JP2020536524A5

JP2020536524A5 -

Info

Publication number: JP2020536524A5
Application number: JP2020518080A
Authority: JP
Filing date: 2018-09-28
Publication date: 2021-11-04

Claims

クリックライゲーション反応で第一の分子を第二の分子に結合するための方法において、第一の分子が、アルキン基である第一のクリック官能基を含み、かつ第二の分子が、アジド基である第二のクリック官能基を含み、前記方法が、触媒の存在下で反応混合物中で第一の分子と第二の分子との接触を含む方法であって、クリック反応が反応混合物中で追加のＭｇ ²⁺金属カチオンの存在下で実施されることを特徴とする、前記方法。
前記金属カチオンが、１〜２００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは５〜２５ｍｍｏｌ／ｌ、及び最も好ましくは１０〜２０ｍｍｏｌ／ｌの量でクリック反応混合物中に含まれる、請求項１に記載の方法。
前記クリック反応混合物が、有機溶媒、好ましくはＤＭＳＯ、及び／又は好ましくはトリス（３−ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ）、２−（４−（（ビス（（１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）酢酸（ＢＴＴＡＡ）、トリス（（１−ベンジル−４−トリアゾリル）メチル）アミン（ＴＢＴＡ）、２−（４−（（ビス（（１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１Ｈ−１，２，３，−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾリル−１−イル）エチルスルフェート（ＢＴＴＥＳ）又はそれらの類似体、特に他の三座型のポリトリアゾールの少なくとも１つから選択される、Ｃｕ安定化リガンドを含む、請求項１又は２に記載の方法。
前記有機溶媒が、２〜１０％（ｖ／ｖ）、好ましくは４〜６％（ｖ／ｖ）の量でクリック反応混合物中に含まれ、及び／又はＣｕ（Ｉ）−安定化リガンドが、１０〜４０００μｍｏｌ／ｌ、好ましくは５００〜１０００μｍｏｌ／ｌの量でクリック反応混合物中に含まれる、請求項３に記載の方法。
前記触媒が、Ｃｕ触媒、好ましくは不均一Ｃｕ触媒である、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
前記第一の分子及び前記第二の分子の少なくとも１つが、生体分子、好ましくはヌクレオシド、ヌクレオチド、核酸、アミノ酸、ペプチド、糖及び脂質から選択される生体分子であり、かつ特に好ましくは第一の分子と第二の分子の双方がオリゴヌクレオチドである、請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。
前記第一の分子及び前記第二の分子の少なくとも１つが、検出可能な標識を有する、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法。
クリックライゲーション反応において使用するためのアクチベーター組成物であって、アルキン基である第一のクリック官能基を含む第一の分子とアジド基である第二のクリック官能基を含む第二の分子とが、触媒、好ましくは不均一Ｃｕ触媒の存在下で結合され、アクチベーター混合物が、追加のＭｇ ²⁺金属カチオン及びさらに有機溶媒及び／又はＣｕ安定化リガンドを含む、前記アクチベーター組成物。
前記Ｃｕ安定化リガンドが、トリス（３−ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ）、２−（４−（（ビス（（１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）酢酸（ＢＴＴＡＡ）、トリス（（１−ベンジル−４−トリアゾリル）メチル）アミン（ＴＢＴＡ）、２−（４−（（ビス（（１−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１Ｈ−１，２，３，−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾリル−１−イル）エチルスルフェート（ＢＴＴＥＳ）又はそれらの類似体、特に他の三座型のポリトリアゾールの少なくとも１つから選択され、及び／又は有機溶媒が、ＤＭＳＯである、請求項８に記載のアクチベーター組成物。
前記Ｍｇ ²⁺金属カチオンを１〜２００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは５〜２５ｍｍｏｌ／ｌの量で、及び／又は前記有機溶媒を２〜１０％（ｖ／ｖ）、好ましくは４〜６％（ｖ／ｖ）の量で、及び／又は前記Ｃｕ安定化リガンドを１０〜４０００μｍｏｌ／ｌ、好ましくは５００〜１０００μｍｏｌ／ｌの量で含む、請求項８又は９に記載のアクチベーター組成物。
第一の成分として不均一Ｃｕ触媒を、及び第二の成分として請求項８から１０までのいずれか１項に記載のアクチベーター組成物を含む、クリックライゲーション試薬キット。
アルキン基である第一のクリック官能基を含む第一の分子、アジド基である第二のクリック官能基を含む第二の分子、緩衝液、溶媒、酵素、修飾及び／又は非修飾ヌクレオチド、５’末端に二本鎖ループを任意に含む（インデックス）プライマー及び／又はアダプター、並びに任意にクロマトグラフィー材料からなる群から好ましくは選択されるクリック反応の１種以上のさらなる成分を含む、請求項１１に記載のクリックライゲーション試薬キット。
第一の分子を第二の分子に結合するためのクリックライゲーション反応のための不均一Ｃｕ触媒を含む少なくとも１つの反応チャンバーを有する装置であって、第一の分子がアルキン基である第一のクリック官能基、第二の分子がアジド基である第二のクリック官能基、及び任意にさらに固体キャリア材料を含み、少なくとも装置の１つの反応チャンバーにおいて金属カチオン又は請求項８から１０までのいずれか１項記載のアクチベーター組成物が存在する、前記装置。
ＲＮＡ又はＤＮＡ増幅、ＲＮＡ又はＤＮＡ標識方法及びＲＮＡ又はＤＮＡシーケンシング方法から選択される後続反応を任意にさらに含む、クリック反応産物を提供するための、請求項１から７までのいずれか１項に記載の方法、請求項８から１０までのいずれか１項に記載のアクチベーター組成物、請求項１１又は１２に記載のクリックライゲーション試薬キット、又は請求項１３に記載の装置の使用。