JP2020120622A - 組換え細胞、発現構築物、及び組換えタンパク質の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]
第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット、及び上記第一のプロモーターとは異なる第二のプロモーターに作動可能に連結された上記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを有する、組換え細胞。
[2]
上記第二のプロモーターの転写活性が、上記第一のプロモーターの転写活性よりも弱い、[1]に記載の組換え細胞。
[3]
上記第一のプロモーターと上記第二のプロモーターのポリヌクレオチド配列が少なくとも80%の配列同一性を有する、[1]又は[2]に記載の組換え細胞。
[4]
上記第一のプロモーターが、T7プロモーターである、[1]〜[3]のいずれかに記載の組換え細胞。
[5]
上記第二のプロモーターが、配列番号2で示される塩基配列、及び配列番号3で示される塩基配列から選択される塩基配列を含む、[1]〜[4]のいずれかに記載の組換え細胞。
[6]
第三のプロモーターに作動可能に連結された上記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第三の発現カセットを更に有する、[1]〜[5]のいずれかに記載の組換え細胞。
[7]
上記第三のプロモーターが、上記第一のプロモーター、又は上記第二のプロモーターと同じである、[6]に記載の組換え細胞。
[8]
上記組換えタンパク質がフィブロインである、[1]〜[7]のいずれかに記載の組換え細胞。
[9]
上記第一の発現カセット及び上記第二の発現カセットが、宿主ゲノムDNA中に組み込まれている、[1]〜[8]のいずれかに記載の組換え細胞。
[10]
第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット、及び上記第一のプロモーターとは異なる第二のプロモーターに作動可能に連結された上記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを有する、発現構築物。
[11]
上記第二のプロモーターの転写活性が、上記第一のプロモーターの転写活性よりも弱い、[10]に記載の発現構築物。
[12]
上記第一のプロモーターと上記第二のプロモーターのポリヌクレオチド配列が少なくとも80%の配列同一性を有する、[10]又は[11]に記載の発現構築物。
[13]
上記第一のプロモーターが、T7プロモーターである、[10]〜[12]のいずれかに記載の組換え細胞。
[14]
上記第二のプロモーターが、配列番号2で示される塩基配列、及び配列番号3で示される塩基配列から選択される塩基配列を含む、[10]〜[13]のいずれかに記載の組換え細胞。
[15]
第三のプロモーターに作動可能に連結された上記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第三の発現カセットを更に有する、[10]〜[14]のいずれかに記載の発現構築物。
[16]
上記第三のプロモーターが、上記第一のプロモーター、又は上記第二のプロモーターと同じである、[15]に記載の発現構築物。
[17]
第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット、及び上記第一のプロモーターとは異なる第二のプロモーターに作動可能に連結された上記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを有する組換え細胞をタンパク質生産培地中で培養する生産工程を備える、上記組換えタンパク質の製造方法。
[18]
上記生産工程において、上記組換え細胞を連続培養又は流加培養で培養する、[17]に記載の製造方法。
[19]
上記生産工程は、発現誘導剤を上記タンパク質生産培地に添加して上記組換えタンパク質の発現誘導を行う発現誘導ステップを含む、[17]又は[18]に記載の製造方法。
[20]
上記生産工程は、発現誘導剤を上記タンパク質生産培地に添加して上記組換えタンパク質の発現誘導を行った後、9時間以上培養を行うことを含む、[17]〜[19]のいずれかに記載の製造方法。
本実施形態に係る組換え細胞は、第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット、及び第一のプロモーターとは異なる第二のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを有する。
第一の発現カセットは、少なくとも第一のプロモーターと、当該第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むものである。第一の発現カセットは、第一のプロモーター及び組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列に作動可能に連結された1又は複数の調節配列を更に含むものであってもよい。
第二の発現カセットは、少なくとも第二のプロモーターと、当該第二のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むものである。第二のプロモーターは、第一のプロモーターとは異なる(塩基配列が異なる)ものである。第二の発現カセットで発現される組換えタンパク質は、第一の発現カセットで発現される組換えタンパク質と同じものであるのが好ましい。
第二のプロモーターは、その転写活性が、第一のプロモーターの転写活性よりも弱いプロモーターであるのが好ましい。第二のプロモーターは、その転写活性が、第一のプロモーターの転写活性を100としたときに、50以下であることが好ましく、25以下であることがより好ましく、10以下であることが更に好ましく、5以下であることが更により好ましく、1以下であることが特に好ましい。プロモーターの転写活性は、後述する実施例に記載の方法により、測定することができる。
本実施形態に係る組換え細胞は、第一及び第二の発現カセットに加えて、更に1又は複数の発現カセット(第三の発現カセット、第四の発現カセット、・・・第Nの発現カセット、・・・)を含むものであってもよい。
本発明に係る組換え細胞で生産する組換えタンパク質(以下、「目的タンパク質」ともいう。)は、特に制限されず、任意のタンパク質を使用することができる。目的タンパク質としては、工業規模での製造が好ましい任意のタンパク質を挙げることができ、例えば、工業用に利用できるタンパク質、医療用に利用できるタンパク質、及び構造タンパク質等を挙げることができる。工業用又は医療用に利用できるタンパク質の具体例としては、酵素、制御タンパク質、受容体、ペプチドホルモン、サイトカイン、膜又は輸送タンパク質、予防接種に使用する抗原、ワクチン、抗原結合タンパク質、免疫刺激タンパク質、アレルゲン、及び完全長抗体又は抗体フラグメント若しくは誘導体等を挙げることができる。構造タンパク質の具体例としては、フィブロイン(例えば、スパイダーシルク、カイコシルク等)、ケラチン、コラ−ゲン、エラスチン、レシリン、及びこれらタンパク質の断片、並びにこれら由来のタンパク質等を挙げることができる。
本発明の一実施形態に係る組換え細胞は、例えば、第一の発現カセット及び第二の発現カセット(並びに、必要に応じて、第三の発現カセット、第四の発現カセット、・・・)(以下、まとめて「発現カセット」ともいう。)を宿主細胞に導入することにより得ることができる。
本実施形態に係る組換えタンパク質の製造方法は、少なくとも生産工程を備える。生産工程は、本発明に係る組換え細胞をタンパク質生産培地中で培養する工程である。本実施形態に係る組換えタンパク質の製造方法は、生産工程の前に、上述した組換え細胞を前培養培地で培養する前培養工程を更に備えるものであってもよい。
本実施形態に係る組換え細胞は、組換えタンパク質(目的タンパク質)の発現が誘導できるものであってもよい。組換えタンパク質の発現の誘導は、誘導性プロモーターによる転写(目的とするタンパク質をコードする核酸の転写)を活性化することにより行われる。誘導性プロモーターの活性化は、誘導性プロモーターの種類に応じて、当該技術分野で公知の方法に従って行うことができる。
前培養工程は、生産工程の前に、組換え細胞を前培養培地で培養する工程である。前培養培地の具体的な態様は、上述したタンパク質生産培地で説明した態様と同様である。前培養培地は、タンパク質生産培地と同じであってもよく、異なっていてもよい。
本実施形態に係る発現構築物は、第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット、及び前記第一のプロモーターとは異なる第二のプロモーターに作動可能に連結された前記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを有する。
T7プロモーターに遺伝子工学的な手法を用いて変異を導入して、T7プロモーターよりも転写活性の弱まった変異型プロモーター(T7.5プロモーター:配列番号2、及びT7.51プロモーター:配列番号3)を取得した。
(目的タンパク質)
ネフィラ・クラビペス(Nephila clavipes)由来のフィブロイン(GenBankアクセッション番号:P46804.1、GI:1174415)の塩基配列及びアミノ酸配列に基づき、配列番号5で示されるアミノ酸配列を有する改変フィブロイン(以下、「PRT799」ともいう。)を設計した。配列番号5で示されるアミノ酸配列は、ネフィラ・クラビペス由来のフィブロインのアミノ酸配列に対して、生産性の向上を目的としてアミノ酸残基の置換、挿入及び欠失を施したアミノ酸配列を有し、さらにN末端に配列番号6で示されるアミノ酸配列(タグ配列及びヒンジ配列)が付加されている。
宿主として大腸菌(Escherichia coli)BL21(DE3)株を用い、以下(a)〜(c)の手法を用いて改変フィブロイン発現カセットを染色体上の3箇所に組み込み、改変フィブロイン発現カセットを3つ有する組換え細胞を取得した。
1つ目の改変フィブロイン発現カセットは、HK022ファージが溶原化する機構を利用して宿主染色体上に組み込んだ。当該機構は、宿主染色体の特定部位(attBサイト)とファージゲノムの特定部位(attP(HK022)サイト)との間での配列特異的な組み換えである。
2つ目の改変フィブロイン発現カセットは、φ80ファージが溶原化する機構を利用して宿主染色体上に組み込んだ。当該機構は、宿主染色体の特定部位(attBサイト)とファージゲノムの特定部位(attPサイト)との間での配列特異的な組み換えである。
3つ目の改変フィブロイン発現カセットは、λファージが有する相同組換えシステムを利用して宿主染色体上に組み込んだ。当該相同組換えシステムは、ファージゲノムのRed領域にあるexo、bet、gam遺伝子産物により相同組換えを生じるものである。
上記(2)の方法で取得した組換え細胞2種を使用し、改変フィブロイン(PRT799)の発現量を評価した。使用した2種の組換え細胞は、3つの改変フィブロイン発現カセットがいずれもT7プロモーターを有する組換え細胞(以下、「T7−T7−T7株」ともいう。)と、3つの改変フィブロイン発現カセットのうち、1つがT7プロモーターを有し、残りの2つがT7.51プロモーターを有する組換え細胞(以下、「T7−T7.51−T7.51株」ともいう。)である。
図5は、T7−T7−T7株及びT7−T7.51−T7.51株のタンパク質(改変フィブロイン)生産量を評価した結果を示すグラフである。図5に示すように、3つの改変フィブロイン遺伝子の発現がいずれもT7プロモーターで駆動されるT7−T7−T7株よりも、3つの改変フィブロイン遺伝子の発現がそれぞれT7プロモーター又はT7.51プロモーターで駆動されるT7−T7.51−T7.51株の方が、タンパク質(改変フィブロイン)生産量が優れていた。また、誘導後の時間の経過と共にその差が大きくなっていた。これは、T7−T7.51−T7.51株が、組換えタンパク質の生産能力を長時間維持できることを反映していると考えられる。
Claims (20)
- 第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット、及び前記第一のプロモーターとは異なる第二のプロモーターに作動可能に連結された前記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを有する、組換え細胞。
- 前記第二のプロモーターの転写活性が、前記第一のプロモーターの転写活性よりも弱い、請求項1に記載の組換え細胞。
- 前記第一のプロモーターと前記第二のプロモーターのポリヌクレオチド配列が少なくとも80%の配列同一性を有する、請求項1又は2に記載の組換え細胞。
- 前記第一のプロモーターが、T7プロモーターである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組換え細胞。
- 前記第二のプロモーターが、配列番号2で示される塩基配列、及び配列番号3で示される塩基配列から選択される塩基配列を含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組換え細胞。
- 第三のプロモーターに作動可能に連結された前記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第三の発現カセットを更に有する、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組換え細胞。
- 前記第三のプロモーターが、前記第一のプロモーター、又は前記第二のプロモーターと同じである、請求項6に記載の組換え細胞。
- 前記組換えタンパク質がフィブロインである、請求項1〜7のいずれか一項に記載の組換え細胞。
- 前記第一の発現カセット及び前記第二の発現カセットが、宿主ゲノムDNA中に組み込まれている、請求項1〜8のいずれか一項に記載の組換え細胞。
- 第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット、及び前記第一のプロモーターとは異なる第二のプロモーターに作動可能に連結された前記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを有する、発現構築物。
- 前記第二のプロモーターの転写活性が、前記第一のプロモーターの転写活性よりも弱い、請求項10に記載の発現構築物。
- 前記第一のプロモーターと前記第二のプロモーターのポリヌクレオチド配列が少なくとも80%の配列同一性を有する、請求項10又は11に記載の発現構築物。
- 前記第一のプロモーターが、T7プロモーターである、請求項10〜12のいずれか一項に記載の組換え細胞。
- 前記第二のプロモーターが、配列番号2で示される塩基配列、及び配列番号3で示される塩基配列から選択される塩基配列を含む、請求項10〜13のいずれか一項に記載の組換え細胞。
- 第三のプロモーターに作動可能に連結された前記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第三の発現カセットを更に有する、請求項10〜14のいずれか一項に記載の発現構築物。
- 前記第三のプロモーターが、前記第一のプロモーター、又は前記第二のプロモーターと同じである、請求項15に記載の発現構築物。
- 第一のプロモーターに作動可能に連結された組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第一の発現カセット、及び前記第一のプロモーターとは異なる第二のプロモーターに作動可能に連結された前記組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む第二の発現カセットを有する組換え細胞をタンパク質生産培地中で培養する生産工程を備える、前記組換えタンパク質の製造方法。
- 前記生産工程において、前記組換え細胞を連続培養又は流加培養で培養する、請求項17に記載の製造方法。
- 前記生産工程は、発現誘導剤を前記タンパク質生産培地に添加して前記組換えタンパク質の発現誘導を行う発現誘導ステップを含む、請求項17又は18に記載の製造方法。
- 前記生産工程は、発現誘導剤を前記タンパク質生産培地に添加して前記組換えタンパク質の発現誘導を行った後、9時間以上培養を行うことを含む、請求項17〜19のいずれか一項に記載の製造方法。
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05292972A (ja) * | 1991-07-29 | 1993-11-09 | Tonen Corp | 改良された酵母発現系 |
JP2010527239A (ja) * | 2007-05-17 | 2010-08-12 | ベーリンガー インゲルハイム エルツェーファウ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディトゲゼルシャフト | 組換えタンパク質を工業規模で製造する方法 |
US20150284729A1 (en) * | 2012-11-15 | 2015-10-08 | National University Of Singapore | Univariant Extrinsic Initiator Control System for Microbes and an In Vitro Assembly of Large Recombinant DNA Molecules From Multiple Components |
WO2015178466A1 (ja) * | 2014-05-21 | 2015-11-26 | 味の素株式会社 | フィブロイン様タンパク質の製造法 |
JP2017520261A (ja) * | 2014-07-09 | 2017-07-27 | ルピン・リミテッド | 二重シストロン細菌発現システム |
-
2019
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05292972A (ja) * | 1991-07-29 | 1993-11-09 | Tonen Corp | 改良された酵母発現系 |
JP2010527239A (ja) * | 2007-05-17 | 2010-08-12 | ベーリンガー インゲルハイム エルツェーファウ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディトゲゼルシャフト | 組換えタンパク質を工業規模で製造する方法 |
US20150284729A1 (en) * | 2012-11-15 | 2015-10-08 | National University Of Singapore | Univariant Extrinsic Initiator Control System for Microbes and an In Vitro Assembly of Large Recombinant DNA Molecules From Multiple Components |
WO2015178466A1 (ja) * | 2014-05-21 | 2015-11-26 | 味の素株式会社 | フィブロイン様タンパク質の製造法 |
JP2017520261A (ja) * | 2014-07-09 | 2017-07-27 | ルピン・リミテッド | 二重シストロン細菌発現システム |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
FRANCISCO-JOSE MORALEJO ET AL.: "Thaumatin Production in Aspergillus awamori by Use of Expression Cassettes with Strong F", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 65(3), JPN6022048378, 31 December 1999 (1999-12-31), pages 1168 - 1174, ISSN: 0005051100 * |
MOHAMMAD HOSSEIN ETEMADZADEH ET AL.: "Isolation, cloning, and expression of E. coli BirA gene for biotinylation applications", ADVANCED BIOMEDICAL RESEARCH, vol. 4, JPN7022005341, 31 December 2015 (2015-12-31), pages 149, ISSN: 0005051099 * |
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