JP2020127430A - 抗プロ／潜在型−ミオスタチン抗体およびその使用 - Google Patents

抗プロ／潜在型−ミオスタチン抗体およびその使用 Download PDF

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Abstract

【課題】プロミオスタチンおよび／または潜在型ミオスタチンに特異的に結合する抗体の提供。【解決手段】重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体であって、前記重鎖可変ドメインが、特定の配列からなる配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を含む、抗体。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本願は、「ＴＲＡＮＳＦＯＲＭＩＮＧ ＧＲＯＷＴＨ ＦＡＣＴＯＲ−ＲＥＬＡＴＥＤ
ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＵＳＥＳ ＴＨＥＲＥＯＦ」と題され、２０１４年１
１月６日に出願された米国仮特許出願第６２／０７６，２３０号、「ＴＲＡＮＳＦＯＲＭ
ＩＮＧ ＧＲＯＷＴＨ ＦＡＣＴＯＲ−ＲＥＬＡＴＥＤ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ
ＵＳＥＳ ＴＨＥＲＥＯＦ」と題され、２０１５年１月６日に出願された米国仮特許出
願第６２／１００，３６１号、「ＴＲＡＮＳＦＯＲＭＩＮＧ ＧＲＯＷＴＨ ＦＡＣＴＯ
Ｒ−ＲＥＬＡＴＥＤ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＵＳＥＳ ＴＨＥＲＥＯＦ」と題
され、２０１５年７月１日に出願された米国仮特許出願第６２／１８７，３４８号、およ
び「ＡＮＴＩ−ＰＲＯ／ＬＡＴＥＮＴ−ＭＹＯＳＴＡＴＩＮ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ Ａ
ＮＤ ＵＳＥＳ ＴＨＥＲＥＯＦ」と題され、２０１５年９月１５日に出願された米国仮
特許出願第６２／２１９，０９４号の米国特許法第１１９条（ｅ）のもとの優先権を主張
する。これらの出願の各々が、すべての目的のために、全体が本明細書中に組み込まれる
。
本開示の実施形態は、増殖因子活性の調節物質を含んでよい。いくつかの実施形態では
そのような調節物質は、抗体を含んでよく、ＴＧＦ−βファミリーメンバー活性および／
または生物学を調節できる。
ミオスタチンは、筋肉量（ｍｕｓｃｌｅ ｍａｓｓ）を負に制御する分泌型増殖因子で
ある。過度筋肉（ｈｙｐｅｒｍｕｓｃｕｌａｒ）の表現型をもたらすミオスタチン遺伝子
中の機能喪失変異が、ウシ、ヒツジ、魚類、イヌおよびヒトにおいて記載されている。ミ
オスタチン発現は、一般に骨格筋に限定されており、低レベルの発現が脂肪および心臓組
織において報告されている。ミオスタチンシグナル伝達の阻害は、筋肉のサイズの増加を
もたらす。
開示の要旨
本開示の態様は、いくつかの実施形態では、ミオスタチンの形態（例えばプロミオスタ
チンおよび／または潜在型ミオスタチン）に特異的に結合する抗体に関する。例えば本明
細書で提供される抗体は、プロミオスタチンおよび／または潜在型ミオスタチンなどのミ
オスタチンのプロ形態および／または潜在型形態の１つまたは複数に特異的に結合する。
いくつかの実施形態ではそのような抗体は、ミオスタチンシグナル伝達を阻害する。いく
つかの実施形態ではミオスタチンシグナル伝達の阻害は、筋肉量を増加させるまたは筋萎
縮症を予防するのに有用である。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体は、
ミオスタチンに結合し、プロタンパク質転換酵素および／またはトロイドプロテアーゼに
よるミオスタチンの切断を妨げる。プロミオスタチンまたは潜在型ミオスタチンの切断を
妨げることは、いくつかの実施形態では、ミオスタチン活性化を妨げる。本開示のさらな
る態様は、抗原への親和性がｐＨに感受性である抗体に関する。いくつかの実施形態では
そのようなｐＨ感受性抗体は、血清から抗原を排除するのに有効である。さらに、いくつ
かの実施形態では本明細書で提供される抗体は、血清から抗原（例えばプロミオスタチン
および／または潜在型ミオスタチン）を効率的に排除できるスイーピング抗体（ｓｗｅｅ
ｐｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）である。
本開示の態様は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体を含み、重鎖可
変ドメインは配列番号１０〜１１のいずれか１つに記載の配列を含む相補性決定領域３（
ＣＤＲＨ３）を含む。いくつかの実施形態では抗体は、プロ／潜在型ミオスタチンに特異
的に結合する。いくつかの実施形態では軽鎖可変ドメインは、配列番号２２〜２３のいず
れか１つに記載の配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む。別の実施形態では
前記抗体は、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、
ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＨ１は配列番号１〜３のいずれ
か１つに記載の配列を含み、ＣＤＲＨ２は配列番号４〜９のいずれか１つに記載の配列を
含み、ＣＤＲＨ３は配列番号１０〜１１のいずれか１つに記載の配列を含み、ＣＤＲＬ１
は配列番号１２〜１７のいずれか１つに記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２は配列番号１８〜
２１のいずれか１つに記載の配列を含み、ＣＤＲＬ３は配列番号２２〜２３のいずれか１
つに記載の配列を含む。
いくつかの実施形態では前記ＣＤＲＨ１は、配列番号１または２に記載の配列を含み、
ＣＤＲＨ２は配列番号４または５に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３は配列番号１０に記載
の配列を含み、ＣＤＲＬ１は配列番号１２または１３に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２は
配列番号１８または１９に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ３は配列番号２２に記載の配列を
含む。
別の実施形態では前記ＣＤＲＨ１は配列番号１または３に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ
２は配列番号６または７に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３は配列番号１１に記載の配列を
含み、ＣＤＲＬ１は配列番号１４または１５に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２は配列番号
２０または２１に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ３は配列番号２３に記載の配列を含む。
他の実施形態ではＣＤＲＨ１は配列番号１または３に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ２は
配列番号８または９に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３は配列番号１１に記載の配列を含み
、ＣＤＲＬ１は配列番号１６または１７に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２は配列番号２０
または２１に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ３は配列番号２３に記載の配列を含む。
別の実施形態では前記抗体は、配列番号２５〜２９のいずれか１つに記載の重鎖可変ド
メイン配列を含む。いくつかの実施形態では前記抗体は、配列番号３０〜３５のいずれか
１つに記載の軽鎖可変ドメイン配列を含む。
本開示の他の態様は、プロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合し、重鎖可変ドメイン
および軽鎖可変ドメインを含む抗体を含み、軽鎖可変ドメインは配列番号２２〜２３のい
ずれか１つに記載の配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む。いくつかの実施
形態では前記抗体は、配列番号３０の軽鎖可変ドメイン配列を含む。
本開示のいくつかの態様は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２
７、配列番号２８および配列番号２９からなる群より選択される配列を有するポリペプチ
ドに関する。いくつかの実施形態ではポリペプチドは、可変重鎖ドメインである。いくつ
かの実施形態ではポリペプチドは、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番
号２７、配列番号２８または配列番号２９に記載のアミノ酸配列のいずれか１つと少なく
とも７５％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）同一である
。
本開示のいくつかの態様は、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３
３、配列番号３４および配列番号３５からなる群より選択される配列を有するポリペプチ
ドに関する。いくつかの実施形態ではポリペプチドは、可変軽鎖ドメインである。いくつ
かの実施形態ではポリペプチドは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番
号３３、配列番号３４または配列番号３５に記載のアミノ酸配列のいずれか１つと少なく
とも７５％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）同一である
。
本開示の別の態様は、プロ／潜在型ミオスタチンへの結合について上に記載の抗体と競
合する抗体を含む。いくつかの実施形態では前記抗体は、上に記載の抗体と同じエピトー
プにおいてプロ／潜在型ミオスタチンに結合する。別の実施形態では抗体は、１０−６Ｍ
未満である抗体とプロ／潜在型ミオスタチンとの間の平衡解離定数、Ｋｄでプロ／潜在型
ミオスタチンへの結合について競合する。他の実施形態では前記抗体のＫｄは、１０−１
１Ｍから１０−６Ｍの範囲にある。
いくつかの実施形態では抗体はヒト化抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、キメラ
抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片またはＦｖ断片である。別の実施形態では抗体は
、ヒト化抗体である。別の実施形態では抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態では
抗体は、ヒト生殖系列配列を有するフレームワークを含む。別の実施形態では抗体は、Ｉ
ｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ２Ｃ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４
、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＭおよびＩｇＥ定常ドメインからなる群より選択さ
れる重鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では抗体は、ＩｇＧ４の定常ドメイン
を含む。他の実施形態では抗体は、ＩｇＧ１様ヒンジを生じ、鎖間ジスルフィド結合の形
成を可能にするＳｅｒからＰｒｏへの骨格置換を有するＩｇＧ４の定常ドメインを含む。
別の実施形態では抗体は、蛍光性作用物質、発光性作用物質、酵素性作用物質および放射
性作用物質からなる群より選択される作用物質にコンジュゲートされる。
別の実施形態では抗体は、成熟ミオスタチンと比較してプロ／潜在型ミオスタチンに特
異的に結合する。いくつかの実施形態では抗体は、トランスホーミング増殖因子ベータフ
ァミリーの別のメンバーと比較してプロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合する。別の
実施形態では前記メンバーは、ＧＤＦ１１またはアクチビンである。
本開示のさらなる態様は、プロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合し、トロイドプロ
テアーゼによるタンパク質分解を介した成熟ミオスタチンの形成を阻害する抗体を含む。
いくつかの実施形態では前記抗体は、トロイドプロテアーゼによるタンパク質分解を介し
た成熟ミオスタチンの形成を１μＭ未満のＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では
抗体は、ヒトおよびネズミプロ／潜在型ミオスタチンと交差反応性である。他の実施形態
では抗体は、ＧＤＦ１１またはアクチビンと比較してプロ／潜在型ミオスタチンに特異的
に結合する。別の実施形態では抗体は、成熟ミオスタチンと比較してプロ／潜在型ミオス
タチンに特異的に結合する。
本開示の別の態様は、プロ／潜在型ミオスタチンを含む培地中に存在する細胞における
ミオスタチン受容体活性化を低減する方法であって、上に記載の抗体を、タンパク質分解
を介したプロ／潜在型ミオスタチンの活性化を阻害するのに有効な量で培地に送達するこ
とを含む方法を包含する。いくつかの実施形態では培地は、プロタンパク質転換酵素をさ
らに含む。他の実施形態では培地は、トロイドプロテアーゼをさらに含む。別の実施形態
では抗体は、トロイドプロテアーゼによるタンパク質分解を介したプロ／潜在型ミオスタ
チンの活性化を阻害するのに有効な量で培地に送達される。いくつかの実施形態では細胞
はｉｎ ｖｉｔｒｏにある。他の実施形態では細胞はｉｎ ｖｉｖｏにある。
本開示の別の態様は、ミオパチーを有する被験体を処置する方法であって、上に記載の
抗体の有効量を被験体に投与することを含む方法を含む。いくつかの実施形態ではミオパ
チーは原発性ミオパチーである。別の実施形態では原発性ミオパチーは非活動性萎縮症を
含む。他の実施形態では非活動性萎縮症は、股関節骨折、待機的人工関節置換術（ｅｌｅ
ｃｔｉｖｅ ｊｏｉｎｔ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、救命医療ミオパチー（ｃｒｉｔｉ
ｃａｌ ｃａｒｅ ｍｙｏｐａｔｈｙ）、脊髄損傷または発作（ｓｔｒｏｋｅ）に関連す
る。いくつかの実施形態ではミオパチーは、筋肉喪失（ｍｕｓｃｌｅ ｌｏｓｓ）が疾患
病態に続発する二次性ミオパチーである。他の実施形態では二次性ミオパチーは、脱神経
、遺伝性筋脱力または悪液質を含む。別の実施形態では二次性ミオパチーは、筋萎縮性側
索硬化症または脊髄性筋萎縮症に関連する脱神経である。いくつかの実施形態では二次性
ミオパチーは、筋ジストロフィーに関連する遺伝性筋脱力である。他の実施形態では二次
性ミオパチーは、腎不全、ＡＩＤＳ、心臓の状態、がんまたは加齢に関連する悪液質であ
る。
本開示の別の態様は、加齢に関連する疾患または状態を有する被験体を処置する方法を
含む。加齢に関連する例示的疾患および状態は、非限定的に、筋肉減少症（加齢性筋肉喪
失）、虚弱およびアンドロゲン欠乏症を含む。
本開示の別の態様は、非活動性萎縮症／外傷に関連する疾患または状態を有する被験体
を処置する方法を含む。非活動性萎縮症／外傷に関連する例示的疾患および状態は、非限
定的に、集中治療室（ＩＣＵ）で過ごした時間に関連する筋脱力、股関節置換術、股関節
骨折、発作、床上安静、ＳＣＩ、回旋筋腱板損傷、膝置換術、骨折および熱傷を含む。
本開示の別の態様は、神経変性疾患または状態を有する被験体を処置する方法を含む。
例示的神経変性疾患または状態は、非限定的に脊髄性筋萎縮症および筋萎縮性側索硬化症
（ＡＬＳ）を含む。
本開示の別の態様は、悪液質に関連する疾患または状態を有する被験体を処置する方法
を含む。悪液質に関連する例示的疾患および状態は、非限定的にがん、慢性心不全、後天
性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および慢性腎臓疾患（Ｃ
ＫＤ）を含む。
本開示の別の態様は、まれな疾患に関連する疾患または状態を有する被験体を処置する
方法を含む。例示的なまれな疾患および状態は、非限定的に骨形成不全症、孤発性封入体
筋炎および急性リンパ芽球性白血病を含む。
本開示の別の態様は、代謝障害および／または身体組成に関連する疾患または状態を有
する被験体を処置する方法を含む。いくつかの実施形態では疾患または状態は肥満（例え
ば重度の肥満）、プラダー・ウィリー症候群、ＩＩ型糖尿病または食欲不振である。しか
し代謝障害および／または身体組成に関連する追加的疾患または状態は本開示の範囲内で
ある。
本開示の別の態様は、先天性ミオパチーに関連する疾患または状態を有する被験体を処
置する方法を含む。例示的先天性ミオパチーは、非限定的にＸ連鎖筋細管ミオパチー、常
染色体優性中心核ミオパチー、常染色体劣性中心核ミオパチー、ネマリンミオパチーおよ
び先天性筋線維型不均衡ミオパチー（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｆｉｂｅｒ−ｔｙｐｅ ｄ
ｉｓｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｍｙｏｐａｔｈｙ）を含む。
本開示の別の態様は、筋ジストロフィーに関連する疾患または状態を有する被験体を処
置する方法を含む。例示的筋ジストロフィーは、非限定的にデュシェンヌ型、ベッカー型
、顔面肩甲上腕型（ＦＳＨ）および肢帯型筋ジストロフィーを含む。
本開示の別の態様は、泌尿婦人科関連疾患または状態、声門障害（狭窄）、外眼性ミオ
パチー、手根管（ｃａｒｐｅｌ ｔｕｎｎｅｌ）、ギランバレーまたは骨肉腫を有する被
験体を処置する方法を含む。
いくつかの実施形態では処置は、被験体において筋力の改善を生じる。他の実施形態で
は処置は、被験体において代謝状態の改善を生じる。
いくつかの実施形態では抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量
で投与される。別の実施形態では抗体は、０．３ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇの範囲の
用量で投与される。
いくつかの実施形態では抗体は、被験体に静脈内投与される。他の実施形態では抗体は
、被験体に皮下投与される。別の実施形態では抗体は、被験体に複数の機会に投与される
。いくつかの実施形態では、前記複数回投与は、少なくとも毎月実施される。別の実施形
態では前記複数回投与は、少なくとも毎週実施される。
本開示のさらなる態様は、上に記載の任意の抗体および担体を含む組成物を含む。いく
つかの実施形態では前記担体は薬学的に許容される担体である。他の実施形態では抗体お
よび担体は凍結乾燥形態にある。別の実施形態では抗体および担体は溶液中にある。いく
つかの実施形態では抗体および担体は凍結されている。他の実施形態では抗体および担体
は、−６５℃未満またはそれに等しい温度で凍結される。
本開示の他の態様は、３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およ
びＣＤＲＨ３を含むタンパク質をコードする単離された核酸を含み、ＣＤＲＨ３は配列番
号１０または１１に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では前記ＣＤＲＨ１は、配列
番号１、２または３に記載の配列を含む。他の実施形態ではＣＤＲＨ２は、配列番号４〜
９のいずれか１つに記載の配列を含む。
本開示の別の態様は、３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およ
びＣＤＲＬ３を含むタンパク質をコードする単離された核酸を含み、ＣＤＲＬ３は配列番
号２２に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では前記ＣＤＲＬ１は配列番号１２〜１
７のいずれか１つに記載の配列を含む。他の実施形態ではＣＤＲＬ２は配列番号１８〜２
１のいずれか１つに記載の配列を含む。
本開示のさらなる態様は、配列番号３８〜４９のいずれか１つに記載の配列を含む単離
された核酸を含む。
本開示の別の態様は、上に記載の単離された核酸を含む単離された細胞を含む。
本開示はいくつかの態様では、ミオパチーを有する被験体から得られた生物学的試料を
評価する方法を含む。いくつかの実施形態では方法は、被験体から得られた生物学的試料
のタンパク質と、プロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合する抗体とを含む免疫学的反
応混合物を調製すること；抗体とプロ／潜在型ミオスタチンとの間で結合複合体が形成さ
れることを可能にする条件下に免疫学的反応混合物を維持すること；および結合複合体形
成の程度を決定することを含む。いくつかの実施形態では方法は、被験体から得られた生
物学的試料のタンパク質と、プロミオスタチンに特異的に結合する抗体とを含む免疫学的
反応混合物を調製すること；抗体とプロミオスタチンとの間で結合複合体が形成されるこ
とを可能にする条件下に免疫学的反応混合物を維持すること；および結合複合体形成の程
度を決定することを含む。いくつかの実施形態では方法は、被験体から得られた生物学的
試料のタンパク質と、潜在型ミオスタチンに特異的に結合する抗体とを含む免疫学的反応
混合物を調製すること；抗体と潜在型ミオスタチンとの間で結合複合体が形成されること
を可能にする条件下に免疫学的反応混合物を維持すること；および結合複合体形成の程度
を決定することを含む。いくつかの実施形態では方法は、被験体から得られた生物学的試
料のタンパク質と、成熟ミオスタチンに特異的に結合する抗体とを含む免疫学的反応混合
物を調製すること；抗体と成熟ミオスタチンとの間で結合複合体が形成されることを可能
にする条件下に免疫学的反応混合物を維持すること；および結合複合体形成の程度を決定
することを含む。
図１Ａ〜１Ｂは、ミオスタチンのドメイン構造およびプロミオスタチンアセンブリを示す。図１Ａは、阻害性のプロドメインの後にジスルフィド結合二量体として存在するＣ末端増殖因子ドメインが続く、プロタンパク質として分泌されるミオスタチンを示す。図１Ｂは、プロドメイン（紫色）が増殖因子（藍色）を、「ストレートジャケット」アセンブリにより封入する不活性なコンフォメーションでアセンブルされた前駆体タンパク質を示す。この図は、潜在型ＴＧＦβ１の構造の改作である。
図２は、ミオスタチンの活性化が２つの異なるプロテアーゼ事象を伴い、少なくとも３つのミオスタチン種を生成することを示す。生合成前駆体タンパク質であるプロミオスタチンは、２つの別個のプロテアーゼによってプロセシングされる。この概略図で示す第１のステップは、フューリンなどのプロタンパク質転換酵素ファミリーメンバーによって行われる。この切断によって、プロドメインは成熟増殖因子から分離される。プロテアーゼのトロイドファミリーによる第２の切断事象はプロドメインを切断する。これらの切断事象によって、成熟型のミオスタチンが生成され、これは活性ミオスタチンまたは成熟ミオスタチンと称され得る。
図３Ａ〜３Ｃは、Ａｂ１が、プロテアーゼのトロイドファミリーのメンバーによるプロミオスタチンの切断を遮断することを示す。Ａｂ１の漸増量と共にプレインキュベートしたプロミオスタチン試料を、ミオスタチン活性化アッセイにおいて分析した。レポーターアッセイ（図３Ａ）によるミオスタチン放出の分析後、次いで、試料を還元条件下で泳動させて、ミオスタチンのプロドメインに対して惹起された抗体によるウエスタンブロットによってプロービングした（図３Ｂ）。トロイド切断後に生成されたプロドメインのＮ末端部分に対応する約１８ｋＤａのバンド（四角で囲った部分）は、Ａｂ１の用量の増加に比例して減少した。潜在型およびプロミオスタチンの標準物質（４５ｎｇをロードした）により、プロミオスタチンが約５０ｋＤａに、およびプロドメインが約３７ｋＤａに移動したことが示される。図３Ｃは、ミオスタチンの活性化が２つの異なるプロテアーゼ事象を伴い、３つの主要なミオスタチン種を生成することを示す。生合成前駆体タンパク質であるプロミオスタチンは、２つの別個のプロテアーゼによってプロセシングされる。プロミオスタチン（およびプロＧＤＦ１１）の切断は、プロドメインと成熟増殖因子の間の保存されたＲＸＸＲ部位で切断する、フューリン／ＰＡＣＥ３（Ｐａｉｒｅｄ Ｂａｓｉｃ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ Ｃｌｅａｖｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ３）またはＰＣＳＫ５（Ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／Ｋｅｘｉｎ ｔｙｐｅ ５）などのプロタンパク質転換酵素によって行われる。この切断によって、潜在的複合体が産生され、この中で成熟増殖因子は、プロドメインによりその受容体に対する結合から遮蔽されている。トロイドプロテアーゼの起こり得る阻害を説明し、プロミオスタチンのさらなる切断の遮断を説明する、図３Ｂを参照されたい。活性増殖因子の活性化および放出は、ＴＬＬ−２（トロイド様タンパク質２）またはＢＭＰ１（骨形成タンパク質１）などのＢＭＰ／トロイドファミリーのさらなるプロテアーゼによる切断後に達成される。 図３Ａ〜３Ｃは、Ａｂ１が、プロテアーゼのトロイドファミリーのメンバーによるプロミオスタチンの切断を遮断することを示す。Ａｂ１の漸増量と共にプレインキュベートしたプロミオスタチン試料を、ミオスタチン活性化アッセイにおいて分析した。レポーターアッセイ（図３Ａ）によるミオスタチン放出の分析後、次いで、試料を還元条件下で泳動させて、ミオスタチンのプロドメインに対して惹起された抗体によるウエスタンブロットによってプロービングした（図３Ｂ）。トロイド切断後に生成されたプロドメインのＮ末端部分に対応する約１８ｋＤａのバンド（四角で囲った部分）は、Ａｂ１の用量の増加に比例して減少した。潜在型およびプロミオスタチンの標準物質（４５ｎｇをロードした）により、プロミオスタチンが約５０ｋＤａに、およびプロドメインが約３７ｋＤａに移動したことが示される。図３Ｃは、ミオスタチンの活性化が２つの異なるプロテアーゼ事象を伴い、３つの主要なミオスタチン種を生成することを示す。生合成前駆体タンパク質であるプロミオスタチンは、２つの別個のプロテアーゼによってプロセシングされる。プロミオスタチン（およびプロＧＤＦ１１）の切断は、プロドメインと成熟増殖因子の間の保存されたＲＸＸＲ部位で切断する、フューリン／ＰＡＣＥ３（Ｐａｉｒｅｄ Ｂａｓｉｃ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ Ｃｌｅａｖｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ３）またはＰＣＳＫ５（Ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／Ｋｅｘｉｎ ｔｙｐｅ ５）などのプロタンパク質転換酵素によって行われる。この切断によって、潜在的複合体が産生され、この中で成熟増殖因子は、プロドメインによりその受容体に対する結合から遮蔽されている。トロイドプロテアーゼの起こり得る阻害を説明し、プロミオスタチンのさらなる切断の遮断を説明する、図３Ｂを参照されたい。活性増殖因子の活性化および放出は、ＴＬＬ−２（トロイド様タンパク質２）またはＢＭＰ１（骨形成タンパク質１）などのＢＭＰ／トロイドファミリーのさらなるプロテアーゼによる切断後に達成される。
図４は、細胞ベースのレポーターアッセイにおける親Ａｂ１抗体および他の候補の性能を示す。３回の複製の平均値の標準偏差を示すが、値が小さいために、ほとんどのデータ点についてグラフ上で見えない。
図５は、ある特定の抗体がプロＧＤＦ１１活性化を阻害しないことをグラフで示す。
図６は、平均体重変化率を評価するアッセイの結果を示す。動物の体重を毎日測定して、０日目からの体重変化率を算出した。データは、群の平均値±ＳＥＭを表す。試験４２日目の各群の平均変化率データを、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、ＰＢＳ対照群との比較においてＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ事後検定を使用して分析した。＊＊ｐ＜０．０１。
図７Ａ〜７Ｄは、組織重量を評価するアッセイの結果を示す。図７Ａは、平均腓腹筋重量を示す。図７Ｂは、平均胸筋重量を示す。図７Ｃは、平均ヒラメ筋重量を示す。図７Ｄは、平均三頭筋重量を示す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、ビヒクル対照群（群１）との比較においてＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ事後検定を使用して行った。データは、群の平均値±ＳＥＭを表す。＊＊ｐ＜０．０１。棒グラフは、左から右に群１〜５を示す。
図８Ａ〜８Ｃは、組織重量を評価するアッセイの結果を示す。図８Ａは、平均前脛骨筋重量を示す。図８Ｂは、平均横隔膜重量を示す。図８Ｃは、平均四頭筋重量を示す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、ビヒクル対照群（群１）との比較においてＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ事後検定を使用して行った。データは、群の平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５。棒グラフは、左から右に群１〜５を示す。
図９Ａ〜９Ｂは、平均体重変化率および平均除脂肪量変化率を評価するアッセイの結果を示す。図９Ａは、試験を通して週に２回体重測定した動物において算出された０日目からの体重変化率を示すグラフである。図９Ｂにおいて、−４、７、１４、２１、および２８日目に身体組成を測定するために、動物にＥｃｈｏＭＲＩ（ＱＮＭＲ）を実施して、０日目からの除脂肪量変化率を算出した。データは、群の平均値±ＳＥＭを表す。体重および除脂肪量の両方に関して、試験２８日目での各群の平均変化率データを、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、ＩｇＧ対照群（群２）との比較においてＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ事後検定を使用して分析した。＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊ｐ＜０．０５、ｎｓ（有意ではない）。
図１０Ａ〜１０Ｄは、筋重量を評価するアッセイの結果を示すグラフである。図１０Ａは平均四頭筋重量を示し、図１０Ｂは平均腓腹筋重量を示し、図１０Ｃは平均前脛骨筋重量を示し、図１０Ｄは平均横隔膜重量を示す。ＩｇＧ対照群と比較してＡｂ１処置群の平均筋重量の差の百分率を、それぞれの棒グラフの上に記す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、ＩｇＧ対照群（群２）との比較においてＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ事後検定を使用して行った。データは群の平均値±ＳＥＭを表す。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊ｐ＜０．０５、ｎｓ（有意ではない）。 図１０Ａ〜１０Ｄは、筋重量を評価するアッセイの結果を示すグラフである。図１０Ａは平均四頭筋重量を示し、図１０Ｂは平均腓腹筋重量を示し、図１０Ｃは平均前脛骨筋重量を示し、図１０Ｄは平均横隔膜重量を示す。ＩｇＧ対照群と比較してＡｂ１処置群の平均筋重量の差の百分率を、それぞれの棒グラフの上に記す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、ＩｇＧ対照群（群２）との比較においてＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ事後検定を使用して行った。データは群の平均値±ＳＥＭを表す。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊ｐ＜０．０５、ｎｓ（有意ではない）。
図１１Ａ〜１１Ｂは、平均体重変化率および平均除脂肪量変化率を評価するアッセイの結果を示す。図１１Ａは、試験を通して週に２回体重測定した動物から算出された０日目からの体重変化率を示す。（図１１Ｂ）−１、６、および１３日目に身体組成を測定するために、動物にＥｃｈｏＭＲＩ（ＱＮＭＲ）を実施して、−１日目からの除脂肪量変化率を算出した。ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水、Ｄｅｘ＝デキサメタゾン、ＩｇＧ（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＩｇＧ対照抗体、Ａｂ１（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体およびＡｂ１（２）＝２ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体。データは、群の平均値±ＳＥＭを表す。１４日目（体重に関して）および１３日目（除脂肪量に関して）での各群の平均変化率データを、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、群１（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊ｐ＜０．０５）および群５（＋＋＋＋ｐ＜０．０００１、＋＋＋ｐ＜０．０００５、＋＋ｐ＜０．００５、＋ｐ＜０．０５）に対するＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を使用して分析した。ｎｓ（有意ではない）。
図１２Ａ〜１２Ｄは、異なる筋重量を評価するアッセイの結果を示すグラフである。図１２Ａは平均腓腹筋重量（グラム）を示し、図１２Ｂは平均四頭筋重量（グラム）を示し、図１２Ｃは、ＰＢＳ（ＩＰ）および通常の飲料水（群１）で処置した対照動物と比較した平均腓腹筋重量変化率を示し、図１２Ｄは、ＰＢＳ（ＩＰ）および通常の飲料水（群１）で処置した対照動物と比較した平均四頭筋重量変化率を示す。ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水、Ｄｅｘ＝デキサメタゾン、ＩｇＧ（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＩｇＧ対照抗体、Ａｂ１（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体およびＡｂ１（２）＝２ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体。図１２Ａ〜１２Ｂに関して、エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を表す。図１２Ｃ〜１２Ｄに関して、エラーバーは、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、群１（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊ｐ＜０．０５）および群５（＋＋＋＋ｐ＜０．０００１、＋＋＋ｐ＜０．０００５、＋＋ｐ＜０．００５、＋ｐ＜０．０５）に対するＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を使用して行った。ｎｓ（有意ではない）。棒グラフは左から右に、ＰＢＳ、水；ＰＢＳ、ｄｅｘ；ＩｇＧ対照；Ａｂ１（２０）；およびＡｂ１（２）を示す。 図１２Ａ〜１２Ｄは、異なる筋重量を評価するアッセイの結果を示すグラフである。図１２Ａは平均腓腹筋重量（グラム）を示し、図１２Ｂは平均四頭筋重量（グラム）を示し、図１２Ｃは、ＰＢＳ（ＩＰ）および通常の飲料水（群１）で処置した対照動物と比較した平均腓腹筋重量変化率を示し、図１２Ｄは、ＰＢＳ（ＩＰ）および通常の飲料水（群１）で処置した対照動物と比較した平均四頭筋重量変化率を示す。ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水、Ｄｅｘ＝デキサメタゾン、ＩｇＧ（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＩｇＧ対照抗体、Ａｂ１（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体およびＡｂ１（２）＝２ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体。図１２Ａ〜１２Ｂに関して、エラーバーは標準偏差（ＳＤ）を表す。図１２Ｃ〜１２Ｄに関して、エラーバーは、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、群１（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊ｐ＜０．０５）および群５（＋＋＋＋ｐ＜０．０００１、＋＋＋ｐ＜０．０００５、＋＋ｐ＜０．００５、＋ｐ＜０．０５）に対するＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を使用して行った。ｎｓ（有意ではない）。棒グラフは左から右に、ＰＢＳ、水；ＰＢＳ、ｄｅｘ；ＩｇＧ対照；Ａｂ１（２０）；およびＡｂ１（２）を示す。
図１３Ａ〜１３Ｂは、平均体重変化率および平均除脂肪量変化率を評価するアッセイの結果を示す。図１３Ａは、試験を通して週に２回体重測定した動物に関して算出した０日目からの体重変化率を示す。図１３Ｂは、−１、７、および１４日目に身体組成を測定するためにＥｃｈｏＭＲＩ（ＱＮＭＲ）を実施した動物から算出した−１日目からの除脂肪量変化率を示す。ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水、ＩｇＧ（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＩｇＧ対照抗体、Ａｂ１（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体およびＡｂ１（２）＝２ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体。データは、群の平均値±ＳＥＭを表す。
図１４Ａ〜１４Ｄは、筋重量を評価するアッセイの結果を示す。図１４Ａは、ギプス固定した脚からの平均腓腹筋重量（グラム）を示し、図１４Ｂは、ギプス固定した脚からの平均四頭筋重量（グラム）を示し、図１４Ｃは、ＰＢＳ（ＩＰ）で処置して、ギプス固定していない対照動物（群１）と比較した平均腓腹筋重量変化率を示し、図１４Ｄは、ＰＢＳ（ＩＰ）で処置して、ギプス固定していない対照動物（群１）と比較した平均四頭筋重量変化率を示す。ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水、ＩｇＧ（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＩｇＧ対照抗体、Ａｂ１（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体およびＡｂ１（２）＝２ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体。図１４Ａ〜１４Ｂに関して、エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を表す。図１４Ｃ〜１４Ｄに関して、エラーバーは、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、群１（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊ｐ＜０．０５）および群５（＋＋＋＋ｐ＜０．０００１、＋＋＋ｐ＜０．０００５、＋＋ｐ＜０．００５、＋ｐ＜０．０５）に対するＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を使用して行った。ｎｓ（有意ではない）。棒グラフは左から右に、ＰＢＳ、非ギプス固定；ＰＢＳ、ギプス固定；ＩｇＧ対照；Ａｂ１（２０）；およびＡｂ１（２）を示す。 図１４Ａ〜１４Ｄは、筋重量を評価するアッセイの結果を示す。図１４Ａは、ギプス固定した脚からの平均腓腹筋重量（グラム）を示し、図１４Ｂは、ギプス固定した脚からの平均四頭筋重量（グラム）を示し、図１４Ｃは、ＰＢＳ（ＩＰ）で処置して、ギプス固定していない対照動物（群１）と比較した平均腓腹筋重量変化率を示し、図１４Ｄは、ＰＢＳ（ＩＰ）で処置して、ギプス固定していない対照動物（群１）と比較した平均四頭筋重量変化率を示す。ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水、ＩｇＧ（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＩｇＧ対照抗体、Ａｂ１（２０）＝２０ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体およびＡｂ１（２）＝２ｍｇ／ｋｇ／週で投与したＡｂ１抗体。図１４Ａ〜１４Ｂに関して、エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を表す。図１４Ｃ〜１４Ｄに関して、エラーバーは、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、群１（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．０００５、＊＊ｐ＜０．００５、＊ｐ＜０．０５）および群５（＋＋＋＋ｐ＜０．０００１、＋＋＋ｐ＜０．０００５、＋＋ｐ＜０．００５、＋ｐ＜０．０５）に対するＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を使用して行った。ｎｓ（有意ではない）。棒グラフは左から右に、ＰＢＳ、非ギプス固定；ＰＢＳ、ギプス固定；ＩｇＧ対照；Ａｂ１（２０）；およびＡｂ１（２）を示す。
図１５は、２１日目（右上）および２８日目（左上）での除脂肪量変化を評価するアッセイの結果を示す。試験した抗体の３つの異なる用量、２０ｍｇ／ｋｇ／週（左下）、２ｍｇ／ｋｇ／週（中央下）、および０．５ｍｇ／ｋｇ／週（右下）、ＰＢＳ対照、ならびにＩｇＧ対照の除脂肪量変化率も示す。統計学的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡの後に、群１（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５）およびＩｇＧ対照に対するＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を使用して行った。上のパネルに関して、棒グラフは左から右に、ＰＢＳ；ＩｇＧ対照、２０ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ１、２０ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ１、２ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ１、０．５ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ２、２０ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ２、２ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ２、０．５ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ４、２０ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ４、２ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ４、０．５ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ６、２０ｍｇ／ｍｋ／週；Ａｂ６、２ｍｇ／ｍｋ／週；およびＡｂ６、０．５ｍｇ／ｍｋ／週である。
図１６Ａ〜１６Ｂは、ミオスタチン前駆体型のドメイン構造および評価を示す。図１６Ａは、プロミオスタチンおよび潜在型ミオスタチンのドメイン構造を示し、プロテアーゼ切断部位を示す。図１６Ｂは、ＳＤＳ ＰＡＧＥゲルにおいて泳動させた、部分的プロタンパク質転換酵素切断プロミオスタチンを示す。還元条件下では、タンパク質バンドは、プロミオスタチンモノマー（約５０ｋＤ）、プロドメイン（約３７ｋＤ）および増殖因子（１２．５ｋＤ）からなった。
図１７Ａ〜１７Ｂは、Ａｂ１がミオスタチンに対して特異的であることを示す。図１７Ａは、Ａｂ１がプロミオスタチンおよび潜在型ミオスタチンに特異的に結合することを示し、ＴＧＦＢスーパーファミリーの他のメンバー、特にＧＤＦ１１の対応する型に対する結合は観察されなかった。Ａｂ１を、表記の抗原でコーティングされたＦｏｒｔｅ−Ｂｉｏ ＢＬＩチップに高濃度（５０ｕｇ／ｍＬ）で投与して、オンレートおよびオフレートを測定して、およそのＫｄ値を得た。結合事象を示すバイオセンサー応答の大きさを、黒色の棒グラフによってグラフ表示し、算出されたＫｄをオレンジ色で示す。図１７Ｂは、Ａｂ１がプロミオスタチンの活性化を遮断するが、プロＧＤＦ１１は遮断しないことを示している。プロタンパク質転換酵素およびトロイドプロテアーゼファミリーの両方からの酵素によって一晩タンパク質分解反応を行った後、２９３Ｔ細胞においてＣＡＧＡベースのレポーターアッセイを使用して成熟増殖因子の放出を測定した。結果を対照反応と比較して、アッセイにおいて放出されたプロミオスタチンまたはプロＧＤＦ１１の割合を算出した。
図１８Ａ〜１８Ｃは、候補抗体によるＳＣＩＤ用量反応を示す。図１８Ａは腓腹筋重量を示し、図１８Ｂは四頭筋重量を示す。図１８Ｃは、ＰＢＳ対照と比較した平均筋重量変化率を示す。 図１８Ａ〜１８Ｃは、候補抗体によるＳＣＩＤ用量反応を示す。図１８Ａは腓腹筋重量を示し、図１８Ｂは四頭筋重量を示す。図１８Ｃは、ＰＢＳ対照と比較した平均筋重量変化率を示す。
図１９は、Ａｂ１を既存のミオスタチン抗体（ＡｂＭｙｏ）と比較する、作用試験の持続時間の結果を示す。ＰＢＳを陰性対照として使用した。ＩｇＧを陽性対照として使用した。除脂肪量の変化を異なる投与プロトコールに従って２１日後に調べた。
図２０は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでミオスタチン活性化を再構成するアッセイを説明する概略図である。
図２１Ａ〜２１Ｂは、セリンがプロリンに置換されたＩｇＧ４サブタイプのヒト化モノクローナル抗体（Ａｂ２）の重鎖（図２１Ａ；配列番号５０）および軽鎖（図２１Ｂ；配列番号５１）を示す。これは、ＩｇＧ１様ヒンジ配列を生成し、ＩｇＧ４の特徴である鎖間ジスルフィド架橋の不完全な形成を最小限にする。相補性決定領域（ＣＤＲ）を下線で示す。紫色：Ｎ−結合グリコシル化コンセンサス配列部位；水色：起こり得る切断部位；赤色：起こり得る脱アミド化部位；黄緑色：起こり得る異性化部位；濃い青色：起こり得るメチオニン酸化部位；太字：予想されるＮ末端ピログルタミン酸。
図２２は、生殖系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）による免疫原性リスクの低減を示す概略図である。２４Ｈ４（ＷＴ）は、概略図に示すように、フレームワーク領域内に５つの非生殖系列アミノ酸を含有する。
図２３Ａ〜２３Ｃは、Ａｂ１の最適化を示す。プロミオスタチンに特異的に結合する最適化された候補を選択して、それによって親和性が増加した何ダースものクローンを得た。Ａｂ１（図２３Ａ）と比較して酵母クローン（図２３Ｂ）の結合の増加を示すために、ＦＡＣＳを実施した。図２３Ｃは、親和性成熟改変体が、同様にｏｃｔｅｔによってより遅いオフレートを有することを示している。 図２３Ａ〜２３Ｃは、Ａｂ１の最適化を示す。プロミオスタチンに特異的に結合する最適化された候補を選択して、それによって親和性が増加した何ダースものクローンを得た。Ａｂ１（図２３Ａ）と比較して酵母クローン（図２３Ｂ）の結合の増加を示すために、ＦＡＣＳを実施した。図２３Ｃは、親和性成熟改変体が、同様にｏｃｔｅｔによってより遅いオフレートを有することを示している。
図２４Ａ〜２４Ｂは、親Ａｂ１の可変重鎖領域（図２４Ａ）および可変軽鎖領域（図２４Ｂ）と、親和性最適化改変体Ａｂ３およびＡｂ５との配列アラインメントを示す。配列識別子は、上から下に配列番号２４、２６、２８に対応する（図２４Ａ）。配列識別子は、上から下に配列番号３０、３２、３４に対応する（図２４Ｂ）。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、Ｋａｂａｔ（下線）およびＩＭＧＴ命名法（太字）を使用して定義する。親Ａｂ１からの置換を赤色で示す。
詳細な記載
ミオスタチンは、ＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーであり、２個のメンバー：ミ
オスタチン（ＧＤＦ８としても公知）およびＧＤＦ１１を含むサブファミリーに属してい
る。ＴＧＦβスーパーファミリーの他のメンバーと同様に、ミオスタチンおよびＧＤＦ１
１は、両方とも不活性前駆体ポリペプチド（それぞれプロミオスタチンおよびプロＧＤＦ
１１と呼ばれる）として最初発現される。ドメイン構造および命名法は図１Ａに示されて
いる。図１Ｂは、成熟増殖因子が「潜在型ラッソ（ｌａｔｅｎｃｙ ｌａｓｓｏ）」と呼
ばれるループによって繋がれた２個のアルファヘリックスから構成されるケージに閉じ込
められているプロミオスタチンの全体構造のカートゥーンモデルを例示する。
成熟増殖因子の活性化および放出は、図２に概説する数個の別々のプロテアーゼ切断事
象によって達成される。プロミオスタチンおよびプロＧＤＦ１１の第１の切断ステップは
、プロドメインと成熟増殖因子との間の保存されたＲＸＸＲ部位で切断するプロタンパク
質転換酵素によって実行される。この切断は、成熟増殖因子がプロドメインによってその
受容体への結合から遮蔽されている潜在型複合体を生じる。成熟、活性ミオスタチン増殖
因子の活性化および放出は、ｍＴＬＬ−２などのＢＭＰ／トロイドファミリー由来の追加
的プロテアーゼによる切断後に達成される（図２）。
ヒト、ラット、マウスおよびカニクイザルにおける例示的プロＧＤＦ８配列は下に提供
される。これらのプロＧＤＦ８配列において、プロタンパク質転換酵素切断部位は、太字
で示され、トロイドプロテアーゼ部位は下線で示される。いくつかの実施形態ではプロタ
ンパク質転換酵素切断部位は、配列番号５２〜５５のアミノ酸残基２４０から２４３を含
む。いくつかの実施形態ではトロイドプロテアーゼ部位は、配列番号５２〜５５のアミノ
酸残基７４〜７５を含む。本明細書で提供される例示的プロＧＤＦ８配列が限定的である
ことを意図せず、他の種由来の追加的プロＧＤＦ８配列が、その任意のアイソフォームを
含め、本開示の範囲内であることは理解されるべきである。
ミオスタチンおよびＧＤＦ１１は、９０パーセントの同一性を有してそれらの成熟増殖
因子ドメイン間で比較的高い程度の保存を共有するが、それらのプロドメイン領域では２
個の間で５０パーセント未満のアミノ酸同一性であり、十分に保存されていない。ミオス
タチンおよびＧＤＦ１１は、ＩＩ型受容体（ＡＣＴＲＩＩＡ／Ｂ）と会合しているＩ型受
容体（ＡＬＫ４／５）からなる同じ受容体に結合し、それを通じてシグナル伝達する。Ｉ
型およびＩＩ型受容体とのミオスタチンの会合（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）は、ＳＭＡＤリ
ン酸化および筋萎縮症遺伝子の転写活性化をもたらすシグナル伝達カスケードを開始させ
る。成熟増殖因子における比較的高い程度の保存は、成熟ミオスタチンとＧＤＦ１１とを
区別できるモノクローナル抗体などの試薬を同定することを困難なものにしている。
ミオパチーにおけるミオスタチンの役割
骨格筋は、体重のおよそ４０％を占め、動的器官であり、１日あたり１〜２％の割合で
代謝回転する。筋萎縮症は、非活動性期間中に（例えば非活動性萎縮症）および／または
増大した全身性炎症（悪液質）に応答して生じる高度に制御された異化工程である。床上
安静中などの長期の固定期間中に生じる場合がある非活動性萎縮症では、筋肉喪失が急速
に生じる。例えば１週間の入院中に平均的患者は約１．３ｋｇの筋肉量を失う。
筋萎縮症は、幅広い臨床状態において顕著な病的状態を生じる。筋萎縮性側索硬化症（
ＡＬＳ）または脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）のような脱神経の疾患および筋ジストロフィー
を含む遺伝疾患では、筋力および機能の喪失は適切な処置がない高度に身体障害性の臨床
症状発現である。腎不全、ＡＩＤＳ、心臓の状態またはがんによる悪液質症候群では、筋
消耗は原発性状態の処置の成功をしばしば台無しにする。筋肉喪失は、加齢の自然な経過
としても生じ、その最も重症の形態は、筋肉減少症、治療介入を必要とする病的状態とし
てますます認識されるようになっている高齢者における広汎性の状態として分類されてい
る。最後に、筋萎縮症を進行させる大きな要因は非活動性である。固定は、股関節骨折、
待機的人工関節置換術、脊髄損傷、救命医療ミオパチーおよび発作などの状態の大きな群
において急速で顕著な筋肉喪失を生じる。それらの原因は様々だが、これらの徴候は顕著
な身体障害、長い身体のリハビリテーションおよび回復時間ならびに生活の質の低下をも
たらす筋脱力の特徴を共有する。
筋萎縮症状態に関する医学的必要性は満たされていない。したがって、筋萎縮症を処置
するために、いくつかの実施形態において方法が本明細書で提供される。いくつかの実施
形態では本明細書で提供される方法は、原発性ミオパチーの処置に関する。いくつかの実
施形態では本明細書で提供される方法は、例えば脱神経、遺伝性筋脱力および悪液質の疾
患、筋肉喪失が疾患病態に続発する状態などの二次性ミオパチーの処置に関する。いくつ
かの実施形態では、非活動性萎縮症（例えば股関節骨折または脊髄損傷（ＳＣＩ）に関連
する）などの原発性ミオパチーの処置のために本明細書で提供される方法は、被験体にお
いて筋肉量、強度および機能の増加を生じる。
ミオスタチン経路阻害
筋肉関連状態の処置に向けて臨床開発の種々の段階にあるいくつかのミオスタチン経路
アンタゴニストがある。そのような経路アンタゴニストは、成熟増殖因子またはそのＩＩ
型受容体のいずれかを標的化し、大部分は複数のＴＧＦβファミリーメンバーのシグナル
伝達に拮抗する。例えばいくつかの現在の臨床候補は、それぞれ生殖生物学、創傷治癒、
赤血球生成および血管形成の制御因子である、アクチビンＡ、ＧＤＦ１１ならびにＢＭＰ
９および１０などの追加的増殖因子を遮断する。本開示の態様は、ミオスタチンに加えて
これらの因子を遮断することが、容認できない副作用のために安全に治療を受けられる患
者の集団を限定している可能性があるという認識に関する。
したがって、プロミオスタチンおよび／または潜在型ミオスタチンに結合でき、それに
よりミオスタチン活性を阻害する抗体ならびにミオパチーを伴う疾患および障害を処置す
るためのその使用が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、循環中の潜在的複
合体が優勢であることを考慮して、成熟増殖因子よりむしろ、より豊富でより長く存在す
るミオスタチン前駆体、例えばプロミオスタチンおよび潜在型ミオスタチンを特異的に標
的化する処置が本明細書で提供される。いかなる特定の理論にも束縛されることを望まな
いが、本明細書で提供される抗体は、例えばＩ型（ＡＬＫ４／５）およびＩＩ型（ＡＣＴ
ＲＩＩＡ／Ｂ）受容体に結合することによって、ミオスタチン経路を活性化できるミオス
タチンの「活性」形態と考えられる成熟ミオスタチンへのタンパク質分解を介したプロミ
オスタチンおよび／または潜在型ミオスタチンの活性化を妨げることができる。本明細書
において使用される場合、用語「プロ／潜在型ミオスタチン」は、プロミオスタチン、潜
在型ミオスタチンまたは両方を指す。いくつかの実施形態では抗プロ／潜在型ミオスタチ
ン抗体は、プロミオスタチンに特異的に結合する。いくつかの実施形態では抗プロ／潜在
型ミオスタチン抗体は、潜在型ミオスタチンに特異的に結合する。いくつかの実施形態で
は抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、潜在型ミオスタチンおよびプロミオスタチンの両
方に特異的に結合する。
プロ／潜在型ミオスタチンに結合する抗体
本開示は、ある特定のプロ／潜在型ミオスタチン特異的抗体（例えば本明細書でＡｂ１
と称される抗体）が、タンパク質分解を介したプロ／潜在型ミオスタチンの成熟ミオスタ
チンへの活性化を妨げたという驚くべき発見に少なくとも部分的に基づいている。さらに
そのような抗体を使用するミオスタチン活性化の阻害は、デキサメタゾンおよびギプス固
定誘導筋萎縮症マウスモデルの両方において筋肉量の増加に有効であった。本開示の態様
は、プロ／潜在型ミオスタチンに結合し、タンパク質分解を介したプロ／潜在型ミオスタ
チンの成熟ミオスタチンへの活性化を阻害する抗体（例えば抗体および抗原結合性断片）
を提供する。
抗体（複数形と互換的に使用される）は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少
なくとも１つの抗原認識部位を通じて、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチ
ドなどの標的に特異的に結合できる免疫グロブリン分子である。本明細書において使用さ
れる場合、用語「抗体」は、インタクト（例えば全長）ポリクローナルまたはモノクロー
ナル抗体だけでなく、その抗原結合性断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖな
ど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、
キメラ抗体、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体、多特異性抗体（例えば二重特異性
抗体）ならびに抗体のグリコシル化改変体、抗体のアミノ酸配列改変体および共有結合的
に改変された抗体を含む求められる特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任
意の他の改変構成も包含する。抗体は、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭな
どの任意のクラス（またはそのサブクラス）の抗体を含み、抗体はいずれかの特定のクラ
スである必要はない。その重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブ
リンは様々なクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンの５個の主なクラスがあり：Ｉ
ｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、これらのいくつかはサブクラス（アイソタ
イプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさ
らに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それ
ぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの
様々なクラスのサブユニット構造および三次元構成は周知である。
本明細書に記載の抗体は、プロ／潜在型ミオスタチンに結合でき、それによりタンパク
質分解を介したプロ／潜在型ミオスタチンの成熟ミオスタチンへの活性化を阻害する。い
くつかの場合では本明細書に記載の抗体は、タンパク質分解を介したプロ／潜在型ミオス
タチンの活性化を少なくとも２０％、例えば３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、
８０％、９０％、９５％またはそれより高く阻害できる。いくつかの場合では本明細書に
記載の抗体は、プロタンパク質転換酵素（例えばフューリン）によるタンパク質分解を介
したプロミオスタチンの切断を少なくとも２０％、例えば３０％、４０％、５０％、６０
％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれより高く阻害できる。いくつかの場合で
は本明細書に記載の抗体は、トロイドプロテアーゼ（例えばｍＴＬＬ２）によるタンパク
質分解を介したプロミオスタチンまたは潜在型ミオスタチンの切断を少なくとも２０％、
例えば３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれよ
り高く阻害できる。抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の阻害活性は、日常的方法によって
、例えば実施例１および図３に記載のウエスタンブロット分析によって測定され得る。し
かし、タンパク質分解を介したプロ／潜在型ミオスタチンの切断への抗プロ／潜在型ミオ
スタチン抗体の阻害活性を測定するために追加的方法が使用され得ることは理解されるべ
きである。いくつかの実施形態ではプロ／潜在型ミオスタチン切断（例えばプロタンパク
質転換酵素および／またはトロイドプロテアーゼによる）の阻害は、阻害剤効力の尺度を
提供し、プロテアーゼ（例えばプロタンパク質転換酵素またはトロイドプロテアーゼの）
活性を半分に低減するために必要な阻害剤（例えば抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体）の
濃度であり、酵素または基質濃度に依存しない阻害定数（Ｋｉ）として反映され得る。
いくつかの実施形態ではプロタンパク質転換酵素は（ｉ）プロタンパク質転換酵素切断
部位を含有するタンパク質のペプチド結合を加水分解する触媒ドメイン、および（ｉｉ）
プロタンパク質転換酵素切断部位を有するｒＴＧＦに結合する結合ポケットを含む。本開
示による使用のためのプロタンパク質転換酵素の例は、非限定的にＰＣＳＫ５／６、ＰＡ
ＣＥ４、ＰＡＣＥ７およびＰＡＣＥ３（例えばフューリン）を含む。プロタンパク質転換
酵素は、いくつかの実施形態では、非限定的にヒト、サルまたはげっ歯類（例えばマウス
、ラット、ハムスター）を含む任意の哺乳動物から得られる。
いくつかの実施形態ではプロタンパク質転換酵素は、ＰＣＳＫ５／６、ＰＡＣＥ４、Ｐ
ＡＣＥ７およびＰＡＣＥ３（例えばフューリン）からなる群より選択されるプロタンパク
質転換酵素に相同性である。例えばプロタンパク質転換酵素は、ＰＣＳＫ５／６、ＰＡＣ
Ｅ４、ＰＡＣＥ７またはＰＡＣＥ３（例えばフューリン）と少なくとも７０％同一、少な
くとも８０％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同
一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、少なくとも
９９．５％同一または少なくとも約９９．９％同一であってよい。
プロタンパク質転換酵素切断部位は、いくつかの実施形態では、プロタンパク質転換酵
素（例えばＰＣＳＫ５／６、ＰＡＣＥ４、ＰＡＣＥ７およびＰＡＣＥ３）によって切断さ
れ得るアミノ配列である。いくつかの実施形態ではプロタンパク質転換酵素切断部位は、
アミノ酸配列Ｒ−Ｘ−Ｘ−Ｒを含み、式中Ｒはアルギニンであり、Ｘは任意のアミノ酸で
ある。いくつかの実施形態ではプロタンパク質転換酵素切断部位は、アミノ酸配列Ｒ−Ｘ
−（Ｋ／Ｒ）−Ｒを含み、式中Ｒはアルギニンであり、Ｋはリシンであり、Ｘは任意のア
ミノ酸である。いくつかの実施形態ではプロタンパク質転換酵素切断部位は、Ｒ−Ｖ−Ｒ
−Ｒ（配列番号５７）であるアミノ酸配列を含み、式中Ｒはアルギニンであり、Ｖはバリ
ンである。ヒト、ラット、マウスおよびカニクイザルミオスタチンについての例示的プロ
タンパク質転換酵素切断部位は、配列番号５２〜５５において太字で示される。いくつか
の実施形態ではプロタンパク質転換酵素切断部位は、アミノ酸配列ＲＳＲＲ（配列番号５
６）を含む。
いくつかの実施形態では本開示による使用のためのトロイドプロテアーゼは、非限定的
に、ＢＭＰ−１、ｍＴＬＬ−１およびｍＴＬＬ−２を含む。トロイドプロテアーゼは、非
限定的にヒト、サルまたはげっ歯類（例えばマウス、ラット、ハムスター）を含む任意の
哺乳動物から得ることができる。いくつかの実施形態ではトロイドプロテアーゼは、ＢＭ
Ｐ−１、ｍＴＬＬ−１およびｍＴＬＬ−２からなる群より選択されるトロイドプロテアー
ゼに相同性である。例えばトロイドプロテアーゼは、ＢＭＰ−１、ｍＴＬＬ−１およびｍ
ＴＬＬ−２と少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、少
なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％
同一、少なくとも９９％同一、少なくとも９９．５％同一または少なくとも約９９．９％
同一であってよい。
トロイドプロテアーゼ切断部位は、いくつかの実施形態では、トロイド（例えばＢＭＰ
−１、ｍＴＬＬ−１およびｍＴＬＬ−２）によって切断され得るアミノ配列である。ヒト
、ラット、マウスおよびカニクイザルミオスタチンについての例示的トロイドプロテアー
ゼ切断部位は、配列番号５２〜５５において下線で示される。いくつかの実施形態ではト
ロイド切断部位は、アミノ酸配列ＱＲを含み、式中Ｑはグルタミンであり、Ｒはアルギニ
ンである。
いくつかの実施形態では本明細書に記載の抗体は、プロ／潜在型ミオスタチンに結合で
き、それによりミオスタチン活性を阻害する。いくつかの場合では本明細書に記載の抗体
は、ミオスタチンシグナル伝達を少なくとも２０％、例えば３０％、４０％、５０％、６
０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれより高く阻害できる。いくつかの実施
形態ではミオスタチンシグナル伝達の阻害は、日常的方法によって、例えば実施例１に記
載のミオスタチン活性化アッセイを使用して測定され得る。しかし、追加的方法がミオス
タチンシグナル伝達活性を測定するために使用され得ることは理解されるべきである。
例えばプロタンパク質転換酵素および／またはトロイドプロテアーゼによる、タンパク
質分解を介したミオスタチンの切断の程度は、任意の好適な方法を使用して測定および／
または定量され得ることは理解されるべきである。いくつかの実施形態ではタンパク質分
解を介したミオスタチンの切断の程度は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使
用して測定および／または定量される。例えばＥＬＩＳＡは、放出された増殖因子（例え
ば成熟ミオスタチン）のレベルを測定するために使用され得る。別の例としてプロミオス
タチン、潜在型ミオスタチンおよび／または成熟ミオスタチンに特異的に結合する抗体は
、ミオスタチン（例えばプロ／潜在型／成熟ミオスタチン）の特定の形態のレベルを測定
するため、タンパク質分解を介したミオスタチンの切断の程度を定量するためのＥＬＩＳ
Ａにおいて使用され得る。いくつかの実施形態ではタンパク質分解を介したミオスタチン
の切断の程度は、免疫沈降に続いてトリプシンペプチドのＳＤＳ−ＰＡＧＥもしくは質量
分析、蛍光異方性に基づく技術、ＦＲＥＴアッセイ、水素−重水素交換質量分析、および
／またはＮＭＲ分光法を使用して測定および／または定量される。
いくつかの実施形態では、免疫グロブリンとしても公知の抗体は、それぞれおよそ２５
ｋＤａの２本の軽鎖（Ｌ）およびそれぞれおよそ５０ｋＤａの２本の重鎖（Ｈ）から構成
される四量体グリコシル化タンパク質である。ラムダおよびカッパと呼ばれる２つの型の
軽鎖が抗体において見出され得る。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて免疫グロ
ブリンは、５個の主なクラス：Ａ、Ｄ、Ｅ、ＧおよびＭに割り当てられてよく、これらの
いくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ
４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分割され得る。各軽鎖は、Ｎ末端可変（Ｖ）ドメイ
ン（ＶＬ）および定常（Ｃ）ドメイン（ＣＬ）を典型的には含む。各重鎖は、Ｎ末端Ｖド
メイン（ＶＨ）、３個または４個のＣドメイン（ＣＨ１−３）およびヒンジ領域を典型的
には含む。ＶＨに最も近位のＣＨドメインはＣＨ１と名付けられる。ＶＨおよびＶＬドメ
インは、超可変配列（相補性決定領域、ＣＤＲ）の３個の領域のための足場を形成するフ
レームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）と呼ばれる比較的保存された
配列の４個の領域からなる。ＣＤＲは、抗体と抗原との特異的相互作用に関与する残基の
大部分を含有する。ＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される。したがっ
て、重鎖上のＣＤＲ構成成分はＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３と称され、一方
軽鎖上のＣＤＲ構成成分はＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３と称される。ＣＤＲ
は、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕ
ｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１年）、Ｋａｂａｔら編に記載のＫａｂａｔ ＣＤＲ
を典型的には指す。抗原結合部位を特徴付けるための別の基準は、Ｃｈｏｔｈｉａによっ
て記載の超可変ループを指す。例えばＣｈｏｔｈｉａ， Ｄ．ら、（１９９２年）Ｊ．
Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７巻：７９９〜８１７頁およびＴｏｍｌｉｎｓｏｎら、（１
９９５年）ＥＭＢＯ Ｊ． １４巻：４６２８〜４６３８頁を参照されたい。さらに別の
基準は、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｏｄｅ
ｌｉｎｇソフトウェアによって使用されるＡｂＭ定義である。一般に例えばＡｎｔｉｂｏ
ｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ （Ｄｕｅｂｅｌ， ＳおよびＫ
ｏｎｔｅｒｍａｎｎ， Ｒ．編， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅ
ｒｇ）のＰｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙ
ｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓを参照されたい。
Ｋａｂａｔ ＣＤＲに関して記載された実施形態は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループにもし
くはＡｂＭ定義ループに関して、またはこれらの方法のいずれかの組合せに関して同様に
記載された関係を使用して代替的に実行され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体および抗体をコー
ドする本開示の核酸分子は、表１に示すＣＤＲアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では本開示の抗プロ／潜在型ミオスタチン結合剤（例えば抗体）は
、表１に示される抗体のいずれか１つに提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３
、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２もしくはＣＤＲＬ３またはそれらの組合せを含む任意の抗体（
抗原結合性断片を含む）を含む。いくつかの実施形態では抗プロ／潜在型ミオスタチン結
合剤は、表１に示される抗体のいずれか１つのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、Ｃ
ＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含む。本開示は、表１に示される抗体のいずれ
か１つに提供されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２また
はＣＤＲＬ３を含む分子をコードする任意の核酸配列も含む。抗体重鎖および軽鎖ＣＤＲ
３ドメインは、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を演じる
場合がある。したがって、本開示の抗プロ／潜在型ミオスタチン結合剤またはその核酸分
子は、表１に示す抗体の少なくとも重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３を含み得る。
本開示の態様は、プロ／潜在型ミオスタチンタンパク質に結合し、６個の相補性決定領
域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣ
ＤＲＬ３を含むモノクローナル抗体または抗原結合性断片に関する。
いくつかの実施形態ではＣＤＲＨ１は配列番号１〜３のいずれか１つに記載の配列を含
む。いくつかの実施形態ではＣＤＲＨ２は配列番号４〜９のいずれか１つに記載の配列を
含む。いくつかの実施形態ではＣＤＲＨ３は配列番号１０〜１１のいずれか１つに記載の
配列を含む。ＣＤＲＬ１は配列番号１２〜１７のいずれか１つに記載の配列を含む。いく
つかの実施形態ではＣＤＲＬ２は配列番号１８〜２１のいずれか１つに記載の配列を含む
。いくつかの実施形態ではＣＤＲＬ３は配列番号２２〜２３のいずれか１つに記載の配列
を含む。
いくつかの実施形態では（例えば表１に示される抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体Ａｂ
１について）ＣＤＲＨ１は配列番号１または２に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ２は配列番
号４または５に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３は配列番号１０に記載の配列を含み、ＣＤ
ＲＬ１は配列番号１２または１３に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２は配列番号１８または
１９に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ３は配列番号２２に記載の配列を含み、抗体はプロ／
潜在型ミオスタチンに結合する。
いくつかの実施形態では（例えば表１に示される抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体Ａｂ
３について）ＣＤＲＨ１は配列番号１または３に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ２は配列番
号６または７に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３は配列番号１１に記載の配列を含み、ＣＤ
ＲＬ１は配列番号１４または１５に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２は配列番号２０または
２１に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ３は配列番号２３に記載の配列を含み、抗体はプロ／
潜在型ミオスタチンに結合する。
いくつかの実施形態では（例えば表１に示される抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体Ａｂ
５について）ＣＤＲＨ１は配列番号１または３に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ２は配列番
号８または９に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３は配列番号１１に記載の配列を含み、ＣＤ
ＲＬ１は配列番号１６または１７に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２は配列番号２０または
２１に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ３は配列番号２３に記載の配列を含み、抗体はプロ／
潜在型ミオスタチンに結合する。いくつかの例では本開示の抗プロ／潜在型ミオスタチン
結合剤（例えば抗体）のいずれかは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１
、ＣＤＲＬ２および／またはＣＤＲＬ３に実質的に類似する１つまたは複数のＣＤＲ（例
えばＣＤＲＨまたはＣＤＲＬ）配列を有する任意の抗体（抗原結合性断片を含む）を含む
。例えば抗体は、配列番号１〜２３のいずれか１つの対応するＣＤＲ領域と比較して５個
、４個、３個、２個または１個までのアミノ酸残基バリエーションを含有する、表１（配
列番号１〜２３）に示される１つまたは複数のＣＤＲ配列を含んでよい。表１に列挙され
る抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域についての完全なアミノ酸および核酸配列は下
に提供される。
いくつかの実施形態では本開示の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、配列番号２４〜
２９のいずれか１つの重鎖可変ドメインまたは配列番号３０〜３５のいずれか１つの軽鎖
可変ドメインを含む任意の抗体を含む。いくつかの実施形態では本開示の抗プロ／潜在型
ミオスタチン抗体は、配列番号２４および３０；２５および３１；２６および３２；２７
および３３；２８および３４；または２９および３５）の重鎖可変および軽鎖可変の対を
含む任意の抗体を含む。
本開示の態様は、本明細書に記載のもののいずれかに相同性の重鎖可変および／または
軽鎖可変アミノ酸配列を有する抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体を提供する。いくつかの
実施形態では抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、配列番号２４〜２９のいずれかの重鎖
可変配列または配列番号３０〜３５のいずれか１つの軽鎖可変配列と少なくとも７５％（
例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）同一である重鎖可変配列
または軽鎖可変配列を含む。いくつかの実施形態では相同性重鎖可変および／または軽鎖
可変アミノ酸配列は、本明細書で提供されるＣＤＲ配列のいずれの内でも変化していない
。例えばいくつかの実施形態では配列バリエーションの程度（例えば７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９８％または９９％）は本明細書で提供されるＣＤＲ配列のいず
れかを除外して重鎖可変および／または軽鎖可変配列内で生じてよい。
２個のアミノ酸配列の「パーセント同一性」はＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ
Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０巻：５８７３〜７７頁、
１９９３年のとおり改変されたＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ． Ｎａ
ｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８７巻：２２６４〜６８頁、１９９０年のアル
ゴリズムを使用して決定される。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．
Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５巻：４０３〜１０頁、１９９０年のＮＢＬＡＳＴおよび
ＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。ＢＬＡＳＴタンパク質検
索は、目的のタンパク質分子に相同性のアミノ酸配列を得るためにＸＢＬＡＳＴプログラ
ム、スコア＝５０、ワード長＝３で実行され得る。２個の配列間にギャップが存在する場
合、ギャップＢＬＡＳＴがＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．
２５巻（１７号）：３３８９〜３４０２頁、１９９７年に記載のとおり利用され得る。
ＢＬＡＳＴおよびギャップＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム
（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用され得る。
いくつかの実施形態では保存的変異は、結晶構造に基づいて決定されるプロ／潜在型ミ
オスタチンとの相互作用に残基が関与しそうにない位置でＣＤＲまたはフレームワーク配
列に導入されてよい。本明細書において使用される場合、「保存的アミノ酸置換」は、ア
ミノ酸置換が行われるタンパク質の相対電荷またはサイズの特徴を変更しないアミノ酸置
換を指す。改変体は、そのような方法をまとめている参考文献、例えばＭｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｊ． Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋら編、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８９年また
はＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、
Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．、Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋにおいて見出されるような当業者に公知のポリペプチド配列を変更するた
めの方法に従って調製されてよい。アミノ酸の保存的置換は、次の群：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ
、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、
Ｎ；および（ｇ）Ｅ、Ｄ内のアミノ酸の間で行われる置換を含む。
いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体は、抗体に望ましい特性を付与する
変異を含む。例えば、天然ＩｇＧ４ ｍＡｂで生じることが公知であるＦａｂアーム交換
による起こり得る困難な状況を回避するために、本明細書で提供される抗体は、セリン２
２８（ＥＵ番号付け、Ｋａｂａｔ番号付け残基２４１）がプロリンに変換されてＩｇＧ１
様（ＣＰＰＣＰ（配列番号５８））ヒンジ配列が生じる安定化「Ａｄａｉｒ」変異を含む
場合がある（Ａｎｇａｌ Ｓ．ら、「Ａ ｓｉｎｇｌｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂ
ｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ａｂｏｌｉｓｈｅｓ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ
ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎ （ＩｇＧ４） ａｎｔｉｂｏｄｙ」Ｍｏ
ｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０巻、１０５〜１０８頁；１９９３年）。したがって、抗体のい
ずれかは、安定化「Ａｄａｉｒ」変異またはアミノ酸配列ＣＰＰＣＰ（配列番号５８）を
含んでよい。
本開示の抗プロ／潜在型ミオスタチン結合剤は、任意選択で抗体定常領域またはその一
部を含んでよい。例えばＶＬドメインは、そのＣ末端でＣκまたはＣλなどの軽鎖定常ド
メインに付着され得る。同様にＶＨドメインまたはその一部は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ
、ＩｇＧおよびＩｇＭならびに任意のアイソタイプサブクラスのような重鎖の全体または
一部に付着され得る。抗体は、好適な定常領域を含み得る（例えばＫａｂａｔら、Ｓｅｑ
ｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅ
ｒｅｓｔ、第９１〜３２４２号、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅ
ａｌｔｈ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）を参照
されたい）。したがって、この範囲内の抗体は、任意の好適な定常領域と組み合わされた
ＶＨおよびＶＬドメイン、またはその抗原結合性部分を含み得る。
ある特定の実施形態ではＶＨおよび／またはＶＬドメインは、生殖系列配列に復帰され
てよく、例えばこれらのドメインのＦＲは、生殖系列細胞によって産生されるものに適合
するように従来の分子生物学技術を使用して変異される。例えばＶＨおよび／またはＶＬ
ドメインは、それぞれＩｇＨＶ３−３０（配列番号３６）および／またはＩｇＬＶ１−４
４（配列番号３７）の生殖系列配列に復帰されてよい。ＶＨおよび／またはＶＬドメイン
のいずれかが任意の好適な生殖系列配列に復帰され得ることは理解されるべきである。他
の実施形態ではＦＲ配列は、コンセンサス生殖系列配列から逸脱したままである。
いくつかの実施形態では抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体または抗原結合性断片は、配
列番号２４〜３５に示す抗体のフレームワーク領域を含んでも含まなくてもよい。いくつ
かの実施形態では抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、ネズミ抗体であり、ネズミフレー
ムワーク領域配列を含む。
いくつかの実施形態では本開示の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、比較的高い親和
性で、例えば１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−
１１Ｍ未満またはそれより低いＫｄでプロ／潜在型ミオスタチンに結合できる。例えば抗
プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、５ｐＭから５００ｎＭの間、例えば５０ｐＭから１０
０ｎＭの間、例えば５００ｐＭから５０ｎＭの間の親和性でプロ／潜在型ミオスタチンに
結合できる。本開示は、プロ／潜在型ミオスタチンへの結合について本明細書に記載の抗
体のいずれかと競合し、５０ｎＭまたはそれより低い（例えば２０ｎＭもしくはそれより
低い、１０ｎＭもしくはそれより低い、５００ｐＭもしくはそれより低い、５０ｐＭもし
くはそれより低い、または５ｐＭもしくはそれより低い）親和性を有する抗体または抗原
結合性断片も含む。抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の親和性および結合動態は、これに
限定されないがバイオセンサー技術（例えばＯＣＴＥＴまたはＢＩＡＣＯＲＥ）を含む任
意の好適な方法を使用して試験されてよい。
標的抗原に「特異的に結合する」抗体は非標的抗原に結合するよりも大きな親和性、ア
ビディティ、より容易におよび／またはより長い持続時間で標的抗原に結合する。いくつ
かの実施形態では、プロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合する抗体が本明細書で開示
される。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体のいずれかは、プロ／潜在型
ミオスタチンのトロイド切断部位にもしくはその近くにまたはトロイドドッキング部位に
もしくはその近くに結合する。いくつかの実施形態では抗体は、トロイド切断部位または
トロイドドッキング部位の１５またはそれより少ないアミノ酸残基内に結合する場合に、
トロイド切断部位近く、またはトロイドドッキング部位近くに結合する。いくつかの実施
形態では本明細書で提供される抗体のいずれかは、トロイド切断部位またはトロイドドッ
キング部位の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４また
は１５アミノ酸残基内に結合する。いくつかの実施形態では抗体は、ＧＤＦ８のトロイド
切断部位にまたはその近くに結合する。例えば抗体は、配列番号６２ ＰＫＡＰＰＬＲＥ
ＬＩＤＱＹＤＶＱＲＤＤＳＳＤＧＳＬＥＤＤＤＹＨＡＴ（配列番号６２）に記載のアミノ
配列に結合できる。他の実施形態では、本明細書で提供される抗体のいずれかは、プロ／
潜在型ミオスタチンのプロタンパク質転換酵素切断部位にもしくはその近くに、またはプ
ロタンパク質転換酵素ドッキング部位にもしくはその近くに結合する。いくつかの実施形
態では抗体は、プロタンパク質転換酵素切断部位またはプロタンパク質転換酵素ドッキン
グ部位の１５またはそれより少ないアミノ酸残基内に結合する場合、プロタンパク質転換
酵素切断部位近くに、またはプロタンパク質転換酵素ドッキング部位近くに結合する。い
くつかの実施形態では本明細書で提供する抗体のいずれかは、プロタンパク質転換酵素切
断部位またはプロタンパク質転換酵素ドッキング部位の１、２、３、４、５、６、７、８
、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸残基内に結合する。いくつかの
実施形態では抗体は、ＧＤＦ８のプロタンパク質転換酵素切断部位にまたはその近くに結
合する。例えば抗体は、配列番号６３に記載のアミノ酸配列に結合できる。
ＧＬＮＰＦＬＥＶＫＶＴＤＴＰＫＲＳＲＲＤＦＧＬＤＣＤＥＨＳＴＥＳＲＣ（配列番号６
３）。
一例では本明細書に記載の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、ミオスタチンの他の形
態および／または増殖因子のＴＧＦβファミリーの他のメンバーと比較してプロ／潜在型
ミオスタチンに特異的に結合する。増殖因子のＴＧＦβファミリーのメンバーは、非限定
的にＡＭＨ、ＡＲＴＮ、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１５、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭ
Ｐ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８Ａ、ＢＭＰ８Ｂ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１０、ＧＤＦ１
１、ＧＤＦ１５、ＧＤＦ２、ＧＤＦ３、ＧＤＦ３Ａ、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、Ｇ
ＤＦ８、ＧＤＦ９、ＧＤＮＦ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＨＢＢ、ＩＮＨＢＣ、ＩＮＨ
ＢＥ、ＬＥＦＴＹ１、ＬＥＦＴＹ２、ＮＯＤＡＬ、ＮＲＴＮ、ＰＳＰＮ、ＴＧＦβ１、Ｔ
ＧＦβ２およびＴＧＦβ３タンパク質を含む。そのような抗体は、増殖因子のＴＧＦβフ
ァミリーの他のメンバーと比較してはるかに高い親和性（例えば少なくとも２倍、５倍、
１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍または１，０００倍高い）でプロ／潜在
型ミオスタチンに結合できる。いくつかの実施形態ではそのような抗体は、増殖因子のＴ
ＧＦβファミリーの他のメンバーと比較して少なくとも１，０００倍高い親和性でプロ／
潜在型ミオスタチンに結合できる。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体は
、ＧＤＦ１１または成熟ミオスタチンの１つまたは複数の形態と比較してはるかに高い（
例えば少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍または１
，０００倍高い）親和性でプロ／潜在型ミオスタチンに結合できる。いくつかの実施形態
では本明細書で提供される抗体は、ＧＤＦ１１（例えばプロＧＤＦ１１、潜在型ＧＤＦ１
１もしくは成熟ＧＤＦ１１）または成熟ミオスタチンの１つまたは複数の形態と比較して
少なくとも１，０００倍高い親和性でプロ／潜在型ミオスタチンに結合できる。代替的に
またはさらに抗体は、プロ／潜在型ＧＤＦ１１などのＴＧＦβファミリーの他のメンバー
と比較して、タンパク質分解を介したプロ／潜在型ミオスタチンの切断（例えばプロタン
パク質転換酵素またはトロイドプロテアーゼによる）に対してはるかに高い阻害活性（例
えば少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１，００
０倍高い）を示し得る。
いくつかの実施形態では抗体は抗原に結合するが、抗原を血漿から有効に除去できない
。したがって、いくつかの実施形態では血漿中の抗原の濃度は、抗原のクリアランスを低
減することによって増加され得る。しかし、いくつかの実施形態では本明細書で提供され
る抗体（例えばスイーピング抗体）は、抗原への親和性がｐＨに感受性である。そのよう
なｐＨ感受性抗体は、中性ｐＨで血漿中の抗原に結合でき、酸性エンドソーム中で抗原か
ら解離し、それにより抗体媒介抗原蓄積を低減し、および／または血漿からの抗原クリア
ランスを促進する。
本開示の態様は、スイーピング抗体に関する。本明細書において使用される場合、「ス
イーピング抗体」は、ｐＨ感受性抗原結合および、中性または生理学的ｐＨで細胞表面新
生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への少なくとも閾値レベルの結合の両方を有する抗体を指す
。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎに中性ｐＨで
結合する。例えばスイーピング抗体は、７．０から７．６の範囲のｐＨでＦｃＲｎに結合
できる。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、抗原に抗原結合部位で結合でき、
細胞性ＦｃＲｎに抗体のＦｃ部分を介して結合できる。いくつかの実施形態では次いでス
イーピング抗体は、内部移行され、分解される場合がある抗原を酸性エンドソーム中に放
出できる。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、もはや抗原に結合せず、次いで
（例えばエキソサイトーシスによって）細胞によって血清に戻して放出され得る。
いくつかの実施形態では血管内皮（例えば被験体の）中のＦｃＲｎは、スイーピング抗
体の半減期を延ばす。いくつかの実施形態ではミオスタチン（例えばプロミオスタチン、
潜在型ミオスタチンまたはプライムドミオスタチン（ｐｒｉｍｅｄ Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ
））などの抗原に結合するスイーピング抗体を、いくつかの実施形態では血管内皮細胞は
内部移行させる。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、血流に戻って再循環され
る。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、その従来の対応物と比較して半減期（
例えば被験体の血清中）が増加している。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体の従
来の対応物は、スイーピング抗体の由来元である抗体を指す（例えばｐＨ７でより大きな
親和性でＦｃＲｎに結合するように従来の抗体のＦｃ部分を操作する前）。いくつかの実
施形態ではスイーピング抗体は、被験体の血清中でその従来の対応物と比較して少なくと
も１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３５％、５０％、７５％、１００％、
１５０％、２００％または２５０％長い半減期を有する。
いくつかの実施形態ではスイーピング抗体のＦｃ部分は、ＦｃＲｎに結合する。いくつ
かの実施形態ではスイーピング抗体のＦｃ部分は、ＦｃＲｎに７．４のｐＨで１０−３Ｍ
から１０−８Ｍの範囲のＫｄで結合する。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、
ＦｃＲｎに７．４のｐＨで１０−３Ｍから１０−７Ｍ、１０−３Ｍから１０−６Ｍ、１０
−３Ｍから１０−５Ｍ、１０−３Ｍから１０−４Ｍ、１０−４Ｍから１０−８Ｍ、１０−
４Ｍから１０−７Ｍ、１０−４Ｍから１０−６Ｍ、１０−４Ｍから１０−５Ｍ、１０−５
Ｍから１０−８Ｍ、１０−５Ｍから１０−７Ｍ、１０−５Ｍから１０−６Ｍ、１０−６Ｍ
から１０−８Ｍ、１０−６Ｍから１０−７Ｍまたは１０−７Ｍから１０−８Ｍの範囲のＫ
ｄで結合する。いくつかの実施形態ではＦｃＲｎは、スイーピング抗体のＣＨ２−ＣＨ３
ヒンジ領域に結合する。いくつかの実施形態ではＦｃＲｎは、プロテインＡまたはプロテ
インＧと同じ領域に結合する。いくつかの実施形態ではＦｃＲｎは、ＦｃγＲとは異なる
結合部位に結合する。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体Ｆｃ領域のアミノ酸残基
ＡＡは、ＦｃＲｎへの結合のために必要である。いくつかの実施形態ではスイーピング抗
体Ｆｃ領域のアミノ酸残基ＡＡは、ＦｃＲｎへの結合に影響を与える。
いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体のいずれかは、より高い親和性でＦ
ｃＲｎに結合するように操作される。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体
のいずれかは、ｐＨ７．４でより高い親和性でＦｃＲｎに結合するように操作される。い
くつかの実施形態ではスイーピング抗体のＦｃＲｎへの親和性は、それらの従来の対応物
と比較してそれらの薬物動態（ＰＫ）特性を伸ばすように増加される。例えばいくつかの
実施形態ではスイーピング抗体は、より低い用量での効能に起因してより少ない有害反応
を誘発する。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、より少ない頻度で投与される
。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体のある特定の組織型への経細胞輸送は増加さ
れる。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、経胎盤性送達の効率を増強する。い
くつかの実施形態ではスイーピング抗体は、産生するためにあまり費用がかからない。
いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体のいずれかは、低親和性でＦｃＲｎ
に結合するように操作される。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体のいず
れかは、ｐＨ７．４で、低親和性でＦｃＲｎに結合するように操作される。いくつかの実
施形態ではスイーピング抗体のＦｃＲｎへの親和性は、それらの従来の対応物と比較して
それらの薬物動態的（ＰＫ）特性を短くするように減少される。例えばいくつかの実施形
態ではスイーピング抗体は、画像化および／または放射免疫療法に関してさらに急速に排
除される。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、自己免疫疾患に対する処置とし
て内在性病原性抗体のクリアランスを促進する。いくつかの実施形態ではスイーピング抗
体は、材料胎児特異的抗体の経胎盤輸送によって生じる可能性がある有害な妊娠転帰のリ
スクを低減する。
いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、中性または生理学的ｐＨ（例えばｐＨ７
．４）と比較して低いｐＨで抗原への親和性が減少する。いくつかの実施形態ではスイー
ピング抗体は、生理学的ｐＨ（例えばｐＨ７．４）と比較して酸性ｐＨ（例えば５．５か
ら６．５の範囲のｐＨ）で抗原への親和性が減少する。本明細書で提供される抗体のいず
れかはｐＨ変化に応じて抗原から解離するように操作されてよい（例えばｐＨ感受性抗体
）ことは理解されるべきである。いくつかの実施形態では本明細書で提供されるスイーピ
ング抗体は、ｐＨに応じて抗原に結合するように操作される。いくつかの実施形態では本
明細書で提供されるスイーピング抗体は、ｐＨに応じてＦｃＲｎに結合するように操作さ
れる。いくつかの実施形態では本明細書で提供されるスイーピング抗体は、エンドサイト
ーシスによって内部移行される。いくつかの実施形態では本明細書で提供されるスイーピ
ング抗体は、ＦｃＲｎ結合によって内部移行される。いくつかの実施形態ではエンドサイ
トーシスされたスイーピング抗体は、抗原をエンドソーム中に放出する。いくつかの実施
形態ではスイーピング抗体は、細胞表面に戻って再循環される。いくつかの実施形態では
スイーピング抗体は、細胞に結合したままである。いくつかの実施形態ではエンドサイト
ーシスされたスイーピング抗体は、血漿に戻って再循環される。本明細書で提供される抗
体のいずれかのＦｃ部分が、異なるＦｃＲｎ結合活性を有するように操作されてよいこと
は理解されるべきである。いくつかの実施形態ではＦｃＲｎ結合活性は、スイーピング抗
体による抗原のクリアランス時間に影響を与える。いくつかの実施形態ではスイーピング
抗体は、長時間作用型または速効型スイーピング抗体であってよい。
いくつかの実施形態では従来の治療用抗体をスイーピング抗体に変換することは、有効
用量を低減する。いくつかの実施形態では従来の治療用抗体をスイーピング抗体に変換す
ることは、有効用量を少なくとも１％、２％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、
５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％低減する。いくつかの実
施形態では従来の治療用抗体をスイーピング抗体に変換することは、有効用量を少なくと
も１／１．５、１／２、１／３、１／４、１／５、１／６、１／８、１／１０、１／１５
、１／２０、１／５０または１／１００に低減する。
いくつかの実施形態では治療のためのスイーピング抗体の適切な用量を選択することは
、経験的に実行され得る。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体の高用量は、ＦｃＲ
ｎを飽和する場合があり、血清中の抗原を内部移行することなく安定化する抗体を生じる
。いくつかの実施形態では低用量のスイーピング抗体は、治療的に有効でない場合がある
。いくつかの実施形態ではスイーピング抗体は、１日１回、１週間に１回、２週間ごとに
１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、６週間ごとに１回、８週間ごとに１回、１
０週間ごとに１回、１２週間ごとに１回、１６週間ごとに１回、２０週間ごとに１回また
は２４週間ごとに１回投与される。
いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体のいずれもスイーピング抗体になる
ように改変または操作されてよい。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体の
いずれも任意の好適な方法を使用してスイーピング抗体に変換されてよい。例えばスイー
ピング抗体を作製するための好適な方法はＩｇａｗａら、（２０１３年）「Ｅｎｇｉｎｅ
ｅｒｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗｉｔｈ Ｎｏｖｅｌ Ａｎｔｉ
ｇｅｎ−Ｓｗｅｅｐｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎ Ｖｉｖｏ」、ＰＬｏＳ ＯＮＥ
８巻（５号）：ｅ６３２３６頁；およびＩｇａｗａら、「ｐＨ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａ
ｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅ
ｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｏｄａｌｉｔｙ」、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ
ｉｃａ Ａｃｔａ １８４４巻（２０１４年）１９４３〜１９５０頁に以前に記載されて
おり、これらのそれぞれの内容は参照により本明細書に組み込まれる。しかし、本明細書
で提供されるスイーピング抗体を作製するための方法が限定されることを意味しないこと
は理解されるべきである。したがって、スイーピング抗体と作製するための追加的方法は
本開示の範囲内である。
本開示のいくつかの態様は、本明細書で提供される抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の
いずれかの親和性（例えばＫｄとして表される）がｐＨの変化に感受性であるという認識
に基づいている。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体は、比較的高いｐＨ
（例えば７．０〜７．４の範囲のｐＨ）と比較して比較的低いｐＨ（例えば４．０〜６．
５の範囲のｐＨ）でプロ／潜在型ミオスタチンへの結合のＫｄが増加している。いくつか
の実施形態では本明細書で提供される抗体は、ｐＨが４．０から６．５の間である場合に
、１０−３Ｍ、１０−４Ｍ、１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍの範囲の
プロ／潜在型ミオスタチンへの結合のＫｄを有する。いくつかの実施形態では本明細書で
提供される抗体は、ｐＨが７．０から７．４の間である場合に、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ
、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍの範囲のプロ／潜在型ミオスタ
チンへの結合のＫｄを有する。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体は、ｐ
Ｈ７．０から７．４の間と比較してｐＨ４．０から６．５の間で少なくとも２倍、少なく
とも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも
１０００倍、少なくとも５０００倍または少なくとも１００００倍大きいプロ／潜在型ミ
オスタチンへの結合のＫｄを有する。
ポリペプチド
本開示のいくつかの態様は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２
７、配列番号２８および配列番号２９からなる群より選択される配列を有するポリペプチ
ドに関する。いくつかの実施形態ではポリペプチドは可変重鎖ドメインである。いくつか
の実施形態ではポリペプチドは、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号
２７、配列番号２８または配列番号２９に記載のアミノ酸配列のいずれか１つと少なくと
も７５％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）同一である。
本開示のいくつかの態様は、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３
３、配列番号３４および配列番号３５からなる群より選択される配列を有するポリペプチ
ドに関する。いくつかの実施形態ではポリペプチドは可変軽鎖ドメインである。いくつか
の実施形態ではポリペプチドは、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号
３３、配列番号３４または配列番号３５に記載のアミノ酸配列のいずれか１つと少なくと
も７５％（例えば８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）同一である。
抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体と競合する抗体
本開示の態様は、本明細書で提供される抗体のいずれかと競合または交差競合する抗体
に関する。抗体に関して本明細書において使用される用語「競合する」は、第１の抗体が
、第２の抗体の結合と十分に類似した様式でタンパク質（例えば潜在型ミオスタチン）の
エピトープに結合し、そのエピトープとの第１の抗体の結合の結果が、第２の抗体の非存
在下での第１の抗体の結合と比較して第２の抗体の存在下で検出可能に減少されることを
意味する。第２の抗体のそのエピトープへの結合も第１の抗体の存在下で検出可能に減少
される別の場合が可能であるが、そうである必要はない。すなわち第１の抗体は第２の抗
体のそのエピトープへの結合を、第２の抗体がそのそれぞれのエピトープへの第１の抗体
の結合を阻害することなく阻害できる。しかし、各抗体がそのエピトープまたはリガンド
との他の抗体の結合を検出可能に阻害する場合、同じ程度、より大きい程度またはより小
さい程度であるかに関わらず、抗体はそれらのそれぞれのエピトープ（複数可）の結合に
ついて互いに「交差競合する」といえる。競合するおよび交差競合する両方の抗体は、本
開示の範囲内である。そのような競合または交差競合が生じる機構（例えば立体障害、コ
ンフォメーション変化もしくは共通エピトープまたはそれらの部分への結合）に関わらず
、当業者は、そのような競合および／または交差競合抗体が包含され、本明細書で提供さ
れる方法および／または組成物に有用であり得ることを理解する。
本開示の態様は、本明細書で提供される抗体のいずれかと競合または交差競合する抗体
に関する。いくつかの実施形態では抗体は、本明細書で提供される抗体のいずれかと同じ
エピトープにおいてまたはその近くに結合する。いくつかの実施形態では抗体は、それが
エピトープの１５またはそれより少ないアミノ酸残基内に結合する場合にエピトープ近く
に結合する。いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体のいずれかは、本明細書
で提供される抗体のいずれかが結合するエピトープの１、２、３、４、５、６、７、８、
９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸残基内に結合する。
別の実施形態では抗体は、１０−６Ｍ未満の抗体とタンパク質との間の平衡解離定数Ｋ
ｄで本明細書で提供される抗原のいずれか（例えばプロ／潜在型ミオスタチン）への結合
について競合または交差競合する。他の実施形態では抗体は、１０−１１Ｍから１０−６
Ｍの範囲のＫｄで、本明細書で提供される抗原のいずれかへの結合について競合または交
差競合する。
本開示の態様は本明細書で提供される抗体のいずれかとプロ／潜在型ミオスタチンへの
結合について競合する抗体に関する。いくつかの実施形態では抗体は、本明細書で提供さ
れる抗体のいずれかと同じエピトープにおいてプロ／潜在型ミオスタチンに結合する。例
えば、いくつかの実施形態では本明細書で提供される抗体のいずれかは、プロ／潜在型ミ
オスタチンのトロイド切断部位にもしくはその近くにまたはトロイドドッキング部位にも
しくはその近くに結合する。他の実施形態では本明細書で提供される抗体のいずれかは、
プロ／潜在型ミオスタチンのプロタンパク質転換酵素切断部位にもしくはその近くにまた
はプロタンパク質転換酵素ドッキング部位にもしくはその近くに結合する。別の実施形態
では抗体は、１０−６Ｍ未満の抗体とプロ／潜在型ミオスタチンとの間の平衡解離定数Ｋ
ｄでプロ／潜在型ミオスタチンへの結合について競合する。他の実施形態では本明細書で
提供される抗体のいずれかと競合する抗体は、１０−１１Ｍから１０−６Ｍの範囲のＫｄ
でプロ／潜在型ミオスタチンに結合する。
本明細書で提供される抗体のいずれかは、任意の好適な方法を使用して特徴付けられて
よい。例えば１つの方法は、抗原が結合するエピトープを同定すること、すなわち「エピ
トープマッピング」である。例えばＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ、ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ、Ｎ．Ｙ．、１９９９年の１１章に記載のとおり、抗体抗原複合体の結晶構造を解析す
ること、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイおよび合成ペプチドに基づくアッセイを
含む、タンパク質上のエピトープの位置をマッピングおよび特徴付けするための多数の好
適な方法がある。追加的例ではエピトープマッピングは、抗体が結合する配列を決定する
ために使用され得る。エピトープは、直鎖状エピトープであり得、すなわちアミノ酸の単
一のストレッチに含有され得る、または必ずしも単一のストレッチ（一次構造直鎖状配列
）に含有されていなくてもよいアミノ酸の三次元相互作用によって形成されるコンフォメ
ーショナルエピトープ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ）であってよい
。多様な長さ（例えば少なくとも４〜６アミノ酸長）のペプチドは、単離または合成（例
えば組換え的に）され、抗体との結合アッセイのために使用されてよい。別の例では抗体
が結合するエピトープは、標的抗原配列由来の重複ペプチドを使用し、抗体による結合を
決定することによる系統的スクリーニングにおいて決定され得る。遺伝子断片発現アッセ
イにより、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームは、無作為にまたは特異
的な遺伝的構築によってのいずれかで断片化され、発現された抗原断片と試験される抗体
との反応性が決定される。遺伝子断片は、例えばＰＣＲによって産生され、次いで放射性
アミノ酸の存在下でタンパク質へｉｎ ｖｉｔｒｏで転写および翻訳され得る。抗体の放
射性標識抗原断片への結合は、次いで免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定される。
ある特定のエピトープは、ファージ粒子の表面に提示された無作為ペプチド配列の大きな
ライブラリー（ファージライブラリー）を使用しても同定され得る。代替的に、重複ペプ
チド断片の規定のライブラリーは、簡単な結合アッセイにおいて試験抗体への結合につい
て試験され得る。追加的例では、抗原結合ドメインの変異誘発、ドメイン交換実験および
アラニンスキャンニング変異誘発は、エピトープ結合のために要求される、十分なおよび
／または必要な残基を同定するために実施され得る。例えばドメイン交換実験は、プロ／
潜在型ミオスタチンポリペプチドの種々の断片が、ＴＧＦβタンパク質ファミリーの別の
メンバー（例えばＧＤＦ１１）などの密接に関連しているが抗原性が異なるタンパク質由
来の配列で置き換えられて（交換されて）いる標的抗原の変異体を使用して実施され得る
。抗体の変異体プロ／潜在型ミオスタチンへの結合を評価することによって、抗体結合へ
の特定の抗原断片の重要性が評価され得る。
代替的に、競合アッセイは、抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決
定するために同じ抗原に結合することが公知である他の抗体を使用して実施されてよい。
競合アッセイは当業者に周知である。好適な方法のいずれか、例えば本明細書に記載のエ
ピトープマッピング法は、抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体が本明細書に記載のプロ／潜
在型ミオスタチン中の特異的残基／セグメントの１つまたは複数に結合するかどうかを決
定するために適用され得る。さらに抗体と、プロ／潜在型ミオスタチン中のこれらの定義
された残基の１つまたは複数との相互作用は、日常的技術によって決定され得る。例えば
結晶構造を決定することができ、プロ／潜在型ミオスタチン中の残基と抗体中の１つまた
は複数の残基との間の距離はそれに従って決定され得る。そのような距離に基づいて、プ
ロ／潜在型ミオスタチン中の特定の残基が抗体中の１つまたは複数の残基と相互作用する
かどうかが決定され得る。さらに、競合アッセイおよび標的変異誘発アッセイなどの好適
な方法は、変異体プロ／潜在型ミオスタチンなどの別の標的と比較した、候補抗プロ／潜
在型ミオスタチン抗体のプロ／潜在型ミオスタチンへの優先的な結合を決定するために適
用され得る。
プロ／潜在型ミオスタチンに結合する抗体の産生
多数の方法は、本開示の抗体またはその抗原結合性断片を得るために使用され得る。例
えば抗体は、組換えＤＮＡ方法を使用して産生され得る。モノクローナル抗体は、公知の
方法によりハイブリドーマの生成によっても産生され得る（例えばＫｏｈｌｅｒおよびＭ
ｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ、２５６号：４９５〜４９９頁を参照された
い）。この様式で形成されたハイブリドーマは、次いで、特定の抗原に特異的に結合する
抗体を産生する１つまたは複数のハイブリドーマを同定するために酵素結合免疫吸着アッ
セイ（ＥＬＩＳＡ）および表面プラズモン共鳴（例えばＯＣＴＥＴまたはＢＩＡＣＯＲＥ
）解析などの標準的方法を使用してスクリーニングされる。特定の抗原の任意の形態、例
えば組換え抗原、天然に存在する形態、その任意の改変体または断片、およびその抗原性
ペプチド（例えば直鎖状エピトープとしてまたはコンフォメーショナルエピトープとして
足場内の本明細書に記載のエピトープのいずれか）は免疫原として使用され得る。抗体を
作製する１つの例示的方法は、抗体またはその断片（例えばｓｃＦｖ）を発現するタンパ
ク質発現ライブラリー、例えばファージまたはリボソームディスプレイライブラリーをス
クリーニングすることを含む。ファージディスプレイは、例えばＬａｄｎｅｒら、米国特
許第５，２２３，４０９号、Ｓｍｉｔｈ（１９８５年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８巻：１３
１５〜１３１７頁、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２
４〜６２８頁、Ｍａｒｋｓら、（１９９１年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２２２巻：
５８１〜５９７頁、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９１／１７２７１、ＷＯ９２／２０７９
１、ＷＯ９２／１５６７９、ＷＯ９３／０１２８８、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／
０９６９０およびＷＯ９０／０２８０９に記載されている。
ディスプレイライブラリーの使用に加えて、特定の抗原（例えばプロミオスタチン）は
、非ヒト動物、例えばげっ歯類、例えばマウス、ハムスター、またはラットを免疫化する
ために使用されてよい。一実施形態では非ヒト動物はマウスである。
別の実施形態ではモノクローナル抗体は、非ヒト動物から得られ、次いで好適な組換え
ＤＮＡ技術を使用して改変される（例えばキメラ）。キメラ抗体を作製するための種々の
アプローチは記載されている。例えばＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａ
ｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．８１巻：６８５１頁、１９８５年、Ｔａｋｅｄａら、
Ｎａｔｕｒｅ ３１４巻：４５２頁、１９８５年、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８
１６，５６７号、Ｂｏｓｓら、米国特許第４，８１６，３９７号、Ｔａｎａｇｕｃｈｉら
、欧州特許公開第ＥＰ１７１４９６号、欧州特許公開第０１７３４９４号、英国特許第Ｇ
Ｂ２１７７０９６Ｂ号を参照されたい。
追加的な抗体産生技術についてＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗら編、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ、１９８８年を参照されたい。本開示は、抗体のいずれかの特定の供給源、産
生の方法または他の特別な特徴に必ずしも限定されない。
本開示のいくつかの態様は、ポリヌクレオチドまたはベクターで形質転換された宿主細
胞に関する。宿主細胞は、原核または真核細胞であってよい。宿主細胞に存在するポリヌ
クレオチドまたはベクターは、宿主細胞のゲノムに組み込まれていてもよく、または染色
体外に維持されていてもよい。宿主細胞は、細菌性、昆虫、真菌、植物、動物またはヒト
細胞などの任意の原核または真核細胞であってよい。いくつかの実施形態では真菌細胞は
、例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属のもの、具体的にはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種
のものである。用語「原核生物」は、抗体または対応する免疫グロブリン鎖の発現のため
にＤＮＡまたはＲＮＡ分子で形質転換またはトランスフェクトされ得る全ての細菌を含む
。原核生物の宿主は、例えばＥ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔ
ｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓおよびＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓなどのグラム陰
性およびグラム陽性細菌を含んでよい。用語「真核生物」は、酵母、高等植物、昆虫なら
びに脊椎動物細胞、例えばＮＳＯおよびＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞を含む。組換え産
生手順において用いられる宿主に応じて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体ま
たは免疫グロブリン鎖は、グリコシル化されてよい、またはグリコシル化されなくてよい
。抗体または対応する免疫グロブリン鎖は、開始メチオニンアミノ酸残基も含んでよい。
いくつかの実施形態では、ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主はヌクレオチ
ド配列の高レベル発現に好適な条件下に維持されてよく、所望により、免疫グロブリン軽
鎖、重鎖、軽鎖／重鎖二量体もしくはインタクト抗体、抗原結合性断片または他の免疫グ
ロブリン形態の回収および精製が続いてよい；Ｂｅｙｃｈｏｋ、Ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．
Ｙ．、（１９７９年）を参照されたい。したがって、ポリヌクレオチドまたはベクターは
、次に抗体または抗原結合性断片を産生する細胞に導入される。さらに、前述の宿主細胞
を含むトランスジェニック動物、好ましくは哺乳動物は、抗体または抗体断片の大規模産
生のために使用されてよい。
形質転換された宿主細胞は、発酵槽で増殖され、最適な細胞増殖を達成するための任意
の好適な技術を使用して培養されてよい。発現されると、全抗体、それらの二量体、個々
の軽鎖および重鎖、他の免疫グロブリン形態または抗原結合性断片は、硫酸アンモニウム
沈殿法、親和性カラム、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当技術分野
の標準的手順により精製されてよい；Ｓｃｏｐｅｓ、「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．（１９８２年）を参照された
い。次いで抗体または抗原結合性断片は、増殖培地、細胞溶解物または細胞膜画分から単
離されてよい。例えば微生物で発現された抗体または抗原結合性断片の単離および精製は
、例えば調製用クロマトグラフィー分離および、例えば抗体の定常領域に対して指向され
たモノクローナルまたはポリクローナル抗体の使用を含むものなどの免疫学的分離などの
任意の従来の手段によってであってよい。
本開示の態様は、モノクローナル抗体の無期限に延長される供給源を提供するハイブリ
ドーマに関する。ハイブリドーマの培養物から直接免疫グロブリンを得るための代替法と
して、不死化ハイブリドーマ細胞は、続く発現および／または遺伝子操作のための再編成
重鎖および軽鎖遺伝子座の供給源として使用されてよい。再編成抗体遺伝子は、ｃＤＮＡ
を産生するために適切なｍＲＮＡから逆転写されてよい。いくつかの実施形態では重鎖定
常領域は、異なるアイソタイプのものと交換されるかまたは全体が除去されてよい。可変
領域は、一本鎖Ｆｖ領域をコードするように連結されてよい。複数のＦｖ領域は、１つよ
り多い標的への結合能力を付与するために連結されてよく、またはキメラ重鎖および軽鎖
組合せが用いられてよい。任意の適切な方法は、抗体可変領域のクローニングおよび組換
え抗体の生成のために使用されてよい。
いくつかの実施形態では、重鎖および／または軽鎖の可変領域をコードする適切な核酸
が得られ、標準的組換え宿主細胞にトランスフェクトされ得る発現ベクターに挿入される
。種々のそのような宿主細胞が使用されてよい。いくつかの実施形態では哺乳動物宿主細
胞は、効率的なプロセシングおよび産生のために有利である場合がある。この目的のため
に有用な典型的な哺乳動物細胞株は、ＣＨＯ細胞、２９３細胞またはＮＳＯ細胞を含む。
抗体または抗原結合性断片の産生は、改変組換え宿主を宿主細胞の増殖およびコード配列
の発現に適切な培養条件下で培養することによって実行されてよい。抗体または抗原結合
性断片は、培養物からそれらを単離することによって回収され得る。発現系は、生じた抗
体が培地に分泌されるように、シグナルペプチドを含める形で設計されてよいが；細胞内
産生物も可能である。
本開示は、本明細書に記載の抗体の免疫グロブリン鎖の少なくとも可変領域をコードす
るポリヌクレオチドも含む。いくつかの実施形態ではポリヌクレオチドによってコードさ
れる可変領域は、上に記載のハイブリドーマのいずれか１つによって産生された抗体の可
変領域のＶＨおよび／またはＶＬの少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドは、例えばＤＮＡ、ｃＤＮＡ
、ＲＮＡまたは合成的に産生されたＤＮＡもしくはＲＮＡまたはこれらのポリヌクレオチ
ドのいずれかを単独もしくは組合せで含む組換え的に産生されたキメラ核酸分子であって
よい。いくつかの実施形態ではポリヌクレオチドは、ベクターの一部である。そのような
ベクターは、好適な宿主細胞においておよび好適な条件下でベクターの選択を可能にする
マーカー遺伝子などのさらなる遺伝子を含んでよい。
いくつかの実施形態ではポリヌクレオチドは、原核または真核細胞での発現を可能にす
る発現調節配列に作動可能に連結される。ポリヌクレオチドの発現は、ポリヌクレオチド
の翻訳可能なｍＲＮＡへの転写を含む。真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞での発現を確
実にする制御エレメントは、当業者に周知である。それらは、転写の開始を促進する制御
配列ならびに任意選択で転写の終了および転写物の安定化を促進するポリＡシグナルを含
んでよい。追加的制御エレメントは、転写および翻訳エンハンサー、ならびに／または天
然で関連するもしくは異種性のプロモーター領域を含んでよい。原核生物の宿主細胞での
発現を可能にする可能性のある制御エレメントは例えばＥ．ｃｏｌｉにおけるＰＬ、Ｌａ
ｃ、ＴｒｐまたはＴａｃプロモーターを含み、真核宿主細胞での発現を可能にする制御エ
レメントの例は、酵母におけるＡＯＸ１もしくはＧＡＬ１プロモーターまたは哺乳動物お
よび他の動物細胞におけるＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモー
ター（ラウス肉腫ウイルス）、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサーもしくはグロ
ビンイントロンである。
転写の開始に関与するエレメント以外のそのような制御エレメントはＳＶ４０ポリＡ部
位またはｔｋポリＡ部位などのポリヌクレオチドの下流の転写終結シグナルも含み得る。
さらに、用いられる発現系に応じて、ポリペプチドを細胞コンパートメントに向かわせる
またはそれを培地に分泌することができるリーダー配列を、ポリヌクレオチドのコード配
列に加えてよく、以前に記載されている。リーダー配列（複数可）は、翻訳、開始および
終止配列と適切なフェーズ（ｐｈａｓｅ）でアセンブルされ、好ましくは、リーダー配列
は翻訳されたタンパク質またはその部分の例えば細胞外培地への分泌を導くことができる
。望ましい特徴、例えば発現される組換え産物の安定化または精製の簡略化を与えるＣま
たはＮ末端識別ペプチドを含む融合タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチド配列
を、任意選択で使用してもよい。
いくつかの実施形態では軽鎖および／または重鎖の少なくとも可変ドメインをコードす
るポリヌクレオチドは、両方の免疫グロブリン鎖または１つだけの可変ドメインをコード
してよい。同様にポリヌクレオチドは、同じプロモーターの調節下にあってよく、または
発現のために別々に調節されてよい。さらにいくつかの態様は、抗体または抗原結合性断
片の免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドを、任意選択で抗体
の他の免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドとの組合せで含む
、遺伝子工学において従来使用されるベクター、特にプラスミド、コスミド、ウイルスお
よびバクテリオファージに関する。
いくつかの実施形態では発現調節配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェ
クトできるベクター中の真核プロモーター系として提供されるが、原核生物の宿主のため
の調節配列も使用されてよい。レトロウイルス、ワクチニアウイルス、アデノ随伴ウイル
ス、ヘルペスウイルスまたはウシパピローマウイルスなどのウイルス由来の発現ベクター
は、ポリヌクレオチドまたはベクターを標的化された細胞集団（例えば抗体または抗原結
合性断片を発現するように細胞を操作するため）に送達するために使用されてよい。種々
の適切な方法は、組換えウイルス性ベクターを構築するために使用されてよい。いくつか
の実施形態ではポリヌクレオチドおよびベクターは、標的細胞への送達のためにリポソー
ムに再構成されてよい。ポリヌクレオチド（例えば配列および発現調節配列をコードする
免疫グロブリン鎖の重鎖および／または軽鎖可変ドメイン（複数可））を含有するベクタ
ーは、細胞宿主の種類に応じて変化する好適な方法によって宿主細胞に移行されてよい。
修飾
本開示の抗体または抗原結合性断片は、プロ／潜在型ミオスタチンの検出および単離の
ために、これらに限定されないが、酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材
料、放射性材料、ポジトロン放出金属、非放射性常磁性金属イオン、および親和性標識を
含む検出可能な標識で修飾されてよい。検出可能な物質は、本開示のポリペプチドに直接
または、好適な技術を使用して中間体（例えばリンカーなど）を通じて間接のいずれかで
カップリングまたはコンジュゲートされてよい。好適な酵素の非限定的例は、西洋ワサビ
ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシ
ダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼを含み；好適な補欠分子族複合体の非限定的例
はストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンを含み；好適な蛍光材料の非
限定的例はビオチン、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシア
ネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたは
フィコエリトリンを含み；発光材料の例はルミノールを含み；生物発光材料の非限定的例
はルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンを含み；好適な放射性材料の例は、例
えばヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、イオウ（３
５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、
１１１Ｉｎ）およびテクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、
ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）
、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９
Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、８６Ｒ、１８８Ｒｅ、
１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ
、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅおよびスズ（１１３Ｓｎ、１
１７Ｓｎ）などの放射性金属イオン、例えばアルファ放射体または他の放射性同位元素を
含む。検出可能な物質は、本開示の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体に直接または、好適
な技術を使用して中間体（例えばリンカーなど）を通じて間接のいずれかでカップリング
またはコンジュゲートされてよい。検出可能な物質にコンジュゲートされた抗プロ／潜在
型ミオスタチン抗体は、本明細書に記載の診断アッセイのために使用され得る。
医薬組成物
抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の１つまたは複数は、ミオパチーに関連する疾患また
は障害の緩和に使用するための医薬組成物を形成するために緩衝剤を含む薬学的に許容さ
れる担体（賦形剤）と混合されてよい。「許容される」は、担体が組成物の活性成分と適
合性でなければならず（好ましくは活性成分を安定化できる）、処置される被験体に有害
であってはならないことを意味する。緩衝剤を含む薬学的に許容される賦形剤（担体）の
例は、当業者に明らかであり、以前に記載されている。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔ
ｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ
Ｅｄ．（２０００年）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉ
ｎｓ編、Ｋ． Ｅ． Ｈｏｏｖｅｒを参照されたい。一例では本明細書に記載の医薬組成
物は、標的抗原の異なるエピトープ／残基を認識する１個より多い抗プロ／潜在型ミオス
タチン抗体を含有する。
本方法において使用される医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定
化剤を凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で含んでよい。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈ
ｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ
Ｅｄ．（２０００年）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎ
ｓ編、Ｋ． Ｅ． Ｈｏｏｖｅｒ）。許容される担体、賦形剤または安定化剤は、使用さ
れる投薬量および濃度でレシピエントに無毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、または他
の有機酸などの緩衝剤；アルコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質；保存剤（オ
クタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリドなど；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベ
ンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール
；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノー
ル；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１
０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリンなどのタ
ンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパ
ラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類および
グルコース、マンノースもしくはデキストランを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレ
ート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナト
リウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎタンパク質錯体）；ならびに／また
はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（
ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含んでよい。薬学的に許容される賦形剤はさらに
本明細書に記載される。
いくつかの例では本明細書に記載の医薬組成物は、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎ
ａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２巻：３６８８頁（１９８５年）、Ｈｗａ
ｎｇら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７巻：４０３０頁
（１９８０年）ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号
に記載のものなどの任意の好適な方法によって調製され得る抗プロ／潜在型ミオスタチン
抗体を含有するリポソームを含む。循環時間が増強されたリポソームは米国特許第５，０
１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コ
レステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を
含む脂質組成物での逆相蒸発法によって生成され得る。リポソームは、望ましい直径を有
するリポソームを得るために規定のポアサイズのフィルターを通して押し出される。
抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、コロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブ
ミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマク
ロエマルジョン中の、例えばコアセルベーション技術によってまたは界面重合によって調
製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセロースもしくはゼラチン
マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マ
イクロカプセルにも捕捉され得る。例示的技術は、以前に記載されており、例えばＲｅｍ
ｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍ
ａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ． Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００年）を参照され
たい。
他の例では本明細書に記載の医薬組成物は、徐放性形式で製剤化されてよい。徐放性調
製物の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、マト
リクスは成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリク
スの例は、ポリエステル、ハイドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリ
レート）または、ポリ（ビニルアルコール（ｖ ｎｙｌａｌｃｏｈｏｌ））、ポリラクチ
ド乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸と７エチル−Ｌ−グルタ
メートとの共重合体、非分解性エチレン酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）
（乳酸グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なミクロス
フェア）などの分解性乳酸グリコール酸共重合体、スクロースアセテートイソブチレート
およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために使用される医薬組成物は、無菌でなければならない。これ
は、例えば無菌濾過膜を通じた濾過によって容易に達成される。治療用抗体組成物は、一
般に無菌アクセスポートを有する容器、例えば皮下注射針によって貫通できるストッパー
を有する静脈内用溶液バッグまたはバイアルに入れられる。
本明細書に記載の医薬組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与または吸入もしくは吹
送法による投与のための錠剤、丸剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液もしくは懸濁物または
座薬などの単位投与形態であってよい。
錠剤などの固体組成物を調製するために主要活性成分は、医薬用担体、例えばコーンデ
ンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸
マグネシウム、リン酸二カルシウムもしくはガムなどの従来の錠剤化成分、および本開示
の化合物の均一な混合物を含有する固体予備製剤組成物を形成するための他の医薬用希釈
剤、例えば水、または無毒性の薬学的に許容されるそれらの塩と混合されてよい。これら
の予備製剤組成物を均一と称する場合、活性成分が組成物全体に均質に分散されており、
それにより組成物が錠剤、丸剤およびカプセルなどの同等に有効な単位投与形態に容易に
分割され得ることを意味する。この固体予備製剤組成物は、次いで本開示の活性成分０．
１ｍｇから約５００ｍｇを含有する上に記載の種類の単位投与形態に分割される。新規組
成物の錠剤または丸剤は、長期作用の利点をもたらす投与形態を提供するためにコーティ
ングまたは他の方法で配合されてよい。例えば錠剤または丸剤は、内剤（ｉｎｎｅｒ ｄ
ｏｓａｇｅ）および外剤（ｏｕｔｅｒ ｄｏｓａｇｅ）構成成分を含んでよく、後者は前
者を覆うエンベロープの形態にある。２個の構成成分は、胃での崩壊に抵抗するために役
立ち、内部の構成成分が十二指腸へインタクトなまま通過することまたは放出を遅らせる
ことを可能にする腸溶性層（ｅｎｔｅｒｉｃ ｌａｙｅｒ）によって分離されてよい。種
々の材料がそのような腸溶性層またはコーティングのために使用されてよく、そのような
材料はいくつかのポリマー酸ならびにポリマー酸とセラック、セチルアルコールおよび酢
酸セルロースなどの材料との混合物を含む。好適な表面活性剤は、具体的にはポリオキシ
エチレンソルビタン（例えばＴｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）お
よび他のソルビタン（例えばＳｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）など
の非イオン性剤を含む。表面活性剤を含む組成物は、好都合には０．０５から５％の表面
活性剤を含み、０．１から２．５％であってよい。必要に応じて他の成分、例えばマンニ
トールまたは他の薬学的に許容されるビヒクルが添加されてよいことは理解される。
好適なエマルジョンは、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉ
ｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）およびＬｉｐｉｐｈｙｓａ
ｎ（商標）などの商業的に入手できる脂肪エマルジョンを使用して調製されてよい。活性
成分は、予め混合されたエマルジョン組成物に溶解されてよく、または代替的に油（例え
ばダイズ油、ベニバナ油、綿実油、ゴマ油、コーン油もしくはアーモンド油）およびリン
脂質（例えば卵リン脂質、ダイズリン脂質もしくはダイズレシチン）と水とを混合して形
成されたエマルジョンに溶解されてもよい。他の成分、例えばグリセロールまたはグルコ
ースが、エマルジョンの張度を調整するために加えられてよいことは理解される。好適な
エマルジョンは、典型的には２０％まで、例えば５から２０％の油を含有する。
エマルジョン組成物は、抗プロミオスタチン抗体をＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）とま
たはその構成成分（ダイズ油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することによ
って調製されるものであってよい。
吸入または吹送法のための医薬組成物は、薬学的に許容される水性もしくは有機溶媒ま
たはそれらの混合物中の溶液および懸濁物ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は
、上に記載の好適な薬学的に許容される賦形剤を含有してよい。いくつかの実施形態では
組成物は、局所または全身性効果のために経口または経鼻呼吸経路によって投与される。
好ましくは無菌の薬学的に許容される溶媒中の組成物は、ガスの使用によって噴霧されて
よい。噴霧される溶液は、噴霧デバイスから直接吸われてよい、または噴霧デバイスはフ
ェイスマスク、テントもしくは間欠的陽圧呼吸器に取り付けられてよい。溶液、懸濁物ま
たは粉末組成物は、好ましくは経口または経鼻で適切な様式で製剤を送達するデバイスか
ら投与されてよい。
疾患／障害を処置するための抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の使用
本明細書に記載の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、ミオパチーを伴う疾患または障
害を処置するのに有効である。本明細書において使用される場合、用語「ミオパチー」は
、筋肉線維が正しく機能せず、典型的には筋脱力を生じる筋肉疾患を指す。ミオパチーは
、実際は神経筋性または筋骨格性である筋肉疾患を含む。いくつかの実施形態ではミオパ
チーは遺伝性ミオパチー（ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｍｙｏｐａｔｈｙ）である。遺伝性ミオ
パチーは、非限定的に、ジストロフィー、筋緊張症、先天性ミオパチー（例えばネマリン
ミオパチー、マルチ／ミニコアミオパチーおよび中心核ミオパチー）、ミトコンドリアミ
オパチー、家族性周期性ミオパチー、炎症性ミオパチーならびに代謝性ミオパチー（例え
ばグリコーゲン貯蔵疾患および脂質貯蔵障害）を含む。いくつかの実施形態ではミオパチ
ーは後天性ミオパチーである。後天性ミオパチーは、非限定的に、外来物質誘導性ミオパ
チー（例えば薬物誘導性ミオパチーおよびグルココルチコイドミオパチー、アルコール性
ミオパチーおよび他の毒性作用物質によるミオパチー）、筋炎（例えば皮膚筋炎、多発性
筋炎（ｐｏｌｙｍｏｓｉｔｉｓ）および封入体筋炎）、骨化性筋炎、横紋筋融解症ならび
にミオグロビン尿症ならびに非活動性萎縮症を含む。いくつかの実施形態ではミオパチー
は非活動性萎縮症であり、骨折（例えば股関節骨折）によってまたは神経損傷（例えば脊
髄損傷（ＳＣＩ））によって生じる場合がある。いくつかの実施形態ではミオパチーは、
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、腎不全による悪液質症候群
、ＡＩＤＳ、心臓の状態および／またはがんなどの疾患または障害に関連する。いくつか
の実施形態ではミオパチーは加齢に関連する。
本開示の態様は、ミオパチーを有する被験体を処置する方法であって、上に記載の抗体
の有効量を被験体に投与することを含む方法を含む。いくつかの実施形態ではミオパチー
は原発性ミオパチーである。別の実施形態では原発性ミオパチーは非活動性萎縮症を含む
。他の実施形態では非活動性萎縮症は、股関節骨折、待機的人工関節置換術、救命医療ミ
オパチー、脊髄損傷または発作に関連する。いくつかの実施形態ではミオパチーは、筋肉
喪失が疾患病態に続発する二次性ミオパチーである。他の実施形態では二次性ミオパチー
は、脱神経、遺伝性筋脱力または悪液質を含む。別の実施形態では二次性ミオパチーは、
筋萎縮性側索硬化症または脊髄性筋萎縮症に関連する脱神経である。いくつかの実施形態
では二次性ミオパチーは、筋ジストロフィーに関連する遺伝性筋脱力である。他の実施形
態では二次性ミオパチーは、腎不全、ＡＩＤＳ、心臓の状態、がんまたは加齢に関連する
悪液質である。
本開示の別の態様は、加齢に関連する疾患または状態を有する被験体を処置する方法を
含む。加齢に関連する例示的疾患および状態は、非限定的に筋肉減少症（加齢性筋肉喪失
）、虚弱およびアンドロゲン欠乏症を含む。
本開示の別の態様は、非活動性萎縮症／外傷に関連する疾患または状態を有する被験体
を処置する方法を含む。非活動性萎縮症／外傷に関連する例示的疾患および状態は、非限
定的に、集中治療室（ＩＣＵ）で過ごした時間に関連する筋脱力、股関節置換術、股関節
骨折、発作、床上安静、ＳＣＩ、回旋筋腱板損傷、膝置換術、骨折および熱傷を含む。
本開示の別の態様は、神経変性疾患または状態を有する被験体を処置する方法を含む。
例示的神経変性疾患または状態は、非限定的に脊髄性筋萎縮症および筋萎縮性側索硬化症
（ＡＬＳ）を含む。
本開示の別の態様は、悪液質に関連する疾患または状態を有する被験体を処置する方法
を含む。悪液質に関連する例示的疾患および状態は、非限定的にがん、慢性心不全、後天
性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および慢性腎臓疾患（Ｃ
ＫＤ）を含む。
本開示の別の態様は、まれな疾患に関連する疾患または状態を有する被験体を処置する
方法を含む。例示的なまれな疾患および状態は、非限定的に骨形成不全症、孤発性封入体
筋炎および急性リンパ芽球性白血病を含む。
本開示の別の態様は、代謝障害および／または身体組成に関連する疾患または状態を有
する被験体を処置する方法を含む。いくつかの実施形態では疾患または状態は肥満（例え
ば重度の肥満）、プラダー・ウィリー症候群、ＩＩ型糖尿病または食欲不振である。しか
し代謝障害および／または身体組成に関連する追加的疾患または状態は、当業者に明らか
であり、本開示の範囲内である。
本開示の別の態様は、先天性ミオパチーに関連する疾患または状態を有する被験体を処
置する方法を含む。例示的先天性ミオパチーは、非限定的にＸ連鎖筋細管ミオパチー、常
染色体優性中心核ミオパチー、常染色体劣性中心核ミオパチー、ネマリンミオパチーおよ
び先天性筋線維型不均衡ミオパチーを含む。
本開示の別の態様は、筋ジストロフィーに関連する疾患または状態を有する被験体を処
置する方法を含む。例示的筋ジストロフィーは、非限定的にデュシェンヌ型、ベッカー型
、顔面肩甲上腕型（ＦＳＨ）および肢帯型筋ジストロフィーを含む。
本開示の別の態様は、泌尿婦人科関連疾患または状態、声門障害（狭窄）、外眼性ミオ
パチー、手根管、ギランバレーまたは骨肉腫を有する被験体を処置する方法を含む。
本明細書に記載の方法を実施するために、上に記載の医薬組成物の有効量は、処置を必
要とする被験体（例えばヒト）に静脈内投与、例えばボーラスとしてまたは一定期間にわ
たる持続注入によって、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、髄腔内、
経口、吸入または局所経路によって、などの好適な経路を介して投与され得る。ジェット
噴霧器および超音波噴霧器を含む液体製剤のための商業的に入手できる噴霧器は、投与に
有用である。液体製剤は、直接噴霧されてよく、凍結乾燥粉末は復元後に噴霧され得る。
代替的に抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、フルオロカーボン製剤および定量吸入器を
使用してエアロゾル化されてよく、または凍結乾燥され粉砕された粉末として吸入されて
よい。
本明細書に記載の方法によって処置される被験体は、哺乳動物、より好ましくはヒトで
あってよい。哺乳動物は、これらに限定されないが家畜、スポーツ動物、愛玩動物、霊長
類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットを含む。処置を必要とするヒト被験体は、上
に記すものなどのミオパチーを伴う疾患／障害を有する、そのリスクがあるまたはそれを
有すると疑われるヒト患者であってよい。プロ／潜在型ミオスタチン関連疾患または障害
を有する被験体は、日常的医学的検査、例えば臨床検査、臓器機能検査、ＣＴスキャンま
たは超音波によって同定され得る。そのような疾患／障害のいずれかを有すると疑われる
被験体は、疾患／障害の１つまたは複数の症状を示す場合がある。疾患／障害のリスクが
ある被験体は、その疾患／障害についてのリスク因子の１つまたは複数を有する被験体で
あってよい。
本明細書において使用される「有効量」は、単独または１つもしくは複数の他の活性剤
との組合せのいずれかで、被験体に治療効果を付与するために必要な各活性剤の量を指す
。当業者によって認識されるとおり、有効量は、処置される特定の状態、状態の重症度、
年齢、身体状態、サイズ、性別および体重を含む個々の患者パラメータ、処置の期間、同
時に行われている治療（ある場合）の性質、投与の特定の経路ならびに医療関係者の知識
および専門的意見内の同様の要因などに応じて変化する。これらの要因は当業者に周知で
あり、日常的な実験程度で対処され得る。個々の構成成分またはその組合せの最大用量、
すなわち正当な医学的判断による最高安全用量が使用されることは一般に好ましい。しか
し患者が医学的根拠、心理的理由のためにまたは事実上任意の他の理由のためにより低い
用量または許容できる用量を主張できることは、当業者によって理解される。
半減期などの経験的検討事項は、一般に投薬量の決定に寄与する。例えばヒト化抗体ま
たは完全ヒト抗体などのヒト免疫系に適合性である抗体は、抗体の半減期を延長し、かつ
宿主の免疫系によって抗体が攻撃されることを防ぐために使用されてよい。投与の頻度は
、治療の経過にわたって決定および調整されてよく、一般に、必ずではないが、ミオパチ
ーを伴う疾患／障害の処置および／または抑制および／または回復および／または遅延に
基づく。代替的に抗プロ／潜在型ミオスタチンの徐放性持続的放出（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ
ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｒｅｌｅａｓｅ）製剤も適切である場合がある。徐放を達成す
るための種々の製剤およびデバイスは、当業者に明らかであり、本開示の範囲内である。
一例では本明細書に記載の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体についての投薬量は、抗体
の１回または複数回の投与を与えられた個体において経験的に決定され得る。個体は、漸
増する投薬量のアンタゴニストを与えられる。アンタゴニストの効能を評価するために、
疾患／障害の指標が追跡されてよい。
一般に本明細書に記載の抗体のいずれかの投与について、初期候補投薬量は約２ｍｇ／
ｋｇであってよい。本開示の目的のために典型的な一日投薬量は、上に述べる要因に応じ
て約０．１μｇ／ｋｇから、３μｇ／ｋｇまで、３０μｇ／ｋｇまで、３００μｇ／ｋｇ
まで、３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ超のいずれ
かの範囲であってよい。数日間またはそれより長くにわたる反復投与では、状態に応じて
処置は症状の望ましい抑制が生じるまでまたは、プロ／潜在型ミオスタチンに関連する疾
患もしくは障害またはその症状を緩和する十分な治療レベルが達成されるまで持続される
。例示的投与レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの初期用量に続く、抗体の約１ｍｇ／ｋｇの毎
週の維持用量または続く隔週の約１ｍｇ／ｋｇの維持用量を投与することを含む。しかし
他の投与レジメンが、医師が達成を望む薬物動態学的減衰のパターンに応じて有用である
場合がある。例えば１週間に１回から４回の投与が企図される。いくつかの実施形態では
約３μｇ／ｍｇから約２ｍｇ／ｋｇ（約３μｇ／ｍｇ、約１０μｇ／ｍｇ、約３０μｇ／
ｍｇ、約１００μｇ／ｍｇ、約３００μｇ／ｍｇ、約１ｍｇ／ｋｇおよび約２ｍｇ／ｋｇ
など）の範囲の投与は使用されてよい。いくつかの実施形態では投与頻度は、１週間ごと
、２週間ごと、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間
ごともしくは１０週間ごとに１回；または１ヵ月ごと、２ヵ月ごともしくは３ヵ月ごとも
しくはそれ超に１回である。この治療の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易
にモニタリングされる。投与レジメン（使用される抗体を含む）は、時間をわたって変化
する場合がある。
いくつかの実施形態では正常体重の成人患者について、約０．３から５．００ｍｇ／ｋ
ｇの範囲の用量が投与され得る。特定の投与レジメン、例えば用量、タイミングおよび反
復は、特定の個体およびその個体の医療歴および個々の薬剤の特性（薬剤の半減期および
他の関連する検討事項など）に依存する。
本開示の目的のために抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の適切な投薬量は、用いられる
特異的抗体（またはその組成物）、疾患／障害の種類および重症度、抗体が予防または治
療目的で投与されるか、以前の治療、患者の病歴およびアンタゴニストへの応答ならびに
主治医の判断に依存する。いくつかの実施形態では、望ましい結果を達成する投薬量に到
達するまで、臨床医は、抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体を投与する。抗プロ／潜在型ミ
オスタチン抗体の投与は、投与の目的が治療的または予防的であるかに関わらず、例えば
レシピエントの生理学的状態、および熟練した医師に公知である他の要因に応じて連続的
または間欠的であってよい。抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の投与は、予め選択した期
間にわたって本質的に連続的であっても、または間隔をあけた一連の用量、例えばプロ／
潜在型ミオスタチンに関連する疾患または障害が発症する前、その間またはその後のいず
れかであってもよい。
本明細書において使用される場合、用語「処置する」は、ミオパチーを伴う疾患／障害
、疾患／障害の症状または疾患／障害に対する素因を有する被験体への、障害、疾患の症
状または疾患／障害に対する素因を治癒する（ｃｕｒｅ）、治す（ｈｅａｌ）、緩和する
、軽減する、変える、改善する（ｒｅｍｅｄｙ）、回復させる、改善するまたは影響を与
えるための１つまたは複数の活性剤を含む組成物の適用または投与を指す。
プロ／潜在型ミオスタチンに関連する疾患／障害を緩和することは、疾患の発症（ｄｅ
ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）もしくは進行を遅らせること、または疾患の重症度を低減すること
を含む。疾患を緩和することは、必ずしも治癒的結果を要求しない。本明細書で使用する
場合、プロ／潜在型ミオスタチンに関連する疾患／障害の発症を「遅らせること」は、疾
患の進行を遅らせる（ｄｅｆｅｒ）、妨げる（ｈｉｎｄｅｒ）、遅くする（ｓｌｏｗ）、
遅らせる（ｒｅｔａｒｄ）、安定化するおよび／または先に延ばす（ｐｏｓｔｐｏｎｅ）
ことを意味する。この遅らせることは、病歴および／または処置される個体に応じて様々
な時間の長さであってよい。疾患の発症を「遅らせる」もしくは緩和する、または疾患の
発病（ｏｎｓｅｔ）を遅らせる方法は、方法を使用しない場合と比較して所与の時間枠に
おいて疾患の１つもしくは複数の症状の発症の可能性を低減するおよび／または所与の時
間枠において症状の程度を低減する方法である。そのような比較は、統計的に有意な結果
をもたらすのに十分な数人の被験体を使用する臨床研究に典型的には基づく。
疾患の「発症」または「進行」は、疾患の初期症状発現および／または後に続く疾患の
進行を意味する。疾患の発症は、検出可能であり得、標準的臨床技術を使用して評価され
得る。しかし発症は、検出不能である場合がある進行も指す。本開示の目的に関して発症
または進行は、症状の生物学的経過を指す。「発症」は出現（ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ）、
再発および発病を含む。本明細書において使用される場合、ミオパチーを伴う疾患／障害
の「発病」または「出現」は、初回発病および／または再発を含む。
いくつかの実施形態では本明細書に記載の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、処置を
必要とする被験体にタンパク質分解を介したプロ／潜在型ミオスタチンの活性ミオスタチ
ンへの活性化をｉｎ ｖｉｖｏで少なくとも２０％（例えば３０％、４０％、５０％、６
０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えて）阻害するのに十分な量で投与される
。他の実施形態では抗体は、プロ／潜在型ミオスタチンまたは潜在型ミオスタチンレベル
を少なくとも２０％（例えば３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％
またはそれを超えて）低減するのに有効な量で投与される。
医学の当業者に公知である従来の方法は、処置される疾患の種類または疾患の部位に応
じて被験体に医薬組成物を投与するために使用されてよい。本組成物は、他の従来の経路
を介して投与されてもよく、例えば経口、非経口、吸入スプレーによって、局所的、直腸
、鼻、頬側、膣または埋め込みリザーバーを介して投与され得る。本明細書において使用
される用語「非経口」は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液包内、胸
骨内、髄腔内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術を含む。さらに１、３または６ヵ
月デポー注射可能なまたは生分解性材料および方法を使用するなどの投与の注射可能なデ
ポー経路を介して被験体に投与されてもよい。
注射可能な組成物は、植物油、ジメチルアセトアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｔａｍｉ
ｄｅ）、ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、乳酸エチル、炭
酸エチル、イソプロピルミリステート、エタノールおよびポリオール（グリセロール、プ
ロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）などの種々の担体を含有してよ
い。静脈内注射用に水溶性抗体は、抗体および生理学的に許容される賦形剤を含有する医
薬用製剤が注入される点滴方法によって投与されてよい。生理学的に許容される賦形剤は
、例えば５％デキストロース、０．９％生理食塩水、リンゲル液または他の好適な賦形剤
を含んでよい。筋肉内調製物、例えば抗体の好適な可溶性塩形態の無菌製剤は、注射用水
、０．９％生理食塩水または５％グルコース溶液などの医薬用賦形剤に溶解され、投与さ
れてよい。
一実施形態では抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体は、部位特異的または標的化局所送達
技術を介して投与される。部位特異的または標的化局所送達技術の例は、抗プロ／潜在型
ミオスタチン抗体の種々の埋め込み可能なデポー供給源または、注入カテーテル、留置カ
テーテルもしくは針カテーテルなどの局所送達カテーテル、合成移植片、外膜ラップ、シ
ャントおよびステントまたは他の埋め込み可能なデバイス、部位特異的担体、直接注射ま
たは直接適用を含む。例えばＰＣＴ公開第ＷＯ００／５３２１１号および米国特許第５，
９８１，５６８号を参照されたい。
ポリヌクレオチドまたは発現ベクターを含有する治療用組成物の標的化送達も使用され
得る。受容体媒介ＤＮＡ送達技術は、例えばＦｉｎｄｅｉｓら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌ．（１９９３年） １１巻：２０２頁、Ｃｈｉｏｕら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ
ａｐｅｕｔｉｃｓ： Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｏｆ Ｄｉ
ｒｅｃｔ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ（Ｊ． Ａ． Ｗｏｌｆｆ編）（１９９４年）、
Ｗｕら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． （１９８８年）２６３巻：６２１頁、Ｗｕら、
Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．（１９９４年）２６９巻：５４２頁、Ｚｅｎｋｅら、Ｐｒ
ｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ（１９９０年）８７巻：３６５５頁
、Ｗｕら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．（１９９１年）２６６巻：３３８頁に記載され
ている。
ポリヌクレオチド（例えば本明細書に記載の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体をコード
するもの）を含有する治療用組成物は、遺伝子治療プロトコールでの局所投与のためにＤ
ＮＡ約１００ｎｇから約２００ｍｇの範囲で投与される。いくつかの実施形態では、ＤＮ
Ａの約５００ｎｇから約５０ｍｇ、約１μｇから約２ｍｇ、約５μｇから約５００μｇお
よび約２０μｇから約１００μｇまたはそれを超える濃度範囲も遺伝子治療プロトコール
中に使用されてよい。
本明細書に記載の治療用ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクル
を使用して送達され得る。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルスまたは非ウイルス起源のもの
であってよい（一般にＪｏｌｌｙ、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４
年）１巻：５１頁、Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４年
）５巻：８４５頁、Ｃｏｎｎｅｌｌｙ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９
５年）１巻：１８５頁およびＫａｐｌｉｔｔ、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９
４年）６巻：１４８頁を参照されたい）。そのようなコード配列の発現は、内在性哺乳動
物または異種性プロモーターおよび／またはエンハンサーを使用して誘導され得る。コー
ド配列の発現は、構成的または制御的のいずれであってもよい。
望ましい細胞における望ましいポリヌクレオチド（例えば本明細書に開示の抗体をコー
ドする）の送達および発現に好適なウイルスに基づくベクターは、本開示の範囲内である
。例示的なウイルスに基づくビヒクルは、これらに限定されないが、組換えレトロウイル
ス（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０７９３６号、第ＷＯ９４／０３６２２号、第ＷＯ９
３／２５６９８号、第ＷＯ９３／２５２３４号、第ＷＯ９３／１１２３０号、第ＷＯ９３
／１０２１８号、第ＷＯ９１／０２８０５号、米国特許５，２１９，７４０号、および第
４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号ならびに欧州特許第０３４５２
４２号を参照されたい）、アルファウイルスに基づくベクター（例えばシンドビスウイル
スベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−６７；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２４７
）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２４６）および
ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２５０；Ａ
ＴＣＣ ＶＲ １２４９；ＡＴＣＣ ＶＲ−５３２））およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡ
Ｖ）ベクター（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号、第ＷＯ９３／０３７６９号
、第ＷＯ９３／１９１９１号、第ＷＯ９４／２８９３８号、第ＷＯ９５／１１９８４号お
よび第ＷＯ９５／００６５５号を参照されたい）を含む。Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ． Ｇｅ
ｎｅ Ｔｈｅｒ．（１９９２年）３巻：１４７頁に記載の不活化アデノウイルスに連結さ
れたＤＮＡの投与も用いられ得る。
これらに限定されないが、不活化アデノウイルス単独に連結されたまたは連結されてい
ないポリカチオン縮合（ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｉｃ ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ）ＤＮＡ（例え
ばＣｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．（１９９２年）３巻：１４７頁を参照
されたい）；リガンド連結ＤＮＡ（例えばＷｕ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．（１９
８９年）２６４巻：１６９８５頁を参照されたい）；真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば
米国特許第５，８１４，４８２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／０７９９４号、第ＷＯ９６／
１７０７２号、第ＷＯ９５／３０７６３号および第ＷＯ９７／４２３３８号を参照された
い）ならびに核電荷中和または細胞膜との融合を含む非ウイルス性送達ビヒクルおよび方
法も用いられてよい。ネイキッドＤＮＡも用いられてよい。例示的ネイキッドＤＮＡ導入
方法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／１１０９２号および米国特許第５，５８０，８５９号に
記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用できるリポソームは、米国特許第５，４
２２，１２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１３７９６号、第ＷＯ９４／２３６９７号、第
ＷＯ９１／１４４４５号および欧州特許第０５２４９６８号に記載されている。追加的ア
プローチはＰｈｉｌｉｐ、Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．（１９９４年）１４巻：２
４１１頁、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．
（１９９４年）９１巻：１５８１頁に記載されている。
本明細書に記載の方法において使用される特定の投与レジメン、例えば用量、タイミン
グおよび反復は、特定の被験体およびその被験体の医療歴に依存する。
いくつかの実施形態では、１つより多い抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体または、抗プ
ロ／潜在型ミオスタチン抗体と別の好適な治療剤との組合せは、処置を必要とする被験体
に投与され得る。アンタゴニストは、同じ型または互いに異なっていてよい。抗プロ／潜
在型ミオスタチン抗体は、薬剤の有効性を増強するおよび／または補完するのに役立つ他
の薬剤と併せて使用されてもよい。
ミオパチーを伴う疾患／障害に対する処置の効能は、任意の好適な方法を使用して評価
され得る。例えばミオパチーを伴う疾患／障害に対する処置の効能は、筋脱力を評価する
こと（例えば脱力のパターンおよび重症度を評価すること）、筋電図検査、血液化学を評
価すること（例えば電解質を評価する、内分泌的原因を評価すること、クレアチニンキナ
ーゼレベルを測定すること、赤血球沈降速度を決定することおよび抗核抗体アッセイを実
施すること）、ならびに生検を評価すること（例えば組織学的、組織化学的、電子顕微鏡
、生化学および遺伝子解析によって）によって評価され得る。
ミオパチーを伴う疾患／障害を緩和することにおける使用のためのキット
本開示は、ミオパチーを伴う疾患／障害を緩和することにおける使用のためのキットも
提供する。そのようなキットは、抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体、例えば本明細書に記
載のもののいずれかを含む１つまたは複数の容器を含んでよい。
いくつかの実施形態ではキットは、本明細書に記載の方法のいずれかによる使用のため
の指示を含んでよい。含まれる指示は、本明細書に記載の標的疾患を処置する、発病を遅
らせるまたは緩和するための抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の投与の記載を含み得る。
キットは、個体が標的疾患を有するかどうかを同定することに基づいて処置に好適な個体
を選択する記載をさらに含み得る。さらに他の実施形態では、指示は、標的疾患のリスク
がある個体に抗体を投与する記載を含む。
抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の使用に関する指示は、一般に目的の処置のための投
薬量、投与スケジュールおよび投与の経路についての情報を含む。容器は、単位用量、バ
ルクパッケージ（例えば複数用量パッケージ）または部分単位用量であってよい。本開示
のキット中に供給される指示は、典型的にはラベルまたはパッケージ挿入物（例えばキッ
トに含まれる紙のシート）上の指示書であるが、機械で読み取り可能な指示（例えば磁気
または光学保存ディスク上に書き込まれた指示）も許容される。
ラベルまたはパッケージ挿入物は組成物がミオパチーを伴う疾患または障害を処置する
、発病を遅らせるおよび／または緩和するために使用されることを示す。指示は、本明細
書に記載の方法のいずれかを実施するために提供されてよい。
本開示のキットは、好適なパッケージ中にある。好適なパッケージは、これらに限定さ
れないが、バイアル、ビン、ジャー、可撓性パッケージ（例えばシールされたマイラーま
たはプラスチックバッグ）などを含む。吸入器、鼻投与デバイス（例えばアトマイザー）
またはミニポンプなどの注入デバイスなどの特定のデバイスとの組合せでの使用のための
パッケージも検討される。キットは、無菌アクセスポートを有してよい（例えば容器は皮
下注射針によって貫通できるストッパーを有する静脈内用溶液バッグまたはバイアルであ
ってよい）。容器も無菌アクセスポートを有してよい（例えば容器は皮下注射針によって
貫通できるストッパーを有する静脈内用溶液バッグまたはバイアルであってよい）。組成
物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載の抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体で
ある。
任意選択でキットは、緩衝剤および解釈の情報などの追加的構成成分を提供できる。通
常キットは、容器および、容器上にまたは容器に付随してラベルまたはパッケージ挿入物
（複数可）を含む。いくつかの実施形態では本開示は、上に記載のキットの内容物を含む
製造品を提供する。
プロ／潜在型ミオスタチンを検出するためのアッセイ
いくつかの実施形態では本明細書で提供される方法および組成物は、被験体から得られ
た試料中のプロ／潜在型ミオスタチンを検出するための方法に関する。本明細書において
使用される場合、「被験体」は、個々の生物、例えば個々の哺乳動物を指す。いくつかの
実施形態では被験体はヒトである。いくつかの実施形態では被験体は非ヒト哺乳動物であ
る。いくつかの実施形態では被験体は非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態では被験
体はげっ歯類である。いくつかの実施形態では被験体はヒツジ、ヤギ、ウシ、ネコまたは
イヌである。いくつかの実施形態では被験体は、脊椎動物、両生類、は虫類、魚類、昆虫
、ハエまたは線虫である。いくつかの実施形態では被験体は実験動物である。いくつかの
実施形態では被験体は、遺伝子操作されており、例えば遺伝子操作された非ヒト被験体で
ある。被験体は、いずれの性で任意の発達段階であってよい。いくつかの実施形態では被
験体は、患者または健常なボランティアである。
いくつかの実施形態では、被験体から得られた試料中のプロ／潜在型ミオスタチンを検
出するための方法は（ａ）抗原が試料中に存在する場合、抗体の抗原への結合に好適な条
件下で試料を抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体と接触させ、それにより結合複合体を形成
すること、および（ｂ）抗原に結合した抗体または抗原結合性断片のレベルを決定するこ
と（例えば結合複合体のレベルを決定すること）を含む。
本明細書において使用される場合、結合複合体は、抗原（例えばプロ／潜在型ミオスタ
チンタンパク質）に結合した抗体（抗原結合性断片を含む）の生体分子複合体を指す。結
合複合体は、単一の特異性を有する抗体または異なる特異性を有する２つもしくはそれ超
の抗体もしくは抗原結合性断片を含んでよい。一実施形態では結合複合体は、同じ抗原上
の異なる抗原性部位を認識する２つまたはそれ超の抗体を含む。いくつかの場合では抗体
は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、多糖またはタンパク質などの他の生体分子に結合している抗原に結
合できる。一実施形態では結合複合体は異なる抗原を認識する２つまたはそれ超の抗体を
含む。いくつかの実施形態では結合複合体中の抗体（例えば抗原に結合した固定化抗体）
は、それ自体が抗原として抗体（例えば検出可能に標識された抗体）に結合できる。した
がって、結合複合体は、いくつかの場合では、複数の抗原および複数の抗体または抗原結
合性断片を含む場合がある。
結合複合体中に存在する抗原は、ｉｎ ｓｉｔｕでのそれらの天然のコンフォメーショ
ンであってもなくてもよい。いくつかの実施形態では結合複合体は、抗体と精製されたタ
ンパク質抗原または抗原を含む単離されたタンパク質との間で形成され、その中で抗原は
ｉｎ ｓｉｔｕでのその天然のコンフォメーションではない。いくつかの実施形態では、
結合複合体は、抗体と精製されたタンパク質抗原との間で形成され、その中で抗原はｉｎ
ｓｉｔｕでのその天然のコンフォメーションではなく、固体支持体（例えばＰＶＤＦ膜
）に固定されている。いくつかの実施形態では結合複合体は、抗体と、例えばｉｎ ｓｉ
ｔｕに天然のコンフォメーション（例えば細胞表面上）に存在する細胞表面タンパク質と
で形成される。
結合複合体中の抗体は、検出可能に標識されてもされなくてもよい。いくつかの実施形
態では結合複合体は、検出可能に標識された抗体および標識されていない抗体を含む。い
くつかの実施形態では結合複合体は、検出可能に標識された抗原を含む。いくつかの実施
形態では結合複合体中の抗体は、１つまたは複数の固体支持体に固定されている。いくつ
かの実施形態では結合複合体中の抗原は、１つまたは複数の固体支持体に固定されている
。例示的な固体支持体は、本明細書に開示されており、当業者に明らかである。結合複合
体の前述の例は限定を意図しない。結合複合体の他の例は当業者に明らかである。
検出、診断およびモニタリング方法のいずれにおいても抗体（抗原結合性断片を含む）
または抗原は、固体支持体表面に直接または間接のいずれかでコンジュゲートされてよい
。固体支持体へのコンジュゲーションのための方法は、標準的であり、共有結合的および
非共有結合的相互作用を介して達成されてよい。コンジュゲーション方法の非限定的例は
、吸着、架橋結合、プロテインＡ／Ｇ抗体相互作用およびストレプトアビジン−ビオチン
相互作用を含む。コンジュゲーションの他の方法は、当業者に容易に明らかである。
いくつかの態様では、検出、診断およびモニタリング方法は、抗原（例えばプロ／潜在
型ミオスタチン）に結合した抗体（抗原結合性断片を含む）のレベルを１つまたは複数の
参照基準と比較することを含む。参照基準は、例えばプロ／潜在型ミオスタチンを有する
または有さない被験体における対応するプロ／潜在型ミオスタチンのレベルであってよい
。一実施形態では参照基準は、プロ／潜在型ミオスタチン（例えばバックグラウンドレベ
ル）を含有しない試料において検出されるプロ／潜在型ミオスタチンのレベルである。代
替的にバックグラウンドレベルは、特定のプロ／潜在型ミオスタチンを含有する試料から
試料を非特異的抗体（例えば非免疫血清から得られた抗体）と接触させることによって決
定され得る。再度参照基準は、プロ／潜在型ミオスタチンを含有する試料（例えば陽性対
照）において検出されたプロ／潜在型ミオスタチンのレベルであってよい。いくつかの場
合、参照基準は試料中のプロ／潜在型ミオスタチンの濃度の変動と関連する一連のレベル
であってよく、試験試料中のプロ／潜在型ミオスタチンの濃度を定量するのに有用であり
得る。参照基準の前述の例は、限定ではなく、他の好適な参照基準は、当業者に容易に明
らかである。いくつかの実施形態ではプロ／潜在型ミオスタチンに結合する抗体のレベル
は、成熟ミオスタチンのレベルと比較される。いくつかの場合ではプロ／潜在型ミオスタ
チンのレベルは、試料中の不活性ミオスタチン対活性ミオスタチンの比率を決定するため
に成熟ミオスタチンと比較される。
プロ／潜在型ミオスタチンのレベルは、生物学的試料から本明細書で提供されるとおり
測定され得る。生物学的試料は、被験体または細胞から得られてよい任意の生物学的材料
を指す。例えば生物学的試料は、全血、血漿、血清、唾液、脳脊髄液、尿、細胞（もしく
は細胞溶解物）または組織（例えば正常組織もしくは腫瘍組織）であってよい。いくつか
の実施形態では生物学的試料は、流体試料である。いくつかの実施形態では生物学的試料
は、固形組織試料である。例えば組織試料は、非限定的に骨格筋、心臓の筋肉、脂肪組織
および他の器官由来の組織を含んでよい。いくつかの実施形態では生物学的試料は、生検
試料である。いくつかの実施形態では固形組織試料は、当技術分野における日常的方法を
使用して流体試料にされてよい。
生物学的試料は、細胞株の１つまたは複数の細胞も含んでよい。いくつかの実施形態で
は細胞株は、ヒト細胞、霊長類細胞（例えばベロ細胞）、ラット細胞（例えばＧＨ３細胞
、ＯＣ２３細胞）またはマウス細胞（例えばＭＣ３Ｔ３細胞）を含む。非限定的にヒト胚
性腎臓（ＨＥＫ）細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔ
ｕｔｅの６０種のがん細胞株（ＮＣＩ６０）由来のがん細胞、ＤＵ１４５（前立腺がん）
細胞、Ｌｎｃａｐ（前立腺がん）細胞、ＭＣＦ−７（乳がん）細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−４３
８（乳がん）細胞、ＰＣ３（前立腺がん）細胞、Ｔ４７Ｄ（乳がん）細胞、ＴＨＰ−１（
急性骨髄性白血病）細胞、Ｕ８７（神経膠芽腫）細胞、ＳＨＳＹ５Ｙヒト神経芽細胞腫細
胞（骨髄腫からのクローニング）およびＳａｏｓ−２（骨がん）細胞を含む種々のヒト細
胞株がある。
さらなる実施形態は、疾患または状態を有するまたは有するリスクがある被験体におい
て疾患、状態または任意のその処置（例えばミオパチーまたはミオパチー処置）をモニタ
リングするための方法であって、（ａ）生物学的試料を被験体から得ること、（ｂ）プロ
／潜在型ミオスタチンを検出する抗体を使用して生物学的試料中のプロ／潜在型ミオスタ
チンのレベルを決定すること、ならびに（ｃ）１回または複数回の機会にステップ（ａ）
および（ｂ）を反復することを含む方法に関する。ミオスタチンは、筋萎縮症についての
バイオマーカーとして使用されているが、現在利用可能な商業的方法および試薬（例えば
ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロットにおいて使用される抗体）は、ミオスタチンに対し
て特異的ではないか、成熟ミオスタチンだけを検出するか、またはミオスタチンを全く検
出しないかのいずれかである。したがって、疾患および／または状態（例えば筋萎縮症）
の文脈において診断目的でプロ／潜在型ミオスタチンを検出するための方法および試薬（
例えば抗体）が本明細書で提供される。一例としてプロ／潜在型ミオスタチンのレベルは
、被験体またはそれ由来の生物学的試料において疾患または状態の進行を検出またはモニ
タリングするために測定されてよい。別の例としてプロ／潜在型ミオスタチンのレベルは
、被験体またはそれ由来の生物学的試料において疾患または状態に対する処置への応答を
モニタリングするために測定されてよい。プロ／潜在型ミオスタチンのレベルが、被験体
が有する疾患もしくは状態または被験体が供され得る任意の処置レジメンに応じて異なる
場合がある任意の好適な期間にわたってモニタリングされてよいことは理解されるべきで
ある。
別の実施形態は、上に記載の抗体、抗原結合性断片、ポリヌクレオチド、ベクターまた
は細胞のいずれか１つおよび任意選択で検出のための好適な手段を含む診断用組成物に関
する。抗体は、例えば、それらを液相でまたは固相担体に結合させて利用し得るイムノア
ッセイにおける使用に適する。抗体を利用する場合があるイムノアッセイの例は、直接ま
たは間接形式での競合的および非競合的イムノアッセイである。そのようなイムノアッセ
イの例は、酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射イムノアッセイ（ＲＩＡ）、サ
ンドイッチ（免疫アッセイ（ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ））、フローサイト
メトリー、ウエスタンブロットアッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫組織化学、免疫顕微鏡
検査（ｉｍｍｕｎｏ−ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）、側方流動免疫クロマトグラフィーアッセ
イ（ｌａｔｅｒａｌ ｆｌｏｗ ｉｍｍｕｎｏ−ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ａｓ
ｓａｙ）およびプロテオミクスアレイである。抗原および抗体は、多数の異なる固体支持
体（例えば担体、膜、カラム、プロテオミクスアレイなど）に結合させてよい。固体支持
体材料の例は、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、ポリプ
ロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、ナイロン、アミロース、ニ
トロセルロースなどの天然および修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロースおよ
びマグネタイトを含む。支持体の性質は、固定されているかまたは溶液中に懸濁されてい
るか（例えばビーズ）のいずれであってもよい。
さらなる実施形態によって、本明細書で提供される抗体（抗原結合性断片を含む）は、
組織試料、血液試料または任意の他の適切な体液試料であってよい被験体由来の生物学的
試料を得ることによって、被験体におけるプロ／潜在型ミオスタチン発現を評価するため
の方法においても使用され得る。手順は、血液試料（全血、血清、血漿）、組織試料また
はそれから単離されたタンパク質試料を、抗体と抗原との間の結合複合体の形成を可能に
する条件下で抗体と接触させることを含み得る。次いでそのような結合複合体のレベルは
、任意の好適な方法によって決定され得る。いくつかの実施形態では生物学的試料は、抗
原が試料中に存在する場合に抗体のプロ／潜在型ミオスタチンタンパク質への結合、およ
び抗原に結合した抗体からなる結合複合体の形成に好適な条件下で抗体と接触させる。こ
の接触させるステップは、チューブ、プレートウェル、メンブレンバス、細胞培養皿、顕
微鏡スライドなどの反応チャンバーにおいて典型的には実施される。いくつかの実施形態
では抗体は固体支持体に固定される。いくつかの実施形態では抗原は固体支持体に固定さ
れる。いくつかの実施形態では固体支持体は、反応チャンバーの表面である。いくつかの
実施形態では固体支持体は、ポリマー性膜（例えばニトロセルロースストリップ、ポリフ
ッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜など）である。他の適切な固体支持体は使用されてよい。
いくつかの実施形態では抗体は、抗原と接触させる前に固体支持体に固定される。他の
実施形態では抗体の固定は、結合複合体の形成後に実施される。さらに他の実施形態では
抗原は、結合複合体の形成の前に固体支持体に固定される。検出試薬は、固定化された結
合複合体を検出するために反応チャンバーに加えられる。いくつかの実施形態では検出試
薬は、抗原に対して指向される、検出可能に標識された二次抗体を含む。いくつかの実施
形態では一次抗体は、それ自体が検出可能に標識され、そのため検出試薬である。
一態様では検出方法は、固体支持体に抗体を固定するステップ；試料（例えば生物学的
試料または単離されたタンパク質試料）を、抗原が試料中に存在する場合に抗原の抗体へ
の結合を可能にする条件下で固体支持体に適用するステップ；固体支持体から過剰な試料
を除去するステップ；検出可能に標識された抗体を、検出可能に標識された抗体の抗原結
合固定化抗体への結合を可能にする条件下で適用するステップ；固体支持体を洗浄するス
テップおよび固体支持体上の標識の存在をアッセイするステップを含む。
いくつかの実施形態では抗原は、反応チャンバー（例えばメンブレンバス）中の抗体と
接触させる前に、ＰＶＤＦ膜などの固体支持体に固定される。検出試薬は、固定化された
結合複合体を検出するために反応チャンバーに加えられる。いくつかの実施形態では検出
試薬は、抗原に対して指向される、検出可能に標識された二次抗体を含む。いくつかの実
施形態では検出試薬は、一次抗体に対して指向される、検出可能に標識された二次抗体を
含む。本明細書で開示のとおり検出可能な標識は、例えば放射性同位元素、フルオロフォ
ア、発光分子、酵素、ビオチン成分、エピトープタグまたは色素分子であってよい。いく
つかの実施形態では一次抗体は、それ自体が検出可能に標識され、そのため検出試薬であ
る。好適な検出可能な標識は、本明細書に記載され、当業者に容易に明らかである。
したがって、（ａ）抗原結合試薬（例えばプロ／潜在型ミオスタチン結合試薬）として
、検出可能に標識された抗体および／または非標識抗体、（ｂ）検出試薬、ならびに任意
選択で（ｃ）試料中の抗原を検出するための試薬を使用するための完全な指示を含む家庭
内または臨床使用に好適な診断用キット（ポイントオブケアサービス）が提供される。い
くつかの実施形態では診断キットは、固体支持体に固定された抗体および／またはプロ／
潜在型ミオスタチンを含む。本明細書に記載の固体支持体のいずれかは、診断キットへの
組み込みに好適である。好ましい実施形態では固体支持体は、プレートウェルの反応チャ
ンバーの表面である。典型的にはプレートウェルは、６個、１２個、２４個、９６個、３
８４個および１５３６個から選択されるいくつかのウェルを有するマルチウェルプレート
中にあるが、そのように限定されない。他の実施形態では診断キットは、検出可能に標識
された抗体を提供する。診断キットは、これらの実施形態に限定されず、キット組成物に
おける他のバリエーションは当業者に容易に明らかである。
したがって、次の具体的な実施形態は、単なる例示として解釈され、決して本開示の残
部の限定ではないと解釈される。本明細書で引用する全ての刊行物は、本明細書で参照す
る目的または主題について参照により組み込まれる。
（実施例１：抗体の生成および選択）
抗体の概要
Ａｂ２は、ヒトのプロミオスタチンおよび潜在型ミオスタチンに高い親和性（Ｆｏｒｔ
ｅＢｉｏ ＢＬＩによりＫｄ＝３４２０ｐＭ）で結合するＩｇＧ４／ラムダアイソタイプ
の完全ヒト抗プロ／潜在型ミオスタチンモノクローナル抗体である。抗体は、０．５マイ
クロモル濃度の範囲のＩＣ５０値（アッセイの限界またはほぼ限界である）で、タンパク
質分解を介したプロ／潜在型ミオスタチンの活性化を阻害することができる。ポリペプチ
ドの理論的分子量は、１４４，７３６Ｄａであり、その理論的ｐＩは６．７である。抗体
ディスプレイを使用する親和性の最適化を行って、より高い親和性の改変体Ａｂ４および
Ａｂ６を同定した。親和性最適化改変体を、ヒトＩｇＧ４／ラムダアイソタイプフレーム
ワークにおいて同様に構築する。
親抗体のプラットフォームおよび同定
親Ａｂ１抗体は、選択のための一次抗原としてプロおよび潜在型ミオスタチンを使用し
たナイーブファージディスプレイライブラリーの選択を介して同定した。ファージ選択お
よび初回スクリーニングは、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９
０年）によって記載される形式と類似の形式で従来のｓｃＦｖをディスプレイするライブ
ラリーを使用して実施した。各選択ラウンドは、事前除去（ｐｒｅ−ｃｌｅａｒｉｎｇ）
（非特異的ファージ抗体を除去するため）、抗原とのインキュベーション、洗浄、溶出、
および増幅からなった。選択は、固相（イムノチューブにコーティングされたビオチン化
抗原）および溶液相（ストレプトアビジンコーティングビーズを使用して捕捉されたビオ
チン化抗原）パニング（ｐａｎｎｉｎｇ）戦略の両方を使用して複数ラウンドを介して行
われた。
全体で１０，０００個の個々のｓｃＦｖクローンを、２つの別個の作戦を通してプロま
たは潜在型ミオスタチンに対する結合に関してスクリーニングした。第１のプログラムは
、抗原としてプロ／潜在型ミオスタチンを利用したが、第２の作戦は、抗原として潜在型
ミオスタチンを使用した。目的のｓｃＦｖクローンのＤＮＡをシークエンシングして、独
自のクローン２１６個を同定した。結合陽性のｓｃＦｖクローンを、プロＧＤＦ１１なら
びに無関係なタンパク質のパネルに対する結合に関してカウンタースクリーニングして、
プロ／潜在型ミオスタチンに関する特異性を確認した。独自のｓｃＦｖクローンのパネル
から１０１個（ＧＤＦ８特異的クローン１３４個中）を、さらに特徴付けるために完全長
のＩｇＧ（ＩｇＧ１アイソタイプ）に変換した。
完全長のＩｇＧ抗体を、ヒトおよびネズミのプロおよび潜在型形態のミオスタチンなら
びにＧＤＦ１１に対する結合に関してＥＬＩＳＡによってさらに特徴付けた。ミオスタチ
ンプロドメイン、プロＴＧＦβ（ヒトおよびネズミ）、ミオスタチンの成熟増殖因子、Ｇ
ＤＦ１１成熟増殖因子、アクチビンＡ増殖因子、およびプロアクチビンＡに対する結合に
関しても、抗体をスクリーニングした。リード抗体を、ヒトおよびネズミのプロおよび潜
在型ミオスタチンと交差反応するが、ＧＤＦ１１ともアクチビンともＴＧＦβタンパク質
とも相互作用しないことに基づいて選択した。
２つの形態のエピトープビニング（ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ）を使用した。第
１に、ミオスタチンのプロドメインの一部とＧＤＦ１１の一部とを交換したキメラ構築物
を設計して生成した。これらのキメラタンパク質を、ＥＬＩＳＡによって、スクリーニン
グ抗体との相互作用に関してアッセイした。ビオチン化プロ／潜在型ミオスタチン抗体が
ストレプトアビジンコーティングバイオセンサーチップに固定されたＦｏｒｔｅＢｉｏ
ＢＬＩ機器を使用してエピトープビニングを行い、センサー応答によって抗体の交差遮断
を評価した。ＥＬＩＳＡ結合実験のデータと共に、これらのエピトープビニング実験によ
り、本発明者らの機能的に活性なリード抗体（以下を参照されたい）を、３つの異なるエ
ピトープ群（表３を参照されたい）に分離することができた。
抗体がプロ／潜在型ミオスタチンに結合してその活性化を阻害する能力を評価するため
に、いくつかの生化学および細胞アッセイが確立された。プロおよび潜在型ミオスタチン
に対する結合動態を、ビオチン化基質タンパク質がストレプトアビジンコーティングセン
サーチップに固定されたＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔによって測定した。スクリーニン
グからの候補の平衡解離定数を表３に示す。
ＩｇＧがミオスタチンのシグナル伝達を阻害する能力を測定するために、ミオスタチン
活性化アッセイを開発した。ｍＴｌｌ２（トロイドプロテアーゼはミオスタチンの活性化
を必要とする）またはフューリン（プロドメインから成熟増殖因子を切断するプロタンパ
ク質転換酵素）のいずれかを過剰発現する細胞から馴化培地を生成した。試験抗体とのプ
レインキュベーション後、プロ／潜在型ミオスタチンまたは潜在型ミオスタチンを、ｍＴ
ｌｌ２およびフューリン馴化培地（プロミオスタチン）の混合物またはｍＴｌｌ２馴化培
地（潜在型ミオスタチン）のいずれかと共にインキュベートした。一晩のタンパク質分解
反応の後、成熟増殖因子の放出を、２９３Ｔ細胞におけるＣＡＧＡベースのレポーターア
ッセイを使用して測定した。抗体を、同じアッセイにおいて用量反応によってさらに確認
し、その結果を表３に示す。
５つの親抗体（表３）は、上記のアッセイの全てにおいて一貫して強力な選択性および
活性を示し、これらをｉｎ ｖｉｖｏでさらに特徴付けるためにさらに選択した（実施例
２において考察される）。Ａｂ８は、潜在型ミオスタチンを認識しないが、一貫性のため
に、プロ／潜在型ミオスタチンに対するこれらの抗体の結合および活性を要約する。
抗体候補の作用機序を決定するために、図３に示すようにミオスタチンのプロドメイン
に対して惹起されたポリクローナル抗体を使用してウエスタンブロットによって試料を分
析した。これによって、ｍＴｌｌ２切断後に生成されるミオスタチンプロドメインの断片
（四角で囲った部分）の追跡が可能となった。Ａｂ１の濃度が増加するにつれて、この断
片の生成の用量依存的な減少が認められた。この実験は、エピトープビン１の抗体が、プ
ロテアーゼのトロイドファミリーによるプロおよび潜在型ミオスタチンの切断を遮断する
ことによって作用することを示している。
活性抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ活性に
基づいて、Ａｂ１を、親和性成熟、生殖系列化、および製造可能性分析を含むさらなる最
適化のためのリードとして選択した。
Ａｂ１の最適化
Ａｂ１抗体をさらなる最適化のために選択した。プロ／潜在型ミオスタチンの親和性を
、酵母ディスプレイを使用して最適化した。さらに、ヒト可変領域フレームワーク内の非
生殖系列アミノ酸位置の起こり得る免疫原性傾向を低減させるために、Ａｂ１の配列を生
殖系列化した。
酵母ディスプレイによるＡｂ１の親和性最適化
Ａｂ１親抗体を、酵母に基づくｓｃＦｖディスプレイアプローチを使用してプロ／潜在
型ミオスタチンに対する結合に関して最適化した。簡単に説明すると、Ａｂ１が利用する
ヒトフレームワークに対応する抗体ディープシークエンシングを使用して天然のヒト抗体
レパートリーにおいて観察されるアミノ酸頻度に基づいて、選択されたＣＤＲ位置に点変
異を導入する３つの異なるｓｃＦｖライブラリーを作製した。それぞれのライブラリーは
、得られた重鎖または軽鎖のそれぞれの改変体が、それぞれのＣＤＲに１つの置換を有し
、全体で３つの置換を有するように、それぞれのＣＤＲに１つの点変異が導入されたＡｂ
１配列に基づくｓｃＦｖを含有した。３つのライブラリーを、ＦＡＣＳベースのソーティ
ングおよび選択のために使用して、プロ／潜在型ミオスタチンに対してより高い結合親和
性を有するクローンのプールを同定した（図２３）。酵母発現ｓｃＦｖクローンの直接結
合を使用して、哺乳動物細胞培養物において発現される完全長のＩｇＧに転換するための
抗体を選択した。
酵母の作戦で同定された高親和性のｓｃＦｖクローンの多くは、重鎖の２８位で置換を
含有した。いくつかのクローンでは、トレオニンのアスパラギンへの置換によって、ＣＤ
ＲＨ１内で非標準のＮ−グリコシル化モチーフが組み込まれていた。抗体の可変領域内で
のＮ−グリコシル化は望ましくないことがあるので、グリコシル化モチーフを含有するい
かなるクローンも、この位置でアラニンを含有するようにさらに置換した。
次に、プロおよび潜在型ミオスタチンに対する結合動態を、親和性最適化構築物のそれ
ぞれに関してｏｃｔｅｔによって評価して、親Ａｂ１の動態と比較した（実施例２におい
て考察する）。クローンは全て、ミオスタチンに関して有意に増加した結合親和性を示し
、ＧＤＦ１１と比較した選択的結合プロファイルに基づいて、Ａｂ３およびＡｂ５の２つ
を選択した。
抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体の一次配列および骨格
親Ａｂ１の可変領域とその親和性最適化改変体との配列アラインメントを以下に示す。
相補性決定領域（ＣＤＲ）は、Ｋａｂａｔ（下線）およびＩＭＧＴ命名法（太字）を使用
して定義される。親Ａｂ１からの置換を、赤色の小文字で示す（下記および図２４Ａ〜２
４Ｂ）。
抗体操作およびアイソタイプ選択の根拠
いくつかの実施形態では、ミオスタチンの遮断にとって有用な抗体は、エフェクター機
能を欠如する。このため、ヒト化構築物に関して、ＩｇＧ４−Ｆｃ領域を選択した。Ｉｇ
Ｇ４アイソタイプの抗体は、補体Ｃ１ｑに対する結合が不良で、したがって補体を有意に
活性化しない。これらの抗体はまた、Ｆｃγ受容体に対する結合も弱く、そのため抗体依
存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は非効率的であるか、または存在しない。
ネイティブＩｇＧ４ ｍＡｂに関して起こることが知られているＦａｂアーム交換によ
る起こり得る困難な状況を回避するために、Ａｂ１およびその改変体を、セリン２２８（
ＥＵ番号付け：Ｋａｂａｔ番号付け残基２４１）がプロリンに変換されてＩｇＧ１様（Ｃ
ＰＰＣＰ（配列番号５８））ヒンジ配列が生じる安定化「Ａｄａｉｒ」変異（Ａｎｇａｌ
、１９９３年）により操作した。この操作したＦｃ配列を、承認された抗体Ｋｅｙｔｒｕ
ｄａ、Ｍｙｌｏｔａｒｇ、およびＴｙｓａｂｒｉの生成、ならびに現行のいくつかの後期
臨床候補ｍＡｂに使用する。
生殖系列化および免疫原性のリスク評価
Ａｂ１親抗体およびその改変体は、ファージディスプレイに由来する完全ヒトＩｇＧ４
（Ｓ２２８Ｐ）、ラムダ抗体である。抗体のＦｃ部分は、Ｆａｂアーム交換を防止するた
めに１つの安定化変異を（上記）含有する。ＩｇＧ４ Ｆｃは、Ｆｃガンマ受容体に対し
て測定可能な結合を有すると予想されない（実施例２を参照されたい）。
完全ヒトナイーブファージライブラリーから単離されたＡｂ１の可変フレームワーク領
域は、５つの非生殖系列アミノ酸を含有する（以下および図２２を参照されたい）。相補
性決定領域（ＣＤＲ）は、Ｋａｂａｔの命名法を使用して定義され、下線で示される。非
生殖系列の残基を小文字で示す。
免疫原性の可能性を緩和するために、非生殖系列フレームワーク残基をその対応する生
殖系列アミノ酸に置換するＡｂ１分子のさらなる改変体を作製した。いくつかの実施形態
では、Ａｂ１に関する置換を、Ａｂ３およびＡｂ４、またはその生殖系列化が適切である
本明細書に開示される任意の抗体に同様に適用することができる。
Ａｂ１の可変領域と、その親和性最適化改変体との配列アラインメントを、以下に示す
。Ａ．）重鎖、Ｂ．）軽鎖。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、Ｋａｂａｔ（下線）およびＩ
ＭＧＴ命名法（太字）を使用して定義する。親Ａｂ１に存在するフレームワーク領域の置
換を小文字で示す。
５つの置換のうち３つは、ＣＤＲ領域から離れていることが見出され、したがって、結
合に影響を及ぼさない。軽鎖の２位のプロリンはＣＤＲＬ３に対してパッキングされてい
ることから、このプロリンを生殖系列のセリンに置換すると、ＣＤＲのコンフォメーショ
ンを安定化させることによって、プロ／潜在型ミオスタチンに対する結合を実際に改善す
る。
抗体全体は、９９％超がヒトである（１００％から、ＣＤＲＨ３を除く非生殖系列ＡＡ
の％を差し引くことによって算出した）。化学コンジュゲーションは存在しない。重鎖Ｃ
ＤＲＨ２配列は、生殖系列ＩｇＨＶ３−３０配列にも存在する、起こり得る異性化傾向（
Ａｓｐ−Ｇｌｙ）を含有する。
（実施例２：薬理学的特徴付け）
ｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学アッセイ
全体で２４個の最適化Ａｂ１改変体を発現させて、ＩｇＧ４として精製し、結合および
機能的活性の改善に関してアッセイした。これらの分子に対する変化は、親和性成熟スク
リーニングにおいてプロ／潜在型ミオスタチンに対する結合の増加を付与するＣＤＲの変
異と共に、親可変領域に対する生殖系列化変異を含んだ（実施例１を参照されたい）。
Ａｂ１改変体を、プロミオスタチンおよび潜在型ミオスタチンタンパク質（ヒト、ネズ
ミ、およびカニクイザル）に対する結合を、陰性対照タンパク質の大規模スクリーニング
と共に再評価するいくつかの異なるＥＬＩＳＡベースのアッセイにおいてスクリーニング
して、親和性成熟の結果として非特異的結合が導入されないことを確認した。陰性対照は
、ＧＤＦ１１タンパク質（プロＧＤＦ１１、潜在型ＧＤＦ１１、および成熟ＧＤＦ１１）
、ＴＧＦβタンパク質、ならびにアクチビンタンパク質（プロアクチビン）を含んだ。さ
らに、抗体を、既に公表されたスクリーニング（Ｈｏｔｚｅｌら、２０１２年）と類似の
スクリーニングにおいて多重特異性（急速なクリアランスが起こり得る）に関して評価し
た。多重特異性スクリーニングにおいて陰性対照タンパク質またはバキュロウイルス粒子
と有意に相互作用するいかなる抗体も、開発プログラムの候補としてさらに考慮しなかっ
た。
Ａｂ１の２４個の最適化改変体も、プロミオスタチン活性化アッセイにおいて評価して
、その機能的効能を決定して、用量反応曲線からのＥＣ５０値を親Ａｂ１抗体と比較した
。ほとんどの抗体は同等であるか、または改善されたＥＣ５０値を有し、このアッセイに
おいて効能の低減を示したのは少数であった。活性アッセイにおいて効能が低減した抗体
をさらなる分析から除外した。
プロミオスタチンおよび潜在型ミオスタチンに対する結合が改善したが、プロミオスタ
チンおよび潜在型ミオスタチンに対して特異性を保持するＡｂ１の３つの改変体を同定し
た。これらの３つの改変体および親Ａｂ１分子の結合および活性データを、表４〜７に要
約し、配列を実施例１に示す。
細胞ベースのｅｘ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの生物活性アッセイ
Ａｂ１最適化改変体を、ＧＤＦ８活性化アッセイにおいて用量反応試験で評価した。こ
れらの実験において、０．５μＭプロミオスタチンを、漸増量の試験物質と共にプレイン
キュベートした。このプレインキュベーションステップの後、ｍＴｌｌ２およびフューリ
ンプロテアーゼを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞由来の馴化培地を添加して、プロミオス
タチンから成熟増殖因子を放出させた。３０℃で一晩インキュベートした後、材料を、Ｓ
ＭＡＤベースのルシフェラーゼレポータープラスミドを有する２９３Ｔ細胞に添加して、
放出された材料の活性を記録した。データを図４に示す。
他のＴＧＦβファミリーメンバーよりも優先したミオスタチンに対する選択性
候補抗体の選択性も、結合および機能的アッセイの両方によって評価して、ＴＧＦβフ
ァミリーの他のメンバーに対して交差反応性がないことを確認した。ヒトミオスタチンと
ＧＤＦ１１とは、成熟増殖因子ドメインにおいて９０％の同一性を共有し、プロドメイン
領域において４７％の同一性を共有する。ＥＬＩＳＡアッセイにより、ミオスタチンのプ
ロドメインからなる構築物にこの抗体が結合することが示されていることから、エピトー
プマッピング試験から、親Ａｂ１分子がプロミオスタチンおよび潜在型ミオスタチンのプ
ロドメイン上のエピトープを認識することが決定された。ミオスタチンのプロドメインと
ＧＤＦ１１は５０％未満の同一性を共有し、有意な交差反応性は予想されないものの、リ
ード抗体の特異性を注意深く評価した。
目的の抗体と陰性対照試薬との間の相互作用を検出する感度の良いアッセイを開発した
。このアッセイにおいて、ビオチン化プロＧＤＦ１１またはビオチン化プロミオスタチン
を、抗体３０μｇ／ｍＬを含有するウェルに適用したＦｏｒｔｅＢｉｏ ＢＬＩストレプ
トアビジンコーティングセンサーチップ上に固定した。検体と、チップ上に固定したタン
パク質との相互作用を、バイオセンサーチップの応答の大きさによって測定する。会合５
分後のバイオセンサー応答（プロＧＤＦ８の飽和シグナル）を２つの抗原の間で比較して
、ＧＤＦ８結合に関する応答率として表した。抗体は全て、プロミオスタチンに関して測
定される確固とした結合事象と比較して、プロＧＤＦ１１と最小限の相互作用を有した。
抗体候補もＧＤＦ１１活性化アッセイにおいて評価した。このアッセイにおいて、５０
ｎＭプロＧＤＦ１１を、増加濃度の抗体と共にプレインキュベートする。プレインキュベ
ーションの後、ＢＭＰ−１（トロイドファミリープロテアーゼ）およびＰＣＳＫ５（ＧＤ
Ｆ１１に対して特異的なフューリンファミリーメンバー）を過剰発現するＨＥＫ２９３細
胞由来の馴化培地を添加して、タンパク質分解を介してプロＧＤＦ１１を活性化した。３
０℃で一晩インキュベートした後、反応混合物をＳＭＡＤベースのレポーター細胞株にお
いてＧＤＦ１１活性に関して評価する。表８に示すように、抗ミオスタチン抗体は、プロ
ＧＤＦ１１活性化を阻害しないが、陽性対照抗体は、ＧＤＦ１１活性化の用量依存的阻害
を付与する。
抗体候補の結合親和性を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｑｋｅディップを使用して
決定し、生体層干渉法（ｂｉｏ−ｌａｙｅｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ）を利用し
て標識フリーのアッセイシステムを読み取った。それぞれの実験において抗原をバイオセ
ンサー（プロＧＤＦ８、プロＧＤＦ１１、およびプロアクチビンに関してストレプトアビ
ジンコーティングバイオセンサー；他の全てに関して直接アミンカップリング）に固定し
て、抗体／構築物を、溶液中で高濃度（５０μｇ／ｍＬ）で提示して、結合相互作用を測
定した。
抗原結合試験からの結果を表９に要約する。不良な結合応答を有するデータにフィット
させたいくつかの算出されたＫｄ値が存在し、これらは表において弱い非特異的結合とし
て示す。
Ｆｃ領域の機能性の評価
抗プロ／潜在型ミオスタチン療法の予想される機序は、可溶性の標的（プロ／潜在型ミ
オスタチン）に結合すること、およびタンパク質分解を介した活性化を防止することを伴
う。そのため、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害および補体結合は、この作用機序にとって
必要ではない。Ａｂ１およびその関連する改変体を、ＩｇＧ４−Ｆｃ領域を含有するよう
に操作した。ＩｇＧ４抗体は一般的に、補体成分Ｃ１ｑおよびＦｃγ受容体に対するその
結合が弱いためにエフェクター機能を欠如すると理解される。
エフェクター機能の能力が低減されていることを証明するために、Ａｂ１および関連す
る抗体を、ＥＬＩＳＡによってＣＤ６４（ＦｃｇＲＩ）およびＣ１ｑに対する結合に関し
て試験した。比較のために、Ａｂ１のＩｇＧ１改変体も調製した。このアッセイにおいて
、ＩｇＧ４抗体は全て、ＩｇＧ１と比較してＣＤ６４およびＣ１ｑに対して有意に弱い結
合（１／１０〜１／２０）を示した。ＥＣ５０での相対的結合値を表１０に記載する。
Ａｂ１およびその関連改変体のＣＤ６４およびＣ１ｑに対する見かけの結合親和性は、
他のＩｇＧ４臨床候補抗体と類似であり、ＩｇＧ１アイソタイプの抗体と比較してかなり
低減されている。したがって、ＩｇＧ４抗体の公知の生物学に基づいて、抗プロ／潜在型
ミオスタチン抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏで認識可能なエフェクター機能を誘導しないと結論
される。
動物モデルにおける効能
ｉｎ ｖｉｔｒｏ特徴付けに基づいて、４つの抗体（Ａｂ７、Ａｂ１、Ａｂ８、および
Ａｂ９）を選択して、ｉｎ ｖｉｖｏ試験において試験した。試験の目的は、これらの４
つの候補抗体がマウスの筋肉量を調節する能力を評価することであった。１０匹の雌性Ｓ
ＣＩＤマウスの５つの群に、試験物質を１週間に１回、０、７、１４、２１、２８、およ
び３５日目に腹腔内（ＩＰ）注射によって投与した。試験物質の投与前（０日目）、全て
の動物に握力評価を行った。握力評価はまた、試験の最終日（４２日目）にも実施した。
０日目に、全血球算定（ＣＢＣ）評価のために血液を後眼窩出血を介して採取した。投与
後、動物を体重および全身健康状態の観察について毎日評価した。４２日目に、握力評価
の後、動物をＣＯ２過量投与によって屠殺して、ＣＢＣ評価のために心穿刺によって血液
を採取した。血漿を調製するために、さらなる血液を採取した。様々な組織を単離して重
量を測定した。採取した筋肉は、腓腹筋、胸筋、ヒラメ筋、三頭筋、前脛骨筋、四頭筋（
大腿直筋）、および横隔膜であった。採取した臓器は、心臓、腎臓、脾臓、肝臓、および
鼠径部白色脂肪組織であった。組織は全て重量を測定して、瞬間凍結したが、腓腹筋は、
組織学分析のためにホルマリン（脚１）およびＯＣＴ（脚２）で固定した。
要約
試験ＳＣＨ−０２における動物の平均一日体重変化率データを図６に示す。５群全ての
動物の体重は、毎週増加した。抗体Ａｂ１で処置した動物は、図６に描写するように、最
大の体重増加（１４．６％）を示した。Ａｂ１で処置した動物のみが、ビヒクル（ＰＢＳ
）対照群の動物と比較して平均体重変化率の統計学的に有意な増加を示した（図６）。
切除した筋肉の重量を図７および８にプロットする。Ａｂ１で処置した動物は、ビヒク
ル（ＰＢＳ）対照処置動物と比較して腓腹筋（図７Ａ）および横隔膜（図８Ｂ）重量の統
計学的に有意な増加、それぞれ２７．６％および４９．８％を示した。Ａｂ１処置動物か
らのさらなる筋肉は、ＰＢＳ対照と比較して重量の増加を示したが、これらの差は統計学
的に有意ではなかった。心臓、脾臓、腎臓、肝臓および脂肪組織の平均組織重量に関して
処置群の間に統計学的有意差はなかった。
ＳＣＩＤ用量反応試験
ｉｎ ｖｉｖｏ試験（上記）において、Ａｂ１を２５ｍｇ／ｋｇで１週間に１回６週間
投与した動物は、ビヒクル（ＰＢＳ）を投与した動物と比較して、体重および筋重量（腓
腹筋および横隔膜）の統計学的に有意な増加を示した。次に、Ａｂ１のこの筋肉増強活性
を、ＳＣＩＤマウスの用量反応試験においてより詳細に調べた。この試験において、筋肉
量に及ぼす効果の大きさを、Ａｂ１の用量を６０ｍｇ／ｋｇ／週もの高用量まで増加させ
ることによって増加させることができるか否か、および筋肉量に及ぼす効果の大きさを、
Ａｂ１の用量を２ｍｇ／ｋｇ／週もの低用量に減少させることによって減少させることが
できるか否かを調べた。この試験において、Ａｂ１の活性を、さらに２つの抗体（上記の
試験で当初試験したＡｂ８、およびＡｂ１０）と比較した。
１０匹の雌性ＳＣＩＤマウスの１０個の群に試験物質を腹腔内（ＩＰ）注射（１０ｍｌ
／ｋｇ）によって週に２回、０、３、７、１０、１４、１７、２１、および２４日目に投
与した。試験物質の用量は以下のとおりであった：Ａｂ１（３０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／
ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１ｍｇ／ｋｇ）、Ａｂ１０（１０ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／
ｋｇ）、ならびにＡｂ８（１０ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）。対照群にはＰＢＳおよ
びＩｇＧ対照（３０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。処置群を表１１に記載する。動物は、試験
開始時１０週齢であった。体重を−４日目に測定して、投与日に対応して試験を通し週に
２回、測定した。身体組成パラメータ（脂肪量、除脂肪量、および水分含有量）を、Ｅｃ
ｈｏＭＲＩ（ＱＮＭＲ）によって−４、７、１４、２１、および２８日目に測定した。抗
体の初回用量から３０日後に動物をＣＯ２の過量投与によって屠殺して、ＣＢＣ評価およ
び血漿調製のために心穿刺によって血液を採取した。さらに、試験終了時に、様々な組織
を単離して重量を測定した。採取した筋肉は、腓腹筋、ヒラメ筋、前脛骨筋、四頭筋（大
腿直筋）、および横隔膜であった。筋肉を、試験マウスの左右両方の脚から切除した。分
析のために、両方の脚からの個々の筋肉の重量を合計してグラムでの平均筋重量を算出し
た。採取した他の組織は、心臓、腎臓、脾臓、肝臓、および脂肪組織であった。組織は全
て、重量を測定して、次いで、瞬間凍結したが、腓腹筋は、組織学分析のためにホルマリ
ン（左脚）およびＯＣＴ（右脚）で固定した。
ビヒクル（ＰＢＳ）、ＩｇＧ対照、およびＡｂ１の異なる用量で処置した動物に関する
平均体重変化率および平均除脂肪量変化率データを図９に示す。２０および６０ｍｇ／ｋ
ｇ／週の用量のＡｂ１で処置した動物は、ＩｇＧ対照処置動物と比較して試験２８日目に
体重の有意な増加、それぞれ１５．３％および１４．４％を示した（図９Ａ）。Ａｂ１（
６０、２０、６、および２ｍｇ／ｋｇ／週の用量）で処置した動物の４つ全ての群が、Ｉ
ｇＧ対照処置動物と比較して試験２８日目に除脂肪量の統計学的に有意な増加、それぞれ
、１４．１％、１２．４％、１７．１％、および１５．５％を示した（図９Ｂ）。
４つの筋肉（四頭筋、腓腹筋、前脛骨筋、および横隔膜）の重量を図１０にプロットす
る。ヒラメ筋も切除したが、筋肉のサイズが小さいために、データセットは極めて変動し
た。Ａｂ１の全ての用量で処置した動物は、ＩｇＧ対照動物と比較して筋重量の統計学的
に有意な増加を示した（図１０）。ＩｇＧ対照と比較した筋肉量の平均変化率を、それぞ
れの筋肉グラフ上で対応する棒グラフの上に示す。四頭筋重量の平均変化率は、最高用量
の２０．５％から最低用量の１０．７％までの範囲であった（図１０Ａ）。腓腹筋重量の
平均重量変化率は、最高用量の１７．７％から最低用量の１５．９％までの範囲であった
（図１０Ｂ）。前脛骨筋重量の平均重量変化率は、最高用量の２４．０％から最低用量の
１８．０％までの範囲であった（図１０Ｃ）。横隔膜筋重量の平均重量変化率は、全ての
用量群に関して３０％超であった（図１０Ｄ）。心臓、脾臓、腎臓、肝臓、および脂肪組
織の平均組織重量に関して処置群間で統計学的有意差はなかった。
デキサメタゾン誘導筋萎縮症モデルにおけるＡｂ１処置
健康なＳＣＩＤマウスにおいて抗ミオスタチン抗体Ａｂ１が筋肉量を構築する能力を考
慮して、Ａｂ１処置が、筋萎縮症を誘導する処置から動物を保護することもできるか否か
を決定した。動物を、その飲料水中のデキサメタゾンで２週間処置することによって、コ
ルチコステロイド誘導筋萎縮症モデルを確立した。選択した用量（２．５ｍｇ／ｋｇ／日
）は、除脂肪体重および個々の後肢筋肉量の有意な減少を誘導することができた。以下の
実験において、動物を、Ａｂ１の異なる用量で処置して、このデキサメタゾン誘導筋萎縮
症から動物を保護できるか否かを決定した。
この試験において、１０匹の雄性マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）の８つの群を、１３．５週
齢で試験に登録した。試験０日目に開始して、マウスに、通常の飲料水（群１〜４）、ま
たはデキサメタゾンを含有する水（群５〜８）のいずれかを与えた。試験物質を、週に２
回、０、３、７、および１０日目に腹腔内（ＩＰ）注射（１０ｍｌ／ｋｇ）によって投与
した。試験物質および用量は以下のとおりであった：ＰＢＳ（群１および５）、１０ｍｇ
／ｋｇ ＩｇＧ対照（群２および６）、１０ｍｇ／ｋｇ Ａｂ１（群３および７）、なら
びに１ｍｇ／ｋｇ Ａｂ１（群４および８）。処置群を表１２に記載する。試験を通して
少なくとも週に２回、体重を測定した。身体組成パラメータ（脂肪量、除脂肪量、および
水分含有量）を、ＥｃｈｏＭＲＩ（ＱＮＭＲ）によって、−１、６、および１３日目に測
定した。抗体の初回用量から１４日後、動物をＣＯ２の過量投与によって屠殺して、血漿
を調製するために心穿刺によって血液を採取した。さらに、試験終了時、様々な組織を単
離して重量を測定した。採取した筋肉は、腓腹筋、ヒラメ筋、前脛骨筋、四頭筋（大腿直
筋）、および横隔膜であった。筋肉を、試験マウスの左右両方の脚から切除した。分析の
ために、両方の脚の個々の筋肉の重量を合計して、平均筋重量をグラムで算出した。採取
した他の組織は、心臓、腎臓、脾臓、肝臓、および脂肪組織であった。組織は全て、重量
を測定して、次いで、瞬間凍結したが、腓腹筋は、組織学分析のためにホルマリン（左脚
）およびＯＣＴ（右脚）で固定した。
この実験において、抗ミオスタチン抗体Ａｂ１によるマウスの処置が、コルチコステロ
イド誘導筋萎縮症から動物を保護できるか否かを決定した。試験中、体重を週に２回測定
して、除脂肪量を−１、６および１３日目にＱＮＭＲによって測定した。非疾患対照群（
群１）およびデキサメタゾン処置群（群５〜８）の動物に関して、平均体重変化率および
平均除脂肪量変化率データを図１２に示す。１４日目では、これらの処置群のいずれの間
でも平均体重変化率に有意差は認められなかった（図１１Ａ）。デキサメタゾンで２週間
マウスを処置すると、通常の飲料水を与えた対照群（群１）と比較して除脂肪体重は有意
に減少した（群５および６）（図１１Ｂ）。しかし、デキサメタゾンおよび２０ｍｇ／ｋ
ｇ／週の抗体Ａｂ１の両方で処置したマウス（群７）は、対照群（群１）と比較して試験
１４日目に除脂肪体重変化率の有意差を示さなかった。２０ｍｇ／ｋｇ／週のＡｂ１で処
置した動物は、デキサメタゾン処置対照群（群５および６）のいずれかと比較して、１４
日目に除脂肪体重変化率の有意差を示したが、２ｍｇ／ｋｇ／週は有意差を示さなかった
。
デキサメタゾンおよび試験物質による２週間の処置の終了時、個々の筋肉を切除して、
重量を測定した。２つの筋肉（腓腹筋と四頭筋）の重量データを図１２Ａ〜１２Ｂにプロ
ットする。飲料水を通してデキサメタゾンを投与され、ＰＢＳまたはＩｇＧ対照抗体のい
ずれかを同様に投与された動物は、非疾患対照群（群１）と比較して、腓腹筋および四頭
筋の有意な萎縮症を示した（群５および６）。デキサメタゾンと２０ｍｇ／ｋｇ／週のＡ
ｂ１の両方で処置された動物（群７）は、デキサメタゾン処置対照群（群５および６）の
いずれかと比較して筋重量の有意差を示したが、２ｍｇ／ｋｇ／週は、有意差を示さなか
った。さらに、デキサメタゾンと２０ｍｇ／ｋｇ／週の抗体Ａｂ１の両方で処置したマウ
ス（群７）は、非疾患対照群（群１）と比較して、腓腹筋および四頭筋重量の有意差を示
さなかった。対照群（群１、ＰＢＳおよび水）の平均筋重量と比較した各群の平均筋重量
の差の百分率を、図１２Ｃ〜１２Ｄに示す。ＰＢＳおよびＩｇＧ対照群におけるデキサメ
タゾン処置によって誘導された腓腹筋肉量の減少率は、それぞれ、１６．５％および１８
．９％であった。これに対し、デキサメタゾンと２０ｍｇ／ｋｇ／週のＡｂ１の両方で処
置した動物では、腓腹筋肉量の減少は４．０％に過ぎず、これは非疾患対照群（群１）と
統計学的に異ならなかった。デキサメタゾンと２ｍｇ／ｋｇ／週のＡｂ１の両方で処置し
た動物（群８）では、腓腹筋肉量の減少は１０％に過ぎず、この群の筋肉量の減少は、Ｐ
ＢＳおよびＩｇＧ対照群（群５および６）の減少と統計学的に異ならなかった。類似の結
果が四頭筋について見られた（図１２Ｄ）。
ギプス固定誘導筋萎縮症モデルにおけるＡｂ１処置
健康なＳＣＩＤマウスにおいて抗ミオスタチン抗体Ａｂ１が筋肉量を構築する能力を考
慮して、Ａｂ１処置が、筋萎縮症を誘導する処置から動物を保護することもできるか否か
を調べた。マウスの右脚をギプスで２週間固定することによって、非活動性萎縮症モデル
を確立した。足を足底屈位置にして右脚をこの期間ギプスで固定することにより、個々の
後肢筋肉量の有意な減少を誘導することができた。以下の実験において、動物を異なる用
量のＡｂ１で処置して、このギプス固定誘導筋萎縮症から動物を保護する程度を決定した
。
この試験において、１０匹の雄性マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）の８つの群を、１４．５週
齢で試験に登録した。試験０日目に開始して、マウスを麻酔下に置き、足を足底屈位置に
して右後肢にギプスを固定した（群５〜８）。対照群（群１〜４）も麻酔下に置いたが、
後肢のギプス固定を行わなかった。試験物質を、週に２回、０、３、７、および１０日目
に腹腔内（ＩＰ）注射（１０ｍｌ／ｋｇ）によって投与した。試験物質および用量は以下
のとおりであった：ＰＢＳ（群１および５）、１０ｍｇ／ｋｇ ＩｇＧ対照（群２および
６）、１０ｍｇ／ｋｇ Ａｂ１（群３および７）、ならびに１ｍｇ／ｋｇ Ａｂ１（群４
および８）。処置群を表１３に記載する。試験を通して少なくとも週に２回、体重を測定
した。身体組成パラメータ（脂肪量、除脂肪量、および水分含有量）を、ＥｃｈｏＭＲＩ
（ＱＮＭＲ）によって、−１、７、および１４日目に測定した。抗体の初回用量から１４
日後、動物をＣＯ２の過量投与によって屠殺して、血漿を調製するために心穿刺によって
血液を採取した。
さらに、様々な組織を単離して重量を測定した。採取した筋肉は、腓腹筋、ヒラメ筋、
足底筋、前脛骨筋、および四頭筋（大腿直筋）であった。分析のために、動物の右後肢か
ら個々の筋肉の重量を収集した。採取した他の組織は、心臓、脂肪組織、および脾臓であ
った。組織は全て、重量を測定して、次いで、瞬間凍結したが、腓腹筋は、組織学分析の
ためにホルマリンで固定した。
要約
この実験において、抗ミオスタチン抗体Ａｂ１でのマウスの処置が、右後肢のギプス固
定によって誘導された非活動性筋萎縮症からマウスを保護できるか否かを試験した。試験
中、体重を週に２回測定して、除脂肪量を−１、７および１４日目にＱＮＭＲによって測
定した。非疾患対照群（群１）および２週間ギプス固定した群（群５〜８）の動物に関し
て、平均体重変化率および平均除脂肪量変化率データを図１３に示す。右後肢のギプス固
定は、体重増加に対していかなる負の効果も及ぼさず（図１３Ａ）、群の除脂肪量のいか
なる差も有意ではなかった（図１３Ｂ）。
２週間の試験の終了時、個々の筋肉を切除して、重量を測定した。２つの筋肉（腓腹筋
と四頭筋）の重量データを図１４Ａ〜１４Ｂにプロットする）。脚をギプス固定して、同
様にＰＢＳまたはＩｇＧ対照抗体のいずれかを投与した動物は、非ギプス固定対照群（群
１）と比較して、腓腹筋および四頭筋の有意な萎縮症を示した（群５および６）。ギプス
固定して２０ｍｇ／ｋｇ／週のＡｂ１を投与した動物（群７）は、ギプス固定対照群（群
５および６）のいずれかと比較して筋重量の有意差を示したが、２ｍｇ／ｋｇ／週は、有
意差を示さなかった。さらに、２０ｍｇ／ｋｇ／週の抗体Ａｂ１で処置したギプス固定マ
ウス（群７）は、非ギプス固定対照群（群１）と比較して、腓腹筋および四頭筋重量の有
意差を示さなかった。非ギプス固定対照群（群１）の平均筋重量と比較して各群の平均筋
重量の差の百分率を、図１４Ｃ〜１４Ｄに示す。ＰＢＳおよびＩｇＧ対照群におけるギプ
ス固定によって誘導された腓腹筋肉量の減少率は、それぞれ、２２．８％および２３．５
％であった。これに対し、２０ｍｇ／ｋｇ／週のＡｂ１で処置したギプス固定マウスでは
、腓腹筋肉量の減少は１０．０％に過ぎなかった。この差は、ＰＢＳおよびＩｇＧ対照抗
体を投与したギプス固定対照群（群５および６）と統計学的に異なることが見出された。
２ｍｇ／ｋｇ／週のＡｂ１で処置したギプス固定マウスの筋肉量の減少は、ＰＢＳおよび
ＩｇＧ対照群（群５および６）の減少と統計学的に異ならなかった。類似の結果が四頭筋
について見られた（図１４Ｄ）。さらなるデータを図１５〜２０に提供する。
Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ４、およびＡｂ６によるＳＣＩＤ用量反応試験
Ａｂ１による以前のｉｎ ｖｉｖｏ試験は、Ａｂ１が、健康な動物において筋肉量を増
加させることができ、ならびにマウス筋萎縮症モデル（デキサメタゾンおよびギプス固定
誘導萎縮症）において筋肉喪失を予防することができることを証明した。抗体操作の努力
により、Ａｂ１より良好であるｉｎ ｖｉｔｒｏ特徴を有する３つの抗体が同定された。
この試験において、ＳＣＩＤマウスにおいて、これらの抗体のｉｎ ｖｉｖｏ活性を、３
つの異なる用量で、既に確立されたＡｂ１の活性と比較した。
８匹の雌性ＳＣＩＤマウスの１４個の群に、週に２回、０、３、７、１０、１４、１７
、２１、および２４日目に腹腔内（ＩＰ）注射（１０ｍｌ／ｋｇ）によって試験物質を投
与した。試験物質の用量は以下のとおりであった：Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ４、およびＡｂ
６は、３つの異なる用量（１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および０．２５ｍｇ／ｋｇ）
で投与し、ＩｇＧ対照抗体は１０ｍｇ／ｋｇで投与した。処置群を表１４に記載する。動
物は、試験開始時１０週齢であった。投与日に対応して試験を通し、週に２回、体重を測
定した。身体組成パラメータ（脂肪量、除脂肪量、および水分含有量）を、ＥｃｈｏＭＲ
Ｉ（ＱＮＭＲ）によって、０、７、１４、２１および２８日目に測定した。抗体の初回用
量から２８日後、動物をＣＯ２の過量投与によって屠殺して、血漿を調製するために心穿
刺によって血液を採取した。
さらに、様々な組織を単離して重量を測定した。採取した筋肉は、腓腹筋、ヒラメ筋、
前脛骨筋、四頭筋（大腿直筋）、足の長指伸筋、および横隔膜であった。筋肉を、試験マ
ウスの左右両方の脚から切除した。分析のために、両方の脚の個々の筋肉の重量を合計し
て、平均筋重量をグラムで算出した。採取した他の組織は、心臓、腎臓、脾臓、肝臓、お
よび脂肪組織であった。組織は全て、重量を測定して、次いで、瞬間凍結したが、左の腓
腹筋は、組織学分析のためにホルマリンで固定した。
（実施例３：化学／製薬科学）
Ａｂ２は、２２８位でセリンをプロリンに置換したＩｇＧ４サブタイプのヒト化モノク
ローナル抗体である。これによって、ＩｇＧ１様ヒンジ配列が生成され、ＩｇＧ４の特徴
である鎖間ジスルフィド架橋の不完全な形成を最小限にする。Ａｂ２の重鎖および軽鎖の
完全なアミノ酸配列を以下に示す。相補性決定領域（ＣＤＲ）を下線で示す。紫色：Ｎ−
結合グリコシル化コンセンサス配列部位；水色：起こり得る切断部位；赤色：起こり得る
脱アミド化部位；黄緑色：起こり得る異性化部位；濃い青色：起こり得るメチオニン酸化
部位；太字：予想されるＮ末端ピログルタミン酸（図２１Ａ〜２１Ｂ）。
Ａｂ１の分子モデリングにより、起こり得るいくつかの翻訳後改変部位が同定された。
軽鎖における２つのアスパラギン、および重鎖における７つのアスパラギンは、脱アミド
化を受けやすい。これらの残基の２つは、重鎖のＣＤＲ領域内に位置する。
ネイティブＩｇＧ４ ｍＡｂは、２つの半分子（それぞれが、１つの重鎖と１つの軽鎖
とを含有する）が非共有結合的相互作用によってインタクト抗体構造において維持される
重鎖間ジスルフィド架橋の不完全な形成を有し得る。ＩｇＧ４分子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
およびｉｎ ｖｉｖｏで半分子を交換する傾向があり得、半分子のレベルは、製造バッチ
間で一貫していなければならない。ＩｇＧ４構造の骨格におけるＳｅｒからＰｒｏへの置
換によって、ＩｇＧ１様ヒンジ配列がもたらされ、それによって鎖間ジスルフィド結合の
形成が可能となり、抗体構造を顕著に安定化させる。ヒンジ領域の完全性および安定性を
、非還元性キャピラリー電気泳動および遊離のスルフヒドリルの定量などのアッセイを使
用して、展開中に広範な特徴付けを行いながらモニタリングする。鎖交換の可能性をｉｎ
ｖｉｖｏでモニタリングする。
要約
プロミオスタチンおよび／または潜在型ミオスタチンの活性化を遮断するプロ／潜在型
ミオスタチン特異的抗体を、本明細書に提供する。この活性化遮断抗体を健康なマウスに
投与すると、除脂肪体重および筋肉のサイズを増加させ、筋肉増強効果を１ヵ月間維持す
るために単一の用量しか必要としない。さらに、抗体の投与は、２つの別個の筋消耗モデ
ルにおいて健康なマウスを筋萎縮症から保護する。データは、ミオスタチン活性化の遮断
が、確固とした筋成長を促進してｉｎ ｖｉｖｏで筋萎縮症を防止し、筋消耗の治療介入
のための代替機構を表すことを証明する。
本開示のいくつかの実施形態を本明細書において記載し、説明してきたが、機能を行う
ための、ならびに／あるいは本明細書において記載される結果および／または１つもしく
は複数の利点を得るための、多様な他の手段および／または構造は、当業者によって容易
に想起され、そのような変更および／または改変のそれぞれは、本開示の範囲内であると
考えられる。より一般的には、本明細書において記載される全てのパラメータ、寸法、材
料、および構成は、例示的であることを意味し、実際のパラメータ、寸法、材料、および
／または構成は、特定の応用または本開示の教示が使用される応用に依存することを、当
業者は容易に理解するであろう。当業者は、単なる日常的実験を使用して、本明細書に記
載される開示の特異的実施形態に対する多くの同等物を認識するまたは確認することがで
きる。したがって、前述の実施形態は、単なる例として紹介され、添付の特許請求の範囲
およびその同等物の範囲内で、本開示は具体的に記載および特許請求される以外に実践し
てもよいと理解すべきである。本開示は、本明細書において記載されるそれぞれの個々の
特徴、システム、物品、材料、および／または方法を対象とする。さらに、２つまたはそ
れ超のそのような特徴、システム、物品、材料、および／または方法の任意の組合せは、
そのような特徴、システム、物品、材料、および／または方法が相互に矛盾しない限り、
本開示の範囲に含まれる。
本明細書および特許請求の範囲において使用される不定冠詞「１つの（ａ）」および「
１つの（ａｎ）」は、それらが明らかに反対を示していない限り、「少なくとも１つ」を
意味すると理解すべきである。
本明細書および特許請求の範囲で使用される語句「および／または」は、そのように結
合された要素、すなわち、ある場合では結合して存在し、別の場合では離れて存在する要
素の「いずれかまたは両方」を意味すると理解すべきである。明らかに反対であることと
示していない限り、具体的に同定されたそのような要素に関連するか関連しないかによら
ず、「および／または」の語句によって具体的に同定された要素以外に他の要素が、任意
選択で存在してもよい。このように、非制限的な例として、「含む」などの制限のない用
語と共に使用する場合の「Ａおよび／またはＢ」という言及は、一実施形態ではＢを含ま
ないＡ（任意選択でＢ以外の要素を含む）、別の実施形態ではＡを含まないＢ（任意選択
でＡ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態ではＡとＢの両方（任意選択で他の要素を
含む）等を指し得る。
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、「または」は、上記で定義される「
および／または」と同じ意味を有すると理解すべきである。例えば、リストにある項目を
分離する場合、「または」または「および／または」は、包含的に解釈され、すなわち、
いくつかの要素または要素のリストのうちの少なくとも１つを含むが、１超も含み、任意
選択で追加の記載されていない項目を含むと解釈される。その反対であることを明らかに
示している、「唯一の」もしくは「まさに１つの」、または特許請求の範囲において使用
される場合の「からなる」などの用語のみが、いくつかの要素または要素のリストのうち
の厳密に１つの要素の包含を指す。一般的に、本明細書において使用される用語「または
」は、「いずれか」、「〜の１つ」、「〜の１つのみ」または「〜のまさに１つ」などの
排他的な用語がその前にある場合、排他的代替物（すなわち、「１つまたは他方であるが
、両方ではない」）を示すとのみ解釈される。特許請求の範囲において使用される場合の
「本質的にからなる」は、特許法の分野で使用されるその通常の意味を有する。
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、１つまたは複数の要素のリス
トを参照する場合の語句「少なくとも１つ」は、要素のリストにおける要素の任意の１つ
または複数から選択される少なくとも１つの要素を意味するが、必ずしも要素のリスト内
に具体的に記載されるあらゆる要素の少なくとも１つを含まず、要素のリストにおける要
素の任意の組合せを除外しないと理解すべきである。この定義はまた、具体的に同定され
たそれらの要素に関係するか無関係であるかによらず、語句「少なくとも１つ」が指す要
素のリスト内で具体的に同定された要素以外の要素が任意選択で存在してもよいことを許
容する。このため、非限定的な例として、「ＡおよびＢの少なくとも１つ」（または、同
等の「ＡまたはＢの少なくとも１つ」、または同等の「Ａおよび／またはＢの少なくとも
１つ」）は、一実施形態では、任意選択で１超のＡを含む少なくとも１つのＡでＢは存在
しない（任意選択でＢ以外の要素を含む）ことを指し；別の実施形態では、任意選択で１
超のＢを含む少なくとも１つのＢでＡは存在しない（任意選択でＡ以外の要素を含む）こ
とを指し；なお別の実施形態では、任意選択で１超のＡを含む少なくとも１つのＡと、任
意選択で１超のＢを含む少なくとも１つのＢ（任意選択で他の要素を含む）を指し得る等
々である。
特許請求の範囲、ならびに上記の明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」
、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａ
ｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「伴う（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）
」、「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」その他などの全ての移行句は、制限がないと理解す
べきであり、すなわち、含むがこれらに限定されないことを意味する。「からなる」およ
び「本質的にからなる」という移行句のみが、米国特許庁の米国特許審査便覧第２１１１
．０３節に記載されているようにそれぞれ、制限的または半制限的な移行句である。
請求項の要素を修飾するための、特許請求の範囲における「第１」、「第２」、「第３
」等などの序数の使用は、それ自体、いかなる優先性、選択性、または１つの請求項の要
素の順位が別の請求項の要素より上であること、または方法の行為が実行される時間的順
序を暗示するものではなく、請求項の要素を区別するために、ある特定の名称を有する１
つの請求項の要素を、同じ名称（序数の使用以外の点で）を有する別の要素と区別するた
めの単なる表示として使用される。

Claims (73)

  1. 重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗体であって、前記重鎖可変ドメイン
    が、配列番号１０〜１１のいずれか１つに記載の配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＨ
    ３）を含む、抗体。
  2. プロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記軽鎖可変ドメインが、配列番号２２〜２３のいずれか１つに記載の配列を含む相補
    性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む、請求項１または２に記載の抗体。
  4. ６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１
    、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＨ１が配列番号１〜３のいずれか１つに記
    載の配列を含み、ＣＤＲＨ２が配列番号４〜９のいずれか１つに記載の配列を含み、ＣＤ
    ＲＨ３が配列番号１０〜１１のいずれか１つに記載の配列を含み、ＣＤＲＬ１が配列番号
    １２〜１７のいずれか１つに記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２が配列番号１８〜２１のいず
    れか１つに記載の配列を含み、ＣＤＲＬ３が配列番号２２〜２３のいずれか１つに記載の
    配列を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体。
  5. ＣＤＲＨ１が配列番号１または２に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ２が配列番号４または
    ５に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３が配列番号１０に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ１が配
    列番号１２または１３に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２が配列番号１８または１９に記載
    の配列を含み、ＣＤＲＬ３が配列番号２２に記載の配列を含む、請求項４に記載の抗体。
  6. ＣＤＲＨ１が配列番号１または３に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ２が配列番号６または
    ７に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３が配列番号１１に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ１が配
    列番号１４または１５に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２が配列番号２０または２１に記載
    の配列を含み、ＣＤＲＬ３が配列番号２３に記載の配列を含む、請求項４に記載の抗体。
  7. ＣＤＲＨ１が配列番号１または３に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ２が配列番号８または
    ９に記載の配列を含み、ＣＤＲＨ３が配列番号１１に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ１が配
    列番号１６または１７に記載の配列を含み、ＣＤＲＬ２が配列番号２０または２１に記載
    の配列を含み、ＣＤＲＬ３が配列番号２３に記載の配列を含む、請求項４に記載の抗体。
  8. 配列番号２４〜２９のいずれか１つに記載の重鎖可変ドメイン配列を含む、請求項１か
    ら７のいずれか一項に記載の抗体。
  9. 配列番号３０〜３５のいずれか１つに記載の軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項１か
    ら８のいずれか一項に記載の抗体。
  10. プロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合し、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイ
    ンを含む抗体であって、前記軽鎖可変ドメインが、配列番号２２〜２３のいずれか１つに
    記載の配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む、抗体。
  11. 配列番号３０の軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項１０に記載の抗体。
  12. プロ／潜在型ミオスタチンへの結合について、請求項１から１１のいずれか一項に記載
    の抗体と競合する抗体。
  13. 請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体と同じエピトープにおいてプロ／潜在型
    ミオスタチンに結合する、請求項１２に記載の抗体。
  14. １０−６Ｍ未満である前記抗体とプロ／潜在型ミオスタチンとの間の平衡解離定数、Ｋ
    ｄでプロ／潜在型ミオスタチンへの結合について競合する、請求項１２または１３に記載
    の抗体。
  15. 前記Ｋｄが１０−１１Ｍから１０−６Ｍの範囲にある、請求項１４に記載の抗体。
  16. ヒト化抗体、ダイアボディ、キメラ抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片またはＦｖ
    断片である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体。
  17. ヒト化抗体である、請求項１６に記載の抗体。
  18. ヒト抗体である、請求項１６に記載の抗体。
  19. ヒト生殖系列配列を有するフレームワークを含む、請求項１から１７のいずれか一項に
    記載の抗体。
  20. ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ２Ｃ、ＩｇＧ３、Ｉｇ
    Ｇ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＭおよびＩｇＥ定常ドメインからなる群より選
    択される重鎖定常ドメインを含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体。
  21. ＩｇＧ４の定常ドメインを含む、請求項２０に記載の抗体。
  22. ＩｇＧ１様ヒンジを生じ、鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にするＳｅｒからＰｒｏ
    への骨格置換を有するＩｇＧ４の定常ドメインを含む、請求項２０に記載の抗体。
  23. 蛍光性作用物質、発光性作用物質、酵素性作用物質および放射性作用物質からなる群よ
    り選択される作用物質にコンジュゲートされている、請求項１から２２のいずれか一項に
    記載の抗体。
  24. 成熟ミオスタチンと比較してプロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合する、請求項１
    から２３のいずれか一項に記載の抗体。
  25. トランスホーミング増殖因子ベータファミリーの別のメンバーと比較してプロ／潜在型
    ミオスタチンに特異的に結合する、請求項１から２３のいずれか一項に記載の抗体。
  26. 前記メンバーがＧＤＦ８またはアクチビンである、請求項２５に記載の抗体。
  27. 配列番号５０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号５１に記載のアミノ酸
    配列を有する軽鎖を含む、抗体。
  28. プロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合し、トロイドプロテアーゼによるタンパク質
    分解を介した成熟ミオスタチンの形成を阻害する抗体。
  29. トロイドプロテアーゼによるタンパク質分解を介した成熟ミオスタチンの形成を１μＭ
    未満のＩＣ５０で阻害する、請求項２８に記載の抗体。
  30. ヒトおよびネズミプロ／潜在型ミオスタチンと交差反応性である、請求項２８または２
    ９に記載の抗体。
  31. ＧＤＦ１１またはアクチビンと比較してプロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合する
    、請求項２８から３０のいずれか一項に記載の抗体。
  32. 成熟ミオスタチンと比較してプロ／潜在型ミオスタチンに特異的に結合する、請求項２
    ８から３１のいずれか一項に記載の抗体。
  33. プロ／潜在型ミオスタチンを含む培地中に存在する細胞におけるミオスタチン受容体活
    性化を低減する方法であって、請求項１から３２のいずれか一項に記載の抗体を、タンパ
    ク質分解を介した前記プロ／潜在型ミオスタチンの活性化を阻害するのに有効な量で前記
    培地に送達するステップを含む、方法。
  34. 前記培地がプロタンパク質転換酵素をさらに含む、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記培地がトロイドプロテアーゼをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
  36. 前記抗体が、前記トロイドプロテアーゼによるタンパク質分解を介した前記プロ／潜在
    型ミオスタチンの活性化を阻害するのに有効な量で前記培地に送達される、請求項３３か
    ら３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏにある、請求項３３から３６のいずれか一項に記載の方法
    。
  38. 前記細胞がｉｎ ｖｉｖｏにある、請求項３３から３６のいずれか一項に記載の方法。
  39. ミオパチーを有する被験体を処置する方法であって、請求項１から３２のいずれか一項
    に記載の抗体の有効量を前記被験体に投与するステップを含む、方法。
  40. 前記ミオパチーが原発性ミオパチーである、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記原発性ミオパチーが非活動性萎縮症を含む、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記非活動性萎縮症が股関節骨折、待機的人工関節置換術、救命医療ミオパチー、脊髄
    損傷または発作に関連する、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記ミオパチーが、筋肉喪失が疾患病態に続発する二次性ミオパチーである、請求項３
    ９に記載の方法。
  44. 前記二次性ミオパチーが脱神経、遺伝性筋脱力または悪液質を含む、請求項４３に記載
    の方法。
  45. 前記二次性ミオパチーが、筋萎縮性側索硬化症または脊髄性筋萎縮症に関連する脱神経
    である、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記二次性ミオパチーが、筋ジストロフィーに関連する遺伝性筋脱力である、請求項４
    ４に記載の方法。
  47. 前記二次性ミオパチーが、腎不全、ＡＩＤＳ、心臓の状態、がんまたは加齢に関連する
    悪液質である、請求項４４に記載の方法。
  48. 前記処置が前記被験体における筋力の改善を生じる、請求項３９から４７のいずれか一
    項に記載の方法。
  49. 前記処置が前記被験体において代謝状態の改善を生じる、請求項３９から４８のいずれ
    か一項に記載の方法。
  50. 前記抗体が０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される、請求項
    ３９から４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記抗体が０．３ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される、請求項３
    ９から５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記抗体が前記被験体に静脈内投与される、請求項３９から５１のいずれか一項に記載
    の方法。
  53. 前記抗体が前記被験体に皮下投与される、請求項３９から５１のいずれか一項に記載の
    方法。
  54. 前記抗体が前記被験体に複数の機会に投与される、請求項３９から５１のいずれか一項
    に記載の方法。
  55. 前記複数回投与が少なくとも毎月実施される、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記複数回投与が少なくとも毎週実施される、請求項５５に記載の方法。
  57. 請求項１から３２のいずれか一項に記載のいずれかの抗体、および担体を含む組成物。
  58. 前記担体が薬学的に許容される担体である、請求項５７に記載の組成物。
  59. 前記抗体および前記担体が凍結乾燥形態にある、請求項５７または５８に記載の組成物
    。
  60. 前記抗体および前記担体が溶液中にある、請求項５７または５８に記載の組成物。
  61. 前記抗体および前記担体が凍結されている、請求項５７または５８に記載の組成物。
  62. 前記抗体および前記担体が−６５℃未満またはそれに等しい温度で凍結される、請求項
    ５７または５８に記載の組成物。
  63. ３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含むタ
    ンパク質をコードする単離された核酸であって、ＣＤＲＨ３が配列番号１０または１１に
    記載の配列を含む、核酸。
  64. ＣＤＲＨ１が配列番号１、２または３に記載の配列を含む、請求項６３に記載の単離さ
    れた核酸。
  65. ＣＤＲＨ２が配列番号４〜９のいずれか１つに記載の配列を含む、請求項６３または６
    ４に記載の単離された核酸。
  66. ３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含むタ
    ンパク質をコードする単離された核酸であって、ＣＤＲＬ３が配列番号２２に記載の配列
    を含む、核酸。
  67. ＣＤＲＬ１が配列番号１２〜１７のいずれか１つに記載の配列を含む、請求項６６に記
    載の単離された核酸。
  68. ＣＤＲＬ２が配列番号１８〜２１のいずれか１つに記載の配列を含む、請求項６６また
    は６７に記載の単離された核酸。
  69. 配列番号３８〜４９のいずれか１つに記載の配列を含む単離された核酸。
  70. 請求項６３から６９のいずれか一項に記載の単離された核酸を含む単離された細胞。
  71. ミオパチーを有する被験体から得られた生物学的試料を評価する方法であって、
    （ａ）前記被験体から得られた生物学的試料のタンパク質と、プロ／潜在型ミオスタチン
    に特異的に結合する抗体とを含む免疫学的反応混合物を調製するステップ；
    （ｂ）前記抗体とプロ／潜在型ミオスタチンとの間の結合複合体の形成を可能にする条件
    下に前記免疫学的反応混合物を維持するステップ；および
    （ｃ）結合複合体形成の程度を決定するステップ
    を含む、方法。
  72. 配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８および配列
    番号２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
  73. 配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４および配列
    番号３５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
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