JP2021134215A - プロテアソーム活性化剤 - Google Patents
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Abstract
Description
〔項1〕トルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの中から選ばれる1種、又は2種以上に由来する抽出物を含むプロテアソーム活性化剤。
〔項2〕〔項1〕記載の剤を含有する皮膚外用剤。好ましくは、表皮細胞のプロテアソーム活性化のための皮膚外用剤である。
〔項3〕〔項1〕記載の剤を含有する経口組成物。好ましくは、細胞内プロテアソームの活性化を必要とする対象者のための経口組成物である。
〔項4〕トルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの中から選ばれる1種、又は2種以上に由来する抽出物を用いて、プロテアソームを活性化することを特徴とする、肌細胞の老化抑制のための美容方法。
(プロテアソームの活性化剤)
プロテアソームの活性化剤は、細胞内のプロテアソームの活性化を誘導するための剤である。この剤は、液体だけでなく、固形等も挙げられ、皮膚外用剤だけでなく、経口組成物(固体でも液体でも作製可能)も考えられる。
「トルメンチラ」は、バラ科、ポテンティラ属の植物(トルメンチラ(学名 Potentilla tormentilla))である。「トルメンチラ」の抽出物を製造する際には、材料として、例えば、根、根茎、葉、茎、花、果実、果皮、種子、全草、又はこれらの混合物を用いる。
「セイヨウネズ」は、ヒノキ科、ビャクシン属の植物(セイヨウネズ(学名 Juniperus communis))である。「セイヨウネズ」の抽出物を製造する際には、材料として、例えば、根、根茎、葉、茎、花、果実、果皮、種子、全草、又はこれらの混合物を用いる。
「ハマメリス」は、マンサク科、マンサク属の植物(ハマメリス(学名 Hamamelis virginiana))である。「ハマメリス」の抽出物を製造する際には、材料として、例えば、根、根茎、葉、茎、花、果実、果皮、種子、全草、又はこれらの混合物を用いる。
トルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの抽出物は、例えば、材料を生のまま又は乾燥したものを粉砕後に溶媒で抽出して作製する。以下に製造例を示す。
トルメンチラの根乾燥物、セイヨウネズの果実乾燥物、又はハマメリスの葉乾燥物を粉砕する。これらの粉砕物について、各100gを個別に50℃〜80℃の温水1kgに5〜24時間浸漬する。この浸漬を経て得られる溶液を所定の濾過材(Glass Fiber Filter (ADVANTEC製 Gf−75)とMixed Cellurose ester (ADVANTEC製 A045A047A)など)を用いて濾過する。終濃度30%となるように1,3−ブチレングリコールを添加し、0℃〜10℃の環境で10〜20日間、静置する。この溶液を所定の濾過材を用いて濾過し、得られた溶液をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いる。この製造例1で得られる各抽出物に含まれる乾燥固形分は、1〜5%である。
トルメンチラの根乾燥物、セイヨウネズの果実乾燥物、又はハマメリスの葉乾燥物を粉砕する。これらの粉砕物について、各100gを個別に50%エタノール溶液1kgに浸漬する。10℃〜30℃の環境で、5〜15日間浸漬する。この浸漬を経て得られる溶液を所定の濾過材を用いて濾過する。濾過後の溶液に含まれるエタノールをエバポレーションによって所定量除去する。この除去後の溶液に対して、終濃度50%となるように1,3−ブチレングリコールを添加する。この添加後の溶液を0℃〜10℃の環境で、10〜20日間静置する。再度、所定の濾過材を用いて濾過し、得られた溶液をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いる。この製造例2で得られる各抽出物に含まれる乾燥固形分は、1〜5%である。
トルメンチラの根乾燥物、セイヨウネズの果実乾燥物、又はハマメリスの葉乾燥物を粉砕する。これらの粉砕物について、各100gを個別に70%1,3−ブチレングリコール溶液1kgに浸漬する。10℃〜30℃の環境で5〜15日間浸漬する。この浸漬を経て得られる溶液を所定の濾過材を用いて濾過する。−30℃〜−10℃の環境で10〜20日間静置した後、所定の濾過材を用いて濾過する。さらに、0℃〜10℃の環境で10〜20日間静置した後、所定の濾過材を用いて濾過する。得られた溶液をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いる。この製造例3で得られる各抽出物に含まれる乾燥固形分は、1〜5%である。
トルメンチラの根乾燥物、セイヨウネズの果実乾燥物、又はハマメリスの葉乾燥物を粉砕する。これらの粉砕物について、各100gを個別に70%の1,3−ブチレングリコール溶液1kgに浸漬する。10℃〜30℃の環境で5〜15日間浸漬する。この浸漬を経て得られる溶液を所定の濾過材を用いて濾過する。−30℃〜−10℃の環境で10〜20日間静置した後、所定の濾過材を用いて濾過する。1,3−ブチレングリコールが終濃度50%となるように水を添加し、0℃〜10℃の環境で10〜20日間静置する。この溶液を所定の濾過材を用いて濾過し、得られた溶液をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いる。この製造例4で得られる各抽出物に含まれる乾燥固形分は、1〜5%である。
トルメンチラの根乾燥物、セイヨウネズの果実乾燥物、又はハマメリスの葉乾燥物を粉砕する。これらの粉砕物について、各100gを個別に70%1,3−ブチレングリコール溶液1kgに浸漬する。0℃〜10℃の環境で10〜20日間浸漬する。この浸漬を経て得られる溶液を所定の濾過材を用いて濾過した後、活性炭によって成分吸着する。所定の濾過材を用いて濾過することで活性炭を除き、更に限外濾過膜を用いて、濾過し、分子量50000以下の分画を作製して、得られた溶液をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いる。この製造例5で得られる各抽出物に含まれる乾燥固形分は、1〜5%である。
抽出溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール或いは含水低級アルコール、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、1,2−ブチレングリコール、1,4−ブチレングリコール、1,5−ペンタンジオール、1,2−ペンタンジオール、1,3−ペンタンジオール、1,4−ペンタンジオール、1,3,5−ペンタントリオール、グリセリン、ポリエチレングリコール(分子量100〜10万)等の多価アルコール或いは含水多価アルコール、アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル、エチルメチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、キシレン、ベンゼン、クロロホルム、四塩化炭素、フェノール、トルエン等の各種有機溶媒や適宜規定度を調製した酸(塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸等)やアルカリ(水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等)の中から選ばれる1種、もしくは2種以上の混液が挙げられる。
本発明で用いるトルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの抽出物は、溶媒抽出後、更に適宜精製操作を施すことも可能である。精製操作は、例えば、酸(塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、有機酸等)又はアルカリ(水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等)添加による分解、微生物による発酵又は代謝変換、イオン交換樹脂や活性炭、ケイ藻土等による成分吸着、種々の分離モード(イオン交換、親水性吸着、疎水性吸着、サイズ排除、配位子交換、アフィニティー等)を有するクロマトグラフィーを用いた分画、濾紙やメンブランフィルター、限外濾過膜等を用いた分子量分画濾過、加圧又は減圧、加温又は冷却、乾燥、pH調整、脱臭、脱色、長時間の静置保管等であり、これらを任意に選択し、組み合わせて処理することも可能である。
本発明のトルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの抽出物は、澱の析出をより防ぐ観点から、上述の製造例1及び製造例2において、1,3−ブチレングリコールを添加する前に、HP−20といった樹脂で精製してもよい。HP−20を用いる場合、1,3−ブチレングリコールを添加する前の溶液を20%エタノール濃度にした後、HP−20を充填したカラムに添加する。20%エタノールでカラムを洗浄後、50%エタノールで溶出する。得られた溶出液に含まれるエタノールをエバポレーションによって所定量除去する。この除去後の溶液に対して、所定量の1,3−ブチレングリコールを添加する。この添加後の溶液を約0℃〜約10℃の環境で10〜20日間静置する。再度、所定の濾過材を用いて濾過し、得られた溶液をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いる。
本発明のトルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの抽出物は、澱の析出をより防ぐ観点から、上述の製造例4において、HP−20といった樹脂で精製する工程を挿入してもよい。HP−20を用いる場合、HP−20を5〜15%重量で添加し、10℃〜30℃の環境で一晩撹拌する。所定の濾過材を用いて濾過し、得られた溶液をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いる。
本発明のトルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの抽出物は、澱の析出をより防ぐ観点から、上述の製造例1〜4において、活性炭で精製する工程を追加してもよい。活性炭を0.1〜3%重量で添加し、10℃〜30℃の環境で0.5〜2時間撹拌する。所定の濾過材を用いて濾過し、得られた溶液をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いる。
本発明のトルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの抽出物は、澱の析出をより防ぐ観点から、製造例1〜5などで作製した各抽出物を、更に限外濾過膜を用いて、濾過し、所定の分子量の分画を作製して、その分画をトルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物として用いてもよい。この分画の分子量の上限は、澱の析出をより防ぐ観点から、好ましくは100000以下、より好ましくは80000以下、更に好ましくは50000以下である。
本発明による経口組成物は、例えば、飲料、食品、医薬品、医薬部外品が挙げられる。本実施形態の抽出物を配合して食品組成物を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類;ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質;アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類;セルロース、アラビアゴム等の多糖類;大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等の任意の助剤を添加して任意の剤形に製剤化することができる。また、本実施形態の抽出物の経口組成物への配合量は、一般的な摂取量を考慮して成人一日当たり本実施形態の抽出物の摂取量が1日当たり約1〜1000mg程度となるように調整することが好ましい。経口組成物における本発明の抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、0.001〜50%、好ましくは0.01〜15質量%の範囲が好ましい。
本発明による皮膚外用剤は、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、液体、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、スプレー剤等利用上の適当な形態の1)医薬品類、2)医薬部外品類、3)局所用又は全身用の皮膚外用剤類(例えば、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、固形石鹸、液体ソープ、ハンドウォッシュ等の洗顔料や皮膚洗浄料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、除毛剤、脱毛剤、髭剃り処理料、アフターシェーブローション、プレショーブローション、シェービングクリーム、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ等のメークアップ化粧料、香水類、美爪剤、美爪エナメル、美爪エナメル除去剤、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、貼付剤、エアゾール剤等)、4)頭皮・頭髪に適用する薬用又は/及び化粧用の製剤類(例えば、シャンプー剤、リンス剤、ヘアートリートメント剤、プレヘアートリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、エアゾール剤等)、5)浴湯に投じて使用する浴用剤、6)その他、腋臭防止剤や消臭剤、制汗剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ等が挙げられる。
また、このような剤には、必要に応じて、本発明の効果を損ねない範囲で以下に例示する成分や添加剤を任意に選択・併用して製造することができ、これらの処方系中への配合量は、特に規定するものではないが、通常、0.0001〜50質量%程度が好ましいと考えられる。
アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン、又はこれら油脂類の水素添加物(硬化油等)等。
ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等。
流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス等。
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、12−ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸等の天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、2−エチルブタン酸、イソペンタン酸、2−メチルペンタン酸、2−エチルヘキサン酸、イソペンタン酸等の合成脂肪酸。
エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール等の天然アルコール、2−ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、2−オクチルドデカノール等の合成アルコール。
酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、ペンチルグリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、ガラクチトール、ソルビトール、マンニトール、ラクチトール、マルチトール等。
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等。
ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛等。
アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン(C2〜C4)オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル(C2〜C4)キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等。
アニオン界面活性剤(アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩)、カチオン界面活性剤(アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩)、両性界面活性剤:カルボン酸型両性界面活性剤(アミノ型、ベタイン型)、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤(エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤)、その他の界面活性剤(天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤)等。
ビタミンA群:レチノール、レチナール(ビタミンA1)、デヒドロレチナール(ビタミンA2)、カロチン、リコピン(プロビタミンA)、ビタミンB群:チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩(ビタミンB1)、リボフラビン(ビタミンB2)、ピリドキシン(ビタミンB6)、シアノコバラミン(ビタミンB12)、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンC群:ビタミンC酸又はその誘導体、ビタミンD群:エルゴカルシフェロール(ビタミンD2)、コレカルシフェロール(ビタミンD3)、ジヒドロタキステロール、ビタミンE群:ビタミンE又はその誘導体、ユビキノン類、ビタミンK群:フィトナジオン(ビタミンK1)、メナキノン(ビタミンK2)、メナジオン(ビタミンK3)、メナジオール(ビタミンK4)、その他、必須脂肪酸(ビタミンF)、カルニチン、フェルラ酸、γ−オリザノール、オロット酸、ビタミンP類(ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン)、ビタミンU等。
バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸などのアミノ酸誘導体等。
添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工(例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、濾過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、pH調整、脱臭、脱色等を任意に選択、組み合わせた処理)を行い、各種の素材から任意に選択して供すれば良い。
本発明の美容方法は、トルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの中から選ばれる1種、又は2種以上に由来する抽出物を用いて、細胞内のプロテアソームを活性化することを特徴とする。前述のとおり、本発明者らは、トルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリス由来の抽出物に、細胞内のプロテアソームを活性化する作用を見出した。そして、この知見から本発明者らは、肌改善のための美容方法として、トルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの中から選ばれる1種、又は2種以上に由来する抽出物を用いてプロテアソームを活性化することに至り、本発明を完成させた。また、本発明において、美容方法とは、単に個人的に行われる方法のみならず、美容に関わる商品の提供の際に、顧客にあわせた化粧料の処方として提供され、医師以外の化粧料販売員やエステティシャンにより提供されるものを含む。また、美容に関わる商品の説明書(添付文書等)等においてその商品の使用方法として提供されるものも含む。
ヒト由来の株化細胞に対して、トルメンチラ、セイヨウネズ、又はハマメリスの抽出物を添加し、一定時間の培養後、細胞を溶解し、細胞内で発現したプロテアソームの活性を評価した。プロテアソームの活性は、その活性を発光強度で定量するCell−Based Proteasome−GloTM Assaysキット(Promega製 G8660(キモトリプシン様活性測定用))を用いて測定した。
ヒト皮膚角化細胞ケラチノサイト(TOYOBO社製)をメーカーの推奨する培地を用いて、96ウェル黒プレートに対して1×104(個)/ウェルで撒き、5%CO2培養機にて37℃で16時間培養した。ハマメリスの抽出物を終濃度0.5%、0.3%、又は0.15%となるようにウェルに添加し、5%CO2培養機にて37℃で2時間、4時間、8時間、又は24時間培養した。ウェル内の培地を抜き取り、PBSでウェルを2回洗浄後、PBSを50μL/ウェルで添加した。そして、Cell−Based Proteasome−GloTM Assaysキットを用いて、メーカーが推奨する方法に従って、プロテアソーム活性を評価した。本実験のコントロールとして、ハマメリスの抽出物を含まない抽出溶媒である50%1,3ブチレングリコールを終濃度0.5%、0.3%、又は0.15%となるように添加したウェルを設定し、プロテアソーム活性を測定した。抽出溶媒のみを添加したウェルのプロテアソーム活性を100として、ハマメリスの抽出物を添加したウェルのプロテアソーム活性の割合(相対値)を算出した。
細胞の老化に伴い、細胞内で酸化されたタンパク質や構造変性したタンパク質が凝集し、リポフスチンと呼ばれる酸化凝集物が蓄積することが知られている。プロテアソームの活性化の結果として、リポフスチンの蓄積が抑制されるかを評価した。
Claims (4)
- トルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの中から選ばれる1種、又は2種以上に由来する抽出物を含むプロテアソーム活性化剤。
- 請求項1記載の剤を含有する皮膚外用剤。
- 請求項1記載の剤を含有する経口組成物。
- トルメンチラ、セイヨウネズ、ハマメリスの中から選ばれる1種、又は2種以上に由来する抽出物を用いて、プロテアソームを活性化することを特徴とする、肌細胞の老化抑制のための美容方法。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2024185836A1 (ja) * | 2023-03-08 | 2024-09-12 | 一丸ファルコス株式会社 | ポドフィロトキシン類を含有するプロテアソーム活性化剤 |
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2021
- 2021-02-19 JP JP2021024746A patent/JP2021134215A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2024185836A1 (ja) * | 2023-03-08 | 2024-09-12 | 一丸ファルコス株式会社 | ポドフィロトキシン類を含有するプロテアソーム活性化剤 |
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