JP2020536512A - タンパク性ヘテロ二量体及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
第1の単量体成員と、該第1の単量体成員とは異なる第2の単量体成員とを含むタンパク性ヘテロ二量体であって、
前記第1の単量体成員は、第1のFcサブユニットを含み、
前記第2の単量体成員は、第2のFcサブユニットを含み、
前記第1の単量体成員は、前記第2の単量体成員と会合して、前記第1のFcサブユニットと前記第2のFcサブユニットとの複合体形成により前記ヘテロ二量体を形成し、
前記タンパク性ヘテロ二量体は、前記第1のFcサブユニット及び/又は前記第2のFcサブユニットに融合した1個以上のインターロイキンを更に含み、
前記タンパク性ヘテロ二量体は、腫瘍抗原に対して結合特異性を示すいずれの抗体重鎖可変領域又は抗体軽鎖可変領域も含まない、
タンパク性ヘテロ二量体を提供する。
1)第1の修飾:Y349及びT366、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びF405;
2)第1の修飾:Y349、T366、及びF405、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、及びY407;
3)第1の修飾:Y349、T366、及びK409、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びF405;
4)第1の修飾:Y349、T366、F405、K360、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びQ347;
5)第1の修飾:Y349、T366、F405、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、K360、及びQ347;
6)第1の修飾:Y349、T366、K409、K360、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、F405、及びQ347;
7)第1の修飾:Y349、T366、K409、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、F405、K360、及びQ347;
8)第1の修飾:T366、K409、及びK392、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、D399、及びF405;
9)第1の修飾:T366及びK409、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、及びF405;
10)第1の修飾:T366、K409、及びY349、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、F405、及びE357;
11)第1の修飾:T366、K409、Y349、及びS354、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、F405、及びE357;
12)第1の修飾:T366及びF405、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、及びK409;
13)第1の修飾:T366、F405、及びD399、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びK392;
14)第1の修飾:T366、F405、及びY349、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びE357;
15)第1の修飾:T366、F405、Y349、及びS354、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びE357;
の群のいずれかから選択される位置群にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置は、KABAT番号のEUインデックスに従って決定される。
1)本開示のいずれか1つによるタンパク性ヘテロ二量体と、
2)本開示のいずれか1つによる前記第1の単量体成員の2個の同一のコピーによって形成される第1のホモ二量体と、
3)本開示のいずれか1つによる前記第2の単量体成員の2個の同一のコピーによって形成される第2のホモ二量体と、
を含み、
前記タンパク質混合物中の前記タンパク性ヘテロ二量体のパーセンテージが、少なくとも50%である、タンパク質混合物を提供する。
(i)タンパク性ヘテロ二量体の発現を達成する条件下で本開示の宿主細胞を培養することと、
(ii)発現されたタンパク性ヘテロ二量体又は該タンパク性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物を採取すること
とを含む、本開示のいずれか1つによるタンパク性ヘテロ二量体の作製方法を提供する。
本明細書に記載の全ての刊行物、特許及び特許出願は、それぞれ個々の刊行物、特許、又は特許出願が具体的に及び個々に引用することにより本明細書の一部をなすことが示された場合と同じ程度において引用することにより本明細書の一部をなす。
一態様において、本開示は、タンパク性ヘテロ二量体を提供する。タンパク性ヘテロ二量体は、第1の単量体成員と、第1の単量体成員とは異なる第2の単量体成員とを含み得る。第1の単量体成員は、第1のFcサブユニットを含み得る。第2の単量体成員は、第2のFcサブユニットを含み得る。第1の単量体成員は、第2の単量体成員と会合し、第1のFcサブユニットと第2のFcサブユニットとの複合体形成を介してヘテロ二量体を形成し得る。
1)Y349及びT366;
2)Y349、T366、及びF405;
3)Y349、T366、及びK409;
4)Y349、T366、F405、K360、及びQ347;
5)Y349、T366、F405、及びQ347;
6)Y349、T366、K409、K360、及びQ347;
7)Y349、T366、K409、及びQ347;
8)T366、K409、及びK392;
9)T366及びK409;
10)T366、K409、Y349、及びS354;
11)T366及びF405;
12)T366、F405、及びD399;並びに
13)T366、F405、Y349、及びS354
の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置は、KABAT番号のEUインデックスに従って決定される。
1)Y349C及びT366W;
2)Y349C、T366W、及びF405K;
3)Y349C、T366W、及びK409E;
4)Y349C、T366W、及びK409A;
5)Y349C、T366W、F405K、K360E、及びQ347E;
6)Y349C、T366W、F405K、及びQ347R;
7)Y349C、T366W、K409A、K360E、及びQ347E;
8)Y349C、T366W、K409A、及びQ347R;
9)T366W、K409A、及びK392D;
10)T366W及びK409A;
11)T366W、K409A、及びY349D;
12)T366W、K409A、Y349D、及びS354D;
13)T366W及びF405K;
14)T366W、F405K、及びD399S;
15)T366W、F405K、及びY349D;並びに
16)T366W、F405K、Y349D、及びS354D
の群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置は、KABAT番号のEUインデックスに従って決定される。
1)D356、T366、L368、Y407、及びF405;
2)D356、T366、L368、及びY407;
3)D356、T366、L368、Y407、及びQ347;
4)D356、T366、L368、Y407、K360、及びQ347;
5)D356、T366、L368、Y407、F405、及びQ347;
6)D356、T366、L368、Y407、F405、K360、及びQ347;
7)T366、L368、Y407、D399、及びF405;
8)T366、L368、Y407、及びF405;
9)T366、L368、Y407、F405、及びE357;
10)T366、L368、Y407、及びK409;
11)T366、L368、Y407、K409、及びK392;並びに
12)T366、L368、Y407、K409、及びE357
の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置は、KABAT番号のEUインデックスに従って決定される。
1)D356C、T366S、L368A、Y407V、及びF405K;
2)D356C、T366S、L368A、及びY407V;
3)D356C、T366S、L368A、Y407V、及びQ347R;
4)D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E、及びQ347E;
5)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、及びQ347R;
6)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E、及びQ347E;
7)T366S、L368A、Y407V、D399S、及びF405K;
8)T366S、L368G、Y407A、及びF405K;
9)T366S、L368A、Y407V、F405K、及びE357A;
10)T366S、L368A、Y407V、及びK409A;
11)T366S、L368A、Y407V、K409A、及びK392D;
12)T366S、L368G、Y407A、及びK409A;
13)T366S、L368A、Y407V、K409A、及びE357Aの群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置は、KABAT番号のEUインデックスに従って決定される。
第1のFcサブユニットは、第1の修飾を含み、
第2のFcサブユニットは、第2の修飾を含み、
第1の修飾及び第2の修飾は、
1)第1の修飾:Y349及びT366、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びF405;
2)第1の修飾:Y349、T366、及びF405、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、及びY407;
3)第1の修飾:Y349、T366、及びK409、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びF405;
4)第1の修飾:Y349、T366、F405、K360、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びQ347;
5)第1の修飾:Y349、T366、F405、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、K360、及びQ347;
6)第1の修飾:Y349、T366、K409、K360、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、F405、及びQ347;
7)第1の修飾:Y349、T366、K409、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、F405、K360、及びQ347;
8)第1の修飾:T366、K409、及びK392、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、D399、及びF405;
9)第1の修飾:T366及びK409、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、及びF405;
10)第1の修飾:T366、K409、及びY349、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、F405、及びE357;
11)第1の修飾:T366、K409、Y349、及びS354、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、F405、及びE357;
12)第1の修飾:T366及びF405並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、及びK409;
13)第1の修飾:T366、F405、及びD399、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びK392;
14)第1の修飾:T366、F405、及びY349、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びE357;
15)第1の修飾:T366、F405、Y349、及びS354、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びE357
の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置は、KABAT番号のEUインデックスに従って決定される。
第1のFcサブユニットは、第1の修飾を含み、
第2のFcサブユニットは、第2の修飾を含み、
第1の修飾及び第2の修飾は、
1)第1の修飾:Y349C及びT366W、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、及びF405K;
2)第1の修飾:Y349C、T366W、及びF405K、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、及びY407V;
3)第1の修飾:Y349C、T366W、及びK409E、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、及びF405K;
4)第1の修飾:Y349C、T366W、及びK409A、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、及びF405K;
5)第1の修飾:Y349C、T366W、F405K、K360E、及びQ347E、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、及びQ347R;
6)第1の修飾:Y349C、T366W、F405K、及びQ347R、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E、及びQ347E;
7)第1の修飾:Y349C、T366W、K409A、K360E、及びQ347E、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、及びQ347R;
8)第1の修飾:Y349C、T366W、K409A、及びQ347R、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E、及びQ347E;
9)第1の修飾:T366W、K409A、及びK392D、並びに、
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、D399S、及びF405K;
10)第1の修飾:T366W及びK409A、並びに
第2の修飾:T366S、L368G、Y407A、及びF405K;
11)第1の修飾:T366W、K409A、及びY349D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、F405K、及びE357A;
12)第1の修飾:T366W、K409A、Y349D、及びS354D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、F405K、及びE357A;
13)第1の修飾:T366W及びF405K、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、及びK409A;
14)第1の修飾:T366W、F405K、及びD399S、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、K409A、及びK392D;
15)第1の修飾:T366W及びF405K、並びに
第2の修飾:T366S、L368G、Y407A、及びK409A;
16)第1の修飾:T366W、F405K、及びY349D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、K409A、及びE357A;
17)第1の修飾:T366W、F405K、Y349D、及びS354D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、K409A、及びE357A
の群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置は、KABAT番号のEUインデックスに従って決定される。
1)本開示によるタンパク性ヘテロ二量体、
2)本開示によるタンパク性ヘテロ二量体の第1の単量体成員の2つの同一のコピーにより形成される第1のホモ二量体、及び
3)本開示によるタンパク性ヘテロ二量体の第2の単量体成員の2つの同一コピーにより形成される第2のホモ二量体を含み得る。
タンパク質混合物中のタンパク性ヘテロ二量体のパーセンテージは、少なくとも約50%、少なくとも約55%、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、又は少なくとも約99%であり得る。
或る点において、本開示は、本開示によるタンパク性ヘテロ二量体又は本開示によるタンパク質混合物と、任意に薬学的に許容可能な添加剤とを含む医薬組成物を提供する。
(i)或る量の本開示のタンパク性ヘテロ二量体(例えば、ヘテロ二量体タンパク質)又はタンパク質混合物と、任意に
(ii)或る量の第2の作用物質と、
(iii)経口投与に好適な医薬添加剤とを含有する経口投与用の固体医薬組成物を提供する。
幾つかの実施形態において、組成物は、
(iv)或る量の第3の作用物質を更に含有する。幾つかの実施形態において、タンパク性ヘテロ二量体又はタンパク質混合物、第2の作用物質及び任意の第3の作用物質の量は、単独又は組合せで被験体の病態の治療に効果的な量である。
或る点において、本開示は、腫瘍又は腫瘍細胞の成長を阻害するための薬剤及び/又はキットの製造における、本開示によるタンパク性ヘテロ二量体、又は本開示によるタンパク質混合物の使用を提供する。幾つかの実施形態において、薬剤及び/又はキットは、標的細胞(例えば、癌細胞)の成長若しくは分化を特異的及び/又は優先的に阻害するか、又は標的細胞(例えば、癌細胞)を死滅させるために使用される。
或る点において、本開示は、本開示によるタンパク性ヘテロ二量体又は本開示によるタンパク質混合物を作製する方法を提供する。この方法は、
(i)タンパク性ヘテロ二量体の発現を達成する条件下で本開示の宿主細胞を培養することと、
(ii)発現されたタンパク性ヘテロ二量体又は該タンパク性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物を採取すること
とを含み得る。
前記第1の単量体成員が第1のFcサブユニットを含み、
前記第2の単量体成員が第2のFcサブユニットを含み、
前記第1の単量体成員が前記第2の単量体成員と会合して、前記第1のFcサブユニットと前記第2のFcサブユニットとの複合体形成により前記ヘテロ二量体を形成し、
前記タンパク性ヘテロ二量体が前記第1のFcサブユニット及び/又は前記第2のFcサブユニットに融合した1個以上のインターロイキンを更に含み、
前記タンパク性ヘテロ二量体が腫瘍抗原に対して結合特異性を示すいずれの抗体重鎖可変領域又は抗体軽鎖可変領域も含まない、
タンパク性ヘテロ二量体。
1)Y349及びT366;
2)Y349、T366、及びF405;
3)Y349、T366、及びK409;
4)Y349、T366、F405、K360、及びQ347;
5)Y349、T366、F405、及びQ347;
6)Y349、T366、K409、K360、及びQ347;
7)Y349、T366、K409、及びQ347;
8)T366、K409、及びK392;
9)T366及びK409;
10)T366、K409、Y349、及びS354;
11)T366及びF405;
12)T366、F405、及びD399;並びに
13)T366、F405、Y349、及びS354
の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がKABAT番号のEUインデックスに従って決定される、実施形態15〜18のいずれか1つに記載のタンパク性ヘテロ二量体。
1)Y349C及びT366W;
2)Y349C、T366W、及びF405K;
3)Y349C、T366W、及びK409E;
4)Y349C、T366W、及びK409A;
5)Y349C、T366W、F405K、K360E、及びQ347E;
6)Y349C、T366W、F405K、及びQ347R;
7)Y349C、T366W、K409A、K360E、及びQ347E;
8)Y349C、T366W、K409A、及びQ347R;
9)T366W、K409A、及びK392D;
10)T366W及びK409A;
11)T366W、K409A、及びY349D;
12)T366W、K409A、Y349D、及びS354D;
13)T366W及びF405K;
14)T366W、F405K、及びD399S;
15)T366W、F405K、及びY349D;並びに
16)T366W、F405K、Y349D、及びS354D
の群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置がKABAT番号のEUインデックスに従って決定される、実施形態15〜19のいずれか1つに記載のタンパク性ヘテロ二量体。
1)D356、T366、L368、Y407及びF405;
2)D356、T366、L368、及びY407;
3)D356、T366、L368、Y407、及びQ347;
4)D356、T366、L368、Y407、K360、及びQ347;
5)D356、T366、L368、Y407、F405、及びQ347;
6)D356、T366、L368、Y407、F405、K360、及びQ347;
7)T366、L368、Y407、D399、及びF405;
8)T366、L368、Y407、及びF405;
9)T366、L368、Y407、F405、及びE357;
10)T366、L368、Y407、及びK409;
11)T366、L368、Y407、K409、及びK392;並びに
12)T366、L368、Y407、K409、及びE357
の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がKABAT番号のEUインデックスに従って決定される、実施形態15〜23のいずれか1つに記載のタンパク性ヘテロ二量体。
1)D356C、T366S、L368A、Y407V、及びF405K;
2)D356C、T366S、L368A、及びY407V;
3)D356C、T366S、L368A、Y407V、及びQ347R;
4)D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E、及びQ347E;
5)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、及びQ347R;
6)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E、及びQ347E;
7)T366S、L368A、Y407V、D399S、及びF405K;
8)T366S、L368G、Y407A、及びF405K;
9)T366S、L368A、Y407V、F405K、及びE357A;
10)T366S、L368A、Y407V、及びK409A;
11)T366S、L368A、Y407V、K409A、及びK392D;
12)T366S、L368G、Y407A、及びK409A;
13)T366S、L368A、Y407V、K409A、及びE357A
の群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置がKABAT番号のEUインデックスに従って決定される、実施形態15〜24のいずれか1つに記載のタンパク性ヘテロ二量体。
前記第2のFcサブユニットが第2の修飾を含み、
前記第1の修飾及び前記第2の修飾が
1)第1の修飾:Y349及びT366、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びF405;
2)第1の修飾:Y349、T366、及びF405、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、及びY407;
3)第1の修飾:Y349、T366、及びK409、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びF405;
4)第1の修飾:Y349、T366、F405、K360、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びQ347;
5)第1の修飾:Y349、T366、F405、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、K360、及びQ347;
6)第1の修飾:Y349、T366、K409、K360、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、F405、及びQ347;
7)第1の修飾:Y349、T366、K409、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、F405、K360、及びQ347;
8)第1の修飾:T366、K409、及びK392、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、D399、及びF405;
9)第1の修飾:T366及びK409、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、及びF405;
10)第1の修飾:T366、K409、及びY349、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、F405、及びE357;
11)第1の修飾:T366、K409、Y349、及びS354、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、F405、及びE357;
12)第1の修飾:T366及びF405、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、及びK409;
13)第1の修飾:T366、F405、及びD399、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びK392;
14)第1の修飾:T366、F405、及びY349、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びE357;
15)第1の修飾:T366、F405、Y349、及びS354、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びE357;
の群のいずれかから選択される位置群にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がKABAT番号のEUインデックスに従って決定される、実施形態15〜25のいずれか1つに記載のタンパク性ヘテロ二量体。
上記第2のFcサブユニットが第2の修飾を含み、
該第1の修飾及び第2の修飾が
1)第1の修飾:Y349C及びT366W、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、及びF405K;
2)第1の修飾:Y349C、T366W、及びF405K、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、及びY407V;
3)第1の修飾:Y349C、T366W、及びK409E、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y40V、及びF405K;
4)第1の修飾:Y349C、T366W、及びK409A、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、及びF405K;
5)第1の修飾:Y349C、T366W、F405K、K360E、及びQ347E、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、及びQ347R;
6)第1の修飾:Y349C、T366W、F405K、及びQ347R、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E、及びQ347E;
7)第1の修飾:Y349C、T366W、K409A、K360E、及びQ347E、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、F405、K及びQ347R;
8)第1の修飾:Y349C、T366W、K409A、及びQ347R、並びに
第2の修飾:D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E、及びQ347E;
9)第1の修飾:T366W、K409A、及びK392D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、D399S、及びF405K;
10)第1の修飾:T366W及びK409A、並びに
第2の修飾:T366S、L368G、Y407A、及びF405K;
11)第1の修飾:T366W、K409A、及びY349D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、F405K、及びE357A;
12)第1の修飾:T366W、K409A、Y349D、及びS354D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、F405K、及びE357A;
13)第1の修飾:T366W及びF405K、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、及びK409A;
14)第1の修飾:T366W、F405K、及びD399S、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、K409A、及びK392D;
15)第1の修飾:T366W及びF405K、並びに
第2の修飾:T366S、L368G、Y407A、及びK409A;
16)第1の修飾:T366W、F405K、及びY349D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、K409A、及びE357A;
17)第1の修飾:T366W、F405K、Y349D、及びS354D、並びに
第2の修飾:T366S、L368A、Y407V、K409A、及びE357A
の群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置がKABAT番号のEUインデックスに従って決定される、実施形態15〜26のいずれか1つに記載のタンパク性ヘテロ二量体。
上記第2のFcサブユニットが第2の修飾を含み、
該第1の修飾がアミノ酸置換T366W及びK409Aを含み、該第2の修飾がアミノ酸置換T366S、L368G、Y407A、及びF405Kを含み、該アミノ酸の位置が、KABAT番号のEUインデックスに従って決定される、実施形態27に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
1)実施形態1〜38のいずれか1個に記載のタンパク性ヘテロ二量体と、
2)実施形態1〜38のいずれか1個に記載の前記第1の単量体成員の2つの同一のコピーによって形成される第1のホモ二量体と、
3)実施形態1〜38のいずれか1個に記載の前記第2の単量体成員の2つの同一のコピーによって形成される第2のホモ二量体と、
を含み、前記タンパク質混合物中の前記タンパク性ヘテロ二量体のパーセンテージが、少なくとも50%である、タンパク質混合物。
(ii)発現されたタンパク性ヘテロ二量体又は該タンパク性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物を採取すること
とを含む、実施形態1〜38のいずれか1つに記載のタンパク性ヘテロ二量体又は実施形態42〜46のいずれか1つに記載のタンパク質混合物を作製する方法。
1.1 Fcの修飾
ヒトIgG1 Fcドメインの界面残基にアミノ酸修飾(アミノ酸置換等)を行い、以下の群の修飾(以下の表1に示す)を得て、本開示において、鎖Aは、Fc9又は第1のFcサブユニットとも称され、鎖Bは、Fc6又は第2のFcサブユニットとも称される:
まず、ヒトインターロイキン10(IL10)(P22301)の配列情報を国立生物工学情報センター(NCBI)から入手し、それをコードする完全長ポリヌクレオチド配列を入手した。次いで、ヒトIgG1−Fcのアミノ酸配列(すなわち、P01857の残基104〜残基330)を、タンパク質データベースUniprotによるヒト免疫グロブリンγ1(IgG1)定常領域(P01857)のアミノ酸配列に従って得た。その後、点突然変異(T366S、L368G、Y407A、及びF405K)をIgG1−Fcフラグメントに導入した。それにより得られたポリペプチドは、Fc6と称される。次いで、リンカー配列「(GGGGS)3」(配列番号37)をFc6のN末端に付加して、リンカー−Fc6を得た。次いで、それをコードする対応するDNA配列を、オンラインツールDNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて設計した。次いで、リンカー配列「(GGGGS)3」(配列番号37)をIL10の2つのコピーの間に付加し、(IL10)2を得た。次いで、(IL10)2をコードするポリヌクレオチド配列を、リンカー−Fc6をコードするポリヌクレオチド配列の5’末端に付加し、それにより融合タンパク質(IL10)2−Fc6をコードするポリヌクレオチド配列を得て、合成した。(IL10)2−Fc6のアミノ酸配列は、配列番号38に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号39に規定される。
まず、ヒトインターロイキン10(IL10)(P22301)の配列情報を国立生物工学情報センター(NCBI)から入手し、それをコードする完全長ポリヌクレオチド配列を入手した。次いで、ヒトIgG1−Fcのアミノ酸配列(すなわち、P01857の残基104〜残基330)を、タンパク質データベースUniprotによるヒト免疫グロブリンγ1(IgG1)定常領域(P01857)のアミノ酸配列に従って得た。次いで、リンカー配列「(GGGGS)3」(配列番号37)をIgG1−FcのN末端に付加し、リンカー−Fcを得た。次いで、それをコードする対応するDNA配列を、オンラインツールDNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて設計した。IL10をコードするポリヌクレオチド配列を、リンカー−Fcをコードするポリヌクレオチド配列の5’末端に付加し、それにより融合タンパク質IL10−Fcをコードするポリヌクレオチド配列を得て、合成した。IL10−Fcのアミノ酸配列は、配列番号40に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号41に規定される。
ヒトIgG1−Fcのアミノ酸配列(すなわち、P01857の残基104〜残基330)を、タンパク質データベースUniprotによるヒト免疫グロブリンγ1(IgG1)定常領域(P01857)のアミノ酸配列に従って得た。その後、点突然変異(T366W及びK409A)をIgG1Fcフラグメントに導入した。それにより得られるポリペプチドは、Fc9と称される。Fc9のアミノ酸配列は、配列番号17に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号42に規定される。
セツキシマブの重鎖及び軽鎖の完全長アミノ酸配列(上皮増殖因子受容体EGFRに対する抗体である、アービタックス(Erbitux)すなわちErb)を得て、これらのアミノ酸配列をコードする対応するDNA配列をオンラインツールDNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて得た。次いで、セツキシマブの軽鎖(Erb−LC)をコードする核酸分子を合成した。Erb−LCのアミノ酸配列は、配列番号43に規定され、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号44に規定される。次いで、点突然変異(T366W及びK409A)をセツキシマブ重鎖遺伝子のFc領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾セツキシマブ重鎖をコードする核酸分子を合成し(本明細書において、erb−Fc9と称する)、それをコードする対応するペプチドをErb−Fc9と命名した。Erb−Fc9のアミノ酸配列は、配列番号45に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号46に規定される。
まず、ヒトインターロイキン10(IL10)(P22301)の配列情報を国立生物工学情報センター(NCBI)から入手した。次いで、リンカー配列「(GGGGS)3」を2つのIL10の間に付加して、(IL10)2及びそれをコードする完全長ポリヌクレオチド配列を得た。次いで、ヒトIgG1−Fcのアミノ酸配列(すなわち、P01857の残基104〜残基330)を、タンパク質データベースUniprotによるヒト免疫グロブリンγ1(IgG1)定常領域(P01857)のアミノ酸配列に従って得た。次いで、リンカー配列「(GGGGS)3」(配列番号37)をIgG1−FcのN末端に付加し、リンカー−Fcを得た。次いで、それをコードする対応するDNA配列を、オンラインツールDNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて設計した。(IL10)2をコードするポリヌクレオチド配列を、リンカー−Fcをコードするポリヌクレオチド配列の5’末端に付加することにより、融合タンパク質(IL10)2−Fcをコードするポリヌクレオチド配列を得て、合成した。(IL10)2−Fcのアミノ酸配列は、配列番号47に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号48に規定される。
まず、ヒトインターロイキン10(IL10)(P22301)の配列情報を国立生物工学情報センター(NCBI)から入手し、それをコードする完全長ポリヌクレオチド配列を得た。次いで、ヒトIgG1−Fc(すなわち、P01857の残基104〜残基330)のアミノ酸配列を、タンパク質データベースUniprotによるヒト免疫グロブリンγ1(IgG1)定常領域(P01857)のアミノ酸配列に従って得た。その後、点突然変異(T366S、L368G、Y407A、及びF405K)をIgG1−Fcフラグメントに導入した。それにより得られるポリペプチドは、Fc6と称される。
まず、ヒトインターロイキン10(IL10)(P22301)の配列情報を国立生物工学情報センター(NCBI)から入手し、それをコードする完全長ポリヌクレオチド配列を得た。次いで、ヒトIgG1−Fc(すなわち、P01857の残基104〜残基330)のアミノ酸配列を、タンパク質データベースUniprotによるヒト免疫グロブリンγ1(IgG1)定常領域(P01857)のアミノ酸配列に従って得た。その後、点突然変異(T366S、L368G、Y407A、及びF405K)をIgG1−Fcフラグメントに導入し、それにより得られたポリペプチドをFc6と称する。次いで、リンカー配列「(GGGGS)3」(配列番号37)をFc6のN末端に付加し、リンカー−Fc6を得た。次いで、それをコードする対応するDNA配列を、オンラインツールDNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて設計した。IL10をコードするポリヌクレオチド配列を、リンカー−Fc6をコードするポリヌクレオチド配列の5’末端に付加し、それにより融合タンパク質IL10−Fc6をコードするポリヌクレオチド配列を得て、合成した。IL10−Fc6のアミノ酸配列は、配列番号53に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号54に規定される。
まず、ヒトインターロイキン10(IL10)(P22301)の配列情報を国立生物工学情報センター(NCBI)から入手し、それをコードする完全長ポリヌクレオチド配列を得た。次いで、(すなわち、P01857の残基104〜残基330)を、タンパク質データベースUniprotによるヒト免疫グロブリンγ1(IgG1)定常領域(P01857)のアミノ酸配列に従って得た。その後、点突然変異(T366W及びK409A)をIgG1Fcフラグメントに導入した。それにより得られたポリペプチドをFc9と称する。次いで、リンカー配列「(GGGGS)3」(配列番号37)をFc9のN末端に付加し、リンカー−Fc9を得た。次いで、それコードする対応するDNA配列を、オンラインツールDNAworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて設計した。次いで、リンカー配列「(GGGGS)3」(配列番号37)をIL10の2つのコピーの間に付加し、(IL10)2を得た。次いで、(IL10)2をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Fc9をコードするポリヌクレオチド配列の5’末端に付加し、それにより融合タンパク質(IL10)2−Fc9をコードするポリヌクレオチド配列を得て、合成した。(IL10)2−Fc9のアミノ酸配列は、配列番号57に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号58に規定される。
ヒトIgG1−Fcのアミノ酸配列(すなわち、P01857の残基104〜残基330)を、タンパク質データベースUniprotからのヒト免疫グロブリンγ1(IgG1)定常領域(P01857)のアミノ酸配列に従って取得した。その後、点突然変異(T366S、L368G、Y407A、及びF405K)をIgG1Fcフラグメントに導入し、それにより得られたポリペプチドをFc6と呼ぶ。Fc6のアミノ酸配列は、配列番号18に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号59に規定される。
実施例1に従って得られた核酸分子((IL10)2−Fc6、IL10−Fc、Fc9、Erb−Fc9、Erb−LC、(IL10)2−Fc、Fc6−(IL10)2、IL10−Fc6、(IL10)2−Fc9、及びFc6をコードする)をHindIII及びEcoRI(Takara)で消化し、次いでベクターpcDNA4/myc−HisA(Invitrogen、V863−20)にそれぞれサブクローニングした。得られたプラスミドを配列決定によって検証し、正しい組換えプラスミドをそれぞれ、次のように命名した:pcDNA4−(IL10)2−Fc6、pcDNA4−IL10−Fc、pcDNA4−Fc9、pcDNA4−Erb−Fc9、pcDNA4−Erb−LC、pcDNA4−(IL10)2−Fc、pcDNA4−Fc6−(IL10)2、pcDNA4−IL10−Fc6、pcDNA4−(IL10)2−Fc9、及びpcDNA4−Fc6。
トランスフェクションの2日前に、12×600mLの順化(domesticated)HEK293(ATCC、CRL−1573(商標))細胞の懸濁液を一過性トランスフェクションのために調製し、細胞を0.8×106細胞/mlの密度で播種した。2日後に、3つの細胞懸濁液のアリコートを遠心分離した後、600mLのFreestyle293培養培地に再懸濁した。
群A:pcDNA4−IL10−Fc6(200μg)+pcDNA4−Fc9(200μg);
群B:pcDNA4−(IL10)2−Fc6(200μg)+pcDNA4−Fc9(200μg);
群C:pcDNA4−FC6−(IL10)2(200μg)+pcDNA4−Fc9(200μg);
群D:pcDNA4−(IL10)2−Fc9(200μg)+pcDNA4−Fc6(200μg);
群E:pcDNA4−Erb−Fc9(200μg)+pcDNA4−Erb−LC(200μg)+pcDNA4−(IL10)2−Fc6(200μg);
群F:pcDNA4−IL10−Fc(200μg);
群G:pcDNA4−(IL10)2−Fc(200μg)。
4.1 ヒトIL10R1タンパク質への結合能の検出(ELISA)
ヒトIL10R1(R&D、9100−R1−050)をコーティングバッファー(50mM Na2CO3、NaHCO3 pH9.6)で5μg/mLに希釈し、100μL/ウェルで4℃にて一晩。洗浄後、3%BSA−PBSを用いて37℃にて1時間プレートを密封した。次いで、全てのサンプルをそれぞれ10000ng/mLから希釈して、対照としての希釈液(1%BSA−PBS)で3倍希釈して合計11の濃度にし、37℃で2時間インキュベートした。洗浄後、ヤギ抗hIgG−HRP(Sigma、A0170)を添加し、37℃で1時間インキュベートした。可溶性一成分TMB基質発色液を添加し、室温で5分間〜10分間暗所で発色を行った。50μL/ウェルで2N H2SO4を添加して、発色反応を停止した。OD450nm値をMD SpectraMax Plus 384マイクロプレートリーダーで読み取り、SoftMax Pro v5.4を使用してデータ処理及びダイアグラフ(diagraph)分析を行った。結果を図3及び表6に示す。
MC/9(ATCC CRL−8306)細胞を100μL/ウェルで96ウェルプレートに蒔いた。MC/9の量は、5×104/ウェルであった。全てのサンプルを最大濃度2×104pMに希釈した。次いで、サンプルを4倍に希釈して、100μL/ウェルで合計9つの濃度にした。対照群として、100μLのDMEM培地を添加した。各サンプルは、二連で行った。次いで、5%CO2にて37℃で2日間インキュベートする。次いで、上清の140μL/ウェルを捨て、60μL/ウェルのCellTiter−Glo Cell Activity Assay Agent(Promega G7571)を添加する。暗所にてオービタルシェーカーで15分間(100rpm)インキュベートする。次いで、上清の100μL/ウェルを新たな96ウェルの白色プレートに移し、MD Spectra Max Plus 384マイクロプレートリーダーで全波長の発光を測定し、結果を図4に示す。
5.1 動物及び細胞培養
雌性C57BL/6マウスを、8週齢で中国科学院の実験動物センター(中国、上海)から入手し、特定の病原体を含まない条件下で飼育した。全ての動物を地元の倫理委員会に従って使用した。この研究は、医療実験動物の管理及び使用のためのガイド(1998年、中華人民共和国衛生部)の推奨事項によって承認された。B16F10黒色腫細胞株を社内で作製し、10%(体積/体積)ウシ胎児血清(FBS)、100単位/mlペニシリン、及び100μg/mlストレプトマイシン(Gibco Invitrogen)を添加したDMEM培地で成長させた。
B16F10細胞(5×106)をマウスの脇腹に皮下(s.c.)接種し、約7日間成長させた。腫瘍体積を2つの垂直直径(長さ及び幅)で記録し、V=ab2/2として計算し、式中、a及びbは、それぞれ最長及び最短の直径である。7日後、腫瘍体積は、およそ70mm3と測定された。
B16F10細胞の移植の7日後、(IL10)2−Fc9又はアイソタイプ(hIgG)をそれぞれ0.5mg/kg及び2.5mg/kgの投与量で腹腔内(i.p.)又は腫瘍内(i.t.)に注射した。投薬を週に2回、合計3回行った。腫瘍サイズを週に2回測定し、腫瘍体積を計算して腫瘍成長の曲線を得た。結果を図5A及び図5Bに示す。図5Aでは、水平軸は、B16F10細胞の移植後の日数であり、垂直軸は、腫瘍の平均体積であり、(IL10)2−Fc9は、i.p.又はi.t.投与した場合にin vivoで腫瘍体積を効果的に減少させたのに対し、対照アイソタイプは、減少できなかったことがわかる。図5Bは、異なる投与量での(IL10)2−Fc9(i.p.及びi.t.)の治療による22日目の腫瘍体積を示す。腫瘍サイズの測定を5回繰り返した。(IL10)2−Fc9は、種々の用量のi.p.及びi.t.投与を行った場合、in vivoでの腫瘍体積を減少させたことがわかる。
6.1 本開示による(IL10) 2 −Fc9の効果(高濃度)
C57BL/6腫瘍制御モデルを実施例5で上述した通りに得た。マウスを1群当たり5匹のマウスを含む2群に分けた:アイソタイプ対照群、0.65mg/kgのヒトIgG1で治療;(IL10)2−Fc9群、0.65mg/kg(IL10)2−Fc9で治療。0日目に、C57BL/6マウスにB16F10−EGFR5細胞をs.c.接種し、7日目、10日目、14日目に(IL10)2−Fc9又はヒトIgG1をそれぞれi.p.注射した。
C57BL/6腫瘍制御モデルを実施例5で上述した通りに得た。マウスを、1群当たり5匹のマウスを含む2群に分けた:アイソタイプ対照群、0.5mg/kgのヒトIgG1で治療;(IL10)2−Fc9群、0.13mg/kgの(IL10)2−Fc9で治療。0日目に、C57BL/6マウスにB16F10−EGFR5細胞をs.c.接種し、7日目、10日目、14日目に(IL10)2−Fc9又はヒトIgG1をそれぞれi.p.注射した。
1)本開示によるタンパク性ヘテロ二量体、
2)本開示によるタンパク性ヘテロ二量体の第1の単量体成員の2つの同一のコピーにより形成される第1のホモ二量体、及び
3)本開示によるタンパク性ヘテロ二量体の第2の単量体成員の2つの同一コピーにより形成される第2のホモ二量体を含み得る。
タンパク質混合物中のタンパク性ヘテロ二量体のパーセンテージは、少なくとも約50%、少なくとも約55%、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、又は少なくとも約99%であり得る。
一態様では、本開示は、本開示によるタンパク性ヘテロ二量体又は本開示によるタンパク質混合物と、任意に薬学的に許容可能な添加剤とを含む医薬組成物を提供する。
一態様では、本開示は、腫瘍又は腫瘍細胞の成長を阻害するための薬剤及び/又はキットの製造における、本開示によるタンパク性ヘテロ二量体、又は本開示によるタンパク質混合物の使用を提する。幾つかの実施形態において、薬剤及び/又はキットは、標的細胞(例えば、癌細胞)の成長若しくは分化を特異的及び/又は優先的に阻害するか、又は標的細胞(例えば、癌細胞)を死滅させるために使用される。
一態様では、本開示は、本開示によるタンパク性ヘテロ二量体又は本開示によるタンパク質混合物を作製する方法を提供する。この方法は、
(i)タンパク性ヘテロ二量体の発現を達成する条件下で本開示の宿主細胞を培養することと、
(ii)発現されたタンパク性ヘテロ二量体又は該タンパク性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物を採取すること
とを含み得る。
4.1 ヒトIL10R1タンパク質への結合能の検出(ELISA)
ヒトIL10R1(R&D、9100−R1−050)をコーティングバッファー(50mM Na2CO3、NaHCO3 pH9.6)で5μg/mLに希釈し、100μL/ウェルで4℃にて一晩インキュベートした。洗浄後、3%BSA−PBSを用いて37℃にて1時間プレートを密封した。次いで、全てのサンプルをそれぞれ10000ng/mLから希釈して、対照としての希釈液(1%BSA−PBS)で3倍希釈して合計11の濃度にし、37℃で2時間インキュベートした。洗浄後、ヤギ抗hIgG−HRP(Sigma、A0170)を添加し、37℃で1時間インキュベートした。可溶性一成分TMB基質発色液を添加し、室温で5分間〜10分間暗所で発色を行った。50μL/ウェルで2N H2SO4を添加して、発色反応を停止した。OD450nm値をMD SpectraMax Plus 384マイクロプレートリーダーで読み取り、SoftMax Pro v5.4を使用してデータ処理及びダイアグラフ(diagraph)分析を行った。結果を図3及び表6に示す。
Claims (25)
- 第1の単量体成員と、該第1の単量体成員とは異なる第2の単量体成員とを含むタンパク性ヘテロ二量体であって、
前記第1の単量体成員が第1のFcサブユニットを含み、
前記第2の単量体成員が第2のFcサブユニットを含み、
前記第1の単量体成員が前記第2の単量体成員と会合して、前記第1のFcサブユニットと前記第2のFcサブユニットとの複合体形成により前記ヘテロ二量体を形成し、
前記タンパク性ヘテロ二量体は、前記第1のFcサブユニット及び/又は前記第2のFcサブユニットに融合した1個以上のインターロイキンを更に含み、
前記タンパク性ヘテロ二量体は、腫瘍抗原に対して結合特異性を示すいずれの抗体重鎖可変領域又は抗体軽鎖可変領域も含まない、
タンパク性ヘテロ二量体。 - 前記1個以上のインターロイキンが前記第1のFcサブユニット及び/又は前記第2のFcサブユニットのアミノ末端アミノ酸及び/又はカルボキシ末端アミノ酸に融合している、請求項1に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 2個以上のインターロイキンを含み、該2個以上のインターロイキンが1個以上のインターロイキン二量体を形成し、各インターロイキン二量体が互いに融合した2個のインターロイキンを含む、請求項2に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記1個以上のインターロイキンの少なくとも1個がIL10である、請求項1〜3のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記1個以上のインターロイキン二量体が少なくとも1個のIL10二量体を含み、該IL10二量体が2個のIL10を含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第1のFcサブユニット及び/又は前記第2のFcサブユニットがIgG分子に由来する、請求項1〜5のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記IgGがヒトIgG1である、請求項6に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第1のFcサブユニットが前記第2のFcサブユニットと異なり、前記第1のFcサブユニット及び/又は前記第2のFcサブユニットが前記第1のFcサブユニットと前記第2のFcサブユニットとの間のヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第1のFcサブユニットが第1の修飾を含み、前記第2のFcサブユニットが第2の修飾を含み、前記第1の修飾及び前記第2の修飾が、
1)第1の修飾:Y349及びT366、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びF405;
2)第1の修飾:Y349、T366、及びF405、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、及びY407;
3)第1の修飾:Y349、T366、及びK409、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びF405;
4)第1の修飾:Y349、T366、F405、K360、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、及びQ347;
5)第1の修飾:Y349、T366、F405、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、K360。及びQ347;
6)第1の修飾:Y349、T366、K409、K360、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、F405、及びQ347;
7)第1の修飾:Y349、T366、K409、及びQ347、並びに
第2の修飾:D356、T366、L368、Y407、F405、K360、及びQ347;
8)第1の修飾:T366、K409、及びK392、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、D399、及びF405;
9)第1の修飾:T366及びK409、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、及びF405;
10)第1の修飾:T366、K409、及びY349、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、F405、及びE357;
11)第1の修飾:T366、K409、Y349、及びS354、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、F405、及びE357;
12)第1の修飾:T366及びF405、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、及びK409;
13)第1の修飾:T366、F405、及びD399、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びK392;
14)第1の修飾:T366、F405、及びY349、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びE357;
15)第1の修飾:T366、F405、Y349、及びS354、並びに
第2の修飾:T366、L368、Y407、K409、及びE357;
の群のいずれかから選択される位置群にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がKABAT番号のEUインデックスに従って決定される、請求項8に記載のタンパク性ヘテロ二量体。 - 前記1個以上のインターロイキンの少なくとも1個が前記第2のFcサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合している、請求項1〜9のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第2の単量体成員において、前記1個以上のインターロイキンの少なくとも2個が互いに融合してインターロイキン二量体を形成し、該インターロイキン二量体が前記第2のFcサブユニットのアミノ末端アミノ酸に更に融合している、請求項10に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第2の単量体成員において、前記1個以上のインターロイキンの少なくとも2個が互いに融合してインターロイキン二量体を形成し、該インターロイキン二量体が前記第2のFcサブユニットのカルボキシル末端アミノ酸に更に融合している、請求項1〜9のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第1の単量体成員がいずれのインターロイキンも含まない、請求項1〜12のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第1の単量体成員が前記第1のFcサブユニットからなる、請求項1〜13のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記1個以上のインターロイキンの少なくとも1個が、前記第1のFcサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合している、請求項1〜12のいずれか1項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第1の単量体成員において、前記1個以上のインターロイキンの少なくとも2個が互いに融合してインターロイキン二量体を形成し、該インターロイキン二量体が前記第1のFcサブユニットのアミノ末端アミノ酸に更に融合している、請求項15に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第2の単量体成員がいずれのインターロイキンも含まない、請求項15又は16に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 前記第2の単量体成員が前記第2のFcサブユニットからなる、請求項15〜17のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体。
- 請求項1〜18のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体をコードする単離された核酸。
- 請求項19に記載の単離された核酸を含むベクター。
- 請求項19に記載の単離された核酸又は請求項20に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
- タンパク質混合物であって、
1)請求項1〜18のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体と、
2)請求項1〜18のいずれか一項に記載の前記第1の単量体成員の2個の同一のコピーによって形成される第1のホモ二量体と、
3)請求項1〜18のいずれか一項に記載の前記第2の単量体成員の2個の同一のコピーによって形成される第2のホモ二量体と、
を含み、
前記タンパク質混合物中の前記タンパク性ヘテロ二量体のパーセンテージが少なくとも50%である、タンパク質混合物。 - 請求項1〜18のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体又は請求項22に記載のタンパク質混合物と、任意に薬学的に許容可能な添加剤とを含む医薬組成物。
- 腫瘍若しくは腫瘍細胞の成長を阻害するための及び/又は治療を必要とする被験体において癌を治療するための薬剤及び/又はキットの製造における、請求項1〜18のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体又は請求項22に記載のタンパク質混合物の使用。
- (i)タンパク性ヘテロ二量体の発現を達成する条件下で請求項21に記載の宿主細胞を培養することと、
(ii)発現されたタンパク性ヘテロ二量体又は該タンパク性ヘテロ二量体を含むタンパク質混合物を採取すること
とを含む、請求項1〜18のいずれか一項に記載のタンパク性ヘテロ二量体の作製方法。
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