JP2020520903A - がん治療における化学療法剤と組み合わせた抗ｆｇｆｒ２抗体 - Google Patents

がん治療における化学療法剤と組み合わせた抗ｆｇｆｒ２抗体 Download PDF

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Abstract

本出願は、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法と組み合わせた特定のがんの治療における、線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）に対する抗体、例えば、ＦＧＦＲ２アイソフォームＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ（ＦＧＦＲ２ｂとしても知られる）に対する抗体の使用に関する。【選択図】図１

Description

本出願は、２０１７年５月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／５０７，０５３号、及び２０１７年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６２／５８１，９９２号の優先権の利益を主張するものであり、当該出願は、その全体が参照により援用される。
本出願は、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法と組み合わせた特定のがんの治療における、線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）に対する抗体、例えば、ＦＧＦＲ２アイソフォームＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ（ＦＧＦＲ２ｂとしても知られる）に対する抗体の使用に関する。
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーメンバーは、チロシンキナーゼ受容体である既知の４つの線維芽細胞増殖因子受容体１〜４（ＦＧＦＲ１〜４）及びそのアイソフォームに結合し、個々のＦＧＦは、異なるＦＧＦＲに様々な程度で結合する（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：１５６９４，２００６）。ヒトＦＧＦＲ２のタンパク質配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ｌｏｃｕｓ ＡＦ４８７５５３に提供されている。各ＦＧＦＲは、３つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン（Ｄ１、Ｄ２及びＤ３）を含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、１回膜貫通ヘリックス、及び細胞内触媒キナーゼドメインからなる（Ｍｏｈａｍｍａｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｓ，１６：１０７，２００５）。ＦＧＦは、主に受容体のＤ２及びＤ３における領域を介して受容体に結合する。Ｄ１とＤ２との間のリンカーには、酸性アミノ酸が連続している領域があり、「アシッドボックス」（ＡＢ）と呼ばれる。Ｄ１及びＡＢを含有する領域は、受容体の自己抑制に関与すると考えられており、これは、リガンドへの結合によって緩和される。
ＦＧＦＲは、そのｍＲＮＡの選択的スプライシングが複数あることにより、様々なアイソフォームが生じることを特徴とする（Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１５２９２，１９９６；ＦＧＦＲ２及びそのアイソフォームの配列については、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ Ｐ２１８０２及びアイソフォームＰ２１８０２−１〜Ｐ２１８０２−２０も参照されたい）。とりわけ、３つ全てのＩｇドメインを含有する型（αアイソフォーム）、またはＤ１を除くＤ２及びＤ３ドメインの２つのＩｇドメインのみを含有する型（βアイソフォーム）がある。ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２及びＦＧＦＲ３において、全ての型が、ＩＩＩａと示されるＤ３の前半部分を含有するが、Ｄ３の後半部分については２つの選択的エクソンが使用され得ることから、ＩＩＩｂ及びＩＩＩｃの型が生じる。ＦＧＦＲ２について、これらの型は、それぞれＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ（または、単にＦＧＦＲ２ｂ及びＦＧＦＲ２ｃ）と示され、対応するベータ型は、ＦＧＦＲ２（ベータ）ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２（ベータ）ＩＩＩｃと示される。ＦＧＦＲ２のＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ型（Ｋ−ｓａｍ−ＩＩとも示される）は、ＦＧＦ１及びＫＧＦファミリーメンバー（ＦＧＦ７、ＦＧＦ１０及びＦＧＦ２２）の両方に対して高親和性の受容体であるが、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ（Ｋ−ｓａｍ−Ｉとも示される）は、ＦＧＦ１及びＦＧＦ２の両方によく結合するものの、ＫＧＦファミリーメンバーには結合しない（Ｍｉｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：２４６，１９９２）。実際に、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＫＧＦファミリーメンバーに対する唯一の受容体であり（Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９６，ｏｐ．ｃｉｔ．）、そのため、ＫＧＦＲとも示される。
ＦＧＦＲ及びそのアイソフォームは、様々な組織で異なる発現をする。ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ（ならびにＦＧＦＲ１及びＦＧＦＲ３のＩＩＩｂ型）は、上皮組織に発現するが、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃは、間葉組織に発現する（Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６０７６，１９９２；Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９６，ｏｐ．ｃｉｔ．）。これらの受容体のＦＧＦリガンドのいくつかは、反対の発現パターンを有する。このように、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ１０及びＦＧＦ２２を含むＫＧＦサブファミリーメンバーは、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂにのみ結合し（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｏｐ．ｃｉｔ．）、間葉組織に発現することから、上皮細胞のパラクリンエフェクターであり得る（Ｏｒｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９６，ｏｐ．ｃｉｔ．）。対照的に、ＦＧＦ４サブファミリーメンバーＦＧＦ４〜６は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに結合し、上皮系及び間葉系の両方で発現することから、オートクリン機能またはパラクリン機能のいずれかを有し得る。ＦＧＦＲ２のアイソフォーム及びそのリガンドの発現パターンから、ＦＧＦＲ２は、上皮間葉相互作用に関与しており（Ｆｉｎｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２０３：２２３，１９９５）、そのため、マウスにおけるＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのノックアウトが胚異常及び致死をもたらすことは驚くことではない（Ｄｅ Ｍｏｅｒｌｏｏｚｅ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２７：４８３，２０００）。
ＫＧＦ（ＦＧＦ７）及びＫＧＦＲ（ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ）は、多くの膵癌において過剰発現しており（Ｉｓｈｉｗａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５３：２１３，１９９８）、その共発現は、予後不良と相関している（Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７０：１９６４，２００７）。ＦＧＦＲ２遺伝子の体細胞変異は、子宮内膜（子宮）癌の大規模パネルのうち１２％で認められ、いくつかの試験症例では、腫瘍細胞の生存に必要であった（Ｄｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：８７１３，２００８）。２つの腫瘍において、ＦＧＦＲ２変異は、アペール症候群に関連する、同じＳ２５２Ｗ置換であることが判明した。ＦＧＦＲ２の増幅及び過剰発現は、特に予後の悪い未分化型びまん性胃癌と関係し、小分子化合物によるＦＧＦＲ２活性の阻害は、かかるがん細胞の増殖を強く阻害した（Ｋｕｎｉｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：２３４０，２００８；Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１３１：１５３０，２００６）。
ＦＧＦＲシグナル伝達の阻害は、抗腫瘍免疫を改善し、乳癌の転移を減じることが報告されている（例えば、Ｔ．Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．１４３：４３５−４４６（２０１４）参照）。抗ＦＧＦＲ２抗体はまた、例えば、胃癌のモデルでも試験されている。具体的な抗ＦＧＦＲ２抗体は、例えば、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載されており、これには、ヒトＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合するが、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃにはあまり結合しないか、結合しないモノクローナル抗体及びその逆のモノクローナル抗体が含まれる。米国特許出願公開第２０１５−００５０２７３Ａ１号は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する特定のアフコシル化抗体について記載している。
本開示は、例えば、対象の胃癌などの消化管癌を治療する方法であって、その対象に、治療上有効な量の抗線維芽細胞増殖因子受容体２（抗ＦＧＦＲ２）及び修正版ＦＯＬＦＯＸ６（ｍＦＯＬＦＯＸ６）化学療法を投与することを含む、方法を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、次の特性のうちの１つ以上を有する：ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに対するよりも高い親和性でＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合すること、またはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合しないこと、ヒトＦＧＦＲ２に対するＦＧＦ２の結合を阻害すること、ヒトＦＧＦＲ２に対するＦＧＦ７の結合を阻害すること、マウス腫瘍モデルにおいて、ヒト腫瘍の成長を阻害すること、ＡＤＣＣ活性を誘導すること、増強されたＡＤＣＣ活性を有すること、アフコシル化されていること、ならびにマウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍組織中のＰＤ−Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びマクロファージのうちの１つ以上の数を対照と比較して増加させることが可能であること。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖超可変領域Ｈ１（ＨＶＲ−Ｈ１）、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖超可変領域Ｌ１（ＨＶＲ−Ｌ１）、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖可変ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の軽鎖は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択される。
本明細書における方法のいくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、次の特性のうちの１つ以上を有する：位置Ａｓｎ２９７のフコースを欠いていること、κ軽鎖定常領域を含むこと、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含むこと、位置Ａｓｎ２９７がフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、増強されたＡＤＣＣ活性を有すること、位置Ａｓｎ２９７がフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有すること、ならびにマウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍組織中のＰＤ−Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びマクロファージのうちの１つ以上の数を対照と比較して増加させることが可能であること。
本明細書における方法のいくつかの実施形態において、対象は、局所進行性、切除不能または転移性である胃癌を有する。いくつかの実施形態において、胃癌は、胃食道癌である。
本明細書における方法のいくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、６〜１５ｍｇ／ｋｇ、１０〜１５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１０〜２１日ごとに１回、１０〜１５日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、１４日ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、１８日ごとに１回、１９日ごとに１回、２０日ごとに１回、または２１日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１４日ごとに１回投与される。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、次の投与レジメンで投与される：（ａ）６〜１５ｍｇ／ｋｇの用量で、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が１４日ごとに１回投与される；（ｂ）６ｍｇ／ｋｇの用量で、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が１４日ごとに１回投与される；（ｃ）１０ｍｇ／ｋｇの用量で、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が１４日ごとに１回投与される；または（ｄ）１５ｍｇ／ｋｇの用量で、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が１４日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態において、（ａ）抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、６〜１５ｍｇ／ｋｇ、１０〜１５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇの用量で、１１〜１７日ごとに１回、１２〜１６日ごとに１回、１３〜１５日ごとに１回、または１４日ごとに１回投与され、（ｂ）３〜８ｍｇ／ｋｇ、５〜８ｍｇ／ｋｇ、７〜８ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、または８ｍｇ／ｋｇの少なくとも１回の中間用量が、（ａ）の２回の投与の間に投与され、（ｂ）の用量は、（ａ）の用量よりも少ない。いくつかの実施形態において、（ｉ）（ａ）の用量は、１３〜１５日ごとに１０〜１５ｍｇ／ｋｇであり、（ｉｉ）（ａ）の用量は、１３〜１５日ごとに１５ｍｇ／ｋｇであり、（ｉｉｉ）（ｂ）の用量は、５〜８ｍｇ／ｋｇであり、（ａ）の少なくとも１回の投与から６〜８日後及び（ａ）の後続の投与の６〜８日前に投与され、（ｉｖ）（ａ）の用量は、１３〜１５日ごとに１０〜１５ｍｇ／ｋｇであり、（ｂ）の用量は、７〜８ｍｇ／ｋｇであり、（ａ）の少なくとも１回の投与から６〜８日後及び（ａ）の後続の投与の６〜８日前に投与され、（ｖ）（ａ）の用量は、１４日ごとに１５ｍｇ／ｋｇであり、（ｂ）の用量は、７〜８ｍｇ／ｋｇであり、（ａ）の少なくとも１回の投与から７日後及び（ａ）の後続の投与の７日前に投与され、（ｖｉ）（ａ）の用量は、１４日ごとに１５ｍｇ／ｋｇであり、（ｂ）の用量は、７．５ｍｇ／ｋｇであり、（ａ）の少なくとも１回の投与から７日後及び（ａ）の後続の投与の７日前に投与され、及び／または（ｖｉｉ）（ｂ）の用量は、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれかの（ａ）の用量の１回目の投与後に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１５ｍｇ／ｋｇの用量で１４日ごとに１回投与され、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から６〜８日後に、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が７．５ｍｇ／ｋｇの用量で更に投与される。いくつかのそのような実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１５ｍｇ／ｋｇの用量で１４日ごとに１回投与され、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から７日後に、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が７．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかのそのような実施形態において、７．５ｍｇ／ｋｇの用量は、１回のみ、すなわち、１５ｍｇ／ｋｇの１回目の投与と２回目の投与との間に投与される。
本明細書における方法のいくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の静脈内（ＩＶ）注入またはＩＶボーラスによる投与を含む。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の静脈内（ＩＶ）注入またはＩＶボーラスによる投与に続いて、４４〜４８時間にわたる２４００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵのＩＶ注入による投与を含む。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、１０〜２１日ごとに１回、１０〜１５日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、１４日ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、１８日ごとに１回、１９日ごとに１回、２０日ごとに１回、または２１日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、１４日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の静脈内（ＩＶ）注入またはＩＶボーラスによる投与に続いて、４４〜４８時間にわたる２４００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵのＩＶ注入による投与を含み、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、１４日ごとに１回投与される。
本明細書における方法のいくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、同時投与または逐次投与される。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６の１回以上の投与は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与前に投与される。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６の２回の投与は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与前に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩＢ抗体は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と同じ日及びｍＦＯＬＦＯＸ６の投与前に投与される。
いくつかの実施形態において、胃癌は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現することが予め決定されており、及び／または胃癌は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有することが予め決定されている。いくつかの実施形態において、方法は、胃癌がＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現しているかどうかを決定すること、及び／または胃癌がＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有するかどうかを決定することを更に含む。いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ過剰発現は、免疫組織化学染色（ＩＨＣ）によるタンパク質レベルで決定される。いくつかの実施形態において、過剰発現は、腫瘍細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％における３＋のＩＨＣシグナルによって予め決定されているか、または決定される。いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅は、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用してＦＧＦＲ２と染色体１０セントロメア（ＣＥＮ１０）の比を得ることによって予め決定されているか、または決定され、ここで、ＦＧＦＲ２遺伝子は、ＦＩＳＨによって決定されるＦＧＦＲ２／ＣＥＮ１０比が２以上であるとき、増幅しているとみなされる。いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２増幅は、循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）で予め検出されているか、または検出される。
本開示のいくつかの実施形態は、対象の局所進行性、切除不能または転移性胃癌を治療する方法であって、対象に、治療上有効な量の抗線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｂ（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ）抗体及び修正版ＦＯＬＦＯＸ６（ｍＦＯＬＦＯＸ６）化学療法を投与することを含み、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、
軽鎖可変領域は、
（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１０〜１５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与され、続いて、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）のＩＶ注入またはＩＶボーラスによる投与に続いて、４４〜４８時間にわたる２４００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵのＩＶ注入による投与を含むｍＦＯＬＦＯＸ６が投与され、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、２週間ごとに投与される、方法を包含する。本開示のいくつかの実施形態は、対象の局所進行性、切除不能または転移性胃癌を治療する方法であって、対象に、治療上有効な量の抗線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｂ（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ）抗体及び修正版ＦＯＬＦＯＸ６（ｍＦＯＬＦＯＸ６）化学療法を投与することを含み、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、
軽鎖可変領域は、
（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、１３〜１５日ごとに投与され、任意選択により、３〜８ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の単回用量が、６〜１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から６〜８日後及び６〜１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の２回目の投与から６〜８日前に投与される、方法を包含する。いくつかのそのような実施形態において、（ａ）抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与され、（ｂ）抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、１４日ごとに同じ日に投与され、（ｃ）７．５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の単回用量は、１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から７日後及び１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の２回目の投与から７日前に投与される。
本明細書のいくつかの実施形態において、胃癌は、腫瘍細胞の少なくとも１０％における３＋のＩＨＣシグナルによって示されるように、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現していることが予め決定されており、及び／または胃癌は、ｃｔＤＮＡにおけるＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有することが予め決定されている。いくつかのそのような実施形態において、対象は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与の前にｍＦＯＬＦＯＸ６の２回の投与を受けている。
本開示はまた、例えば、上記方法のいずれかに従って、患者の胃癌などの消化管癌を治療することにおける使用のための、本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と、オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのそれぞれとを含む、組成物を包含する。いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と、オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのうちの少なくとも１つとの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と、オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのうちの少なくとも１つとは、別個の容器または区画にある。いくつかのそのような実施形態において、組成物は、抗体と、オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのそれぞれとの組み合わせを、別個の容器または区画に含む。いくつかの実施形態において、組成物は、消化管癌、例えば、胃癌の治療における使用のための説明書を更に含む。
本明細書における方法または組成物のいくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載されるモノクローナル抗体ＧＡＬ−ＦＲ２１、ＧＡＬ−ＦＲ２２、またはＧＡＬ−ＦＲ２３の重鎖及び軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、軽鎖可変領域は、（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号５のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号２のアミノ酸配列を含む、重鎖を有する。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号３のアミノ酸配列を含む、軽鎖を有する。いくつかの実施形態において、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号１５のアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号１９のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメインを有する。いくつかの実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号１５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠いている。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、カッパ軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７がフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏで、増強されたＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）活性を有する。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体は、位置Ａｓｎ２９７がフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体は、マウス異種移植及び／または同種移植腫瘍モデルにおいて、腫瘍組織中のＰＤ−Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びマクロファージのうちの１つ以上の数を対照と比較して（例えば、ＦＧＦＲ２を標的にしない対照抗体と比較して）増加させることが可能である。
前述の一般的な説明及び以下の詳細な説明は、いずれも、例示及び説明を与えるものであり、特許請求の範囲を限定するものではないことを理解されたい。本明細書で使用されるセクション見出しは、単に構成上のためであり、記載される主題を限定するものと解釈されるものではない。本明細書で引用される全ての参考文献は、特許出願及び特許公報を含め、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に援用される。
以下の実施例１に記載される臨床試験の用量漸増パートＩの投与スケジュールを示す。初回コホートは、用量レベル１であり、追加の登録は、以下の表２に記載される用量制限毒性（ＤＬＴ）の存在についての解析に従い、図に示されるように、用量レベル１、２、または−１である。 以下の実施例１に記載される臨床試験のパートＩのために実施される患者評価を示すフローチャートである。 実施例２に記載される臨床試験の用量漸増（第１相）の投与スケジュールを示す。初回コホートは、コホート１及び２であり、必要に応じて、コホート３が開始され、更に必要に応じて、コホート４（図示せず）も開始する。更なる詳細については、以下の実施例２に記載される。
定義
別途の定義がない限り、本発明に関連して使用される科学技術用語は、当該技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。更に、文脈により別途の規定がない限り、単数形の用語は複数を包含し、複数形の用語は単数を包含するものとする。
組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応、ならびに精製技術に関連して使用される例示的な技術は、当該技術分野において知られている。そのような技術及び手順の多くは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））他に記載されている。加えて、化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤化及び送達、ならびに患者の治療についての例示的な技術もまた、当該技術分野において知られている。
本願において、「または」の使用は、別段の指示がない限り、「及び／または」を意味する。複数の従属項の文脈において、「または」の使用は、２つ以上の先行する独立項または従属項を択一的に言及するものである。また、「要素」または「成分」などの用語は、特に明記しない限り、１つのユニットを含む要素及び成分、ならびに２つ以上のサブユニットを含む要素及び成分の両方を包含する。
本開示に従って使用されるとき、以下の用語は、特に指定のない限り、以下の意味を有するものと理解されるものとする。
「核酸分子」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、区別なく使用され得、ヌクレオチドの高分子化合物を指す。そのようなヌクレオチドの高分子化合物は、天然及び／または非天然ヌクレオチドを含有し得、これらには、限定するものではないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びＰＮＡが含まれる。「核酸配列」は、核酸分子またはポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの線状配列を指す。
「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基の高分子化合物を指すために本明細書において区別なく使用され、最小の長さに限定されない。そのようなアミノ酸残基の高分子化合物は、天然または非天然アミノ酸残基を含有し得、これらには、限定するものではないが、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体及び多量体が含まれる。完全長タンパク質及びその断片は、いずれも、この定義に包含される。この用語はまた、ポリペプチドの発現後の修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化などを含む。更に、本発明上、「ポリペプチド」は、そのタンパク質が所望の活性を保持する限り、天然配列に対して欠失、付加及び置換（一般に天然では保存的置換）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異導入のように意図的なものであってもよいし、タンパク質を産生する宿主による変異またはＰＣＲ増幅によるエラーなどの偶発的なものであってもよい。
「ＦＧＦＲ２」は、ヒト線維芽細胞増殖因子受容体２を指し、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ及びＩＩＩｃスプライシングフォームなどの、その選択的スプライシングフォームのいずれも含む。ＦＧＦＲ２という用語は、野生型ＦＧＦＲ２及び天然に生じる変異型、例えば、いくつかのがん細胞で認められているＦＧＦＲ２−Ｓ２５２ＷなどのＦＧＦＲ２活性化変異型を包含する。「ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ」または「ＦＧＦＲ２ｂ」は、ヒト線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｂスプライシングフォームを指すために、本明細書において区別なく使用される。例示的なヒトＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ配列は、２０１３年７月７日付のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０７５２５９．４に示される。非限定的な例示的成熟ヒトＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂアミノ酸配列は、配列番号１に示される。「ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ」または「ＦＧＦＲ２ｃ」は、ヒト線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｃスプライシングフォームを指すために、本明細書において区別なく使用される。例示的なヒトＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ配列は、２０１３年７月７日付のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０００１３２．３に示される。非限定的な例示的成熟ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃアミノ酸配列は、配列番号１２に示される。
「ＦＧＦＲ２細胞外ドメイン」または「ＦＧＦＲ２ ＥＣＤ」は、ヒトＦＧＦＲ２の細胞外ドメインを指し、その天然バリアント及び遺伝子操作されたバリアントを含む。ＦＧＦＲ２ ＥＣＤの一例は、配列番号１３に記載される。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、少なくとも超可変領域（ＨＶＲ）の重鎖のＨ１、Ｈ２及びＨ３ならびに軽鎖のＬ１、Ｌ２及びＬ３を含む分子であって、抗原に結合することが可能な分子を指す。抗体という用語は、限定するものではないが、抗原に結合することが可能な断片、例えば、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２を含む。抗体という用語にはまた、限定するものではないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザルなどの様々な種の抗体なども含まれる。また、小分子医薬品などの他の分子にコンジュゲートされた抗体、二重特異性抗体及び多重特異性抗体も含まれる。
「抗ＦＧＦＲ２」抗体は、ＦＧＦＲ２に特異的に結合する抗体を指す。「抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ」抗体または「抗ＦＧＦＲ２ｂ」抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ（ＦＧＦＲ２ｂとして知られる）に特異的に結合する抗体を指す。かかる抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃなどのＦＧＦＲ２の他のアイソフォームに対する親和性よりもＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに対して高い親和性を有する。いくつかの実施形態において、この抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合し得ない。「抗ＦＧＦＲ２抗体」、「抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体」及び「抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体」という用語は、かかる抗体のアフコシル化型を特に含む。
「重鎖可変領域」という用語は、重鎖ＨＶＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＶＲ２、ＦＲ３及びＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域はまた、ＦＲ１の少なくとも一部及び／またはＦＲ４の少なくとも一部を含む。
「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的重鎖定常領域は、γ、δ、及びαを含む。非限定的な例示的重鎖定常領域はまた、ε及びμを含む。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体は、ＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体は、ＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体は、ＩｇＡ抗体である。更に、μ定常領域を含む抗体は、ＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体は、ＩｇＥ抗体である。特定のアイソタイプは、更にサブクラスに分けることができる。例えば、ＩｇＧ抗体は、限定するものではないが、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体を含み、ＩｇＡ抗体は、限定するものではないが、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体を含み、ＩｇＭ抗体は、限定するものではないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含む。
「重鎖」という用語は、リーダー配列の有無に関係なく、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「完全長重鎖」という用語は、リーダー配列の有無に関係なく、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
「軽鎖可変領域」という用語は、軽鎖ＨＶＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＶＲ２、ＦＲ３及びＨＶＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１及び／またはＦＲ４を含む。
「軽鎖定常領域」という用語は、軽鎖定常ドメインＣＬを含む領域を指す。非限定的な例示的軽鎖定常領域は、λ及びκを含む。
「軽鎖」という用語は、リーダー配列の有無に関係なく、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「完全長軽鎖」という用語は、リーダー配列の有無に関係なく、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変性であり、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般に、天然４鎖抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）に由来するアミノ酸残基を含み、後者は、配列可変性が最も大きく、及び／または抗原認識に関与する。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）及び９６〜１０１（Ｈ３）に存在する（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、及びＨ３の９５〜１０２に存在する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。超可変領域（ＨＶＲ）及び相補性決定領域（ＣＤＲ）という用語は、いずれも、抗原結合領域を形成する可変領域の部分を指す。
「親和性」または「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の総和の強さを指す。いくつかの実施形態において、「結合親和性」は、結合ペア（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合し、これにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて、細胞毒素により標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。ＡＤＣＣを媒介する主な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７−９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号もしくは同第５，８２１，３３７号または米国特許第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載されているものなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを実施することができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が含まれる。代替的または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて、評価されてもよい。Ｆｃ領域のアミノ酸配列が改変された更なる抗体、及びＡＤＣＣ活性が増強または減少された更なる抗体は、例えば、米国特許第７，９２３，５３８号及び米国特許第７，９９４，２９０号に記載されている。
「増強されたＡＤＣＣ活性」を有する抗体は、親抗体と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで、ＡＤＣＣの媒介に関してより有効である抗体を指し、ここで、抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的形態において異なり、アッセイで使用される当該抗体及び親抗体の量は、本質的に同じである。いくつかの実施形態において、抗体及び親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、抗体は、アフコシル化されているのに対し、親抗体は、フコシル化されている。いくつかの実施形態において、ＡＤＣＣ活性は、米国特許出願公開第２０１５−００５０２７３−Ａ１号に開示されているようなｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを使用して決定されるが、例えば、動物モデルなどにおける、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法も企図される。いくつかの実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体はまた、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して、増強された親和性を有する。いくつかの実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して、増強された親和性を有する。いくつかの実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対して、増強された親和性を有する。
「ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性」は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（場合によって、ＣＤ１６ａとも称される）に対して、親抗体よりも大きい親和性を有する抗体を指し、ここで、抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的形態において異なる。いくつかの実施形態において、抗体及び親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、抗体は、アフコシル化されているのに対し、親抗体は、フコシル化されている。ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性を決定するための任意の好適な方法が使用され得る。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性は、米国特許出願公開第２０１５−００５０２７３−Ａ１号に記載の方法によって決定される。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体はまた、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対して増強された親和性を有する。
本明細書で使用される「キメラ抗体」は、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの可変領域と、第２の種（例えば、ヒト、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの定常領域とを含む、抗体を指す。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、少なくとも１つのラット可変領域と、少なくとも１つのマウス定常領域とを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗体の可変領域の全てが第１の種に由来し、キメラ抗体の定常領域の全てが第２の種に由来する。
本明細書で使用される「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域に由来する該当するアミノ酸で置換されている抗体を指す。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などである。
本明細書で使用される「ヒト抗体」は、ヒトで産生される抗体、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）などのヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物で産生される抗体、及びファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ法を使用して選択される抗体（抗体レパートリーは、ヒト免疫グロブリン配列に基づく）を指す。
「アフコシル化された」抗体または「フコースを欠く」抗体は、その定常領域のグリコシル化においてフコースを欠いている、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ抗体を指す。ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３のグリコシル化は、最大２Ｇａｌの残基を末端に有するコアフコシル化二分岐複合型オリゴ糖グリコシル化のように、Ａｓｎ２９７（Ｎ２９７）に生じる。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠いている。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じて、Ｇ０、Ｇ１（α１，６またはα１，３）またはＧ２グリカン残基と指定される。例えば、Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．１：４４−５３（２００３）を参照されたい。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．Ｈ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．１４：２０１−２０７（１９９７）に記載されている。抗体の集団のうち、その集団の抗体の５％未満がＡｓｎ２９７にフコースを含むのであれば、その抗体は、アフコシル化されているとみなされる。
「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域に帰属する生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって様々である。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞の活性化が挙げられる。
抗ＦＧＦＲ２抗体に関して、リガンドの「結合を遮断する」またはリガンドの「結合を阻害する」という用語は、ＦＧＦＲ２と、ヒト線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１）またはＦＧＦ２などのＦＧＦＲ２リガンドとの間の相互作用を阻害する能力を指す。かかる阻害は、任意の機序を介して起こり得、例えば、これらには、リガンド結合への直接的干渉、例えば、ＦＧＦＲ２上の結合部位の重複によるもの、及び／またはリガンド親和性を変更する抗体によって誘導されるＦＧＦＲ２の高次構造の変化、または、例えば、ＦＧＦＲ２ ＥＣＤもしくはＦＧＦＲ２ ＥＣＤ融合分子の場合、ＦＧＦＲ２リガンドへの結合に対する競合によって誘導されるものが含まれる。
本明細書で使用される「単離された」という用語は、典型的に天然に見出される成分の少なくともいくつかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、当該ポリペプチドが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」という。発現後に細胞によって分泌されるポリペプチドの場合、当該ポリペプチドを産生する細胞から、当該ポリペプチドを含有する上清を物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」こととみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、典型的に自然に見出される、より大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡなど）の一部でない場合、または、例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドの場合、当該ポリヌクレオチドが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」という。したがって、宿主細胞内のベクターに含有されるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが天然でそのベクターに見出されない限り、「単離された」ということもできる。
「高いレベル」という用語は、対象の特定の組織におけるタンパク質レベルが、本明細書に記載されるがんまたは他の状態を患っていない個体（複数可）などの対照の同じ組織と比較して、高いことを意味する。高いレベルは、任意の機序の結果、例えば、タンパク質の発現の増加、安定性の増大、分解の減少、分泌の増加、クリアランスの低下などであり得る。
タンパク質または細胞型に関する「減少」または「減少する」または「増加」または「増加する」という用語は、腫瘍などの対象の特定の組織における当該タンパク質または細胞型のレベルが少なくとも１０％変化することを意味する。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体などの作用物質は、腫瘍などの対象の特定の組織におけるタンパク質または細胞型のレベルを、当該抗体との接触前のレベルと比較して、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％増加または減少させる。
「対象」及び「患者」という用語は、ヒトを指すために、本明細書において区別なく使用される。いくつかの実施形態において、他の哺乳動物、例えば、限定するものではないが、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、実験用哺乳動物、家畜哺乳動物、競技用哺乳動物、及び愛玩哺乳動物を治療する方法もまた提供される。
「試料」という用語は、本明細書で使用されるとき、対象から採取されるか、または対象に由来する組成物であって、例えば、物理学的、生化学的、化学的及び／または生理学的特徴に基づいて、特徴付け、定量及び／または同定される、細胞実体及び／または他の分子実体を含有する組成物を指す。例示的な試料は、組織試料である。
「がん」という用語は、制御不能な細胞増殖、抑制不能な細胞成長、及びアポトーシスを介する細胞死の減少に関連する悪性増殖性疾患を指す。「消化管癌」または「ＧＩ癌」という用語は、胃癌、大腸癌、または膵臓腺癌などの消化管のがんを指す。いくつかの実施形態において、消化管癌は、「胃癌」または「ＧＣ」であり、本明細書で使用されるとき、胃食道癌を含む。
いくつかの実施形態において、がんは、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含むが、いくつかの実施形態では、がんは、ＦＧＦＲ２増幅を含まない。いくつかの実施形態において、増幅が生じる場合、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セントロメア）の比が＞３である。いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０比が≧２である。しかしながら、他の実施形態において、ＦＧＦＲ２レベルは、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０比が１〜２の間であり、ＦＧＦＲ２の増殖を示さない。いくつかの実施形態において、変異または転座は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅の原因となり得る。
ＦＧＦＲ２遺伝子増幅は、例えば、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションアッセイ（ＦＩＳＨ）を使用して決定され得る。ＦＧＦＲ２遺伝子増幅はまた、血液ベースアッセイまたは「リキッドバイオプシー」によって検出することもできる。血液ベースアッセイのいくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅は、循環腫瘍細胞または「ＣＴＣ」由来のＤＮＡで検出され得る。ＣＴＣの検出及び分子特徴付けの方法は、例えば、Ａｌｉｘ−Ｐａｎａｂｉｅｒｅｓ（２０１３）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５９：１ １１０−１１８に記載されている。血液ベースアッセイのいくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅は、ｃｔＤＮＡで検出される。「ｃｔＤＮＡ」という用語は、「循環腫瘍ＤＮＡ」を指し、これは、細胞に関連しない、血流中の腫瘍由来の断片化ＤＮＡである。ｃｔＤＮＡの検出及び分子特徴付けの方法は、例えば、Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ＆Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １５：２ ５９−７２に記載されており、ＰＣＲによる方法及び次世代シーケンシング（ＮＧＳ）を含む。
いくつかの実施形態において、がんは、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現している。いくつかの実施形態において、がんは、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを多く過剰発現している。いくつかの実施形態において、がんは、正規化されたＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ発現レベルよりも２倍、３倍、５倍、または１０倍高い正規化レベルでＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施形態において、がんは、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現しているが、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含まず、他の実施形態において、がんは、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含み、更に、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現している。ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの発現は、例えば、正常組織と比較した、患者に由来する腫瘍試料の免疫組織化学染色（ＩＨＣ）によるタンパク質レベルで決定され得る。「ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂタンパク質の過剰発現」及び「ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現」などという用語は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂタンパク質が高いレベルであることを意味し、かかる高いレベルの原因は問わない（すなわち、高いレベルがタンパク質翻訳の増加及び／または分解の減少、他の機序、または機序の組み合わせの結果であるかどうかにかかわらない）。いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現は、例えば、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）解析などの技術を使用して、非がん性組織と比較したｍＲＮＡレベルで検出され得る。
ＩＨＣによるＦＧＦＲ２またはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの発現レベルは、腫瘍試料に０〜３のスケールのＩＨＣスコアを与えることによって決定され得る。本明細書において、反応性が観察されない場合、または腫瘍細胞の１０％未満にのみ細胞膜の反応性がある場合、「０」のスコアが与えられる。腫瘍細胞の少なくとも１０％に、わずかなもしくはほとんど識別できない細胞膜の反応性がある場合、または細胞がその細胞膜の一部のみで反応性である場合、「１＋」のスコアが与えられる。腫瘍細胞の少なくとも１０％に、弱〜中程度の完全な基底側または側方の細胞膜の反応性がある場合、「２＋」のスコアが与えられる。腫瘍細胞の少なくとも１０％に、強い完全な基底側または側方の細胞膜の反応性がある場合、「３＋」のスコアが与えられる。いくつかの実施形態において、ＩＨＣによる腫瘍細胞の１＋、２＋または３＋染色は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの実施形態において、ＩＨＣによる腫瘍細胞の２＋または３＋染色は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現を示す。いくつかの実施形態において、ＩＨＣによる腫瘍細胞の３＋染色は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現を示す。
「修正版ＦＯＬＦＯＸ６」または「ｍＦＯＬＦＯＸ６」化学療法レジメンは、本明細書に記載される種々の実施形態において提供されるように、オキサリプラチン（例えば、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、ロイコボリン（例えば、ロイコボリンカルシウムまたはフォリン酸）及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の組み合わせがヒト患者にそれぞれＩＶ注入またはＩＶボーラスにより約２〜８時間にわたって投与され、次いで、５−ＦＵの更なる注入がＩＶ注入により約２日間かけて投与される、レジメンを指す。
「治療」は、本明細書で使用されるとき、治療的処置を指し、例えば、その目的は、標的とする病的状態または障害の重症度を下げることまたは進行を遅らせることであり、また、例えば、その目的は、状態または障害の再発を抑制することである。ある特定の実施形態において、「治療」という用語は、患者の疾患の治療薬のあらゆる投与または適用を包含し、疾患または疾患の進行を抑制することまたは遅延させること、疾患を、例えば、寛解をもたらすことによって、または失われた、損なわれたもしくは欠陥のある機能を回復もしくは修復することによって、部分的にまたは完全に緩和すること、非効率なプロセスを刺激すること、あるいはプラトーに達した疾患の重症度を下げることを含む。「治療」という用語はまた、任意の表現型特徴の重症度を下げること、及び／または当該特徴の発生、程度もしくは可能性を下げることを含む。治療を必要とする者には、既に障害を持つ者だけでなく、障害の再発リスクがある者または障害の再発を予防もしくは遅延させる必要がある者が含まれる。
「有効量」または「治療上有効な量」という用語は、対象の疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。ある特定の実施形態において、有効量は、所望される治療上または予防上の結果を達成するのに必要な投与量及び期間での有効な量を指す。本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体及び化学療法レジメンの治療上有効な量は、個体の病状、年齢、性別及び体重、ならびに個体において所望の応答を惹起する抗体（複数可）の能力などの因子に応じて変わり得る。治療上有効な量は、治療上の有益な効果が、抗体（複数可）のあらゆる毒性または有害な影響よりも上回る量を包含する。いくつかの実施形態において、「有効量」という表現は、がんの治療に有効である抗体の量を指す。
化学療法レジメンなどの１つ以上の更なる治療薬「との組み合わせ」投与は、任意の順序での、同時（並行）投与及び連続（逐次）投与を含む。
「薬学的に許容される担体」は、対象への投与のために、「医薬組成物」を一緒に含む治療薬で使用するために当該技術分野で従来から用いられている、非毒性の固形、半固形もしくは液体の賦形剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤助剤、または担体を指す。薬学的に許容される担体は、採用される投与量及び濃度でレシピエントに対して毒性がなく、製剤の他の成分と適合性があるものである。薬学的に許容される担体は、採用される製剤に適したものである。例えば、治療薬が経口投与される場合、担体は、ゲルカプセル剤であり得る。治療薬が皮下投与される場合、担体は、理想的に、皮膚に対して刺激がなく、注射部位反応を起こさないものである。
更なる定義は、以下のセクションにおいて記載され得る。
例示的な抗ＦＧＦＲ２抗体
例示的な抗ＦＧＦＲ２抗体には、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに特異的に結合する抗体、すなわち、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が含まれる。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合するよりも低い親和性でＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに結合する。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合しない。
本明細書の実施形態において使用される例示的な抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２０１２年１月２４日に発行された米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載のＨｕＧＡＬ−ＦＲ２１抗体であり、参照により本明細書に明示的に援用される。米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号の図１３及び１４は、ＨｕＧＡＬ−ＦＲ２１の可変領域及び完全長成熟抗体鎖のアミノ酸配列を示し、参照により本明細書に援用される。抗体ＨｕＧＡＬ−ＦＲ２１の重鎖可変領域配列は、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号の図１３において下線が引かれており、参照により本明細書に明示的に援用される。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。本明細書の実施形態において使用され得る更なる抗体には、特定のアフコシル化抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体について記載している米国特許出願公開第２０１５−００５０２７３−Ａ１号に記載のものが含まれ、参照により本明細書に援用される。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの超可変領域（ＨＶＲ；例えば、ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む、少なくとも１つの重鎖と、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む、少なくとも１つの軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２つの重鎖と、２つの軽鎖とを含み、各重鎖は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含み、各軽鎖は、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、６つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、上記の６つのＨＶＲを含み、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに結合しない。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
一態様において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む６つのＨＶＲを含む、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と競合する。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインとを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、そのような抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合することなく、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、配列番号４において、合計で１〜１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入または欠失は、ＨＶＲ以外の領域（すなわち、ＦＲ）内にある。任意選択により、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号５のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに結合することなく、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、配列番号５において、合計で１〜１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入または欠失は、ＨＶＲ以外の領域（すなわち、ＦＲ）内にある。任意選択により、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列と、配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入または欠失を含有し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、そのような抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに結合することなく、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、配列番号４において、合計で１〜１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。ある特定の実施形態において、配列番号５において、合計で１〜１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入または欠失は、ＨＶＲ以外の領域（すなわち、ＦＲ）内にある。任意選択により、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列を含み、一方または両方の配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含み、ＶＬは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体のＶＨは、上に提供される実施形態のいずれかにおけるものであり、ＶＬは、上に提供される実施形態のいずれかにおけるものである。一実施形態において、抗体は、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列をそれぞれ含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖配列を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する重鎖配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、そのような抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合することなく、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、配列番号２において、合計で１〜１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入または欠失は、ＨＶＲ以外の領域（すなわち、ＦＲ）内にある。任意選択により、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖は、配列番号２のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、重鎖は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する軽鎖配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、そのような抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合することなく、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、配列番号３において、合計で１〜１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入または欠失は、ＨＶＲ以外の領域（すなわち、ＦＲ）内にある。任意選択により、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の軽鎖は、配列番号３のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、軽鎖は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖配列を含み、配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖配列を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する重鎖配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、そのような抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合することなく、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する軽鎖配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、そのようなＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合することなく、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに選択的に結合する能力を保持している。ある特定の実施形態において、配列番号２において、合計で１〜１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。ある特定の実施形態において、配列番号３において、合計で１〜１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。ある特定の実施形態において、置換、挿入または欠失は、ＨＶＲ以外の領域（すなわち、ＦＲ）内にある。任意選択により、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖は、配列番号２のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含み、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の軽鎖は、配列番号３のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、重鎖は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含み、軽鎖は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
更なる例示的な抗ＦＧＦＲ２抗体は、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号に記載のＧＡＬ−ＦＲ２２及びＧＡＬ−ＦＲ２３抗体であり、参照により本明細書に援用される。ＧＡＬ−ＦＲ２２の軽鎖及び重鎖可変領域は、例えば、米国特許第８，１０１，７２３Ｂ２号の配列番号７及び８に提供され、また、ＫａｂａｔのＣＤＲならびに軽鎖及び重鎖可変領域は、当該特許の図１６に提供されており、参照により本明細書に援用される。ＧＡＬ−ＦＲ２１、ＧＡＬ−ＦＲ２２及びＧＡＬ−ＦＲ２３を産生するハイブリドーマは、それぞれ２００８年１１月６日、１１月６日及び８月１２日にＡＴＣＣ番号９５８６、９５８７及び９４０８として、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＰＯ Ｂｏｘ １５４９，Ｍａｎａｓｓａｓ ＶＡ，ＵＳＡ，２０１０８）に寄託されている。したがって、いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２抗体は、これらの３つのハイブリドーマ株のうちの１つから得られる抗体のアミノ酸配列を含む、抗体である。
ＧＡＬ−ＦＲ２２の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はまた、当該特許の配列番号３９及び４３に示されており、ＫａｂａｔのＣＤＲは、当該特許の配列番号４０〜４２及び４４〜４６に示されている。したがって、いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、（ｉｖ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、（ｖ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び（ｖｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体は、重鎖可変ドメインが、配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号３９のアミノ酸配列を含む、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体は、軽鎖可変ドメインが、配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号４３のアミノ酸配列を含む、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号３９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、例えば、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるか、または配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
本明細書に記載される方法のいずれかにおいて、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体またはヒト抗体であり得る。本明細書に記載される組成物または方法のいずれかにおいて、抗ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択され得る。本明細書に記載される組成物または方法のいずれかにおいて、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＤから選択され得る。本明細書に記載される組成物または方法のいずれかにおいて、抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＩｇＧであり得る。本明細書に記載される方法のいずれかにおいて、抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３であり得る。
抗体の例示的な特性
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに対する親和性よりも高い親和性でＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合するか、もしくはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合せず、ヒトＦＧＦＲ２に対するＦＧＦ２の結合を阻害し、及び／またはヒトＦＧＦＲ２に対するＦＧＦ７の結合を阻害する。ＦＧＦＲ２への抗体の結合及びＦＧＦＲ２とＦＧＦとの間の結合の阻害は、例えば、米国特許第８，１０１，７２３号に記載のＥＬＩＳＡアッセイ、または、例えば、ＷＯ２０１５／−１７６００の実施例２に記載のチップベースアッセイによって評価することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、ＡＤＣＣ活性を誘導し、いくつかの実施形態において、例えば、ＷＯ２０１５／−１７６００に記載されるように、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。ＡＤＣＣ活性は、例えば、ＷＯ２０１５／−１７６００の実施例３に記載されるとおりに決定され得る。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６３３３２号の実施例１に示されるように、マウスモデルにおいて、ヒト腫瘍の成長を阻害し得る。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、例えば、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６３３３２号の実施例２に記載されるように、マウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍組織中のＰＤ−Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びマクロファージのうちの１つ以上の数を対照と比較して増加させることが可能である。
アフコシル化抗ＦＧＦＲ２抗体
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体、例えば上記の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有し（すなわち、アフコシル化抗体）、すなわち、抗体は、アフコシル化されている。いくつかの実施形態において、アフコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７のフコースを欠く、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３抗体である。
本明細書において、抗体は、複数のそのような抗体が少なくとも９５％のアフコシル化抗体を含む場合、アフコシル化されているとみなされる。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に結合している全ての糖構造の合計（例えば、複合型、混合型及び高マンノース型構造）に対する、Ａｓｎ２９７の糖鎖内にあるフコースの平均量を算出することによって決定され得る。抗体中のフコースを検出する非限定的な例示的方法には、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法（例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６参照）、遊離した蛍光標識オリゴ糖のＨＰＬＣ測定法（例えば、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｎ−Ｇｌｙｃａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｕｓｉｎｇ ＵＨＰＬＣ ｗｉｔｈ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，” Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（２０１２）；Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌｙｓｉｓ，１４：６０１−６０８（１９９６）；Ｔａｋａｈａｓｉ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍ．，７２０：２１７−２２５（１９９６）参照）、遊離した蛍光標識オリゴ糖のキャピラリー電気泳動測定法（例えば、Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，７１：５１８５−５１９２（１９９９）参照）及び単糖組成物を測定するためのパルスドアンペロメトリ検出を用いたＨＰＬＣ（例えば、Ｈａｒｄｙ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７０：５４−６２（１９８８）参照）が含まれる。
Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の位置２９７付近（ＥＵナンバリングのＦｃ領域残基）に位置するアスパラギン残基を指すが、所与の抗体配列において、Ａｓｎ２９７は、抗体の軽微な配列変化に起因して、位置２９７から上流または下流の約±３アミノ酸、すなわち、位置２９４〜３００の間に位置してもよい。本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体において、Ａｓｎ２９７は、配列
Figure 2020520903
（配列番号２の位置２９２〜２９６）に認められ、以下の配列表の配列番号２では、太字及び下線付きで示される。
フコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「アフコシル化」または「フコース欠損」抗体に関連する公開物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。アフコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、タンパク質のフコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；米国特許出願公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）；及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．、特に実施例１１）及び機能性アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８を欠く細胞株、例えば、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７参照）が挙げられる。
本明細書の抗ＦＧＦＲ２抗体は、二分されたオリゴ糖を有し得、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐型オリゴ糖は、ＧｌｃＮＡｃによって二分されている。そのような抗体は、フコシル化の減少及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）；及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体は、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する。そのような抗体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
本発明のいくつかの実施形態において、アフコシル化抗ＦＧＦＲ２抗体は、ヒトエフェクター細胞の存在下で、フコースを含む同じアミノ酸配列を有する抗体よりも効果的にＡＤＣＣを媒介する。一般に、ＡＤＣＣ活性は、米国特許出願公開第２０１５−００５０２７３Ａ１号に開示されているｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを使用して決定され得るが、例えば、動物モデルなどにおける、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイまたは方法も企図される。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体は、配列番号２及び３の重鎖及び軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態において、配列番号２及び３の重鎖及び軽鎖配列を含む抗体は、アフコシル化されている。
例示的な抗体定常領域
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＤから選択されるアイソタイプものである。いくつかの実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含む抗体が選択される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、Ｎ２９７がフコシル化されていないヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
本明細書及び特許請求の範囲を通して、明記されない限り、または当業者に既知でない限り、免疫グロブリン重鎖の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）におけるＥＵインデックスのナンバリングであり、参照により本明細書に明示的に援用される。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。
ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＩｇＧまたは野生型抗体のＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するバリアントＦｃ領域を含む。ある特定の実施形態において、バリアントＦｃ領域は、野生型抗体のＦｃ領域内に２つ以上のアミノ酸置換を有する。ある特定の実施形態において、バリアントＦｃ領域は、野生型抗体のＦｃ領域内に３つ以上のアミノ酸置換を有する。ある特定の実施形態において、バリアントＦｃ領域は、本明細書に記載されるＦｃ領域アミノ酸置換を少なくとも１つ、２つまたは３つ以上有する。ある特定の実施形態において、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域及び／または親抗体のＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性を有する。ある特定の実施形態において、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域及び／または親抗体のＦｃ領域と少なくとも約９０％の相同性を有する。ある特定の実施形態において、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域及び／または親抗体のＦｃ領域と少なくとも約９５％の相同性を有する。
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度が増加または減少するように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または除去は、１つ以上のグリコシル化部位が創出または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって、簡便に達成され得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合、Ｆｃ領域に結合する炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的に、分岐した二分岐型オリゴ糖を含み、これは、一般に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により結合している。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸、ならびに二分岐型オリゴ糖構造の「幹」中のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。いくつかの実施形態において、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体を作製するために行われ得る。
抗体はまた、アミノ酸末端リーダー伸長を有し得る。例えば、アミノ酸末端リーダー配列の１つ以上のアミノ酸残基は、抗体の任意の１つ以上の重鎖または軽鎖のアミノ酸末端に存在する。例示的なアミノ末端リーダー伸長は、３つのアミノ酸残基ＶＨＳを含むか、またはこれらからなり、抗体の一方または両方の軽鎖上に存在する。
ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏまたは血清半減期は、例えば、バリアントＦｃ領域を含むポリペプチドが投与される、トランスジェニックマウス、ヒトまたは非ヒト霊長類において評価することができる。例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）も参照されたい。
例示的なキメラ抗体
ある特定の実施形態において、本明細書で提供される抗ＦＧＦＲ２抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例として、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。更なる例として、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
非限定的な例示的キメラ抗体には、本明細書に記載される重鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２及びＨＶＲ３及び／または軽鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２及びＨＶＲ３配列を含む、ＦＧＦＲ２に対するキメラ抗体が含まれる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるキメラ抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＤから選択されるアイソタイプものである。いくつかの実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
上記のように、エフェクター機能が望ましいかどうかは、抗体の目的とする特定の治療方法に依存し得る。したがって、いくつかの実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むキメラ抗体が選択される。いくつかの実施形態において、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含むキメラ抗体が選択される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるキメラ抗体は、Ｎ２９７がフコシル化されていないヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
例示的なヒト化抗体
いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２に結合するヒト化抗体が使用される。ヒト化抗体は、治療用分子として有用であるが、それは、ヒト化抗体が、抗体治療薬に対する免疫応答をもたらし、治療薬の有効性を低下させ得る、非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答など）を低減または排除するからである。
ある特定の実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性が低下するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、ＨＶＲまたはＣＤＲ（またはその一部）は、非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体はまた、任意選択により、ヒト定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基の由来となる抗体）の対応する残基に置換される。
ヒト化抗体及びその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，（２００８）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３に概説されており、更に、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフト化について記載）；Ｐａｄｌａｎ，（１９９１）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（「リサーフェーシング」について記載）；Ｄａｌｌ'Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（「ＦＲシャフリング」について記載）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（ＦＲシャフリングに対する「ガイド選択」について記載）に記載されている。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６参照）；軽鎖可変領域または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５１：２６２３参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，（２００８）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３参照）；及びＦＲライブラリのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８参照）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＤから選択されるアイソタイプものである。いくつかの実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト化抗体は、Ｎ２９７がフコシル化されていないヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
ヒト抗体
ヒト抗ＦＧＦＲ２抗体は、任意の好適な方法によって作製することができる。非限定的な例示的方法には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作製することが含まれる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１−５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−８（１９９３）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−９（１９９４）；ならびに米国特許第５，５４５，８０７号、同第６，７１３，６１０号、同第６，６７３，９８６号、同第６，１６２，９６３号、同第５，５４５，８０７号、同第６，３００，１２９号、同第６，２５５，４５８号、同第５，８７７，３９７号、同第５，８７４，２９９号及び同第５，５４５，８０６号を参照されたい。
非限定的な例示的方法にはまた、ファージディスプレイライブラリを使用してヒト抗体を作製することも含まれる。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１−８（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−９７（１９９１）；及びＰＣＴ国際公開第ＷＯ９９／１０４９４号を参照されたい。
いくつかの実施形態において、ヒト抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＤから選択されるアイソタイプものである。いくつかの実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施形態において、本明細書に記載されるヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域内にＳ２４１Ｐの変異を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むヒト抗体が選択される。いくつかの実施形態において、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域を含むヒト抗体が選択される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト化抗体は、Ｎ２９７がフコシル化されていないヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
例示的な抗体コンジュゲート
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体は、標識及び／または細胞傷害剤にコンジュゲートされる。本明細書で使用されるとき、標識は、抗体の検出を容易にする部分及び／または抗体が結合する分子の検出を容易にする部分である。非限定的な例示的標識には、放射性同位体、蛍光基、酵素基、化学発光基、ビオチン、エピトープタグ、金属結合タグなどが含まれるが、これらに限定されない。当業者は、目的の用途に応じて好適な標的を選択することができる。
本明細書で使用されるとき、細胞傷害剤は、１つ以上の細胞の増殖能力を低下させる部分である。細胞は、例えば、細胞がアポトーシスを生じることまたは別様に死滅すること、細胞が細胞周期の進行を行えないこと及び／または分裂しないこと、細胞が分化することなどの理由から、細胞が増殖できなくなった場合、低下した増殖能力を有する。非限定的な例示的細胞傷害剤には、放射性同位体、毒素及び化学療法剤が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、目的の用途に応じて好適な細胞傷害剤を選択することができる。
いくつかの実施形態において、標識及び／または細胞傷害剤は、化学的方法を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで抗体にコンジュゲートされる。非限定的な例示的化学的コンジュゲート方法は、当該技術分野において知られており、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｅｓ（旧Ｐｉｅｒｃｅ；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）、Ｐｒｏｚｙｍｅ（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）、ＳＡＣＲＩ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｃａｌｇａｒｙ，Ｃａｎａｄａ）、ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ（Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）などから商業的に利用可能なサービス、方法及び／または試薬が含まれる。いくつかの実施形態において、標識及び／または細胞傷害剤がポリペプチドである場合、その標識及び／または細胞傷害剤は、少なくとも１つの抗体鎖を含む同じ発現ベクターから発現させて、抗体鎖に融合された標識及び／または細胞傷害剤を含むポリペプチドを産生することができる。当業者は、目的の用途に応じて、標識及び／または細胞傷害剤を抗体にコンジュゲートするのに好適な方法を選択することができる。
抗体をコードする核酸分子
抗体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子が提供される。いくつかの実施形態において、核酸分子は、抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドと、抗体の軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施形態において、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。
いくつかのそのような実施形態において、重鎖及び軽鎖は、１つの核酸分子から、または２つの別個の核酸分子から２つの別個のポリペプチドとして発現される。いくつかの実施形態において、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリヌクレオチドは、互いに連結された重鎖及び軽鎖の両方を含む、単一のポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態において、抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含み、リーダー配列は、翻訳されたとき、重鎖または軽鎖のＮ末端に位置する。上述のように、リーダー配列は、天然の重鎖または軽鎖リーダー配列であってもよいし、別の異種リーダー配列であってもよい。
核酸分子は、当該技術分野における従来の組み換えＤＮＡ技術を使用して構築され得る。いくつかの実施形態において、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に好適な発現ベクターである。
抗体の発現及び産生
ベクター
抗体の重鎖及び／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。抗体の重鎖及び／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。そのようなベクターには、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列及び軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖及び軽鎖は、ベクターから２つの別個のポリペプチドとして発現される。いくつかの実施形態において、重鎖及び軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合など、単一のポリペプチドの一部として発現される。
いくつかの実施形態において、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、第１のベクター及び第２のベクターは、同様の量（同様のモル量または同様の質量など）で、宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態において、５：１〜１：５のモル比または質量比の第１のベクターと第２のベクターが宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態において、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターは、１：１〜１：５の質量比で使用される。いくつかの実施形態において、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターは、１：２の質量比で使用される。
いくつかの実施形態において、ベクターは、ＣＨＯ細胞もしくはＣＨＯ由来細胞、またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現に最適化されたベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０−８８９（２００４）に開示されている。
いくつかの実施形態において、ベクターは、ヒトを含む動物における抗体重鎖及び／または抗体軽鎖のｉｎ ｖｉｖｏ発現用のベクターが選択される。いくつかのそのような実施形態において、ポリペプチドの発現は、組織特異的に機能するプロモーターの制御下で行われる。例えば、肝臓特異的プロモーターについては、例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２００６／０７６２８８号に記載されている。
宿主細胞
種々の実施形態において、抗体の重鎖及び／または軽鎖は、細菌細胞などの原核細胞、または真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞及び哺乳動物細胞などの真核細胞で発現され得る。かかる発現は、例えば、当該技術分野において知られている手順に従って実施され得る。ポリペプチドの発現に使用され得る例示的な真核細胞には、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞、２９３−６Ｅ細胞を含む２９３細胞、ＣＨＯ−Ｓ及びＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびにＮＳＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、抗体の重鎖及び／または軽鎖は、酵母において発現され得る。例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２００６／０２７００４５Ａ１号を参照されたい。いくつかの実施形態において、特定の真核生物宿主細胞は、抗体の重鎖及び／または軽鎖に所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生される同ポリペプチドよりもシアリル化の程度がより高いポリペプチドを産生する。
１つ以上の核酸の所望の宿主細胞への導入は、限定するものではないが、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含む任意の方法によって実施され得る。非限定的な例示的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の好適な方法に従って、所望の宿主細胞に一過性または安定的にトランスフェクトされ得る。
いくつかの実施形態において、１つ以上のポリペプチドは、任意の好適な方法に従って、ポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子を用いて操作またはトランスフェクトされた動物においてｉｎ ｖｉｖｏで産生され得る。
抗体の精製
抗体は、任意の好適な方法によって精製され得る。そのような方法には、アフィニティーマトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が含まれるが、これらに限定されない。好適な親和性リガンドには、抗体定常領域に結合する抗原及びリガンドが含まれる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、または抗体アフィニティーカラムが、定常領域への結合及び抗体の精製に使用され得る。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチルカラムまたはフェニルカラムもまた、一部のポリペプチドの精製に好適である。ポリペプチドを精製する多数の方法が当該技術分野において知られている。
抗体の無細胞産生
いくつかの実施形態において、抗体は、無細胞系で産生される。非限定的な例示的無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９−４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８−４５（２００４）；Ｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５−７１３（２００３）に記載されている。
修正版ＦＯＬＦＯＸ６
修正版ＦＯＬＦＯＸ６（ｍＦＯＬＦＯＸ６）化学療法レジメンは、オキサリプラチン（例えば、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、ロイコボリン（例えば、ロイコボリンカルシウムまたはフォリン酸）及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の組み合わせがそれぞれ連続して合計約２日間かけて静脈内投与されるレジメンを含む。修正版ＦＯＬＦＯＸ６は、進行性胃癌に対する第一選択治療として使用されている。胃癌患者２２０名の治療においてｍＦＯＬＦＯＸ６と５−ＦＵ／ＬＶ／シスプラチン（ＦＬＰ）を比較した無作為化第３相試験は、統計的に有意ではない無増悪期間の改善を報告したが、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、好中球減少症、貧血及び末梢神経障害を含む、グレード３／４の有害事象の意味のある減少と関係した（Ａｌ−Ｂａｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２６：１４３５−４２（２００８））。その後の研究では、進行性胃癌におけるｍＦＯＬＦＯＸ６の安全性及び有効性が確認された（Ｂ．Ｋｅａｍ，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ，８：１４８（２００８））。
いくつかの実施形態において、オキサリプラチン（例えば、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、ロイコボリン（例えば、ロイコボリンカルシウムまたはフォリン酸）及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の組み合わせは、それぞれＩＶ注入またはＩＶボーラスにより約２〜８時間にわたって投与され、次いで、５−ＦＵの更なる注入がＩＶ注入により約４４〜４８時間かけて投与される。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、１日目に５０〜１００ｍｇ／ｍ２で、例えば２時間かけて、ＩＶにより投与されるオキサリプラチン、次いで、１日目に１００〜４００ｍｇ／ｍ２で、例えば２時間かけて、ＩＶにより投与されるロイコボリン、次いで、全て１日目に１００〜４００ｍｇ／ｍ２で、ＩＶボーラスまたはＩＶ注入により投与される５−ＦＵ、続いて、２０００〜２５００ｍｇ／ｍ２での、４４〜４８時間、例えば４６時間にわたる、５−ＦＵの更なるＩＶ注入を含む。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、１日目に７５〜１００ｍｇ／ｍ２で、例えば２時間かけて、ＩＶにより投与されるオキサリプラチン、次いで、１日目に２００〜４００ｍｇ／ｍ２で、例えば２時間かけて、ＩＶにより投与されるロイコボリン、次いで、全て１日目に２００〜４００ｍｇ／ｍ２で、ＩＶボーラスまたはＩＶ注入により投与される５−ＦＵ、続いて、２２００〜２４００ｍｇ／ｍ２での、４４〜４８時間、例えば４６時間にわたる、５−ＦＵの更なるＩＶ注入を含む。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、１日目に７５〜９０ｍｇ／ｍ２で、例えば２時間かけて、ＩＶにより投与されるオキサリプラチン、次いで、１日目に３００〜４００ｍｇ／ｍ２で、例えば２時間かけて、ＩＶにより投与されるロイコボリン、次いで、全て１日目に３００〜４００ｍｇ／ｍ２で、ＩＶボーラスまたはＩＶ注入により投与される５−ＦＵ、続いて、２２００〜２４００ｍｇ／ｍ２での、４４〜４８時間、例えば４６時間にわたる、５−ＦＵの更なるＩＶ注入を含む。
いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、１日目に８５ｍｇ／ｍ２で、例えば２時間かけて、ＩＶにより投与されるオキサリプラチン、次いで、１日目に４００ｍｇ／ｍ２で、例えば２時間かけて、ＩＶにより投与されるロイコボリン、次いで、全て１日目に４００ｍｇ／ｍ２で、ＩＶボーラスまたはＩＶ注入により投与される５−ＦＵ、続いて、２４００ｍｇ／ｍ２での、４４〜４８時間、例えば４６時間にわたる、５−ＦＵの更なるＩＶ注入を含む。例えば、胃癌の第一選択治療としてのｍＦＯＬＦＯＸ６の開始用量には、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、３５０ｍｇのフォリン酸カルシウム（フォリン酸）、４００ｍｇ／ｍ２用量のフルオロウラシル、続いて４６時間かけて注入される２４００ｍｇ／ｍ２用量のフルオロウラシルが含まれ得る。
いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、１０〜２１日ごとに１回、例えば、１０〜１５日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、１４日ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、１８日ごとに１回、１９日ごとに１回、２０日ごとに１回、または２１日ごとに１回に投与され得る。
いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、「２週間」ごとに１回投与され得、これは、本明細書における一般的投与レジメンの文脈で使用されるとき、１４日±３日ごとに１回、または１１〜１７日ごとに１回を意味する。
治療用組成物及び治療方法
がんを治療する方法
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体などの抗ＦＧＦＲ２抗体の有効量を、修正版ＦＯＬＦＯＸ６化学療法レジメン（ｍＦＯＬＦＯＸ６）と組み合わせて投与することを含む、がんを治療するための方法が提供される。いくつかの実施形態において、がんは、胃癌、大腸癌及び膵臓腺癌などの消化管（ＧＩ）癌である。いくつかの実施形態において、がんは、切除不能、局所進行性または転移性の胃癌である。
方法のいくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、６〜１５ｍｇ／ｋｇ、１０〜１５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、７〜２１日ごとに１回、７〜１５日ごとに１回、７〜１０日ごとに１回、１０〜１４日ごとに１回、１１〜１７日ごとに１回、１２〜１６日ごとに１回、１３〜１５日ごとに１回、７日ごとに１回、８日ごとに１回、９日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、１４日ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、１８日ごとに１回、１９日ごとに１回、２０日ごとに１回、または２１日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２週間ごとに１回投与され得、これは、１４日±３日ごとに１回、または１１〜１７日ごとに１回を意味する。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２週間ごとに６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１３〜１５日ごとに６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１４日ごとに６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２週間ごとに６、１０または１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１３〜１５日ごとに６、１０または１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１４日ごとに６、１０または１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与される。
いくつかの実施形態において、２回の投与が２週間の間隔をおいて行われ、その２回の投与の間に中間追加量が一度に投与され、中間追加量は、２回の投与よりも少ない、投与レジメンが使用される。かかるレジメンにおける投与は、循環抗体を適切な濃度または比較的安定した濃度に経時的に維持するのに役立ち得る。例えば、投与後の循環抗体の濃度が投与後約１週間でトラフに低下する場合、トラフ時またはトラフ時付近で低量の追加量を投与し、続けて、追加量から約１週間後に通常量をもう１度投与することは、循環抗体の濃度全体を経時的に安定させ、投与と投与の間で濃度が低くなりすぎるのを防ぐのに役立ち得る。
したがって、いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２週間ごとに６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与され、６〜１５ｍｇ／ｋｇ用量よりも低い用量である中間追加量が、２回の６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与の１回目から１週間後（７±２日または５〜９日後を意味する）及び２回の６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与の２回目から１週間前（すなわち、５〜９日前）に投与される。いくつかのそのような実施形態において、追加量は、３〜８ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、追加量は、直前の用量または直後の用量の半分の用量である。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２週間ごとに６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与され、３〜８ｍｇ／ｋｇの中間追加量が、２回の６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与の１回目から６〜８日後及び２回の６〜１５ｍｇ／ｋｇの投与の２回目から６〜８日前に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２週間ごとに１０〜１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与され、５〜８ｍｇ／ｋｇの中間追加量が、２回の１０〜１５ｍｇ／ｋｇの投与の１回目から６〜８日後及び２回の１０〜１５ｍｇ／ｋｇの投与の２回目から６〜８日前に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、２週間ごとに１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与され、７〜８ｍｇ／ｋｇの中間追加量が、２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の１回目から６〜８日後及び２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の２回目から６〜８日前に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１３〜１５日ごとに１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与され、７〜８ｍｇ／ｋｇの中間追加量が、２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の１回目から６〜８日後及び２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の２回目から６〜８日前に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１４日ごとに１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与され、７〜８ｍｇ／ｋｇの中間追加量が、２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の１回目から６〜８日後及び２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の２回目から６〜８日前に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１４日ごとに１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与され、７〜８ｍｇ／ｋｇの中間追加量が、２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の１回目から７日後及び２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の２回目から７日前に投与される。上記実施形態のいくつかにおいて、追加量は、１回のみ、例えば、１回目の抗体投与と２回目の抗体投与との間の１回のみ患者に投与される。他の実施形態において、追加量は、２回のみ、例えば、１回目の抗体投与と２回目の抗体投与との間、及び２回目の抗体投与と３回目の抗体投与との間の２回のみ投与される。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１４日ごとに１５ｍｇ／ｋｇの投与レジメンで投与され、７．５ｍｇ／ｋｇの中間追加量が、２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の１回目から７日後及び２回の１５ｍｇ／ｋｇの投与の２回目から７日前に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１４日ごとに１回、１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、１日目に開始した後、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から７日後（すなわち、８日目）に、７．５ｍｇ／ｋｇの追加量で投与される。いくつかのそのような実施形態において、７．５ｍｇ／ｋｇの追加量は、１回のみ、例えば、１５ｍｇ／ｋｇの１回目の抗体投与と２回目の抗体投与の間にのみ投与される。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、同時に、例えば同日に、投与されてもよいし（例えば、抗体は、ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンの開始前にＩＶにより注入される）、逐次的に、例えば異なる日に、投与されてもよい。いくつかの実施形態において、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体による治療の開始前に、少なくとも１回または少なくとも２回投与される。いくつかの実施形態において、抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、いずれも、７〜２１日ごとに１回、７〜１５日ごとに１回、７〜１０日ごとに１回、１０〜１４日ごとに１回、１１〜１７日ごとに１回、１２〜１６日ごとに１回、１３〜１５日ごとに１回、７日ごとに１回、８日ごとに１回、９日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、１４日ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、１８日ごとに１回、１９日ごとに１回、２０日ごとに１回、または２１日ごとに１回投与される。いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、２週間ごとに１回投与され得、これは、１４日±３日ごとに１回、または１１〜１７日ごとに１回を意味する。
いくつかの実施形態において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、
（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、
軽鎖可変領域は、
（ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、１０〜１５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与され、続いて、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）のＩＶ注入またはＩＶボーラスによる投与に続いて、４４〜４８時間にわたる２４００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵのＩＶ注入による投与を含むｍＦＯＬＦＯＸ６が投与され、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、２週間ごとに投与される。
いくつかの実施形態において、対象は、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を含む胃癌を有するが、いくつかの実施形態では、がんは、ＦＧＦＲ２増幅を含まない。いくつかの実施形態において、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して、例えば、遺伝子座及び染色体１０セントロメアに対するプローブにより、遺伝子増幅を評価する。いくつかの実施形態において、増幅が生じる場合、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０（染色体１０セントロメア）の比が＞３である。いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２増幅は、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０比が≧２である。しかしながら、他の実施形態において、ＦＧＦＲ２レベルは、ＦＧＦＲ２：ＣＥＮ１０比が１〜２の間であり、ＦＧＦＲ２の増幅を示さない。
いくつかの実施形態において、対象は、ＦＧＦＲ２を過剰発現している胃癌、またはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現している胃癌を有する。いくつかの実施形態において、がんは、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃよりもＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを多く過剰発現している。いくつかの実施形態において、がんは、遺伝子増幅を含まないが、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現しており、他の実施形態では、がんは、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅とＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現の両方を含む。いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２増幅を含むがんは、正規化されたＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ発現レベルよりも２倍、３倍、５倍、または１０倍高い正規化レベルでＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを発現する。いくつかの実施形態において、発現レベルは、ＧＵＳＢに対して正規化される。いくつかの実施形態において、過剰発現は、ｍＲＮＡの過剰発現である。いくつかの実施形態において、過剰発現は、タンパク質の過剰発現である。いくつかの実施形態において、点変異または転座は、ＦＧＦＲ２の過剰発現の原因となり得る。
いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２またはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現は、免疫組織化学染色（ＩＨＣ）によって決定される。例えば、過剰発現は、腫瘍細胞の少なくとも１０％、例えば、腫瘍細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％、または５０％における１＋、２＋、または３＋のＩＨＣシグナルによって決定され得る。例えば、いくつかのそのような実施形態において、治療される患者は、例えば、腫瘍細胞の少なくとも１０％（例えば、細胞膜）で、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂについて、２＋または３＋のＩＨＣシグナルを有し得る。いくつかの実施形態において、患者は、腫瘍細胞の少なくとも１０％で、３＋のシグナルを有し得る。いくつかの実施形態において、患者は、腫瘍細胞の少なくとも１０％で、少なくとも１＋のシグナルを有し得る。
いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２またはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現は、「Ｈスコア」で報告され得る。Ｈスコアを決定するには、まず、例えばＩＨＣにより、固定視野で細胞膜の染色強度を決定し、０、１＋、２＋、または３＋のスコアを得ることができ、次の式を用いてＨスコアを算出することができる：１×（ＩＨＣ強度が１＋である視覚化された細胞の％）＋２×（ＩＨＣ強度が２＋である視覚化された細胞の％）＋３×（ＩＨＣ強度が３＋である視覚化された細胞の％）。理論上、Ｈスコアは、０〜３００の範囲であり得、視野中の全細胞が３＋のＩＨＣ染色である場合、３００に等しい。いくつかの実施形態において、治療される患者は、ＦＧＦＲ２、例えばＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂについて、＞２０、例えば、＞３０、＞４０、＞５０、もしくは＞１００、または２０〜３００、２０〜１００、２０〜５０、２０〜４０、もしくは２０〜３０の範囲の初期Ｈスコアを有する。いくつかの実施形態において、患者は、＞１０のＨスコアを有し、または１０〜２０もしくは１５〜２０の範囲内である。他の実施形態において、患者は、０〜１０のＨスコアを有し、これは、過剰発現がないことを示し得る。
いくつかの実施形態において、がん、例えば、胃癌は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現していること及び／またはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有することが既に決定されている。他の実施形態において、本明細書の方法は、例えば、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体による治療を行うに値するかどうかを決定するために、治療の実施前に、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ発現及びＦＧＦＲ２遺伝子増幅状態の一方または両方を評価する。いくつかの実施形態において、本明細書の方法は、（ａ）腫瘍細胞の少なくとも１０％における２＋もしくは３＋のＩＨＣシグナルによって示されるように、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現していること及び／または（ｂ）ｃｔＤＮＡにおけるＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有することが決定されている胃癌を治療するために使用される。いくつかの実施形態において、本明細書の方法は、（ａ）腫瘍細胞の少なくとも１０％における３＋のＩＨＣシグナルによって示されるように、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現していること及び／または（ｂ）ｃｔＤＮＡにおけるＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有することが決定されている胃癌を治療するために使用される。
投与経路、担体及び追加の医薬組成物
種々の実施形態において、抗体は、限定するものではないが、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、口腔内、直腸、腹腔内、皮内、局所、経皮、及び髄腔内、または移植もしくは吸入を含む、様々な経路によって、ｉｎ ｖｉｖｏ投与され得る。対象の抗体は、固体、半固体、液体または気体の形態の調製物に製剤化され得、これらには、限定するものではないが、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、浣腸剤、注射剤、吸入剤及びエアゾール剤が含まれる。抗体をコードする核酸分子は、文献に記載されているように、金微粒子上にコーティングされ、微粒子銃装置または「遺伝子銃」によって、皮内送達されてもよい（例えば、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５６：１５２−１５４（１９９２）参照）。適切な製剤及び投与経路は、目的の用途に応じて選択され得る。
種々の実施形態において、抗体を含む組成物は、薬学的に許容される多種多様な担体を含む製剤として提供される（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）参照）。ビヒクル、アジュバント及び希釈剤を含む、薬学的に許容される様々な担体が利用可能である。更に、薬学的に許容される種々の補助物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤、安定剤、湿潤剤なども利用可能である。非限定的な例示的担体には、生理食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール及びこれらの組み合わせが含まれる。
本明細書に記載される抗ＦＧＦＲ２抗体と、本明細書に記載されるオキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法剤のうちの１つ以上とを含む組成物もまた、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、ＦＧＦＲ２阻害剤及び化学療法剤は、一緒に混ざることがないように、例えば、別個の容器内にそれぞれ含まれるか、または単一容器の別個の区画内にそれぞれ含まれる。いくつかの実施形態において、組成物は、がん治療における使用のための説明書などの使用説明書を含む。
以下で論じる実施例は、純粋に本発明の例示を目的にし、決して本発明を限定するとみなされるものではない。実施例は、以下の実験が実施された実験の全てであることまたは唯一の実験であることを示すものではない。
実施例１：これまでに未治療の進行性胃癌または胃食道癌を有する患者における、修正版ＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の、第１相の用量設定安全性導入段階に続く、第３相無作為化二重盲検プラセボ対照試験
プロトコルの概要
以下のプロトコルを最大２５０の異なる試験施設で世界的に行う。試験は、パート１：第１相の用量設定安全性導入段階及びパート２：第３相試験の２つのパートで行う。
パート１の主要目的は、（ａ）進行性消化管（ＧＩ）腫瘍の患者に固定用量の持続静注５−フルオロウラシル、ロイコボリン及びオキサリプラチン（ｍＦＯＬＦＯＸ６）と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの推奨用量（ＲＤ）を決定すること、ならびに（ｂ）ＧＩ腫瘍の患者にｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの漸増用量の安全性プロファイルを評価することである。パート１の副次的目的は、（ａ）ＧＩ腫瘍の患者にｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂへの長期曝露の安全性及び忍容性を評価すること、（ｂ）ＧＩ腫瘍の患者にｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの薬物動態（ＰＫ）プロファイルを特徴付けること、ならびに（ｃ）抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの免疫原性を特徴付けることである。パート１はまた、ＧＩ腫瘍患者の血液及び毛嚢試料中の探索的バイオマーカーの評価により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの薬力学（ＰＤ）プロファイルを特徴付ける。
パートＩの主要エンドポイントは、試験責任医師によって抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに関係すると評価されたグレード２以上の有害事象（ＡＥ）の発生及び用量制限毒性（ＤＬＴ）と定義された臨床検査異常である。パート１の副次的エンドポイントは、（ａ）ＡＥの発生、臨床検査異常、角膜及び網膜所見、ならびに心電図（ＥＣＧ）異常、（ｂ）血清中濃度−時間プロファイルから得られる抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＫパラメーター、例えば、血清中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、最高血清中濃度（Ｃｍａｘ）、トラフ血清中濃度（Ｃｔｒｏｕｇｈ）、クリアランス（ＣＬ）、消失半減期（ｔ１／２）、分布容積及び蓄積率（適切かつ該当する場合）、ならびに（ｃ）免疫原性試験によって決定される、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに対する免疫応答である。このパートはまた、血液及び毛嚢試料中のバイオマーカーを探索してもよい。
パート２では、主要目的は、ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌または胃食道癌（以後、胃癌またはＧＣと称される）を有する患者の無増悪生存期間（ＰＦＳ）の解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利益を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価することである。副次的目的は、（ａ）ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の全生存期間（ＯＳ）の解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利益を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること、（ｂ）ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性及び忍容性を、ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者のプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること、（ｃ）ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者で、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＫプロファイルを特徴付けること、（ｄ）抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの免疫原性を特徴付けること、ならびに（ｅ）治療前及び治療中の腫瘍生検での免疫細胞浸潤及び他の探索的バイオマーカーの分析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＤプロファイルを、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して特徴付けることである。試験はまた、（ａ）盲検下独立審査委員会（ＢＩＲＣ）の増悪評価に基づいたＰＦＳの解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利益を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること、（ｂ）ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の客観的奏効率（ＯＲＲ）の解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利益を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること、（ｃ）ＢＩＲＣの増悪評価に基づいたＯＲＲの解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利点を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること、（ｄ）ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の１年のＯＳの解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利点を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること、（ｅ）ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の奏功持続期間（ＤＯＲ）の解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利点を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること、（ｆ）ＦＧＦＲ２状態（腫瘍組織及び／または血液ベース生検［ｃｔＤＮＡ］アッセイ）と臨床アウトカムとの関連性を探索すること、（ｇ）腫瘍組織のＦＧＦＲ２状態と血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイを使用したＦＧＦＲ２増幅との一致を探索すること、（ｈ）ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の血液試料中の探索的バイオマーカーの評価により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＤプロファイルを、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して特徴付けること、ならびに（ｉ）抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂをｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の患者報告アウトカム（ＰＲＯ）及び生活の質（ＱＯＬ）アウトカムを、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価することを行ってもよい。
パート２のエンドポイントには、無作為化から、試験責任医師の評価に基づいて放射線学的に増悪とされた日（ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準ずる）またはあらゆる原因による死亡日のいずれか早いほうまでの期間として定義される主要エンドポイントＰＦＳ、及び様々な副次的エンドポイントが含まれる。副次的エンドポイントには、（ａ）無作為化日からあらゆる原因による死亡までの期間として定義されるＯＳ、（ｂ）ＲＥＣＩＳＴｖ１．１に準じた、試験責任医師による腫瘍病変評価に基づく客観的な腫瘍縮小効果、（ｃ）ＡＥの発生、臨床検査異常、角膜及び網膜所見、ならびにＥＣＧ異常、（ｄ）血清中濃度−時間プロファイルから得られる、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与された場合のＲＤでの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＫパラメーター、例えば、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｃｔｒｏｕｇｈ、ＣＬ、ｔ１／２、分布容積、及び蓄積率（適切かつ該当する場合）、（ｅ）免疫原性試験によって決定される免疫応答、ならびに（ｆ）治療前及び治療中の腫瘍生検試料での免疫細胞浸潤レベル及び他の探索的バイオマーカーが含まれる。試験はまた、（ａ）少なくとも１回の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を受け、１年後生存している患者の割合として定義される、１年のＯＳ、（ｂ）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に準じて試験責任医師によって決定される奏功を有する患者に限定され、かつ、ＲＥＣＩＳＴｖ１．１に準じて試験責任医師によって決定される最初の奏功から増悪または死亡のいずれか早いほうまでの期間として定義される、ＤＯＲ、（ｃ）腫瘍組織及び／または血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイで特定されたＦＧＦＲ２状態とＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に準じた客観的な腫瘍縮小効果との相関関係、（ｄ）腫瘍組織で特定されたＦＧＦＲ２状態と血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイにおけるＦＧＦＲ２増幅との間の相関関係、（ｅ）探索的血液ベースバイオマーカー、ならびに（ｆ）ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ及びＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０で測定したときのＱｏＬのベースラインからの変化を評価してもよい。
試験デザインは、以下のとおりである。試験は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤ及び有効性を評価するための２パート多施設試験である。試験は、ＦＧＦＲ２ｂ＋胃癌患者における、オープンラベルパート１用量漸増、及び無作為化二重盲検プラセボ対照パート２試験を含む。パート１は、適格性のある進行性ＧＩ腫瘍患者における、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの最低２つの計画用量コホートで構成され、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＲＤを決定する。パート２は、２つの拡大群（１：１の無作為化）で構成され、ＦＧＦＲ２ｂで選択された進行性ＧＣ患者（ＦＧＦＲ２ｂ発現のプロスペクティブ免疫組織化学染色（ＩＨＣ）分析及び／またはＦＧＦＲ２増幅を示す血液ベースアッセイによって決定）における、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせたＲＤでの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性及び有効性を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価することを目的にする。患者は、試験のパート１またはパート２のいずれかに登録され、両方には登録されない。最長１４日（２週間）の初期スクリーニング期間後、患者を１４日サイクルで２週間ごとにｍＦＯＬＦＯＸ６（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂありまたはなし）により治療する。患者は、パート１への登録前にｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を開始しているか、または受けたことがあってよいが、適格性には、患者が少なくとも追加で２回のｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法サイクルを受ける候補であることが求められる（パート１で患者が受け得るＦＯＬＦＯＸサイクル数に上限はなく、投与を受けない場合もある）。パート１に登録した各患者は、安全性評価及び用量制限毒性の発生について、２８日間（ＤＬＴ期間）観察する。ＤＬＴ期間の完了時に、患者は、試験責任医師の判断で、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を継続することができる。追加治療は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、１４日サイクルで２週間ごとに投与することができる。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与回数に上限はない。ＤＬＴ期間以降のｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンの継続投与は、地域の標準治療に従う。パート２では、腫瘍がＩＨＣ（２＋または３＋のスコア）または血液によりＦＧＦＲ２ｂ陽性であり、進行期胃癌に標準的な第一選択療法であるｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を２サイクル完了しており、かつインフォームドコンセントに署名している患者を１：１に無作為化して、１４日サイクルで２週間ごとに、パート１で得られたデータの評価後に選択されたＲＤで、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６により治療を行う。登録患者は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、１４日サイクルで２週間ごとに治療を継続することができる。治療決定は全て、現地の評価を使用して、試験責任医師が行う。増悪または同意の撤回以外の理由による試験治療の中止後は、患者が追加の抗がん療法を開始するまで、腫瘍評価を継続する。加えて、パート１及びパート２の両患者は、ＥＯＴ来院後約３ヶ月±２８日ごとに、最後の患者が試験に登録されてから最大２４ヶ月後まで、または死亡、追跡不能、同意の撤回もしくは試験依頼者による試験中止（いずれか先に生じたもの）まで、施設来院または電話により、生存に関する長期追跡調査を受ける。
パート１は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのオープンラベル用量漸増試験である。パート１に適格である患者は、切除不能、局所進行性または転移性疾患を有する未選択ＧＩ癌（ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する腫瘍ありまたはなし）を有し、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂとｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の両方の投与候補である。ＦＧＦＲ２状態は、ＩＨＣ及び血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイによってレトロスペクティブに決定する。パート１に登録した患者は、以下のように、１４日サイクルで２週間ごとに、固定用量のバックボーン化学療法レジメンのｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた、漸増用量の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂにより治療を行う。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与：抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ ＩＶは、２週間ごとに、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の投与前に、各サイクルの１日目に投与する。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、インラインフィルタ付きの末梢静脈または中心静脈カテーテルを介した約３０分のＩＶ注入として投与する。
バックボーン化学療法レジメン：ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の投与は、各治療サイクルの１日目に、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与後（３０分の休息後）に開始する。ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、次のように、２週間ごとに投与する：オキサリプラチン８５ｍｇ／ｍ２の１２０分にわたるＩＶ注入、ロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２の１２０分にわたるＩＶ注入、続けて、フルオロウラシル（５ＦＵ）４００ｍｇ／ｍ２のＩＶボーラス、続けて、４６時間にわたる持続ＩＶ注入としての５−ＦＵ ２４００ｍｇ／ｍ２。オキサリプラチンの投与は、事前補液を必要としない。セロトニン拮抗薬（デキサメタゾンありまたはなし）などの制吐薬の前投薬は、臨床的に適応とされる場合、試験責任医師の判断で現地の標準治療に準じて使用されてもよい。用量レベル（パート１） パート１では、標準的な３＋３用量漸増デザインで、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの２つの用量コホートが予定され、各コホートに最低３人の患者を登録する。予定される用量レベルは、用量レベル１：１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ、用量レベル２：１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ、用量レベル−１：６ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ（用量レベル１からの減量が必要な場合のみ）である。
全ての用量漸増の決定は、ＤＬＴ、全体的な安全性、及び忍容性の評価に基づくものであり、各コホートに最後に登録された患者が２８日間のＤＬＴ期間を完了した後（２治療サイクルの完了後）に行われる。用量漸増の決定は、試験依頼者及び試験責任医師から構成されるコホート審査委員会（ＣＲＣ）による合意を得る。安全性及びＰＫパラメーターの検討により、最適な標的曝露を達成するために、代替用量レベルによるコホートの追加の決定が通知される場合もある。用量レベル−１は、用量レベル１で２以上のＤＬＴが観察された場合にのみ登録する。ＤＬＴを以下に定義する。
用量漸増の決定は、以下のアルゴリズムに基づく：コホート中３名の患者のいずれにもＤＬＴがない場合、次のコホートを開始することができる；コホート中１／３の患者がＤＬＴを示す場合、同じコホートに更に３人の患者を登録する；コホート中の２／３または３／３患者がＤＬＴを示す場合、登録を中止し、また、先のコホートに３人しかいなかった場合には、下のコホート（すなわち、より低い用量レベル）に更に３人の患者を入れる；コホート中１／６の患者がＤＬＴを示す場合、次のコホートを開始することができる；２／６以上がＤＬＴを示す場合、登録を中止し、また、低い用量レベルで、そのコホートに３人の患者しか登録されていなかった場合には、更に３人の患者を入れる。
パート２に関する抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＲＤは、全体的な安全性、忍容性及びＰＫの評価に基づいて、ＣＲＣによって特定する。したがって、ＲＤは、特定された最大耐量（ＭＴＤ）と同じであってもよいし、同じでなくてもよい。例えば、ＭＴＤに達しない場合、またはパート１の後続の治療サイクルからのデータが安全性プロファイルについての更なる洞察を提供する場合、ＲＤは、ＭＴＤを超えないが、ＭＴＤとは異なる用量であり得る。ＭＴＤは、ＤＬＴ期間中に患者の３３％未満がＤＬＴを経験する最大用量として定義される。所与の用量レベルで患者３人のうち１人にＤＬＴが観察された場合、３人の追加患者が同じ用量レベルに登録される。ある用量レベルで治療された３〜６人の患者のうち２人がＤＬＴを経験するまで、用量漸増を継続することができる（用量レベルは１５ｍｇ／ｋｇを超えない）。次いで、次に低い用量がＭＴＤとみなされる。ＭＴＤまたはＲＤに一旦到達したら、最大６人の追加患者を追加し、その用量レベルにおける安全性及びＰＫを更に探ってもよい。したがって、パート１の合計登録数は、約９〜１２人の患者である。ＤＬＴ期間中に、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を２回受けない患者はいずれも評価不能とみなし、患者を入れ替える。入れ替えられた患者は、試験依頼者との検討後、試験を継続することができる。２８日間のＤＬＴ期間中、２回の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたは２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６を超える投与はしてはならない。ＤＬＴ期間の完了時に、患者は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、１４日サイクルで２週間ごとに投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与を継続することができる。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の用量変更基準は、以下に記載される。増悪以前の何らかの理由によるｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法投与の中止の場合（例えば、蓄積毒性または地域の実施基準に準じたｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の完了）、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、単独療法として継続し、２週間ごとに投与してもよい。化学療法に関係する毒性に起因してｍＦＯＬＦＯＸ６のサイクルが１４日を超えて遅れる場合でも、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与は、遅延させてはならず、２週間ごとの投与が継続してなされ得る。投与遅延後のｍＦＯＬＦＯＸ６の新しいサイクルの開始は、可能であれば、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入投与と同期させる必要がある（ただし、試験要件ではない）。
増悪以前の何らかの理由による抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの中止の場合（例えば、蓄積毒性）、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法は、現地の地域実施基準に従って、または試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、投与を継続することができる。
ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌患者集団における、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性及び有効性をプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して特徴付けることを目的とする、パート２に患者を登録する。パート２への登録は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＲＤ（１５ｍｇ／ｋｇを超えない）がパート１のＣＲＣによって特定された場合にのみ開始する。パート２は、二重盲検であり、合計で最大約３６０人の、ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌患者で構成され、２つの治療群：群１：２週間ごとに投与されるＲＤの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６、または群２：２週間ごとに投与されるプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６のうちの１つの投与を受けるように１：１に無作為化する。パート２の登録開始は、試験依頼者の判断で行われる。第一選択のｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法に適格であり、２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６を受けている、切除不能、局所進行性または転移性疾患を有する胃癌患者が試験のパート２に登録される。患者は、検証済みＩＨＣまたは血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイによってそれぞれ決定されたＦＧＦＲ２ｂ過剰発現及び／またはＦＧＦＲ２増幅に基づいて、登録対象に選択される。ＩＨＣを使用したＦＧＦＲ２ｂ過剰発現または血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイを使用した増幅のいずれも示さない患者は、登録対象にならないが、適格性要件を満たすには、アッセイの一方または両方に基づく陽性で十分である（例えば、血液ベース生検［ｃｔＤＮＡ］アッセイは陽性であるが、ＩＨＣは陰性）。登録患者は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、１４日サイクルで２週間ごとに治療を継続することができる。治療決定は全て、現地を使用して、試験責任医師が行う。
組み入れ基準は、以下のとおりである。試験のパート１またはパート２のいずれかに登録する患者は、１８歳以上であり、切除不能、局所進行性または転移性の疾患を有し、米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータスが０〜１であり、ＦＧＦＲ２状態を決定するための腫瘍組織を提供し、インフォームドコンセントを提出しなければならず、更に、以下に記載する全ての他の適格基準を満たさなければならない。試験のパート１（用量漸増安全性導入段階）に登録する患者は、以下の組み入れ基準も満たさなければならない：ｍＦＯＬＦＯＸ６が適切な治療とみなされる、組織学的または細胞学的に確認された消化管悪性腫瘍（例えば、胃癌、大腸癌、膵臓腺癌）。転移性疾患に対する先の化学療法レジメンが２以下である（５−ＦＵ及び／またはオキサリプラチンによる先のアジュバント化学療法は含まない）。患者は、少なくとも２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の候補者でなければならない。
試験のパート２（用量拡大）に登録する患者は、以下の組み入れ基準も満たさなければならない：組織学的に記録された胃または胃食道接合部腺癌。ＩＨＣによって決定されるＦＧＦＲ２ｂ過剰発現及び／または血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイによって決定されるＦＧＦＲ２増幅。転移性または切除不能な疾患に対する先の化学療法がない（ｍＦＯＬＦＯＸ６の組み入れ基準＃２０に記載されている場合を除く）。先の白金系化学療法がない（ｍＦＯＬＦＯＸ６の組み入れ基準＃２０に記載されている場合を除く）。先のアジュバント療法またはネオアジュバント療法（化学療法及び／または化学放射線療法）を受けている場合は、アジュバント療法の終了と登録との間に６ヶ月を超える期間が経過していなければならない。
患者は、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の候補者であり、試験登録前に２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を受けている必要がある（ただし、２サイクルを超えない）。パート１またはパート２のいずれかに登録する患者は、以下を有する場合、除外される：未治療もしくは症候性の中枢神経系（ＣＮＳ）転移；心機能障害もしくは臨床的に有意な心臓病；高いＱＴｃＦ；有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）グレード２以上の末梢性感覚ニューロパチー；陽性のＨＥＲ２状態；または試験への参加に伴うリスクを高める可能性がある他の状態。これらの組み入れ基準または除外基準の免除は認められない。
パート１では、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、またはプロトコルに規定する試験離脱の他の原因まで、１４日（±３日）ごとに約３０分かけて試験施設で投与される、静脈内バッグに希釈するための滅菌バイアルで提供される。
パート２では、盲検化したＩＰ（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ／プラシーボ）が提供され、パート１のオープンラベル抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂと同様の方法で投与する。
オキサリプラチン、５−ＦＵ及びロイコボリンは、通常の施設実施基準に準じて、各施設に提供される。ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、またはプロトコルに規定する試験離脱の他の原因まで、１４日（±３日）ごとに投与する。最新の地域医薬品添付文書及び完全な処方薬情報を参照する。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＫパラメーター、例えば、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｃｔｒｏｕｇｈ、ＣＬ、ｔ１／２、分布容積及び蓄積率などを評価するために血液試料を採取する。パート１では、以下に概説する時点で、登録された全ての患者の血液試料を採取し、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの血清レベルを測定する。パート２では、以下に概説する時点で、パート２に無作為化された最初の６０人の患者の血液試料を採取する。パート１及びパート２に関して、抗抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体のための血液試料を、指定された時点で採取する。
腫瘍縮小効果の評価は、試験責任医師と、ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１ガイドラインに準じた盲検化した放射線学的中央審査との両方によって行う。ＢＩＲＣによる独立審査に関する完全な詳細は、独立画像審査書に記載される。
有効性の尺度には、臨床検査及び適切なイメージング技術、好ましくは、ＲＥＣＩＳＴガイドラインに準じた適切なスライス厚での胸部、腹部及び骨盤のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンから構成される腫瘍評価が含まれ、必要に応じて、他の評価（磁気共鳴画像法［ＭＲＩ］、Ｘ線、陽電子放射断層撮影［ＰＥＴ］、及び超音波）を実施してもよい。腫瘍評価は、スクリーニング時（パート１及びパート２のサイクル１の１日目から２週間以内）、次いで、１回目の投与から６週間ごとに２４週間、それ以後、約１２週間ごとに実施する。最初の完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）が認められた場合、４〜６週間後に確定のためのスキャンを実施しなければならない。
安全性の尺度には、ＡＥ、血液学的検査、臨床化学検査、尿検査、バイタルサイン、体重、併用薬／処置、ＥＣＯＧパフォーマンスステータス、対象の身体検査、ＥＣＧ及び眼科検査が含まれる。独立したデータ監視委員会（ＤＭＣ）がパート２の治療期間全体を通して定期的に安全性試験データ（ＡＥ及びＳＡＥ）を評価する。
パート１では、ＦＧＦＲ２状態を評価するために提出された腫瘍組織を、ＩＨＣの使用により、ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現についてレトロスペクティブに分析する。試験薬の１回目の投与（サイクル１の１日目）前に、血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイのための試料を採取し、ＦＧＦＲ２増幅についてレトロスペクティブに分析する。探索的バイオマーカー分析のための血液試料は、サイクル１及び２の１日目の投与前、サイクル１の１日目及びサイクル２の１日目の投与から４８時間後（３日目）、２８日間のＤＬＴ期間を超えて治療を継続する患者についてはサイクル３の１日目の投与前、ならびにＥＯＴ来院時に採取する。試料採取が可能な全ての患者から、サイクル１の１日目、サイクル３の１日目、及びサイクル５の１日目の投与前、ならびにＥＯＴ来院時に、毛嚢試料を採取する。
パート２では、ＦＧＦＲ２状態を評価するために腫瘍組織を提出し、これを、ＩＨＣの使用により、ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現についてプロスペクティブに分析する。ｃｔＤＮＡ評価のための血液試料を、ＦＧＦＲ２増幅についてプロスペクティブに分析する。加えて、１回目の投与から６週間ごとに２４週間、それ以後、約１２週間ごとに血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイを長期にわたって採取し、ＦＧＦＲ２増幅についてレトロスペクティブに分析する。パート２の全ての患者については、ＥＯＴ来院時にも試料を採取する。パート２の全ての患者については、ＥＯＴ来院時にも試料を採取する。探索的バイオマーカー分析のための血液試料は、サイクル１及び２の１日目の投与前、サイクル１の１日目及びサイクル２の１日目の投与から４８時間後（３日目）、サイクル３の１日目の投与前、ならびにＥＯＴ来院時に採取する。
新鮮な腫瘍生検は、実施可能な限り必須であり、治療前及びサイクル３の１日目の７日前以内（及び投与の少なくとも２４時間前）の治療中に、パート２に無作為化された最大３０人の患者に対して実施する。各時間点での実施可能性は、試験責任医師によって評価され、患者の安全性に対する考慮を含めるものとする。生検が実施可能でないと試験責任医師が評価した場合、当該決定は、原資料に記録しなければならない。登録前の１２週間以内に生検が採取された患者の場合、当該試料は、ＰＤ分析に十分な試料が使用できるであれば（単一パラフィン包埋ブロックまたは約１０スライド）、新鮮な治療前生検の要件を満たし得る。パート２の患者はまた、試験依頼者との検討後に、腫瘍縮小効果が記録された際の任意選択の治療中生検及び／または腫瘍増悪が記録された任意選択の治療後生検を受け得る。
本試験に計画される総登録数は、最大約３７２人の患者である。標準的な３＋３デザインに準じて、あらゆる用量制限毒性について評価可能な最大約１２人の患者をパート１に登録する。パート２については、ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌を有する最大約３６０人の患者を登録し、１：１に無作為化してｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６を投与することによって、有効性及び忍容性を試験する。適格性のある患者は、地理上の地域（米国及び欧州対アジア対他の地域）、前治療の状況（ｄｅ ｎｏｖｏ対アジュバント／ネオアジュバント）、及び測定可能な疾患状態（測定可能対測定不能）に従って層化する。
パート１では、分析は全て記述的であり、適宜、用量群及び全体で示される。記述統計には、連続変数の観察数、平均、標準偏差、中央値、範囲及び四分位範囲、ならびにカテゴリー変数の数及びパーセントが含まれ、９５％信頼区間が適宜示される。パート２では、主要な有効性解析は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６により治療した患者のＰＦＳの比較である。主要エンドポイントのＰＦＳは、無作為化から、試験責任医師の評価に基づいて放射線学的に増悪とされた日（ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準ずる）またはあらゆる原因による死亡日のいずれか早いほうまでの期間として定義される。副次的有効性エンドポイントは、ＯＳ及びＯＲＲを含む。ＰＦＳには中間解析及び主解析があり、いずれもイベントに基づく解析である。登録患者で４８例のイベント（ＰＦＳ主解析における目標９６例のＰＦＳイベントの５０％）が観察された後の中間分析では、ＰＦＳの無益性試験のみが実施され、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較した抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の組み合わせのＨＲが０．８０６を超えることを回避する。中間解析は、最初の患者が登録されてから約２０ヶ月後に実施されることが推定される。ＰＦＳの主解析は、少なくとも９６例のＰＦＳイベントが最初の１５６人の登録患者で観察されたときに行われ、治療企図（ＩＴＴ）集団を使用して実施する。主解析には、ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準じて試験責任医師が決定した放射線学的増悪イベント及び死亡のみが含まれる。ＰＦＳの主解析は、層別ログランク両側検定（有意水準０．０５）を使用して行う。層化因子は、音声自動応答／Ｗｅｂ登録システム（ＩＸＲＳ）に文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。層別ログランク検定のｐ値が統計的に有意であり（＜０．０５両側）、ＨＲが１未満であれば、ＰＦＳに差はないとする帰無仮説を棄却し、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６を投与した群と比較して、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを投与した群で、ＰＦＳが統計的に延長されると推定する。各治療群に関するＰＦＳ中央値及び関連する９５％信頼区間は、カプランマイヤー法を使用して推定する。ハザード比（ＨＲ＝λ抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ＋ｍＦＯＬＦＯＸ６／λｍＦＯＬＦＯＸ６）は、治療群を唯一の主効果としたＣｏｘ回帰モデルを使用し、ログランク検定で使用したのと同じ層化因子で層化して推定する。層化していないＨＲも示す。
ＯＳ及びＯＲＲを含む副次的エンドポイントの解析は、主要エンドポイントであるＰＦＳが統計的に有意であるときに行い、ＯＳ及びＯＲＲの形式的な仮説は、０．０５の水準で階層的に検定する。ＯＳを最初に検定し、それが有意であれば、次にＯＲＲを検定する。主要エンドポイント及び副次的エンドポイントの検定における第一種過誤の確率は、この固定順序検定手順（水準０．０５）を採用することによって制御される。ＰＦＳの検定が統計的に有意である場合、ＯＳの中間解析及び最終解析が計画される。ＯＳの中間解析は、ＰＦＳの主解析時に行う。ＯＳの解析を行う場合、中間時（すなわち、少なくとも９６例のＰＦＳイベントが観察された時）、及び最終時（すなわち、２４９例の死亡が観察された時）のＯＳ解析は、ＩＴＴ集団で実施する。ＯＳの仮説検定は、層別ログランク両側検定（有意水準０．０５）を使用して行う。ＯＳの中間解析及び最終解析では、群逐次法を使用して、Ｏ’Ｂｒｉｅｎ−Ｆｌｅｍｉｎｇの境界に基づく第一種過誤の確率と、Ｇａｍｍａファミリーに基づく第二種過誤の確率（パラメーター−４）とを確定する。層化因子は、ＩＸＲＳに文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。各治療群に関するＯＳ中央値及び関連する９５％信頼区間は、カプランマイヤー法を使用して推定する。ＨＲは、治療群を唯一の主効果としたＣｏｘ回帰モデルを使用し、ログランク検定で使用したのと同じ層化因子で層化して推定する。層化していないＨＲも示す。ＯＲＲは、試験責任医師によってＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準じて定義される部分奏効または完全奏効のある患者の割合と定義する。ＯＲＲの主解析は、ベースラインを測定することが可能な疾患を有する患者間で実施する。ＯＲＲの解析において、ベースライン後に適切な腫瘍評価を受けていない患者は、ノンレスポンダーとしてカウントする。ＯＲＲの形式的な仮説検定は、層別化したＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ検定を使用して実施する。層化因子は、ＩＸＲＳに文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。
検出力及び標本サイズ：本試験は、ＰＦＳの主解析に十分な検出力を提供するように設計する。プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の６ヶ月投与を受けた患者のＰＦＳ中央値（ｍＰＦＳ）に基づくと、２４ヶ月の受入期間及び６ヶ月の追跡期間後、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較した抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の組み合わせのｍＰＦＳについて、検出力９０％を有する０．５のハザード比（ＨＲ）（両側、α＝０．０５）を示すには、約１５６人の患者（１：１の無作為化）及び目標９６例のＰＦＳイベントが必要である。ＰＦＳの指数分布を仮定すると、これは、６ヶ月から１２ヶ月のｍＰＦＳの増加に該当する。現在の設計では、ＰＦＳの統計的有意性をもたらす最小観察効果は、６ヶ月から９ヶ月の５０％改善（ＨＲ＝０．６７）である。本試験はまた、ＯＳの主解析にも検出力があるようにする。プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の１０ヶ月投与を受けた患者のＯＳ中央値（ｍＯＳ）に基づくと、最後の患者の登録から３６ヶ月の受入期間及び１０ヶ月の追跡期間後、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較した抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の組み合わせのｍＯＳについて、全体の第一種過誤水準０．０５で検出力８０％を有する０．７のＨＲを示すには、試験の登録を最大約３６０人の患者まで継続し、２４９例の死亡イベントを目標にする。ＯＳの指数分布を仮定すると、これは、１０ヶ月から１４．３ヶ月のＯＳ中央値の４３％の増加に該当する。現在の設計では、最終解析においてＯＳの統計的有意性をもたらす最小観察効果は、１０ヶ月から１２．８ヶ月の２８％改善（ＨＲ＝０．７８）である。
安全性解析：安全性の解析は、試験期間中にいずれかの試験薬（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６またはプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６）の投与を受けた全ての患者を含み、治療後のあらゆる安全性情報を提供する。全てのＡＥは、国際医薬用語集（ＭｅｄＤＲＡ）を使用してコードする。試験責任医師は、ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３を使用してＡＥの重症度を分類する。治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、試験薬の１回目の投与以降に発生日を持つあらゆるイベント、または治療前に存在し治療後に悪化したあらゆるイベントと定義する。最終投与日＋３０日より前の発生日であるＴＥＡＥのみを概要表に記載する。ＡＥを経験した患者の数及びパーセンテージは、器官別大分類、基本語、試験薬との関係、及び各治療群の重症度ごとにまとめる。死亡を含むＳＡＥを経験した患者、または試験からの早期離脱もしくは試験薬の中止に関連するＡＥを経験した患者については、患者別のリストを提供する。臨床検査データは、臨床検査の種類ごとにまとめる。試験薬の投与後に異常（すなわち、参照範囲外）及び／または臨床的に有意な異常を経験した患者の数及びパーセンテージを、各臨床検査の測定について示す。各臨床検査の測定は、ベースライン及びその後の全ての治療後予定来院についての記述統計を提供する。ベースラインから治療後来院までの変化も提供する。バイタルサインの記述統計も同様に提供する。加えて、ＣＴＣＡＥグレードのベースラインからのシフト（該当する場合）及び高／低フラグによるシフト（ＣＴＣＡＥグレードが定義されていない場合）を治療群ごとに提示する。安全性エンドポイントの形式比較は計画しない。
ＰＫ解析：ＰＫパラメーターは、非コンパートメント解析を使用して推定されるが、コンパートメント解析を適宜用いてもよい。
プロトコルの詳細
１．序文
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの背景
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体（ＦＧＦＲ）経路のがんにおける役割は、よく知られている。ＦＧＦは、腫瘍細胞の形質転換及び増殖を刺激し、血管新生を刺激することができる。２２のヒトＦＧＦが知られており、個々のＦＧＦの発現は、一般に特定の組織、細胞種及び／または発達段階に限定されている。ＦＧＦシグナル伝達は、ＦＧＦＲ１〜４と呼ばれるＦＧＦ受容体サブタイプを産生する４つの異なる遺伝子によりコードされる膜貫通チロシンキナーゼ受容体ファミリーによって媒介される（Ｔｕｒｎｅｒ ａｎｄ Ｇｒｏｓｅ ２０１０）。
ＦＧＦＲ２は、２つのスプライシングバリアントｂ及びｃを有する。一般に、ＦＧＦＲ２ｂは、上皮起源の組織（例えば、胃、皮膚）に発現する（Ｍｉｋｉ １９９２）。ＦＧＦＲ２ｂを介してシグナル伝達を行う主なリガンドは、ＦＧＦ７、ＦＧＦ１０及びＦＧＦ２２である。ＦＧＦ／ＦＧＦＲ２経路におけるシグナル伝達の変化（例えば、ＦＧＦＲ２ｂタンパク質の過剰発現またはＦＧＦＲ２遺伝子の増幅）は、胃癌、乳癌及び他の癌に関連しており、予後不良を意味すると思われる（Ｗｕ ２０１３，Ｔｕｒｎｅｒ ａｎｄ Ｇｒｏｓｅ ２０１０）。実際、１９９０年には既に、胃癌（約３〜９％）及び乳癌（１〜２％）を有する患者のサブセットが、染色体１０ｑ２６にあるＦＧＦＲ２遺伝子の増幅を持つことが確認された。胃癌では、ＦＧＦＲ２の増幅により、細胞表面上のＦＧＲ２ｂ受容体が高レベルで発現している。
ＦＧＦＲ２ｂ特異的抗体
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ヒトＦＧＦＲ２ｂ受容体（ＮＣＢＩ参照配列ＩＤ ＮＰ＿００１１３８３８５．１）に特異的なヒト化モノクローナル抗体（ＩｇＧ１アイソタイプ）であり、ＦＧＦリガンドが受容体に結合するのを遮断する。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２ｂ受容体アイソフォームの３番目のＩｇ領域を標的にし、この領域は、選択的スプライシングを受け、リガンド特異性を制御している。この抗体は、グリコシル化されているが、ＦＵＴ８遺伝子（α１，６−フコシルトランスフェラーゼ）を欠くチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株で産生されるため、抗体の多糖部分にコアフコースがない。コアフコースの不存在は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩａに対して、フコシル化分子と比較してより高い親和性をもたらし、免疫細胞を媒介にした腫瘍細胞殺傷を潜在的に増強する（Ｓｈｉｎｋａｗａ ２００３）。そのため、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増強するために糖鎖が改変されている（Ｇｅｍｏ ２０１４）。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する胃癌及び乳癌細胞株の細胞培養において、ＦＧＦリガンド刺激によるＦＧＦＲ２ｂリン酸化及び細胞増殖を阻害する。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂはまた、ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する胃及び乳房異種移植モデルにおいて、腫瘍成長を阻害する。したがって、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの３つの潜在的作用機序には、リガンド結合及び下流のシグナル伝達を遮断すること、ＦＧＦＲ２ｂドライバータンパク質の発現を減少させること、ならびにＡＤＣＣを増強することが含まれる。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現し、ＦＧＦＲ２遺伝子の増殖がある、ＦＧＦＲ２ｂが腫瘍成長の誘導因子と考えられる免疫不全マウスの胃癌異種移植片において、完全かつ永続的な腫瘍成長阻害をもたらすことができる（Ｇｅｍｏ ２０１４）。加えて、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２ｂを中程度に発現する４Ｔ１同種移植腫瘍モデルにおいて、ＮＫ細胞の動員及びそれに伴う腫瘍成長の阻害を示す。これらのデータは、ＡＤＣＣが、中程度のＦＧＦＲ２ｂ過剰発現があり、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅のない患者に有効であり得、ＡＤＣＣ活性が、これらの患者における作用機序に対する主な寄与因子である可能性を示唆している。
更に、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＦＧＦＲ２ｂ受容体に特異的であるので、他のＦＧＦ／ＦＧＦＲ（ＦＧＦＲ２ｃを含む）のシグナル伝達に干渉しない。ＦＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）と対照的に、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＦＧＦ２３シグナル伝達を阻害しない。ＦＧＦ２３は、カルシウム／リン酸代謝に関与するリガンドである。したがって、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂによる治療は、ＦＧＦＲ ＴＫＩに関連する著しい用量制限の高リン酸血症を引き起こさないと予想される（Ａｎｄｒｅ ２０１３，Ｂｒｏｗｎ ２００５，Ｄｉｅｎｓｔｍａｎｎ ２０１４，Ｓｅｑｕｉｓｔ ２０１４）。
ｍＦＯＬＦＯＸ６
持続静注５−フルオロウラシル、ロイコボリン、及びオキサリプラチン（ｍＦＯＬＦＯＸ６）は、承認された化学療法剤であり、転移性胃癌の第一選択治療の標準治療である。５−ＦＵは、世界中で胃癌治療に使用されている主な化学療法剤であり、５−ＦＵとの組み合わせ化学療法により臨床アウトカムの改善がもたらされることが研究で示されてから、他の療法と頻繁に併用されている（Ｋｅａｍ ２００８）。標準治療のＡｄｒｕｃｉｌ（登録商標）もまた、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）として知られ、広く使用されている化学療法剤であり、現在、大腸癌、乳癌、胃癌及び膵癌の治療に適応されている。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の開始用量の正当性
この用量漸増安全性導入段階試験のパート１では、２８日サイクルで２週間ごとにＩＶ注入で投与される開始用量１０ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを計画する。
先の第Ｉ相臨床試験において、固形腫瘍患者（ｎ＝１９）及び胃癌患者（ｎ＝８）で用量漸増を実施した。用量漸増中、いずれの用量レベルでも用量制限毒性（ＤＬＴ）はなかった。したがって、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの最大耐量（ＭＴＤ）は、特定されなかった。目標薬物濃度の前臨床モデリング及び観察された忍容性、ならびに観察された有効性のエビデンスに基づいて、１５ｍｇ／ｋｇを拡大用量として選択した。２週間ごとの１５ｍｇ／ｋｇ投与で、患者の大部分において、ＯＣＵＭ２ ＦＧＦＲ２増殖胃癌異種移植モデルを使用したマウス有効性試験から得られた定常状態における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂトラフ濃度（Ｃｔｒｏｕｇｈ ｓｓ）６０μｇ／ｍＬに到達することが予想される。
集団ＰＫ解析の公表データに基づくと、ベバシズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）、トラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）、ペルツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．２０１６）、及びラムシルマブ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）を含む抗体治療薬の人種ごとのＰＫに、臨床的に有意な差は観察されなかった。重要なことは、進行中の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ試験の臨床データが、１０ｍｇ／ｋｇの用量がヒトで許容されることを裏付けていることである。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂはまた、５３人の患者を最大１５ｍｇ／ｋｇの用量で治療した世界で初のヒト試験において、許容される安全性プロファイルを示している。
ｍＦＯＬＦＯＸ６の開始用量には、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、３５０ｍｇのフォリン酸カルシウム（フォリン酸）、４００ｍｇ／ｍ２用量のフルオロウラシル、及び２４００ｍｇ／ｍ２用量のフルオロウラシルが含まれる。オキサリプラチン及びフォリン酸カルシウムは、三方活栓／Ｙサイトコネクタを使用して、ＩＶ注入により同時投与する。用量の少ないフルオロウラシルをＩＶボーラスで投与し、用量のより多いフルオロウラシルをＩＶ注入で４６時間かけて投与する。ｍＦＯＬＦＯＸ６は、１４日ごとに投与する。
パート２プレスクリーニングの根拠
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、胃癌腫瘍に発現したときのＦＧＦＲ２ｂ受容体を認識するように設計された抗体である。現在の仮説は、ＦＧＦＲ２ｂの存在が、ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌または胃食道癌を有する患者（パート２）の応答の重要な予測因子であるというものである。これは、ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する腫瘍のみが抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ治療に応答した異種移植研究）における前臨床観察に基づくとともに、ＦＧＦＲ２ｂ陽性患者で抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ活性の程度が大きいことを示している、進行中の世界で初のヒト試験の初期結果にも基づいている。
パート２の患者は、検証済みＩＨＣ（２＋または３＋のスコア）または血液ベース生検アッセイによってそれぞれ決定されたＦＧＦＲ２ｂ過剰発現及び／またはＦＧＦＲ２増幅に基づいて、登録対象に選択される。ＩＨＣを使用したＦＧＦＲ２ｂ過剰発現または血液ベース生検アッセイを使用した増幅のいずれも示さない患者は、登録対象にならないが、適格性要件を満たすには、アッセイの一方または両方に基づく陽性で十分である（例えば、血液ベース生検アッセイは陽性であるが、ＩＨＣは陰性）。
パート２の患者は、転移性または切除不能な疾患に関する先の化学療法を受けていない者であり、先のアジュバント療法またはネオアジュバント療法（化学療法及び／または化学放射線療法）を受けている場合は、アジュバント療法の終了と登録との間に６ヶ月を超える期間が経過していなければならない。これらの患者は、切除不能、局所進行性または転移性の疾患を有し、したがって、その診断直後に治療（ｍＦＯＬＦＯＸ６）を開始することが期待される。
ＩＨＣの結果は、完了するまでに最大で数週間を要することがあるので、血液ベースアッセイで陰性である患者は、ＩＨＣによる適格性の確認を待つ間、化学療法による治療開始が遅れることがある。このため、試験に参加する全ての患者は、登録時に２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６を受けていることが求められる。患者は、２サイクル超または２サイクル未満の投与を受けることができない。これは、試験参加者間で治療の不均衡が生じ、試験結果の解釈を潜在的に混乱させる可能性があるためである。ｍＦＯＬＦＯＸ６の最初の２サイクルを投与するのにかかる時間の間に、ＩＨＣの結果を得ることができると予想される。この期間中、患者は、まだ試験に登録していないため、ｍＦＯＬＦＯＸ６は、現地の実施基準に従って投与され、有害事象は、試験の一部として記録されない。患者は、血液及びＩＨＣアッセイについて、プレスクリーニングインフォームドコンセントを提出する。ＩＨＣの結果が陽性であれば、患者は、２コース目のｍＦＯＬＦＯＸ６を完了し、スクリーニング期間に入る。次いで、インフォームドコンセントの提出を含む全ての他の適格基準を満たしたら、試験への登録となる。ＩＨＣの結果が陰性であり、血液ベース生検も陰性である場合、患者は、試験参加に適さない。
腫瘍生検及び血液評価の根拠
本試験のパート２の患者は、組織の結果と血液の結果の両方が必要である。そのため、患者は、組織と血漿の両方を提供できない場合、適格でない。ＩＨＣを使用したＦＧＦＲ２ｂ過剰発現または血液ベース生検アッセイを使用した増幅のいずれも示さない患者は、登録対象にならないが、適格性要件を満たすには、アッセイの一方または両方に基づく陽性で十分である（例えば、血液ベース生検アッセイは陽性であるが、ＩＨＣは陰性）。血液検査は、ＦＧＦＲ２のＤＮＡ増幅を明らかにするのに対し、ＩＨＣ検査は、タンパク質発現の程度を示す。Ｆｉｖｅ Ｐｒｉｍｅは、ＩＨＣによってＦＧＦＲ２ｂを検出するために感度及び特異性が最適化されている、非臨床用途の抗ＦＧＦＲ２ｂ抗体を開発している。
胃癌試料を評価する試験において、ＦＧＦＲ２増幅は、ＩＨＣのよって検出したとき、有意なＦＧＦＲ２ｂ表面発現と一貫して関連している（Ｇｅｍｏ ２０１４）。前臨床試験で観察された抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの抗腫瘍作用が、腫瘍細胞株におけるＦＧＦＲ２ｂの過剰発現に基づいて予想された。ＦＧＦＲ２ｂの過剰発現のない患者は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６による治療から有意な利益を得る可能性は低い。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂによる治療について、ＦＧＦＲ２ｂ陽性腫瘍を有する患者を選択することは、進行中の世界で初の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの第１相ヒト試験のデータによって裏付けられている。試験目的及びエンドポイント
パート１：主要目的
進行性消化管（ＧＩ）腫瘍の患者に固定用量の持続静注５−フルオロウラシル、ロイコボリン及びオキサリプラチン（ｍＦＯＬＦＯＸ６）と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの推奨用量（ＲＤ）を決定すること。
ＧＩ腫瘍の患者にｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの漸増用量の安全性プロファイルを評価すること。
パート１：副次的目的
ＧＩ腫瘍の患者にｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂへの長期曝露の安全性及び忍容性を評価すること。
ＧＩ腫瘍の患者にｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの薬物動態（ＰＫ）プロファイルを特徴付けること。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの免疫原性を特徴付けること。
パート１：探索的目的
ＧＩ腫瘍患者の血液及び毛嚢試料中の探索的バイオマーカーの評価により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの薬力学（ＰＤ）プロファイルを特徴付けること。
パート２：主要目的
ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌または胃食道癌（以後、胃癌またはＧＣと称される）を有する患者の無増悪生存期間（ＰＦＳ）の解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利益を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
パート２：副次的目的
ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の全生存期間（ＯＳ）の解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利益を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性及び忍容性を、ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者のプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者で、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＫプロファイルを特徴付けること。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの免疫原性を特徴付けること。
治療前及び治療中の腫瘍生検での免疫細胞浸潤及び他の探索的バイオマーカーの分析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＤプロファイルを、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して特徴付けること。
パート２：探索的目的
盲検下独立審査委員会（ＢＩＲＣ）の増悪評価に基づいたＰＦＳの解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利益を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の客観的奏効率（ＯＲＲ）の解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利益を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
ＢＩＲＣの増悪評価に基づいたＯＲＲの解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利点を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の１年のＯＳの解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利点を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の奏功持続期間（ＤＯＲ）の解析により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床上の利点を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
ＦＧＦＲ２状態（腫瘍組織及び／または血液ベース生検）と臨床アウトカムとの関連性を探索すること。
腫瘍組織のＦＧＦＲ２状態と血液ベース生検を使用したＦＧＦＲ２増幅との一致を探索すること。
ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の血液試料中の探索的バイオマーカーの評価により、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＤプロファイルを、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して特徴付けること。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂをｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、ＦＧＦＲ２ｂで選択されたＧＣを有する患者の患者報告アウトカム（ＰＲＯ）及び生活の質（ＱＯＬ）アウトカムを、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価すること。
パート１：主要試験エンドポイント
試験責任医師によって抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに関係すると評価されたグレード２以上の有害事象（ＡＥ）の発生及び用量制限毒性（ＤＬＴ）と定義された臨床検査異常。
パート１：副次的エンドポイント
ＡＥの発生、臨床検査異常、角膜及び網膜所見、ならびに心電図（ＥＣＧ）異常。
血清中濃度−時間プロファイルから得られる抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＫパラメーター、例えば、血清中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、最高血清中濃度（Ｃｍａｘ）、トラフ血清中濃度（Ｃｔｒｏｕｇｈ）、クリアランス（ＣＬ）、消失半減期（ｔ１／２）、分布容積及び蓄積率（適切かつ該当する場合）。
免疫原性試験によって決定される免疫応答を評価すること。
パート１：探索的エンドポイント
血液及び毛嚢試料中の探索的バイオマーカー。
パート２：主要エンドポイント
無作為化から、試験責任医師の評価に基づいて放射線学的に増悪とされた日（ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準ずる）またはあらゆる原因による死亡日のいずれか早いほうまでの期間として定義される、ＰＦＳ。
パート２：副次的エンドポイント
無作為化日からあらゆる原因による死亡までの期間として定義される、ＯＳ。
ＲＥＣＩＳＴｖ１．１に準じた、試験責任医師による腫瘍病変評価に基づく客観的奏効率（ＯＲＲ）。
ＡＥの発生、臨床検査異常、角膜及び網膜所見、ならびに心電図（ＥＣＧ）異常。
血清中濃度−時間プロファイルから得られる、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与された場合のＲＤでの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＫパラメーター、例えば、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｃｔｒｏｕｇｈ、ＣＬ、ｔ１／２、分布容積、及び蓄積率（適切かつ該当する場合）。
免疫原性試験によって決定される免疫応答。
治療前及び治療中の腫瘍生検試料での免疫細胞浸潤レベル及び他の探索的バイオマーカー。
パート２：探索的エンドポイント
少なくとも１回の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を受け、１年後生存している患者の割合として定義される、１年のＯＳ。
ＲＥＣＩＳＴｖ１．１に準じて試験責任医師によって決定される奏功を有する患者に限定され、かつ、ＲＥＣＩＳＴｖ１．１に準じて試験責任医師によって決定される最初の奏功から増悪または死亡のいずれか早いほうまでの期間として定義される、ＤＯＲ。
腫瘍組織及び／または血液ベース生検で特定されたＦＧＦＲ２状態とＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に準じた客観的な腫瘍縮小効果との相関関係。
腫瘍組織で特定されたＦＧＦＲ２状態と血液ベース生検におけるＦＧＦＲ２増幅との間の相関関係。
血液試料中の探索的バイオマーカー。
ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ及びＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０で測定したときのＱｏＬのベースラインからの変化。
試験の全体的なデザイン及び計画
概要
本試験は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤ及び有効性を評価するための２パート多施設試験である。試験は、オープンラベルパート１用量漸増安全性導入段階、及び無作為化二重盲検プラセボ対照パート２用量拡大を含む。
パート１は、適格性のある進行性ＧＩ腫瘍患者における、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの最低２つの計画用量コホートで構成され、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＲＤを決定する。パート２は、２つの拡大群（１：１の無作為化）で構成され、ＦＧＦＲ２ｂで選択された進行性ＧＣ患者（ＦＧＦＲ２ｂ発現のプロスペクティブＩＨＣ分析及び／またはＦＧＦＲ２増幅を示す血液ベースアッセイによって決定）における、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせたＲＤでの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性及び有効性を、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して評価することを目的にする。患者は、試験のパート１またはパート２のいずれかに登録され、両方には登録されない。
最長１４日（２週間）の初期スクリーニング期間後、患者を１４日サイクルで２週間ごとにｍＦＯＬＦＯＸ６（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂありまたはなし）により治療する。患者は、パート１への登録前にｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を開始しているか、または受けたことがあってよいが、適格性には、患者が少なくとも追加で２回のｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法サイクルを受ける候補であることが求められる（パート１で患者が受け得るＦＯＬＦＯＸサイクル数に上限はなく、投与を受けない場合もある）。
パート１に登録した各患者は、安全性評価及び用量制限毒性の発生について、２８日間（ＤＬＴ期間）観察する。ＤＬＴ期間の完了時に、患者は、試験責任医師の判断で、治療を継続することができる。追加治療は、臨床的に適応とされる場合、その後、１４日サイクルで２週間ごとに投与することができる。
パート２では、腫瘍がＩＨＣまたは血液によりＦＧＦＲ２ｂ陽性であり、進行期胃癌に標準的な第一選択療法であるｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を２サイクル完了しており、かつインフォームドコンセントに署名している患者を１：１に無作為化して、１４日サイクルで２週間ごとに、パート１で得られたデータの評価後に選択されたＲＤで、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせたプラシーボにより治療を行う。
初期スクリーニング期間
パート１
スクリーニング期間は、患者が同意説明文書（ＩＣＦ）に署名したときに開始する。全ての患者が抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの１回目の投与前の１４日（２週間）以内にスクリーニング評価を受ける。同意説明文書の署名後、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの１回目の投与前に生じる試験手順に関係しないいずれのＡＥもこの期間中には収集しない。患者は、パート１への登録前にｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を開始しているか、または受けたことがあってよいが、適格性には、患者が少なくとも追加で２回のｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法サイクルを受ける候補であることが求められる（パート１で患者が受け得るＦＯＬＦＯＸサイクル数に上限はなく、投与を受けない場合もある）。
パート２
パート２では、腫瘍がＩＨＣまたは血液によりＦＧＦＲ２ｂ陽性であり、進行期胃癌に標準的な第一選択療法であるｍＦＯＬＦＯＸ化学療法を２サイクル完了しており、かつインフォームドコンセントに署名し、他の適格基準を満たす患者を登録する。
パート２の適格性は、ＩＨＣ及び血液によるＦＧＦＲ２ｂ陽性検査のみを伴うプレスクリーニング期間と、残りの全ての適格基準を確認するスクリーニング期間の２段階で評価する。
無作為化
パート１
パート１は、オープンラベル試験である。適格と判断された患者を順次登録する。
パート２
プレスクリーニング期間中、ＦＧＦＲ２ｂ陽性について患者を検査する。一方または両方の方法（ＩＨＣ及び／または血液）による検査陽性の患者をスクリーニング期間に入れる。（注：血液検査が陽性であれば、ＩＨＣの結果を待つ必要はない。この時点で、患者は適格であるので、スクリーニング期間を開始するものとする）。
適格性を満たす患者をｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせたプラシーボまたはｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに１：１に無作為化する。
パート１（用量漸増安全性導入段階）
パート１は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのオープンラベル用量漸増試験である。パート１に適格である患者は、切除不能、局所進行性または転移性疾患を有する未選択ＧＩ癌（ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する腫瘍ありまたはなし）を有し、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂとｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の両方の投与候補である。ＦＧＦＲ２状態は、ＩＨＣ及び血液ベース生検によってレトロスペクティブに決定する。
パート１に登録した患者は、以下のように、１４日サイクルで２週間ごとに、固定用量のバックボーン化学療法レジメンのｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた、漸増用量の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂにより治療を行う。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与：
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ ＩＶは、２週間ごとに、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の投与前に、各サイクルの１日目に投与する。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、インラインフィルタ付きの末梢静脈または中心静脈カテーテルを介した約３０分のＩＶ注入として投与する。
バックボーン化学療法レジメン：
ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の投与は、各治療サイクルの１日目に、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与後（３０分の休息後）に開始する。ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、次のように、２週間ごとに投与する：
オキサリプラチン８５ｍｇ／ｍ２の１２０分にわたるＩＶ注入、ロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２の１２０分にわたるＩＶ注入、続けて、フルオロウラシル（５−ＦＵ）４００ｍｇ／ｍ２のＩＶボーラス、続けて、４６時間にわたる持続ＩＶ注入としての５−ＦＵ ２４００ｍｇ／ｍ２。
オキサリプラチンの投与は、事前補液を必要としない。セロトニン拮抗薬（デキサメタゾンありまたはなし）などの制吐薬の前投薬は、臨床的に適応とされる場合、試験責任医師の判断で現地の標準治療に準じて使用されてもよい。
用量レベル（パート１）
パート１では、標準的な３＋３用量漸増デザインで、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの２つの用量コホートが予定され、各コホートに最低３人の患者を登録する。予定される用量レベルは、以下のとおりである。
Figure 2020520903
全ての用量漸増の決定は、ＤＬＴ、全体的な安全性、及び忍容性の評価に基づくものであり、各コホートに最後に登録された患者が２８日間のＤＬＴ期間を完了した後（２治療サイクルの完了後）に行われる。用量漸増の決定は、試験依頼者及び試験責任医師から構成されるコホート審査委員会（ＣＲＣ）による合意を得る。安全性及びＰＫパラメーターの検討により、最適な標的曝露を達成するために、代替用量レベルによるコホートの追加の決定が通知される場合もある。用量レベル−１は、用量レベル１で２以上のＤＬＴが観察された場合にのみ登録する。
パート１の用量漸増の決定には、表２に示すアルゴリズムが使用される：
Figure 2020520903
パート２に関する抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＲＤは、全体的な安全性、忍容性及びＰＫの評価に基づいて、ＣＲＣによって特定する。したがって、ＲＤは、特定された最大耐量（ＭＴＤ）と同じであってもよいし、同じでなくてもよい。例えば、ＭＴＤに達しない場合、またはパート１の後続の治療サイクルからのデータが安全性プロファイルについての更なる洞察を提供する場合、ＲＤは、ＭＴＤを超えないが、ＭＴＤとは異なる用量であり得る。
ＭＴＤは、ＤＬＴ期間中に患者の３３％未満がＤＬＴを経験する最大用量として定義される。所与の用量レベルで患者３人のうち１人にＤＬＴが観察された場合、３人の追加患者が同じ用量レベルに登録される。ある用量レベルで治療された３〜６人の患者のうち２人がＤＬＴを経験するまで、用量漸増を継続することができる（用量レベルは１５ｍｇ／ｋｇを超えない）。次いで、次に低い用量がＭＴＤとみなされる。
ＭＴＤまたはＲＤに一旦到達したら、３人の追加患者を追加し、その用量レベルにおける安全性及びＰＫを更に探ってもよい。したがって、パート１の合計登録数は、約９〜１２人の患者である。
ＤＬＴ期間中に、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を正確に２回受けない患者はいずれも評価不能とみなし、患者を入れ替える。入れ替えられた患者は、試験依頼者との検討後、試験を継続することができる。２８日間のＤＬＴ期間中、２回の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたは２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６を超える投与はしてはならない。
ＤＬＴ期間の完了時に、患者は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、１４日サイクルで２週間ごとに投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与を継続することができる。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与回数に上限はない。ＤＬＴ期間以降のｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンの継続投与は、地域の標準治療に従う。
増悪以前の何らかの理由によるｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法投与の中止の場合（例えば、蓄積毒性または地域の実施基準に準じたｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の完了）、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、単独療法として継続し、２週間ごとに投与してもよい。化学療法に関係する毒性に起因してｍＦＯＬＦＯＸ６のサイクルが１４日を超えて遅れる場合でも、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与は、遅延させてはならず、２週間ごとの投与が継続してなされ得る。投与遅延後のｍＦＯＬＦＯＸ６の新しいサイクルの開始は、可能であれば、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入投与と同期させる必要がある（ただし、試験要件ではない）。
増悪以前の何らかの理由による抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの中止の場合（例えば、蓄積毒性）、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法は、現地の地域実施基準に従って、または試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、投与を継続することができる。
パート２：無作為化二重盲検用量拡大
ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌患者集団における、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性及び有効性をプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して特徴付けることを目的とする、パート２に患者を登録する。パート２への登録は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＲＤ（１５ｍｇ／ｋｇを超えない）がパート１のＣＲＣによって特定された場合にのみ開始する。
パート２は、二重盲検であり、合計で最大約３６０人の、ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌患者で構成され、２つの治療群のうちの１つの投与を受けるように１：１に無作為化する：
群１：２週間ごとに投与されるＲＤの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６、または
群２：２週間ごとに投与されるプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６。
パート２の登録開始は、試験依頼者の判断で行われる。
第一選択のｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法に適格であり、２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６を受けている、切除不能、局所進行性または転移性疾患を有する胃癌患者が試験のパート２に登録される。患者は、検証済みＩＨＣまたは血液ベース生検アッセイによってそれぞれ決定されたＦＧＦＲ２ｂ過剰発現及び／またはＦＧＦＲ２増幅に基づいて、登録対象に選択される。
登録患者は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、１４日サイクルで２週間ごとに治療を継続することができる。治療決定は全て、現地の評価を使用して、試験責任医師が行う。増悪または同意の撤回以外の理由による試験治療の中止後は、患者が追加の抗がん療法を開始するまで、腫瘍評価を継続する。加えて、パート１及びパート２の両患者は、ＥＯＴ来院後約３ヶ月±２８日ごとに、最後の患者が試験に登録されてから最大２４ヶ月後まで、または死亡、追跡不能、同意の撤回もしくは試験依頼者による試験中止（いずれか先に生じたもの）まで、施設来院または電話により、生存に関する長期追跡調査を受ける。
増悪以前の何らかの理由によるｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法投与の中止の場合（例えば、蓄積毒性または地域の実施基準に準じたｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の完了）、ＩＰは、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、単独療法として継続し、２週間ごとに投与してもよい。化学療法に関係する毒性に起因してｍＦＯＬＦＯＸ６のサイクルが１４日を超えて遅れる場合でも、ＩＰ投与は、遅延させてはならず、２週間ごとの投与が継続してなされ得る。投与遅延後のｍＦＯＬＦＯＸ６の新しいサイクルの開始は、可能であれば、ＩＰの注入投与と同期させる必要がある（ただし、試験要件ではない）。
増悪以前の何らかの理由によるＩＰの中止の場合（例えば、蓄積毒性）、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法は、現地の地域医療に従って、または試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、投与を継続することができる。
試験スキーマ
試験スキーマを図１（パート１）及び図２（パート２）に示す。
試験デザインの根拠
本試験は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤ及び有効性を評価するための２パート多施設試験である。試験は、オープンラベルパート１用量漸増安全性導入段階、及び無作為化二重盲検プラセボ対照パート２用量拡大を含む。
パート１は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの用量漸増安全性導入段階試験である。標準的な３＋３デザインを使用する。パート１に登録した患者は、１４日サイクルで２週間ごとに、固定用量のバックボーン化学療法レジメンのｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた、漸増用量の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂにより治療を行う。パート１に登録した各患者は、安全性評価及び用量制限毒性の発生について、２８日間（ＤＬＴ期間）観察し、データを評価した後に、パート２のＲＤを選択する。
パート１に適格である患者は、切除不能、局所進行性または転移性疾患を有する未選択ＧＩ癌（ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する腫瘍ありまたはなし）を有し、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂとｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の両方の投与候補である。ＦＧＦＲ２状態は、ＩＨＣ及び血液ベース生検によってレトロスペクティブに決定する。
パート２では、選択した患者を１：１に無作為化して、１４日サイクルで２週間ごとに、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６またはプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６により治療する。パート２の患者は、正確に２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６を完了しなければならない（それ以上でも以下でもない）。
無作為化した患者におけるＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌患者のＰＦＳ、ＯＲＲ、及びＯＳを測定すると、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較して、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与した場合における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの臨床所の利点が強調され得る。
試験適格性及び離脱基準
患者及び試験施設の計画数
パート１では、標準的な３＋３用量漸増デザインで、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの２用量コホートが予定され、各コホートに最低３人の患者を登録する。ＭＴＤまたはＲＤに一旦到達したら、３人の追加患者を追加し、その用量レベルにおける安全性及びＰＫを更に探ってもよい。したがって、パート１の合計登録数は、約９〜１２人の患者である。
パート２では、最大約３６０人のＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌患者を１：１に無作為化して、１４日サイクルで２週間ごとに、パート１で得られたデータの評価後に選択されたＲＤで、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせたプラシーボにより治療する。パート２の登録開始は、試験依頼者の判断で行われる。
本試験に計画される総登録数は、最大約３７２人の患者である。
試験は、最大２５０の世界の試験施設で行う。
全コホートの組み入れ基準
試験のパート１またはパート２のいずれかに登録する患者は、以下の組み入れ基準を全て満たさなければならない：
１）切除不能、局所進行性または転移性の疾患
２）あらゆる試験関連評価の前に、施設内審査委員会（ＩＲＢ）／独立倫理委員会（ＩＥＣ）が承認した同意説明文書（ＩＣＦ）を理解し、これに署名すること
３）平均余命が少なくとも３ヶ月
４）米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータスが０〜１
５）ＩＣＦに署名した時点で１８歳以上
６）登録前の７２時間以内の血清β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（β−ｈＣＧ）妊娠検査が陰性（妊娠可能な女性のみ）
７）性的に活性な患者（妊娠可能な女性及び男性）においては、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの最終投与から６ヶ月後まで、２つの効果的な避妊法を使用する意志があり、そのうちの１つは、物理的バリア法（コンドーム、ペッサリー、または子宮頸／膣円蓋キャップ）でなければならない。他の効果的な避妊形態には、次が含まれる。
・スクリーニングから少なくとも６ヶ月前の永続的な不妊手術（子宮摘出及び／または両側卵巣摘出、または手術による両側卵管結紮、または精管切除）
・試験前の少なくとも９０日間、安定した経口避妊薬治療もしくは子宮内器具もしくはインプラント装置を使用しているか、または生活様式として性行為を自制している妊娠可能な女性
８）次の検査値によって確認された、十分な血液学的及び生物学的機能：
・骨髄機能
・絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ
・血小板＞１００×１０９／Ｌ
・ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ
・肝機能
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦３×正常値上限（ＵＬＮ）；肝転移がある場合、≦５×ＵＬＮ
・ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ
・腎機能
・クレアチニンクリアランス計算値≧５０ｍＬ／分
９）常用量の抗凝固薬を服用している患者は、安定用量のワルファリンを服用し、患者の状態の治療域内で範囲内の国際標準比（ＩＮＲ）でなければならず、または安定用量の低分子量ヘパリンを服用していなければならない
１０）測定可能または測定不能な疾患
１１）ＦＧＦＲ２状態を決定するための腫瘍組織
試験のパート１（用量漸増安全性導入段階）に登録する患者は、以下の組み入れ基準も満たさなければならない：
ｍＦＯＬＦＯＸ６が適切な治療とみなされる、組織学的または細胞学的に確認された消化管悪性腫瘍（例えば、胃癌、大腸癌、膵臓腺癌）
転移性疾患に対する先の化学療法レジメンが２以下である（５−ＦＵ及び／またはオキサリプラチンによる先のアジュバント化学療法は含まない）。
患者は、少なくとも２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の候補者でなければならない。
試験のパート２（用量拡大）に登録する患者は、以下の組み入れ基準も満たさなければならない：
１）組織学的に記録された胃または胃食道接合部腺癌
２）ＩＨＣによって決定されるＦＧＦＲ２ｂ過剰発現及び／または血液ベース生検によって決定されるＦＧＦＲ２増幅
３）転移性または切除不能な疾患に対する先の化学療法がない（ｍＦＯＬＦＯＸ６の組み入れ基準＃２０に記載されている場合を除く）
４）先の白金系化学療法がない（ｍＦＯＬＦＯＸ６の組み入れ基準＃２０に記載されている場合を除く）
５）先のアジュバント療法またはネオアジュバント療法（化学療法及び／または化学放射線療法）を受けている場合は、アジュバント療法の終了と登録との間に６ヶ月を超える期間が経過していなければならない
６）患者は、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の候補者であり、試験登録前に２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を受けている必要がある（ただし、２サイクルを超えない）
全コホートの除外基準
パート１またはパート２のいずれかに登録する患者は、以下の基準のいずれかに該当する場合、除外される：
未処置もしくは症候性の中枢神経系（ＣＮＳ）転移。無症候性ＣＮＳ転移を有する患者は、少なくとも４週間臨床的に安定しており、かつ、ＣＮＳ疾患に関連する症状を管理するための手術、放射線または任意のコルチコステロイド療法などの介入を必要としない限り、適格である
以下のいずれかを含む、心機能障害または臨床的に有意な心疾患：
・登録前６ヶ月以内の不安定狭心症
・登録前６ヶ月以内の急性心筋梗塞
・ニューヨーク心臓協会分類ＩＩ〜ＩＶのうっ血性心不全
・制御されていない高血圧（最適な医療管理にもかかわらず、＞１６０／９０と定義される）
・β遮断薬またはジゴキシン以外の抗不整脈療法を必要とする心不整脈
・活動性冠動脈疾患
７）ＱＴｃＦ＞４５０ミリ秒（男性）または＞４７０ミリ秒（女性）
８）有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）グレード２以上の末梢性感覚ニューロパチー
９）登録前１４日以内の全身治療を必要とする活動性感染症または任意の制御されていない感染症
１０）既知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連疾患、または慢性Ｂ型もしくはＣ型肝炎の病歴
１１）間質性肺疾患（例えば、肺炎または肺線維症）の病歴
１２）出血傾向または凝固障害のエビデンスまたは病歴
１３）登録前２８日以内の任意の試験薬または試験療法
１４）登録２８日以内の放射線治療。患者は、全ての放射線療法関連毒性から回復していなければならない。登録８週間以内に放射性医薬品（ストロンチウム、サマリウム）の使用がない
１５）ＦＧＦ−ＦＧＦＲ経路の任意の選択的阻害剤（例えば、ＡＺＤ４５４７、ＢＧＪ３９８、ＪＮＪ−４２７５６４９３、ＢＡＹ１１７９４７０）による前治療
１６）ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレード１を超える、前治療からの継続中の有害作用（グレード２の脱毛症は除く）
１７）本臨床試験の登録２８日以内、または本臨床試験中における別の治療臨床試験への参加
１８）角膜欠陥、角膜潰瘍、角膜炎、円錐角膜、角膜移植の病歴、または眼科医の見解で抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ治療にリスクをもたらし得る他の既知の角膜異常
１９）陽性のＨＥＲ２状態（３＋の陽性ＩＨＣ検査または２＋のＩＨＣ及び陽性ＦＩＳＨによって定義）。ＨＥＲ２状態は、胃癌のスコアリングガイドライン（ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ）に基づく。
２０）登録前２８日以内の大きな外科的処置は認められない。局所／硬膜外麻酔に必要な手術は、登録から少なくとも７２時間前に完了していなければならない。全ての症例において、患者は、治療実施前に十分に回復し、安定していなければならない
２１）妊娠中または授乳中の女性（患者が試験薬投与中に授乳を中断し、試験中止から６ヶ月後に再開する場合を除く）；妊娠可能な女性は、試験中に妊娠を検討してはならない
２２）臨床試験と相容れない任意の重篤または不安定な随伴性全身性障害の存在（例えば、薬物乱用、精神障害、または制御されていない併発病、例えば、活動性感染症、動脈血栓症、及び症候性肺塞栓症）
２３）試験への参加に伴うリスクを高める可能性があるか、または試験結果の解釈に干渉する可能性があり、試験責任医師の見解で、患者の試験への参加が適切ではないとされる、任意の他の状態の存在（例えば、ジヒドロピリミジン欠損または胸水）
２４）ポリソルベートを含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ製剤、または白金含有薬剤、フルオロウラシルもしくはロイコボリンの成分に対する既知のアレルギーまたは過敏症
２５）試験責任医師の見解上、試験治療薬の効果決定に影響を及ぼさない別の悪性腫瘍を除く、以前の悪性腫瘍の病歴
これらの組み入れ基準または除外基準の免除は認められない。
患者の離脱及び入れ替え
以下のいずれかに該当する場合、患者は、プロトコルに規定された治療法を中止しなければならない：
・患者またはその法律上認められた代理人からの要請による同意の撤回
・試験責任医師が評価した患者の疾患の進行
・許容できない安全上のリスクを患者にもたらす任意の事象
・臨床状態の評価に重大な影響を及ぼす併発病
・試験中の任意の時点での陽性妊娠検査
・試験依頼者またはその認定代理人の特定の要請（例えば、患者の安全上の理由により試験が中止された場合）
患者の特定及び登録
患者は、書面によるインフォームドコンセントを提出することができ、全ての組み入れ基準を満たし、いずれの除外基準も満たさないことを要する。試験責任医師及び試験依頼者または試験に登録した任意の患者の被指名人による組み入れ基準または除外基準の免除は認められない。患者の登録前に、全ての適格基準を満たさなければならない。試験のパート１に適格である患者は、最初に利用可能なコホートに登録される。患者は、試験のパート１またはパート２のいずれかに登録することができ、両方には登録されない。
パート２では、患者は、最初に、血液ベース生検アッセイと組織検査の両方が必要なプレスクリーニングを受ける。ＦＧＦＲ２陽性と判定された患者は、直ちにスクリーニング期間に入ることができる（すなわち、陽性の血液検査結果を有する患者は、ＩＨＣ結果を待つ必要はない（表３参照）。パート２の患者はまた、ｍＦＯＬＦＯＸ６のサイクルを２回（ただし、２回を超えない）を完了していなければならない。
Figure 2020520903
ａ：両検査は、中央検査室で実施される。
ｂ：２×１０ｍＬが必要
ｃ：ＩＨＣ：最低でも５スライドが必要。２＋または３＋のスコアを陽性とみなす。
パート１及び２の両方において、試験責任医師は、登録前に、不適格性の所見がエラーと思われる場合、または急性所見が反復検査で適格基準を満たす可能性がある場合、適格性の臨床検査及びバイタルサイン／ＥＣＧを繰り返すことができる。血液学的検査及び血液化学検査の結果は、適格性を確認するために、投与後７２時間以内に得なければならない。
試験薬
識別情報
パート１では、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、またはプロトコルに規定する試験離脱の他の原因まで、１４日（±３日）ごとに約３０分かけて試験施設で投与される、静脈内バッグに希釈するための滅菌バイアルで提供される。
パート２では、プラシーボは、盲検化していない施設薬剤師によって提供される。参加者を［１：１］の比で無作為に割り付け、盲検化したＩＰ（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ／プラシーボ）を投与する。試験責任医師は、試験の全期間を通して、各参加者が割り付けられた試験治療薬について、盲検化したままである。この盲検を維持するために、盲検化していない薬剤師が全試験治療薬の再構築及び分配に責任を負う。品質保証監査の場合、監査人（複数可）は、施設（複数可）にある盲検化していない試験治療記録にアクセスすることができ、無作為化／分配が正確に行われているかどうか検証する。
オキサリプラチン、５−ＦＵ及びロイコボリンは、通常の施設実施基準に準じて、各施設に提供される。ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、またはプロトコルに規定する試験離脱の他の原因まで、１４日（±３日）ごとに投与する。最新の地域医薬品添付文書及び完全な処方薬情報を参照する。
投与
１．ｍＦＯＬＦＯＸ６
オキサリプラチン、５−ＦＵ及びロイコボリンは、通常の施設実施基準に準じて、各施設に提供される。ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、増悪、許容できない毒性、またはプロトコルに規定する試験離脱の他の原因まで、１４日（±３日）ごとに投与する。
ｍＦＯＬＦＯＸ６の開始用量には、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、３５０ｍｇのフォリン酸カルシウム（フォリン酸）、４００ｍｇ／ｍ２用量のフルオロウラシル、及び２４００ｍｇ／ｍ２用量のフルオロウラシルが含まれる。オキサリプラチン及びフォリン酸カルシウムは、三方活栓／Ｙサイトコネクタを使用して、ＩＶ注入により同時投与する。用量の少ないフルオロウラシルをＩＶボーラスで投与し、用量のより多いフルオロウラシルをＩＶ注入で４６時間かけて投与する。ｍＦＯＬＦＯＸ６は、１４日ごとに投与することができる。
最新の医薬品添付文書及び完全な処方薬情報を参照する。
２．オープンラベル抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ（パート１）及び盲検化したＩＰ（パート２）
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、本プロトコルに記載の手順を使用して、本試験の患者にのみ投与する。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの用量は、サイクル１の１日目の体重に基づき、患者の体重がサイクル１の１日目から１０％を超えて変化する場合は調節する。
薬剤師（または他の責任者）は、投与のための溶液を調製する。バイアルの数を計算した後、患者の体重に基づき、試験薬品を０．９％塩化ナトリウム溶液に希釈する。調製した抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、調製後８時間以内に投与するものとする（周囲温度）。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、医師の管理下、インラインフィルタ付きの末梢静脈または中心静脈カテーテルを介したＩＶ注入で約３０分かけて投与する。パート２について、治療割り付けに関して盲検化されていない薬剤師がプラシーボを提供する。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入は、早期に停止、軽減、中断、または中止しなければならない。患者が急性輸液反応を起こす場合、注入中だけでなく、注入後３０分ごと最低２時間、及び急性輸液反応が解決するまで、患者のバイタルサイン（体温、血圧、脈拍、及び呼吸数）をモニタリングするものとする。
患者は、試験参加期間中、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの２回の投与が２週間の間隔をおいて行われる。パート１では、ＤＬＴ期間の完了時に、増悪なく忍容性があれば、患者は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、１４日サイクルで２週間ごとに投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与を継続することができる。
開始用量及び用量変更
３．パート１：用量漸増安全性導入段階
パート１に登録した患者は、上記のように、１４日サイクルで２週間ごとに、固定用量のバックボーン化学療法レジメンのｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた、漸増用量の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂにより治療を行う。
用量変更基準
４．オープンラベル抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ（パート１）及び盲検化したＩＰ（パート２）
パート１及びパート２：抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの用量の減量は、パート１のＤＬＴ期間を過ぎて治療を受けている患者、またはパート２の任意の患者に対し、表４に概説するガイドラインに準じて、認めることができる。これらのガイドラインに該当しないと試験責任医師がみなす、用量の減量または中断は、試験依頼者または被指名人との検討及びその承認を必要とする。
Figure 2020520903
患者は、イベントがベースラインまたはグレード１以下に回復した場合、表４に概説するガイドラインに準じて、試験薬を再開することができる。
計画された投与来院には±３日の期間がある。患者は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与を７日以内に２回連続で受けてはならない。各サイクルの最初の投与を各サイクルの１日目とみなす。サイクルは、治療遅延がない限り、１４日ごとに繰り返す。
各患者の開始用量を超える患者内の用量漸増は、認められない。ある理由で患者の用量が減量され、その理由がもう関係なくなった場合、試験依頼者による検討及び承認後に、最初に割り当てられた用量への用量漸増が行われ得る。
５．ｍＦＯＬＦＯＸ６
パート１及びパート２：患者は、ｍＦＯＬＦＯＸ６の毒性に関して詳細にモニタリングしなければならない。５−ＦＵ及びオキサリプラチンの用量調整は、治療中の患者に認められ得るが、ＤＬＴ期間中にｍＦＯＬＦＯＸのいずれかの成分の用量調整または遅延を必要とする患者は、その用量調整または遅延が抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに関係すると思われるＡＥに起因する場合を除き、評価可能とみなされない。この場合、ＡＥは、ＤＬＴとみなされる（ＤＬＴの定義については下記参照）。パート１のＤＬＴ期間を過ぎた患者またはパート２の任意の患者についてのｍＦＯＬＦＯＸのいずれかの成分の用量調整は、プロトコルに概説されるガイドラインに準じて、認められる。
増悪前にオキサリプラチン投与が何らかの理由で中止された場合、５−ＦＵ／ロイコボリン療法は、増悪、許容できない毒性、または試験離脱の他の原因まで、２週間ごとのスケジュールで継続することができる。
ｍＦＯＬＦＯＸ６の毒性に対する用量調整について、表５に示す。
Figure 2020520903
次のプロトコルから改変：Ｌｏｕｐａｋｉｓ Ｆ，Ｃｒｅｍｏｌｉｎｉ Ｃ，Ｍａｓｉ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｉｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ＦＯＬＦＯＸＩＲＩ ａｎｄ ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｆｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４；３７１：１６０９−１８．ＤＯＩ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ１４０３１０８。
用量制限毒性
ＤＬＴは、治療の最初の２８日間に起きた以下のイベントのいずれかとして定義され、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに関して、試験責任医師が評価する。適宜、イベントは、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ（第４．０３版）に従って分類する。
・５日間を超えるＡＮＣ＜０．５×１０９／Ｌまたは発熱性好中球減少症（すなわち、ＡＮＣ＜１．０×１０９／Ｌ及び３８．３℃超の１回の体温、または１時間を超える３８℃以上の発熱）。施設内の標準手順に準じてＧ−ＣＳＦの使用が認められる。
・血小板＜２５×１０９／Ｌまたは血小板＜５０×１０９／Ｌであり、医療介入が必要な出血
・長期の（７日を超える）グレード３の血小板減少症
・グレード４の貧血（すなわち、生命を脅かす影響；緊急介入が必要なもの）
・７日以内に解決しないグレード２以上の眼に関する何らかのＡＥ
・ＡＳＴ／ＡＬＴ＞３×ＵＬＮ、及び同時に発生する総ビリルビン＞２×ＵＬＮであり、がんによる肝機能とは無関係のもの
・グレード３以上の何らかの非血液学的ＡＥ（全身治療で十分に制御できる場合、悪心、嘔吐、及び下痢を除く）。グレード３または４の臨床検査値で、試験責任医師及び試験依頼者の同意により臨床的に重要ではないとされるものは、ＤＬＴとみなされない。
・ｍＦＯＬＦＯＸ６のいずれかの成分の少なくとも４日の減量または遅延をもたらす、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに関係するいずれかの有害事象
推奨用量（ＲＤ）及び最大耐量（ＭＴＤ）
最低用量レベルでの毒性
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの最初の用量レベル（１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗ）で予想外にもＭＴＤを上回る場合、続行方法に関する決定は、安全性、忍容性、及びＰＫデータに基づいてなされ、試験責任医師と試験依頼者の間で合意を得る。
用量レベル−１（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ ６ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗ；３〜６人の対象）は、用量レベル１で２以上のＤＬＴが観察された場合にのみ登録する。
コホート内の用量漸増
パート１では、患者内の用量漸増は認められない。
パート２では、患者は、パート１で決定されたＲＤで治療され、用量漸増は認められない。
試験薬注入中の投与中断
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入は、注入中にグレード３以上の何らかのＡＥが発生した場合、停止しなければならない。注入中に、気管支痙攣または呼吸困難が患者に発生した場合、注入は、停止するものとする。急性輸液反応の症状には、発熱、冷え、悪寒、蕁麻疹、頭痛を伴う低血圧及び高血圧、喘鳴、呼吸困難、低酸素症、ならびに肺浸潤が含まれ得る。
加えて、重症度の低いＡＥ（グレード１または２）が注入中に発生した場合は、試験責任医師の判断で、注入速度を減速してもよいし、注入を停止してもよい。グレード３以下の重度のＡＥが４時間以内に解消しない場合、以前の半分の速度で注入を開始することができる。注入を再開した任意の時点で同じＡＥが同じ重症度で再度現れた場合、その注入を中止するものとし、試験依頼者または試験依頼者の被指名人との協議なく、試験薬の更なる投与は行わない。
注入を完了する前に患者が急性輸液反応を起こした場合、注入を停止しなければならず、そのイベントが完全に解決するまで、兆候及び症状、ならびに現地の臨床プロトコルに従って、迅速に患者を管理及びモニタリングする必要がある。注入関連事象がグレード１または２のいずれかであり、注入日に完全に解決した患者については、試験責任医師の判断で、前投薬をしながら、より遅い速度で注入を再開することができる。当該患者への後続の注入は全て、前投薬をしながら、注入速度を下げて投与するものとする。前投薬は、適応される場合、コルチコステロイド、ジフェンヒドラミン、アセトアミノフェン及び／または気管支拡張薬などの薬物療法が含まれ得る。グレード３以上の注入関連有害事象を経験した患者、ならびに前投薬及び減速注入にもかかわらず、注入再開後に注入関連反応が再開した患者については、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを永続的に中止する。
患者が急性輸液反応を起こす場合、注入中だけでなく、注入後３０分ごと最低２時間、及び急性輸液反応が解決するまで、患者のバイタルサイン（体温、血圧、脈拍、及び呼吸数）をモニタリングするものとする。
ｍＦＯＬＦＯＸ６の毒性に起因する投与の中断及び遅延を表５に記載する（ロイコボリン、５−ＦＵ及びオキサリプラチンの製品ラベル参照）。
評価のパラメーター及び方法
安全性パラメーター
安全性の尺度には、ＡＥ、血液学的検査、臨床化学検査、尿検査、バイタルサイン、体重、併用薬／処置、ＥＣＯＧパフォーマンスステータス、対象の身体検査、ＥＣＧ及び眼科検査が含まれる。
１．１ 患者選択のための腫瘍分析
１．１．１ パート１
パート１に適格である患者は、切除不能、局所進行性または転移性疾患を有する未選択ＧＩ癌（ＦＧＦＲ２ｂを過剰発現する腫瘍ありまたはなし）を有し、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂとｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の両方の投与候補である。ＦＧＦＲ２状態は、ＩＨＣ及び血液ベース生検によってレトロスペクティブに決定する。
１．１．２ パート２
本試験のパート２の患者は、腫瘍組織分析及び血液試料分析に同意しなければならない。患者は、検証済みＩＨＣまたは血液ベース生検アッセイによってそれぞれ決定されたＦＧＦＲ２ｂ過剰発現及び／またはＦＧＦＲ２増幅に基づいて、登録対象に選択される。ＩＨＣを使用したＦＧＦＲ２ｂ過剰発現または血液ベース生検アッセイを使用した増幅のいずれも示さない患者は、登録対象にならないが、適格性要件を満たすには、アッセイの一方または両方に基づく陽性で十分である（例えば、血液ベース生検アッセイは陽性であるが、ＩＨＣは陰性）。登録のためのＦＧＦＲ２ｂ過剰発現分析に適切な腫瘍標本を得ることは、各試験責任医師の責任である。腫瘍スライドまたは腫瘍ブロック標本の処理、ラベリング及び出荷の手順は、標本採取キットとともに配布されるラボマニュアルに詳述されている。
第三者の臨床検査室は、検証済みＩＨＣ及び血液ベースアッセイをそれぞれ使用してＦＧＦＲ２ｂ発現及びＦＧＦＲ２増幅分析を実施する。
パート２について、腫瘍及び血液標本を受領したら、可能な限り効率的に分析を実施し、試験責任医師または被指名人に結果を知らせる。
１．２ 薬力学解析のための新鮮な腫瘍生検
１．２．１ パート２のみ
腫瘍微小環境における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの薬力学作用を評価するために、腫瘍生検試料も採取する。これらの生検試料は、治療前及び治療中に取得し、免疫浸潤及び選択した腫瘍マーカーの発現について調べる。耐性の機序を理解するために、治療中または治療後に応答及び／または悪化した腫瘍の任意選択の生検も取得する。腫瘍生検試料は、限定するものではないが、ＩＨＣ、ｑＲＴ−ＰＣＲ、遺伝子突然変異検出、及び蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を含む、様々な方法を使用して、免疫または疾患関連遺伝子及び／またはタンパク質の発現、ならびに免疫細胞集団の存在について評価することができる。これらの試料はまた、ＲＮＡシーケンシングを行い、遺伝子発現経路における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの作用、及び応答または応答耐性に関連して特定された遺伝子発現シグネチャーを決定することができる。これらの分析は、将来の治療効果の予測に役立ち得る。腫瘍バイオマーカー発現の他の方法も評価される。
新鮮な生検は、実施可能な限り、原発腫瘍または転移性腫瘍部位のものが必須であり、スクリーニング時（投与前少なくとも２４時間）及びサイクル３の１日目の７日前以内の治療中（及び投与前少なくとも２４時間）に、パート２に無作為化された最大３０人の患者に対して行われる。登録前の１２週間以内に生検が採取された患者の場合、この試料は、ＰＤ分析に十分な試料が使用できるであれば（単一パラフィン包埋ブロックまたは約１０スライド）、新鮮な治療前生検の要件を満たし得る。
パート２の患者は、腫瘍縮小効果が記録された場合、腫瘍評価後２８（±７）日以内に、任意選択の治療中生検も受け得る。パート２の患者はまた、腫瘍増悪が記録された場合、ＥＯＴ来院時に、任意選択の治療後生検を受け得る。各場合において、生検を行う前に、試験依頼者との協議を行わなければならない。両生検は、任意選択である。
各時間点での新鮮な腫瘍試料採取の実施可能性は、試験責任医師によって評価され、患者の安全性に対する考慮を含めるものとする。生検が実施可能でないと試験責任医師が評価した場合、当該決定は、原資料に記録しなければならない。
生検病変は、炎症、出血または寸法変化を起こす可能性があり、不正確な腫瘍測定につながることがある。したがって、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１の基準によって応答を評価する際には、生検病変を標的病変に使用しないことが強く推奨される。これらの生検試料は、摘出、切開またはコア針生検とする。穿刺吸引生検または他の細胞学標本は、下流のバイオマーカー分析には十分でない。パラフィン包埋ブロックまたは非染色スライドの形態の腫瘍組織標本は、ＩＨＣ中央評価に提出する。
１．３ 腫瘍評価
腫瘍評価は、臨床検査及び適切なイメージング技術（好ましくは、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に準じた適切なスライス厚でのＣＴスキャン）から構成されるものとし、必要に応じて、他の評価（ＭＲＩ、放射線写真、ＰＥＴ、及び超音波）を実施してもよい。ベースライン時の病変を検出するために使用したのと同じ方法を使用して、臨床試験を通して同じ病変を追跡する。スクリーニングの腫瘍スキャンは、サイクル１の１日目の治療開始から２週間以内に行わなければならない。
腫瘍縮小効果の評価は、試験責任医師と、ＲＥＣＩＳＴ １．１ガイドラインに準じた盲検化した放射線学的中央審査との両方によって行う。
腫瘍スキャンは、スクリーニング時（パート１及びパート２のサイクル１の１日目から２週間以内）及びサイクル４の１日目、サイクル７の１日目、サイクル１０の１日目、サイクル１３の１日目の開始前７日以内、それ以後、約１２週間ごとに実施する。最初のＣＲまたはＰＲが認められた場合、４〜６週間後に確定のためのスキャンを実施しなければならない。
増悪または同意の撤回以外の理由による試験治療の中止後は、患者が追加の抗がん療法を開始するまで、腫瘍評価を継続する。
１．３．１ 血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）
パート１では、試験薬の１回目の投与（サイクル１の１日目）前に、血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイのための試料を採取し、ＦＧＦＲ２増幅についてレトロスペクティブに分析する。
パート２では、プレスクリーニングの血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイを行う。この試料は、ＦＧＦＲ２増幅についてプロスペクティブに分析する。加えて、１回目の投与から６週間ごとに２４週間、それ以後、約１２週間ごとに血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）アッセイを長期にわたって採取し、ＦＧＦＲ２増幅についてレトロスペクティブに分析する。パート２の全ての患者については、ＥＯＴ来院時にも試料を採取する。
１．４ 毛嚢を使用した薬力学バイオマーカー分析
パート１のみで、眉毛または頭皮からの毛嚢（約１０、入手可能である場合）を、試料採取が可能な全ての患者から採取する。毛嚢は、ＦＧＦＲ２ｂ受容体を発現することが知られており、ＦＧＦＲ２ｂのレベル及び下流のシグナル伝達の変化を使用することにより、ＦＧＦＲ２ｂ受容体を効果的に遮断するために必要な抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの用量と下流のシグナル伝達とを相関付けることができ、試験のパート２のＲＤを選択する指針を得ることができる。
１．５ 血液を使用した薬力学バイオマーカー分析
ＦＧＦＲ経路（例えば：ＦＧＦ７、ＦＧＦ１０）の探索的バイオマーカー分析のための血清試料は、付録３で指定する時点での投与前に、全ての患者から採取する。
１．６ ｃｔＤＮＡのための血液試料
１．７ 腫瘍生検を使用した薬力学バイオマーカー分析
免疫細胞浸潤レベル及び他の探索的バイオマーカーは、全ての患者から得た治療前及び治療中の腫瘍生検試料で分析する。
１．８ ＦＣＧＲ多型
ＦＣＧＲ２Ａ及びＦＣＧＲ３ＡなどのＦｃガンマ受容体に頻繁に生じる多型についても血液試料を採取する。これらの遺伝子は、予測される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの作用機序であるＡＤＣＣ経路の不可欠な部分である白血球上のＦｃガンマ受容体を発現する。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに対する患者応答との相関を得るために、試験の完了時にレトロスペクティブ分析のためのデータを収集する。これらのバイオマーカー検査は、探索的とみなされる。
１．９ 生活の質スケール
ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ生活の質（ＱｏＬ）に関する質問票及びＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０を投与前の複数の機会で実施する（時点については、付録１参照）。
ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ質問票は、ＥｕｒｏＱｏｌグループによって開発され、臨床的及び経済的評価に関する効用値を提供する、標準化された尺度である。記述システム及び視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）を使用する。記述システムには、移動の程度、身の回りの管理、ふだんの活動、痛み／不快感、及び不安／ふさぎ込みの５つの項目があり、各項目には、問題はない、少し問題がある、中程度の問題がある、かなり問題がある、及び極度の問題があるの５つのレベルがある。
回答者は、５項目のそれぞれにおいて、最も適切な状態に対する四角にチェックマークをつけることで、自身の健康状態を示すように求められる。５項目に対する数字を合わせて、回答者の健康状態を記述する５桁の数字にすることができる。ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ記述システムによって定義された健康状態を１つの指標値に変換し、効用値を算出する。ＶＡＳは、回答者が２０ｃｍの垂直ＶＡＳで自己評価した健康状態を表現するものであり、エンドポイントは、「想像できる最も良い健康状態」及び「想像できる最も悪い健康状態」と記載されている。
欧州がん治療研究機関（ＥＯＲＴＣ）の生活の質に関する質問票（ＱＬＱ）は、国際的な臨床試験に参加しているがん患者の健康に関連する生活の質を評価するための統合システムである。ＥＯＲＴＣは、ＱｏＬ評価にモジュール式アプローチを使用しており、基本質問票（ＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０）と、必要に応じて一緒に実施される、腫瘍部位、治療法またはＱｏＬの項目に限定されたモジュール（例えば、胃癌専用モジュールはＱＬＱ−ＳＴＯ２２である）とから構成される。
患者は、５つの機能スケール（身体、役割、感情、社会、及び認知）、３つの症状スケール（疲労、悪心及び嘔吐、ならびに疼痛）、及び全体的な健康状態／ＱＯＬスケール、及び６つの単一項目（呼吸困難、不眠、食欲不振、便秘、下痢、及び経済的困難）に対する回答を提供する。
１．１０ ＥＣＯＧパフォーマンスステータス
ＥＣＯＧパフォーマンスステータスは、付録１に概説する時点で全ての患者において評価する。ＥＣＯＧパフォーマンスステータスは、患者の疾患の進行状況を評価し、患者の日常生活能力への疾患の影響を評価し、適切な治療及び予後を決定するために使用される尺度である。ＥＣＯＧスケールを付録４に示す。
１．１１ 薬物動態パラメーター
血清中抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ濃度を決定するための血液試料は、薬物動態学、免疫原性及び薬力学の血液試料採取の試験フローチャート（付録３）に概説するように、各患者から取得する。
２． 試験の実施
２．１ 患者評価の概要
詳細な患者評価のスケジュールを付録１に示す。安全性に関する臨床検査評価の一覧を付録２に示す。試料採取ならびにＰＫ、ＰＤ及び免疫原性データ処理の手順を付録３のフローチャートに記載する。
２．２ 来院による試験評価及び手順
２．２．１ プレスクリーニング期間（パート２のみ−試験前）
あらゆる試験関連手順の前に、署名がなされた書面によるインフォームドコンセント（プレスクリーニングＩＣＦ）を回収しなければならない。
・ＦＧＦＲ２ｂ発現のプロスペクティブＩＨＣ分析及びＦＧＦＲ２増幅を示す血液ベースアッセイ（上記参照）。
２．２．２ スクリーニング期間（−１４日目〜０日目）
あらゆる試験関連手順の前に、署名がなされた書面によるインフォームドコンセントを回収しなければならない。試験への参加に完全に同意した患者は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの最初の注入投与前の１４日（２週間）以内にスクリーニング評価を受ける。以下の手順を実施する。
・適格基準の審査／確認
・病歴及び疾患歴（薬歴を含む）
・アーカイブまたは新たに入手した材料からの腫瘍組織の採取（パート１及びパート２への登録に必要）
・人口統計及びベースライン特性
・完全な身体検査（体重及び身長を含む）
・ＥＣＯＧパフォーマンスステータス評価
・バイタルサイン（血圧、脈拍、呼吸、及び体温［℃］）
・記録前に５分休息した後の１２誘導ＥＣＧ
・包括的眼科検査
・安全性に関する血液検査（付録２参照）
・妊娠可能な女性については、７２時間前以内の血清妊娠検査（ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン［β−ＨＣＧ］）
・尿検査（タンパク質、グルコース、血液、ｐＨ及びケトンに関するディップスティックを含む）
・治療開始前１４日以内に実施される腫瘍評価。臨床検査及び適切なイメージング技術を含み、必要に応じて他の評価（ＭＲＩ、放射線写真、ＰＥＴ、及び超音波）を実施
・無作為化（パート２の患者のみ）
・パート２に無作為化される最大３０人の患者に関して：投与前少なくとも２４時間の原発性または転移性腫瘍部位の新鮮な組織生検。登録前の１２週間以内に生検が採取された患者の場合、この試料は、ＰＤ分析に十分な試料が使用できるであれば（単一パラフィン包埋ブロックまたは約１０スライド）、新鮮な治療前生検の要件を満たし得る。
・付録３に概説する、血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）の試料採取
・ＦＯＬＦＯＸ投与（パート１については、患者は、試験登録前にｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を開始していてもよく、適格であるには、少なくとも２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の候補者でなければならない。パート２については、患者は、無作為化前に２サイクルのｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を完了している必要がある）。
・ＡＥ報告（該当する場合）
２．２．３ 治療期間
２．２．３．１ サイクル１、１日目
以下の手順を実施する。
・適格基準の審査／確認
・スクリーニングからのあらゆる変化を捕捉するための病歴、疾患歴及び薬歴の更新
・限定的な身体検査（体重及び口内検査を含む）
・患者報告アウトカム（ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ及びＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０）
・投与前、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入開始から０．５、１、２及び４時間後におけるバイタルサイン（血圧、脈拍、呼吸、及び体温［℃］）
・安全性に関する血液検査。適格性を確認するために、試験薬投与前７２時間以内に結果を得ること（付録２参照）。
・妊娠可能な女性については、投与７２時間前以内の血清妊娠検査（β−ＨＣＧ）
・尿検査（タンパク質、グルコース、血液、ｐＨ及びケトンに関するディップスティックを含む）
・付録３に概説する、ＰＫ、免疫原性試験、ＦＣＧＲ、ｃｔＤＮＡ及び探索的バイオマーカー分析のための血液試料採取。
・血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）の試料採取：パート１では、サイクル１の１日目の投与前に、レトロスペクティブ分析のための血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）試料を採取する。この時点の試料は、パート２の患者からは必要ない。
・パート１においてのみ、サイクル１の１日目の投与前に、試料採取が可能な全ての患者から頭皮または眉気の毛嚢試料（約１０、入手可能である場合）を採取する。
・ＡＥ報告
・併用薬の検討
試験薬の投与：
・抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＩＶ注入により３０分にわたって投与
・ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法は、３０分の休息後に投与
２．２．３．２ サイクル１、２日目
以下の手順を実施する。
・投与前、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入開始から０．５、１及び２時間後に測定されるバイタルサイン（血圧、脈拍、呼吸、及び体温［℃］）
・付録３に概説する、ＰＫ及び探索的バイオマーカー分析のための血液試料を採取する。
・ｍＦＯＬＦＯＸ６投与を継続する
・ＡＥ報告
・併用薬の検討
２．２．３．３ サイクル１、３日目
以下の手順を実施する。
・投与前、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入開始から０．５、１及び２時間後に測定されるバイタルサイン（血圧、脈拍、呼吸、及び体温［℃］）
・付録３に概説する、ＰＫ解析のための血液試料採取
・ｍＦＯＬＦＯＸ６投与を継続する
・ＡＥ報告
・併用薬の検討
２．２．３．４ サイクル１、８日目
以下の手順を実施する。
・限定的な身体検査（体重及び口内検査を含む）
・投与前、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入開始から０．５、１及び２時間後に測定されるバイタルサイン（血圧、脈拍、呼吸、及び体温［℃］）
・安全性に関する血液検査。試験薬の投与前７２時間以内に結果を得ること（付録２参照）。
・付録３に概説する、ＰＫ解析のための血液試料採取
・ＡＥ報告
・併用薬の検討
２．２．３．５ サイクル２ １日目
以下の手順を実施する。
・限定的な身体検査（体重及び口内検査を含む）
・投与前、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入開始から０．５、１及び２時間後に測定されるバイタルサイン（血圧、脈拍、呼吸、及び体温［℃］）
・安全性に関する血液検査。試験薬の投与前７２時間以内に結果を得ること（付録２参照）。
・付録３に概説する、ＰＫ、免疫原性試験及び探索的バイオマーカー分析のための血液試料
・ＡＥ報告
・併用薬の検討
試験薬の投与：
・抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、ＩＶ注入により３０分にわたって投与
・ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法は、３０分の休息後に投与
２．２．３．６ サイクル３の１日目及び後続の奇数サイクルの１日目
ＤＬＴ期間の完了時に、患者は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、１４日サイクルで２週間ごとに投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与を継続することができる。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与回数に上限はない。ＤＬＴ期間以降のｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンの継続投与は、地域の標準治療に従う。
以下の手順を実施する。
・限定的な身体検査（体重及び口内検査を含む）
・ＥＣＯＧパフォーマンスステータス評価
・患者報告アウトカム（ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ及びＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０）
・投与前、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入開始から０．５、１、及び２時間後に実施されるバイタルサイン（血圧、脈拍、呼吸、及び体温［℃］）
・包括的眼科検査
・パート１の患者、ならびに抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びＦＯＬＦＯＸ６の投与に無作為化したパート２の患者に対するＯＣＴなしの細隙灯検査；サイクル２の１日目以降６週間ごと（サイクル３の１５日目、サイクル５の１日目、及びサイクル６の１５日目の前）、それ以後、サイクル６の１５日目以降１２週間ごと。患者が何らかの持続性角膜所見を有する場合、６〜８週間ごとに継続する。
・安全性に関する血液検査。試験薬の投与前７２時間以内に結果を得ること（付録２参照）。
・妊娠可能な女性については、投与７２時間前以内の尿妊娠検査
・尿検査（タンパク質、グルコース、血液、ｐＨ及びケトンに関するディップスティックを含む）
・サイクル３の１日目の７日以内に実施される腫瘍評価。臨床検査及び適切なイメージング技術を含み、必要に応じて他の評価（ＭＲＩ、放射線写真、ＰＥＴ、及び超音波）を実施
・新鮮な生検は、実施可能な限り、原発腫瘍または転移性腫瘍部位のものが必須であり、サイクル３の１日目の７日前以内（及び投与前少なくとも２４時間）に、パート２に無作為化された最大３０人の患者に対してのみ行われる。
・付録３に概説する、ＰＫ、免疫原性試験、血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）及び探索的バイオマーカー分析のための血液試料採取。
・パート２についてのみ、血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）試料を治療前に採取する。
・頭皮または眉毛の毛嚢試料（約１０、入手可能である場合）
・ＡＥ報告
・併用薬の検討
試験薬の投与：
・抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、各サイクルの１日目にＩＶ注入により３０分にわたって投与
・ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法は、各サイクルの１日目における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与後、３０分の休息後に投与。
２．２．３．７ サイクル４の１日目及び後続の偶数サイクルの１日目
以下の手順を実施する。
・限定的な身体検査（体重及び口内検査を含む）
・患者報告アウトカム（ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ及びＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０）
・投与前、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの注入開始から０．５、１及び２時間後に測定されるバイタルサイン（血圧、脈拍、呼吸、及び体温［℃］）
・パート１の患者、ならびに抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びＦＯＬＦＯＸ６の投与に無作為化したパート２の患者に対するＯＣＴなしの細隙灯検査；サイクル２の１日目以降６週間ごと（サイクル３の１５日目、サイクル５の１日目、及びサイクル６の１５日目の前）、それ以後、サイクル６の１５日目以降１２週間ごと。患者が何らかの持続性角膜所見を有する場合、６〜８週間ごとに継続する。
・安全性に関する血液検査。試験薬の投与前７２時間以内に結果を得ること（付録２参照）。
・サイクル４の１日目の開始前７日以内に実施される腫瘍評価。臨床検査及び適切なイメージング技術を含み、必要に応じて他の評価（ＭＲＩ、放射線写真、ＰＥＴ、及び超音波）を実施
・パート２についてのみ、血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）試料を治療前に採取する。
・パート１について、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与前４時間以内、及び後続サイクルの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ注入終了後１５分（±１０分）におけるＰＫのための血液試料。パート２について、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの投与前４時間以内、及び抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ注入ＡＥ報告終了後１５分（±１０分）に採取されるＰＫ試料（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６群に無作為化された患者のみ）
・ＡＥ報告
・併用薬の検討
試験薬の投与：
・抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、各サイクルの１日目にＩＶ注入により３０分にわたって投与
・ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法は、各サイクルの１日目における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与後、３０分の休息後に投与
２．２．４ 治療終了来院または早期中止
患者は、最後の試験治療薬投与から約２８（±３）日後、または患者が試験を途中で中止する場合、試験施設に戻る。以下の評価を試験終了来院時に実施する。
・限定的な身体検査（口内検査を含む）
・ＥＣＯＧパフォーマンスステータス評価
・バイタルサイン（５分の休息後の座位脈拍、血圧、呼吸、及び体温［℃］）
・５分休息した後の１２誘導ＥＣＧ
・包括的眼科検査
・安全性に関する血液検査（付録２参照）
・妊娠可能な女性については、尿妊娠検査
・尿検査（タンパク質、グルコース、血液、ｐＨ及びケトンに関するディップスティックを含む）
・腫瘍スキャン。最終スキャンがＥＯＴ来院前の６週間未満に実施されている場合、または腫瘍増悪が事前に決定されている場合は、省略することができる。
・免疫原性試験のための血液試料
・パート２についてのみ、血液ベース生検（ｃｔＤＮＡ）試料を採取する
・頭皮または眉毛の毛嚢試料（約１０、入手可能である場合）
・パート１の全ての患者及びパート２で抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を受けた全ての患者のＰＫのための血液試料
・バイオマーカー評価のための血液試料
・ＡＥ報告
・併用薬の検討
備考：増悪または同意の撤回以外の理由による試験治療の中止後は、患者が追加の抗がん療法を開始するまで、腫瘍評価を継続する。
２．２．５ 長期追跡調査
・パート１及びパート２の両患者は、ＥＯＴ来院後約３ヶ月±２８日ごとに、最後の患者が試験に登録されてから最大２４ヶ月後まで、または死亡、追跡不能、同意の撤回もしくは試験依頼者による試験中止（いずれか先に生じたもの）まで、施設来院または電話により、生存に関する長期追跡調査を受ける。
・追跡調査期間中、患者が抗がん療法を受ける場合、これを記録するものとする。
・追跡調査期間の最初の６ヶ月間に生じたあらゆる妊娠を試験依頼者に報告するものとする。
・患者は、死亡、追跡不能、同意の撤回、または試験依頼者による試験中止まで、追跡するものとする。
・ＥＯＴ来院後に発生した重篤なＡＥは、試験責任医師が試験薬との因果関係があるとみなす場合、試験責任医師が試験依頼者に報告するものとする。
３．統計方法
データベースロック前に、以下に概説する解析の詳細な方法について記載する、別個の統計解析計画書（ＳＡＰ）を確定する。計画された解析からの逸脱は、いかなるものも最終総括試験報告書に記載し、十分な根拠を示す。
３．１ 試験患者
３．１．１ 患者の内訳
試験の各期間（例えば、スクリーニング、サイクル１、及び投与される場合は後続サイクル）に参加した患者及び完了した患者の数及びパーセンテージを示す。離脱の理由についても要約する。
３．１．２ プロトコルの逸脱
主要なプロトコルの逸脱を有する患者の数及びパーセンテージの要約を逸脱の種類ごとに提供する。逸脱は、データベースロック前にＳＡＰにおいて定義する。
３．１．３ 分析集団
試験には、以下の分析集団を定義する。
・安全性集団−任意の部分の少なくとも１回の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を受けた、全ての患者。
・ＤＬＴ評価可能集団−試験のパート１に登録し、少なくとも２回の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を受け、治療のサイクル１を完了したか、またはサイクル１でＤＬＴを経験した、全ての患者。
・ＰＫ評価可能集団−少なくとも１回の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を受け、ＰＫプロファイルの決定に適切なＰＫ評価が得られた、全ての患者。妥当性は、個々に決定され、血液試料の分析前に評価する。
・治療企図（ＩＴＴ）集団−登録した全ての患者
・有効性評価可能集団−適格基準を満たし、少なくとも１回の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ投与を受け、少なくとも１回のベースライン後疾患評価を有する、全ての患者
３．２ 一般的な考慮事項
本試験に計画される総登録数は、最大約３７２人の患者である。標準的な３＋３デザインに準じて、あらゆるＤＬＴについて評価可能な最大約１２人の患者をパート１に登録する。
パート２については、ＦＧＦＲ２ｂで選択された胃癌を有する最大約３６０人の患者を登録し、１：１に無作為化してｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせたプラシーボを投与することによって、有効性及び忍容性を試験する。適格性のある患者は、地理上の地域（米国及び欧州対アジア対他の地域）、前治療の状況（ｄｅ ｎｏｖｏ対アジュバント／ネオアジュバント）、及び測定可能な疾患状態（測定可能対測定不能）に従って層化する。
検出力及び標本サイズ
本試験は、ＰＦＳの主解析に十分な検出力を提供するように設計する。
プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の６ヶ月投与を受けた患者のｍＰＦＳに基づくと、２４ヶ月の受入期間及び６ヶ月の追跡期間後、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較した抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の組み合わせのｍＰＦＳについて、検出力９０％を有する０．５のハザード比（ＨＲ）（両側、α＝０．０５）を示すには、約１５６人の患者（１：１の無作為化）及び目標９６例のＰＦＳイベントが必要である。
ＰＦＳの指数分布を仮定すると、これは、６ヶ月から１２ヶ月のＰＦＳ中央値の増加に該当する。現在の設計では、ＰＦＳの統計的有意性をもたらす最小観察効果は、６ヶ月から９ヶ月の５０％改善（ＨＲ＝０．６７）である。
本試験はまた、ＯＳの主解析にも検出力があるようにする。
プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の１０ヶ月投与を受けた患者のｍＯＳに基づくと、最後の患者の登録から３６ヶ月の受入期間及び１０ヶ月の追跡期間後、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較した抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の組み合わせのｍＯＳについて、全体の第一種過誤水準０．０５で検出力８０％を有する０．７のＨＲを示すには、試験の登録を最大約３６０人の患者まで継続し、２４９例の死亡イベントを目標にする。ＯＳの中間解析及び最終解析では、群逐次法を使用して、Ｏ’Ｂｒｉｅｎ−Ｆｌｅｍｉｎｇの境界に基づく第一種過誤の確率と、Ｇａｍｍａファミリーに基づく第二種過誤の確率（パラメーター−４）とを確定する。
ＯＳの指数分布を仮定すると、これは、１０ヶ月から１４．３ヶ月のＯＳ中央値の４３％の増加に該当する。現在の設計では、最終解析においてＯＳの統計的有意性をもたらす最小観察効果は、１０ヶ月から１２．８ヶ月の２８％改善（ＨＲ＝０．７８）である。
検出力及び標本サイズの推定値は、ＥＡＳＴ（登録商標）（Ｖ６．４）を使用して推定した。
３．３ 人口統計、ベースライン特性、及び併用薬
人口統計データ、病歴、併発疾患及び併用薬は、コホート別と、全体について要約する。試験の実施基準を満たすかどうかを判断するために、対応する表及び一覧を提供する。これらには、適格基準を満たさなかった患者の説明、プロトコル違反の評価、試験薬の説明責任、及び試験の全般的実施に影響し得る他のデータが含まれる。
安全性集団のベースライン特性を要約する。治療を開始する前に死亡もしくは離脱した患者、または必要な安全性の観察を完了しない患者は、個別にそれを記載し、評価する。
３．４ 治療コンプライアンス
治療薬投与については、用量投与、用量変更または遅延、累積用量、平均用量、注入回数、及び治療期間を含め、コホート別に要約する。
３．５ 有効性解析
パート１では、分析は全て記述的であり、適宜、用量群及び全体で示される。記述統計には、連続変数の観察数、平均、標準偏差、中央値、範囲及び四分位範囲、ならびにカテゴリー変数の数及びパーセントが含まれ、９５％信頼区間が適宜示される。
３．５．１ 一次有効性解析
パート２では、主要な有効性解析は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６により治療した患者のＰＦＳの比較である。
主要エンドポイントのＰＦＳは、無作為化から、試験責任医師の評価に基づいて放射線学的に増悪とされた日（ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準ずる）またはあらゆる原因による死亡日のいずれか早いほうまでの期間として定義される。副次的有効性エンドポイントは、ＯＳ及びＯＲＲを含む。
ＰＦＳには中間解析及び主解析があり、いずれもイベントに基づく解析である。登録患者で４８例のイベント（ＰＦＳ主解析における目標９６例のＰＦＳイベントの５０％）が観察された後の中間分析で、ＰＦＳの無益性試験のみが実施され、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較した抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の組み合わせのＨＲが０．８０６を超えることを回避する。中間解析は、最初の患者が登録されてから約２０ヶ月後に実施されることが推定される。
ＰＦＳの主解析は、少なくとも９６例のＰＦＳイベントが最初の１５６人の登録患者で観察されたときに行われ、治療企図（ＩＴＴ）集団を使用して実施する。
主解析には、ＲＥＣＩＳＴｖ．１．１に準じて試験責任医師が決定した放射線学的増悪イベント及び死亡が含まれる。
ＰＦＳの主解析は、層別ログランク両側検定（有意水準０．０５）を使用して行う。層化因子は、音声自動応答／Ｗｅｂ登録システム（ＩＸＲＳ）に文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。
層別ログランク検定のｐ値が統計的に有意であり（＜０．０５両側）、ＨＲが１未満であれば、ＰＦＳに差はないとする帰無仮説を棄却し、プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６を投与した群と比較して、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを投与した群で、ＰＦＳが統計的に延長されると推定する。
各治療群に関するＰＦＳ中央値及び関連する９５％信頼区間は、カプランマイヤー法を使用して推定する。ハザード比（ＨＲ＝λ抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ＋ｍＦＯＬＦＯＸ６／λｍＦＯＬＦＯＸ６）は、治療群を唯一の主効果としたＣｏｘ回帰モデルを使用し、ログランク検定で使用したのと同じ層化因子で層化して推定する。層化していないＨＲも示す。副次的エンドポイントのＯＳ解析は、主要エンドポイントであるＰＦＳが統計的に有意であるときに行い、ＯＳの形式的な仮説は、０．０５の水準で階層的に検定する。主要エンドポイント及び副次的エンドポイントの検定における第一種過誤の確率は、この固定順序検定手順（水準０．０５）を採用することによって制御される。
３．５．２ 二次有効性解析
ＯＳ及びＯＲＲを含む副次的エンドポイントの解析は、主要エンドポイントであるＰＦＳが統計的に有意であるときに行い、ＯＳ及びＯＲＲの形式的な仮説は、０．０５の水準で階層的に検定する。ＯＳを最初に検定し、それが有意であれば、次にＯＲＲを検定する。主要エンドポイント及び副次的エンドポイントの検定における第一種過誤の確率は、この固定順序検定手順（水準０．０５）を採用することによって制御される。
ＰＦＳの検定が統計的に有意である場合、ＯＳの中間解析及び最終解析が計画される。ＯＳの中間解析は、ＰＦＳの主解析時に行う。ＯＳの解析を行う場合、中間時（すなわち、少なくとも９６例のＰＦＳイベントが観察された時）、及び最終時（すなわち、２４９例の死亡が観察された時）のＯＳ解析は、ＩＴＴ集団で実施する。
ＯＳの仮説検定は、層別ログランク両側検定（有意水準０．０５）を使用して行う。ＯＳの中間解析及び最終解析では、群逐次法を使用して、Ｏ’Ｂｒｉｅｎ−Ｆｌｅｍｉｎｇの境界に基づく第一種過誤の確率と、Ｇａｍｍａファミリーに基づく第二種過誤の確率（パラメーター−４）とを確定する。層化因子は、ＩＸＲＳに文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。
各治療群に関するＯＳ中央値及び関連する９５％信頼区間は、カプランマイヤー法を使用して推定する。ＨＲは、治療群を唯一の主効果としたＣｏｘ回帰モデルを使用し、ログランク検定で使用したのと同じ層化因子で層化して推定する。層化していないＨＲも示す。
ＯＲＲは、試験責任医師によってＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準じて定義される部分奏効または完全奏効のある患者の割合と定義する。ＯＲＲの主解析は、ベースラインを測定することが可能な疾患を有する患者間で実施する。ＯＲＲの解析において、ベースライン後に適切な腫瘍評価を受けていない患者は、ノンレスポンダーとしてカウントする。ＯＲＲの形式的な仮説検定は、層別化したＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ検定を使用して実施する。層化因子は、ＩＸＲＳに文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。
３．５．３ 探索的有効性解析
探索的有効性エンドポイントには、全ての登録患者に関する、応答患者の奏功持続期間、１年のＯＳ率、ならびにＥＱ−５Ｄ−５Ｌ及びＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０によって測定したＱｏＬのベースラインからの変化が含まれる。
奏功持続期間は、客観的な腫瘍縮小効果を有する患者に関し、ＲＥＣＩＳＴ１．１による客観的な腫瘍縮小効果の最初の放射線学的記録から増悪までの時間、またはあらゆる原因による死亡までの時間と定義する。奏功持続期間の中央値及びその関連９５％ＣＩは、カプランマイヤー法を使用して、治療群ごとに推定する。治療群間の差は、層別ログランク検定を使用し、無作為化に使用したのと同じ層化を使用して解析する。
１年生存患者の割合として定義される１年のＯＳ率は、カプランマイヤー法を使用して、全生存期間の解析中に推定する。割合の分散は、Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄの公式を使用して推定する。２つの治療群間の１年生存の差の全体的な比較は、ｚ統計量を使用して算出する（ｔ＝１年）。
ＥＱ−５Ｄ−５Ｌ及びＥＯＲＴＣ ＱＬＱ−Ｃ３０によって測定したＱｏＬにおけるベースラインからの変化については、各ベースライン後評価及び治療終了時におけるベースラインからの変化の要約統計を提示する。該当する場合、反復測定分析法を使用して、治療群間の差を解析する。
盲検下独立審査委員会（ＢＩＲＣ）
ＢＩＲＣは、試験責任医師の評価とＢＩＲＣの評価との間の一致を評価するために設立される。予め指定された監査計画は、画像審査書に含まれるが、患者のパーセンテージ、イメージングサブセットの識別、全ての画像を監査する基準、及びＰＦＳ結果の現地審査と監査との比較について詳細に記載する。
３．６ 安全性解析
安全性の解析は、試験期間中にいずれかの試験薬（ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはプラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６）の投与を受けた全ての患者を含み、治療後のあらゆる安全性情報を提供する。全てのＡＥは、国際医薬用語集（ＭｅｄＤＲＡ）を使用してコードする。試験責任医師は、ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３を使用してＡＥの重症度を分類する。
治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、試験薬の１回目の投与以降に発生日を持つあらゆるイベント、または治療前に存在し治療後に悪化したあらゆるイベントと定義する。最終投与日＋３０日より前の発生日であるＴＥＡＥのみを概要表に記載する。ＡＥを経験した患者の数及びパーセンテージは、器官別大分類、基本語、試験薬との関係、及び各治療群の重症度ごとにまとめる。死亡を含むＳＡＥを経験した患者、または試験からの早期離脱もしくは試験薬の中止に関連するＡＥを経験した患者については、患者別のリストを提供する。臨床検査データは、臨床検査の種類ごとにまとめる。試験薬の投与後に異常（すなわち、参照範囲外）及び／または臨床的に有意な異常を経験した患者の数及びパーセンテージを、各臨床検査の測定について示す。各臨床検査の測定は、ベースライン及びその後の全ての治療後予定来院についての記述統計を提供する。ベースラインから治療後来院までの変化も提供する。バイタルサインの記述統計も同様に提供する。加えて、ＣＴＣＡＥグレードのベースラインからのシフト（該当する場合）及び高／低フラグによるシフト（ＣＴＣＡＥグレードが定義されていない場合）を治療群ごとに提示する。安全性エンドポイントの形式比較は計画しない。
３．７ 薬物動態解析
ＰＫパラメーターは、非コンパートメント解析を使用して推定されるが、コンパートメント解析を適宜用いてもよい。血清中抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ濃度−時間の個々のデータ及び平均（±ＳＤ）データを用量レベルごとに集計し、プロットする。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂのＰＫパラメーターは、静脈内注入の入力データを用いて非コンパートメント解析（ＮＣＡ）法の使用により、血清中試験薬濃度−時間データから推定する。代替的な方法を検討してもよい。ＰＫパラメーターの個々の推定値及び平均（±ＳＤ）を用量レベルごとに集計し、まとめる。血清中抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ濃度−時間データ及びＰＫパラメーターの推定値については、他の記述統計を報告する場合もある。データが許す限り、用量の比例性、試験薬の累積、及び定常状態の到達を評価する。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ曝露に対する免疫原性の作用を評価する。
３．８ 中間解析
プラシーボ及びｍＦＯＬＦＯＸ６と比較した抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及びｍＦＯＬＦＯＸ６の組み合わせのＰＦＳのＨＲが０．８０６を超えることを回避するために、最初の１５６人の登録患者で４８例のイベント（ＰＦＳ主解析における目標９６例のＰＦＳイベントの５０％）が観察された後に、ＰＦＳの無益性試験のみが実施される、ＰＦＳの中間解析がある。加えて、ＰＦＳの検定が統計的に有意である場合、ＯＳの中間解析が計画される。ＯＳの中間解析は、ＰＦＳの主解析時に行う。ＯＳを解析する場合、中間解析でのＯＳ解析は、ＩＴＴ集団で実施し、中間解析での第一種過誤の確率は、解析時における情報の一部（死亡イベント）に応じて、Ｌａｎ−ＤｅＭｅｔｓのＯ’Ｂｒｉｅｎ−Ｆｌｅｍｉｎｇのα消費関数を実施することによって決定する。
加えて、安全性データは、試験依頼者及びＣＲＯのメディカルモニターによる定期的検討を行う。用量漸増段階中には、メディカルモニター及び試験責任医師（複数可）は、用量漸増または減量の前に各用量コホートからの安全性データを検討する。全てのサイクルのＡＥデータは、利用可能となった時にメディカルモニターに提出する。
３．９ 計画していた解析の変更
プロトコル中で計画された統計解析の文章と最終ＳＡＰとの間に矛盾がある場合、プロトコル修正は生じず、ＳＡＰが優先する。
参考文献
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Figure 2020520903
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備考：Ｃｍａｘ１＝１回目の投与後に観察された最高血清中濃度；Ｃｍａｘ１／用量＝投与量によって正規化したＣｍａｘ１；Ｃｔｒｏｕｇｈ１＝１回目の投与間隔終了時に観察された血清中濃度；ＡＵＣｌａｓｔ＝投与時点から１回目の投与後の最終定量可能濃度までに観察された濃度−時間曲線下面積。ＡＵＣｌａｓｔ／用量＝投与量によって正規化したＡＵＣｌａｓｔ；及びｔ１／２＝消失半減期。
ＮＣ＝ＬＬＯＱを下回るＣｔｒｏｕｇｈ１により、患者３人中２人で報告できなかった要約統計；ＮＤ＝正確に決定できなかったＰＫパラメーター。ａｎ＝３。１人の患者のデータは、当該患者が試験のＣ１Ｄ１５に関するデータを有することなく終了したので、報告することができなかった；ｂｎ＝２。消失期は、患者３人のうち１人で１半減期未満であると特徴付けられた。したがって、この患者のデータは、データ解析計画書に規定されているように、半減期の要約統計から除外した；ｃ試験患者６人のうち１人は、部分投与を受けたので、パラメーターを要約統計から省いた；ｄｎ＝３。消失期は、患者５人のうち２人で１半減期未満であると特徴付けられた。したがって、これらの患者は、データ解析計画書に規定されているように、半減期の要約統計から除外した。
付録１：評価スケジュール−用量漸増安全性導入段階（パート１）及び用量拡大（パート２）
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実施例２：これまでに未治療の進行性胃癌及び胃食道癌を有する患者における、修正版ＦＯＬＦＯＸ６に対する修正版ＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の第１相／第３相試験
プロトコルの概要
本試験は、本明細書の実施例１に記載される試験の変形版であり、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の安全性、忍容性、有効性、ＰＫ、及びＰＤを評価するための多施設試験である。試験は、ＧＩ腫瘍患者（ＦＧＦＲ２で選択していないもの）におけるオープンラベルの第１相安全性導入段階に続く、ＦＧＦＲ２で選択されたＧＣ患者（ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現のプロスペクティブＩＨＣ分析及び／またはＦＧＦＲ２遺伝子増幅を示すｃｔＤＮＡ血液アッセイによって決定される）における無作為化オープンラベル第３相を含む。初期スクリーニング期間後、患者を２週間サイクルで抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と組み合わせたｍＦＯＬＦＯＸ６またはｍＦＯＬＦＯＸ６単独により治療する。
第１相：用量漸増安全性導入段階
第１相は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体のオープンラベル用量漸増である。適格性のある患者は、任意の種類の切除不能、局所進行性または転移性ＧＩ癌を有し、少なくとも２回のｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の投与候補である。ＦＧＦＲ２状態は、登録の要件ではない。ＦＧＦＲ２状態は、ＩＨＣによってレトロスペクティブに検査し（組織が入手可能である場合）、試料をｃｔＤＮＡ血液アッセイから入手する。
第１相は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の最低２つの用量コホートで構成され、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の第３相のＲＤを決定する。患者は、先にｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を開始していてもしていなくてもよいし、受けたことがあってもなくてもよい。患者が受けた可能性のある先のｍＦＯＬＦＯＸ６投与に回数の上限はない。
各登録患者は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体による治療の初日（サイクル１の１日目［試験１日目］）から２８日間（ＤＬＴ期間）、安全性評価、ＰＫ及び用量制限毒性の発生について、観察する。患者のコホートを２週間サイクルで標準用量のｍＦＯＬＦＯＸ６の化学療法レジメンと組み合わせた漸増用量の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体により治療する。
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与
抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体ＩＶは、２週間ごとに、各サイクルの１日目（２週間＝１サイクル）及びｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の前に投与する。コホート２で治療される患者にのみ、サイクル１の８日目に追加用量の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体を１回投与する（この日はｍＦＯＬＦＯＸ６は投与されない）。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、末梢静脈または中心静脈カテーテルを介した約３０分のＩＶ注入として投与する。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体注入のＩＶ投与セットは、０．２２μｍのインラインフィルタまたは０．２２μｍのシリンジフィルタを備えなければならない。
ｍＦＯＬＦＯＸ６の投与
ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の投与も、各治療サイクルのサイクル１の１日目（試験１日目）に、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の注入が終了してから３０分後に開始する。ｍＦＯＬＦＯＸ６は、以下のとおり、２週間ごとに投与する：
−１日目：オキサリプラチン８５ｍｇ／ｍ２を１２０分かけてＩＶ注入。
−１日目：ロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２を１２０分かけてＩＶ注入。Ｙコネクタを使用する場合は、オキサリプラチンと同時投与が可能であり、Ｙコネクタを使用しない場合は、逐次投与。
−１日目：オキサリプラチン及びロイコボリンの直後、約５分かけて５ＦＵ ４００ｍｇ／ｍ２をボーラス。
−１日目：５−ＦＵボーラスの直後、５−ＦＵ ２４００ｍｇ／ｍ２を４６時間かけて連続ＩＶ注入。
２８日間のＤＬＴ期間後、患者は、毒性分析に基づいて、ｍＦＯＬＦＯＸ６または抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の用量が保持されるか、または減量され得る。前投薬は、試験責任医師の判断で現地の標準治療に準じて使用してもよい。
第１相コホート
第１相では、試験する抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の最初の用量コホートは、６ｍｇ／ｋｇである。予定される用量レベルは、以下のとおりである。
−コホート１：２週間ごとに６ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体；
−コホート２：２週間ごとに１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体；８日目に１回の７．５ｍｇ／ｋｇ投与（サイクル１のみ）；
−コホート３（必要である場合）：２週間ごとに１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体；
−コホート４（必要である場合）：最適な標的曝露での忍容性を達成するために、コホート３よりも低いが、コホート１よりも高い用量レベル。
６ｍｇ／ｋｇの最初のコホートが２８日間のＤＬＴ期間をクリアした場合、８日目に７．５ｍｇ／ｋｇの投与（サイクル１のみ）を含む、２週間ごとの１５ｍｇ／ｋｇでの２つ目の用量コホートをＲｏｌｌｉｎｇ−６デザインで試験し、６人の患者を登録する。用量漸増の決定は、ＤＬＴ、全体的な安全性及び忍容性の評価に基づく。用量漸増の決定は、各コホートに最後に登録された患者が２８日間のＤＬＴ期間を完了した後（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６の２治療サイクルの完了後）に行われる。用量漸増の決定は、試験依頼者及び試験責任医師から構成されるコホート審査委員会（ＣＲＣ）による合意を得る。コホート２で２以上のＤＬＴが観察された場合、コホート１と２の間での用量レベルをＲｏｌｌｉｎｇ６（２週間ごとの１５ｍｇ／ｋｇ）デザインで評価することができる（コホート３）。コホート３で２以上のＤＬＴが観察された場合、コホート３よりも低いが、コホート１よりも高い用量レベルをＲｏｌｌｉｎｇ６デザインで評価することができる（コホート４）。ＤＬＴは、試験責任医師が抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体に関係するとみなす、以下のいずれかとして定義する。
・５日間を超えるＡＮＣ＜０．５×１０９／Ｌまたは発熱性好中球減少症（すなわち、ＡＮＣ＜１．０×１０９／Ｌ及び３８．３℃超の１回の体温、または１時間を超える３８℃以上の発熱）。施設内の標準手順に準じてＧ−ＣＳＦの使用が認められる。
・血小板＜２５×１０９／Ｌまたは血小板＜５０×１０９／Ｌであり、医療介入が必要な出血
・長期の（３日を超える）＜５０×１０９／Ｌの血小板
・グレード４の貧血（すなわち、生命を脅かす影響；緊急介入が必要なもの）
・７日以内に解決しないグレード２〜３の眼に関する何らかのＡＥ
・グレード４の眼に関するＡＥ
・ＡＳＴ／ＡＬＴ≧３×ＵＬＮ、及び同時に発生する総ビリルビン≧２×ＵＬＮであり、がんによる肝機能とは無関係のもの
・グレード３以上の何らかの非血液学的ＡＥ（悪心、嘔吐、及び下痢を除く）。
・グレード３の悪心、嘔吐または下痢で、７２時間の支持療法で解消しないもの
・グレード３の臨床検査値で、７２時間以内に解消しない場合、試験責任医師及び試験依頼者の同意により臨床的に重要ではないとされるもの。
・グレード４の悪心、嘔吐または下痢
・グレード４の何らかの臨床検査値
以下の表７中の以下のアルゴリズムを用量漸増の決定に使用する：
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第３相に関する抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体のＲＤは、全体的な安全性、忍容性、及びＰＫの評価に基づいてＣＲＣによって特定され、サイクル１の８日目にのみ投与される７．５ｍｇ／ｋｇを含む、２週間ごとにＩＶ投与される１５ｍｇ／ｋｇを超えないものとする。ＲＤを決定する際に、ＣＲＣは、ＤＬＴ評価期間中に観察された毒性、ＤＬＴ評価期間以降に観察されたあらゆる毒性、ならびにＤＬＴ基準を満たさない毒性に起因するｍＦＯＬＦＯＸ６または抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の減量及び中止を考慮する。データ全体に基づいて、選択される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体のＲＤは、投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６の用量強度を下げないことが予想される用量である。したがって、ＲＤは、特定された最大耐量（ＭＴＤ）と同じであってもよいし、同じでなくてもよい。例えば、ＭＴＤに達しない場合、または第１相の後続の治療サイクルからのデータが安全性プロファイルについての更なる洞察を提供する場合、ＲＤは、ＭＴＤを超えないが、ＭＴＤとは異なる用量であり得る。
ＭＴＤは、ＤＬＴ（用量制限毒性）期間中に患者の３３％未満がＤＬＴを経験する最大用量として定義される。コホート１で３人の患者のうち１人にＤＬＴが観察された場合、３人の追加患者がその用量レベルに登録される。ある用量レベルで治療された３〜６人の患者のうち２人がＤＬＴを経験するまで、用量漸増を継続することができる（用量レベルは第１相で許容された最大用量レベルを超えない）。次いで、次に低い用量がＭＴＤとみなされる。
試験デザイン
コホート２（２週間ごとに１５ｍｇ／ｋｇのコホート、８日目に１回の７．５ｍｇ／ｋｇ投与［サイクル１のみ］を含む）への登録を開始したら、６人の患者を登録し、安全性及び有効性を調査する。第１相の合計登録数は、約９〜２１人の患者である。
ＤＬＴ期間中に、ＤＬＴまたは抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体に関係するＡＥではない理由により、コホートに定義された抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の全回数の投与、及びｍＦＯＬＦＯＸ６の２回の完全な投与を受けない患者はいずれも評価不能とみなし、患者を入れ替える。入れ替えられた患者は、試験責任医師の判断及び試験依頼者との検討後、試験を継続することができる。２８日間のＤＬＴ期間中、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの追加投与または２回を超えるｍＦＯＬＦＯＸ６の投与はしてはならない。サイクル２の１日目における抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６の投与は、同期させる必要はない。例えば、ｍＦＯＬＦＯＸ６にのみ関係し、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体に関係しないと思われるＡＥに起因して、ｍＦＯＬＦＯＸ６が遅延する場合、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ｍＦＯＬＦＯＸ６の投与スケジュールの遅延に関係なく、サイクル１及び２に計画したとおりに投与するものとする。
ＤＬＴ期間の完了時に、患者は、試験責任医師の判断で、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与を継続することができる。追加治療は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性まで、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、２週間ごとに（１サイクル）投与することができる。
治療の最初の３サイクル（４２日）中に、化学療法に関係する毒性に起因してｍＦＯＬＦＯＸ６のサイクルが２週間を超えて遅れる場合でも、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、スケジュール（±３日）どおりに投与するものとする。最初の３サイクル後であれば、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体を最大±７日遅延させて、ｍＦＯＬＦＯＸ６の投与と同期させることができる。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体またはｍＦＯＬＦＯＸ６の投与回数に指定された上限はない。ＤＬＴ期間以降のｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンの継続投与は、以下のスケジュールに従う：
・ｍＦＯＬＦＯＸ６の開始用量には、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のフォリン酸カルシウム（フォリン酸）、４００ｍｇ／ｍ２のボーラス投与の５−ＦＵ、及び２４００ｍｇ／ｍ２の４６時間にわたる連続注入投与の５−ＦＵが含まれる。
・ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンは、試験責任医師の評価による放射線学的な増悪（第３相のみ）、臨床的な増悪（第１相のみ）、許容できない毒性、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、２週間（±３日）ごとに投与する。
・１日目：オキサリプラチン８５ｍｇ／ｍ２を１２０分かけてＩＶ注入
・１日目：ロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２を１２０分かけてＩＶ注入。Ｙコネクタを使用する場合は、オキサリプラチンと同時投与が可能であり、Ｙコネクタを使用しない場合は、逐次投与
・１日目：オキサリプラチン及びロイコボリンの直後、約５分かけて５ＦＵ ４００ｍｇ／ｍ２をボーラス
・１日目：５−ＦＵボーラスの直後、５−ＦＵ ２４００ｍｇ／ｍ２を４６時間かけて連続ＩＶ注入。
ｍＦＯＬＦＯＸ６の継続投与に対する任意の変更は、以下のガイドラインに基づいて行われ得る：
・体重に少なくとも１０％の変化があった場合、用量を再計算するものとする。
・各注入中、及び各注入後約７２時間は、寒い天候への曝露を回避するように患者に助言する。
・オキサリプラチンを開始する前に、低カリウム血症及び低マグネシウム血症を治す。
・５−ＦＵ後の重度の下痢、粘膜炎及び骨髄抑制がある場合は、ジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼ欠損に関する評価を促すものとする。
・ロイコボリン投与は、ｄ，ｌ−ラセミ混合物で与える。ＬＥＶＯ−ロイコボリン（ｌ−ロイコボリン）については、半量で使用する。
・増悪前にオキサリプラチン投与が何らかの理由で中止された場合、５−ＦＵ／ロイコボリン療法は、増悪、許容できない毒性、または試験離脱の他の理由まで、２週間ごとのスケジュールで継続することができる。５−ＦＵ／ロイコボリン療法が中止された場合、オキサリプラチンも中止しなければならない。
ｍＦＯＬＦＯＸ６毒性に対するいくつかの用量調整について、以下の表８に示す。
Figure 2020520903
Figure 2020520903
試験の第１相部分において、何らかの理由で抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が永続的に中止される場合、患者は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の最終投与から約２８日後に治療終了（ＥＯＴ）の追跡調査来院を行う。これらの患者に対しては、それ以上の追跡調査は実施されず、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体治療の追跡調査来院の終了は、試験の終了である。試験責任医師の評価による増悪またはプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれか以外の何らかの理由でｍＦＯＬＦＯＸ６が中止される場合、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、試験責任医師の判断で、単剤療法として継続してもよい。
第３相の無作為化オープン部分
第３相への登録は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体のＲＤがＣＲＣによって特定された場合に開始し、このＲＤは、第１相で評価及び許容された最大用量レベルを超えない。患者は、第１相または第３相のいずれかに登録され得るが、試験の両方の相に登録されることはない。試験の第３相部分の登録開始は、試験依頼者の判断で行われる。
登録の適格性としては、切除不能、局所進行性または転移性ＧＣを有し、標準的な第一選択療法であるｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の候補者であり、かつ中央施設で実施されるＩＨＣ組織検査及び／またはｃｔＤＮＡ血液アッセイによりＦＧＦＲ２陽性である腫瘍を有することが患者に求められる。プレスクリーニング同意説明文書（ＩＣＦ）は、ＦＧＦＲ２検査のための組織（アーカイブまたは新鮮なもの）及び血液試料の提出前に、患者が署名しなければならない。ＦＧＦＲ２中央検査の結果を受領するには約２週間かかることがあるため、患者は、この中間期間（プレスクリーニング期間）中に、試験責任医師の判断で、最大１回のｍＦＯＬＦＯＸ６投与を受けることが認められる。この１回の化学療法は、試験の要件ではなく、本臨床試験の部分とはみなされない。
ＩＨＣによるＦＧＦＲ２ｂ陽性及び／またはｃｔＤＮＡ血液アッセイによるＦＧＦＲ２遺伝子増幅陽性である腫瘍検査の患者は、全試験参加に同意し（全試験ＩＣＦに署名）、スクリーニング期間に入ることができる。全試験ＩＣＦの署名から試験登録までの時間は、スクリーニング期間（最大２１日）とみなされる。スクリーニング期間中、患者は、全ての適格基準を満たすことを確実にするために、プロトコルに規定されたスクリーニング手順を受ける。
試験の第３相部分は、無作為化オープンラベルであり、ＦＧＦＲ２で選択されたＧＣ患者を５４８人登録し、１：１に無作為化してｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせたＲＤの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体対ｍＦＯＬＦＯＸ６を投与し、組み合わせの有効性を評価する。患者は、無作為化の３日以内に最初の試験治療薬投与を受けなければならない。治療群は、以下から構成される。
−群１：２週間ごとにｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせて投与される抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体、または
−群２：２週間ごとに投与されるｍＦＯＬＦＯＸ６。
増悪以外の何らかの理由による試験治療薬のいずれかの成分（ｍＦＯＬＦＯＸ６、ｍＦＯＬＦＯＸ６の成分、または抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体）の中止は、他の成分の中止を強制するものではない。例外は、何らかの理由による５−ＦＵの中止であり、オキサリプラチン及びロイコボリンの中止を必要とする。ｍＦＯＬＦＯＸ６レジメンの継続投与は、上記のとおり、提供されてもよい。
治療の最初の３サイクルについて、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ｍＦＯＬＦＯＸ６治療の遅延に関係なく、スケジュール（±３日）どおりに投与するものとする。ｍＦＯＬＦＯＸ６が遅延する場合、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の最初の３サイクル後であれば、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体を最大７日遅延させて、ｍＦＯＬＦＯＸ６の投与と同期させることができる。しかしながら、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体とｍＦＯＬＦＯＸ６の投与の同期は、プロトコル要件ではない。７日後も患者がｍＦＯＬＦＯＸ６を受けることができない場合、ＩＭＰは、２週間（±３日）ごとの単剤療法として継続するものとする。
同意の撤回以外の何らかの理由により全ての試験治療薬（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６の全ての成分）を中止する患者は、治療薬の成分（オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵ、または抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体）の最終投与から約２８日後にＥＯＴ安全性追跡調査来院を行う。
ただし、増悪または同意の撤回以外の理由により試験治療薬（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及び／またはｍＦＯＬＦＯＸ６）を中止する患者は、放射線学的な増悪または追加の抗がん療法の開始まで、プロトコルのスケジュールに従って、腫瘍評価を受け続け、この時点で、患者は、生存に関する長期追跡調査を受ける。
生存に関する長期追跡調査は、ＥＯＴ来院後約３ヶ月（±１ヶ月）ごとに、最後の患者が試験に登録されてから最大２４ヶ月後まで、または死亡、追跡不能、同意の撤回もしくは試験依頼者による試験中止（いずれか先に生じたもの）まで、施設来院、電話により、または患者登録簿を（国内法及び一般的なデータ保護法に従って）使用することによって、完了する。
第１相及び第３相の組み入れ基準
試験の第１相または第３相のいずれかに登録する患者は、以下の組み入れ基準を全て満たさなければならない：
・切除不能、局所進行性または転移性の疾患
・あらゆる試験関連評価の前に、施設内審査委員会（ＩＲＢ）／独立倫理委員会（ＩＥＣ）が承認した同意説明文書（ＩＣＦ）を理解し、これに署名すること
・試験責任医師の見解上、平均余命が少なくとも３ヶ月
・米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータスが０〜１
・ＩＣＦに署名した時点で１８歳以上
・サイクル１の１日目の治療前９６時間以内の血清β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（β−ｈＣＧ）妊娠検査が陰性（妊娠可能な女性のみ）
・性的に活性な患者（妊娠可能な女性及び男性）においては、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の最終投与から６ヶ月後まで、２つの効果的な避妊法を使用する意志があり、そのうちの１つは、物理的バリア法（コンドーム、ペッサリー、または子宮頸／膣円蓋キャップ）でなければならない。他の効果的な避妊形態には、次が含まれる。
・スクリーニングから少なくとも６ヶ月前の永続的な不妊手術（子宮摘出及び／または両側卵巣摘出、または手術による両側卵管結紮、または精管切除）
・試験前の少なくとも９０日間、安定した経口避妊薬治療もしくは子宮内器具もしくはインプラント装置を使用しているか、または生活様式として性行為を自制している妊娠可能な女性
・次の検査値によって確認された、サイクル１の１日目の９６時間以内の十分な血液学的及び生物学的機能：
骨髄機能
・絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ
・血小板≧１００×１０９／Ｌ
・ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ
肝機能
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＜３×正常値上限（ＵＬＮ）；肝転移がある場合、＜５×ＵＬＮ
・ビリルビン＜１．５×ＵＬＮ
腎機能
・Ｃｏｃｋｒｏｆｔ Ｇａｕｌｔ式を使用したクレアチニンクリアランス計算値≧５０ｍＬ／分
・常用量の抗凝固薬を服用している患者は、安定用量のワルファリンを登録前６週間服用し、患者の状態の治療域内の国際標準比（ＩＮＲ）でなければならず、または安定用量の低分子量ヘパリンを服用していなければならない
・測定可能または測定不能な疾患
・試験の第１相に登録する患者は、以下の組み入れ基準も満たさなければならない：
・ｍＦＯＬＦＯＸ６が適切な治療とみなされる、組織学的または細胞学的に確認されたＧＩ悪性腫瘍（例えば、ＧＣ、大腸癌、膵臓腺癌）
・ＩＨＣによるＦＧＦＲ２ｂ過剰発現のレトロスペクティブ決定のための腫瘍組織（入手可能である場合）
・患者は、少なくとも２回のｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法を受ける候補でなければならない。投与量は以下のとおりであり、上記の毒性ガイドラインの対象である：
・ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の投与は、各治療サイクルのサイクル１の１日目（試験１日目）に、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の注入が終了してから３０分後に開始する。ｍＦＯＬＦＯＸ６は、２週間ごとに以下のとおりに投与する：
・１日目：オキサリプラチン８５ｍｇ／ｍ２を１２０分かけてＩＶ注入。
・１日目：ロイコボリン４００ｍｇ／ｍ２を１２０分かけてＩＶ注入。Ｙコネクタを使用する場合は、オキサリプラチンと同時投与が可能。Ｙコネクタが利用できない場合、逐次投与。
・１日目：オキサリプラチン及びロイコボリンの直後、約５分かけて５ＦＵ ４００ｍｇ／ｍ２をボーラス。
・１日目：５−ＦＵボーラスの直後、５−ＦＵ ２４００ｍｇ／ｍ２を４６時間かけて連続ＩＶ注入。１回目の投与後、患者は、ガイドラインに準じた毒性に基づいて、減量、遅延、または中止を受け得る。
試験の第３相に登録する患者は、以下の組み入れ基準も満たさなければならない：
・組織学的に記録された胃または胃食道接合部（ＧＥＪの近位及び遠位５ｃｍと定義）の腺癌
・Ｃ１Ｄ１の２８日以内に実施される胸部、腹部及び骨盤の放射線イメージング（コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）が好ましく、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）は許容される）
・中央施設で実施されるＩＨＣ検査によって決定されるＦＧＦＲ２ｂ過剰発現及び／または中央施設で実施されるｃｔＤＮＡ血液ベースアッセイによって決定されるＦＧＦＲ２遺伝子増幅の腫瘍組織
・患者は、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の候補者でなければならない
・転移性または切除不能な疾患に対する先の化学療法がない（プレスクリーニング期間中のＦＧＦＲ２検査の結果を待つ間に投与される最大１回のｍＦＯＬＦＯＸ６は除く）
・先の白金系化学療法がない（組み入れ基準＃１８に記載されている場合を除く）
・先のアジュバント療法またはネオアジュバント療法（化学療法及び／または化学放射線療法）を受けている場合は、アジュバント療法の終了と登録との間に６ヶ月を超える期間が経過していなければならない。
第１相及び第３相の除外基準
第１相または第３相のいずれかに登録する患者は、以下の基準のいずれかに該当する場合、除外される：
・未治療もしくは症候性の中枢神経系（ＣＮＳ）転移（ＣＮＳイメージングは必要でない）。無症候性ＣＮＳ転移を有する患者は、少なくとも４週間臨床的に安定しており、かつ、ＣＮＳ疾患に関連する症状を管理するための手術、放射線または任意のコルチコステロイド療法などの介入を必要としない限り、適格である
・以下のいずれかを含む、心機能障害または臨床的に有意な心疾患：
・登録前６ヶ月以内の不安定狭心症
・登録前６ヶ月以内の急性心筋梗塞
・ニューヨーク心臓協会分類ＩＩ〜ＩＶのうっ血性心不全
・制御されていない高血圧（最適な医療管理にもかかわらず、≧１６０／９０と定義される）
・β遮断薬またはジゴキシン以外の抗不整脈療法を必要とする制御されていない心不整脈
・活動性冠動脈疾患
・ＱＴｃＦ≧４８０
・有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）グレード２以上の末梢性感覚ニューロパチー
・登録前１４日以内の全身治療を必要とする活動性感染症または任意の制御されていない感染症
・既知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連疾患、または既知の活性もしくは慢性Ｂ型もしくはＣ型肝炎
・間質性肺疾患（例えば、肺炎または肺線維症）の病歴
・出血傾向または凝固障害のエビデンスまたは病歴
・登録２８日以内の放射線治療。患者は、全ての急性放射線療法関連毒性から回復していなければならない。登録８週間以内に放射性医薬品（ストロンチウム、サマリウム）の使用がない
・ＦＧＦ−ＦＧＦＲ経路の任意の選択的阻害剤（例えば、ＡＺＤ４５４７、ＢＧＪ３９８、ＪＮＪ−４２７５６４９３、ＢＡＹ１１７９４７０）による前治療
・ＮＣＩ ＣＴＣＡＥグレード１を超える、先の全身治療からの継続中の有害作用（グレード２の脱毛症は除く）
・本臨床試験の登録２８日以内、または本臨床試験中における、別の治療臨床試験への参加または任意の試験薬の投与
・角膜欠陥、角膜潰瘍、角膜炎、円錐角膜、角膜移植の病歴、または角膜潰瘍の発生リスクを増加させる可能性のある他の既知の角膜異常
・既知の陽性のＨＥＲ２（３＋の陽性ＩＨＣ検査または２＋のＩＨＣ及び陽性ＦＩＳＨによって定義）
・登録前２８日以内の大きな外科的処置は認められない。局所／硬膜外麻酔に必要な手術は、登録から少なくとも７２時間前に完了していなければならない。全ての症例において、患者は、治療実施前に十分に回復し、安定していなければならない
・妊娠中または授乳中の女性（患者が試験治療薬投与中に授乳を中断し、試験中止から６ヶ月後に再開する場合を除く）；妊娠可能な女性は、試験中に妊娠を検討してはならない
・臨床試験と相容れない任意の重篤または不安定な随伴性全身性障害の存在（例えば、薬物乱用、精神障害、または制御されていない併発病、例えば、動脈血栓症、及び症候性肺塞栓症）
・試験への参加に伴うリスクを高める可能性があるか、または試験結果の解釈に干渉する可能性があり、試験責任医師の見解で、患者の試験への参加が適切ではないとされる、任意の他の状態の存在
・ポリソルベートを含む抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体製剤、または白金含有薬剤、５−ＦＵもしくはロイコボリンの成分に対する既知のアレルギーまたは過敏症
・以下を除く、過去の悪性腫瘍の病歴：
・根治的に治療された非黒色腫の皮膚悪性腫瘍
・上皮内子宮頸癌
・根治的に治療された乳管または小葉の上皮内乳癌であり、現在全身治療を受けていないもの
・５年を超えて根治的に治療された固形腫瘍で、再発のエビデンスないもの。
これらの組み入れ基準または除外基準の免除は認められない。
試験治療：
第１相において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、ｍＦＯＬＦＯＸ６化学療法の投与前に、２週間（±３日）ごとに約３０分（±１０分）かけて試験施設で投与される、静脈内（ＩＶ）バッグに希釈するための滅菌バイアルで提供される。コホート２で治療される患者にのみ、サイクル１の８日目に追加用量の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体を１回投与する。サイクル２以降、全ての患者は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、２週間ごとに各サイクルの１日目に抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与を受ける。ＦＰ１４４注入のＩＶ投与セットは、０．２２μｍのインラインフィルタまたは０．２２μｍのシリンジフィルタを備えなければならない。
第３相において、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、第１相の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と同様の方法で調製及び投与される。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与は、試験責任医師の評価による放射線学的もしくは臨床的な増悪、許容できない毒性、または患者がプロトコルに規定する他の離脱基準のいずれかを満たすまで、継続する。
オキサリプラチン、５−ＦＵ、及びロイコボリン（ｍＦＯＬＦＯＸ６）は、２週間（±７日）ごとに各施設（上記のとおり）で投与される。
薬物動態評価
第１相及び第３相に登録された全ての患者で血液試料をそれぞれ指定の時点で採取し、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの血清レベルを測定する。
ＰＫパラメーターは、非コンパートメント解析を使用して推定されるが、コンパートメント解析を適宜用いてもよい。本臨床試験の血清中濃度−時間データは、統合集団ＰＫ解析及び曝露−反応関係の評価のために、他の試験からのデータとともにプールする。
免疫原性評価
第１相及び第３相に登録された全ての患者について、抗（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体）抗体のための血液試料を採取する。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体に対する免疫応答として定義される免疫原性は、全ての患者から得た、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体に対する総抗体を測定することによって評価する。免疫原性試験は、スクリーニング、確認、及び滴定から構成される。抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体に対して確認された抗体応答の更なる特性評価を検討してもよい。
有効性評価
第３相中の腫瘍縮小効果の評価は、試験責任医師がＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１ガイドラインに準じて実施する。有効性の尺度には、臨床検査及び適切なイメージング技術、好ましくは、ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１ガイドラインに準じた適切なスライス厚での胸部、腹部及び骨盤のＣＴスキャン（ＭＲＩも許容される）から構成される腫瘍評価が含まれる。スキャンは、スクリーニング期間中に行われる（サイクル１の１日目の２１日以内）。標準治療の一部としてスクリーニング前に実施されるスキャンは、登録前の２８日以下に実施されるのでれば、許容される。スキャンは、サイクル１の１日目から８週間（±７日）ごとに実施する。
安全性評価
第１相及び第３相の両方における安全性の尺度には、ＡＥ、血液学的検査、臨床化学検査、尿検査、バイタルサイン、体重、併用薬／処置、ＥＣＯＧパフォーマンスステータス、対象の身体検査、ＥＣＧ及び眼科検査が含まれる。
薬力学評価
第Ｉ相
ＰＤ評価は、指定の時点で収集する。入手可能であれば、ＦＧＦＲ２状態を評価するために提出された腫瘍組織を、ＩＨＣの使用により、ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現についてレトロスペクティブに分析する。ＦＧＦＲ２状態の評価のために提出される血液試料は、試験治療薬の１回目の投与前に採取し、ｃｔＤＮＡ血液アッセイを使用して、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅についてレトロスペクティブに分析する。ＦＧＦＲ経路の探索的バイオマーカー分析のための血液試料は、長期にわたって採取する。
第３相
ＦＧＦＲ２状態を評価するために腫瘍組織を提出し、これを、ＩＨＣの使用により、ＦＧＦＲ２ｂ過剰発現についてプロスペクティブに分析する。ＦＧＦＲ２状態を評価するために血液試料を提出し、これを、ｃｔＤＮＡ血液アッセイの使用により、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅についてプロスペクティブに分析する。登録前に、組織または血液のいずれか（両方ではない）からの陽性結果が得られなければならない。
本試験に計画される総登録数は、最大約５６９人の患者である。あらゆる用量制限毒性について評価可能な患者約９〜２１人を第１相に登録する。第３相については、ＦＧＦＲ２で選択されたＧＣを有する約５４８人の患者を登録し、１：１に無作為化してｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体、またはｍＦＯＬＦＯＸ６単独を投与することによって、有効性及び忍容性を評価する。適格性のある患者は、地理上の地域（米国及び欧州対日本対アジアの他地域［中国を含む］対世界の他地域）、前治療の状況（ｄｅ ｎｏｖｏ対アジュバント／ネオアジュバント）、及び登録前のｍＦＯＬＦＯＸ６単回用量の投与（ありまたはなし）により層化する。
第１相では、分析は全て記述的であり、適宜、用量群及び全体で示される。記述統計には、連続変数の観察数、平均、標準偏差、中央値、範囲及び四分位範囲、ならびにカテゴリー変数の数及びパーセントが含まれ、９５％信頼区間が適宜示される。更に、減量または投与中止に至るＴＥＡＥの発生を集計し、まとめる。第３相では、主要な有効性解析は、ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体により治療した患者と、ｍＦＯＬＦＯＸ６により治療した患者間のＯＳの比較である。
主要エンドポイントのＯＳは、無作為化からあらゆる原因による死亡までの期間として定義される。副次的有効性エンドポイントには、ＰＦＳ及びＯＲＲが含まれるが、ＰＦＳは、無作為化から、試験責任医師の評価に基づいて放射線学的もしくは臨床的に増悪とされた日（ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準ずる）またはあらゆる原因による死亡日のいずれか早いほうまでの期間として定義されるのに対し、ＯＲＲは、ベースラインが測定可能な疾患を有し、かつ試験責任医師によってＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に準じて決定される部分奏効または完全奏効のある患者の割合として定義される。
この第３相試験は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体とｍＦＯＬＦＯＸ６の組み合わせの全生存期間（ＯＳ）のハザード比（ＨＲ）を、ｍＦＯＬＦＯＸ６単独と比較して評価するように設計する。３７４例の主要死亡イベントが８０％の検出力をもたらし、偽陽性エラー率２．５％を有するＣｏｘ回帰分析（片側）を使用して０．７５のＯＳのＨＲを検出することができる。ＯＳの指数分布を仮定すると、これは、１０ヶ月から１３．３ヶ月への生存期間中央値の約３３％の増加に該当する。ＯＳの統計的有意性は、推定ＨＲ＝０．８１５で生じ、これは、１０ヶ月から１２．２６ヶ月への生存期間中央値の約２２．６％の増加に該当する。
主要イベントの標的数を達成するためには、４４ヶ月の受入期間中に約５４８人の患者を無作為化（１：１）し、約２４ヶ月の更なる追跡調査を含む。
ＯＳの仮説を最初に検定する。ＯＳには中間解析と主解析の２つがあり、全てイベントに基づく解析である。
ＯＳの中間解析は２回計画され、１回目はＯＳイベントの５０％（約１８７例のイベント）後、２回目はＯＳイベントの７５％（約２８１例のイベント）後である。これらの中間解析の回数及び時期に柔軟性をもたせるために、Ｌａｎ−ＤｅＭｅｔｓの実施によるＯ’Ｂｒｉｅｎ−Ｆｌｅｍｉｎｇのモニタリング境界を使用して、２．５％の偽陽性エラー率を維持する。
ＯＳの主解析は、治療企図（ＩＴＴ）集団を使用して実施し、層別ログランク検定を使用して行う。層化因子は、音声自動応答／Ｗｅｂ登録システム（ＩＸＲＳ）に文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。
各治療群に関するＯＳ中央値及び関連する９５％信頼区間は、カプランマイヤー法を使用して推定する。ハザード比（ＨＲ＝λ抗−ＦＧＦＲ２−ＩＩＩＢ抗体＋ｍＦＯＬＦＯＸ６／λｍＦＯＬＦＯＸ６）は、治療群を唯一の主効果としたＣｏｘ回帰モデルを使用し、層別ログランク検定で使用したのと同じ層化因子で層化して推定する。層化していないＨＲも示す。
副次的エンドポイントのＰＦＳ及びＯＲＲの解析は、主要エンドポイントであるＯＳの解析が統計的に有意である場合に、階層的に検定する。ＰＦＳ及びＯＲＲへの影響に関する形式的な仮説は、０．０５の水準で階層的に検定する。ＰＦＳを最初に検定し、それが有意であれば、次にＯＲＲを検定する。主要エンドポイント及び副次的エンドポイントの検定におけるファミリーワイズの第一種過誤の確率は、このゲートキーピング検定手順（水準０．０５）を採用することによって制御される。
ＯＳの検定が有意である場合、ＯＳ解析の実施時に観察された全てのＰＦＳイベントに基づいて、層化ログランク検定を０．０５の水準で使用して、無増悪生存期間（ＰＦＳ）を検定する。ＰＦＳの主解析は、層別ログランク検査（両側）を使用して行う。層化因子は、音声自動応答／Ｗｅｂ登録システム（ＩＸＲＳ）に文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。
各治療群に関するＰＦＳ中央値及び関連する９５％信頼区間は、カプランマイヤー法を使用して推定する。ＨＲは、治療群を唯一の主効果としたＣｏｘ回帰モデルを使用し、層別ログランク検定で使用したのと同じ層化因子で層化して推定する。層化していないＨＲも示す。ＰＦＳ解析は、ＩＴＴ集団で行う。
ＰＦＳの検定が有意である場合、ＯＲＲの解析を、ベースラインを測定することが可能な疾患を有する患者間で実施する。ＯＲＲの解析において、ベースライン後に適切な腫瘍評価を受けていない患者は、ノンレスポンダーとしてカウントする。ＯＲＲの形式的な仮説検定は、層別化したＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ検定（両側、水準０．０５）を使用して実施する。層化因子は、ＩＸＲＳに文書化されている無作為化スケジュールの層化に使用されるものと同じである。
安全性解析：全てのＡＥは、国際医薬用語集（ＭｅｄＤＲＡ）を使用してコードする。試験責任医師は、ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３を使用してＡＥの重症度を分類する。治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、試験治療薬の１回目の投与以降に発生日を持つあらゆるイベント、または治療前に存在し治療後に悪化したあらゆるイベントと定義する。最終投与日＋２８日より前の発生日であるＴＥＡＥのみを概要表に記載する。
臨床検査データは、臨床検査の種類ごとにまとめる。試験治療薬の投与後に異常（すなわち、参照範囲外）及び／または臨床的に有意な異常を経験した患者の数及びパーセンテージを、各臨床検査の測定について示す。各臨床検査の測定は、ベースライン及びその後の全ての治療後予定来院についての記述統計を提供する。ベースラインから治療後来院までの変化も提供する。バイタルサインの記述統計も同様に提供する。加えて、ＣＴＣＡＥグレードのベースラインからのシフト（該当する場合）及び高／低フラグによるシフト（ＣＴＣＡＥグレードが定義されていない場合）を同様に提示する。
第Ｉ相の安全性解析は、安全性集団に含まれる患者について実施する。ＤＬＴの発生、ＴＥＡＥの発生、臨床検査異常（例えば、シフトテーブル）、バイタルサイン、角膜及び網膜所見、ならびにＥＣＧを用量レベルごとに集計し、まとめる。更に、減量または投与中止に至るＴＥＡＥの発生を集計し、まとめる。
第３相の安全性の解析は、試験期間中にいずれかの試験治療薬（ｍＦＯＬＦＯＸ６と組み合わせた抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体またはｍＦＯＬＦＯＸ６）の投与を受けた全ての患者を含み、治療後のあらゆる安全性情報を提供する。ＴＥＡＥの発生、臨床検査異常、バイタルサイン、角膜及び網膜所見、ならびにＥＣＧを治療群ごとに集計し、まとめる。
血清中抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体濃度−時間の個々のデータ及び平均（±ＳＤ）データを用量レベルごとに集計し、プロットする。適切かつ該当する場合、ＰＫパラメーターを用量レベルごとに集計し、要約する。データが許す限り、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体曝露に対する免疫原性の影響を用量レベルごとに評価し、集計し、まとめる。統合集団ＰＫ解析及び曝露−反応関係の評価を別個の報告書で提出する。
試験コホートの概略図を図３に提供する。
配列表
以下の表は、本明細書で参照したいくつかの配列の一覧を提供する。
Figure 2020520903
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Claims (50)

  1. 対象の胃癌を治療する方法であって、前記対象に、治療上有効な量の抗線維芽細胞増殖因子受容体２ＩＩＩｂ（抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ）抗体及び修正版ＦＯＬＦＯＸ６（ｍＦＯＬＦＯＸ６）化学療法を投与することを含む、前記方法。
  2. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、次の特性：
    ａ．ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに対する親和性よりも高い親和性でＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂに結合すること、またはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃに検出可能なレベルで結合しないこと、
    ｂ．ヒトＦＧＦＲ２に対するＦＧＦ２の結合を阻害すること、
    ｃ．ヒトＦＧＦＲ２に対するＦＧＦ７の結合を阻害すること、
    ｄ．マウス腫瘍モデルにおいて、ヒト腫瘍の成長を阻害すること、
    ｅ．ＡＤＣＣ活性を誘導すること、
    ｆ．増強されたＡＤＣＣ活性を有すること、
    ｇ．アフコシル化されていること、ならびに
    ｈ．マウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍組織中のＰＤ−Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びマクロファージのうちの１つ以上の数を対照と比較して増加させることが可能であること
    のうちの１つ以上を有する、請求項１に記載の方法。
  3. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
    （ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び
    （ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、
    前記軽鎖可変領域は、
    （ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、
    請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の前記重鎖可変ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の方法。
  5. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の前記軽鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３または４に記載の方法。
  6. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の前記重鎖可変ドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の前記軽鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項３〜６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の前記重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の方法。
  9. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の前記軽鎖が、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３または８に記載の方法。
  10. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の前記重鎖が、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項３、８または９のいずれか１項に記載の方法。
  11. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の前記軽鎖が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項３または８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、アフコシル化されている、請求項３〜１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、次の特性：
    ａ．位置Ａｓｎ２９７のフコースを欠いていること、
    ｂ．κ軽鎖定常領域を含むこと、
    ｃ．ＩｇＧ１重鎖定常領域を含むこと、
    ｄ．位置Ａｓｎ２９７がフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、増強されたＡＤＣＣ活性を有すること、
    ｅ．位置Ａｓｎ２９７がフコシル化されている同じアミノ酸配列を有する抗体と比較して、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有すること、ならびに
    ｆ．マウス腫瘍モデルにおいて、腫瘍組織中のＰＤ−Ｌ１陽性細胞、ＮＫ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びマクロファージのうちの１つ以上の数を対照と比較して増加させることが可能であること
    のうちの１つ以上を有する、請求項３〜１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 前記胃癌が、局所進行性、切除不能または転移性である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、６〜１５ｍｇ／ｋｇ、１０〜１５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、７〜２１日ごとに１回、７〜１５日ごとに１回、７〜１０日ごとに１回、１０〜１４日ごとに１回、１１〜１７日ごとに１回、１２〜１６日ごとに１回、１３〜１５日ごとに１回、７日ごとに１回、８日ごとに１回、９日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、１４日ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、１８日ごとに１回、１９日ごとに１回、２０日ごとに１回、または２１日ごとに１回投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、次の投与レジメン：
    （ａ）６〜１５ｍｇ／ｋｇの用量で、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が１４日ごとに１回投与される；
    （ｂ）６ｍｇ／ｋｇの用量で、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が１４日ごとに１回投与される；
    （ｃ）１０ｍｇ／ｋｇの用量で、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が１４日ごとに１回投与される；または
    （ｄ）１５ｍｇ／ｋｇの用量で、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が１４日ごとに１回投与される、
    請求項１８に記載の方法。
  20. （ａ）前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、６〜１５ｍｇ／ｋｇ、１０〜１５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇの用量で、１１〜１７日ごとに１回、１２〜１６日ごとに１回、１３〜１５日ごとに１回、または１４日ごとに１回投与され、（ｂ）３〜８ｍｇ／ｋｇ、５〜８ｍｇ／ｋｇ、７〜８ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、または８ｍｇ／ｋｇの少なくとも１回の中間用量が、（ａ）の２回の投与の間に投与され、（ｂ）の用量は、（ａ）の用量よりも少ない、請求項１８に記載の方法。
  21. （ｉ）（ａ）の用量が、１３〜１５日ごとに１０〜１５ｍｇ／ｋｇであり、
    （ｉｉ）（ａ）の用量が、１３〜１５日ごとに１５ｍｇ／ｋｇであり、
    （ｉｉｉ）（ｂ）の用量が、５〜８ｍｇ／ｋｇであり、（ａ）の少なくとも１回の投与から６〜８日後及び（ａ）の後続の投与の６〜８日前に投与され、
    （ｉｖ）（ａ）の用量が、１３〜１５日ごとに１０〜１５ｍｇ／ｋｇであり、（ｂ）の用量が、７〜８ｍｇ／ｋｇであり、（ａ）の少なくとも１回の投与から６〜８日後及び（ａ）の後続の投与の６〜８日前に投与され、
    （ｖ）（ａ）の用量が、１４日ごとに１５ｍｇ／ｋｇであり、（ｂ）の用量が、７〜８ｍｇ／ｋｇであり、（ａ）の少なくとも１回の投与から７日後及び（ａ）の後続の投与の７日前に投与され、
    （ｖｉ）（ａ）の用量が、１４日ごとに１５ｍｇ／ｋｇであり、（ｂ）の用量が、７．５ｍｇ／ｋｇであり、（ａ）の少なくとも１回の投与から７日後及び（ａ）の後続の投与の７日前に投与され、及び／または
    （ｖｉｉ）（ｂ）の用量が、（ｉ）〜（ｖｉ）のいずれかの（ａ）の用量の１回目の投与後に投与される、
    請求項２０に記載の方法。
  22. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、１５ｍｇ／ｋｇの用量で１４日ごとに１回投与され、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から６〜８日後に、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、７．５ｍｇ／ｋｇの用量で更に投与される、請求項１９に記載の方法。
  23. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、１５ｍｇ／ｋｇの用量で１４日ごとに１回投与され、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から７日後に、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、７．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記ｍＦＯＬＦＯＸ６が、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の静脈内（ＩＶ）注入またはＩＶボーラスによる投与を含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 前記ｍＦＯＬＦＯＸ６が、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の静脈内（ＩＶ）注入またはＩＶボーラスによる投与に続いて、４４〜４８時間にわたる２４００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵのＩＶ注入による投与を含む、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記ｍＦＯＬＦＯＸ６が、１０〜２１日ごとに１回、１０〜１５日ごとに１回、１０日ごとに１回、１１日ごとに１回、１２日ごとに１回、１３日ごとに１回、１４日ごとに１回、１５日ごとに１回、１６日ごとに１回、１７日ごとに１回、１８日ごとに１回、１９日ごとに１回、２０日ごとに１回、または２１日ごとに１回投与される、請求項２４または２５に記載の方法。
  27. 前記ｍＦＯＬＦＯＸ６が、１４日ごとに１回投与される、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記ｍＦＯＬＦＯＸ６が、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の静脈内（ＩＶ）注入またはＩＶボーラスによる投与に続いて、４４〜４８時間にわたる２４００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵのＩＶ注入による投与を含み、前記ｍＦＯＬＦＯＸ６は、１４日ごとに１回投与される、請求項２４に記載の方法。
  29. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及び前記ｍＦＯＬＦＯＸ６が、同時投与または逐次投与される、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記ｍＦＯＬＦＯＸ６の１回以上の投与が、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与前に行われる、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記ｍＦＯＬＦＯＸ６の２回の投与が、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与前に行われる、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記ｍＦＯＬＦＯＸ６の２回の投与が、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の投与前に行われる、請求項２９に記載の方法。
  33. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、前記ｍＦＯＬＦＯＸ６と同じ日及びｍＦＯＬＦＯＸ６の投与前に投与される、請求項２８に記載の方法。
  34. 前記胃癌が、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現していることが予め決定されており、及び／または前記胃癌が、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有することが予め決定されている、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記胃癌がＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現しているかどうかを決定すること、及び／または前記胃癌がＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有するかどうかを決定することを更に含む、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
  36. ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの過剰発現が、免疫組織化学染色（ＩＨＣ）によって決定される、請求項３４または３５に記載の方法。
  37. 前記過剰発現が、腫瘍細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％における＋２または３＋のＩＨＣシグナルによって予め決定されているか、または決定される、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記ＦＧＦＲ２遺伝子増幅が、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用してＦＧＦＲ２と染色体１０セントロメア（ＣＥＮ１０）の比を得ることによって予め決定されているか、または決定され、ここで、前記ＦＧＦＲ２遺伝子は、ＦＩＳＨによって決定されるＦＧＦＲ２／ＣＥＮ１０比が２以上であるとき、増幅しているとみなされる、請求項３４または３５に記載の方法。
  39. 前記ＦＧＦＲ２増幅が、循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）で予め検出されているか、または検出される、請求項３４、３５または３８に記載の方法。
  40. 対象において、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現している、局所進行性、切除不能または転移性胃癌を治療する方法であって、前記対象に、治療上有効な量の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及び修正版ＦＯＬＦＯＸ６（ｍＦＯＬＦＯＸ６）化学療法を投与することを含み、
    前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、アフコシル化され、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
    （ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び
    （ｉｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、
    前記軽鎖可変領域は、
    （ｉｖ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｖｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、
    前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体は、６〜１５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与され、続いて、８５ｍｇ／ｍ２のオキサリプラチン、４００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン、及び４００ｍｇ／ｍ２の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）のＩＶ注入またはＩＶボーラスによる投与に続いて、４４〜４８時間にわたる２４００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵのＩＶ注入による投与を含む前記ｍＦＯＬＦＯＸ６が投与され、
    前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６は、１３〜１５日ごとに投与され、任意選択により、３〜８ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の単回用量が、６〜１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から６〜８日後及び６〜１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の２回目の投与から６〜８日前に投与される、前記方法。
  41. （ａ）前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体が、１５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与され、（ｂ）前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体及びｍＦＯＬＦＯＸ６が、１４日ごとに同じ日に投与され、（ｃ）７．５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の単回用量が、１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与から７日後及び１５ｍｇ／ｋｇの抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の２回目の投与から７日前に投与される、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記胃癌が、腫瘍細胞の少なくとも１０％における２＋もしくは３＋のＩＨＣシグナルによって示されるように、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを過剰発現していることが予め決定されており、及び／または前記胃癌が、ｃｔＤＮＡにおけるＦＧＦＲ２遺伝子増幅を有することが予め決定されている、請求項４０または４１に記載の方法。
  43. 前記対象が、前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体の１回目の投与の前にｍＦＯＬＦＯＸ６の２回の投与を受けている、請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
  44. 請求項１〜４３のいずれか１項に記載の方法に従って患者の胃癌を治療するための薬剤の調製のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と、オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのそれぞれとの使用。
  45. 請求項１〜４０３のいずれか１項に記載の方法に従って患者の胃癌を治療することにおける使用のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と、オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのそれぞれとを含む、組成物。
  46. 請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と、オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのうちの少なくとも１つとの組み合わせを含む、組成物。
  47. 前記抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体と、前記オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのうちの少なくとも１つとが、別個の容器または区画にある、請求項４６に記載の組成物。
  48. オキサリプラチン、ロイコボリン及び５−ＦＵのそれぞれを別個の容器または区画に含む、請求項４７に記載の組成物。
  49. 胃癌治療における使用のための説明書を更に含む、請求項４６〜４８のいずれか１項に記載の組成物。
  50. がん治療における使用のための請求項４６〜４８のいずれか１項に記載の組成物。
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