JP2021500085A - 感染症の治療又は予防のためのペクチン性多糖酵素加水分解物 - Google Patents

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Abstract

本発明は、栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択される、以下の特徴：・１０〜３００ｋＤａの分子量；・ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれる、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格；・以下の単糖の組成：−個々のガラクツロン酸は、メチル化されていてもよい、及び／又はアセチル基でエステル化されていてもよいガラクツロン酸残基が、２０〜６０モル％；−ラムノース残基が、８〜５０モル％；−アラビノース残基が、０〜４０モル％；−ガラクトース残基が、０〜４５モル％；−ガラクツロン酸残基とラムノース残基のモル比が、５：１〜１：１；−ガラクツロン酸残基、ラムノース残基、アラビノース残基及びガラクトース残基は合わせて、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の単糖の少なくとも８５モル％、を有するニンジンＲＧ-Ｉ多糖を含む、経口投与を含む感染症の治療的又は予防的処置に使用するための製品に関する。これらのニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、ニンジンから得たペクチン中に存在するペクチン性多糖を部分的に加水分解することにより製造できる。ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の感染に対する有効性は、ＲＧ-Ｉ多糖を酵素で加水分解し少なくとも一部のホモガラクツロナンを除去することにより、実質的に改善される。

Description

本発明は、上気道の感染など、感染症の予防的又は治療的処置におけるペクチン性多糖酵素加水分解物の使用に関する。ニンジン由来のペクチン性多糖酵素分解物は、非常に高いラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ-Ｉ）含有量が特徴である。
特に、本発明は、栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択される製品を提供し、前記製品は、上述のニンジンＲＧ-Ｉ多糖酵素加水分解物を含む。さらに、本発明は、感染症の治療における上述の製品の使用、及びニンジンＲＧ-Ｉ多糖酵素分解物の製造方法に関する。
感染は、病原体の生体組織への侵入、それらの増殖、並びに、病原体及びそれが産生する毒素に対する宿主組織の反応である。生物はその免疫系で感染と戦うことができる。免疫系は、病気から保護する生物の内部の、多くの生物学的な構造及び方法を含む宿主の防御系である。栄養は免疫機能の重要なモジュレーターである。たとえば、食物繊維は免疫系のさまざまな特性を調節することができ、それゆえ、感染に対する抵抗性を変化させる。免疫系を刺激し、又は補助することにより、病原菌に対する免疫応答がより効果的になる。このことは、感染の症状を予防し、又は、感染症からの早期の回復につながる。
上気道感染症は、鼻、副鼻腔、咽頭又は喉頭を含む上気道に影響を与える急性の感染が引き起こす疾患である。これは、通常、鼻づまり、喉の痛み、扁桃炎、咽頭炎、喉頭炎、副鼻腔炎、中耳炎、特定のインフルエンザ及び風邪を含む。ほとんどの感染症は事実上ウイルスで生じ、他の例では原因は細菌である。上気道感染症は、真菌又は蠕虫で発生する場合もあるが、これらはあまり一般的ではない。下気道感染症は、一般に上気道感染症よりも深刻で、すべての感染症中、主な死因である。
急性気道感染症を引き起こす可能性のあるウイルスには、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、パラインフルエンザウイルス、ＲＳウイルス及びヒトメタニューモウイルスが含まれる。上気道感染症を引き起こす可能性のある細菌には、Ａ群β溶血性連鎖球菌、ジフテリア菌、淋菌、肺炎クラミジア、Ｃ群β溶血性連鎖球菌が含まれる。
子供は年間に２〜９回ウイルス性呼吸器疾患にかかる。上気道感染症は、仕事や学校を休む人々の主な理由である。インフルエンザウイルス、アデノウイルス、麻疹、風疹、肺炎球菌、インフルエンザ菌、ジフテリア、炭疽菌及び百日咳菌に対するワクチン接種は、それらがＵＲＴに感染するのを防ぐか、感染症の重症度を軽減するかもしれない。免疫系によって保護される他の感染症には、腸管感染症が含まれる。腸の感染症には、コレラ、腸チフス、パラチフス、他のサルモネラ感染、赤痢、ボツリヌス中毒、胃腸炎及びアメーバ症などがある。感染性下痢症としても知られている胃腸炎は、胃及び小腸を含む胃腸管の炎症である。兆候や症状は、下痢、嘔吐、腹痛やその組合せを含む。発熱、倦怠感及び脱水症状が生じるかもしれない。胃腸炎は、ウイルス、細菌、寄生虫及び真菌の感染で生じる可能性がある。ロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス及びアストロウイルスはウイルス性胃腸炎を引き起こすことが知られている。ロタウイルスは子供の胃腸炎の実にありふれた原因である。先進国では、カンピロバクター ジェジュニが細菌性胃腸炎の主要な原因である。胃腸炎を引き起こす可能性がある他の細菌には、大腸菌、サルモネラ菌、赤痢菌、黄色ブドウ球菌及びカンピロバクターが含まれる。毒素産生性クロストリジウム ディフィシルは、高齢者でより頻繁に生じる下痢のかなりの原因である。多くの原虫も胃腸炎を引き起こす可能性がある。最も一般的にはジアルジア ランブリアであるが、赤痢アメーバ、クリプトスポリジウム属、及び他の種も関係する。
米国特許出願公開第２００４／０７２７９１号明細書には、感染と戦うために、哺乳類細胞に有害物質又は生物が付着するのを妨げるペクチン加水分解物を使用することが記載されている。ペクチンは、柑橘類、リンゴ又は甜菜から得られる。
米国特許出願公開第２００２／００２２６０１号明細書には、キチンオリゴ糖、キトサンオリゴ糖及び部分的に脱アセチル化されたキチンオリゴ糖から選択される少なくとも１つの成分を含む薬剤を投与することを含む、風邪を予防又は治療する方法が記載されている。
米国特許出願公開第２０１１／０１１２０４８号明細書には、ストレスを受けた対象における上気道感染の症状を軽減する方法が記載されており、この方法は、有効量のβ-グルカンを投与することを含む。
米国特許出願公開第２０１３／０１３７７５７号明細書には、インフルエンザウイルス感染を防ぐ方法が記載されており、この方法は、対象の粘膜を主にペクチン及びポリヌクレオチドを含む組成物で処理し、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンとシアル酸との間の接着を阻止することを含む。
米国特許出願公開第２０１４／０２８８０２１号明細書には、上気道感染の予防のためにカラマツのアラビノガラクタン及びポリフェノールを使用することが記載されている。
米国特許出願公開第２０１６／０２５０６２５号明細書には、上気道感染症の治療方法が記載されており、この方法は、ビフィズス菌、乳酸菌、プロピオニバクテリア、及びそれらの組合せからなる群から選択される非複製プロバイオテックス微生物を含む組成物を投与することを含む。
ペクチンは、陸生植物の一次細胞壁に存在する構造ヘテロ多糖である。ペクチン性多糖は、以下の多糖成分を様々な量で含む不均一な多糖類である：
（ｉ） ホモガラクツロナン（ＨＧ）、
（ｉｉ） キシロガラクツロナン（ＸＧ）、
（ｉｉｉ） アピオガラクツロナン（ＡＧ）、
（ｉｖ） ラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ-Ｉ）、及び
（ｖ） ラムノガラクツロナンＩＩ（ＲＧ-ＩＩ）。
図１は、上述した５つの多糖成分を含むペクチン性多糖の構造の概略図である。多糖成分のＡＧ、ＸＧ及びＲＧ-ＩＩは、通常、ペクチン性多糖のごく一部であることに留意されたい。
多糖成分ＨＧ、ＡＧ、ＸＧ及びＲＧ-ＩＩは、それぞれ、α-(1−4)結合D-ガラクツロン酸単糖ユニットの直鎖からなる骨格で構成される。
ＲＧ-Ｉのみが、反復二糖単位 4)-α-D-ガラクツロン酸-(1,2)-α-L-ラムノース-(1 の直鎖からなる骨格で構成される。ＲＧ-Ｉの構造の概略図を図２に示す。
ペクチン性多糖の組成と微細構造は、用いる植物源及び抽出条件で大きく変化する。ホモガラクツロナンドメインは、約１００までの連続したD-ＧａｌＡ残基を有することができる。側鎖を有するＲＧ-Ｉドメインは、通常、「分岐領域」又は「毛深い領域」と呼ばれ、一方、（ＲＧ-Ｉドメインに接続する）ホモガラクツロナンドメインは、通常、グリコシド又はグリコシド側鎖で置換されない。
ＲＧ-１のＧａｌＡ残基は、１位及び４位でＲｈａ残基に結合し、一方、Ｒｈａ残基は、アノマー位及び2-ＯＨ位でＧａｌＡ残基に結合する。一般に、Ｒｈａ残基の約２０〜８０％は4-ＯＨ位で分岐し（植物源及び分離方法による）、中性及び酸性の側鎖を有する。これらの側鎖は、さまざまな様式で結合したＡｒａ及びＧａｌ残基から主に構成され、アラビナン、アラビノガラクタンＩ（ＡＧ-Ｉ）及び／又はＡＧ-ＩＩとして知られているポリマーを形成する。ＡＧ-Ｉは、3-ＯＨ位がα-L-アラビノシル基で置換されたβ-(1,4)-結合D-Ｇａｌ骨格で構成され、当該Ｇａｌ骨格は、間にα(1,5)-L-Ａｒａ単位を有してもよい。ＡＧ-ＩＩは、β(1,3)結合したD-Ｇａｌを主鎖とし、短い(1,6)結合の側鎖で置換された、高度に分岐したガラクタンで構成される。側鎖は、さらに、(1,3)-及び／又はα(1,5)-結合L-Ａｒａを有する。オリゴ糖側鎖は、直鎖状又は分枝状であってもよく、そのいくつかは、α-L-フコシド、β-D-グルクロニド、及び4-O-メチル β-D-グルクロニル残基で終結してもよい。
国際公開第２０１１／０６９７８１号には、カメリア シネンシス（Camellia sinensis、チャノキ）から得られる多糖であって、当該多糖の骨格は、交互のラムノガラクツロナンＩコア、及びα(1,4)-結合ポリ又はオリゴラクツロン酸コアを含み、当該骨格中のガラクツロン酸残基とラムノース残基のモル比は、２．５：１〜１：１であり、少なくとも７０ｋＤａの分子量を有する多糖を含む可食製品が記載されている。前記可食製品は、１以上のアブラナ科に属する植物、好ましくはダウクス カロタ（Daucus carota、ニンジン）から入手可能な多糖をさらに含むことができる。表１は、ニンジンから単離された１１０ｋＤａを超える分子量のペクチン性多糖画分を示す。表２は、この多糖画分がin vitroで免疫調節活性を有したことを示す。
国際公開第２０１２／１４８２７７号には、少なくとも２０％の乾燥物質を含む調製物が記載されており、当該調製物は、４０ｋＤａ以上の分子量のラムノガラクツロナンＩペクチンを、ペクチン性多糖の重量で計算して少なくとも２０％含むペクチン性多糖の混合物を少なくとも５０乾燥重量％含み、当該ペクチン性多糖の混合物は、多くても２０％のガラクツロン酸残基のメチル化度、及び多くても２０％のガラクツロン酸残基のアセチル化度で特徴付けられ、当該調製物は、５０ｍＭの重炭酸アンモニウム水溶液で希釈し固形分を２．５重量％とした場合にゲルを形成しない。その実施例には、ニンジンからさまざまな抽出手段によりペクチン性多糖画分を得ることが記載されている。その画分のいくつかは、免疫調節活性を有した。
国際公開第２００４／０８４６５２号には、
a) 野菜を１〜３０ｍｍに破砕、細断、又はスライスし、
b) 野菜片を６０〜９０℃で湯通しし、
c) 湯通しした野菜片を温浸酵素と接触させ、
d) 得られた野菜片をブレンドしてピューレを得る、
工程を含む、野菜ピューレの製造方法が記載されている。この国際特許出願の実施例には、この方法によるニンジンのピューレの製造が記載されている。
Broxtermanらは、ペクチンに対する熱処理の影響についての研究を説明する（Acetylated pectins in raw and heat processed carrot, Carbohydrate Polymers 177 (2017) 58-66）。皮を剥いたニンジン又は熱処理したニンジンキューブから得たアルコール不溶性固形分から、水溶性固形分（ＷＳＳ）を抽出した。ペクチンの微細な化学構造を調べるために、ペクチン分解酵素による制御された分解を行った。ＷＳＳは、A. aculeatus由来のポリガラクツロナーゼ（エンドＰＧ）、及びA. niger由来のペクチンリアーゼ（ＰＬ）で分解した。
本発明者らは、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の感染に対する有効性が、ＲＧ-Ｉ多糖を酵素で加水分解し、少なくとも一部のホモガラクツロナンを除去することにより、実質的に改善できることを発見した。本発明のニンジンＲＧ-Ｉ多糖酵素加水分解物は、以下の組合せにより特徴付けられる：
・１０〜３００ｋＤａの分子量；
・ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれる、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格；
・以下の単糖の組成：
−個々のガラクツロン酸は、メチル化されていてもよい、及び／又はアセチル基でエステル化されていてもよいガラクツロン酸残基が、２０〜６０モル％；
−ラムノース残基が、８〜５０モル％；
−アラビノース残基が、０〜４０モル％；
−ガラクトース残基が、０〜４５モル％；
−ガラクツロン酸残基とラムノース残基のモル比が、５：１〜１：１；
−ガラクツロン酸残基、ラムノース残基、アラビノース残基及びガラクトース残基は合わせて、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の単糖の少なくとも８５モル％。
本発明のある側面は、感染症の治療又は予防における上述したニンジンＲＧ-Ｉ多糖を含む製品の使用に関する。
本発明者らは、理論に羈束されることを望むものではないが、ホモガラクツロナンの除去（［ＧａｌＡ］：［Ｒｈａ］比の低下）は、ＲＧ-Ｉ多糖の物理化学的特性を変化させ、腸管及びヒト末梢血単核球のいわゆるパターン認識受容体とより効果的に相互作用する分子の三次元構成をもたらすと信じられている。上皮細胞や他の免疫学的に活性な細胞で発現するパターン認識受容体とＲＧ-Ｉ多糖との相互作用は、それらの機能的応答性を調節することができ、そのことは、メディエーターの産生及び免疫学的に活性な細胞の再循環により、腸管のみならず、口腔、気道、尿路、膣、皮膚などの体の他の部位での感染に対する耐性を改善できると信じられている。
ホモガラクツロナン除去のためのペクチン分解酵素の使用は、免疫調節性ＲＧ-Ｉ多糖の収量を増加させる費用対効果の高い方法をもたらすという利点を提供する。
本発明の別の側面は、栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択された製品であって、前記製品は上述したニンジンＲＧ-Ｉ多糖を少なくとも０．１乾燥重量％含み、前記製品中に存在する、１０ｋＤａより大きい分子量で、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖として定義されるペクチン性多糖の少なくとも２０重量％が前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖である、製品に関する。
本発明のニンジンＲＧ-Ｉ多糖酵素加水分解物は、以下の工程：
・少なくとも１５ｋＤａの分子量を有し、かつ、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を有するペクチン性多糖を少なくとも５乾燥重量％含有するペクチンをニンジン（例．ニンジンの搾りかす）から得る工程、
・前記ペクチン性多糖を、ペクチンリアーゼ（EC 4.2.2.10）、ペクチン酸リアーゼ（EC 4.2.2.2）、エンドポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.15）、エキソポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.67及びEC 3.2.1.82）から選択される１以上のガラクツロナーゼを使用して、部分的に加水分解する工程、
・前記ペクチン性多糖部分加水分解物を、遠心分離、デカンテーション、ろ過及びそれらの組合せから選択される固液分離技術に供し、ペクチン性多糖部分加水分解物を含む液体画分を得る工程、
・前記液体画分を、分画分子量が１０〜１００ｋＤａの限外ろ過膜を使用して、限外ろ過を行う工程、及び
・前記ペクチン性多糖部分加水分解物を含む保持液を回収する工程
を含む方法により製造できる。
発明の詳細な説明
本発明の第１の側面は、感染症の治療的又は予防的処置に使用するための製品に関し、前記処置は前記製品の経口投与を含み、前記製品は、栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択され、前記製品は、以下の特徴：
・１０〜３００ｋＤａの分子量；
・ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれる、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格；
・以下の単糖の組成：
−個々のガラクツロン酸は、Ｃ６位がメチル化されていてもよい、並びに／又は、Ｏ２位及び／若しくはＯ３位がアセチル化されていてもよいガラクツロン酸残基が、２０〜６０モル％；
−ラムノース残基が、８〜５０モル％；
−アラビノース残基が、０〜４０モル％；
−ガラクトース残基が、０〜４０モル％；
−ガラクツロン酸残基とラムノース残基のモル比が、５：１〜１：１；
−ガラクツロン酸残基、ラムノース残基、アラビノース残基及びガラクトース残基は合わせて、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の単糖の少なくとも８５モル％、
の組合せを有するニンジンＲＧ-Ｉ多糖を少なくとも０．１乾燥重量％含む。
本明細書において、「分岐した多糖」という用語は、骨格鎖内の少なくとも１つの単糖がグリコシド結合によって結合した単糖の側鎖を１つ以上の有する、グリコシド結合で結合する単糖の直線状骨格鎖を含む多糖を指す。
「骨格鎖」及び「骨格」という用語は同義語である。
本明細書において、「ペクチン性多糖」という用語は、１０ｋＤａより大きい分子量を有し、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれる、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖を指す。
本明細書において、「ストレッチ」という用語は、多糖骨格中のグリコシド結合した２つの単糖であって、結合した側鎖を含まない単糖の並びを指す。
本明細書において、「ドメイン」という用語は、ストレッチとストレッチに結合する側鎖を指す。
「ラムノガラクツロナンＩストレッチ」又は「ＲＧ-Ｉストレッチ」という用語は、ガラクツロン酸（ＧａｌＡ）及びラムノース（Ｒｈａ）から成るストレッチを指し、ここで、ＧａｌＡ残基は１位及び４位でＲｈａ残基に結合し、Ｒｈａ残基はアノマー位及び2-ＯＨ位でＧａｌＡ残基に結合し、すなわち、α(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基の繰り返しである。ＲＧ-１ドメインは、例えばガラクタン、アラビナン及びアラビノガラクタン側鎖などの側鎖を含むことができる。
「ラムノガラクツロナンＩ多糖」又は「ＲＧ-Ｉ多糖」という用語は、１以上のラムノガラクツロナンＩストレッチを含む骨格を含む、場合により分岐したペクチン性多糖を指す。
「α(1,4)-結合ガラクツロン酸ストレッチ」という用語は、α(1→4)-ガラクツロン残基から成るストレッチを指す。
ＲＧ-Ｉドメインのほかに、本発明のニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、１以上の以下のドメインを含んでいてもよい：
・ホモガラクツロナン（ＨＧ）、
・キシロガラクツロナン（ＸＧ）、
・アピオガラクツロナン（ＡＧ）、
・ラムノガラクツロナンＩＩ（ＲＧ-ＩＩ）。
ドメインＸＧ、ＡＧ、及びＲＧ-ＩＩは、通常、ＲＧ-Ｉ多糖のごく一部である。
本発明のＲＧ-１ポリサッカライド中に場合によって存在するＨＧドメイン、ＸＧドメイン、ＡＧ及びＲＧ-ＩＩドメインは、２以上のα-(1-4)-結合D-ガラクツロン酸の直鎖から成る骨格を含む。
ＨＧドメインは側鎖を含まない。ＨＧドメインの骨格中のガラクツロン酸残基のカルボキシル基は、エステル化されていてもよい。エステル化されたガラクツロン酸は、メチルエステル又はアセチルエステルであってもよい。
ＸＧドメインの骨格は、D-キシロース側鎖を１以上含む。
ＡＧドメインの骨格は、１以上のD-アピオース残基を含む側鎖を１以上含む。
ＲＧ-ＩＩドメインの骨格は、D-キシロース又はD-アピオースのみから成るものではない側鎖を１以上含む。ＲＧ-ＩＩドメインの骨格中のガラクツロン酸残基のカルボキシル基は、エステル化されていてもよい。ガラクツロン酸は、メチル基又はアセチル基のいずれかでエステル化されてもよく、それぞれ、メチルエステル又はアセチルエステルを形成する。
「アセチル化度」という用語は、割合として表される、ガラクツロン酸残基あたりのアセチル残基の数を指す。
「メチル化度」という用語は、割合として表される、ガラクツロン酸残基あたりのメチル残基の数を指す。
多糖の濃度及び単糖組成は、当業者に公知の分析技術で決定することができる。酸加水分解（メタノリシス）後、中性糖の単糖組成は、パルスアンペロメトリー検出器付の高速陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ-ＰＡＤ）によって適切に決定できる。
ウロン酸（ガラクツロン酸はウロン酸の主要な形態である）は、比色m-ヒドロキシジフェニルアッセイで決定できる。
分子サイズ分布は、高速サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、屈折率（ＲＩ）検出（濃度）により決定できる。
上記分析方法は、Analytical Biochemistry Vol. 207, Issue 1, 1992, pg 176（中性糖分析）、並びにMol. Nutr. Food Res., Vol 61, Issue 1, 2017, 1600243（ウロン酸分析及び分子サイズ分布）に記載されている。
本明細書において、すべての割合は、特に明記しない限り重量パーセントを指す。
本発明における処置の文脈でいう経口投与は、自己投与を含む。
本発明に係る治療的又は予防的処置における使用は、ニンジンＲＧ-１多糖を、好ましくは少なくとも１００ｍｇ、より好ましくは少なくとも３５０ｍｇ、最も好ましくは３５０〜５０００ｍｇ提供する製品の経口投与を含む。
別の好ましい態様では、処置は、少なくとも１００ｍｇ、より好ましくは少なくとも３５０ｍｇ、最も好ましくは３５０〜５０００ｍｇのニンジンＲＧ-１多糖を提供する１日用量での製品の経口投与を含む。
特に好ましい態様では、製品は、風邪やインフルエンザなどの上気道感染症の治療又は予防に使用される。
別の好ましい態様では、製品は、胃腸炎などの腸管感染症の治療又は予防に使用される。
本発明のＲＧ-１多糖含有組成物が経口投与される対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。
本発明の製品は、好ましくは栄養製剤、食品、サプリメント又は飲料である。
製品は、好ましくは少なくとも０．２乾燥重量％、より好ましくは少なくとも０．３〜１０乾燥重量％、最も好ましくは少なくとも０．４〜５乾燥重量％のニンジンＲＧ-Ｉ多糖を含む。
ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、好ましくは、ＲＧ-１多糖が増強されたペクチン性多糖の形態で本発明の製品中に配合される。したがって、特に好ましい態様では、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、製品中に存在するペクチン性多糖の少なくとも２０重量％、より好ましくは少なくとも３０重量％、さらにより好ましくは６０重量％、最も好ましくは少なくとも８０重量％に相当し、前記ペクチン性多糖は、１０ｋＤａを超える分子量であり、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖として定義される。
本発明で使用されるニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、ラムノガラクツロナンＩストレッチ、及び場合によってはα(1,4)-結合ホモガラクツロン酸ストレッチも含む骨格を有する。ニンジンＲＧ-Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基とラムノース残基のモル比は、５：１〜１：１である。ニンジンＲＧ-Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基とラムノース残基のモル比は、好ましくは４．８：１〜１：１、より好ましくは４．５：１〜１：１、さらにより好ましくは４．２：１〜１：１、最も好ましくは４：１〜１．１：１である。
ラムノース残基は、通常、ニンジンＲＧ-１多糖に含まれる側鎖中の残基も含むすべての単糖残基の９〜４５％、より好ましくは１０〜４０％、最も好ましくは１１〜３５％に相当する。
ガラクツロン酸残基は、通常、ニンジンＲＧ-１多糖に含まれる側鎖中の残基も含むすべての単糖残基の２１〜５５％、より好ましくは２２〜５０％、最も好ましくは２３〜４５％に相当する。
アラビノース残基は、通常、ニンジンＲＧ-１多糖に含まれるすべての単糖残基の４〜３８％、より好ましくは６〜３６％、最も好ましくは８〜３４％に相当する。
ガラクトース残基は、通常、ニンジンＲＧ-１多糖に含まれるすべての単糖残基の４〜４２％、より好ましくは８〜４０％、最も好ましくは１０〜３８％に相当する。
ガラクツロン酸残基、ラムノース残基、アラビノース残基及びガラクトース残基は合わせて、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の単糖の、好ましくは少なくとも８８モル％、より好ましくは少なくとも９０モル％、最も好ましくは少なくとも９２モル％である。
ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、通常、少なくとも１０ｋＤａの分子量である。１以上のＲＧ-１多糖は、より好ましくは２０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、最も好ましくは４０ｋＤａ〜３００ｋＤａの分子量である。
本発明のニンジンＲＧ-１多糖は、ニンジン中のペクチン性多糖の酵素による加水分解で適切に製造することができる。ニンジン中のペクチン性多糖は、通常、アセチル化度が３０〜５０％でメチル化度が６０〜８０％である。これらのペクチン性多糖の酵素加水分解によるホモガラクツロナン（ＨＧ）ドメインの除去は、通常、メチル化度が低く、アセチル化度の高いＲＧ-１増強多糖をもたらす。
本発明者らは、本発明の酵素による加水分解が、通常、少なくとも２０％、より好ましくは３０〜１１０％、さらに好ましくは３５〜９０％、最も好ましくは４０〜７０％のアセチル化度を有するニンジンＲＧ-１多糖をもたらすことを見出した。
本発明の好ましい態様では、ニンジンＲＧ-１多糖の酵素による製造は、例えば、ペクチンエステラーゼの作用により、メチル化度が大幅に低下する。ニンジンＲＧ-１多糖のメチル化度は、好ましくは５０％以下、より好ましくは４０％以下、最も好ましくは１０〜３０％である。
別の好ましい態様では、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖のメチル化度（ＤＭ）に対するアセチル化度（ＤＡ）の比は、好ましくは１以上、より好ましくは２以上、より好ましくは３以上、最も好ましくは５以上である。ペクチンエステラーゼ活性は、酵素により製造されたニンジンＲＧ-１多糖のアセチル化度に大きく影響しないので、非常に高いＤＡ：ＤＭ比を有するＲＧ-１多糖は、ペクチナーゼ（ポリガラクツロナーゼ及び／又はリアーゼ）とペクチンエステラーゼの組合せによって、ニンジンのペクチン性多糖を部分的に加水分解することで得ることができる。
別の好ましい態様では、ペクチン性糖類からニンジンＲＧ-１多糖を酵素で製造すると、末端に不飽和ガラクツロン酸残基を含むニンジンＲＧ-１多糖をもたらす。ニンジン中のペクチン性多糖は、通常、不飽和ガラクツロン酸残基を含まない。しかし、ペクチンリアーゼ及び／又はペクチン酸リアーゼによるこれらのペクチン性多糖の加水分解は、必然的に、不飽和非還元末端ガラクツロン酸残基を含む多糖フラグメントをもたらす。ＲＧ−１多糖中の、好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２５％、最も好ましくは少なくとも５０％の非還元末端ガラクツロン酸残基は、不飽和ガラクツロン酸残基である。不飽和ガラクツロン酸は、２３５ｎｍのＵＶ吸収の測定により、簡単に確認できる。
ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の骨格は１以上の側鎖を含むことができる。これらの側鎖は、アラビノース残基及び／又はガラクトース残基、並びに少量のフコース、グルコース、グルクロン酸、キシロース及び／又はウロン酸のモノマーを含んでいてもよい。１以上の側鎖は、好ましくは、ガラクタン側鎖、アラビナン側鎖及びアラビノガラクタン側鎖から選択される。
アラビナン側鎖は、１以上のα(1,5)結合アラビノース残基を含み、かつ、ＲＧ-１ドメインのラムノース残基の4-ＯＨ位に結合している。アラビナン側鎖は、直鎖状又は分枝状であってもよい。側鎖が直鎖状である場合、側鎖はα(1,5)結合アラビノース残基から成る。アラビナン側鎖が分岐状側鎖である場合、１以上のα-アラビノース残基は、α(1,5)結合アラビノースのＯ-２及び／又はＯ-３に結合する。
ガラクタン側鎖は、１以上のβ(1,4)結合ガラクトース残基を含み、かつ、ＲＧ-Ｉドメインのラムノース残基のＯ-４位に結合している。
アラビノガラクタン側鎖は、ＲＧ-Ｉドメインのラムノース残基のＯ-４位に結合しており、Ｉ型アラビノガラクタン（ＡＧ-Ｉ）又はＩＩ型アラビノガラクタン（ＡＧ-ＩＩ）であり得る。ＡＧ-Ｉは、ＧａｌｐのO-６位又はO-３位が置換される(1→4)-β-D-Ｇａｌｐ骨格から成る。ＡＧ-Ｉは、α-L-Ａｒａｆ-ｐ残基及び／又は(1→5)-α-L-Ａｒａｆの短い側鎖でさらに置換される。ＡＧ-ＩＩは、アラビノシル化された(1→6)-β-D-Ｇａｌｐ二次鎖で修飾されたα(1→3)-β-D-Ｇａｌｐ骨格から成る。
ニンジンＲＧ-Ｉ多糖中に、アラビノース残基とラムノース残基は、好ましくは４：１未満のモル比、より好ましくは３：１未満、最も好ましくは２：１未満で存在する。
ニンジンＲＧ-Ｉ多糖中に、ガラクトース残基とラムノース残基は、好ましくは４：１未満のモル比、より好ましくは３．２：１未満、最も好ましくは２．５：１未満で存在する。
ニンジンＲＧ-Ｉ多糖中のアラビノース残基及びガラクトース残基とラムノース残基のモル比は、好ましくは７：１未満、より好ましくは５：１未満、最も好ましくは４：１未満である。
ガラクツロン酸残基及びラムノース残基の組合せは、ニンジンＲＧ-１多糖に含まれる単糖の、好ましくは少なくとも３０モル％、より好ましくは３５〜９０モル％、最も好ましくは４０〜７５モル％である。
特に好ましい態様では、ニンジンＲＧ-１多糖は以下の単糖の組成：
・個々のガラクツロン酸は、メチル化されていてもよい、及び／又はアセチル基でエステル化されていてもよいガラクツロン酸残基が、２１〜５５モル％；
・ラムノース残基が、９〜３５モル％；
・アラビノース残基が、５〜３５モル％；
・ガラクトース残基が、５〜４０モル％
を有する。
本発明の製品中のニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、好ましくはニンジンペクチンの部分的酵素加水分解により得られる。特に好ましい態様では、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、ペクチンリアーゼ（EC 4.2.2.10）、ペクチン酸リアーゼ（EC 4.2.2.2）、エンドポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.15）、エキソポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.67及びEC 3.2.1.82）から選択される１以上のペクチナーゼを用いる、ニンジンペクチンの酵素加水分解によって得られる。より好ましくは、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、ペクチンリアーゼ（EC 4.2.2.10）及びペクチン酸リアーゼ（EC 4.2.2.2）から選択される１以上のペクチナーゼを用いる、ニンジンペクチンの酵素加水分解によって得られる。
本発明の製品は、好ましくは、１以上の上述したペクチナーゼを僅かに含む。これらのペクチナーゼは、活性及び／又は不活性な形態で製品中に存在してもよい。
好ましい態様では、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、エンドポリガラクツロナーゼ及び／又はエキソポリガラクツロナーゼとペクチンエステラーゼ（EC 3.1.1.11）を組み合わせた酵素で、ニンジンペクチンを、加水分解することによって得られる。
別の好ましい態様では、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、ペクチンリアーゼ及び／又はペクチン酸リアーゼで、ニンジンペクチンを、加水分解することによって得られる。
ニンジンＲＧ-１多糖のほかに、本発明の製品は、好ましくは少なくとも１乾燥重量％、より好ましくは少なくとも３乾燥重量％の、ラクツロース、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、ミルクオリゴ糖、グァーガム及びアラビアゴムから選択される１以上のプレバイオティクスを含む。さらにより好ましくは、製品は、少なくとも１乾燥重量％、より好ましくは少なくとも３乾燥重量％の、ラクツロース、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖及びミルクオリゴ糖から選択される１以上のプレバイオティクスを含む。
本発明の別の側面は、栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択された製品であって、前記製品は上述したニンジンＲＧ-Ｉ多糖を少なくとも０．１乾燥重量％含み、前記製品中に存在する、１０ｋＤａより大きい分子量で、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖として定義されるペクチン性多糖の少なくとも２０重量％が前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖である、製品に関する。
本発明のさらに別の側面は、
・少なくとも１５ｋＤａの分子量を有し、かつ、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を有するペクチン性多糖を少なくとも５乾燥重量％、好ましくは少なくとも１０乾燥重量％、より好ましくは少なくとも２５乾燥重量％含有するペクチンを、ニンジンから得る工程、
・前記ペクチン性多糖を、ペクチンリアーゼ（EC 4.2.2.10）、ペクチン酸リアーゼ（EC 4.2.2.2）、エンドポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.15）、エキソポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.67及びEC 3.2.1.82）から選択される１以上のペクチナーゼを使用して、部分的に加水分解する工程、
・前記ペクチン性多糖部分加水分解物を、遠心分離、デカンテーション、ろ過及びそれらの組合せから選択される固液分離技術に供し、ペクチン性多糖部分加水分解物を含む液体画分を得る工程、
・前記液体画分を、分画分子量が１０〜１００ｋＤａの限外ろ過膜を使用して、限外ろ過する工程、及び
・前記ペクチン性多糖部分加水分解物を含む保持液を回収する工程
を含む、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の製造方法に関する。
好ましい態様では、ペクチン性多糖は、エンドポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.15）及びエキソポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.67及びEC 3.2.1.82）から選択される１以上のペクチナーゼを用いて、部分的に加水分解される。
別の好ましい態様では、ペクチン性多糖は、ペクチンリアーゼ（EC 4.2.2.10）及びペクチン酸リアーゼ（EC 4.2.2.2）から選択される１以上のペクチナーゼを用いて、部分的に加水分解される。上述したように、これらのリアーゼによるペクチン性多糖の加水分解は、必然的に、不飽和非還元末端ガラクツロン酸残基を含む多糖をもたらす。
本願の方法では、ペクチン性多糖は、好ましくは、上述した１以上のペクチナーゼ及び１以上のペクチンエステラーゼ（EC 3.1.1.11）の組合せにより加水分解される。１以上のペクチンエステラーゼは、１以上のペクチナーゼの前又は同時に使用してもよい。ペクチナーゼとペクチンエステラーゼの併用は、使用するペクチナーゼがエンドポリガラクツロナーゼ、エキソポリガラクツロナーゼ及びその組合せから選択される場合に特に有利である。ペクチナーゼとペクチンエステラーゼの併用は、通常、メチル化度が低く、アセチル化／メチル化の比率が高い、ニンジンのペクチン性多糖部分加水分解物をもたらす。
ペクチン性多糖の部分加水分解は、ペクチン性多糖とペクチナーゼの水溶液を１５〜７０℃で、少なくとも１０分間、好ましくは１５〜３００分間維持することにより実施することが好ましい。
本願の方法で用いるニンジンから得るペクチンは、好ましくは、ニンジンジュース製造時に得られるニンジンのパルプであるか、又はそのようなパルプの一部である。
本明細書において、「限外ろ過」という用語は、限外ろ過膜を使用する透析も包含する。この方法の特に好ましい態様では、固液分離後に得た液体画分は、分画分子量が１２〜８０ｋＤａの限外ろ過膜で限外ろ過される。より好ましくは、前記限外ろ過膜の分画分子量は、１０〜６０ｋＤａであり、最も好ましくは２０〜４５ｋＤａである。
特に好ましい態様では、限外ろ過工程で得られた保持液は、含水量が５０重量％未満に濃縮される。さらにより好ましくは、保持液は、含水量が１５重量％未満、最も好ましくは１２重量％まで乾燥される。
上述した保持液は、好ましくは、噴霧乾燥、ドラム乾燥及び凍結乾燥から選択される乾燥技術を使用して乾燥される。より好ましくは、用いられる乾燥技術は、噴霧乾燥又はドラム乾燥である。最も好ましくは、保持液は噴霧乾燥により乾燥される。
好ましくは、この方法は有機溶媒を使用しない。
本発明の方法により得られるニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、好ましくは、上述したニンジンＲＧ-Ｉ多糖である。
本発明は、栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択される製品を製造する方法であって、０．１〜５０％乾燥重量％の上述したニンジンＲＧ-Ｉ多糖を製品の中に配合することを含む方法も含む。好ましくは、製品は、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖と１以上の食用成分と組み合わせることで製造される。
この方法のある態様は、栄養製剤、食品及び飲料から選択される製品の製造に関し、前記方法は、少なくとも０．５〜４０乾燥重量％、より好ましくは少なくとも１〜３０乾燥重量％のニンジンＲＧ-Ｉ多糖を製品中に配合することを含む。
別の態様では、この方法は、サプリメント及び医薬品から選択される製品の製造に用いられ、前記方法は、少なくとも１０〜９０乾燥重量％、好ましくは少なくとも２０〜８０乾燥重量％、最も好ましくは少なくとも３０〜６０乾燥重量％のニンジンＲＧ-Ｉ多糖を製品中に配合することを含む。
ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、好ましくは乾燥重量で少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは少なくとも３０％のニンジンＲＧ−１多糖を含有する加水分解物の形態で製品に配合される。
別の好ましい態様では、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、粉末、好ましくは含水量が１５重量％未満、より好ましくは含水量が１２重量％未満の粉末の形態で製品に配合される。
上述した粉末は、１０ｋＤａ未満の分子量を有する材料を、好ましくは３０重量％未満、より好ましくは２０重量％未満、最も好ましくは１０重量％未満、含む。
ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、好ましくは加水分解物の形態で製品に配合され、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、加水分解物中に存在するペクチン性多糖の少なくとも２０重量％、より好ましくは少なくとも３０重量％、さらにより好ましくは少なくとも６０重量％、最も好ましくは少なくとも８０重量％に相当し、前記ペクチン性多糖は、１０ｋＤａより大きい分子量を有し、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖として定義される。
本発明を、以下の非限定的な実施例でさらに説明する。
実施例１
ニンジンジュース製造時の残余である乾燥ニンジン搾りかす（ニンジン繊維粉末、GreendFields、ポーランド）を脱塩水（１００ｇ／ｌ）に分散させ、３種の異なる市販の酵素：
１．Pectinex（登録商標）Yield Mash、Novozymes社（全分散物の０．０２％）
２．Pectinex（登録商標）Ultra Mash、Novozymes社（全分散物の０．０２％）
３．Pectinex（登録商標）Ultra Mash、Novozymes社（全分散物の０．０５％）
を使用し、実験室規模の加水分解を行った（酵素分解条件：４５℃、１２０分）。
９０℃で１０分間加熱することにより酵素分解を終了し、次いで、遠心分離し、分画分子量が１０ｋＤａの膜（Microdyn Nadir；UP010）を用いてその上清を透析した。
対照は、水に乾燥ニンジン搾りかすを加え（１００ｇ／ｌ）、９０℃を１２０分間維持し、遠心分離し、酵素分解物の分散液と同じ方法でその上清を透析することにより製造した。
実施例２
実施例１の非加水分解ニンジンＲＧ-Ｉ多糖（対照）及び実施例１の酵素加水分解ニンジンＲＧ-Ｉ多糖（試料１〜３）の単糖組成は、以下のように決定した。
多糖の濃度及び単糖組成を、Analytical Biochemistry Vol. 207, Issue 1, 1992, pg 176（中性糖分析）及びMol. Nutr. Food Res., Vol 61, Issue 1, 2017, 1600243（ウロン酸分析及び分子サイズ分布）に記載の分析方法で決定した。
単糖分析の結果を表１に示す。（Rha＝ラムノース；GalA＝ガラクツロン酸；Ara＝アラビノース；Gal＝ガラクトース）
実施例３
実施例１の非加水分解ニンジンＲＧ-Ｉ多糖（対照）及び実施例１の酵素加水分解ニンジンＲＧ-Ｉ多糖（試料１〜３）の免疫調節活性は、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）アッセイにより決定した。
免疫調節アッセイ
免疫機能に対する多糖の効果を評価するため、それらを新たに単離した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）とインキュベートした。手短にいうと、ＰＢＭＣはフィコールプラーク（Amersham）を用い、血液のバフィーコートから単離した。ＰＢＭＣ（２×１０６細胞／ｍＬ）を、ＲＰＭＩ培地（Gibco（登録商標）RPMI 1640培地）中で、３００μｇのＲＧ-Ｉ多糖と共に２０時間インキュベート（５％ＣＯ２、３７℃）した。続いて、上清を回収し、製造者の指示に従い、ビーズアレイ（CBA human inflammation kit、BD-Bioscience）を使用し、フローサイトメーター（BD FACSCANTO II）でサイトカインを測定した。陰性対照としてＲＰＭＩを、１００％として結果を正規化する参照としてＬＰＳ（大腸菌由来、Sigma L3012、５ｍｇ）を使用した。データは、ＬＰＳによって誘発された応答に対して正規化された％として表され、４種のサイトカインとその合計について、３種のドナーで平均化される。
表２に免疫調節アッセイの結果を示す。
実施例４
実施例１を、酵素Pectinex（登録商標）Ultra Mash（Novozymes社）を使用し、異なるスケール、すなわち、２０リットル（試料１）、５，０００リットル（試料２）及び１０，０００リットル（試料３）で繰り返した（条件：全分散液の０．１％w/w、４５℃、２時間、酵素失活：９０℃で１０分間）。試料２及び３では、液体と固体を分けるために、遠心分離の代わりにデカンテーションを行った。上清を１０ｋＤａ膜で限外ろ過し、小さな分子を除去した。
多糖加水分解物の単糖組成を、実施例２に記載の方法で分析した。
分析結果を表３に示す。
アセチル化度及びメチル化度を、以下のように決定した：多糖試料（２〜５ｍｇ）を水酸化ナトリウム（０．１Ｍ、一晩、２０℃）で処理した。放出されたメタノールを、DB-WAX ETRカラム、Cryo Focus-4コールドトラップ及びＦＩＤ検出器を備えたヘッドスペースＧＣで測定した（Huisman et al., Food Hydrocolloids, 18, 4, 2004, 665-668を変更）。
試料を中和し（１Ｍ ＨＣｌ）、放出されたアセチル基を、ガードカラム付きAminex HPX 87Hカラム及びＲＩ検出器を備えたＨＰＬＣで定量した（Voragen et al. Food Hydrocolloids,1, 1, 1986, 65-70を変更）。エステル化度は、ウロン酸の量の割合として放出されるメタノール及び酢酸のモル量として表される。
エステル化度の分析結果を表４に示す。
実施例５
実施例４の酵素加水分解ニンジンＲＧ-１多糖（試料１〜３）の免疫調節活性は、実施例３に記載のヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）アッセイで決定した。結果を表５に示す。
実施例６
実施例４の試料２の多糖加水分解物をさらに加水分解し、続いて、高分子量画分を単離した。多糖加水分解物を脱塩水（１００ｇ／ｌ）に溶解し、さらに酵素で加水分解した（Pectinex（登録商標）Ultra Mash、Novozymes社、４５℃、１４時間）。９０℃で１０分間加熱することにより酵素分解を終了した。
酵素分解された多糖溶液の一部を、セミ分取サイズ排除クロマトグラフィーにかけ、７０ｋＤａを超える分子量の多糖を含む画分を得た。
非分画多糖加水分解物及び単離した高分子画分の単糖組成を、実施例２に記載の方法で分析した。
分析結果を表６に示す。
酵素分解された多糖及びその高分子画分の免疫調節活性を、実施例３に記載の方法で決定した。結果を表７に示す。
実施例７
ニンジン搾りかすを水に分散（１００ｇ／Ｌ）させることにより、ペクチン性多糖加水分解物を製造した。
試料１は、酵素を添加せずに９０℃で１２０分間抽出した（抽出収率：４．８％）。
試料２は、１ｇ／１００ｍＬ（総分散液）の酵素濃度でRapidase C600（ペクチンリアーゼ、ポリガラクツロナーゼ、ペクチンエステラーゼ、セルラーゼ及びヘミセルラーゼ活性を含む酵素混合物、Militz, H. Wood Sci. Technol. (1993) 28: 9）を添加し、４５℃で１２０分間抽出した（抽出収率：５．６％）。
次いで、両方の試料を遠心分離（１８０００ｇ、１０分）し、上清を分画分子量が１２〜１４ｋＤａの膜（Visking、London、英国）で徹底的に透析した。限外ろ過／透析ろ過の後、実験室規模の凍結乾燥機で酵素分解物を凍結乾燥した。
屈折率検出器を備えたＨＰＳＥＣで測定した試料１及び試料２の分子サイズ分布を図３に示す。
２つの試料の単糖組成を、実施例２に記載の方法で分析した。分析結果を表８に示す。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］ 感染症の治療的又は予防的処置に使用するための製品であって、
前記処置は前記製品の経口投与を含み、
前記製品は、栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択され、
前記製品は、以下の特徴：
・１０〜３００ｋＤａの分子量；
・ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれる、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格；
・以下の単糖の組成：
−個々のガラクツロン酸は、Ｃ６位がメチル化されていてもよい、並びに／又は、Ｏ２位及び／若しくはＯ３位がアセチル化されていてもよいガラクツロン酸残基が、２０〜６０モル％；
−ラムノース残基が、８〜５０モル％；
−アラビノース残基が、０〜４０モル％；
−ガラクトース残基が、０〜４５モル％；
−ガラクツロン酸残基とラムノース残基のモル比が、５：１〜１：１；
−ガラクツロン酸残基、ラムノース残基、アラビノース残基及びガラクトース残基は合わせて、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の単糖の少なくとも８５モル％、
の組合せを有するニンジンＲＧ-Ｉ多糖を少なくとも０．１乾燥重量％含む、
製品。
［２］ 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖のメチル化度は多くても５０％である、［１］に記載の使用のための製品。
［３］ 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖のメチル化度に対するアセチル化度の比が１以上である、［１］又は［２］に記載の使用のための製品。
［４］ 前記ＲＧ-１多糖中の非還元末端ガラクツロン酸残基の少なくとも１０％が不飽和ガラクツロン酸残基である、［１］に記載の使用のための多糖。
［５］ 前記製品中に存在する、１０ｋＤａより大きい分子量で、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖として定義されるペクチン性多糖の少なくとも２０重量％が、前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖である、［１］〜［４］のいずれか１つに記載の使用のための製品。
［６］ 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖中のアラビノース残基及びガラクトース残基とラムノース残基のモル比が５：１未満、好ましくは４．５：１未満である、［１］〜［５］のいずれか１つに記載の使用のための製品。
［７］ 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は以下の単糖の組成：
・個々のガラクツロン酸は、メチル化されていてもよい、及び／又はアセチル基でエステル化されていてもよいガラクツロン酸残基が、２１〜５５モル％；
・ラムノース残基が、９〜３５モル％；
・アラビノース残基が、５〜４０モル％；
・ガラクトース残基が、５〜４０モル％
を有する、［１］〜［６］のいずれか１つに記載の使用のための製品。
［８］ 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖が、ニンジンペクチンの部分的酵素加水分解により得られたものである、［１］〜［７］のいずれか１つに記載の使用のための製品。
［９］ 前記使用が、前記ニンジンＲＧ-１多糖を少なくとも２００ｍｇ提供する前記製品の経口投与を含む、［８］に記載の治療的又は予防的処置に使用するための製品。
［１０］ 栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択された製品であって、
前記製品は、［１］〜［４］及び［６］〜［８］のいずれか１つで定義されたニンジンＲＧ-Ｉ多糖を少なくとも０．１乾燥重量％含み、
前記製品中に存在する、１０ｋＤａより大きい分子量で、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖として定義されるペクチン性多糖の少なくとも２０重量％が、前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖である、
製品。
［１１］ ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の製造方法であって、当該方法は、
・ペクチンをニンジンから得る工程、
ここで、前記ペクチンは、少なくとも１５ｋＤａの分子量を有し、かつ、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を有するペクチン性多糖を少なくとも５乾燥重量％含有する、
・前記ペクチン性多糖を、ペクチンリアーゼ（EC 4.2.2.10）、ペクチン酸リアーゼ（EC 4.2.2.2）、エンドポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.15）、エキソポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.67及びEC 3.2.1.82）から選択される１以上のペクチナーゼを使用して、部分的に加水分解する工程、
・前記ペクチン性多糖部分加水分解物を、遠心分離、デカンテーション、ろ過及びそれらの組合せから選択される固液分離技術に供し、ペクチン性多糖部分加水分解物を含む液体画分を得る工程、
・前記液体画分を、分画分子量が１０〜１００ｋＤａの限外ろ過膜を使用して、限外ろ過する工程、及び
・前記ペクチン性多糖部分加水分解物を含む保持液を回収する工程
を含む、方法。
［１２］ 前記ペクチン性多糖が、エンドポリガラクツロナーゼ及び／又はエキソポリガラクツロナーゼを使用する部分的な加水分解の前、又は同時に、１以上のペクチンエステラーゼ（EC 3.1.1.11）を使用して加水分解される、［１１］に記載の方法。
［１３］ 前記回収された保持液を含水量が１５重量％未満まで乾燥する、［１１］又は［１２］に記載の方法。
［１４］ 前記方法により得られるニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、［１］〜［８］のいずれか１つで定義されるニンジンＲＧ-１多糖である、［１１］〜［１３］のいずれか１つに記載の方法。
［１５］ 栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択される製品を製造する方法であって、［１］〜［８］のいずれか１つで定義されるニンジンＲＧ-Ｉ多糖、０．１〜５０％乾燥重量％をその中に配合することを含む、方法。

Claims (15)

  1. 感染症の治療的又は予防的処置に使用するための製品であって、
    前記処置は前記製品の経口投与を含み、
    前記製品は、栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択され、
    前記製品は、以下の特徴：
    ・１０〜３００ｋＤａの分子量；
    ・ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれる、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格；
    ・以下の単糖の組成：
    −個々のガラクツロン酸は、Ｃ６位がメチル化されていてもよい、並びに／又は、Ｏ２位及び／若しくはＯ３位がアセチル化されていてもよいガラクツロン酸残基が、２０〜６０モル％；
    −ラムノース残基が、８〜５０モル％；
    −アラビノース残基が、０〜４０モル％；
    −ガラクトース残基が、０〜４５モル％；
    −ガラクツロン酸残基とラムノース残基のモル比が、５：１〜１：１；
    −ガラクツロン酸残基、ラムノース残基、アラビノース残基及びガラクトース残基は合わせて、ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の単糖の少なくとも８５モル％、
    の組合せを有するニンジンＲＧ-Ｉ多糖を少なくとも０．１乾燥重量％含む、
    製品。
  2. 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖のメチル化度は多くても５０％である、請求項１に記載の使用のための製品。
  3. 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖のメチル化度に対するアセチル化度の比が１以上である、請求項１又は２に記載の使用のための製品。
  4. 前記ＲＧ-１多糖中の非還元末端ガラクツロン酸残基の少なくとも１０％が不飽和ガラクツロン酸残基である、請求項１に記載の使用のための多糖。
  5. 前記製品中に存在する、１０ｋＤａより大きい分子量で、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖として定義されるペクチン性多糖の少なくとも２０重量％が、前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための製品。
  6. 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖中のアラビノース残基及びガラクトース残基とラムノース残基のモル比が５：１未満、好ましくは４．５：１未満である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための製品。
  7. 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖は以下の単糖の組成：
    ・個々のガラクツロン酸は、メチル化されていてもよい、及び／又はアセチル基でエステル化されていてもよいガラクツロン酸残基が、２１〜５５モル％；
    ・ラムノース残基が、９〜３５モル％；
    ・アラビノース残基が、５〜４０モル％；
    ・ガラクトース残基が、５〜４０モル％
    を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための製品。
  8. 前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖が、ニンジンペクチンの部分的酵素加水分解により得られたものである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための製品。
  9. 前記使用が、前記ニンジンＲＧ-１多糖を少なくとも２００ｍｇ提供する前記製品の経口投与を含む、請求項８に記載の治療的又は予防的処置に使用するための製品。
  10. 栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択された製品であって、
    前記製品は、請求項１〜４及び６〜８のいずれか１項で定義されたニンジンＲＧ-Ｉ多糖を少なくとも０．１乾燥重量％含み、
    前記製品中に存在する、１０ｋＤａより大きい分子量で、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を含む、場合により分岐した多糖として定義されるペクチン性多糖の少なくとも２０重量％が、前記ニンジンＲＧ-Ｉ多糖である、
    製品。
  11. ニンジンＲＧ-Ｉ多糖の製造方法であって、当該方法は、
    ・ペクチンをニンジンから得る工程、
    ここで、前記ペクチンは、少なくとも１５ｋＤａの分子量を有し、かつ、ラムノース残基がα(1→4)-ガラクツロン酸-α(1→2)-ラムノース残基に含まれるガラクツロン酸残基及びラムノース残基から成る骨格を有するペクチン性多糖を少なくとも５乾燥重量％含有する、
    ・前記ペクチン性多糖を、ペクチンリアーゼ（EC 4.2.2.10）、ペクチン酸リアーゼ（EC 4.2.2.2）、エンドポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.15）、エキソポリガラクツロナーゼ（EC 3.2.1.67及びEC 3.2.1.82）から選択される１以上のペクチナーゼを使用して、部分的に加水分解する工程、
    ・前記ペクチン性多糖部分加水分解物を、遠心分離、デカンテーション、ろ過及びそれらの組合せから選択される固液分離技術に供し、ペクチン性多糖部分加水分解物を含む液体画分を得る工程、
    ・前記液体画分を、分画分子量が１０〜１００ｋＤａの限外ろ過膜を使用して、限外ろ過する工程、及び
    ・前記ペクチン性多糖部分加水分解物を含む保持液を回収する工程
    を含む、方法。
  12. 前記ペクチン性多糖が、エンドポリガラクツロナーゼ及び／又はエキソポリガラクツロナーゼを使用する部分的な加水分解の前、又は同時に、１以上のペクチンエステラーゼ（EC 3.1.1.11）を使用して加水分解される、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記回収された保持液を含水量が１５重量％未満まで乾燥する、請求項１１又は１２に記載の方法。
  14. 前記方法により得られるニンジンＲＧ-Ｉ多糖は、請求項１〜８のいずれか１項で定義されるニンジンＲＧ-１多糖である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 栄養製剤、食品、サプリメント、飲料及び医薬品から選択される製品を製造する方法であって、請求項１〜８のいずれか１項で定義されるニンジンＲＧ-Ｉ多糖、０．１〜５０％乾燥重量％をその中に配合することを含む、方法。
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