KR20200134253A - 약제학적 병용물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 (a) 프로그래밍된 사멸 1(Programmed Death 1, PD-1)에 결합하는 적어도 하나의 항체 분자(예를 들어, 인간화 항체 분자), 및 (b) HDM2-p53 상호작용 억제제를 포함하며, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위해 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여하기 위한 약제학적 병용물, 이러한 병용물을 포함하는 약제학적 조성물; 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 상기 병용물을 투여하는 것을 포함하는 증식성 질환을 앓는 대상체의 치료 방법; 증식성 질환의 치료를 위한 이러한 병용물의 용도; 및 이러한 병용물을 포함하는 시판 패키지에 관한 것이며; 상기 증식성 질환은 TP53 야생형 종양, 특히 TP53 야생형 신장 세포 암종(RCC) 또는 TP53 야생형 결장직장암(CRC)이다.

Description

약제학적 병용물
[서열 목록]
본 출원은 ASCII 형식으로 전자 제출되고, 그의 전문이 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 상기 ASCII 사본은 파일명이 PAT058095_SL.TXT이며, 크기가 190,381 바이트이다.
[기술분야]
본 발명은 (a) 본원에서 "PD-1 억제제"로도 지칭되는 프로그래밍된 사멸 1(Programmed Death 1, PD-1)에 결합하는 적어도 하나의 항체 분자(예를 들어, 인간화 항체 분자), 및 (b) 본원에서 "HMD2 억제제"로도 지칭되는 HDM2-p53 상호작용 억제제를 포함하며, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위해 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여하기 위한 약제학적 병용물, 이러한 병용물을 포함하는 약제학적 조성물; 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 상기 병용물을 투여하는 것을 포함하는 증식성 질환을 앓는 대상체의 치료 방법; 증식성 질환의 치료를 위한 이러한 병용물의 용도; 및 이러한 병용물을 포함하는 시판 패키지에 관한 것이며; 상기 증식성 질환은 종양, 특히 TP53 야생형 종양, 특히 TP53 야생형 고형 종양, 특히 TP53 야생형 신장 세포 암종(RCC) 또는 결장직장암(CRC)이다.
p53은 비정상적인 성장 신호, DNA 손상, 자외선 및 단백질 키나아제 억제제를 포함한 다수의 잠재적 종양 형성 과정에 의해 유도되고 활성화되며(Millard M, et al. Curr Pharm Design 2011;17:536-559), 세포 성장 정지, DNA 수복, 세포자멸사 및 혈관신생을 제어하는 유전자를 조절한다(Bullock AN & Fersht AR. Nat Rev Cancer 2001;1:68-76; Vogelstein B, et al. Nature Education 2010;3(9):6).
인간 이중 미세체-2(Human Double Minute-2, HDM2)는 p53의 가장 중요한 조절인자 중 하나이다. 이는 p53에 직접적으로 결합하여, 이의 전사활성화를 억제하고, 이어서 이를 세포질 분해로 유도한다(Zhang Y, et al. Nucleic Acids Res 2010;38:6544- 6554).
p53은 (모든 인간 암의 대략 50%에서 발견되는) TP53 유전자의 직접적인 돌연변이를 통해(Vogelstein, B et al. Nature 2000;408:307-310), 또는 HDM2의 과발현과 같은 억제 메커니즘을 통해(Zhao Y, et al. BioDiscovery 2013;8:4), 인간 암에서 가장 빈번하게 불활성화되는 단백질 중 하나이다.
HDM2-p53 상호작용의 강력하고 선택적인 억제제(HDM2 억제제 또는 MDM2 억제제로도 언급됨), 예를 들어 NVP-HDM201은 전임상 세포에서와 생체내 모델에서 p53 기능을 회복시키는 것으로 밝혀졌다(Holzer P, et al. Poster presented at AACR 2016, Abstract #4855).
T 세포가 항원에 대한 면역 반응을 매개하는 능력은 2개의 별개의 신호전달 상호작용을 필요로 한다(Viglietta, V. et al. (2007) Neurotherapeutics 4:666-675; Korman, A. J. et al. (2007) Adv. Immunol. 90:297-339). 첫 번째, 항원-제시 세포(APC)의 표면 상에 배열된 항원이 항원-특이적 미감작 CD4+ T 세포에 제시된다. 그러한 제시는 T 세포 수용체(TCR)를 통해 신호를 전달하고, 이는 T 세포가 제시된 항원에 특이적인 면역 반응을 개시하도록 유도한다. 두 번째, APC와 별개의 T 세포 표면 분자 사이의 상호작용을 통해 매개된 다양한 공동자극성 및 억제성 신호가 T 세포의 활성화 및 증식, 그리고 궁극적으로는 그들의 억제를 촉발한다.
프로그래밍된 사멸 1(PD-1) 단백질은 T 세포 조절인자의 확대된 CD28/CTLA-4 패밀리의 억제성 구성원이다((Viglietta, V. et al. (2002) Curr Opin Immunol 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J. Immunol. 170:711-8). CD28 패밀리의 다른 구성원은 CD28, CTLA-4, ICOS 및 BTLA를 포함한다. 그것은 많은 종양이 면역 시스템에 의한 공격을 회피하는 데 사용하는 면역 관문 경로에서의 표적 부위들 중 하나이다. PD-1은 단량체로서 존재하는 것으로 제시되어 있는데, 다른 CD28 패밀리 구성원들에 특징적인 쌍을 이루지 않은 시스테인 잔기가 결여되어 있다. PD-1은 활성화된 B 세포, T 세포, 및 단핵구 상에서 발현된다.
종양에 대한 면역 반응을 조절하는 데 있어서 면역 관문 경로의 중요성을 고려하면, 면역억제성 단백질, 예컨대 PD-1의 활성을 조절하고, 이에 따라 면역 시스템의 활성화로 이어지는 신규한 병용 요법의 개발에 대한 필요성이 존재한다. 이러한 작용제는 예를 들어, 암 면역요법 및 기타 병태의 치료에 사용될 수 있다.
직장결장암(CRC)은 2012년에는 약 140만 명이 진단되어 전 세계에서 세 번째로 흔한 암이고, 694,000명이 사망하여 암으로 인한 사망 원인 중 네 번째로 가장 흔한 원인이다(World Cancer Report 2014). CRC 환자에 대한 결과는 종양의 면역 침윤과 관련이 있으며, CRC가 면역 반응을 자극하는 치료법으로부터 이익을 얻을 수 있음을 시사한다(Fridman WH, Galon J, Pages F, et al. (2011) Prognostic and predictive impact of intra- and peritumoral immune infiltrates. Cancer Res. p. 5601-5). 그러나 CTLA-4 또는 PD-1의 관문 억제제를 이용한 예비 경험은 부정합 수복 결핍 집단 외에서는 실망스러웠다(Le DT, Uram JN, Wang H, et al. (2015) PD-1 Blockade in Tumors with Mismatch-Repair Deficiency. N. Engl. J. Med. p. 2509-20; 및 기타 참고문헌(Ribas et al. 2005; Chung et al. 2010; Brahmer et al. 2010; Topalian et al. 2012; Brahmer et al. 2012). 효능 결여의 원인은 불분명하다(Kroemer G, Galluzzi L, Laurence Zitvogel L, et al. (2015) Colorectal cancer: the first neoplasia found to be under immunosurveillance and the last one to respond to immunotherapy? OncoImmunology 4:7, e1058597-1-3).
신장 세포 암종(RCC)은 전 세계적으로 신생물 관련 사망의 16번째 주요 원인으로, 2012년에는 전 세계적으로 143,000명이 사망했다(Ferlay et al 2015). 미국에서는 2016년에 62,000건이 넘는 새로운 사례와 14,000명이 넘는 신장암으로 인한 사망이 있을 것으로 예상된다(Siegel et al 2016). 니볼루맙은 RCC용(약물 라벨 옵디보(Opdivo®)(2014))으로 승인되었다. 니볼루맙은 에베로리무스와 비교하여 제1선 치료법 이후에 RCC 환자에서 25개월의 중앙값의 OS를 보여주어, 니볼루맙을 받는 환자들의 경우 5.4개월의 이익을 나타내었다(Mazza C, Escudier B, Albiges L. (2017) Nivolumab in renal cell carcinoma: latest evidence and clinical potential. Ther Adv Med Oncol. p.171-181). 현재까지, 최소 31건의 연구에서 RCC에서 TP53의 발현을 조사하였다. 2519개의 RCC 종양의 메타 분석에서, TP53 양성 빈도는 24.5%였다(Noon AP, Vlatkovic N, Polanski R, et. al (2010) p53 and MDM2 in renal cell carcinoma: biomarkers for disease progression and future therapeutic targets? Cancer. p.116:780-90).
현재 개발 중인 면역요법은 통상적인 치료가 효과적이지 않은 환자들을 포함한 흑색종 암 환자에게 유의한 이익을 제공하기 위해 시작되었다. 최근, PD-1/PD-L1 상호작용의 2가지 억제제인 펨브롤리주맙 및 니볼루맙이 각각 상표명 키트루드(Keytruda®) 및 옵디보(Opdivo®)로 NSCLC 및 흑색종에서의 사용에 대해 승인되었다.
PD-1/PD-L1 상호작용의 억제제들이 내약성이 우수하고 주목할 만한 범위의 암 유형에 걸친 어느 정도의 활성을 증명하였지만, 반응률 및 치료의 지속력을 증가시키기 위해 치료법을 다른 치료제로 보완할 필요성은 여전하다.
HDM2 억제제에 대한 상이한 투약 요법이 기술되었고 임상 연구에서 시험되었다.
예를 들어, US2013/0245089에서는 환자에게 4-{[(2R,3S,4R,5S)-4-(4-클로로-2-플루오로-페닐)-3-(3-클로로-2-플루오로-페닐)-4-시아노-5-(2,2-디메틸-프로필)-피롤리딘-2-카르보닐]-아미노}-3-메톡시-벤조산을 약 800 내지 약 3000 mg/일의 양으로 28일 치료 주기의 제1일 내지 제7일에서 약 7일까지의 투여 기간 동안 투여하고, 이어서 약 21 내지 약 23일의 휴약 기간을 갖는 것에 의해 암으로 고통받는 환자를 치료하는 방법을 개시한다.
B. Higgins 등에 의한 Clinical Cancer Research의 논문(May 2014)에서는 28일 주기 계획을 개시하는데, 여기에서는 RG7388을 주 1회로 3회 투여한 다음 13일 휴약하거나(28일 주기 계획), 약물을 28일 계획의 5연속일 동안 투여한다. HDM2 억제제에 대한 추가의 투약 요법은 WO 2015/198266에 개시된다.
특정 치료 환경(단일 작용제 치료법 또는 병용 요법, 적응증 유형)에서 특정 HDM2 억제제에 대한 안전하지만 효과적인 용량 및 투여 요법을 찾는 것은 이러한 억제제의 임상적 사용에 있어 여전히 큰 도전이다.
본 발명은 TP53 야생형 암, 특히 TP53 야생형 고형 종양인 암의 치료에 사용하기 위한, PD-1 억제제와 병용하는 성분으로서, 화합물 A, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정을 제공한다.
화합물 A는 다음의 프로젝트 코드, 화학명 및 구조를 갖는 화합물이다:
HDM201(INN: 시레마들린(siremadlin)), 즉, (6S)-5-(5-클로로-1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-일)-6-(4-클로로페닐)-2-(2,4-디메톡시피리미딘-5-일)-1-이소프로필-5,6-디하이드로피롤로[3,4-d]이미다졸-4(1H)-온으로도 언급되는, (S)-5-(5-클로로-1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로-피리딘-3-일)-6-(4-클로로-페닐)-2-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-1-이소프로필-5,6-디하이드로-1H-피롤로[3,4-d]이미다졸-4-온,
Figure pct00001
.
바람직하게는, HDM201은 숙신산 공동-결정으로 존재한다. 더욱 바람직하게는, HDM201은 1:1(몰 비율)의 숙신산 공동-결정 형태로 존재한다.
본 발명은 (a) 프로그래밍된 사멸 1(PD-1)에 결합하는 적어도 하나의 항체 분자(예를 들어, 인간화 항체 분자), 특히 하기에 기재된 예시적인 항체 분자, 및 (b) 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정인 HDM2-p53 억제제를 포함하는 약제학적 병용물을 제공한다. 약제학적 병용물은 증식성 질환, 특히 TP53 야생형 암, 더욱 특별하게는 TP53 야생형 고형 종양의 치료를 위한 동시적, 개별적 또는 순차적 투여에 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 약제학적 병용물에 관한 것으로,
(A) 화합물 A(HDM201, 시레마들린), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정인 HDM2-p53 억제제; 및
(B) 하기 표 1에 기재된 BAP049-클론-B 또는 BAP049-클론-E의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 표 1에 기재된 BAP049-클론-B 또는 BAP049-클론-E의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 인간 프로그래밍된 사멸-1(PD-1)에 결합할 수 있는 단리된 항체 분자를 포함하며, 바람직하게는 항-PD-1 항체 분자는 PDR001(스파탈리주맙, spartalizumab)이다.
그러한 병용물을 포함하는 약제학적 조성물; 상기 병용물을 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 증식성 질환을 가진 대상체를 치료하는 방법; 증식성 질환을 치료하기 위한 그러한 병용물의 용도; 및 그러한 병용물을 포함하는 시판 패키지가 또한 제공된다.
PD-1 억제제는 발명의 명칭이 "Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof"인 USSN 14/604,415, 및 WO/2015/112900에 기재된 항-PD-1 항체 분자이며, 이들 둘 모두는 이의 전문이 참조로 포함된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 본 명세서에 기재된 항체로부터, 중쇄로부터의 3개의 상보성 결정 영역(CDR) 및 경쇄로부터의 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 항원 결합 영역, 예를 들어 가변 영역 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하며, 예를 들어 상기 항체는 BAP049-hum01, BAP049-hum02, BAP049-hum03, BAP049-hum04, BAP049-hum05, BAP049-hum06, BAP049-hum07, BAP049-hum08, BAP049-hum09, BAP049-hum10, BAP049-hum11, BAP049-hum12, BAP049-hum13, BAP049-hum14, BAP049-hum15, BAP049-hum16, BAP049-클론-A, BAP049-클론-B, BAP049-클론-C, BAP049-클론-D, 또는 BAP049-클론-E; 또는 표 1에 기재된 항체, 또는 표 1에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된 항체; 또는 상기 언급된 임의의 서열과 실질적으로 동일한(예를 들어, 적어도 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한) 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 항체이다.
예를 들어, 항-PD-1 항체 분자는 Kabat 등에 따른 VH CDR1 또는 Chothia 등에 따른 VH 초가변 루프 1, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있으며, 이들은, 예를 들어 표 1에 제시된 바와 같다. 일 구현예에서, VH CDR1의 Kabat 및 Chothia CDR의 조합은 아미노산 서열 GYTFTTYWMH(서열번호 224), 또는 이와 실질적으로 동일한(예를 들어, 적어도 하나의 아미노산 변경을 갖는, 그러나 2개, 3개 또는 4개 이하의 변경(예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 갖는) 아미노산 서열을 포함한다. 항-PD-1 항체 분자는 예를 들어, 표 1에 제시된 바와 같이, 예를 들어 Kabat 등에 따른 VH CDR 2~3 및 Kabat 등에 따른 VL CDR 1~3을 추가로 포함할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 프레임워크 영역은 Kabat 등에 따라 정의된 CDR 및 Chothia 등에 따라 정의된 초가변 루프의 조합에 기초하여 정의된다. 예를 들어, 항-PD-1 항체 분자는 Chothia 등에 따른 VH 초가변 루프 1에 기초하여 정의된 VH FR1 및 Kabat 등에 따른 VH CDR 1~2에 기초하여 정의된 VH FR2를 포함할 수 있으며, 이들은, 예를 들어 표 1에 제시된 바와 같다. 항-PD-1 항체 분자는 예를 들어, Kabat 등에 따른 VH CDR 2~3에 기초하여 정의된 VH FR 3~4 및 Kabat 등에 따른 VL CDR 1~3에 기초하여 정의된 VL FR을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 병용물에 바람직한, 프로그래밍된 사멸 1(PD-1)에 결합하는 항체 분자(예를 들어, 인간화 항체 분자)는 BAP049-클론-E인 예시적인 항체 분자이고, 바람직한 아미노산 서열은 본원의 표 1에 기재되어 있다(VH: 서열번호 38; VL: 서열번호 70). 바람직한 항체 분자는 또한 본원에서 항체 B 또는 스파탈리주맙(INN) 또는 PDR001로 지칭된다.
본 발명은 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 동시적, 개별적 또는 순차적 투여를 위한, 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정인 HDM2-p53 억제제, 및 본원에 기재된 항-PD-1 항체 분자를 포함하는 약제학적 병용물을 추가로 제공한다.
본 발명은 특히 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 병용물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 증식성 질환, 특히 암의 치료를 위한 본 발명의 병용물의 용도를 제공한다. 특히, 본 발명의 병용물은 TP53 야생형, 특히 TP53 고형 종양인 암의 치료에 유용할 수 있고, 특히 상기 TP53 고형 종양은 신장 세포 암종(RCC) 및 결장직장암(CRC)으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 증식성 질환, 특히 암, 특히 TP53 야생형인 암, 특히 TP53 고형 종양의 치료용 의약의 제조를 위한 본 발명의 병용물의 용도를 제공하며, 특히 상기 TP53 고형 종양은 신장 세포 암종(RCC) 및 결장직장암(CRC)으로부터 선택된다.
또한, 본 발명은 증식성 질환에 대해 공동으로 치료적으로 유효한 양의 본 발명의 병용물을 상기 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 증식성 질환의 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 증식성 질환에 대해 공동으로 치료적으로 유효한 양의 본 발명의 병용물, 및 선택적으로 적어도 1종의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물 또는 병용 제제를 제공한다.
본 발명은 또한 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, (a) 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염인 HDM2 억제제의 하나 이상의 투여 단위, 및 (b) 항-PD-1 항체 분자를 포함하는 병용 제제를 제공한다.
본 발명은 또한 증식성 질환, 특히 TP53 야생형인 고형 종양의 치료에 사용하기 위한, 활성 성분으로서 본 발명의 병용물 및 이를 필요로 하는 환자에게 본 발명의 병용물을 동시, 개별 또는 순차 투여하기 위한 설명서를 포함하는 시판 패키지를 제공한다.
본 발명은 또한 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 복합체 또는 공동-결정인 HDM2 억제제, 및 항-PD-1 항체 분자, 및 증식성 질환의 치료에 있어서 동시적, 개별적 또는 순차적 사용을 위한 설명서를 포함하는 시판 패키지를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 항체 분자 및/또는 본원에 기재된 저분자량의 활성 성분 및 사용설명서를 포함하는 진단 또는 치료 키트를 특징으로 한다.
본 발명은 또한 PD-1 억제제 및 HDM2 억제제의 투여를 위한 용량 범위 및 투약 요법을 제공한다.
특히 본 발명은 암의 치료에 사용하기 위한, 본원에 기재된 PD-1 억제제 및 HDM2 억제제 HDM201의 병용물을 제공하며, 이때, PD-1 억제제는 4주마다 1회(q4w) 투여되고, HDM201은 제1일, 및 제6일 내지 제14일 중 어느 하루, 바람직하게는 제6일 내지 제10일 중 어느 하루, 더욱 바람직하게는 4주 치료 주기의 제8일에(d1d8q4w) 투여된다.
PD-1 억제제의 1일 용량은 100 내지 400 mg, 바람직하게는 200 내지 400 mg, 더욱 바람직하게는 300 내지 400 mg이고, 훨씬 더 바람직하게는 1일 용량은 400 mg이고, HDM201의 1일 용량은 30 내지 120 mg이고, 바람직하게는 1일 용량은 40 내지 120 mg이고, 더욱 바람직하게는 1일 용량은 60 내지 120 mg이고, 훨씬 더 바람직하게는 1일 용량은 60 mg 내지 90 mg이고, 훨씬 더 바람직하게는 1일 용량은 60 내지 80 mg이다. 본원에서, HDM201의 1일 용량은 유리 형태를 지칭한다. 즉, 임의의 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정 형성자의 질량을 포함하지 않는다. 예를 들어, HDM201 숙신산 공동-결정의 경우, 숙신산의 질량을 포함하지 않는다.
본원에서 언급되는 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 다른 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.
본 발명의 기타 특징, 목적 및 장점은 이러한 설명 및 도면으로부터, 그리고 청구범위로부터 명백할 것이다.
도 1은 뮤린 항-PD-1 mAb BAP049의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 나타낸다. 상측 및 하측 서열은 2개의 독립적인 분석으로부터 유래한 것이다. Kabat 넘버링에 기초한 경쇄 및 중쇄 CDR 서열이 밑줄 그어져 있다. Chothia 넘버링에 기초한 경쇄 및 중쇄 CDR 서열은 굵은 이탤릭체로 나타나 있다. 경쇄 서열의 위치 102에 있는 쌍을 이루지 않은 Cys 잔기는 박스 표시가 되어 있다. 서열들은 보이는 순서대로 각각 서열번호 8, 228, 16 및 229로서 개시되어 있다.
도 2a는 생식세포계열 서열과 정렬된 뮤린 항-PD-1 mAb BAP049의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 나타낸다. 상측 및 하측 서열은 각각 생식세포계열(GL) 및 BAP049(Mu mAb) 서열이다. Kabat 넘버링에 기초한 경쇄 및 중쇄 CDR 서열이 밑줄 그어져 있다. Chothia 넘버링에 기초한 경쇄 및 중쇄 CDR 서열은 굵은 이탤릭체로 나타나 있다. "-"는 동일한 아미노산 잔기를 의미한다. 서열들은 보이는 순서대로 각각 서열번호 230, 8, 231 및 16으로서 개시되어 있다.
도 2b는 뮤린 κ J2 유전자 및 뮤린 항-PD-1 mAb BAP049에서의 상응하는 돌연변이의 서열을 나타낸다. "-"는 동일한 뉴클레오티드 잔기를 의미한다. 서열들은 보이는 순서대로 각각 서열번호 233, 232, 234 및 235로서 개시되어 있다.
도 3a 및 도 3b는 형광 표지된 뮤린 항-PD-1 mAb BAP049(Mu mAb)와 BAP049의 3개의 키메라 버전(Chi mAb) 사이의 경쟁 결합을 나타낸다. 실험을 2회 수행하였으며, 결과가 각각 도 3a 및 도 3b에 나타나 있다. 3개의 키메라 BAP049 항체(Chi mAb(Cys), Chi mAb(Tyr) 및 Chi mAb(Ser))는 각각 경쇄 가변 영역의 위치 102에 Cys, Tyr 및 Ser 잔기를 갖는다. Chi mAb(Cys), Chi mAb(Tyr) 및 Chi mAb(Ser)는 또한 각각 BAP049-chi, BAP049-chi-Y, 및 BAP049-chi-S로 알려져 있다.
도 4는 16개의 인간화 BAP049 클론(BAP049-hum01 내지 BAP049-hum16)에 대한 FACS 결합 분석의 결과를 나타낸 막대 그래프이다. 항체 농도는 각각의 시험된 mAb에 대해 가장 좌측 막대에서 가장 우측 막대로 200, 100, 50, 25 및 12.5 ng/ml이다.
도 5는 인간화 BAP049 클론의 구조 분석을 나타낸다(a, b, c, d 및 e는 다양한 유형의 프레임워크 영역 서열을 나타낸다). 샘플에서의 mAb의 농도가 또한 제시되어 있다.
도 6a 및 도 6b는 일정한 농도의, 알렉사(Alexa) 488이 표지된 뮤린 mAb BAP049, 시험 항체의 단계별 희석액, 및 PD-1을 발현하는 300.19 세포를 이용한 경쟁 결합 분석에서 측정한 인간화 BAP049 mAb의 결합 친화도 및 특이성을 나타낸다. 실험을 2회 수행하였으며, 결과가 각각 도 6a 및 도 6b에 나타나 있다.
도 7은 FACS 데이터, 경쟁 결합 및 구조 분석에 기초한 인간화 BAP049 클론의 순위를 나타낸다. 샘플에서의 mAb의 농도가 또한 제시되어 있다.
도 8a 및 도 8b는 선택된 인간화 BAP049 클론에 의한 PD-1에 대한 리간드 결합의 차단을 나타낸다. PD-1에 대한 PD-L1-Ig 및 PD-L2-Ig 결합의 차단이 도 8a에 제시되어 있다. PD-1에 대한 PD-L2-Ig 결합의 차단이 도 8b에 제시되어 있다. BAP049-hum01, BAP049-hum05, BAP049-hum08, BAP049-hum09, BAP049-hum10, 및 BAP049-hum11을 평가하였다. 뮤린 mAb BAP049 및 경쇄 가변 영역의 위치 102에 Tyr을 갖는 키메라 mAb를 또한 이들 분석에 포함시켰다.
도 9a 및 도 9b는 16개의 인간화 BAP049 클론 및 BAP049 키메라(BAP049-chi)에 대한 중쇄 가변 도메인 서열의 정렬을 나타낸다. 도 9a에는, 모든 서열이 나타나 있다(보이는 순서대로 각각 서열번호 22, 38, 38, 38, 38, 38, 38, 38, 38, 38, 50, 50, 50, 50, 82, 82 및 86). 도 9b에는, 마우스 서열과 상이한 아미노산 서열만이 나타나 있다(보이는 순서대로 각각 서열번호 22, 38, 38, 38, 38, 38, 38, 38, 38, 38, 50, 50, 50, 50, 82, 82 및 86).
도 10a 및 도 10b는 16개의 인간화 BAP049 클론 및 BAP049 키메라(BAP049-chi)에 대한 경쇄 가변 도메인 서열의 정렬을 나타낸다. 도 10a에는, 모든 서열이 나타나 있다(보이는 순서대로 각각 서열번호 24, 66, 66, 66, 66, 70, 70, 70, 58, 62, 78, 74, 46, 46, 42, 54 및 54). 도 10b에는, 마우스 서열과 상이한 아미노산 서열만이 나타나 있다(보이는 순서대로 각각 서열번호 24, 66, 66, 66, 66, 70, 70, 70, 58, 62, 78, 74, 46, 46, 42, 54 및 54).
도 11은 본원에 개시된 병용 요법에 의해 표적화된 항원 처리 및 제시, 이펙터 세포 반응 및 면역억제 경로를 개략적으로 설명하는 개략도이다.
도 12는 동일한 용량의 예시적인 항-PD-1 항체 분자를 제공받고 있는 환자에 대한 상이한 체중에 걸쳐 예측된 C최저(Ctrough)(Cmin) 농도를 나타낸다.
도 13은 관찰된 vs. 모델 예측된(집단 또는 개별 기준) Cmin 농도를 나타낸다.
도 14는 약동학적 특성을 분석하는 데 사용된 모델의 축적, 시간 경과 및 대상체 내 가변성을 나타낸다.
도 15는 요법 1B에서 120 mg으로 치료받는 환자에서 추정되는 주기 당 평균 농도를 보여준다. 코호트 1: 120 mg. 코호트 2: 120 mg, 새로운 변이체. 파선: 종양 정체(SJSA-1 세포주), 점선: 종양 정체(지방육종 세포주). 각각의 개별 환자는 원으로 나타낸다.
도 16은 기하 평균 농도-시간 프로파일을 보여준다(요법 1A, 주기 1 제1일)(PAS).
도 17는 최초 주기 동안 각각의 인간 평균 NVP-HDM201 농도를 보여준다(DDS). 각각의 C(평균) = 주기 1의 지속기간(시간)으로 나눈 주기 1의 종점에서 각각의 AUC 모드. 평균 용량 수준 = 주기 1의 지속기간(일)로 나눈 주기 1의 종점에서 총 누적 용량.
도 18은 각각의 요법에서 시험한 다음 용량을 기반으로 모델링한 혈소판 동역학 프로파일을 보여준다(위로부터 아래의 순서): Reg2C(제1일~제7일 Q4wk): 25 mg(6.25 mg/d); Reg2A(제1일~제14일 Q4wk): 20 mg(10 mg/d); Reg1B(제1일, 제8일 Q4wk): 150 mg(10.7 mg/d); Reg1A(제1일 Q3wk): 350 mg(16.7 mg/d).
도 19는 혈액 종양 환자에서 요법당 용량에 대한 최초 치료 주기 동안의 각각의 평균 농도를 보여준다. 120 ng/mL에서의 선 = 인간 SJSA-1 이종이식 래트로부터 95% 종양 퇴행. 41 ng/mL에서의 선 = 인간 SJSA-1(골육종) 이종이식 래트에서 TGI PK/PD 모델링으로부터 얻은 종양 정체에 대한 평균 농도. 19 ng/mL에서의 선 = 인간 HSAX2655(지방육종) PDX 래트에서 TGI PK/PD 모델링으로부터 얻은 종양 정체에 대한 평균 농도.
평균 용량 수준(mg/일)의 계산:
Figure pct00002

도 20은 요법 1B에 따라 HDM201로 치료받은 육종(지방육종 및 기타 육종) 환자에서 최상의 전체 반응 및 직경의 합의 기준선으로부터 최상의 변화 백분율을 보여준다(2017년 9월). PD: 진행성 질환, SD: 안정 질환, PR: 부분 관해.
도 21: Balb/c 마우스의 Colon26 종양(7628 Colon 26-XPD)의 HDM201로 조절된 면역 세포 침윤
Colon 26 종양의 면역 세포의 HDM201 조절 프로파일. (A) CD11c+/CD45+ 골수세포(%), (B) CD8+/CD45+ T 세포(%), (C) CD45- 세포의 PDL1 MFI, 및 (D) PD1+/CD45+ 림프구(%)의 증가. Colon 26 세포를 Balb/c 마우스의 우측 옆구리에 이식하였다. 종양이 약 60 mm3에 도달하면, 마우스를 무작위 배정하고, 제0일과 제7일에 3시간마다 40 mg/kg의 HDM201을 3회 처리하였다. 마우스를 안락사시키고, 첫 번째 용량 후 제5일과 제12일에 FACS 분석을 위해 종양을 수집하고 처리하였다.
도 22: Colon 26 종양 및 배출 림프절(8063 Colon 26-XPD)에서의 HDM201로 증진된 DC 기능, T 세포 초회감작 및 CD8/Treg 비율
Colon 26 종양의 면역 세포의 HDM201 조절 프로파일. (A) CD103+CD11c+ DC(%), (B) Tbet+EOMES-CD8+/CD45+ T 세포(%), 및 (C) CD8/Treg 비율의 증가. Colon 26 세포를 Balb/c 마우스의 우측 옆구리에 이식하였다. 종양이 약 100 mm3에 도달하면, 마우스를 무작위 배정하고, 제0일과 제7일에 3시간마다 40 mg/kg의 HDM201을 3회 처리하였다. 마우스를 안락사시키고, 첫 번째 용량 후 제5일과 제12일에 FACS 분석을 위해 종양 및 배출 림프절을 수집하고 처리하였다.
도 23: 체중 변화 백분율(8020 Colon 26-XEF)
체중 변화 백분율. Balb/c 마우스에 2 × 105개의 Colon 26 세포를 피하로 이식하였다. 세포 이식 후 제12일, 제19일 및 제26일에 3시간마다 po로 40 mg/kg의 HDM201을 마우스에 3회, 그리고 제12일, 제15일, 제19일, 및 제22일에 5 mg/kg의 aPD-1 항체를 ip로 처리하였다. 체중을 주 2회 기록하였고, 실시예 3의 해당 섹션에 기재된 식에 기초하여 체중 변화 백분율을 계산하였다.
도 24: 종점까지의 시간(8020 Colon 26-XEF)
종점까지의 시간. Balb/c 마우스에 2 × 105개의 Colon 26 세포를 피하로 이식하였다. 세포 이식 후 제12일, 제19일 및 제26일에 3시간마다 po로 40 mg/kg의 HDM201을 마우스에 3회, 그리고 제12일, 제15일, 제19일, 및 제22일에 5 mg/kg의 aPD-1 항체를 ip로 처리하였다. 종점은 1000 mm3 이상의 종양 부피로 정의되었다. 로그 순위, p < 0.05.
도 25: 각각의 종양 성장 곡선(8020 Colon 26-XEF)
각각의 종양 성장 곡선. Balb/c 마우스에 2 × 105개의 Colon 26 세포를 피하로 이식하였다. 세포 이식 후 제12일, 제19일 및 제26일에 3시간마다 po로 40 mg/kg의 HDM201을 마우스에 3회, 그리고 제12일, 제15일, 제19일, 및 제22일에 5 mg/kg의 aPD-1 항체를 ip로 처리하였다. 종점은 1000 mm3 이상의 종양 부피로 정의되었다. 수평 파선은 종양 종점의 종양 크기(1000 mm3)를 나타낸다.
도 26: 마우스는 Colon 26 세포에 대해 장기 특정 기억을 발달시켰으나, 4T1 세포에 대해서는 그렇지 않았다(8020 Colon 26-XEF).
장기 특정 기억은 이전에 aPD1 항체와 HDM201의 병용물로 치료된 CR 마우스에서 발달되었다. A) HDM201 + aPD1 항체 처리 후 CR을 달성했던 모든 마우스가 Colon 26 세포의 두 번째 주사를 거부하였다. 미감작 마우스(n=5) 및 CR 마우스(HDM201 + aPD1 Ab, n=5)의 옆구리 좌측에 2 × 105개의 Colon 26 세포를 이식하였다. 종양 부피를 매주 측정하였다. CR 마우스에서는 제34일까지 종양이 관찰되지 않았다. B) 6주 후, 미감작 마우스(n=5) 및 CR 마우스(HDM201 + aPD1 Ab, n=5)의 유방 지방 패드에 4T1 세포를 이식하였다. 종양 부피를 측정하였고, 모든 마우스가 4T1 종양을 발달시켰으며, 4T1 세포 이식 후 제14일에 마우스를 안락사시켰다.
도 27: colon 26 및 4T1 세포로 동물에 재시험하여 기억 효과를 증명함.
도 28: 항-종양 기억 T 세포 반응의 증명: H2Ld-AH1 덱스트라머에 의해 검출된 항-PD1 항체 유도 반응자와 HDM201의 병용물 또는 HDM201로 처리한 마우스의 비장에서 AH1 특이적 CD8+ T 세포의 빈도.
도 29: 항-종양 기억 T 세포 반응의 증명: CD8+ T 세포 내에서 CD44+ AH1+의 빈도.
도 30: p53 녹아웃 colon 26 클론의 시험관내 특성화
도 31: 임상 연구 CPDR001X2102의 연구 기간
표의 간략한 설명
표 1은 뮤린, 키메라 및 인간화 항-PD-1 항체 분자에 대한 아미노산 및 뉴클레오티드 서열의 요약이다. 항체 분자는 뮤린 mAb BAP049, 키메라 mAb BAP049-chi 및 BAP049-chi-Y, 및 인간화 mAb BAP049-hum01 내지 BAP049-hum16 및 BAP049-클론-A 내지 BAP049-클론-E를 포함한다. 중쇄 및 경쇄 CDR의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열, 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열, 및 중쇄 및 경쇄의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열이 이 표에 제시되어 있다.
표 2는 인간화 mAb BAP049-hum01 내지 BAP049-hum16 및 BAP049-클론-A 내지 BAP049-클론-E에 대한 중쇄 및 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열을 제시한다.
표 3은 인간 IgG 중쇄 및 인간 카파 경쇄의 불변 영역 아미노산 서열을 제시한다.
표 4는 인간화 mAb BAP049-클론-A 내지 BAP049-클론-E에 대한 중쇄 및 경쇄 리더 서열의 아미노산 서열을 제시한다.
표 5는 균일 투여(flat dosing) 스케줄에 기초한 예시적인 PK 파라미터를 제시한다.
HDM2 억제제
"HDM2i", "Hdm2i", "MDM2 억제제", "MDM2i", "Mdm2i"로도 언급되는 용어 "HDM2 억제제"는 본원에서 HDM-2/p53 또는 HDM-4/p53 상호작용을, 시간 분해 형광 에너지 전달(Time Resolved Fluorescence Energy Transfer, TR-FRET) 분석에 의해 측정되는 10 μM 미만, 바람직하게는 1 μM 미만, 바람직하게는 nM 범위의 IC50으로 억제하는 임의의 화합물을 의미한다. p53-Hdm2 및 p53-Hdm4 상호작용의 억제는 시간 분해 형광 에너지 전달(TR-FRET)에 의해 측정된다. 형광 에너지 전달(또는 Foerster 공명 에너지 전달)은 공여체와 수용체 5 형광 분자 사이에서 에너지 전달을 기술한다. 이 분석에서, C-말단 비오틴 모이어티 태그를 붙인 MDM2 단백질(아미노산 2 내지 188) 및 MDM4 단백질(아미노산 2 내지 185)이 공여체 형광단으로서 기능하는 유로퓸 표지된 스트렙타비딘(Perkin Elmer, Inc., Waltham, MA, USA)과 조합하여 사용된다. p53 유도된, Cy5 표지 펩티드 Cy5- TFSDLWKLL(p53 aa18 내지 26)이 에너지 수용체이다. 340 nm에서 공여체 10 분자의 여기로, MDM2 또는 MDM4와 p53 펩티드 사이의 결합 상호작용은 665 nm에서의 수용체 방출 파장에서 에너지 전달 및 향상된 반응을 유도한다. MDM2 또는 MDM4의 p53 결합 부위에 대한 억제제 분자 결합으로 인한 p53-MDM2 또는 p53-MDM4 복합체 형성의 붕괴는 615 nm에서 증가된 공여체 방출을 야기한다. 비율 척도의 FRET 분석 판독은 시간 분해 모드로 측정된 2개의 별개 형광 신호의 15 미가공 데이터로부터 계산된다(계수율 665 nm/계수율 615 nm x 1000). 분석은 다음 절차에 따라 수행될 수 있다: 시험은 백색 1536w 미세적정플레이트(Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany)에서, 90% DMSO/10% H2O(3.2%의 최종 DMSO 농도) 중 희석된 100 nL의 화합물을 반응 완충액(PBS, 125 mM NaCl, 0.001% 노벡신(단백질의 용해도 및 안정성을 증가시키도록 설계된 탄수화물 폴리머(노벡신 폴리머)로 구성됨; Novexin Ltd., ambridgeshire, United Kingdom), 젤라틴 0.01%, 0.2%의 플루로닉(에틸렌옥사이드 및 프로필렌옥사이드로부터의 블록 공중합체, BASF, Ludwigshafen, Germany), 1 mM의 DTT) 중 2 μL의 유로퓸 20 표지된 스트렙타비딘(최종 농도 2.5 nM)과 조합한 다음, 분석 완충액 중 희석된 0.5 μL MDM2-Bio 또는 MDM4-Bio(최종 농도 10 nM)를 첨가하여, 총 부피 3.1 μL에서 수행된다. 용액을 실온에서 15분 동안 전배양한 다음, 분석 완충액 중 0.5 μL의 Cy5-p53 펩티드(최종 농도 20 nM)를 첨가한다. 실온에서 10분 동안 배양한 후 플레이트를 판독한다. 샘플의 측정을 위해, Analyst GT 다중모드 마이크로플레이트 판독기(Molecular Devices)를 다음 세팅 30으로 사용한다: 색선별 거울 380 nm, 여기 330 nm, 방출 공여체 615 nm 및 방출 수용체 665 nm. IC50 값은 XLfit를 사용하여 곡선 맞춤으로 계산한다. 특정되지 않은 경우, 시약은 Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA로부터 구입한다.
본 발명에 따른 바람직한 HDM2 억제제는 HDM201, 즉 (6S)-5-(5-클로로-1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-일)-6-(4-클로로페닐)-2-(2,4-디메톡시피리미딘-5-일)-1-이소프로필-5,6-디하이드로피롤로[3,4-d]이미다졸-4(1H)-온으로도 언급되는, (S)-5-(5-클로로-1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로-피리딘-3-일)-6-(4-클로로-페닐)-2-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-1-이소프로필-5,6-디하이드로-1H-피롤로[3,4-d]이미다졸-4-온,
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이다.
HDM201은 유리 분자, 용매화물(수화물 포함) 또는 산 이형으로 존재할 수 있다. 용매화물은 에탄올 용매화물(에탄올레이트)일 수 있다. 산 이형은 HDM201과 산으로 형성된 염, 또는 HDM201 산 복합체, 또는 HDM201 산 공동-결정일 수 있고, 바람직하게는 HDM201은 공동-결정으로서 존재한다. 바람직한 산은 숙신산이다. 가장 바람직하게는, HDM201은 숙신산 공동-결정으로서 존재한다.
HDM201 및 이의 수화물, 용매화물 및 산 이형 및 이의 제조 방법은 WO2013/111105에 기술되어 있다(예를 들어, 실시예 102, 형태 A, B, 및 C).
PD-1에 대한 항체 분자
일 구현예에서, PD-1 억제제는 발명의 명칭이 "Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof"인 USSN 14/604,415, 및 WO/2015/112900에 기재된 항-PD-1 항체 분자이며, 이들 둘 모두는 이의 전문이 참조로 포함된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 본 명세서에 기재된 항체로부터, 중쇄로부터의 3개의 상보성 결정 영역(CDR) 및 경쇄로부터의 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 항원 결합 영역, 예를 들어 가변 영역 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하며, 예를 들어 상기 항체는 BAP049-hum01, BAP049-hum02, BAP049-hum03, BAP049-hum04, BAP049-hum05, BAP049-hum06, BAP049-hum07, BAP049-hum08, BAP049-hum09, BAP049-hum10, BAP049-hum11, BAP049-hum12, BAP049-hum13, BAP049-hum14, BAP049-hum15, BAP049-hum16, BAP049-클론-A, BAP049-클론-B, BAP049-클론-C, BAP049-클론-D, 또는 BAP049-클론-E; 또는 표 1에 기재된 항체, 또는 표 1에서의 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된 항체; 또는 상기 언급된 임의의 서열과 실질적으로 동일한(예를 들어, 적어도 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 이상 동일한) 서열 중 임의의 것으로부터 선택되는 항체이다.
예를 들어, 항-PD-1 항체 분자는 Kabat 등에 따른 VH CDR1 또는 Chothia 등에 따른 VH 초가변 루프 1, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있으며, 이들은, 예를 들어 표 1에 제시된 바와 같다. 일 구현예에서, VH CDR1의 Kabat 및 Chothia CDR의 조합은 아미노산 서열 GYTFTTYWMH(서열번호 224), 또는 이와 실질적으로 동일한(예를 들어, 적어도 하나의 아미노산 변경을 갖는, 그러나 2개, 3개 또는 4개 이하의 변경(예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 갖는) 아미노산 서열을 포함한다. 항-PD-1 항체 분자는 예를 들어, 표 1에 제시된 바와 같이, 예를 들어 Kabat 등에 따른 VH CDR 2~3 및 Kabat 등에 따른 VL CDR 1~3을 추가로 포함할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 프레임워크 영역은 Kabat 등에 따라 정의된 CDR 및 Chothia 등에 따라 정의된 초가변 루프의 조합에 기초하여 정의된다. 예를 들어, 항-PD-1 항체 분자는 Chothia 등에 따른 VH 초가변 루프 1에 기초하여 정의된 VH FR1 및 Kabat 등에 따른 VH CDR 1~2에 기초하여 정의된 VH FR2를 포함할 수 있으며, 이들은, 예를 들어 표 1에 제시된 바와 같다. 항-PD-1 항체 분자는 예를 들어, Kabat 등에 따른 VH CDR 2~3에 기초하여 정의된 VH FR 3~4 및 Kabat 등에 따른 VL CDR 1~3에 기초하여 정의된 VL FR을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 병용물에 바람직한, 프로그래밍된 사멸 1(PD-1)에 결합하는 항체 분자(예를 들어, 인간화 항체 분자)는 BAP049-클론-E인 예시적인 항체 분자이고, 바람직한 아미노산 서열은 본원의 표 1에 기재되어 있다(VH: 서열번호 38; VL: 서열번호 70). 이 특별히 바람직한 항체 분자는 본원에서 PDR001 또는 스파탈리주맙(INN)으로도 지칭된다.
또한, 본 발명은 증식성 질환, 특히 TP53 야생형 고형 종양의 치료를 위한 동시적, 개별적 또는 순차적 투여를 위한, (a) 프로그래밍된 사멸 1(PD-1)에 결합하는 적어도 하나의 항체 분자(예를 들어, 인간화 항체 분자), 특히 본원에 기재된 예시적인 항체 분자, 및 (b) 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정과 같은 HDM2 억제제를 포함하는 약제학적 병용물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 장애, 예를 들어 과다증식성 병태 또는 장애(예를 들어, 암)를 치료하는(예를 들어, 억제, 감소, 또는 개선하는) 방법을 특징으로 한다. 방법은 항-PD-1 항체 분자, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바람직한 항-PD-1 항체 분자를 HDM2 억제제와 병용하여, 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 약 300 mg 내지 400 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 예를 들어, 바람직한 항-PD-1 항체 분자는 3주마다 1회 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 다른 구현예에서, 예를 들어, 바람직한 항-PD-1 항체 분자는 4주마다 1회 약 400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 증식성 장애는 암이다. 일부 구현예에서, 증식성 장애는 TP53 야생형 종양이고, 특히, TP53 야생형 고형 종양이다.
TP53 야생형으로 간주되려면 종양은 첫 번째 용량의 연구 약물 전 36개월 이내에 수집된 종양 샘플에서 최소한 엑손 5, 6, 7 및 8에서 돌연변이가 전혀 검출되지 않아야 한다. (일자와 관계 없이 4개 초과의 카피 수로 정의된) HDM2의 게놈 증폭을 갖는 것으로 이전에 문서화된 종양은 TP53 WT 상태 확인이 필요하지 않다.
일부 구현예에서, 증식성 장애는 TP53 야생형 RCC이다.
일부 구현예에서, 증식성 장애는 TP53 야생형 CRC, 특히 MSS CRC로도 지칭되는 부수체 안정적(microsatellite stable, MSS) CRC이다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 200 mg 내지 500 mg, 예를 들어 약 250 mg 내지 450 mg, 약 300 mg 내지 400 mg, 약 250 mg 내지 350 mg, 약 350 mg 내지 450 mg, 또는 약 300 mg 또는 약 400 mg의 용량(예를 들어, 균일 용량)으로 주사에 의해(예를 들어, 피하 또는 정맥내) 투여된다. 투여 스케줄(예를 들어, 균일 투여 스케줄)은, 예를 들어 주 1회 내지 2주, 3주, 4주, 5주, 또는 6주마다 1회로 다양할 수 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자, 예를 들어 예시적인 항체 분자는 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 약 300 mg 내지 400 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 3주마다 1회 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 4주마다 1회 약 400 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자, 예를 들어 예시적인 항체 분자는 4주마다 1회 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자, 예를 들어 예시적인 항체 분자는 3주마다 1회 약 400 mg의 용량으로 투여된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 과증식(예를 들어, 암) 세포의 활성(예를 들어, 성장, 생존, 또는 생존력, 또는 모두)을 감소시키는 방법을 특징으로 한다. 방법은 세포를 항-PD-1 항체 분자, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 분자와 접촉시키는 것을 포함한다. 방법은, 예를 들어 c-Raf 수용체 티로신 키나제 억제제와의 병용물 형태의 치료적 프로토콜의 일부로서, 예를 들어 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 약 300 mg 내지 400 mg의 용량의 항-PD-1 항체 분자로 대상체에서 수행될 수 있다. 특정 구현예에서, 용량은 3주마다 1회 약 300 mg의 항-PD-1 항체 분자이다. 다른 구현예에서, 용량은 4주마다 1회 약 400 mg의 항-PD-1 항체 분자이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 항-PD-1 항체 분자(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 분자)를 포함하는 조성물(예를 들어, 하나 이상의 조성물 또는 투여 형태)을 특징으로 한다. 항-PD-1 항체 분자(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 분자)를 포함하는 제형, 예를 들어 투여 제형, 및 키트, 예를 들어 치료 키트가 또한 본 명세서에 기재된다. 특정 구현예에서, 조성물 또는 제형은 300 mg 또는 400 mg의 항-PD-1 항체 분자(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 분자)를 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 제형은 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 투여되거나 사용된다. 이러한 조성물은 종종 RCC 또는 CRC의 치료를 위하여, 그리고 특히 RCC 또는 MSS CRC를 앓는 환자를 치료하기 위하여, 동시적, 개별적 또는 순차적 투여를 위해, HDM2 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정과 병용하여 사용된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 RCC 또는 CRC를 치료하는 데 사용하기 위한 항-PD-1 항체를 제공하며, 여기서 항-PD-1 항체는 HDM2 억제제와 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여되거나 그렇게 투여되도록 제조된다. 본 발명은 또한 RCC 또는 CRC를 치료하는 데 사용하기 위한 HDM2 억제제를 제공하며, 여기서 HDM2 억제제는 항-PD-1 항체와 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여되거나 그렇게 투여되도록 제조된다.
전형적으로, 항-PD-1 항체는 정맥내 투여되며, 이에 따라 바람직하게는 경구 투여되는 HDM2 억제제와 개별적으로 또는 순차적으로 투여된다. HDM2 억제제 및 항-PD-1 항체의 투여의 적합한 방법, 경로, 투여량 및 빈도는 본 명세서에 기재되어 있다.
본 명세서에 개시된 병용물은 단일 조성물로 함께 투여되거나 둘 이상의 상이한 조성물, 예를 들어 본 명세서에 기재된 조성물 또는 투여 형태로 개별적으로 투여될 수 있다. 치료제는 임의의 순서로 투여될 수 있다. 제1 작용제와 추가 작용제(예를 들어, 제2, 제3 작용제)는 동일한 투여 경로를 통해 또는 상이한 투여 경로를 통해 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 약제학적 병용물, 특히 본 발명의 약제학적 병용물은 자유형 병용 제품(free combination product), 즉 둘 이상의 활성 성분, 예를 들어 화합물 A 및 본 명세서에 기재된 예시적인 항체 분자(항체 B)의 병용물일 수 있으며, 이는 둘 이상의 상이한 투여 형태로 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여된다.
자유형 병용 제품은 (a) 단일 패키지 또는 키트 내에 함께 패키징된 둘 이상의 별개의 약물 제품, 또는 (b) 라벨링에 따라, 오직 다른 개별적으로 명시된 약물과 함께 사용하기 위한, 개별적으로 패키징된 약물 제품일 수 있으며, 여기서 각각의 약물은 의도된 용도, 적응증, 또는 효과를 달성할 것을 필요로 한다.
본 발명은 또한 (a) 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염인 HDM2 억제제의 하나 이상의 투여 단위, 및 (b) 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체의 하나 이상의 투여 단위, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 병용 제제를 제공한다.
추가 구현예에서, 본 발명은 특히 증식성 질환, 특히 암의 치료 방법에 관한 것이다. 일 구현예에서, 본 발명은 증식성 질환, 특히 암의 치료용 의약 제조를 위한 본 발명의 병용물의 용도에 관한 것이다. 일 구현예에서, 본 발명의 병용물은 증식성 질환, 특히 암의 치료용 의약의 제조에 사용하기 위한 것이다.
본 발명은 또한 TP53 야생형 고형 종양의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 약제학적 병용물, 예를 들어 (a) 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정 및 (b) 하기 표 1에 기재된 BAP049-클론-B 또는 BAP049-클론-E의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 표 1에 기재된 BAP049-클론-B 또는 BAP049-클론-E의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 인간 프로그래밍된 사멸-1(PD-1)에 결합할 수 있는 단리된 항체 분자를 포함하는 약제학적 병용물을 제공한다.
병용 요법의 용도
본 명세서에 개시된 병용물은 하기 중 하나 이상의 결과를 가져올 수 있다: 항원 제시의 증가, 이펙터 세포 기능의 증가(예를 들어, T 세포 증식, IFN-γ 분비 또는 세포용해 기능 중 하나 이상), 조절성 T 세포 기능의 억제, 다수의 세포 유형, 예컨대 조절성 T 세포, 이펙터 T 세포 및 NK 세포의 활성에 대한 효과, 종양 침윤 림프구의 증가, T-세포 수용체 매개 증식의 증가, 및 암성 세포에 의한 면역 회피의 감소. 일 구현예에서, 병용물에서의 PD-1 억제제의 사용은 PD-1의 하나 이상의 활성을 억제, 감소 또는 중화시키며, 그 결과 면역 관문의 차단 또는 감소로 이어진다. 따라서, 그러한 병용물은 대상체에서 면역 반응의 증강이 요구되는 장애를 치료하거나 예방하는 데 사용될 수 있다.
따라서, 또 다른 양태에서는, 대상체에서 면역 반응을 조절하는 방법이 제공된다. 방법은 본 명세서에 개시된 병용물(예를 들어, 치료적 유효량의 항-PD-1 항체 분자 및 치료적 유효량의 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정을 포함하는 병용물)을 대상체에게 투여하여, 대상체에서 면역 반응이 조절되도록 하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 대상체에서 면역 반응을 증강, 자극 또는 증가시킨다. 대상체는 포유동물, 예를 들어 영장류, 바람직하게는 고등 영장류, 예를 들어 인간(예를 들어, 본 명세서에 기재된 장애를 갖거나, 가질 위험이 있는 환자)일 수 있다. 일 구현예에서, 대상체는 면역 반응의 증강을 필요로 한다. 일 구현예에서, 대상체는 본 명세서에 기재된 장애, 예를 들어 본 명세서에 기재된 암 또는 감염성 장애를 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 면역손상되거나, 면역손상될 위험이 있다. 예를 들어, 대상체는 화학요법 치료 및/또는 방사선 치료법을 받고 있거나 받았다. 대안적으로, 또는 조합하여, 대상체는 감염의 결과로서 면역손상되거나, 면역손상될 위험이 있다.
일 양태에서, TP53 야생형인 고형 종양, 특히 RCC 또는 CRC인 증식성 질환을 치료하는(예를 들어, 감소시키거나, 억제하거나, 진행을 지연시키는 중 하나 이상의) 방법이 제공된다. 또 다른 양태에서, 대상체에서 TP53 야생형인 고형 종양, 특히 RCC 또는 CRC인 증식성 질환을 치료하는(예를 들어, 감소시키거나, 억제하거나, 진행을 지연시키는 중 하나 이상의) 방법이 제공된다. 방법은 본 명세서에 개시된 병용물(예를 들어, 치료적 유효량의 항-PD-1 항체 분자 및 치료적 유효량의 화합물 A 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정을 포함하는 병용물)을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 명세서에 기재된 병용물은 대상체에게 전신(예를 들어, 경구, 비경구, 피하, 정맥내, 직장내, 근육내, 복막내, 비강내, 경피내, 또는 흡입 또는 강내 장치에 의해) 투여되거나, 국소 투여되거나, 또는 점막, 예컨대 코, 목 및 기관지에 대한 적용에 의해 투여될 수 있다.
투여량 및 치료 요법
본원에 개시된 치료제의 투여량 및 치료 요법은 당업자에 의해 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 1 내지 30 mg/kg, 예를 들어 약 5 내지 25 mg/kg, 약 10 내지 20 mg/kg, 약 1 내지 5 mg/kg, 또는 약 3 mg/kg의 용량으로 주사에 의해(예를 들어, 피하 또는 정맥내) 투여된다. 투여 스케줄은, 예컨대 매 1주 1회 내지 매 2주, 3주, 또는 4주 1회로 다양할 수 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 격주마다 약 10 내지 20 mg/kg의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 200 mg 내지 500 mg, 예를 들어 약 250 mg 내지 450 mg, 약 300 mg 내지 400 mg, 약 250 mg 내지 350 mg, 약 350 mg 내지 450 mg, 또는 약 300 mg 또는 약 400 mg의 용량(예를 들어, 균일 용량)으로 주사에 의해(예를 들어, 피하 또는 정맥내) 투여된다. 투여 스케줄(예를 들어, 균일 투여 스케줄)은, 예를 들어 주 1회 내지 2주, 3주, 4주, 5주, 또는 6주마다 1회로 다양할 수 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 300 mg 내지 400 mg의 용량으로 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 300 mg의 용량으로 3주마다 1회 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 400 mg의 용량으로 4주마다 1회 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 300 mg의 용량으로 4주마다 1회 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 400 mg의 용량으로 3주마다 1회 투여된다.
화합물 A의 총 1일 용량은 단일 용량으로(즉, 1일 1회) 또는 1일 2회 투여될 수 있다. 예를 들어, 화합물 A는 1일 1회 1200 mg 또는 1일 2회 400 mg의 용량으로 투여될 수 있다.
화합물 A인 HDM2 억제제는 약 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120 mg의 1일 용량으로 4주 치료 주기의 제1일 및 제8일에 투여될 수 있고, 바람직한 항-PD-1 항체 분자는 3주마다 1회 약 400 mg의 용량으로 투여된다.
화합물 A인 HDM2 억제제는 약 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120 mg의 1일 용량으로 4주 치료 주기의 제1일 및 제8일에 투여될 수 있고, 항-PD-1 항체 분자는 4주마다 1회 약 400 mg의 용량으로 투여된다.
화합물 A는 특히 1일 1회(QD) 약 40, 60, 80, 100, 120 mg의 1일 용량으로 4주 치료 주기의 제1일 및 제8일에 투여될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 예시적인 항-PD-1 분자는 4주마다 1회 400 mg의 용량으로 투여될 수 있고, 화합물 A는 60, 80, 100, 또는 120 mg의 1일 용량으로 4주 치료 주기의 제1일 및 제8일에 투여될 수 있다.
추가의 병용 요법
본 명세서에 기재된 방법 및 병용물은 다른 작용제 또는 치료 방식과 병용하여 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법은 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 분자를, 장애를 치료 또는 예방하기에 유효한 양으로, 작용제 또는 치료 절차 또는 치료 방식과 병용하여 포함하는 병용물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 항-PD-1 항체 분자와 작용제 또는 치료 절차 또는 치료 방식은 임의의 순서대로 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 항-PD-1 항체 분자와, 다른 치료제, 치료 절차 또는 치료 방식(예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 것들)의 임의의 병용 및 순서가 사용될 수 있다. 항체 분자 및/또는 다른 치료제, 치료 절차 또는 치료 방식은 활동성 장애의 기간 동안, 또는 완화 또는 덜 활동성인 질환의 기간 동안 투여될 수 있다. 항체 분자는 다른 치료 전에, 다른 치료와 동시에, 치료 후에, 또는 장애의 완화 중에 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물은 다른 항체 분자, 화학요법, 다른 항암 요법(예를 들어, 표적화된 항암 요법, 유전자 요법, 바이러스 요법, RNA 요법 골수 이식, 나노요법, 또는 종양용해성 약물), 세포독성제, 면역-기반 요법(예를 들어, 사이토카인 또는 세포-기반 면역 요법), 외과적 처치(예를 들어, 소괴절제술(lumpectomy) 또는 유방절제술(mastectomy)) 또는 방사선 처치, 또는 이들 중 임의의 것의 조합 중 하나 이상과 병용하여 투여된다. 추가의 요법은 애주번트 또는 네오애주번트 요법의 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 추가의 요법은 효소 억제제(예를 들어, 소분자 효소 억제제) 또는 전이 억제제이다. 병용 투여될 수 있는 예시적인 세포독성제는 항미세소관제, 토포이소머라제 억제제, 항대사물제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 삽입제(intercalating agent), 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 세포자멸사를 촉진하는 작용제, 프로테아좀 억제제, 및 방사선(예를 들어, 국부 또는 전신 조사(예를 들어, 감마 조사))를 포함한다. 다른 구현예에서, 추가의 요법은 수술 또는 방사선, 또는 이들의 병용이다. 다른 구현예에서, 추가의 요법은 PI3K/AKT/mTOR 경로 중 하나 이상을 표적으로 하는 요법, HSP90 억제제, 또는 튜불린 억제제이다.
대안적으로, 또는 전술한 병용물과 병용하여, 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물이 다음 중 하나 이상과 병용 투여될 수 있다: 면역조절제(예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 억제성 분자, 예를 들어, 면역 관문 분자의 억제제); 백신, 예를 들어, 치료적 암 백신; 또는 기타 형태의 세포 면역요법.
일 구현예에서, 본 명세서에 개시된 병용물, 예를 들어 항-PD-1 항체 분자를 포함하는 병용물은 폐암, 예를 들어 비소세포 폐암을 치료하기 위하여 화학요법과 병용하여 사용된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 폐암을 치료하기 위하여 표준 폐, 예를 들어 NSCLC, 화학요법, 예를 들어 백금 이중 요법(platinum doublet therapy)과 함께 사용된다. 암은 초기, 중기 또는 후기의 암일 수 있다.
일 구현예에서, 본 명세서에 개시된 병용물, 예를 들어 항-PD-1 항체 분자를 포함하는 병용물은 피부암, 예를 들어 흑색종을 치료하기 위하여 화학요법과 병용하여 사용된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 피부암을 치료하기 위하여 표준 피부, 예를 들어 흑색종, 화학요법, 예를 들어 백금 이중 요법과 함께 사용된다. 암은 초기, 중기 또는 후기의 암일 수 있다.
항-PD-1 항체 분자와, 다른 치료제, 치료 절차 또는 치료 방식(예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 것들)의 임의의 병용 및 순서가 사용될 수 있다. 항체 분자 및/또는 다른 치료제, 치료 절차 또는 치료 방식은 활동성 장애의 기간 동안, 또는 완화 또는 덜 활동성인 질환의 기간 동안 투여될 수 있다. 항체 분자는 다른 치료 전에, 다른 치료와 동시에, 치료 후에, 또는 장애의 완화 중에 투여될 수 있다.
고친화성 및 특이성으로 프로그래밍된 사멸 1(PD-1)에 결합하는 항체 분자(예를 들어, 인간화 항체 분자)가 적어도 부분적으로 본 명세서에 개시된다. 항체 분자를 인코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 항체 분자를 제조하는 방법이 또한 제공된다. 항체 분자를 포함하는 약제학적 조성물 및 투여 제형이 또한 제공된다. 본 명세서에 개시된 항-PD-1 항체 분자는 장애, 예컨대 암성 장애(예를 들어, 고형 및 연조직 종양)를 치료, 예방 및/또는 진단하기 위하여 (단독으로 또는 다른 작용제 또는 치료 방식과 병용하여) 사용될 수 있다. 따라서, 항-PD-1 항체 분자를 사용하여, PD-1을 검출하기 위한 조성물 및 방법뿐만 아니라, 암을 포함한 다양한 장애를 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 개시된다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 균일 또는 고정 용량으로 투여 또는 사용된다.
정의
추가 용어가 아래에서 그리고 본 출원에 걸쳐 정의된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 관사(“a” 및 “an”)는 관사의 문법상 목적어 중 하나 이상(예를 들어, 적어도 하나)을 지칭한다.
용어 "또는"은 문맥상 달리 명시하지 않는 한, 본 명세서에서 용어 "및/또는"을 의미하고, 이와 상호교환적으로 사용된다.
"약" 및 "대략"은 일반적으로 측정의 성질 및 정확도를 고려하여, 측정된 양에 대해 허용되는 오차의 정도를 의미할 것이다. 예시적인 오차의 정도는 주어진 값 또는 값의 범위의 20퍼센트(%) 이내, 통상적으로 10% 이내, 보다 전형적으로 5% 이내이다.
"병용물" 또는 "와 병용하여"는 요법 또는 치료제가 동일한 시간에 투여되고/되거나 함께 전달을 위하여 제형화되어야 함을 암시하고자 하는 것은 아니지만, 이들 전달 방법은 본 명세서에 기재된 범주 이내에 있다. 병용물 형태의 치료제들은 하나 이상의 다른 추가의 요법 또는 치료제와 동시에, 그 전에, 또는 그에 후속하여 투여될 수 있다. 치료제 또는 치료 프로토콜은 임의의 순서대로 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 작용제는 그러한 작용제에 대해 결정된 용량으로 그리고/또는 시간 스케줄에 투여될 것이다. 이 병용물에 이용되는 추가의 치료제는 단일 조성물로 함께 투여되거나 상이한 조성물로 별도로 투여될 수 있음이 또한 이해될 것이다. 일반적으로, 조합으로 이용되는 추가 치료제는 개별적으로 이용되는 수준을 초과하지 않는 수준으로 이용될 것으로 예상된다. 일부 구현예에서, 조합으로 이용되는 수준은 개별적으로 이용되는 수준보다 더 낮을 것이다.
구현예에서, 추가의 치료제는 치료적 용량으로 또는 치료적 용량보다 더 낮은 용량으로 투여된다. 특정 구현예에서, 억제, 예를 들어 성장 억제를 달성하는 데 필요한 제2 치료제의 농도는 제2 치료제가 개별적으로 투여될 때보다 제2 치료제가 제1 치료제, 예를 들어 항-PD-1 항체 분자와 병용하여 투여될 때 더 낮다. 특정 구현예에서, 억제, 예를 들어 성장 억제를 달성하는 데 필요한 제1 치료제의 농도는 제1 치료제가 개별적으로 투여될 때보다 제1 치료제가 제2 치료제와 병용하여 투여될 때 더 낮다. 특정 구현예에서, 병용 요법에서, 억제, 예를 들어 성장 억제를 달성하는 데 필요한 제2 치료제의 농도는 단일 제제요법으로서 제2 치료제의 치료적 용량보다 더 낮으며, 예를 들어 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 또는 80 내지 90% 더 낮다. 특정 구현예에서, 병용 요법에서, 억제, 예를 들어 성장 억제를 달성하는 데 필요한 제1 치료제의 농도는 단일 제제요법으로서 제1 치료제의 치료적 용량보다 더 낮으며, 예를 들어 10 내지 20%, 20 내지 30%, 30 내지 40%, 40 내지 50%, 50 내지 60%, 60 내지 70%, 70 내지 80%, 또는 80 내지 90% 더 낮다.
용어 "억제", "억제제", 또는 "길항제"는 주어진 분자의 특정 파라미터, 예를 들어 활성의 감소를 포함하며, 예를 들어 면역 관문 억제제이다. 예를 들어, 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40% 이상의 활성, 예를 들어 PD-1 또는 PD-L1 활성의 억제가 이 용어에 의해 포함된다. 따라서, 억제는 100%일 필요는 없다.
용어 "활성화", "활성화제", 또는 "효능제"는 주어진 분자의 특정 파라미터, 예를 들어 활성의 증가를 포함하며, 예를 들어 공동자극성 분자이다. 예를 들어, 적어도 5%, 10%, 25%, 50%, 75% 이상의 활성, 예를 들어 공동자극 활성의 증가가 이 용어에 의해 포함된다.
용어 "암"은 비정상 세포의 급속하고 제어되지 않은 성장을 특징으로 하는 질환을 지칭한다. 암 세포는 국부로 또는 혈류 및 림프계를 통해 신체의 다른 부분으로 확산될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "암" 또는 "종양"은 악성뿐만 아니라 전암성 암 및 종양을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 장애, 예를 들어 증식성 장애의 진행, 중증도 및/또는 지속기간의 감소 또는 개선, 또는 하나 이상의 치료법의 투여로부터 얻은 장애의 하나 이상의 증상(바람직하게는, 하나 이상의 식별가능한 증상)의 개선을 지칭한다. 특정 구현예에서, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 환자가 반드시 식별할 수 있는 것은 아닌, 증식성 장애, 예컨대 종양의 성장의 적어도 하나의 측정가능한 신체적 파라미터의 개선을 지칭한다. 다른 구현예에서, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 예를 들어 식별가능한 증상의 안정화에 의해 신체적으로, 또는 예를 들어 신체적 파라미터의 안정화에 의해 생리적으로, 또는 둘 모두에 의한 증식성 장애의 진행의 억제를 지칭한다. 다른 구현예에서, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 종양 크기 또는 암성 세포 계수의 감소 또는 안정화를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된"은 물질이 그의 원래의 또는 천연 환경(예를 들어, 그것이 천연 발생이라면 자연 환경)으로부터 회수되는 것을 지칭한다. 예를 들어, 살아 있는 동물에 존재하는 자연 발생 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 단리된 것이 아니지만, 인간의 개입에 의해 자연계에서 공존하는 물질의 일부 또는 전부로부터 분리된 동일한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 단리된 것이다. 그러한 폴리뉴클레오티드는 벡터의 일부일 수 있고/있거나 그러한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 조성물의 일부일 수 있으며, 그러한 벡터 또는 조성물은 그것이 자연에서 발견되는 환경의 일부가 아니라는 점에서 여전히 단리된 것일 수 있다.
본 발명의 다양한 양태가 하기에 추가로 상세히 기재되어 있다. 추가의 정의가 본 명세서 전체에 걸쳐 기재되어 있다.
항체 분자
일 구현예에서, 항체 분자는 포유류, 예를 들어 인간, PD-1에 결합한다. 예를 들어, 항체 분자는 PD-1 상의 에피토프, 예를 들어 선형 또는 입체구조 에피토프(예를 들어, 본 명세서에 기재된 에피토프)에 특이적으로 결합한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체 분자"는 적어도 하나의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질, 예를 들어 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편을 지칭한다. 용어 "항체 분자"는, 예를 들어 단일클론 항체(면역글로불린 Fc 영역을 갖는 전장 항체를 포함함)를 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체, 또는 전장 면역글로불린 사슬을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체, 또는 전장 면역글로불린 사슬의 항원 결합 또는 기능적 단편을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 다중특이성 항체 분자이며, 예를 들어 그것은 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하며, 여기서 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖고, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 일 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자이다. 이중특이적 항체는 2개 이하의 항원에 대해 특이성을 갖는다. 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 단일특이적 항체 분자이고, 단일 에피토프와 결합한다. 예를 들어, 단일특이적 항체 분자는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 가지며, 이들 각각은 동일한 에피토프와 결합한다.
일 구현예에서, 항체 분자는 다중특이성 항체 분자이며, 예를 들어 그것은 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하며, 여기서 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖고, 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열 중 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 일 구현예에서, 제1 에피토프와 제2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어 동일한 단백질(또는 다량체성 단백질의 서브유닛) 상에 있다. 일 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 일 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 일 구현예에서, 제1 에피토프와 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체성 단백질의 상이한 서브유닛) 상에 있다. 일 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 제3, 제4 또는 제5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자, 삼중특이적 항체 분자, 또는 사중특이적 항체 분자이다.
일 구현예에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자이다. 이중특이적 항체는 2개 이하의 항원에 대해 특이성을 갖는다. 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다. 일 구현예에서, 제1 에피토프와 제2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어 동일한 단백질(또는 다량체성 단백질의 서브유닛) 상에 있다. 일 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 일 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 일 구현예에서, 제1 에피토프와 제2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질(또는 다량체성 단백질의 상이한 서브유닛) 상에 있다. 일 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체를 포함한다. 일 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체 또는 이의 단편, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 절반 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 일 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편, 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 일 구현예에서, 제1 에피토프는 PD-1 상에 위치되어 있고, 제2 에피토프는 TIM-3, LAG-3, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1 및/또는 CEACAM-5), PD-L1, 또는 PD-L2 상에 위치되어 있다.
일 구현예에서, 항체 분자는 디아바디(diabody), 및 단일쇄 분자뿐만 아니라, 항체의 항원 결합 단편(예를 들어, Fab, F(ab')2, 및 Fv)을 포함한다. 예를 들어, 항체 분자에는 중(H)쇄 가변 도메인 서열(본원에서 VH로 약칭됨), 및 경(L)쇄 가변 도메인 서열(본원에서 VL로 약칭됨)이 포함될 수 있다. 일 구현예에서, 항체 분자는 중쇄 및 경쇄를 포함하거나 이로 이루어진다(본 명세서에서 절반 항체로 지칭됨). 또 다른 예에서, 항체 분자는 2개의 중(H)쇄 가변 도메인 서열 및 2개의 경(L)쇄 가변 도메인 서열을 포함함으로써 2개의 항원 결합 부위를 형성하며, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fc, Fd, Fd', Fv, 단일쇄 항체(예를 들어, scFv), 단일 가변 도메인 항체, 디아바디(Dab)(2가 및 이중특이적), 및 키메라(예를 들어, 인간화) 항체인데, 이들은 전 항체(whole antibody)의 변형에 의해 생성되거나 재조합 DNA 기술을 사용하여 드 노보(de novo)로 합성될 수 있다. 이들 기능성 항체 단편은 그들 각각의 항원 또는 수용체와 선택적으로 결합하는 능력을 보유한다. 항체 및 항체 단편은 IgG, IgA, IgM, IgD, 및 IgE를 포함하지만 이로 한정되지 않는 임의의 부류의 항체로부터의 것이거나 항체의 임의의 하위부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4)로부터의 것일 수 있다. 항체 분자의 제조는 단일클론성 또는 다중클론성일 수 있다. 항체 분자는 또한 인간 항체, 인간화 항체, CDR-그래프트된 항체, 또는 시험관내에서 생성된 항체일 수 있다. 항체는, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 선택되는 중쇄 불변 영역을 가질 수 있다. 항체는 또한, 예컨대 카파 또는 람다로부터 선택되는 경쇄를 가질 수 있다. 용어 "면역글로불린"(Ig)은 본 명세서에서 용어 "항체"와 상호교환 가능하게 사용된다.
항체 분자의 항원 결합 단편의 예에는 다음이 포함된다: (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 디아바디(dAb) 단편; (vi) 낙타 또는 낙타화 가변 도메인; (vii) 단일쇄 Fv(scFv)(예를 들어, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 참조); (viii) 단일 도메인 항체. 이들 항체 단편은 당업자에게 알려진 통상적인 기법을 사용하여 얻어지며, 이들 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성을 위해 스크리닝된다.
용어 "항체"는 온전한 분자뿐만 아니라 이의 기능적 단편을 포함한다. 항체의 불변 영역은 변경, 예를 들어, 돌연변이되어, 항체의 특성을 수정할 수 있다(예를 들어, 다음 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시킬 수 있다: Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 이펙터 세포 기능, 또는 보체 기능).
VH 및 VL 영역은 "상보성 결정 영역"(CDR)으로 불리는 초가변성의 영역들로 세분될 수 있으며, 이들 사이에는 "프레임워크 영역"(FR 또는 FW)으로 불리는 더 보존된 영역들이 산재되어 있다.
프레임워크 영역 및 CDR의 범위는 다수의 방법에 의해 정확하게 정의되어 있다(Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917; 및 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된 AbM 정의 참조). 일반적으로, 예를 들어 Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg)] 참조.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "상보성 결정 영역" 및 "CDR"은 항원 특이성 및 결합 친화성을 부여하는 항체 가변 영역 내의 아미노산의 서열을 지칭한다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR(HCDR1, HCDR2, HCDR3)이 있고, 각각의 경쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR(LCDR1, LCDR2, LCDR3)이 있다.
주어진 CDR의 정확한 아미노산 서열 경계는 Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD("Kabat" 넘버링 체계), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948("Chothia" 넘버링 체계)에 기재된 것들을 비롯한, 다수의 잘 알려진 체계 중 임의의 것을 사용하여 결정할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "Chothia" 번호 체계에 따라 정의된 CDR은 또한 때때로 "초가변 루프"로 지칭된다.
예를 들어, Kabat에 따르면, 중쇄 가변 도메인(VH) 내의 CDR 아미노산 잔기는 31~35(HCDR1), 50~65(HCDR2), 및 95~102(HCDR3)로 넘버링되고; 경쇄 가변 도메인(VL) 내의 CDR 아미노산 잔기는 24~34(LCDR1), 50~56(LCDR2), 및 89~97(LCDR3)로 넘버링된다. Chothia에 따르면, VH 내의 CDR 아미노산은 26~32(HCDR1), 52~56(HCDR2), 및 95~102(HCDR3)로 넘버링되고; VL 내의 아미노산 잔기는 26~32(LCDR1), 50~52(LCDR2), 및 91~96(LCDR3)으로 넘버링된다. Kabat 및 Chothia 둘 모두의 CDR 정의를 조합함으로써, CDR은 인간 VH 내의 아미노산 잔기 26~35(HCDR1), 50~65(HCDR2), 및 95~102(HCDR3) 및 인간 VL 내의 아미노산 잔기 24~34(LCDR1), 50~56(LCDR2), 및 89~97(LCDR3)로 구성된다.
일반적으로, 구체적으로 나타내지 않는 한, 항-PD-1 항체 분자는 예를 들어 표 1에 기재된, 하나 이상의 Kabat CDR 및/또는 Chothia 초가변 루프의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 표 1에 기재된 항-PD-1 항체 분자에 대해 다음의 정의가 사용된다: Kabat 및 Chothia의 조합된 CDR 정의에 따른 HCDR1, 및 Kabat의 CDR 정의에 다른 HCCDR 2~3 및 LCCDR 1~3. 모든 정의 하에서, 각각의 VH 및 VL에는 전형적으로 다음의 순서로 아미노 말단부터 카복시 말단으로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR이 포함된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 지칭한다. 예를 들어, 서열에는 자연 발생 가변 도메인의 아미노산 서열의 전부 또는 일부가 포함될 수 있다. 예를 들어, 서열에는 1개, 또는 2개 이상의 N- 또는 C-말단 아미노산이 포함될 수 있거나, 포함되지 않을 수 있거나, 단백질 구조의 형성과 상용성인 다른 변경이 포함될 수 있다.
용어 "항원 결합 부위"는 PD-1 폴리펩티드 또는 이의 에피토프에 결합하는 계면을 형성하는 결정인자들을 포함하는 항체 분자의 일부를 지칭한다. 단백질(또는 단백질 모방체)에 관하여, 항원 결합 부위는 통상적으로 PD-1 폴리펩티드에 결합하는 계면을 형성하는 (적어도 4개의 아미노산 또는 아미노산 모방체의) 하나 이상의 루프를 포함한다. 전형적으로, 항체 분자의 항원 결합 부위에는 적어도 1개 또는 2개의 CDR 및/또는 초가변 루프, 또는 더 전형적으로는 적어도 3개, 4개, 5개 또는 6개의 CDR 및/또는 초가변 루프가 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "단클론 항체" 또는 "단클론 항체 조성물"은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 단클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타낸다. 단일클론 항체는 하이브리도마 기법에 의해 또는 하이브리도마 기법을 사용하지 않는 방법(예컨대 재조합 방법)에 의해 제조될 수 있다.
인간화 또는 CDR-그래프트된 항체는 (중쇄 및/또는 경쇄 면역글로불린 사슬 중) 적어도 1개 또는 2개, 그러나 일반적으로는 3개의 모든 수령 CDR이 공여 CDR로 대체되어 있을 것이다. 항체는 비인간 CDR의 적어도 일부분으로 대체될 수 있거나 CDR의 단지 일부만이 비인간 CDR로 대체될 수 있다. PD-1에 대한 인간화 항체의 결합에 요구되는 CDR의 수만 대체하는 것이 필요하다. 바람직하게는, 공여체는 설치류 항체, 예를 들어 래트 또는 마우스 항체일 것이며, 수령체는 인간 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크일 것이다. 통상적으로, CDR을 제공하는 면역글로불린은 "공여체"로 불리고, 프레임워크를 제공하는 면역글로불린은 "수용체"로 불린다. 일 구현예에서, 공여체 면역글로불린은 비인간(예를 들어, 설치류)이다. 수용체 프레임워크는 자연 발생(예를 들어, 인간) 프레임워크 또는 컨센서스 프레임워크이거나, 이와 약 85% 이상, 바람직하게는 90%, 95%, 99% 또는 그 이상 동일한 서열이다.
예시적인 PD-1 억제제
PD-1은 예를 들어 활성화된 CD4+ 및 CD8+ T 세포, Treg 및 B 세포 상에서 발현되는 CD28/CTLA-4 과 구성원이다. 그것은 이펙터 T 세포 신호전달 및 기능을 음성으로 조절한다. PD-1은 종양-침윤 T 세포 상에서 유도되며, 기능적 소진 또는 기능이상을 초래할 수 있다(Keir et al. (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). PD-1은 그의 2개의 리간드, 즉 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1) 또는 프로그래밍된 사멸-리간드 2(PD-L2) 중 어느 하나로의 결합 시에 공동억제 신호를 전달한다. PD-L1은 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 대식세포, 수지상 세포(DC), B 세포, 상피 세포, 혈관 내피 세포 및 많은 유형의 종양을 포함하는 다수의 세포 유형 상에서 발현된다. 뮤린 및 인간 종양 상에서의 PD-L1의 높은 발현은 다양한 암에서의 불량한 임상 결과와 연관되어 왔다(Keir et al. (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). PD-L2는 수지상 세포, 대식세포 및 일부 종양 상에서 발현된다. PD-1 경로의 차단은 암 면역요법을 위해 전임상적으로, 그리고 임상적으로 검증되었다. 전임상 및 임상 연구 둘 모두에 의해, 항-PD-1 차단이 이펙터 T 세포의 활성을 복구시킬 수 있으며, 강력한 항-종양 반응을 초래하는 것이 증명되었다. 예를 들어 PD-1 경로의 차단은 소진된/기능이상 이펙터 T 세포 기능(예를 들어 증식, IFN-γ 분비 또는 세포용해 기능)을 복구시키고/거나 Treg 세포 기능을 억제할 수 있다(Keir et al. (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). PD-1 경로의 차단은 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역부착소(immunoadhesin), 융합 단백질, 또는 PD-1, PD-L1 및/또는 PD-L2의 올리고펩티드에 의해 수행될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "프로그래밍된 사멸 1" 또는 "PD-1"은 아이소형(isoform), 포유동물, 예를 들어 인간 PD-1, 인간 PD-1의 종 상동체 및 PD-1과 적어도 하나의 공통의 에피토프를 포함하는 유사체를 포함한다. PD-1, 예를 들어 인간 PD-1의 아미노산 서열은 당해 분야, 예를 들어 Shinohara T et al. (1994) Genomics 23(3):704-6; Finger LR, et al. Gene (1997) 197(1-2):177-87에 공지되어 있다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 분자는 본 명세서에 기재된 방법에 따라 단독으로 또는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 추가의 작용제와 병용하여 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 병용물은 본 명세서에 기재된 PD-1 억제제, 예를 들어 항-PD-1 항체 분자(예를 들어, 인간화 항체 분자)를 포함한다.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 하기를 포함한다:
(a) 서열번호 4의 HCDR1 아미노산 서열, 서열번호 5의 HCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 13의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 14의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 33의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(b) 서열번호 1로부터 선택되는 HCDR1 아미노산 서열; 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 10의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 11의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(c) 서열번호 4의 HCDR1 아미노산 서열, 서열번호 5의 HCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 13의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 14의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 33의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(d) 서열번호 1의 HCDR1 아미노산 서열; 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 10의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 11의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL.
일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 하기를 포함한다:
(a) 서열번호 4의 HCDR1 아미노산 서열, 서열번호 5의 HCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 13의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 14의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 33의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
(b) 서열번호 1의 HCDR1 아미노산 서열; 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 10의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 11의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(c) 서열번호 224의 HCDR1 아미노산 서열, 서열번호 5의 HCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 13의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 14의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 33의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(d) 서열번호 224의 HCDR1 아미노산 서열; 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 10의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 11의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL.
특정 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 하기를 포함한다:
(i) 서열번호 1, 서열번호 4 또는 서열번호 224로부터 선택되는 HCDR1 아미노산 서열; 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및
(ii) 서열번호 10의 LCDR1 아미노산 서열; 서열번호 11의 LCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL).
다른 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 하기를 포함한다:
(i) 서열번호 1, 서열번호 4 또는 서열번호 224로부터 선택되는 HCDR1 아미노산 서열; 서열번호 5의 HCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및
(ii) 서열번호 13의 LCDR1 아미노산 서열; 서열번호 14의 LCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 33의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL).
상기 언급된 항체 분자의 구현예에서, HCDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, HCDR1은 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, HCDR1은 서열번호 224의 아미노산 서열을 포함한다.
구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 147, 151, 153, 157, 160, 162, 166, 또는 169 중 임의의 것의 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 90% 동일하거나, 서열번호 147, 151, 153, 157, 160, 162, 166, 또는 169 중 임의의 것의 아미노산 서열과 비교하여 2개 이하의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 프레임워크(FW) 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 147, 151, 153, 157, 160, 162, 166, 또는 169 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 프레임워크 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 147, 151, 153, 157, 160, 162, 166, 또는 169 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 적어도 2개, 3개, 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 147 또는 151의 VHFW1 아미노산 서열, 서열번호 153, 157, 또는 160의 VHFW2 아미노산 서열, 및 서열번호 162 또는 166의 VHFW3 아미노산 서열을 포함하며, 선택적으로, 서열번호 169의 VHFW4 아미노산 서열을 추가로 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 174, 177, 181, 183, 185, 187, 191, 194, 196, 200, 202, 205, 또는 208 중 임의의 것의 아미노산 서열, 또는 이와 적어도 90% 동일하거나, 서열번호 174, 177, 181, 183, 185, 187, 191, 194, 196, 200, 202, 205, 또는 208 중 임의의 것의 아미노산 서열과 비교하여 2개 이하의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 프레임워크 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 174, 177, 181, 183, 185, 187, 191, 194, 196, 200, 202, 205, 또는 208 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 적어도 하나의 프레임워크 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 174, 177, 181, 183, 185, 187, 191, 194, 196, 200, 202, 205, 또는 208 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 적어도 2개, 3개, 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 174, 177, 181, 183, 또는 185의 VLFW1 아미노산 서열, 서열번호 187, 191, 또는 194의 VLFW2 아미노산 서열, 및 서열번호 196, 200, 202, 또는 205의 VLFW3 아미노산 서열을 포함하며, 선택적으로, 서열번호 208의 VLFW4 아미노산 서열을 추가로 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체는 서열번호 38, 50, 82, 또는 86 중 임의의 것과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38, 50, 82, 또는 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 42, 46, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 또는 78 중 임의의 것과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 42, 46, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 또는 78의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 52 또는 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체는 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 80의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체는 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단일쇄 Fv 단편(scFv)으로부터 선택된다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택되는 중쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 카파 또는 람다의 경쇄 불변 영역으로부터 선택되는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 212 또는 214의, EU 넘버링에 따른 위치 228 또는 위치 108에 돌연변이를 갖는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역, 및 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 212 또는 214의, EU 넘버링에 따른 위치 228 또는 위치 108에 세린에서 프롤린으로의 돌연변이를 갖는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역, 및 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 216의, EU 넘버링에 따른 위치 297 또는 위치 180에 아스파라긴에서 알라닌으로의 돌연변이를 갖는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역, 및 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 217의, EU 넘버링에 따른 위치 265 또는 위치 148에 아스파르트산에서 알라닌으로의 돌연변이, 및 서열번호 217의, EU 넘버링에 따른 위치 329 또는 위치 212에 프롤린에서 알라닌으로의 돌연변이를 갖는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역, 및 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 서열번호 218의, EU 넘버링에 따른 위치 234 또는 위치 117에 류신에서 알라닌으로의 돌연변이, 및 서열번호 218의, EU 넘버링에 따른 위치 235 또는 위치 118에 류신에서 알라닌으로의 돌연변이를 갖는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역, 및 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 약 0.2 nM 미만의 해리 상수(KD)로 인간 PD-1에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 Biacore 방법에 의해 측정될 때, 약 0.2 nM, 0.15 nM, 0.1 nM, 0.05 nM, 또는 0.02 nM 미만, 예를 들어 약 0.13 nM 내지 0.03 nM, 예를 들어 약 0.077 nM 내지 0.088 nM, 예를 들어 약 0.083 nM의 KD로 인간 PD-1에 결합한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 Biacore 방법에 의해 측정될 때, 약 0.2 nM, 0.15 nM, 0.1 nM, 0.05 nM, 또는 0.02 nM 미만, 예를 들어 약 0.11 nM 내지 0.08 nM, 예를 들어 약 0.093 nM의 KD로 사이노몰거스 PD-1에 결합한다.
특정 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 Biacore 방법에 의해 측정될 때, 유사한 KD로, 예를 들어 nM 범위로 인간 PD-1 및 사이노몰거스 PD-1 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 ELISA에 의해 측정될 때, 약 0.1 nM, 0.075 nM, 0.05 nM, 0.025 nM, 또는 0.01 nM 미만, 예를 들어 약 0.04 nM의 KD로 인간 PD-1-Ig 융합 단백질에 결합한다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 FACS 분석에 의해 측정될 때, 약 0.1 nM, 0.075 nM, 0.05 nM, 0.025 nM, 또는 0.01 nM 미만, 예를 들어 약 0.06 nM의 KD로 인간 PD-1을 발현하는 Jurkat 세포(예를 들어, 인간 PD-1-형질감염된 Jurkat 세포)에 결합한다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 FACS 분석에 의해 측정될 때, 약 1 nM, 0.75 nM, 0.5 nM, 0.25 nM, 또는 0.1 nM 미만, 예를 들어 약 0.4 nM의 KD로 사이노몰거스 T 세포에 결합한다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 FACS 분석에 의해 측정될 때, 약 1 nM, 0.75 nM, 0.5 nM, 0.25 nM, 또는 0.01 nM 미만, 예를 들어 약 0.6 nM의 KD로 사이노몰거스 PD-1을 발현하는 세포(예를 들어, 사이노몰거스 PD-1로 형질감염된 세포)에 결합한다.
특정 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 마우스 또는 래트 PD-1과 교차-반응성이 아니다. 다른 구현예에서, 상기 언급된 항체는 레서스 PD-1과 교차-반응성이다. 예를 들어 교차-반응성은 PD-1을 발현하는 세포(예를 들어 인간 PD-1-발현 300.19 세포)를 사용하여 Biacore 방법 또는 결합 검정에 의해 측정될 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 PD-1의 세포외 Ig-유사 도메인과 결합한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 PD-L1, PD-L2, 또는 둘 모두에 대한, 또는 PD-L1, PD-L2, 또는 둘 모두를 발현하는 세포에 대한 PD-1의 결합을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 약 1.5 nM, 1 nM, 0.8 nM, 0.6 nM, 0.4 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM 미만, 예를 들어 약 0.79 nM 내지 약 1.09 nM, 예를 들어 약 0.94 nM, 또는 약 0.78 nM 또는 그 이하, 예를 들어 약 0.3 nM의 IC50으로, PD-1을 발현하는 세포(예를 들어, 인간 PD-1-발현 300.19 세포)에 대한 PD-L1 결합을 감소시킨다(예를 들어, 차단한다). 일부 구현예에서, 상기 언급된 항체는 약 2 nM, 1.5 nM, 1 nM, 0.5 nM 또는 0.2 nM 미만, 예를 들어 약 1.05 nM 내지 약 1.55 nM, 또는 약 1.3 nM 이하, 예를 들어 약 0.9 nM의 IC50으로, PD-1을 발현하는 세포(예를 들어 인간 PD-1-발현 300.19 세포)에 대한 PD-L2 결합을 감소시킨다(예를 들어 차단한다).
다른 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 항원-특이적 T 세포 반응을 향상시킬 수 있다.
구현예에서, 항체 분자는 단일특이적 항체 분자 또는 이중특이적 항체 분자이다. 구현예에서, 항체 분자는 PD-1에 대하여 제1 결합 특이성 및 TIM-3, LAG-3, CEACAM(예를 들어 CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), PD-L1 또는 PD-L2에 대하여 제2 결합 특이성을 갖는다. 구현예에서, 항체 분자는 항체의 항원 결합 단편, 예를 들어 절반 항체 또는 절반 항체의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 (예를 들어, 25 μg/mL의) 포도상구균 장독소(Staphylococcal enterotoxin) B(SEB)에 의해 활성화된 세포로부터의 IL-2의 발현을, 동종형(isotype) 대조군(예를 들어, IgG4)이 사용될 때의 IL-2의 발현과 비교하여 적어도 약 2배, 3배, 4배, 5배, 예를 들어 약 2 내지 3배, 예를 들어 약 2 내지 2.6배, 예를 들어 약 2.3배만큼 증가시키며, 이는, 예를 들어 SEB T 세포 활성화 검정 또는 인간 전혈 생체외(ex vivo) 검정에서 측정될 때 그러하다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 (예를 들어, 0.1 μg/mL의) 항-CD3에 의해 자극된 T 세포로부터의 IFN-γ의 발현을, 동종형 대조군(예를 들어, IgG4)이 사용될 때의 IFN-γ의 발현과 비교하여 적어도 약 2배, 3배, 4배, 5배, 예를 들어 약 1.2 내지 3.4배, 예를 들어 약 2.3배만큼 증가시키며, 이는, 예를 들어 IFN-γ 활성 검정에서 측정될 때 그러하다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 (예를 들어, 3 pg/mL의) SEB에 의해 활성화된 T 세포로부터의 IFN-γ의 발현을, 동종형 대조군(예를 들어, IgG4)이 사용될 때의 IFN-γ의 발현과 비교하여 적어도 약 2배, 3배, 4배, 5배, 예를 들어 약 0.5 내지 4.5배, 예를 들어 약 2.5배만큼 증가시키며, 이는, 예를 들어 IFN-γ 활성 검정에서 측정될 때 그러하다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 CMV 펩티드로 활성화된 T 세포로부터의 IFN-γ의 발현을, 동종형 대조군(예를 들어, IgG4)이 사용될 때의 IFN-γ의 발현과 비교하여 적어도 약 2배, 3배, 4배, 5배, 예를 들어 약 2 내지 3.6배, 예를 들어 약 2.8배만큼 증가시키며, 이는, 예를 들어 IFN-γ 활성 검정에서 측정될 때 그러하다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는 CMV 펩티드로 활성화된 CD8+ T 세포의 증식을, 동종형 대조군(예를 들어, IgG4)이 사용될 때의 CD8+ T 세포의 증식과 비교하여 적어도 약 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 예를 들어 약 1.5배만큼 증가시키며, 이는, 예를 들어 적어도 n회(예를 들어, n = 2 또는 4)의 세포 분열을 통해 계대된 CD8+ T 세포의 백분율에 의해 측정될 때 그러하다.
특정 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 원숭이에서 측정될 때, Cmax가 약 100 μg/mL 내지 약 500 μg/mL, 약 150 μg/mL 내지 약 450 μg/mL, 약 250 μg/mL 내지 약 350 μg/mL, 또는 약 200 μg/mL 내지 약 400 μg/mL, 예를 들어 약 292.5 μg/mL이다.
특정 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어, 원숭이에서 측정될 때, T1/2가 약 250시간 내지 약 650시간, 약 300시간 내지 약 600시간, 약 350시간 내지 약 550시간, 또는 약 400시간 내지 약 500시간, 예를 들어 약 465.5시간이다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 Biacore 방법에 의해 측정될 때, 5×10-4, 1×10-4, 5×10-5, 또는 1×10-5 s-1보다 느린, 예를 들어 약 2.13×10-4 s-1의 Kd로 PD-1에 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 언급된 항체 분자는, 예를 들어 Biacore 방법에 의해 측정될 때, 1×104, 5×104, 1×105, 또는 5×105 M-1s-1보다 빠른, 예를 들어 약 2.78×105 M-1s-1의 Ka로 PD-1에 결합한다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 항-PD-1 항체 분자는 PD-1의 C 가닥, CC' 루프, C' 가닥 및 FG 루프 내의 하나 이상의 잔기에 결합한다. PD-1의 도메인 구조는 예를 들어 Cheng et al., "Structure and Interactions of the Human Programmed Cell Death 1 Receptor" J. Biol. Chem. 2013, 288:11771-11785에 기재되어 있다. Cheng et. al.에 기재된 바와 같이, C 가닥은 잔기 F43~M50을 포함하며, CC' 루프는 S51~N54를 포함하며, C' 가닥은 잔기 Q55~F62를 포함하며, FG 루프는 잔기 L108-I114(Chang et al.(상기 문헌)에 따른 아미노산 넘버링)를 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체는 PD-1의 범위 F43~M50, S51~N54, Q55~F62 및 L108~I114 중 하나 이상 내의 적어도 하나의 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체는 PD-1의 범위 F43~M50, S51~N54, Q55~F62 및 L108~I114 중 2, 3 또는 4개 모두 내의 적어도 하나의 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 또는 둘 모두에 대한 결합 부위의 일부인 PD-1 내의 잔기에 결합한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 언급된 항체 분자들 중 임의의 것을 인코딩하는 단리된 핵산 분자, 이의 벡터 및 숙주 세포를 제공한다.
상기 언급된 항체 분자들 중 임의의 것의 항체 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역, 또는 둘 모두를 인코딩하는 단리된 핵산이 또한 제공된다.
일 구현예에서, 단리된 핵산은 중쇄 CDR 1 내지 CDR 3을 인코딩하며, 상기 핵산은 서열번호 108~112, 223, 122~126, 133~137, 또는 144~146의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 단리된 핵산은 경쇄 CDR 1 내지 CDR 3을 인코딩하며, 상기 핵산은 서열번호 113~120, 127~132, 또는 138~143의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 핵산은 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 39, 51, 83, 87, 90, 95, 또는 101 중 임의의 것과 적어도 85% 동일하다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 핵산은 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 39, 51, 83, 87, 90, 95, 또는 101 중 임의의 것을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 핵산은 중쇄를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 41, 53, 85, 89, 92, 96, 또는 103 중 임의의 것과 적어도 85% 동일하다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 핵산은 중쇄를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 41, 53, 85, 89, 92, 96, 또는 103 중 임의의 것을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 핵산은 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 45, 49, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 94, 98, 100, 105, 또는 107 중 임의의 것과 적어도 85% 동일하다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 핵산은 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 45, 49, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 94, 98, 100, 105, 또는 107 중 임의의 것을 포함한다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 핵산은 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 45, 49, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 94, 98, 100, 105, 또는 107 중 임의의 것과 적어도 85% 동일하다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 핵산은 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함하며, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 45, 49, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 94, 98, 100, 105, 또는 107 중 임의의 것을 포함한다.
특정 구현예에서, 상기 언급된 핵산을 포함하는 하나 이상의 발현 벡터 및 숙주 세포가 제공된다.
유전자 발현에 적합한 조건 하에서 본 명세서에 기재된 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 항체 분자 또는 이의 단편을 생성하는 방법이 또한 제공된다.
일 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체 분자를 제공하는 방법을 특징으로 한다. 방법은 PD-1 항원(예를 들어, PD-1 에피토프의 적어도 일부분을 포함하는 항원)을 제공하는 단계; PD-1 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 분자를 수득하는 단계; 및 항체 분자가 PD-1 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는지를 평가하거나, PD-1의 활성을 조절하는 데, 예를 들어 억제하는 데 있어서의 항체 분자의 효능을 평가하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 대상체, 예를 들어 인간 또는 비인간 동물에게 항체 분자를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제, 및 적어도 하나의 치료제, 예를 들어 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 분자를 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물을 제공한다. 일 구현예에서, 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 항체 분자 및 하나 이상의 작용제, 예를 들어 치료제 또는 다른 항체 분자의 병용물을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 분자는 표지 또는 치료제에 접합된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 병용물은 스파탈리주맙(PDR001, 노바티스(Novartis)), 니볼루맙(브리스톨-마이어스 스큅), 펨브롤리주맙(머크 앤드 컴퍼니(Merck & Co)), 피딜리주맙(큐어테크(CureTech)), MEDI0680(메드이뮨), REGN2810(리제너론(Regeneron)), TSR-042(테사로(Tesaro)), PF-06801591(화이자(Pfizer)), BGB-A317(베이진(Beigene)), BGB-108(베이진), INCSHR1210(인사이트(Incyte)) 또는 AMP-224(앰플이뮨(Amplimmune))로부터 선택되는 PD-1 억제제를 포함한다.
약제학적 조성물 및 키트
또 다른 양태에서, 본 발명은 조성물, 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화된, 본 명세서에 기재된 항체 분자를 포함하는 약제학적으로 허용되는 조성물을 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매체, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 직장내, 척수 또는 표피 투여(예를 들어, 주사 또는 주입에 의함)에 적합할 수 있다.
본 발명의 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어 액체, 반고체 및 고체 투여 형태, 예컨대 액체 용액(예를 들어, 주사가능 및 주입가능 용액), 분산액 또는 현탁액, 리포좀 및 좌제를 포함한다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 응용에 좌우된다. 통상적인 바람직한 조성물은 주사가능 또는 주입가능 용액의 형태이다. 바람직한 투여 방식은 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 복막내, 근육내)이다. 바람직한 구현예에서, 항체는 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 항체는 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 어구 "비경구 투여" 및 "비경구 투여된"은 통상적으로 주사에 의한, 경장 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하고, 제한 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복막내, 경기관, 피하, 각피하(subcuticular), 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
치료 조성물은 전형적으로 제조 및 보관 조건 하에서 멸균 상태이고 안정해야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포좀, 또는 높은 항체 농도에 적합한 다른 질서있는 구조로서 제형화될 수 있다. 필요한 양의 활성 화합물(즉, 항체 또는 항체의 일부분)을, 필요에 따라 상기 열거된 성분들 중 하나 또는 이들의 배합물과 함께, 적절한 용매 중에 혼입한 후, 여과 멸균함으로써 멸균 주사용 용액이 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 베이스 분산 매질 및 상기 열거된 것들으로부터의 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 활성 화합물을 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 미리 멸균-여과된 용액으로부터의 활성 성분과 임의의 추가의 요망되는 성분의 분말을 산출하는 진공 건조 및 냉동-건조이다. 예를 들어, 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 용액의 적절한 유동성이 유지될 수 있다. 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 모노스테아르산염 및 젤라틴을 주사용 조성물 중에 포함시킴으로써, 주사용 조성물의 연장된 흡수를 가져올 수 있다.
항체 분자는 많은 치료적 응용에 있어서, 바람직한 투여 경로/방식이 정맥내 주사 또는 주입일 수 있지만, 당해 분야에 알려져 있는 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 항체 분자는 20 mg/분 초과, 예를 들어 20 내지 40 mg/분, 통상적으로 40 mg/분 이상의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여되어, 약 35 내지 440 mg/m2, 통상적으로 약 70 내지 310 mg/m2, 더 통상적으로는 약 110 내지 130 mg/m2의 용량에 도달할 수 있다. 구현예에서, 항체 분자는 10 mg/분 미만; 바람직하게는 5 mg/분 이하의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여되어, 약 1 내지 100 mg/m2, 바람직하게는 약 5 내지 50 mg/m2, 약 7 내지 25 mg/m2, 더 바람직하게는 약 10 mg/m2의 용량에 도달할 수 있다. 당업자에 의해 인식될 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 달라질 것이다. 특정 구현예에서, 활성 화합물은 화합물을 급속 방출에 대해 보호할 담체와 함께, 예컨대 임플란트, 경피 패치, 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형으로 제조될 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르소에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조를 위한 많은 방법이 특허받았거나, 일반적으로 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978 참조.
특정 구현예에서, 항체 분자는, 예를 들어 불활성 희석제 또는 동화성 식용 담체와 함께 경구 투여될 수 있다. 화합물(그리고 필요에 따라, 다른 성분)은 또한 경질 또는 연질 셸 젤라틴 캡슐 내에 봉입되거나, 정제로 압축되거나, 대상체의 식이 내로 직접 혼입될 수 있다. 경구 치료적 투여를 위하여, 화합물에 부형제가 혼입될 수 있고, 섭취가능한 정제, 협측 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 비경투 투여 이외의 것으로 투여하기 위해, 불활성화를 방지하는 물질로 화합물을 코팅하거나 그러한 물질과 함께 화합물을 공동-투여하는 것이 필요할 수 있다. 치료 조성물은 또한 당해 분야에 알려진 의료 장치로 투여될 수 있다.
투여 요법은 최적의 원하는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있고, 여러 번 분할된 용량이 시간이 지남에 따라 투여될 수 있거나, 용량이 치료 상황의 긴급성에 의해 지시되는 바와 같이 비례하여 감소 또는 증가될 수 있다. 특히, 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여량 단위 형태로 비경구 조성물을 제형화하는 것이 유리하다. 본원에서 사용된 바와 같은 투여량 단위 형태는, 치료받을 대상체에 대한 단위 투여량으로서 맞춰진 물리적으로 별개의 단위를 나타내며; 각각의 단위는 요구되는 약제학적 담체와 함께 요망되는 치료 효과를 생성하기 위해 계산된 예정된 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여량 단위 형태에 대한 명세 사항은 (a) 활성 화합물의 독특한 특성 및 달성될 특정 치료 효과, 및 (b) 개체의 민감도를 치료하기 위한 이러한 활성 화합물을 배합하는 분야에 내재된 한계에 의해 설명되며, 이에 직접 의존한다.
항체 분자의 치료적 또는 예방적 유효량에 대한 예시적인 비제한적 범위는 0.1 내지 30 mg/kg, 더 바람직하게는 1 내지 25 mg/kg이다. 항-PD-1 항체 분자의 투여량 및 치료 요법은 당업자에 의해 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 주사에 의해(예컨대 피하 또는 정맥내) 약 1 내지 40 mg/kg, 예컨대 1 내지 30 mg/kg, 예컨대 약 5 내지 25 mg/kg, 약 10 내지 20 mg/kg, 약 1 내지 5 mg/kg, 1 내지 10 mg/kg, 5 내지 15 mg/kg, 10 내지 20 mg/kg, 15 내지 25 mg/kg, 또는 약 3 mg/kg의 용량으로 투여된다. 투여 스케줄은, 예컨대 매 1주 1회 내지 매 2주, 3주, 또는 4주 1회로 다양할 수 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 격주마다 약 10 내지 20 mg/kg의 용량으로 투여된다.
또 다른 예로서, 항체 분자의 치료적 또는 예방적 유효량에 대한 비제한적 범위는 200 내지 500 mg, 더 바람직하게는 300 내지 400 mg/kg이다. 항-PD-1 항체 분자의 투여량 및 치료 요법은 당업자에 의해 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 200 mg 내지 500 mg, 예를 들어 약 250 mg 내지 450 mg, 약 300 mg 내지 400 mg, 약 250 mg 내지 350 mg, 약 350 mg 내지 450 mg, 또는 약 300 mg 또는 약 400 mg의 용량(예를 들어, 균일 용량)으로 주사에 의해(예를 들어, 피하 또는 정맥내) 투여된다. 투여 스케줄(예를 들어, 균일 투여 스케줄)은, 예를 들어 주 1회 내지 2주, 3주, 4주, 5주, 또는 6주마다 1회로 다양할 수 있다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 300 mg 내지 400 mg의 용량으로 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 300 mg의 용량으로 3주마다 1회 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 400 mg의 용량으로 4주마다 1회 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 300 mg의 용량으로 4주마다 1회 투여된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자는 약 400 mg의 용량으로 3주마다 1회 투여된다. 이론에 구애받고자 하지 않지만, 일부 구현예에서, 균일 또는 고정 투여는, 예를 들어 약물 공급량을 절약하고 조제상의 오류를 감소시킬 수 있어서 환자에게 유익할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자의 제거율(CL)은 약 6 내지 16 mL/h, 예를 들어 약 7 내지 15 mL/h, 약 8 내지 14 mL/h, 약 9 내지 12 mL/h, 또는 약 10 내지 11 mL/h, 예를 들어 약 8.9 mL/h, 10.9 mL/h, 또는 13.2 mL/h이다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자의 CL에 대한 체중의 지수(exponent)는 약 0.4 내지 0.7, 약 0.5 내지 0.6, 또는 0.7 이하, 예를 들어 0.6 이하, 또는 약 0.54이다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자의 안정 상태에서의 분포 부피(Vss)는 약 5 내지 10 V, 예를 들어 약 6 내지 9 V, 약 7 내지 8 V, 또는 약 6.5 내지 7.5 V, 예를 들어 약 7.2 V이다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자의 반감기는 약 10 내지 30일, 예를 들어 약 15 내지 25일, 약 17 내지 22일, 약 19 내지 24일, 또는 약 18 내지 22일, 예를 들어 약 20일이다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체 분자의 Cmin(예를 들어, 80 kg 환자에 대해)은 적어도 약 0.4 μg/mL, 예를 들어 적어도 약 3.6 μg/mL, 예를 들어 약 20 내지 50 μg/mL, 예를 들어 약 22 내지 42 μg/mL, 약 26 내지 47 μg/mL, 약 22 내지 26 μg/mL, 약 42 내지 47 μg/mL, 약 25 내지 35 μg/mL, 약 32 내지 38 μg/mL, 예를 들어 약 31 μg/mL 또는 약 35 μg/mL이다. 일 구현예에서, Cmin은 4주마다 1회 약 400 mg의 용량으로 항-PD-1 항체 분자를 제공받고 있는 환자에서 결정된다. 또 다른 구현예에서, Cmin은 3주마다 1회 약 300 mg의 용량으로 항-PD-1 항체 분자를 제공받고 있는 환자에서 결정된다. 특정 구현예에서, Cmin은, 예를 들어 SEB 생체외 검정에서 IL-2 변화에 기초하여 결정될 때, 항-PD-1 항체 분자의 EC50보다 적어도 약 50배 더 높으며, 예를 들어 적어도 약 60배, 65배, 70배, 75배, 80배, 85배, 90배, 95배, 또는 100배, 예를 들어 적어도 약 77배 더 높다. 다른 구현예에서, Cmin은, 예를 들어 SEB 생체외 검정에서 IL-2 변화에 기초하여 결정될 때, 항-PD-1 항체 분자의 EC90보다 적어도 5배 더 높으며, 예를 들어 적어도 6배, 7배, 8배, 9배, 또는 10배, 예를 들어 적어도 약 8.6배 더 높다.
항체 분자는 20 mg/분 초과, 예를 들어 20 내지 40 mg/분, 통상적으로 40 mg/분 이상의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여되어, 약 35 내지 440 mg/m2, 통상적으로 약 70 내지 310 mg/m2, 더 통상적으로는 약 110 내지 130 mg/m2의 용량에 도달할 수 있다. 구현예에서, 약 110 내지 130 mg/m2의 주입 속도는 약 3 mg/kg의 수준을 달성한다. 다른 구현예에서, 항체 분자는 10 mg/분 미만, 예를 들어 5 mg/분 이하의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여되어, 약 1 내지 100 mg/m2, 예를 들어 약 5 내지 50 mg/m2, 약 7 내지 25 mg/m2, 또는 약 10 mg/m2의 용량에 도달할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 약 30분의 기간에 걸쳐 주입된다. 투여량 값은 경감시키고자 하는 병태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있음에 유의한다. 임의의 특정 대상체의 경우에, 구체적인 투여 요법은 개체의 필요성 및 조성물을 투여하거나 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간의 경과에 따라 조정되어야 하고, 본원에서 나타낸 투여량 범위는 단지 예시적이며 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하려는 것이 아님이 추가로 이해되어야 한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 본 발명의 항체 또는 항체의 일부분의 "치료적 유효량" 또는 "예방적 유효량"을 포함할 수 있다. "치료적 유효량"은 원하는 치료 효과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 개질된 항체 또는 항체 단편의 치료 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 그리고 항체 또는 항체의 일부가 개체에서 요망되는 반응을 유발하는 능력과 같은 요인에 따라 변할 수 있다. 또한, 치료적 유효량은 개질된 항체 또는 항체 단편의 임의의 독성 효과 또는 유해 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 더 큰 것이다. "치료적 유효 투여량"은 바람직하게는 측정가능한 파라미터, 예를 들어 종양 성장 속도를 치료받지 않은 대상체와 비교하여 적어도 약 20%만큼, 더 바람직하게는 적어도 약 40%만큼, 더욱 더 바람직하게는 적어도 약 60%만큼, 휠씬 더 바람직하게는 적어도 약 80%만큼 억제한다. 측정가능한 파라미터, 예를 들어 암을 억제하는 화합물의 능력은 인간 종양에서의 효능을 예측할 수 있는 동물 모델 시스템에서 평가될 수 있다. 대안적으로, 조성물의 이러한 특성은 숙련된 실무자에게 알려진 검정에 의해 시험관내에서 그러한 억제를 억제하는 화합물의 능력을 조사함으로써 평가될 수 있다.
"예방적 유효량"은 원하는 예방 결과를 달성하는 데 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 통상적으로, 예방적 용량은 질환의 발생 전에 또는 질환의 초기 단계에 대상체에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 더 적을 것이다.
또한, 본원에 기재된 항체 분자를 포함하는 키트가 본 발명의 범위 내에 있다. 키트는 하기를 포함한 하나 이상의 다른 요소들을 포함할 수 있다: 사용 설명서; 다른 시약, 예를 들어 표지, 치료제, 또는 항체를 표지 또는 치료제에 킬레이팅하거나 달리 커플링하기에 유용한 작용제, 또는 방사성 방호 조성물; 투여를 위하여 항체를 준비하기 위한 장치 또는 다른 재료; 약제학적으로 허용되는 담체; 및 대상체에게 투여하기 위한 장치 또는 다른 재료.
병용 요법의 추가 용도
병용물, 예를 들어 본 명세서에 개시된 항-PD-1 항체 분자는 시험관내 및 생체내에서의 진단적 유용성뿐만 아니라 치료적 및 예방적 유용성을 갖는다. 예를 들어, 이들 분자는 다양한 장애, 예컨대 암 및 감염성 장애를 치료, 예방 및/또는 진단하기 위하여, 시험관내 또는 생체외에서 배양 중인 세포에 투여되거나 인간 대상체에게 투여될 수 있다.
따라서, 일 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 병용물을 대상체에게 투여하여, 대상체에서의 면역 반응이 변형되도록 하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 변형시키는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 면역 반응은 증강되거나, 자극되거나, 상향조절된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 비정상적인 PD-1 기능을 특징으로 하는 장애 또는 병태를 갖는 인간 환자이다.
본 출원의 본문의 전체에 걸쳐, 명세서의 본문과 서열 목록 사이에 차이가 존재할 경우, 본 명세서의 본문이 우선한다.
[표 1]
뮤린, 키메라 및 인간화 항체 분자에 대한 아미노산 및 뉴클레오티드 서열. 항체 분자는 뮤린 mAb BAP049, 키메라 mAb BAP049-chi 및 BAP049-chi-Y, 및 인간화 mAb BAP049-hum01 내지 BAP049-hum16 및 BAP049-클론-A 내지 BAP049-클론-E를 포함한다. 중쇄 및 경쇄 CDR, 중쇄 및 경쇄 가변 영역, 및 중쇄 및 경쇄의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열이 제시되어 있다.
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[표 2]
인간화 mAb BAP049-hum01 내지 BAP049-hum16 및 BAP049-클론-A 내지 BAP049-클론-E에 대한 중쇄 및 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열
Figure pct00067
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Figure pct00069
[표 3]
인간 IgG 중쇄 및 인간 카파 경쇄의 불변 영역 아미노산 서열
Figure pct00070
Figure pct00071
[표 4]
인간화 mAb BAP049-클론-A 내지 BAP049-클론-E에 대한 중쇄 및 경쇄 리더 서열의 아미노산 서열
Figure pct00072
실시예
하기의 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위해 제시된 것으로서, 본 발명의 범위를 어떠한 방식으로든 제한하려고 의도한 것이 아니며, 그렇게 해석되어서는 안 된다.
실시예 1: 항-PD-1 항체 분자의 균일 투여 스케줄
약동학(PK) 모델링에 기초하여, 적절한 Cmin 농도로 환자에 대한 노출을 제공하기 위해 균일 용량을 이용하는 것이 예상된다. 환자의 99.5% 초과는 EC50 초과일 것이고, 환자의 93% 초과는 EC90 초과일 것이다. 3주마다 1회(Q3W) 300 mg 또는 4주마다 1회(Q4W) 400 mg을 이용하는 예시적인 항-PD-1 항체 분자에 대한 예측된 안정 상태 평균 Cmin은 평균 20 ug/mL를 초과(최고 체중, 150 kg)할 것으로 예상된다.
[표 5]
균일 투여 스케줄에 기초한 예시적인 PK 파라미터
Figure pct00073
어느 하나의 용량/요법(300 mg q3w 또는 400 mg q4w)에 대해 관찰되는 예시적인 항-PD-1 항체 분자에 대한 예상된 평균 안정 상태 Cmin 농도는 EC50(0.42 ug/mL)보다는 적어도 77배 더 높고 EC90보다는 약 8.6배 더 높을 것이다. 생체외 효능은 SEB 생체외 검정에서의 IL-2 변화에 기초한다.
환자의 10% 미만이 300 mg Q3W 또는 400 mg Q4W에 대하여 3.6 ug/mL 미만의 Cmin 농도를 달성할 것으로 예상된다. 환자의 0.5% 미만이 300 mg Q3W 또는 400 mg Q4W에 대하여 0.4 ug/mL 미만의 Cmin 농도를 달성할 것으로 예상된다.
동일한 용량의 예시적인 항-PD-1 항체 분자를 제공받고 있는 환자에 대한 상이한 체중에 걸쳐 예측된 C최저(Cmin) 농도가 도 12에 제시되어 있다. 체중 기반 투여가 고정 용량과 비교되어 있다(3.75 mg/kg Q3W vs. 300 mg Q3W 및 5 mg/kg Q4W vs. 400 mg Q4W). 도 12는 예시적인 항-PD-1 항체 분자의 균일 투여를 뒷받침한다.
PK 모델이 추가로 검증된다. 도 13에 나타낸 바와 같이, 관찰된 농도 vs. 모델 예측된 농도는 단일선 상에 놓여 있다. 도 14는 모델이 축적, 시간 경과, 및 대상체 내 가변성을 포착한 것을 보여준다.
실시예 2: HDM201의 용량 및 투여 요법
이 실시예는 제1상 임상시험 CHDM201X2101에서 고형 종양 환자에 대하여 단일 작용제 HDM201을 사용한 본 발명의 용량 및 요법을 뒷받침하는 임상 안전성 및 약동학(PK) 데이터의 개요를 제공한다.
본원에서, 표준 요법을 진행 중이거나 표준 요법이 존재하지 않는 TP53 야생형(WT)의 진행된 고형 종양 환자에서의 HDM201의 이러한 다기관, 공개 표지, 최초의 인간 대상의 제1상 연구(NCT02143635)로부터의 데이터가 개시된다.
바람직한 것은 4w 주기의 d1 및 d8에서 주어진 120 mg HDM201인 것으로 밝혀졌다(요법 1B). 데이터는 데이터 마감일이 2016년 9월 19일인 단일 제제요법 임상시험으로부터 얻은 것이다.
연구의 제I상 파트의 일차 목적은 HDM201의 최대 내약 용량(Maximum Tolerated Dose, MTD)을 결정하고/하거나 바람직한 용량을 결정하는 것이다. 연구 설계를 통해 고형 악성 종양에 걸쳐 HDM201에 대한 두 가지 광범위한 투여 전략의 안전성, 내약성 및 임상적 활성을 병행 탐색할 수 있었다: 간헐적 고용량 요법(요법 1A 및 1B)과 연장된 저용량 요법(요법 2A 및 2C). 표 Ex2.1에서는 고형 종양 환자에서 평가된 각각의 카테고리에서의 투약 요법을 요약한다. 표 Ex2.2는 이 연구에 참여한 환자의 기준선 특성을 제공한다.
일차 목적의 종점은 치료의 최초 주기 동안 용량 제한 독성(Dose Limiting Toxicities, DLT)의 발생이다. 비록 일차 분석에서는 DLT 비율을 근거로 MTD를 추정하지만, 최종적인 바람직한 용량 결정은 이후 주기의 내약성, PK, PD 및 항-종양 활성을 포함하여, 주기 1 DLT 비율을 넘어서 추가의 데이터를 이용한다.
[표 Ex2.1]
HDM201 투약 요법 및 고형 종양군에서 평가된 용량 수준
Figure pct00074
환자 모집단
이 연구에 참여한 환자는 다음 기준을 특징으로 한다:
표준 요법에도 불구하고 진행되었거나 효과적인 표준 요법이 존재하지 않는 국소적으로 진행되거나 전이성 고형 악성 종양이 있는 18세 이상의 환자
스크리닝 36개월 이하 전에 수집된 종양 생검으로부터 얻은, 문서화된 TP53 WT 상태(최소한 엑손 5 내지 8에서 돌연변이 없음)의 종양
고형 종양에서의 반응 평가 기준(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors, RECIST) v1.1에 따라 측정 가능하거나 측정 가능하지 않은(그러나 평가 가능한) 질환
동부 종양학 협력 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG) 수행도 ≤2
p53-HDM2 상호작용을 억제하는 화합물, 예를 들어 RG7388 또는 NVP-CGM097로 이전에 치료받지 않음
연구 치료 전 2주 이내에 골수계통을 표적으로 하는 성장 인자, 예를 들어, G-CSF로 치료받지 않음
절대 호중구 수>1,500/μL, 혈소판 수>100,000/μL, 헤모글로빈>9.0 g/dL
표 Ex2.2는 이 연구에 참여한 환자의 기준선 특성을 제공한다.
[표 Ex2.2]
기준선 특성(FAS)
Figure pct00075
통계적 분석
용량-단계적 확대 결정은 과다복용 제어 단계적 확대 원칙(escalation with overdose control principle, EWOC)으로 베이지안 로지스틱 회귀 모델(Bayesian logistic regression model, BLRM)을 지침으로 하였다.
결정은 용량-제한 독성, 최초 치료 주기 동안 모든 유해 사건에 대한 통상적 용어 기준(Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE) 등급 2 이상의 독성 데이터, 및 평가 가능한 환자로부터의 약동학 및 약력학 데이터를 포함하여, 이 연구에서 평가된 요법 및 모든 용량 수준으로부터 이용 가능한 데이터의 합성을 기반으로 하였다.
주기 2의 혈액학적 독성 또한 용량의 단계적 확대 및 요법 선택에 고려되었다.
용량/요법 근거
단일 작용제 HDM201로 고형 종양에서 평가된 4가지 투약 요법 중에서, 간헐적 고용량 요법 1B(4 w 주기의 d1 및 d8)가 가장 유리한 치료 지수를 갖는 것으로 밝혀졌다. 등급 3/4의 혈소판감소증이 모든 시험 용량에 걸쳐 이 요법에서 최저였고, 120 mg의 선택된 RDE로 치료받은 환자에서 일어나지 않았다(표 Ex2.3-1 참조). 가장 빈번한 비혈액학적 독성은 위장관이었으나, 4개 요법 전체에 걸쳐 평가된 용량 수준 어느 것에서도 용량 제한은 아니었다. 약동학 데이터에서는 전임상 데이터의 PK/PD 모델링에 근거하여 치료적으로 관련된 노출이 요법 1B에 대해서는 120 mg 용량 수준에서 달성되었음을 보여주었고, 이 용량으로 치료받은 환자에서 임상적 효능의 관찰에 의해 추가로 뒷받침되었다(장기간 지속되는 PR 환자 1인, 미확인 PR 환자 1인 및 SD 환자 1인). 120 mg 용량은 또한 용량의 단계적 확대를 뒷받침하는 베이지안 로지스틱 회귀 모델(BLRM)에 의해 권고된 유리한 용량의 범위 내였다. 따라서, 120 mg의 용량에서 요법 1B가 가장 바람직한 용량 및 요법으로 판단되었다.
상세한 임상 개요
데이터 마감 시(2016년 9월 19일), 고형 종양 환자 85인이 평가된 4개 투약 요법 전체에 걸쳐 HDM201로 치료받았다(표 Ex2.1 참조). 평가된 모든 요법 전체에 걸쳐 용량 제한 독성은 일차적으로 골수억제와 관련되었다.
모든 용량-제한 혈구감소증 중에서, 등급 3/4의 호중구감소증 및 혈소판감소증은 요법 전체에 걸쳐 가장 흔하게 관찰되었다(표 Ex2.3). 따라서, 4개 요법 전체에 걸쳐 등급 3/4의 혈구감소증(가장 중요하게는 혈소판감소증)의 상대적인 발생은 확장을 위한 용량 및 요법의 선택에 영향을 미치는 핵심 인자였다.
연구하는 동안, HDM201-유도 골수억제는 시작을 지연시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다(주기 1 넘어서). 따라서, 주기 2에서 일어나는 용량 제한 혈액학적 독성 또한 비결합 감도 모델을 사용하여, 연구 과정 중에 용량의 단계적 확대 결정에 요인으로 포함되었다. 표 Ex2.4는 고형 종양에서 평가된 모든 요법 전체에 걸쳐 주기 1 동안 용량 제한 독성 및 주기 2에서 용량 제한 혈액학적 독성의 수를 요약한 것이다.
간헐적 고용량 요법 1A 및 연장된 저용량 요법 2A는 용량의 단계적 확대에서 첫 번째로 평가되었다. 두 요법 다 예상되는 치료적으로 관련된 노출을 달성하는 용량 수준에서 지연된 혈액학적 독성 및 DLT의 불리한 비율을 가졌다. 따라서, 2개의 추가 요법을 탐색하는 코호트를 시작하였다: 간헐적 고용량 요법 1B와 연장된 저용량 요법 2C. 요법 2C에서, DLT는 노출이 PK/PD 모델링을 근거로 효과적일 것으로 예상되는 것들 아래에 있는 용량 수준에서 관찰되었다.
20인의 환자가 요법 1B에 따라 3개의 상이한 용량 수준(120 mg, 150 mg 및 200 mg)에서 치료받았다. 요법 1B에서 연구 치료에 기인한다고 의심되는 것으로 보고된 가장 빈번한 AE(모든 등급)는 오심(12인의 환자, 60.0%), 혈소판감소증/혈소판수 저하(9인의 환자, 45.0%), 호중구감소증/호중구수 저하(8인의 환자, 40.0%) 및 구토(5인의 환자, 25.0%)였다. 이 군에서 9인의 환자(45.0%)는 치료 관련된 것으로 의심되는 적어도 하나의 CTCAE 등급 3/4의 AE를 경험하였다. 연구 치료에 기인한다고 의심되는 가장 빈번한 3가지의 CTCAE 등급 3/4의 AE는 호중구감소증/호중구수 저하(6인의 환자, 30.0%), 리파아제 증가(3인의 환자, 15%) 및 혈소판감소증/혈소판수 저하(2인의 환자, 10.0%)였다. DLT 기준에 부합하는 지속되는 호중구감소증(제22일에 시작되고 18일간 지속됨)의 한 사건이 150 mg의 용량으로 치료받는 한 환자에서 관찰되었다. 더 구체적인 것은 표 Ex2.5 참조. 평가된 4개 요법 중에서, 요법 1B가 등급 3/4의 혈소판감소증의 가장 낮은 전체 발생을 가졌다(표 Ex2.3).
120 mg의 바람직한 용량에서는(요법 1B), 등급 3/4의 혈소판감소증 AE의 사례가 없었다(표 Ex2.3-1 참조). 이 용량 수준에서 혈소판감소증으로 인한 용량 중단 또는 단절이 없었고 혈소판 수혈이 필요한 환자도 없었다. 등급 3/4의 호중구감소증의 발생은 모든 요법 전체에 걸쳐 유사하였고, 120 mg 용량 수준에서 9인의 환자 중 2인에서 관찰되었다. 이 용량 수준에서 비혈액학적 용량 제한 독성 또는 등급 3/4의 AE는 없었다.
중요하게도, 의미 있는 임상적 활성이 120 mg의 바람직한 용량에서 관찰되었다(요법 1B). 이 용량으로 치료받은 9인의 환자 중, 1 PR(18주 지속되고 마감일에 여전히 진행 중)이 연조직 육종 환자에, 1의 미확인 PR 및 1 SD(8주 지속)가 둘 다 지방육종 환자에 존재하여, 치료적으로 관련된 노출이 이 용량 및 스케줄에서 달성됨을 나타낸다.
[표 Ex2.3]
연구 약물 관련된 것으로 의심되는 모든 혈구감소증 유해 사건 - 고형 종양
Figure pct00076
[표 Ex2.4]
고형 종양에서 치료 주기 1 DLT 및 주기 2 혈액학적 용량 제한 독성
Figure pct00077
[표 Ex2.5]
연구 약물 관련된 것으로 의심되는 모든 등급 및 등급 3/4의 유해 사건, 선호 용어 및 치료에 의함 - 고형 종양 - 요법 1B
Figure pct00078
Figure pct00079
안전성
전형적으로 주기 2 중에 발생하는 용량 제한 독성은 호중구감소증 및 혈소판감소증이었다.
연구 약물-관련된 모든 등급의 유해 사건(adverse event, AE; 모든 환자의 10% 이상에서 발생)은 표 Ex2.6에 제시된다.
[표 Ex2.6]
연구-약물 관련된 것으로 의심되는 유해 사건, 병용 치료 요법에 의함(모든 등급, 10% 이상에서 발생)
Figure pct00080
가장 빈번한 비혈액학적 독성은 위장관이었으나, 4개 요법 전체에 걸쳐 평가된 어느 용량 수준에서도 용량-제한은 아니었고; 가장 통상적인 모든 등급의 위장관 AE는 오심(44/85; 52%)이었는데, 대부분 중증도가 경도 내지 중등도였다.
특히 흥미 있는 연구-약물 관련된 등급 3/4의 AE는 표 Ex2.3에 나타낸다. 연구-약물 관련된 것으로 의심되는 등급 3/4의 혈액학적 독성은 모든 치료 요법에서 관찰되었고, 환자의 대략 35%까지 발생하였다. 등급 3/4의 혈소판감소증은 요법 1B에서 가장 낮았다.
임상적 PK
용량의 단계적 확대 과정 전반에 걸쳐 약동학 데이터를 평가하였다. 2종의 HDM201 약물 이형을 연구 과정 동안 평가하였다(더 구체적인 것은 프로토콜 참조). 비구획적 PK 분석에서는 용량 범위(2 내지 350 mg) 전체에 걸쳐 2.0 내지 5.8 시간 범위에서 최대 혈장 농도에 도달하는 시간의 중앙값을 보여주었다. 예비 용량 비례 평가에서는 연구된 용량 범위에 걸쳐 대략적으로 용량 비례의 PK(AUClast 및 Cmax)를 보여주었다. 다수의 용량 코호트에서, AUClast 및 Cmax에 대한 환자간 변동성(CV% 기하 평균)은 낮음 내지 중등도였다(6 내지 58.5%). 추가로, 모든 이용 가능한 HDM201 농도의 통합 분석은 모집단 접근법을 사용하여 수행되었다. HDM201의 PK는 선형 청소율 및 지연된 영차 및 일차 흡수 과정을 갖는 1-구획 PK 모델에 의해 최적으로 기술되었다. 체중은 겉보기 중심 분포 용적(apparent central volume of distribution, Vc/F)에서 통계적으로 유의미한 공변량으로서 확인되었는데, 여기에서 Vc/F는 체중 증가와 함께 증가하였다.
HDM201에 대한 바람직한 용량을 추가로 뒷받침하기 위해, 구획적 PK 모델링을 사용하여 요법 1B에서 120 mg으로 치료받는 9인의 환자에 대하여 주기당 개체 평균 농도를 추정하였다(도 15). 다수의 환자(9인 중 7인)에서, 주기당 추정 평균 약물 농도는 전임상 데이터(인간 SJSA-1 이종이식 래트 모델)의 PKPD 모델링으로부터 결정된 주기당 대략 41 ng/mL의 가장 보존적인 평균 종양 정체 농도와 가깝거나 그 위였다.
치료 요법 1A(12.5 내지 350 mg)에서 단일 용량(제1일) 이후 NVP-HDM201에 대한 대표적인 기하 평균 혈장 농도-시간 프로파일은 도 16에 제시된다.
경구 흡수는 신속하였고(중앙값 Tmax 2 내지 5.8시간) 용량군(2 내지 350 mg)에 따라 다르지 않았다.
평균 혈장 노출(AUClast 및 Cmax)은 용량 증가와 함께 증가하였고, 단일 및 반복 용량 이후 용량 비례로부터 주요 편차는 없었다.
NVP-HDM201 정상-상태는 일반적으로 제8일까지 도달하였고 매일 투약으로 제한된 누적이 있었다.
제1일 단일 용량(50 내지 350 mg) 이후 추정된 중앙값 반감기는 13.7 내지 23.1시간 범위였다.
노출에서의 환자간 변동성(CV% 기하 평균)은 일반적으로 낮음 내지 중등도였다. NVP-HDM201의 구획적 모집단 PK 모델링을 사용하여 주기 1에서 개체 평균 혈장 농도를 추정하고 PK/PD 종양 성장 모델링에 의해 유도되는 종양 정체에 대한 전임상 평균 농도와 비교하였다. 결과를 도 17에 나타낸다.
요법 2A/2C와 비교하여, 요법 1A/1B로 도달한 평균 혈장 농도는, 95% 종양 퇴행에 요구되는 예측한 전임상 표적 효과 수준(125 ng/mL)에 더 근접하였고(도 18에서 위의 파선) 인간 SJSA-1 이종이식 래트 모델의 PKPD 모델링으로부터 결정된 대략 41 ng/mL(파선)의 가장 보존적인 평균 종양 정체 농도에 대한 추정 평균 농도와 가깝거나 그 위였다(도 17).
대략 19 ng/mL 농도에서의 파선은 지방육종(HSAX2655) 환자-유래 이종이식 래트 모델로부터의 전임상 데이터의 PK/PD 모델링으로부터 결정된 평균 종양 정체를 나타낸다.
농도 29.4 ng/mL에서의 파선은 SJSA-1 세포주에서 세포 활성으로부터 결정된 IC50 값을 나타낸다.
통계적 분석
이 연구는 용량의 단계적 확대를 뒷받침하고 MTD를 추정하고/하거나 HDM201에 대한 바람직한 용량을 결정하기 위해 베이지안 로지스틱 회귀 모델(BLRM)을 이용한다. 과다복용 제어의 단계적 확대(EWOC)를 사용한 BLRM은 이용 가능한 이전 정보의 포함을 가능하게 하고 임상 연구에서 보여준 관찰된 용량 제한 독성(DLT)에 대한 새로운 정보를 기반으로 하는 모델 파라미터를 갱신한다. 요법 1A 및 1B에서 용량의 단계적 확대 과정 동안, DLT 발생은 모델을 갱신하고 다음 용량에 대한 결정을 뒷받침하기 위해 사용되었다. 연구 과정 동안 HDM201이 대부분 주기 2 동안 발생한 골수 독성을 유발한 것이 명백하게 되었을 때, 주기 1 DLT 및 주기 2에서 혈액학적 용량 제한 AE(모든 혈구감소증에 동등하게 가중치를 부과함)를 포함하는 비결합 감도 모델을 사용하여 용량의 단계적 확대/RDE 결정의 지침으로 하였다. 추가적으로, 결정은 항상 평가 가능한 환자로부터의 낮은 등급의 독성, PK, 및 PD 데이터(이용 가능할 때)를 포함하여, 연구에서 평가된 모든 용량 수준으로부터 이용 가능한 관련 데이터의 합성을 근거로 하였다.
요법 1B(용량 수준 120 mg, 150 mg 및 200 mg)에서 치료받은 환자로부터의 주기 1 DLT 사건 데이터를 사용한 BLRM의 결과는 400 mg의 HDM201까지의 단계적 확대를 뒷받침하였다. 120 mg에서 중앙값 DLT 비율은 프로토콜 분석 및 감도 분석에 따라 각각 3.5% 및 25.7%였다. 따라서, 120 mg은 임상적으로 관련된 등급 3/4의 혈소판감소증의 더 낮은 발생, 관리 가능한 호중구감소증, 및 이 용량에서 관찰된 의미 있는 임상적 활성을 고려하여 바람직한 용량인 것으로 밝혀졌다.
효능
데이터 마감 시, 고용량의 간헐적 요법을 받은 환자 2/46인(4%)이 PR에 도달하였다(요법 1A를 받은 STS-혈관내막 육종 환자 1인; 요법 1B를 받은 STS-혈관주위세포종 환자 1인)(표 Ex2.7). 고용량의 간헐적 요법을 받은 환자 15/46인(33%) 및 저용량의 연장된 요법을 받은 환자 14/39인(36%)이 SD를 달성하였다(표 Ex2.7).
의미 있는 질환 조절이 모든 투약 요법에서 관찰된 한편(DCR: 34%), PR은 요법 1A 및 1B에서만 보여, 고용량의 간헐적 요법이 더 효과적임을 시사하였다.
2017년 9월까지, 강력한 항종양 효능이 육종 환자(지방육종 및 기타 육종)에서 관찰되었다. 요법 1B에 따라 HDM201로 치료받은 21인의 육종 환자 중에서 5인의 환자가 부분 관해(partial response, PR)를 보였고, 11인이 안정 질환(stable disease, SD)을 보였다. 질환은 5인의 환자에서만 진행되었다(PD)(도 20 참조).
[표 Ex2.7]
최상의 전체 반응(FAS)(2016년 11월)
Figure pct00081
치료의 32주의 종점에서 적어도 안정 질환을 갖거나 더 나은 환자에서 중앙값의 상대적 용량 강도(relative dose intensity, RDI)는 저용량의 연장된 요법 2A 및 2C에서 유사하였다. 고용량의 간헐적 요법 둘 중에서, 요법 1B는 더 유리한 RDI를 가졌으며, 이는 치료적으로 관련된 용량에서 이의 전체적으로 더 양호한 내약성을 뒷받침한다(표 Ex2.8).
[표 Ex2.8]
32주 치료의 종점에서 적어도 안정 질환을 갖는 환자에 대한 상대적 용량 강도 요약(SAS)
Figure pct00082
혈소판감소증의 PK/PD 모델
시간 경과에 따른 개개의 PK 및 혈소판수 데이터를 근거로 하여 PK/PD 모델을 설정하였다.
PK 모델: 이상성 흡수를 갖는 1 구획.
PD 모델: 증식 세포 및 조절에 대한 HDM201의 효과 및 PLT 수혈을 포함하는, 혈소판감소증에 대한 조정된 프라이버그(Friberg) 모델.
데이터베이스:
n= 73의 대상
1301 PK 관찰
1023 PD 혈소판 관찰
427 PD GDF15 관찰
도 18에 나타낸 혈소판 동역학 프로파일은 각각의 요법에서 시험한 다음의 용량을 기반으로 모델링한 것이다(도 18에서 위로부터 아래의 순서):
Reg2C(제1일~제7일 Q4wk): 25 mg((25 mg x 7 투여일)/28일 주기 = 6.25 mg/일)
Reg2A(제1일~제14일 Q4wk): 20 mg((20 mg x 14 투여일)/28일 주기 = 10 mg/일)
Reg1B(제1일, 제8일 Q4wk): 150 mg((150 mg x 2 투여일)/28일 주기 = 10.7 mg/일)
Reg1A(제1일 Q3wk): 350 mg((350 mg x 1 투여일)/21일 주기 = 16.7 mg/일)
이 모델링에 근거하여, 1B가 단일 작용제 활성을 보여준 요법 중 최상의 전체 혈소판 동역학 프로파일을 갖는다.
임상 연구에서 요법 1B 150 mg에서의 G4 혈소판감소증의 최초 발생은 100일 이후에만 일어났다.
1B에 엘트롬보팍을 추가하면 다음 주기에서 혈소판 회복의 저하된 피크 및 상대적 지연을 완화시킬 수 있을 것이다.
실시예 3: HDM2 억제제 HDM201과 PD-1 억제제의 병용에 대한 전임상 연구
이 실시예에서, Colon 26 결장직장 선암종(CRC) 동계 마우스 모델에서 면역 조절에 대한 MDM2 억제제 NVP-HDM201(HDM201)의 영향이 증명된다. 다색 FACS 분석을 사용하여, HDM201이 초기 시점(처리 후 제5일)에 종양에서 CD103+CD11+ 수지상 세포(DC)의 수를 증가시켜 항원 교차 제시를 위한 DC의 활성화를 반영하는 것으로 관찰되었다. HDM201은 또한 종양 및 종양 배출 림프절에서 Tbet+EOMES-CD8+ T 세포의 백분율을 증가시켜, T 세포가 DC에 의해 프라이밍되었음을 시사하였다. 이후 시점(처리 후 제12일)에서, 종양에서 증가된 CD8/Treg 비율이 관찰되어, 효과적인 면역 반응의 유도를 나타내었다. 또한, HDM201은 CD45- 세포에서 프로그래밍된 사멸 리간드 1(PD-L1)과 CD45+ T 세포에서 프로그래밍된 사멸-1(PD1)과 같은 면역억제 단백질의 상향 조절을 유도하였다.
단일 제제요법으로서 또는 항-PD1 항체와 병용된 HDM201의 항-종양 효과를 Colon 26 CRC 동계 마우스 모델에서 평가하였다. 40 mg/kg의 HDM201은 종양 성장을 억제한 반면, 항-PD1 항체와 함께 PD-1 차단을 추가하자 상승적이고 지속적인 종양 퇴행이 초래되었다. 완전 종양 퇴행(CR) 비율은 어느 하나의 단독 처리(CR 없음)와 비교하여 병용군(10 중 5의 CR)에서 유의하게 증가되었다. 병용 아암에서 이 강력한 항-종양 활성은 HDM201에 의한 면역 조절과 일치하여, CR을 달성한 마우스는 또한 4T1 세포가 아닌 Colon 26 세포에 대해 장기적인 특정 기억을 발달시켰다. 종합하면, 이러한 데이터는 MDM2 억제가 종양에서 수지상 세포 기능, T 세포 프라이밍 및 CD8/Treg 비율을 조절하여 종양 성장 억제를 유도하는 것으로 보임을 증명하였고; 항-PD1 항체와의 병용은 면역억제 상태로부터 T 세포를 추가로 해방시키고, 항-종양 반응을 유의하게 개선하였다. 이러한 데이터는 클리닉에서 이 병용물을 탐구하는 것을 지지한다.
HDM201의 면역조절 효과를 조사하기 위하여, Colon 26 뮤린 CRC 모델이 사용되었는데, 이는 야생형 p53 상태를 기반으로 선택되었다. 본 발명자들의 가설은 MDM2/p53 상호작용의 억제가 종양 세포에서 PDL1을 상향 조절하고 림프구에서 PD1을 상향 조절하는 반면, PD1/PDL1 상호작용의 차단은 HDM201의 항-종양 효과를 강화할 것이라는 것이다.
재료 및 방법
재료
동물 및 유지 조건
모든 실험의 경우, 동물을 12시간(h) 명암 순환 시설에 수용하고, 먹이와 물을 자유롭게 이용할 수 있게 하였다. 동물 특성을 표 Ex3.1에 요약하였다.
[표 Ex3.1]
동물 특성
Figure pct00083
동물 복지에 관한 진술
동물을 실험 전 적어도 3일 동안 Novartis NIBR 동물 시설에서 적응되게 하였다. 동물을 Novartis IACUC 규정 및 지침에 따라 다루었다.
세포 및 세포 배양 조건
동계 종양 모델은 종양이 유래한 마우스의 동일한 계통의 동물에 이식된 마우스 유래 종양 세포주이다. 이것은 이러한 연구에 사용된 면역 세포를 표적으로 하는 항체 시험의 중심인 면역적격 동물의 사용을 가능하게 한다. Colon 26은 N-니트로소-N-메틸우레탄에 의해 유도된 Balb/c 마우스 결장 암종 세포주이다(Griswold DP and Corbett TH; A colon tumor model for anticancer agent evaluation Cancer 36:2441-2444, 1975). 4T1은 Balb/c 마우스에서 자발적으로 발생하는 유방 종양이다(Aslakson CJ, Miller FR. Selective events in the metastatic process defined by analysis of the sequential dissemination of subpopulations of a mouse mammary tumor. Cancer Res. 52: 1399-1405, 1992).
Colon 26 세포는 Genomics Institute of the Novartis Research Foundation에서 입수하였다. 4T1 세포는 ATCC로부터 구입하였다. 두 세포주의 마스터 스톡은 CLE(Cell Line Encyclopedia)에 의해 생성되었다. Colon 26 및 4T1 세포를 항생제 없이 10%의 열 불활성화 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI 1640에서 배양하였다; 세포는 IMPACT VIII PCR 분석 패널(IDEXX RADIL, IDEXX Laboratories INC, Westbrook, ME)에서 마이코플라스마 및 바이러스 오염이 없었다.
화합물 제형화 및 항체
HDM201-BB(숙신산)을 50 mM의 인산염 완충액(pH 6.8) 중 0.5% w/v의 메틸셀룰로오스(MC) 용액에 4.84 mg/ml(4 mg/ml의 유리 염기)의 최종 농도로 제형화하였다. 염/유리 염기 비율은 1.21이다. 제형을 경구 위관영양법(po)에 의한 매주(qw) 투여와 함께, 주의 첫째 날에 3시간마다 3회(3×q3h) 10 ml/kg으로 투여하였다. 제형은 빛으로부터 보호되었을 때 4℃에서 3주 동안 안정적이었다.
항-PD1 항체(클론 29F.1A12, 뮤린 교차 반응성) 및 이의 동종형 대조군(래트 IgG2a)을 BioLegend(San Diego, CA, USA)에서 구입하였다. 두 항체 모두 PBS(Gibco, Life Technologies)에 0.5 mg/ml의 최종 농도로 제형화하고, 2주 동안 주 2회(2qw) 복강내 주사(ip)로 10 ml/kg의 부피로 투여하였다.
방법
암컷 Balb/c 마우스의 Colon 26 동계 종양 모델.
Colon 26 세포를 80~95%의 컨플루언스에서 수확하고, 세척하고, 2 × 106개 세포/ml의 농도로 차가운 PBS에 재현탁시켰다. 마지막으로, 총 부피 100 μL의 0.2 x 106개 세포를 미감작 Balb/c 마우스의 우측 상단 옆구리에 피하(sc) 이식하였다. 연구 8020 Colon 26-XEF의 경우, 세포 이식 후 제10일에 종양 부피가 27~60 mm3 범위에 도달했을 때 동물을 무작위화하고 연구에 등록하였다. 모든 처리는 3일 후 제13일에 시작되었다. PD 연구의 경우, 평균 종양 부피가 100~120 mm3에 도달했을 때 동물을 무작위화하였다.
동물 모니터링
동물 복지, 거동, 및 일반적인 건강을 매일 모니터링하였다. 빈사 상태의 동물은 안락사시켰다.
연구 설계
처리군에 대한 용량 및 스케줄을 포함한, 연구 7628 Colon 26-XPD, 8063 Colon 26-XPD 및 8020 Colon 26-XEF의 설계는 표 Ex3.2 내지 표 Ex3.4에 요약되어 있다. 투약일(들)에 동물의 체중을 측정하고, 투여 부피를 체중에 대해 10 ml/kg으로 조정하였다. 종양 크기 및 체중을 무작위화 시점에서 그리고 그 후 연구 지속기간 동안 주 2회 기록하였다. 매일 데이터 수집 후 다음의 데이터가 수집되었다: 사망률, 개체 및 군 평균 체중, 및 개체 및 군 평균 종양 부피.
[표 Ex3.2]
연구 7628 Colon 26-XPD의 용량 및 스케줄
Figure pct00084
[표 Ex3.3]
연구 8063 Colon 26-XPD의 용량 및 스케줄
Figure pct00085
[표 Ex3.4]
연구 8020 Colon 26-XEF의 용량 및 스케줄
Figure pct00086
유세포 분석
종양으로부터의 종양 침윤 림프구(TIL)를 두 연구(7849 Colon 26-XPD 및 8063 Colon 26-XPD)에 대해 유세포 분석법으로 분석하였다. 림프절 림프구를 8063 Colon 26-XPD에 대해 분석하였다. 샘플을 T 세포 염색용(표 Ex3.5) 및 골수세포 염색용(표 Ex3.6)의 2개의 별도의 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다.
[표 Ex3.5]
유세포 분석 패널(7628 Colon 26-XPD)
Figure pct00087
[표 Ex3.6]
유세포 분석 패널(8063 Colon 26-XPD)
Figure pct00088
조직 처리
연구 7628 Colon26-XPD의 경우, 처리 개시 후 제5일 및 제12일에 마우스로부터 종양 및 비장을 수집하였다. RDS-2016-00163에 따라 단일 세포 현탁액을 생성하였다. 간략하게는, 조직을 가위로 잘게 썬 다음, GentleMAX(Miltenyi)를 사용하여 Liberase TM 연구 등급의 콜라게나제(Roche) 및 DNase l 재조합효소(Roche)를 사용하여 RPMI 1640(Gibco, Life Technologies)을 함유하는 해리 완충액에서 기계적 균질화를 수행하였다. 수조에서 37℃에서 15분 배양한 후, 균질물을 10%의 FBS로 ??치시키고 70 μM 세포 여과기(Falcon)에서 여과시켰다. 이 과정의 종료 시, 세포의 단일 세포 현탁액이 얻어졌고, 항체의 T 세포 또는 골수세포 패널로 염색시키기 위해 2백만 개의 세포를 96-웰 플레이트에 플레이팅하였다.
연구 8063 Colon 26-XPD의 경우, 종양 및 림프절을 수집한 다음 RDS-2017-00141에 따라 기계적으로 및 효소적으로 단일 세포 현탁액으로 처리하였다. 소화 과정은 각 주기에서 DNase I(Roche), 콜라게나제 P(Roche) 및 디스파제(Gibco)를 함유하는 새로운 소화 완충액을 사용한 4~5의 연속 소화 주기를 수반한다. 이 과정의 종료 시, 세포 현탁액을 70 μM의 세포 여과기에서 여과시켜 단일 세포 현탁액을 얻었다. T 세포 패널 또는 골수세포 패널 항체의 염색을 위해 2백만 개의 세포를 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다.
FACS 염색 및 데이터 수집
일단 세포를 플레이팅한 후, 샘플을 표 Ex3.5 및 표 Ex3.6에 제시된 바와 같이 생/사 염색으로 염색하였다. 그 후, 샘플을 얼음 위에서 30분 동안 마우스 Fc 블록(Miltenyi Biotec)의 1:50의 희석물로 차단하였다. 샘플을 1500 rpm에서 5분 동안 회전시킨 다음, 60분 동안 표 Ex3.5 및 표 Ex3.6에 제시된 바와 같이 형광 색소 접합 표면 항체 혼합물로 염색하였다. 차단 및 염색 과정 중, 세포를 4℃에서 유지시키고, 빛으로부터 보호하였다.
T 세포의 세포내 염색을 위해, 표면 염색 후, 플레이트를 다시 1500 rpm에서 5분 동안 회전시킨 다음, 세포를 고정/펌 키트(eBioscience)를 사용하여 밤새 고정시키고 투과화시켰다. 세포를 투과화 완충액으로 세척한 후, 암소에서 4℃에서 1시간 동안 세포내 항체로 염색하였다. 플레이트를 투과화 완충액으로 2회 세척하고, 200 μl의 PBS에 현탁시켰다. 데이터 수집은 LSRFortessa™(BD Biosciences)를 사용하여 수행하였다.
데이터 분석
체중
체중의 변화 백분율을 (BW현재 - BW제0일)/(BW제0일) x 100%로서 계산하였다. 데이터는 평균 D0 ± SEM으로 간주되는 최초 체중 측정으로부터의 평균 체중 변화 백분율로 표시하였다. 체중을 언급할 때 D0은 종양 세포 이식 후 7 내지 10일 후 또는 처리 시작 1 내지 3일 전에 취한 측정치와 관련이 있다.
종양 부피
처리/대조 백분율(%T/C) 및 퇴행 백분율(%Reg) 값을 각각 다음 식을 이용하여 계산하였다:
ΔT >0인 경우, % T/C = 100 x ΔT/ΔC
ΔT <0인 경우, % Reg = 100 x ΔT/T최초
식에서,
T = 주어진 연구일의 약물 처리군의 평균 종양 부피;
ΔT = 주어진 연구일의 약물 처리군의 평균 종양 부피 - 최초 투여일의 약물 처리군의 평균 종양 부피;
T최초 = 최초 투여일의 약물 처리군의 평균 종양 부피;
C = 연구 중인 모든 비히클 처리 마우스의 마지막 날의 대조군의 평균 종양 부피;
ΔC = 연구 중인 모든 비히클 처리 마우스의 마지막 날의 대조군의 평균 종양 부피 - 최초 투여일의 대조군의 평균 종양 부피.
종점까지의 시간
카플란 마이어 생존 분석을 수행하여 종점까지의 시간(time to endpoint, TTE)의 차이를 비교하였다. 종양 부피가 1000 mm3를 초과하고 사망("1")으로 점수가 매겨지면 마우스를 종양 종점을 달성하는 것으로 점수를 매겼다. 로그 순위(만텔-콕스) 생존 분석을 수행하였다(SigmaPlot13.0). 종점까지의 시간 중앙값의 그래프 분석을 Prism(GraphPad v7)에서 수행하였다.
유동 데이터 분석
Treestar의 FLOWJO v10.0.7 소프트웨어를 사용하여 각 실행 후 분석을 수행하였다. 각 분석에 대해, 형태학적 파라미터의 조합(모든 세포: SSC-A vs FSC-A, 단일 세포: SSC-H vs SSC-W; FSC-H vs FSC-W)을 이용하여 관심 모집단을 게이팅하여 살아 있는 백혈구를 확인하고, eFluor780(BD Biosciences) 또는 황색 염료(Invitrogen)를 이용하여 죽은 세포를 제외시켰다. CD45+CD4+ 및 CD45+CD8+ 표지화를 이용하여 T 세포를 게이팅한 다음, CD4+Foxp3-(T 고식적(conventional)), 및 CD4+ FoxP3+(Treg) 아형을 게이팅하였다. Tbet+EOMES- 세포는 새롭게 프라이밍된 T 세포에 대해 게이팅하였다. 골수세포는 Broz와 Krummel이 발표한 전략에 따라 게이팅하였다(Broz ML, Krummel MF. The emerging understanding of myeloid cells as partners and targets in tumor rejection Cancer Immunol Res. 2015 Apr;3(4):313-9). 수지상 세포(DC)는 CD11b+CD11C+CD103+DC에 대해 게이팅하였다. CD45- 특이적 표지를 사용하여 종양 세포, 내피 세포 및 섬유모세포를 포함한 비림프구를 확인하였다.
통계적 분석
유동 데이터의 경우, 독립표본 t 검정 및 일원배치 분산분석을 SigmaPlot 13.0에서 수행하였다. 델타 종양 부피 및 체중 차이 백분율을 통계적 분석에 사용하였다. 군간 비교는 분산분석 또는 크루스칼 왈리스 분산분석에 이어 사후 터키 검정을 이용하여 수행하였다. 종점까지의 시간 분석을 위해, 로그 순위(만텔-콕스) 생존 분석을 수행하였다(SigmaPlot 13.0). 종점까지의 시간 중앙값의 그래프 분석을 Prism(GraphPad v7)에서 수행하였다. 모든 통계적 평가에서, 유의 수준은 p < 0.05로 설정되었다. 달리 언급되지 않는 한, 비히클 대조군과 비교한 유의도가 보고된다.
결과
약력학: 면역 프로파일링(7628 Colon 26-XPD 및 8063 Colon 26-XPD)
TIL의 면역 프로파일링을 표 Ex3.5 및 표 Ex3.6에 도시된 패널에 따라 유세포 분석에 의해 수행하였다. 최초 투여 후 제5일과 제12일에 동물을 안락사시켰다. TIL 특성화를 위해 종양, 종양 배출 림프절 및 비장을 수확하였다. 종양 및 림프절의 골수 및 T 세포 구획을 나열하고 그 결과를 도 21 및 도 22에 제시하였다. 비장세포는 주로 염색 대조군에 사용하였다(데이터 미도시).
최초 면역 프로파일링은 HDM201이 CD11C+CD45+ 세포(%)와 CD8 T 세포를 증가시킴을 밝혀냈다(도 3-1). HDM201에 의해 조절되는 특정 세포 유형을 추가로 분석하기 위해, 포괄적인 FACS 분석을 수행하였다. HDM201이 항원 교차 제시가 가능한 CD103+CD11+DC(%)를 증가시켰고; 새롭게 프라이밍된 Tbet+EOMES-CD8+/CD45+ T 세포(%)와 CD8/Treg 비율을 증가시켰음을 발견하였다(도 22). 또한, HDM201은 CD45- 집단(종양 세포, 간질 세포 또는 내피 세포)에서 PDL1의 평균 형광 강도(MFI)로 나타낸 CD45- 세포의 PDL1 발현을 유도하였다. HDM201은 또한 PD1+CD45+ 세포(%)를 증가시켰다(도 21). 이러한 결과는 HDM201이 종양에 대해 활성 면역 반응을 유도했음을 나타낸다. 한편, HDM201은 종양 세포뿐만 아니라 면역 세포에서 면역억제 단백질의 상향 조절을 촉발하였다.
항-종양 활성: Colon 26 동계 이종이식 종양 모델(8020 Colon 26-XEF)에서 aPD-1 항체와 HDM201의 병용
PD-1/PD-L1 축을 표적으로 하는 aPD1 항체와 HDM201의 항-종양 활성을 Colon 26 뮤린 동계 모델(8020 Colon 26-XEF)에서 조사하였다. 세포 이식 후 제9일에 종양 부피에 기초하여 동물을 처리군으로 무작위화하였다. 처리를 제12일에 개시하고, HDM201을 3주 동안 매주 투여하고 항-PD1 항체를 2주 동안 주 2회 투여하는 것으로 계속하였다. 동물은 각각이 종양 부피 > 1000 mm3로 정의된 개별 종점에 도달할 때까지 연구에 남아 있었다. 카플란 마이어 분석(GraphPad v7.0)을 이용하여 종점까지의 시간 중앙값으로서 종양 성장 지연을 평가하였다.
내약성
동물 체중을 모니터링하고 처리 전(종양 이식 후 제9일) 체중에 대한 백분율 변화로 보고하였다. 모든 군에서 체중 증가가 관찰되었으므로, 모든 처리는 내약성이 우수하였다(도 23). 종양 이식 후 제23일은 모든 동물이 연구에 남아 있는 마지막 날이었으므로, 이 분석에 사용되었다.
항-종양 활성
카플란 마이어(로그 순위) 분석에 의해 결정된 종점까지의 시간 중앙값(TV≥ 1000 mm3)을 사용하여 처리 매개 종양 성장 지연을 평가하였다. 표 Ex3.7에 제시된 바와 같이, 비히클 대조군과 비교하여 단일 제제요법으로서 HDM201은 종점에 도달하는 시간을 증가시키는 경향이 있는데, 종점까지의 시간 중앙값은 각각 23일에 비해 31.5일이다. 대조적으로, PD1의 차단은 23일의 종점까지의 시간을 초래했는데, 이는 비히클군과 동일하다. aPD1 항체와 HDM201의 병용은 종점까지의 시간을 84일로 유의하게 연장시켰다(p<0.05)(표 Ex3.7, 도 24).
[표 Ex3.7]
카플란 마이어 종점까지의 시간(8020 Colon 26-XEF)
Figure pct00089
각 처리군에 대한 개별 동물의 종양 부피를 도 25에 제시하였다. 비히클 처리군의 모든 동물에서 종양 성장이 관찰되었으며, 모두 제30일까지 종점에 도달하였다. 단일 제제요법으로서 HDM201은 10마리 중 부분 관해를 갖는 동물 1마리를 유도하였다(도 25); 단일 제제요법 항-PD-1 항체(클론# 29F.1A12)는 또한 10마리 중 부분 관해를 나타내는 동물 1마리를 유도하였다(도 25). 대조적으로, 항-PD-1 항체와 HDM201의 병용은 10마리 중 2마리의 동물이 부분 관해를 나타내고, 10마리 중 5마리가 완전 관해를 나타내게 하였다(도 25).
HDM201은 지속적인 종양 특이적 면역 반응을 촉진한다.
HDM201로 관찰된 면역조절 활성 및 관문 차단 항체와 결합되는 능력을 고려하여, 생성된 항-종양 반응의 지속성과 특이성을 조사하였다. 항-종양 반응이 항원 특이적인지를 조사하기 위해, 반응자 마우스의 좌측 옆구리에 Colon 26을 재시험하였다.
완전 관해를 달성한 동물의 반대편 옆구리에 (최초 세포 이식 후 제123일에) 20만 개의 Colon 26 세포를 재시험하였고, 이에 따라 모든 마우스는 Colon 26 세포의 두 번째 주사를 거부한 반면, 미감작 마우스는 종양을 발달시켰다(도 26). 대조적으로, 4T1 세포로 재시험했을 때(제182일), 모든 마우스에서 (미감작 마우스와 유사하게) 종양이 발생하여, 기억이 Colon 26 세포에 특이적임을 증명하였다(도 26).
HDM201 처리가 항-종양 기억 T 세포 반응의 발달을 유도했는지를 추가로 조사하기 위해, 반응자 마우스의 비장세포를 단리하고 CT26 관련 항원 AH1(gp70423-431) 펩티드(Huang et al 1996)로 시험관내에서 자극하고, IFN-γ 생성 세포의 수를 ELISPOT 분석을 통해 계산하였다. 도 27에 제시된 바와 같이, T 세포에 의한 IFN-γ의 항원 특이적 생산이 모든 반응자에서 검출되었다. 이와 일관되게, H2Ld-AH1 덱스트라머에 의해 검출된 항-PD1 항체 유도 반응자와 HDM201의 병용물 또는 HDM201로 처리한 마우스의 비장에서 AH1 특이적 CD8+ T 세포 빈도의 증가를 관찰하였다. (도 28 및 도 29). 전반적으로, 이러한 데이터는 HDM201 처리가 지속적인 종양 특이적 기억 T 세포 반응의 발달을 촉진했음을 증명하였다.
p53 녹아웃 Colon 26 클론의 시험관내 특성화
p53 녹아웃 Colon 26 클론을 1 μM의 HDM201의 존재 하에 성장시키고, 항 p53 항체(Cell Signaling CST#2524)를 사용하여 40 μg의 총 단백질/샘플을 로딩하는 웨스턴 블롯으로 p53 발현을 스크리닝하였다. p53 음성 클론을 확인하고, 4일 동안 HDM201 없이 성장시킨 다음, 1 μM의 HDM201로 24시간 동안 Colon26 모세포와 함께 재처리하여 p53 경로의 반응을 모니터링하였다. p53 및 p21 변화를 웨스턴 블롯으로 모니터링하고 84 유전자 qPCR 어레이를 사용하여 경로 활성을 추가로 확인하였다(RT2 프로파일러 PCR 어레이 p53 경로, Cat No. 330231 PAMM-027ZA Qiagen). RNASeq 분석을 위해 선택된 클론도 제출하였다.
이 p53 KO Colon26 모델을 사용하여, HDM201이 종양 성장을 억제할 수 없음이 밝혀졌다(도 30). PD-1/PD-L1 축이 차단되었을 때 관찰된 추가 이익은 없었다(도 30). HDM201의 유익한 반응이 p53 야생형 종양에서만 관찰되므로, 전반적으로 이 데이터는 HDM201의 항-종양 활성의 특이성을 증명한다.
결론
p53은 세포 주기 정지 또는 세포자멸사 유도를 통해 세포의 게놈 안정성을 보호하는 데 중심적인 역할을 하는 전사 인자이다. 또한, p53은 종양 면역 조절 및 면역 반응의 항상성 조절에 참여하는 것으로 보고되었다. 본원에서, HDM201이 종양의 면역 세포뿐만 아니라 종양 배출 림프절에도 영향을 미친다는 점이 증명되었다. 구체적으로, HDM201은 종양 및 배출 림프절에서 항원 제시 세포(DC)를 증가시켰다. DC가 미감작 T 세포에 대해 종양 항원을 제시하여 종양 및 종양 배출 림프절에서 새로 프라이밍된 T 세포의 수를 증가시켰다고 가정한다. 이들 T 세포는 종양 부위로 이동하여, 종양 항원이 활성화되는 것을 인식하였다. 궁극적으로, 증가된 CD8/Treg 비율이 종양에서 관찰되었다. CD8 T 세포는 종양 세포를 인식하고 종양 세포 사멸을 유도한 활성 이펙터 세포이다. 또한, CD45- 집단에서 PDL1 상향 조절이 관찰되었고 HDM201과 항-PD1 항체의 병용은 단일 제제요법으로서 HDM201 및 aPDL1 항체와 비교하여 항-종양 반응을 유의하게 증진시켰다. 이러한 결과는 MDM2 억제가 p53 야생형 종양 모델에서 PD-1/PD-L1 경로의 차단에 의해 추가로 증진된 적응 면역을 유발함을 증명하여, 야생형 p53을 가진 암 환자에서 MDM2 억제제 및 관문 차단 항체를 병용하는 근거를 제공한다.
실시예 4: HDM2 억제제 HDM201과 PD-1 억제제 PDR001(BAP049-클론 E, 스파탈리주맙)의 병용에 대한 임상 연구
임상 시험
CPDR001X2102, EUDRACT 번호: 2016-000654-35
(특히) HDM201과 병용한 PDR001의 안전성, 내약성 및 약력학(PD)을 특성화하는 제Ib상, 공개 표지, 다기관 연구
이론적 근거
항-종양 면역을 증진시키는 작용제의 최신 개발은 암 치료를 빠르게 변화시키고 있다. 그러나 이러한 치료법은 모든 암 유형에 효과적이지는 않으며, 반응이 지속되지 않는 경우가 많고, 많은 환자가 치료로부터 혜택을 거의 또는 전혀 받지 못한다. PD-1/PD-L1 상호 작용의 억제제들은 내약성이 우수하고 주목할 만한 범위의 암 유형에 걸쳐 활성이며, 반응률 및 치료의 지속성을 증가시키는 병용 요법의 한 구성요소가 될 가능성이 높을 것이다.
이 시험에서 PDR001과 병용되는 작용제는 직접적인 항-종양제로서가 아니라 면역조절제로 사용된다. 판매되는 작용제인 파노비노스타트 및 에베롤리무스는 승인되지 않은 적응증에 사용될 것이며, 에베롤리무스의 경우 승인된 요법보다 현저히 낮은 용량으로 덜 자주 투여될 것이다. 목표는 종양 세포가 생존을 위해 의존하는 중요한 경로의 억제제로서가 아니라, 보다 효과적인 항-종양 면역 반응을 자극하기 위하여 이러한 작용제를 사용하는 것이다. 이러한 이유로, 그리고 항종양 면역 반응을 증진시키는 것이 많은 질환에 걸쳐 유익할 것으로 예상되기 때문에, 이러한 병용은 시판되는 것들과는 상이한 적응증에서 시험될 것이다.
HDM201과 병용하는 PDR001과 관련하여: HDM2와 TP53 사이의 상호작용의 억제제인 HDM201은 또한 전임상 모델에서 면역 활성화 및 PD-1 차단의 효능을 증진시킨다.
이 연구는 추가 시험을 위한 용량 및 스케줄을 확인하고, 이러한 병용물의 안전성, 내약성, 약리학적 및 임상적 활성을 예비적으로 평가할 것이다.
연구를 위해 다음과 같은 암 유형을 선택하였다:
결장직장암(부정합 수복 결핍 아집단 이외): PD-1/PD-L1 요법이 알려지지 않은 이유로 효과가 없는 암. 공개된 데이터는, 종양의 면역 상황이 기존의 화학요법을 이용한 치료에 대한 반응을 예측하고 예견함을 시사하지만, 알려지지 않은 이유로 PD-1 또는 CTLA-4 억제제는 효과적이지 않다(Kroemer G, Galluzzi L, Laurence Zitvogel L, et al. (2015) Colorectal cancer: the first neoplasia found to be under immunosurveillance and the last one to respond to immunotherapy? OncoImmunology 4:7, e1058597-1-3). CRC를 포함시키는 것의 목적은 병용 요법이 보다 효과적인 항-종양 반응을 활성화시킬 수 있는지를 알아보는 것이다.
MSS CRC 환자는 PDR001+HDM01 아암에 대한 자격이 있을 것인데, 이 질환은 상대적으로 낮은 비율의 TP53 돌연변이를 갖기 때문이다.
신장 세포 암종, PDR001+HDM201 아암에만 해당: RCC를 포함시키는 것의 목적은 HDM201과의 병용 요법이 활성을 확대하거나, 반응을 심화시키거나, 더 오래 지속되는 반응을 초래할 수 있을지에 대한 예비적 평가를 제공하는 것이다. PDR001+HDM201을 이용한 연구를 위한 질환은 자격을 위해 TP53 야생형 질환 환자만 확인해야 하는 필요성을 반영하도록 수정될 것이다.
신장 세포 암종은 TP53 돌연변이의 비율이 낮으며, 소수의 환자가 PD-1 억제제를 이용한 치료에 반응한다.
이 연구의 목적은 단일 작용제인 PD-1 억제제를 이용한 치료에 대해 공개된 데이터와 비교하여 병용물이 반응률과 반응의 지속성을 증가시킬 수 있다는 예비적 증거를 제공하는 것이다. 각 질환군은 병용 요법이 PD-1 차단에 대한 저항성을 극복할 수 있을지를 조사하기 위해 이전에 PD-1 관문 억제제로 치료받은 환자의 부분집합을 포함할 수 있다. 현재 이용 가능한 데이터는 일반적으로 PD-L1 발현과 같은 승인된 분자 진단 시험을 기반으로 환자를 제외시키는 것을 뒷받침하지 않으므로, 각 질환에 대해, 특정 분자 선택이 적용되지 않을 것이다.
이 연구는 이들 작용제가 PDR001과 안전하게 병용될 수 있는지를 조사할 것이고, 만일 그렇다면, 추가 연구에 적합한 용량 및 요법을 확인할 것이다. 연구는 또한 각 병용물이 잠재적인 임상적 이익을 시사하는 종양의 약리학적 변화를 유도하는지를 평가할 것이고, 각 병용물의 효능을 예비적으로 평가할 것이다.
목적
일차 목적
=>향후 연구를 위한 권장 용량 및 스케줄을 확인하기 위해 HDM201과 병용한 PDR001의 안전성 및 내약성을 특성화함.
종점:
안전성
● 치료로 인한 AE 및 SAE의 빈도 및 중증도
● 기준선 및 기준선 이후 실험실 파라미터 및 활력 징후 간의 변화
단계적 확대만
● 치료의 최초 2주기 동안 용량 제한 독성(DLT)의 발생
내약성
● 용량 중단 및 감소의 빈도
● 용량 강도
핵심 이차 목적
=>종양의 면역 침윤의 변화 특성화
종점: 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색에 의한 종양 침윤 림프구(TIL)의 조직병리학, IHC에 의한 TIL 및 골수세포 침윤물(예컨대, CD8, FoxP3 및 적절한 경우 골수 마커)의 특성화
이차 목적
=>HDM201과 병용한 PDR001의 항-종양 활성 추정
종점: irRC 및 RECIST v1.1에 따른 최상의 전체 반응(BOR), PFS. 무치료 생존(TFS)
=>모든 연구 약물의 약동학 특성화
종점: PDR001 및 PK 파라미터의 혈청 농도, HDM201 및 PK 파라미터의 혈장 농도
=>PDR001의 면역원성 평가
종점: 항-PDR001 항체의 존재 및/또는 농도
탐색적 목적
=>연구 치료의 재투여 후 HDM201과 병용한 PDR001의 항-종양 활성 추정
종점: RECIST v1.1에 따른 BOR
연구 설계
이것은 TP53 야생형 MSS-CRC 또는 RCC 환자에서 HDM201과 병용한 PDR001의 제Ib상, 다기관, 공개 표지 연구이다.
연구는 용량의 단계적 확대 부분에 이어, 11개의 임상시험 아암이 있는 용량 확장 부분으로 구성된다.
연구의 용량의 단계적 확대 부분 중에, 환자는 HDM201과 병용하여, i.v.로 투여되는 고정 용량의 PDR001로 치료될 것이다.
MTD/RDE가 결정될 때까지 3~6인의 환자가 치료될 것이다.
HDM201의 시작 용량은 60 mg이다.
HDM201과 병용한 PDR001에 대한 MTD/RDE의 용량의 단계적 확대 및 결정은 EWOC 기준을 이용한 BLRM을 지침으로 할 것이다. 용량의 단계적 확대는 2주기의 치료 완료 후 수행될 것이다. DLT를 확인하기 위해 등록된 모든 환자에 대해 유해 사건(AE) 및 실험실 값을 포함한 안전성 평가를 면밀히 모니터링할 것이다. 단일 MTD/RDE가 정의될 것이다; 질환 특이적 MTD/RDE는 설정되지 않을 것이다.
MTD/RDE를 결정하기 전에, 최소 12인의 환자가 PDR001과 HDM201의 병용물로 치료를 받았어야 한다.
쌍을 이룬 종양 생검이 모든 환자로부터 얻어질 것이다. 이러한 생검 샘플의 분석은 병용물의 용량과 약력학 활성 사이의 관계를 더 잘 이해하는 데 도움을 줄 것이다.
MTD/RDE가 병용 요법에 대해 선언되면, 각 용량 확장 부분이 시작될 수 있다. 확장 부분의 주요 목적은 MTD/RDE에서 임의의 연구 치료의 안전성과 내약성을 추가로 평가하는 것이다.
주요 2차 목적은 치료에 대한 반응으로 종양의 면역 침윤 변화를 평가하는 것이다. 이는 MTD/RDE에서 치료받은 환자에서 최소 10개의 평가 가능한 생검 쌍(생검 표본은 분석하기에 충분한 종양을 함유해야 한다)을 사용하여, 모든 환자로부터 수집된, 쌍을 이루는 종양 생검에서 평가될 것이다. 이것이 가능하지 않은 경우, 이러한 생검 수집이 중지될 수 있다. 최소한 20인의 환자가 치료를 받을 계획이지만, 일부 생검 표본의 실패를 고려하여, 약 30인의 환자가 각 임상시험 아암에서 치료를 받을 것으로 추정된다. 2차 목적에는 예비적인 항-종양 활성 평가가 포함된다.
각 치료군에서, 이전에 PD-1/PDL-1 억제제 요법을 받았고 진행했던 최대 약 6인의 환자가 등록될 수 있다. 병용물이 단일 작용제 PD-1/PDL-1 억제제를 이용한 이전 치료에 대한 저항성을 극복할 가능성을 보여주거나 이전의 PD-1/PDL-1 억제제 치료를 미경험한 환자의 등록이 논리적으로 실행 불가능한 경우, 이 수는 증가될 수 있다.
단계적 확대 부분 및 확장 부분에 등록된 모든 환자는 다음의 연구 기간에 참여할 수 있다:
· 사전 스크리닝 기간
· 스크리닝 기간
· 치료 기간 1
· 치료 중단 기간
· 치료 기간 2
· 안전성 추적 기간
· 질환 진행 추적
각 연구 기간은 아래에 설명되어 있으며, 도 31에 도시하였다. 안전성 추적 기간을 완료하거나, 동의를 철회하거나, 추적이 단절되거나 사망할 때까지 모든 환자는 "연구 중"인 것으로 간주된다.
분자 사전 스크리닝 사전 동의서는 임의의 분자 사전 스크리닝 절차 전에 서명해야 한다(TP53 상태가 연구 외부에서 이미 평가된 경우에는 해당되지 않음). 잠재적인 자격이 있는 환자는, 환자가 전체 스크리닝에 고려될 수 있기 전에 시퀀싱을 통해 그들의 TP53 상태에 대한 기록문서를 가지고 있어야 한다. 환자의 종양 샘플이 TP53 유전자의 엑손 5, 6, 7 및 8에 돌연변이를 나타내지 않을 경우, 그리고 연구 치료의 최초 용량 전 36개월 이내에 수집된 종양 샘플로부터 이 TP53 상태가 얻어진 경우(연구 외부에서 TP53wt 상태가 지역적으로 얻어진 경우에도 적용 가능함) 환자는 전체 스크리닝에 자격이 있다고 간주될 것이다. 예외: (일자와 관계없이)(4개 초과의 카피 수로 정의된) HDM2의 증폭의 이전 기록문서는 TP53 WT 상태 확인을 필요로 하지 않는다.
스크리닝 시험은 TP53 상태가 알려진 후에만 시작해야 한다.
스크리닝 기간은 환자가 연구 동의서에 서명하면 시작된다. 포함 기준 전부를 충족하고 제외 기준은 해당 없음을 확인하기 위해 환자가 평가될 것이다.
스크리닝 후, 주기 1의 제1일에 치료 기간 1이 시작될 것이다. 환자는 예정된 방문 시 임상 평가를 받게 될 것이다.
환자가 허용할 수 없는 독성을 경험하고/경험하거나, 질환 진행의 임상적 증거가 있고/있거나, 임상시험자 또는 환자의 재량에 따라 치료가 중단되지 않는 한, 치료 기간 1 동안의 연구 치료는 6주기의 치료법 동안 투여될 것이다. 질환 진행의 방사선학 증거가 있지만 임상적 이익의 증거가 있는 환자는 Novartis로부터의 문서화된 승인 후 6주기를 완료하기 위해 연구 치료를 계속할 수 있다.
환자가 치료 기간 1 동안 연구 치료를 영구적으로 중단하는 경우, 치료 종료 방문이 이루어져야 하며, 아래에 정의된 적절한 추적 평가가 이루어져야 한다.
환자가 주기 6(치료 기간 1)을 완료하면, 연구 치료가 중단되고, 환자는 연구 치료 중단 기간에 들어갈 것이다. 환자는 안전성 평가(매월), 종양 평가(2개월마다), 및 PDR001 PK(매월) 및 RO 평가(매월)를 위한 샘플 수집을 위한 연구 방문을 계속할 것이다. 환자가 질환 진행의 임상적 또는 방사선학 증거를 갖는 경우, Novartis와 문서화된 논의 후 치료를 재개할 수 있다.
환자가 치료 기간 2에 들어가지 않고 연구 치료를 영구적으로 중단하는 경우, 치료 종료 방문이 이루어져야 하며, 아래에 정의된 적절한 추적 평가가 수행되어야 한다.
환자는 치료 중단 시 받고 있던 것과 동일한 용량과 스케줄로 연구 치료를 재개해야 한다(도 27). 환자는 임상 상태의 응급 독성 및 진행 관련 감소와 관련하여 환자가 치료에 적합하다는 임상시험자와 Novartis의 의료 모니터 간의 문서화된 합의 후에만 치료 기간 2의 치료법을 시작할 것이다. 모든 환자는 연구 치료를 재개하기 전에 종양 평가를 받아야 한다. 이 종양 평가는 치료 기간 2의 기준선으로 사용될 것이다(도 27). 2주기의 연구 치료 완료 후, 환자가 2등급 초과의 연구 치료 관련 독성을 경험하지 않은 경우, 환자는 기관 표준 치료에 따라 감소된 평가 스케줄 하에 또는 3개월마다 중 더욱 빈번한 스케줄로 계속해서 연구에 참여할 수 있다. 치료 기간 2 동안 질환 진행의 방사선학 증거가 있고 임상적 이익의 증거가 있는 환자는 Novartis와 문서화된 논의 후 연구 치료를 계속할 수 있다.
치료 기간 2에서 연구 치료를 영구적으로 중단한 후, 치료 종료 방문 및 안전성 추적 평가가 아래에 정의된 대로 이루어져야 한다.
EOT 방문은 연구 치료를 영구적으로 중단하기로 결정한 후 14일 이내에 이루어질 것이다. 모든 참여 환자는 EOT 방문을 완료해야 한다.
모든 환자는 PDR001을 영구적으로 중단한 후 150일 동안 안전성 평가를 위해 추적될 것이다.
환자 모집단
연구는 진행된/전이성 CRC 또는 RCC 성인 환자에서 수행될 것이다.
포함 기준:
이 연구에 포함될 자격이 있는 환자는 하기의 모든 기준을 충족해야 한다:
1. 임의의 절차 전에 서명 동의서를 받아야 한다
2. 18세 이상의 연령.
3. 표준 요법에도 불구하고 진행되었거나, 표준 요법에 불내약성이거나, 표준 요법이 존재하지 않는, RECIST 버전 1.1에 의해 결정된 측정 가능한 질환이 있는, 진행된/전이성 암 환자.
환자는 HDM201과 병용한 PDR001에 대해 다음 군 중 하나에 해당해야 한다
· TP53 야생형 CRC(PCR 및/또는 IHC를 포함한 국소 분석에 의한 부정합 수복 결핍 아님) 또는 TP53 야생형 RCC
TP53 야생형으로 간주되려면 종양은 첫 번째 용량의 연구 약물 전 36개월 이내에 수집된 종양 샘플에서 최소한 엑손 5, 6, 7 및 8에서 돌연변이가 전혀 검출되지 않아야 한다. (일자와 관계 없이 4개 초과의 카피 수로 정의된) HDM2의 게놈 증폭을 갖는 것으로 이전에 문서화된 종양은 TP53 WT 상태 확인이 필요하지 않다.
4. 1 이하의 ECOG 수행도
환자는 치료 기관의 지침에 따라 생검에 적합한 질환 부위가 있어야 하고 종양 생검의 후보자여야 한다. 환자들은 스크리닝 시, 그리고 이 연구에서 치료 중에 다시 새로운 종양 생검을 기꺼이 받아야 한다.
5. PD-1/PDL-1 억제제를 이용한 사전 요법은, 이전의 PD-1- 또는 PD-L1 유도 요법에 기인한 임의의 독성이 요법의 중단으로 이어지지 않는 경우 허용된다.
제외 기준:
이 연구에 포함될 자격이 있는 환자는 (특히) 다음의 기준 중 임의의 것을 충족하지 않아야 한다:
다음과 같이 정의된 범위 밖의 실험실 값을 갖는 환자:
· 크레아티닌 제거율(Cockcroft-Gault 식을 이용하여 계산되거나 측정됨) < 40 mL/분
· 총 빌리루빈 > 1.5 x ULN(총 빌리루빈 > 3.0 x ULN 또는 직접 빌리루빈 > 1.5 x ULN인 경우, 제외되는 길버트 증후군 환자는 제외)
· 알라닌 아미노트랜스페라아제(ALT) > 3 x ULN(ALT > 5 x ULN인 경우 제외되는, 간의 종양 침범이 있는 환자는 제외)
· 아스파르트산 아미노트랜스페라아제(AST) > 3 x ULN(AST > 5 x ULN인 경우 제외되는, 간의 종양 침범이 있는 환자는 제외)
· 성장 인자 또는 수혈 지원 없이, 절대 호중구 수 < 1.0 x 109/L
· 성장 인자 또는 수혈 지원 없이, 혈소판 수 < 75 x 109/L
· 헤모글로빈(Hgb) < 9 g/dL
· 적절한 대체 요법에도 불구하고 CTCAE 등급 1 초과의 칼륨, 마그네슘, 칼슘 또는 인산 이상
다음의 치료가 필요한 환자:
· 중간 정도 내지 강한 CYP3A4 억제제
· 좁은 치료 지수의 CYP3A4/5의 임의의 기질
중간 정도 내지 강한 CYP3A4 유도제
다음의 범위 밖의 값을 갖는 환자:
· 절대 호중구 수(ANC) <1500/μL
· 혈소판 < 100 000/μL
치료
PDR001에 대한 RP2D는 CPDR001X2101 제I/II상 임상 연구에서 4주마다 투여되는 400 mg으로 확립되었으며, 이 병용 연구에서 모든 환자를 위해 사용될 것이다.
따라서, 환자는 400 mg Q4W의 RP2D의 PDR001로 치료 받게 될 것이다. (주입 용액을 위한 100 mg 분말로 공급된) PDR001은 30분의 주입으로, 또는 임상적으로 시사되는 경우 최대 2시간, i.v.에 의해 투여될 것이다.
HDM201은 4주의 치료 주기(q4w)의 제1일(d1) 및 제8일(d8)에, 즉 요법 1B로 제공될 것이다. HDM201은 (HDM201 유리 염기의 mg으로 표시된) 10 mg 및 100 mg의 투여량 강도의 경구 투여용 경질 젤라틴 캡슐로서 제공될 것이다. 캡슐은 다양한 크기 및/또는 색상으로 구분되며, 공개 표지의, 어린이에게 안전한, 밀봉된 병으로 제공될 것이다. 시작 용량은 60 mg일 것이다. 용량은 20 mg의 용량 증분으로, 예를 들어, 80 mg, 100 mg, 120 mg으로 단계적으로 확대될 수 있다. HDM201은 제안된 시작 용량 미만, 예를 들어, 40 mg으로 단계적으로 축소될 수 있다.
CHDM201X2101 임상 연구는 각 28일 주기의 D1 및 D8에 제공된 120 mg의 고형 종양 환자에 대한 RDE를 확립하였다.
이 병용 연구의 경우, 시작 용량은 각 28일 주기의 D1 및 D8에서의 60 mg일 것이다. 이 용량은 고형 종양 환자에 대한 RDE의 절반이며, 환자에서 시험된 적은 없지만, 15 mg 내지 25 mg QD, 1주 투약/3주 휴약의 HDM201로 치료한 고형 종양 환자에서의 혈소판감소증의 유도에 의해 평가한 바와 같이, 이 용량과 스케줄은 유효할 것으로 예상된다.
PDR001은 HDM201과 병용 투여될 것이다. 환자에게는 균일 규모로 투여될 것이며, 체중이나 체표면적에 의해 투여되지 않을 것이다. 병용 약물의 투약은 클리닉 방문 중 PDR001 주입 완료 직후에 이루어질 것이다.
약동학 샘플링 당일, 환자는 투약 전 채혈 및 PDR001 투여 후 클리닉에서 아침 용량을 취해야 한다.
HDM201은 적어도 식사 1시간 전 또는 식사 2시간 후에 공복에 경구 투여해야 한다. 환자는 캡슐을 씹지 않고 물 한 잔과 함께 각 투여일에 거의 같은 시간에 아침에 캡슐을 복용해야 한다. 환자가 여러 캡슐을 복용해야 하는 용량 수준으로 할당된 경우, 가능한 한 짧은 간격 내에서, 캡슐을 연속적으로 복용해야 한다. 방문일에 환자는 임상시험자 또는 피지명자의 관리 하에 클리닉에서 HDM201을 취할 것이다. 환자가 제8일에 계획대로 용량을 취하는 것을 잊은 경우, 가능한 한 빨리 용량을 취해야 한다. 그러나 계획된 용량에서 6일이 넘게 지난 경우에는 이 용량은 건너뛰어야 한다.
HDM201의 경우, 혈소판감소증 환자의 경우 항응고요법과 항혈소판제의 사용을 신중하게 고려해야 한다.
연구 약물
PDR001:
제약 형태: 주입용액용 분말.
정맥내(IV)용. 항체는 단일 작용제의 RDE(확장을 위한 권장 용량)인 400 mg Q4W i.v.(정맥내)의 균일 용량으로 투여될 것이다. 항체는 또한 병용 치료 요법을 위해 300 mg i.v. Q3W로 투여될 수 있는데, 이것이 더욱 편리할 수 있기 때문이다.
HDM201:
약물 제품은 경질 젤라틴 캡슐(HGC)로 직접 충전된 HDM201 숙신산 약물 물질로 구성되고, 임의의 다른 부형제를 함유하지 않는다. 약물 제품은 경구용으로 의도된, 4종의 투여량 강도: 1 mg, 2.5 mg, 10 mg 및 100 mg(유리 형태의 중량 기준)로 제공된다. 1 mg 강도 캡슐은 "3호" 황색 HGC이고, 2.5 mg 강도 캡슐은 "3호" 스웨덴 오렌지 HGC이고, 10 mg 강도 캡슐은 "1호" 회색 HGC이고, 100 mg은 "0호" 스웨덴 오렌지 HGC이다. 약물 제품은 어린이에게 안전한 인덕션 봉인된 고밀도 폴리에틸렌(HDPE) 병에 포장된다.
경구용.
참조에 의한 포함
도면 및 표를 포함한 다른 구현예 및 실시예가, 발명의 명칭이 "Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof"인 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2015/112900 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2015/0210769에 개시되어 있으며, 이들은 이의 전문이 참조로 포함된다.
본원에 언급된 모든 간행물, 특허, 및 기탁 번호는 마치 각각의 개별 간행물 또는 특허가 구체적으로 그리고 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 나타낸 것처럼 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다.
균등물
본 발명의 특정 구현예가 논의되었지만, 상기 명세서는 예시적이고, 제한적이지 않다. 본 명세서 및 하기 청구범위를 검토 시 본 발명의 많은 변형이 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명의 전체 범위는 이의 균등물의 전체 범위 및 명세서와 함께 청구항을 참조하여 이러한 변형과 함께 결정되어야 한다.
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Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 149 gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagtc cctgcggatc 60 tcctgcaagg gctct 75 <210> 150 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 150 gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt 60 agctgtaaag gttca 75 <210> 151 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 151 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 20 25 <210> 152 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 152 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttct 75 <210> 153 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> 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Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu 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Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Ala Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 218 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 218 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 219 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 219 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser <210> 220 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 220 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys 20 <210> 221 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 221 Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Pro Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser 1 5 10 15 Val Gln Ala <210> 222 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 222 Met Ser Val Leu Thr Gln Val Leu Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Gly Thr Arg Cys 20 <210> 223 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 223 tggactactg ggacgggagc ttac 24 <210> 224 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 224 Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 225 <400> 225 000 <210> 226 <400> 226 000 <210> 227 <400> 227 000 <210> 228 <211> 134 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic 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peptide" <400> 233 Cys Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 234 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <220> <221> CDS <222> (2)..(37) <400> 234 g tac acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa c 38 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 235 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 235 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10

Claims (28)

  1. 약제학적 병용물로서,
    (A) (6S)-5-(5-클로로-1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-일)-6-(4-클로로페닐)-2-(2,4-디메톡시피리미딘-5-일)-1-이소프로필-5,6-디하이드로피롤로[3,4-d]이미다졸-4(1H)-온(화합물 A) 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정인 HDM2 억제제;
    Figure pct00090

    및
    (B) 표 1에 기재된 BAP049-클론-B 또는 BAP049-클론-E의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 표 1에 기재된 BAP049-클론-B 또는 BAP049-클론-E의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 인간 프로그래밍된 사멸-1(PD-1)에 결합할 수 있는 단리된 항체 분자인 항-PD-1 항체 분자
    를 포함하는 약제학적 병용물.
  2. 제1항에 있어서, 항-PD-1 항체 분자는
    (a) 서열번호 4의 HCDR1 아미노산 서열, 서열번호 5의 HCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 서열번호 13의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 14의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 33의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    (b) 서열번호 1의 HCDR1 아미노산 서열; 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 10의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 11의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (c) 서열번호 4의 HCDR1 아미노산 서열, 서열번호 5의 HCDR2 아미노산 서열, 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 13의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 14의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 33의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
    (d) 서열번호 1의 HCDR1 아미노산 서열; 서열번호 2의 HCDR2 아미노산 서열; 및 서열번호 3의 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 10의 LCDR1 아미노산 서열, 서열번호 11의 LCDR2 아미노산 서열 및 서열번호 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL
    을 포함하는 것인, 약제학적 병용물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, HDM2 억제제, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정, 및 항-PD-1 항체 분자는 개별적으로, 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인, 약제학적 병용물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, HDM2 억제제는 경구 투여 형태인, 약제학적 병용물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항-PD-1 항체 분자는 주사용 투여 형태인, 약제학적 병용물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 병용물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  7. 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 병용물 또는 제6항에 따른 약제학적 조성물.
  8. 증식성 질환 치료용 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 병용물의 용도.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 병용물 또는 제6항에 따른 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 증식성 질환을 치료하기 위한 방법.
  10. 증식성 질환은 TP53 야생형 고형 종양인, 제7항에 따른 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물 또는 제8항에 따른 약제학적 병용물의 용도 또는 제9항에 따른 방법.
  11. 제10항에 있어서, 증식성 질환은 신장 세포 암종(RCC)인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  12. 제10항에 있어서, 증식성 질환은 결장직장암(CRC)인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  13. 제10항에 있어서, 증식성 질환은 부수체 안정적 결장직장암(MSS-CRC)인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, HDM2 억제제는 제1일 및 4주 치료 주기의 제6일 내지 제14일 중 어느 하루, 바람직하게는 제1일 및 4주 치료 주기의 제6일 내지 제10일 중 어느 하루, 더욱 바람직하게는 4주 치료 주기의 제1일 및 제8일(d1d8q4w)에 투여되는 것인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  15. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, HDM2 억제제의 1일 용량은 약 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120 mg으로부터 선택되고, 바람직하게는 HDM201 억제제의 1일 용량은 약 30 내지 약 120 mg이고, 바람직하게는 1일 용량은 약 40 내지 약 120 mg이고, 더욱 바람직하게는 1일 용량은 약 60 내지 약 120 mg이고, mg 단위의 1일 용량의 양은 유리 형태로서의 HDM2 억제제를 지칭하는 것인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  16. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, HDM2 억제제의 1일 용량은 약 60 내지 약 90 mg이고, 훨씬 더 바람직하게는 1일 용량은 약 60 내지 약 80 mg이고, mg 단위의 1일 용량의 양은 유리 형태로서의 HDM2 억제제를 지칭하는 것인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  17. 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체 분자는 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 약 300 mg 내지 약 400 mg의 용량으로 투여되는 것인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  18. 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체 분자는 3주마다 1회 약 300 mg의 용량으로 투여되는 것인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  19. 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체 분자는 4주마다 1회 약 400 mg의 용량으로 투여되는 것인, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 약제학적 병용물의 용도, 또는 방법.
  20. 항-PD-1 항체 분자는
    (a) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (b) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (c) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (d) 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (e) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (f) 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (g) 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (h) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (i) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (j) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (k) 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (l) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (m) 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (n) 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인;
    (o) 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 또는
    (p) 서열번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인
    을 포함하는 것인, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 병용물, 또는 제6항에 따른 약제학적 조성물, 또는 제8항에 따른 약제학적 병용물의 용도, 또는 제9항에 따른 방법.
  21. TP53 야생형 고형 종양을 치료하는 데 사용하기 위한 항-PD-1 항체로서, HDM2 억제제와 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여되도록 제조되는 것인, 항-PD-1 항체.
  22. TP53 야생형 RCC를 치료하는 데 사용하기 위한 항-PD-1 항체로서, HDM2 억제제와 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여되도록 제조되는 것인, 항-PD-1 항체.
  23. TP53 야생형 CRC를 치료하는 데 사용하기 위한 항-PD-1 항체로서, HDM2 억제제와 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여되도록 제조되는 것인, 항-PD-1 항체.
  24. TP53 야생형 MSS CRC를 치료하는 데 사용하기 위한 항-PD-1 항체로서, HDM2 억제제와 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여되도록 제조되는 것인, 항-PD-1 항체.
  25. TP53 야생형 고형 종양을 치료하는 데 사용하기 위한 HDM2 억제제로서, 항-PD-1 항체와 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여되도록 제조되는 것인, HDM2 억제제.
  26. 환자에서 TP53 야생형 고형 종양을 치료하는 데 사용하기 위한 HDM2 억제제로서, 항-PD-1 항체와 개별적으로, 동시에, 또는 순차적으로 투여되도록 제조되고, 환자는 이전에 면역요법을 제공받았던 것인, HDM2 억제제.
  27. (a) 제1항에 따른 HDM2 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 복합체 또는 공동-결정의 하나 이상의 투여 단위, 및 (b) 제2항에 따른 항-PD-1 항체의 하나 이상의 투여 단위, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 병용 제제.
  28. 활성 성분으로서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 병용물을, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위하여 이를 필요로 하는 환자에게 상기 약제학적 병용물을 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여하기 위한 설명서와 함께 포함하는, 시판 패키지 키트.
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