JP2021161093A - イオン液体を用いたｂｐａ製剤およびｂｐａを構成物質とするイオン液体 - Google Patents

Abstract

【課題】本発明は、ＢＮＣＴ療法に好適な高濃度のｐ−ボロノフェニルアラニンを含有する水溶性製剤を提供することを目的とする。【解決手段】ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、コリン塩をカチオンとし、アミノ酸またはクエン酸のアニオンから構成されるイオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物を提供する。【選択図】図１１

Description

本発明は、イオン液体とＢＰＡを含む放射線治療に用いる増強剤、ＢＰＡの体内分布をＰＥＴで画像化するための標識化剤、高濃度のＢＰＡを溶解した医薬品原料に関する。

癌のホウ素中性子捕捉療法（以下「ＢＮＣＴ」ともいう。）は、あらかじめ腫瘍組織に取り込ませた^１０Ｂ核と生体にほぼ影響を及ばさない熱中性子線の捕捉反応によって生じるα粒子および７Ｌｉ粒子によって腫瘍細胞を障害する放射線療法である。ＢＮＣＴに用いる薬剤としてｐ−ボロノフェニルアラニン（ＢＰＡ）が知られており、既に臨床でも用いられている。

しかしながら、ＢＰＡは、生理的ｐＨでの溶解性が極めて乏しく、実用上の大きな問題となっている。このため、ＢＰＡの溶解を促進させるために、ＢＰＡのフルクトース錯体を形成させる方法（特許文献１）、ＢＰＡにアルカリ溶液中で、単糖またはポリオールを添加し、イオン交換樹脂により無機塩を除去する方法（特許文献２）という方法、ソルビトールを添加する方法（特許文献３）が知られている。

しかしながら、特許文献１記載の方法はＢＰＡフルクトース錯体の水溶性は不十分であり、例えば体重６０ｋｇの患者用にＢＰＡの３０ｇ相当量を室温でフルクトースとの錯体水溶液として調製すると、溶液量は少なくとも１．２Ｌ程度と、極めて大きな液量を必要とし実用上問題がある。また、フルクトース錯体法と比較して、特許文献３記載のソルビトール法では溶解度はあまり向上せず、特許文献２記載のポリオールを添加し、イオン交換樹脂により無機塩を除去する方法もフルクトース錯体法の４倍程度しか溶解度が向上していない。また、特許文献２の方法は操作が煩雑で有り実用に適しておらず、特許文献１の方法は細胞毒性の点で問題があった。

２０００年以降、イオン液体は触媒、電気化学等の分野で用いられるようになり、製剤分野では経皮吸収促進等の目的で用いられている（非特許文献１）。また、バイオマス系の研究では、コリンーアミノ酸イオン液体が、稲わらからリグニンを選択的に可溶化することが知られている（非特許文献２）。また、難溶性薬物の溶解法として、メグルミンと脂肪酸が構成するイオン液体を用いた難溶性薬物の溶解方法が知られている（特許文献４）。
しかしながら、イオン液体とホウ素製剤の関係は全く知られていない。

田原義朗、後藤雅弘、Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ（ドラッグ デリバリー システム）３３巻、４号（２０１８年）３０３〜３１０頁 Ｌｏｒｅｎｚｏ Ｃｏｎｔｒａｎｉ（ロレンゾ コントラニ）Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ（バイオフィジカル レビュー）１０巻、３号（２０１８年）８７３−８８０頁

米国特許第５４９２９００号 米国特許第６１６９０７６号 特開２０１３−１７３８０４号 特許第５４６８２２１号

本発明は、ＢＮＣＴ療法に好適な高濃度のｐ−ボロノフェニルアラニンを含有する水溶性製剤を提供することを目的とする。

本発明は、
〔１〕ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物、
〔２〕イオン液体がコリン塩のイオン液体であることを特徴とする〔１〕記載の液状医薬組成物、
〔３〕コリン塩のイオン液体が、２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシドのカチオンと、アミノ酸またはクエン酸のアニオンから構成されることを特徴とする〔１〕または〔２〕記載の液状医薬組成物、
〔４〕アミノ酸が、グリシン、セリン、プロリンまたはフェニルアラニンであることを特徴とする〔１〕から〔３〕のいずれかひとつに記載の医薬組成物、
〔５〕ｐ−ボロノフェニルアラニンをホウ素濃度として５０００〜３００００ｐｐｍ含むことを特徴とする〔１〕から〔４〕のいずれかひとつに記載の液状医薬組成物、
〔６〕〔１〕から〔５〕のいずれかひとつに記載の液状医薬組成物を有効成分として含むことを特徴とする腫瘍の放射線治療に用いる増強剤、
〔７〕〔６〕記載の放射線治療が、中性子捕捉療法であることを特徴とする増強剤、
〔８〕ＰＥＴによる画像診断に用いることを特徴とする〔１〕から〔５〕のいずれかひとつに記載の液状医薬組成物。

図１は、コリン−セリンイオン液体の^１Ｈ−ＮＭＲの結果である。 図２は、コリン−セリンイオン液体のＦＴ−ＩＲの結果である。 図３は、コリン−プロリンイオン液体の^１Ｈ−ＮＭＲの結果である。 図４は、コリン−プロリンイオン液体のＦＴ−ＩＲの結果である。 図５は、コリン−グリシンイオン液体の^１Ｈ−ＮＭＲの結果である。 図６は、コリン−グリシンイオン液体のＦＴ−ＩＲの結果である。 図７は、コリン−フェニルアラニンイオン液体の^１Ｈ−ＮＭＲの結果である。 図８は、コリン−フェニルアラニンンイオン液体のＦＴ−ＩＲの結果である。 図９は、コリン−クエン酸イオン液体の^１Ｈ−ＮＭＲの結果である。 図１０は、コリン−クエン酸イオン液体のＦＴ−ＩＲの結果である。 図１１は、イオン液体に溶解したＢＰＡとフラクトースを用いて溶解したＢＰＡに対する細胞生存率を示したものである。

本発明に使用するｐ−ボロノフェニルアラニンは、フェニルアラニンをホウ素(¹⁰B)で標識したボロノフェニルアラニン(ＢＰＡ)であればどのようなものでも良いが、ＢＰＡの特性を利用したボロノフェニルアラニンの誘導体も含まれる。ボロノフェニルアラニンの誘導体としては、ＢＰＡの体内分布をＰＥＴで画像化するために、ＢＰＡを放射性核種¹⁸Ｆで標識した化合物フルオロボロノフェニルアラニン(ＦＢＰＡ)等が含まれる。
ｐ−ボロノフェニルアラニンの光学異性体としては、Ｌ−体，Ｄ−体，Ｌ−体およびＤ−体のジアステレオマーのどのようなものでも良いが、とりわけＬ−体が好ましい。

ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とする液状医薬組成物とは、ｐ−ボロノフェニルアラニンの腫瘍細胞への集積性を利用し、ホウ素(¹⁰Ｂ)と熱中性子との核反応で生じる高ＬＥＴ放射線のα粒子(ヘリウムイオン)を用いて癌細胞のみを破壊する効果を主薬効とする液体状の医薬組成物を示す。

イオン液体とは、幅広い温度範囲で液体として存在する塩であり、イオンのみからなる液体を示す。イオン液体のカチオンとしては、アンモニウム、イミダゾリウム、コリン、スルホニウム、ピラゾリウム、ピリジニウム、ピロリジニウム、ホスホニウムが挙げられ、そのカチオンに組み合わされるアニオンとしては、ＣＨ_３ＣＯＯ⁻，ＣＦ_３ＣＯＯ⁻，ＮＯ^３−，Ｂｒ⁻，Ｃｌ⁻等が挙げられる。また、カチオンとしてメグルミンを用いる場合は、好適なアニオンとしてオレイン酸、デカン酸、イソステアリン酸等の脂肪酸を用いることができる。

本発明の場合、イオン液体の中でもカチオンが安全性の高いコリン塩のイオン液体であることが好ましい。本発明に用いるイオン液体は、コリン塩のイオン液体であればアニオンは前述のアニオンを使用することができるが、好ましくはアニオンとしてアミノ酸を用いるコリン−アミノ酸イオン液体、コリン−クエン酸イオン液体を用いる。

コリン−アミノ酸イオン液体のカチオンであるコリンとしては、Ｎ、Ｎ，Ｎ−トリメチルエタノールアンモニウム、２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ，Ｎ−トリメチルエタン−１−アンモニウム、２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシド が挙げられ、アニオンとして用いるアミノ酸としては、グリシン、フェニルグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン、リシン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミンまたはオルニチン及びこれらの誘導体が挙げられるが、セリン、プロリン、フェニルアラニン、グリシンを用いることが好ましい。

コリンークエン酸イオン液体のカチオンであるコリンとしては、Ｎ、Ｎ，Ｎ−トリメチルエタノールアンモニウム、２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ，Ｎ−トリメチルエタン−１−アンモニウム、等が挙げられ、アニオンとしてはクエン酸およびその誘導体が用いられる。

本発明における液状医薬組成物とは、難溶性のｐ−ボロノフェニルアラニンが溶解している状態の液体状組成物であって、前記医薬用途に用いられる組成物を示し、ｐ−ボロノフェニルアラニンを常温で５０００ｐｐｍ以上、５０００〜３００００ｐｐｍ、好ましくは１００００〜３００００ｐｐｍ、とりわけ好ましくは１２０００〜２００００ｐｐｍ含むことを特徴とする。
液状組成物に含まれるイオン液体は、液体の構成の全てがイオン液体であっても良く、必要により水に分散させても良い。

本発明の液状組成物のｐＨは、生体への投与を考慮して、中性付近のｐＨであることが好ましい。より具体的には、６．５から７．５の範囲であり、特に好ましくは７．４付近である。ｐＨの調節には必要に応じて、当該技術分野で用いられる適当なｐＨ調節剤（塩酸、炭酸水素ナトリウムなど）、緩衝剤などを使用してもよい。

本発明の液状組成物の浸透圧比は特に限定されないが、生理食塩水対比で、１から２までの範囲内にあることが好ましい。より好ましくは、１．１から１．４の範囲である。この範囲にある場合には、注射剤の場合、痛みの軽減や投与時間の短縮が可能になる。

本発明の液状組成物中には、その生体内外での安定性を高めるため、必要により生体に含まれるナトリウム、マグネシウム等各種金属イオンが含まれていてもよい。ナトリウムイオンの場合その濃度は、細胞内液と細胞外液の電解質バランスが大きく崩れないように体液のナトリウムイオン濃度範囲に近い数値範囲であることが好ましい。

本発明の液状組成物には、必要に応じて、リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、酢酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝剤を加えてもよい。これらの緩衝剤は、製剤の安定化や刺激性の低下に有用な場合がある。

さらに本発明の組成物には、液体製剤の添加物として医薬医薬品機器等法で許容される添加物を、必要に応じて含有させることができる。そのような添加物として、通常、液体、特に水性の組成物に用いられる添加剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、ソルビン酸カリウム、塩酸クロロヘキシジン等の保存剤、エデト酸Na等の安定化剤、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の増粘剤、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、ショ糖、ブドウ糖等の等張化剤、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン等の等張剤、塩酸、水酸化ナトリウム等のｐＨ調整剤が挙げられる。

本発明の液状組成物がＢＮＣＴに用いられる医薬品である場合、ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物の投与方法は、腫瘍の近傍にｐ−ボロノフェニルアラニンを送達させる方法であればどのような物でも良いが、好ましくは静脈投与、腹腔内投与、経皮投与を用いる。また、本発明の液状組成物がＰＥＴに用いられる診断用医薬品である場合、投与方法として静脈投与が用いられる。

静脈投与、腹腔内投与等体内に直接注入する投与方法の場合は、イオン液体に溶解したｐ−ボロノフェニルアラニンに対して、必要により例えば、ポリソルベート８０，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０，ポリエチレングリコール，カルボキシメチルセルロース，アルギン酸ナトリウム等分散剤、メチルパラベン，プロピルパラベン，ベンジルアルコール，クロロブタノール，フェノール等の保存剤、例えば、塩化ナトリウム，グリセリン，Ｄ−マンニトール、グルコース等の等張化剤を加え、例えば、注射用蒸留水，生理的食塩水，リンゲル液等の水溶剤で希釈化し、ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする静脈投与、腹腔内投与に用いる液状医薬組成物を製造する。

また、経皮投与により腫瘍の近傍にｐ−ボロノフェニルアラニンを送達する場合は、必要により例えば、ポリソルベート８０，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０，ポリエチレングリコール，カルボキシメチルセルロース，アルギン酸ナトリウム等分散剤、メチルパラベン，プロピルパラベン，ベンジルアルコール，クロロブタノール，フェノール等の保存剤、例えば、塩化ナトリウム，グリセリン，Ｄ−マンニトール、グルコース等の等張化剤を加え、例えば、オリーブ油，ゴマ油，綿実油，トウモロコシ油等の植物油、プロピレングリコール等の油性溶剤に溶解、懸濁あるいは乳化することにより、経皮投与に用いるｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物を製造する。

なお、上記医薬品組成物の製造工程においては、所望により例えば、サリチル酸ナトリウム，酢酸ナトリウム等の溶解補助剤、例えば、ヒト血清アルブミン等の安定剤、例えば、ベンジルアルコール等の無痛化剤等の添加物、更に医薬品医療機器等法において認められているものであれば必要に応じて抗酸化剤、着色剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、防腐剤、ゲル化剤を用いても良い。

また、ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物は、必要により治療の際に例えば、注射用蒸留水，生理的食塩水，リンゲル液等の水溶剤または医薬品用のローション、クリームで希釈しても良い。
本発明のｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物は、以下の製造方法で製造することができる。

１．コリン−アニオンイオン液体の合成法
コリン−アニオンイオン液体の合成は、コウドリーらの方法〔Ｃｈｏｗｄｈｒｙ ｅｔ ａｌ．（コウドリーら）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（モレキュラー ファーマセウティックス）、１５巻、６号（２０１８年）２４８４〜２４８８頁〕等を参考にして以下のように行った。

アニオンに関しては、アニオンとして使用される化合物を水に溶解し、０．１ｍｏｌ〜０．０１ｍｏｌ、好ましくは０．０５ｍｏｌの水溶液を調整する。
アニオンとして使用する化合物としては、ＣＨ_３ＣＯＯ−，ＣＦ_３ＣＯＯ−，ＮＯ_３−，Ｂｒ−，Ｃｌ−等のアニオンの発生源となる化合物であればどのようなものでも良いが、本発明の場合はアミノ酸またはクエン酸およびこれらの誘導体を用いることができる。アミノ酸としてはグリシン、フェニルグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン、リシン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミンまたはオルニチン及びこれらの誘導体が挙げられるが、セリン、プロリン、フェニルアラニン、グリシンを用いることが好ましい。

上記アニオンと等量のコリンの水溶液をアニオン水溶液に加え、１５℃から２５℃、好ましくは室温において、１２〜３６時間、好ましくは２４時間撹拌する。更にオイルバス等を用い１００〜１４０℃、好ましくは１２０℃の条件下でエバポレーター等により水分を除去する。得られた液体を徐々に冷却することにより目的とするイオン液体を得ることができる。

カチオンとして用いるコリンとしては、Ｎ、Ｎ，Ｎ−トリメチルエタノールアンモニウム、２−ヒドロキシ−Ｎ、Ｎ，Ｎ−トリメチルエタンー１−アンモニウム、２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシド が挙げられる。コリンは固体を水で溶解しても良いし、市販されているコリン水溶液〔２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシド（４７〜５０％水溶液）〕を用いても良い。

２．ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物の製造法
室温にて、ｐ−ボロノフェニルアラニンを、必要により純水を加えた前記コリンアニオンイオン液体に添加して撹拌、溶解する。ｐ−ボロノフェニルアラニンの終濃度は、５０００〜３００００ｐｐｍに調整する。必要により、前記医薬品製剤添加物を加え、ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物を製造する。

本発明に使用するｐ−ボロノフェニルアラニンは、フェニルアラニンをホウ素(¹⁰B)で標識したボロノフェニルアラニン(ＢＰＡ)であればどのようなものでも良く、市販品を用いても良い。

ｐ−ボロノフェニルアラニンを合成する場合は、特開平１１−２５５７７３号、特開２０００−２１２１８５号、米国特許５１５７１４９号記載の公知の方法を参考にして合成しても良い。

ｐ−ボロノフェニルアラニンの光学異性体としては、Ｌ−体，Ｄ−体，Ｌ―体およびＤ−体のジアステレオマーのどのようなものでも良いが、とりわけＬ―体が好ましい。添加する純水としては、例えば市販のＭｉＬＬｉ−ＱＷａｔｅｒ（商品名）市販の純水を用いても良い。

以下に、ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成の処方例を示す。
処方例１
ＢＰＡを含むイオン液体 ３６μＬ
ｔｗｅｅｎ８０ １５μＬ
エタノール ６０μＬ
ＰＢＳ ４６９μＬ
ＰＢＳに溶解させたクエン酸 ２０μＬ（１ｇ／２５ｍＬ）

実施例１
１−１ コリン−セリンイオン液体
アニオンとして市販の医薬品用高純度セリン（東京化成工業製）を、終濃度０．０５ｍｏｌ濃度になるように純水（商品名：，ＭｉＬＬｉ−ＱＷａｔｅｒ、メルクミリポア社製）に溶解した。カチオンとしてこれと等量になるようにコリン水溶液（２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシド、４７〜５０％水溶物：東京化成工業製）１２．０ｍｌを加え、室温で２４時間撹拌した。撹拌終了後、混合溶液をオイルバスに移し、１２０℃の温度に加温し、エバポレーターで水分を除去した後、室温まで徐々に冷却した。
コリン−セリンイオン液体の生成を化学的に確認するために、サンプルを^１ＨＮＭＲ（図１）およびＦＴ−ＩＲ（図２）で確認した。
^１ＨＮＭＲの測定結果は文献値と一致し、ＦＴ−ＩＲでは１５５５〜１５９３ｃｍ^−１付近に現れるカルボキシレートの非対称性伸縮を確認したため、コリン-セリンイオン液体の生成が確認された。

１−２ ｐ−ボロノフェニルアラニン含有コリン−セリンイオン液体組成物
コリン−セリンイオン液体３３８．１ｍｇに純水（商品名：ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ、メルクミリポア社製）１００μＬを加え溶解液を作成した。
ｐ−ボロノフェニルアラニンを前記溶解液に対して添加し撹拌した。溶解しないｐ−ボロノフェニルアラニンを除去し、ボロン濃度の測定により、溶解しているｐ−ボロノフェニルアラニンの濃度を測定したところ、１７６７２．２４５ｐｐｍであった。

実施例２
２−１ コリン−プロリンイオン液体
アニオンとして市販の医薬品用高純度プロリン（東京化成工業製）を、終濃度０．０５ｍｏｌ濃度になるように純水（商品名：，ＭｉＬＬｉ−ＱＷａｔｅｒ、メルクミリポア社製）に溶解した。カチオンとしてこれと等量になるようにコリン水溶液（２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシド、４７〜５０％水溶物：東京化成工業製）１２．０ｍｌを加え、室温で２４時間撹拌した。撹拌終了後、混合溶液をオイルバスに移し、１２０℃の温度に加温し、エバポレーターで水分を除去した後、室温まで徐々に冷却し、コリンプロリンイオン液体を得た。

コリン−プロリンイオン液体の生成を化学的に確認するために、サンプルを^１ＨＮＭＲ（図３）およびＦＴ−ＩＲ（図４）で確認した。
^１ＨＮＭＲの測定結果は文献値（デユアンージアン タオ他、ジャーナル オブ ケミカル エンジニアリング データ、２０１３年、５８巻、１５４２〜１５４８頁、コウドリー他、モレキュラー ファーマセウティカルス、２０１８年、１５巻、６号、２４８４〜２４８８頁）と一致し、ＦＴ−ＩＲでは特有のピークを確認したため、コリン-セリンイオン液体の生成が確認された。

２−２ ｐ−ボロノフェニルアラニン含有コリン−プロリンイオン液体組成物
コリン−プロリンイオン液体２９７．５ｍｇに純水（商品名：ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ、メルクミリポア社製）１００μＬを加え溶解液を作成した。
ｐ−ボロノフェニルアラニンを前記溶解液に対して添加し撹拌した。溶解しないｐ−ボロノフェニルアラニンを除去し、ボロン濃度の測定により、溶解しているｐ−ボロノフェニルアラニンの濃度を測定したところ、１２５００，１３９ｐｐｍであった。

実施例３
３−１ コリン−グリシンイオン液体
アニオンとして市販の医薬品用高純度グリシン（東京化成工業製）を、終濃度０．０５ｍｏｌ濃度になるように純水（商品名：ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ、メルクミリポア社製）に溶解した。カチオンとしてこれと等量になるようにコリン水溶液（２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシド、４７〜５０％水溶物：東京化成工業製）１２．０ｍｌを加え、室温で２４時間撹拌した。撹拌終了後、混合溶液をオイルバスに移し、１２０℃の温度に加温し、エバポレーターで水分を除去した後、室温まで徐々に冷却し、コリングリシンイオン液体を得た。

コリン−プロリンイオン液体の生成を化学的に確認するために、サンプルを^１ＨＮＭＲ（図５）およびＦＴ−ＩＲ（図６）で確認した。
^１ＨＮＭＲの測定結果は文献値（デユアンージアン タオ他、ジャーナル オブ ケミカル エンジニアリング データ、２０１３年、５８巻、１５４２〜１５４８頁、コウドリー他、モレキュラー ファーマセウティカルス、２０１８年、１５巻、６号、２４８４〜２４８８頁）と一致し、ＦＴ−ＩＲでは特有のピークを確認したため、コリン−セリンイオン液体の生成が確認された。

３−２ ｐ−ボロノフェニルアラニン含有コリン−グリシンイオン液体組成物
コリン−グリシンイオン液体３２１．０ｍｇに純水（商品名：ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ、メルクミリポア社製）ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ１００μＬを加え溶解液を作成した。
ｐ−ボロノフェニルアラニンを前記溶解液に対して添加し撹拌した。溶解しないｐ−ボロノフェニルアラニンを除去し、ボロン濃度の測定により、溶解しているｐ−ボロノフェニルアラニンの濃度を測定したところ、７１７１．８７６ｐｐｍであった。

実施例４
４−１ コリン−フェニルアラニンイオン液体
アニオンとして市販の医薬品用高純度フェニルアラニン（和光純薬製）を、終濃度０．０５ｍｏｌ濃度になるように純水（商品名：ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ、メルクミリポア社製）に溶解した。カチオンとしてこれと等量になるようにコリン水溶液（２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシド、４７〜５０％水溶物：東京化成工業製）１２．０ｍｌを加え、室温で２４時間撹拌した。撹拌終了後、混合溶液をオイルバスに移し、１２０℃の温度に加温し、エバポレーターで水分を除去した後、室温まで徐々に冷却し、コリンフェニルアラニンイオン液体を得た。

コリン−フェニルアラニンイオン液体の生成を化学的に確認するために、サンプルを^１ＨＮＭＲ（図７）およびＦＴ−ＩＲ（図８）で確認した。
^１ＨＮＭＲの測定結果は文献値（デユアンージアン タオ他、ジャーナル オブ ケミカル エンジニアリング データ、２０１３年、５８巻、１５４２〜１５４８頁、コウドリー他、モレキュラー ファーマセウティカルス、２０１８年、１５巻、６号、２４８４〜２４８８頁）と一致し、ＦＴ−ＩＲでは特有のピークを確認したため、コリン−セリンイオン液体の生成が確認された。

４−２ ｐ−ボロノフェニルアラニン含有コリン−フェニルアラニンイオン液体組成物
コリン−グリシンイオン液体２８０．９ｍｇに純水（商品名：ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ、メルクミリポア社製）１００μＬを加え溶解液を作成した。
ｐ−ボロノフェニルアラニンを前記溶解液に対して添加し撹拌した。溶解しないｐ−ボロノフェニルアラニンを除去し、ボロン濃度の測定により、溶解しているｐ−ボロノフェニルアラニンの濃度を測定したところ、７３４２．１０４ｐｐｍであった。

実施例５
５−１ コリン−クエン酸イオン液体
アニオンとして市販の医薬品用クエン酸（和光純薬製）を、終濃度０．０５ｍｏｌ濃度になるように純水（商品名：ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ、メルクミリポア社製）に溶解した。カチオンとしてこれと等量になるようにコリン水溶液（２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシド、４７〜５０％水溶物：東京化成工業製）１２．０ｍｌを加え、室温で２４時間撹拌した。撹拌終了後、混合溶液をオイルバスに移し、１２０℃の温度に加温し、エバポレーターで水分を除去した後、室温まで徐々に冷却し、コリン−クエン酸イオン液体を得た。

コリン−クエン酸液体の生成を化学的に確認するために、サンプルを^１ＨＮＭＲ（図９）およびＦＴ−ＩＲ（図１０）で確認した。
^１ＨＮＭＲの測定結果は文献値（デユアンージアン タオ他、ジャーナル オブ ケミカル エンジニアリング データ、２０１３年、５８巻、１５４２〜１５４８頁、コウドリー他、モレキュラー ファーマセウティカルス、２０１８年、１５巻、６号、２４８４〜２４８８頁）と一致し、ＦＴ−ＩＲでは特有のピークを確認したため、コリン−セリンイオン液体の生成が確認された。

５−２ ｐ−ボロノフェニルアラニン含有コリン−クエン酸イオン液体組成物
コリン−クエン酸イオン液体に純水（商品名：ＭｉＬＬｉ−Ｑ Ｗａｔｅｒ、メルクミリポア社製）１００μＬを加え溶解液を作成した。
ｐ−ボロノフェニルアラニンを前記溶解液に対して添加し撹拌した。溶解しないｐ−ボロノフェニルアラニンを除去し、ボロン濃度の測定により、溶解しているｐ−ボロノフェニルアラニンの濃度を測定したところ、１０６５６．３３３ｐｐｍであった。

試験例１ ｐ−ボロノフェニルアラニン含有コリンセリンイオン液体とｐ−ボロノフェニルアラニンフラクトース錯体（ＢＰＡ−Ｆｌｕ）の細胞毒性の対比
ＢＰＡ−ＩＬとＢＰＡ−Ｆｌｕの細胞毒性を対比するために以下の実験を行った。
Ｖ７９−３７９Ａ細胞（チャイニーズハムスター 肺、線維芽細胞：５０００Ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌをＣＯ_２インキュベーターの中で２４時間培養した（５０００Ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）。細胞培養液の中に、ＢＰＡ−ＩＬおよびＢＰＡ−ＦＬＵ（ホウ素濃度７．８１２５ｐｐｍ〜４０００ｐｐｍ）各１０μＬを添加し、更に１時間培養した。ＣＣＫ−８溶液１０μＬをＣＯ_２インキュベーターに添加した６０分後に、４５０ｎｍにおける吸収を測定することによりＢＰＡ−ＩＬおよびＢＰＡ−ＦＬＵの各濃度における細胞の生存率を測定した（図９）。

その結果、ＢＰＡ−ＦＬＵのＩＣ_５０が６３３．３ｐｐｍであるのに対して、ＢＰＡ−ＩＬが１２１５ｐｐｍであり、本件発明の組成物が、従来の化合物よりも安全であることが示された。

本発明により、高濃度ｐ−ボロノフェニルアラニンを内包し、かつ安全な腫瘍の放射線治療に用いる増強剤およびＰＥＴに用いる診断用医薬品が提供される。

Ｃｈｏｌｉｎｅ：コリン水溶液
Ｉｏｎｉｃ Ｌｉｑｕｉｄｓ：コリン−セリンイオン液体
ＢＰＡ−ＩＬ：ｐ−ボロノフェニルアラニン含有コリンセリン液体
ＢＰＡ−Ｆｌｕ：ｐ−ボロノフェニルアラニンフラクトース錯体
（ａ）コリン、（ｂ）コリン−セリンイオン液体、（ｃ）Ｌ−セリン
（ｄ）コリン−プロリンイオン液体、（ｅ）Ｌ−プロリン
（ｆ）コリン−グリシンイオン液体、（ｇ）Ｌ−グリシン
（ｈ）コリン−フェニルアラニンイオン液体、（i）Ｌ−フェニルアラニン
（ｊ）コリン−クエン酸イオン液体、（ｋ）クエン酸

Claims (8)

1. ｐ−ボロノフェニルアラニンを有効成分とし、イオン液体を含むことを特徴とする液状医薬組成物。
2. イオン液体がコリン塩のイオン液体であることを特徴とする請求項１記載の液状医薬組成物。
3. コリン塩のイオン液体が、２−ヒドロキシエチルトリメチルアンモニウムヒドロキシドのカチオンと、アミノ酸またはクエン酸のアニオンから構成されることを特徴とする請求項１または２記載の液状医薬組成物。
4. アミノ酸が、グリシン、セリン、プロリンまたはフェニルアラニンであることを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
5. ｐ−ボロノフェニルアラニンをホウ素濃度として５０００ｐｐｍ〜３００００ｐｐｍ含むことを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の液状医薬組成物。
6. 請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の液状医薬組成物を有効成分として含むことを特徴とする腫瘍の放射線治療に用いる増強剤。
7. 請求項６記載の放射線治療が、中性子捕捉療法であることを特徴とする増強剤。
8. ＰＥＴによる画像診断に用いることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の液状医薬組成物。

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