JP2020204604A - 粒子分析装置及び粒子分析方法 - Google Patents
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- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
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Abstract
Description
この構成であれば、前記励起波長の光の散乱光を除去することができるので、各蛍光マーカが修飾された粒子を精度良く分析することができる。
まず、血液や尿などの体液である生体試料を遠心分離して、エクソソームを分離する。具体的には、生体試料を遠心分離する第1分離工程(S1−1)と、当該第1分離工程により得られた上清を第1分離工程よりも高回転で遠心分離する第2分離工程(S1−2)とを行う。なお、第2分離工程は、超遠心分離を行うものであっても良い。また、分離工程はカラム、フィルタ、マイクロ流路を使用した方法であっても良い。
上記の分離工程(第2分離工程)により得られた上清に対して粒径分布測定を行い、上清が所定の粒子径の粒子を含むか否かを判断する。ここで、粒径分布測定に用いる装置は、上述したナノトラッキング法を用いたものであってもよいし、レーザ回折/散乱式のものや動的光散乱式のものであってもよい。
分離工程により得られた上清に対して複数の蛍光マーカを添加する。ここで、複数の蛍光マーカは、エクソソームにおけるガン由来の表面分子に結合するものである。これにより、エクソソームに存在する互いに異なる複数の表面分子に、互いに異なる複数の蛍光マーカが修飾される。
修飾工程により得られたサンプルをキュベットセル5に収容し、当該キュベットセル5をエクソソーム分析装置100のセル設置部に設置する。その後、エクソソーム分析装置100において、キュベットセル5に複数の蛍光マーカそれぞれに対応した励起波長の光を照射して、複数の蛍光マーカそれぞれの発光を検出する。これにより、分析部4が、光検出部3により得られた検出信号(動画像データ)に基づいて、各蛍光マーカが修飾されたエクソソームの粒子径分布を算出する。算出された各エクソソームの粒子径分布(図2参照)は、エクソソーム分析装置100のディスプレイ等に表示される。
このように構成した本実施形態のエクソソーム分析装置100によれば、エクソソームの表面分子に複数の蛍光マーカを修飾したサンプルに対して、複数の蛍光マーカそれぞれに対応した励起波長の光を照射するので、各蛍光マーカが修飾されたエクソソームをそれぞれ別個に分析することができる。したがって、各エクソソームを分泌した異常な細胞を解析することができ、その解析結果から病気を診断することができる。例えば、特定の異常な細胞にのみ現れる表面分子に蛍光マーカをつければ、その特定の異常な細胞の有無を検出できる。また、複数の異常な細胞に共通で現れる表面分子に蛍光マーカをつければ、複数の蛍光マーカそれぞれの検出結果の組み合わせにより、特定の異常な細胞の有無を検出できるようになる。
なお、本発明は前記実施形態に限られるものではない。
2 ・・・光照射部
21 ・・・第1の光源
22 ・・・第2の光源
23 ・・・第3の光源
3 ・・・光検出部
31 ・・・撮像カメラ
32 ・・・フィルタ
4 ・・・分析部
Claims (9)
- 粒子に存在する互いに異なる複数の表面分子に互いに異なる複数の蛍光マーカを修飾したサンプルに対して、前記複数の蛍光マーカそれぞれに対応した励起波長の光を照射する光照射部と、
前記複数の蛍光マーカそれぞれの発光を検出する光検出部と、
前記光検出部により得られた検出信号を用いて前記各蛍光マーカが修飾された粒子を分析する分析部とを備え、
前記光検出部は、前記検出信号として動画像データを出力するものであり、
前記分析部は、前記動画像データを用いて、各蛍光マーカが修飾された粒子のブラウン運動を追跡し、その拡散速度から前記各蛍光マーカが修飾された粒子の粒子径分布を算出するものである、粒子分析装置。 - 前記粒子は、エクソソームである、請求項1の記載の粒子分析装置。
- 前記複数の蛍光マーカは、前記エクソソームにおけるガン由来の表面分子に修飾されている、請求項2記載の粒子分析装置。
- 前記光照射部は、各蛍光マーカに対応する励起波長の光を順番に照射するものである、請求項1乃至3の何れか一項に記載の粒子分析装置。
- 前記光検出部は、前記励起波長の光を遮断するフィルタを有する、請求項1乃至4の何れか一項に記載の粒子分析装置。
- 粒子に存在する互いに異なる複数の表面分子に、互いに異なる複数の蛍光マーカを修飾する修飾工程と、
前記修飾工程により得られたサンプルに対して、前記複数の蛍光マーカそれぞれに対応した励起波長の光を照射して、前記複数の蛍光マーカそれぞれの発光を検出して動画像データを取得し、前記動画像データを用いて、各蛍光マーカが修飾された粒子のブラウン運動を追跡し、その拡散速度から前記各蛍光マーカが修飾された粒子の粒子径分布を算出する分析工程とを備える粒子分析方法。 - 前記粒子としてエクソソームを含む生体試料を遠心分離する分離工程と、
前記修飾工程は、前記分離工程により得られた上清に対して前記複数の蛍光マーカを添加することより行われる、請求項6記載の粒子分析方法。 - 前記分離工程により得られた上清に対して粒径分布測定を行い、前記上清が所定の粒子径の粒子を含むか否かを判断する判断工程を更に備える、請求項7記載の粒子分析方法。
- 前記分離工程は、前記生体試料を遠心分離する第1分離工程と、前記第1分離工程により得られた上清を前記第1分離工程よりも高回転で遠心分離する第2分離工程とを含む、請求項7又は8記載の粒子分析方法。
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