JP2021036230A - 粒子及びその製造方法、アフィニティー粒子、検査試薬、検査キット、並びに検出方法 - Google Patents
粒子及びその製造方法、アフィニティー粒子、検査試薬、検査キット、並びに検出方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021036230A JP2021036230A JP2020133869A JP2020133869A JP2021036230A JP 2021036230 A JP2021036230 A JP 2021036230A JP 2020133869 A JP2020133869 A JP 2020133869A JP 2020133869 A JP2020133869 A JP 2020133869A JP 2021036230 A JP2021036230 A JP 2021036230A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- particles
- particle
- ligand
- unit
- binding
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 251
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 38
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000007689 inspection Methods 0.000 title description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 112
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 80
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims abstract description 47
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical group O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 43
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 19
- 125000005372 silanol group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 60
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 51
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 51
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 claims description 45
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 44
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 40
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 38
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 36
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 36
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 36
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 36
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 239000013076 target substance Substances 0.000 claims description 30
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 28
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 25
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 24
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 19
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 16
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 16
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 16
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 15
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 12
- -1 succinimidyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 239000007870 radical polymerization initiator Substances 0.000 claims description 11
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 claims description 7
- 150000003377 silicon compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 claims description 5
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 claims description 5
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 claims description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 5
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 3
- ZADOWCXTUZWAKL-UHFFFAOYSA-N 3-(3-trimethoxysilylpropyl)oxolane-2,5-dione Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCC1CC(=O)OC1=O ZADOWCXTUZWAKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004581 coalescence Methods 0.000 claims description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 31
- 230000007423 decrease Effects 0.000 abstract description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 239000013049 sediment Substances 0.000 abstract 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 127
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 35
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 29
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 27
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 23
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 18
- 230000008859 change Effects 0.000 description 18
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 17
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 17
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 17
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 16
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 14
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 12
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 10
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 10
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- USHAGKDGDHPEEY-UHFFFAOYSA-L potassium persulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O USHAGKDGDHPEEY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 6
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 6
- XDLMVUHYZWKMMD-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCOC(=O)C(C)=C XDLMVUHYZWKMMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 5
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 4
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 4
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 4
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 3
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 3
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 3
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 3
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 3
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 3
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 3
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 3
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 3
- 150000004767 nitrides Chemical class 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- LTQBNYCMVZQRSD-UHFFFAOYSA-N (4-ethenylphenyl)-trimethoxysilane Chemical compound CO[Si](OC)(OC)C1=CC=C(C=C)C=C1 LTQBNYCMVZQRSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LHFKZUQILUQJEH-UHFFFAOYSA-N 3-(3,3,3-trimethoxypropyl)oxolane-2,5-dione Chemical compound COC(CCC1CC(=O)OC1=O)(OC)OC LHFKZUQILUQJEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DOYKFSOCSXVQAN-UHFFFAOYSA-N 3-[diethoxy(methyl)silyl]propyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCO[Si](C)(OCC)CCCOC(=O)C(C)=C DOYKFSOCSXVQAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LZMNXXQIQIHFGC-UHFFFAOYSA-N 3-[dimethoxy(methyl)silyl]propyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CO[Si](C)(OC)CCCOC(=O)C(C)=C LZMNXXQIQIHFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KBQVDAIIQCXKPI-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropyl prop-2-enoate Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCOC(=O)C=C KBQVDAIIQCXKPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N Butadiene Chemical compound C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAPJBEWLBFYGME-UHFFFAOYSA-N Methyl acrylate Chemical compound COC(=O)C=C BAPJBEWLBFYGME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- FWDBOZPQNFPOLF-UHFFFAOYSA-N ethenyl(triethoxy)silane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)C=C FWDBOZPQNFPOLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NKSJNEHGWDZZQF-UHFFFAOYSA-N ethenyl(trimethoxy)silane Chemical compound CO[Si](OC)(OC)C=C NKSJNEHGWDZZQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 229910052809 inorganic oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007561 laser diffraction method Methods 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006068 polycondensation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N tert‐butyl hydroperoxide Chemical compound CC(C)(C)OO CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- CIGLHMQJIHXLPV-UHFFFAOYSA-N triethoxy(3-methoxypropyl)silane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCOC CIGLHMQJIHXLPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- LCPVQAHEFVXVKT-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4-difluorophenoxy)pyridin-3-amine Chemical compound NC1=CC=CN=C1OC1=CC=C(F)C=C1F LCPVQAHEFVXVKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVTLBBWTUPQRAY-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanobutan-2-yldiazenyl)-2-methylbutanenitrile Chemical compound CCC(C)(C#N)N=NC(C)(CC)C#N AVTLBBWTUPQRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYGWHHGCAGTUCH-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-cyano-4-methylpentan-2-yl)diazenyl]-2,4-dimethylpentanenitrile Chemical compound CC(C)CC(C)(C#N)N=NC(C)(C#N)CC(C)C WYGWHHGCAGTUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VFXXTYGQYWRHJP-UHFFFAOYSA-N 4,4'-azobis(4-cyanopentanoic acid) Chemical compound OC(=O)CCC(C)(C#N)N=NC(C)(CCC(O)=O)C#N VFXXTYGQYWRHJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004342 Benzoyl peroxide Substances 0.000 description 1
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 229910001030 Iron–nickel alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYCMBHHDWRMZGG-UHFFFAOYSA-N Methylacrylonitrile Chemical compound CC(=C)C#N GYCMBHHDWRMZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXEKPEMOWBOYRF-UHFFFAOYSA-N [2-[(1-azaniumyl-1-imino-2-methylpropan-2-yl)diazenyl]-2-methylpropanimidoyl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC(=N)C(C)(C)N=NC(C)(C)C(N)=N LXEKPEMOWBOYRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 239000005456 alcohol based solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 235000019400 benzoyl peroxide Nutrition 0.000 description 1
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229910000416 bismuth oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000420 cerium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- PMHQVHHXPFUNSP-UHFFFAOYSA-M copper(1+);methylsulfanylmethane;bromide Chemical compound Br[Cu].CSC PMHQVHHXPFUNSP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- TYIXMATWDRGMPF-UHFFFAOYSA-N dibismuth;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[Bi+3].[Bi+3] TYIXMATWDRGMPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000007720 emulsion polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N indium;oxotin Chemical compound [In].[Sn]=O AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 239000010954 inorganic particle Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 238000003541 multi-stage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001451 organic peroxides Chemical class 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMMGVYCKOGBVEV-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoceriooxy)cerium Chemical compound [Ce]=O.O=[Ce]=O BMMGVYCKOGBVEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SIWVEOZUMHYXCS-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoyttriooxy)yttrium Chemical compound O=[Y]O[Y]=O SIWVEOZUMHYXCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N oxygen(2-);zirconium(4+) Chemical compound [O-2].[O-2].[Zr+4] RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- CHQMHPLRPQMAMX-UHFFFAOYSA-L sodium persulfate Substances [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O CHQMHPLRPQMAMX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011135 tin Substances 0.000 description 1
- 229910052718 tin Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910001928 zirconium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Abstract
Description
更に別の方法として、粒子の一部を磁性体とする方法がある。すなわち、ラテックス凝集法によって凝集した粒子を磁場方向に引き寄せることで相対的に非特異吸着を低減させ感度を上げる方法である(特許文献3)。
また、特許文献2に開示された方法では、親水官能基を表面にコートするためには多段の反応で煩雑な操作が必要となる。
また、特許文献3に開示された磁性粒子を用いた方法では、磁場印加する機構を組み込む必要があり、装置構成が煩雑になる場合がある。
「第一の実施形態」
(粒子、及び粒子の製造方法)
本実施形態に係る粒子の製造方法は、少なくとも、ラジカル重合性モノマー、ラジカル重合開始剤、及びピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体を、水溶液(水系媒体)と混合して乳濁液を調製する工程(第一の工程)を有する。さらに、得た乳濁液を加熱し、ラジカル重合性モノマーを重合する工程(第二の工程)を有する。なお、本実施形態に係る製造方法によって製造される粒子を以下では、ポリマー微粒子と呼ぶことがある。本実施形態に係る粒子の製造方法によって製造される粒子は、ピロリドン環を有する有機化合物の存在により、粒子表面の親水性が高いため、BSAを用いることなく、非特異吸着を抑制できる。また、BSAのような天然物を用いていないので、粒子毎の非特異吸着の抑制能力の差が小さい。言い換えると、粒子を製造する上で、非特異吸着の抑制能力の再現性が高い。更に、ピロリドン環を有する有機化合物として共重合体を用いるため、活性サイトが粒子表面に多く存在し、リガンドを結合する割合も高くなる。その結果、凝集法、例えばラテックス凝集法などによる抗原抗体反応の検出感度が高い。ここで、「ユニット」とは、1つのモノマーに対応する単位構造のことを意味する。
次に、本実施形態に係る粒子の製造方法の一例を説明する。
本実施形態に係るポリマー微粒子は、少なくとも、ラジカル重合性モノマー、ラジカル重合開始剤、並びに、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体を水系媒体と混合して乳濁液を調製する(第一の工程)。ここで、リガンドを結合できる官能基は、カルボキシ基、アミノ基、チオール基、エポキシ基、マレイミド基、スクシニミジル基、または、シリコンアルコキシド基のいずれかを用いることができる。
さらに、乳濁液を加熱し、モノマーを重合する工程(第二の工程)を有する。
本実施形態に係るポリマー微粒子は、ラジカル重合性を有する二重結合を有する化合物を共重合し得られるポリマー微粒子である。
ラジカル重合性モノマーは、少なくともスチレン系モノマーを含むことを特徴とする。更に、アクリレート系モノマー、メタクリレート系モノマーからなる群より選択されるモノマーが含まれていてもよい。例えば、ブタジエン、酢酸ビニル、塩化ビニル、アクリロニトリル、メタクリル酸メチル、メタクリロニトリル、アクリル酸メチルなどを挙げることができる。スチレン系モノマーに加えて、上記のモノマーの群より選択される少なくとも一つを用いることができる。すなわち、これらのモノマーの中から、単独であるいは複数種組み合わせて使用できる。また一つの分子内に二重結合を2つ以上有するモノマー、例えばジビニルベンゼンを架橋剤として用いてもよい。
ラジカル重合開始剤としては、アゾ化合物、有機過酸化物などから広く使用することができる。具体的には、2,2’−アゾビス(イソブチロニトリル)、2,2’−アゾビス(2,4−ジメチルバレロニトリル)、2,2’−アゾビス(2−メチルブチロニトリル)、4,4’−アゾビス(4−シアノ吉草酸)、2,2’−アゾビス(2−メチルプロピオンアミジン)二塩酸塩、2,2’−アゾビス(2−メチルプロピオン酸)ジメチル、tert−ブチルヒドロペルオキシド、過酸化ベンゾイル、過硫酸アンモニウム(APS)、過硫酸ナトリウム(NPS)、過硫酸カリウム(KPS)などをあげることができる。
ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含む共重合体は、合成したポリマー微粒子に含まれ、主に粒子表面に存在する。以下、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含む共重合体を、PVP共重合体と略す。ポリマー微粒子の合成時から上記PVP共重合体を投入することにより、ポリマー微粒子に非特異吸着抑制能と、リガンド結合能を一度に付与することが可能となる。合成時に投入したPVP共重合体は、ラジカル重合性モノマーよりも親水性なので、合成時に溶媒と生成中のポリマー微粒子との界面に存在する。ポリマー微粒子は、合成時にPVP共重合体のポリマー鎖を一部巻き込むことや、ピロリドン環とスチレン(ラジカル重合性モノマー)との相互作用などの物理・化学吸着によって、該粒子の表面にPVP共重合体を吸着する。共重合体は、ビニルピロリドンとアクリル酸との共重合体であることが好ましく、ビニルピロリドンとアクリル酸とのモル比が、2:8〜9:1であることが好ましい。また、ポリマー微粒子はケイ素化合物を含んでいても良く、スチレンモノマーに対するケイ素化合物を含有する割合が40重量%以下であることが好ましい。
PVP共重合体は、ランダムポリマーである(以下、「PVPランダム共重合体」ともいう。)。
PVP共重合体に加えて、ポリマー微粒子合成時に保護コロイドとして親水性ポリマーを添加しても構わない。
本実施形態のPVPランダム共重合体は、分子量が高いことによる、粒子分散のための立体反発効果と、ポリスチレン粒子表面への吸着性とをバランス良く発揮できる適切な親水性を示すことができるからである。分子内で親水性の程度に著しい偏りがない、適切な親水性によって、良好な粒子の分散性とリガンドの結合性の両立に寄与していると考えられるからである。
一方、ブロック共重合体は、分子内で、親水性の高い部分(PVP)と低い部分(リガンドを結合できるユニット)とが明確に分かれるため、親水性の程度を分子全体で均一に調整することは困難である。例えば、ブロック共重合体は、水中で疎水性部分が自己会合し、ポリマーミセルなどの自己組織化体を形成する。その場合、本実施形態の製造方法で示すように、粒子合成において水系媒体にPVP共重合体を添加する場合においては、ブロック共重合体はミセルとなりやすく、ポリスチレン粒子表面への吸着量が低下し、結果として得られる微粒子は水への分散性が悪化することが考えられる。
水溶液(水系媒体)は、媒体中に含まれる水が80%以上100%以下であることが好ましい。水溶液は、水や、水に可溶な有機溶媒、たとえばメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトンを水に混合した溶液が例示される。水以外の有機溶媒を20%より多く含有させると、ポリマー微粒子製造時に重合性モノマーの溶解が生じるおそれがある。
そのほかに、界面活性剤、消泡剤、塩、増粘剤などを水系媒体に対して10%以下の割合で添加して用いても構わない。
このようにして作製したポリマー微粒子は、検体検査用の前駆体粒子である。この前駆体粒子に抗体を固定化し検体検査用の粒子として用いることができる。
本実施形態では、本実施形態に係る粒子と、リガンドを結合できる官能基に結合したリガンドとを有するアフィニティー粒子を提供できる。本実施形態において、リガンドとは、特定の標的物質が有する受容体に特異的に結合する化合物のことである。リガンドが標的物質と結合する部位は決まっており、選択的または特異的に高い親和性を有する。例えば、抗原と抗体、酵素タンパク質とその基質、ホルモンや神経伝達物質などのシグナル物質とその受容体、核酸などが例示されるが、本実施形態におけるリガンドはこれらに限定されない。核酸としてはデオキシリボ核酸等が挙げられる。本実施形態におけるアフィニティー粒子とは、標的物質に対して選択的または特異的に高い親和性(アフィニティー)を有する。リガンドとして例えば、抗体、抗原、抗原結合フラグメント(例えば、Fab、F(ab’)2、F(ab’)、Fv、scFvなど)、天然由来核酸、人工核酸、アプタマー、ペプチドアプタマー、オリゴペプチド、酵素又は補酵素などが挙げられる。本実施形態におけるリガンドが、抗体、抗原、タンパク質及び核酸のいずれかであることが好ましい。
本実施形態における体外診断用の検査試薬、すなわち体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるための検査試薬は、本実施形態に係るアフィニティー粒子と、アフィニティー粒子を分散させる分散媒を有する。本実施形態における試薬中に含有される本実施形態に係るアフィニティー粒子の量は、0.001質量%から20質量%が好ましく、0.01質量%から10質量%がより好ましい。本実施形態に係る試薬は、本発明の目的を達成可能な範囲において、本実施形態に係るアフィニティー粒子の他に、溶剤やブロッキング剤などの第三物質を含んでもよい。溶剤やブロッキング剤などの第三物質は2種類以上を組み合わせて含んでもよい。本実施形態において用いる溶剤の例としては、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、グッド緩衝液、トリス緩衝液、アンモニア緩衝液などの各種緩衝液が例示されるが、本実施形態における試薬に含まれる溶剤はこれらに限定されない。
本実施形態における体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるための検査キットは、上記試薬と、上記試薬を内包する筐体とを有する。本実施形態に係るキットとしては、ラテックス凝集測定用増感剤を含有させてもよい。ラテックス凝集測定用増感剤として、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアルギン酸等が挙げられるが、本発明はこれらに限定されない。また、本実施形態に係るキットは、陽性コントロール、陰性コントロール、血清希釈液等を備えていてもよい。陽性コントロール、陰性コントロールの媒体として、測定しうる標的物質が含まれていない血清、生理食塩水の他、溶剤を用いてもよい。本実施形態に係るキットは、通常の体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるためのキットと同様にして、本実施形態に係る標的物質の検出方法に使用できる。また、従来公知の方法によって標的物質の濃度も測定することができ、特に、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に用いることが好適である。
本実施形態における体外診断による検体中の標的物質の検出方法は、本実施形態に係るアフィニティー粒子と、標的物質を含む可能性のある検体とを混合する工程を有する。また、本実施形態に係るアフィニティー粒子と検体との混合は、pH3.0からpH11.0の範囲で行われることが好ましい。また、混合温度は20℃から50℃の範囲であり、混合時間は1分から20分の範囲である。また、本検出方法は、溶剤を使用することが好ましい。また、本実施形態に係る検出方法におけるアフィニティー粒子の濃度は、反応系中、好ましくは0.001質量%から5質量%、より好ましくは0.01質量%から1質量%である。本実施形態に係る検出方法は、アフィニティー粒子と検体との混合の結果として生じる凝集反応を光学的に検出すること、すなわちラテックス凝集法により検体中の標的物質を検出することが好ましい。具体的には、検査試薬に、検体を混合して混合液を得る工程と、混合液に、光を照射する工程と、混合液に照射された光の、透過光または散乱光の少なくともいずれかを検出する工程を有する。混合液において生じる上記凝集反応を光学的に検出することで、検体中の標的物質が検出され、更に標的物質の濃度も測定することができる。上記凝集反応を光学的に検出する方法としては、散乱光強度、透過光強度、吸光度等を検出可能な光学機器を用いて、これらの値の変化量を測定すればよい。
以下、本発明の第二の実施形態について、詳細に説明するが、本発明はこれらに限られない。
本発明に係る粒子の第一の形態は、無機物を含む粒子であって、該粒子の表面がピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体で被覆されている。本発明に係る粒子の第二の形態は、無機物、並びに、ピロリドン環を有する重合体の第一層と、同一分子内にカルボキシ基、及び、シリコンアルコキシド基またはシラノール基を有する重合体の第二層を含む。本発明に係る粒子の第一の形態において、粒子の表面を被覆する共重合体を、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体とすることで、第一の実施形態で述べたように、良好な粒子の分散性とリガンドの結合性を両立することができる。
本発明に係る粒子を構成する無機物としては金属、金属酸化物、金属窒化物、合金及びこれらの組み合わせを挙げることができる。金属としては、銀、金、銅、スズ、鉄、ニッケル、パラジウム、モリブデン、白金、亜鉛、コバルト、ケイ素などを挙げることができる。金属酸化物としては、上記金属として挙げた化合物の酸化物に加えて、シリカ、酸化ジルコニウム、酸化アルミニウム、酸化チタン、酸化イットリウム、酸化セリウム、酸化インジウムスズ、酸化ビスマスなどを挙げることができる。窒化物としては、上記金属として挙げた化合物の窒化物に加えて、炭窒化チタン、窒化アルミニウムなどを挙げることができる。合金としては、上記金属として挙げた化合物の合金(例えば、鉄―ニッケル合金など)を挙げることができる。本実施形態における無機物はケイ素化合物であってもよく、粒子に対するケイ素化合物を含有する割合が40重量%以上であることが好ましい。
本発明に係る第一の形態の粒子を構成するピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含む共重合体は、合成した粒子の表面に存在する。以下、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含む共重合体を、PVP共重合体と略す。PVP共重合体の分子量は10000以上100000以下が好ましく、40000以上70000以下がなお好適である。分子量が小さいと、粒子表面の親水性が弱く、非特異吸着を起こし易くなる。分子量が大きいと、粒子の表面の親水層が厚くなりすぎて、粒子がゲル化して扱いにくくなる。共重合体は、ビニルピロリドンとアクリル酸との共重合体であることが好ましく、ビニルピロリドンとアクリル酸とのモル比が、2:8〜9:1であることが好ましい。
PVP共重合体に加えて、粒子合成時に保護コロイドとして親水性ポリマーや界面活性剤を添加しても構わない。
本実施形態に係る粒子の粒径及び比重は、夾雑物を除去するために必要な沈降速度によって決めることができる。ある媒質中での沈降速度及び粒径と比重の関係は、ストークスの式によって下記式(1)で表すことができる。
本実施形態に係る粒子の製造方法の一例を説明する。無機物として金属酸化物を使用する場合は、金属アルコキシドなどのラジカル重合性モノマー、ラジカル重合開始剤、並びに、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体を、アルコール系溶媒と混合して乳濁液を調製する工程を有する。なお、ラジカル重合開始剤はなくともよいが、イオン交換水などを添加することができる。アルコール系溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコールなどを使用することができる。無機物としてシリカを使用する場合は、ストーバー法に従って粒子を合成することができる。
このようにして作製した微粒子は、検体検査に用いる前駆体粒子として利用できる。この前駆体粒子にリガンドを結合し夾雑物分離粒子として用いることができる。
本実施形態では、リガンドを結合できる官能基に結合したリガンドを有する夾雑物分離粒子を提供できる。本実施形態における夾雑物分離粒子とは、分離対象夾雑物に対して高い親和性(アフィニティー)を有する。本実施形態において、リガンドとは、特定の物質に特異的に結合する化合物のことである。リガンドと、リガンドと結合する化合物の組み合わせの例としては、抗体と抗原、核酸と相補配列をもつ核酸、アビジン(またはストレプトアビジン、またはニュートラアビジン)とビオチン、各種イムノグロブリンとプロテインA(またはプロテインG)、ヒスチジンタグペプチドと金属イオンを配位したキレート剤、各種タンパク質(タグペプチド含む)とその相互作用物質、酵素タンパク質とその基質、ホルモンや神経伝達物質などのシグナル物質とその受容体などを挙げることができるが、本実施形態におけるリガンドはこれらに限定されない。例えば、分離対象夾雑物をまとめて除去できるのであれば、特異性の高くないリガンドを用いることができる。リガンドとして例えば、抗体、抗原、抗原結合フラグメント(例えば、Fab、F(ab’)2、F(ab’)、Fv、scFvなど)、天然由来核酸、人工核酸、アプタマー、ペプチドアプタマー、オリゴペプチド、酵素又は補酵素などが挙げられる。
本実施形態における体外診断用の検査試薬、すなわち体外診断による検体中の標的物質の検出に用いるための検査試薬は、標的物質を検出することが可能な検査試薬と、夾雑物分離粒子と、これらを分散させる分散媒を有する。本実施形態における試薬中に含有される夾雑物分離粒子の量は、0.001質量%から20質量%が好ましく、0.01質量%から10質量%がより好ましい。本実施形態に係る試薬は、本発明の目的を達成可能な範囲において、夾雑物分離粒子の他に、溶剤やブロッキング剤などの第三物質を含んでもよい。溶剤やブロッキング剤などの第三物質は2種類以上を組み合わせて含んでもよい。第三物質の例としては、ラテックス凝集測定用増感剤であるポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアルギン酸等が挙げられるが、本発明はこれらに限定されない。本実施形態において用いる溶剤の例としては、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、グッド緩衝液、トリス緩衝液、ヘペス緩衝液、アンモニア緩衝液などの各種緩衝液が例示されるが、本実施形態における試薬に含まれる溶剤はこれらに限定されない。
本実施形態における体外診断による検体(検査対象)中の標的物質の検出に用いるための検査キットは、上記検査試薬と、上記試薬を内包する筐体とを有する。本実施形態に係るキットとしては、ラテックス凝集測定用増感剤を含有させてもよい。ラテックス凝集測定用増感剤として、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアルギン酸等が挙げられるが、本発明はこれらに限定されない。また、本実施形態に係るキットは、陽性コントロール、陰性コントロール、血清希釈液等を備えていてもよい。陽性コントロール、陰性コントロールの媒体として、測定しうる標的物質が含まれていない血清、生理食塩水の他、溶剤を用いてもよい。本実施形態に係るキットは、特に、検体中の夾雑物の除去を行うことで非特異凝集を抑制することで、ラテックス凝集法による検体中の標的物質の検出に好適に用いることができる。
本実施形態における体外診断による検体中の標的物質の検出方法は、夾雑物分離粒子と、分離対象夾雑物を含む可能性のある検体とを混合する工程を有する。また、本実施形態に係る夾雑物分離粒子と検体との混合は、pH3.0からpH11.0の範囲で行われることが好ましい。また、混合温度は20℃から50℃の範囲であり、混合時間は1分から20分の範囲である。また、本検出方法は、溶剤を使用することが好ましい。また、本実施形態に係る検出方法における夾雑物分離粒子の濃度は、反応系中、好ましくは0.001質量%から5質量%、より好ましくは0.01質量%から1質量%である。
ただし、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
300mlのフラスコにリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)157g添加し、Poly(N−vinyl pyrrolidone-co-acrylic acid), random(ポリ(N−ビニルピロリドン−ran−アクリル酸))(ポリマーソース社製、分子量60000、ピロリドン環部位の分子量:カルボキシ基部位の分子量の比=4:6)1.3gを溶かした。次に3−メタクリルオキシプロピルトリメトキシシラン(信越化学工業株式会社製 LS−3380)4.0g、スチレン(キシダ化学株式会社製)13.0gを添加し、室温で窒素を吹き込みながら撹拌を15分間行った。その後オイルバスでフラスコ内の乳濁液を70℃に加熱した。ペルオキソ二硫酸カリウム(和光純薬工業株式会社製)0.3gをリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)10mlに溶かした溶液を、上記70℃に加熱した乳濁液中に添加した。70℃のまま7時間撹拌した後、室温に戻しポリマー微粒子の分散液を得た。
300mlのフラスコにリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)157g添加し、Poly(N−vinyl pyrrolidone-co-acrylic acid), random(ポリ(N−ビニルピロリドン−ran−アクリル酸))(ポリマーソース社製、分子量60000、ピロリドン環部位の分子量:カルボキシ基部位の分子量の比=4:6)0.9g、ポリビニルピロリドンK−30(キシダ化学株式会社製、分子量40000)0.4gを溶かした。次に3−メタクリルオキシプロピルトリメトキシシラン(信越化学工業株式会社製 LS−3380)4.0g、スチレン(キシダ化学株式会社製)13.0gを添加し、室温で窒素を吹き込みながら撹拌を15分間行った。その後オイルバスでフラスコ内の乳濁液を70℃に加熱した。ペルオキソ二硫酸カリウム(和光純薬工業株式会社製)0.3gをリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)10mlに溶かした溶液を、上記70℃に加熱した乳濁液中に添加した。70℃のまま7時間撹拌した後、室温に戻しポリマー微粒子の分散液を得た。
300mlのフラスコにリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)157g添加し、Poly(N−vinyl pyrrolidone-co-acrylic acid), random(ポリ(N−ビニルピロリドン−ran−アクリル酸))(ポリマーソース社製、分子量60000、ピロリドン環部位の分子量:カルボキシ基部位の分子量の比=4:6)0.9g、ポリビニルピロリドンK−30(キシダ化学株式会社製、分子量40000)0.4gを溶かした。スチレン(キシダ化学株式会社製)17.0gを添加し、室温で窒素を吹き込みながら撹拌を15分間行った。その後オイルバスでフラスコ内の乳濁液を70℃に加熱した。ペルオキソ二硫酸カリウム(和光純薬工業株式会社製)0.3gをリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)10mlに溶かした溶液を、上記70℃に加熱した乳濁液中に添加した。70℃のまま7時間撹拌した後、室温に戻しポリマー微粒子の分散液を得た。
300mlのフラスコにリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)157g添加し、ポリビニルピロリドンK−30(キシダ化学株式会社製、分子量40000)1.3gを溶かした。スチレン(キシダ化学株式会社製)13.0g、次に3−メタクリルオキシプロピルトリメトキシシラン(信越化学工業株式会社製 LS−3380)4.0g、を添加し、室温で窒素を吹き込みながら撹拌を15分間行った。その後オイルバスでフラスコ内の乳濁液を70℃に加熱した。ペルオキソ二硫酸カリウム(和光純薬工業株式会社製)0.3gをリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)10mlに溶かした溶液を、上記70℃に加熱した乳濁液中に添加した。70℃のまま7時間撹拌した後、室温に戻しポリマー微粒子の分散液を得た。
300mlのフラスコにリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)157g添加し、ポリビニルピロリドンK−30(キシダ化学株式会社製、分子量40000)1.3gを溶かした。スチレン(キシダ化学株式会社製)17.0gを添加し、室温で窒素を吹き込みながら撹拌を15分間行った。その後オイルバスでフラスコ内の乳濁液を70℃に加熱した。ペルオキソ二硫酸カリウム(和光純薬工業株式会社製)0.3gをリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)10mlに溶かした溶液を、上記70℃に加熱した乳濁液中に添加した。70℃のまま7時間撹拌した後、室温に戻しポリマー微粒子の分散液を得た。
300mlのフラスコにリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)157g添加し、ポリビニルピロリドンK−30(キシダ化学株式会社製、分子量40000)1.3gを溶かした。スチレン(キシダ化学株式会社製)13.0g、ライトエステルHO−MS(協栄社化学社製)2.0mLを添加し、室温で窒素を吹き込みながら撹拌を15分間行った。その後オイルバスでフラスコ内の乳濁液を70℃に加熱した。ペルオキソ二硫酸カリウム(和光純薬工業株式会社製)0.3gをリン酸塩緩衝液pH7.4(キシダ化学株式会社製)10mlに溶かした溶液を、上記70℃に加熱した乳濁液中に添加した。70℃のまま7時間撹拌した後、室温に戻しポリマー微粒子の分散液を得た。
IMMUTEX 免疫診断用ポリマー粒子P0113 (JSR株式会社製 粒径187nmのポリスチレン粒子にカルボキシ基を結合したポリマー粒子)を、粒子の濃度を1.0重量%に調製した。
実施例及び比較例4以外の比較例で作製した各ポリマー微粒子分散液に抗PSA抗体を以下の通り結合した。
実施例1〜3及び比較例1〜4で作製した各ポリマー微粒子分散液を30μlに緩衝液で15倍に希釈した人血清溶液60μlを添加し37℃で5分保温した。保温の前後で527nmの吸光度を測定し、前後での吸光度の変化量を3回測定した。表1には3回の平均値を示す。吸光度×10000の値の変化量が1000未満を非特異凝集が抑制されているとし、1000以上を非特異凝集が起こっていると評価した。結果を表1に示す。
実施例ではポリマー微粒子の表面に存在する親水性のPVP共重合体が非特異吸着を抑制する働きを示したと考えられる。
抗体の結合で作製した抗PSA抗体が結合した各ポリマー微粒子分散液を0.1重量%に調製し、ラテックス凝集反応を行った。
固形分/粒子濃度は、加熱乾燥式水分計(MX−50、株式会社エー・アンド・ディー製)を使用して、既知重量の試料の水分を蒸発させることで求めた。
粒径は、ゼータサイザー(Nano−ZS、マルバーン社製)を使用して動的光散乱法によって測定した。
ゼータ電位は、ゼータサイザーを使用して専用セルを用いて測定した。溶媒は純水とした。
自然沈降速度は、LUMISizer(登録商標)(LUM Japan株式会社製)を使用して、遠心分離時の光透過量プロファイルを基に測定した。
110mlのサンプル瓶に、イソプロピルアルコール(キシダ化学株式会社製)50mL、イオン交換水0.0555mlを添加し、オルトケイ酸テトラエチル(東京化成工業株式会社製)6.2ml、及び、ポリビニルピロリドンK−30(キシダ化学株式会社製、分子量40000)0.5gを溶かした。次に、先に調製したサンプル瓶内の混合溶液を撹拌しながら、28%アンモニア水(キシダ化学株式会社製)6.5mlを、ゆっくりと滴下しながら添加した。室温で一晩撹拌し続けた後、この混合溶液を遠心分離器にかけ、微粒子を回収し、上澄みは捨てた。微粒子は、イオン交換水中に再分散した後、再度遠心分離器にかけた。遠心分離器による微粒子の回収と、イオン交換水による再分散を3回繰り返した。このようにして得られた微粒子の分散液を、濃度が10.0重量%となるよう調整した。
真球状シリカ微粒子Silbol−S 240nm(富士化学株式会社製)を、リン酸塩緩衝液で濃度0.25重量%、10mlとなるように調製した。実施例4と同じように、Poly(N−vinyl pyrrolidone−co−acrylic acid), random(ポリ(N−ビニルピロリドン−ran−アクリル酸))を溶かしたリン酸塩緩衝液を、上記微粒子の分散液に添加した。これ以降は実施例4と同じ操作を行い、微粒子分散液を調製した。
実施例4及び5で作製した、Poly(N−vinyl pyrrolidone−co−acrylic acid),random(ポリ(N−ビニルピロリドン−ran−アクリル酸))を添加した後の各微粒子分散液に抗CRP抗体を以下の通り結合した。
夾雑物のモデルとしてCRPを選択した。ヒト血清由来CRP(シグマアルドリッチ社製)を緩衝液で希釈し、波長280nmでの光路長1cmの吸光度が約0.5となるように調製した。このCRPの希釈液と、濃度0.2重量%に調製した上記抗CRP抗体が結合した各微粒子分散液を、体積比1:1の割合で混合した。比較対象として、CRPの希釈液と、微粒子分散液と同じ体積の微粒子を含まない溶液を混合した。室温で1時間撹拌した後に、遠心分離して上清を回収した。上清の波長280nmでの吸光度を測定し、吸光度の変化率を測定した。吸光度の変化率は次の式によって求めた。
{(各微粒子を添加した上清の吸光度)−(微粒子を含まない溶液を添加した上清の吸光度)}÷(微粒子を含まない溶液を添加した上清の吸光度)×100
実施例1のスチレンモノマー(蒸留せずに使用)13.0gを12.8gに、ペルオキソ二硫酸カリウム0.3gを 0.5gにそれぞれ変更した以外は、実施例1と同様にしてポリマー微粒子の分散液を得た。 このポリマー微粒子をシリカ粒子Aと表記する。
シリカ粒子Aの水中の粒子径(直径、動的光散乱法による測定)は、235nmであり、多分散度指数(PDI)は、0.027であった。シリカ粒子Aの分散溶液の電気伝導度測定の結果、シリカ粒子Aの単位重量あたりのカルボキシ基量は、87nmol/mgであった。
シリカ粒子Aの非特異凝集の抑制評価として、アルブミンに対する非特異凝集性を確認した。まず、シリカ粒子Aの水分散液50μLと0.05%、あるいは0.5%ウシ血清アルブミン溶液(リン酸緩衝生理食塩水にウシ血清アルブミンを溶かしたもの)50μLとを混合し、37℃で5分保温した。保温の前後で572nmの吸光度を測定し、前後での吸光度の変化量を測定した。アルブミンに対する非特異凝集が起こる場合は、吸光度の変化量×10000の数値は1000以上になる。
吸光度の変化量×10000の数値を以下に示す。
0.05%アルブミン溶液:40
0.5%アルブミン溶液:130
シリカ粒子Aの非特異凝集の抑制評価として、ヒト血清グロブリン分画に対する非特異凝集性を確認した。まず、グロブリン濃度0.48mg/mLあるいは48mg/mLのグロブリン溶液16μLを、リン酸緩衝液60μLに加え、5分間37℃でインキュベートした。その後、シリカ粒子Aの分散液30μLをこれに加え、37℃で5分保温した。保温の前後で572nmの吸光度を測定し、前後での吸光度の変化量を測定した。ヒト血清グロブリン分画に対する非特異凝集が起こる場合は、吸光度の変化量×10000の数値は1000以上になる。
吸光度の変化量×10000の値を以下に示す。
グロブリン濃度0.48mg/mL:−20
グロブリン濃度48mg/mL:100
シリカ粒子Aの非特異凝集の抑制評価として、ヒト血清フィブリンに対する非特異凝集性を確認した。まず、シリカ粒子Aの水分散液50μLとヒト血清フィブリン溶液(用事調製したもの)50μLとを混合し、37℃で5分保温した。保温後、目視による粒子の凝集を観察した結果、粒子凝集は認められなかった。
実施例6で作製した、シリカ粒子Aに抗CRP抗体を以下の通り結合した。
まず、シリカ粒子Aの分散液を、遠心して微粒子を沈殿させた。上清を除去した後、シリカ粒子Aのペレットを、緩衝液で再分散させ、これに水溶性カルボジイミド(東京化成工業製)を加えた。さらにN−ヒドロキシスクシンイミド(東京化成工業製)を加えた。シリカ粒子Aの分散液を、室温で30分間撹拌した後、遠心分離によって、シリカ粒子Aを回収した。シリカ粒子Aを緩衝液で洗浄した。シリカ粒子Aを緩衝液に再分散させて、抗CRP抗体を粒子1mgあたり抗体200μgとなるように加えた。室温、60分間撹拌した後、遠心分離によって、シリカ粒子Aを回収した。シリカ粒子Aを、緩衝液で十分に洗浄して、抗CRP抗体が結合したシリカ粒子Aを得た。BCAアッセイでタンパク質を定量することで、シリカ粒子Aに抗体が結合していることを確認した。
次に、ラテックス凝集反応の評価を行った。ヒト血清由来CRP標準液と抗体結合シリカ粒子Aの分散液とを混合して、混合前後での波長572nmにおける吸光度を測定した結果、吸光度の上昇が認められた。以上の結果より、抗体が結合したシリカ粒子AのCRPに対する抗原抗体反応性が確認された。シリカ粒子Aは、免疫反応を利用する検査用粒子、たとえばラテックス凝集法で用いられる抗体感作ラテックスとして好適に用いることが出来る。
Claims (34)
- ポリスチレンを含むポリマー粒子であって、
該ポリマー粒子が、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体を含み構成されていることを特徴とする、粒子。 - 前記リガンドを結合できる官能基が、
カルボキシ基、アミノ基、チオール基、エポキシ基、マレイミド基、スクシニミジル基のいずれかであることを特徴とする、請求項1に記載の粒子。 - 前記ランダム共重合体における、前記ピロリドン環を有するユニットと、前記リガンドを結合できる官能基を有するユニットとのモル比が、2:8〜9:1であることを特徴とする、請求項1または2に記載の粒子。
- 前記ランダム共重合体が、ビニルピロリドンとアクリル酸との共重合体であることを特徴とする、請求項1乃至3のいずれか一項に記載の粒子。
- 前記ランダム共重合体における、前記ビニルピロリドンのユニットと前記アクリル酸のユニットとのモル比が、2:8〜9:1であることを特徴とする、請求項4に記載の粒子。
- 前記ランダム共重合体の分子量が10000以上100000以下、であることを特徴とする、請求項1乃至5のいずれか1項に記載の粒子。
- ケイ素化合物を含むことを特徴とする、請求項1乃至6のいずれか1項に記載の粒子。
- 前記粒子は、16μLの血清を混合した60μLの緩衝液に、0.1重量%の前記粒子の分散液30μLを添加し、37℃にて5分間放置した前後での、光路10mmにおける、波長572nmの吸収スペクトルの差が0.1以下であることを特徴とする、請求項1に記載の粒子。
- 少なくとも、スチレンを含むラジカル重合性モノマー、ラジカル重合開始剤、並びに、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体を、水系媒体と混合して乳濁液を調製する第一の工程と、
前記乳濁液を撹拌し、前記ラジカル重合性モノマーを重合する第二の工程と、を有することを特徴とする、粒子の製造方法。 - 請求項1に記載の粒子を分散媒に分散する工程を含む、検査試薬の製造方法。
- 前記検査試薬における前記粒子の平均粒子径が100nm以上400nm以下である、請求項10に記載の検査試薬の製造方法。
- 請求項1に記載の粒子と、前記リガンドを結合できる官能基に結合したリガンドと、を有するアフィニティー粒子。
- 前記リガンドが、抗体、抗原、タンパク質及び核酸のいずれかであることを特徴とする請求項12に記載のアフィニティー粒子。
- 請求項12または13に記載のアフィニティー粒子と、前記アフィニティー粒子を分散させる分散媒と、を有することを特徴とする体外診断用の検査試薬。
- 前記リガンドが抗体または抗原であり、凝集法による検体中の抗原または抗体の検出に用いられる、請求項14に記載の検査試薬。
- 請求項14または15に記載の検査試薬と、前記検査試薬を内包する筐体とを有することを特徴とする体外診断用の検査キット。
- 検体中の標的物質の検出方法であって、
請求項14または15に記載の検査試薬に、検体を混合する工程を有することを特徴とする検出方法。 - 凝集法による検体中の標的物質の検出方法であって、
請求項14または15に記載の検査試薬に、検体を混合して混合液を得る工程と、
前記混合液に、光を照射する工程と、
前記混合液に照射された光の、透過光または散乱光の少なくともいずれかを検出する工程と、
を有することを特徴とする検出方法。 - 無機物を含む粒子であって、該粒子の表面に、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体を含み構成されているか、または、ピロリドン環を有する重合体の第一層と、同一分子内にカルボキシ基、及び、シリコンアルコキシド基またはシラノール基を有する重合体の第二層とを含み構成されていることを特徴とする、粒子。
- 前記リガンドを結合できる官能基がカルボキシ基、アミノ基、チオール基、エポキシ基、マレイミド基、スクシニミジル基から選択される1つ以上であることを特徴とする、請求項19に記載の粒子。
- 前記ランダム共重合体における、前記ピロリドン環を有するユニットと、前記リガンドを結合できる官能基を有するユニットとのモル比が、2:8〜9:1であることを特徴とする、請求項19または20に記載の粒子。
- 前記ランダム共重合体が、ビニルピロリドンとアクリル酸との共重合体であることを特徴とする、請求項19乃至21のいずれか一項に記載の粒子。
- 前記ランダム共重合体における、前記ビニルピロリドンのユニットと前記アクリル酸のユニットとのモル比が、2:8〜9:1であることを特徴とする、請求項22に記載の粒子。
- 前記ランダム共重合体の分子量が10000以上100000以下、であることを特徴とする、請求項19乃至23のいずれか一項に記載の粒子。
- 前記第一層の重合体がポリビニルピロリドンであり、前記第二層の重合体が有機シランを含むラジカル重合性モノマーから合成され、
前記有機シランは、3−トリメトキシシリルプロピルコハク酸無水物、シラン−PEG−カルボン酸、ジエトキシシラン−PEG−カルボン酸、モノエトキシシラン−PEG−カルボン酸、並びに、これらを組み合わせて使用され、
前記PEGの分子量は、600以上70000以下から選択されることを特徴とする、請求項19に記載の粒子。 - 前記無機物が、ケイ素化合物であることを特徴とする、請求項19乃至25のいずれか一項に記載の粒子。
- 前記ケイ素化合物を含有する割合が40重量%以上であることを特徴とする、請求項26に記載の粒子。
- 前記リガンドを結合できる官能基、または、前記カルボキシ基にリガンドが結合していることを特徴とする、請求項19乃至27のいずれか一項に記載の粒子。
- 前記リガンドが抗体、抗原、タンパク質、及び、核酸のいずれかであることを特徴とする請求項28に記載の粒子。
- 前記粒子の水中での自然沈降速度が2.2×10−5cm/sec以上であることを特徴とする、請求項19乃至29のいずれか一項に記載の粒子。
- 少なくとも、金属アルコキシド、ピロリドン環を有するユニットとリガンドを結合できる官能基を有するユニットとを含むランダム共重合体を、溶媒と混合して乳濁液を調製する第一の工程と、
前記乳濁液を撹拌し、モノマーを重合する第二の工程と、を有することを特徴とする、粒子の製造方法。 - 請求項29または30に記載の粒子と、前記粒子を分散させる分散媒と、を少なくとも有することを特徴とする体外診断用の検査試薬。
- 前記検査試薬が夾雑物の分離に用いられることを特徴とする、請求項32に記載の検査試薬。
- 請求項32または33に記載の検査試薬と、請求項14または15に記載の検査試薬と、前記検査試薬を内包する筐体とを有することを特徴とする体外診断用の検査キット。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019153199 | 2019-08-23 | ||
JP2019153199 | 2019-08-23 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021036230A true JP2021036230A (ja) | 2021-03-04 |
Family
ID=74716980
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020133869A Pending JP2021036230A (ja) | 2019-08-23 | 2020-08-06 | 粒子及びその製造方法、アフィニティー粒子、検査試薬、検査キット、並びに検出方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2021036230A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023095865A1 (ja) * | 2021-11-26 | 2023-06-01 | キヤノン株式会社 | 検体検査用粒子 |
-
2020
- 2020-08-06 JP JP2020133869A patent/JP2021036230A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023095865A1 (ja) * | 2021-11-26 | 2023-06-01 | キヤノン株式会社 | 検体検査用粒子 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4665762B2 (ja) | 非特異吸着を抑制した基材表面 | |
FR2749082A1 (fr) | Particules superparamagnetiques et monodispersees | |
WO2019208711A1 (ja) | 粒子、及びその製造方法 | |
US20160216273A1 (en) | Fluorescent labeling particle | |
JP5416039B2 (ja) | 標識試薬シリカナノ粒子 | |
Basinska | Hydrophilic Core‐Shell Microspheres: A Suitable Support for Controlled Attachment of Proteins and Biomedical Diagnostics | |
JP7091128B2 (ja) | 粒子、及びその製造方法 | |
JP5202857B2 (ja) | 分散性が高く、非特異的吸着を防止した複合粒子、複合粒子コロイド、それを用いた分析試薬、及び複合粒子の製造方法 | |
JP2023126848A (ja) | 粒子、粒子の製造方法、アフィニティー粒子、及び、これを含む試薬及びキット、並びに標的物質の検出方法 | |
US20220227984A1 (en) | Particle and method for producing particle | |
JP2021036230A (ja) | 粒子及びその製造方法、アフィニティー粒子、検査試薬、検査キット、並びに検出方法 | |
JP2006266970A (ja) | 免疫診断薬用ポリマー粒子 | |
JP7091129B2 (ja) | 粒子、及びその製造方法 | |
KR101690803B1 (ko) | 항인지질 항체 측정 시약에 사용하는 불용성 담체, 항인지질 항체 측정 시약, 및 항인지질 항체의 측정 방법 | |
JP7360846B2 (ja) | 検体検査用粒子およびその製造方法 | |
JP7393896B6 (ja) | 粒子およびその製造方法 | |
CN114555650B (en) | Granules and method for producing granules | |
JP7499570B2 (ja) | 粒子、およびその製造方法、並びにその粒子を用いた標的物質の検出方法 | |
JP2003277455A (ja) | ポリマー粒子の製造方法、ポリマー粒子および生理活性物質担体 | |
JP7150463B2 (ja) | 粒子、粒子の製造方法、アフィニティー粒子、及び、これを含む検査試薬及び検査キット、並びに標的物質の検出方法 | |
WO2022259989A1 (ja) | 検体検査用偏光発光粒子 | |
JP5048423B2 (ja) | 凝集検査用微粒子 | |
CN118318006A (en) | Particle for sample inspection | |
JP2023168243A (ja) | 偏光異方に基づく測定による解析方法、検査キット及び検査試薬 | |
CN117716228A (zh) | 基于偏振各向异性测量的用于检测和测量目标物质的方法以及用于该方法的颗粒 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7421 Effective date: 20220630 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20230719 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230727 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230719 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20240311 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240430 |