KR20180133399A

KR20180133399A - 인간 폴리오바이러스 수용체(ｐｖｒ)에 특이적인 항체

Info

Publication number: KR20180133399A
Application number: KR1020187028157A
Authority: KR
Inventors: 오페르 만델보임; 노아 에스 케이난; 핀차스 츠케르만; 스티판 존지크
Original assignee: 이섬 리서치 디벨러프먼트 컴파니 오브 더 히브루 유니버시티 오브 예루살렘 엘티디.; 유니버시티 오브 리예카 패컬티 오브 메디신
Priority date: 2016-03-01
Filing date: 2017-02-28
Publication date: 2018-12-14
Also published as: IL261200B2; AU2017228055B2; EP3423495A1; CO2018010538A2; US20240018257A1; IL261200B; EP3423495B1; US10906987B2; MX2022014867A; IL296874A; EP4043492A1; US20210115150A1; CA3015619A1; CN109071666A; AU2017228055A1; US20200040092A1; MX2018010445A; ES2903280T3; BR112018067522A2; RU2018134065A

Abstract

본 발명은 폴리오바이러스 수용체(PVR)를 인지하고 이러한 PVR이 Ig 및 ITIM 도메인을 가진 T 세포 면역수용체(TIGIT)에 결합하는 것을 저해하는 단일클론 항체를 제공한다. 나아가, 본 발명은 이러한 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 암 면역요법, 감염 치료 및 진단에서 이들의 사용 방법을 제공한다.

Description

인간 폴리오바이러스 수용체(ＰＶＲ)에 특이적인 항체

본 발명은 면역요법 분야이며, 단백질 폴리오바이러스 수용체에 결합하는 항체 및 이의 단편, 이들 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열, 및 이들 항체를 생성하는 하이브리도마 세포에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 이들 항체를 포함하는 치료적 및 진단적 조성물, 및 이들 단일클론 항체를 사용하는 질병, 특히 암의 치료 및 진단 방법에 관한 것이다.

암 면역요법은 예를 들어 항원 제시 세포와 종양 세포의 융합과 함께 종양 세포 상의 항원에 특이적인 항체의 처리에 의해, 또는 항종양 T 세포의 특이적인 활성화에 의해 항종양 면역 반응을 발생시키고 증대시키는 데 이용된다. 환자에서 종양 세포에 대한 면역 세포(예를 들어 T 세포)를 보충하는 능력은, 현재까지 치유가 어려운 것으로 간주되었던 암 유형 및 전이와 싸우는 치료 양상을 제공한다.

T 세포-매개 면역 반응은, 면역 반응의 규모를 조절하는 공동자극 신호와 공동저해 신호 사이의 균형에 의해 제어되는 다수의 순차적인 단계들을 포함한다. 면역 체크포인트로 지칭되는 저해 신호는 자가관용(self-tolerance)의 유지, 및 또한 면역-매개 부차적인 조직 손상의 제한에 결정적이다. 이들 신호는 감염 또는 면역 도발이 명확해지거나, 악화되거나 지속됨에 따라 변하고, 이들 변화는 T 세포의 반응에 영향을 미치고 면역 반응을 개조한다.

면역 체크포인트 단백질의 발현은 종양에 의해 제어될 수 있다. 예를 들어, 암세포 표면 상에서 프로그래밍된 사멸-1 리간드(PD-L1)의 상향조절은, PD-1에의 결합을 통해 T 세포를 저해함으로써 이들 암세포가 숙주 면역계를 회피할 수 있게 하며, 그렇지 않으면 이러한 PD-1은 이들 종양 세포를 공격할 것이다. 따라서, 면역 체크포인트는 암에 대한 기능적인 세포성 면역력의 활성화에 대한 유의한 장벽을 나타낸다. 이에, 면역 세포 상의 저해성 리간드에 특이적인 길항적(antagonistic) 항체는 실행 가능한 항암제인 것으로 간주되고, 이들 항체는 임상에서 평가중에 있다(예를 들어 니볼루맙(Nivolumab) 및 펨블로리주맙(Pembrolizumab)). 면역 체크포인트 분자에 대한 또 다른 예는 Ig 및 ITIM 도메인을 가진 T 세포 면역수용체(TIGIT)이다. TIGIT는 T 세포 및 자연 살해 세포(NK 세포)를 포함하여 다양한 면역 세포들 상에서 발현되는 공동저해성 분자이다. TIGIT는 폴리오바이러스 수용체(PVR)에 높은 친화성으로 결합한다.

CD155로도 지칭되는 폴리오바이러스 수용체(PVR)는 세포외기질 분자에 대한 세포 접착을 매개하는 데 관여하는 막관통 당단백질이다. PVR은, 이의 발현이 다형성교아종, 수모세포종을 포함하여 신경외배엽암 및 결장직장암종(문헌[Solecki et al., J. Biol. Chem. 2002, 277: 25697-700]) 뿐만 아니라 췌장암(문헌[Nishiwada et al., Anticancer Res. 2015, 35(4): 2287-97])에서 상향조절되기 때문에 과거에 종양 항원으로서 기재되었고, 치료적 개입에 대한 잠재적인 표적으로 기재되었다. PVR은 또한, Ras-Raf-MEK-ERK 신호전달의 혈청-유도 활성화를 증강시키며, 사이클린 D2 및 E를 상향조절하고, p27Kip1을 하향조절하여, 결국에는 세포 주기 중 G0/G1 기의 기간을 단축시키는 것으로 공지되어 있고(문헌[Kakunaga 2004, J. Biological Chemistry, 279, 36419-36425]), 그러한 이유에서 종양 세포 상의 PVR의 차단이 종양 세포의 생존력을 감소시킬 것으로 예상된다. PVR은 또한, VEGFR2와 인테그린 α(v)β(3)와의 상호작용을 조절함으로써 혈관신생에 결정적인 역할을 하고 VEGF-유도 혈관신생 및 VEGFR2-매개 Rap1-Akt 신호전달 경로를 제어하는 것으로 제시되어 있다(문헌[Kinugasa et al., 2012, Circ Res. 2012, 110(5), 716-26]). 부가적으로, PVR은 IGF1R과 복합체를 형성하고 Met 신호전달에 참여하며, 복합체 형성의 차단은 세포 생존력 및 혈관신생을 감소시켰다(문헌[Lee et al., Scientific Reports 2014, 20, 4, 7139]).

전이에서 PVR의 관여는, 암세포를 마우스의 꼬리에 주사하고 폐로의 전이를 측정함으로써 언급되었다. 암세포에서 상향조절된 PVR은 혈소판에서 이의 역수용체(counter-receptor)와 트랜스상호작용하고, 이러한 트랜스상호작용은 폐로의 암세포의 전이를 증강시키는 것으로 나타났다(문헌[Morimoto et al., Oncogene (2008) 27, 264-273]).

미국 특허 출원 20070041985는 PVR 또는 이의 임의의 유도체의 적어도 하나의 세포내 또는 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 분자를 개시하고 있으며, 여기서 이러한 분자는 PVR 또는 이의 임의의 유도체를 발현하는 세포의 수용체 매개 접착, 추적 및/또는 침범 거동을 조절하는 능력을 가진다.

미국 특허 출원 20090215175는 세포의 접착, 추적, 침범 및/또는 전이 잠재성에 필수적인 PVR 기능을 조절하는 분자(예를 들어 작은 화학적 화합물, 올리고뉴클레오타이드, 폴리펩타이드, 항체 및 항체 단편)를 제공한다. 이러한 분자는 전이 잠재성, 전이 및 암을 갖는 세포의 치료에 사용될 수 있다.

PCT 출원 공개 WO 2006/124667은 TIGIT와 이의 리간드인 PVR의 결합을 차단하는 단일클론 항체에 의한 단백질 zB7R1(TIGIT)의 조절을 개시하고 있다.

단독으로 또는 다른 작용제와 조합하여, PVR과 TIGIT의 결합을 저해함으로써 종양 또는 바이러스 감염 세포를 공격하기 위해 면역계 세포를 강력하게 하는 부가적이며 보다 효과적이고, 특이적이며, 안전하고/거나 안정한 작용제를 제공하려는 충족되지 않은 요망이 존재한다.

본 발명은, 폴리오바이러스 수용체(PVR)를 인지하고, PVR이 Ig 및 ITIM 도메인을 가진 T 세포 면역수용체(TIGIT)에 결합하는 것을 방지하고, 림프구, 예컨대 자연 살해(NK) 세포 및 T-세포 상에서 억제 활성을 저해하는 항체 및 이의 단편을 제공한다. 본원에 개시된 항-PVR 항체는 암세포 상에 존재하는 PVR에 결합할 수 있다. 이들 항체 및 이들의 단편은 PVR에 대한 상보성 결정 영역(CDR) 서열, 높은 친화성 및 높은 특이성의 독특한 세트를 갖는 것을 특징으로 하고, 단독 요법으로서 및 다른 항암제들과 조합하여 종양 면역 회피에 대항하기 위한 암 면역요법에 유용하다. 항체는 또한, 바이러스 감염을 치료하는 데 유용하다.

현재, 본원에 개시된 고 친화성 항-PVR 항체는 TIGIT-PVR 상호작용을 차단하고 T 세포 및 NK 세포 활성을 회복시키는 것으로 발견되어 있다. 이러한 항체는 인간 PVR에 대해 높은 특이성을 보여주었다. 이들 특성은, 본 발명의 단일클론 항체(mAb)가 암 면역요법에 사용하기 위한 가치 있는 후보물질이 되게 하고, 더 적은 부작용으로 더 낮은 용량을 투여할 수 있게 한다.

유리하게는, 본 발명에 따른 항-PVR mAb는 PD-L1 시험관내 모델(A549)에서 T 세포 증식을 항 PD-1 및 CTLA-4 mAb보다 더 양호하게 유도할 수 있다. 유도 효과는 말초 혈액 단핵구 세포(PMBC) 및 정제된 CD4 및 CD8 T 세포에 대해 나타났다. 또한, PVR mAb는 시험된 대부분의 표적 세포들에서 NK 세포 활성화를 유도할 수 있었다. 더욱이, 본원에 기재된 일부 항-PVR 항체들은 시험관내에서, 현재 요법에 사용되는 공지된 작용제인 에르비툭스(Erbitux)®와 유사한 항암 활성을 가진다. 더욱이, 본원에 기재된 일부 항-PVR 항체들은 부가적인 항암제, 예컨대 항 PD-1 및 CTLA-1 항체 및 표피 성장 인자 수용체(EGFR)와 조합되었을 때 상승작용 효과를 보여주었다. 또한, 일부 항-PVR 항체들은 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 것으로 확인되었다. 추가로, 본 발명에 따른 일부 항-PVR 항체들은 DNAM1의 공동자극 신호전달에 아무런 차단 효과를 갖지 않았으며, 따라서 이들은 다른 면역 유도 신호에 유해한 효과를 갖지 않는 것으로 개시된다.

흥미롭게는, 인간 PVR 서열과 설치류 PVR 서열 사이의 높은 서열 유사성에도 불구하고, 본 발명의 항체는 인간 PVR에 고도로 특이적이다.

추가로, 예상치 못하게도, 인간 불변 사슬을 포함하는 일부 키메라 단일클론 항체들은 이들의 동등한 뮤린 단일클론 항체들과 비교하여 면역 세포 활성화에 증강된 효과를 보여준 것으로 개시되어 있다.

본원에 기재된 일부 항 PVR mAb들은 종양 세포 상에서 PVR을 차단함으로써 면역 독립적인 방식으로 종양 세포 생존력(viability)을 감소시킬 수 있었다. 임의의 작용 메커니즘으로 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 이러한 활성은 세포 주기 중 G0/G1 기의 기간을 단축시키는 PVR의 능력으로 인한 것으로 제시된다.

일 양태에 따르면, 본 발명은 폴리오바이러스 수용체(PVR)에 결합하는 단리된 단일클론 항체, 또는 적어도 항원 결합 부위를 포함하는 이의 항체 단편을 제공하며, 여기서 단리된 항체 또는 항체 단편은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

i. 서열 번호 77을 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열 번호 79를 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역의 3개의 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체;

ii. 서열 번호 69를 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열 번호 71을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체; 및

iii. 서열 번호 73을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열 번호 75를 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체.

서열 번호 2, 10, 18, 26, 34 또는 42에 상동성인 중쇄 및 경쇄에 함유된 CDR 서열을 포함하는 항체가 또한, 본 발명의 범위 내에 포함된다. 일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 2는 서열 번호 69와 호환 가능하다. 일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 10은 서열 번호 71과 호환 가능하다. 일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 18은 서열 번호 73과 호환 가능하다. 일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 26은 서열 번호 75와 호환 가능하다. 일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 34는 서열 번호 77과 호환 가능하다. 일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 42는 서열 번호 79와 호환 가능하다.

주어진 항체 분자의 CDR 서열을 확인하기 위한 몇 가지 방법들이 당업계에 공지되어 있으나, 표준의 명확한 방법은 존재하지 않는다. 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역들로부터 CDR 서열의 확인은 비제한적으로 KABAT, Chothia 및 IMGT로서 공지된 방법들을 포함하여 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 수행될 수 있다. CDR들의 선택된 세트는 1개 초과의 방법에 의해 식별된 서열을 포함할 수 있으며, 즉, 일부 CDR 서열들은 예를 들어 KABAT를 사용하여 확인될 수 있고, 일부는 IMGT를 사용하여 확인될 수 있다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 항-PVR 4E5(또는 hPVR.07)로 표시된 단일클론 항체의 CDR 서열, 즉 서열 번호 69로 표시된 중쇄 가변 영역에 함유된 3개의 CDR 서열들 및 서열 번호 71로 표시된 경쇄 가변 영역에 함유된 3개의 CDR 서열들을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 GFDFSRYW(서열 번호 4)를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 포함하는 중쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 PDGNYNALDYW(서열 번호 8)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 RYW를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 RYWMT(서열 번호 80)를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다.

소정의 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 (i) 서열 GFDFSRYW(서열 번호 4)를 포함하는 HC CDR1; (ii) 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 포함하는 HC CDR2; 및 (iii) 서열: PDGNYNALDYW(서열 번호 8)를 포함하는 HC CDR3을 포함한다.

소정의 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 (i) 서열 RYW를 포함하는 HC CDR1; (ii) 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 포함하는 HC CDR2; 및 (iii) 서열: PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 포함하는 HC CDR3을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 포함하는 경쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 WASTRHT(서열 번호 14)를 포함하는 경쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. 소정의 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다: (i) LC CDR1은 서열 KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 포함하며; (ii) LC CDR2는 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 포함하고; (iii) HC CDR3은 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 포함한다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 서열: GFDFSRYW(서열 번호 4)를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열: PDGNYNALDYW(서열 번호 8)를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 포함하는 경쇄 CDR3, 또는 초가변 영역(HVR) 서열 내에 5% 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 이의 유사체를 포함한다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은

i. 서열 번호 4 및 서열 번호 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 중쇄 CDR1,

ii. 서열 번호 6 및 서열 번호 81로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 중쇄 CDR2,

iii. 서열 번호 8 및 서열 번호 82로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 중쇄 CDR3,

iv. 서열 번호 12로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1,

v. 서열 번호 14로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및

vi. 서열 번호 16으로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR3

으로 구성된 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 12, 서열 번호 14 및 서열 번호 16으로 구성된 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다.

다른 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 서열 번호 80, 서열 번호 81, 서열 번호 82, 서열 번호 12, 서열 번호 14 및 서열 번호 16으로 구성된 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 69로 표시된 중쇄 가변 영역, 또는 이러한 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 2의 유사체는 서열 번호 69로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역이다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 71로 표시된 경쇄 가변 영역, 또는 이러한 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 10의 유사체는 서열 번호 71로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역이다.

특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 2 또는 서열 번호 69로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 10 또는 서열 번호 71로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역, 또는 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.

본 발명은 또한, 단일클론 항체(mAb) 4E5가 결합하는 인간 PVR 단백질 내의 에피토프에 높은 친화성으로 결합할 수 있는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.

다른 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체는 7D4로 표시된 단일클론 항체(또는 hPVR.01)의 CDR 서열, 즉, 서열 번호 73으로 표시된 중쇄 가변 영역 내에 함유된 3개의 CDR 서열 및 서열 번호 75로 표시된 경쇄 가변 영역 내에 함유된 3개의 CDR 서열을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 GYTFTEYTMH(서열 번호 20)를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 포함하는 중쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 VIPLEY(서열 번호 24)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 소정의 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다: (i) HC CDR1은 서열 GYTFTEYTMH(서열 번호 20)를 포함하며; (ii) HC CDR2는 서열: GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 포함하고; (iii) HC CDR3은 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 EYTMH(서열 번호 83)를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 포함하는 경쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 SASYRYR(서열 번호 30)을 포함하는 경쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. 소정의 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다: (i) LC CDR1은 서열 KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 포함하며; (ii) LC CDR2는 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 포함하고; (iii) HC CDR3은 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 포함한다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체는 서열 GYTFTEYTMH(서열 번호 20)를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열: GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 포함하는 경쇄 CDR3, 또는 HVR 서열 내에 5% 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 이의 유사체를 포함한다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은, 서열 번호 20 및 서열 번호 83으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 22로 표시된 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 서열 번호 24로 표시된 서열을 갖는 중쇄 CDR3, 서열 번호 28로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 30으로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 32로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR3으로 구성된 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 28, 서열 번호 30 및 서열 번호 32로 구성된 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다.

다른 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 서열 번호 83, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 28, 서열 번호 30 및 서열 번호 32로 구성된 6개 CDR 서열의 세트를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 73으로 표시된 중쇄 가변 영역, 또는 이러한 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 18의 유사체는 서열 번호 73으로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역이다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 75로 표시된 경쇄 가변 영역, 또는 이러한 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 26의 유사체는 서열 번호 75로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역이다.

특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 18 또는 서열 번호 73으로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 26 또는 서열 번호 75로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역, 또는 이러한 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.

본 발명은 또한, mAb 7D4가 결합하는 인간 PVR 단백질 내의 에피토프에 높은 친화성으로 결합할 수 있는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.

다른 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체는 5B9로 표시된 단일클론 항체(또는 hPVR.09)의 CDR 서열, 즉, 서열 번호 77로 표시된 중쇄 가변 영역 내에 함유된 3개의 CDR 서열 및 서열 번호 79로 표시된 경쇄 가변 영역 내에 함유된 3개의 CDR 서열을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체는 서열 번호 34로 표시된 중쇄 가변 영역 내에 함유된 상보성 결정 영역(CDR) 서열 및 서열 번호 42, 서열 번호 49, 서열 번호 50, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 53 및 서열 번호 54로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역 서열 내에 함유된 3개의 CDR 서열을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 GYTFSNYWIE(서열 번호 36)를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 포함하는 중쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다.

소정의 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다: (i) HC CDR1은 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 포함하며; (ii) HC CDR2는 서열: EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 포함하고; (iii) HC CDR3은 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 KASQDVGTAVV(서열 번호 44)를 포함하는 경쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 WASSRHN(서열 번호 46)을 포함하는 경쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 서열 KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 포함하는 경쇄 CDR1을 포함한다.

소정의 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다: (i) LC CDR1은 서열 KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 포함하며; (ii) LC CDR2는 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 포함하고; (iii) HC CDR3은 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 포함한다.

부가적인 실시형태에 따르면, LC CDR2는 서열 번호 46, 56, 57, 58, 59, 60, 또는 61로 표시된 서열을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 서열: GYTFSNYWIE(서열 번호 36)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 서열: EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAVV(서열 번호 44)를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 포함하는 경쇄 CDR3, 또는 HVR 서열 내에 5% 이하의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 이의 유사체를 포함한다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 서열 번호 36 및 서열 번호 84로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 38로 표시된 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 서열 번호 40으로 표시된 서열을 갖는 중쇄 CDR3, 서열 번호 44 및 서열 번호 85로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 46으로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 48로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR3으로 구성된다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 단편은 서열 번호 36 또는 서열 번호 84로 표시된 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 38로 표시된 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 서열 번호 40으로 표시된 서열을 갖는 중쇄 CDR3, 서열 번호 44 또는 서열 번호 85로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 46, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 59, 서열 번호 60 및 서열 번호 61로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 48로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR3으로 구성된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 77로 표시된 중쇄 가변 영역, 또는 이러한 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 34의 유사체는 서열 번호 77로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역이다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 79로 표시된 경쇄 가변 영역, 또는 이러한 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 서열 번호 42의 유사체는 서열 번호 79로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역이다.

특정한 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 34 및 서열 번호 77로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 42 및 서열 번호 79로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 경쇄 가변 영역, 또는 이러한 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 34로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 42, 서열 번호 49, 서열 번호 50, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 53, 또는 서열 번호 54로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는 이러한 경쇄 및/또는 중쇄 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체를 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다

본 발명은 또한, mAb 5B9가 결합하는 인간 PVR 단백질 내의 에피토프에 높은 친화성으로 결합할 수 있는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 항체 또는 이의 단편은 인간 PVR을 적어도 10^-8M의 친화성으로 인지한다. 다른 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 인간 PVR에 10^-8M, 5x10^-9M, 10^-9M, 5x10^-10M, 10^-10M, 5x10^-11M 또는 심지어 이보다 높은 친화성으로 결합한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

상기 기재된 단리된 mAb 항체 및 항체 단편의 유사체 및 유도체가 또한, 본 발명의 범위 내에 포함된다. 일부 실시형태에서, 서열 번호 2, 10, 18, 26, 34 및 42로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열로 표시된 적어도 하나의 가변 영역을 포함하는 특정한 유사체 또는 단리된 mAb 또는 이의 단편 또한, 본 발명의 범위에 포함된다. 서열 번호 69, 71, 73, 75, 77 및 79로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열로 표시된 적어도 하나의 가변 영역을 포함하는 단리된 mAb 또는 이의 단편 또한, 본 발명의 범위에 포함된다.

일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편 유사체는 참조 항체 서열의 초가변 영역과 적어도 90%의 서열 동일성을 가진다.

소정의 실시형태에 따르면, 단리된 항체 또는 이의 단편의 유사체 또는 유도체는 참조 항체 서열의 가변 영역과 적어도 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 가진다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 2 또는 서열 번호 69로 표시된 중쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다. 다른 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 18 또는 서열 번호 73으로 표시된 중쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다. 다른 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 34 또는 서열 번호 77로 표시된 중쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 10 또는 서열 번호 71로 표시된 경쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다. 다른 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 26 또는 서열 번호 75로 표시된 경쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다. 다른 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 42 또는 서열 번호 79로 표시된 경쇄 가변 영역, 또는 상기 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서 (i) 중쇄는 서열 번호 2를 포함하고, 경쇄는 서열 번호 10을 포함하거나; (ii) 중쇄는 서열 번호 18을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 26을 포함하거나; (iii) 중쇄는 서열 번호 34를 포함하고, 경쇄는 서열 번호 42를 포함한다. 상기 중쇄 또는 경쇄와 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 항체 또는 단편의 유사체가 또한, 포함된다.

다른 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서 (i) 중쇄는 서열 번호 69를 포함하고, 경쇄는 서열 번호 71을 포함하거나; (ii) 중쇄는 서열 번호 73을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 75를 포함하거나; (iii) 중쇄는 서열 번호 77을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 79를 포함한다. 상기 중쇄 또는 경쇄와 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 항체 또는 단편의 유사체가 또한, 포함된다.

일부 실시형태에 따르면, 유사체는 상기 기재된 항체 경쇄 또는 중쇄 가변 영역과 적어도 96, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 가진다. 일부 실시형태에 따르면, 유사체는 초가변 영역의 하나 이상의 CDR 서열, 즉, 서열 번호 4, 6, 8, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 28, 30, 32, 36, 38, 40, 44, 46, 48, 80, 81, 82, 83, 84 및 85로 표시된 CDR 서열들 중 임의의 하나에 하나 이하의 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다. 일부 실시형태에 따르면, 아미노산 치환은 보존적 치환이다.

일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 상기 정의된 경쇄 및 중쇄 영역을 갖는 초가변 영역(HVR)을 포함하며, 여기에 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산은 치환, 결실 및/또는 첨가되었다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 상기 정의된 경쇄 및 중쇄 영역을 갖는 HVR을 포함하며, 여기에서 하나의 아미노산이 치환되었다. 특정한 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 상기 정의된 바와 같은 CDR을 포함하며, 여기에서 하나의 아미노산이 치환되었다. 일부 특정한 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 상기 정의된 바와 같은 경쇄 CDR2를 포함하며, 여기에서 하나의 아미노산이 치환되었다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 55(WASSRHX)로 표시된 서열을 갖는 경쇄 CDR2를 포함하며, 여기서 X는 A, R, D, E, P 및 T로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 56-61로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 경쇄 CDR2를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 CDR 세트를 포함한다:

i. HC CDR1은 GYTFSNYWIE(서열 번호 36) 및 SNYWIE(서열 번호 84)로부터 선택되며; HC CDR2는 EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)이며; HC CDR3은 TKIYGNSFDY(서열 번호 40)이며; LC CDR1은 KASQDVGTAVV(서열 번호 44) 및 KASQDVGTAV(서열 번호 85)로부터 선택되며; LC CDR2는 WASSRHN(서열 번호 46), WASSRHA(서열 번호 56), WASSRHR(서열 번호 57), WASSRHD(서열 번호 58), WASSRHE(서열 번호 59), WASSRHP(서열 번호 60) 및 WASSRHT(서열 번호 61)로 이루어진 군으로부터 선택되고; LC CDR3은 QQYSRYPLT(서열 번호 48)인 6개 CDR의 CDR 세트;

ii. HC CDR1 서열은 GFDFSRYW(서열 번호 4) 및 RYWMT(서열 번호 80)로부터 선택되며; HC CDR2는 EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6) 및 EIHPDSSKINYTPSQKD(서열 번호 81)로부터 선택되며; HC CDR3은 PDGNYNALDYW(서열 번호 8) 및 PDGNYNALDY(서열 번호 82)로부터 선택되며; LC CDR1은 KASQDVGTAVT(서열 번호 12)이며; LC CDR2는 WASTRHT(서열 번호 14)이고; LC CDR3은 QQYSRYPYT(서열 번호 16)인 6개 CDR의 CDR 세트;

iii. HC CDR1 서열은 GYTFTEYTMH(서열 번호 20) 및 EYTMH(서열 번호 83)로부터 선택되며; HC CDR2는 GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)이며; HC CDR3은 VIPLEY(서열 번호 24)이며; LC CDR1은 KASQNVYTNVA(서열 번호 28)이며; LC CDR2는 SASYRYR(서열 번호 30)이고; LC CDR3은 QQYNSYPLA(서열 번호 32)인 6개 CDR의 CDR 세트.

따라서, 본 발명은 인간 단백질 PVR에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체, 또는 이의 결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 단일클론 항체 또는 단편은 6개 CDR 서열의 세트를 포함하며, 이러한 세트는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

i. 서열 번호 4, 6, 8, 12, 14 및 16;

ii. 서열 번호 20, 22, 24, 28, 30 및 32;

iii. 서열 번호 36, 38, 40, 44, 46 및 48;

iv. 서열 번호 36, 38, 40, 44, 55 및 48;

v. 서열 번호 80, 81, 82, 12, 14 및 16;

vi. 서열 번호 83, 22, 24, 28, 30 및 32;

vii. 서열 번호 84, 38, 40, 85, 46 및 48; 및

viii. 서열 번호 84, 38, 40, 85, 55 및 48.

본 발명은 또한, 중쇄 및 경쇄를 포함하는 단일클론 항체 및 이의 결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 사슬은 중쇄 가변 영역 서열 및 경쇄 가변 영역 서열의 세트를 포함하고, 상기 세트는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:

i. 서열 번호 2 및 10;

ii. 서열 번호 69 및 71;

iii. 서열 번호 18 및 26;

iv. 서열 번호 73 및 75;

v. 서열 번호 34 및 42; 및

vi. 서열 번호 77 및 79.

일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 인간 PVR이 T 세포 또는 NK 세포 상에 발현된 TIGIT에 결합하는 것을 저해할 수 있다.

특정한 실시형태에 따르면, mAb는 키메라 항체, 및 항체의 적어도 항원 결합 부위를 포함하는 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에 따르면, 항체는 키메라 항체이다. 보다 다른 실시형태에 따르면, 키메라 항체는 인간 불변 영역을 포함한다. 보다 다른 실시형태에 따르면, 키메라 단일클론 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 포함한다. 특정한 실시형태에 따르면, 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')₂, Fd, Fd', Fv, dAb, 단리된 CDR 영역, 단일 사슬 항체(scab), "다이아바디(diabody)" 및 "선형(linear) 항체"로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 항체 또는 항체 단편은 마우스 IgG2a, 마우스 IgG2b, 마우스 IgG3, 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4로 이루어진 군으로부터 선택되는 프레임워크 서열을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 상기 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 단편을 포함하는 컨쥬게이트가 제공된다.

일부 실시형태에 따르면, 컨쥬게이트는 담체 단백질을 포함한다.

단일클론 항체를 코딩하며 PVR에 대해 높은 친화성 및 특이성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 서열, 뿐만 아니라 이들 폴리뉴클레오타이드 서열를 운반하는 벡터 및 숙주 세포가 본 발명의 또 다른 양태에 따라 제공된다.

일부 실시형태에 따르면, 상기 기재된 HC 가변 영역 및 경쇄 LC 가변 영역의 아미노산 서열들을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열들이 제공된다.

일부 실시형태에 따르면, 폴리뉴클레오타이드 서열은, (i) 서열 번호 2의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 10의 경쇄 가변 영역을 갖는 단일클론 항체(본원에서 4E5로서 식별됨); (ii) 서열 번호 18의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 26의 경쇄 가변 영역을 갖는 단일클론 항체(본원에서 7D4로서 식별됨); 또는 (iii) 서열 번호 34의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 42의 경쇄 가변 영역을 갖는 단일클론 항체(본원에서 5B9로서 식별됨)가 결합하는 인간 PVR 단백질 내의 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 항체 단편 또는 사슬을 코딩한다.

일부 실시형태에 따르면, 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 2 또는 서열 번호 69로 표시된 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 사슬을 코딩한다. 일부 실시형태에 따르면, 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 10 또는 서열 번호 71로 표시된 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 사슬을 코딩한다.

다른 실시형태에 따르면, 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 18 또는 서열 번호 73로 표시된 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 사슬을 코딩한다. 부가적인 실시형태에 따르면, 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 26 또는 서열 번호 75로 표시된 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 사슬을 코딩한다.

다른 실시형태에 따르면, 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 34 또는 서열 번호 77로 표시된 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 사슬을 코딩한다. 부가적인 실시형태에 따르면, 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 42 또는 서열 번호 79로 표시된 서열을 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 사슬을 코딩한다.

보다 일부의 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 폴리뉴클레오타이드 서열은 6개의 CDR 서열들을 포함하는 항체 또는 항체 단편 또는 사슬을 코딩한다: (i) 서열: GFDFSRYW(서열 번호 4) 또는 RYWMT(서열 번호 80)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 갖는 경쇄 CDR3; (ii) 서열 EYTMH(서열 번호 83)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 갖는 경쇄 CDR3; 또는 (iii) 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 갖는 경쇄 CDR3.

일부 실시형태에 따르면, 상기 정의된 폴리뉴클레오타이드 서열은 항체, 적어도 항원 결합 부위를 포함하는 항체 단편, 및 상기 항체 또는 항체 단편을 포함하는 항체 컨쥬게이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 분자를 코딩한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 단일클론 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 1 또는 서열 번호 68로 표시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단일클론 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 17 또는 서열 번호 72로 표시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단일클론 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 33 또는 서열 번호 76으로 표시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단일클론 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 9 또는 서열 번호 70으로 표시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단일클론 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 25 또는 서열 번호 74로 표시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 단일클론 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 41 또는 서열 번호 78로 표시된 서열, 또는 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 본 발명은 상기 개시된 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩되는 적어도 하나의 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다.

추가의 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체 사슬 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 핵산 구축물을 제공한다. 일부 실시형태에 따르면, 핵산 구축물은 플라스미드이다.

일부 실시형태에 따르면, 플라스미드는 서열 번호 1, 서열 번호 17 또는 서열 번호 33으로 표시된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 플라스미드는 서열 번호 68, 서열 번호 72 또는 서열 번호 76으로 표시된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

다른 실시형태에 따르면, 플라스미드는 서열 번호 9, 서열 번호 25 또는 서열 번호 41로 표시된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

다른 실시형태에 따르면, 플라스미드는 서열 번호 70, 서열 번호 74 또는 서열 번호 78로 표시된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

보다 다른 양태에서, 본 발명은 상기 정의된 특이적인 CDR 서열 및/또는 특이적인 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편을 제공할 수 있는 하이브리도마 세포를 제공한다.

일부 실시형태에 따르면, 상기 개시된 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 하이브리도마 세포가 제공된다.

일부 실시형태에 따르면, 하이브리도마는 6개의 상보성 결정 영역(CDR) 서열들을 포함하는 단일클론 항체를 생성할 수 있다: (i) 서열: GFDFSRYW(서열 번호 4) 또는 RYWMT(서열 번호 80)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 갖는 경쇄 CDR3; (ii) 서열 EYTMH(서열 번호 83)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 갖는 경쇄 CDR3; 또는 (iii) 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 갖는 경쇄 CDR3.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편은 세포독성 모이어티, 방사성 모이어티 또는 식별 가능한 모이어티에 부착될 수 있다.

또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 PVR을 높은 친화성 및 특이성으로 인지하는 활성 성분, 적어도 하나의 항체, 항체 단편 또는 이의 컨쥬게이트, 및 선택적으로 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 희석제, 염 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은, (i) 서열 번호 2의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 10의 경쇄 가변 영역을 갖는, 본원에서 4E5(PVR.07로도 표시됨)로서 식별되는 항체; (ii) 서열 번호 18의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 26의 경쇄 가변 영역을 갖는, 본원에서 7D4(PVR.01로도 표시됨)로서 식별되는 항체; 및 (ii) 서열 번호 34의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 42의 경쇄 가변 영역을 갖는, 본원에서 5B9(PVR.09로도 표시됨)로서 식별되는 항체로부터 선택되는 단일클론 항체가 결합하는 인간 PVR 단백질 내의 에피토프에 결합할 수 있는 단일클론 항체 또는 이의 단편을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 6개의 CDR들을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 항체 단편을 포함한다: (i) 서열: GFDFSRYW(서열 번호 4) 또는 RYWMT(서열 번호 80)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 갖는 경쇄 CDR3; (ii) 서열 EYTMH(서열 번호 83)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 갖는 경쇄 CDR3; 또는 (iii) 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 갖는 경쇄 CDR3.

일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열 번호 2, 서열 번호 69, 서열 번호 18, 서열 번호 73, 서열 번호 34 및 서열 번호 77로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열 번호 10, 서열 번호 71, 서열 번호 26, 서열 번호 75, 서열 번호 42 및 서열 번호 79로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

특정한 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열 번호 2 또는 서열 번호 69로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 10 또는 서열 번호 71로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 단편을 포함한다.

특정한 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열 번호 18 또는 서열 번호 73으로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 26 또는 서열 번호 75로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 단편을 포함한다.

특정한 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 서열 번호 34 또는 서열 번호 77로 표시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 42 또는 서열 번호 79로 표시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단일클론 항체 또는 이의 단편을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 인간 PVR을 인지하는 적어도 2개의 항체들의 조합, 또는 항체 단편을 포함한다.

보다 다른 실시형태에 따르면, 약제학적 조성물은 본 발명에 따른 PVR에 특이적으로 결합하는 하나의 mAb 또는 단편, 및 상이한 항원, 예컨대 세포-수용체, 종양 항원 또는 면역조절 단백질에 특이적으로 결합하는 하나의 mAb 또는 단편을 포함한다.

또한, PVR이 NK 세포 상에 발현된 TIGIT에 결합하는 것을 저해함으로써 NK 세포독성을 회복시키는 데 사용하기 위한, 본 발명에 따른 적어도 하나의 항체, 항체 단편 또는 항체 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.

일부 실시형태에 따르면, 항체, 항체 단편 또는 항체 컨쥬게이트는, 인간 PVR이 T-세포 상에 발현된 TIGIT에 결합하는 것을 저해할 수 있다.

일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 암 면역요법 또는 면역 반응의 증강에 사용하기 위한 것이다.

암은 PVR을 발현하는 임의의 암일 수 있다. 일부 실시형태에 따르면, 암은 PVR을 과발현한다.

본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 암은 전이성 암이다. 일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 피험자에서 전이의 형성 또는 분포를 저해하거나, 전이의 총 수를 감소시키는 데 사용하기 위한 것이다.

본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 암은 흑색종, 유방암, 난소암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 자궁경부암, 신장암, 폐암, 갑상선암, 전립선암, 뇌암, 콩팥 암, 인후암, 후두암종, 방광암, 간암, 섬유육종, 자궁내막세포암, 신경교아종, 육종, 골수종, 백혈병 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 암은 고형암이다. 일부 특정한 실시형태에 따르면, 고형암은 흑색종(피부), 폐암, 결장암, 유방암, 자궁암 및 콩팥암으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에 따르면, 암은 유방암, 폐암 및 지방육종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 실시형태에 따르면, 암은 혈액암이다. 일부 실시형태에 따르면, 혈액암은 골수종 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 골수증식성 질병, 다발성 골수종, 또는 골수이형성 증후군이다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다. 소정의 실시형태에 따르면, 암은 백혈병이다. 특정한 실시형태에 따르면, 암은 급성 골수종 백혈병(AML)이다.

일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 것이다.

일부 실시형태에 따르면, 바이러스 감염은 감염된 세포의 표면 상의 PVR을 통해 표적 세포에 결합하는 바이러스에 의해 유발된다.

일부 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 혈관신생-관련 질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 것이다. 소정의 실시형태에 따르면, 혈관신생-관련 질병 또는 장애는 암, 눈의 세포 증식성 질병(안과 질병), 망막 장애 및 염증성 질병으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

보다 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 정의된 단일클론 항체 또는 항체 단편을 사용함으로써, 인간 PVR이 적어도 하나의 리간드에 결합하는 것을 저해하는 방법을 제공한다.

부가적인 양태에 따르면, 본 발명은 치료적 유효량의 상기 정의된 단일클론 항체, 항체 단편 또는 항체 컨쥬게이트를 면역 반응의 증강이 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 피험자에서 면역 반응을 증강시키는 방법을 제공한다.

보다 다른 양태에 따르면, 본 발명은, 인간 PVR을 높은 친화성 및 특이성으로 인지하고 인간 PVR이 이의 리간드에 결합하는 것을 저해할 수 있는 적어도 하나의 항체, 항체 단편 또는 이의 컨쥬게이트를 포함하는 치료적 유효량의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료 방법을 제공한다.

일부 실시형태에 따르면, 투여되는 약제학적 조성물 내의 항체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: (i) 서열 번호 2로 표시된 중쇄 가변 영역 내에 함유된 CDR 서열 및 서열 번호 10으로 표시된 경쇄 가변 영역 내에 함유된 CDR 서열을 포함하는 단일클론 항체; (ii) 서열 번호 18로 표시된 중쇄 가변 영역 내에 함유된 CDR 서열 및 서열 번호 26으로 표시된 경쇄 가변 영역 내에 함유된 CDR 서열을 포함하는 단일클론 항체; 또는 (iii) 서열 번호 34로 표시된 중쇄 가변 영역 내에 함유된 CDR 서열 및 서열 번호 42로 표시된 경쇄 가변 영역 내에 함유된 CDR 서열을 포함하는 단일클론 항체.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 투여되는 약제학적 조성물 내의 단일클론 항체는 하기를 포함한다: 중쇄 CDR1은 GFDFSRYW(서열 번호 4) 및 RYWMT(서열 번호 80)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하며; 중쇄 CDR2는 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 포함하며; 중쇄 CDR3은 서열: PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 포함하며; 경쇄 CDR1은 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 포함하며; 경쇄 CDR2는 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 포함하고; 경쇄 CDR3은 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 포함한다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

또 다른 특정한 실시형태에 따르면, 투여되는 약제학적 조성물 내의 단일클론 항체는 하기를 포함한다: 중쇄 CDR1은 서열 EYTMH(서열 번호 83)를 포함하며; 중쇄 CDR2는 서열: GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 포함하며; 중쇄 CDR3은 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 포함하며; 경쇄 CDR1은 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 포함하며; 경쇄 CDR2는 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 포함하고; 경쇄 CDR3은 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 포함한다.

또 다른 특정한 실시형태에 따르면, 투여되는 약제학적 조성물 내의 단일클론 항체는 하기를 포함한다: 중쇄 CDR1은 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 포함하며; 중쇄 CDR2는 서열: EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 포함하며; 중쇄 CDR3은 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 포함하며; 경쇄 CDR1은 서열: KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 포함하며; 경쇄 CDR2는 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 포함하고; 경쇄 CDR3은 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 포함한다.

본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 치료적 유효량은 피험자에서 종양 크기 및 전이 수의 저하를 초래한다.

일부 실시형태에 따르면, 암 치료 방법은 적어도 하나의 부가적인 항암요법을 투여하거나 수행하는 단계를 포함한다. 소정의 실시형태에 따르면, 부가적인 항암요법은 수술, 화학요법, 방사선요법 또는 면역요법이다.

일부 실시형태에 따르면, 암 치료 방법은 인간 PVR을 높은 친화성 및 특이성으로 인지하는 단일클론 항체 및 부가적인 항암제의 투여를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 부가적인 항암제는 면역 조절제, 활성화된 림프구 세포, 키나제 저해제 및 화학치료제로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 실시형태에 따르면, 부가적인 면역 조절제는, 인간 PVR 이외의 항원에 결합하는 항체, 항체 단편 또는 항체 컨쥬게이트이다.

일부 실시형태에 따르면, 부가적인 면역 조절제는 면역 체크포인트 분자에 대한 항체이다. 일부 실시형태에 따르면, 부가적인 면역 조절제는 인간 프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 PD-L2, 암배아 항원-관련 세포 접착 분자 1(CEACAM1), 림프구 활성화 유전자 3(LAG3), CD137, OX40(CD134로도 지칭됨), 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR), TIGIT 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역 체크포인트 분자에 대한 항체이다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 항암제는 에르비툭스, 시타라빈(cytarabine), 플루다라빈(fludarabine), 플루오로우라실, 머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 겜시타빈, 빈크리스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 카르무스틴(carmustine), 로무스틴(lomustine), 클로람부실(chlorambucil), 사이클로포스파미드, 시스플라틴, 카르보플라틴, 이포스파미드, 메클로레타민(mechlorethamine), 멜팔란(melphalan), 티오테파, 다카바진(dacarbazine), 블레오마이신, 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신(idarubicin), 미토마이신, 미톡산트론, 플리카마이신(plicamycin), 에토포사이드, 테니포사이드(teniposide) 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 항암제는 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 저해제이다. 일부 실시형태에 따르면, EGFR 저해제는 세툭시맙(Cetuximab)(에르비툭스®), 파니투무맙(Panitumumab)(벡티빅스(Vectibix)®) 및 네시투무맙(necitumumab)(포르트라짜(Portrazza)®)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, EGFR 저해제는 세툭시맙(에르비툭스®)이다.

본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 피험자는 인간 피험자이다.

본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 사용자는 면역 공동저해성 수용체의 활성 또는 발현을 하향조절하는 작용제의 사용을 추가로 포함한다.

본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 면역 세포는 T 세포이다.

본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 면역 공동저해성 수용체는 PD-1, TIGIT, DNAM-1, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, CD96, BY55, LAIR1, SIGLEC10 및 2B4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따른 항체를 사용하여 PVR이 TIGIT에 결합하는 것을 조절하는 단계를 포함하는, 면역계 기능 및/또는 활성의 조절 방법을 제공한다.

일 양태에 따르면, 본 발명은 CD155를 엔트리(entry) 수용체로서 이용하는 바이러스의 바이러스 감염을 이를 필요로 하는 피험자에서 예방하거나 치료하는 방법을 제공하며, 이러한 방법은 치료적 유효량의 본원에 기재된 항 PVR 단일클론 항체를 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에 따르면, 바이러스는 폴리오 바이러스, 콕사키 바이러스, 아데노 바이러스 및 인간 결핍 바이러스(HIV)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

보다 다른 양태에 따르면, 본 발명은 혈관신생-관련 질병 또는 장애의 치료 방법을 제공한다. 소정의 실시형태에 따르면, 혈관신생-관련 질병 또는 장애는 암, 눈의 세포 증식성 질병(안과 질병), 망막 장애 및 염증성 질병으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 암 치료 방법은 혈관신생을 저해함으로써 피험자에서 전이의 형성, 성장 또는 확산을 예방하거나 감소시키는 단계를 포함한다.

일 양태에 따르면, 본 발명은 피험자에서 암 또는 감염성 질병을 진단하거나 예후하는 방법을 제공하며, 이러한 방법은 본원에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 항체를 사용하여 상기 피험자의 생물학적 시료 내에서 PVR의 발현 수준을 확인하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 추가로, PVR의 발현을 확인하거나 정량화하는 방법을 추가로 포함하며, 이러한 방법은 생물학적 시료를 항체 또는 항체 단편과 접촉시키는 단계 및 복합체 형성 수준을 측정하는 단계를 포함하며, 여기서 항체 또는 항체 단편은 (i) 서열: GFDFSRYW(서열 번호 4) 또는 RYWMT(서열 번호 80)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 갖는 경쇄 CDR3; (ii) 서열 EYTMH(서열 번호 83)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 갖는 경쇄 CDR3; 또는 (iii) 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 갖는 경쇄 CDR3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 확인 및 정량화 방법은 시험관내 또는 생체외에서 수행될 수 있거나, PVR의 발현과 연관된 질환을 진단하는 데 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 항체는 또한, 스크리닝 방법을 설정하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 효소-연결 면역흡착 검정(ELISA), 또는 방사성면역 검정(RIA)이, 분비된 폴리펩타이드 또는 세포-연관된 폴리펩타이드의 수준을 당업계에 공지된 항체 및 방법을 사용하여 측정하기 위해 구축될 수 있다.

일부 실시형태에 따르면, PVR의 존재를 검출하거나 정량화하는 방법은

i. 시료를, PVR에 특이적인 항체, 또는 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 이의 항체 단편과 함께 인큐베이션하는 단계;

ii. 결합된 PVR을 검출 가능한 프로브를 사용하여 검출하는 단계

를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 이러한 방법은 추가로,

iii. (ii)의 양을, 공지된 양의 PVR을 함유하는 참조 시료로부터 수득된 표준 곡선과 비교하는 단계; 및

iv. 시료 내 PVR의 양을 표준 곡선으로부터 계산하는 단계

를 포함한다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 시료는 체액이다.

일부 실시형태에 따르면, 이러한 방법은 시험관내 또는 생체외에서 수행된다.

(i) 서열: GFDFSRYW(서열 번호 4) 또는 RYWMT(서열 번호 80)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 갖는 경쇄 CDR3; (ii) 서열 EYTMH(서열 번호 83)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 갖는 경쇄 CDR3; 또는 (iii) 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 갖는 중쇄 CDR1, 서열: EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)를 갖는 중쇄 CDR2, 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 갖는 중쇄 CDR3, 서열: KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 갖는 경쇄 CDR1, 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 갖는 경쇄 CDR2, 및 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 갖는 경쇄 CDR3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 생물학적 시료에서 PVR의 발현을 측정하기 위한 키트가 또한, 제공된다.

일 양태에 따르면, 본 발명은 암 검출용 키트를 제공하며, 전단적 키트는 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 이의 단편을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 본 발명은, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편 또는 컨쥬게이트를 사용하여 피험자 유래의 시료에서 PVR의 발현 또는 활성을 확인하는 단계, 및 PVR의 발현 또는 활성을 PVR 발현 또는 활성의 참조 양과 비교하는 단계를 포함하는, 면역-관련 질병 또는 증식성 질병을 진단하거나, 중증도를 평가하거나 단계화(staging)하는 방법을 제공한다. 상기 참조 양은 정상적인 피험자, 동일한 피험자이긴 하지만 상이한 단계의 질병에 있는 피험자로부터 취해진 시료로부터 수득될 수 있거나, 대규모의 피험자 집단의 임상 데이터로부터 확인된다.

본 발명의 추가의 실시형태들 및 적용 가능성의 전체 범위는 이하에 주어진 상세한 설명으로부터 명확해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 구체적인 실시예가 본 발명의 바람직한 실시형태를 가리키기는 하지만, 본 발명의 사상 및 범위 내에서 다양한 변화 및 변형들이 이러한 상세한 설명으로부터 당업자에게 명확해질 것이기 때문에 예시로서만 주어질 뿐임을 이해해야 한다.

도 1a 내지 1c는 PVR mRNA 발현 수준(지시된 같이 높거나 낮음)과 생존율 간의 상관관계를 도시하는 그래프이다. 상관관계는 폐암(도 1a), 유방암(도 1b) 및 지방육종(도 1c)에 대해 측정되었다. mRNA 발현의 데이터 세트는 GEO 부위로부터 수득되었고, bioprofiling.de 사이트를 사용하여 하기와 같이 분석되었다: 폐암에 대해 GEO 데이터세트 ID: GSE31210, 유방암에 대해 GEO 데이터세트 ID: GSE25055 및 지방육종에 대해 GEO 데이터세트 ID: GSE30929.
도 2는 면역 세포 및 종양 세포 상에서의 수용체 발현의 개략도이다. TIGIT는 많은 면역 세포들(예를 들어 T 세포) 상의 공동저해성 수용체에 관한 것이며; DNAM-1(CD226로도 명명됨)은 많은 면역 세포들(예를 들어 T 세포) 상의 활성화 수용체에 관한 것이며; Fc 수용체는, NK 세포뿐만 아니라 호중구 및 대식세포를 포함한 골수 세포 상에서 주로 발현되는 강한 활성화 수용체에 관한 것이며; PVR은 많은 종양 세포들에 의해 발현되는, TIGIT에 대한 저해성 리간드에 관한 것이고(DNAM-1보다 더 약하게 결합함); 넥틴-2는 많은 종양 세포들에 의해 발현되는, DNAM-1에 대한 활성화 리간드에 관한 것이다(TIGIT에 의한 미미한 인지(marginal recognition)). 본 발명에 따른 항-PVR의 결합은 이중 효과를 보여준다: 1) Fc 수용체를 통해 종양 세포의 사멸화 증강; 및 2) TIGIT와의 상호작용을 차단함으로써 면역 세포의 활성화 증가.
도 3a 내지 3d는 발생된 4개의 항-PVR 항체들의 FACS 분석을 도시하는 그래프이다. 종양 세포주에 대한 TIGIT-Fc의 직접적인 결합을 차단하는 데 있어서 항체의 효능이 나타나 있다. 도 3a는 비-차단성 항-PVR 항체(항-PVR mAb 항체 2G3으로서 hPVR.17로도 명명됨)를 예시하고 있다. 도 3b 내지 3d는 발생된 항체들 중 3개, 즉 각각 5B9(hPVR.09로도 명명됨), 7D4(hPVR.01로도 명명됨) 및 4E5(hPVR.07로도 명명됨)가 TIGIT-Ig 결합의 차단에 의해 나타난 바와 같이 항-PVR 차단형 mAb임을 보여준다. 하이브리도마 액(soup)(5 μl/웰)이 HepG2 세포에 첨가되었다. TIGIT-Fc는 2 μg/웰에서 20 μg/ml의 최종 농도까지 사용되었고, 세포 결합된 TIGIT의 수준은, 형광 표지된 항-Fc Ab를 첨가한 후 FACS에 의해 측정되었다. 채워진 히스토그램은 항-Fc 시약에 의한 백그라운드 염색을 도시하고 있다.
도 4는, 항-PVR mAb 항체 7D4(hPVR.01로도 명명됨)를 이용한 PVR-TIGIT 상호작용의 차단이 어떻게 인간 세포주 MDA-MB-231(유방 선암종)의 NK 세포 사멸화를 증강시키는지 보여주는 그래프이다. 특이적인 사멸화는 표적 세포로부터의 [35S]--메티오닌이 분비를 기반으로 계산된다. 대조군(Ctrl)은 비-관련 마우스 IgG이다. P 값 = 0.0056.
도 5는, 항-PVR mAb 4E5(hPVR.07로도 명명됨)를 이용한 PVR-TIGIT 상호작용의 차단이 인간 암 세포주 HepG2(간세포암종)의 NK 세포 사멸화를 증강시킴을 도시하는 그래프이다. 없음 - mAb가 없는 경우의 HepG2의 사멸화; 항-PVR 4E5 - 마우스 항-PVR 4E5mIgG1을 사용한 HepG2의 사멸화(인간 Fc 수용체의 활성화는 없음); 항-PVR 4e5hIgG1 - 항-PVR 4E5-hIgG1을 사용한 HepG2의 사멸화(인간 Fc 수용체의 활성화), 에르비툭스(P.C) - 양성 대조군 mAb 에르비툭스(항-EGFR). 모든 mAb들은 10 μg/ml에서 사용되었다. P 값: 항-PVR 4E5 - 0.04, 항-PVR 4e5hIgG1 - 0.000746 및 에르비툭스(양성 대조군) - 0.003219.
도 6a 내지 6o는, 인간 종양 세포주가 PVR 및 넥틴-2를 발현함을 도시하는 그래프이다. 흑색종 세포(도 6a 내지 e), 유방암 세포(도 6f 내지 h), 결장직장 세포(도 6i), 신장 세포(도 6j), 폐암 세포(도 6k), 전립선암 세포(도 6l), 뇌종양 세포(도 6m) 및 간세포암종 세포(도 6n 내지 o)는 모두 PVR 및 넥틴-2를 발현한다. mAb는 0.2 μg/웰로 사용되었다: 상업적인 항-넥틴-2 mAb 및 항-PVR mAb 4E5(hPVR.07로도 명명됨).
도 7a 내지 7c는, PVR이 주요 TIGIT 리간드임을 도시하는 FACS 분석 그래프이다. 도 7a는, HepG2 세포(인간 간세포암종 세포)가 PVR 및 넥틴-2를 발현함을 예시한다. 도 7b는, 이들 세포가 넥틴-2를 또한 발현한다는 사실에도 불구하고, 정제된 항-PVR mAb 4E5(hPVR.07로도 명명됨)(0.15 μg)가 TIGIT-Ig(2 μg/ml) 결합을 거의 완전히(97% 초과) 차단함을 예시한다. 도 7c는, CHO 세포가 h넥틴-2를 높은 수준으로 발현함을 예시한다. 도 7d는, 모든 PVR mAb들에 의한, 도 7c에서와 동일한 CHO 세포의 염색의 결여를 보여주며, 이는 항-PVR mAb에 의한 넥틴-2의 직접적인 인지가 존재하지 않으며 따라서 도 7b에 나타난 TIGIT 결합의 차단이 넥틴-2의 결합에 의해서는 설명될 수 없으며, 그보다는 직접적인 PVR 차단의 결과임을 의미한다.
도 8a 내지 8c는 인간 PVR에 대한 모든 항-PVR mAb들의 유사한 결합 효능을 도시하고 있다. 모든 3개의 차단형 클론들은 내인성 PVR HepG2 세포(도 8a) 및 과발현된 hPVR B16-hPVR 세포(도 8b) 둘 다에 대해 유사한(10% 미만의 차이) 결합을 발생시킨다. 결합은 또한, 인간 PVR과 93%의 유사성을 가진 PVR 단백질을 발현하는 아프리카 그린 원숭이 유래의 Vero 세포주를 사용하여 검사되었다(도 8c). 이 경우, 상이한 Ab들은 상이한 염색 강도를 보여주었다. 각각의 mAb는 모든 경우들에서 0.2 μg으로 사용되었다.
도 9는, 본 발명의 항-PVR 항체가 캐닌(canine) PVR을 인지하지 않음을 도시하는 그래프이다. 인간 TIGIT-Fc(10 μg/ml)는 캐닌 MDCK 세포주에 강하게 교차 반응성이고 결합한다. 어떠한 PVR mAb도 이들 세포에 결합할 수 없었으며, 이는 이들이 캐닌 PVR을 인지하지 않음을 제시한다.
도 10a 내지 10d는 넥틴-2가 TIGIT에 의해서가 아니라 DNAM-1에 의해 우선적으로 결합됨을 도시하고 있다. PVR 또는 넥틴2 중 어느 하나를 과발현하는 세포가, 지시된 항체 농도를 사용하여 염색되었다. 도 10a는 넥틴2 발현 세포에 대한 TIGIT-Fc의 결합을 예시하며; 도 10b는 넥틴-2 발현 세포에 대한 DNAM-FC의 결합을 예시한다. 도 10c는 PVR 발현 세포에 대한 TIGIT의 결합을 예시한다. 도 10d는 PVR 발현 세포에 대한 DNAM-1의 결합을 예시한다.
도 11은 T 세포 증식에 미치는 항-PVR 항체의 효과를 보여준다. 인간 PBMC는 CFSE 표지되었으며, 지시된 항체의 존재 하에 표적 세포와 함께 인큐베이션되었다. 결과는 대조군과 비교하여 배수 증가된 증식으로서 제시된다. 이러한 결과는 총 10명의 건강한 공여자로부터 7개의 풀링된(pooled) 실험들이다. P 값: mAb 4E5에 대해 - 0.000241, mAb 5B9에 대해 - 1.96E^-05, 항 PD-1에 대해 - 0.016303, 항 CTLA4에 대해 - 0.000171, 및 4E5hIgG1에 대해 - 0.008176.
도 12는 T 세포 증식에 미치는 항-PVR 항체와 다른 항체의 조합 효과를 보여준다. 인간 PBMC는 CFSE 표지되었으며, 지시된 항체 조합의 존재 하에 표적 세포와 함께 인큐베이션되었다. 결과는 대조군과 비교하여 배수 증가된 증식으로서 제시된다. 이러한 결과는 12명의 건강한 공여자들을 사용하여 7개의 독립적인 실험들이다. P 값: 항 PD1+항 CTLA - 47.54E^-03, 항 PD-1+4E5 - 7.02E^-02, 항 PD-1+5B9 - 1.11E^-04, 항 CTLA4+4E5 - 1.37E^-03, 항 CTLA4+5B9 - 5.47E^-06.
도 13은 CD8 T 세포 증식에 미치는 항-PVR 항체의 특이적인 효과를 도시하고 있다. 인간 PBMC는 CFSE 표지되었으며, 지시된 항체의 존재 하에 표적 세포(A549)와 함께 인큐베이션되었다. CD8 양성 세포는 배양물 내에서 9일 내지 12일 후, FACS에 의해 계수되었다. 결과는 대조군과 비교하여 배수 증가된 증식으로서 제시된다. 이러한 결과는 건강한 PBMC 공여자들을 사용하여 2개의 독립적인 실험들이다.
도 14는 상이한 항체들을 이용한 유도 후, CD4 세포에 대한 CD8 세포의 비율을 도시하고 있다. 인간 PBMC는 CFSE 표지되었으며, 지시된 항체의 존재 하에 표적 세포(A549)와 함께 인큐베이션되었다. 세포는 배양물 내에서 9일 내지 12일 후 계수되었다. 결과는 총 2명의 건강한 공여자들의 2개의 풀링된 실험들이다.
도 15는 NK 탈과립화에 미치는 항-PVR 항체의 효과를 보여준다. 인간 NK 세포는 지시된 항체의 존재 하에 MDA-MB-231 세포(삼중 음성 유방암 세포주)와 함께 인큐베이션되었다. 결과는 5명의 상이한 건강한 NK 세포 공여자들에서 수행된 7개의 독립적인 실험들을 대표한다. P 값: PVR4E5 - 0.005063, PVR5B9 - 0.00374, PVR7D4 - 0.019448, PVR4E5-hIgG1 - 2.03E^-05, PVR5B9-hIgG1 - 1.45E^-05, PVR7D4-hIgG1 5.8E^-05.
도 16a 내지 16d는 면역 세포의 부재 하에 종양 세포 생존율에 미치는 항-PVR 항체의 효과를 보여준다. A549 세포(도 16a), U373 세포(도 16b), HCT116 세포(도 16c) 및 Mel-624(도 16d)의 생존율은 24시간 동안 50 마이크로그램/ml의 지시된 mAb의 존재 하에 MTT 세포 생존율 검정을 사용하여 검사되었다. 유의성은 싱글 테일드 스튜던트 TIEST에 의해 계산되며, *<0.05, ** <0.03, 및 ***< 0.02.

본 발명은 인간 폴리오바이러스 수용체(PVR)에 특이적인 단일클론 항체를 제공한다. 본 발명은 또한, 치료적 작용제로서의 mAb의 생성 및 용도를 제공한다. 특히, 본 발명의 mAb는 면역 세포의 항종양 사멸화 활성을 회복시키고 증대시키기 위해 그리고 진단적 시약으로서 단독으로 또는 다른 작용제와 조합하여 사용될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "항원"은 항체 형성을 이끌어 내고 항체에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 항원은 1개 초과의 에피토프를 가질 수 있다. 상기 지칭되는 특이적인 결합은, 항원이 이의 상응하는 항체와 고도로 선택적인 방식으로 반응할 것이고 다른 항원에 의해 유발될 수 있는 다른 많은 항체들과는 반응하지 않을 것임을 가리키는 것으로 의미된다. 본 발명의 일부 실시형태에 따르면, 항원은 PVR 단백질이다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "PVR"은 CD155(분화 클러스터 155)로도 공지된 폴리오바이러스 수용체를 지칭한다. PVR은 N-종결 신호 서열, 3개의 세포외 면역글로불린(Ig)-유사 도메인들, 막관통 도메인 및 세포질 꼬리를 가진 막관통 당단백질이다. 이는 대략 80 kDa의 분자 크기 및 3개의 Ig-유사 도메인들, 구체적으로 최외곽 V-유사 도메인 및 후속해서 2개의 C2-유사 도메인들로 구성된 구조를 가진다. 본 발명에 따른 예시적인 PVR은 GenBank 수탁 번호: NP_001129240.1, NP_001129241.1, NP_001129242.2 및 NP_006496.4로 표시되어 있다. 이들 폴리오바이러스 수용체는 세포외 도메인 서열을 공유하며, 따라서 본 발명의 친화성 결합 모이어티에 의해 표적화될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "항원 결정기" 또는 "에피토프"는 특정한 항체와 특이적으로 반응하는 항원 분자의 영역을 지칭한다. 에피토프로부터 유래된 펩타이드 서열은, 동물을 면역화하고 부가적인 다중클론 또는 단일클론 항체를 생성하기 위해 당업계에 공지된 방법을 적용하여 단독으로 또는 담체 모이어티와 함께 사용될 수 있다. 에피토프로부터 유래된 단리된 펩타이드는 항체를 검출하기 위해 진단 방법에 사용될 수 있다.

친화성은 공지된 방법, 예컨대 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 정량화될 수 있고(문헌[Scarano S, Mascini M, Turner AP, Minunni M. Surface plasmon resonance imaging for affinity-based biosensors. Biosens Bioelectron. 2010, 25: 957-66]에 기재됨), 예를 들어 해리 상수 Kd를 사용하여 계산될 수 있으며, 따라서 더 낮은 Kd는 더 높은 친화성을 반영함을 주지해야 한다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편은 hPVR 내의 에피토프에 결합한다. 구체적으로, 항체는 NP_006496.4로 표시된 바와 같이 PVR의 아미노산 1-343 내의 에피토프에 결합한다.

항체 또는 면역글로불린은 이황화 결합에 의해 함께 연결된 2개의 중쇄들 및 2개의 경쇄들을 포함하며, 각각의 경쇄는 "Y"자형 구성에서 각각의 중쇄에 이황화 결합에 의해 연결되어 있다. 항체의 단백질가수분해성 절단에 의해 Fv(단편 가변) 및 Fc(단편 결정질) 도메인이 수득된다. 항원 결합 도메인인 Fab는, 폴리펩타이드 서열이 달라지는 영역을 포함한다. 용어 F(ab')₂는 이황화 결합에 의해 함께 연결된 2개의 Fab' 암(arm)들을 나타낸다. 항체의 중심축은 Fc 단편으로 명명된다. 각각의 중쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인(V_H)을 갖고, 후속해서 다수의 불변 도메인(C_H)들을 가진다. 각각의 경쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인(V_L) 및 다른쪽 말단에 불변 도메인(C_L)을 가지며, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬되고, 경쇄 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)과 정렬된다. 경쇄 및 중쇄의 각각의 쌍의 가변 도메인은 항원 결합 부위를 형성한다. 경쇄 및 중쇄 상의 도메인들은 동일한 일반 구조를 가지며, 각각의 도메인은 상보성 결정 영역(CDR 1-3)으로 공지된 3개의 초가변 도메인들에 의해 접합된 4개의 프레임 워크 영역들을 포함하고, 이들의 서열은 상대적으로 보존된다. 이들 도메인은 항원 결합 부위의 특이성 및 친화성에 기여한다.

주어진 중쇄 또는 경쇄 가변 서열 유래의 CDR 식별 또는 확인은 전형적으로, 당업계에 공지된 몇몇 방법들 중 하나를 사용하여 수행된다. 예를 들어, 이러한 확인은 Kabat(문헌[Wu T.T and Kabat E.A., J Exp Med, 1970; 132:211-50]) 및 IMGT(문헌[Lefranc M-P, et al., Dev Comp Immunol, 2003, 27:55-77])에 따라 수행된다.

용어 "서열을 갖는 CDR" 또는 유사한 용어가 사용되는 경우, 이는, CDR이 명시된 서열을 포함하는 옵션, 및 또한 CDR이 명시된 서열로 구성되는 옵션을 포함한다.

항체의 항원 특이성은 초가변 영역(VHR), 즉 함께 항원 결합 부위를 형성하는 경쇄 및 중쇄 둘 다의 독특한 CDR 서열을 기반으로 한다.

중쇄의 이소타입(감마, 알파, 델타, 입실론 또는 뮤)은 면역글로불린 부류(각각 IgG, IgA, IgD, IgE 또는 IgM)를 결정한다. 경쇄는 2개의 이소타입들(카파, κ 또는 람다, λ) 중 하나이다. 2개의 이소토프(isotope)들은 모든 항체 부류들에서 확인된다.

용어 "항체"는 가장 광범위한 의미로 사용되고, 요망되는 생물학적 활성, 즉 인간 PVR에의 결합을 나타내기에 충분할 정도로 긴 단일클론 항체(전장 또는 온전한 단일클론 항체를 포함), 다중클론 항체, 다가 항체 및 항체 단편을 포함한다.

항체 또는 본 발명에 따른 항체는 온전한 항체, 예컨대 다중클론 항체 또는 단일클론 항체(mAb), 뿐만 아니라 이의 단백가수분해성 단편, 예컨대 Fab 또는 F(ab')₂ 단편을 포함한다. 단일 사슬 항체가 또한, 본 발명의 범위 내에 포함된다.

항체 단편

"항체 단편"은, 일반적으로 온전한 항체의 항원 결합 부위를 포함하고 항원에 결합하는 능력을 보유하는, 온전한 항체의 단지 일부를 포함한다. 본 정의에 의해 포함된 항체 단편의 예는, (i) VL, CL, VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fab 단편; (ii) CH1 도메인의 C-종결부에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fab 단편인 Fab' 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편; (iv) VH 및 CH1 도메인, 및 CH1 도메인의 C-종결부에 하나 이상의 시스테인 잔기를 갖는 Fd' 단편; (v) 항체의 단일 암(arm)의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편; (vi) VH 도메인으로 구성된 dAb 단편(문헌[Ward et al., Nature 1989, 341, 544-546]); (vii) 단리된 CDR 영역; (viii) F(ab')₂ 단편으로서, 힌지(hinge) 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편들을 포함하는 2가 단편; (ix) 단일 사슬 항체 분자(예를 들어 단일 사슬 Fv; scFv)(문헌[Bird et al., Science 1988, 242, 423-426; 및 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1988, 85,5879-5883]); (x) 동일한 폴리펩타이드 사슬 내에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 2개의 항원 결합 부위들을 갖는 "다이아바디(diabody)"(예를 들어, EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌[Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 6444-6448] 참조); (xi) 상보성 경쇄 폴리펩타이드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역들을 형성하는, 탠덤(tandem) Fd 분절들의 쌍(VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 "선형 항체"(문헌[Zapata et al. Protein Eng., 1995, 8, 1057-1062]; 및 미국 특허 5,641,870)을 포함한다.

항체 단편의 생성을 위해 다양한 기술들이 개발되어 왔다. 전형적으로, 이들 단편은 온전한 항체의 단백질가수분해성 절단을 통해 유도되었다(예를 들어 문헌[Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992) 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985)] 참조). 그러나, 이들 단편은 현재 재조합 숙주 세포에 의해 직접적으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이로부터 직접적으로 회수되고, 화학적으로 커플링되어 F(ab')₂ 단편을 형성할 수 있다(문헌[Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)]). 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')₂ 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 항체 단편의 다른 생성 기술은 당업자에게 명확할 것이다. 다른 실시형태에서, 선택되는 항체는 단일 사슬 Fv 단편(scFv)이다.

단일 사슬 항체는 항원 결합 능력을 가지며, 면역글로불린 경쇄 및 중쇄의 가변 영역, 즉, 연결된 V_H-V_L 또는 단일 사슬 Fv(scFv)와 상동성이거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 단일 사슬 복합 폴리펩타이드일 수 있다. 단일 사슬 항체의 생성 기술(미국 특허 4,946,778)은 PVR에 대한 단일 사슬 항체를 생성하기 위해 개조될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "단일클론 항체"(mAb)는 실질적으로 상동성인 항체들의 집단으로부터 수득되는 항체를 지칭하며, 즉, 해당 집단을 포함하는 개별 항체들은, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단일클론 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원에 대한 것이다. 더욱이, 상이한 결정기(에피토프)들에 대한 상이한 항체들을 전형적으로 포함하는 다중클론 항체 조제물과는 대조적으로, 각각의 단일클론 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대한 것이다. 수식어 "단일클론"이 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생성을 필요로 하는 것으로 간주되어서는 안 된다. mAb는 당업자에게 공지된 방법에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일클론 항체는 처음에 문헌[Kohler et al., Nature 1975, 256, 495]에 의해 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 4,816,567 참조). 단일클론 항체는 또한, 예를 들어 문헌[Clackson et al., Nature 1991, 352, 624-628 또는 Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.

기능적인 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 유전자들의 신속한 식별 및 클로닝을 통해 단일클론 항체로부터 유래되는 재조합 1가 항원 결합 분자의 디자인 및 개발, 및 재조합 박테리아에서의 발현을 위해 최적화된 합성 DNA 서열의 디자인 및 클로닝은 문헌[Fields et at. 2013, 8(6):1125-48]에 기재되어 있다.

본 발명의 mAb는 IgG, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하여 임의의 면역글로불린 부류일 수 있다. mAb를 생성하는 하이브리도마는 시험관내 또는 생체내에서 배양될 수 있다. 높은 역가(titer)의 mAb는, 개별 하이브리도마 유래의 세포가 프리스틴-프라임드(pristine-primed) Balb/c 마우스 내에 복강내 주사되어 요망되는 mAb를 고농도로 함유하는 복수 유체를 생성하는 생체내 생성에 의해 수득될 수 있다. mAb는 당업자에게 잘 공지된 방법을 사용하여 이러한 복수 유체로부터, 또는 배양 상층액으로부터 정제될 수 있다.

본 발명의 항체의 초가변 영역과 특이적으로 면역반응성인 항-이디오타입(idiotype) 항체가 또한, 이해된다.

본 발명은 경쇄의 3개의 CDR 및 중쇄의 3개의 CDR을 포함하는 항원 결합 도메인(ABD)을 포함하는 단일클론 항체 또는 항체 단편을 제공하며, 여기서 상기 ABD는, (i) 아미노산 서열 서열 번호 69를 포함하는 중쇄 가변 사슬 및 아미노산 서열 서열 번호 71을 포함하는 경쇄 가변 사슬(본원에서 4E5 또는 hPVR.07로서 식별됨); (ii) 아미노산 서열 서열 번호 73을 포함하는 중쇄 가변 사슬 및 아미노산 서열 서열 번호 75를 포함하는 경쇄 가변 사슬(본원에서 7D4 또는 hPVR.01로서 식별됨); 또는 (iii) 아미노산 서열 서열 번호 77을 포함하는 중쇄 가변 사슬 및 아미노산 서열 서열 번호 79를 포함하는 경쇄 가변 사슬(본원에서 5B9 또는 hPVR.09로서 식별됨)을 포함하는 단일클론 마우스 항체의 ABD와 적어도 90%의 서열 동일성 또는 유사성을 가진다. 이러한 항체는 4E5, 7D4 또는 5B9의 상응하는 ABD와 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96, 적어도 97, 적어도 98, 적어도 99%의 서열 동일성 또는 유사성 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 ABD 도메인을 가질 수 있다.

서열 동일성은 2개의 상이한 서열들 사이에서 정확하게 일치하는 아미노산 또는 뉴클레오타이드의 양이다. 서열 유사성은, 동일한 아미노산인 것으로 확인되는, 아미노산의 보존적 치환을 가능하게 한다.

본 발명은 또한, 본 발명에 따른 항체 분자의 보존적 아미노산 변이체를 제공한다. 코딩되는 단백질의 전반적인 분자 구조를 보존하는 본 발명에 따른 변이체가 또한 제조될 수 있다. 개시된 단백질 생성물을 포함하는 개별 아미노산의 특성을 고려하면, 일부 합리적인 치환은 당업자에 의해 인지될 것이다. 아미노산 치환, 즉, "보존적 치환"은 예를 들어 관련된 잔기의 극성, 전하, 용해성, 소수성, 친수성 및/또는 양친매성 성질에서의 유사성을 기반으로 수행될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "항체 유사체"는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해 또 다른 항체로부터 유래되는 항체를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "항체 변이체"는 본 발명의 항체를 포함하는 임의의 분자를 지칭한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 또 다른 화학적 엔터티에 연결된 융합 단백질이 항체 변이체로 간주된다.

항체 서열의 유사체 및 변이체가 또한, 본 출원의 범위 내에 포함된다. 이들로는, 서열 내 아미노산의 보존적 및 비-보존적 치환, 삽입 및 결실 등이 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다. 이러한 변형 및 결과적인 항체 유사체 또는 변이체는, 이들이 인간 PVR에 대한 항체의 결합을 부여하거나 심지어 개선하는 한, 본 발명의 범위 내에 포함된다.

당업자에게 공지된 바와 같은 아미노산의 보존적 치환은 본 발명의 범위 내에 포함된다. 보존적 아미노산 치환은 하나의 아미노산을, 동일한 유형의 작용기 또는 곁사슬을 가진 또 다른 아미노산, 예를 들어 지방족, 방향족, 양전하성, 음전하성 아미노산으로 대체하는 것을 포함한다. 이들 치환은 경구 생체이용률, 침투성 및 특정한 세포 집단으로의 표적화, 면역원성 등을 증강시킬 수 있다. 당업자는, 코딩되는 서열 내의 단일 아미노산 또는 작은 퍼센트의 아미노산들을 변경하거나, 첨가하거나 결실시키는, 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질 서열에 대한 개별 치환, 결실 또는 첨가가, 이러한 변경이 아미노산을 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환시키는 경우 "보존적으로 변형된 변이체"임을 인지할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산들을 제공하는 보존적 치환 표는 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 당업계에 공지된 하나의 표에 따르면, 하기 6개의 군들은 각각, 서로에 대해 보존적 치환인 아미노산을 함유한다:

1) 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T);

2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);

3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);

4) 아르기닌(R), 라이신(K);

5) 이소루신(I), 루신(L), 메티오닌(M), 발린(V); 및

6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W).

변이체 사슬 서열은 특정한 프라이머를 사용하여 시퀀싱 방법에 의해 확인된다는 것이 강조되어야 한다. 하나의 동일한 서열 상에 이용되는 상이한 시퀀싱 방법들은 특히 서열 종결부 내에서 기술적 문제 및 상이한 프라이머들로 인해 약간 상이한 서열들을 초래할 수 있다. 따라서, 항-PVR 가변 사슬 서열의 상이한 변이체들은 출원에 따라 명시된다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "항체의 항원 결합 부위를 갖는 분자" 및 "항원 결합 단편"은, 임의의 이소타입이며 임의의 동물 세포주 또는 미생물에 의해 발생되는 온전한 면역글로불린 분자, 뿐만 아니라 이의 항원 결합 반응성 분획, 예컨대 비제한적으로 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')₂ 단편, 이의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 부위, Fab 미니-항체(예를 들어 WO 93/15210, 미국 특허 출원 08/256,790, WO 96/13583, 미국 특허 출원 08/817,788, WO 96/37621, 미국 특허 출원 08/999,554 참조), 및 이러한 반응성 분획을 혼입하는 단일 사슬 항체, 뿐만 아니라 이러한 항체 반응성 분획이 물리적으로 삽입된 임의의 다른 유형의 분자를 포함하고자 한다. 이러한 분자는 비제한적으로 효소적 절단, 펩타이드 합성 또는 재조합 기술을 포함하는 임의의 공지된 기술에 의해 제공될 수 있다.

본원에서 단일클론 항체는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 종으로부터 유래되거나 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 한편, 사슬(들)의 나머지가 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체, 뿐만 아니라 이러한 항체의 단편을, 이들이 요망되는 생물학적 활성을 나타내는 한, 포함한다(미국 특허 4,816,567; 및 문헌[Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)]). 또한, 상보성 결정 영역(CDR) 그래프팅은 친화성 또는 특이성을 포함하는 항체 분자의 소정의 특성들을 변경하기 위해 수행될 수 있다. CDR 그래프팅의 비제한적인 예는 미국 특허 5,225,539에 개시되어 있다.

키메라 항체는, 상이한 부위들이 상이한 동물 종들로부터 유래된 분자, 예컨대 뮤린 mAb 유래의 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 분자이다. 실질적으로 인간 항체(수여자 항체로 명명됨) 유래의 가변 영역 프레임워크 잔기 및 실질적으로 마우스 항체(공여자 항체로 명명됨) 유래의 CDR을 가진 항체가 또한, 인간화된 항체로 지칭된다. 키메라 항체는 주로, 적용 시 면역원성을 감소시키고 생성 수율을 증가시키는 데 사용되는데, 예를 들어 뮤린 mAb가 하이브리도마로부터 더 높은 수율 및 인간에서 더 높은 면역원성을 가지는 경우, 인간/뮤린 키메라 mAb가 사용된다. 키메라 항체들 및 이들의 생성 방법들은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어 PCT 특허 출원 WO 86/01533, WO 97/02671, WO 90/07861, WO 92/22653 및 미국 특허 5,693,762, 5,693,761, 5,585,089, 5,530,101 및 5,225,539).

일부 특정한 실시형태에 따르면, 단일클론 항체는 키메라 단일클론 항체이다.

일부 실시형태에 따르면, 키메라 항체는 인간-유래 불변 영역을 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 키메라 항체의 인간 불변 영역은 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 및 인간 IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다.

특정한 실시형태에 따르면, 키메라 단일클론 항체 또는 이의 단편은 인간 IgG1 하위유형의 불변 영역 하위부류를 포함한다.

특정한 실시형태에 따르면, (i) 서열 번호 4 또는 80, 6 또는 81, 8 또는 82, 12, 14 및 16; (ii) 서열 번호 20 또는 83, 22, 24, 28, 30 및 32; 및 (iii) 서열 번호 36 또는 84, 38, 40, 44 또는 85, 46 및 48로 이루어진 군으로부터 선택되는 6개 CDR의 세트를 포함하는, PVR을 인지하는 키메라 단일클론 항체가 제공된다.

약물학

약제학적 및 의약 제제에서, 활성 작용제는 바람직하게는, 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체(들) 및 선택적으로 임의의 다른 치료적 성분과 함께 이용된다. 담체(들)는 제제의 다른 성분과 융화성이며 이의 수여자에게 과도하게 유해하지 않다는 의미에서 약제학적으로 허용 가능해야 한다. 활성 작용제는 상기 기재된 바와 같이 요망되는 약물학적 효과를 달성하기에 효과적인 양, 및 요망되는 노출을 달성하기에 적절한 양으로 제공된다.

전형적으로, 항체의 항원 결합 부위를 포함하거나, 펩타이드-모방체를 포함하여 또 다른 폴리펩타이드를 포함하는 본 발명의 항체 및 이의 단편 및 컨쥬게이트는 치료적 용도를 위한 멸균 식염수 용액 내에 현탁될 것이다. 약제학적 조성물은 대안적으로, 활성 성분(항체의 항원 결합 부위를 포함하는 분자)의 방출을 조절하거나 환자의 시스템 내에서 이의 존재를 연장시키기 위해 제제화될 수 있다. 다수의 적합한 약물 전달 시스템들이 공지되어 있고, 예를 들어 이식 가능한 약물 방출 시스템, 하이드로겔, 하이드록시메틸셀룰로스, 마이크로캡슐, 리포좀, 마이크로에멀젼, 마이크로스피어 등을 포함한다. 조절형 방출 조제물은 본 발명에 따른 분자와 복합체화되거나 흡착시키기 위해 중합체의 사용을 통해 제조될 수 있다. 예를 들어, 생체적합성 중합체는 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트)의 매트릭스 및 스테아르산 이량체와 세바르산의 폴리무수물 공중합체의 매트릭스를 포함한다. 이러한 매트릭스로부터의 본 발명에 따른 분자, 즉 항체 또는 항체 단편의 방출 속도는 분자의 분자량, 매트릭스 내의 분자의 양 및 분산되는 입자의 크기에 따라 다르다.

이러한 발명의 약제학적 조성물은 임의의 적합한 수단, 예컨대 경구, 국소, 비내, 피하, 근육내, 정맥내, 동맥내, 관절내, 병변내, 종양내 또는 비경구 투여될 수 있다. 통상적으로, 정맥내(i.v.) 투여는 항체의 전달에 사용된다.

당업자는, 치료적 유효량의 본 발명에 따른 분자가 특히, 투여 스케쥴, 투여되는 분자의 단위 용량, 분자가 다른 치료적 작용제와 조합하여 투여되는지의 여부, 환자의 면역 상태 및 건강, 투여되는 분자의 치료적 활성, 혈액 순환에서의 이의 지속성, 및 치료 의사의 판단에 따라 다를 것임을 알게 될 것이다.

본원에 사용되는 바와 같이 용어 "치료적 유효량"은 포유류에서 질병 또는 장애의 치료에 효과적인 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우, 약물의 치료적 유효량은 암세포의 수를 감소시키며; 종양 크기를 감소시키며; 말초 기관 내로의 암세포 침윤을 저해하거나(즉, 어느 정도까지 서행시키고 바람직하게는 중단시키거나); 종양 전이를 저해하거나(즉, 어느 정도까지 서행시키고 바람직하게는 중단시키거나); 종양 성장을 어느 정도까지 저해하거나; 및/또는 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 경감시킬 수 있다. 약물이 기존의 암세포의 성장을 방지하고/거나 사멸시킬 수 있는 한, 이러한 약물은 세포증식억제성(cytostatic) 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법의 경우, 생체내에서의 효능은 예를 들어, 생존 기간, 질병 진행까지의 시간(TPP; time to disease progression), 반응 속도(RR; response rate), 반응 기간 및/또는 삶의 질을 평가함으로써 측정될 수 있다.

본 발명에 의한 치료에 의해 개선될 수 있는 암으로는, 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병 또는 림프구성 악성종양 등이 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다. 이러한 암의 보다 특정한 예로는, 편평세포암, 폐암(소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평암종을 포함), 복막암, 간세포암, 위(gastric) 또는 복부(stomach) 암(위장암을 포함), 췌장암, 신경교아종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장 또는 콩팥 암, 간암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간암종 및 다양한 유형의 두경부암들, 뿐만 아니라 B-세포 림프종(저등급/소낭 모양 비호지킨 림프종 NHL); 작은 림프구성(SL) NHL; 중간 등급/소낭 모양 NHL; 중간 등급 미만성 NHL; 고등급 면역모세포성 NHL; 고등급 림프아구성 NHL; 고등급 작은 비-절단형 세포 NHL; 벌키 질병(bulky disease) NHL; 외투 세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom's Macroglobulinemia)을 포함); 만성 림프구성 백혈병(CLL); 급성 림프아구성 백혈병(ALL); 털세포 백혈병; 만성 골수모구성 백혈병; 및 이식후 림프구증식성 장애(PTLD), 뿐만 아니라 모종증(phakomatosis)과 연관된 비정상 혈관 증식, 부종(예컨대 뇌종양과 연관된 것) 및 메이그 증후군(Meigs's syndrome) 등이 있다. 바람직하게는, 암은 유방암, 결장직장암, 직장암, 비소세포폐암, 비호지킨 림프종(NHL), 콩팥세포암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종, 카포시 육종, 암양종 암종, 두경부암, 흑색종, 난소암, 중피종 및 다발성 골수종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 치료에 의해 개선될 수 있는 암성 질환은 전이성 암을 포함한다.

다른 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 PVR 과발현을 특징으로 하는 암의 치료에 사용되기 위한 것이다. PVR 과발현과 관련된 암 유형은 암 게놈 아틀라스(TCGA; The Cancer Genome Atlas)와 같은 공지된 데이터 베이스를 사용하여 식별될 수 있다. 소정의 실시형태에 따르면, 암은 부신피질 암종(ACC), 혐색소성 콩팥 세포 암종(KICH), 간의 간세포암종(LIHC), 결장 및 직장 선암종(COAD, READ), 췌관 선암종(PAAD), 크롬친화성 세포종 & 곁신경절종(PCPG), 유두상 신장 암종(KIRP), 폐 선암종(LUAD), 두경부 편평세포 암종(HNSC), 전립선 선암종(PRAD), 자궁 내막양 자궁내막 암종(UCEC), 자궁경부암(CESC), 피부 흑색종(SKCM), 중피종(MESO), 요로상피세포 방광암(BLCA), 투명 세포 신장 암종(KIRC), 폐 편평세포 암종(LUSC), 자궁 암육종(UCS), 육종(SARC), 난소 장액성 낭선종(OV), 유두상 갑상선 암종(THCA), 다형성교아종(GBM), 유방암(BRCA), 저등급 신경교종(LGG) 및 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBC)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

활성 성분으로서의 본 발명의 분자는, 잘 공지된 바와 같이 약제학적으로 허용 가능하고 활성 성분과 융화성인 부형제 내에서 용해, 분산 또는 혼합된다. 적합한 부형제는 예를 들어, 물, 식염수, 인산염 완충 식염수(PBS), 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 및 이들의 조합이다. 다른 적합한 담체는 당업자에게 잘 공지되어 있다. 또한, 요망되는 경우, 조성물은 습윤 또는 유화 작용제, pH 완충제와 같은 보조 성분을 미량으로 함유할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 항신생물성 조성물과 함께 투여될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "치료"는 치료적 치료 및 방지적 또는 예방적 조치를 둘 다 지칭한다. 치료가 필요한 대상은, 이미 장애를 갖고 있는 대상뿐만 아니라 장애가 예방되어야 하는 대상을 포함한다.

용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는, 포유류에서의 생리학적 질환을 지칭하거나 기재한다. 암의 예로는, 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병 등이 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다. 이러한 암의 보다 특정한 예로는, 흑색종, 폐암, 갑상선암, 유방암, 결장암, 전립선암, 간암, 방광암, 콩팥암, 자궁경부암, 췌장암, 백혈병, 림프종, 골수종, 난소암, 자궁암, 육종, 담관암 또는 자궁내막암 등이 있다.

일부 실시형태에 따르면, 암 치료 방법은 적어도 하나의 부가적인 항암제의 투여를 포함하는 치료 섭생의 일부로서 약제학적 조성물의 투여 단계를 포함한다.

일부 실시형태에 따르면, 항암제는 항대사물질, 유사분열 저해제, 탁산(taxane), 토포이소머라제 저해제, 토포이소머라제 II 저해제, 아스파라기나제, 알킬화제, 항종양성 항생제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 항대사물질은 시타라빈(cytarabine), 글루다라빈(gludarabine), 플루오로우라실, 머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 티오구아닌, 겜시타빈 및 하이드록시우레아로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 유사분열 저해제는 빈크리스틴, 빈크리스틴 및 비노렐빈으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 토포이소머라제 저해제는 토포테칸 및 이레노테칸(irenotecan)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 알킬화제는 부술판(busulfan), 카르무스틴(carmustine), 로무스틴(lomustine), 클로람부실(chlorambucil), 사이클로포스파미드, 시스플라틴, 카르보플라틴, 이포사미드(ifosamide), 메클로레타민(mechlorethamine), 멜팔란(melphalan), 티오테파, 다카바진(dacarbazine) 및 프로카바진(procarbazine)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 항종양성 항생제는 블레오마이신, 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신(idarubicin), 미토마이신, 미톡산트론 및 플리카마이신(plicamycin)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에 따르면, 토포이소머라제 II는 에토포사이드 및 테니포사이드(teniposide)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 부가적인 항암제는 베바시주맙(bevacizumab), 카르보플라틴, 사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드, 겜시타빈 하이드로클로라이드, 토포테칸 하이드로클로라이드, 티오테파 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

본 발명에 따른 단일클론 항체는 적어도 하나의 항암제와의 조합된 요법의 일부로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에 따르면, 부가적인 항암제는 면역 조절제, 활성화된 림프구 세포, 키나제 저해제 또는 화학치료제이다.

일부 실시형태에 따르면, 항암제는 효능제(agonist) 또는 길항제이든지 간에, 면역 체크포인트 분자에 대한 항체와 같은 면역 조절제이다.

체크포인트 면역요법 차단은 암 치료의 흥미로운 새로운 베뉴(venue)인 것으로 입증되었다. 면역 체크포인트 경로는, 생리학적 조건 하에 자가관용을 유지하고 면역계에 의한 손상으로부터 조직을 보호하기 위해 협력하여 작용하는 다양한 공동자극성 및 저해성 분자들로 구성된다. 종양은 면역계를 회피하기 위해 소정의 체크포인트 경로들을 이용한다. 따라서, 이러한 경로의 저해는 유망한 항암 치료 전략으로서 출현하였다.

항-세포독성 T 림프구 4(CTLA-4) 항체 이필리무맙(ipilimumab)(2011년에 승인됨)은, 암 환자의 치료에 이득을 보여준 최초의 면역치료적 작용제였다. 항체는 T 세포에의 항원 제시 동안 저해 신호를 방해한다. 항-프로그래밍된 세포 사멸 1(PD-1) 항체 펨블로리주맙(Pembrolizumab)(2014년에 승인됨)은 T 세포에 의해 발현되는 PD-1 수용체의 음성 면역 조절 신호전달을 차단한다. 부가적인 항-PD-1 작용제는 비소세포폐암(NSCLC)의 치료를 위해 2014년에 규제 승인을 받기 위해 파일링되었다. 적극적인 연구가 현재, 많은 다른 면역 체크포인트들, 특히 CEACAM1, NKG2A, B7-H3, B7-H4, VISTA, CD112R, 림프구 활성화 유전자 3(LAG3), CD137, OX40(CD134로도 지칭됨) 및 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR)를 조사하고 있다.

일부 특정한 실시형태에 따르면, 면역 조절제는 CTLA-4를 저해하는 항체, 항-인간 프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1(PD-1), PD-L1 및 PD-L2 항체, 활성화된 세포독성 림프구 세포, 림프구 활성화제, CEACAM에 대한 항체, TIGIT에 대한 항체 및 RAF/MEK 경로 저해제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다. 일부 특정한 실시형태에 따르면, 부가적인 면역 조절제는 PD-1에 대한 mAb, PD-L1에 대한 mAb, PD-L2에 대한 mAb, CEACAM1에 대한 mAb, CTLA-4에 대한 mAb, TIGIT에 대한 mAb, 인터루킨 2(IL-2) 또는 림포카인-활성화된 살해(LAK) 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 실시형태에 따르면, 부가적인 항암제는 화학치료제이다. 본 발명에 따른 항체와 함께 또는 개별적으로 투여될 수 있을 화학요법제는 비제한적으로 미톡산트론, 토포이소머라제 저해제, 스핀들 포이즌 빈카(spindle poison vinca): 빈크리스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈(탁솔), 파클리탁셀, 도세탁셀; 알킬화제: 메클로레타민(mechlorethamine), 클로람부실(chlorambucil), 사이클로포스파미드, 멜팔란(melphalan), 이포스파미드; 메토트렉세이트; 6-머캅토퓨린; 5-플루오로우라실, 시타라빈(cytarabine), 겜시타빈; 포도필로톡신: 에토포사이드, 이리노테칸, 토포테칸, 다카바진(dacarbazin); 항생제: 독소루비신(아드리아마이신(adriamycin)), 블레오마이신, 미토마이신; 니트로소우레아: 카르무스틴(BCNU), 로무스틴(lomustine), 에피루비신(epirubicin), 이다루비신(idarubicin), 다우노루비신; 무기 이온: 시스플라틴, 카르보플라틴; 인터페론, 아스파라기나제; 호르몬: 타목시펜, 류프롤리드(leuprolide), 플루타미드(flutamide) 및 메게스트롤 아세테이트를 포함하여 당업계에서 항암 활성을 나타내는 것으로 공지된 임의의 이러한 작용제를 포함할 수 있다.

일부 실시형태에 따르면, 화학치료제는 알킬화제, 항대사물질, 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 관련된 저해제, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxin), 항생제, L-아스파라기나제, 토포이소머라제 저해제, 인터페론, 백금 배위 착화합물, 안트라세네디온(anthracenedione) 치환된 우레아, 메틸 하이드라진 유도체, 부신피질 억제제, 아드레노코티코스테로이드, 프로게스틴, 에스트로겐, 안티에스트로겐, 안드로겐, 안티안드로겐 및 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체로부터 선택된다. 또 다른 실시형태에 따르면, 화학치료제는 5-플루오로우라실(5-FU), 류코보린(LV; leucovorin), 이레노테칸(irenotecan), 옥살리플라틴, 카페시타빈(capecitabine), 파클리탁셀 및 도세탁셀로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나 이상의 화학치료제가 사용될 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 암 치료에 사용되거나 면역 반응의 증강에 사용되기 위한 것이다.

용어 "면역 반응의 증강"은 면역계의 반응성을 증가시키고 이의 기억을 유도하거나 연장시키는 것을 지칭한다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 백신접종 시 면역계를 자극시키는 데 사용될 수 있다. 따라서, 일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 백신접종을 향상시키기 위해 사용될 수 있다.

소정의 실시형태에서, 암은 폐암, 갑상선암, 유방암, 결장암, 흑색종, 전립선암, 간암, 방광암, 콩팥암, 자궁경부암, 췌장암, 백혈병, 림프종, 골수종, 난소암, 자궁암, 육종, 담관암 및 자궁내막 세포암으로부터 선택된다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별 실시형태를 나타낸다.

일부 실시형태에 따르면, 적어도 하나의 본 발명에 따른 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제학적 조성물, 및 부가적인 면역 조절제 또는 키나제 저해제를 포함하는 약제학적 조성물은 개별 투여에 의해 암의 치료에 사용된다.

보다 다른 양태에 따르면, 본 발명은 치료적 유효량의 본 발명에 따른 단일클론 항체 또는 항체 단편을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 피험자에서 암의 치료 방법을 제공한다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "유효량"은, 피험자에게 투여 시 의도되는 치료적 효과를 가질 항체 단편의 단일클론 항체의 충분한 양을 지칭한다. 치료적 최종 결과를 달성하는 데 필요한 유효량은 예를 들어, 종양의 특정한 유형 및 환자의 질환의 중증도, 및 조합이 방사선과 추가로 공동 투여되는지의 여부를 포함하여 다수의 인자들에 따라 다를 수 있다. 본 발명의 맥락에서 활성 작용제의 유효량(용량)은 시간이 경과함에 따라 피험자에서 유익한 치료적 반응, 예컨대 비제한적으로 종양 성장의 저해, 종양 성장 속도의 감소, 종양 및 전이 성장의 예방 및 증강된 생존율을 발휘하기에 충분해야 한다.

본원에 기재된 조성물의 독성 및 치료적 효능은 세포 배양물 또는 실험 동물 내에서 표준 약제학적 절차에 의해, 예를 들어 주제 화합물에 대한 IC50(50% 저해를 제공하는 농도) 및 최대 관용 용량을 확인함으로써 확인될 수 있다. 이들 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는, 인간에 사용하기 위한 다양한 투여량들을 제제화하는 데 사용될 수 있다. 투여량은 다른 관련된 인자들 중에서도 특히, 이용되는 투약 형태, 선택되는 투약 섭생, 치료에 사용되는 작용제의 조성 및 이용되는 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 정확한 제제, 투여 경로 및 투여량은 환자의 질환의 측면에서 개별 의료진에 의해 선택될 수 있다. 치료되어야 하는 질환의 중증도 및 반응성에 따라, 투약은 또한, 서방성 조성물의 단일 투여일 수 있으며, 이때 치료 기간은 수일 내지 수주간, 또는 치유가 발휘되거나 질병 상태의 약화가 달성될 때까지 지속된다. 투여되는 조성물의 양은 당연하게도, 치료를 받는 피험자, 병의 중증도, 투여 방식, 처방 의료진의 판단 및 모든 다른 관련된 인자들에 따라 다를 것이다.

용어 피험자에게 성분, 화합물 또는 작용제를 "투여하는" 또는 "~의 투여"는 당업자에게 공지된 여러 가지 방법들 중 하나의 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 화합물 또는 작용제는 장내(enterally) 또는 비경구 투여될 수 있다. 장내는, 경구(per os), 설하 또는 직장내를 포함하여 위장관을 통한 투여를 지칭한다. 비경구 투여는 정맥내, 피부내, 근육내, 복강내, 피하, 안내(ocularly), 설하, 비내, 흡입, 척수내, 대뇌내 및 경피(예를 들어 피부관을 통한 흡수에 의해) 투여를 포함한다. 화합물 또는 작용제는 또한, 화합물 또는 작용제의 연장된, 느린 또는 조절된 방출을 제공하는 재충전 가능한 또는 생분해성 중합체성 디바이스 또는 다른 디바이스, 예를 들어 패치 및 펌프, 또는 제제에 의해 적절하게 도입될 수 있다. 투여는 또한, 예를 들어 1회, 복수회, 및/또는 하나 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다. 일부 실시형태에서, 투여는 자가 투여를 포함하여 직접 투여, 및 약물의 처방 행위를 포함하여 간접 투여를 둘 다 포함한다. 예를 들어 본원에 사용된 바와 같이, 환자에게 약물의 자가 투여 또는 또 다른 사람에 의해 약물 투여를 지시하고/거나 환자에게 약물의 처방전을 제공하는 의료진은 약물을 환자에게 투여하고 있다.

항체는 일반적으로, 0.1 내지 약 20 mg/kg 환자 체중, 보편적으로 약 0.5 내지 약 10 mg/kg, 종종 약 1 내지 약 5 mg/kg의 범위로 투여된다. 이러한 측면에서, 순환 반감기가 적어도 12시간, 바람직하게는 적어도 4일, 보다 바람직하게는 21일 이하인 항체를 사용하는 것이 바람직하다. 키메라 항체는 14일 내지 21일 이하의 순환 반감기를 갖는 것으로 예상된다. 일부 경우, 큰 로딩 용량을 투여한 후, 치료 기간에 걸쳐 주기적인(예를 들어 주 단위의(weekly)) 유지 용량을 투여하는 것이 유리할 수 있다. 항체는 또한, 서방성 전달 시스템, 펌프 및 연속 주입을 위한 다른 공지된 전달 시스템에 의해 전달될 수 있다.

용어 "약"은, 특정한 값에 대해 허용 가능한 오차 범위, 예를 들어 5% 또는 10% 이하가 추정되어야 함을 의미한다.

혈관신생

일 양태에 따르면, 본 발명은 혈관신생-관련 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다.

혈관신생은, 혈관 내피 세포가 증식하고, 절단하고(prune) 재구조화하여 기존의 혈관 네트워크로부터 새로운 혈관을 형성하는 중요한 세포적 사건이다. 혈관 공급의 발달이 정상적인 및 병리학적 증식 과정 및 염증에 필수적이라는 강력한 증거가 존재한다. 혈관 구획은 배아발생 동안 기관 발달 및 분화, 뿐만 아니라 상처 치유, 조직 복구 및 성인에서는 생식 기능에 필요하다.

혈관신생은 또한, 여러 가지 장애들, 예컨대 비제한적으로 종양, 증식성 망막병증, 연령-관련 황반 변성, 류마티스 관절염 및 건선의 발병에 연루된다. 혈관신생은 대부분의 원발성 종양들의 성장 및 이들의 후속적인 전이에 필수적이다. 종양은 1 내지 2 mm 크기까지 단순 확산에 의해 충분한 영양소 및 산소를 흡수할 수 있으며, 상기 크기 점에서 이들 종양의 추가의 성장은 혈관 공급의 정교화(elaboration)를 필요로 한다. 이러한 과정은 발아하는(sprouting) 새로운 혈관 모세관을 시작하기 위해 이웃 숙주 성숙한 혈관구조의 보충을 포함하는 것으로 생각되며, 이러한 새로운 혈관 모세관은 종양 덩어리 쪽으로 성장하고 후속해서 침윤한다. 또한, 종양 혈관신생은 신혈관혈성(neovascularization)을 촉진하기 위해 골수로부터의 순환하는 내피 전구 세포의 보충을 포함한다.

진단

나아가, 본 발명은 암의 진단 및 예후화 방법을 개시한다.

일 양태에 따르면, 본 발명은 피험자에서 암 또는 감염성 질병의 진단 및/또는 예후 방법을 제공하며, 이러한 방법은 본원에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 항체를 사용하여 상기 피험자의 생물학적 시료 내에서 PVR의 발현 수준을 확인하는 단계를 포함한다.

용어 "생물학적 시료"는 진단 또는 모니터링 검정에 사용될 수 있는, 유기체로부터 수득된 여러 가지 시료 유형들을 포함한다. 이러한 용어는 생물학적 기원의 혈액 및 다른 액체 시료, 고형 조직 시료, 예컨대 생검 표본, 또는 조직 배양물 또는 이로부터 유래된 세포 및 이의 자손을 포함한다. 부가적으로, 이러한 용어는 순환하는 종양 또는 다른 세포를 포함할 수 있다. 이러한 용어는 구체적으로는, 임상 시료를 포함하며, 추가로 세포 배양물, 세포 상층액, 세포 용해물, 혈청, 혈장, 소변, 양수, 눈 시료의 수양액(aqueous humour) 및 유리액(vitreous)을 포함하여 생물학적 유체 및 조직 시료 내의 세포를 포함한다. 이러한 용어는 또한, 확보 후 시약의 처리, 가용화, 또는 소정의 구성성분을 위한 농화(enrichment)와 같이 임의의 방식에 의해 조작된 시료를 포함한다.

PVR의 발현 수준의 확인은 본원에 기재된 바와 같은 표지된 항-PVR 항체에 의해 수행될 수 있다. 발현의 확인은 예를 들어 ELISA에 의해 수행될 수 있다.

본 발명의 방법은 추가로, 상기 발현 수준을 대조군 수준과 비교하는 단곌르 포함할 수 있다.

하기 실시예는 본 발명의 일부 실시형태들을 보다 완전히 예시하기 위해 제시된다. 이들은 본 발명의 범위를 어떠한 방식으로도 제한하는 것으로 간주되어서는 안 된다.

실시예

실험 절차

이제, 상기 상세한 설명과 함께 본 발명을 비제한적인 방식으로 예시하는 하기 실시예를 참조로 한다.

일반적으로, 본원에 사용되는 명명법 및 본 발명에 이용되는 실험 절차는 분자, 생화학, 미생물학 및 재조합 DNA 기술들을 포함한다. 이러한 기술은 당업계에 잘 공지되어 있다. 잘 공지된 절차에 관한 다른 일반적인 참조문헌들은 독자의 편의를 위해 이 문헌 전체에 제공되어 있다.

실시예 1. 높은 PVR 발현은 불량한 예후와 상관관계가 있다

PVR 및 넥틴-2는 저해성 수용체 TIGIT에 대한 리간드이다(도 2). 결과는, 높은 PVR 발현 수준이 폐암, 유방암 및 지방육종의 불량한 암 예후와 상관관계가 있음을 예시하고 있다(각각 도 1a 내지 1c). PVR의 GEO 발현은 bioprofiling.de를 사용하여 생존율과 상관관계가 있었으며, 관련된 데이터 세트는 ID: GSE31210, GSE25055, GSE30929이다. 더욱이 동일한 분석을 사용하여, 넥틴-2 발현은 대체로, 생존율에 대한 양성 마커이었다.

실시예 2. 항-PVR mAb의 발생 및 정제

항-PVR 항체를 발생시키기 위해, 재조합 단백질을 생성하였으며, 인간 PVR의 세포외 부분과 면역글로불린 G 담체의 인간 Fc 영역을 면역원으로서 조합한 hPVR-Fc를 정제하였다.

BALB/c 마우스에 완전 프론트 보조제(complete Freund's adjuvant) 중 50 ㎍의 면역원을 주사하고, 2주 후에 불완전 프론트 보조제 내에서 주사하였다. 2주 후, 항체 역가에 대해 혈청을 스크리닝하였다. 최상의 반응체(responder)(항-hPVR-Fc 항체의 역가에 대해 ELISA 검정에 의해 혈청을 모니터링하였음)에게 PBS 중 면역원을 이용하여 부스팅하였다. 3일 후, 비장 세포를 수합하고, 적혈구의 용해 후, SP2/0 세포와 융합하였다. 세포를, 하이브리도마 선별을 위해 하이폭산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 함유하는 20% RPMI 1640 배지 내에 접종하고, ELISA를 사용하여 mAb에 대해 스크리닝하였다. SP2/0 골수종 세포를 면역화된 마우스의 비장 세포와 융합함으로써 안정한 하이브리도마 세포주를 발생시켰다.

양성 결과물(hPVR-Fc를 인지하는 항체를 분비하는 세포주)들을 추가로 선별하여, 몇 가지 구별되는 특징들을 가질 생성물을 발달시켰다: a) 항체 생성 비용을 감축시키기 위한 높은 수율; b) 마우스와 인간 PVR 및 면역 세포 수용체의 몇 가지 다른 리간드들 사이의 교차 반응성의 결여; c) 살아 있는 세포의 표면 상에 발현된 본래의, 성숙한 인간 PVR 분자에 대한 강한 결합 능력(항체는, 상이한 기술들, 예를 들어 유세포분석, 웨스턴 블롯, ELISA에서 hPVR을 인지하는 입증된 능력을 가진 포괄적인 항-hPVR 단일클론 항체 풀(pool)로부터 선택되었음). 사실상, 인간 및 마우스 PVR들은 높은 수준의 상동성을 가지며, 인간 상동체(homologue)를 인지하는 마우스 단일클론 항체를 발생시키는 것이 쉽지 않다. 보다 중요하게는, 인간 PVR은 이의 세포외 영역 상에서 광범위하게 글리코실화된다. 이들 이유에서, 보편적인 항원(예컨대 이. 콜라이 유래의 항원)을 사용하여 본래의 단백질을 인지하는 항체를 발생시키는 것은 쉽지 않다.

본 발명자들은, 본래의 단백질인 인간 PVR을 밀접하게 모방하기 위해, 포유류 인간 배아 신장 293(HEK 293T) 세포 내에서 생성되고 본래의 조건 하에 면역친화성 크로마토그래피에 의해 정제된 분자인 hPVR-Fc 면역원을 사용하였다. 결론적으로, 발생된 항-hPVR mAb들의 풀로부터, 살아 있는 세포 상에서 본래의 인간 PVR 형태를 인지하는 대표적인 것들을 식별하였으며, 이는 치료 동안 인간 면역 세포 반응에 영향을 미칠 유도체를 발달시키기 위한 전제 조건이다.

4개의 항-PVR 항체들을 발생시켰다. 이들 중에서, 3개의 항체들은 차단형 항-PVR mAb, 즉 항체 5B9(hPVR.09로도 명명됨), 항체 7D4(hPVR.01로도 명명됨) 및 항체 4E5(hPVR.07로도 명명됨)이었다. 이들 항체들은 모두 TIGIT-Ig 결합을 차단한다(각각 도 3b 내지 3d에 예시되어 있음). TIGIT-Ig 결합을 차단하지 않는 제4 항체가 발생되었고, 2G3(hPVR.17로도 명명됨)으로 명명되었다(도 3a).

표면 플라즈몬 공명(SPR) Biosensor Biacore™ T100(GE Healthcare)을 사용하여, 항체와 hPVR 사이의 Koff, Kon 및 K_D를 확인하였다(표 1).

표 1. Biacore™에 의한 항체 친화성 측정

mAB	친화성
4E5	7.22E^-10
5B9	1.62E^-09
7D4	1.93E^-10

서열 번호 86(GenBank: AAA02914.1에 상응함)으로 표시된 인간 중쇄 불변 IgG1 영역을 포함하는 키메라 단일클론 항체를 상기 3개의 항체들로부터 당업계에 공지된 방법을 사용하여 생성하였다.

실시예 3. 항-PVR mAb를 이용한 PVR-TIGIT 상호작용의 차단은 인간 세포주의 NK 세포 사멸화를 증강시켰다

검정 12시간 전에, 표적 세포를 [35S]-메티오닌으로 표지하였다. 지시된 항체를 5 ㎍/ml의 최종 농도로 첨가하고, 표지된 표적(5000개 세포/웰)과 함께 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 검정을 96U자형 플레이트 내에서 RPMI 배지 내에서 37℃에서 5시간 동안 수행하였다. 표지된 표적을 효과기 NK 세포와 10:1 E:T 비율로 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 플레이트를 원심분리하고(1600 rpm, 5분, 4℃), 상층액(50 ㎕)을 수합한 다음, 불투명한 Opti-플레이트(Packard)로 옮겼다. 150 ㎕ 섬광 액체(Perkin Elmer)를 첨가하고, 마이크로 베타 β-계수기(Perkin Elmer)에 의해 분석하였다. 최대 표지화를, 100 ㎕의 0.1 N NaOH를 동일한 양의 표적(5000개/웰)에 첨가함으로써 확인하였다. 자발적 방출을, 표적 세포만 함유하는 웰에서 확인하였다. 최종의 특이적인 사멸화를 하기와 같이 계산하였다: ((방사성 판독 - 자발적 방출) / (최대 표지화 - 자발적 방출))*100 = 특이적인 사멸화. 도 4에 나타낸 바와 같이, NK 세포와 항-PVR mAb 7D4(hPVR.01로도 명명됨)의 배양은 인간 유방 선암종 세포주 MDA-MB-231의 NK 세포 사멸화를 (2배만큼) 증강시켰다.

실시예 4. 항-PVR mAb를 이용한 PVR-TIGIT 상호작용의 차단은 인간 암 세포주의 NK 세포 사멸화를 증강시켰다

검정 12시간 전에, 표적 세포를 [35S]-메티오닌으로 표지하였다. 지시된 항체를 5 ㎍/ml의 최종 농도로 첨가하고, 표지된 표적(5000개 세포/웰)과 함께 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 효과기 NK 세포와 함께 10:1 E:T 비율로 인큐베이션하였다. 검정을 96U자형 플레이트 내에서 RPMI 배지 내에서 37℃에서 5시간 동안 수행하였다. 인큐베이션 후, 플레이트를 원심분리하고(1600 rpm, 5분, 4℃), 상층액(50 ㎕)을 수합한 다음, 불투명한 Opti-플레이트(Packard)로 옮겼다. 150 ㎕ 섬광 액체(Perkin Elmer)를 첨가하고, 마이크로 베타 β-계수기(Perkin Elmer)에 의해 분석하였다. 최대 표지화를, 100 ㎕의 0.1 N NaOH를 동일한 양의 표적(5000개/웰)에 첨가함으로써 확인하였다. 자발적 방출을, 표적 세포만 함유하는 웰에서 확인하였다. 최종의 특이적인 사멸화를 하기와 같이 계산하였다: ((방사성 판독 - 자발적 방출) / (최대 표지화 - 자발적 방출))*100 = 특이적인 사멸화.

도 5에 나타낸 바와 같이, 항-PVR mAb 4E5(hPVR.07로도 명명됨)를 이용한 PVR-TIGIT 상호작용의 차단은 인간 암 세포주 HepG2(간세포암종)의 NK 세포 사멸화를 증강시킨다. 따라서, PVR의 차단은 표적 세포의 증강된 사멸화를 초래하는 것이 분명하다. 4E5의 인간 IgG 대응물(counterpart)을 mAb의 키메라 버전에 사용하였을 때, 사멸화가 더 증강된다. 사멸화는 양성 대조군(에르비툭스ⓒ)과 동등하다.

실시예 5. 인간 종양 세포주는 PVR 및 넥틴-2를 발현한다

종양 세포 상에서의 PVR 및 넥틴-2의 발현을 검사하기 위해, 상이한 종양 세포주들 상에서 이들 단백질의 발현 수준을, 항 PVR-4E5 Ab 및 항-넥틴-2 Ab(클론 TX-31)를 둘 다 2 ㎍/ml로 사용하여 FACS 분석에 의해 검사하였다. 도 6a 내지 6o에 나타낸 바와 같이, 다양한 인간 종양 세포주들은 PVR 및 넥틴-2를 발현한다. 구체적으로, 흑색종 세포(도 6a 내지 6e), 유방암 세포(도 6f 내지 6h), 결장직장 세포(도 6i), 신장 세포(도 6j), 폐암 세포(도 6k), 전립선암 세포(도 6l), 뇌종양 세포(도 6m), 및 간세포암종 세포(도 6n 내지 6o)가 모두 PVR 및 넥틴-2를 발현하는 것으로 나타나 있다.

실시예 6. PVR은 주요 TIGIT 리간드이다

도 7a 내지 7c는, PVR이 주요 TIGIT 리간드임을 나타낸다. 구체적으로, HepG2 세포(인간 간세포암종 세포)가 PVR 및 넥틴-2(도 7a)를 둘 다 발현하는 것으로 나타났다. HepG2 세포와 hPVR.07로도 명명된 정제된 항-PVR mAb 4E5(0.15 ㎍/웰)의 배양은, 이들 세포가 넥틴-2를 또한 발현한다는 사실에도 불구하고, TIGIT-Ig 결합(2 ㎍/ml)을 거의 완전히 차단하였다(도 7b). 도 7c 및 7d에 나타낸 바와 같이, 항-PVR mAb에 의한 넥틴-2의 직접적인 인지가 존재하지 않았다는 것이 분명하다.

실시예 7. 인간 및 영장류 PVR에의 mAb 클론의 결합

도 8a 내지 8c에 나타낸 바와 같이, 시험된 모든 항-PVR 항체 클론들은 FACS 분석을 사용하여 인간 PVR(hPVR)에 결합한다. 간략하게는, 세포를 트립신처리하고, 1개 웰 당 2*10⁵개 세포로 염색하기 위해 옮겼다. 지시된 항체를 얼음 상에서 30분 동안 첨가하였다. 모든 항체들을 2 ㎍/ml의 최종 농도로 사용하였다. 결합된 항-PVR Ab 검출을 항-마우스 IgG-647을 사용하여 수행하였다. 마우스 IgG1 카파를 음성 대조군으로서 사용하였다.

도 8a는, 내인성 hPVR이 HepG2 간세포암종 세포의 표면 상에서 FACS 염색에 의해 검출되었음을 예시한다. 도 8b에서, 뮤린 세포주 B16을 사용하였다. 뮤린 PVR 서열은 인간 종과 상이하고, 신호의 결여에 의해 알 수 있듯이 항-인간 PVR 항체에 의해 인지되지 않는다(좌측 패널). 전장 hPVR 단백질(NP_006496.4 아미노산 1-418)이 이들 세포에서 과발현되었을 때, 모든 3개의 클론들은 식별된 신호를 초래하였으며(우측 패널), 이는 이러한 염색이 인간 PVR 단백질들에 대한 이들 Ab의 특이적인 결합의 결과라는 주장을 추가로 지지한다.

PVR 아미노산 서열은 일부 종들에 걸쳐 보존된다. 인간 PVR의 아미노산 보존을 아프리카 그린 원숭이와 인-실리코(in-silico)에서 비교하였으며, 인간 PVR과 93%의 유사성을 갖는 것으로 확인되었다. 아프리카 그린 원숭이 Vero 세포의 FACS 염색은, 원숭이의 PVR이 모든 3개의 인간 mAb들에 의해 효율적으로 인지됨을 나타냈다(도 8c). 추가로, 이들 인간 항-PVR 항체는 개과(canine) 및 설치류, 예컨대 햄스터 또는 마우스 유래의 PVR을 인지하지 않는 것으로 확인되었다. 도 9는 개과 PVR 발현 MDCK 세포에 대한 FACS 분석을 보여준다. 알 수 있듯이, 항-인간 Ab들 중 어느 것도 양성 신호를 초래하지 않은 한편, PVR 발현 그 자체는 강한 TIGIT-Ig 신호에 의해 지지된다.

실시예 8. 넥틴-2는 DNAM-1에 의해 우선적으로 결합된다

TIGIT-Fc 및 DNAM-1-Fc를 도 10에서 지시된 농도로 사용하여, h넥틴-2를 과발현하는 세포: RPMI-8866 세포주(도 10a 및 10b), (또는 B16-hPVR 세포주(도 10c 및 10d)를 염색하였다. 결합된 융합 단백질 검출을 항-인간-IgG APC를 사용하여 수행하고, FACS에 의해 분석하였다.

PVR 결합에 대해, TIGIT-Fc에 의한 신호는 이전의 보고와 유사하게 DNAM-1-Fc와 2배 내지 4배 더 높았다(문헌[Yu. X et al., 2009, Nat Immunol., 10(1):48-57]). 동시에, DNAM-1-Fc에 대한 h넥틴-2의 결합은 TIGIT-Fc에 대한 이의 결합보다 2배 내지 10배 더 강하였으며, 이는 하나의 보고와 상충되지만(문헌[YYu. X et al 2009]), 또 다른 연구에 의해 확증된다(문헌[YZhu Y et al., 2016, J Exp Med., 8;213(2):167-76]). 종합하여, 결과는, DNAM-1이 넥틴-2 결합에 대한 우선적인 수용체임을 예시한다. 이에, PVR의 차단은 TIGIT의 저해성 신호전달을 방지할 것이며, 한편 DNAM-1에 의한 공동자극 신호전달을 가능하게 한다. DNAM-1은 이의 리간드를 갖고 있는 다른 세포에 대한 세포성 접착을 매개한다.

실시예 9. 항 PVR 항체는 T 세포 증식을 증강시킨다

T 세포 증식에 미치는 항 PVR mAb의 효과를 시험하기 위해, 인간 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC)를 카르복시플루오레세인 숙신이미딜 에스테르(CFSE)로 염색시키고, 4 ㎍/ml 농도의 항체의 존재 하에 표적 세포와 함께 인큐베이션하였다. CFSE 희석율을 배양물 내에서 5일 내지 9일 후 CD45 양성 세포 상에서 측정하였다. 도 11에 나타낸 바와 같이, 항 PVR 5B9 활성은 단일 작용제로서 PD-1 및 CTLA4 항체 활성을 능가한다. 또한, 인간 IgG1 불변 영역을 갖는 키메라 항 PVR 4E5hIgG1 클론은 이의 마우스 대응물보다 우수하였다. 다음, 항 PVR mAb와, T 세포 증식을 증강시키는 것으로 확인된 다른 항체의 조합된 효과를 검사하였다. 인간 PBMC를 카르복시플루오레세인 숙신이미딜 에스테르(CFSE)로 염색시키고, 4 ㎍/ml 농도의 항체의 존재 하에 표적 세포와 함께 인큐베이션하였다. CFSE 희석율을 배양물 내에서 5일 내지 9일 후 CD45 양성 세포 상에서 측정하였다. 결과는, PD-1 또는 CTLA-4와 조합된 경우 항-PVR 5B9의 증식 활성이 PD-1과 CTLA4의 조합의 활성을 능가함을 보여준다(도 12). 또한, 항-PVR 4E5와 CTLA-4의 조합의 활성은 PD-1과 CTLA4의 조합과 동등하다. 다음, CD8의 특이적인 유도를 검사하였다. 도 13에 나타낸 바와 같이, 항 PVR 항체 CD8 T 세포 증식 활성은 PD1의 활성을 능가한다. 또한, 항 PVR 5B9 항체의 유도 활성은 CTLA1을 능가한다. CD8/CD4 증식의 비율을 상이한 항체들에 대해 평가하였다(도 14). 항 PVR 5B9는 가장 높은 CD8/CD4 비율을 가졌다. 가변 중쇄 및 경쇄의 DNA 서열들을 사용하여, 인간 IgG1 이소타입 불변 도메인 및 불변 경쇄(CL) 인간 IgG 카파 도메인을 포함하는 키메라 항체를 구축하였다. 마우스 및 인간 키메라 대응물 항체에 의해 유도된 T-세포 증식을 CFSE 검정에 의해 측정하였다. 표 2에 나타낸 숫자는 대조군과 비교된 증식의 상대 수준을 나타낸다.

표 2. T 세포 증식에 미치는 항 PVR 항체의 효과의 요약.

클론의 명칭	Fc 유형	T 세포 증식에 미치는 효과(CFSE)	T 세포 증식 세포 계수에 미치는 효과
4E5	마우스 IgG1	198%	320%
4E5	인간 IgG1	275%	353%
5B9	마우스 IgG1	300%	410%
5B9	인간 IgG1	270%	364%
7D4	마우스 IgG1	141%	260%
7D4	인간 IgG1	280%	360%

다음, NK 탈과립화에 미치는 PVR-항체 효과를 검사하였다. 탈과립화 동안, NK 세포 내의 세포용해성 과립이 방출되고, 세포용해성 과립 표면 상에 존재하는 리소좀-연관 막 단백질-1(LAMP-1, CD107a)이 세포 표면으로 수송되고, 항체 결합을 위해 접근 가능하게 된다. 이러한 마커는 활성화된 NK 세포의 식별을 가능하게 한다. NK 세포들을 항 PVR 항체(마우스 및 이들의 키메라 인간 대응물 항체)와 더불어 5개의 상이한 표적 세포들과 함께 인큐베이션하였다. 탈과립화를 항-CD107a 항체를 사용하여 평가하였다.

표 3. NK 탈과립화 활성에 미치는 항-PVR 항체의 효과.

		표적 암세포
클론	Fc 유형	MDA-MB-231	HepG2	MV-411	Mel-624*	A549
4E5	마우스 IgG1	125%	150%	150%	120%	-
4E5	인간 IgG1	305%	260%	160%	145%	260%
5B9	마우스 IgG1	132%	160%	150%	120%	-
5B9	인간 IgG1	300%	260%	220%	145%	240%
7D4	마우스 IgG1	124%	160%	150%	115%	-
7D4	인간 IgG1	220%	200%	130%	120%	165%

* Mel 624에서 hPVR의 발현은 낮으며, 따라서 상대 효과가 낮다.

표 3 및 도 15에 나타낸 바와 같이, 모든 항체들은 NK 탈과립화 활성을 보여주었으며, 여기서 키메라 항체들은 이들의 상응하는 마우스 항체와 비교하여 유의하게 더 높은 활성을 가졌다.

실시예 10. 항 PVR 항체는 면역 세포의 부재 하에 종양 세포의 생존율을 감소시킨다.

A549, U373, HCT116 및 Mel-624 세포의 생존율을 50 마이크로그램/ml의 상이한 항-PVR mAb들의 존재 하에 24시간 동안 MTT 세포 생존율 검정을 사용하여 검사하였다. 도 16a 내지 16d 및 표 4에 나타낸 바와 같이, 5B9 mAb에 의한 PVR 차단은 mIgG와 비교하여 20% 내지 40%의 생존력을 유의하게 감소시켰다.

표 4. 종양 세포의 생존율에 미치는 항-PVR 항체의 효과.

mIgG 처리된 세포와 비교하여, 몇 가지 표적 세포주들에 걸쳐 24시간 이내에 사멸한 세포의 퍼센트이다.

mAb	MDA-MB-231	HCT-116	Mel-624	A549
4E5	12%	20%	-	25%
5B9	20%	22%	32%	25%
7D4	17%	27%	12%	25%

실시예 11. 인간화된 마우스 모델에서 인간 종양에 미치는 항-PVR 항체의 생체내 효과 - 단기간 인간화

항체의 항종양 효능을 생체내에서 연구한다. 인간 암의 저해에서 본원에 기재된 항체의 효능을 추정하기 위해, 항체를 인간 기원의 종양 및 림프구를 둘 다 조합한 모델에서 연구한다. NOD scid 감마(NSG) 마우스에게 hPBMC를 그래프팅시켜, 면역-적격을 회복시키고, 인간 암세포를 시도하였다(challenge). 예정된 시점/종양 크기에서, 마우스에게 본 발명에 따른 항 인간 PVR 항체를 처리하고, 종양 시도 후 상이한 시점들에서 다수의 용량들로 투여하였다. 동일한 실험을 키메라 항-PVR 항체를 이용하여 수행하였다. 종양 성장 곡선 및 체중을 3x/주(week)로 측정하고, 마우스를 안락사시킬 때, 상이한 기관들에서 TIL 및 면역 집단의 광범위한 표현형 분석을 수행한다.

PBMC huNSG 마우스에서 종양 세포주(line)를 이용한 유사한 모델을 문헌[Gupta P., Oncoimmunology. 2015 Mar 6; 4(2): e981449]에 따라 수행한다.

실시예 12. 인간화된 마우스 모델에서 인간 종양에 미치는 항-PVR 항체의 생체내 효과 - 장기간 인간화

인간 암의 저해에서 항-PVR 항체의 효능을 추정하기 위해, 항체를 인간 기원의 종양 및 림프구를 둘 다 조합한 모델에서 연구한다. 새로 태어난 NOD scid 감마(NSG) 마우스 새끼에게 방사선을 조사하고, CD34+ HSC를 그래프팅시켜, 면역-적격을 회복시켰다. 면역 세포 재구성의 확인 후 1주 내지 2주째에, 마우스에게 인간 암세포를 시도하고, 예정된 시점/종양 크기에서 본 발명에 따른 항 인간 PVR 항체를 처리하고, 상이한 시점들에서 다수의 용량들로 투여한다. 동일한 실험을 인간화된 항-PVR 항체를 이용하여 수행한다. 종양 성장 곡선 및 체중을 3x/주로 측정한다. 마우스를 안락사시킬 때, 상이한 기관들에서 TIL 및 면역 집단의 광범위한 표현형 분석을 수행한다.

본 발명의 항체의 종양 저해 활성을 연구하는 데 사용된 유사한 모델을 The Jackson Laboratory(http://immune-checkpoint.com/wp-content/uploads/sites/24/2015/01/Day-1-15.45-Rick-Huntress.pdf)에 의해 구축하였다.

실시예 13. IFNγ의 유도

사이토카인 분비에 미치는 항 PVR mAb의 효과를 시험하기 위해, 2명의 건강한 공여자들 유래의 인간 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC)를 1 마이크로그램/ml 및 0.1 마이크로그램/ml 농도에서 항체(mIgG, 5B9mIgG, 항 CTL-4 항체로서 이필리무맙으로 명명됨)의 존재 하에 표적 세포와 함께 인큐베이션하였다. 배양물 내에서 6일 후 IFNγ의 수준을 측정하였다. 항-PVR 5B9 항체에 의한 IFNγ의 유의한 유도가 관찰되었다(1 ㎍/ml의 경우 P = 7.34548E^-11 및 0.1 ㎍/ml의 경우 2.73179E^-08).

IFNγ의 분비는 항종양 면역력의 주요 구성성분이고, 항-PVR mAb에 의한 IFNγ 분비의 유도는 암 치료에서 이들 화합물의 잠재적인 추가의 항종양형성 효과를 가리킨다.

구체적인 실시형태들의 상기 설명은 당업자가, 과도한 실험 없이, 일반적인 개념으로부터 벗어나지 않으면서 다양한 적용들을 위해 이러한 구체적인 실시형태들을 현재의 지식을 적용함으로써 쉽게 변형하고/거나 적응시킬 수 있으며, 따라서 이러한 적응 및 변형은 개시된 실시형태들의 등가물의 의미 및 범위 내에서 이해되어야 하고 이해되고자 하는 것임을 완전히 보여줄 것이다. 본원에 이용된 구어 또는 용어는 설명을 위한 것이고 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. University of Rijeka Faculty of Medicine <120> ANTIBODIES SPECIFIC TO HUMAN POLIOVIRUS RECEPTOR (PVR) <130> Yissum/0137 PCT <150> US 62/301727 <151> 2016-03-01 <150> US 62/364924 <151> 2016-07-21 <160> 86 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 390 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 1 gaggtgaagc tgcaggagtc tggaggtggc ctggtgcagc ctggaggatc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctcaggatt cgattttagt agatactgga tgacttgggt ccggcaggct 120 ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attcatccag atagcagtaa gataaactat 180 acgccatctc aaaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgttc 240 ctgcaaatga gcaaagtgag atttgaggac acagcccttt atttctgtgc aagacctgat 300 ggtaactaca atgctctgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctcagcc 360 aaaacgacac ccccatctgt ctatgtcgac 390 <210> 2 <211> 130 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Lys Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Gln 50 55 60 Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Phe Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr 115 120 125 Val Asp 130 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 3 ggattcgatt ttagtagata ctgg 24 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp 1 5 <210> 5 <211> 45 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 5 gaaattcatc cagatagcag taagataaac tatacgccat ctcaa 45 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Lys Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Gln 1 5 10 15 <210> 7 <211> 33 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 7 cctgatggta actacaatgc tctggactac tgg 33 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Pro Asp Gly Asn Tyr Asn Ala Leu Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 9 <211> 374 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 9 ctgcaaccgg tgtacattcc gacattgtga tgactcagtc tcacaaattc atgtccacat 60 cagtgggaga cagggtcagc atcacctgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtaa 120 cctggtatca acagaaacca ggacaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc 180 ggcacactgg agtccctgat cgcttcacag gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca 240 ccattagtga tgtgcaatct gaagacttgg caaattattt ctgtcagcaa tatagcaggt 300 atccgtacac gttcggaggg gggaccaagc tggaaataaa acgggccgat gctgcaccaa 360 ctgtatccgt cgac 374 <210> 10 <211> 124 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Ala Thr Gly Val His Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe 1 5 10 15 Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser 20 25 30 Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Asp Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asn Tyr Phe Cys Gln Gln 85 90 95 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ccatcagcaa tgtgcagtct 240 gaagacttgg cagactattt ctgtcagcaa tataacagct atcctctcgc gttcggctcg 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 26 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Tyr Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Arg Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Ala Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105 110 Pro Thr Val Ser Val Asp 115 <210> 27 <211> 33 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 27 aaggccagtc agaatgtgta tactaatgta gcc 33 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28 Lys Ala Ser Gln Asn Val Tyr Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 29 <211> 21 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 29 tcggcatcct accggtacag g 21 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 30 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Arg 1 5 <210> 31 <211> 27 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 31 cagcaatata acagctatcc tctcgcg 27 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 32 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Ala 1 5 <210> 33 <211> 345 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 33 caactgcagc agtctggagc tgagctgatg aagcctgggg cctcagtgaa gatttcctgc 60 aaggctactg gctacacatt cagtaactac tggattgagt ggataaaaca gaggcctgga 120 catggccttg agtggattgg agagattttt cctggaagtg gtcgtattaa cttcaatgag 180 aagttcaagg gcaaggccac attcactgca gacacatcct ccgacacaac ctacatgcaa 240 ctcagcagcc tgacatctgc ggactctgcc gtctattact gtgcaagaac gaagatctat 300 ggtaactcct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtc 345 <210> 34 <211> 115 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 34 Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala Ser Val 1 5 10 15 Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Ile 20 25 30 Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu 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Mus musculus <400> 43 aaggccagtc aggatgtggg tactgctgtg gtc 33 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 44 Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Val 1 5 10 <210> 45 <211> 21 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 45 tgggcatcca gtcggcacaa t 21 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 46 Trp Ala Ser Ser Arg His Asn 1 5 <210> 47 <211> 27 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 47 cagcaatata gcaggtatcc actcaca 27 <210> 48 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48 Gln Gln Tyr Ser Arg Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 49 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutated chain <400> 49 Asp Ile Met Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Ser Arg His Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ser 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Mutated polynucleotide <400> 64 gacatcatga tgacccagtc tcacaaattc atgtctacat ctgtaggaga cagagtcaac 60 atcacttgca aggcgagtca ggatgtgggt actgctgtgg tctggtatca gcagaaacca 120 gggcaatctc ctaagttgct gatctattgg gcatccagtc ggcacgatgg ggtcccagat 180 aggttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240 gaagatttgt cagattattt ctgccaacag tatagcagat accctctcac attcggggct 300 gggaccaagc tggagctcaa a 321 <210> 65 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Mutated polynucleotide <400> 65 gacatcatga tgacccagtc tcacaaattc atgtctacat ctgtaggaga cagagtcaac 60 atcacttgca aggcgagtca ggatgtgggt actgctgtgg tctggtatca gcagaaacca 120 gggcaatctc ctaagttgct gatctattgg gcatccagtc ggcacgaggg ggtcccagat 180 aggttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240 gaagatttgt cagattattt ctgccaacag tatagcagat accctctcac attcggggct 300 gggaccaagc tggagctcaa a 321 <210> 66 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Mutated polynucleotide <400> 66 gacatcatga 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agatactgga tgacttgggt ccggcaggct 120 ccagggaaag ggctagaatg gattggagaa attcatccag atagcagtaa gataaactat 180 acgccatctc aaaaggataa attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgttc 240 ctgcaaatga gcaaagtgag atttgaggac acagcccttt atttctgtgc aagacctgat 300 ggtaactaca atgctctgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctc 356 <210> 69 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 69 Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Lys Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Gln 50 55 60 Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Phe Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 70 <211> 321 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 70 gacattgtga tgacccagtc 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musculus <400> 74 gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagagtcagc 60 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgtat actaatgtag cctggtatca acagaaacca 120 gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagggg agtccctgat 180 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240 gaagacttgg cagactattt ctgtcagcaa tataacagct atcctctcgc gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataaa a 321 <210> 75 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 75 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Tyr Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Arg Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Ala Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 76 <211> 357 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 76 caggttcagt tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagatt 60 tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt aactactgga ttgagtggat aaaacagagg 120 cctggacatg gccttgagtg gattggagag atttttcctg gaagtggtcg tattaacttc 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattc actgcagaca catcctccga cacaacctac 240 atgcaactca gcagcctgac atctgcggac tctgccgtct attactgtgc aagaacgaag 300 atctatggta actcctttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcccca 357 <210> 77 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 77 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Phe Pro Gly Ser Gly Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asp Thr Thr Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Ala Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Lys Ile Tyr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Pro 115 <210> 78 <211> 321 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 78 gacattatga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcaac 60 atcacctgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtgg tctggtatca acagaaacca 120 ggacaatctc ctaaattatt gatttactgg gcatccagtc ggcacaatgg agtccctgat 180 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca cgattagtaa tgtgcagtct 240 gaagacttgt cagattattt ctgtcagcaa tatagcaggt atccactcac attcggggct 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 79 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 79 Asp Ile Met Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Ser Arg His Asn Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ser Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Arg Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 80 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 80 Arg Tyr Trp Met Thr 1 5 <210> 81 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 81 Glu Ile His Pro Asp Ser Ser Lys Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Gln Lys 1 5 10 15 Asp <210> 82 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 82 Pro Asp Gly Asn Tyr Asn Ala Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 83 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 83 Glu Tyr Thr Met His 1 5 <210> 84 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 84 Ser Asn Tyr Trp Ile Glu 1 5 <210> 85 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 85 Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val 1 5 10 <210> 86 <211> 329 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser 1 5 10 15 Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 20 25 30 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 35 40 45 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 50 55 60 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr 65 70 75 80 Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 95 Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 100 105 110 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 145 150 155 160 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 165 170 175 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 180 185 190 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 195 200 205 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 210 215 220 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 225 230 235 240 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 245 250 255 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 260 265 270 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 290 295 300 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 305 310 315 320 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325

Claims

인간 폴리오바이러스 수용체(PVR)에 결합하는 단리된 단일클론 항체, 또는 적어도 항원 결합 부위를 포함하는 이의 항체 단편으로서,
(i) 서열 번호 77을 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열 번호 79를 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역의 3개의 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체; 또는
(ii) 서열 번호 69를 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열 번호 71을 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체; 또는
(iii) 서열 번호 73을 포함하는 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 및 서열 번호 75를 포함하는 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR, 또는 상기 항체 또는 단편 서열과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 이의 유사체 또는 유도체
를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 CDR 세트를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편:
i. HC CDR1은 GYTFSNYWIE(서열 번호 36) 및 SNYWIE(서열 번호 84)로부터 선택되며; HC CDR2는 EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)이며; HC CDR3은 TKIYGNSFDY(서열 번호 40)이며; LC CDR1은 KASQDVGTAVV(서열 번호 44) 및 KASQDVGTAV(서열 번호 85)로부터 선택되며; LC CDR2는 WASSRHN(서열 번호 46), WASSRHA(서열 번호 56), WASSRHR(서열 번호 57), WASSRHD(서열 번호 58), WASSRHE(서열 번호 59), WASSRHP(서열 번호 60) 및 WASSRHT(서열 번호 61)로 이루어진 군으로부터 선택되고; LC CDR3은 QQYSRYPLT(서열 번호 48)인 6개 CDR의 CDR 세트;
ii. HC CDR1은 GFDFSRYW(서열 번호 4) 및 RYWMT(서열 번호 80)로부터 선택되며; HC CDR2는 EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6) 및 EIHPDSSKINYTPSQKD(서열 번호 81)로부터 선택되며; HC CDR3은 PDGNYNALDYW(서열 번호 8) 및 PDGNYNALDY(서열 번호 82)로부터 선택되며; LC CDR1은 KASQDVGTAVT(서열 번호 12)이며; LC CDR2는 WASTRHT(서열 번호 14)이고; LC CDR3은 QQYSRYPYT(서열 번호 16)인 6개 CDR의 CDR 세트; 및
iii. HC CDR1은 GYTFTEYTMH(서열 번호 20) 및 EYTMH(서열 번호 83)로부터 선택되며; HC CDR2는 GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)이며; HC CDR3은 VIPLEY(서열 번호 24)이며; LC CDR1은 KASQNVYTNVA(서열 번호 28)이며; LC CDR2는 SASYRYR(서열 번호 30)이고; LC CDR3은 QQYNSYPLA(서열 번호 32)인 6개 CDR의 CDR 세트.
제1항에 있어서, HC CDR1은 서열 SNYWIE(서열 번호 84)를 포함하며; HC CDR2는 EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)로 표시된 서열을 포함하고; HC CDR3은 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, LC CDR1은 서열 KASQDVGTAV(서열 번호 85)를 포함하며; LC CDR2는 서열: WASSRHN(서열 번호 46)을 포함하고; LC CDR3은 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, HC CDR1 서열은 GYTFSNYWIE(서열 번호 36) 및 SNYWIE(서열 번호 84)로 이루어진 군으로부터 선택되며; HC CDR2 서열은 서열 EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)로 구성되며; HC CDR3은 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)로 구성되며; LC CDR1 서열은 KASQDVGTAVV(서열 번호 44) 및 KASQDVGTAV(서열 번호 85)로 이루어진 군으로부터 선택되며; LC CDR2는 서열: WASSRHN(서열 번호 46)으로 구성되고; LC CDR3은 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)로 구성되는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 34 및 서열 번호 77로부터 선택되는 중쇄 가변 영역, 또는 상기 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 42 및 서열 번호 79로부터 선택되는 경쇄 가변 서열, 또는 상기 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄가 서열 번호 34를 포함하고 경쇄가 서열 번호 42를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서 중쇄가 서열 번호 77을 포함하고 경쇄가 서열 번호 79를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제8항 또는 제9항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편의 변이체로서, 상기 항체의 경쇄 또는 중쇄와 적어도 95%의 동일성을 갖는 것인 변이체.
제1항에 있어서, HC CDR1 서열은 GYTFSNYWIE(서열 번호 36) 및 SNYWIE(서열 번호 84)로 이루어진 군으로부터 선택되며; HC CDR2는 EIFPGSGRINFNEKFKG(서열 번호 38)로 구성되며; HC CDR3은 서열: TKIYGNSFDY(서열 번호 40)로 구성되며; LC CDR1은 KASQDVGTAVV(서열 번호 44) 및 KASQDVGTAV(서열 번호 85)로 이루어진 군으로부터 선택되며; LC CDR2 서열은 WASSRHN(서열 번호 46), WASSRHA(서열 번호 56), WASSRHR(서열 번호 57), WASSRHD(서열 번호 58), WASSRHE(서열 번호 59), WASSRHP(서열 번호 60) 및 WASSRHT(서열 번호 61)로 이루어진 군으로부터 선택되고; LC CDR3은 서열: QQYSRYPLT(서열 번호 48)로 구성되는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항에 있어서, HC CDR1은 GFDFSRYW(서열 번호 4) 및 RYWMT(서열 번호 80)로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하며; HC CDR2는 서열 EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6)를 포함하고; HC CDR3은 서열 PDGNYNALDY(서열 번호 82)를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제12항 중 어느 한 항에 있어서, LC CDR1은 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)를 포함하며; LC CDR2는 서열: WASTRHT(서열 번호 14)를 포함하고; LC CDR3은 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항, 제12항 및 제13항 중 어느 한 항에 있어서, HC CDR1 서열은 GFDFSRYW(서열 번호 4) 및 RYWMT(서열 번호 80)로 이루어진 군으로부터 선택되며; HC CDR2 서열은 EIHPDSSKINYTPSQ(서열 번호 6) 및 EIHPDSSKINYTPSQKD(서열 번호 81)로 이루어진 군으로부터 선택되며; HC CDR3 서열은 PDGNYNALDYW(서열 번호 8) 및 PDGNYNALDY(서열 번호 82)로 이루어진 군으로부터 선택되며; LC CDR1은 서열: KASQDVGTAVT(서열 번호 12)로 구성되며; LC CDR2는 서열: WASTRHT(서열 번호 14)로 구성되고; LC CDR3은 서열: QQYSRYPYT(서열 번호 16)로 구성되는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 2 및 서열 번호 69로부터 선택되는 중쇄 가변 영역, 또는 상기 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 10 또는 서열 번호 71로부터 선택되는 경쇄 가변 영역, 또는 상기 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄가 서열 번호 2를 포함하고 경쇄가 서열 번호 10을 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄가 서열 번호 69를 포함하고 경쇄가 서열 번호 71을 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제17항 또는 제18항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편의 변이체로서, 상기 항체의 경쇄 또는 중쇄와 적어도 95%의 동일성을 갖는 변이체.
제1항에 있어서, HC CDR1은 서열 EYTMH(서열 번호 83)를 포함하며; HC CDR2는 서열 GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)를 포함하고; HC CDR3은 서열: VIPLEY(서열 번호 24)를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제20항 중 어느 한 항에 있어서, LC CDR1은 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)를 포함하며; LC CDR2는 서열: SASYRYR(서열 번호 30)을 포함하고; LC CDR3은 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항, 제20항 및 제21항 중 어느 한 항에 있어서, HC CDR1 서열은 GYTFTEYTMH(서열 번호 20) 및 EYTMH(서열 번호 83)로 이루어진 군으로부터 선택되며; HC CDR2 서열은 GIDPNNGGTNYNQNFKG(서열 번호 22)로 구성되며; HC CDR3은 서열: VIPLEY(서열 번호 24)로 구성되며; LC CDR1은 서열: KASQNVYTNVA(서열 번호 28)로 구성되며; LC CDR2는 서열: SASYRYR(서열 번호 30)로 구성되고; LC CDR3은 서열: QQYNSYPLA(서열 번호 32)로 구성되는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 18 및 서열 번호 73으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역, 또는 상기 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 26 및 서열 번호 75로부터 선택되는 경쇄 가변 서열, 또는 상기 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 95%의 서열 유사성을 갖는 유사체를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄가 서열 번호 18을 포함하고 경쇄가 서열 번호 26을 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제1항, 제2항 및 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄가 서열 번호 73을 포함하고 경쇄가 서열 번호 75를 포함하는 것인 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편.
제25항 또는 제26항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 항체 단편의 변이체로서, 상기 항체의 경쇄 또는 중쇄와 적어도 95%의 동일성을 갖는 변이체.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, PVR이 Ig 및 ITIM 도메인을 가진 T 세포 면역수용체(TIGIT)에 결합하는 것을 저해할 수 있는 단리된 단일클론 항체.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체 또는 항체 단편의 HC 또는 LC 서열의 적어도 하나의 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열.
제29항에 있어서, 단일클론 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하며, 서열 번호 1, 서열 번호 68, 서열 번호 17, 서열 번호 72, 서열 번호 33 및 서열 번호 76으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열, 또는 상기 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열.
제29항에 있어서, 단일클론 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하며, 서열 번호 9, 서열 번호 70, 서열 번호 25, 서열 번호 74, 서열 번호 41 및 서열 번호 78로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열, 또는 상기 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열.
제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 플라스미드.
제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 하이브리도마 세포.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 단일클론 항체를 생성할 수 있는 하이브리도마 세포.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성 모이어티, 방사성 모이어티 또는 식별 가능한 모이어티에 부착된 단일클론 항체.
활성 성분으로서 제1항 내지 제28항 및 제35항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 단리된 항체 또는 이의 단편, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 희석제, 염 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
제36항에 있어서, PVR이 TIGIT에 결합하는 것을 저해함으로써 면역계를 조절하는 데 사용하기 위한 약제학적 조성물.
제36항에 있어서, 암 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
제36항에 있어서, 피험자에서 바이러스 감염을 예방하거나 치료하는 데 사용하기 위한 약제학적 조성물.
제36항에 있어서, 혈관신생-관련 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 약제학적 조성물.
제40항에 있어서, 혈관신생-관련 질병 또는 장애는 암, 눈의 세포 증식성 질병, 망막 장애 및 염증성 질병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
제36항에 따른 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료 방법.
제42항에 있어서, 수술, 화학요법, 방사선요법 및 면역요법으로부터 선택되는 부가적인 항암요법을 추가로 포함하는 방법.
제42항에 있어서, 부가적인 면역 조절제, 활성화된 림프구 세포, 키나제 저해제, 화학치료제 또는 임의의 다른 항암제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제44항에 있어서, 부가적인 면역 조절제는 PD-1, CTLA-4, PDL-1, CEACAM1, NKG2A, B7-H3, B7-H4, VISTA, CD112R, 림프구 활성화 유전자 3(LAG3), CD137, OX40(CD134로도 지칭됨), 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR), TIGIT 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역 체크포인트 분자에 대한 항체인 방법.
제42항에 있어서, 암은 고형암인 방법.
제42항에 있어서, 암은 혈액암인 방법.
제42항에 있어서, 치료는 피험자에서 전이 형성, 성장 또는 확산의 예방 또는 감소를 초래하는 것인 방법.
피험자에서 암의 진단 방법으로서, 생물학적 시료를 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 단편과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항체 단편을 포함하는, 피험자에서 암을 진단하기 위한 키트.