモデルにより最もよく説明された。体重を、見掛けの中央コンパートメント分布容積（Ｖｃ／Ｆ）に対する統計的に有意な共変量として同定し、Ｖｃ／Ｆは、体重の増加と共に増加した。
ＨＤＭ２０１の好ましい用量を更に裏付けるために、コンパートメントＰＫモデリングを使用して、レジメン１Ｂで１２０ｍｇにおいて処置された９例の患者について１回のサイクル当たりの個々の平均濃度を推定した（図１５）。患者の大多数（９例中７例）で、推定された１回のサイクル当たりの平均薬剤濃度は、前臨床データのＰＫＰＤモデリング（ヒトＳＪＳＡ−１異種移植片ラットモデル）から決定した１回のサイクル当たり約４１ｎｇ／ｍＬの最も保守的な平均腫瘍停滞濃度に近いか、またはこの濃度を超えていた。
処置レジメン１Ａ（１２．５〜３５０ｍｇ）の単回投与（１日目）後のＮＶＰ−ＨＤＭ２０１の代表的な幾何平均血漿濃度−時間プロファイルを図１６に示す。
経口吸収は、速く（中央値Ｔｍａｘ ２〜５．８時間）、用量群（２〜３５０ｍｇ）により変動しなかった。
平均血漿曝露（ＡＵＣｌａｓｔおよびＣｍａｘ）は、用量の増加と共に増加し、単回投与および反復投与後に用量比例からの大きい逸脱はなかった。
ＮＶＰ−ＨＤＭ２０１定常状態は、概して８日までに達成され、毎日の投与では蓄積が制限された。
１日目の単一用量（５０〜３５０ｍｇ）後に推定される半減期の中央値は、１３．７〜２３．１時間の範囲であった。
曝露における患者間変動性（ＣＶ％幾何平均）は、概して低〜中程度であった。ＮＶＰ−ＨＤＭ２０１のコンパートメント母集団ＰＫモデリングを使用して、サイクル１に関する個々の平均血漿濃度を推定し、ＰＫ／ＰＤ腫瘍増殖モデリングにより誘導された腫瘍停滞に関して前臨床平均濃度との比較を可能にした。結果を図１７に示す。
レジメン２Ａ／２Ｃと比較すると、レジメン１Ａ／１Ｂで達成された平均血漿濃度は、９５％腫瘍退縮に必要とされる予測された前臨床標的有効レベル（１２５ｎｇ／ｍＬ）（図１８中の上方の破線）付近であり、ヒトＳＪＳＡ−１異種移植ラットモデルのＰＫ／ＰＤモデリングから決定された約４１ｎｇ／ｍＬ（破線）の最も保守的な平均腫瘍停滞濃度の推定される平均濃度付近であったか、またはこの平均濃度を超えていた（図１７）。
約１９ｎｇ／ｍＬの濃度での破線は、脂肪肉腫（ＨＳＡＸ２６５５）患者由来の異種移植ラットモデルからの前臨床データのＰＫ／ＰＤモデリングから決定された平均腫瘍停滞を表す。
濃度２９．４ｎｇ／ｍＬでの破線は、ＳＪＳＡ−１細胞株での細胞活性から決定されたＩＣ５０値を表す。
統計解析
この研究では、Ｂａｙｅｓｉａｎロジスティック回帰モデル（ＢＬＲＭ）を利用して用量漸増を裏付け、ＭＴＤを推定し、かつ／またはＨＤＭ２０１の好ましい用量を決定する。過量管理による漸増（ＥＷＯＣ）を伴うＢＬＲＭは、利用可能な事前情報の組込みを可能にし、臨床研究で見られた、観察した用量制限毒性（ＤＬＴ）についての新たな情報に基づいてモデルパラメータを更新する。レジメン１Ａおよび１Ｂの用量漸増の過程中、ＤＬＴ発生率を使用して、モデルを更新して次の用量の決定を補助した。この研究の経過中、ＨＤＭ２０１により誘発される骨髄毒性がサイクル２中に主に発症することが明らかになった場合、サイクル１のＤＬＴおよびサイクル２での血液学的用量制限ＡＥを含む非結合感受性モデル（全ての血球減少症を等しく重み付けする）を使用して、用量漸増／ＲＤＥ決定を導いた。加えて、決定は、常に、この研究で評価した全ての用量レベルから入手可能な関連データ（例えば、評価可能な患者からの低グレードの毒性、ＰＫおよびＰＤのデータ（入手可能な場合））の合成に常に基づいた。
レジメン１Ｂ（用量レベル１２０ｍｇ、１５０ｍｇおよび２００ｍｇ）で処置された患者からのサイクル１のＤＬＴ事象データを使用するＢＬＲＭの結果は、最大４００ｍｇのＨＤＭ２０１の漸増を裏付けた。プロトコル解析および感度解析による１２０ｍｇでのＤＬＴ率の中央値は、それぞれ３．５％および２５．７％であった。そのため、臨床的に関連するグレード３／４の血小板減少症のより低い発生率、管理可能な好中球減少症およびこの用量で観測した有意な臨床活性を考慮して、１２０ｍｇが好ましい用量であることを発見した。
有効性
データカットオフ時、高用量の断続的レジメンを受けた２例／４６例（４％）の患者がＰＲを達成した（レジメン１Ａを受けた、ＳＴＳ内膜肉腫を有する１例の患者；レジメン１Ｂを受けた、ＳＴＳ血管外皮細胞腫を有する１例の患者）（表Ｅｘ２．７）。高用量の断続的レジメンを受けた１５例／４６例（３３％）の患者および低用量の長期にわたるレジメンを受けた１４例／３９例（３６％）の患者がＳＤを達成した（表Ｅｘ２．７）。
有意な疾患制御を全ての投与レジメンで観測した（ＤＣＲ：３４％）が、ＰＲは、レジメン１Ａおよび１Ｂでのみ見られ、これは、高用量の断続的レジメンがより有効であることを示唆する。
２０１７年９月まで、肉腫患者（脂肪肉腫および他の肉腫）に対して強い抗腫瘍効果を観測した。レジメン１Ｂに従ってＨＤＭ２０１で処置された２１例の肉腫患者のうち、５例の患者が部分奏効（ＰＲ）を示し、１１例が安定疾患（ＳＤ）を示した。疾患は、５例の患者でのみ進行した（図２０を参照されたい）。
Figure 2021518348
３２週間の処置の終了時に少なくとも安定疾患以上が得られた患者に関する相対用量強度（ＲＤＩ）の中央値は、低用量長期レジメン２Ａおよび２Ｃで類似していた。２つの高用量断続的レジメンのうち、レジメン１Ｂは、一層好ましいＲＤＩであり、これが治療上適切な用量で全体的に良好な耐容性であることが裏付けられる（表Ｅｘ２．８）。
Figure 2021518348
血小板減少症のＰＫ／ＰＤモデル
個々のＰＫデータおよび血小板計数の経時的なデータに基づいてＰＫ／ＰＤモデルを確立した。
ＰＫモデル：二相性吸収を有する１コンパートメント
ＰＤモデル：ＰＬＴ輸血ならびに増殖細胞および調節に対するＨＤＭ２０１への効果を含む血小板減少症の調整後Ｆｒｉｂｅｒｇモデル
データのベース：
ｎ＝７３の被験者
１３０１例のＰＫ観察
１０２３例のＰＤ血小板観察
４２７例のＰＤ ＧＤＦ１５観察
図１８に示す血小板動態プロファイルを、（図１８の上から下へと順に）各レジメンで試験した下記の用量に基づいてモデル化する。
Ｒｅｇ２Ｃ（Ｄ１〜７ Ｑ４ｗｋ）：２５ｍｇ（（２５ｍｇ×７投与日）／２８日サイクル＝６．２５ｍｇ／日）
Ｒｅｇ２Ａ（Ｄ１〜１４ Ｑ４ｗｋ）：２０ｍｇ（（２０ｍｇ×１４投与日）／２８日サイクル＝１０ｍｇ／日）
Ｒｅｇ１Ｂ（１日目、８日目 Ｑ４ｗｋ）：１５０ｍｇ（（１５０ｍｇ×２投与日）／２８日サイクル＝１０．７ｍｇ／日）
Ｒｅｇ１Ａ（Ｄ１ Ｑ３ｗｋ）：３５０ｍｇ（（３５０ｍｇ×１投与日）／２１日サイクル＝１６．７ｍｇ／日）
このモデル化に基づき、１Ｂは、単剤活性を示したレジメンの最高の全体的な血小板動態プロファイルを有する。
臨床研究でのレジメン１Ｂ １５０ｍｇによるＧ４血小板減少症の最初の発症は、１００日後のみで発症した。
１ＢへのＥｌｔｒｏｍｂｏｐａｇの追加により、相対的な遅延およびその後のサイクルによる血小板回復のピークの低減を軽減し得た。
実施例３：ＰＤ−１阻害剤とＨＤＭ２阻害剤ＨＤＭ２０１との併用に関する前臨床研究
本例では、ＭＤＭ２阻害剤ＮＶＰ−ＨＤＭ２０１（ＨＤＭ２０１）がＣｏｌｏｎ ２６結腸直腸腺癌（ＣＲＣ）同系マウスモデルの免疫モジュレーションに及ぼす効果を実証する。マルチカラーＦＡＣＳ分析を用いると、早い時点（処置後５日目）でＨＤＭ２０１によって腫瘍中のＣＤ１０３＋ＣＤ１１＋樹状細胞（ＤＣ）の数が増加したことが観察され、これは、抗原交差提示に関するＤＣの活性化を反映するものであった。ＨＤＭ２０１により、腫瘍ならびに腫瘍流入領域リンパ節中のＴｂｅｔ＋ＥＯＭＥＳ−ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合も増加した。これは、ＤＣによってＴ細胞がプライミングされたことを示唆している。後の時点（処置後１２日目）において、腫瘍中のＣＤ８／Ｔｒｅｇ比の増加が観察され、これは、有効な免疫応答の誘導を指し示すものであった。加えて、ＨＤＭ２０１は、ＣＤ４５−細胞上のプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）およびＣＤ４５＋Ｔ細胞中のプログラム死１（ＰＤ１）などの免疫抑制タンパク質の上方制御を誘導した。
単剤療法としてのまたは抗ＰＤ１抗体との併用でのＨＤＭ２０１の抗腫瘍効果をＣｏｌｏｎ ２６ ＣＲＣ同系マウスモデルで評価した。４０ｍｇ／ｋｇのＨＤＭ２０１は腫瘍成長を阻害する一方、抗ＰＤ１抗体によってＰＤ−１遮断を加えると、相乗的で持続性のある腫瘍退縮が生じた。完全腫瘍退縮（ＣＲ）率は、いずれか一方の処置単独（ＣＲなし）と比較したとき、併用群で有意に上昇した（１０例中５例のＣＲ）。併用アームにおけるこのロバストな抗腫瘍活性は、ＨＤＭ２０１による免疫モジュレーションと一致し、従ってＣＲを達成したマウスには、Ｃｏｌｏｎ ２６細胞に対する長期特異的記憶も発生したが、しかし、４Ｔ１細胞に対して発生しなかった。まとめると、これらのデータから、ＭＤＭ２阻害が樹状細胞機能、Ｔ細胞プライミングおよび腫瘍中のＣＤ８／Ｔｒｅｇ比をモジュレートし、腫瘍成長阻害につながるように見えることが実証された。抗ＰＤ１抗体との併用により、Ｔ細胞が免疫抑制状態から更に解除され、抗腫瘍応答が有意に向上した。これらのデータは、臨床におけるこの併用の探索を裏付けている。
ＨＤＭ２０１の免疫モジュレート効果を調べるため、Ｃｏｌｏｎ ２６マウスＣＲＣモデルを使用し、これは、その野生型ｐ５３状態に基づいて選択した。本発明者らの仮説は、ＭＤＭ２／ｐ５３相互作用の阻害が腫瘍細胞中のＰＤＬ１およびリンパ球中のＰＤ１を上方制御する一方、ＰＤ１／ＰＤＬ１相互作用の遮断がＨＤＭ２０１の抗腫瘍効果を増強するというものである。
材料および方法
材料
動物および維持条件
全ての実験について、動物は、１２時間（ｈ）明期／暗期サイクル施設で飼育し、餌および水を自由に摂取させた。表Ｅｘ３．１に動物特性をまとめる。
Figure 2021518348
動物福祉に関する記載事項
動物は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＮＩＢＲ動物施設で実験前に少なくとも３日間順化させた。動物の取り扱いは、Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＩＡＣＵＣ規則および指針に従った。
細胞および細胞培養条件
同系腫瘍モデルは、腫瘍の起源となったマウスと同じ系統の動物に移植されたマウス由来腫瘍細胞株である。これにより免疫適格動物の使用が可能となり、これは、本試験において使用される免疫細胞を標的化する抗体の試験の中心となる。Ｃｏｌｏｎ ２６は、Ｎ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレタンによって誘導されたＢａｌｂ／ｃマウス結腸癌細胞株である（Ｇｒｉｓｗｏｌｄ ＤＰ ａｎｄ Ｃｏｒｂｅｔｔ ＴＨ；Ａ ｃｏｌｏｎ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｇｅｎｔ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃａｎｃｅｒ ３６：２４４１−２４４４，１９７５）。４Ｔ１は、Ｂａｌｂ／ｃマウスからの自然発生する乳腺腫瘍である（Ａｓｌａｋｓｏｎ ＣＪ，Ｍｉｌｌｅｒ ＦＲ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｅｖｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓ ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａ ｍｏｕｓｅ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１３９９−１４０５，１９９２）。
Ｃｏｌｏｎ ２６細胞は、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎから入手した。４Ｔ１細胞は、ＡＴＣＣから購入した。両方の細胞株のマスターストックは、ＣＬＥ（Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ）によって作成された。抗生物質不含の１０％熱失活ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ １６４０中でＣｏｌｏｎ ２６および４Ｔ１細胞を培養した。ＩＭＰＡＣＴ ＶＩＩＩ ＰＣＲアッセイパネル（ＩＤＥＸＸ ＲＡＤＩＬ、ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＩＮＣ、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，ＭＥ）で細胞にマイコプラズマおよびウイルス汚染はなかった。
化合物製剤化および抗体
５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）中の０．５％ｗ／ｖメチルセルロース（ＭＣ）溶液にＨＤＭ２０１−ＢＢ（コハク酸）を４．８４ｍｇ／ｍｌ（４ｍｇ／ｍｌ遊離塩基）の最終濃度となるように製剤化した。塩／遊離塩基比は、１．２１である。毎週（ｑｗ）、その週の初日にこの製剤を１０ｍｌ／ｋｇで３時間毎に３回（３×ｑ３ｈ）、強制経口投与（ｐｏ）によって投与した。製剤は、遮光下に置いたとき、４℃で３週間安定していた。
抗ＰＤ１抗体（クローン２９Ｆ．１Ａ１２、マウス交差反応性）およびそのアイソタイプ対照（ラットＩｇＧ２ａ）をＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から購入した。両方の抗体とも、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中０．５ｍｇ／ｍｌの最終濃度となるように製剤化し、１０ｍｌ／ｋｇの容積で腹腔内注射（ｉｐ）により週２回（２ｑｗ）、２週間にわたって投与した。
方法
雌Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＣｏｌｏｎ ２６同系腫瘍モデル
Ｃｏｌｏｎ ２６細胞を８０〜９５％コンフルエンスで回収し、洗浄し、冷ＰＢＳ中に２×１０６細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。最後に、１００μＬの総容積中の０．２×１０６細胞をナイーブＢａｌｂ／ｃマウスの右上側腹部に皮下（ｓｃ）移植した。試験８０２０ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＥＦについて、細胞移植後１０日目に腫瘍容積が２７〜６０ｍｍ３の範囲に達したところで動物を無作為化し、試験に登録した。処置は、全て３日後の１３日目に開始した。ＰＤ試験について、平均腫瘍容積が１００〜１２０ｍｍ３に達したところで動物を無作為化した。
動物のモニタリング
動物のウェルビーイング、行動および全般的な健康を毎日モニタした。瀕死の動物がいれば、安楽死させた。
試験設計
処置群についての用量およびスケジュールを含む試験７６２８ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤ、８０６３ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤおよび８０２０ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＥＦの設計を表Ｅｘ３．２〜表Ｅｘ３．４にまとめる。投与日に動物を秤量し、投与容積は、体重に応じて１０ｍｌ／ｋｇに調整した。無作為化時点およびその後、試験継続期間中週２回、腫瘍寸法および体重を記録した。各データ収集日後に毎回、以下のデータを収集した：死亡発生率、個体および群平均体重ならびに個体および群平均腫瘍容積。
Figure 2021518348
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フローサイトメトリー分析
両方の試験（７８４９ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤおよび８０６３ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤ）について、腫瘍からの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）をフローサイトメトリーによって分析した。８０６３ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤについて、リンパ節リンパ球を分析した。試料を２つの別個の９６ウェルプレートに、１つをＴ細胞染色用（表Ｅｘ３．５）に、かつ１つを骨髄系細胞染色用（表Ｅｘ３．６）にプレーティングした。
Figure 2021518348
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組織処理
試験７６２８ Ｃｏｌｏｎ２６−ＸＰＤについて、処置開始後５日目および１２日目にマウスから腫瘍および脾臓を採取した。ＲＤＳ−２０１６−００１６３に従って単一細胞懸濁液を作成した。簡潔に言えば、組織を鋏で細かく刻み、続いてＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をＬｉｂｅｒａｓｅ（商標）研究用グレードコラゲナーゼ（Ｒｏｃｈｅ）およびＤＮアーゼｌリコンビナーゼ（Ｒｏｃｈｅ）と共に含有する解離緩衝液中でＧｅｎｔｌｅＭＡＸ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して機械的にホモジナイズした。水浴中３７℃で１５分間インキュベートした後、ホモジネートを１０％ＦＢＳでクエンチし、７０μＭセルストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ）でろ過した。この処理の終了時、細胞の単一細胞懸濁液が得られ、Ｔ細胞または骨髄系細胞のいずれかの抗体パネルで染色するため９６ウェルプレートに２００万個の細胞をプレーティングした。
試験８０６３ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤについて、腫瘍およびリンパ節を採取し、次にＲＤＳ−２０１７−００１４１に従って機械的処理および酵素的処理の両方により単一細胞懸濁液にした。消化処理は、４〜５回の連続消化サイクルを含み、各サイクルについて、ＤＮアーゼＩ（Ｒｏｃｈｅ）、コラゲナーゼＰ（Ｒｏｃｈｅ）およびディスパーゼ（Ｇｉｂｃｏ）を含有する新しい消化緩衝液とする。この処理の終了時、細胞懸濁液を７０μＭセルストレーナーでろ過して単一細胞懸濁液を得た。Ｔ細胞パネルまたは骨髄系細胞パネル抗体染色のため９６ウェルプレートに２００万個の細胞をプレーティングした。
ＦＡＣＳ染色およびデータ収集
細胞をプレーティングしたところで、表Ｅｘ３．５および表Ｅｘ３．６に示されるとおり試料を生死判別染色剤で染色した。その後、試料を１：５０希釈のマウスＦｃブロッキング剤（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）により氷上で３０分間ブロッキングした。試料を１５００ｒｐｍで５分間スピンし、次に表Ｅｘ３．５および表Ｅｘ３．６に示されるとおり、蛍光色素コンジュゲート表面抗体混合物で６０分間染色した。ブロッキングおよび染色手順中、細胞は、４℃に維持し、遮光下に置いた。
Ｔ細胞の細胞内染色のため、表面染色後、プレートを再び１５００ｒｐｍで５分間スピンし、次に固定／透過処理キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して細胞を一晩固定および透過処理した。細胞を透過処理緩衝液で洗浄し、次に細胞内抗体により暗所下４℃で１時間染色した。プレートを透過処理緩衝液で２回洗浄し、２００μｌ ＰＢＳに懸濁した。ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してデータ収集を実施した。
データ解析
体重
体重変化率は、（ＢＷｃｕｒｒｅｎｔ−ＢＷＤ０）／（ＢＷＤ０）×１００％として計算した。データは、平均Ｄ０±ＳＥＭと見なした初回体重測定値からの平均体重変化率として提供した。Ｄ０は、体重に関するとき、腫瘍細胞移植の７〜１０日後または処置開始の１〜３日前に取った測定値に相関する。
腫瘍容積
処置／対照比（％Ｔ／Ｃ）および退縮率（％Ｒｅｇ）の値を、それぞれ以下の式を用いて計算した。
％Ｔ／Ｃ＝１００×ΔＴ／ΔＣ，ΔＴ＞０の場合
％Ｒｅｇ＝１００×ΔＴ／Ｔｉｎｉｔｉａｌ，ΔＴ＜０の場合
式中、
Ｔ＝薬物処置群の所与の試験日における平均腫瘍容積；
ΔＴ＝薬物処置群の所与の試験日における平均腫瘍容積−薬物処置群の初回投与日における平均腫瘍容積；
Ｔｉｎｉｔｉａｌ＝薬物処置群の初回投与日における平均腫瘍容積；
Ｃ＝全ての媒体処置マウスの最終試験日における対照群の平均腫瘍容積；
ΔＣ＝全ての媒体処置マウスの最終試験日における対照群の平均腫瘍容積−対照群の初回投与日における平均腫瘍容積。
エンドポイントまでの時間
カプラン・マイヤー生存分析を実施して、エンドポイントまでの時間（ＴＴＥ）の差を比較した。腫瘍容積が１０００ｍｍ３を超えたら腫瘍エンドポイントを達成したものとしてマウスをスコア化し、死亡（「１」）としてスコア化した。ログランク（マンテル・コックス）生存分析を実施した（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ１３．０）。エンドポイントまでの時間の中央値のグラフ解析をＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ ｖ７）で実施した。
フローデータ分析
各ラン後に毎回、ＴｒｅｅｓｔａｒからのＦＬＯＷＪＯ ｖ１０．０．７ソフトウェアを使用して分析を実施した。各分析について、形態学的パラメータの組み合わせ（全ての細胞：ＳＳＣ−Ａ対ＦＳＣ−Ａ、単一細胞：ＳＳＣ−Ｈ対ＳＳＣ−Ｗ；ＦＳＣ−Ｈ対ＦＳＣ−Ｗ）およびｅＦｌｕｏｒ７８０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）または黄色色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した死細胞の除外を用いて目的の集団をゲーティングすることにより、生存白血球を同定した。ＣＤ４５＋ＣＤ４＋およびＣＤ４５＋ＣＤ８＋標識を用いてＴ細胞をゲーティングし、続いてＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３−（Ｔ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ）およびＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋（Ｔｒｅｇ）サブセットをゲーティングした。新たにプライミングされたＴ細胞に関してＴｂｅｔ＋ＥＯＭＥＳ−細胞をゲーティングした。ＢｒｏｚおよびＫｒｕｍｍｅｌによる既発表の戦略により（Ｂｒｏｚ ＭＬ，Ｋｒｕｍｍｅｌ ＭＦ．Ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ａｓ ｐａｒｔｎｅｒｓ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１５ Ａｐｒ；３（４）：３１３−９）、骨髄系細胞をゲーティングした。樹状細胞（ＤＣ）をＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１１Ｃ＋ＣＤ１０３＋ＤＣに関してゲーティングした。ＣＤ４５−特異的標識を用いて、腫瘍細胞、内皮細胞および線維芽細胞を含む非リンパ球を同定した。
統計的分析
フローデータについて、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １３．０で対応のないｔ検定および一元配置ＡＮＯＶＡを実施した。統計的分析には、Δ腫瘍容積およびパーセント体重差を用いた。ＡＮＯＶＡまたはクラスカル・ワリスＡＮＯＶＡと、続く事後テューキー検定を用いて群間比較を行った。エンドポイントまでの時間の分析について、ログランク（マンテル・コックス）生存分析を実施した（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １３．０）。エンドポイントまでの時間の中央値のグラフ解析は、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ ｖ７）で実施した。全ての統計学的評価について、有意水準は、ｐ＜０．０５に設定した。特に指定されない限り、媒体対照群と比較した有意性を報告する。
結果
薬力学：免疫プロファイリング（７６２８ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤおよび８０６３ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＰＤ）
表Ｅｘ３．５および表Ｅｘ３．６に示すパネルに従ってフローサイトメトリーによるＴＩＬの免疫プロファイリングを実施した。初回投与後５日目および１２日目、動物を安楽死させた。ＴＩＬ特徴付けのため、腫瘍、腫瘍流入領域リンパ節および脾臓を採取した。腫瘍およびリンパ節からの骨髄およびＴ細胞コンパートメントを数え上げた。結果は、図２１および図２２に示す。脾細胞は、主に染色対照に使用した（データは示さず）。
初期の免疫プロファイリングから、ＨＤＭ２０１により％ＣＤ１１Ｃ＋ＣＤ４５＋細胞およびＣＤ８ Ｔ細胞が増加したことが明らかになった（図３−１）。ＨＤＭ２０１によって調節される特異的細胞型を更に精査するため、本発明者らは包括的ＦＡＣＳ分析を実施した。本発明者らは、ＨＤＭ２０１により、抗原交差提示能を有する％ＣＤ１０３＋ＣＤ１１＋ ＤＣが増加し；かつ新たにプライミングされた％Ｔｂｅｔ＋ＥＯＭＥＳ−ＣＤ８＋／ＣＤ４５＋Ｔ細胞およびＣＤ８／Ｔｒｅｇ比が増加したことを見出した（図２２）。加えて、ＨＤＭ２０１は、ＣＤ４５−集団（腫瘍細胞、間質細胞または内皮細胞）中のＰＤＬ１の平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示される、ＣＤ４５−細胞におけるＰＤＬ１発現を誘導した；ＨＤＭ２０１により、％ＰＤ１＋ＣＤ４５＋細胞も増加した（図２１）。これらの結果から、ＨＤＭ２０１が腫瘍に対して活性免疫応答を誘導したことが示された一方、これは、免疫細胞および腫瘍細胞上の免疫抑制タンパク質の上方制御を引き起こした。
抗腫瘍活性：Ｃｏｌｏｎ ２６同系異種移植片腫瘍モデルにおけるＨＤＭ２０１とａＰＤ−１抗体との併用（８０２０ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＥＦ）
Ｃｏｌｏｎ ２６マウス同系モデルにおいて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１軸を標的とするａＰＤ１抗体を伴うＨＤＭ２０１の抗腫瘍活性を調べた（８０２０ Ｃｏｌｏｎ ２６−ＸＥＦ）。細胞移植後９日目に動物を腫瘍容積に基づいて処置群に無作為化した。１２日目に処置を開始し、ＨＤＭ２０１の投与を３週間にわたって毎週および抗ＰＤ１抗体を２週間にわたって週２回継続した。動物は、腫瘍容積＞１０００ｍｍ３によって定義される個体エンドポイントに各々が達するまで試験を続けた。カプラン・マイヤー分析（ＧｒａｐｈＰａｄ ｖ７．０）を用いて、エンドポイントまでの時間の中央値として腫瘍成長遅延を評価した。
耐容性
動物の体重をモニタし、処置前（腫瘍移植後９日目）の体重に対する変化率として報告した。全ての群で体重の増加が観察されたため、処置は、全て良好に耐容された（図２３）。腫瘍移植後２３日目は、全ての動物が試験に残っていた最終日であったため、従ってこの分析に使用した。
抗腫瘍活性
カプラン・マイヤー（ログランク）分析によって決定されるとおりのエンドポイント（ＴＶ≧１０００ｍｍ３）までの時間の中央値を用いて処置媒介性腫瘍成長遅延を評価した。表Ｅｘ３．７に示されるとおり、単剤療法としてのＨＤＭ２０１は、媒体対照と比較してエンドポイントに達するまでの時間が増加する傾向を示し、エンドポイントまでの時間の中央値は、それぞれ２３日と比較して３１．５日であった。対照的に、ＰＤ１の遮断によりエンドポイントまでの時間が２３日となったが、これは、媒体群と同じである。ＨＤＭ２０１とａＰＤ１抗体との併用は、エンドポイントまでの時間を８４日にまで有意に延長した（ｐ＜０．０５）（表Ｅｘ３．７、図２４）。
Figure 2021518348
各処置群についての個々の動物の腫瘍容積を図２５に示す。媒体処置群の全ての動物において腫瘍成長を観察し、全て３０日目までにエンドポイントに達した。単剤療法としてのＨＤＭ２０１は、１０匹中１匹の動物が部分奏効を得ることをもたらした（図２５）；単剤療法抗ＰＤ−１抗体（クローン＃２９Ｆ．１Ａ１２）も、１０匹中１匹の動物が部分奏効を呈することにつながった（図２５）。対照的に、抗ＰＤ−１抗体とＨＤＭ２０１との併用は、１０匹中２匹の動物が部分奏効を呈し、１０匹中５匹が完全奏効を実証する結果となった（図２５）。
ＨＤＭ２０１は、持続性のある腫瘍特異的免疫応答を促進する
ＨＤＭ２０１で観察される免疫モジュレート活性およびチェックポイント遮断抗体と併用できるその能力を所与として、生成される抗腫瘍応答の持続性および特異性を調べた。抗腫瘍応答が抗原特異的であったかどうかを調べるため、奏効例のマウスを左側腹部に対するＣｏｌｏｎ ２６で再チャレンジした。
完全奏効を達成した動物を反対側の側腹部に対する２０万個のＣｏｌｏｎ ２６細胞で（初回細胞移植後１２３日目に）再チャレンジし、それによれば、全てのマウスがＣｏｌｏｎ ２６細胞の２回目の注射を拒絶した一方、ナイーブマウスには腫瘍が発生した（図２６）。対照的に、４Ｔ１細胞で（１８２日目に）再チャレンジしたとき、全てのマウスに腫瘍が発生したことから（ナイーブマウスと同様）、記憶がＣｏｌｏｎ ２６細胞に特異的であることが実証される（図２６）。
ＨＤＭ２０１処置が抗腫瘍記憶Ｔ細胞応答の発生を誘導したかどうかを更に調べるため、奏効例マウスからの脾細胞を摘出し、インビトロでＣＴ２６関連抗原ＡＨ１（ｇｐ７０４２３−４３１）ペプチドによって刺激し（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ １９９６）、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイでＩＦＮ−γ産生細胞の数を数え上げた。図２７に示すとおり、全ての奏効例においてＴ細胞による抗原特異的ＩＦＮ−γ産生が検出された。これと一致して、本発明者らは、ＨＤＭ２０１またはＨＤＭ２０１と抗ＰＤ１抗体との併用で処置したマウスの脾臓中のＡＨ１特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞頻度の増加が、Ｈ２Ｌｄ−ＡＨ１デキストラマーによって検出されるとおりの奏効例を誘導したことを観察した（図２８および図２９）。総じて、これらのデータから、ＨＤＭ２０１による処置が持続性のある腫瘍特異的記憶Ｔ細胞応答の発生を促進したことが実証された。
ｐ５３ノックアウトＣｏｌｏｎ ２６クローンのインビトロ特性
１μＭ ＨＤＭ２０１の存在下でｐ５３ノックアウトＣｏｌｏｎ ２６クローンを成長させ、抗ｐ５３抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ＣＳＴ＃２５２４）を使用した、４０μｇ全タンパク質／試料でロードしたウエスタンブロットにより、ｐ５３発現に関してスクリーニングした。ｐ５３陰性クローンを同定し、ＨＤＭ２０１なしに４日間成長させて、次にＣｏｌｏｎ２６親細胞と併せて１μＭ ＨＤＭ２０１で再び２４時間処理することにより、ｐ５３経路の応答をモニタした。ｐ５３およびｐ２１の変化をウエスタンブロットによりモニタし、８４遺伝子ｑＰＣＲアレイを使用して経路活性を更に確認した（ＲＴ２ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ ＰＣＲ Ａｒｒａｙ ｐ５３経路、カタログ番号３３０２３１ ＰＡＭＭ−０２７ＺＡ Ｑｉａｇｅｎ）。選択のクローンは、ＲＮＡＳｅｑ分析にもかけた。
このｐ５３ ＫＯ Ｃｏｌｏｎ２６モデルを使用して、ＨＤＭ２０１が腫瘍成長を阻害できないことが示される（図３０）。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１軸を遮断したとき、更なる利益は、観察されなかった（図３０）。総じて、このデータは、ＨＤＭ２０１のその有益な応答として観察される抗腫瘍活性の特異性がｐ５３野生型腫瘍においてのみ観察されることを実証している。
結論
ｐ５３は、細胞周期停止またはアポトーシスの誘導を通じて細胞のゲノム安定性を監視することにおいて中心的な役割を果たす転写因子である。ｐ５３は、腫瘍免疫の調節および免疫応答の恒常性調節に関与することも報告されている。ここでは、ＨＤＭ２０１が腫瘍および腫瘍流入領域リンパ節の免疫細胞に影響を及ぼしたことが実証される。具体的には、ＨＤＭ２０１により、腫瘍および流入領域リンパ節の抗原提示細胞（ＤＣ）が増加した。ＤＣがナイーブＴ細胞に腫瘍抗原を提示し、結果として腫瘍および腫瘍流入領域リンパ節中の新たにプライミングされたＴ細胞の数が増加したことが想定される。これらのＴ細胞は、腫瘍部位に遊走し、腫瘍抗原を認識して活性化された。最終的に、腫瘍においてＣＤ８／Ｔｒｅｇ比の増加が観察された。ＣＤ８ Ｔ細胞は、腫瘍細胞を認識して腫瘍細胞死滅を誘導した活性エフェクター細胞である。加えて、ＣＤ４５−集団においてＰＤＬ１の上方制御が観察され、ＨＤＭ２０１と抗ＰＤ１抗体との併用は、単剤療法としてのＨＤＭ２０１およびａＰＤＬ１抗体と比較して抗腫瘍応答を有意に増強した。これらの結果は、ｐ５３野生型腫瘍モデルにおいてＭＤＭ２阻害が適応免疫を惹起し、それがＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の遮断によって更に増強されたことを実証し、従って野生型ｐ５３を有する癌患者におけるＭＤＭ２阻害剤とチェックポイント遮断抗体との併用に関する理論的根拠を提供するものである。
実施例４：ＰＤ−１阻害剤ＰＤＲ００１（ＢＡＰ０４９−クローンＥ、スパルタリズマブ）とＨＤＭ２阻害剤ＨＤＭ２０１との併用に関する臨床研究
臨床試験
ＣＰＤＲ００１Ｘ２１０２、ＥＵＤＲＡＣＴ番号：２０１６−０００６５４−３５
ＨＤＭ２０１（とりわけ）と併用したＰＤＲ００１の安全性、耐容性および薬力学（ＰＤ）を特徴付けるための第Ｉｂ相非盲検多施設試験
理論的根拠
近年、抗腫瘍免疫を増強する薬剤の開発により、癌の処置は、急速に変化している。しかしながら、それらの処置は、あらゆる癌種で有効というわけではなく、多くの場合に応答に持続性がなく、多くの患者は、処置からの利益をほとんどまたは全く受けない。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の阻害剤は、良好に耐容され、著しく広範な癌種にわたって活性であり、処置の奏効率および持続性を増加させる併用療法の一成分となる可能性が高いであろう。
本試験でＰＤＲ００１と併用される薬剤は、直接的な抗腫瘍剤としてではなく、免疫調節薬として使用される。上市薬剤パノビノスタットおよびエベロリムスが、これらには承認されていない適応疾患において使用されることになり、エベロリムスの場合、承認されているレジメンと比べて大幅に低い用量かつ少ない頻度で投与されることになる。目標は、腫瘍細胞が生存のために依存する決定的に重要な経路の阻害剤としてこれらの薬剤を使用するのでなく、より有効な抗腫瘍免疫応答を刺激するために使用することである。このような理由のためおよび抗腫瘍免疫応答の増強が多くの疾患に有益であると予想されるため、これらの併用は、それらが上市されている適応疾患以外で試験されることになる。
ＨＤＭ２０１との併用でのＰＤＲ００１に関して、ＨＤＭ２とＴＰ５３との間の相互作用の阻害剤であるＨＤＭ２０１は、前臨床モデルにおいて免疫活性化およびＰＤ−１遮断の有効性も増強する。
本試験は、更なる試験に向けて用量およびスケジュールを同定することになり、かつそうした併用の安全性、耐容性、薬理学的および臨床的活性を予備的に評価することになる。
以下の癌種を試験に選択した。
結腸直腸癌（ミスマッチ修復欠損サブ集団以外）：理由は不明ながら、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法が無効な癌。既発表のデータが示唆するところによれば、腫瘍の免疫学的コンテクストが従来の化学療法による処置の奏効の予後指標および予測指標となるが、しかし、理由は不明ながら、ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４阻害剤は無効である（Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ，Ｇａｌｌｕｚｚｉ Ｌ，Ｌａｕｒｅｎｃｅ Ｚｉｔｖｏｇｅｌ Ｌ，ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ｆｏｕｎｄ ｔｏ ｂｅ ｕｎｄｅｒ ｉｍｍｕｎｏｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｏｎｅ ｔｏ ｒｅｓｐｏｎｄ ｔｏ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ？ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４：７，ｅ１０５８５９７−１−３）。ＣＲＣを含める目的は、併用療法がより有効な抗腫瘍応答を活性化し得るかどうかを知るためである。
ＭＳＳ ＣＲＣを有する患者は、この疾患のＴＰ５３突然変異率が比較的低いため、ＰＤＲ００１＋ＨＤＭ０１アームに適格となることになる。
ＰＤＲ００１＋ＨＤＭ２０１アームについてのみ、腎細胞癌：ＲＣＣを含める目的は、ＨＤＭ２０１との併用療法が活性の幅を広げるか、奏効を深めるか、またはより持続性のある応答につながり得るかどうかに関して予備的評価を提供するためである。ＰＤＲ００１＋ＨＤＭ２０１による試験のための疾患は、適格性にＴＰ５３野生型疾患を有する患者のみを同定する必要がある点を反映して修正されることになる。
腎細胞癌は、ＴＰ５３突然変異率が低く、ＰＤ−１阻害剤による処置が奏効する患者は、少数である。
この試験の目的は、単剤ＰＤ−１阻害剤による処置についての既発表のデータと比較して、併用により奏効率および奏効の持続性が上昇し得るという予備的エビデンスを提供することである。各疾患群には、併用療法がＰＤ−１遮断に対する抵抗性を解消し得るかどうかを調べるため、ＰＤ−１チェックポイント阻害剤による処置歴のある患者のサブセットが含まれ得る。概して、ＰＤ−Ｌ１発現などの承認済みの分子診断検査に基づいて患者を除外することを裏付ける現在利用可能なデータはないため、各疾患について、特異的分子選択は、適用されないことになる。
この試験は、これらの薬剤をＰＤＲ００１と安全に併用できるかどうかを調べることになり、かつ併用できる場合には更なる試験に適切な用量およびレジメンを同定することになる。この試験は、各併用が、潜在的な臨床的有益性を示唆するであろう腫瘍の薬理学的変化を誘導するかどうかも評価することになり、かつ各併用の有効性を予備的に評価することになる。
目的
主要目的
＝＞ＨＤＭ２０１との併用でのＰＤＲ００１の安全性および耐容性を特徴付けることにより、更なる試験のための推奨用量およびスケジュールを同定すること
エンドポイント：
安全性
・処置により発生するＡＥおよびＳＡＥの頻度および重症度
・ベースラインとベースライン後との間の検査パラメータおよびバイタルサインの変化
漸増試験のみ
・最初の２回の処置サイクルにおける用量制限毒性（ＤＬＴ）の発生率
耐容性
・投与中断および減量の頻度
・用量強度
重要な副次的目的
＝＞腫瘍における免疫浸潤の変化を特徴付けること
エンドポイント：ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色による腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の病理組織所見、ＩＨＣによるＴＩＬおよび骨髄系細胞浸潤の特徴付け（適宜、ＣＤ８、ＦｏｘＰ３および骨髄マーカーなど）
副次的目的
＝＞ＨＤＭ２０１との併用でのＰＤＲ００１の抗腫瘍活性を推定すること
エンドポイント：ｉｒＲＣおよびＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１による最良総合効果（ＢＯＲ）、ＰＦＳ。無治療生存期間（ＴＦＳ）
＝＞全ての試験薬の薬物動態を特徴付けること
エンドポイント：ＰＤＲ００１の血清濃度およびＰＫパラメータ、ＨＤＭ２０１の血漿濃度およびＰＫパラメータ
＝＞ＰＤＲ００１の免疫原性を評価すること
エンドポイント：抗ＰＤＲ００１抗体の存在および／または濃度
探索的目的
＝＞試験処置の再投与後におけるＨＤＭ２０１との併用でのＰＤＲ００１の抗腫瘍活性を推定すること
エンドポイント：ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１によるＢＯＲ
試験設計
これは、ＴＰ５３野生型ＭＳＳ−ＣＲＣまたはＲＣＣを有する患者におけるＨＤＭ２０１との併用でのＰＤＲ００１の第Ｉｂ相多施設非盲検試験である。
本試験は、１１治験アームによる用量漸増パートと、それに続く用量拡大パートを含む。
本試験の用量漸増パートでは、患者は、ＨＤＭ２０１と併用してｉ．ｖ．投与される固定用量のＰＤＲ００１で処置されることになる。
３〜６例の患者が１つまたは複数のＭＴＤ／ＲＤＥの決定まで処置されることになる。
ＨＤＭ２０１の開始用量は、６０ｍｇである。
ＨＤＭ２０１を伴うＰＤＲ００１についての用量漸増およびＭＴＤ／ＲＤＥの決定は、ＥＷＯＣ基準を用いたＢＬＲＭが指針となることになる。用量漸増は、２回の処置サイクルの完了後に実施することになる。任意のＤＬＴを同定するため、全ての登録患者について有害事象（ＡＥ）および検査値を含めた安全性評価が綿密にモニタされることになる。単一のＭＴＤ／ＲＤＥが定義されることになる。疾患特異的ＭＴＤ／ＲＤＥは、確立されないことになる。
ＭＴＤ／ＲＤＥの決定に先立ち、最低でも１２例の患者がＰＤＲ００１とＨＤＭ２０１との併用で処置されていなければならない。
全ての患者からペア腫瘍生検が入手されることになる。これらの生検試料の分析は、この併用の用量と薬力学的活性との間の関係に関するより良い理解に寄与することになる。
この併用療法についてＭＴＤ／ＲＤＥが断言され次第、それぞれの用量拡大パートを開始し得る。拡大パートの主要目的は、ＭＴＤ／ＲＤＥでの任意の試験処置の安全性および耐容性を更に評価することである。
重要な副次的目的は、処置に応答した腫瘍における免疫浸潤の変化を評価することである。これは、ＭＴＤ／ＲＤＥで処置した患者において、最低でも１０例の評価可能な生検ペアとして（生検標本は、分析に十分な腫瘍を含まなければならない）、全ての患者から採取したペア腫瘍生検で評価されることになる。これが実現不可能である場合、これらの生検の採取は、中止され得る。最低でも２０例の患者を処置するように計画されるが、しかしながら、一部の生検標本の不足を考慮すると、従って各治験アームで約３０例の患者が処置されると推定される。副次的目的には、予備的抗腫瘍活性の評価が含まれる。
各処置群には、過去にＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤療法を受けたことがあり、かつそれで進行した患者を最大で約６例登録し得る。併用が単剤ＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤による過去の処置に対する抵抗性を解消するのに有望である場合または過去のＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤処置に対してナイーブな患者の登録が調達管理上実現不可能な場合、この数を増やし得る。
漸増パートおよび拡大パートに登録した患者は、全て以下の試験期間に参加し得る。
・プレスクリーニング期間
・スクリーニング期間
・処置期間１
・処置中断期間
・処置期間２
・安全性フォローアップ期間
・疾患進行フォローアップ
各試験期間を以下に説明し、かつ図３１に示す。患者は、全て安全性フォローアップ期間の完了、同意の撤回、追跡不能または死亡まで「試験中」と見なされる。
任意の分子プレスクリーニング手順前に分子プレスクリーニングインフォームドコンセントに署名がなされなければならない（本試験外でＴＰ５３状態が既に評価されていた場合には適用されない）。潜在的な適格患者は、フルスクリーニングにその患者を検討し得る前に、シーケンシングによるそのＴＰ５３状態に関する証拠書類を有しなければならない。患者は、その腫瘍試料がＴＰ５３遺伝子のエクソン５、６、７および８に突然変異を呈しない場合ならびにこのＴＰ５３状態が試験処置の初回投与前３６ヵ月以内に採取された腫瘍試料から入手されたものである場合（ＴＰ５３ｗｔ状態が本試験外で各施設において入手されていた場合も該当）、フルスクリーニングに適格と見なされることになる。例外：ＨＤＭ２増幅（＞４コピー数として定義される）の過去の証拠書類（日付不問）があれば、ＴＰ５３ ＷＴ状態の確認は不要である。
スクリーニングテストは、ＴＰ５３状態が判明した後に限り開始しなければならない。
患者が試験インフォームドコンセントに署名し次第、スクリーニング期間が始まる。患者が全ての組入れ基準を満たし、かついずれの除外基準にも該当しないことを確実にするため、患者が評価されることになる。
処置期間１は、スクリーニング後、サイクル１の１日目に始まることになる。患者は、予定されたビジットにおいて臨床評価を受けることになる。
処置期間１中の試験処置は、患者が許容できない毒性を経験する場合、疾患進行の臨床的エビデンスを有する場合および／または治験責任医師もしくは患者の裁量により処置が中断される場合を除き、６回の治療サイクルにわたって投与されることになる。疾患進行の放射線学的エビデンスを有するが、臨床的有益性のエビデンスを有する患者は、Ｎｏｖａｒｔｉｓからの書面化された承認後に試験処置を継続して６サイクルを完了し得る。
処置期間１中に患者が試験処置を永久に中断する場合、以下に定義するとおりの処置終了ビジットおよび適切なフォローアップ評価が行われなければならない。
患者がサイクル６（処置期間１）を完了し次第、試験処置は、中断されることになり、患者は、試験処置中断期間に入ることになる。患者は、安全性評価（毎月）、腫瘍評価（２ヵ月毎）およびＰＤＲ００１ ＰＫのための試料採取（毎月）ならびにＲＯ評価（毎月）のための試験ビジットを継続することになる。患者に疾患進行の臨床的または放射線学的エビデンスがあれば、患者は、Ｎｏｖａｒｔｉｓとの書面化された話し合い後に処置を再開し得る。
患者が処置期間２に入るのでなく、試験処置を永久に中断する場合、以下に定義するとおりの処置終了ビジットが行われなければならず、および適切なフォローアップ評価が実施されなければならない。
患者は、その処置中断時にその患者が受けていた同じ用量およびスケジュールで試験処置を再開しなければならない（図２７）。患者は、発生する毒性および進行に関連する臨床状態の低下の点で患者が処置に適切であることが治験責任医師とＮｏｖａｒｔｉｓメディカルモニターとの間で書面によって合意された後に限り、処置期間２で治療を開始することになる。患者は、全て試験処置の再開前に腫瘍評価を有していなければならない。この腫瘍評価が処置期間２のベースラインとして使用されることになる（図２７）。２回の試験処置サイクルが完了した後、患者が、いかなるグレード２を超える試験処置関連毒性も経験していない場合、その患者は、施設の標準ケアまたは３ヵ月毎のうち、いずれか高頻度の方に従い、削減した評価スケジュール下で試験を継続し得る。処置期間２中に疾患進行の放射線学的エビデンスを示し、かつ臨床的有益性のエビデンスを有する患者は、Ｎｏｖａｒｔｉｓとの書面化された話し合い後に試験処置を継続し得る。
処置期間２における試験処置の永久的な中断後、以下に定義するとおり処置終了ビジットおよび安全性フォローアップ評価が行われなければならない。
ＥＯＴ（処置終了）ビジットは、試験処置を永久に中断するとの決定から１４日以内に行われることになる。全ての参加患者がＥＯＴビジットを完了しなければならない。
全ての患者は、ＰＤＲ００１を永久に中断した後１５０日間にわたり安全性評価に関して追跡されることになる。
患者集団
本試験は、進行した／転移性のＣＲＣまたはＲＣＣを有する成人患者で行われることになる。
組入れ基準：
本試験への組入れに適格な患者は、以下の基準を全て満たす必要がある：
１．任意の手順前に書面によるインフォームドコンセントを入手しなければならない
２．年齢１８歳以上
３．ＲＥＣＩＳＴ第１．１版によって決定したとき測定可能な疾患を伴う、進行癌／転移性癌を有する患者であって、標準療法にも関わらず進行があった者、または標準療法を耐容できない者、または標準療法が存在しない者。
患者は、ＨＤＭ２０１との併用でのＰＤＲ００１に関する以下の群の１つに当てはまる者でなければならない
・ＴＰ５３野生型ＣＲＣ（ＰＣＲおよび／またはＩＨＣを含めた各施設のアッセイによればミスマッチ修復欠損でない）またはＴＰ５３野生型ＲＣＣ
ＴＰ５３野生型であると見なされるために、試験薬の初回投与前３６ヵ月以内に採取された腫瘍試料において最低でも腫瘍にエクソン５、６、７および８に検出される突然変異があってはならない。ＨＤＭ２のゲノム増幅（＞４コピー数として定義される、日付不問）を有するとの過去の証拠書類がある腫瘍について、ＴＰ５３ ＷＴ状態の確認は不要である。
４．ＥＣＯＧパフォーマンスステータス≦１
患者は、生検に適した疾患部位を有し、かつ処置施設の指針に基づく腫瘍生検候補者でなければならない。患者は、スクリーニング時および本試験中の治療中に再度、新規腫瘍生検を受ける意思がなければならない。
５．過去のＰＤ−１−またはＰＤ−Ｌ１を標的とする治療に帰することのできる任意の毒性が治療の中断につながらなかったことを条件として、過去のＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤による治療は、許容される。
除外基準：
本試験に適格な患者は、以下の基準（とりわけ）のいずれにも該当してはならない：
以下として定義される範囲外の検査値を有する患者：
・クレアチニンクリアランス（コッククロフト・ゴールト式を用いた計算値または測定値）＜４０ｍＬ／分
・総ビリルビン＞１．５×ＵＬＮ、但しジルベール症候群の患者を除き、これらの患者は、総ビリルビン＞３．０×ＵＬＮまたは直接ビリルビン＞１．５×ＵＬＮの場合に除外される
・アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞３×ＵＬＮ、但し肝臓の腫瘍病変を有する患者を除き、これらの患者は、ＡＬＴ＞５×ＵＬＮの場合に除外される
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）＞３×ＵＬＮ、但し肝臓の腫瘍病変を有する患者を除き、これらの患者は、ＡＳＴ＞５×ＵＬＮの場合に除外される
・成長因子または輸血支持のない、好中球絶対数＜１．０×１０９／Ｌ
・成長因子または輸血支持のない、血小板数＜７５×１０９／Ｌ
・ヘモグロビン（Ｈｇｂ）＜９ｇ／ｄＬ
・適切な補充療法にも関わらず、カリウム、マグネシウム、カルシウムまたはリン酸異常＞ＣＴＣＡＥグレード１
以下の処置を必要とする患者：
・中程度〜強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤
・治療指数が狭いＣＹＰ３Ａ４／５の任意の基質
中程度〜強力なＣＹＰ３Ａ４誘導剤
以下に関して範囲外の値を有する患者：
・好中球絶対数（ＡＮＣ）＜１５００／μＬ
・血小板＜１０００００／μＬ
処置
ＣＰＤＲ００１Ｘ２１０１第Ｉ／ＩＩ相臨床試験においてＰＤＲ００１についてのＲＰ２Ｄは、４週間毎に投与される４００ｍｇと確立されており、この併用試験の全ての患者に用いることになる。
従って、患者は、ＰＤＲ００１によって４００ｍｇ Ｑ４ＷのＲＰ２Ｄで処置されることになる。ＰＤＲ００１（注入溶液のための１００ｍｇ粉末として供給される）は、ｉ．ｖ．によって３０分注入としてまたは臨床的に適応があれば最長２時間にわたって投与されることになる。
ＨＤＭ２０１は、４週間処置サイクルの１日目（ｄ１）および８日目（ｄ８）に与えられることになり（ｑ４ｗ）、即ちレジメン１Ｂである。ＨＤＭ２０１は、１０ｍｇおよび１００ｍｇ（ＨＤＭ２０１遊離塩基のｍｇで表される）の投薬量強度で経口投与のための硬ゼラチンカプセルとして供給されることになる。カプセルは、異なるサイズおよび／または色によって区別され、非盲検小児安全密閉ボトルに供給されることになる。開始用量は、６０ｍｇとなる。用量は、２０ｍｇの用量増分で漸増され得、例えば８０ｍｇ、１００ｍｇ、１２０ｍｇであり得る。ＨＤＭ２０１は、提案される開始用量を下回って漸減させることができ、例えば４０ｍｇであり得る。
ＣＨＤＭ２０１Ｘ２１０１臨床試験では、固形腫瘍を有する患者について、各２８日サイクルのＤ１およびＤ８に与えられる１２０ｍｇのＲＤＥが確立された。
本併用試験について、開始用量は、各２８日サイクルのＤ１およびＤ８における６０ｍｇとなる。この用量は、固形腫瘍を有する患者に対するＲＤＥの半分であり、患者で依然として試験されていないものの、この用量およびスケジュールは、血小板減少症の誘導によって評価したとき、１５ｍｇ〜２５ｍｇ ＱＤのＨＤＭ２０１によって１週間オン／３週間オフで処置される固形腫瘍を有する患者において活性であると予想される。
ＰＤＲ００１は、ＨＤＭ２０１と併用して投与されることになる。患者は、体重または体表面積基準でなく、フラットスケールで投与されることになる。併用薬物の投与は、臨床ビジット中にＰＤＲ００１注入の完了直後に行われることになる。
薬物動態試料の採取日、患者は、投与前採血およびＰＤＲ００１投与後、その朝の用量を診療室にて服用しなければならない。
ＨＤＭ２０１は、少なくとも食事の１時間前または食事の２時間後に空腹状態で経口投与されなければならない。患者は、カプセルを朝、毎日ほぼ同じ投与時間にコップ１杯の水でカプセルを咀嚼せずに服用しなければならない。患者が複数のカプセルを服用すべき用量レベルに割り付けられる場合、カプセルは、可能な限り短い間隔内に連続して服用されなければならない。ビジット日、患者は、ＨＤＭ２０１を診察室において治験責任医師または被指名人の監視下で服用することになる。患者が、８日目に計画されるとおりの用量の服用を失念した場合、その患者は、可能な限り早くその用量を服用しなければならない。しかしながら、予定された用量から６日超が経過した場合、その用量は、抜かさなければならない。
ＨＤＭ２０１について、血小板減少症の患者に対する抗凝固薬療法および抗血小板剤の使用は、慎重に検討されなければならない。
試験薬
ＰＤＲ００１：
医薬品形態：注入溶液のための粉末
静脈内（ＩＶ）使用について。この抗体は、単剤ＲＤＥ（用量拡大パートの推奨用量）である４００ｍｇ Ｑ４Ｗのフラット用量でｉ．ｖ．（静脈内に）投与されることになる。この抗体は、併用治療レジメンについて３００ｍｇ ｉ．ｖ．Ｑ３Ｗでも投与され得、併用治療レジメンにはこれがより好都合であり得る。
ＨＤＭ２０１：
製剤は、硬質ゼラチンカプセル（ＨＧＣ）に直接充填されたＨＤＭ２０１コハク酸製剤原料からなり、いかなる他の添加剤も含まない。この製剤を４種の投与量強度：１ｍｇ、２．５ｍｇ、１０ｍｇおよび１００ｍｇ（遊離形態の重量を基準とする）で提供し、経口使用を目的とする。１ｍｇ強度のカプセルは、「サイズ３」黄色ＨＧＣであり、２．５ｍｇ強度カプセルは、「サイズ３」Ｓｗｅｄｉｓｈ Ｏｒａｎｇｅ ＨＧＣであり、１０ｍｇ強度カプセルは、「サイズ１」Ｇｒｅｙ ＨＧＣであり、１００ｍｇは、「サイズ０」Ｓｗｅｄｉｓｈ Ｏｒａｎｇｅ ＨＧＣである。この製剤は、チャイルドレジスタンスであり誘導密封された高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）ボトルに入っている。経口使用向け。
参照による援用
図および表を含めた他の実施形態および例については、“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ ＰＤ−１ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ”という名称の国際公開第２０１５／１１２９００号パンフレットおよび米国特許出願公開第２０１５／０２１０７６９号明細書（これらは、全体として参照により援用される）に開示されている。
本明細書において言及される全ての刊行物、特許および受託番号は、各個別の刊行物または特許が参照によって援用されることが具体的かつ個別的に指示されたものとして本明細書によって全体として参照により援用される。
均等物
本発明の具体的な実施形態が考察されているが、上記の本明細書は、例示的なものであり、限定的なものではない。本明細書および以下の特許請求の範囲を検討すれば、当業者に本発明の多くの変形形態が明らかになるであろう。本発明の完全な範囲は、その均等物の全範囲と併せた特許請求の範囲およびかかる変形形態と併せた本明細書を参照することにより決定されなければならない。

Claims (28)

  1. （Ａ）（６Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン（化合物Ａ）
    Figure 2021518348
    またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶であるＨＤＭ２阻害剤；および
    （Ｂ）表１に記載されるとおりのＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、表１に記載されるとおりのＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む、ヒトプログラム死−１（ＰＤ−１）への結合能を有する単離抗体分子である抗ＰＤ−１抗体分子
    を含む医薬併用。
  2. 前記抗ＰＤ−１抗体分子は、
    （ａ）配列番号４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
    （ｂ）配列番号１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１０のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；
    （ｃ）配列番号４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；または
    （ｄ）配列番号１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１０のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ
    を含む、請求項１に記載の医薬併用。
  3. 前記ＨＤＭ２阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶と、前記抗ＰＤ−１抗体分子とは、個別、同時または逐次投与される、請求項１または２に記載の医薬併用。
  4. 前記ＨＤＭ２阻害剤は、経口投薬形態である、請求項１または２に記載の医薬併用。
  5. 前記抗ＰＤ−１抗体分子は、注射用投薬形態である、請求項１または２に記載の医薬併用。
  6. 請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬併用と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
  7. 増殖性疾患の処置における使用のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬併用または請求項６に記載の医薬組成物。
  8. 増殖性疾患の処置のための薬物の調製のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬併用の使用。
  9. 増殖性疾患の処置を、それを必要としている対象において行う方法であって、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬併用または請求項６に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
  10. 前記増殖性疾患は、ＴＰ５３野生型固形腫瘍である、請求項７に記載の使用のための医薬併用、または請求項８に記載の医薬併用の使用、または請求項９に記載の方法。
  11. 前記増殖性疾患は、腎細胞癌（ＲＣＣ）である、請求項１０に記載の使用のための医薬併用、または請求項１０に記載の医薬併用の使用、または請求項１０に記載の方法。
  12. 前記増殖性疾患は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）である、請求項１０に記載の使用のための医薬併用、または請求項１０に記載の医薬併用の使用、または請求項１０に記載の方法。
  13. 前記増殖性疾患は、マイクロサテライト安定性結腸直腸癌（ＭＳＳ−ＣＲＣ）である、請求項１０に記載の使用のための医薬併用、または請求項１０に記載の医薬併用の使用、または請求項１０に記載の方法。
  14. 前記ＨＤＭ２阻害剤は、４週間処置サイクルの１日目および６日目〜１４日目のいずれか１日、好ましくは４週間処置サイクルの１日目および６日目〜１０日目のいずれか１日、より好ましくは４週間処置サイクルの１日目および８日目（ｄ１ｄ８ｑ４ｗ）に投与される、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬併用、または請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の医薬併用の使用、または請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記ＨＤＭ２阻害剤の１日用量は、約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０ｍｇから選択され、好ましくは、ＨＤＭ２０１阻害剤の１日用量は、約３０〜約１２０ｍｇであり、好ましくは、前記１日用量は、約４０〜約１２０ｍｇであり、より好ましくは、前記１日用量は、約６０〜約１２０ｍｇであり、ｍｇでの１日用量の量は、遊離形態としての前記ＨＤＭ２阻害剤に基づく、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の使用のための医薬併用、または前記請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の医薬併用の使用、または請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記ＨＤＭ２阻害剤の１日用量は、約６０〜約９０ｍｇであり、更により好ましくは、前記１日用量は、約６０〜約８０ｍｇであり、ｍｇでの１日用量の量は、遊離形態としての前記ＨＤＭ２阻害剤に基づく、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の使用のための医薬併用、または請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の医薬併用の使用、または請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇ〜約４００ｍｇの用量で３週間に１回または４週間に１回投与される、請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の使用のための医薬併用、または請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の医薬併用の使用、または請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇの用量で３週間に１回投与される、請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の使用のための医薬併用、または請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の医薬併用の使用、または請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与される、請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の使用のための医薬併用、または請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の医薬併用の使用、または請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記抗ＰＤ−１抗体分子は、
    （ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｃ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｄ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｅ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｆ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｇ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｈ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｊ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｋ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｌ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｍ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｎ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
    （ｏ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
    （ｐ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
    を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための医薬併用、または請求項６に記載の医薬組成物、または請求項８に記載の医薬併用の使用、または請求項９に記載の方法。
  21. ＴＰ５３野生型固形腫瘍の処置における使用のための抗ＰＤ−１抗体であって、ＨＤＭ２阻害剤との個別、同時または逐次投与のために調製される抗ＰＤ−１抗体。
  22. ＴＰ５３野生型ＲＣＣの処置における使用のための抗ＰＤ−１抗体であって、ＨＤＭ２阻害剤との個別、同時または逐次投与のために調製される抗ＰＤ−１抗体。
  23. ＴＰ５３野生型ＣＲＣの処置における使用のための抗ＰＤ−１抗体であって、ＨＤＭ２阻害剤との個別、同時または逐次投与のために調製される抗ＰＤ−１抗体。
  24. ＴＰ５３野生型ＭＳＳ ＣＲＣの処置における使用のための抗ＰＤ−１抗体であって、ＨＤＭ２阻害剤との個別、同時または逐次投与のために調製される抗ＰＤ−１抗体。
  25. ＴＰ５３野生型固形腫瘍の処置における使用のためのＨＤＭ２阻害剤であって、抗ＰＤ−１抗体との個別、同時または逐次投与のために調製されるＨＤＭ２阻害剤。
  26. 患者のＴＰ５３野生型固形腫瘍の処置における使用のためのＨＤＭ２阻害剤であって、抗ＰＤ−１抗体との個別、同時または逐次投与のために調製され、前記患者は、過去に免疫療法を受けたことがある、ＨＤＭ２阻害剤。
  27. （ａ）１つ以上の投薬量単位の、請求項１に記載のＨＤＭ２阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、錯体もしくは共結晶と、（ｂ）１つ以上の投薬量単位の、請求項２に記載の抗ＰＤ−１抗体と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体とを含む併用製剤。
  28. 活性成分として、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬併用を、前記医薬併用の、それを必要としている患者への同時、個別または逐次投与に関する説明書と共に含む市販用パッケージキットであって、増殖性疾患の処置における使用のための市販用パッケージキット。
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