JP2021504494A - アデノシン誘導体を含む網膜疾患または視神経疾患の予防及び治療用薬学的組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む網膜疾患または視神経疾患の予防または治療用薬学組成物、経口投与剤及び点眼剤に関するものであって、該薬学組成物、経口投与剤及び点眼剤は、網膜疾患または視神経疾患を効果的に予防または治療することができる。

Description

本発明は、アデノシン誘導体を含む網膜疾患または視神経疾患の予防または治療用組成物に関する。

アデノシン（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）は、特殊な細胞膜の受容体を通じて多くの生理学的機能を行う物質であって、細胞外に存在するアデノシンは、多くの生理学的体系で神経伝達物質として作用するが、一般的に、与えられた器官の過多活動を補償し、ストレスの有害な効果から保護する作用を行う（Ｊａｃｏｂｓｏｎ，Ｋ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５，４０７−４２２，１９９２）。このような作用は、細胞内または細胞外のＡＴＰ（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）が分解されて生成されたアデノシンによる細胞のエネルギー要求を減らし、酸素の供給を増加させようとする、部分的に生成された陰性フィードバックループ（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｆｅｅｄｂａｃｋ ｌｏｏｐ）によるものである。アデノシンは、脳、心臓、腎臓のような必須的な器官の恒常性保持のために重要であり、例えば、脳に外部からアデノシンアゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）を投与することで、神経保護作用があることが証明されており、疼痛、認知、運動または睡眠にもかかわっていることが知られている。

アデノシン受容体（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）は、現在まで薬理学的研究及び分子クローニングを通じて、それぞれＰ１とＰ２受容体とに分類される。Ｐ１受容体は、アデノシンが基質として作用し、Ｐ２受容体は、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＵＴＰ及びＵＤＰが基質として作用して、生理活性を発現する。そのうちから、Ｐ１受容体は、４個の互いに異なるサブタイプのアデノシン受容体が確認され、リガンド（ｌｉｇａｎｄ）に対する親和力、体内分布、作用経路などによって、Ａ_１、Ａ_２またはＡ_３に分類され、Ａ_２は、再びＡ_２ＡとＡ_２Ｂとに分類される。これらアデノシン受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）群の一部類であって、アデノシンＡ_１、Ａ_２Ａ及びＡ_２Ｂ受容体は、多くの選択的なリガンドを使用して薬理学的に確認されているが、アデノシンＡ_３受容体は、１９９２年に最初に明らかになった受容体（Ｚｈｏｕ，Ｑ．Ｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８９，７４３２−７４３６，１９９２）であって、この受容体の病態生理学的な機能を確認するために多くの研究がなされている。

アデノシンＡ_１及びＡ_２受容体アゴニストは、主にアデノシンの誘導体であって、血圧降下剤、精神病治療剤、不整脈治療剤、脂肪代謝抑制剤（糖尿病治療剤）、脳保護剤として多く研究され、その拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）は、キサンチン（ｘａｎｔｈｉｎｅ）誘導体であるか、多様な二環式が接合されたものであって、喘息治療剤、抗うつ剤、不整脈治療剤、腎臓保護剤、パーキンソン病治療剤、知能開発剤などとして開発されている。それにも拘らず、現在商品化されたものは、上室性頻拍（ｓｕｐｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）の治療目的として使用中であるアデノシン自体と心臓手術後に来る血液凝固を防止するために、ワーファリン（ｗａｒｆａｒｉｎ）の補助制として使用中であるアデノシン輸送阻害剤であるジピリダモール（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ）だけである。このように商品化が円滑ではない理由は、アデノシン受容体が全身に広がっており、受容体の活性化時に伴われる多様な薬理作用のためであり、すなわち、所望の組織のアデノシン受容体のみを活性化することができる化合物がないためである。

アデノシン受容体のうち、アデノシンＡ_３受容体は、広く知られたアデノシンＡ_１及びＡ_２の受容体とは異なって、最も最近に明らかになった受容体であって、その役割が多く明らかになっておらず、選択的な受容体調節剤の開発のために多くの研究が進行中である。アデノシンＡ_３受容体を薬理学的に研究するために、［^１２５Ｉ］ＡＢＡ（Ｎ^６−（４−アミノ−３−［^１２５Ｉ］ヨードベンジル）−アデノシン、Ｎ^６−（４−ａｍｉｎｏ−３−［^１２５Ｉ］ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌ）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）、［^１２５Ｉ］ＡＰＮＥＡ（Ｎ^６−２−（４−アミノ−３−［^１２５Ｉ］ヨードフェニル）−エチルアデノシン、Ｎ^６−２−（４−ａｍｉｎｏ−３−［^１２５Ｉ］ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ）−ｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ）または［^１２５Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡ（（Ｎ^６−（４−アミノ−３−［^１２５Ｉ］ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルカルボキサミド、Ｎ^６−（４−ａｍｉｎｏ−３−［^１２５Ｉ］ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌ）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ−５’−Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ）である３個の放射性標識されたリガンドが用いられている。前記放射性標識されたリガンドを利用した薬理学的に研究を通じて、アデノシンＡ_３受容体をチャイニーズハムスター卵巣（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｏｖａｒｙ、ＣＨＯ）細胞に発現させた時、Ａ_３受容体は、ＡＴＰからｃＡＭＰを生成させる酵素であるアデニル酸シクラーゼ（ａｄｅｎｙｌｙｌ ｃｙｃｌａｓｅ）の抑制作用があり、Ａ_３受容体は、アゴニストによって活性化される時、脳でホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ ｉｎｏｓｉｔｏｌ）を分解して、イノシトールリン酸（ｉｎｏｓｉｔｏｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）とＤＡＧとを生成させる酵素であるＧＴＰ−依存性ホスホリパーゼＣ（Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｃ）を活性化するという事実が証明されている（Ｒａｍｋｕｍａｒ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８，１６８８７１−１６８８９０，１９９３；Ａｂｂｒａｃｃｈｉｏ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８，１０３８−１０４５，１９９５）。このような発見は、脳虚血（ｂｒａｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉａ）でのＡ_３受容体活性化作用による反応経路の可能性を説明可能にするが、このような２次伝達物質体系が脳虚血での神経傷害の反応経路を意味するためである。また、Ａ_３受容体のアゴニストは、炎症媒介体である腫瘍壊死因子ＴＮＦ−α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ）の放出を抑制し、やはり炎症媒介体であるＭＩＰ−１α、インターロイキン−１２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２）及びインターフェロン−γ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ）の生成を抑制し、癲癇のような脳疾患に対する保護効果だけではなく、心臓に対しても保護効果があると知られている。アデノシンＡ_３受容体の不活性化は、肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）からヒスタミンのような炎症誘発因子の放出を引き起こせ、気管支を収縮する作用を行い、免疫細胞で細胞死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を引き起こせる。したがって、アデノシンＡ_３受容体拮抗剤は、消炎剤及び喘息治療剤としての開発可能性があるので、薬物学的選択性を有した化合物を開発することができるならば、喘息、炎症、脳虚血、心臓疾患、癌など多様な疾病に対する新たな治療薬物の開発が可能であると考えられる。

現在まで研究開発された物質のうち、代表的なヒトアデノシンＡ_３受容体アゴニストは、ヌクレオシド系であるＮ^６−（３−ヨードベンジル）−５’−（Ｎ−メチルカルバモイル）−アデノシン（Ｎ^６−（３−ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌ）−５’−（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ；ＩＢ−ＭＥＣＡ）及びＮ^６−（３−ヨードベンジル）−２−クロロ−５’−（Ｎ−メチルカルバモイル）−アデノシン（Ｎ^６−（３−ｉｏｄｏｂｅｎｚｙｌ）−２−ｃｈｌｏｒｏ−５’−（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ）−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ；ＣＩ−ＩＢ−ＭＥＣＡ）であって、アデノシンＡ_１及びＡ_２受容体に比較して、Ａ_３受容体に対して高い親和力及び選択性を有する物質である。一方、高い親和力及び選択性を示すアデノシンＡ_３受容体拮抗剤は、ほとんどヌクレオシド骨格ではない非プリン（ｎｏｎｐｕｒｉｎｅ）系の二環式化合物であって、ヒトの受容体では高い活性を示しているが、ラットのＡ_３受容体に対しては活性が弱いか、ほとんどないので、臨床適用が可能な薬物の開発のために必須的な動物実験が不可能であるという短所が指摘されている（Ｂａｒａｌｄｉ，Ｐ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１２，１３１９−１３２９，２００５）。しかし、非プリン系の二環式化合物に比べて、ヌクレオシド系の化合物は、種間に関係なく、高い親和力と選択性とを示すために、動物実験が容易な長所があるので、新薬としての開発可能性が非常に大きいと考えられ、したがって、この系列の選択的アデノシンＡ_３受容体拮抗剤の導出が至急な課題であると言える。

一方、網膜は、眼球壁の最も内側に位置して、眼球内硝子体（ｖｉｔｒｅｏｕｓ ｂｏｄｙ）と接している透明であり、薄い膜であって、モノの光学的情報を電気的信号に変換して、視神経を通じて脳の中枢視覚領域に映像を伝達する一次視覚情報器官の役割を果たす。網膜には、１億個を超える光感知細胞（光受容体細胞、ｌｉｇｈｔ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｅｌｌｓ）と１百万個を超える視神経細胞である神経節細胞（ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌｓ）、そして、これらを連結する電線役割を行う多様な神経細胞からなっており、我が身で最も精巧な組織である。色とモノとを区別し、視力を示す網膜の中心部分である黄斑部（ｍａｃｕｌａ ｌｕｔｅａ）は、円錐細胞で構成された光受容体細胞層と神経節細胞層とからなっており、網膜の厚さが薄く、明るい光状態で映像の電気的信号が化学的信号に転換されて、神経節細胞の軸索である視神経（ｏｐｔｉｃ ｎｅｒｖｅ）に乗って脳に伝達され、黄斑部以外の網膜は、周辺部を調べ、暗い時に、主な役割を担当する。一方、老化または外部的な要因によって網膜に異常が発生すれば、徐々に視力と視野とに問題が生じる視覚障害と共に失明に至る。

網膜疾患は、網膜周辺組織に異常が誘発されて、神経網膜が色素上皮細胞層から離れれば、網膜が眼球後面に分離されて、視力障害を誘発する網膜剥離（ｒｅｔｉｎａｌ ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ）、網膜周辺組織に異常を起こす周辺部網膜変性及び黄斑部に異常が生じる黄斑変性（ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）の３種類に大きく分類されるが、一旦、網膜が色素上皮層と分離されれば、映像に対する光学的情報を伝達されることができず、また、脈絡膜から来る栄養供給がなされないので、神経細胞が機能できなくなり、このような状態を放置すれば、永久的な網膜萎縮が発生して失明に至る。失明（ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ）の主な原因である視覚障害は、網膜疾患がその原因であって、主に年を取るにつれて表われる疾患であって、遺伝的あるいは高度近眼、外傷などの原因で引き起こされ、白内障の次に平凡な眼科疾患である。網膜疾患は、死亡に至る致命的な疾患ではないが、老人人口の増加と共に産業化及び食生活の変化によって、その発病が最近急増しているので、手術的な方法の以外に、人為的な方法で合成された治療剤の形態ではない従来に我々が摂取している生薬材などの形態で供給することができる網膜疾患治療用組成物が開発される必要がある。

本発明の目的は、効果的に網膜疾患を予防または治療することができる薬学組成物、経口投与剤または点眼剤を提供することである。

本発明の他の目的は、効果的に視神経疾患を予防または治療することができる薬学組成物、経口投与剤または点眼剤を提供することである。

前記目的を果たすために、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む網膜疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。

また、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む網膜疾患の予防または治療用経口投与剤を提供する。

しかも、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む網膜疾患の予防または治療用点眼剤を提供する。

前記他の目的を果たすために、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む視神経疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。

また、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む視神経疾患の予防または治療用経口投与剤を提供する。

しかも、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む視神経疾患の予防または治療用点眼剤を提供する：

前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。

本発明は、特定のアデノシン誘導体を有効成分として含む網膜疾患または視神経疾患の予防または治療用組成物に関するものであって、前記アデノシン誘導体は、マウス網膜由来の光受容体細胞で炎症関連タンパク質、ＶＥＧＦ及び炎症性サイトカインの発現を抑制することにより、炎症反応を抑制し、グルタミン酸で誘導された細胞死を抑制することができ、それを含んで製造された点眼剤は、マウスを対象とした実験で効果的に網膜神経節細胞を保護する効果を示したので、網膜疾患または視神経疾患を効果的に予防ないし治療することができる。

本発明の一実施例において、化合物Ａ処理時に、新生血管及び炎症反応関連タンパク質の発現変化を確認した結果である。

図１の実施例において、化合物Ａ処理時に、ＶＥＧＦ及び炎症性サイトカインの発現変化を確認した結果である。

図１の実施例において、化合物Ａ処理時に、新生血管及び炎症反応関連ｍＲＮＡの発現変化を確認した結果である。

本発明の他の一実施例において、化合物Ａ処理時に、マウス網膜由来の光受容体細胞に対する細胞毒性を確認した結果である。

図４の実施例において、グルタミン酸で誘導された細胞死に対する化合物Ａの細胞保護効果を確認したものである（（ｎ＝６）、（ア）化合物Ａの３０分前処理、（イ）化合物Ａの１時間前処理）。

図４の実施例において、化合物Ａの細胞死の抑制効果をＴＵＮＥＬアッセイとＤＡＰＩ染色とを通じて顕微鏡で観察した結果である。

図４の実施例において、化合物Ａのミトコンドリア保護効果を確認した結果である（（ア）ＪＣ−１凝集体、（イ）正常群細胞の分布、（ウ）グルタミン酸のみ処理された実験群細胞の分布、（エ）化合物Ａを前処理した後、グルタミン酸が処理された実験群細胞の分布、（オ）ＣＣＣＰのみ処理された対照群細胞の分布）。

図４の実施例において、化合物Ａのカスパーゼ活性の抑制効果を確認した結果である（（ア）カスパーゼ３／７の活性、（イ）カスパーゼ８の活性）。

（図９及び図１０Ａないし図１０Ｃ）図４の実施例において、化合物Ａによる細胞死と関連したタンパク質の発現変化を確認した結果である（図９の（ア）タンパク質の発現変化、（イ）細胞核のＡＩＦタンパク質の発現変化、（ウ）細胞質のサイトコロームｃタンパク質の発現変化、（エ）ミトコンドリアのＡＩＦタンパク質の発現変化、（オ）ミトコンドリアのサイトコロームｃタンパク質の発現変化；図１０Ａの（ア）タンパク質の発現変化、（イ）ＲＩＰタンパク質の発現変化、（ウ）ＲＩＰ３タンパク質の発現変化；図１０Ｂの（エ）ｐＢｃｌ２タンパク質の発現変化、（オ）Ｂｃｌ２タンパク質の発現変化、（カ）ｐＢａｄタンパク質の発現変化、（キ）Ｂａｄタンパク質の発現変化；図１０Ｃの（ク）ＢＩＤタンパク質の発現変化、（ケ）カスパーゼ８タンパク質の発現変化、（コ）切断されたカスパーゼ（Ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ）９タンパク質の発現変化、（サ）切断されたカスパーゼ３タンパク質の発現変化）。

本発明のさらに他の一実施例によるマウスの眼球で網膜神経節細胞数を測定した結果を示すグラフである。

図１１の実施例によるマウス網膜の組織学的変化を観察した写真である。

以下、本発明をより詳しく説明する。

本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む網膜疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する：

前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。

この際、前記網膜疾患は、糖尿病性網膜症（Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）または加齢黄斑変性（Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）であるが、これらに制限されるものではない。

望ましくは、前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、プロピル、ナフチルメチル、ベンジル、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたはＣ_１〜Ｃ_３のアルコキシ基からなる群から選択される１または２以上の置換基で置換されたベンジル、またはトルイル酸（ｔｏｌｕｉｃ ａｃｉｄ）であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

より望ましくは、前記Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、１−ナフチルメチル、ベンジル、２−クロロベンジル、３−フルオロベンジル、３−クロロベンジル、３−ブロモベンジル、２−メトキシ−５−クロロベンジル、２−メトキシベンジルまたは３−トルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

本発明による前記化学式１で表されるアデノシン誘導体の望ましい例は、次の通りである。

１）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

２）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

３）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

４）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

５）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（５−クロロ−２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

６）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

７）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（ナフタレン−１−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

８）３−（（２−クロロ−９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロチオフェン−２−イル）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）メチル）安息香酸；

９）２−（２−クロロ−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

１０）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

１１）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；

１２）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール；及び

１３）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール。

最も望ましくは、前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物である：

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また、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む網膜疾患の予防または治療用経口投与剤を提供する：

前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。

この際、前記網膜疾患は、糖尿病性網膜症または加齢黄斑変性であるが、これらに制限されるものではない。

望ましくは、前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、プロピル、ナフチルメチル、ベンジル、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたはＣ_１〜Ｃ_３のアルコキシ基からなる群から選択される１または２以上の置換基で置換されたベンジル、またはトルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

より望ましくは、前記Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、１−ナフチルメチル、ベンジル、２−クロロベンジル、３−フルオロベンジル、３−クロロベンジル、３−ブロモベンジル、２−メトキシ−５−クロロベンジル、２−メトキシベンジルまたは３−トルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

最も望ましくは、前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物である：

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また、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む網膜疾患の予防または治療用点眼剤を提供する：

前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。

この際、前記網膜疾患は、糖尿病性網膜症または加齢黄斑変性であるが、これらに制限されるものではない。

望ましくは、前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、プロピル、ナフチルメチル、ベンジル、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたはＣ_１〜Ｃ_３のアルコキシ基からなる群から選択される１または２以上の置換基で置換されたベンジル、またはトルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

より望ましくは、前記Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、１−ナフチルメチル、ベンジル、２−クロロベンジル、３−フルオロベンジル、３−クロロベンジル、３−ブロモベンジル、２−メトキシ−５−クロロベンジル、２−メトキシベンジルまたは３−トルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

最も望ましくは、前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物である：

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本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む視神経疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する：

前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。

この際、前記視神経疾患は、虚血性視神経症、外傷性視神経症及び圧迫性視神経症からなる群から選択されうるが、これらに制限されるものではない。

望ましくは、前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、プロピル、ナフチルメチル、ベンジル、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたはＣ_１〜Ｃ_３のアルコキシ基からなる群から選択される１または２以上の置換基で置換されたベンジル、またはトルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

より望ましくは、前記Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、１−ナフチルメチル、ベンジル、２−クロロベンジル、３−フルオロベンジル、３−クロロベンジル、３−ブロモベンジル、２−メトキシ−５−クロロベンジル、２−メトキシベンジルまたは３−トルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

最も望ましくは、前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物である：

。

本発明による前記化学式１で表されるアデノシン誘導体は、薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができる。前記塩としては、薬学的に許容される多様な有機酸または無機酸によって形成された酸付加塩が有用である。適した有機酸としては、例えば、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸、酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、マイレン酸、安息香酸、サリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸などを使用し、適した無機酸としては、例えば、塩酸、硫酸などのハロゲン酸またはリン酸などを使用することができる。

本発明による前記化学式１で表されるアデノシン誘導体は、薬学的に許容可能な塩だけではなく、通常の方法によって製造可能なあらゆる塩、水化物及び溶媒化物をいずれも含みうる。

また、本発明による網膜疾患または視神経疾患の予防または治療用薬学組成物は、投与のために、前記記載した有効成分の以外に、薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤を含みうる。前記担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、非晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油が挙げられる。

本発明の薬学組成物は、それぞれ通常の方法によって、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤型、外用剤、坐剤または滅菌注射溶液の形態で剤形化して使用することができる。詳細には、剤形化する場合、通常使う充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調剤される。経口投与のための固形製剤としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などを含むが、これらに限定されるものではない。このような固形製剤は、前記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、単純な賦形剤の以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使われる。経口のための液状物、流動パラフィンの以外に、さまざまな賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などを添加して調剤される。非経口投与のための製剤は、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤及び坐剤を含む。非水性溶剤及び懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性オイル、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどが使われる。坐剤の基剤としては、ウイテプゾール、マクロゴール、トウイーン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使われる。

本発明の組成物の適した投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、時間によって異なるが、当業者によって適切に選択されうる。

また、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む視神経疾患の予防または治療用経口投与剤を提供する：

前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。

この際、前記視神経疾患は、虚血性視神経症、外傷性視神経症及び圧迫性視神経症からなる群から選択されうるが、これらに制限されるものではない。

望ましくは、前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、プロピル、ナフチルメチル、ベンジル、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたはＣ_１〜Ｃ_３のアルコキシ基からなる群から選択される１または２以上の置換基で置換されたベンジル、またはトルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

より望ましくは、前記Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、１−ナフチルメチル、ベンジル、２−クロロベンジル、３−フルオロベンジル、３−クロロベンジル、３−ブロモベンジル、２−メトキシ−５−クロロベンジル、２−メトキシベンジルまたは３−トルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

最も望ましくは、前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物である：

。

前記網膜疾患または視神経疾患の予防または治療用経口投与剤は、前記化学式１で表される化合物及び／またはその薬学的に許容可能な塩が固形製剤または液状製剤で剤形化されたものである。

固形製剤は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などであり、液状製剤は、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などであるが、これらに限定されるものではない。

前記網膜疾患または視神経疾患の予防または治療用経口投与剤は、賦形剤をさらに含み、すなわち、メチルセルロース（Ｍｅｔｈｙｌ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ＭＣ）、スクロース（Ｓｕｃｒｏｓｅ）、ラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ジメチルスルホキシド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ、ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ、ＰＥＧ）、ステアリン酸マグネシウム（Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ Ｓｔｅａｒａｔｅ）、炭酸カルシウム、ゼラチン、タルク（ｔａｌｃ）、蒸留水（Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ、ＤＷ）、流動パラフィンなどからなる群から選択される１つ以上の賦形剤をさらに含み、さらに望ましくは、メチルセルロース（ＭＣ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び蒸留水からなる群から選択される１つ以上を含み、より望ましくは、０．５ｗｔ％メチルセルロースを含みうる。

本発明の一実施例の前記網膜疾患または視神経疾患の予防または治療用経口投与剤で、前記化学式１で表される化合物またはそれの薬学的に許容可能な塩は、粉末状または前述した賦形剤に溶解された溶液状にカプセルなどに充填されたものであるが、これらに制限されるものではない。

また、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む視神経疾患の予防または治療用点眼剤を提供する：

前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。

この際、前記視神経疾患は、虚血性視神経症、外傷性視神経症及び圧迫性視神経症からなる群から選択されうるが、これらに制限されるものではない。

望ましくは、前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、プロピル、ナフチルメチル、ベンジル、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたはＣ_１〜Ｃ_３のアルコキシ基からなる群から選択される１または２以上の置換基で置換されたベンジル、またはトルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

より望ましくは、前記Ａは、ＯまたはＳであり、前記Ｒは、メチル、エチル、１−ナフチルメチル、ベンジル、２−クロロベンジル、３−フルオロベンジル、３−クロロベンジル、３−ブロモベンジル、２−メトキシ−５−クロロベンジル、２−メトキシベンジルまたは３−トルイル酸であり、前記Ｙは、ＨまたはＣｌである。

最も望ましくは、前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物である：

。

前記網膜疾患または視神経疾患の予防または治療用点眼剤は、前記化学式１で表される化合物及び／またはその薬学的に許容可能な塩と点眼液とを含みうる。点眼液は、溶解剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｒ）、粘度向上剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｅｒ）、抗酸化剤（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ）、保存剤（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ）、及びバッファ溶液（ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）からなる群から選択される１つ以上を含みうる。

本発明の一実施例において、点眼液は、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ、グリセリン（Ｇｌｙｃｅｒｉｎ）、クエン酸（Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）及びメチルパラベン（Ｍｅｔｈｙｌｐａｒａｂｅｎ）が溶解または混合されたｐＨ６．８のバッファ溶液であるが、これらに制限されるものではない。

以下、本発明の理解を助けるために、実施例を挙げて詳細に説明する。但し、下記の実施例は、当業者に本発明をより完全に説明するために提供されるものであり、本発明の内容を例示するものであり、本発明の範囲が、下記の実施例に限定されるものではない。

＜準備例１＞アデノシン誘導体化合物の合成及び点眼剤の製造

大韓民国登録特許第１０−１３９６０９２号に開示されている方法通りに、アデノシン誘導体を合成した。この際、合成されたアデノシン誘導体は、次の通りである：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−ブロモベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（５−クロロ−２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（２−メトキシベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（ナフタレン−１−イルメチルベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、３−（（２−クロロ−９−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロチオフェン−２−イル）−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）メチル）安息香酸、２−（２−クロロ−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール、及び（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）−２−（６−（３−ブロモベンジルアミノ）−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール。

以後の実験には、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロ−６−（３−クロロベンジルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロチオフェン−３，４−ジオール（以後、「化合物Ａ」とも称する）を使用し、動物実験のために、クレモフォールＥＬ、グリセリン、クエン酸及びメチルパラベンが溶解されたｐＨ６．８のバッファ溶液に前記化合物Ａを混合して、前記化合物がそれぞれ２５０μＭ、５００μＭ及び７５０μＭの濃度で含まれるように点眼剤を製造した。

＜実施例１＞アデノシン誘導体化合物の新生血管及び炎症反応抑制効果の確認

１．実験方法

１）試験物質の製造及び処理

試験物質として使用する化合物Ａは、ＤＭＳＯに溶解して製造した。製造溶液は、使用時まで−２０℃に保管した。試験物質の処理は、血清が含まれていない細胞培養培地に１：１０００（ｖ／ｖ）で希釈して処理した。対照群には、ＤＭＳＯを１：１０００（ｖ／ｖ）で希釈して処理した。

２）試験物質処理時に、細胞内タンパク質発現量の分析

マウス網膜由来の光受容体細胞の新生血管形成関連反応及び炎症反応に対する試験物質の効能を確認するために、多様な条件で２４時間培養された細胞を回収し、ＰＲＯ−ＰＲＥＰタンパク質抽出キット（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ）を使用して細胞内タンパク質を抽出した。該抽出されたタンパク質の定量は、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ）を使用して測定した。４０μｇのタンパク質を１０％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した後、ＰＶＤＦメンブレンに付着させた。タンパク質が付着されたメンブレンは、５％脱脂乳が含まれたＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｗｉｔｈ ０．１％ Ｔｗｅｅｎ−２０）に３０分間反応させた後、１次抗体及び２次抗体を順に反応させた。タンパク質発現量の確認は、Ｆｕｓｉｏｎ Ｆｘｉｍａｇｅ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍを用いて撮影した。タンパク質発現量の分析は、ＩｍａｇｅＪを使用して相対的な値で示した。一方、免疫ブロッティングに使われた抗体及び実験条件を下記表１にまとめて示した。

３）試験物質処理時に、細胞内炎症性サイトカインの定量分析

マウス網膜由来の光受容体細胞の新生血管形成関連反応及び炎症反応に対する試験物質の効能を確認するために、多様な条件で２４時間培養された細胞を回収し、ＰＲＯ−ＰＲＥＰタンパク質抽出キットを用いて細胞内タンパク質を抽出した。該抽出されたタンパク質の定量は、ＢＣＡタンパク質アッセイキットを使用して測定した。細胞内存在する炎症性サイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６）の定量分析は、それぞれのＥＬＩＳＡキットで分析した。

４）試験物質処理時に、培地内ＶＥＧＦ定量分析

マウス網膜由来の光受容体細胞の新生血管形成関連反応に対する試験物質の効能を確認するために、多様な条件で２４時間培養された細胞の培地を遠心分離した後、回収した。培地内存在するＶＥＧＦの定量分析は、Ｍｏｕｓｅ ＶＥＧＦ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔで分析した。

５）試験物質処理時に、細胞内ｍＲＮＡ発現量の分析

マウス網膜由来の光受容体細胞の新生血管形成関連反応及び炎症反応に対する試験物質の効能確認のために、多様な条件で６時間培養された細胞をＴＲＩｚｏｌ溶液を処理して、細胞内総ＲＮＡを分離した。該分離された総ＲＮＡにターゲット遺伝子に対する特異的プライマー（表２）と逆転写酵素とを使用してｃＤＮＡを合成した後、関連因子の発現を確認した。ｍＲＮＡ発現量の分析は、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して相対的な値で示した。

この際、ＰＣＲ分析に使われたプライマー及び実験条件は、下記表２にまとめて示した。

６）統計分析

各実験群の測定値をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ社のＥｘｃｅｌ（２００７）を通じて統計分析した。各実験群の結果値の異常値（Ｏｕｔｌｉｅｒ）を四分位数を求めて確認し、各データの一元配置法による分散分析を行い、結果を平均と標準偏差とで示した。また、Ｆ検定及びｔ検定（等分散及び異分散）を通じて有意レベル０．０５以下で有効性を分析した。

２．実験の結果

１）新生血管及び炎症反応関連タンパク質の発現変化

ＨＭＧＢ−１（Ｈｉｇｈ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｂｏｘ １）と関連して、マウス網膜由来の光受容体細胞に圧力を加える時に、ＨＭＧＢ−１の発現が増加し、ＨＭＧＢ−１を光受容体細胞に処理する時には、新生血管関連因子及び炎症反応が増加すると報告されている（Ｂｏｈｍ Ｍ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ，９６，４０９−４２７，２０１６）。これにより、本発明では、前記参考文献に基づいて光受容体細胞の損傷による新生血管反応及び炎症反応に対するアデノシン誘導体の効能を検証した。

アデノシン誘導体である化合物ＡとＨＭＧＢ−１処理後、新生血管反応関連因子であるＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体１、ＶＥＧＦ受容体２、アンジオポエチン１（ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ１）及びアンジオポエチン２（ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ２）酵素と炎症反応関連因子であるＣＯＸ２、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＩＣＡＭ１及びＶＣＡＭ１酵素とのタンパク質の発現変化を分析した結果を図１Ａ及び図１Ｂに示した。

すなわち、図１Ａ及び図１Ｂは、ＨＭＧＢ−１（５μｇ／ｍＬ）によって新生血管関連因子であるＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２及びＡＮＧ２の発現が有意的に増加することを示し、化合物Ａの処理によって濃度依存的に増加した新生血管関連因子のタンパク質発現が減少することを示す。ＶＥＧＦとＶＥＧＦＲ２、ＣＯＸ２及びＭＭＰ２タンパク質の発現は、化合物Ａ ０．５μＭ以上の濃度で有意的に減少し、ＶＥＧＦＲ１、ＡＮＧ２及びＭＭＰ９の発現は、０．１μＭ以上の濃度で有意的に減少した。ＡＮＧ１タンパク質発現は、２μＭの濃度で有意的に増加し、ＩＣＡＭ１及びＶＣＡＭ１タンパク質発現は、２μＭの濃度で有意的に減少した。

２）ＶＥＧＦ及び炎症性サイトカインの発現変化

ＨＭＧＢ−１によるマウス網膜光受容体細胞の新生血管形成関連反応及び炎症反応に対する化合物Ａの効能を確認するために、ＥＬＩＳＡ分析方法を通じた定量的分析を行った結果、図２に示されたように、ＨＭＧＢ−１によって増加したＶＥＧＦ量は、０．１μＭ以上の化合物Ａによって有意的に減少した。細胞内炎症性サイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ−１β及びＩＬ−６）の量は、いずれもＨＭＧＢ−１によって増加したが、ＴＮＦαは、０．１μＭの濃度以上の化合物Ａの処理によって、ＩＬ−１β及びＩＬ−６は、１μＭの濃度以上の化合物Ａの処理によって、有意的に減少した。

３）新生血管及び炎症反応関連ｍＲＮＡ発現変化

化合物Ａ処理後、新生血管形成関連因子であるＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体１、ＶＥＧＦ受容体２酵素と炎症反応関連因子であるＴＮＦα、ＩＬ−６、ＣＯＸ２、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＩＣＡＭ１及びＶＣＡＭ１酵素とのｍＲＮＡ発現変化を分析した結果、図３Ａ及び図３Ｂに示されたように、ＨＭＧＢ−１によって新生血管関連因子であるＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２のｍＲＮＡ発現が有意的に増加した。しかし、化合物Ａの処理によって増加した新生血管関連因子のｍＲＮＡ発現が濃度依存的に減少した。ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦＲ１の発現は、０．１μＭの濃度以上の化合物Ａを処理した時、有意な減少を示し、ＶＥＧＦＲ２の発現は、０．５μＭ以上の濃度で有意的に減少した。また、炎症反応関連因子であるＴＮＦα、ＩＬ−６、ＣＯＸ２、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＩＣＡＭ１、及びＶＣＡＭ１のｍＲＮＡ発現も、対照群でＨＭＧＢ−１によって有意的に増加したが、化合物Ａの処理によって濃度依存的に減少した。ＣＯＸ２とＩＬ−６の発現は、０．１μＭ以上の化合物Ａの処理によって有意的に抑制され、ＴＮＦα及びＭＭＰ９の発現は、０．５μＭ以上の濃度で有意的に減少した。ＭＭＰ２、ＩＣＡＭ１及びＶＣＡＭ１の発現は、１μＭ以上の化合物Ａの処理によって有意的に減少した。

＜実施例２＞アデノシン誘導体の網膜光受容体細胞の保護効果

１．実験方法

１）試験物質の製造及び処理

試験物質として使用する化合物Ａは、ＤＭＳＯに溶解させて製造した。製造溶液は、使用時まで−２０℃に保管した。また、１０ｍｇのＣＣＣＰを１ｍＬのＤＭＳＯに溶解させて、５０ｍＭのＣＣＣＰ溶液を製造した。製造溶液は、使用時まで−２０℃に保管した。試験物質の処理は、血清が含まれていない細胞培養培地に１：１０００（ｖ／ｖ）で希釈して処理した。対照群には、ＤＭＳＯを１：１０００（ｖ／ｖ）で希釈して処理した。

２）ＴＵＮＥＬ分析

細胞死（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）細胞の定量的分析は、ＤｅａｄＥｎｄ^ＴＭ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ ＴＵＮＥＬ Ｓｙｓｔｅｍで分析した。細胞を１μＭの化合物Ａで１時間前処理した後、５ｍＭのグルタミン酸が含まれた培地で８時間培養した。細胞をＰＢＳで２回洗浄した後、１０％ホルマリンで１５分間固定した。該固定された細胞は、０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００に１０分間露出させた。細胞を蛍光が含まれたｄＵＴＰで反応させて、切断されたＤＮＡ部分を染色した後、ＤＡＰＩが含まれたマウンティング溶液と共にスライドに固定した。染色された細胞は、蛍光顕微鏡を通じて観察した。

３）カスパーゼ（ｃａｓｐａｓｅ）３／７の活性分析

細胞内カスパーゼ３／７の活性は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ ３／７アッセイシステムで分析した。細胞を１μＭの化合物Ａで一時間前処理した後、５ｍＭのグルタミン酸が含まれた培地で２４時間培養した。細胞培養培地と同量のキット溶液を入れ、１時間反応させた後、発生する発光量（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）をマイクロプレートリーダー機（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ）を通じて測定して、相対的な活性を分析した。

４）カスパーゼ８の活性分析

細胞内カスパーゼ８の活性は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ ８アッセイシステムで分析した。細胞を１μＭの化合物Ａで一時間前処理した後、５ｍＭのグルタミン酸が含まれた培地で２４時間培養した。細胞培養培地と同量のキット溶液を入れ、１時間反応させた後、発生する発光量をマイクロプレートリーダー機を通じて測定して、相対的な活性を分析した。

５）ミトコンドリア細胞膜電位の分析

細胞内ミトコンドリア細胞膜電位をＪＣ−１試薬を用いて分析した。細胞を１μＭの化合物Ａで一時間前処理した後、５ｍＭのグルタミン酸が含まれた培地で６時間培養した。その後、５ｍＭのＪＣ−１を処理して３０分間培養した。ＪＣ−１凝集体（ａｇｇｒｅｇａｔｅ）とＪＣ−１単量体（ｍｏｎｏｍｅｒ）は、Ａｔｔｕｎｅ Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｆｏｃｕｓｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒを使用して、励起波長（ｅｘｉｔａｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）４８５±１１ｎｍ及び５３５±１７．５ｎｍと放出波長（ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）５３０±１５及び５９０±１７．５ｎｍとで分析した。

６）細胞内タンパク質発現量の分析

マウス網膜由来の光受容体細胞の新生血管形成関連反応及び炎症反応に対する試験物質の効能を確認するために、多様な条件で２４時間培養された細胞を回収して、ＰＲＯ−ＰＲＥＰタンパク質抽出キットを使用して細胞内タンパク質を抽出した。該抽出されたタンパク質の定量は、ＢＣＡタンパク質アッセイキットを使用して測定した。４０μｇのタンパク質を１０％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した後、ＰＶＤＦメンブレンに付着させた。タンパク質が付着されたメンブレンは、５％脱脂乳が含まれたＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｗｉｔｈ ０．１％ Ｔｗｅｅｎ−２０）に３０分間反応させた後、１次抗体及び２次抗体を順に反応させた。タンパク質発現量の確認は、Ｆｕｓｉｏｎ Ｆｘｉｍａｇｅ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍを用いて撮影した。タンパク質発現量の分析は、ＩｍａｇｅＪを使用して相対的な値で示した。一方、免疫ブロッ分析に使われた抗体及び実験条件を下記表３にまとめて示した。

７）統計分析

各実験群の測定値をＩＢＭ社のＳＰＳＳ ２３．０を通じて統計分析した。各実験群の等分散如何を、等分散である場合、一元変量分析（ｏｎｅ−ｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ）とＴｕｋｅｙｓ ｔｅｓｔとを通じて分析し、異分散である場合、一元変量分析とＷｅｌｃｈｓ ｔ−ｔｅｓｔとを通じて分析した。正常群との有意な統計差を示す実験群は、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１に示し、グルタメートのみ処理された対照群との有意な統計差を示す実験群は、^＃Ｐ＜０．０５、^＃＃Ｐ＜０．０１、^＃＃＃Ｐ＜０．００１に示した。

２．実験の結果

１）グルタミン酸の細胞毒性

培養された細胞にグルタミン酸を培地に希釈して、０〜９ｍＭの濃度で細胞に処理した後、２４時間培養した後、細胞増殖分析用試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ ＡＱ_{ｕｅｏｕｓ} Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ）を処理し、１時間後に細胞生存率を比較分析して、マウス網膜由来の光受容体細胞に対するグルタミン酸の細胞毒性を分析した結果、図４に示されたように、３ｍＭ以上の濃度で濃度依存的に有意な細胞生存率の減少を誘導すると表われた。グルタミン酸のＩＣ_５０数値は、５．１±０．５ｍＭと確認された。

２）アデノシン誘導体の細胞保護効果

グルタミン酸で誘導される細胞死から化合物Ａの細胞保護効果を確認した結果、図５（ｎ＝６）に示されたように、化合物Ａの前処理は、１μＭの濃度まで濃度依存的にグルタミン酸による細胞生存率の阻害を抑制すると確認された。このような実験の結果は、化合物Ａがグルタミン酸で誘導される細胞死に対する保護効果を有することを意味する。化合物ＡのＥＣ_５０（５０％効果濃度）数値は、３０分及び１時間前処理でそれぞれ０．３１±０．０８μＭと０．３５±０．０６μＭとに類似しているように表われた。

３）アデノシン誘導体の細胞死の抑制効果

グルタミン酸による細胞死誘導と化合物Ａの抑制効果とを確認するために、ＴＵＮＥＬアッセイとＤＡＰＩ染色とを通じて細胞死が起こっている細胞を顕微鏡で観察した結果、図６に示されたように、グルタミン酸のみ処理された細胞では、多数の核でＴＵＮＥＬ−陽性反応が確認されたが、化合物Ａが前処理された細胞では、その数が確実に減っていることを確認することができた。このような結果は、化合物Ａがグルタミン酸による細胞死を抑制していることを示す。

４）アデノシン誘導体のミトコンドリア保護効果

グルタミン酸による細胞死は、ミトコンドリアの損傷と関連があると報告されている。これにより、化合物Ａがグルタミン酸によるミトコンドリアの損傷に対して如何なる効果を示すかを確認するために、流動細胞計数器（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を通じてミトコンドリア膜電位差を分析した結果、図７及び下記表４に示されたように、グルタミン酸のみ処理された細胞では、ＪＣ−１凝集体が減少することを確認することができた。ミトコンドリアの損傷を誘発するＣＣＣＰの処理によっても、類似している細胞の分布を確認することができた。しかし、化合物Ａの前処理を行った実験群では、細胞の分布が正常群と類似していると表われた。このような結果は、グルタミン酸による細胞内ミトコンドリアの損傷を化合物Ａが抑制していることを示す。

５）カスパーゼ活性の確認

カスパーゼは、細胞の細胞死を調節すると知られている。これにより、グルタミン酸による細胞損傷と、これに対する化合物Ａの細胞保護効果でカスパーゼの作用を確認した結果、図８に示されたように、グルタミン酸のみ処理された細胞のカスパーゼ３／７（図８の（ア））及びカスパーゼ８（図８の（イ））の活性が有意的に増加し、化合物Ａの前処理結果、カスパーゼ３／７及びカスパーゼ８の活性が濃度依存的に抑制されることを確認することができた。本結果は、化合物Ａがカスパーゼの活性化による細胞の細胞死を抑制しているということを示す。

６）細胞死関連タンパク質の発現変化

グルタミン酸による細胞の死滅に対する化合物Ａの効能を確認するために、細胞死関連タンパク質であるＡＩＦ及びサイトコロームｃの変化を分析した結果、図９に示されたように、グルタミン酸のみ処理された細胞では、ミトコンドリアに存在するＡＩＦとサイトコロームｃがそれぞれ核と細胞質とに移動したことを確認することができ、化合物Ａの前処理結果、核と細胞質とのＡＩＦとサイトコロームｃの発現が有意的に減少したことを確認することができた。すなわち、化合物Ａは、このようなタンパク質の移動変化を有意的に抑制していることを確認することができる。このような結果は、化合物Ａがミトコンドリアの損傷を抑制することにより、細胞の損傷を抑制させることを示す。

また、グルタミン酸による細胞死機転と、これに対する化合物Ａの効能を確認するために、細胞死関連タンパク質の変化を分析した結果、図１０Ａないし図１０Ｃに示されたように、細胞死と関連したＲＩＰの発現がグルタミン酸によって有意的に減少したが、化合物Ａを前処理した実験群では、濃度依存的に再び増加することを確認することができた。また、ミトコンドリア損傷と関連したｐＢｃｌ２、Ｂｃｌ２、ｐＢａｄ、Ｂａｄ及びＢＩＤタンパク質の発現がグルタミン酸によって有意的に変化したが、化合物Ａを前処理した実験群では、正常群のような発現量で回復されていることを確認することができた。カスパーゼ８及び切断されたカスパーゼ９、切断されたカスパーゼ３も、グルタミン酸によって有意的に増加したが、化合物Ａを前処理した実験群では、有意的に減少することを確認することができた。このような結果は、化合物Ａがグルタミン酸による細胞死を抑制することにより、細胞を保護することを示す。

＜実施例３＞アデノシン誘導体を含む点眼剤の視神経保護効能の実験

本発明の誘導体の点眼投与による点眼剤の視神経保護効能を調べるために、下記のようなインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）動物実験を行った。３ヶ月齢正常ＤＡＢ ２Ｊマウスに前記準備例１で製造した点眼剤を点眼投与した。陽性対照群として緑内障治療剤として用いられる点眼剤であるＸａｌａｔａｎを同じ方法で投与し、陰性対照群として実験動物に別途の処理を行っていない。

引き続き、４ヶ月後に実験動物の網膜神経節細胞（Ｒｅｔｉｎａｌ Ｇａｎｇｌｉｏｎ Ｃｅｌｌ、ＲＧＣ）の数を測定し、その断面を観察し、その結果をそれぞれ図１１及び図１２に示した。図１１及び１２において、Ｃｏｎｔｒｏｌは、陰性対照群を、Ｄｒｕｇ ２５０、５００及び７５０は、前記誘導体化合物（化合物Ａ）をそれぞれ２５０μＭ、５００μＭ及び７５０μＭの濃度で含む点眼剤を、Ｘａｌａｔａｎは、陽性対照群を示す。

図１１及び図１２を参照すれば、本発明のアデノシン誘導体を含む点眼剤を投与したマウスで、前記点眼剤の投与量に依存的な視神経保護効果があったことを確認することができた。

以上、本発明の内容の特定の部分を詳しく記述したところ、当業者において、このような具体的な記述は、単に望ましい実施形態であり、これにより、本発明の範囲が制限されるものではないという点は明白である。すなわち、本発明の実質的な範囲は、下記の特許請求の範囲とそれらの等価物とによって定義される。

Claims (22)

1. 下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む網膜疾患の予防または治療用薬学組成物：
   

   

   前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、
   Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
   Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。
2. 前記網膜疾患は、糖尿病性網膜症または加齢黄斑変性であることを特徴とする請求項１に記載の網膜疾患の予防または治療用薬学組成物。
3. 前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物であることを特徴とする請求項１に記載の網膜疾患の予防または治療用薬学組成物。
   

   

   。
4. 下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む網膜疾患の予防または治療用経口投与剤：
   

   

   前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、
   Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
   Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。
5. 前記網膜疾患は、糖尿病性網膜症または加齢黄斑変性であることを特徴とする請求項４に記載の網膜疾患の予防または治療用経口投与剤。
6. 前記経口投与剤は、メチルセルロース（ＭＣ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び蒸留水からなる群から選択される１つ以上を含む賦形剤をさらに含むことを特徴とする請求項４に記載の網膜疾患の予防または治療用経口投与剤。
7. 前記賦形剤は、０．５ｗｔ％メチルセルロースを含むことを特徴とする請求項６に記載の網膜疾患の予防または治療用経口投与剤。
8. 前記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、粉末状にカプセル内に充填されることを特徴とする請求項４に記載の網膜疾患の予防または治療用経口投与剤。
9. 前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物であることを特徴とする請求項４に記載の網膜疾患の予防または治療用経口投与剤。
   

   

   。
10. 下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む網膜疾患の予防または治療用点眼剤：
    

    

    前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、
    Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
    Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。
11. 前記網膜疾患は、糖尿病性網膜症または加齢黄斑変性であることを特徴とする請求項１０に記載の網膜疾患の予防または治療用点眼剤。
12. 下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む視神経疾患の予防または治療用薬学組成物：
    

    

    前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、
    Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
    Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。
13. 前記視神経疾患は、虚血性視神経症、外傷性視神経症及び圧迫性視神経症からなる群から選択されることを特徴とする請求項１２に記載の視神経疾患の予防または治療用薬学組成物。
14. 前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物であることを特徴とする請求項１２に記載の視神経疾患の予防または治療用薬学組成物。
    

    

    。
15. 下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む視神経疾患の予防または治療用経口投与剤：
    

    

    前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、
    Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
    Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。
16. 前記視神経疾患は、虚血性視神経症、外傷性視神経症及び圧迫性視神経症からなる群から選択されることを特徴とする請求項１５に記載の視神経疾患の予防または治療用経口投与剤。
17. 前記経口投与剤は、メチルセルロース（ＭＣ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び蒸留水からなる群から選択される１つ以上を含む賦形剤をさらに含むことを特徴とする請求項１５に記載の視神経疾患の予防または治療用経口投与剤。
18. 前記経口投与剤は、０．５ｗｔ％メチルセルロースを含むことを特徴とする請求項１７に記載の視神経疾患の予防または治療用経口投与剤。
19. 前記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、粉末状にカプセル内に充填されることを特徴とする請求項１５に記載の視神経疾患の予防または治療用経口投与剤。
20. 前記化学式１で表される化合物は、下記化学式２で表される化合物であることを特徴とする請求項１５に記載の視神経疾患の予防または治療用経口投与剤。
    

    

    。
21. 下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む視神経疾患の予防または治療用点眼剤：
    

    

    前記化学式１において、Ａは、ＯまたはＳであり、
    Ｒは、ａ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的に１または２以上のＣ_６〜Ｃ_１０のアリールで置換された直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_５のアルキル、ｂ）非置換の、もしくは、独立して、または選択的にフルオロ、クロロ、ブロモまたは直鎖状または側鎖状のＣ_１〜Ｃ_４のアルコキシ基が、１または２以上に置換されたベンジル、またはｃ）ヒドロキシカルボニルで置換されたベンジルであり、
    Ｙは、Ｈまたはハロゲン元素である。
22. 前記視神経疾患は、虚血性視神経症、外傷性視神経症及び圧迫性視神経症からなる群から選択されることを特徴とする請求項２１に記載の視神経疾患の予防または治療用点眼剤。

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