JP2020514701A5 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020514701A5 JP2020514701A5 JP2019532807A JP2019532807A JP2020514701A5 JP 2020514701 A5 JP2020514701 A5 JP 2020514701A5 JP 2019532807 A JP2019532807 A JP 2019532807A JP 2019532807 A JP2019532807 A JP 2019532807A JP 2020514701 A5 JP2020514701 A5 JP 2020514701A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sample
- modification
- target protein
- binder
- applying
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims description 64
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 51
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims description 42
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims description 42
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 42
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 37
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 claims description 37
- 230000001809 detectable Effects 0.000 claims description 36
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 claims description 30
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 30
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 30
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 claims description 27
- FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L Nitro blue tetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 18
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 claims description 17
- IPVTTYAHKXZGCQ-QOCHGBHMSA-N (4Z)-3-oxo-4-[(4-sulfonaphthalen-1-yl)hydrazinylidene]naphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N/N=C3/C4=CC=C(C=C4C=C(C3=O)S(=O)(=O)O)S(O)(=O)=O)=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 IPVTTYAHKXZGCQ-QOCHGBHMSA-N 0.000 claims description 12
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl dihydrogen phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 4-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=C(Cl)C2=C1 LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 4-nitrophenyl-α-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 0.000 claims description 12
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 12
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N O-Phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229940072417 Peroxidase Drugs 0.000 claims description 12
- 108090000437 Peroxidases Proteins 0.000 claims description 12
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 12
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 12
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 claims description 12
- YCMNFTXISHKEBZ-UHFFFAOYSA-N iodonitrotetrazolium Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C=CC=CC=2)=N1 YCMNFTXISHKEBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 claims description 12
- 239000001022 rhodamine dye Substances 0.000 claims description 11
- 230000003248 secreting Effects 0.000 claims description 10
- -1 Benzodazapin (BD) Chemical compound 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims description 7
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-N,N-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- BLEMLGBVQSNDOD-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CN=C2[C]1C(Cl)=C(Br)C=C2 BLEMLGBVQSNDOD-AEOCFKNESA-N 0.000 claims description 6
- MZRUFMBFIKGOAL-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-1H-pyrazole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=NN1 MZRUFMBFIKGOAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N ABTS Chemical compound S/1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N\N=C1/SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N 0.000 claims description 6
- CMMUPTUNYBWEQB-UHFFFAOYSA-L C1=CC(Br)=C2C(Cl)=C(OP([O-])(=O)[O-])NC2=C1 Chemical compound C1=CC(Br)=C2C(Cl)=C(OP([O-])(=O)[O-])NC2=C1 CMMUPTUNYBWEQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 6
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-L Sulphite Chemical compound [O-]S([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N Texas Red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 claims description 6
- 102400000757 Ubiquitin Human genes 0.000 claims description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims description 6
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 6
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 6
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 6
- 238000000339 bright-field microscopy Methods 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- 125000002350 geranyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 6
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 claims description 6
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 claims description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 6
- MUUHXGOJWVMBDY-UHFFFAOYSA-L tetrazolium blue Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 MUUHXGOJWVMBDY-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- RONADMZTCCPLEF-UHFFFAOYSA-M tetrazolium violet Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C3=CC=CC=C3C=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 RONADMZTCCPLEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- AWBOSXFRPFZLOP-UHFFFAOYSA-N 2,1,3-benzoxadiazole Chemical compound C1=CC=CC2=NON=C21 AWBOSXFRPFZLOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethylcarbazol-3-amine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims 2
- JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethoxybenzidine Chemical compound C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NIKFYOSELWJIOF-UHFFFAOYSA-O Fuchsine Chemical compound Cl.C1=C(N)C(C)=CC(C(=C2C=CC(=[NH2+])C=C2)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 NIKFYOSELWJIOF-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- 238000003556 assay method Methods 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims 1
- 125000003698 tetramethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 6
- HOQAPVYOGBLGOC-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-9H-carbazole Chemical compound C12=CC=CC=C2NC2=C1C=CC=C2CC HOQAPVYOGBLGOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VYXSBFYARXAAKO-BXMGYBSLSA-N CHEMBL3183331 Chemical compound Cl.C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=C\C(=N\CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-BXMGYBSLSA-N 0.000 description 5
- COIVODZMVVUETJ-UHFFFAOYSA-N Sulforhodamine 101 Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C1C1=C(C=C2C3=C4CCCN3CCC2)C4=[O+]C2=C1C=C1CCCN3CCCC2=C13 COIVODZMVVUETJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XJENLUNLXRJLEZ-UHFFFAOYSA-M lissamine rhodamine Chemical compound [Na+].C=12C=C(C)C(N(CC)CC)=CC2=[O+]C=2C=C(N(CC)CC)C(C)=CC=2C=1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O XJENLUNLXRJLEZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- MYIOYATURDILJN-UHFFFAOYSA-N rhodamine 110 Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N)=CC2=[O+]C2=CC(N)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O MYIOYATURDILJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 5
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 2
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
Description
本発明の好ましい実施態様が示され、記載されているが、当業者には、それらに添付の特許請求の範囲を超えない修正がなされてもよいことが容易に明らかである。したがって、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。特許請求の範囲で列挙される参照番号は、例示的且つ特許事務所のレビューを容易にするためだけのものであり、決して限定的ではない。いくつかの実施態様において、この特許出願に提示される図は、角度、寸法比等を含め、縮尺通りに描かれている。いくつかの実施態様において、図は代表的であるのみであり、特許請求の範囲は図の寸法により制限されない。いくつかの実施態様において、語句「含む」を使用する本明細書に記載される発明の説明は、「から成る」として記載することのできる実施態様を含み、したがって、用語「から成る」を使用する本発明の一又は複数の実施態様を主張するためのそのような書面の説明要件が満たされる。
＜さらなる実施態様＞
［実施態様１］
ａ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の標的タンパク質バイオマーカーに対するシグナルを増幅する方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様２］
試料が組織試料である、実施態様１に記載の方法。
［実施態様３］
組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料である、実施態様２に記載の方法。
［実施態様４］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様１−３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様４に記載の方法。
［実施態様６］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様１−５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様６に記載の方法。
［実施態様８］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様６又は７に記載の方法。
［実施態様９］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様１−８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１０］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様１−９のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１１］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様１０に記載の方法。
［実施態様１２］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様１−１１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１３］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様１−１２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１４］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様１３に記載の方法。
［実施態様１５］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様１−１４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１６］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様１５に記載の方法。
［実施態様１７］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様１−１６のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１８］
２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様１−１７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１９］
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、実施態様１−１８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様２０］
ａ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的なポリクローナル第２結合剤を適用することであって、ポリクローナル第２結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の標的タンパク質バイオマーカーに対するシグナルを増幅する方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様２１］
試料が組織試料である、実施態様２０に記載の方法。
［実施態様２２］
組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料である、実施態様２１に記載の方法。
［実施態様２３］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様２０−２２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様２４］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様２３に記載の方法。
［実施態様２５］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様２０−２４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様２６］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様２５に記載の方法。
［実施態様２７］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様２５又は２６に記載の方法。
［実施態様２８］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様２０−２７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様２９］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様２０−２８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３０］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様２９に記載の方法。
［実施態様３１］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様２０−３０のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３２］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様２０−３１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３３］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様３２に記載の方法。
［実施態様３４］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様２０−３３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３５］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様３４に記載の方法。
［実施態様３６］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様２０−３５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３７］
２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様２０−３６のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３８］
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、実施態様２０−３７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３９］
ａ．組織試料を脱パラフィン化試薬で処理すること；
ｂ．組織試料を抗原回復試薬で処理すること；
ｃ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を組織試料に適用すること；
ｄ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｅ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｆ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｇ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料中の標的タンパク質バイオマーカーに対するシグナルを増幅する方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様４０］
標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を適用する前に、組織試料をプロテアーゼで処理することを更に含む、実施態様３９に記載の方法。
［実施態様４１］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様３９又は４０に記載の方法。
［実施態様４２］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様４１に記載の方法。
［実施態様４３］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様３９−４２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様４４］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様４３に記載の方法。
［実施態様４５］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様４３又は４４に記載の方法。
［実施態様４６］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様３９−４５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様４７］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様３９−４６のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様４８］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様４７に記載の方法。
［実施態様４９］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様３９−４８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５０］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様３９−４９のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５１］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様５０に記載の方法。
［実施態様５２］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様３９−５１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５３］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様５２に記載の方法。
［実施態様５４］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様３９−５３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５５］
２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様３９−５４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５６］
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、実施態様３９−５５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５７］
ａ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の標的タンパク質バイオマーカーを検出するための定量的免疫組織化学（ＩＨＣ）の方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様５８］
試料が組織試料である、実施態様５７に記載の方法。
［実施態様５９］
組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料である、実施態様５８に記載の方法。
［実施態様６０］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様５７−５９のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６１］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６２］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様５７−６１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６３］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様６２に記載の方法。
［実施態様６４］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様６２又は６３に記載の方法。
［実施態様６５］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様５７−６４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６６］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様５７−６５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６７］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様６６に記載の方法。
［実施態様６８］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様５７−６７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６９］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様５７−６８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７０］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様６９に記載の方法。
［実施態様７１］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様５７−７０のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７２］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様７１に記載の方法。
［実施態様７３］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様５７−７２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７４］
２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様５７−７３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７５］
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、実施態様５７−７４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７６］
ａ．分泌標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の分泌標的タンパク質バイオマーカーの定量的免疫組織化学（ＩＨＣ）の方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが分泌標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様７７］
試料が組織試料である、実施態様７６に記載の方法。
［実施態様７８］
組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料である、実施態様７７に記載の方法。
［実施態様７９］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様７６−７８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８０］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様７９に記載の方法。
［実施態様８１］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様７６−８０のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８２］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様８１に記載の方法。
［実施態様８３］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様８１又は８２に記載の方法。
［実施態様８４］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様７６−８３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８５］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様７６−８４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８６］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様８５に記載の方法。
［実施態様８７］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様７６−８６のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８８］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様７６−８７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８９］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様８８に記載の方法。
［実施態様９０］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様７６−８９のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９１］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様９０に記載の方法。
［実施態様９２］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様７６−９１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９３］
２つ以上の分泌標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様７６−９２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９４］
分泌標的タンパク質バイオマーカー及び１つ以上の更なる標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重ＩＨＣアッセイを可能にする、実施態様７６−９３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９５］
自動化されている、実施態様１−９４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９６］
自動染色機で実行される、実施態様１−９５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９７］
手動である、実施態様１−９４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９８］
実施態様１−９４のいずれか一項に記載の方法を実行するための自動染色機。
［実施態様９９］
プロセッサに接続されたメモリを備える自動染色装置であって、メモリが、プロセッサによって実行されると、実施態様１−７５のいずれか一項に記載の方法のための動作を自動染色装置に実行させるコンピュータ可読命令を記憶する、自動染色装置。
［実施態様１００］
実施態様１−９４のいずれか一項に記載の方法を実行するための、スライドホルダー、試薬及びディスペンサーを備える自動システム。
［実施態様１０１］
プロセッサに接続されたメモリを備えるシステムを更に含み、メモリが、プロセッサによって実行されると、実施態様１−６６のいずれか一項に記載の方法のための動作を自動システムに実行させるコンピュータ可読命令を記憶する、実施態様１００に記載のシステム。
［実施態様１０２］
ディスペンサーがスライドホルダー内のスライド上に試薬を分配するように適合されている、実施態様１００又は１０１に記載のシステム。
［実施態様１０３］
ａ．患者の腫瘍から組織切片を調製すること；
ｂ．実施態様１−９７のいずれか一項に記載の標的タンパク質バイオマーカーについて組織切片を組織化学的に染色することであって、標的タンパク質バイオマーカーは点状ドットとして現れる、染色すること、
ｃ．（ｂ）の染色された組織切片のデジタル画像を取得すること；
ｄ．染色された組織切片中の対象領域（ＲＯＩ）を同定し、標的タンパク質バイオマーカーに対応するＲＯＩ中の点状ドットを定量すること；
ｅ．定量化された点状ドットに所定のスコアリング関数を適用すること
を含むワークフロー方法。
［実施態様１０４］
ａ．実施態様１−９７のいずれか一項に記載の第２の標的タンパク質バイオマーカーについて組織切片を染色することであって、標的タンパク質バイオマーカーは点状ドットとして現れる、染色すること
ｂ．（ａ）の染色された組織切片のデジタル画像を取得すること；
ｃ．染色された組織切片中の対象領域（ＲＯＩ）を同定し、標的タンパク質バイオマーカー及び第２の標的タンパク質バイオマーカーに対応するＲＯＩ中の点状ドットを定量すること；
ｄ．定量化された点状ドットに所定のスコアリング関数を適用すること
を更に含む、実施態様１０３に記載の方法。
＜さらなる実施態様＞
［実施態様１］
ａ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の標的タンパク質バイオマーカーに対するシグナルを増幅する方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様２］
試料が組織試料である、実施態様１に記載の方法。
［実施態様３］
組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料である、実施態様２に記載の方法。
［実施態様４］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様１−３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様４に記載の方法。
［実施態様６］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様１−５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様６に記載の方法。
［実施態様８］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様６又は７に記載の方法。
［実施態様９］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様１−８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１０］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様１−９のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１１］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様１０に記載の方法。
［実施態様１２］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様１−１１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１３］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様１−１２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１４］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様１３に記載の方法。
［実施態様１５］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様１−１４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１６］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様１５に記載の方法。
［実施態様１７］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様１−１６のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１８］
２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様１−１７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様１９］
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、実施態様１−１８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様２０］
ａ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的なポリクローナル第２結合剤を適用することであって、ポリクローナル第２結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の標的タンパク質バイオマーカーに対するシグナルを増幅する方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様２１］
試料が組織試料である、実施態様２０に記載の方法。
［実施態様２２］
組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料である、実施態様２１に記載の方法。
［実施態様２３］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様２０−２２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様２４］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様２３に記載の方法。
［実施態様２５］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様２０−２４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様２６］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様２５に記載の方法。
［実施態様２７］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様２５又は２６に記載の方法。
［実施態様２８］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様２０−２７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様２９］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様２０−２８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３０］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様２９に記載の方法。
［実施態様３１］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様２０−３０のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３２］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様２０−３１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３３］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様３２に記載の方法。
［実施態様３４］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様２０−３３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３５］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様３４に記載の方法。
［実施態様３６］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様２０−３５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３７］
２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様２０−３６のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３８］
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、実施態様２０−３７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様３９］
ａ．組織試料を脱パラフィン化試薬で処理すること；
ｂ．組織試料を抗原回復試薬で処理すること；
ｃ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を組織試料に適用すること；
ｄ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｅ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｆ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｇ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料中の標的タンパク質バイオマーカーに対するシグナルを増幅する方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様４０］
標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を適用する前に、組織試料をプロテアーゼで処理することを更に含む、実施態様３９に記載の方法。
［実施態様４１］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様３９又は４０に記載の方法。
［実施態様４２］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様４１に記載の方法。
［実施態様４３］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様３９−４２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様４４］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様４３に記載の方法。
［実施態様４５］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様４３又は４４に記載の方法。
［実施態様４６］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様３９−４５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様４７］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様３９−４６のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様４８］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様４７に記載の方法。
［実施態様４９］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様３９−４８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５０］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様３９−４９のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５１］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様５０に記載の方法。
［実施態様５２］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様３９−５１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５３］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様５２に記載の方法。
［実施態様５４］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様３９−５３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５５］
２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様３９−５４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５６］
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、実施態様３９−５５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様５７］
ａ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の標的タンパク質バイオマーカーを検出するための定量的免疫組織化学（ＩＨＣ）の方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様５８］
試料が組織試料である、実施態様５７に記載の方法。
［実施態様５９］
組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料である、実施態様５８に記載の方法。
［実施態様６０］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様５７−５９のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６１］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６２］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様５７−６１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６３］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様６２に記載の方法。
［実施態様６４］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様６２又は６３に記載の方法。
［実施態様６５］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様５７−６４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６６］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様５７−６５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６７］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様６６に記載の方法。
［実施態様６８］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様５７−６７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様６９］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様５７−６８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７０］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様６９に記載の方法。
［実施態様７１］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様５７−７０のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７２］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様７１に記載の方法。
［実施態様７３］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様５７−７２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７４］
２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様５７−７３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７５］
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、実施態様５７−７４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様７６］
ａ．分泌標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の分泌標的タンパク質バイオマーカーの定量的免疫組織化学（ＩＨＣ）の方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが分泌標的タンパク質バイオマーカーを示している方法。
［実施態様７７］
試料が組織試料である、実施態様７６に記載の方法。
［実施態様７８］
組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料である、実施態様７７に記載の方法。
［実施態様７９］
標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様７６−７８のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８０］
翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、実施態様７９に記載の方法。
［実施態様８１］
バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含む、実施態様７６−８０のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８２］
一次抗体が天然の未修飾抗体である、実施態様８１に記載の方法。
［実施態様８３］
一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルである、実施態様８１又は８２に記載の方法。
［実施態様８４］
第２の結合剤が二次抗体を含む、実施態様７６−８３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８５］
二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含む、実施態様７６−８４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８６］
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含む、実施態様８５に記載の方法。
［実施態様８７］
チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、実施態様７６−８６のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８８］
第３の結合剤が三次抗体を含む、実施態様７６−８７のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様８９］
三次抗体がモノクローナル抗体を含む、実施態様８８に記載の方法。
［実施態様９０］
検出可能部分が銀又はチラミドローダミン染料を含む、実施態様７６−８９のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９１］
チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、実施態様９０に記載の方法。
［実施態様９２］
検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、実施態様７６−９１のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９３］
２つ以上の分泌標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、実施態様７６−９２のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９４］
分泌標的タンパク質バイオマーカー及び１つ以上の更なる標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重ＩＨＣアッセイを可能にする、実施態様７６−９３のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９５］
自動化されている、実施態様１−９４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９６］
自動染色機で実行される、実施態様１−９５のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９７］
手動である、実施態様１−９４のいずれか一項に記載の方法。
［実施態様９８］
実施態様１−９４のいずれか一項に記載の方法を実行するための自動染色機。
［実施態様９９］
プロセッサに接続されたメモリを備える自動染色装置であって、メモリが、プロセッサによって実行されると、実施態様１−７５のいずれか一項に記載の方法のための動作を自動染色装置に実行させるコンピュータ可読命令を記憶する、自動染色装置。
［実施態様１００］
実施態様１−９４のいずれか一項に記載の方法を実行するための、スライドホルダー、試薬及びディスペンサーを備える自動システム。
［実施態様１０１］
プロセッサに接続されたメモリを備えるシステムを更に含み、メモリが、プロセッサによって実行されると、実施態様１−６６のいずれか一項に記載の方法のための動作を自動システムに実行させるコンピュータ可読命令を記憶する、実施態様１００に記載のシステム。
［実施態様１０２］
ディスペンサーがスライドホルダー内のスライド上に試薬を分配するように適合されている、実施態様１００又は１０１に記載のシステム。
［実施態様１０３］
ａ．患者の腫瘍から組織切片を調製すること；
ｂ．実施態様１−９７のいずれか一項に記載の標的タンパク質バイオマーカーについて組織切片を組織化学的に染色することであって、標的タンパク質バイオマーカーは点状ドットとして現れる、染色すること、
ｃ．（ｂ）の染色された組織切片のデジタル画像を取得すること；
ｄ．染色された組織切片中の対象領域（ＲＯＩ）を同定し、標的タンパク質バイオマーカーに対応するＲＯＩ中の点状ドットを定量すること；
ｅ．定量化された点状ドットに所定のスコアリング関数を適用すること
を含むワークフロー方法。
［実施態様１０４］
ａ．実施態様１−９７のいずれか一項に記載の第２の標的タンパク質バイオマーカーについて組織切片を染色することであって、標的タンパク質バイオマーカーは点状ドットとして現れる、染色すること
ｂ．（ａ）の染色された組織切片のデジタル画像を取得すること；
ｃ．染色された組織切片中の対象領域（ＲＯＩ）を同定し、標的タンパク質バイオマーカー及び第２の標的タンパク質バイオマーカーに対応するＲＯＩ中の点状ドットを定量すること；
ｄ．定量化された点状ドットに所定のスコアリング関数を適用すること
を更に含む、実施態様１０３に記載の方法。
Claims (15)
- ａ．標的タンパク質バイオマーカーに特異的なバイオマーカー特異的薬剤を試料に適用すること；
ｂ．試料にバイオマーカー特異的薬剤に特異的な第２の結合剤を適用することであって、第２の結合剤は二次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；
ｃ．試料に、チラミドハプテンとコンジュゲートしたチラミド分子を含むチラミド剤を適用することであって、二次酵素が第２の結合剤の位置でチラミドハプテンの試料への付着を触媒する、適用すること；
ｄ．試料にチラミドハプテンに特異的な第３の結合剤を適用することであって、第３の結合剤は三次酵素とコンジュゲートされる、適用すること；及び
ｅ．試料に検出可能部分を適用することであって、三次酵素が検出可能部分との反応を触媒して検出可能部分を可視化する、適用すること；
を含む、試料中の標的タンパク質バイオマーカーに対するシグナルを増幅する方法であって、それによって検出可能部分が明視野顕微鏡法を用いて点状ドットとして可視化され、点状ドットが標的タンパク質バイオマーカーを示しており、且つ
検出可能部分がチラミドローダミン染料を含む、方法。 - 試料が組織試料であり、組織試料がホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料であってもよい、請求項１に記載の方法。
- 標的タンパク質バイオマーカーがタンパク質、炭水化物、核酸、脂質、翻訳後修飾又はこれらの組み合わせを含むか、又は
標的タンパク質バイオマーカーが分泌分子である、請求項１又は２に記載の方法。 - 翻訳後修飾がリン酸修飾、ゲラニル修飾、アセチル修飾、ユビキチン修飾、炭水化物修飾、カルバミル修飾又はこれらの組み合わせを含む、請求項３に記載の方法。
- バイオマーカー特異的薬剤が一次抗体を含み、
一次抗体が天然の未修飾抗体であってもよく及び／又は一次抗体がモノクローナル又はポリクローナルであってもよい、請求項１−４のいずれか一項に記載の方法。 - 第２の結合剤が二次抗体を含む、請求項１−５のいずれか一項に記載の方法。
- 二次酵素がオキシドレダクターゼ、ヒドロラーゼ又はペルオキシダーゼを含み、
ペルオキシダーゼがホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を含んでもよい、請求項１−６のいずれか一項に記載の方法。 - チラミドハプテンがビオチン、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）、ニトロピラゾール（ＮＰ）、ベンゾフラザン（ＢＦ）、ベンゾダザピン（ＢＤ）、ニトロシンアミド（ＮＣＡ）又はジニトロフェニル（ＤＮＰ）を含む、請求項１−７のいずれか一項に記載の方法。
- 第３の結合剤が三次抗体を含み、
三次抗体がモノクローナル抗体を含んでもよい、請求項１−８のいずれか一項に記載の方法。 - チラミドローダミン染料がローダミン１１０、ローダミン６Ｇ、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）又はこれらの組み合わせを含む、請求項１−９のいずれか一項に記載の方法。
- 検出可能部分がＤＡＢ、４−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）、ファストレッド、ブロモクロロインドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ、ファストレッド、ＡＰオレンジ、ＡＰブルー、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート］（ＡＢＴＳ）、ｏ−ジアニシジン、４−クロロナフトール（４−ＣＮ）、ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＭＵ−Ｇａｌｌ）、ｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＰＮＰ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルクロニド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、フクシン、ヨードニトロテトラゾリウム（ＩＮＴ）、テトラゾリウムブルー又はテトラゾリウムバイオレットを含む、請求項１−１０のいずれか一項に記載の方法。
- ２つ以上の標的タンパク質バイオマーカーが検出及び識別される多重免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイに適用される、請求項１−１１のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項１−１２のいずれか一項に記載の方法を実行するための、スライドホルダー、試薬及びディスペンサーを備える自動システム。
- プロセッサに接続されたメモリを備えるシステムを更に含み、メモリが、プロセッサによって実行されると、請求項１−１２のいずれか一項に記載の方法のための動作を自動システムに実行させるコンピュータ可読命令を記憶する、請求項１３に記載のシステム。
- ディスペンサーがスライドホルダー内のスライド上に試薬を分配するように適合されている、請求項１３又は１４に記載のシステム。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2022120926A JP7438281B2 (ja) | 2016-12-19 | 2022-07-28 | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム |
| JP2024019850A JP2024069211A (ja) | 2016-12-19 | 2024-02-13 | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662435955P | 2016-12-19 | 2016-12-19 | |
| US62/435,955 | 2016-12-19 | ||
| PCT/US2017/067039 WO2018118786A1 (en) | 2016-12-19 | 2017-12-18 | Methods and systems for quantitative immunohistochemistry |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2022120926A Division JP7438281B2 (ja) | 2016-12-19 | 2022-07-28 | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2020514701A JP2020514701A (ja) | 2020-05-21 |
| JP2020514701A5 true JP2020514701A5 (ja) | 2021-01-21 |
Family
ID=61006332
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019532807A Pending JP2020514701A (ja) | 2016-12-19 | 2017-12-18 | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム |
| JP2022120926A Active JP7438281B2 (ja) | 2016-12-19 | 2022-07-28 | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム |
| JP2024019850A Pending JP2024069211A (ja) | 2016-12-19 | 2024-02-13 | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2022120926A Active JP7438281B2 (ja) | 2016-12-19 | 2022-07-28 | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム |
| JP2024019850A Pending JP2024069211A (ja) | 2016-12-19 | 2024-02-13 | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20190293637A1 (ja) |
| EP (2) | EP4220164A3 (ja) |
| JP (3) | JP2020514701A (ja) |
| CN (1) | CN110337588B (ja) |
| WO (1) | WO2018118786A1 (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10663711B2 (en) | 2017-01-04 | 2020-05-26 | Corista, LLC | Virtual slide stage (VSS) method for viewing whole slide images |
| EP3815040A4 (en) | 2018-05-21 | 2022-03-02 | Corista LLC | MULTIPLE SAMPLE BULK SLIDE IMAGE PROCESSING USING MULTIPLE RESOLUTION REGISTRATION |
| US10991148B2 (en) * | 2018-08-13 | 2021-04-27 | Canon Medical Systems Corporation | Medical image rendering method and apparatus |
| CN112673258A (zh) * | 2018-09-13 | 2021-04-16 | 文塔纳医疗系统公司 | 用于检测ntrk融合蛋白的组织化学和细胞化学方法 |
| CN109596831B (zh) * | 2019-01-14 | 2020-05-29 | 臻悦生物科技江苏有限公司 | 一种肺癌的多重免疫组化分析试剂盒及其使用方法和应用 |
| WO2020163397A2 (en) * | 2019-02-04 | 2020-08-13 | Akoya Biosciences, Inc. | Analyte detection by selective labeling of biological samples |
| CN109884303B (zh) * | 2019-03-29 | 2020-05-29 | 臻悦生物科技江苏有限公司 | 一种肝癌的多重免疫组化分析试剂盒及其使用方法和应用 |
| CN111830256A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-10-27 | 北京基谱生物科技有限公司 | 一种石蜡切片免疫荧光多重染色试剂盒及使用方法 |
| US11460400B2 (en) | 2020-07-07 | 2022-10-04 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Use of IR spectroscopy to evaluate penetration of reagents into biological specimen |
| KR102475515B1 (ko) * | 2020-10-08 | 2022-12-09 | 한국과학기술원 | 형광 분자가 표지된 상보적인 항체의 반복적인 라벨링을 통한 형광 신호 증폭 방법 |
| CN112834736A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-05-25 | 杭州百凌生物科技有限公司 | 一种检测多种抗原的病理检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| WO2024064338A1 (en) | 2022-09-22 | 2024-03-28 | Agilent Technologies, Inc. | Anti-human icos antibodies for use in immunohistochemistry (ihc) protocols and for diagnosing cancer |
Family Cites Families (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5196306A (en) | 1989-03-29 | 1993-03-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for the detection or quantitation of an analyte using an analyte dependent enzyme activation system |
| US5595707A (en) | 1990-03-02 | 1997-01-21 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated biological reaction apparatus |
| US20030211630A1 (en) | 1998-02-27 | 2003-11-13 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated molecular pathology apparatus having independent slide heaters |
| US6582962B1 (en) | 1998-02-27 | 2003-06-24 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated molecular pathology apparatus having independent slide heaters |
| US6296809B1 (en) | 1998-02-27 | 2001-10-02 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated molecular pathology apparatus having independent slide heaters |
| US6544798B1 (en) | 1999-02-26 | 2003-04-08 | Ventana Medical Systems, Inc. | Removal of embedding media from biological samples and cell conditioning on automated staining instruments |
| US6649138B2 (en) | 2000-10-13 | 2003-11-18 | Quantum Dot Corporation | Surface-modified semiconductive and metallic nanoparticles having enhanced dispersibility in aqueous media |
| US20020083888A1 (en) | 2000-12-28 | 2002-07-04 | Zehnder Donald A. | Flow synthesis of quantum dot nanocrystals |
| US6670113B2 (en) | 2001-03-30 | 2003-12-30 | Nanoprobes | Enzymatic deposition and alteration of metals |
| CA2453450A1 (en) | 2001-07-20 | 2003-11-06 | Quantum Dot Corporation | Luminescent nanoparticles and methods for their preparation |
| DK1636586T3 (da) | 2003-06-24 | 2009-11-23 | Ventana Med Syst Inc | Enzymkatalyseret metaldeponering til foröget in situ-detektion af immunhistokemisker epitoper og nucleinsyresekvenser |
| US7642064B2 (en) | 2003-06-24 | 2010-01-05 | Ventana Medical Systems, Inc. | Enzyme-catalyzed metal deposition for the enhanced detection of analytes of interest |
| US20050186642A1 (en) | 2004-02-24 | 2005-08-25 | Biocare Medical, Inc. | Immunoassay reagents and methods of use thereof |
| JP4806410B2 (ja) | 2004-07-23 | 2011-11-02 | ベンタナ・メデイカル・システムズ・インコーポレーテツド | 流体を生物学的試料に適用するための方法および装置 |
| DK2064549T3 (da) * | 2006-09-21 | 2013-02-04 | Nestec Sa | Antistof-baserede arrays til detektion af flere signaltransducere i sjældne cirkulerende celler |
| CN101162201A (zh) * | 2006-10-11 | 2008-04-16 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种基因芯片的tsa-纳米金标记银染检测法 |
| CA2858359C (en) | 2006-11-01 | 2018-04-03 | Ventana Medical Systems, Inc. | Haptens, hapten conjugates, compositions thereof and method for their preparation and use |
| CA2776527C (en) | 2009-10-19 | 2014-08-05 | Ventana Medical Systems, Inc. | Imaging system and techniques |
| JP2013531801A (ja) * | 2010-07-02 | 2013-08-08 | ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． | 標的検出のためのハプテンコンジュゲート |
| ES2678211T3 (es) * | 2012-03-27 | 2018-08-09 | Ventana Medical Systems, Inc. | Conjugados de señalización y procedimientos de uso |
| ES2639559T3 (es) * | 2012-12-28 | 2017-10-27 | Ventana Medical Systems, Inc. | Análisis de imágenes para el pronóstico de cáncer de mama |
| CA2900842C (en) | 2013-03-12 | 2020-01-21 | Ventana Medical Systems, Inc. | Digitally enhanced microscopy for multiplexed histology |
| US9689875B2 (en) * | 2013-08-28 | 2017-06-27 | Ventana Medical Systems, Inc. | Immunohistochemical assay for detection of CD3 and CD16 |
| CN106030309B (zh) | 2013-12-12 | 2019-11-26 | 休斯敦大学系统 | 通用抗原修复化合物及其使用方法 |
| AU2015220750B2 (en) | 2014-02-24 | 2020-04-16 | Ventana Medical Systems, Inc. | Quinone methide analog signal amplification |
| EP3110966A1 (en) * | 2014-02-24 | 2017-01-04 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated rna detection using labeled 2'-o-methyl rna oligonucleotide probes and signal amplification systems |
| WO2016083364A1 (en) * | 2014-11-25 | 2016-06-02 | Ventana Medical Systems, Inc. | Proximity assays using chemical ligation and hapten transfer |
| WO2016170008A1 (en) | 2015-04-20 | 2016-10-27 | Ventana Medical Systems, Inc. | Inkjet deposition of reagents for histological samples |
-
2017
- 2017-12-18 WO PCT/US2017/067039 patent/WO2018118786A1/en active Application Filing
- 2017-12-18 JP JP2019532807A patent/JP2020514701A/ja active Pending
- 2017-12-18 EP EP23157811.3A patent/EP4220164A3/en active Pending
- 2017-12-18 EP EP17832420.8A patent/EP3555622B1/en active Active
- 2017-12-18 CN CN201780076071.1A patent/CN110337588B/zh active Active
-
2019
- 2019-06-14 US US16/442,091 patent/US20190293637A1/en active Pending
-
2022
- 2022-07-28 JP JP2022120926A patent/JP7438281B2/ja active Active
-
2024
- 2024-02-13 JP JP2024019850A patent/JP2024069211A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2020514701A5 (ja) | ||
| Uliana et al. | Fully disposable microfluidic electrochemical device for detection of estrogen receptor alpha breast cancer biomarker | |
| JP7438281B2 (ja) | 定量的免疫組織化学のための方法及びシステム | |
| Ramos-Vara et al. | When tissue antigens and antibodies get along: revisiting the technical aspects of immunohistochemistry—the red, brown, and blue technique | |
| WO2009148150A1 (ja) | インフルエンザウィルス検出用デバイス | |
| US11156602B2 (en) | Combination product for detecting target marker | |
| US9594054B2 (en) | Targeted delivery of reagents to spots on a planar support through patterned transfer sheets | |
| JP2002202307A (ja) | イムノクロマトグラフ法 | |
| WO2008086596A1 (en) | Apparatus for non-invasive skin sampling and testing | |
| JP6808728B2 (ja) | 脳脊髄液の検出 | |
| US20150168407A1 (en) | Enzyme detection device | |
| US20110195525A1 (en) | Method of use and Apparatus for an Enhanced Lateral Flow Rapid Test Device | |
| US20070196871A1 (en) | Forensic Test for Human Semen | |
| KR20160120675A (ko) | 래피드 정량 진단 키트 | |
| CN106198998A (zh) | 人甲胎蛋白异质体3化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| Schumacher et al. | Quality control of antibodies for assay development | |
| WO2016174185A1 (en) | Multiplex immunohistochemical panel for the identification of metastatic carcinoma in cytology fluid specimens | |
| McGuckin et al. | Detection and quantitation of mucins using chemical, lectin, and antibody methods | |
| EP3749954A1 (en) | Direct immunohistochemistry and immunocytochemistry methods | |
| US20120164661A1 (en) | Methods and reagents for signal amplification | |
| JP2014010102A (ja) | ハプテン標準液およびそれを含むハプテン定量試薬 | |
| US20210199655A1 (en) | Histochemical and cytochemical methods for detecting ntrk fusion proteins | |
| CN113514642A (zh) | 制备检测igfbp4/shbg双指标免疫层析试剂盒 | |
| US20080102480A1 (en) | Method and Apparatus of Enzyme-Link Immunosorbent Assay | |
| JP2011013052A (ja) | 生体試料標本の作製方法 |