JP2021090454A - 抗原結合分子及びその使用方法 - Google Patents

抗原結合分子及びその使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2021090454A
JP2021090454A JP2021035968A JP2021035968A JP2021090454A JP 2021090454 A JP2021090454 A JP 2021090454A JP 2021035968 A JP2021035968 A JP 2021035968A JP 2021035968 A JP2021035968 A JP 2021035968A JP 2021090454 A JP2021090454 A JP 2021090454A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
cells
antigen
amino acid
molecule
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2021035968A
Other languages
English (en)
Other versions
JP7371039B2 (ja
Inventor
ジェド ウィルツィアス
Wiltzius Jed
ジェド ウィルツィアス
スチュアート ジーベルス
Sievers Stuart
スチュアート ジーベルス
ガルシア アリアンヌ ペレス
Perez Garcia Arianne
ガルシア アリアンヌ ペレス
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kite Pharma Inc
Original Assignee
Kite Pharma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kite Pharma Inc filed Critical Kite Pharma Inc
Publication of JP2021090454A publication Critical patent/JP2021090454A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7371039B2 publication Critical patent/JP7371039B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/626—Diabody or triabody
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)

Abstract

【課題】特定のアミノ酸配列を含む部分に特異的に結合する、抗体を含む抗原結合分子、及び、抗原結合分子のヒト化形態を提供する。【解決手段】ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ、ＧＫＰＧＳＧＥＧ、ＳＧＫＰＧＳＧＥ、及び、ＫＰＧＳＧからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子に特異的に結合する単離抗原結合分子である。【選択図】なし

Description

［関連出願の相互参照］
本願は、２０１６年７月１２日付で出願された米国仮特許出願第６２／３６１，４２０
号及び２０１６年１１月１日付で出願された米国仮特許出願第６２／４１５，７８６号の
優先権を主張し、各々の全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
［配列表］
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が引用
することにより本明細書の一部をなす。２０１７年７月１０日付けで作製された上記ＡＳ
ＣＩＩコピーの名前はＫ１０３３＿０３＿ＳＬ．ｔｘｔであり、５７１５３９バイトのサ
イズである。
本開示は、配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配
列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧ
ＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、これらの配
列を含む分子並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体等の抗原結合分子
、かかる抗原結合分子をコードするポリヌクレオチド、並びに抗原結合分子のヒト化形態
に関する。抗原結合分子を使用する方法も開示する。
抗体を含む抗原結合分子は免疫療法、並びにバイオセンサー、アフィニティークロマト
グラフィー及びイムノアッセイ等の固相ベースの用途に使用される。これらの抗体及び抗
原結合分子は、それらの標的を特異的に結合する能力のために有用性を得る。
バイオテクノロジー及び生物療法用途に用いられる場合にペプチドベースであることが
多いリンカー配列は、様々な科学的に関連した用途に役立つ可能性がある。例えば、リン
カーは単に、より大きな分子に対して所望の構造特性及び／又は機能特性を与えるために
スペーサー部分として使用することができる。別の例では、リンカーは、より大きな分子
に対して構造特性又は機能特性を殆ど又は全く与えることができないが、単により大きな
分子を独自に特定する特徴的な特徴部（例えば、「マーカー」又は「バイオマーカー」又
は「タグ」）として使用することができる。更に別の例では、リンカーは、リンカー配列
を含むより大きな分子に対する抗体の結合部位として働くことができる認識可能な特徴部
を与えるために使用することができる。
リンカー配列がより大きな分子の特徴的な、検出可能な又は識別可能な特徴部として使
用される場合、より大きな分子中に存在する他の配列を除くリンカー配列を特異的に結合
する抗体である抗体が検出剤として働くことができる。かかる抗体は、或る特定の条件下
で検出可能な部分で標識することができる。かかる抗体の付加的な用途としては、リンカ
ーを含む分子の精製及び単離、特定の状況における分子の特性化、リンカーを含む及び／
又は提示する分子の集団の濃度の富化、並びに治療用途も挙げられる。
１９９３年に、Whitlow et al.がアミノ酸配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ
（配列番号１）を含む合成リンカーペプチドを開示している（非特許文献１）。開示のペ
プチドはｓｃＦｖの構成成分として研究され、これまでのリンカーペプチドにおいて同定
されたタンパク質分解部位を除去するように設計された。Whitlow et al.は、この新たに
設計された合成リンカーペプチドが、その配列がベースとする以前のリンカーペプチドと
比較した場合にｉｎ ｖｉｔｒｏでタンパク質分解に対してより安定しており、更には同
じ以前のリンカーと比較して少ない凝集を示すと結論付けた。Whitlow et al.は、それら
の第二世代リンカーペプチドに対する任意の抗原結合分子は開示していいない。
配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧ
ＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧ
Ｅ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、これらの配列を含む分
子、並びにかかる分子を提示する細胞を特異的に結合する抗体を含む抗原結合分子が本明
細書に開示される。抗原結合分子のヒト化形態も提供される。その適用及び使用も開示さ
れる。
Whitlow et al., (1993) Prot. Eng. 6(8):989-95
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子に特異
的に結合する単離抗原結合分子が提供される。様々な実施の形態では、抗原結合分子は、
抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ｄＡｂ、非ヒト抗体（例え
ば、ウサギ）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナ
ル抗体、組み換え抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＤ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ヒンジ領
域中に少なくとも１つの変異を有するＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ヒンジ領域中に少な
くとも１つの変異を有するＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、ヒンジ領域中に少なくとも１つ
の変異を有するＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ４抗体、ヒンジ領域中に少なくとも１つの変異を有
するＩｇＧ４抗体、少なくとも１つの非自然発生アミノ酸を含む抗体及びそれらの任意の
組合せからなる群から選択される。特定の実施の形態では、抗原結合分子は、抗体を含む
。
様々な実施の形態では、抗原結合分子は、重鎖（ＨＣ）を含み、幾つかの実施の形態で
は、ＨＣは、配列番号５及び配列番号１７からなる群から選択される重鎖可変領域（ＶＨ
）配列を含む。他の実施の形態では、可変領域（ＶＨ）は、（ａ）ＣＤＲ１、（ｂ）ＣＤ
Ｒ２及び（ｃ）ＣＤＲ３の１つ以上を含む。幾つかの実施の形態では、抗原結合分子は、
配列番号７及び配列番号１９からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１を含み、他の実施の
形態では、抗原結合分子は、配列番号８及び配列番号２０からなる群から選択される重鎖
ＣＤＲ２を含み、更なる他の実施の形態では、抗原結合分子は、配列番号９及び配列番号
２１からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む。様々な実施の形態では、抗原結合分
子は、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲが図６及び図８に
示されるアミノ酸配列を含み、更なる実施の形態では、抗原結合分子は、本明細書、例え
ば添付の配列表並びに図６及び図８で提供される抗原結合分子のＶＨに対して少なくとも
約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも
約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも
約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一のＶＨアミノ酸配列を含む。
様々な実施の形態では、抗原結合分子は、軽鎖（ＬＣ）を含み、幾つかの実施の形態で
は、抗原結合分子は、ＬＣは、配列番号１１及び配列番号２３からなる群から選択される
軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。他の実施の形態では、可変領域（ＶＬ）は、（ａ）Ｃ
ＤＲ１、（ｂ）ＣＤＲ２及び（ｃ）ＣＤＲ３の１つ以上を含む。幾つかの実施の形態では
、抗原結合分子は、配列番号１３及び配列番号２５からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ
１を含み、他の実施の形態では、抗原結合分子は、配列番号１４及び配列番号２６からな
る群から選択される軽鎖ＣＤＲ２を含み、更なる他の実施の形態では、抗原結合分子は、
配列番号１５及び配列番号２７からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３を含む。様々な実
施の形態では、抗原結合分子は、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、
各ＣＤＲが図６及び図８に示されるアミノ酸配列を含み、更なる実施の形態では、抗原結
合分子は、本明細書、例えば添付の配列表並びに図６及び図８で提供される抗原結合分子
のＶＬに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なく
とも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なく
とも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一のＶＬアミ
ノ酸配列を含む。
特定の実施の形態では、抗原結合分子は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ
；及び（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。更に特定の実施の形態では
、抗原結合分子は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１領域；（ｂ）
配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２領域；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列
を含むＶＨ ＣＤＲ３領域；（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１領
域；（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２領域；及び（ｆ）配列番号
１５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３領域を含む。
特定の実施の形態では、抗原結合分子は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶ
Ｈ；及び（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。更に特定の実施の形態で
は、抗原結合分子は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１領域；（
ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２領域；（ｃ）配列番号２１のアミ
ノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３領域；（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ Ｃ
ＤＲ１領域；（ｅ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２領域；及び（ｆ）
配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３領域を含む。
幾つかの実施の形態では、本明細書で提供される抗原結合分子は、蛍光標識、フォトク
ロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気標識、放射標識及びハプテンからなる群から
選択することができる検出可能な標識を更に含む。特定の実施の形態では、検出可能な標
識は、蛍光標識であり、Ａｔｔｏ色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロ
キシクマリン、アミノクマリン、メトキシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃ
ｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、
ＮＢＤ、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コ
ンジュゲート、Ｒｅｄ ６１３、ＰｅｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセ
イン、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．
５、Ｃｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ
、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ＡＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌ
ｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、Ｇ
ＦＰ（Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐ
ｈｉｒｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦＰ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅ
ｔ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、
ｍＴＦＰ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）、Ｍｉｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙ
ｐｅ ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ
６５Ｌ変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒ
ｅｅｎ、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉ
ｔｒｉｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏ
ｒａｎｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦ
Ｐ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」
）、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ＴｕｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−
Ｒｅｄ、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅ
ｒｒｙ、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）
、ｍＫａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐ
ｂｅｒｒｙからなる群から選択される。
抗原結合分子を含む組成物、抗原結合分子の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び抗
原結合分子の軽鎖をコードするポリヌクレオチドも提供される。ポリヌクレオチドを含む
ベクター及びかかるベクターを含む細胞が本開示の付加的な態様を形成する。様々な実施
の形態において、細胞はＣＨＯ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ウサギ細胞、他の哺乳動物細胞、
酵母細胞、又は大腸菌（E. coli）細胞等の細菌細胞からなる群から選択することができ
る。細胞を好適な条件下でインキュベートすることを含み得る、本明細書に開示される抗
原結合分子を作製する方法も提供される。
別の態様では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番
号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む治療用分子を提示する予め選択される数の細胞を含む用量の薬剤を被験体に投与する
方法が提供される。１つの実施の形態では、上記方法は、（ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳ
ＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥ
Ｇ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５０
０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む治療用分子を発現することが知られて
いる又は疑われる、既知の数の細胞を含む集団を含む既知の容量のサンプルを準備するこ
とと、（ｂ）選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示する細胞の集団を含むサンプルの
アリコートを準備することと、（ｃ）選択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、検出可
能な標識を含む抗原結合分子を準備することと、（ｄ）（ｂ）のアリコートと（ｃ）の抗
原結合分子とを、サンプル中に存在する細胞及び該抗原結合分子を含む結合複合体の形成
を可能にする条件下で接触させることと、（ｅ）アリコート中の（ｄ）の結合複合体に存
在する細胞の割合（fraction）を決定することと、（ｆ）（ｅ）において決定された細胞
の割合に基づいて、サンプル中の選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示する細胞の濃
度を決定することと、（ｇ）選択される数の細胞を含むサンプルの容量を決定することと
、（ｈ）（ｇ）において決定された容量のサンプルを被験体に投与することとを含む。
幾つかの実施の形態では、（ａ）治療用分子がＣＡＲであり、（ｂ）細胞がＣＤ８＋Ｔ
細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状
細胞及びＮＫ−Ｔ細胞からなる群から選択される免疫細胞である。特定の実施の形態では
、ＣＡＲは、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７
、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１
１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（
Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（
ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９
ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ
（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、
ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２
）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受
容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、
ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、Ｃ
Ｄ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１
）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５
８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２Ｄ
Ｌ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、Ｃ
Ｄ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ
２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）
、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４
）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、Ｃ
Ｄ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、
ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６
）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳ
Ｆ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）
、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベ
ータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、Ｇ
ＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド
、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク
質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受
容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラ
グメントを含む。幾つかの実施の形態では、免疫細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖ
ｉｖｏに配置されていてもよく、血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び
細胞培養培地の１つの中にあってもよいＴ細胞である。Ｔ細胞は自己Ｔ細胞又は同種異系
Ｔ細胞であり得る。幾つかの実施の形態では、上記用量は被験体の１キログラム当たり０
．５×１０６個の細胞、被験体の１キログラム当たり１．０×１０６個の細胞、被験体の
１キログラム当たり２．０×１０６個の細胞、被験体の１キログラム当たり３．０×１０
６個の細胞、被験体の１キログラム当たり４．０×１０６個の細胞又は被験体の１キログ
ラム当たり５．０×１０６個の細胞を含む。特定の実施の形態では、上記用量は、１ｋｇ
当たり１．０×１０６個の細胞を含む。他の実施の形態では、検出可能な標識は、蛍光標
識、フォトクロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気標識、放射標識及びハプテンか
らなる群から選択される。検出可能な標識が蛍光標識である場合、蛍光標識は、Ａｔｔｏ
色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシクマリン、アミノクマリン、
メトキシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆ
ｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ、Ｒ−フィコエリトリン（
ＰＥ）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｒｅｄ ６１３、
ＰｅｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ
２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ロ
ーダミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）
、ＡＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦ
Ｈ、ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ
、ＥＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍ
ＣＦＰ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍ
Ｋｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦＰ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変
異）、Ｍｉｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ
変異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、
ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ、ＺｓＧｒｅｅｎ１、Ｔａ
ｇＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ、ＹＰｅｔ、Ｔｕｒｂ
ｏＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、ア
ロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲ
ＦＰ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、Ｔ
ｕｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ、Ｒ−フィコエリトリン（
ＲＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕ
ｓｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５
）、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒｒｙからなる群から選択す
ることができる。また更なる実施の形態では、抗原結合分子はヒト化抗原結合分子である
。
別の態様では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番
号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む分子を発現する免疫細胞を活性化する方法が提供される。１つの実施の形態では、上
記方法は、（ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番
号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む分子を発現することが知られている又は疑われる免疫細胞を含むサンプルを準備する
ことと、（ｂ）抗原結合分子とサンプルとを、該抗原結合分子及び選択されるアミノ酸配
列を含む２つの分子を含み、該選択されるアミノ酸配列を含む分子が２つの異なる免疫細
胞上に配置される結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させることとを含む。
幾つかの実施の形態では、免疫細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤リ
ンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞からなる群か
ら選択される。特定の実施の形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番
号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧ
ＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択
されるアミノ酸配列を含む分子は、ＣＡＲである。更なる実施の形態では、ＣＡＲは、Ｃ
Ｄ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、Ｃ
Ｄ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡ
Ｘ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２
７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８
）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１
）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ
１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（Ｃ
ＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ
（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連
ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（Ｓ
ＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−
１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８
Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３
ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ
１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ
５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡ
ＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）、ＣＤ２５８（
ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２
（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫ
Ｇ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（Ｎ
Ｋ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３
（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導
性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、
ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２
Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（Ｇｒｐ
Ｌ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受
容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブ
リンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ
様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラグメントを含む
。幾つかの実施の形態では、免疫細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏに配置さ
れていてもよく、血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培地の
１つの中にあってもよいＴ細胞である。Ｔ細胞は自己Ｔ細胞又は同種異系Ｔ細胞であり得
る。また更なる実施の形態では、抗原結合分子はヒト化抗原結合分子である。
別の態様では、サンプル中のＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、
ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳ
ＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む分子を提示する細胞の数を決定する方法が提供される。１つの実施の形
態では、上記方法は、（ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、Ｇ
ＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧ
Ｅ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミ
ノ酸配列を含む分子を提示することが知られている又は疑われる細胞を含むサンプルを準
備することと、（ｂ）（ａ）のサンプルと、選択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、
検出可能な標識を含む抗原結合分子とを、サンプル中に存在する細胞及び該抗原結合分子
を含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させることと、（ｃ）サンプル中の（
ｂ）の結合複合体に存在する細胞の数を決定することとを含む。
幾つかの実施の形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、Ｇ
ＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）及びＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳ
ＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む分子は、ＣＡＲである。特定の実施の形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２、Ｃ
Ｄ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、
ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、Ｃ
Ｄ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮ
ＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ
４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ
４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、Ｃ
Ｄ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡ
Ｍ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞
抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖
）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４
Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）
、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（Ｋ
ＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）
、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ
２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、
ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）
、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨ
Ｔ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬ
Ａ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）
、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４
４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡ
ＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞
共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−
１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ
、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、Ｓ
ＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、Ｍ
ＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタン
パク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体
及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラグメントを含む。他の実
施の形態では、細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、
ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞からなる群から選択される免疫細
胞である。幾つかの実施の形態では、細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏに配
置されていてもよく、血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培
地の１つの中にあってもよいＴ細胞である。Ｔ細胞は自己Ｔ細胞又は同種異系Ｔ細胞であ
り得る。また更なる実施の形態では、抗原結合分子はヒト化抗原結合分子である。
別の態様では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番
号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む分子を単離する方法が提供される。分子は、選択されるアミノ酸をＮ末端、Ｃ末端、
ドメイン間、ループ中、又は構造を分断しても若しくは分断しなくてもよい分子中の任意
の場所に含むことができる。１つの実施の形態では、上記方法は、（ａ）ＧＳＴＳＧＳＧ
ＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰ
ＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列
番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を含むことが知られてい
る又は疑われるサンプルを準備することと、（ｂ）選択されるアミノ酸配列を特異的に結
合し、任意に検出可能な標識を含む抗原結合分子を準備することと、（ｃ）サンプルと抗
原結合分子とを、選択されるアミノ酸配列を含む分子及び該抗原結合分子を含む結合複合
体の形成を可能にする条件下で接触させることと、（ｄ）結合複合体の一部ではないあら
ゆる分子を形成される結合複合体から分離することと、（ｅ）形成される結合複合体を（
１）選択されるアミノ酸配列を含む分子及び（２）抗原結合分子に分離することとを含む
。
幾つかの実施の形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、Ｇ
ＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧ
Ｅ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミ
ノ酸配列を含む分子はＣＡＲである。特定の実施の形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２、ＣＤ３
デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ
１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１
１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲ
ＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０
（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９
ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６
６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３
）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原
受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、
ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）
、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、Ｃ
Ｄ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ
２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、Ｃ
Ｄ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（
ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ
１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、Ｃ
Ｄ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）
、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）
、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、Ｃ
Ｄ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）
、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ
８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺
激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０
、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、Ｉ
Ｌ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ
−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣ
クラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク
質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及び
それらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラグメントを含む。他の実施の
形態では、抗原結合分子は、アガロースビーズ、磁性ビーズ、プラスチックウェルプレー
ト、ガラスウェルプレート、セラミックウェルプレート及び細胞培養バッグからなる群か
ら選択される表面上に配置される。他の実施の形態では、検出可能な標識は、蛍光標識、
フォトクロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気標識、放射標識及びハプテンからな
る群から選択される。検出可能な標識が蛍光標識である場合、蛍光標識は、Ａｔｔｏ色素
、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシクマリン、アミノクマリン、メト
キシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ
Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ
）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｒｅｄ ６１３、Ｐｅ
ｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、
Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダ
ミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、Ａ
ＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、
ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、Ｅ
ＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦ
Ｐ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅ
ｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦＰ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）
、Ｍｉｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異
）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦ
Ｐ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹ
ＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹ
ＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフ
ィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ
、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、Ｔｕｒ
ｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰ
Ｅ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈ
ａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、
ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒｒｙからなる群から選択するこ
とができる。また更なる実施の形態では、抗原結合分子はヒト化抗原結合分子である。
更なる態様では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰ
ＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列
番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列
を含む分子の有無を決定する方法が提供される。実施の形態では、上記方法は、（ａ）Ｇ
ＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号
２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰ
ＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を含むこと
が知られている又は疑われるサンプルを準備することと、（ｂ）検出可能な標識を更に含
む、選択されるアミノ酸配列を特異的に結合する抗原結合分子を準備することと、（ｃ）
サンプルと抗原結合分子とを、結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させることと
、（ｄ）結合複合体の一部ではないあらゆる分子を形成される結合複合体から分離するこ
とと、（ｅ）結合複合体の有無を検出することとを含む。
実施の形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰ
ＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列
番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列
を含む分子はＣＡＲである。更に別の実施の形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ
、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ
（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（
ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７
）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮ
ＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（Ｉ
ＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（
ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、Ｃ
Ｄ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体
複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８
４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ
１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５
０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ
２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５
８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ
２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２
（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４
４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ
２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ
２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１
９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ
３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、
ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子
（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣ
ＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７
Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６
（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス
１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サ
イトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれら
の組合せからなる群から選択される分子又はそのフラグメントを含む。他の実施の形態で
は、抗原結合分子は、アガロースビーズ、磁性ビーズ、プラスチックウェルプレート、ガ
ラスウェルプレート、セラミックウェルプレート及び細胞培養バッグからなる群から選択
される表面上に配置される。他の実施の形態では、検出可能な標識は、蛍光標識、フォト
クロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気標識、放射標識及びハプテンからなる群か
ら選択される。検出可能な標識が蛍光標識である場合、蛍光標識は、Ａｔｔｏ色素、Ａｌ
ｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシクマリン、アミノクマリン、メトキシク
マリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒ
ａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）、Ｐ
Ｅ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｒｅｄ ６１３、ＰｅｒＣＰ
、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、Ｃｙ３
、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダミン、
リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ＡＰＣ−
Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、ＤＨＲ
、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ
２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦＰ、ｍ
Ｔｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅｉｍａ
−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦＰ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）、Ｍｉ
ｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異）、Ｔ
ｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦＰ（Ｓ
６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹＦＰ、
ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹＦＰ、
ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフィコシ
アニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、Ｄｓ
Ｒｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ＴｕｒｂｏＦ
Ｐ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）、
Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈａ、Ｐ
３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、Ｔｕｒ
ｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒｒｙからなる群から選択することがで
きる。また更なる実施の形態では、抗原結合分子はヒト化抗原結合分子である。
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示
する細胞の濃度を増大する方法が更に提供される。幾つかの実施の形態では、上記方法は
、（ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９
）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子
を含むことが知られている又は疑われる細胞を含むサンプルを準備することと、（ｂ）選
択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、任意に検出可能な標識を含む抗原結合分子を準
備することと、（ｃ）サンプルと抗原結合分子とを、選択されるアミノ酸配列を含む分子
及び該抗原結合分子を含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させることと、（
ｄ）結合複合体の一部ではない任意の構成成分を除去することと、（ｅ）工程（ａ）〜（
ｄ）を所望の回数繰り返すこととを含む。
実施の形態では、（ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳ
ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ
（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む分子はＣＡＲであり、（ｂ）細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫
瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞から
なる群から選択される免疫細胞である。更なる実施の形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２、ＣＤ
３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、Ｃ
Ｄ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ
１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦ
ＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４
０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４
９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ
６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ
３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗
原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）
、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ
）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、
ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩ
Ｒ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、
ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２
（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、Ｃ
Ｄ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、
ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ
）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ
）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、
ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４
）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭ
Ｆ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共
刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１
０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、
ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬ
Ｐ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨ
Ｃクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパ
ク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及
びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラグメントを含む。幾つかの
実施の形態では、細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏに配置されていてもよく
、血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培地の１つの中にあっ
てもよいＴ細胞である。Ｔ細胞は自己Ｔ細胞又は同種異系Ｔ細胞であり得る。また更なる
実施の形態では、抗原結合分子はヒト化抗原結合分子である。
また更なる態様では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧ
ＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（
配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸
配列を含む分子を提示する細胞（例えば、免疫細胞）の集団を枯渇させる方法が提供され
る。実施の形態では、上記方法は、（ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列
番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、Ｓ
ＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選
択されるアミノ酸配列を含む分子を発現することが知られている又は疑われる、枯渇させ
るべき免疫細胞の集団を準備することと、（ｂ）免疫細胞と、（ａ）選択されるアミノ酸
配列を含む分子及び（ｂ）該選択されるアミノ酸配列を含まない該免疫細胞の表面上に提
示される活性化分子に特異的に結合する抗原結合分子とを、該選択されるアミノ酸配列を
含む分子、該活性化分子及び該抗原結合分子を含む三元結合複合体の形成を可能にする条
件下で接触させることとを含む。
特定の実施の形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳ
ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ
（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む分子はＣＡＲである。更なる実施の形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２、ＣＤ３デ
ルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１
１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１
ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳ
Ｆ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（
ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ
（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６
ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）
、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受
容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、Ｃ
Ｄ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、
ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ
１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２
ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ
１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（Ｋ
ＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１
６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ
２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、
ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、
ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ
３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、
ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８
）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激
分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、
ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ
−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−
７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣク
ラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質
、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそ
れらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラグメントを含む。幾つかの実施
の形態では、免疫細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏに配置されていてもよく
、血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培地の１つの中にあっ
てもよいＴ細胞である。Ｔ細胞は自己Ｔ細胞又は同種異系Ｔ細胞であり得る。また更なる
実施の形態では、抗原結合分子はヒト化抗原結合分子である。
一態様では、本発明はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧ
ＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（
配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸
配列を含む分子を提示する細胞の集団のｉｎ ｖｉｖｏ分布をモニタリングする方法を提
供する。幾つかの実施の形態では、細胞の集団はＣＡＲ細胞である。幾つかの実施の形態
では、本発明は、抗原結合分子を準備することと、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャ
ンを行うこととを含む、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧ
ＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（
配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸
配列を含む分子を提示する細胞の集団のｉｎ ｖｉｖｏ分布をモニタリングする方法を提
供する。幾つかの実施の形態では、抗原結合分子を準備することで、ＣＡＲ Ｔ細胞をｉ
ｎ ｖｉｖｏで刺激する又は枯渇させる。
図１Ａは、配列番号１のリンカー配列を含むｓｃＦｖ配列のリボン図であり、図１Ｂは、配列番号１のリンカー配列を含むｓｃＦｖ配列の空間充填図である。リンカーを灰色で示す。 配列番号１のリンカー配列を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提示する細胞を用いて行ったフローサイトメトリー実験の結果を示す一連のプロットである。結果は、２つの異なるクローン（クローン８、左；及びクローン１６、右）から生成した１ｎｇ、１０ｎｇ又は１００ｎｇの抗体を用いて得たものであり、３つ全ての量で発現されるＣＡＲに対する抗体の特異的結合を示す。 配列番号１のリンカー配列を含む５つの異なるＣＡＲを提示する細胞を用いて行ったフローサイトメトリー実験の結果を示す一連のプロットであり、発現されるＣＡＲに対する抗体の特異的結合を示す。 ＣＡＲを提示する細胞を用いて行った免疫組織化学（ＩＨＣ）研究の結果を示す一連の写真である。上の図は、ＣＡＲを提示する細胞への、配列番号１のリンカー配列を含むＣＡＲに対する抗体クローン８の特異的結合を示し、下の図は、ＣＡＲを提示する細胞への、配列番号１のリンカー配列を含むＣＡＲに対する抗体クローン１６の特異的結合を示す。 抗体クローン８及びクローン１６に対して行ったエピトープマッピングＥＬＩＳＡ実験の結果を示すヒストグラムである。結果から、全ての抗体が完全長１８ｍｅｒ（配列番号１）に結合するが、クローン８は１０ｍｅｒ部分配列ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）に特異的に結合し、クローン１６は８ｍｅｒ部分配列ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）に特異的に結合することが実証される。図には配列番号１、配列番号４８５〜配列番号４８８、配列番号１及び配列番号４８９〜配列番号４９１がそれぞれ出現順に開示される。 クローン８及びクローン１６によって分泌される抗体の重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を示す一連の表である。重鎖及び軽鎖ＣＤＲは、各抗体についてＫａｂａｔ（それぞれ出現順に配列番号４９２、配列番号８、配列番号９、配列番号４９３、配列番号２０、配列番号２１、配列番号１３〜配列番号１５及び配列番号２５〜配列番号２７）、Ｃｈｏｔｈｉａ（それぞれ出現順に配列番号７〜配列番号９、配列番号１９〜配列番号２１、配列番号１３〜配列番号１５及び配列番号２５〜配列番号２７）及びＩＭＧＴ（それぞれ出現順に配列番号４９４、配列番号８、配列番号９、配列番号４９５、配列番号２０、配列番号２１、配列番号１３〜配列番号１５及び配列番号２５〜配列番号２７）ナンバリングシステムを用いて示す。 １８ｍｅｒ配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、並びにクローン８の抗体が結合するこの配列上のエピトープ（ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ；配列番号２及びＳＧＫＰＧＳＧＥ；配列番号４９９）及びクローン１６の抗体が結合するこの配列上のエピトープ（ＧＫＰＧＳＧＥＧ；配列番号３及びＫＰＧＳＧ；配列番号５００）を示す表である。 本明細書で提供される抗原結合分子のヒト化形態を示す一連の表である。 ＥＬＩＳＡによるエピトープマッピングから本明細書に開示される抗原結合分子が結合することが見出された配列番号１の領域を示す棒グラフである。このアッセイにより、これまでの実験で特定された領域に焦点を合わせたより狭い範囲のペプチド配列を用いることでリンカー抗体エピトープが図５に示されるＥＬＩＳＡから更に狭められる。 本明細書に開示される抗原結合分子を用いて負及び正にゲーティングされたＣＡＲ−Ｔ細胞を示す蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）プロットの結果を示す図である。 ＯＫＴ３抗体及び本明細書に開示される抗リンカー抗体を用いたＣＡＲ−Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激の結果を示す一連の棒グラフである。ＯＫＴ３は所与の集団中の全てのＴ細胞を活性化するが、抗リンカーＭＡｂは、ＣＡＲ＋集団対ＣＡＲ−集団の比率の勾配を用いることによって示されるように、ＣＡＲ−Ｔ細胞の集団を優先的に活性化することで経時的に富化する。 図１２Ａ及び図１２Ｂは、ＣＡＲ−Ｔ陽性細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激の影響を示す一連の棒グラフ及びプロットである。図面から、このＯＫＴ３抗体は全てのＴ細胞を刺激するが、本明細書に開示される抗原結合分子はＣＡＲ−Ｔ陽性細胞のみを選択的に刺激することが示される。 抗リンカークローン８ Ｍａｂによる刺激の前及び後のＣＡＲ Ｔ細胞を予め注射した雌性ＮＳＧマウスのＦＤＧ−ＰＥＴイメージングを示す図である。 図１４Ａ及び図１４Ｂは、ペプチドＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧを含むＣＡＲ構築物と共にインキュベートしたダイアボディ（diabody）が細胞死の増大をもたらすことを示す図である。図１４Ａに示されるように、ダイアボディ濃度が増大するにつれ、特定のペプチドを含有するＣＡＲ構築物の３回の反復試験の平均においてより大きな蛍光強度中央値が見られる。対照ＣＡＲ又はモックを形質導入した細胞をダイアボディと共にインキュベートした場合、細胞毒性色素蛍光の量の有意な増大は見られない。図１４Ｂでは、ダイアボディ濃度の増大に応じたＣＡＲ＋Ｔ細胞のパーセンテージを測定する。
本開示は、配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配
列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧ
ＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）を含む部分を
特異的に結合する、抗体を含む抗原結合分子、並びに抗原結合分子のヒト化形態、配列番
号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００を含む分子、
かかる分子を提示する細胞、分子をコードするポリヌクレオチド、並びにポリヌクレオチ
ドを含むベクターに関する。ポリヌクレオチド及びベクターを含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞
も開示される。
開示の抗原結合分子を使用する方法が提供される。本明細書に記載される抗原結合分子
、ポリヌクレオチド、ベクター、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞及び方法は様々な用途で、例えば
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫ
ＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配
列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）を含む分子、並びにかかる分子
を提示する細胞の存在を検出する試薬として、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配
列番号４９９及び／又は配列番号５００を含む分子、分子並びにかかる分子を提示する細
胞の量の定量化、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列
番号５００を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞のスクリーニング、配列番号１
、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００を含む分子、並び
にかかる分子を提示する細胞の精製、並びに配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列
番号４９９及び／又は配列番号５００を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に焦
点を合わせたバイオマーカー研究に使用することができる。治療的使用、例えば配列番号
１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００を含む分子、並
びにかかる分子を提示する細胞の生物学的活性を変調する（増強又は抑制する）用途、並
びに配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００を
含む治療剤、並びにかかる分子を提示する細胞に関した投与量決定試験も提供される。
本明細書に開示される抗原結合分子（抗体）は、ウサギ起源のＢ細胞を用いて生成した
ハイブリドーマから生成したが、当業者に知られている標準方法及び本明細書に記載され
る方法を用いて容易にヒト化することができる。開示の抗原結合分子の代表的なヒト化形
態が本明細書で提供される。
Ｉ．定義
本開示がより容易に理解され得るように、特定の用語を最初に定義する。本出願で使用
されるように、本明細書において別段の明らかな提供がなされる場合以外は、以下の用語
は各々、下記に述べられる意味を有するものとする。追加の定義は、本出願全体を通して
定められる。本明細書で提供される標題は、本開示の様々な態様を限定するものではなく
、全体として本明細書を参照することによって理解され得る。
本明細書において「含む、含んでいる」の言葉と共に態様が記載される時はいかなる場
合でも、「からなる」及び／又は「から本質的になる」の用語で記載される別の類似する
態様も提供されることが理解される。
本明細書で使用される単位、接頭辞及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ：Systeme
International de Unites）の容認される形態で提示される。数値範囲は、その範囲を規
定する数字を含む。
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、この開
示が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば
、Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (
2001), CRC Press、"The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013),
Academic Press、及び"The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biolog
y", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Pressは、この開示で使
用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
本明細書で使用される場合、２０個の通常の（例えば、天然に存在する）アミノ酸及び
それらの略号は慣例的な用法に従う。例えば、Immunology - A Synthesis (2nd Edition,
Golub and Gren, Eds., Sinauer Assoc., Sunderland, Mass. (1991))（いかなる目的に
ついても引用することにより本明細書の一部をなす）を参照されたい。２０個の通常のア
ミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、アルファ，アルファ−二置換アミノ酸等
の非天然アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、及び他の特殊（unconventional）アミ
ノ酸も本発明のポリペプチドの好適な成分であり得る。特殊アミノ酸の例としては、４−
ヒドロキシプロリン、ガンマ−カルボキシグルタミン酸、イプシロン−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリ
メチルリシン、ｅ−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−
ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、シグマ−Ｎ−メチ
ルアルギニン、並びに他の同様のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリ
ン）が挙げられる。本明細書で使用されるポリペプチドの表記においては、標準的用法及
び慣行に従い、左手方向がアミノ末端方向であり、右手方向がカルボキシ末端方向である
。
本明細書で使用される場合、数量を特定していない用語（the terms "a" and "an"）は
標準的な慣習に従って使用され、文脈上他の指示がない限り、１つ以上を意味する。
本明細書で使用される場合、「約」の用語は、当業者によって決定される特定の値又は
組成に対する許容可能な誤差範囲に含まれる値又は組成を指し、その値又は組成がどのよ
うに測定され又は決定されるのか、すなわち測定システムの制限に部分的に依存する。例
えば、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる（comprising essentially o
f）」は、当該技術分野における１回の実施当たりの１以上の標準偏差の範囲内を意味し
得る。「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」は、最大１０％（すなわち
±１０％）の範囲を意味し得る。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇ〜５．５ｍｇの間の任
意の数値を含み得る。さらに、特に生物学的なシステム又はプロセスに関して、上記用語
は、或る値の最大１０倍又は最大５倍を意味する場合がある。特定の値又は組成が本開示
で提供される場合、別段の指示がない限り、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含
んでいる」の意味は、その特定の値又は組成に対する許容可能な誤差の範囲に含まれると
される。
本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージの範囲、比率範囲、又
は整数の範囲は、別段の指示がない限り、述べられる範囲に含まれる任意の整数、また適
切な場合には、その分数（或る整数の１０分の１、及び１００分の１等）の値を含むもの
と理解される。
本明細書で使用される場合、「及び／又は」の用語は、２つの指定される特徴又は成分
の各々ともう一方とを含む、又はもう一方を含まない具体的な開示として理解される。し
たがって、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等の句で使用される「及び／又は」の用
語は、「Ａ及びＢ」；「Ａ又はＢ」；「Ａ」（単独）；及び「Ｂ」（単独）を含むことが
意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の句において使用される「及び／又は
」の用語は、Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；
Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の態様の各々を包含す
ることが意図される。
本明細書で使用される場合、選択肢（例えば「又は」）の使用は、選択肢の１つ、それ
らの両方、又はそれらの組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。
本明細書で使用される場合、「同種異系」の用語は、一個体に由来する任意の材料を指
し、該材料はその後、同種の別の個体に導入される（例えば同種異系Ｔ細胞移植）。
本明細書で使用される場合、「抗体」（Ａｂ）の用語は、限定されず、抗原に特異的に
結合する糖タンパク質免疫グロブリンを含む。一般に、抗体は、ジスルフィド結合によっ
て相互に連結された少なくとも２本の重（ＨＣ）鎖及び２本の軽（ＬＣ）鎖、又はそれら
の抗原結合分子を含み得る。各ＨＣ鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記する）
及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つの定常ドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ
２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記する）及び軽鎖
定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメイン、すなわちＣＬを含む。ＶＨ領域
及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存される領域が介在する
、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分され得る。ＶＨ及びＶ
Ｌはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、
ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順で並ぶ、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む。重鎖及
び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。Ａｂの定常領域は、免疫
系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含
む、宿主の組織又は因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
「抗体」の用語は、別段の指示がない限り、特異的結合について無傷抗体と競合する無
傷免疫グロブリン又はその抗原結合部分も包含する。抗原結合部分は組み換えＤＮＡ法、
又は無傷抗体の酵素的若しくは化学的切断によって作製することができる。抗原結合部分
としては、特にＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相
補性決定領域（ＣＤＲ）を含むフラグメント、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダ
イアボディ、トリアボディ（triabodies）、テトラボディ（tetrabodies）、及びポリペ
プチドに特異的抗原結合をもたらすのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有す
るポリペプチドが挙げられる。
「抗体」の用語は、自然発生及び非自然発生（組み換えにより生成された）抗体の両方
、ヒト及び非ヒト抗体、単一特異的抗体、多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む）、免
疫グロブリン、合成抗体、２本の重鎖分子及び２本の軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽
鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、
イントラボディ（intrabodies）（例えば、Stocks, (2004) Drug Discovery Today 9(22)
:960-66を参照されたい）、抗体融合体（この用語は抗体−薬物コンジュゲートを包含し
、本明細書では「抗体コンジュゲート」と称されることがある）、ヘテロコンジュゲート
抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化
抗体、アフィボディ（affybodies）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント
、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗−
抗Ｉｄ抗体を含む）、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣物
」と称されることがある）、並びにその抗原結合フラグメントを含む。或る特定の実施形
態では、本明細書に記載される抗体はポリクローナル抗体集団を指す。
非ヒト抗体は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配
列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧ
ＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、この配列を
含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞を特異的に結合する抗体に関して本明細書に
開示されるように、組み換え法を用いてヒト化し、ヒトにおけるその免疫原性を低減する
ことができる。ヒト化抗体の例が本明細書で提供される。明示的に示された場合を除き、
文脈上他の指定がない限り、「抗体」の用語は、上述の免疫グロブリンのいずれかの抗原
結合分子の抗原結合フラグメントも含み、一価及び二価フラグメント又は部分、並びに一
本鎖抗体（すなわち、ｓｃＦｖ）を含む。
様々な実施形態において、抗体は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号
１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（
配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５
００）、これらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞を特異的に結合する
。幾つかの実施形態では、抗体は配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９
及び／又は配列番号５００を含むＣＡＲ（又はその構成成分）、この配列を含む分子、並
びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する。配列番号１、配列番号２、配列番号
３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００を提示する細胞は、Ｔ細胞等の免疫細胞で
あってもよいが、その必要はない。
本明細書で使用される場合、「抗原」の用語は、免疫応答を誘発する、又は抗体若しく
は他の抗原結合分子によって結合されることが可能な任意の分子を意味する。免疫応答は
、抗体産生若しくは特定の免疫適格細胞（immunologically-competent cells）の活性化
のいずれか、又はそれらの両方を含み得る。当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペ
プチドを含む任意の高分子（配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び
／又は配列番号５００、この配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞を含む）
が抗原としての役割を果たし得ることを容易に理解する。一般的には、抗原は内因性に発
現され得て、すなわちゲノムＤＮＡによって発現され得るか、又は組み換えによって発現
され得るか、又は化学合成され得る。特定の一実施形態では、抗原は、ＧＳＴＳＧＳＧＫ
ＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配
列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及
び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、これらの配列を含む分子の全て又は一部を含み
、キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）等のアジュバントに任意にコンジュゲー
トされる。
本明細書で使用される場合、「抗原結合分子」の用語は、抗原又は標的タンパク質に結
合する部分、及び任意に抗原結合部分が抗原への抗原結合分子の結合を促進する立体配座
をとるのを可能にするスキャフォールド又はフレームワーク部分を含むタンパク質を意味
する。代表的なタイプの抗原結合分子の例としては、ｓｃＦｖ、ヒト、マウス又はウサギ
抗体；ヒト化抗体；キメラ抗体；組み換え抗体；一本鎖抗体；ダイアボディ；トリアボデ
ィ；テトラボディ；Ｆａｂフラグメント；Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；ＩｇＤ抗体；Ｉ
ｇＥ抗体；ＩｇＭ抗体；ＩｇＧ１抗体；ＩｇＧ２抗体；ＩｇＧ３抗体；又はＩｇＧ４抗体
、及びそれらのフラグメントが挙げられる。
抗原結合分子は、例えばグラフトされた相補性決定領域（ＣＤＲ）又はＣＤＲ誘導体を
含む代替タンパク質スキャフォールド又は人工スキャフォールドを含み得る。かかるスキ
ャフォールドとしては、例えば抗原結合分子の３次元構造を安定化するために導入される
突然変異を含む抗体由来のスキャフォールド、及び例えば生体適合性ポリマーを含む完全
合成スキャフォールドが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Korndorfer et
al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 53(1):121-129 (200
3)、Roque et al., Biotechnol. Prog. 20:639-654 (2004)を参照されたい。加えて、ペ
プチド抗体模倣物（「ＰＡＭ」）、及び様々な構成成分（例えば、フィブロネクチン）を
スキャフォールドとして利用する抗体模倣物をベースとしたスキャフォールドを使用する
ことができる。抗原結合分子は、例えば自然発生免疫グロブリンの構造を有し得る。
抗原結合分子は、１つ以上の結合部位を有し得る。２つ以上の結合部位が存在する場合
、結合部位は互いに同一であっても、又は異なっていてもよい。例えば、自然発生ヒト免
疫グロブリンは通例、２つの同一の結合部位を有するが、「二重特異的」又は「二官能性
」抗体は２つの異なる結合部位を有し、２つの異なる抗原（例えば配列番号１、配列番号
２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、並びに細胞表面活性化分子
）を特異的に結合することが可能である。
様々な実施形態において、抗原結合分子は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（
配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳ
ＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配
列番号５００）、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列
番号５００を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞を特異的に結合する本明細書に
開示され、図６及び図８に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つ以上を含む抗体又は
そのフラグメントである。更なる実施形態では、抗原結合分子は配列番号１、配列番号２
、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００を含むＣＡＲに結合し、Ｔ細胞
等の免疫細胞上で発現されることができる。
「自己」の用語は、後に再導入されることになっているのと同じ個体に由来する任意の
材料を指す。例えば、本明細書に記載される操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標）
）の方法は、患者からのリンパ球の収集を含み、該リンパ球は、その後、構築物、例えば
ＣＡＲ構築物を発現するように操作した後、同じ患者に戻される（administered back）
。
本明細書で使用される場合、「結合親和性」の用語は、分子（例えば、抗体等の抗原結
合分子）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合的
な相互作用の合計の強さを意味する。別段の指示がない限り、本明細書で使用される「結
合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映
する、固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的に
は、解離定数（ＫＤ）によって表され得る。親和性は、限定されないが、平衡解離定数（
ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含む、当該技術分野で知られている多くの方法で測定
され得る及び／又は表され得る。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算されるが、ＫＡは
ｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば抗原に対する抗体の会合速度定
数を指し、ｋｏｆｆは、例えば抗原に対する抗体の解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、
ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）又はＫｉｎＥｘＡ又は表面プラズモン共鳴等の当業者に知られて
いる標準的な技法によって決定され得る。
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」の用語は、抗原結合特
異性及び親和性に寄与するアミノ酸配列を意味する。フレームワーク領域は、抗原結合分
子と抗原との間の結合を促進するＣＤＲの適当な立体配座の維持に役立ち得る。重鎖及び
軽鎖の可変領域の各々に３つのＣＤＲが存在し、これらは可変領域の各々についてＣＤＲ
１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と指定される。ＣＤＲの厳密な境界は、種々のシステムに従い
異なって定義されている。
ＣＤＲの多くの定義、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリング、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリン
グ、ＡｂＭナンバリング、又は接触（contact）ナンバリングが一般に使用されている。
ＡｂＭ定義は、Oxford Molecular社のＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用さ
れるＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａのシステムの折衷案である。
Kabatによって記載されるシステム（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immuno
logical Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) and (1991)
）は、抗体の任意の可変領域に適用可能な残基ナンバリングシステムを提供し、３つのＣ
ＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。
Chothia及び共同研究者ら（Chothia and Lesk, (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917及
びChothia et al., (1989) Nature, 342: 877-883）は、ＫａｂａｔのＣＤＲ内の或る特
定の一部分（sub-portions）が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかか
わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体配座をとることを見出した。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤ
Ｒは、ＫａｂａｔのＣＤＲと重なり合う境界を有する。ＫａｂａｔのＣＤＲと重なり合う
ＣＤＲを定義する他の境界が、Padlan et al. ((1995) FASEB J., 9:133-139)、及びMacC
allum et al. ((1996) J. Mol. Biol., 262(5):732-745)によって記載されている。更に
他のＣＤＲ境界の定義は、記載のシステムの１つに厳密に従わない可能性もあるが、特定
の残基若しくは残基の群、又は更にはＣＤＲ全体が抗原結合に大きな影響を与えないとい
う予測又は実験的発見を考慮して短縮又は延長され得るが、それでもＫａｂａｔのＣＤＲ
と重なり合う。本明細書で用いられる方法では、これらのシステムのいずれかに従って定
義されるＣＤＲを利用することができるが、例示的な実施形態ではＣｈｏｔｈｉａにより
定義されるＣＤＲを用いる。
表Ａに、各ナンバリングシステムを用いてＣＤＲを定義する。接触の定義は、利用可能
な複合体結晶構造の分析に基づく。
Figure 2021090454
「Ｋａｂａｔナンバリング」の用語及び類似の用語は、当該技術分野において認められ
、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域、又はその抗原結合分子中のアミノ酸残基をナンバリン
グするシステムを指す。特定の態様では、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って、抗
体のＣＤＲを特定することができる（例えば、Kabat et al. in Sequences of Proteins
of Immunological Interest, 5th Ed., NIH Publication 91-3242, Bethesda MD 1991を
参照されたい）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤ
Ｒは、典型的には、３５に続いて任意に１つ又は２つの追加のアミノ酸（Ｋａｂａｔナン
バリングスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）を含み得るアミノ酸３１位〜３５位
（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位〜６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５位〜１０２位（
ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内
のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４位〜３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位〜５６
位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９位〜９７位（ＣＤＲ３）に存在する。特定の実施形態
では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って
記載することができるが、表Ａを用いて他のナンバリングシステムにて容易に構築させる
ことができる。
特定の態様では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を指す、Ｃｈｏ
ｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定され得る（例えば、Chothia C & Lesk AM, (
1987), J Mol Biol 196: 901-917、Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927
-948、Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817、Tramontano A et al., (19
90) J Mol Biol 215(1): 175-82、及び米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたい
）。典型的には、Ｋａｂａｔナンバリング規定を使用する場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ
−Ｈ１ループは重鎖のアミノ酸２６〜３２、３３又は３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣ
ＤＲ−Ｈ２ループは重鎖のアミノ酸５２〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ３
ループは重鎖のアミノ酸９５〜１０２に存在するのに対し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ
１ループは軽鎖のアミノ酸２４〜３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ２ループは
軽鎖のアミノ酸５０〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ３ループは軽鎖のアミ
ノ酸８９〜９７に存在する。ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−ＨＩループの末端は、Ｋａｂａｔ
ナンバリング規定を使用して番号を付与した場合には、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ
３４の間で変動する（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂ
に挿入を置くため、すなわち３５Ａも３５Ｂも存在しない場合には３２でループが終了し
、３５Ａのみが存在する場合には３３でループが終了し、３５Ａと３５Ｂの両方が存在す
る場合には３４でループが終了するからである）。表Ａを参照されたい。具体的な実施形
態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、図６及び図８に示されるように、Ｃｈｏ
ｔｈｉａナンバリングスキームに従って特定された。
本明細書で使用される「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有する
アミノ酸残基で置換されるものである。側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該技
術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、
アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷
電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロ
シン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシ
ン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例え
ば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニ
ルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。特定の実施形態で
は、本明細書で提供される抗体又は抗原結合分子（又はそのフラグメント）のＣＤＲ（複
数の場合がある）内又はフレームワーク領域（複数の場合がある）内の１以上のアミノ酸
残基を、類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置換することができる。
本開示に包含される保存的アミノ酸置換は、通例は生物系における合成ではなく、化学
ペプチド合成によって組み込まれる非自然発生アミノ酸残基を含み得る。これらはペプチ
ド模倣体及び他の逆転型又は反転型のアミノ酸部分を含む。自然発生残基は、共通の側鎖
特性に基づいて以下のクラスに分けることができる：
疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
中性親水性（neutral hydrophilic）：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び、
芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換する
ことを含み得る。このような置換された残基は、例えば非ヒト抗体と相同であるヒト抗体
の領域、又は分子の非相同領域に導入することができる。例示的な保存的アミノ酸置換を
下記表Ｂに示す。
Figure 2021090454
本明細書で使用される場合、「定常領域」及び「定常ドメイン」の用語は同義であり、
当該技術分野で一般的な意味を有する。定常領域は、抗原への抗体の結合に直接関与しな
いが、Ｆｃ受容体との相互作用等の様々なエフェクター機能を示すことができる抗体部分
、例えば軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常
領域は概して、免疫グロブリン可変ドメインと比べてより保存されたアミノ酸配列を有す
る。
本明細書で使用される場合、「交差競合する（cross competes）」の用語は、抗原と第
１の抗原結合分子又はその結合フラグメントとの相互作用が、抗原と相互作用する参照抗
原結合分子又はその結合フラグメントの能力を遮断する、制限する、阻害する又はそうで
なければ低減する状況を意味する。交差競合は、完全なものであってもよく、例えば、抗
原に対する結合分子の結合が、参照結合分子の抗原を結合する能力を完全に遮断するか、
又は交差競合は、部分的であってもよく、例えば、抗原に対する結合分子の結合が、参照
結合分子の抗原を結合する能力を減少させる。特定の実施形態では、参照抗原結合分子と
交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子と同じ、又はそれと重複するエピトープ
を結合する。他の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照
抗原結合分子とは異なるエピトープを結合する。多くの種類の競合結合アッセイ、例えば
、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；固相直接又は間接酵素免疫定量法
（ＥＩＡ）；サンドイッチ競合アッセイ（Stahli et al., (1983) Method Enzymol 9:242
-53）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Kirkland et al., (1986) J. Immunol. 137
:3614-19）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Harlow and L
ane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press）；Ｉ１２５
標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Morel et al., (1988) Molec Immunol 25:7-15）；
固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Cheung, et al., (1990) Virology 176:546-52）；
及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer et al., (1990) Scand J Immunol 32:77-82）を使用
して、或る一つの抗原結合分子が他方と競合するかどうかを判断することができる。
「誘導体」の用語は、アミノ酸（又は核酸）の挿入、欠失又は置換以外の化学修飾を含
む分子を指す。或る特定の実施形態では、誘導体はポリマー、脂質、又は他の有機若しく
は無機部分との化学結合を含むが、これらに限定されない共有結合修飾を含む。或る特定
の実施形態では、化学修飾された抗原結合分子（誘導体）は、化学修飾されていない抗原
結合分子よりも長い循環半減期を有し得る。幾つかの実施形態では、誘導体抗原結合分子
はポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール又はポリプロピレングリコー
ルを含むが、これらに限定されない１つ以上の水溶性ポリマーの付着を含むように共有結
合修飾される。
本明細書で使用される場合、「ダイアボディ」又はｄＡＢの用語は、２つのポリペプチ
ド鎖を含む二価抗体を意味し、各ポリペプチド鎖が、同じ鎖上の２つのドメイン間での対
合を可能にするには短過ぎ、それにより各ドメインを別のポリペプチド鎖上の相補的なド
メインと対合させるリンカーによって接合されるＶＨ及びＶＬドメインを含む（例えば、
Holliger et al., (1993) Proc Natl Acad Sci U.S.A. 90:6444-48、Poljak et al., (19
94) Structure 2: 1121-23、及びPerisic et al., (1994) Strucure 2(12): 1217-26を参
照されたい）。ダイアボディの２つのポリペプチド鎖が同一である場合、それらの対合に
より生じるダイアボディは２つの同一の抗原結合部位を有する。異なる配列を有するポリ
ペプチド鎖は、２つの異なる抗原結合部位を有するダイアボディを作製するために使用す
ることができる。同様に、トリアボディ及びテトラボディは、それぞれ３つ及び４つのポ
リペプチド鎖を含み、それぞれ同じであっても又は異なっていてもよい３つ及び４つの抗
原結合部位を形成する抗体である。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗
体が特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えばポリ
ペプチドの隣接するアミノ酸（直鎖の又は隣接するエピトープ）であってもよく、又はエ
ピトープは、例えば、ポリペプチド（複数の場合がある）の２以上の隣接しない領域に共
に由来するもの（配座、非直鎖、不連続、又は隣接しないエピトープ）であってもよい。
或る特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回
折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と結合された水素／重水素交換（例えば液
体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイに基づくオリゴペプチド走
査アッセイ、及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば部位特異的変異誘発マッピング
）によって特定され得る。Ｘ線結晶学研究のため、結晶化は、当該技術分野の既知の方法
（例えば、Giege R. et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4):
339-350、McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23、Chayen NE (1997) Structure
5: 1269-1274、McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303）のいずれかを使用し
て遂行され得る。抗体：抗原の結晶は、良く知られているＸ線回折技術を使用して研究さ
れ得て、Ｘ−ＰＬＯＲ（Yale University, 1992、Molecular Simulations, Inc.によって
配布；例えば、Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,を参
照されたい）、及びＢＵＳＴＥＲ（Bricogne, (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystal
logr 49(Pt 1): 37-60、Bricogne, (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter、Ro
versi et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323）
等のコンピューターソフトウェアを使用してリファインされ得る。突然変異誘発マッピン
グ研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して遂行され得る。例えば、アラニン
スキャニング突然変異誘発技術を含む、突然変異誘発技術の説明について、Champe M et
al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-94、及びCunningham & Wells, (1989) Science 244
: 1081-85を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「Ｆａｂフラグメント」の用語はＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣ
Ｈドメインを有する一価フラグメントを意味する。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、
ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを有する二
価フラグメントである。「Ｆｖフラグメント」は抗体の単一アームのＶＨ及びＶＬドメイ
ンを有し、「ｄＡｂフラグメント」はＶＨドメイン、ＶＬドメイン、又はＶＨ若しくはＶ
Ｌドメインの抗原結合フラグメントを有する。
本明細書で使用される場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、
「特異的に結合する」及び「特異的に認識する」の用語は類似の用語であり、抗原結合分
子との関連で区別なく使用され、所与の分子が抗原（例えば、エピトープ又は免疫複合体
）に優先的に結合することを意味し、かかる結合は当業者によって理解される。例えば、
抗原に特異的に結合する抗原結合分子は、例えばイムノアッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標
）、ＫｉｎＥｘＡ ３０００測定器（アイダホ州ボイシのSapidyne Instruments）又は当
該技術分野で知られている他のアッセイによって特定されるように、他のペプチド又はポ
リペプチドに結合し得るが、その親和性はより低い。具体的な実施形態では、抗原に特異
的に結合する分子は、分子が別の抗原に結合する場合のＫＡと比べて少なくとも２ｌｏｇ
、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇ以上のＫＡで抗原に結合する。
別の実施形態では、抗原（例えば、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号
１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（
配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５
００）、この配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞）に特異的に結合する分
子は、約１×１０−７Ｍの解離定数（Ｋｄ）で結合する。幾つかの実施形態では、抗原結
合分子は、Ｋｄが約１×１０−９Ｍ〜約５×１０−９Ｍである場合、抗原（例えば配列番
号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、この配列を
含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞）を「高い親和性」で特異的に結合する。幾
つかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋｄが約１×１０−１０Ｍ〜約５×１０−１０Ｍ
である場合、抗原（例えば配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／
又は配列番号５００、この配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞）を「非常
に高い親和性」で特異的に結合する。
更に別の実施形態では、抗原（例えば配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号
４９９及び／又は配列番号５００、これらの配列を含む分子、かかる分子を提示する細胞
）に特異的に結合する分子は、同様の結合条件下で他のタンパク質と交差反応しない。別
の具体的な実施形態では、抗原（例えば配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号
４９９及び／又は配列番号５００、これらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示す
る細胞）に特異的に結合する分子は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４
９９及び／又は配列番号５００、これらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する
細胞を含まない他のタンパク質と交差反応しない。具体的な実施形態では、別の無関係な
抗原に対するよりも高い親和性で配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９
及び／又は配列番号５００、これらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞
に結合する抗体又はそのフラグメントが本明細書で提供される。或る特定の実施形態では
、例えばラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴又は動力学的排除アッセイ（kineti
c exclusion assay）によって測定されるように、別の無関係な抗原に対するよりも２０
％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０
％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上の親和性で配列番号１、配列番号２、
配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、これらの配列を含む分子、並び
にこの配列を含む分子のような分子を提示する細胞、並びにかかる分子を提示する細胞に
結合する抗原結合分子（例えば、抗体）又はそのフラグメントが本明細書で提供される。
具体的な実施形態では、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又
は配列番号５００を含まない無関係なタンパク質と比較した、本明細書に記載される配列
番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、これらの
配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞を特異的に結合する抗原結合分子、抗
体又はその抗原結合フラグメントの結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイによって
測定されるように、１０％、１５％又は２０％未満のリンカーフラグメントタンパク質に
対する抗体の結合である。
本明細書で使用される「重鎖」の用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメイン
のアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、ＩｇＧのサブクラス、例えばＩｇＧ１、
ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの
クラスの抗体をそれぞれ生じさせる、例えばアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン
（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）を指す場合がある。
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」の用語は、限定されないが、ＩｇＡ、
分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＭを含む、一般的に知られているアイソタイプのいずれか
に由来する免疫分子を意味する。ＩｇＧサブクラスもまた、当業者によく知られており、
限定されないが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。本明細書に記
載される分子の多くが免疫グロブリンである。本明細書で使用される場合、「アイソタイ
プ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス又はサブクラス（例えば、
ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を意味する。
免疫グロブリンは、通常は各対が１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖
（約５０ｋＤａ〜７０ｋＤａ）を有する２つの同一のポリペプチド鎖の対から構成される
四量体分子である。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００個〜１３
０個以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能
に主に関与する定常領域を画定する。ヒト軽鎖はカッパー及びラムダ軽鎖に分類される。
重鎖はミュー、デルタ、ガンマ、アルファ又はイプシロンに分類され、それぞれ抗体のア
イソタイプをＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ又はＩｇＥと画定する。軽鎖及び重鎖にお
いて、可変領域及び定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって接合され、
重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。概して、Berzofsky & Berkower, in
Fundamental Immunology (Paul, (ed), Lippincott Williams & Wilkins (2012)；その
章及び巻の全体が全ての目的で引用することにより本明細書の一部をなす）を参照された
い。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、無傷免疫グロブリンが２つの主要結合部位を有するよ
うに抗体結合部位を形成する。
自然発生免疫グロブリン鎖は、相補性決定領域又は「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可
変領域によって接合される比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ全体構造
を示す。Ｎ末端からＣ末端に向かって、軽鎖及び重鎖はどちらもドメインＦＲ１、ＣＤＲ
１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の
割当ては、Ｋａｂａｔ（例えば、Kabat et al. in Sequences of Proteins of lmmunolog
ical Interest, 5th Ed., NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991)を参照された
い）又はＣｈｏｔｈｉａ（本明細書で使用されるＣｈｏｔｈｉａ；例えば、Chothia & Le
sk (1987), J. Mol. Biol. 196:901-917、Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883 o
r Honegger & Pluckthun (2001), J Mol Biol 309:657-670を参照されたい）の定義に従
って行うことができる。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＡｂｍ（Oxford Molecular）の
ナンバリングシステムは、本明細書でより詳しく記載される。
本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞」の用語は、ｅｘ ｖｉｖｏで培
養される任意の細胞を指す。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞は、Ｔ細胞若しくは樹状細胞等のヒト
細胞を含んでいてもよく、又はＣＨＯ、ｓＰ２／０、ウサギ及び他の非ヒト細胞を含んで
いてもよい。
本明細書で使用される「軽鎖」の用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメイン
のアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、例えばカッパー（κ）又はラムダ（λ）
を指す場合がある。軽鎖アミノ酸配列は当該技術分野で知られている。具体的な実施形態
では、軽鎖はヒト軽鎖である。
「中和する、中和すること」の用語は、リガンド（例えば配列番号１、配列番号２、配
列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００を含む部分）に結合し、そのリガン
ドの生物学的効果を妨げる又は減少させる抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体又はそのフラグ
メントを指す。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体又はそのフラグメ
ントは、リガンド上の結合部位を直接遮断する、或いは間接的な手段（リガンドの構造の
又はエネルギーの変更等）によってリガンドの結合能を変更する。幾つかの実施形態では
、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体又はそのフラグメントは、結合されるタンパク質が生体
機能を実施するのを妨げる。
本明細書で使用される場合、「患者」の用語は、癌等の異常な生理的状態の治療を受け
ているか、又は障害と正式に診断された任意のヒト、正式に認識された障害を有しないヒ
ト、治療を受けているヒト、障害を発症するリスクがあるヒト等を意味する。「被験体」
及び「患者」の用語は、本明細書では区別なく使用され、ヒト及び非ヒト動物被験体の両
方を含む。
本明細書で使用される「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」の用語は、
本明細書では区別なく使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結されたアミノ酸
残基で構成される化合物を意味する。ポリペプチド、タンパク質又はペプチドは、少なく
とも２個のアミノ酸を含まなければならないが、タンパク質又はペプチドのアミノ酸配列
を構成し得るアミノ酸の最大数に制限はない。本明細書で使用される場合、上記用語は、
ペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも一般的に称される短い鎖と、一般的にはタ
ンパク質と称される、より長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」としては例えば、特
に、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同性のポリペプチド、オリゴペプチド、
ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類
縁体、融合タンパク質が挙げられる。「ポリペプチド」の用語は、天然ペプチド、組み換
えペプチド、合成ペプチド又はそれらの組合せを含む。
幾つかの態様では、ポリペプチド及び／又はタンパク質は、抗原結合分子の１個以上の
アミノ酸の欠失、付加及び／又は置換を有する。有用なポリペプチドフラグメントは、限
定されないが、１個以上のＣＤＲ領域、重鎖及び／又は軽鎖の可変ドメイン、抗体鎖の他
の部分の一部等を含む、抗原結合分子の免疫学的に機能性のフラグメントを含み得る。抗
原結合分子の１つ以上のアミノ酸と置き換えることができる部分としては、例えばＤ形態
又はＬ形態のアミノ酸、（図６及び図８に提示されるこれらの配列、並びにそれらの列挙
される配列番号と比較して）抗原結合分子の同じ位置に通常見られるアミノ酸とは異なる
アミノ酸、欠失、非自然発生アミノ酸、及びアミノ酸の化学類縁体が挙げられる。
ペプチド類縁体は、鋳型ペプチドと似た特性を有する非ペプチド薬として製薬業界で一
般に使用され、本開示の一態様を形成する。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペ
プチド模倣体（"peptide mimetics" or "peptidomimetics"）」と称される。例えば、Fau
chere, (1986) Adv. Drug Res. (Testa, ed.) 15:29-69、Veber & Freidinger, (1985) T
INS, p.392、及びEvans et al., (1987) J. Med. Chem, 30:1229-39（いかなる目的につ
いても引用することにより本明細書の一部をなす）を参照されたい。
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、こ
れらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞を含むポリペプチド、ペプチド
、タンパク質及び類似分子は、これらの用語によって具体的に包含される。
本明細書で使用される場合、「パーセント同一性」の用語は、比較される分子中のアミ
ノ酸又はヌクレオチド間で同一の残基のパーセントを意味する。これらの算出については
、アラインメントにおけるギャップ（存在する場合）は、特定の数理モデル又はコンピュ
ータープログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によってアドレス指定されなければな
らない。アラインメントさせた核酸又はポリペプチドの同一性を算出するために使用する
ことができる方法としては、Computational Molecular Biology, (Lesk, ed.), (1988) N
ew York: Oxford University Press、Biocomputing Informatics and Genome Projects,
(Smith, ed.), 1993, New York: Academic Press、Computer Analysis of Sequence Data
, Part I, (Griffin and Griffin, eds.), 1994, New Jersey: Humana Press、von Heinj
e, (1987) Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press、Sequ
ence Analysis Primer, (Gribskov and Devereux, eds.), 1991, New York: M. Stockton
Press、及びCarillo et al., (1988) J. Applied Math. 48:1073に記載されるものが挙
げられる。
パーセント同一性の算出においては、配列間の最も大きな一致を与える方法で比較され
る配列をアラインメントさせる。パーセント同一性を特定するために使用されるコンピュ
ータープログラムは、例えばＭＯＥ（Chemical Computing Group）又はＤＮＡＳＴＡＲ（
ウィスコンシン州マディソンのウィスコンシン大学）であり得る。コンピューターアルゴ
リズムであるＧＡＰを使用して、パーセント配列同一性が特定される２つのポリペプチド
又はポリヌクレオチドをアラインメントさせることができる。配列を、それらの各アミノ
酸又はヌクレオチドの最適なマッチング（アルゴリズムによって特定される、「一致スパ
ン（matched span）」）についてアラインメントさせる。ギャップ開始ペナルティ（gap
opening penalty）（平均対角（average diagonal）の３倍として算出され、ここで「平
均対角」は使用される比較マトリクスの対角の平均である；「対角」は、特定の比較マト
リクスにより各々の完全なアミノ酸の一致に対して割り当てられるスコア又は数である）
及びギャップ伸長ペナルティ（通常は、ギャップ開始ペナルティの１／１０倍である）、
並びにＰＡＭ ２５０又はＢＬＯＳＵＭ ６２等の比較マトリクスがアルゴリズムと併せ
て用いられる。或る特定の実施形態では、上記アルゴリズムによって、標準的な比較マト
リクス（例えば、Dayhoff et al., (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure 5
:345-352 for the PAM 250 comparison matrix、Henikoff et al., (1992) Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A. 89: 10915-10919 for the BLOSUM 62 comparison matrixを参照され
たい）も使用される。
２つのアミノ酸配列をアラインメントさせる或る特定のアラインメントスキームは、２
つの配列の短い領域のみのマッチングをもたらすことができ、このアラインメントされた
小さな領域は、２つの完全長配列間に有意な関連性が存在しないにもかかわらず、非常に
高い配列同一性を有し得る。したがって、選択されるアラインメント方法（例えば、ＧＡ
Ｐプログラム）は標的ポリペプチドの少なくとも５０個の連続アミノ酸にわたるアライン
メントをもたらすように必要に応じて調整され得る。
本明細書で使用される場合、「一本鎖抗体」及び「一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ
）」の用語は区別なく使用され、ＶＬ及びＶＨ領域が連続タンパク質鎖を形成するように
リンカーによって接合され、タンパク質鎖がそれ自体に折り重なり、一価抗原結合部位を
形成するようにリンカーが十分に長い抗原結合分子を意味する（例えば、Bird et al., (
1988) Science 242:423-26及びHuston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.
85:5879-83 (1988)を参照されたい）。ＦＭＣ６３（Nicholson et al., (1997) Mol. Imm
unol. 34:(16-17) 1157-65）がｓｃＦｖの具体例であり、ＣＤ１９に特異的である。
治療剤（例えば配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列
番号５００を含む部分、これらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞）の
「治療的有効量」、「有効用量」、「有効量」又は「治療的に有効な投薬量」は、単独で
又は別の治療剤と組み合わせて使用された場合に、疾患の発症から被験体を保護する、又
は疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度及び持続期間の増加、若しくは疾
患の罹患に起因する機能障害若しくは身体障害の予防によって明示される疾患の退縮を促
進する、任意の量である。治療剤の疾患の退縮を促進する能力は、熟練した専門家に知ら
れている様々な方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト被験体において、ヒトにおけ
る効能を予測する動物モデル系において、又はｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて薬剤の
活性をアッセイすることによって評価され得る。
「形質導入」及び「形質導入した」の用語は、外来性ＤＮＡがウイルスベクターによっ
て細胞へと導入されるプロセスを指す（Hartl and Jones (1997) Genetics: Principles
and Analysis, 4th ed, Jones & Bartlettを参照されたい）。幾つかの実施形態では、ベ
クターはレトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベ
クター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイル
スベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノ随伴
ウイルスベクター、レンチウイルスベクター又はそれらの任意の組合せである。
本明細書で使用される場合、「可変領域」又は「可変ドメイン」の用語は区別なく使用
され、抗体の一部、一般的には、軽鎖又は重鎖の一部、典型的には抗体のアミノ末端を意
味し、重鎖中の約１００個〜１３０個のアミノ酸及び軽鎖中の約９０個〜１１５個のアミ
ノ酸を含み、それらは、抗体間で配列が広範囲に異なり、特定の抗原に対する特定の抗体
の結合及び特異性において使用される。配列における可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ
）と称される領域に濃縮されるのに対し、可変ドメイン中のより高度に保存された領域は
フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互
作用及び特異性を主として担うものである。
或る特定の実施形態では、抗原結合分子の可変領域はヒト可変領域である。更なる実施
形態では、可変領域は、齧歯類、ヒト又はマウスのＣＤＲ、及びヒトのフレームワーク領
域（ＦＲ）を含む。更なる実施形態では、可変領域は霊長類（例えば非ヒト霊長類）の可
変領域である。また更なる実施形態では、可変領域はウサギ可変領域である。他の実施形
態では、可変領域は、ヒトＣＤＲ及び非ヒト（例えばウサギ、マウス、ラット又は非ヒト
霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。他の実施形態では、可変領域は非ヒト（例
えばウサギ、マウス、ラット又は非ヒト霊長類）ＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域（Ｆ
Ｒ）を含む。
「ＶＨ」、「ＶＨドメイン」及び「ＶＨ鎖」の用語は区別なく使用され、抗原結合分子
、抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域を意味する。
「ＶＬ」、「ＶＬドメイン」及び「ＶＬ鎖」の用語は区別なく使用され、抗原結合分子
、抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域を意味する。
本発明の様々な態様が以下の小節に更に詳細に記載される。
ＩＩ．抗原結合分子及びそれをコードするポリヌクレオチド
本開示は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、
特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、これらの配列を
含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞を特異的に結合する、抗体を含む抗原結合分
子、及び／又は本明細書に記載される１つ以上の抗原結合分子（すなわち、図６及び図８
に記載され、及び／又は添付の配列表に開示されるものの１つ以上）と交差競合する抗原
結合分子に関する。抗原結合分子をコードするポリヌクレオチドも提供され、本開示の一
態様を形成する。
本発明のコードされる抗体又は抗原結合分子は、一本鎖又は二本鎖であり得る。幾つか
の実施形態では、抗体又は抗原結合分子は一本鎖である。或る特定の実施形態では、抗原
結合分子はｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ｄＡｂ及びそれらの任
意の組合せからなる群から選択される。特定の一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は
ｓｃＦｖを含む。
或る特定の実施形態では、抗体等の抗原結合分子は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が
リンカーによって接続された一本鎖（ｓｃＦｖ）を含む。幾つかの実施形態では、ＶＨが
リンカーのＮ末端に位置し、ＶＬがリンカーのＣ末端に位置する。他の実施形態では、Ｖ
ＬがリンカーのＮ末端に位置し、ＶＨがリンカーのＣ末端に位置する。幾つかの実施形態
では、リンカーは少なくとも約５個、少なくとも約８個、少なくとも約１０個、少なくと
も約１３個、少なくとも約１５個、少なくとも約１８個、少なくとも約２０個、少なくと
も約２５個、少なくとも約３０個、少なくとも約３５個、少なくとも約４０個、少なくと
も約４５個、少なくとも約５０個、少なくとも約６０個、少なくとも約７０個、少なくと
も約８０個、少なくとも約９０個又は少なくとも約１００個のアミノ酸を含む。幾つかの
実施形態では、リンカーは約８個のアミノ酸〜約１８個のアミノ酸（例えば、１０個のア
ミノ酸）を含む。
幾つかの実施形態では、本発明の抗原結合分子は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴ
ＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫ
ＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳ
Ｇ（配列番号５００）、これらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特
異的に結合する。或る特定の実施形態では、本開示の抗原結合分子は配列番号１、配列番
号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、並びにこれらの配列を含
む分子及びかかる分子を提示する細胞を１×１０−６Ｍ未満、１×１０−７Ｍ未満、１×
１０−８Ｍ未満又は１×１０−９Ｍ未満のＫＤで特異的に結合する。特定の一実施形態で
は、抗原結合分子は配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配
列番号５００、並びにこれらの配列を含む分子及びかかる分子を提示する細胞に１×１０
−７Ｍ未満のＫＤで特異的に結合する。別の実施形態では、抗原結合分子は配列番号１、
配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、並びにこれらの配
列を含む分子及びかかる分子を提示する細胞を１×１０−８Ｍ未満のＫＤで特異的に結合
する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子はｓｃＦｖ ＦＭＣ６３、並びにこの配列を
含む分子及びかかる分子を提示する細胞を約１×１０−７Ｍ、約２×１０−７Ｍ、約３×
１０−７Ｍ、約４×１０−７Ｍ、約５×１０−７Ｍ、約６×１０−７Ｍ、約７×１０−７
Ｍ、約８×１０−７Ｍ、約９×１０−７Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約２×１０−８Ｍ、約３
×１０−８Ｍ、約４×１０−８Ｍ、約５×１０−８Ｍ、約６×１０−８Ｍ、約７×１０−
８Ｍ、約８×１０−８Ｍ、約９×１０−８Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約２×１０−９Ｍ、約
３×１０−９Ｍ、約４×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約６×１０−９Ｍ、約７×１０
−９Ｍ、約８×１０−９Ｍ、約９×１０−９Ｍ、約１×１０−１０Ｍ又は約５×１０−１
０ＭのＫＤで結合する。ＫＤは、本明細書に記載されるように標準的な方法論を用いて算
出することができる。
具体的な実施形態では、本開示の抗原結合分子は、クローン８又はクローン１６として
本明細書で同定される抗体であり、各々が提示及び標識される以下の重鎖及び軽鎖アミノ
酸、コード配列、可変配列及びＣＤＲ配列を含む：
クローン８ ＶＨ ＤＮＡコード配列
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGG
TCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCACCATCAGTAACCTTGCAATAATCT
GGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATATATCGGAGACATTGATGGTCGTGGTGACATATACTGTGCGACCTGG
GCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACACTGGATCTGAGATTCACCAGCCCGACAACCGAGGACACGGC
CACCTACTTCTGTGCCGTAGATGGTGATGGTAGTGGTTGGGGTGACTTTAACTTTTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCG
TCTCCTCA（配列番号４）
クローン８ ＶＨ ＡＡ（ＣＤＲは下線）
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFTISNLAIIWVRQAPGKGLEYIGDIDGRGDIYCATW
AKGRFTISKTSTTLDLRFTSPTTEDTATYFCAVDGDGSGWGDFNFWGPGTLVTVSS（配列番号５）
クローン８ ＨＣ ＡＡ（ＣＤＲは下線）
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFTISNLAIIWVRQAPGKGLEYIGDIDGRGDIYCATW
AKGRFTISKTSTTLDLRFTSPTTEDTATYFCAVDGDGSGWGDFNFWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVT
LGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPT
CPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPI
AHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAE
DNYKTTPAVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK（配列番号６）
クローン８ ＶＨ ＣＤＲ１ ＡＡ
GFTISNL（配列番号７）
クローン８ ＶＨ ＣＤＲ２ ＡＡ
DIDGRGDIYCATWAK（配列番号８）
クローン８ ＶＨ ＣＤＲ３ ＡＡ
DGDGSGWGDFNF（配列番号９）
クローン８ ＶＬ DNAコード配列
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGAC
CCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCAGCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAGCACTG
CATTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTC
TCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGGAGTGTGACGATGCTGCCAC
TTACTACTGTCAACAGGGTTGGAGTACTGTGAATGTTGATAATGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAGA（配
列番号１０）
クローン８ ＶＬ AA（ＣＤＲは下線）
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVSIKCQASQSISTALAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGV
SSRFKGSGSGTQFTLTISGVECDDAATYYCQQGWSTVNVDNVFGGGTEVVVR（配列番号１１）
クローン８ ＬＣ ＡＡ（ＣＤＲは下線）
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVSIKCQASQSISTALAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGV
SSRFKGSGSGTQFTLTISGVECDDAATYYCQQGWSTVNVDNVFGGGTEVVVRDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVA
NKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC（配
列番号１２）
クローン８ ＶＬ ＣＤＲ１ ＡＡ
QASQSISTALA（配列番号１３）
クローン８ ＶＬ ＣＤＲ２ ＡＡ
RASTLAS（配列番号１４）
クローン８ ＶＬ ＣＤＲ３ ＡＡ
QQGWSTVNVDNV（配列番号１５）
クローン１６ ＶＨ ＤＮＡコード配列
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGG
TCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATCCGACATCAGTAGCTACCACATGGGCT
GGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCATTGTTAGTAGTGGTAGCGCATACTACGCGACCTGG
GCAAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGGACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACTCGGC
CACCTATTTCTGTGCCAGAAATCAATATAGTGGTTATGGCTTTAGCTTCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCT
CA（配列番号１６）
クローン１６ ＶＨ ＡＡ（ＣＤＲは下線）
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGSDISSYHMGWVRQAPGKGLEYIGIIVSSGSAYYATW
AKGRFTISRTSTTVDLKITSPTTEDSATYFCARNQYSGYGFSFWGPGTLVTVSS（配列番号１７）
クローン１６ ＨＣ ＡＡ（ＣＤＲは下線）
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGSDISSYHMGWVRQAPGKGLEYIGIIVSSGSAYYATW
AKGRFTISRTSTTVDLKITSPTTEDSATYFCARNQYSGYGFSFWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLG
CLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPTCP
PPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAH
QDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDN
YKTTPAVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK（配列番号１８）
クローン１６ ＶＨ ＣＤＲ１ ＡＡ
GSDISSY（配列番号１９）
クローン１６ ＶＨ ＣＤＲ２ ＡＡ
IIVSSGSAYYATWAK（配列番号２０）
クローン１６ ＶＨ ＣＤＲ３ ＡＡ
NQYSGYGFSF（配列番号２１）
クローン１６ ＶＬ ＤＮＡコード配列
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCGTCGTGCTGAC
CCAGACTCCATCCCCAGTGTCTACAGCTGTAGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCACAGTGTTTATTATG
GCGACTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCTAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCAATCTGGCATCT
GGTGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGC
TGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGGTGAGACTGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAA
（配列番号２２）
クローン１６ ＶＬ ＡＡ（ＣＤＲは下線）
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAVVLTQTPSPVSTAVGGTVTINCQSSHSVYYGDWLAWYQQKPGQPPKLLIYRASNLAS
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDGETAFGGGTEVVVK（配列番号２３）
クローン１６ ＬＣ ＡＡ（ＣＤＲは下線）
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAVVLTQTPSPVSTAVGGTVTINCQSSHSVYYGDWLAWYQQKPGQPPKLLIYRASNLAS
GVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDGETAFGGGTEVVVKDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCV
ANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC（配
列番号２４）
クローン１６ ＶＬ ＣＤＲ１ ＡＡ
QSSHSVYYGDWLA（配列番号２５）
クローン１６ ＶＬ ＣＤＲ２ ＡＡ
RASNLAS（配列番号２６）
クローン１６ ＶＬ ＣＤＲ３ ＡＡ
LGGYDDDGETA（配列番号２７）
一実施形態では、本開示の抗原結合分子は抗体及びその抗原結合フラグメントである。
一実施形態では、本開示の抗体は、図６及び図８に記載される少なくとも１つのＣＤＲを
含む。別の態様では、本開示は、本明細書に記載され、当該技術分野で知られているよう
に本明細書に開示される抗体を産生することが可能なハイブリドーマ及びハイブリドーマ
から抗体を作製する方法を提供する。
ヒト化抗体は本明細書に記載され、既知の技法によって作製することができる。一実施
形態では、ヒト化モノクローナル抗体は、マウス又はウサギ抗体の可変ドメイン（又はそ
の抗原結合部位の全て若しくは一部）と、ヒト抗体に由来する定常ドメインとを含む。代
替的には、ヒト化抗体フラグメントは、マウス又はウサギモノクローナル抗体の抗原結合
部位と、ヒト抗体に由来する可変ドメインフラグメント（抗原結合部位を欠く）とを含み
得る。操作されたモノクローナル抗体を作製する手順としては、Riechmann et al., (198
8) Nature 332:323、Liu et al., (1987) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84:3439、Larrick
et al., (1989) Bio/Technology 7:934、及びWinter et al., (1993) TIPS 14:139に記
載されるものが挙げられる。一実施形態では、キメラ抗体はＣＤＲグラフト化抗体である
。抗体をヒト化する技法は、例えば米国特許第５，８６９，６１９号、同第５，２２５，
５３９号、同第５，８２１，３３７号、同第５，８５９，２０５号、同第６，８８１，５
５７号、Padlan et al., (1995) FASEB J. 9:133-39、Tamura et al., (2000) J. Immuno
l. 164:1432-41、Zhang et al., (2005) Mol. Immunol. 42(12):1445-1451、Hwang et al
., Methods. (2005) 36(1):35-42、Dall'Acqua et al., (2005) Methods 36(1):43-60、
及びClark, (2000) Immunology Today 21(8):397-402に論考されている。
本発明の抗原結合分子は、完全ヒトモノクローナル抗体であってもよい。完全ヒトモノ
クローナル抗体は、当業者が精通している様々な技法によって生成することができる。か
かる方法としては、ヒト末梢血細胞（例えば、Ｂリンパ球を含有する）のエプスタインバ
ーウイルス（ＥＢＶ）形質転換、ヒトＢ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫化、挿入されたヒト
免疫グロブリン遺伝子を保有する免疫化トランスジェニックマウスに由来する脾臓細胞の
融合、ヒト免疫グロブリンＶ領域ファージライブラリーからの単離、又は当該技術分野で
知られており、本明細書の本開示に基づく他の手順が挙げられるが、これらに限定されな
い。
非ヒト動物においてヒトモノクローナル抗体を生成する手順が開発されている。例えば
、１つ以上の内在性免疫グロブリン遺伝子を様々な手段によって不活性化したマウスが作
製された。ヒト免疫グロブリン遺伝子をマウスに導入し、不活性化マウス遺伝子を置き換
えた。この技法では、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子座の要素を、内在性重鎖及び軽鎖遺伝子座
の標的破壊を含有する胚性幹細胞系に由来するマウスの株に導入する（Bruggemann et al
., (1997) Curr. Opin. Biotechnol. 8:455-58も参照されたい）。
ヒト抗体又は部分ヒト抗体の作製のためのトランスジェニック動物を作製及び使用する
技法の例は、米国特許第５，８１４，３１８号、同第５，５６９，８２５号及び同第５，
５４５，８０６号；Davis et al., Antibody Engineering: Methods and Protocols, (Lo
, ed) Humana Press, NJ, 191-200 (2003)；Kellermann et al., (2002) Curr Opin Biot
echnol. 13:593-97；Russel et al., (2000) Infect Immun. 68:1820-26；Gallo et al.,
(2000) Eur J. Immun. 30:534-40；Davis et al., (1999) Cancer Metastasis Rev. 18:
421-25；Green, (1999) J Immunol Methods 231:11-23；Jakobovits, (1998) Advanced D
rug Delivery Reviews 31:33-42；Green et al., (1998) J Exp Med. 188:483-95；Jakob
ovits, (1998) Exp. Opin. Invest. Drugs. 7:607-14；Tsuda et al., (1997) Genomics,
42:413-21；Mendez et al., (1997) Nat. Genet. 15:146-56；Jakobovits, (1994) Curr
Biol. 4:761-63；Arbones et al., (1994) Immunity 1:247-60；Green et al., (1994)
Nat. Genet. 7:13-21；Jakobovits et al., (1993) Nature 362:255-58；Jakobovits et
al., (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:2551-55；Chen et al., (1993) Intl Immunol
5:647-656；Choi et al., (1993) Nature Genetics 4:117-23；Fishwild et al., (1996)
Nature Biotechnology 14:845-51；Lonberg et al., (1994) Nature 368: 856-59；Lonb
erg, (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113: 49-101；Neuberger, (1996)
Nature Biotech 14:826；Taylor et al., (1992) Nucleic Acids Research 20:6287-95
；Taylor et al., (1994) Intl Immunol 6:579-91；Tomizuka et al., (1997) Nature Ge
netics 16:133-43；Tomizuka et al., (2000) Proc Nat Acad Sci USA 97:722-27；Tuail
lon et al., (1993) Proc Nat Acad Sci USA 90:3720-24；Tuaillon et al., (1994) J I
mmunol 152:2912-20.；Lonberg et al., (1994) Nature 368:856；Taylor et al., (1994
) Intl Immunol 6:579；米国特許第５，８７７，３９７号；Bruggemann et al., (1997)
Curr. Opin. Biotechnol. 8:455-58；Jakobovits et al., (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci.
764:525-35に記載されている。
本発明の抗原結合分子を得るための付加的な方法は、この目的で確立されているファー
ジディスプレイを用いたものである。例えば、Winter et al., (1994) Ann. Rev. Immuno
l. 12:433-55、Burton et al., (1994) Adv. Immunol 57:191-280を参照されたい。ヒト
又はマウス免疫グロブリン可変領域の遺伝子のコンビナトリアルライブラリーをファージ
ベクターにおいて作成し、これをスクリーニングして、ｓｃＦｖ ＦＭＣ６３、並びにこ
の配列を含む分子及びかかる分子を提示する細胞を結合するＩｇフラグメント（Ｆａｂ、
Ｆｖ、ｓＦｖ又はその多量体）を選択することができる。例えば米国特許第５，２２３，
４０９号、Huse et al., (1989) Science 246:1275-81、Sastry et al., (1989) Proc. N
atl. Acad. Sci. USA 86:5728-32、Alting-Mees et al., (1990) Strategies in Molecul
ar Biology 3:1-9、Kang et al., (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:4363-66、Hoo
genboom et al., (1992) J. Mol. Biol. 227:381-388、Schlebusch et al., (1997) Hybr
idoma 16:47-52、及びこれらに引用される参照文献を参照されたい。例えば、Ｉｇ可変領
域フラグメントをコードする複数のポリヌクレオチド配列を含有するライブラリーを、Ｍ
１３若しくはラムダファージ（λＩｍｍｕｎｏＺａｐ（商標）（Ｈ）及びλＩｍｍｕｎｏ
Ｚａｐ（商標）（Ｌ）ベクター（カリフォルニア州ラホヤのStratagene）もこのアプロー
チに使用することができる）、又はそれらの変異体等の繊維状バクテリオファージのゲノ
ムに、ファージコートタンパク質をコードする配列とインフレームで挿入することができ
る。
簡潔に述べると、ｍＲＮＡをＢ細胞集団から単離し、λＩｍｍｕｎｏＺａｐ（商標）（
Ｈ）及びλＩｍｍｕｎｏＺａｐ（商標）（Ｌ）、並びに同様のベクターにおいて重鎖及び
軽鎖免疫グロブリンｃＤＮＡ発現ライブラリーを作成するために使用する。これらのベク
ターを個別にスクリーニングするか、又は同時発現させてＦａｂフラグメント又は抗体を
形成することができる。陽性プラークを続いてＥ．コリからのモノクローナル抗体フラグ
メントの高レベルの発現を可能にする非溶解性プラスミドへと変換することができる。
一実施形態では、ハイブリドーマにおいて、対象のモノクローナル抗体を発現する遺伝
子の可変領域を、ヌクレオチドプライマーを用いて増幅する。これらのプライマーは、当
業者が合成するか、又は商業的供給源（特にＶＨ、ＶＬ、ＣＨ及びＣＬ領域のプライマー
を含むマウス及びヒト可変領域のプライマーも販売している）から購入することができる
。これらのプライマーを用いて重鎖又は軽鎖可変領域を増幅することができ、これを次い
でベクターに挿入することができる。次いで、これらのベクターを発現のためにＥ．コリ
、酵母又は哺乳動物ベースの系に導入することができる。ＶＨ及びＶＬドメインの融合体
を含有する多量の一本鎖タンパク質を、これらの方法を用いて作製することができる。
上記の免疫化及び他の技法のいずれかを用いて本明細書で提供される抗原結合分子を産
生する細胞が得られた後、本明細書に記載されるような標準的な手順に従い、ＤＮＡ又は
ｍＲＮＡをそれから単離し、増幅することによって特定の抗体遺伝子をクローニングする
ことができる。それにより産生される抗体をシークエンシングすることができ、同定され
たＣＤＲ及びＣＤＲをコードするＤＮＡを、本発明による他の抗体を生成するために先に
記載したように操作することができる。
抗体等の幾つかのタンパク質が様々な翻訳後修飾を受ける可能性があることが当業者に
は理解される。これらの修飾のタイプ及び程度は多くの場合、タンパク質を発現させるた
めに使用される宿主細胞株、及び培養条件によって決まる。かかる修飾はグリコシル化、
メチオニン酸化、ジケトピペリジン（diketopiperizine）形成、アスパラギン酸塩異性化
及びアスパラギン脱アミド化の変化を含み得る。よく見られる修飾は、カルボキシペプチ
ダーゼの作用によるカルボキシ末端塩基性残基（リシン又はアルギニン等）の喪失である
（例えば、Harris, (1995) J Chromatog 705:129-34に記載される）。
マウスモノクローナル抗体を作製する代替的方法は、ハイブリドーマ細胞を同系マウス
、例えばモノクローナル抗体を含有する腹水の形成を促進するために処理された（例えば
、プリスタンで刺激された）マウスの腹膜腔に注射することである。モノクローナル抗体
を、確立されている様々な技法によって単離し、精製することができる。かかる単離法と
して、プロテインＡセファロースを用いたアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排
除クロマトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる（例えば、Baines
and Thorpe, (1992) in Methods in Molecular Biology, 10:79-104 (The Humana Press
)を参照されたい）。モノクローナル抗体は、抗体の特定の性質（例えば、重鎖又は軽鎖
のアイソタイプ、結合特異性等）に基づいて選択された適切なリガンドを用いるアフィニ
ティークロマトグラフィーによって精製することができる。固体支持体に固定化される好
適なリガンドの例としては、プロテインＡ、プロテインＧ、抗定常領域（軽鎖又は重鎖）
抗体及び抗イディオタイプ抗体が挙げられる。
開示の抗原結合分子はウサギの系において産生させたが、ヒト、部分ヒト又はヒト化抗
体が多くの用途、特にヒト被験体への抗体の投与を伴う用途に好適な場合があり、他のタ
イプの抗原結合分子が或る特定の用途に好適である。かかる抗体は本明細書に記載される
ように作製することができ、本開示の一態様を形成する。
本開示は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、
特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、この配列を含む
分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子を提供する。本
明細書に開示される抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子が本開示の別の態様を形成
する。
或る特定の実施形態では、抗原結合分子は配列番号５、配列番号１１、配列番号１７及
び配列番号２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む参照抗体と交差競合する。
或る特定の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１３又は配列番号１９のアミノ酸配
列を含むＶＨ ＣＤＲ１を含む参照抗体と交差競合する。或る特定の実施形態では、抗原
結合分子は、配列番号１４又は配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む
参照抗体と交差競合する。或る特定の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１５又は
配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む参照抗体と交差競合する。
他の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１３又は配列番号２５のアミノ酸配列を
含むＶＬ ＣＤＲ１を含む参照抗体と交差競合する。或る特定の実施形態では、抗原結合
分子は、配列番号１４又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む参照
抗体と交差競合する。或る特定の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１５又は配列
番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む参照抗体と交差競合する。
幾つかの実施形態では、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／
又は配列番号５００を特異的に結合する抗体又は抗原結合分子は、本明細書に開示される
参照抗体と同じ又は重複するエピトープ（例えば、図６及び図８に提示される配列を含む
もの）を結合する。或る特定の実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、参照抗体と同じ
又は重複するエピトープを結合する。
ＩＩａ．クローン８
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＧＦＴＩＳＮＬ（配列番号７）を含む、それからなる、又はそれ
から本質的になるＶＨ ＣＤＲ１を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＤＩＤＧＲＧＤＩＹＣＡＴＷＡＫ（配列番号８）を含む、それか
らなる、又はそれから本質的になるＶＨ ＣＤＲ２を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＤＧＤＧＳＧＷＧＤＦＮＦ（配列番号９）を含む、それからなる
、又はそれから本質的になるＶＨ ＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、（ａ）アミノ酸配列ＧＦＴＩＳＮＬ（配列番号７）を含む、それからなる、若
しくはそれから本質的になるＶＨ ＣＤＲ１、及び／又は（ｂ）アミノ酸配列ＤＩＤＧＲ
ＧＤＩＹＣＡＴＷＡＫ（配列番号８）を含む、それからなる、若しくはそれから本質的に
なるＶＨ ＣＤＲ２、及び／又は（ｃ）アミノ酸配列ＤＧＤＧＳＧＷＧＤＦＮＦ（配列番
号９）を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になるＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖
ＶＨを含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、図６及び図８に提示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ
３配列のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む
。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、図６及び図８のアミノ酸配列（例えば、（配列番号５））を含む重鎖可変領域
配列を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、本明細書に記載されるＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。具体的な実施
形態では、抗体又は抗原結合分子は、図６及び図８に提示される配列に記載される又はそ
れから誘導可能なＶＨ ＦＲ（例えば、図６又は図８の１つの配列中のＦＲの１つ、２つ
、３つ又は４つ）を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、本明細書に開示される重鎖配列（例えば、図６の配列番号６）を含む。一実施
形態では、抗体又は抗原結合分子は配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む
。
様々な実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号５の重鎖可変領域配列に対して８
０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９
８％又は９９％同一である。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＱＡＳＱＳＩＳＴＡＬＡ（配列番号１３）を含む、それからなる
、又はそれから本質的になるＶＬ ＣＤＲ１を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＲＡＳＴＬＡＳ（配列番号１４）を含む、それからなる、又はそ
れから本質的になるＶＬ ＣＤＲ２を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＱＱＧＷＳＴＶＮＶＤＮＶ（配列番号１５）を含む、それからな
る、又はそれから本質的になるＶＬ ＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、（ａ）アミノ酸配列ＱＡＳＱＳＩＳＴＡＬＡ（配列番号１３）を含む、それか
らなる、若しくはそれから本質的になるＶＬ ＣＤＲ１、及び／又は（ｂ）アミノ酸配列
ＲＡＳＴＬＡＳ（配列番号１４）を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる
ＶＬ ＣＤＲ２、及び／又は（ｃ）アミノ酸配列ＱＱＧＷＳＴＶＮＶＤＮＶ（配列番号１
５）を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になるＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖Ｖ
Ｌを含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、図６及び図８に提示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ
３配列のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む
。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、図６又は図８のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１）を含む軽鎖可変領域配
列を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、本明細書に記載されるＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。具体的な実施
形態では、抗体又は抗原結合分子は、図６及び図８に提示される配列に記載される又はそ
れから誘導可能なＶＬ ＦＲ（例えば、図６又は図８の１つの配列中のＦＲの１つ、２つ
、３つ又は４つ）を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、本明細書に開示される軽鎖配列（例えば、図６又は図８の配列番号１２）を含
む。一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可
変領域を含む。
様々な実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号１１の軽鎖可変領域配列に対して
８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％又は９９％同一である。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結
合分子は、本明細書に開示されるＶＨ ＣＤＲ配列のいずれか１つ、２つ及び／又は３つ
を含む。或る特定の実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、本明細書に開示される任意
のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有する
ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む。幾つかの実施形態では、抗
体又は抗原結合分子は、本明細書に開示されるＶＬ ＣＤＲ配列のいずれか１つ、２つ及
び／又は３つを含む。或る特定の実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、本明細書に開
示される任意のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列をそ
れぞれ有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分
配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、Ｓ
ＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、この配列
を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結合分子
は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１領域、（ｂ）配列番号８のア
ミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２領域、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ Ｃ
ＤＲ３領域、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１領域、（ｅ）配列
番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２領域、及び（ｆ）配列番号１５のアミノ酸
配列を含むＶＬ ＣＤＲ３領域を含む。
一実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分
配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、Ｓ
ＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、この配列
を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞（配列番号１）、この配列を含む分子、並
びにこの配列を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結合分子は、（ａ）ＶＨ
ＣＤＲ１領域、（ｂ）ＶＨ ＣＤＲ２領域、（ｃ）ＶＨ ＣＤＲ３領域、（ｄ）ＶＬ Ｃ
ＤＲ１領域、（ｅ）ＶＬ ＣＤＲ２領域及び（ｆ）ＶＬ ＣＤＲ３領域を含み、ここでＶ
Ｈ及びＶＬ ＣＤＲは図６及び図８に示される。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結
合分子は、本明細書に（例えば、図６及び図８に）開示される重鎖可変領域配列及び本明
細書に（例えば、図６及び図８に）開示される軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含む重
鎖可変領域、及び（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。重鎖可
変領域及び軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は図６に提示される。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結
合分子は、本明細書に（例えば、図６及び図８に）開示される重鎖配列及び本明細書に（
例えば、図６及び図８に）開示される軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含む重
鎖、及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列に対して
８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％又は９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配
列に対して８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％
、９７％、９８％又は９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ＩＩｂ．クローン１６
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＧＳＤＩＳＳＹ（配列番号１９）を含む、それからなる、又はそ
れから本質的になるＶＨ ＣＤＲ１を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＩＩＶＳＳＧＳＡＹＹＡＴＷＡＫ（配列番号２０）を含む、それ
からなる、又はそれから本質的になるＶＨ ＣＤＲ２を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＮＱＹＳＧＹＧＦＳＦ（配列番号２１）を含む、それからなる、
又はそれから本質的になるＶＨ ＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、（ａ）アミノ酸配列ＧＳＤＩＳＳＹ（配列番号１９）を含む、それからなる、
若しくはそれから本質的になるＶＨ ＣＤＲ１、及び／又は（ｂ）アミノ酸配列ＩＩＶＳ
ＳＧＳＡＹＹＡＴＷＡＫ（配列番号２０）を含む、それからなる、若しくはそれから本質
的になるＶＨ ＣＤＲ２、及び／又は（ｃ）アミノ酸配列ＮＱＹＳＧＹＧＦＳＦ（配列番
号２１）を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になるＶＨ ＣＤＲ３を含む重
鎖ＶＨを含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、図６及び図８に提示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ
３配列のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む
。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、図６又は図８のアミノ酸配列（例えば、配列番号１７）を含む重鎖可変領域配
列を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、本明細書に記載されるＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。具体的な実施
形態では、抗体又は抗原結合分子は、図６に提示される配列に記載される又はそれから誘
導可能なＶＨ ＦＲ（例えば、図６又は図８の１つの配列（例えば、配列番号１７）中の
ＦＲの１つ、２つ、３つ又は４つ）を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、本明細書に開示される重鎖配列（例えば、図６の配列番号１８）を含む。一実
施形態では、抗体又は抗原結合分子は配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を
含む。
様々な実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号１７の重鎖可変領域配列に対して
８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％又は９９％同一である。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＱＳＳＨＳＶＹＹＧＤＷＬＡ（配列番号２５）を含む、それから
なる、又はそれから本質的になるＶＬ ＣＤＲ１を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＲＡＳＮＬＡＳ（配列番号２６）を含む、それからなる、又はそ
れから本質的になるＶＬ ＣＤＲ２を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、アミノ酸配列ＬＧＧＹＤＤＤＧＥＴＡ（配列番号２７）を含む、それからなる
、又はそれから本質的になるＶＬ ＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、（ａ）アミノ酸配列ＱＳＳＨＳＶＹＹＧＤＷＬＡ（配列番号２５）を含む、そ
れからなる、若しくはそれから本質的になるＶＬ ＣＤＲ１、及び／又は（ｂ）アミノ酸
配列ＲＡＳＮＬＡＳ（配列番号２６）を含む、それからなる、若しくはそれから本質的に
なるＶＬ ＣＤＲ２、及び／又は（ｃ）アミノ酸配列ＬＧＧＹＤＤＤＧＥＴＡ（配列番号
２７）を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になるＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖
ＶＬを含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、図６又は図８に提示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ
３配列のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む
。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、図６又図８のアミノ酸配列（例えば、配列番号２３）を含む軽鎖可変領域配列
を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、本明細書に記載されるＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。具体的な実施
形態では、抗体又は抗原結合分子は、図６及び図８に提示される配列に記載される又はそ
れから誘導可能なＶＬ ＦＲ（例えば、図６又は図８の１つの配列中のＦＲの１つ、２つ
、３つ又は４つ）を含む。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子又
は抗体は、本明細書に開示される軽鎖配列（例えば、図６又は図８の配列番号２４）を含
む。一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可
変領域を含む。
様々な実施形態において、軽鎖可変領域は、配列番号２３の軽鎖可変領域配列に対して
８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％又は９９％同一である。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結
合分子は、本明細書に開示されるＶＨ ＣＤＲ配列のいずれか１つ、２つ及び／又は３つ
を含む。或る特定の実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、本明細書に開示される任意
のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有する
ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及びＶＨ ＣＤＲ３を含む。幾つかの実施形態では、抗
体又は抗原結合分子は、本明細書に開示されるＶＬ ＣＤＲ配列のいずれか１つ、２つ及
び／又は３つを含む。或る特定の実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、本明細書に開
示される任意のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列をそ
れぞれ有するＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分
配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、Ｓ
ＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、この配列
を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結合分子
は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１領域、（ｂ）配列番号２０
のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２領域、（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶ
Ｈ ＣＤＲ３領域、（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１領域、（ｅ
）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２領域、及び（ｆ）配列番号２７のア
ミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３領域を含む。
一実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分
配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、Ｓ
ＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、この配列
を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞（配列番号１）、この配列を含む分子、並
びにこの配列を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結合分子は、（ａ）ＶＨ
ＣＤＲ１領域、（ｂ）ＶＨ ＣＤＲ２領域、（ｃ）ＶＨ ＣＤＲ３領域、（ｄ）ＶＬ Ｃ
ＤＲ１領域、（ｅ）ＶＬ ＣＤＲ２領域及び（ｆ）ＶＬ ＣＤＲ３領域を含み、ここでＶ
Ｈ及びＶＬ ＣＤＲは図６及び図８に示される。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結
合分子は、本明細書に（例えば、図６及び図８に）開示される重鎖可変領域配列及び本明
細書に（例えば、図６及び図８に）開示される軽鎖可変領域配列を含む。
一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む
重鎖可変領域、及び（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。重鎖
可変領域及び軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列は図６に提示される。
幾つかの実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、こ
の配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結
合分子は、本明細書に（例えば、図６及び図８に）開示される重鎖配列及び本明細書に（
例えば、図６及び図８に）開示される軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む
重鎖、及び（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列に対し
て８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％
、９８％又は９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２４のアミノ酸
配列に対して８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％又は９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ＩＩＩ 抗体及び抗原結合分子をコードするポリヌクレオチド
本発明は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、
特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、これらの配列を
含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体及び抗原結合分子を
コードするポリヌクレオチドにも関する。
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号５及び配列番号１７か
らなる群から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、少なく
とも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なく
とも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は１０
０％同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗原結合分子をコードする。
幾つかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１１及び配列番号２３
からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列に対して少なくとも約７５％、少な
くとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少な
くとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％）、少なくとも約９９％又は
１００％同一の軽鎖可変アミノ酸配列を含む抗原結合分子をコードする。
或る特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４及び配列番号１６からなる
群から選択される重鎖コード配列を含む。別の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列
番号１０及び配列番号２２からなる群から選択される軽鎖コード配列を含む。
当業者に理解されるように、開示のポリヌクレオチド配列の変異が遺伝コードの縮重に
より可能である。このため、開示のポリヌクレオチド配列のかかる変異体は、本開示の一
態様を形成する。
ＩＶ．ベクター、細胞及び医薬組成物
或る特定の態様では、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書で提供され
る。幾つかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるようなＧＳＴＳＧＳＧＫＰ
ＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、並びにこれらの配列を含む分子及びかかる分子を
提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結合分子をコードするポリヌクレオチドを
含むベクター又はベクターのセットに関する。
当該技術分野で知られている任意のベクターが本発明の抗体及び抗原結合分子の発現に
好適であり得る。幾つかの実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。幾つかの
実施形態では、ベクターはレトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、マウス白血病ウイ
ルスベクター、ＳＦＧベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター
、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベク
ター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノ随伴ウイル
スベクター（ＡＡＶ）、レンチウイルスベクター又はそれらの任意の組合せである。
他の態様では、本発明のポリヌクレオチド又はベクターを含む細胞が本明細書で提供さ
れる。幾つかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるような抗原結合分子をコ
ードするポリヌクレオチドを含む細胞、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞に関する。幾つかの実施形
態では、本発明は、本明細書に開示されるようなＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ
（配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（
配列番号５００）、これらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞に特異的
に結合する抗体又はその抗原結合分子をコードするポリヌクレオチドを含む細胞、例えば
ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞に関する。
任意の細胞を、本発明の抗体及び抗原結合分子の全て又はフラグメントをコードするポ
リヌクレオチド及びベクターの宿主細胞として使用することができる。幾つかの実施形態
では、宿主細胞は原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、又は哺乳動物細胞等のより高等な真核
細胞であってもよい。好適な原核細胞として、限定されずに、グラム陰性又はグラム陽性
の生物等の真正細菌、例えばエシェリヒア（Escherichia）、例えばＥ．コリ等の腸内細
菌科（Enterobacteriaceae）；Ｂ．サチリス（subtilis）及びＢ．リケニフォルミス（li
cheniformis）等の桿菌；Ｐ．アエルギノーザ（aeruginosa）等のシュードモナス；及び
ストレプトマイセス（Streptomyces）等が挙げられる。幾つかの実施形態では、宿主細胞
はヒト細胞等の哺乳動物細胞である。幾つかの実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞であ
り、他の実施形態では、宿主細胞はｓＰ２／０又は他のマウス細胞である。本発明の宿主
細胞は、当該技術分野で知られている任意の供給源によって得ることができる。
本発明の他の態様は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含む組成物、本明細書
に記載されるベクター、抗体、本明細書に記載される抗原結合分子、及び／又は本明細書
に記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞に関する。幾つかの実施形態では、組成物は薬学的に
許容可能な担体、希釈剤、可溶化剤、乳化剤、防腐剤及び／又はアジュバントを含む。幾
つかの実施形態では、組成物は賦形剤を含む。
一実施形態では、組成物はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、Ｇ
ＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧ
Ｅ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）、並びにこれらの配列を
含む分子及びかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗体又は抗原結合分子をコー
ドするポリヌクレオチドを含む。別の実施形態では、組成物は配列番号１、配列番号２、
配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、並びにこれらの配列を含む分子
及びかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する抗原結合分子を含む。別の実施形態で
は、組成物は、本明細書に開示される抗体をコードするポリヌクレオチド又はポリヌクレ
オチドによってコードされるその抗原結合分子を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞を含む。
幾つかの実施形態では、組成物は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号
１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（
配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５
００）、並びにこれらの配列を含む分子及びかかる分子を提示する細胞に特異的に結合す
る２つ以上の異なる抗体又は抗原結合分子を含む。幾つかの実施形態では、組成物は、配
列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９及び／又は配列番号５００、並びに
これらの配列を含む分子及びかかる分子を提示する細胞に特異的に結合する２つ以上の抗
体又は抗原結合分子を含み、ここで抗体又は抗原結合分子は２つ以上のエピトープを結合
する。幾つかの実施形態では、抗体又は抗原結合分子は、そのエピトープへの結合につい
て互いに競合しない。幾つかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合分
子の２つ以上を医薬組成物中で組み合わせる。かかる組成物は、ヒトを含む被験体への投
与に好適であるのが好ましい。
Ｖ．例示的な方法
以下のセクションでは、本明細書に開示される抗原結合分子を使用する様々な例示的な
方法を記載する。本明細書に開示される任意の抗原結合分子及びそのフラグメント（図面
及び添付の配列表に提示されるものを含む）を開示の方法に使用することができる。
開示の方法の一部でＴ細胞を用いることができる。かかるＴ細胞を当該技術分野で知ら
れている任意の供給源によって得ることができる。例えばＴ細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで
造血幹細胞集団から分化されてもよく、又はＴ細胞は被験体から得られてもよい。Ｔ細胞
は、例えば末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染
部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍から得られてもよい。加えて、Ｔ細
胞は、当該技術分野において利用可能な１つ以上のＴ細胞株に由来し得る。また、Ｔ細胞
は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス等の当業者に知られている数多
くの技術を使用して被験体から収集された血液単位から得られてもよい。Ｔ細胞療法のた
めにＴ細胞を単離する付加的な方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号
（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に開示されている。
様々な実施形態において、抗原結合分子は、アミノ酸配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥ
ＧＳＴＫＧ（配列番号１）、又はアミノ酸配列ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）若し
くはＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）を含む部分配列を含む分子、これらの配列を含
む分子及びかかる配列を提示する細胞に特異的に結合する。更なる実施形態では、抗原結
合分子は、（ａ）軽鎖ＣＤＲ１、（ｂ）軽鎖ＣＤＲ２、（ｃ）軽鎖ＣＤＲ３、（ｄ）重鎖
ＣＤＲ１、（ｅ）重鎖ＣＤＲ２及び（ｆ）重鎖ＣＤＲ３の１つ以上を含む。付加的な実施
形態では、抗原結合分子は、配列番号９若しくは配列番号２１の重鎖ＣＤＲ３、又は配列
番号１５若しくは配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ３、又は重鎖及び軽鎖の両方を含む。他の実
施形態では、抗原結合分子は、配列番号７若しくは配列番号１９のアミノ酸配列を含む重
鎖ＣＤＲ１、配列番号８若しくは配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、又は
配列番号１３若しくは配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は配列番号１
４若しくは配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。様々な実施形態にお
いて、抗原結合分子は重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖
ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲは図６に示されるアミノ酸配列を含む。
様々な実施形態において、抗原結合分子は重鎖（ＨＣ）を含み、ＨＣは配列番号５を含
む重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含み得る。様々な実施形態において、重鎖は重鎖ＣＤＲ１
、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲは図６及び図８に示されるアミノ酸配
列を含む。さらに、幾つかの実施形態では、本明細書に開示される請求項の抗原結合分子
（例えば、配列番号５を含む可変領域（ＶＨ）配列を含む抗原結合分子）のＶＨに対して
少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、
少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、
少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一のＶＨアミノ酸配列を含む
抗原結合分子を用いることができる。
様々な実施形態において、抗原結合分子は軽鎖（ＬＣ）を含み、ＬＣは配列番号１１を
含む軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含み得る。様々な実施形態において、軽鎖は軽鎖ＣＤＲ
１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲは図６及び図８に示されるアミノ酸
配列を含む。さらに、幾つかの実施形態では、本明細書に開示される請求項の抗原結合分
子（例えば、配列番号１１を含む可変領域（ＶＬ）配列を含む抗原結合分子）のＶＨに対
して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５
％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７
％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一のＶＬアミノ酸配列を
含む抗原結合分子を用いることができる。
様々な実施形態において、抗原結合分子は、アミノ酸配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥ
ＧＳＴＫＧ（配列番号１）、又はアミノ酸配列ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）若しくは
ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）を含む部分配列を含む分子に特異的に結合することができ
る。開示の方法の更なる実施形態では、抗原結合分子は、（ａ）軽鎖ＣＤＲ１、（ｂ）軽
鎖ＣＤＲ２、（ｃ）軽鎖ＣＤＲ３、（ｄ）重鎖ＣＤＲ１、（ｅ）重鎖ＣＤＲ２及び（ｆ）
重鎖ＣＤＲ３の１つ以上を含む。開示の方法の付加的な実施形態では、抗原結合分子は、
配列番号２１の重鎖ＣＤＲ３若しくは配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ３、又は重鎖及び軽鎖の
両方を含む。開示の方法の他の実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１９のアミノ酸
配列を含む重鎖ＣＤＲ１、又は配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、又は配
列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、又は配列番号２６のアミノ酸配列を含む
軽鎖ＣＤＲ２を含む。
様々な実施形態において、抗原結合分子は重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ３
、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲは図６及び図８に示さ
れるアミノ酸配列を含む。
開示の方法の様々な実施形態において、抗原結合分子は重鎖（ＨＣ）を含み、ＨＣは配
列番号１７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含み得る。図面を参照すると、開示の方法
の様々な実施形態において、重鎖は重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３を含み
、各ＣＤＲは図６に示されるアミノ酸配列を含む。さらに、開示の方法の実施形態では、
本明細書に開示される請求項の抗原結合分子（例えば、配列番号１７を含む可変領域（Ｖ
Ｈ）配列を含む抗原結合分子）のＶＨに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％
、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％
、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％
又は約１００％同一のＶＨアミノ酸配列を含む抗原結合分子を用いることができる。
開示の方法の様々な実施形態において、抗原結合分子は軽鎖（ＬＣ）を含み、ＬＣは配
列番号２３を含む軽鎖可変領域（ＬＨ）配列を含み得る。図面を参照すると、開示の方法
の様々な実施形態において、軽鎖は軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含み
、各ＣＤＲは図６及び図８に示されるアミノ酸配列を含む。さらに、開示の方法の実施形
態では、本明細書に開示される請求項の抗原結合分子（例えば、配列番号２３を含む可変
領域（ＶＬ）配列を含む抗原結合分子）のＶＨに対して少なくとも約７０％、少なくとも
約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも
約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも
約９９％又は約１００％同一のＶＬアミノ酸配列を含む抗原結合分子を用いることができ
る。
開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２１のア
ミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列
番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽
鎖ＣＤＲ３を含む。
開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号７のアミノ酸配列を含
む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９のアミノ酸
配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１
４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤ
Ｒ３を含む。
ここで、開示の方法に用いることができる抗原結合分子の上記の説明に鑑みて、代表的
な方法をより詳細に論考する。
Ｖａ．或る用量の薬剤を被験体に投与する方法
一態様では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳ
ＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号
４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含
む治療用分子を提示する予め選択される数の細胞を含む用量の薬剤を被験体に投与する方
法が提供される。
具体的な実施形態では、用量は被験体の１キログラム当たり０．５×１０６個の細胞、
被験体の１キログラム当たり１．０×１０６個の細胞、被験体の１キログラム当たり２．
０×１０６個の細胞、被験体の１キログラム当たり３．０×１０６個の細胞、被験体の１
キログラム当たり４．０×１０６個の細胞又は被験体の１キログラム当たり５．０×１０
６個の細胞を含むが、任意の用量を用いた方法を用いることができる。被験体の１キログ
ラム当たり１．０×１０６個の細胞が好ましい用量である。
本明細書に提示される定義と一致して、様々な実施形態において、被験体はヒト又は非
ヒト被験体である。被験体がヒトである場合、被験体は例えば、癌等の異常な生理的状態
の治療を受けているか、又は障害と正式に診断された任意のヒト、正式に認識された障害
を有しないヒト、治療を受けているヒト、障害を発症するリスクがあるヒト、障害の有無
について研究されているヒト等であり得る。
初めに、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特
にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧ
ＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択
されるアミノ酸配列を含む治療用分子を発現することが知られている又は疑われる、既知
の数の細胞を含む集団を含むサンプルを準備する。
一実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（
配列番号１）を含み、別の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＧＫＰＧＳＧＥ
Ｇ（配列番号２）を含み、別の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＫＰＧＳＧＥ
Ｇ（配列番号３）を含み、別の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＳＧＫＰＧＳＧ
Ｅ（配列番号４９９）を含み、別の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＫＰＧＳＧ
（配列番号５００）を含む。
本明細書に提示される定義と一致して、様々な実施形態において、被験体はヒト又は非
ヒト被験体である。被験体がヒトである場合、被験体は例えば、癌等の異常な生理的状態
の治療を受けているか、又は障害と正式に診断された任意のヒト、正式に認識された障害
を有しないヒト、治療を受けているヒト、障害を発症するリスクがあるヒト、障害の有無
について研究されているヒト等であり得る。
初めに、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配
列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を提示することが知られている又は疑われ
る、既知の数の細胞を含む集団を含む既知の容量のサンプルを準備する。細胞の数は任意
の既知の方法を用いて決定することができる。好ましい実施形態では、サンプル中の細胞
をセルソーター（例えば、ＦＡＣＳ）等の自動化装置を用いて計数することによって集団
を決定するが、従来の非自動化細胞計数法を用いることもできる。
この方法の細胞は任意のタイプの細胞を含むことができ、免疫細胞（例えばＢリンパ球
、単球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽
細胞及び乏突起膠細胞）が好ましい。Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞及びＴ
ｒｅｇ細胞を含む）が特に好ましい。具体的な実施形態では、細胞は、本明細書に記載さ
れるように、また当該技術分野で知られている方法によって得ることができるＴ細胞であ
る。任意のタイプの細胞を方法に用いることができ、細胞はヒト細胞又は非ヒト細胞（原
核細胞及び真核細胞の両方を含む）であり得る。例示的な細胞としては、Ｔ細胞、腫瘍浸
潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞等の免疫
細胞が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞は自己、同種異系若しくは異種であ
ってもよく、又はｉｎ ｖｉｖｏ Ｔ細胞若しくはｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞であっても
よく、ＣＤ４＋Ｔ細胞若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞であってもよい。付加的な実施形態では、
細胞はＣＡＲを提示するＴ細胞である。さらに、細胞を血液、組織、又は被験体から得ら
れる任意の他のサンプル、細胞培養培地、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織等のような細
胞を生存形態に維持することが可能な任意の環境に配置する又はそれから単離することが
できる。勾配精製、細胞培養選択及び／又は細胞選別が細胞を得る際に有用であり得る。
細胞によって発現される治療用分子は、それが投与される被験体に治療効果をもたらす
ことが知られる又は考えられる任意の分子を含み得る。このため、治療用分子は、任意の
構造又は設計のペプチド又はポリペプチドであってもよい。選択されるアミノ酸配列（す
なわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含
む治療用分子の一部が、少なくとも部分的に細胞外に、すなわち本開示の抗原結合分子等
の細胞外相互作用パートナーによって認識され得る程度まで発現又は配置されるのが好ま
しい。
具体的な実施形態では、治療用分子はＣＡＲである。治療用分子がＣＡＲである場合、
治療用分子はＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７
、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１
１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（
Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（
ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９
ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ
（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、
ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２
）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受
容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、
ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、Ｃ
Ｄ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１
）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５
８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２Ｄ
Ｌ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、Ｃ
Ｄ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ
２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）
、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４
）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、Ｃ
Ｄ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、
ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６
）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳ
Ｆ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）
、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベ
ータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、Ｇ
ＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド
、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク
質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受
容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラ
グメントを含み得る。
続いて、選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示する細胞の集団を含むサンプルのア
リコートを準備する。アリコートは、任意の簡便な手段を用いて、例えばセルソーターに
よって、単にサンプルから物質をピペッティングして取り出すことによって得ることがで
きる。
さらに、選択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、検出可能な標識を含む抗原結合分
子を準備する。抗原結合分子は本明細書、例えば図面、配列表又は本開示に開示される抗
原結合分子であるのが好ましい。任意の検出可能な標識をこの方法に用いることができ、
好適な標識は所望の基準のセットを用いて選択することができる。検出可能な標識のタイ
プの例としては、Ａｔｔｏ色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシク
マリン、アミノクマリン、メトキシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉ
ｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ
、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュ
ゲート、Ｒｅｄ ６１３、ＰｅｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、
ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃ
ｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロ
フィコシアニン（ＡＰＣ）、ＡＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−
３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（
Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒ
ｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦＰ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、Ｇ
ＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦ
Ｐ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）、Ｍｉｄｏｒｉｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ
ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５
Ｌ変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅ
ｎ、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒ
ｉｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａ
ｎｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、
ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、
ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ＴｕｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅ
ｄ、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒ
ｙ、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍ
Ｋａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅ
ｒｒｙからなる群から選択され得る蛍光色素が挙げられる。他のタイプの検出可能な標識
としては、Johnson, Molecular Probes Handbook: A Guide to Fluorescent Probes and
Labeling Techniques, 11th Edition, Life Technologies, (2010)（引用することにより
明示的に本明細書の一部をなす）に記載される光学色素、放射標識（例えば３Ｈ、１１Ｃ
、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、６４Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２４
Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ等の同位体マーカー）、フォトクロミック化合物、磁気標識（例
えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ）等が挙げられる。タンパク質を標識化する戦略は当該技術分
野で知られており、開示の方法に用いることができる。
標識を分子中の任意の位置で抗原結合分子と会合させることができるが、そのような結
合活性の変更が所望されない限りにおいて分子の結合特性が変更されないような位置（又
は複数の標識が用いられる場合に複数の位置）で標識を分子と会合させるのが好ましい。
選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９
９又は配列番号５００）を特異的に結合する任意の抗原結合分子を用いることができる。
好適な抗原結合分子及びその構成成分の例は本明細書、例えば添付の配列表、並びに図６
及び図８に提示される。開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号
１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ
２、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含
む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２７のア
ミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。開示の方法の他の具体的な実施形態では、抗原結
合分子は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列
番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
抗原結合分子を任意の表面上に配置しても、又は表面上に全く配置しなくてもよい。例
えば、抗原結合分子がバッファー中に存在していても、バッファー−抗原結合分子をサン
プルと接触させてもよい。代替的には、抗原結合分子を表面と会合させることができる。
好適な表面としては、アガロースビーズ、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ等の磁性ビーズ、又はウェ
ルプレート等のプラスチック、ガラス若しくはセラミックプレート、細胞培養バッグ等の
バッグ等が挙げられる。表面自体をカラム等の別の構造内に配置してもよい。
続いて、サンプル中に存在する細胞及び抗原結合分子を含む結合複合体の形成を可能に
する条件下でサンプルのアリコートを抗原結合分子と接触させる。このため、この方法工
程の結果は、検出可能な標識が会合した抗原結合分子が、選択されるアミノ酸配列（すな
わち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む
治療用分子を発現する細胞に結合した結合複合体の形成である。このため、結合複合体自
体が検出可能である。結合複合体の形成を可能にする条件は様々な要因に依存するが、一
般的にはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のような生理的ｐＨ及びイオン強度の水性バ
ッファーが結合複合体の形成に有利であり、開示の方法で好ましい。
アリコート中の結合複合体中に存在する細胞の割合を決定する。この算出は、検出可能
な標識を有する細胞の数と標識を有しない細胞の数とを比較することによって行うことが
でき、パーセンテージとして表すことができる。結合複合体中の細胞の数を決定すること
ができる。結合複合体中に存在する細胞の数を決定するために用いられる具体的な方法は
、選択される標識の性質に依存する。例えば、蛍光標識が選択される場合にはＦＡＣＳを
用いることができ、同位体標識が選択される場合には質量分析、ＮＭＲ又は他の技法を用
いることができ、磁気標識が選ばれる場合には磁気ベースの細胞選別を用いることができ
、顕微鏡検査を用いることもできる。サンプル中の細胞の数は最初から既知であるため、
結合複合体中に存在する細胞の割合を容易に決定することができる。
続いて、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配
列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を発現する初期サンプル中の細胞の濃度を
決定する。この決定は、結合複合体中に存在し、したがって検出可能な標識を有する治療
用タンパク質を発現することが決定された細胞の割合に基づく。
治療用タンパク質を提示する細胞の割合が既知であり、アリコートの容量が既知である
ため、治療用分子を発現する、アリコートを取ったサンプル中の細胞の数のより大きなサ
ンプルの容量との単純な比較が、治療用分子を有するサンプル中の細胞の割合（すなわち
、より大きなサンプル中の治療用分子を有する細胞の濃度）を治療用分子／容量ベースで
もたらす。
選択される細胞の数を含むサンプルの容量を、サンプル中に存在する治療用分子を有す
る細胞の濃度に基づく外挿によって決定する。
最後に、所望の数の細胞を含む容量のサンプルを被験体に投与する。投与は、サンプル
中に存在し、サンプル中の細胞によって発現される治療用分子に基づく治療レジメンの一
態様を構成し得る。
投与は１回又は２回以上行うことができるが、この方法の利点は、予め選択される数の
細胞（この細胞の数は既知の又は期待される効力に基づいて決定される）を含む用量を投
与することによって、治療用分子を提示する細胞の不必要な投与を回避する、すなわち、
被験体が所望の治療効果をもたらす正確な数の細胞を受け、これが過度に多い又は過度に
少ない細胞でないことである。
Ｖｂ．細胞を活性化する方法
免疫細胞を活性化する開示の方法をＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号
１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫ
ＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択さ
れる配列を含む分子を提示する任意の免疫細胞に関連して用いることができる。開示の方
法との関連で、かかる分子を提示するＴ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞及びＴ
ｒｅｇ細胞を含む）が好ましく、開示の方法を実証するために使用されるが、かかる分子
を提示する他の免疫細胞（例えば腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、細胞毒性Ｔリンパ球、腫
瘍浸潤リンパ球等のリンパ球、好中球、好塩基球、又はヘルパーＴ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、
樹状細胞、Ｂ細胞、造血幹細胞、マクロファージ、単球、ランゲルハンス細胞、ケラチノ
サイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞、及び乏突起膠細胞、及びＮＫ細胞）を開示の
方法に用いることもできる。
Ｔ細胞の活性化（この用語は「刺激」の用語と区別なく使用される）は、抗原−特異的
Ｔ細胞受容体認識及びＴ細胞上の補助受容体により伝達されるシグナルに依存する。例え
ばＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン及びＣＤ３ゼータタンパク質のクラス
タリングが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の他の構成成分と更に会合し、Ｔ細胞の活性化を誘
導し、これを免疫応答性にする。このため、本明細書で使用される「活性化」又は「刺激
」は、結合がシグナル伝達事象を媒介する、リガンド（同じ分子の別のコピーであっても
よい、例えばＣＤ３ゼータがＣＤ３ゼータの別のコピーと会合する）との分子の結合によ
って誘導される一次応答を指す。
一実施形態では、Ｔ細胞は、本明細書で提供される抗原結合分子によりｉｎ ｖｉｔｒ
ｏで活性化され、本開示の方法に従って活性化されたＴ細胞を続いてｅｘ ｖｉｖｏで増
殖させ、本明細書に開示されるものを含む様々な用途に使用することができる。
別の実施形態では、活性化は本明細書で提供される抗原結合分子を用いてｉｎ ｖｉｖ
ｏで行われ、本開示の方法に従って活性化されたＴ細胞について、活性化細胞が配置され
る生物において増殖が行われる。ｉｎ ｖｉｖｏ活性化は治療レジームの一部をなし、そ
の例が本明細書に記載される。
活性化の前に、Ｔ細胞等の免疫細胞を被験体（例えばヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラッ
ト、ウサギ等の哺乳動物、又はそのトランスジェニック種；人工胸腺オルガノイド（ＡＴ
Ｏ；例えば、引用することにより本明細書の一部をなす、Seet et al., Nature Methods
14(5):521 (2017)を参照されたい）等の人工系に由来する細胞を、開示のｉｎ ｖｉｖｏ
及びｉｎ ｖｉｔｒｏ活性化方法に用いることもできる）から得る。Ｔ細胞を含む免疫細
胞はＰＢＭＣ、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、脾臓
組織、腫瘍又はＴ細胞株を含む、本明細書に記載されるような多数の供給源から得ること
ができる。また、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ分離等の当業者に知られている数多くの技術を
使用して被験体から収集された容量の血液から得られてもよい。勾配精製、細胞培養選択
及び／又は細胞選別を用いることもできる。
これに鑑みて、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番
号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む分子を提示するＴ細胞等の免疫細胞を活性化する方法が提供される。
初めに、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥ
Ｇ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９
９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分
子を提示することが知られている又は疑われる免疫細胞を含むサンプルを準備する。具体
的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（
配列番号１）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＧＫＰＧＳＧＥ
Ｇ（配列番号２）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＫＰＧＳＧＥ
Ｇ（配列番号３）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＳＧＫＰＧＳＧ
Ｅ（配列番号４９９）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＫＰＧＳＧ
（配列番号５００）である。
具体的な実施形態では、細胞は、本明細書に記載されるように、また当該技術分野で知
られている方法によって得ることができるＴ細胞である。細胞はヒト細胞又は非ヒト細胞
であり得る。Ｔ細胞は自己、同種異系又は異種であり得る。Ｔ細胞が開示の方法に用いら
れる場合、Ｔ細胞はｉｎ ｖｉｖｏ Ｔ細胞又はｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞であり得る。
さらに、細胞を血液、組織、又は被験体から得られる任意の他のサンプル、細胞培養培地
、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織、好適なバッファー等のような細胞を生存形態に維持
することが可能な任意の環境に配置する又はそれから単離することができる。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、
配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子はＣＡＲである。分子がＣ
ＡＲである場合、分子はＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ
４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ
）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、
ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、
ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）
、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、
ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣ
ＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（
ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ
細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔ
ｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ
４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩ
Ｒ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）
、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（
ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３Ｄ
Ｌ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ
１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３
−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮ
ＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ
−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−
ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（Ｓ
ＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（
ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／
ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、Ｉ
Ｌ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、
ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８
３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容
体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化
ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又
はそのフラグメントを含み得る。
次いで、抗原結合分子とサンプルとを、抗原結合分子及び選択されるアミノ酸配列（す
なわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含
む２つの分子を含み、選択されるアミノ酸配列を含む分子が２つの異なる免疫細胞上に配
置される結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させる。結合事象は両方の免疫細胞
を互いにより接近させる効果を有し、複数の細胞が複数の結合事象後に互いにクラスター
化する。
抗原結合分子は本明細書、例えば図面、配列表又は本開示の本セクションに開示される
抗原結合分子（又はそのフラグメント）であるのが好ましい。選択されるアミノ酸配列（
すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を
特異的に結合する任意の抗原結合分子を用いることができる。好適な抗原結合分子の複数
の例、例えば図６及び図８に示されるＣＤＲの１つ以上を有するものが本明細書で提示さ
れる。結合複合体の各免疫細胞上に存在する選択される配列を含む分子は同じであっても
よく、又は抗原結合分子によって特異的に認識される限りにおいて異なっていてもよい。
開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２１のア
ミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列
番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖
ＣＤＲ３を含む。開示の方法の他の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号７
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配
列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１５のアミノ酸配
列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
抗原結合分子を任意の表面上に配置しても、又は表面上に全く配置しなくてもよい。例
えば、ｉｎ ｖｉｖｏ用途では、抗原結合分子がバッファー中に存在していてもよく、抗
原結合分子を被験体の身体に注射することによって接触を達成することができ、その際に
、抗原結合分子がＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番
号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む分子を提示する細胞と接触する場合に活性化が生じる。
所望のレベルの活性化を達成する抗原結合分子の正確な量は、実験的に決定することが
でき、様々な被験体に特異的な基準に依存する。ｉｎ ｖｉｖｏ活性化については、抗原
結合分子の量は、例えば２５μｇ／ｋｇ／日、２０μｇ／ｋｇ／日、１５μｇ／ｋｇ／日
、１０μｇ／ｋｇ／日又は５μｇ／ｋｇ／日であり得る。抗原結合分子は被験体に所望の
日数、例えば５日間、４日間、３日間、２日間又は１日間投与することができる。他の活
性化抗体を、どのくらいの抗原結合分子を被験体に投与するかを決定する際の指針として
使用することができる。例えば、抗ＣＤ３活性化抗体ＯＫＴ３を用いた臨床経験が開示の
方法を行う際の実例となり、有益であり得る。
特定の治療レジームを所与の被験体に合わせることができ、投与量及び条件が通常は臨
床医によって考慮される様々な要因に依存し得ることが当業者には認識される。ｉｎ ｖ
ｉｖｏ活性化についての抗原結合分子の好適な用量を決定する際に考慮することができる
例としては、被験体の健康全般及び強さ、被験体の体重、選択される配列を有する分子を
提示する細胞の所望の全体的な活性化の程度、効力及びｉｎ ｖｉｖｏ効力が挙げられる
。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性化では、抗原結合分子がバッファー中に存在していても、バッフ
ァー−抗原結合分子をサンプルと接触させてもよい。代替的には、幾つかの実施形態では
、抗原結合分子を表面と会合させることができる。好適な表面としては、アガロースビー
ズ、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ等の磁性ビーズ、又はウェルプレート等のプラスチック、ガラス
若しくはセラミックプレート、細胞培養バッグ等のバッグ等が挙げられる。表面自体をカ
ラム等の別の構造内に配置してもよい。
結合複合体の形成を可能にする条件は様々な要因に依存するが、一般的にはリン酸緩衝
生理食塩水（ＰＢＳ）中のような生理的ｐＨ及びイオン強度の水性バッファーが結合複合
体の形成に有利であり、開示の方法で好ましい。
実際には、抗原結合分子の結合が選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列
番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子（１つの分子が２
つの異なる免疫細胞の各々にある）に特異的に結合する場合、２つの細胞が互いに接近し
て引き寄せられる。この接近、すなわちクラスタリングは、免疫細胞を活性化する効果を
有する。
Ｖｃ．対象の分子を提示する細胞の数を決定する方法
対象の分子を発現するサンプル中に存在する細胞の数を決定することが望ましい場合が
ある状況が見られる。例えば、対象の分子を発現する被験体から得られるサンプル中に存
在する免疫細胞の数を決定することが望ましい場合がある。また、トランスフェクション
の効率のレベルの尺度として使用することができる、トランスフェクトされ、対象の分子
を発現する細胞の数を決定することが望ましい場合がある。開示の方法をこれらの用途、
及び対象の分子を発現するサンプル中に存在する細胞の数を決定することが望ましい他の
用途に用いることができる。
このため、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧ
ＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４
９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列
を含む、サンプル中の分子を提示する細胞の数を決定する方法が提供される。
一実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰ
ＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列
番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列
を含む対象の分子を発現することが知られている又は疑われる細胞を含むサンプルを準備
する。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴ
ＫＧ（配列番号１）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号３）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＫＰ
ＧＳＧ（配列番号５００）である。
細胞は任意のタイプとすることができ、ヒト又は非ヒト（例えばマウス、ラット、ウサ
ギ、ハムスター等）であり得る。好ましい実施形態では、細胞は免疫細胞である。この方
法の免疫細胞は、任意のタイプの免疫細胞（例えばＢリンパ球、単球、樹状細胞、ランゲ
ルハンス細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞及び乏突起膠細胞）で
あり得る。Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞及びＴｒｅｇ細胞を含む）が特に
好ましい。具体的な実施形態では、細胞は、本明細書に記載されるように、また当該技術
分野で知られている方法によって得ることができるＴ細胞である。任意のタイプの免疫細
胞を開示の方法の本実施形態に用いることができる。例示的な細胞としては、Ｔ細胞、腫
瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞等の
免疫細胞が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞は自己、同種異系又は異種であ
り得る。Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞であり得る。Ｔ細胞が開示の方法に
用いられる場合、Ｔ細胞はｉｎ ｖｉｖｏ Ｔ細胞又はｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞であり
得る。さらに、細胞を血液、組織、又は被験体から得られる任意の他のサンプル、細胞培
養培地、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織、好適なバッファー等のような細胞を生存形態
に維持することが可能な任意の環境に配置する又はそれから単離することができる。
具体的な実施形態では、対象の分子はＣＡＲである。分子がＣＡＲである場合、分子は
ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、
ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧ
ＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ
２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ
８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ
１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡ
Ｍ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（
ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９
Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関
連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（
ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４
−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５
８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ
３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、Ｃ
Ｄ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（Ｂ
Ｙ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬ
ＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）、ＣＤ２５８
（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７
２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（Ｎ
ＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（
ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５
３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘
導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ
、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−
２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（Ｇｒ
ｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ
受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロ
ブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌ
ｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラグメントを含
み得る。
次いで、サンプルを、対象の分子を特異的に結合し、検出可能な標識を含む抗原結合分
子と、サンプル中に存在する細胞及び抗原結合分子を含む結合複合体の形成を可能にする
条件下で接触させる。抗原結合分子は本明細書、例えば図面、配列表又は本開示の本セク
ションに開示される抗原結合分子（又はそのフラグメント）であるのが好ましい。選択さ
れるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は
配列番号５００）を特異的に結合する任意の抗原結合分子を開示の方法に用いることがで
きる。好適な抗原結合分子の複数の例、例えば図６及び図８に示されるＣＤＲの１つ以上
を有するものが本明細書で提示される。
任意の検出可能な標識をこの方法に用いることができ、好適な標識は所望の基準のセッ
トを用いて選択することができる。検出可能な標識のタイプの例としては、Ａｔｔｏ色素
、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシクマリン、アミノクマリン、メト
キシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ
Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ
）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｒｅｄ ６１３、Ｐｅ
ｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、
Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダ
ミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、Ａ
ＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、
ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、Ｅ
ＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦ
Ｐ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅ
ｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦＰ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）
、Ｍｉｄｏｒｉｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変
異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、Ｇ
ＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ、ＺｓＧｒｅｅｎ１、Ｔａｇ
ＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ、ＹＰｅｔ、Ｔｕｒｂｏ
ＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロ
フィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦ
Ｐ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、Ｔｕ
ｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ、Ｒ−フィコエリトリン（Ｒ
ＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓ
ｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）
、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒｒｙからなる群から選択され
得る蛍光色素が挙げられる。他のタイプの検出可能な標識としては、Johnson, Molecular
Probes Handbook: A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Techniques, 11th Ed
ition, Life Technologies, (2010)（引用することにより明示的に本明細書の一部をなす
）に記載される光学色素、放射標識（例えば３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３
５Ｓ、６４Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ等の同
位体マーカー）、フォトクロミック化合物、磁気標識（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ）等
が挙げられる。タンパク質を標識化する戦略は当該技術分野で知られており、開示の方法
に用いることができる。
標識を分子中の任意の位置で抗原結合分子と会合させることができるが、（そのような
結合活性の変更が所望されない限りにおいて）分子の結合特性が変更されないような位置
（又は複数の標識が用いられる場合に複数の位置）で標識を分子と会合させるのが好まし
い。選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号
４９９又は配列番号５００）を含む対象の分子を特異的に結合する任意の抗原結合分子又
はそのフラグメントを開示の方法に用いることができる。
開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２１のア
ミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列
番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖
ＣＤＲ３を含む。開示の方法の他の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号７
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配
列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１５のアミノ酸配
列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
抗原結合分子を任意の表面上に配置しても、又は表面上に全く配置しなくてもよい。例
えば、抗原結合分子がバッファー中に存在していても、バッファー−抗原結合分子をサン
プルと接触させてもよい。代替的には、抗原結合分子を表面と会合させることができる。
好適な表面としては、アガロースビーズ、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ等の磁性ビーズ、又はウェ
ルプレート等のプラスチック、ガラス若しくはセラミックプレート、細胞培養バッグ等の
バッグ等が挙げられる。表面自体をカラム等の別の構造内に配置してもよい。
結合複合体の形成を可能にする条件は様々な要因に依存するが、一般的にはリン酸緩衝
生理食塩水（ＰＢＳ）中のような生理的ｐＨ及びイオン強度の水性バッファーが結合複合
体の形成に有利であり、開示の方法で好ましい。
続いて、サンプルにおいて結合複合体中に存在する細胞の数を決定する。結合複合体中
に存在する細胞の数を決定するために用いられる具体的な方法は、選択される標識の性質
に依存する。例えば、蛍光標識が選択される場合にはＦＡＣＳを用いることができ、同位
体標識が選択される場合には質量分析、ＮＭＲ又は他の技法を用いることができ、磁気標
識が選ばれる場合には磁気ベースの細胞選別を用いることができ、顕微鏡検査を用いるこ
ともできる。これらの検出方法の結果は細胞の数の形とすることができ、又は結果は結果
に基づく細胞の数の算出を可能にする形とすることができる。
Ｖｄ．分子を単離する方法
異なる分子、特に生物学的に関連した分子の集団を互いに分離する能力を有することは
極めて有用である。本明細書で提供される抗原結合分子を使用することで、かかる分離を
達成し、様々なバイオテクノロジー、生物薬剤学及び治療の用途に用いることができる。
本開示の一態様では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧ
ＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（
配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸
配列を含む分子を単離する方法が提供される。
一実施形態では、この方法はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、
ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳ
ＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む分子を含むことが知られている又は疑われるサンプルを準備することを
含む。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴ
ＫＧ（配列番号１）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号３）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＫＰ
ＧＳＧ（配列番号５００）である。
具体的な実施形態では、対象の分子はＣＡＲである。分子がＣＡＲである場合、分子は
ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、
ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧ
ＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ
２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ
８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ
１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡ
Ｍ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（
ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９
Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関
連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（
ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４
−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５
８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ
３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、Ｃ
Ｄ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（Ｂ
Ｙ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬ
ＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ）、ＣＤ２５８
（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７
２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１４（Ｎ
ＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）、ＣＤ３３６（
ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５
３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘
導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ
、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−
２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（Ｇｒ
ｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ
受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロ
ブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌ
ｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフラグメントを含
み得る。
選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２又は配列番号３）を特異的
に結合し、任意に検出可能な標識を含む抗原結合分子を準備する。検出可能な標識を用い
ることが決定される場合、本明細書に記載されるような任意の検出可能な標識をこの方法
に用いることができ、好適な標識は所望の基準のセットを用いて選択することができる。
検出可能な標識のタイプの例としては、蛍光標識（例えばフルオレセイン、ローダミン、
テトラメチルローダミン、エオシン、エリトロシン、クマリン、メチル−クマリン、ピレ
ン、Ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ、スチルベン、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、Ｃ
ａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩ
ＰＹ ＦＬ、ＬＣ Ｒｅｄ ６４０、Ｃｙ ５、Ｃｙ ５．５、ＬＣ Ｒｅｄ ７０５、
Ｏｒｅｇｏｎ ｇｒｅｅｎ、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ色素（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３
５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５
９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０）、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ
、Ｃａｓ−ｃａｄｅ Ｙｅｌｌｏｗ及びＲ−フィコエリトリン（ＰＥ）（Molecular Prob
es）、ＦＩＴＣ、ローダミン及びＴｅｘａｓ Ｒｅｄ（Pierce）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、
Ｃｙ７（Amersham Life Science））が挙げられる。フルオロフォアを含む好適な光学色
素が、Johnson, Molecular Probes Handbook:A Guide to Fluorescent Probes and Label
ing Techniques, 11thEdition, Life Technologies, (2010)（引用することにより明示的
に本明細書の一部をなす）に記載されている。放射標識（例えば３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、
１５Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、６４Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２４Ｉ、１２５
Ｉ、１３１Ｉ等の同位体マーカー）、フォトクロミック化合物、Ｈａｌｏ−ｔａｇ、Ａｔ
ｔｏ色素、Ｔｒａｃｙ色素、タンパク性蛍光標識（例えば、タンパク性蛍光標識としては
、ウミシイタケ（Renilla）、ウミエラ（Ptilosarcus）又はオワンクラゲ（Aequorea）種
のＧＦＰを含む緑色蛍光タンパク質（Chalfie et al., (1994) Science 263:802-805）、
ＥＧＦＰ（Clontech Labs., Inc.、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｕ５５７６２）、
青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ、Quantum Biotechnologies, Inc；Stauber, (1998) Biotec
hniques 24:462-471；Heim et al., (1996) Curr. Biol. 6: 178-182）、高感度黄色蛍光
タンパク質（Clontech Labs., Inc.）、ルシフェラーゼ（Ichiki et al., (1993) J. Imm
unol. 150:5408-5417）も挙げられるが、これらに限定されない）、磁気標識（例えば、
ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ）等を用いることもできる。タンパク質を標識化する戦略が当該技術
分野で知られており、開示の方法に用いることができる。
標識を分子中の任意の位置で抗原結合分子と会合させることができるが、（そのような
結合活性の変更が所望されない限りにおいて）分子の結合特性が変更されないような位置
（又は複数の標識が用いられる場合に複数の位置）で標識を分子と会合させるのが好まし
い。本明細書に開示されるもの、例えば図６及び図８に示されるＣＤＲの１つ以上を有す
るもの等の選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配
列番号４９９又は配列番号５００）を特異的に結合する任意の抗原結合分子又はそのフラ
グメントを用いることができる。
開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２１のア
ミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列
番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖
ＣＤＲ３を含む。開示の方法の他の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号７
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配
列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１５のアミノ酸配
列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
抗原結合分子を任意の表面上に配置しても、又は表面上に全く配置しなくてもよい。例
えば、抗原結合分子がバッファー中に存在していても、バッファー−抗原結合分子をサン
プルと接触させてもよい。代替的には、抗原結合分子を表面と会合させることができる。
好適な表面としては、アガロースビーズ、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ等の磁性ビーズ、又はウェ
ルプレート等のプラスチック、ガラス若しくはセラミックプレート、細胞培養バッグ等の
バッグ等が挙げられる。表面自体をカラム等の別の構造内に配置してもよい。
サンプルと抗原結合分子とを、選択されるアミノ酸配列を含む分子及び抗原結合分子を
含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させる。結合複合体の形成を可能にする
条件は様々な要因に依存するが、一般的にはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のような
生理的ｐＨ及びイオン強度の水性バッファーが結合複合体の形成に有利であり、開示の方
法で好ましい。結合複合体の構成部分が本明細書に記載されるように表面上に配置され得
ることから、形成される結合複合体も表面上に配置することができる。
この段階で、結合複合体が形成されていない可能性があり、又は選択されるアミノ酸配
列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００
）を含む分子に結合した１つ以上の抗原結合分子を含む複数の結合複合体が形成されてい
る可能性がある。選択されるアミノ酸配列を含む非結合分子及び／又は非結合抗原結合分
子が、任意の形成される結合複合体の局所環境中に存在する可能性もある。
次いで、結合複合体の一部ではない任意の分子を任意の形成される結合複合体から分離
する。除去の方法は、結合複合体の構造及び／又は局所環境によって決まる。例えば、抗
原結合分子がビーズ、プレート又はバッグ上に配置される場合、反応混合物の非結合構成
成分を、形成される結合複合体を無傷で残す溶液を用いて洗い流すことができる。結合複
合体がビーズ上に配置される場合、ビーズ自体をカラム又は他の構造の中に入れてもよく
、同じアプローチを用いることができる。
結合複合体の形成を誘導するために使用される溶液は、例えば非結合構成成分を除去す
る洗浄溶液として使用することができる。形成される結合複合体を破壊しない任意の好適
なバッファー又は溶液を使用することができる。通例、高塩濃度、非生理的ｐＨを有し、
カオトロープ又は変性剤を含有するバッファーは、この方法工程を行う際に避けるのが好
ましい。
次いで、形成される結合複合体を、（ａ）選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号
１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子、及び（
ｂ）抗原結合分子に分離する。分離は、当業者に知られている標準的な方法論を用いて達
成することができる。例えば、好適なｐＨ及び組成の溶液で複合体を洗浄することができ
る。この目的で一般に用いられる溶液は、０．１ＭグリシンＨＣｌ（ｐＨ２．５〜３．０
）であり、この溶液を用いて分離を達成することができる。用いることができる他の溶液
としては、１００ｍＭクエン酸（ｐＨ３．０）、５０ｍＭ〜１００ｍＭトリエチルアミン
又はトリエタノールアミン（ｐＨ１１．５）；１５０ｍＭ水酸化アンモニウム（ｐＨ１０
．５）；０．１Ｍグリシン・ＮａＯＨ（ｐＨ１０．０）；５Ｍ塩化リチウム、３．５Ｍ塩
化マグネシウム又はカリウム、３．０Ｍ塩化カリウム、２．５Ｍヨウ化ナトリウム又はカ
リウム、０．２Ｍ〜３．０Ｍチオシアン酸ナトリウム、２．０Ｍ ＮａＣｌを含む０．１
Ｍ Ｔｒｉｓ−アセテート（ｐＨ７．７）；２Ｍ〜６ＭグアニジンＨＣｌ、２Ｍ〜８Ｍ尿
素、１．０Ｍチオシアン酸アンモニウム、１％デオキシコール酸ナトリウム１％ＳＤＳ；
及び１０％ジオキサン５０％エチレングリコール（ｐＨ８〜１１．５）が挙げられる。
分離に続いて、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号
４９９又は配列番号５００）を含む分子に最も対象が持たれる場合、これを収集すること
ができる。代替的には、抗原結合分子に最も対象が持たれる場合、これを収集することが
できる。
Ｖｅ．分子の有無を決定する方法
本明細書に開示されるように、場合によっては、配列番号１、配列番号２、配列番号４
９９又は配列番号５００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を単離するこ
とが望ましいことがある。他の場合では、単に配列番号１、配列番号２、配列番号４９９
又は配列番号５００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子がサンプルに存在
するか又は存在しないかを知ることが十分な情報である。例えば、発現のレベルに関わら
ず、かかる分子が発現されることを知ることが有益であり得る。他の場合では、かかる分
子を除去するように設計された精製プロセス又は工程が効果的であったかを知ることが望
ましい場合がある。このため、配列番号１、配列番号２、配列番号４９９又は配列番号５
００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子の有無の定性的決定が、複数の用
途で有用であり得る。
これに鑑みて、サンプル中のＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、
ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳ
ＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるア
ミノ酸を含む分子のサンプルにおける有無を決定する方法が提供される。
一実施形態では、この方法はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、
ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳ
ＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む分子を含むことが知られている又は疑われるサンプルを準備することを
含む。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴ
ＫＧ（配列番号１）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号３）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＫＰ
ＧＳＧ（配列番号５００）である。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、
配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子はＣＡＲである。分子がＣ
ＡＲである場合、分子はＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ
４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ
）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、
ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、
ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）
、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、
ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣ
ＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（
ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ
細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔ
ｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ
４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩ
Ｒ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）
、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（
ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３Ｄ
Ｌ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ
１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３
−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮ
ＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ
−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−
ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（Ｓ
ＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（
ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／
ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、Ｉ
Ｌ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、
ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８
３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容
体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化
ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又
はそのフラグメントを含み得る。
選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号４９９又は配列
番号５００）を特異的に結合する、検出可能な標識を含む抗原結合分子を準備する。好適
な標識は所望の基準のセットを用いて選択することができる。検出可能な標識のタイプの
例としては、蛍光標識（例えばフルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、
エオシン、エリトロシン、クマリン、メチル−クマリン、ピレン、Ｍａｌａｃｈｉｔｅ
ｇｒｅｅｎ、スチルベン、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、
Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、ＬＣ Ｒｅｄ
６４０、Ｃｙ ５、Ｃｙ ５．５、ＬＣ Ｒｅｄ ７０５、Ｏｒｅｇｏｎ ｇｒｅｅｎ
、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ色素（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕ
ｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａ
ｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕ
ｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａ
ｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０）、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｃａｓ−ｃａｄｅ Ｙｅ
ｌｌｏｗ及びＲ−フィコエリトリン（ＰＥ）（Molecular Probes）、ＦＩＴＣ、ローダミ
ン及びＴｅｘａｓ Ｒｅｄ（Pierce）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７（Amersham Life Sc
ience））が挙げられる。フルオロフォアを含む好適な光学色素が、Johnson, Molecular
Probes Handbook:A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Techniques, 11th Edit
ion, Life Technologies, (2010)（引用することにより明示的に本明細書の一部をなす）
に記載されている。放射標識（例えば３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、
６４Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ等の同位体マ
ーカー）、フォトクロミック化合物、Ｈａｌｏ−ｔａｇ、Ａｔｔｏ色素、Ｔｒａｃｙ色素
、タンパク性蛍光標識（例えば、タンパク性蛍光標識としては、ウミシイタケ（Renilla
）、ウミエラ（Ptilosarcus）又はオワンクラゲ（Aequorea）種のＧＦＰを含む緑色蛍光
タンパク質（Chalfie et al., (1994) Science 263:802-805）、ＥＧＦＰ（Clon-tech La
bs., Inc．、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｕ５５７６２）、青色蛍光タンパク質（
ＢＦＰ、Quantum Biotechnologies, Inc；Stauber, (1998) Biotechniques 24:462-471；
Heim et al., (1996) Curr. Biol. 6: 178-182）、高感度黄色蛍光タンパク質（Clontech
Labs., Inc.）、ルシフェラーゼ（Ichiki et al., (1993) J. Immunol. 150:5408-5417
）も挙げられるが、これらに限定されない）、磁気標識（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ）
等を用いることもできる。タンパク質を標識化する戦略が当該技術分野で知られており、
開示の方法に用いることができる。
開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２１のア
ミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列
番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖
ＣＤＲ３を含む。開示の方法の他の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号７
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配
列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１５のアミノ酸配
列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
標識を分子中の任意の位置で抗原結合分子と会合させることができるが、（そのような
結合活性の変更が所望されない限りにおいて）分子の結合特性が変更されないような位置
（又は複数の標識が用いられる場合に複数の位置）で標識を分子と会合させるのが好まし
い。本明細書に開示されるもの、例えば図６及び図８に示されるＣＤＲの１つ以上を有す
るもの等の、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、
配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を特異的に結合する任意の抗原結合分子
を用いることができる。
続いて、サンプルと抗原結合分子とを、サンプル中に存在する細胞及び抗原結合分子を
含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させる。抗原結合分子を任意の表面上に
配置しても、又は表面上に全く配置しなくてもよい。例えば、抗原結合分子がバッファー
中に存在していても、バッファー−抗原結合分子をサンプルと接触させてもよい。代替的
には、抗原結合分子を表面と会合させることができる。好適な表面としては、アガロース
ビーズ、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ等の磁性ビーズ、又はウェルプレート等のプラスチック、ガ
ラス若しくはセラミックプレート、細胞培養バッグ等のバッグ等が挙げられる。表面自体
をカラム等の別の構造内に配置してもよい。
サンプルと抗原結合分子とを、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番
号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子及び抗原結合分子を
含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させる。結合複合体の形成を可能にする
条件は様々な要因に依存するが、一般的にはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のような
生理的ｐＨ及びイオン強度の水性バッファーが結合複合体の形成に有利であり、開示の方
法で好ましい。結合複合体の構成部分が本明細書に記載されるように表面上に配置され得
ることから、形成される結合複合体も表面上に配置することができる。
この段階で、結合複合体が形成されていない可能性があり、又は選択されるアミノ酸配
列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子
に結合した１つ以上の抗原結合分子（又は抗原結合分子に結合した選択されるアミノ酸配
列を含む１つ以上の分子）を含む複数の結合複合体が形成されている可能性がある。選択
されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号４９９又は配列番号５
００）を含む非結合分子及び／又は非結合抗原結合分子が、任意の形成される結合複合体
の局所環境中に存在する可能性もある。
次いで、結合複合体の一部ではない任意の分子を任意の形成される結合複合体から分離
する。除去の方法は、結合複合体の構造及び／又は局所環境によって決まる。例えば、抗
原結合分子がビーズ、プレート又はバッグ上に配置される場合、反応混合物の非結合構成
成分を、形成される結合複合体を無傷で残す溶液を用いて洗い流すことができる。結合複
合体がビーズ上に配置される場合、ビーズ自体をカラム又は他の構造の中に入れてもよく
、同じアプローチを用いることができる。
結合複合体の形成を誘導するために使用される溶液は、例えば非結合構成成分を除去す
る洗浄溶液として使用することができる。形成される結合複合体を破壊しない任意の好適
なバッファー又は溶液を使用することもできる。通例、高塩濃度、非生理的ｐＨを有し、
カオトロープ又は変性剤を含有するバッファーは、この方法工程を行う際に避けるのが好
ましい。
最後に、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号４９９
又は配列番号５００）を含む分子及び抗原結合分子を含む結合複合体の有無を検出する。
結合複合体の有無を検出するために用いられる具体的な方法は、選択される標識の性質に
依存する。例えば、蛍光標識が選択される場合にはＦＡＣＳを用いることができ、同位体
標識が選択される場合には質量分析、ＮＭＲ又は他の技法を用いることができ、磁気標識
が選ばれる場合には磁気ベースの細胞選別を用いることができ、顕微鏡検査を用いること
もできる。この方法の最終結果は、検出可能な標識を含む抗原結合分子の有無、ひいては
その結合パートナーである選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、
配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子の有無の定性的評価である。
開示の方法の全てと同様に、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号
２、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を任意の環境に配置することができ
る。好ましい実施形態では、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２
、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を細胞の表面上に発現させる。本実施
形態では、細胞は任意のタイプとすることができ、ヒト又は非ヒト（例えばマウス、ラッ
ト、ウサギ、ハムスター等）であり得る。好ましい実施形態では、細胞は免疫細胞である
。この方法の免疫細胞は、任意のタイプの免疫細胞（例えばＢリンパ球、単球、樹状細胞
、ランゲルハンス細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞及び乏突起膠
細胞）であり得る。Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞及びＴｒｅｇ細胞を含む
）が特に好ましい。具体的な実施形態では、細胞は、本明細書に記載されるように、また
当該技術分野で知られている方法によって得ることができるＴ細胞である。任意のタイプ
の免疫細胞を開示の方法の本実施形態に用いることができ、細胞はヒト細胞又は非ヒト細
胞であり得る。例示的な細胞としては、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞
、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞等の免疫細胞が挙げられるが、これらに限
定されない。Ｔ細胞は自己、同種異系又は異種であり得る。付加的な実施形態では、細胞
はＣＡＲを提示するＴ細胞である。Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞であり得
る。Ｔ細胞が開示の方法に用いられる場合、Ｔ細胞はｉｎ ｖｉｖｏ Ｔ細胞又はｉｎ
ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞であり得る。
付加的な実施形態では、細胞を血液、組織、又は被験体から得られる任意の他のサンプ
ル、細胞培養培地、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織、好適なバッファー等のような細胞
を生存形態に維持することが可能な任意の環境に配置する又はそれから単離することがで
きる。
Ｖｆ．分子の濃度を増大する方法
非常に多くの場合、対象の分子は所望より低いレベルでサンプル中に存在する。例えば
、細胞に外来遺伝子をトランスフェクトする場合、外来遺伝子によってコードされるタン
パク質（複数の場合もある）の発現レベルは低い。細胞から分泌される分子についても同
じことが言える。かかる分子は少量で存在することが多い（しかし、分子が配列番号１、
配列番号２又は配列番号３の開示のアミノ酸配列の１つを含む場合、依然として本明細書
で提供される方法を用いて検出することができる）。低い発現レベルの問題に対する一解
決策は、溶液中に遊離していても又は細胞の表面上に発現されていてもよい対象の分子の
濃度を増大することである。細胞内で発現される対象の分子の濃度を高めることもできる
が、初めに分子を放出させるために細胞を溶解させる必要がある。
この問題に対処するために、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、
ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳ
ＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む分子を提示する細胞の濃度を増大する方法が提供される。
一実施形態では、この方法はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、
ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳ
ＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む分子を含むことが知られている又は疑われる細胞を含むサンプルを準備
することを含む。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴ
ＫＧ（配列番号１）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号３）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＫＰ
ＧＳＧ（配列番号５００）である。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、
配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子はＣＡＲである。分子がＣ
ＡＲである場合、分子はＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ
４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ
）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、
ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、
ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）
、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、
ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣ
ＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（
ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ
細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔ
ｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ
４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩ
Ｒ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）
、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（
ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３Ｄ
Ｌ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ
１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３
−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮ
ＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ
−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−
ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（Ｓ
ＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（
ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／
ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、Ｉ
Ｌ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、
ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８
３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容
体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化
ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又
はそのフラグメントを含み得る。
選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４
９９又は配列番号５００）を特異的に結合し、任意に検出可能な標識を含む抗原結合分子
を準備する。検出可能な標識を用いることが好ましい場合、本明細書に記載されるような
任意の検出可能な標識をこの方法に用いることができ、好適な標識は所望の基準のセット
を用いて選択することができる。検出可能な標識のタイプの例としては、蛍光標識（例え
ばフルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリトロシン、ク
マリン、メチル−クマリン、ピレン、Ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ、スチルベン、Ｌ
ｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＩＡＥ
ＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、ＬＣ Ｒｅｄ ６４０、Ｃｙ ５、Ｃｙ
５．５、ＬＣ Ｒｅｄ ７０５、Ｏｒｅｇｏｎ ｇｒｅｅｎ、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ色
素（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６
８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８
０）、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｃａｓ−ｃａｄｅ Ｙｅｌｌｏｗ及びＲ−フィコエリ
トリン（ＰＥ）（Molecular Probes）、ＦＩＴＣ、ローダミン及びＴｅｘａｓ Ｒｅｄ（
Pierce）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７（Amersham Life Science））が挙げられる。フ
ルオロフォアを含む好適な光学色素が、Johnson, Molecular Probes Handbook:A Guide t
o Fluorescent Probes and Labeling Techniques, 11th Edition, Life Technologies, (
2010)（引用することにより明示的に本明細書の一部をなす）に記載されている。放射標
識（例えば３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、６４Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔ
ｃ、１１１Ｉｎ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ等の同位体マーカー）、フォトクロミッ
ク化合物、Ｈａｌｏ−ｔａｇ、Ａｔｔｏ色素、Ｔｒａｃｙ色素、タンパク性蛍光標識（例
えば、タンパク性蛍光標識としては、ウミシイタケ（Renilla）、ウミエラ（Ptilosarcus
）又はオワンクラゲ（Aequorea）種のＧＦＰを含む緑色蛍光タンパク質（Chalfie et al.
, (1994) Science 263:802-805）、ＥＧＦＰ（Clon-tech Labs., Inc．、Ｇｅｎｂａｎｋ
アクセッション番号Ｕ５５７６２）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ、Quantum Biotechnol
ogies, Inc；Stauber, (1998) Biotechniques 24:462-471；Heim et al., (1996) Curr.
Biol. 6: 178-182）、高感度黄色蛍光タンパク質（Clontech Labs., Inc.）、ルシフェラ
ーゼ（Ichiki et al., (1993) J. Immunol. 150:5408-5417）も挙げられるが、これらに
限定されない）、磁気標識（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ）等を用いることもできる。タ
ンパク質を標識化する戦略が当該技術分野で知られており、開示の方法に用いることがで
きる。
標識を分子中の任意の位置で抗原結合分子と会合させることができるが、（そのような
結合活性の変更が所望されない限りにおいて）分子の結合特性が変更されないような位置
（又は複数の標識が用いられる場合に複数の位置）で標識を分子と会合させるのが好まし
い。本明細書に開示されるもの、例えば図６及び図８に示されるＣＤＲの１つ以上を有す
るもの等の、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、
配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を特異的に結合する任意の抗原結合分子
（又は抗原結合分子若しくはそのフラグメントに結合した選択されるアミノ酸配列を含む
１つ以上の分子）を用いることができる。
開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２１のア
ミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列
番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖
ＣＤＲ３を含む。開示の方法の他の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号７
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配
列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１５のアミノ酸配
列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
抗原結合分子を任意の表面上に配置しても、又は表面上に全く配置しなくてもよい。例
えば、抗原結合分子がバッファー中に存在していても、バッファー−抗原結合分子をサン
プルと接触させてもよい。代替的には、抗原結合分子を表面と会合させることができる。
好適な表面としては、アガロースビーズ、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ等の磁性ビーズ、又はウェ
ルプレート等のプラスチック、ガラス若しくはセラミックプレート、細胞培養バッグ等の
バッグ等が挙げられる。表面自体をカラム等の別の構造内に配置してもよい。
選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４
９９又は配列番号５００）を含む分子を発現する細胞は任意のタイプとすることができ、
ヒト又は非ヒト（例えばマウス、ラット、ウサギ、ハムスター等）であり得る。好ましい
実施形態では、細胞は免疫細胞である。この方法の免疫細胞は、任意のタイプの免疫細胞
（例えばＢリンパ球、単球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、ケラチノサイト、内皮細胞
、星状細胞、線維芽細胞及び乏突起膠細胞）であり得る。Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ヘ
ルパーＴ細胞及びＴｒｅｇ細胞を含む）が特に好ましい。具体的な実施形態では、細胞は
、本明細書に記載されるように、また当該技術分野で知られている方法によって得ること
ができるＴ細胞である。任意のタイプの免疫細胞を用いることができ、細胞はヒト細胞又
は非ヒト細胞であり得る。例示的な細胞としては、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）
、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞等の免疫細胞が挙げられるが、
これらに限定されない。Ｔ細胞は自己、同種異系又は異種であり得る。付加的な実施形態
では、細胞はＣＡＲを提示するＴ細胞である。Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細
胞であり得る。Ｔ細胞が開示の方法に用いられる場合、Ｔ細胞はｉｎ ｖｉｖｏ Ｔ細胞
又はｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞であり得る。さらに、細胞を血液、組織、又は被験体から
得られる任意の他のサンプル、細胞培養培地、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織、好適な
バッファー等のような細胞を生存形態に維持することが可能な任意の環境に配置する又は
それから単離することができる。
細胞を含むサンプルと抗原結合分子とを、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号
１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子及び抗原
結合分子を含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させる。結合複合体の形成を
可能にする条件は様々な要因に依存するが、一般的にはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）
中のような生理的ｐＨ及びイオン強度の水性バッファーが結合複合体の形成に有利であり
、開示の方法で好ましい。結合複合体の構成部分が本明細書に記載されるように表面上に
配置され得ることから、形成される結合複合体も表面上に配置することができる。
この段階で、結合複合体が形成されていない可能性があり、又は選択されるアミノ酸配
列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００
）を含む分子に結合した１つ以上の抗原結合分子を含む複数の結合複合体が形成されてい
る可能性がある。選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号
３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む非結合分子及び／又は非結合抗原結合分
子が、任意の形成される結合複合体の局所環境中に存在する可能性もある。
次いで、結合複合体の一部ではない任意の分子又は細胞を任意の形成される結合複合体
から分離する。除去の方法は、結合複合体の構造及び／又は局所環境によって決まる。例
えば、抗原結合分子がビーズ、プレート又はバッグ上に配置される場合、反応混合物の非
結合構成成分を、形成される結合複合体を無傷で残す溶液を用いて洗い流すことができる
。結合複合体がビーズ上に配置される場合、ビーズ自体をカラム又は他の構造の中に入れ
てもよく、同じアプローチを用いることができる。
結合複合体の形成を誘導するために使用される溶液は、例えば非結合構成成分を除去す
る洗浄溶液として使用することができる。形成される結合複合体を破壊しない任意の好適
なバッファー又は溶液も使用することができる。通例、高塩濃度、非生理的ｐＨを有し、
カオトロープ又は変性剤を含有するバッファーは、この方法工程を行う際に避けるべきで
ある。
この方法段階で、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番
号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を提示する細胞の集団が存在する
。検出可能な標識を用いた場合、標識の性質に応じて細胞の濃度を容易に決定することが
できる。選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列
番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を発現しない細胞が存在しないことで、選択
されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又
は配列番号５００）を含む分子を提示する細胞の集団（又は濃度）がこの方法の実施前の
レベルと比較して増大する。
選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４
９９又は配列番号５００）を含む分子の濃度が所望のレベルにない場合、上記の工程を所
望の回数繰り返すことができる。この方法工程との関連で、所望の濃度の細胞が既に存在
する場合に所望の回数はゼロであり得る。
Ｖｇ．免疫細胞の集団を枯渇させる方法
被験体が免疫細胞により媒介される病態を有する場合、被験体への害を阻止するために
病態を適時に制御することが相当に重要であり得る。例えば、被験体が自己免疫反応を有
する場合、害を阻止するために免疫細胞の集団を枯渇させることによって免疫細胞媒介性
応答を抑制することが望ましい場合がある。別の例では、免疫療法を受けている被験体が
療法に過度に強く反応し、害のリスクがある可能性がある。被験体に投与された免疫細胞
の集団を枯渇させることが、免疫療法に対する被験体の反応を軽減する効果的なアプロー
チである場合もある。被験体の免疫細胞媒介性応答を制御する方法の必要性に鑑みて、Ｇ
ＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号
２）及びＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）、ＫＰ
ＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示する
免疫細胞の集団を枯渇させる方法が提供される。本明細書で提供されるもの、例えば図６
及び図８に示されるＣＤＲの１つ以上を有するもの等の、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
ＳＴＫＧ（配列番号１）、より具体的には部分配列ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）
、部分配列ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、部分配列ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９
９）又は部分配列ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）を特異的に認識する抗原結合分子を開示
の方法に用いることができる。
開示の方法の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２１のア
ミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列
番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖
ＣＤＲ３を含む。開示の方法の他の具体的な実施形態では、抗原結合分子は、配列番号７
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配
列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１５のアミノ酸配
列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、この方法はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、
ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳ
ＧＥ（配列番号４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む分子を提示することが知られている又は疑われる、枯渇させるべき免疫
細胞の集団を準備することを含む。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴ
ＫＧ（配列番号１）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＳＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号２）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＧＫＰＧ
ＳＧＥＧ（配列番号３）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）であり、他の実施形態では、選択されるアミノ酸配列はＫＰ
ＧＳＧ（配列番号５００）である。
具体的な実施形態では、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、
配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子はＣＡＲである。分子がＣ
ＡＲである場合、分子はＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ
４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ
）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、
ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、
ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）
、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、
ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣ
ＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（
ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ
細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔ
ｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ
４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩ
Ｒ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）
、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（
ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３Ｄ
Ｌ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ
１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３
−ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮ
ＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ
−１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−
ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（Ｓ
ＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（
ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／
ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、Ｉ
Ｌ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、
ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８
３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容
体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化
ＮＫ細胞受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又
はそのフラグメントを含み得る。
幾つかの実施形態では、ＣＡＲ等の分子を発現する細胞を死滅させることが有益であり
得る。上記のように、幾つかの実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞等の治療用細胞が患者にお
いて治療に使用され、続いて枯渇させる必要がある場合がある。一実施形態では、本発明
は、ＣＡＲを発現する他のＴ細胞を死滅させるためにＴ細胞を使用することを含む、これ
らのＴ細胞を除去する方法を提供する。本明細書に開示されるもの（すなわち、抗リンカ
ークローン８及び／又は１６、並びにそのフラグメント）等の特定の抗原結合分子によっ
て認識される特異的エピトープを含む分子を提示する細胞を、クローン８及び／又は１６
のフラグメントから構成されるもの（本明細書に記載される）等の特異的抗原結合ｓｃＦ
ｖに連結されたヒトＣＤ３結合ｓｃＦｖを含む二重特異的分子であるダイアボディを用い
て死滅させることができる。或る特定の実施形態では、ダイアボディは、ＧＳＴＳＧＳＧ
ＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（
配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）
及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）を含む分子を発現する細胞とヒトＴ細胞とに結
合して免疫シナプスを形成し、細胞死を促進する。
選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、２、３、４９９又は５００）を含む分
子を提示する免疫細胞は任意のタイプとすることができ、ヒト又は非ヒト（例えばマウス
、ラット、ウサギ、ハムスター等）であり得る。この方法の免疫細胞は、任意のタイプの
免疫細胞（例えばＢリンパ球、単球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、ケラチノサイト、
内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞及び乏突起膠細胞）であり得る。Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ
細胞、ヘルパーＴ細胞及びＴｒｅｇ細胞を含む）が特に好ましい。具体的な実施形態では
、細胞は、本明細書に記載されるように、また当該技術分野で知られている方法によって
得ることができるＴ細胞である。任意のタイプの免疫細胞を開示の方法の本実施形態に用
いることができ、細胞はヒト細胞又は非ヒト細胞であり得る。例示的な細胞としては、Ｔ
細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ
細胞等の免疫細胞が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞は自己、同種異系又は
異種であり得る。付加的な実施形態では、細胞はＣＡＲを提示するＴ細胞である。Ｔ細胞
はＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞であり得る。Ｔ細胞が開示の方法に用いられる場合
、Ｔ細胞はｉｎ ｖｉｖｏ Ｔ細胞又はｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞であり得る。さらに、
細胞を血液、組織、又は被験体から得られる任意の他のサンプル、細胞培養培地、ｅｘ
ｖｉｖｏで成長させた組織、好適なバッファー等のような細胞を生存形態に維持すること
が可能な任意の環境に配置する又はそれから単離することができる。開示の方法を治療的
状況に用いることができることから、好ましい実施形態では、免疫細胞の集団は被験体、
より好ましくはヒト被験体内に配置される。
続いて、免疫細胞と、（ａ）選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号
２又は配列番号３）を含む分子、及び（ｂ）選択されるアミノ酸配列を含む分子を発現し
ない免疫細胞の表面上に発現される活性化分子に特異的に結合する抗原結合分子とを、選
択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９
又は配列番号５００）を含む分子、活性化分子及び抗原結合分子を含む三元結合複合体の
形成を可能にする条件下で接触させる。抗原結合分子を任意の表面上に配置しても、又は
表面上に全く配置しなくてもよい。例えば、抗原結合分子（枯渇させるべき免疫細胞の集
団を含んでいてもよく、バッファー中に存在していてもよい）、及びバッファー−抗原結
合分子をサンプルと接触させてもよい。代替的には、抗原結合分子を表面と会合させるこ
とができる。好適な表面としては、アガロースビーズ、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ等の磁性ビー
ズ、又はウェルプレート等のプラスチック、ガラス若しくはセラミックプレート、細胞培
養バッグ等のバッグ等が挙げられる。表面自体をカラム等の別の構造内に配置してもよい
。
免疫細胞と抗原結合分子とを、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番
号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子、抗原結合分子、及
び選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４
９９又は配列番号５００）を含む分子を発現しない免疫細胞の表面上に発現される活性化
分子を含む三元結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させる。結合複合体の形成を
可能にする条件は様々な要因に依存するが、一般的にはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）
中のような生理的ｐＨ及びイオン強度の水性バッファーが結合複合体の形成に有利であり
、開示の方法で好ましい。結合複合体の構成部分が本明細書に記載されるように表面上に
配置され得ることから、形成される結合複合体も表面上に配置することができる。
好ましい実施形態では、抗原結合分子を被験体に直接投与することによって接触を行う
。本実施形態では、被験体は枯渇させるべき細胞の集団を既に有しており、細胞は選択さ
れるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は
配列番号５００）を含む分子を発現する。このため、これらの細胞及び活性化分子を提示
する細胞は、抗原結合分子を被験体に投与する前に被験体中に存在する。ヒト血液、リン
パ液及び組織の環境により三元結合複合体の形成が可能となる。抗原結合分子と選択され
るアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配
列番号５００）を含む分子との結合は、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、
配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を提示するこ
れらの細胞（すなわち、枯渇させるべき細胞）を「タグ付けする」働きをする。この結合
事象自体が枯渇をもたらしても又はもたらさなくてもよい。しかしながら、抗原結合分子
が活性化分子を結合して三元結合複合体を形成する場合、この結合事象が両方の細胞（す
なわち、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列
番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を発現する細胞及び活性化分子を発現する細
胞）を接近させる。結合事象の生理学的結果は、選択されるアミノ酸配列（すなわち配列
番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又は配列番号５００）を含む分子を発
現する細胞の死滅である。このため、複数の結合事象が被験体全体で生じることで、選択
されるアミノ酸配列（すなわち配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４９９又
は配列番号５００）を含む分子を有する免疫細胞の集団が枯渇し、被験体に対する害のリ
スクが減少する。
Ｖｈ．分子をｉｎ ｖｉｖｏでモニタリングする方法
陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングが腫瘍学研究及び患者ケアによく用いられ
ている。頭部、胸部、腹部及び骨盤の占拠性病変については、最もよく報告されているＰ
ＥＴの用途の１つは、良性の症例と悪性の症例との区別におけるものである。特に、１８
Ｆ−フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）がこれらの用途の全てでグルコース取込みの
分布のイメージングに使用されている。加えて、腫瘍の代謝及び成長の種々の態様をイメ
ージングする他の放射性トレーサーの開発は、可能性の更なる局面をもたらす。これらの
トレーサーとしては、アミノ酸組込みを測定するための１１Ｃ−メチオニン、ヌクレオチ
ド組込み（細胞増殖の尺度）を測定するための１８Ｆ−チミジン、及び組織低酸素を測定
するための１８Ｆ−フルオロミソニダゾールが挙げられる。
本発明は、ＦＤＧ取込みの特異性を増大するためのＰＥＴ分析における抗原結合分子の
使用を提供する。特に、本明細書で提供される方法を用いることで、ＣＡＲ Ｔ細胞のモ
ニタリング、検出、刺激、活性化又は枯渇に加えて、ＣＡＲ細胞による処理後早期に変化
を評定することができる。具体的には、本明細書で提供される方法は、全身スキャンへの
ＰＥＴの使用を容易にすることができる。癌を病期分類するこの技法を用いることで、身
体のほぼ全ての部位における潜在性の転移性疾患を、ＦＤＧ蓄積の増大により潜在的に検
出することができる。
幾つかの実施形態では、本発明は配列番号１、配列番号２、配列番号４９９又は配列番
号５００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を検出するｉｎ ｖｉｖｏ方
法を提供する。例えば、特定の実施形態では、抗原結合分子は、生体被験体における配列
番号１、配列番号２、配列番号４９９又は配列番号５００からなる群から選択されるアミ
ノ酸配列を含む分子の有無を追跡又はモニタリングするために使用することができる。幾
つかの実施形態では、生体被験体はヒトである。幾つかの実施形態では、配列番号１、配
列番号２、配列番号４９９又は配列番号５００からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む分子を生体被験体に与え、該分子の有無が本明細書で提供される抗原結合分子及び陽
電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンを用いて決定される。
幾つかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合分子は、ＣＡＲ Ｔ細胞をｉｎ
ｖｉｖｏで制御するために使用することができる。幾つかの実施形態では、本明細書で
提供される抗原結合分子は、ＣＡＲ Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｖｏで活性化又は刺激するため
に使用することができる。幾つかの実施形態では、本明細書で提供される抗原結合分子は
、ＣＡＲ Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｖｏで枯渇させるために使用することができる。幾つかの
実施形態では、本明細書で提供される抗原結合分子は、ＣＡＲ Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｖｏ
でモニタリングするために使用することができる。具体的には、ＰＥＴと組み合わせるこ
とで、本明細書で提供される抗原結合分子（例えば、抗リンカー抗体）を使用して、ｉｎ
ｖｉｖｏでの選択されるアミノ酸配列（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４
９９又は配列番号５００）を含む分子を発現する細胞の分布をモニタリング又は追跡する
ことができる。
参照による引用
本明細書で言及される全ての出版物、特許、及び特許出願は、個々の出版物、特許又は
特許出願が各々、具体的かつ個別に引用することにより本明細書の一部をなすことが指示
されるのと同じ程度に、引用することにより本明細書の一部をなす。しかしながら、本明
細書における参照文献の引用は、かかる参照文献が本発明に対する先行技術の認識として
解釈されるべきではない。引用することにより本明細書の一部をなす参照文献に提供され
る定義又は用語のいずれかが本明細書に提供される用語及び考察とは異なる場合は、本発
明の用語及び定義を優先する。上記の明細書は、当業者が本発明を実施するのに十分であ
ると考える。上記の記載及び下記の実施例は、本発明の或る特定の好ましい実施形態を詳
述し、本発明者らにより企図される最良の形態を説明するものである。しかしながら、文
書内で上記事項がどれほど詳述されていようと、多くの方法で本発明を実施することがで
き、本発明は添付の特許請求の範囲及びその任意の均等物に従って解釈されるべきである
ことを理解されたい。
本発明は、以下の実施例によって更に説明されるが、更なる限定として解釈されるべき
ではない。本出願全体を通して引用される全ての参照文献の内容は、引用することにより
明らかに本明細書の一部をなす。
実施例１：抗原結合分子の生成
モノクローナル抗体を、免疫原としてキャリアタンパク質ＫＬＨにコンジュゲートした
１８ｍｅｒペプチドであるＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）を用い
たウサギの免疫化により生成した。オボアルブミンにコンジュゲートした完全長リンカー
ペプチドであるＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）を用いたＥＬＩＳ
Ａによりポリクローナル血清をスクリーニングすることによって力価を決定した。フロー
サイトメトリーによりアッセイされるＣＡＲ Ｔ細胞を用いて二次スクリーニングを行っ
た（図２及び図３）。力価が得られた後、免疫化したウサギを屠殺し、標準的なハイブリ
ドーマ生成及びサブクローニングの技法を用いてモノクローナル抗体を誘導した。ハイブ
リドーマサブクローンの最終スクリーニングを、フローサイトメトリーの付加的なラウン
ド及び増殖性ＣＡＲ Ｔ細胞又はＣＡＲ Ｔ細胞に由来する固定細胞ペレットそれぞれの
免疫組織化学（ＩＨＣ）により達成した。選択された２つの最終サブクローンの配列を、
ハイブリドーマサブクローンの標準的なサンガーシークエンシングにより決定した。
実施例２：免疫組織化学（ＩＨＣ）
候補抗体を、免疫組織化学において有用性についてスクリーニングした（ＩＨＣ；図４
）。ＩＨＣ染色のための固定細胞ペレットを作製するために、約２ｅ６個のＣＡＲ Ｔ細
胞を遠心分離し、ＰＢＳで洗浄した。細胞を、０．４５％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ
）を含有するＰＢＳに再懸濁し、振盪プラットホーム上において室温で２時間インキュベ
ートした。インキュベーション後に細胞をＰＢＳでもう一度洗浄し、５％ＢＳＡを含むＰ
ＢＳに再懸濁した。図４に示されるように、ＣＡＲ形質導入細胞は本明細書で提供される
例示的な抗リンカー抗体によって確実に認識された。
実施例３：エピトープマッピング
抗体（すなわち、抗原結合分子）を、完全長ペプチドであるＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧ
ＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、及びＮ末端又はＣ末端のいずれかが切断され、Ｎ末端のビ
オチン部分又はＣ末端のビオチン部分を有するリシン残基のいずれかを含有する変異体を
用いたＥＬＩＳＡによってエピトープマッピングした。抗体を、プロテインＧ（Pierce）
で予めコーティングしたプレートを用いて９６ウェルプレートフォーマットで捕捉した。
プレートをＰＢＳＴバッファーで６回洗浄し、続いて標的ペプチドとのインキュベーショ
ンを行った。更に６回のＰＢＳＴによる洗浄を行い、抗体をストレプトアビジン−ＨＲＰ
と共に更にインキュベートした。ＰＢＳＴでの最終の６回の洗浄後に、シグナルを検出し
、増強化学発光キット（ＥＣＬ、GE Healthcare）及びＶａｒｉｏｓｋａｎ Ｆｌａｓｈ
プレートリーダー（Thermo Fisher）によって定量化した。エピトープマッピング研究の
結果を図５、図７及び図９に示す。
実施例４：ウサギ抗体クローン８−４及びクローン１６−６からのヒト化配列の生成
Chemical Computing Group（CCG）によって開発されたＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒ
ａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）ソフトウェアを用いて、ウサギ抗体クロ
ーン８−４及び１６−６、並びに以下の２つのデータベースのそれぞれに由来する可変軽
鎖ＶＬ及び可変重鎖ＶＨの対の間でアラインメントを生成した：
（１）Abysisのヒトデータベース：ＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ ＤＢに由来する約２０００個
の既知のヒトＶＬ／ＶＨ配列対のデータベース；及び、
（２）ヒト生殖細胞系列データベース：生殖細胞系列配列のデータベース。
ヒト化モデルは、最良の配列アラインメント（ＶＬ及びＶＨドメインの両方に対して最
も高い同一性）を最小のギャップで示す。各々のヒトデータベースからの上位１００個の
抗体対をエクスポートし、ｋＣｌｕｓｔを用いてクラスター化した（Hauser, Mayer, & S
oding, (2013) BMC Bioinformatics, 248）。２つの抗体８−４（表１〜８）及び８−１
６（表９〜１６）の各々についてのＶＬ及びＶＨ配列の表を下記に提示するが、２つのデ
ータベースの各々からの配列は、９０％（表１、表２、表５、表６、表９、表１０、表１
３、表１４）及び９５％（表３、表４、表７、表８、表１１、表１２、表１５、表１６）
でクラスター化する。結果を本明細書及び図８に提示する。
表１． ８−４ ＶＨヒト化配列 −− ９０％でクラスター化したＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ
ＤＢ（Abysis）（１８個の配列）
表２． ８−４ ＶＬヒト化配列 −− ９０％でクラスター化したＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ
ＤＢ（Abysis）（３９個の配列）
表３． ８−４ ＶＨヒト化配列 −− ９５％でクラスター化したＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ
ＤＢ（Abysis）（４７個の配列）
表４． ８−４ ＬＣヒト化配列 −− ９５％でクラスター化したＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ
ＤＢ（Abysis）（９９個の配列）
表５． ８−４ ＶＨヒト化配列 −− ９０％でクラスター化した生殖細胞系列データ
ベース（２個の配列）
表６． ８−４ ＶＬヒト化配列 −− ９０％でクラスター化した生殖細胞系列データ
ベース（５個の配列）
表７． ８−４ ＶＨヒト化配列 −− ９５％でクラスター化した生殖細胞系列データ
ベース（７個の配列）
表８． ８−４ ＶＬヒト化配列 −− ９５％でクラスター化した生殖細胞系列データ
ベース（１２個の配列）
表９． １６−６ ＶＨヒト化配列 −− ９０％でクラスター化したＩＭＧＴ−Ｌｉｇ
Ｍ ＤＢ（Abysis）（４１個の配列）
表１０． １６−６ ＶＬヒト化配列 −− ９０％でクラスター化したＩＭＧＴ−Ｌｉ
ｇＭ ＤＢ（Abysis）（２１個の配列）
表１１． １６−６ ＶＨヒト化配列 −− ９５％でクラスター化したＩＭＧＴ−Ｌｉ
ｇＭ ＤＢ（Abysis）（８１個の配列）
表１２． １６−６ ＶＬヒト化配列 −− ９５％でクラスター化したＩＭＧＴ−Ｌｉ
ｇＭ ＤＢ（Abysis）（６４個の配列）
表１３． １６−６ ＶＨヒト化配列 −− ９０％でクラスター化した生殖細胞系列デ
ータベース（３個の配列）
表１４． １６−６ ＶＬヒト化配列 −− ９０％でクラスター化した生殖細胞系列デ
ータベース（１個の配列）
表１５． １６−６ ＶＨヒト化配列 −− ９５％でクラスター化した生殖細胞系列デ
ータベース（１０個の配列）
表１６． １６−６ ＶＬヒト化配列 −− ９５％でクラスター化した生殖細胞系列デ
ータベース（７個の配列）
表１． ８−４ ＶＨヒト化配列 −− ９０％でクラスター化したＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ
ＤＢ（Abysis）（１８個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表２． ８−４ ＶＬヒト化配列 −− ９０％でクラスター化したＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ
ＤＢ（Abysis）（３９個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表３． ８−４ ＶＨヒト化配列 −− ９５％でクラスター化したＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ
ＤＢ（Abysis）（４７個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表４． ８−４ ＬＣヒト化配列 −− ９５％でクラスター化したＩＭＧＴ−ＬｉｇＭ
ＤＢ（Abysis）（９９個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表５． ８−４ ＶＨヒト化配列 −− ９０％でクラスター化した生殖細胞系列データ
ベース（２個の配列）
Figure 2021090454
表６． ８−４ ＶＬヒト化配列 −− ９０％でクラスター化した生殖細胞系列データ
ベース（５個の配列）
Figure 2021090454
表７． ８−４ ＶＨヒト化配列 −− ９５％でクラスター化した生殖細胞系列データ
ベース（７個の配列）
Figure 2021090454
表８． ８−４ ＶＬヒト化配列 −− ９５％でクラスター化した生殖細胞系列データ
ベース（１２個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表９． １６−６ ＶＨヒト化配列 −− ９０％でクラスター化したＩＭＧＴ−Ｌｉｇ
Ｍ ＤＢ（Abysis）（４１個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表１０． １６−６ ＶＬヒト化配列 −− ９０％でクラスター化したＩＭＧＴ−Ｌｉ
ｇＭ ＤＢ（Abysis）（２１個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表１１． １６−６ ＶＨヒト化配列 −− ９５％でクラスター化したＩＭＧＴ−Ｌｉ
ｇＭ ＤＢ（Abysis）（８１個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表１２． １６−６ ＶＬヒト化配列 −− ９５％でクラスター化したＩＭＧＴ−Ｌｉ
ｇＭ ＤＢ（Abysis）（６４個の配列）
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
Figure 2021090454
表１３． １６−６ ＶＨヒト化配列 −− ９０％でクラスター化した生殖細胞系列デ
ータベース（３個の配列）
Figure 2021090454
表１４． １６−６ ＶＬヒト化配列 −− ９０％でクラスター化した生殖細胞系列デ
ータベース（１個の配列）
Figure 2021090454
表１５． １６−６ ＶＨヒト化配列 −− ９５％でクラスター化した生殖細胞系列デ
ータベース（１０個の配列）
Figure 2021090454
表１６． １６−６ ＶＬヒト化配列 −− ９５％でクラスター化した生殖細胞系列デ
ータベース（７個の配列）
Figure 2021090454
実施例５：高分子及び細胞の精製のための抗リンカー抗体の使用
本明細書に開示される抗原結合分子は、配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（
配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳ
ＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配
列番号５００）、これらの配列を含む分子、並びにかかる分子を提示する細胞、かかる抗
原結合分子をコードするポリヌクレオチドに特異的に結合する抗体等の抗原結合分子、並
びに抗原結合分子のヒト化形態である。このため、本明細書に開示される抗原結合分子（
例えば、抗体）を用いて、本明細書に開示される抗原結合分子によって認識されるエピト
ープ（例えば、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列
、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫ
ＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００））を提示する高
分子等の分子、ポリマー、細胞、物質等を精製することができる。
一実施形態では、本明細書に開示される抗原結合分子（例えば、クローン８及び／又は
１６、並びにそのフラグメント）をビーズに付着させるか、樹脂に付着又は会合させ、こ
れをカラム又は他の構造内に配置することができる。次いで、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧ
ＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２
）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又は
ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）の全て又はフラグメントを含む分子を含むサンプルを、抗
原結合分子を付着させた又は抗原結合分子と会合させたビーズ、樹脂等と接触させること
ができる。これにより、抗原結合分子とＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番
号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ
（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号
５００）の全て又はフラグメントを含む分子とを含む会合複合体又は結合複合体の形成が
可能となる。次いで、ビーズ又は樹脂をＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番
号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ
（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号
５００）の全て又はフラグメントを含む分子の安定性を維持するように選択されたｐＨを
有するバッファー溶液（例えばＰＢＳ、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、Ｔｒｉｓ、トリシン等）
等の好適な溶液で洗浄することができる。洗浄によりサンプルの不要な非結合構成成分を
除去することができる。洗浄工程に続いて、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配
列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧ
ＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列
番号５００）の全て又はフラグメントを含む分子を、形成された任意の会合又は結合複合
体を破壊するように選択される溶出バッファー及び条件を用いて抗原結合分子から溶出さ
せることができる。好適な溶出バッファーの例としては、モル過剰のペプチドエピトープ
とのインキュベーション、０．１Ｍグリシン（ｐＨ２．５〜３．０）、及び０．１Ｍクエ
ン酸（ｐＨ３．０）、５０ｍＭ〜１００ｍＭトリエチルアミン又はトリエタノールアミン
（ｐＨ１１．５）、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ中の３．５Ｍ〜４．０Ｍ塩化マグネシウム（ｐＨ
７．０）、２Ｍ〜６Ｍグアニジン、及び２Ｍ〜８Ｍ尿素、又は遊離ペプチドＧＳＴＳＧＳ
ＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）
、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫ
ＰＧＳＧ（配列番号５００）を含有する、限定されないが、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ＨＥＰ
ＥＳ若しくは１×ＰＢＳを含むバッファー溶液（ｐＨ約７〜８）が挙げられる。溶出工程
中にＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧＳ
ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ
（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）の全て又はフラグメントを
含む、対象の溶出した分子、細胞及び部分を収集し、続いてサンプルをＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル上に流すことによって純度を確認することができる。
別の実施形態では、抗原結合分子を、エピトープを提示する任意の分子実体を含む溶液
中に配置し、分子、細胞等の混合集団から精製し、３００ｍＭ〜５００ｍＭ塩化ナトリウ
ムで洗浄するか、又はｐＨを低下させ、タンパク質については１Ｍ Ｔｒｉｓ、若しくは
リン酸塩緩衝液、若しくはＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ及びその部分配列、特
にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧ
ＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）等の遊離ペプチドを
含有するバッファーで中和することによってビーズ、樹脂又は遊離抗体から溶出させるこ
とができる。続いて、透析を用いて物質を所望のバッファー条件に戻すことができる。
具体的な実施形態では、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びそ
の部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３
）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）の全
て又はフラグメントを含む分子を提示する細胞を、本明細書に開示される抗原結合分子と
会合させた磁性ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ）とインキュベートすることができ
る。インキュベーションは、生理的条件下等の結合／会合複合体のどちらの形成も可能に
する条件下において、この目的で選択される培地（例えば、ＲＰＭＩ−１６４０）の存在
下で行うのが好ましい。
次いで、ビーズに結合した細胞（ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１
）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配
列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５０
０）を含む分子を提示する）を、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）
及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００
）を含む分子を提示しない細胞から分離する。一実施形態では、磁石の存在下において１
０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ−１６４０等の培地でビーズを洗浄することができる。
次いで、選択された細胞、すなわちＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号
１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（
配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５
００）を含む分子を提示する細胞をビーズから分離することができる。初めに、選択され
た細胞を培地中で成長させる。細胞を４８時間成長させた後、磁性ビーズを溶液中の細胞
から分離し、捨てることで、所望の分子を提示する細胞の純粋な集団を残すことができる
。
代替的な実施形態では、ビーズは磁性ではないが、本実施形態でも、上記の工程を行い
、細胞の完全性を維持するだけでなく、ビーズに結合した細胞とビーズに結合していない
細胞との分離を可能にするように適合させることができる。
代替的な実施形態では、本明細書に開示される抗原結合分子（例えば、クローン８及び
／又は１６、並びにそのフラグメント）をＨｉｓタグ付き（すなわち、短いポリヒスチジ
ン配列で標識された）とし、これにより樹脂上に固定化されたＮｉ２＋、Ｃｏ２＋、Ｃｕ
２＋又はＺｎ２＋等の遷移金属イオンを含む樹脂を用いた細胞の分離を容易にすることが
できる。次いで、抗原結合分子をＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）
及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００
）を含む分子を提示することが知られている又は疑われる細胞と共に、細胞及び抗原結合
分子を含む複合体の形成に好適な条件下でインキュベートすることができる。インキュベ
ーションに続いて、細胞をウェルプレート、カラム又は他の構造等の固体構造内に配置さ
れ得る樹脂と接触させる。次いで、抗原結合分子−細胞複合体を、結合複合体の形成時に
用いられる任意の溶液中に含まれる任意のイミダゾールよりも高濃度のイミダゾールで洗
浄することによって互いに分離することができる。次いで、溶出した細胞を遠沈し、ＲＰ
ＭＩ又は他の好適な培地中で洗浄した後、培地に再懸濁することができる。
実施例６：ＣＡＲ陽性Ｔ細胞の選別
ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ密度遠心分離を用い、製造業者の取扱説明書に
従って健常ドナーのｌｅｕｋｏｐａｋ（Hemacare（商標））から単離した。ＰＢＭＣを、
Ｒ１０培地＋ＩＬ−２（３００ＩＵ／ｍｌ、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（商標）、Prometheus（
商標）Therapeutics and Diagnostics）中のＯＫＴ３（５０ｎｇ／ｍｌ、Miltenyi Biote
c（商標））を用いて刺激した。刺激の２日後に、これらの活性化初代ヒトＴ細胞のウイ
ルス形質導入によりＣＡＲ Ｔ細胞を生成した。形質導入は、スクリーニングに用いられ
るＣＡＲの起源に応じてレトロウイルス（ｐＭＳＶＧベクター）又はレンチウイルス（ｐ
ＧＡＲベクター）のいずれかを用いて行った。ＣＡＲ構築物発現及びウイルス形質導入効
率の確認は、フィコエリトリン（ＰＥ）又はフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴ
Ｃ）にコンジュゲートしたプロテインＬを用いて決定した。
培養したＣＡＲ Ｔ細胞を培養物から取り出し、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４
）、０．２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン及び０．０９％アジ化ナトリウムを含む染色
バッファー中で３０分間、ＰＥにコンジュゲートした抗リンカー抗体と共にインキュベー
トした。細胞を染色バッファー中で２回洗浄し、再懸濁し、ＢＤ Ａｒｉａセルソーター
を用いて選別した。負及び正にゲーティングされた細胞を選別後に組成について分析した
（図１０）。
実施例７：抗原結合分子を用いたＣＡＲ陽性Ｔ細胞の刺激／活性化
Ｔ細胞は多くの場合、マウス抗ＣＤ３抗体であるクローンＯＫＴ３等の抗ＣＤ３抗体を
、抗ＣＤ２８抗体と共に用いて、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）により刺激することで
、第２のシグナル又は共刺激シグナルを生じる。ＣＡＲ Ｔ細胞は、同種抗原との相互作
用時に、ＣＤ２８等のそれらの細胞内ＣＤ３ゼータ及び共刺激ドメインにより両方のシグ
ナルを生じることができる。
したがって、特異的抗原結合分子（例えば、本明細書に開示されるもの：クローン８及
び／又は１６、並びにそのフラグメント等のＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配
列番号１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧ
ＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列
番号５００）を含む分子を認識する抗体等の抗原結合分子）によって認識される特異的エ
ピトープを含む分子を提示するＣＡＲ陽性Ｔ細胞を活性化する方法も提供される。この方
法は、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、特にＧ
ＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧ
Ｅ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）を含むキメラ抗原受容体
（ＣＡＲ）等の活性化ドメインを含有するＴ細胞上の対象のタンパク質を認識する任意の
抗体に適合させることができる。活性化は、ＣＡＲの細胞外構成成分又は同様の分子を特
異的に認識するプレートに結合した、ビーズに結合した、ポリマーに結合した又は他の形
態の抗体を用いて達成することができる。
本実施例では、ＣＡＲ＋Ｔ細胞を本明細書で提供されるもの等の抗リンカー抗体により
ｉｎ ｖｉｔｒｏで選択的に刺激することができることが示される。比較を目的として、
Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化するために一般に用いられるＯＫＴ３抗体（例えば、
Landegren et al., (1984) Eur. J. Immunol. 14(4):325-28を参照されたい）を、全ての
Ｔ細胞を刺激するために使用することができる。Ｔ細胞を成長させるためのバッグ、フラ
スコ、プレート若しくは他の容器を刺激に使用してもよく、又は本明細書に記載されるよ
うにウェルプレートを刺激に使用してもよい。
一例では、ＣＡＲ−Ｔ細胞を実施例４に記載のように選別し（図１０）、混合してＣＡ
Ｒ陽性細胞のパーセンテージが一定の細胞の集団を形成した。次いで、これらの細胞をＯ
ｐＴｍｉｚｅｒ培地中において３７℃で２４時間にわたって選別から回復させた。１２ウ
ェル組織培養処理プレートを、１．５μｇ／ｍＬのＯＫＴ３又は抗リンカー抗体のいずれ
かと共にＨＢＳＳ中において３７℃で２時間インキュベートし、ＨＢＳＳで３回洗浄した
。規定の集団の０．５ｅ６個のＴ細胞を、ＩＬ−２を含む２ｍＬのＯｐＴｍｉｚｅｒ培地
中において抗体で予めコーティングしたプレートに添加し、細胞を３７℃で最大１週間イ
ンキュベートし、様々な時点でサンプリングした。
サンプルをフローサイトメトリーによる分析に供し、ＣＡＲ並びにＣＤ２５、ＣＤ６９
及び４−１ＢＢを含む様々な活性化マーカーの存在を確認した。時間と共に、ＯＫＴ３抗
体が全てのＴ細胞を刺激し、ＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージが変化しないことが観察さ
れた。対照的に、抗リンカー抗体と共にインキュベートした場合、ＣＡＲ陽性であるＴ細
胞が刺激を受けて増殖し、集団に占めるパーセンテージがより大きくなった（図１１）。
加えて、Ｔ細胞の表面上のＣＤ６９及び４−１ＢＢのレベルによって観察されるようにＯ
ＫＴ３が全てのＴ細胞を刺激することが観察された。対照的に、抗リンカー抗体による刺
激はＣＡＲ陽性細胞を選択的に刺激した（図１２Ａ及び図１２Ｂ）。
このため、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）及びその部分配列、
特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰ
ＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５００）を含む分子を提示
する細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで選択的に刺激することができる。
実施例８：ｉｎ ｖｉｖｏでの抗原結合分子を用いたＣＡＲ陽性Ｔ細胞の刺激／活性化
本実施例では、ＣＡＲ＋Ｔ細胞を本明細書で提供される抗リンカー抗体によりｉｎ ｖ
ｉｖｏで選択的に刺激した。ＭＭ１Ｓ細胞を雌性ＮＳＧマウスに移植した。ＭＭ１Ｓ細胞
を除去するために、ペプチドＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）を含
むＣＡＲ−Ｔ細胞を６日目に注射した。１３日目に、フルデオキシグルコース陽電子放出
断層撮影（ＦＤＧ−ＰＥＴ）実験を行い、ベースライン代謝を評定した。クローン８抗リ
ンカー抗体を各マウスに注射し、ＦＤＧ−ＰＥＴ実験を２４時間後に繰り返した。図１３
に示されるように、抗体処理後のＦＤＧ−ＰＥＴシグナルの増大は、後肢において最もよ
く観察され、抗リンカー注射に応答したｉｎ ｖｉｖｏでのＣＡＲ＋Ｔ細胞の刺激が示さ
れた。
実施例９：ダイアボディを用いた特異的ペプチドを含有する分子を発現する細胞の枯渇
本実施例では、ＣＡＲ＋Ｔ細胞を、クローン８及び１６等の抗リンカー結合部分を含む
抗リンカー／抗ヒトＣＤ３ダイアボディによりｉｎ ｖｉｔｒｏで選択的に死滅させるこ
とができる。特異的エピトープＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）を
含有するＣＡＲを形質導入したＴ細胞（ＣＡＲ１）、エピトープを含有しないＣＡＲを形
質導入したＴ細胞（ＣＡＲ２）、又は形質導入しないＴ細胞（モック）を、９６ウェルＵ
底プレートにおいてＴ細胞サプリメント、ペニシリン、ストレプトマイシン、グルタミン
及びＩＬ−２を含むＯｐＴｍｉｚｅｒ培地中で成長させた。各ウェルは２００００個のＴ
細胞を含有していた。ダイアボディをＣＡＲ及びモックで形質導入したＴ細胞サンプルの
各々に１．２８ｐＭ〜１００ｎＭの濃度で添加した。１６時間後に、細胞をＬｉｖｅ／Ｄ
ｅａｄ Ｖｉｏｌｅｔ（(Molecular Probes）及び組み換えプロテインＬ／ストレプトア
ビジン−ＰＥで染色し、ダイアボディの濃度に応じた死細胞の数及びＣＡＲ＋Ｔ細胞のパ
ーセンテージを評定した。図１４Ａに示されるように、膜が破裂した細胞に結合する色素
の量はＣＡＲ１サンプル中で増大し、対照ＣＡＲの発現又はＣＡＲの非発現は色素蛍光の
顕著な増大をもたらさない（それぞれＣＡＲ２及びモックを参照されたい）。このことは
、ＣＡＲ２ Ｔ細胞と比較したＣＡＲ１ Ｔ細胞のパーセンテージの減少によって更に観
察することができる（図１４Ｂ）。ＣＡＲ１細胞はおよそ４０％陽性から開始するが、最
高のダイアボディ濃度で全Ｔ細胞の約１０％まで枯渇し、ＣＡＲ２ Ｔ細胞は２０％と一
定のＣＡＲ＋にとどまる。このため、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号
１）及びその部分配列、特にＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（
配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び／又はＫＰＧＳＧ（配列番号５
００）を含む分子を提示する細胞を、Ｔ細胞に特異的なダイアボディ及び特異的ペプチド
によりｉｎ ｖｉｔｒｏで選択的に枯渇させることができる。

Claims (106)

  1. ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
    番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
    ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子に特異
    的に結合する単離抗原結合分子。
  2. 抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ｄＡｂ、ヒト抗体、ヒト
    化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ＩｇＥ
    抗体、ＩｇＤ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ヒンジ領域中に少なくとも１つの変異を
    有するＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ヒンジ領域中に少なくとも１つの変異を有するＩｇ
    Ｇ２抗体、ＩｇＧ３抗体、ヒンジ領域中に少なくとも１つの変異を有するＩｇＧ１抗体、
    ＩｇＧ４抗体、ヒンジ領域中に少なくとも１つの変異を有するＩｇＧ４抗体、少なくとも
    １つの非自然発生アミノ酸を含む抗体及びこれらの任意の組合せからなる群から選択され
    る、請求項１に記載の抗原結合分子。
  3. 抗体を含む、請求項２に記載の抗原結合分子。
  4. 重鎖（ＨＣ）を含む、請求項２に記載の抗原結合分子。
  5. 前記ＨＣが配列番号５及び配列番号１７からなる群から選択される重鎖可変領域（ＶＨ
    ）配列を含む、請求項４に記載の抗原結合分子。
  6. 前記可変領域（ＶＨ）が（ａ）ＣＤＲ１、（ｂ）ＣＤＲ２及び（ｃ）ＣＤＲ３の１つ以
    上を含む、請求項５に記載の抗原結合分子。
  7. 配列番号７及び配列番号１９からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１を含む、請求項６
    に記載の抗原結合分子。
  8. 配列番号８及び配列番号２０からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２を含む、請求項６
    に記載の抗原結合分子。
  9. 配列番号９及び配列番号２１からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項６
    に記載の抗原結合分子。
  10. 前記重鎖が重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲが図６、図
    ８及び図９に示されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の抗原結合分子。
  11. 請求項５に記載の抗原結合分子のＶＨに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５
    ％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５
    ％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９
    ％又は約１００％同一のＶＨアミノ酸配列を含む抗原結合分子。
  12. 軽鎖（ＬＣ）を含む、請求項２に記載の抗原結合分子。
  13. 前記ＬＣが配列番号１１及び配列番号２３からなる群から選択される軽鎖可変領域（Ｖ
    Ｌ）配列を含む、請求項１２に記載の抗原結合分子。
  14. 前記可変領域（ＶＬ）が（ａ）ＣＤＲ１、（ｂ）ＣＤＲ２及び（ｃ）ＣＤＲ３の１つ以
    上を含む、請求項１３に記載の抗原結合分子。
  15. 配列番号１３及び配列番号２５からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１を含む、請求項
    １４に記載の抗原結合分子。
  16. 配列番号１４及び配列番号２６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２を含む、請求項
    １４に記載の抗原結合分子。
  17. 配列番号１５及び配列番号２７からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項
    １４に記載の抗原結合分子。
  18. 前記軽鎖が軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含み、各ＣＤＲが図６、図
    ８及び図９の１つに示されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の抗原結合分子。
  19. 請求項１３に記載の抗原結合分子のＶＬに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７
    ５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９
    ５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９
    ９％又は約１００％同一のＶＬアミノ酸配列を含む抗原結合分子。
  20. （ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨと、
    （ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬと、
    を含む、請求項２に記載の抗原結合分子。
  21. （ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１領域、
    （ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２領域、
    （ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３領域、
    （ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１領域、
    （ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２領域、及び
    （ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３領域、
    を含む、請求項２０に記載の抗原結合分子。
  22. （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨと、
    （ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＬと、
    を含む、請求項２に記載の抗原結合分子。
  23. （ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１領域と、
    （ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２領域と、
    （ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３領域と、
    （ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１領域と、
    （ｅ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２領域と、
    （ｆ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３領域と、
    を含む、請求項２２に記載の抗原結合分子。
  24. 検出可能な標識を更に含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  25. 前記検出可能な標識が蛍光標識、フォトクロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気
    標識、放射標識及びハプテンからなる群から選択される、請求項２４に記載の抗原結合分
    子。
  26. 前記蛍光標識がＡｔｔｏ色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシク
    マリン、アミノクマリン、メトキシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉ
    ｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュ
    ゲート、Ｒｅｄ ６１３、ＰｅｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、
    ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃ
    ｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロ
    フィコシアニン（ＡＰＣ）、ＡＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−
    ３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（
    Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒ
    ｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦＰ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、Ｇ
    ＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦ
    Ｐ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）、Ｍｉｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ
    ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ
    変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ
    、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉ
    ｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎ
    ｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔ
    ｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍ
    Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ＴｕｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ
    、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫ
    ａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒ
    ｒｙからなる群から選択される、請求項２５に記載の抗原結合分子。
  27. 請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子を含む組成物。
  28. 請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子の重鎖をコードするポリヌクレオ
    チド。
  29. 請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子の軽鎖をコードするポリヌクレオ
    チド。
  30. 請求項２８及び２９の一つに記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  31. 請求項３０に記載のベクターの一方又は両方を含む細胞。
  32. 該細胞が、ＣＨＯ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ウサギ細胞及び大腸菌細胞からなる群から選
    択される細胞を含む、請求項３１に記載の細胞。
  33. 請求項３２に記載の細胞を好適な条件下でインキュベートすることを含む、請求項１〜
    ２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子を製造する方法。
  34. ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
    番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
    ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む治療用分子
    を提示する予め選択される数の細胞を含む用量の薬剤を被験体に投与する方法であって、
    （ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
    （配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９
    ）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む治療
    用分子を発現することが知られている又は疑われる、既知の数の細胞を含む集団を含む既
    知の容量のサンプルを準備すること、
    （ｂ）前記選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示する細胞の集団を含む前記サンプ
    ルのアリコートを準備すること、
    （ｃ）前記選択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、検出可能な標識を含む抗原結合
    分子を準備すること、
    （ｄ）前記（ｂ）のアリコートと前記（ｃ）の抗原結合分子とを、前記サンプル中に存
    在する細胞及び該抗原結合分子を含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させる
    こと、
    （ｅ）前記アリコート中の（ｄ）の結合複合体に存在する細胞の割合を決定すること、
    （ｆ）（ｅ）において決定された細胞の割合に基づいて、前記サンプル中の前記選択さ
    れるアミノ酸配列を含む分子を提示する細胞の濃度を決定すること、
    （ｇ）前記選択される数の細胞を含む前記サンプルの容量を決定すること、及び
    （ｈ）（ｇ）において決定された容量の前記サンプルを前記被験体に投与すること、
    を含む、方法。
  35. （ａ）前記治療用分子がＣＡＲであり、（ｂ）前記細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ
    細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ
    細胞からなる群から選択される免疫細胞である、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記ＣＡＲがＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ
    ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ
    １１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９
    （Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０
    （ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４
    ９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６
    ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）
    、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ
    ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原
    受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）
    、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、
    ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ
    １）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１
    ５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２
    ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、
    ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、Ｃ
    Ｄ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ
    ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１
    ４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、
    ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）
    、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ
    ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲ
    ＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８
    ）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒ
    ベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、
    ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガン
    ド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパ
    ク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞
    受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフ
    ラグメントを含む、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項３５に記載の方法。
  38. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏに配置される、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｖｏに配置される、請求項３７に記載の方法。
  40. 前記Ｔ細胞が血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培地の１
    つの中にある、請求項３７に記載の方法。
  41. 前記Ｔ細胞が自己Ｔ細胞である、請求項３７に記載の方法。
  42. 前記Ｔ細胞が同種異系Ｔ細胞である、請求項３７に記載の方法。
  43. 前記用量が１ｋｇ当たり１．０×１０６個の細胞を含む、請求項３４に記載の方法。
  44. 前記検出可能な標識が蛍光標識、フォトクロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気
    標識、放射標識及びハプテンからなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
  45. 前記蛍光標識がＡｔｔｏ色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシク
    マリン、アミノクマリン、メトキシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉ
    ｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュ
    ゲート、Ｒｅｄ ６１３、ＰｅｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、
    ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃ
    ｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロ
    フィコシアニン（ＡＰＣ）、ＡＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−
    ３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（
    Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒ
    ｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦＰ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、Ｇ
    ＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦ
    Ｐ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）、Ｍｉｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ
    ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ
    変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ
    、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉ
    ｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎ
    ｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔ
    ｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍ
    Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ＴｕｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ
    、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫ
    ａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒ
    ｒｙからなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記抗原結合分子が請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子及びそのヒト
    化形態を含む、請求項３４に記載の方法。
  47. ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
    番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
    ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を発現
    する免疫細胞を活性化する方法であって、
    （ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
    （配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９
    ）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子
    を提示することが知られている又は疑われる免疫細胞を含むサンプルを準備すること、及
    び
    （ｂ）抗原結合分子と前記サンプルとを、該抗原結合分子及び前記選択されるアミノ酸
    配列を含む２つの分子を含み、該選択されるアミノ酸配列を含む分子が２つの異なる免疫
    細胞上に配置される結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させること、
    を含む、方法。
  48. （ａ）前記選択されるアミノ酸配列を含む分子がＣＡＲであり、（ｂ）前記免疫細胞が
    ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現
    細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞からなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記ＣＡＲがＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ
    ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ
    １１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９
    （Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０
    （ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４
    ９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６
    ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）
    、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ
    ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原
    受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）
    、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、
    ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ
    １）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１
    ５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２
    ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、
    ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、Ｃ
    Ｄ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ
    ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１
    ４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、
    ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）
    、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ
    ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲ
    ＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８
    ）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒ
    ベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、
    ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガン
    ド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパ
    ク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞
    受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフ
    ラグメントを含む、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項４８に記載の方法。
  51. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏに配置される、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｖｏに配置される、請求項５０に記載の方法。
  53. 前記Ｔ細胞が血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培地の１
    つの中にある、請求項５０に記載の方法。
  54. 前記Ｔ細胞が自己Ｔ細胞である、請求項５０に記載の方法。
  55. 前記Ｔ細胞が同種異系Ｔ細胞である、請求項５０に記載の方法。
  56. 前記抗原結合分子が請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子及びそのヒト
    化形態を含む、請求項４７に記載の方法。
  57. サンプル中のＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳ
    ＧＥＧ（配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号
    ４９９）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含
    む分子を提示する細胞の数を決定する方法であって、
    （ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
    （配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９
    ）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子
    を提示することが知られている又は疑われる細胞を含むサンプルを準備すること、
    （ｂ）前記（ａ）のサンプルと、前記選択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、検出
    可能な標識を含む抗原結合分子とを、前記サンプル中に存在する細胞及び該抗原結合分子
    を含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させること、及び
    （ｃ）前記サンプル中の（ｂ）の結合複合体に存在する細胞の数を決定すること、
    を含む、方法。
  58. （ａ）前記アミノ酸配列を含む分子がＣＡＲであり、（ｂ）前記選択されるアミノ酸配
    列を含む分子を提示する細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（Ｔ
    ＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞からなる群から選択され
    る免疫細胞である、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記ＣＡＲがＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ
    ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ
    １１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９
    （Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０
    （ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４
    ９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６
    ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）
    、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ
    ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原
    受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）
    、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、
    ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ
    １）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１
    ５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２
    ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、
    ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、Ｃ
    Ｄ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ
    ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１
    ４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、
    ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）
    、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ
    ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲ
    ＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８
    ）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒ
    ベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、
    ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガン
    ド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパ
    ク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞
    受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフ
    ラグメントを含む、請求項５８に記載の方法。
  60. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項５７に記載の方法。
  61. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏに配置される、請求項６０に記載の方法。
  62. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｖｏに配置される、請求項６０に記載の方法。
  63. 前記Ｔ細胞が血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培地の１
    つの中にある、請求項６０に記載の方法。
  64. 前記Ｔ細胞が自己Ｔ細胞である、請求項６０に記載の方法。
  65. 前記Ｔ細胞が同種異系Ｔ細胞である、請求項６０に記載の方法。
  66. 前記検出可能な標識が蛍光標識、フォトクロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気
    標識、放射標識及びハプテンからなる群から選択される、請求項５７に記載の方法。
  67. 前記蛍光標識がＡｔｔｏ色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシク
    マリン、アミノクマリン、メトキシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉ
    ｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュ
    ゲート、Ｒｅｄ ６１３、ＰｅｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、
    ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃ
    ｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロ
    フィコシアニン（ＡＰＣ）、ＡＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−
    ３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（
    Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒ
    ｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦＰ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、Ｇ
    ＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦ
    Ｐ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）、Ｍｉｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ
    ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ
    変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ
    、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉ
    ｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎ
    ｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔ
    ｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍ
    Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ＴｕｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ
    、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫ
    ａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒ
    ｒｙからなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記抗原結合分子が請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子及びそのヒト
    化形態を含む、請求項５７に記載の方法。
  69. ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
    番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
    ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を単離
    する方法であって、
    （ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
    （配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９
    ）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子
    を含むことが知られている又は疑われるサンプルを準備すること、
    （ｂ）前記選択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、任意に検出可能な標識を含む抗
    原結合分子を準備すること、
    （ｃ）前記サンプルと前記抗原結合分子とを、前記選択されるアミノ酸配列を含む分子
    及び該抗原結合分子を含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させることと、
    （ｄ）結合複合体の一部ではないあらゆる分子を形成される結合複合体から分離するこ
    と、及び
    （ｅ）形成される結合複合体を（１）前記選択されるアミノ酸配列を含む分子及び（２
    ）抗原結合分子に分離すること、
    を含む、方法。
  70. 前記選択されるアミノ酸配列を含む分子がＣＡＲである、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記ＣＡＲがＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ
    ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ
    １１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９
    （Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０
    （ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４
    ９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６
    ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）
    、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ
    ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原
    受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）
    、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、
    ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ
    １）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１
    ５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２
    ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、
    ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、Ｃ
    Ｄ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ
    ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１
    ４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、
    ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）
    、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ
    ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲ
    ＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８
    ）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒ
    ベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、
    ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガン
    ド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパ
    ク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞
    受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフ
    ラグメントを含む、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記抗原結合分子がアガロースビーズ、磁性ビーズ、プラスチックウェルプレート、ガ
    ラスウェルプレート、セラミックウェルプレート及び細胞培養バッグからなる群から選択
    される表面上に配置される、請求項６９に記載の方法。
  73. 前記検出可能な標識が蛍光標識、フォトクロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気
    標識、放射標識及びハプテンからなる群から選択される、請求項６９に記載の方法。
  74. 前記蛍光標識がＡｔｔｏ色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシク
    マリン、アミノクマリン、メトキシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉ
    ｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュ
    ゲート、Ｒｅｄ ６１３、ＰｅｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、
    ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃ
    ｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロ
    フィコシアニン（ＡＰＣ）、ＡＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−
    ３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（
    Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒ
    ｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦＰ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、Ｇ
    ＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦ
    Ｐ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）、Ｍｉｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ
    ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ
    変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ
    、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉ
    ｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎ
    ｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔ
    ｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍ
    Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ＴｕｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ
    、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫ
    ａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒ
    ｒｙからなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記抗原結合分子が請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子及びそのヒト
    化形態を含む、請求項６９に記載の方法。
  76. ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
    番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
    ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子の有無
    を決定する方法であって、
    （ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
    （配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９
    ）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子
    を含むことが知られている又は疑われるサンプルを準備すること、
    （ｂ）前記選択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、検出可能な標識を更に含む、抗
    原結合分子を準備すること、
    （ｃ）前記サンプルと前記抗原結合分子とを、結合複合体の形成を可能にする条件下で
    接触させること、
    （ｄ）結合複合体の一部ではないあらゆる分子を形成される結合複合体から分離するこ
    と、及び
    （ｅ）結合複合体の有無を検出することと、
    を含む、方法。
  77. 前記選択されるアミノ酸配列を含む分子がＣＡＲである、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記ＣＡＲがＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ
    ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ
    １１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９
    （Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０
    （ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４
    ９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６
    ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）
    、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ
    ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原
    受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）
    、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、
    ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ
    １）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１
    ５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２
    ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、
    ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、Ｃ
    Ｄ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ
    ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１
    ４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、
    ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）
    、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ
    ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲ
    ＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８
    ）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒ
    ベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、
    ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガン
    ド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパ
    ク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞
    受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフ
    ラグメントを含む、請求項７７に記載の方法。
  79. 前記抗原結合分子がアガロースビーズ、磁性ビーズ、プラスチックウェルプレート、ガ
    ラスウェルプレート、セラミックウェルプレート及び細胞培養バッグからなる群から選択
    される表面上に配置される、請求項７６に記載の方法。
  80. 前記検出可能な標識が蛍光標識、フォトクロミック化合物、タンパク性蛍光標識、磁気
    標識、放射標識及びハプテンからなる群から選択される、請求項７６に記載の方法。
  81. 前記蛍光標識がＡｔｔｏ色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ色素、量子ドット、ヒドロキシク
    マリン、アミノクマリン、メトキシクマリン、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉ
    ｃ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ、ＮＢＤ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＰＥ）、ＰＥ−Ｃｙ５コンジュゲート、ＰＥ−Ｃｙ７コンジュ
    ゲート、Ｒｅｄ ６１３、ＰｅｒＣＰ、ＴｒｕＲｅｄ、ＦｌｕｏｒＸ、フルオレセイン、
    ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃ
    ｙ７、ＴＲＩＴＣ、Ｘ−ローダミン、リサミンローダミンＢ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、アロ
    フィコシアニン（ＡＰＣ）、ＡＰＣ−Ｃｙ７コンジュゲート、Ｉｎｄｏ−１、Ｆｌｕｏ−
    ３、Ｆｌｕｏ−４、ＤＣＦＨ、ＤＨＲ、ＳＮＡＲＦ、ＧＦＰ（Ｙ６６Ｈ変異）、ＧＦＰ（
    Ｙ６６Ｆ変異）、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、ＧＦＰｕｖ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒ
    ｅ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ｍＣＦＰ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、ＥＣＦＰ、ＣｙＰｅｔ、Ｇ
    ＦＰ（Ｙ６６Ｗ変異）、ｍＫｅｉｍａ−Ｒｅｄ、ＴａｇＣＦＰ、ＡｍＣｙａｎ１、ｍＴＦ
    Ｐ１、ＧＦＰ（Ｓ６５Ａ変異）、Ｍｉｄｏｒｉｓｈｉ Ｃｙａｎ、Ｗｉｌｄ Ｔｙｐｅ
    ＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｃ変異）、ＴｕｒｂｏＧＦＰ、ＴａｇＧＦＰ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｌ
    変異）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＧＦＰ（Ｓ６５Ｔ変異）、ＥＧＦＰ、Ａｚａｍｉ Ｇｒｅｅｎ
    、ＺｓＧｒｅｅｎ１、ＴａｇＹＦＰ、ＥＹＦＰ、Ｔｏｐａｚ、Ｖｅｎｕｓ、ｍＣｉｔｒｉ
    ｎｅ、ＹＰｅｔ、ＴｕｒｂｏＹＦＰ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ１、Ｋｕｓａｂｉｒａ Ｏｒａｎ
    ｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｍＫＯ、ＴｕｒｂｏＲＦＰ、ｔ
    ｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＤｓＲｅｄモノマー、ＤｓＲｅｄ２（「ＲＦＰ」）、ｍ
    Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ＴｕｒｂｏＦＰ６０２、ＡｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ１、Ｊ−Ｒｅｄ
    、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）、Ｂ−フィコエリトリン（ＢＰＥ）、ｍＣｈｅｒｒｙ
    、ＨｃＲｅｄ１、Ｋａｔｕｓｈａ、Ｐ３、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、ｍＫ
    ａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）、ＴｕｒｂｏＦＰ６３５、ｍＰｌｕｍ及びｍＲａｓｐｂｅｒ
    ｒｙからなる群から選択される、請求項８０に記載の方法。
  82. 前記抗原結合分子が請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子及びそのヒト
    化形態を含む、請求項７６に記載の方法。
  83. ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
    番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
    ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示
    する細胞の濃度を増大する方法であって、
    （ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
    （配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９
    ）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子
    を含むことが知られている又は疑われる細胞を含むサンプルを準備すること、
    （ｂ）前記選択されるアミノ酸配列を特異的に結合し、任意に検出可能な標識を含む抗
    原結合分子を準備すること、
    （ｃ）前記サンプルと前記抗原結合分子とを、前記選択されるアミノ酸配列を含む分子
    及び該抗原結合分子を含む結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させることと、
    （ｄ）結合複合体の一部ではない任意の構成成分を除去すること、及び
    （ｅ）工程（ａ）〜（ｄ）を所望の回数繰り返すこと、
    を含む、方法。
  84. （ａ）前記選択されるアミノ酸配列を含む分子がＣＡＲであり、（ｂ）前記細胞がＣＤ
    ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞
    、樹状細胞及びＮＫ−Ｔ細胞からなる群から選択される免疫細胞である、請求項８３に記
    載の方法。
  85. 前記ＣＡＲがＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ
    ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ
    １１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９
    （Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０
    （ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４
    ９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６
    ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）
    、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ
    ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原
    受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）
    、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、
    ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ
    １）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１
    ５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２
    ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、
    ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、Ｃ
    Ｄ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ
    ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１
    ４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、
    ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）
    、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ
    ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲ
    ＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８
    ）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒ
    ベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、
    ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガン
    ド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパ
    ク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞
    受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフ
    ラグメントを含む、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項８４に記載の方法。
  87. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏに配置される、請求項８６に記載の方法。
  88. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｖｏに配置される、請求項８６に記載の方法。
  89. 前記Ｔ細胞が血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培地の１
    つの中にある、請求項８６に記載の方法。
  90. 前記Ｔ細胞が自己Ｔ細胞である、請求項８６に記載の方法。
  91. 前記Ｔ細胞が同種異系Ｔ細胞である、請求項８６に記載の方法。
  92. 前記抗原結合分子が請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子及びそのヒト
    化形態を含む、請求項８３に記載の方法。
  93. ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
    番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
    ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示
    する免疫細胞の集団を枯渇させる方法であって、
    （ａ）ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ
    （配列番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９
    ）及びＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子
    を発現することが知られている又は疑われる、枯渇させるべき免疫細胞の集団を準備する
    こと、及び
    （ｂ）前記免疫細胞と、（１）前記選択されるアミノ酸配列を含む分子及び（２）該選
    択されるアミノ酸配列を含まない該免疫細胞の表面上に提示される活性化分子に特異的に
    結合する抗原結合分子とを、該選択されるアミノ酸配列を含む分子、該活性化分子及び該
    抗原結合分子を含む三元結合複合体の形成を可能にする条件下で接触させること、
    を含む、方法。
  94. （ａ）前記アミノ酸配列を含む分子がＣＡＲであり、（ｂ）前記免疫細胞がＣＤ８＋Ｔ
    細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状
    細胞及びＮＫ−Ｔ細胞からなる群から選択される、請求項９３に記載の方法。
  95. 前記ＣＡＲがＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ
    ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ
    １１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９
    （Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０
    （ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４
    ９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６
    ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）
    、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ
    ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原
    受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）
    、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、
    ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ
    １）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１
    ５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２
    ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、
    ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、Ｃ
    Ｄ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３−ゼータ
    ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１
    ４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、
    ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ−ｐ４６）
    、ＣＤ３３６（ＮＫ−ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ−ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ
    ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲ
    ＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８
    ）、ＮＫＧ２Ｃ、ＤＡＰ−１０、ＩＣＡＭ−１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ−２Ｒ
    ベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＬＦＡ−１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、
    ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ−７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガン
    ド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパ
    ク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞
    受容体、Ｔｏｌｌ様受容体及びそれらの組合せからなる群から選択される分子又はそのフ
    ラグメントを含む、請求項９４に記載の方法。
  96. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項９４に記載の方法。
  97. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏに配置される、請求項９６に記載の方法。
  98. 前記Ｔ細胞がｉｎ ｖｉｖｏに配置される、請求項９６に記載の方法。
  99. 前記Ｔ細胞が血液、摘出組織、ｅｘ ｖｉｖｏで成長させた組織及び細胞培養培地の１
    つの中にある、請求項９６に記載の方法。
  100. 前記Ｔ細胞が自己Ｔ細胞である、請求項９６に記載の方法。
  101. 前記Ｔ細胞が同種異系Ｔ細胞である、請求項９６に記載の方法。
  102. 前記抗原結合分子が請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子及びそのヒト
    化形態を含む、請求項９３に記載の方法。
  103. ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）、ＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列
    番号２）、ＧＫＰＧＳＧＥＧ（配列番号３）、ＳＧＫＰＧＳＧＥ（配列番号４９９）及び
    ＫＰＧＳＧ（配列番号５００）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む分子を提示
    する細胞の集団のｉｎ ｖｉｖｏ分布をモニタリングする方法。
  104. 前記細胞の集団がＣＡＲ細胞である、請求項１０３に記載の方法。
  105. 抗原結合分子を準備する工程、及び
    陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンを行う工程、
    を含む、請求項１０３又は１０４に記載の方法。
  106. 前記抗原結合分子が前記ＣＡＲ細胞をｉｎ ｖｉｖｏで刺激する又は枯渇させる、請求
    項１０５に記載の方法。
JP2021035968A 2016-07-12 2021-03-08 抗原結合分子及びその使用方法 Active JP7371039B2 (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662361420P 2016-07-12 2016-07-12
US62/361,420 2016-07-12
US201662415786P 2016-11-01 2016-11-01
US62/415,786 2016-11-01
JP2019501456A JP6896057B2 (ja) 2016-07-12 2017-07-11 抗原結合分子及びその使用方法

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019501456A Division JP6896057B2 (ja) 2016-07-12 2017-07-11 抗原結合分子及びその使用方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2021090454A true JP2021090454A (ja) 2021-06-17
JP7371039B2 JP7371039B2 (ja) 2023-10-30

Family

ID=60941963

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019501456A Active JP6896057B2 (ja) 2016-07-12 2017-07-11 抗原結合分子及びその使用方法
JP2021035968A Active JP7371039B2 (ja) 2016-07-12 2021-03-08 抗原結合分子及びその使用方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019501456A Active JP6896057B2 (ja) 2016-07-12 2017-07-11 抗原結合分子及びその使用方法

Country Status (11)

Country Link
US (2) US10501775B2 (ja)
EP (2) EP4269562A3 (ja)
JP (2) JP6896057B2 (ja)
KR (4) KR102382895B1 (ja)
CN (1) CN109661235B (ja)
AU (2) AU2017297347B2 (ja)
CA (1) CA3030683C (ja)
ES (1) ES2960835T3 (ja)
PL (1) PL3484488T3 (ja)
TW (2) TWI691510B (ja)
WO (1) WO2018013563A1 (ja)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102382895B1 (ko) 2016-07-12 2022-04-08 카이트 파마 인코포레이티드 항원 결합 분자 및 그의 사용 방법
EP3518972A4 (en) 2016-09-28 2020-07-22 Kite Pharma, Inc. ANTIGEN BINDING MOLECULES AND THEIR METHODS OF USE
WO2019060695A1 (en) * 2017-09-22 2019-03-28 Kite Pharma, Inc. CHIMERIC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
CN112218888A (zh) 2018-04-12 2021-01-12 凯德药业股份有限公司 使用肿瘤微环境的特征的嵌合受体t细胞治疗
SG11202011541SA (en) 2018-06-01 2020-12-30 Kite Pharma Inc Chimeric antigen receptor t cell therapy
TW202321311A (zh) * 2021-08-02 2023-06-01 日商諾伊爾免疫生物科技股份有限公司 與scFv等之連接子結合的抗體

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006524510A (ja) * 2003-04-25 2006-11-02 エンゾン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド ポリマー結合のための一本鎖抗原結合ポリペプチド
US7666424B2 (en) * 2001-10-17 2010-02-23 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Methods of preparing and using single chain anti-tumor antibodies
WO2016019300A1 (en) * 2014-07-31 2016-02-04 Novartis Ag Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing t-cells
US20160096902A1 (en) * 2013-05-24 2016-04-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
WO1992003918A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
WO1994012520A1 (en) * 1992-11-20 1994-06-09 Enzon, Inc. Linker for linked fusion polypeptides
JP4187277B2 (ja) 1997-04-30 2008-11-26 エンゾン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド グリコシル化し得る抗原結合単鎖タンパク質、それらの生成および使用
UA77157C2 (en) * 2000-02-25 2006-11-15 Polypeptide anti-egfrviii scfvs with improved cytotoxicity and output, molecule of nucleic acid, that codes the indicated polypeptide, and method of cell destructure with using of this polypeptide
US8501471B2 (en) * 2000-10-18 2013-08-06 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8H9
EP1539233B1 (en) 2001-07-12 2011-04-27 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
US20100015665A1 (en) 2006-11-10 2010-01-21 Ucb Pharma S.A. Antibodies and diagnostics
PL2164514T3 (pl) * 2007-05-21 2017-08-31 Alderbio Holdings Llc Przeciwciała przeciwko IL-6 i ich zastosowanie
WO2009030285A1 (en) 2007-09-07 2009-03-12 Ablynx N.V. Binding molecules with multiple binding sites, compositions comprising the same and uses thereof
KR20230133410A (ko) 2010-12-09 2023-09-19 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 암을 치료하기 위한 키메릭 항원 수용체 변형 t 세포의 용도
CN113461819B (zh) 2011-04-29 2024-01-02 埃派斯进有限公司 抗-cd40抗体及其使用方法
KR101974583B1 (ko) 2012-08-29 2019-05-02 삼성전자주식회사 링커 폴리펩티드 및 이를 이용한 표적 물질 분석 방법
US9915665B2 (en) 2012-12-28 2018-03-13 Abbvie Inc. High-throughput system and method for identifying antibodies having specific antigen binding activities
WO2015057834A1 (en) 2013-10-15 2015-04-23 The California Institute For Biomedical Research Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof
CA2936501A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Stephen J. Forman Chimeric antigen receptors (cars) having mutations in the fc spacer region and methods for their use
EP3186284B1 (en) * 2014-08-28 2022-04-06 BioAtla, Inc. Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
ES2904573T3 (es) 2015-03-27 2022-04-05 Univ Southern California Terapia con células T dirigida a LHR para el tratamiento de tumores sólidos
KR102382895B1 (ko) 2016-07-12 2022-04-08 카이트 파마 인코포레이티드 항원 결합 분자 및 그의 사용 방법
KR102553195B1 (ko) 2016-07-29 2023-07-07 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 항-cd19 항체에 대한 항-이디오타입 항체
EP3518972A4 (en) 2016-09-28 2020-07-22 Kite Pharma, Inc. ANTIGEN BINDING MOLECULES AND THEIR METHODS OF USE
WO2019060713A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 Kite Pharma, Inc. ANTIGEN-BINDING MOLECULES AND METHODS OF USE THEREOF

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7666424B2 (en) * 2001-10-17 2010-02-23 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Methods of preparing and using single chain anti-tumor antibodies
JP2006524510A (ja) * 2003-04-25 2006-11-02 エンゾン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド ポリマー結合のための一本鎖抗原結合ポリペプチド
US20160096902A1 (en) * 2013-05-24 2016-04-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies
WO2016019300A1 (en) * 2014-07-31 2016-02-04 Novartis Ag Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing t-cells

Also Published As

Publication number Publication date
EP3484488A1 (en) 2019-05-22
AU2020210684B2 (en) 2023-12-07
WO2018013563A1 (en) 2018-01-18
EP4269562A2 (en) 2023-11-01
US11608517B2 (en) 2023-03-21
CA3030683A1 (en) 2018-01-18
KR20210027510A (ko) 2021-03-10
KR20230069248A (ko) 2023-05-18
US10501775B2 (en) 2019-12-10
JP6896057B2 (ja) 2021-06-30
CN109661235B (zh) 2023-05-09
KR102382895B1 (ko) 2022-04-08
US20200048681A1 (en) 2020-02-13
EP3484488A4 (en) 2020-04-08
CN109661235A (zh) 2019-04-19
PL3484488T3 (pl) 2024-02-05
AU2020210684A1 (en) 2020-08-27
EP3484488C0 (en) 2023-08-09
US20180016620A1 (en) 2018-01-18
ES2960835T3 (es) 2024-03-06
TW202028251A (zh) 2020-08-01
AU2017297347B2 (en) 2020-05-21
JP7371039B2 (ja) 2023-10-30
AU2017297347A1 (en) 2019-01-31
JP2019525751A (ja) 2019-09-12
TWI691510B (zh) 2020-04-21
CA3030683C (en) 2023-11-21
KR20220045999A (ko) 2022-04-13
EP3484488B1 (en) 2023-08-09
KR102223822B1 (ko) 2021-03-11
EP4269562A3 (en) 2023-12-27
TW201811828A (zh) 2018-04-01
TWI787594B (zh) 2022-12-21
KR20190028738A (ko) 2019-03-19
KR102529719B1 (ko) 2023-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI828334B (zh) 抗原結合分子類和使用彼等之方法
JP7371039B2 (ja) 抗原結合分子及びその使用方法
US11834654B2 (en) Antigen binding molecules and methods of use thereof
US20220396628A1 (en) Anti-idiotypic antigen binding molecules and methods of use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210406

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210406

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220118

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220414

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220809

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221108

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230228

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230526

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230829

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230829

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20230926

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20231018

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7371039

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150