JP2020518289A5

JP2020518289A5 -

Info

Publication number: JP2020518289A5
Application number: JP2020512082A
Authority: JP
Filing date: 2018-05-03
Publication date: 2021-06-17

Description

他の実施形態は特許請求の範囲内にある。
（１）以下のステップ：
(i) 非造血組織から得られたγδ T細胞の集団を提供するステップ；
(ii) 前記γδ T細胞を、効果的な量の
(a) IL-2またはIL-9;
(b) IL-15；および
(c) IL-21
の存在下で少なくとも5日間培養して増幅されたγδ T細胞の集団を生成するステップ；
を含む、γδ T細胞を増幅させる方法。
（２）ステップ(ii)が、さらにIL-4の存在下でのγδ T細胞の培養を含む、（１）に記載の方法。
（３）以下のステップ：
(i) 非造血組織から得られたγδ T細胞の集団を提供するステップ；
(ii) 前記γδ T細胞を、IL-2と、IL-15と、IL-21、ストロマ細胞由来因子（SDF）、IL-1β、IL-12、IL-18およびIL-33からなる群より選択される少なくとも1つの因子と、の存在下で少なくとも5日間培養して、増幅されたγδ T細胞の集団を生成するステップ；を含む、γδ T細胞を増幅させる方法。
（４）ステップ(ii)が、外因性TCR経路アゴニストの不存在下でのγδ T細胞の培養を含む、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の方法。
（５）ステップ(ii)が、無血清培地でのγδ T細胞の培養を含む、（１）〜（４）のいずれか１項に記載の方法。
（６）ステップ(i)の後、分離されたγδ T細胞の集団を生成するために、前記γδ T細胞を非造血細胞から分離する工程をさらに含み、かつ、
ステップ(ii)が以下を含む：
(a) 実質的にストロマ細胞との接触がない、γδ T細胞の培養；
(b) 実質的に腫瘍細胞との接触がない、γδ T細胞の培養；および/または
(c) 実質的に支持細胞との接触がない、γδ T細胞の培養；
（１）〜（５）のいずれか１項に記載の方法。
（７）以下のステップ：
(i) 非造血細胞およびγδ T細胞を含む非造血組織を提供するステップ；
(ii) γδ T細胞を非造血細胞から分離して、分離されたγδ T細胞の集団を得るステップ；
(iii) 前記γδ T細胞を、IL-2と、IL-15と、IL-21、SDF、IL-1β、IL-12、IL-18およびIL-33からなる群より選択される因子と、の存在下で少なくとも5日間培養して、増幅されたγδ T細胞の集団を生成するステップ；
を含む、γδ T細胞を増幅させる方法。
（８）前記非造血組織は、ヒトまたは非ヒト動物の対象から得られたものである、（７）に記載の方法。
（９）ステップ(ii)が、IL-2、IL-15およびIL-21の存在下でのγδ T細胞の培養を含む、（７）または（８）に記載の方法。
（１０）ステップ(ii)が無血清培地でのγδ T細胞の培養を含む、（７）〜（９）のいずれか１項に記載の方法。
（１１）ステップ(iii)が、実質的にストロマ細胞と前記γδ T細胞との接触がない条件下でのγδ T細胞の培養を含む、（７）〜（１０）のいずれか１項に記載の方法。
（１２）ステップ(iii)が、外因性TCR経路アゴニストが存在しない条件下でのγδ T細胞の培養を含む、（７）〜（１１）のいずれか１項に記載の方法。
（１３）非造血細胞からγδ T細胞を分離するステップが、非造血組織から細胞を放出させるように構築された合成スキャホールド上でのγδ T細胞の培養を含む、（６）〜（１２）のいずれか１項に記載の方法。
（１４）非造血細胞からγδ T細胞を分離するステップが、IL-2および/またはIL-15の存在下でのγδ T細胞と非造血細胞との培養を含む、（６）〜（１３）のいずれか１項に記載の方法。
（１５）分離されたリンパ球の集団が分離されたγδ T細胞の集団を含み、前記分離されたγδ T細胞の集団が分離されたVδ1 T細胞の集団を含む、（６）〜（１４）のいずれか１項に記載の方法。
（１６）前記分離されたリンパ球の集団の1〜10％が、増幅前のγδ T細胞である、（１５）に記載の方法。
（１７）前記分離されたリンパ球の集団の1〜10％が、増幅前のVδ1 T細胞である、（１５）または（１６）に記載の方法。
（１８）前記分離されたγδ T細胞の集団の少なくとも80％が、増幅前のVδ1 T細胞である、（６）〜（１７）のいずれか１項に記載の方法。
（１９）前記分離されたγδ T細胞の集団の10％未満が、増幅前のVδ2 T細胞である、（６）〜（１８）のいずれか１項に記載の方法。
（２０）αβ T細胞および/またはNK細胞は、前記分離されたγδ T細胞の集団から除去される、（６）〜（１９）のいずれか１項に記載の方法。
（２１）増幅前に、前記分離されたγδ T細胞の集団が、少なくとも10％のCCR3 ⁺ 細胞、少なくとも10％のCCR4 ⁺ 細胞、少なくとも10％のCCR7 ⁺ 細胞、少なくとも10％のCCR8 ⁺ 細胞、または少なくとも10％のCD103 ⁺ 細胞を含む、（６）〜（２０）のいずれか１項に記載の方法。
（２２）増幅前に、前記分離されたγδ T細胞の集団が、参照となる血液常在性Vδ2 T細胞の集団と比較して、高頻度のCCR3 ⁺ 細胞、CCR4 ⁺ 細胞、CCR7 ⁺ 細胞および/またはCCR8 ⁺ 細胞を含む、（６）〜（２１）のいずれか１項に記載の方法。
（２３）前記分離されたVδ1 T細胞の集団が、参照となる血液常在性Vδ1 T細胞の集団と比較して、高頻度のNKG2D ⁺ 細胞、CD56 ⁺ 細胞、CD69 ⁺ 細胞および/またはTIM3 ⁺ 細胞を含む、（１４）〜（２２）のいずれか１項に記載の方法。
（２４）14日間以内の培養で、増幅されたγδ T細胞の集団が、増幅前の分離されたγδ T細胞の集団と比較して、少なくとも20倍の数のγδ T細胞を含む、（１）〜（２３）のいずれか１項に記載の方法。
（２５）21日間以内の培養で、増幅されたγδ T細胞の集団が、増幅前の分離されたγδ T細胞の集団と比較して、少なくとも50倍の数のγδ T細胞を含む、（１）〜（２４）のいずれか１項に記載の方法。
（２６）前記増幅されたγδ T細胞の集団が、増幅されたVδ1 T細胞の集団を含む、（１）〜（２５）のいずれか１項に記載の方法。
（２７）14日間以内の培養で、増幅されたVδ1 T細胞の集団が、増幅前の分離されたVδ1 T細胞の集団と比較して、少なくとも20倍の数のVδ1 T細胞を含む、（２６）に記載の方法。
（２８）21日間以内の培養で、増幅されたVδ1 T細胞の集団が、増幅前の分離されたVδ1 T細胞の集団と比較して、少なくとも50倍の数のVδ1 T細胞を含む、（２６）または（２７）に記載の方法。
（２９）増幅されたγδ T細胞の集団がCD27を発現する、（１）〜（２８）のいずれか１項に記載の方法。
（３０）増幅されたγδ T細胞の集団が、分離されたγδ T細胞の集団よりも、高いCD27発現量の中央値を示す、（２９）に記載の方法。
（３１）増幅されたγδ T細胞の集団が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して、少なくとも2倍のCD27発現量の中央値を示す、（３０）に記載の方法。
（３２）増幅されたγδ T細胞の集団が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して、高頻度のCD27 ⁺ 細胞を有する、（２９）に記載の方法。
（３３）増幅されたγδ T細胞の集団が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して、少なくとも5％高頻度のCD27 ⁺ 細胞を有する、（３２）に記載の方法。
（３４）増幅されたVδ1 T細胞の集団がCD27を発現する、（２６）〜（２８）のいずれか１項に記載の方法。
（３５）増幅されたVδ1 T細胞の集団が、分離されたVδ1 T細胞の集団よりも、高いCD27発現量の中央値を示す、（３４）に記載の方法。
（３６）増幅されたVδ1 T細胞の集団が、分離されたVδ1 T細胞の集団と比較して、少なくとも2倍のCD27発現量の中央値を示す、（３５）に記載の方法。
（３７）増幅されたVδ1 T細胞の集団が、分離されたVδ1 T細胞の集団と比較して、高頻度のCD27 ⁺ 細胞を有する、（３４）〜（３６）のいずれか１項に記載の方法。
（３８）増幅されたVδ1 T細胞の集団が、分離されたVδ1 T細胞の集団と比較して、少なくとも5％高頻度のCD27 ⁺ 細胞を有する、（３７）に記載の方法。
（３９）増幅されたγδ T細胞の集団が、分離されたγδ T細胞の集団よりも、低いTIGIT平均発現量を示す、（１）〜（３８）のいずれか１項に記載の方法。
（４０）増幅されたγδ T細胞の集団が、分離されたγδ T細胞の集団よりも、少なくとも50％低いTIGIT平均発現量を示す、（３９）に記載の方法。
（４１）増幅されたγδ T細胞の集団が、分離されたγδ T細胞の集団よりも、低頻度のTIGIT ⁺ 細胞を有する、（３９）または（４０）に記載の方法。
（４２）増幅されたγδ T細胞の集団が、分離されたγδ T細胞の集団よりも、少なくとも20％低頻度のTIGIT+細胞を有する、（４１）に記載の方法。
（４３）増幅されたVδ1 T細胞の集団が、分離されたVδ1 T細胞の集団よりも、低いTIGIT平均発現量を示す、（２６）〜（２８）、または（３４）〜（３８）のいずれか１項に記載の方法。
（４４）増幅されたVδ1 T細胞の集団が、分離されたVδ1 T細胞の集団よりも、少なくとも50％低いTIGIT平均発現量を示す、（４３）に記載の方法。
（４５）増幅されたVδ1 T細胞の集団が、分離されたVδ1 T細胞の集団よりも、低頻度のTIGIT ⁺ 細胞を有する、（２６）〜（２８）、または（３４）〜（３８）のいずれか１項に記載の方法。
（４６）増幅されたVδ1 T細胞の集団が、分離されたVδ1 T細胞の集団よりも、少なくとも20％低頻度のTIGIT ⁺ 細胞を有する、（４５）に記載の方法。
（４７）増幅されたγδ T細胞の集団における、CD124、CD215、CD360、CTLA4、CD1b、BTLA、CD39、CD45RA、Fasリガンド、CD25、ICAM-1、CD31、KLRG1、CD30、およびCD2からなる群から選択される1以上のマーカーの平均発現量が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して高い、（１）〜（４６）のいずれか１項に記載の方法。
（４８）増幅されたγδ T細胞の集団における、CD124、CD215、CD360、CTLA4、CD1b、BTLA、CD39、CD45RA、Fasリガンド、CD25、ICAM-1、CD31、KLRG1、CD30、およびCD2からなる群から選択される1以上のマーカーを発現する細胞が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して高頻度である、（１）〜（４７）のいずれか１項に記載の方法。
（４９）増幅されたγδ T細胞の集団における、NKp44、NKp46、ICAM-2、CD70、CD28、CD103、NKp30、LAG3、CCR4、CD69、PD-1およびCD64からなる群から選択される1以上のマーカーの平均発現量が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して低い、（１）〜（４８）のいずれか１項に記載の方法。
（５０）増幅されたγδ T細胞の集団における、NKp44、NKp46、ICAM-2、CD70、CD28、CD103、NKp30、LAG3、CCR4、CD69、PD-1およびCD64からなる群から選択される1以上のマーカーを発現する細胞が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して低頻度である、（１）〜（４９）のいずれか１項に記載の方法。
（５１）増幅されたVδ1 T細胞の集団における、CD124、CD215、CD360、CTLA4、CD1b、BTLA、CD39、CD45RA、Fasリガンド、CD25、ICAM-1、CD31、KLRG1、CD30、およびCD2からなる群から選択される1以上のマーカーの平均発現量が、分離されたVδ1 T細胞の集団と比較して高い、（２６）〜（２８）、（３４）〜（３８）、（４３）または（４５）のいずれか１項に記載の方法。
（５２）増幅されたγδ T細胞の集団における、CD124、CD215、CD360、CTLA4、CD1b、BTLA、CD39、CD45RA、Fasリガンド、CD25、ICAM-1、CD31、KLRG1、CD30、およびCD2からなる群から選択される1以上のマーカーを発現する細胞が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して高頻度である、（２６）〜（２８）、（３４）〜（３８）、（４３）、（４５）または（５１）のいずれか１項に記載の方法。
（５３）増幅されたγδ T細胞の集団における、NKp44、NKp46、ICAM-2、CD70、CD28、CD103、NKp30、LAG3、CCR4、CD69、PD-1およびCD64からなる群から選択される1以上のマーカーの平均発現量が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して低い、（２６）〜（２８）、（３４）〜（３８）、（４３）、（４５）、（５１）または（５２）のいずれか１項に記載の方法。
（５４）増幅されたγδ T細胞の集団における、NKp44、NKp46、ICAM-2、CD70、CD28、CD103、NKp30、LAG3、CCR4、CD69、PD-1およびCD64からなる群から選択される1以上のマーカーを発現する細胞が、分離されたγδ T細胞の集団と比較して低頻度である、（２６）〜（２８）、（３４）〜（３８）、（４３）、（４５）または（５１）〜（５３）のいずれか１項に記載の方法。
（５５）ステップ(iii)が、実質的にストロマ細胞との接触がない、γδ T細胞の培養を含む、（８）〜（５４）のいずれか１項に記載の方法。
（５６）ステップ(iii)が、実質的に支持細胞との接触がない、γδ T細胞の培養を含む、（８）〜（５５）のいずれか１項に記載の方法。
（５７）ステップ(iii)が、実質的に腫瘍細胞との接触がない、γδ T細胞の培養を含む、（８）〜（５５）のいずれか１項に記載の方法。
（５８）前記非造血組織が腫瘍組織ではない、（１）〜（５７）のいずれか１項に記載の方法。
（５９）前記非造血組織が皮膚である、（１）〜（５８）のいずれか１項に記載の方法。
（６０）（１）〜（５９）のいずれかの方法により得られた、増幅されたγδ T細胞。
（６１）分離された集団のγδ T細胞の少なくとも50％がCD27を発現し、実質的にTIGITを発現しない、分離されたγδ T細胞の集団。
（６２）分離された集団のγδ T細胞の少なくとも50％がVδ1を発現する、請求項６１に記載の分離されたγδ T細胞の集団。
（６３）（６０）に記載の増幅されたγδ T細胞、または、（６１）若しくは（６２）に記載の分離されたγδ T細胞の集団を含む、医薬組成物。
（６４）対象における癌または感染症の治療方法に使用するための、（６３）に記載の医薬組成物。
（６５）対象における癌または感染症の治療用薬剤の製造における、（６３）に記載の医薬組成物の使用。
（６６）治療に効果的な量の、（１）〜（５９）のいずれか１項に記載の方法により得られた増幅されたγδ T細胞、請求項６０に記載の増幅されたγδ T細胞、（６１）若しくは（６２）に記載の分離された集団、または、（６３）に記載の医薬組成物を、治療を要する対象に投与するステップを含む、養子T細胞療法により対象を治療する方法。
（６７）増幅されたγδ T細胞の治療に効果的な量は、1投与あたり10×10 ¹² 細胞未満である、（６６）に記載の方法。
（６８）前記治療を要する対象への1以上の追加の治療剤の投与を含む、（６６）または（６７）に記載の方法。
（６９）前記1以上の追加の治療剤は、免疫療法剤、細胞傷害剤、成長阻害剤、放射線治療剤、血管新生阻害剤、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、（６８）に記載の方法。
（７０）前記1以上の追加の治療剤は、前記増幅されたγδ T細胞と同時に投与される、（６８）または（６９）に記載の方法。
（７１）前記1以上の追加の治療剤は、前記増幅されたγδ T細胞の投与後に投与される、（６８）または（６９）に記載の方法。
（７２）前記追加の治療剤が、免疫療法剤である、（６８）〜（７１）のいずれか１項に記載の方法。
（７３）治療に有効な量の（６３）に記載の医薬組成物を、治療を要する対象に投与するステップを含む、養子T細胞療法により対象を治療する方法。
（７４）前記対象がヒトである、（６６）〜（７３）のいずれか１項に記載の方法。
（７５）前記ヒトがヒト癌患者である、（７４）に記載の方法。
（７６）前記ヒト癌患者が固形癌に対する治療を受けている、（７５）に記載の方法。
（７７）前記ヒトはウイルス感染に対する治療を受けている、（７６）に記載の方法。

Claims

以下のステップ(i)及び(ii)を含むγδ T細胞を増幅させる方法であって：
(i) 非造血組織から得られたγδ T細胞の集団を提供するステップ；
(ii) 前記γδ T細胞を、効果的な量の
(a) IL-2またはIL-9;
(b) IL-15；および
(c) IL-21
の存在下で少なくとも5日間培養して増幅されたγδ T細胞の集団を生成するステップ；
前記方法は、ステップ(i)の後に、γδ T細胞を非造血細胞から分離して、分離されたγδ T細胞の集団を生成するステップを含み、かつ、ステップ(ii)は、実質的にストロマ細胞との接触のない条件下でのγδ T細胞の培養を含み、
ステップ（ii）は、外因性TCR経路アゴニストのない条件下でのγδ T細胞の培養を含む、方法。
ステップ(ii)が、さらにIL-4の存在下でのγδ T細胞の培養を含む、請求項１に記載の方法。
ステップ(ii)が、さらに、前記γδ T細胞を、IL-2と、IL-15と、IL-21、ストロマ細胞由来因子（SDF）、IL-1β、IL-12、IL-18およびIL-33からなる群より選択される少なくとも1つの因子と、の存在下で少なくとも5日間培養して、増幅されたγδ T細胞の集団を生成するステップ；を含む、請求項１に記載の方法。
ステップ(ii)が、無血清培地でのγδ T細胞の培養を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
ステップ(i)の後、分離されたγδ T細胞の集団を生成するために、前記γδ T細胞を非造血細胞から分離する工程をさらに含み、かつ、
ステップ(ii)が以下を含む：
(a) 実質的に腫瘍細胞との接触がない、γδ T細胞の培養；および/または
(b) 実質的に支持細胞との接触がない、γδ T細胞の培養；
請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
ステップ(ii)が無血清培地でのγδ T細胞の培養を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
ステップ(iii)が、実質的にストロマ細胞と前記γδ T細胞との接触がない条件下でのγδ T細胞の培養を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
非造血細胞からγδ T細胞を分離するステップが、非造血組織から細胞を放出させるように構築された合成スキャホールド上でのγδ T細胞の培養を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
非造血細胞からγδ T細胞を分離するステップが、IL-2および/またはIL-15の存在下でのγδ T細胞と非造血細胞との培養を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
分離されたリンパ球の集団が分離されたγδ T細胞の集団を含み、前記分離されたγδ T細胞の集団が分離されたVδ1 T細胞の集団を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
(a)前記分離されたγδ T細胞の集団の少なくとも80％が、増幅前のVδ1 T細胞である、及び/又は、
(b)前記分離されたγδ T細胞の集団の10％未満が、増幅前のVδ2 T細胞である、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
αβ T細胞および/またはNK細胞は、前記分離されたγδ T細胞の集団から除去される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
14日間以内の培養で、増幅されたγδ T細胞の集団が、増幅前の分離されたγδ T細胞の集団と比較して、少なくとも20倍の数のγδ T細胞を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
21日間以内の培養で、増幅されたγδ T細胞の集団が、増幅前の分離されたγδ T細胞の集団と比較して、少なくとも50倍の数のγδ T細胞を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
前記増幅されたγδ T細胞の集団が、増幅されたVδ1 T細胞の集団を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
14日間以内の培養で、増幅されたVδ1 T細胞の集団が、増幅前の分離されたVδ1 T細胞の集団と比較して、少なくとも20倍の数のVδ1 T細胞を含む、請求項１５に記載の方法。
21日間以内の培養で、増幅されたVδ1 T細胞の集団が、増幅前の分離されたVδ1 T細胞の集団と比較して、少なくとも50倍の数のVδ1 T細胞を含む、請求項１５または１６に記載の方法。
前記非造血組織が皮膚である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。