JP2020114881A - 親ホモ二量体抗体種からのヘテロ二量体多重特異性抗体の精製方法 - Google Patents
親ホモ二量体抗体種からのヘテロ二量体多重特異性抗体の精製方法 Download PDFInfo
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Abstract
Description
本出願は、2015年4月10日に出願された米国仮特許出願第62/146,116号、及び2015年10月30日に出願された米国仮特許出願第62/249,180号の利益を主張し、その内容全体を参照により本明細書に援用する。
本出願はASCII形式で電子提出された配列表を包含し、その全体を参照により本明細書に援用する。ASCIIコピーは、2016年4月7日に作成され、名称が2009186−0170_SL.txtであり、サイズが145,072バイトである。
et al., Br. J. Pharmacol, Vol. 157(2):220−233 (2009)を参照)など、またはそのような断片を含む非天然型との関連では、抗体可変領域(Fv)の相当な多様性により、実質的にあらゆる抗原またはエピトープを認識するFvを生成することが可能となるので、断片ベースの多重特異性体生成の典型的なアプローチは新しい可変領域の導入である。そのような断片には全長抗体の複雑な四次構造がないので、可変軽鎖及び重鎖は単一の遺伝子コンストラクト中で連結することができる。多くの場合、これらの型は細菌中で高度に発現させることができ、小さなサイズゆえに好ましい透過性という利点を有し得るが、インビボで急速に排泄され、生産及び安定性に関して製造上の障害を提示し得る。これらの欠点の主な原因は、抗体断片は一般に抗体の定常領域を欠き、それに関連する機能的特性、例えば、大きなサイズ、高い安定性、ならびに血清中で長い半減期を維持する(すなわち胎児性Fc受容体FcRn)、または精製のための結合部位の役割を果たす(すなわちプロテインA及びプロテインG)様々なFc受容体及びリガンドへの結合性などを欠くことである。
13[5]:361−367;米国特許出願第09/865,198号;Shen et al., 2006, J Biol Chem 281[16]:10706−10714;Lu et al., 2005, J Biol Chem 280[20]:19665−19672;PCT/US2005/025472(WO 2006/020258として公開))。
単独で、または本明細書に開示の任意の他の実施形態と組み合わせて用いられ得るある実施形態において、本発明は、目的の多重特異性抗体(MAI)の精製方法であって、MAIが第1重鎖(HC)可変領域を含む第1重鎖ポリペプチド及び第2HC可変領域を含む第2重鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体を含み、第1及び第2可変領域が異なる抗原特異性及び異なる等電点を有し、
i)MAI、第1重鎖ポリペプチドの少なくとも1つのコピーまたは第1重鎖ポリペプチドの少なくとも2つのコピーのいずれかを含む第1親ホモ二量体抗体種、及び第2重鎖ポリペプチドの少なくとも1つのコピーまたは第2重鎖ポリペプチドの少なくとも2つのコピーのいずれかを含む第2親ホモ二量体抗体種を含む組成物を入手すること;ならびに
ii)MAIを第1及び第2親ホモ二量体抗体種から分離するクロマトグラフィーを実施すること;
を含み、
それによってMAIを精製する方法を提供する。単独で、または本明細書に開示の任意の他の実施形態と組み合わせて用いられ得るある実施形態において、実施ステップii)は組成物をクロマトグラフィー材料と接触させて組成物−クロマトグラフィー材料複合物を形成すること;ならびに
pH依存的にMAI及び親ホモ二量体抗体種を溶出可能な溶離液のサンプルとクロマトグラフィー材料−組成物複合物を接触させる溶出ステップを実施すること;
を含む。ある実施形態において、異なる等電点は実際の等電点である。ある他の実施形態において、異なる等電点は計算等電点である。
組成物−クロマトグラフィー材料複合物;
のいずれかを調製または平衡化することをさらに含む。
次の緩衝剤:Nシクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、3−(N−モルホリニル)−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、酢酸、及びギ酸の
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;
少なくとも6つ;
少なくとも7つ;もしくは
8つ;または
次の緩衝剤:メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンの
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;もしくは
少なくとも6つ;
のいずれかを含む。
単独で、または本明細書に開示の任意の他の実施形態と組み合わせて用いられ得るある実施形態において、溶離液は
(i)CAPS、CHES、TAPS、HEPPSO、MOPSO、MES、酢酸、ギ酸、及び塩;または
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩;
のいずれかを含む。
次の緩衝剤:Nシクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、3−(N−モルホリニル)−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、酢酸、及びギ酸の
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;
少なくとも6つ;
少なくとも7つ;または
8つ;
を含むが、
ただし、溶離液は次のイミダゾール;ピペラジン;トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)のいずれも含まない。
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩のいずれかから本質的になる。
(i)CAPS、CHES、TAPS、HEPPSO、MOPSO、MES、酢酸、ギ酸;及び塩;または
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩;
のいずれかからなる。
Sepharose FF、UNOshere S、Macro−Prep High
S、DEAE、Mono S、Mono S 5/50 GL、Mono Q、Mono Q 5/50 GL、Mono S 10/100 GL、SP Sepharose HP、Source 30S、Poros XQ、Poros HQ、Q HP、及びSource 30Qからなる群から選択されるクロマトグラフィー材料を用いることをさらに含む。
5/50 GL、Mono Q、Mono Q 5/50 GL、SP Sepharose HP、Source 30S、Poros XQ、Poros HQ、Q HP、及びSource 30Q、及びMono S 10/100 GLから選択される。
Se HiCap、Fractogel S03、Fractogel COO、ProPac WCX−10及びProPac WCX−10HTが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、カチオン交換材料はPoros HS50である。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、Poros HS樹脂はPoros HS 50μmまたはPoros HS 20μm粒子である。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、カチオン交換クロマトグラフィー材料は、Mono S、SP Sepharose FF、Macro−prep High S、Poros GoPure XS、Poros GoPure HS、Capto SP ImpRes、SP Sepharose HP、及びSourse 30Sからなる群から選択される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、カチオン交換クロマトグラフィー材料は、Mono S、Poros HS、SP Sepharose HP、及びSource 30Sからなる群から選択される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、カチオン交換クロマトグラフィー材料は、Mono S、SP Sepharose HP、及びSource 30Sからなる群から選択される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、カチオン交換クロマトグラフィー材料は、Mono S、Poros HS、及びSource 30Sからなる群から選択される。
30Q、Mustang Q、Q Sepharose FF、Dionex ProPac 10 SAX及びTosoh GSKgel Q STAT 7 μΜ WAXならびにDEAE Sepharoseが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、アニオン交換クロマトグラフィー材料は、Mono Q、Poros XQ、Poros HQ、Capto Q ImpRes、Q HP、及びSource 30Qからなる群から選択される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態において、アニオン交換クロマトグラフィー材料は、Mono Q、Sourse 30Q、及びQ HPからなる群から選択される。多モードイオン交換クロマトグラフィー材料の例はCapto MMCである。
Press, N.Y. (1989))を参照。
CDR2の残基52の後の単一のアミノ酸挿入(Kabatによると52a)ならびに重鎖FR残基82の後の挿入残基(例えば、Kabatによると残基82a、82b、及び82cなど)を含み得る。残基のKabat番号付けは、所与の抗体について、抗体の配列の相同な領域における「標準」Kabat番号付け配列とのアラインメントによって決定され得る。
Science 239:1534−1536に記載されている。最初の移植コンストラクトで失われたアフィニティーを取り戻すために、選択したアクセプターフレームワーク残基の対応するドナー残基への「復帰突然変異」が必要とされることが多い(例えば米国特許第5,693,762号を参照)。ヒト化抗体は、任意により免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含むことになり、そのため、典型的にはヒトFc領域を含むことになるであろう。非ヒト抗体をヒト化、再形成、及び再表面形成する様々な技術及び方法が当該技術分野において公知である(Tsurushita & Vasquez, 2004, Humanization of Monoclonal Antibodies, Molecular Biology of B Cells, 533−545, Elsevier Science (USA)、及びそこに引用されている参照文献を参照)。ある変形形態において、Lazar et al., 2007, Mol Immunol 44:1986−1998及び2004年12月3日に出願された「Methods of Generating
Variant Proteins with Increased Host String Content and Compositions Thereof」という名称の米国特許出願第11/004,590号に記載されている方法を用いて抗体の免疫原性を減少させる。
Biol, 2008, 86: 111;Collins et al, Immunogenetics, 2008, DOI 10.1007/s00251− 008−0325−z(オンラインで公開)、それぞれ全体を参照により援用する)、こうした対立遺伝子バリアントの代表的なシャーシ、CDR(例えばCDRH3)及び定常領域も本発明に包含される。いくつかの実施形態において、特定の実施形態において用いられる対立遺伝子バリアント(複数可)は、異なる患者集団に存在する対立遺伝子変異に基づいて、例えば、こうした患者集団において非免疫原性である抗体を同定するために選択され得る。ある実施形態において、本発明の抗体の免疫原性は、患者集団の主要組織適合性複合体(MHC)遺伝子における対立遺伝子変異に依存し得る。そのような対立遺伝子変異は本発明のライブラリーの設計においても考慮され得る。本発明のある実施形態において、シャーシ及び定常領域はベクター上に含まれ、相同組換えによってCDR3領域がそれらの間に導入される。いくつかの実施形態において、1つ、2つまたは3つのヌクレオチドは重鎖シャーシに従い、部分的な(1つもしくは2つの場合)または完全な(3つの場合)コドンのいずれかを形成し得る。完全なコドンが存在する場合、これらのヌクレオチドは、「テール」と呼ばれ、95位を占めるアミノ酸残基をコードする。
Clin. Immunogenet., 1999, 16: 234;Tomlinson et al, J. Mol. Biol, 1992, 227: 799;及びMatsuda et al, J. Exp. Med., 1998, 188: 2151に見出され得る。本発明のある実施形態において、ヒトのレパートリーに見られる可能なV、D、及びJ多様性、ならびに接合多様性(すなわちN1及びN2)を表すカセットが、一本鎖または二本鎖DNAオリゴヌクレオチドとして新規に合成される。例示的なそのような免疫前ライブラリー、ならびにそれを含むポリヌクレオチド配列(及びそれによってコードされるポリペプチド配列)の設計及び組成は、例えば、Lee et al. (Immunogenetics, 2006, 57: 917);Martin et al., Proteins, 1996, 25:130;WO 2009/036379;及びWO 2012/09568にさらに記載されている。
227: 799;及びMatsuda et al, J. Exp. Med.,
1998, 188: 2151に見出され得る。本発明のある実施形態において、ヒトのレパートリーに見られる可能なV、D、及びJ多様性、ならびに接合多様性(すなわちN1及びN2)を表すカセットが、一本鎖または二本鎖DNAオリゴヌクレオチドとして新規に合成される。本発明のある実施形態において、CDR配列をコードするオリゴヌクレオチドカセットが、重鎖または軽鎖シャーシ配列を含有する1つ以上のアクセプターベクターとともに酵母に導入される。哺乳類cDNAまたはmRNAからのプライマーベースのPCR増幅またはテンプレートで誘導されるクローニングのステップは用いない。標準的な相同組換えによって、レシピエント酵母がシャーシ配列(複数可)及び定常領域を含有するアクセプターベクター(複数可)にカセット(例えばCDR3)を組換え、遺伝子的に増殖、発現、ディスプレイ、及びスクリーニングすることができる適切に配列した合成全長ヒト重鎖及び/または軽鎖免疫グロブリンライブラリーが生成される。当業者であれば、アクセプターベクターに含まれるシャーシは、全長ヒト重鎖及び/または軽鎖以外のコンストラクトを生成するように設計することができることを容易に認識するであろう。例えば、本発明のある実施形態において、シャーシは、CDRを含有するオリゴヌクレオチドカセットがアクセプターベクターに組換えられる際に、抗体断片、またはそのサブユニットをコードする配列が生成されるように、抗体断片または抗体断片のサブユニットをコードするポリペプチドの一部をコードするように設計され得る。ある実施形態において、本発明は、約107〜約1020種の抗体メンバーを含む合成免疫前ヒト抗体レパートリーを提供するが、このレパートリーは
(a)選択されたヒト抗体重鎖シャーシ(すなわち、Kabatの定義を用いた重鎖可変領域のアミノ酸1〜94);(b)ヒトIGHD及びIGHJ生殖細胞系配列に基づいて設計されたCDRH3レパートリーであって、以下を含むCDRH3レパートリー:
(i)任意により、1つ以上のテール領域;
(ii)末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ(TdT)の作用によって優先的にコードされ、ヒトB細胞によって機能的に発現されるアミノ酸タイプの20種未満からなる群から選択される約0〜約10アミノ酸を含む1つ以上のN1領域;
(iii)1つ以上の選択されたIGHDセグメントに基づく1つ以上のDHセグメント、及び1つ以上のそのNまたはC末端切断;
(iv)TdTの作用によって優先的にコードされ、ヒトB細胞によって機能的に発現されるアミノ酸の20種未満からなる群から選択される約0〜約10アミノ酸を含む1つ以上のN2領域;ならびに
(v)1つ以上のIGHJセグメントに基づく1つ以上のH3−JHセグメント、及び1つ以上のそのN末端切断(例えばXXWGまで);(c)1つ以上の選択されたヒト抗体κ及び/またはλ軽鎖シャーシ;ならびに
(b)「L」がκまたはλ軽鎖であり得るヒトIGLV及びIGLJ生殖細胞系配列に基づいて設計されたCDRL3レパートリー;
を含む。そのようなライブラリーを調製する手段及び方法は、例えばWO2009036379;WO2012009568;WO2010105256に開示されている。
J. Bacteriol, 1987, 169: 4379、その全体を参照により援用する)などをコードする配列の3’末端にそれぞれ結合させる。これらの遺伝子融合体は、単一のベクターから発現させ、リフォールディングして活性形態に戻ることができるE.coliの細胞周辺腔に分泌させることができるように、ジシストロニックコンストラクトに組み立てられる。(Skerra et al, Biotechnology, 1991, 9: 273、全体を参照により援用する)。例えば、抗体重鎖遺伝子を抗体軽鎖遺伝子と同時に発現させて抗体または抗体断片を産生することができる。
et al., Nature Biotechnology, 2007, 25:
563(その全体を参照により援用する)に記載されているような他の固定化方法によって、抗体を発現及びスクリーニングすることができる。
al., 1996, Protein Engineering 9[7]:617−621;米国特許第5,731,168号;Xie et al., 2005, J
Immunol Methods 296:95−101;Davis et al., 2010, Protein Engineering, Design & Selection 23[4]:195−202;Gunasekaran et al., 2010, J Biol Chem 285[25]:1937−19646;及びPCT/US2009/000071(WO 2009/089004として公開)で提供されている。
CDR2の残基52の後の単一のアミノ酸挿入(Kabatによると52a)ならびに重鎖FR残基82の後の挿入残基(例えば、Kabatによると残基82a、82b、及び82cなど)を含み得る。残基のKabat番号付けは、所与の抗体について、抗体の配列の相同な領域における「標準」Kabat番号付け配列とのアラインメントによって決定され得る。
Science 239:1534−1536に記載されている。最初の移植コンストラクトで失われたアフィニティーを取り戻すために、選択したアクセプターフレームワーク残基の対応するドナー残基への「復帰突然変異」が必要とされることが多い(例えば米国特許第5,693,762号を参照)。ヒト化抗体は、任意により免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含むことになり、そのため、典型的にはヒトFc領域を含むことになるであろう。非ヒト抗体をヒト化、再形成、及び再表面形成する様々な技術及び方法が当該技術分野において公知である(Tsurushita & Vasquez, 2004, Humanization of Monoclonal Antibodies, Molecular Biology of B Cells, 533−545, Elsevier Science (USA)、及びそこに引用されている参照文献を参照)。ある変形形態において、Lazar et al., 2007, Mol Immunol 44:1986−1998及び2004年12月3日に出願された「Methods of Generating
Variant Proteins with Increased Host String Content and Compositions Thereof」という名称の米国特許出願第11/004,590号に記載されている方法を用いて抗体の免疫原性を減少させる。
1996, Annu Rev Cell Dev Biol 12:181−220;Ghetie et al., 2000, Annu Rev Immunol 18:739−76)。このプロセスは、全長分子の大きなサイズに起因する腎臓濾過の防止と相まって、1〜3週間の範囲の好ましい抗体の血清半減期をもたらす。FcのFcRnへの結合は抗体輸送においても重要な役割を果たす。Fc上のFcRnの結合部位は細菌プロテインA及びGが結合する部位でもある。これらのタンパク質による強固な結合は典型的に、タンパク質精製時にプロテインAまたはプロテインGアフィニティークロマトグラフィーを用いることによって抗体を精製する手段として利用される。これらの領域、補体及びFcRn/プロテインA結合領域の忠実度は、抗体の臨床的特性及びその開発の両方にとって重要である。
2010, Protein Engineering, Design & Selection 23[4]:195−202;Gunasekaran et al.,
2010, J Biol Chem 285[25]:1937−19646;及びPCT/US2009/000071(WO 2009/089004として公開)で提供されている。
J. Biol. Chem. 279(8): 6213−6216, Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346−356)、256A、272A、286A、305A、307A、307Q、311A、312A、376A、378Q、380A、382A、434A(Shields et al, Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591−6604)、252F、252T、252Y、252W、254T、256S、256R、256Q、256E、256D、256T、309P、311S、433R、433S、433I、433P、433Q、434H、434F、434Y、252Y/254T/256E、433K/434F/436H、308T/309P/311S(Dall’ Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171−5180, Dall’Acqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514−23524)が挙げられるが、これらに限定されない。FcRn結合性を調節するための他の改変は、Yeung et
al., 2010, J Immunol, 182:7663−7671に記載されている。
Nature Biotech. 17:176−180)。
et al., 1999, Nat Biotechnol 17:176−180;Davies et al., 2001, Biotechnol Bioeng 74:288−294;Shields et al., 2002, J Biol Chem 277:26733−26740;Shinkawa et al., 2003, J Biol Chem 278:3466−3473;米国特許出願第12/434,533号)。これらの技術は、例えば、組換えのもしくは組換えでない様々な生物もしくは細胞株(例えばLec−13 CHO細胞もしくはラットハイブリドーマYB2/0細胞)でIgGを発現させることによって、グリコシル化経路に関与する酵素(例えばFUT8[α−1,6−フコシルトランスフェラーゼ]及び/またはβ1−4−N−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIII[GnTIII])を抑制することによって、IgGが発現した後で炭水化物(複数可)を改変することによって、または酵素阻害剤としてのフコースアナログの存在下で抗体を発現させることによって、Fc領域に共有結合されるフコシル化及び/またはバイセクティングオリゴ糖のレベルを制御する。本明細書に開示する本発明の目的の多重特異性抗体の糖型を改変するための他の方法としては、糖鎖組換え系統の酵母(Li et al., 2006, Nature Biotechnology 24(2):210−215)、蘚類(Nechansky et al., 2007, Mol Immunol 44(7):1826−8)、及び植物(Cox et al., 2006, Nat Biotechnol 24(12):1591−7)を用いることが挙げられる。改変糖型を生成するための特定の方法の使用は、実施形態をその方法に制限することを意図するものではない。むしろ、本明細書に開示の実施形態は、どのように生成されるかにかかわらず、改変糖型を有する本発明の目的の多重特異性抗体を包含する。
Harbor Laboratory Press, New York, 2001)、及びCurrent Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons)に記載されている。本明細書に開示する本発明の目的の多重特異性抗体をコードするDNAを効率的に生成するために用いられ得る様々な技術が存在する。そのような方法としては、遺伝子アセンブリ法、PCRベースの方法及びPCRの変形形態を用いる方法、リガーゼ連鎖反応ベースの方法、プール化オリゴ法、例えば合成シャッフリング、誤りがちな増幅法及びランダム変異でオリゴを用いる方法に用いられるものなど、古典的部位特異的変異誘発法、カセット変異誘発、ならびに他の増幅及び遺伝子合成法が挙げられるが、これらに限定されない。当該技術分野において公知のように、遺伝子アセンブリ、変異誘発、ベクターサブクローニングなどのための様々な市販のキット及び方法が存在し、そのような市販品は本発明の目的の多重特異性抗体をコードする核酸の生成に有用となる。
実施形態1.目的の多重特異性抗体(MAI)の精製方法であって、前記MAIが第1重鎖(HC)可変領域を含む第1重鎖ポリペプチド及び第2HC可変領域を含む第2重鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体を含み、前記第1及び前記第2可変領域が異なる抗原特異性及び異なる等電点を有し、
i)前記MAI、前記第1重鎖ポリペプチドの少なくとも1つのコピーまたは前記第1重鎖ポリペプチドの少なくとも2つのコピーのいずれかを含む第1親ホモ二量体抗体種、及び前記第2重鎖ポリペプチドの少なくとも1つのコピーまたは前記第2重鎖ポリペプチドの少なくとも2つのコピーのいずれかを含む第2親ホモ二量体抗体種を含む組成物を入手すること;ならびに
ii)前記MAIを前記第1及び前記第2親ホモ二量体抗体種から分離するクロマトグラフィーを実施すること;
を含み、
それによって前記MAIを精製する前記方法。
前記組成物をクロマトグラフィー材料と接触させて組成物−クロマトグラフィー材料複合物を形成すること;ならびに
pH依存的に前記MAI及び親ホモ二量体抗体種を溶出可能な溶離液のサンプルと前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を接触させる溶出ステップを実施すること;
を含む、実施形態1に記載の方法。
前記組成物;または
前記組成物−クロマトグラフィー材料複合物;
のいずれかを調製または平衡化することをさらに含む、実施形態2または実施形態3に記載の方法。
(i)リニアpH勾配段階の前のステップpH勾配段階;
(ii)リニア勾配段階の後のステップpH勾配段階;
(iii)ステップpH勾配段階を伴わないリニアpH勾配段階、少なくとも1つのリニアpH勾配段階;または
(iv)実質的にリニアなpH勾配段階;
を含む、実施形態2〜6のいずれか1項に記載の方法。
次の緩衝剤:Nシクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、3−(N−モルホリニル)−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、酢酸、及びギ酸の
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;
少なくとも6つ;
少なくとも7つ;もしくは
8つ;または
次の緩衝剤:メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンの
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;もしくは
少なくとも6つ;
のいずれかを含む、実施形態2〜8のいずれか1項に記載の方法。
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンのいずれかを含む、実施形態2〜9のいずれか1項に記載の方法。
次の緩衝剤:Nシクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、3−(N−モルホリニル)−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、酢酸、及びギ酸の
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;
少なくとも6つ;
少なくとも7つ;もしくは
8つ;
を含むが、
ただし、前記溶離液が次のイミダゾール;ピペラジン;トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)のいずれも含まない、実施形態2〜10のいずれか1項に記載の方法。
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩から本質的になる、実施形態2〜11のいずれか1項に記載の方法。
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩ならびに任意により少なくとも1つの塩からなる、実施形態2〜12のいずれか1項に記載の方法。
b.前記第1親ホモ二量体種の実際の等電点及び前記第2親ホモ二量体種の実際の等電点の差が、7.0pH単位未満;6.5pH単位未満;6.0pH単位未満;5.5pH単位未満;5.0pH単位未満;4.5pH単位未満;4.0単位未満;3.5pH単位未満;2.5pH単位未満;2.4pH単位未満;2.3pH単位未満;2.2pH単位未満;2.1pH単位未満;2.0pH単位未満;1.9pH単位未満;1.8pH単位未満;1.7pH単位未満;1.6pH単位未満;1.5pH単位未満;1.4pH単位未満;1.3pH単位未満、1.2pH単位未満;1.1pH単位未満;1.0pH単位未満;0.95pH単位未満;0.90pH単位未満;0.85pH単位未満;0.80pH単位未満;0.75pH単位未満;0.70pH単位未満;0.65pH単位未満;0.60pH単位未満;0.55pH単位未満;0.50pH単位未満;0.45pH単位未満;0.40pH単位未満;0.35pH単位未満;0.30pH単位未満;0.25pH単位未満;0.20pH単位未満;0.15pH単位未満;0.14pH単位未満;0.13pH単位未満;0.12pH単位未満;0.11pH単位未満;0.10pH単位未満;0.09pH単位未満;0.08pH単位未満;0.07pH単位未満;0.06pH単位未満;0.04pH単位未満;0.03pH単位未満;0.025pH単位未満;0.02pH単位未満;もしくは前述の値のいずれかの間のpH値であるか;
c.前記第1重鎖ポリペプチドの計算等電点及び前記第2重鎖ポリペプチドの計算等電点の差が、7.0pH単位未満;6.5pH単位未満;6.0pH単位未満;5.5pH単位未満;5.0pH単位未満;4.5pH単位未満;4.0単位未満;3.5pH単位未満;2.5pH単位未満;2.4pH単位未満;2.3pH単位未満;2.2pH単位未満;2.1pH単位未満;2.0pH単位未満;1.9pH単位未満;1.8pH単位未満;1.7pH単位未満;1.6pH単位未満;1.5pH単位未満;1.4pH単位未満;1.3pH単位未満、1.2pH単位未満;1.1pH単位未満;1.0pH単位未満;0.95pH単位未満;0.90pH単位未満;0.85pH単位未満;0.80pH単位未満;0.75pH単位未満;0.70pH単位未満;0.65pH単位未満;0.60pH単位未満;0.55pH単位未満;0.50pH単位未満;0.45pH単位未満;0.40pH単位未満;0.35pH単位未満;0.30pH単位未満;0.25pH単位未満;0.20pH単位未満;0.15pH単位未満;0.14pH単位未満;0.13pH単位未満;0.12pH単位未満;0.11pH単位未満;0.10pH単位未満;0.09pH単位未満;0.08pH単位未満;0.07pH単位未満;0.06pH単位未満;0.04pH単位未満;0.03pH単位未満;0.025pH単位未満;0.02pH単位未満;もしくは前述の値のいずれかの間のpH値であるか;または
d.前記第1親ホモ二量体種の計算等電点及び前記第2親ホモ二量体種の計算等電点の差が、7.0pH単位未満;6.5pH単位未満;6.0pH単位未満;5.5pH単位未満;5.0pH単位未満;4.5pH単位未満;4.0単位未満;3.5pH単位未満;2.5pH単位未満;2.4pH単位未満;2.3pH単位未満;2.2pH単位未満;2.1pH単位未満;2.0pH単位未満;1.9pH単位未満;1.8pH単位未満;1.7pH単位未満;1.6pH単位未満;1.5pH単位未満;1.4pH単位未満;1.3pH単位未満、1.2pH単位未満;1.1pH単位未満;1.0pH単位未満;0.95pH単位未満;0.90pH単位未満;0.85pH単位未満;0.80pH単位未満;0.75pH単位未満;0.70pH単位未満;0.65pH単位未満;0.60pH単位未満;0.55pH単位未満;0.50pH単位未満;0.45pH単位未満;0.40pH単位未満;0.35pH単位未満;0.30pH単位未満;0.25pH単位未満;0.20pH単位未満;0.15pH単位未満;0.14pH単位未満;0.13pH単位未満;0.12pH単位未満;0.11pH単位未満;0.10pH単位未満;0.09pH単位未満;0.08pH単位未満;0.07pH単位未満;0.06pH単位未満;0.04pH単位未満;0.03pH単位未満;0.025pH単位未満;0.02pH単位未満;もしくは前述の値のいずれかの間のpH値であるか;
のいずれかである、実施形態1〜17のいずれか1項に記載の方法。
GoPure HS、Poros GoPure XS、SP−Sepharose XL (SPXL)、CM Sepharose Fast Flow、Capto Q
ImpRes、Capto SP ImpRes、Capto S、Capto MMC、Fractogel Se HiCap、Fractogel S03、Fractogel COO、Poros HQ 50、Poros PI 50、Poros D、Mustang Q、Q Sepharose FF、SP Sepharose FF、UNOshere S、Macro−Prep High S、DEAE、Mono
S、Mono S 5/50 GL、Mono Q、Mono Q 5/50 GL、Mono S 10/100 GL、SP Sepharose HP、Source 30S、Poros XQ、Poros HQ、Q HP、及びSource 30Qからなる群から選択されるクロマトグラフィー材料を用いることをさらに含む、実施形態1〜41のいずれか1項に記載の方法。
Mono S、Mono S 5/50 GL、Mono Q、Mono Q 5/50
GL、SP Sepharose HP、Source 30S、Poros XQ、Poros HQ、Q HP、及びSource 30Q、及びMono S 10/100 GLからなる群から選択される、実施形態2〜45のいずれか1項に記載の方法。
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩;
のいずれかを含むイオン交換溶離液。
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩;
のいずれかから本質的になるイオン交換溶離液。
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩;
のいずれかからなるイオン交換溶離液。
実施例で提供するすべてのクロマトグラフィー分離は、各クロマトグラフィー実験中のインラインpHモニタリングを可能とする一体型pH電極を備えたコンピュータ制御AKTA avant 150調製用クロマトグラフィーシステム(GE Healthcare Life Sciences)で実施した。Mono S 5/50 GL、Mono Q 5/50 GL、及びMono S 10/100 GLカラムはそれぞれGE Healthcare Life Sciencesから購入した。すべての他のカラムは、図26A及び26Bのそれぞれの「樹脂」という表題の列に記載の提供業者から購入した。酢酸及び塩化ナトリウムはVWRから入手し、CAPS、MOPSO、及びTAPSはSigmaから入手し、CHES及びギ酸はEMDから入手し、HEPPSOはMP Biomedicalsから入手し、MESはCalbiochemから入手した。メチルアミン(H2O中40%)、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、及びヒドロキシルアミン(H2O中50%)はSigmaから購入し、ビス−トリスはAffymetrixから購入し、塩化ナトリウムはVWRから購入した。pH勾配形成溶液は、緩衝剤を水に溶解させ、溶液を二等分することによって、各実験の前に新たに調製した。別途注記のない限り、溶離液組成物は図1に記載した通りとした。次に、水酸化ナトリウムを用いて半分をpH4(バッファーA)に調整し、一方で、もう半分は同様に水酸化ナトリウムを用いてpH11(バッファーB)に調整した。
5/50 GL、Mono Q 5/50 GL、及び下記の実施例で用いたすべての他の同様のサイズのカラムに対して)または約5mg〜10mg(Mono S 10/100カラム及び下記の実施例で用いたすべての他の同様のサイズのカラムに対して)を開始pHバッファー中にバッファー交換し、0.2μmフィルターに通して濾過した。各分離の前に、カラムを10カラム体積の開始バッファー(バッファーA、バッファーB、またはバッファーA及びバッファーBの適切な混合物のいずれか)で平衡化した。その後、キャピラリーループを介してカラム上にタンパク質組成物を添加し、カラムを別の10カラム体積の開始バッファーで洗浄して未結合物質を除去した。続いて、バッファーA及びバッファーBの適切な混合物でできた20カラム体積のリニアpH勾配を、共通軽鎖二重特異性抗体混合物の分離に用いた。あるいは、15カラム体積のステップ溶出を実施した後、バッファーA及びBの浅めの勾配を用いて溶出した。
実施例1〜9及び実施例14で試験した組成物は以下の抗体種を含んでいた。
IgG1アイソタイプ型の第1重鎖ポリペプチド、IgG1アイソタイプ型の第2重鎖ポリペプチド、及びアミノ酸配列が同一の2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、第1重鎖ポリペプチド及び第2重鎖ポリペプチドの可変領域が、異なるアミノ酸配列及び異なる抗原特異性を有していた(そのため、第1及び第2重鎖ポリペプチド可変領域のそれぞれと軽鎖ポリペプチド(すなわち「共通軽鎖」)の2つのコピーのうちの1つとの各対合によって形成された抗原結合領域が、2つの異なる抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG1アイソタイプ型のMAI;
2コピーの第1重鎖ポリペプチド及び上記の1)と同様な2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、1コピーの第1重鎖ポリペプチド及び1コピーの軽鎖ポリペプチドの対合によって形成された抗原結合領域が単一抗原特異性を有する(そのため、重鎖ポリペプチドの各コピーと軽鎖ポリペプチドの各コピーとの対合によって形成された抗原結合領域がそれぞれ同じ単一抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG1アイソタイプ型の第1親重鎖ホモ二量体抗体種;ならびに
2コピーの第2重鎖ポリペプチド及び上記の1)と同様な2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、1コピーの第2重鎖ポリペプチド及び1コピーの軽鎖ポリペプチドの対合によって形成された抗原結合領域が単一抗原特異性を有する(そのため、第2重鎖ポリペプチドの各コピーと軽鎖ポリペプチドの各コピーとの対合によって形成された抗原結合領域がそれぞれ同じ単一抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG1アイソタイプ型の第2親重鎖ホモ二量体抗体種。
IgG4アイソタイプ型の第1重鎖ポリペプチド、IgG4アイソタイプ型の第2重鎖ポリペプチド、及びアミノ酸配列が同一の2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、第1重鎖ポリペプチド及び第2重鎖ポリペプチドの可変領域が、異なるアミノ酸配列及び異なる抗原特異性を有していた(そのため、第1及び第2重鎖ポリペプチド可変領域のそれぞれと軽鎖ポリペプチド(すなわち「共通軽鎖」)の2つのコピーのうちの1つとの各対合によって形成された抗原結合領域が、2つの異なる抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG4アイソタイプ型のMAI;
2コピーの第1重鎖ポリペプチド及び上記の1)と同様な2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、1コピーの第1重鎖ポリペプチド及び1コピーの軽鎖ポリペプチドの対合によって形成された抗原結合領域が単一抗原特異性を有する(そのため、重鎖ポリペプチドの各コピーと軽鎖ポリペプチドの各コピーとの対合によって形成された抗原結合領域がそれぞれ同じ単一抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG4アイソタイプ型の第1親重鎖ホモ二量体抗体種;ならびに
IgG1アイソタイプ型の第1重鎖ポリペプチド、IgG4アイソタイプ型の第2重鎖ポリペプチド、及びアミノ酸配列が同一の2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、第1重鎖ポリペプチド及び第2重鎖ポリペプチドの可変領域が、異なるアミノ酸配列及び異なる抗原特異性を有していた(そのため、第1及び第2重鎖ポリペプチド重鎖可変領域のそれぞれと軽鎖ポリペプチド(すなわち「共通軽鎖」)の2つのコピーのうちの1つとの各対合によって形成された抗原結合領域が、2つの異なる抗原特異性を有していた)ハイブリッドIgG1/IgG4型のMAI(天然ヒトIgG1アイソタイプ型/ヒト天然IgG4アイソタイプ型);
2コピーの第1重鎖ポリペプチド及び上記の1)と同様な2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、1コピーの第1重鎖ポリペプチド及び1コピーの軽鎖ポリペプチドの対合によって形成された抗原結合領域が単一抗原特異性を有する(そのため、重鎖ポリペプチドの各コピーと軽鎖ポリペプチドの各コピーとの対合によって形成された抗原結合領域がそれぞれ同じ単一抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG1アイソタイプ型の第1親重鎖ホモ二量体抗体種;ならびに
2コピーの第2重鎖ポリペプチド及び上記の1)と同様な2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、1コピーの第2重鎖ポリペプチド及び1コピーの軽鎖ポリペプチドの対合によって形成された抗原結合領域が単一抗原特異性を有する(そのため、第2重鎖ポリペプチドの各コピーと軽鎖ポリペプチドの各コピーとの対合によって形成された抗原結合領域がそれぞれ同じ単一抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG4アイソタイプ型の第2親重鎖ホモ二量体抗体種。
IgG4アイソタイプ型の第1重鎖ポリペプチド、IgG4アイソタイプ型の第2重鎖ポリペプチド、第2重鎖ポリペプチドとの二量体化と比較して第1重鎖ポリペプチドとの優先的な二量体化に有利となるように、第1組換えヘテロ二量体化モチーフが導入された1コピーの第1軽鎖ポリペプチドアミノ酸配列、及び第1重鎖ポリペプチドとの二量体化と比較して第2重鎖ポリペプチドとの優先的な二量体化に有利となるように、第2組換えヘテロ二量体化モチーフが導入された1コピーの第2軽鎖ポリペプチドアミノ酸配列を含み、第1重ポリペプチド及び第2重ポリペプチドの可変領域が異なるアミノ酸配列及び異なる抗原特異性を有していた(そのため、第1重鎖ポリペプチド重鎖可変領域と第1軽鎖ポリペプチドとの各対合によって形成された抗原結合領域が、第2重鎖ポリペプチド重鎖可変領域と第2軽鎖ポリペプチドとの対合によって形成された抗原結合領域とは異なる特異性を有していた)天然ヒトIgG4アイソタイプ型のMAI;
2コピーの第1重鎖ポリペプチド及び上記の1)と同様な2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、1コピーの重鎖ポリペプチド及び1コピーの軽鎖ポリペプチドの対合によって形成された抗原結合領域が単一抗原特異性を有する(そのため、重鎖ポリペプチドの各コピーと軽鎖ポリペプチドの各コピーとの対合によって形成された抗原結合領域がそれぞれ同じ単一抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG4アイソタイプ型の第1親重鎖ホモ二量体抗体種;ならびに
2コピーの第2重鎖ポリペプチド及び上記の1)と同様な2コピーの軽鎖ポリペプチドを含み、1コピーの第2重鎖ポリペプチド及び1コピーの軽鎖ポリペプチドの対合によって形成された抗原結合領域が単一抗原特異性を有する(そのため、第2重鎖ポリペプチドの各コピーと軽鎖ポリペプチドの各コピーとの対合によって形成された抗原結合領域がそれぞれ同じ単一抗原特異性を有していた)天然ヒトIgG4アイソタイプ型の第2親重鎖ホモ二量体抗体種。
強カチオン交換体Mono S 5/50 GLカラムでリニアpH勾配を用いた、重鎖pI計算値の差が0.68pH単位である(HC1のpI計算値=9.73;HC2のpI計算値=9.05;2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)は1.33pH単位異なっていた)、共通軽鎖IgG1二重特異性ヘテロ二量体(「MAI」)及び2つの異なる親ホモ二量体抗体種のそれぞれ(上記の実施例で試験した組成物及び型のスキームAに記載の型)を含む組成物のリニアpH勾配分離。開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0。最終バッファーB:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0。流量1ml/min、0%B〜100%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。
強カチオン交換体Mono S 5/50 GLカラムまたは強カチオン交換体Mono S 10/100 GLカラムで様々なリニアpH勾配を用いた、重鎖pI計算値の差が0.25pH単位である(HC1のpI計算値=9.46;HC2のpI計算値=9.21;2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)は0.59pH単位異なっていた)、共通軽鎖IgG1二重特異性ヘテロ二量体(「MAI」)及び2つの異なる親ホモ二量体抗体種のそれぞれ(上記の実施例で試験した組成物及び型のスキームAに記載の型)を含む組成物のリニアpH勾配分離。図4A:Mono S 5/50 GLカラム(カラム体積:1mL)での0.228mgの全材料の分離:開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0。最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0。流量1ml/min、0%B〜100%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。図4B:Mono S 5/50 GLカラム(カラムサイズ:1mL)での1.57mgの全材料の分離:開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM
CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0。最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0。流量1ml/min、32.5%B〜55%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。図4C:Mono S
10/100 GLカラム(カラムサイズ:8ml)での8.88mgの全材料の分離:開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0。最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0。流量1ml/min、32.5%B〜55%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。
強カチオン交換体Mono S 10/100 GLカラム及びリニアpH勾配を用いた、開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0及び最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0での、重鎖pI計算値の差が様々な共通軽鎖IgG1二重特異性ヘテロ二量体(「MAI」)及び2つの異なる親ホモ二量体抗体種のそれぞれ(上記の実施例で試験した組成物及び型のスキームAに記載の型)を含む組成物のリニアpH勾配分離。流量1ml/min、32.5%B〜55%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。図5A:重鎖pI計算値の差が0.68単位である(HC1のpI計算値=9.73;HC2のpI計算値=9.05;2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)は1.33pH単位異なっていた)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体。図5B:重鎖pI計算値の差が0.43pH単位である(HC1のpI計算値=9.43;HC2のpI計算値=9.00;2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)は1.33pH単位異なっていた)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体。図5C:重鎖pI計算値の差が0.25単位である(HC1のpI計算値=9.46;HC2のpI計算値=9.21;2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)は0.59pH単位異なっていた)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体。図5D:重鎖pI計算値の差が0.24である(HC1のpI計算値=9.43;HC2のpI計算理論値=9.18;2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)は0.26pH単位異なっていた)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体。図5E:重鎖pI計算理論値の差が0.21である(HC1のpI計算値=9.54;HC2のpI計算値=9.33;2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)は0.38pH単位異なっていた)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体。2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)が0.26pH単位異なる共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体の混合物に対して、強カチオン交換体Mono S 10/100 GLカラムでのベースライン分離及び比較的浅いリニアpH勾配が達成される。したがって、これらの結果は、pI計算値の差が約1.33〜わずか約0.26pH単位であった2つの異なる親ホモ二量体抗体種からMAIが精製されたことを示す。加えて、これらの結果は、親ホモ二量体種の重鎖のpI計算値の差が約0.7pH単位〜わずか約0.26pH単位であった2つの異なる親ホモ二量体抗体種からMAIが精製されたことを示す。
強カチオン交換体Mono S 5/50 GLカラムまたは強カチオン交換体Mono S 10/100 GLカラムで様々なリニアpH勾配を用いた、重鎖pI計算値の差が0.09である(HC1のpI計算値=9.43;HC2のpI計算値=9.33;2つの対応する親ホモ二量体抗体種の計算等電点(pI)は0.10pH単位異なっていた)、共通軽鎖IgG1二重特異性ヘテロ二量体(「MAI」)及び2つの異なる親ホモ二量体抗体種のそれぞれ(上記の実施例で試験した組成物及び型のスキームAに記載の型)を含む組成物のリニアpH勾配分離。図8A:Mono S 5/50 GLカラムでの0.421mgの全材料の分離:開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0。最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM
TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0。流量1ml/min、0%B〜100%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。図8B:Mono S
10/100 GLカラムでの7.57mgの全材料の分離:開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0。最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0。流量1ml/min、35%B〜53%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。図8C:Mono S 10/100 GLカラムでの6.69mgの全材料の分離:開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0。最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0。流量1ml/min、37%B〜43%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。図8Cに示す実験で観察されたMAI回収率は図8Bで観察された回収率と比較して64%増加した。
Mono S 10/100 GL強カチオン交換樹脂及び図3の上部の表に概要を示したバッファー組成物を用いて、共通軽鎖IgG1二重特異性ヘテロ二量体(「MAI」)及び2つの異なる親ホモ二量体抗体種のそれぞれ(上記の実施例で試験した組成物及び型のスキームAに記載の型)を含む組成物のリニアpH勾配分離を、リニア塩勾配を用いた同じ組成物の分離と比較した。簡潔に述べると、開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0。最終バッファーB:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0。流量1ml/min、0%B〜100%Bのリニア勾配形成の長さ20カラム体積。
MAI及び2つの異なる親ホモ二量体抗体種を含む組成物からMAIを分離する能力に、異なる親ホモ二量体抗体種のpI計算値の差が影響を及ぼした程度をさらに調査することが望まれた。
MAI及び2つの異なる親ホモ二量体抗体種を含む組成物からMAIを分離するアニオン交換樹脂の能力を調査することが望まれた。したがって、以下に記載するように分離を実施して、例示的なカチオン交換樹脂の性能を例示的なアニオン交換樹脂の性能と比較した。
親ホモ二量体抗体種のpI計算値の差がより大きいサンプルで、所与のMAI及びその親ホモ二量体抗体種を含む組成物からMAIを分離する能力についてカチオン交換樹脂の性能をアニオン交換樹脂とさらに比較することが望まれた。しかし、この場合、pH勾配は上記の実施例に記載のように調製したが、図10A及び図10Bに示すようにより浅くなる(より狭いpH範囲に及ぶ)ように生成した。したがって、図10Aでは8mL Mono Sカラムを用い、図10Bでは8mL Mono Qカラムを用い、実施例6に記載のように調製され、特徴づけられる、親ホモ二量体抗体種のpI計算値の差がそれぞれ1.33、0.26、0.11、及び0.1であったMAI−親ホモ二量体抗体種組成物を、それぞれ2つの樹脂を用いて試験した。
本開示の方法がプロセススケールの樹脂で適用可能かどうかを判定することが望まれた。したがって、第1段階実験において、親ホモ二量体抗体種のpI計算値の差が1.33及び0.26である組成物を分離する能力について、実施例6に記載のように調製され、特徴づけられる完全pH勾配(すなわちpH4〜pH11)をそれぞれで用いて、一連のカチオン及びアニオン交換樹脂を試験する一連の小スケール(1mLカラム)スカウティング実験を行った。実験の第2段階において、次に第1段階からの3つの最も性能が優れたアニオン交換樹脂及びカチオン交換樹脂を採用し、より大きなカラム(8mL)及びより浅い勾配を用いて、親ホモ二量体抗体種のpI計算値の差がわずか約0.1pH単位であった組成物を分離する3つの最も性能が優れた樹脂の能力を評価した。
強カチオン交換体Mono S 10/100 GLカラム及びリニアpH勾配を用いた、開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0及び最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0での、理論上の重鎖pIの差が様々な共通軽鎖IgG4二重特異性ヘテロ二量体及び親ホモ二量体抗体種(上記の実施例で試験した組成物及び型のスキームBに記載の型)の混合物のリニアpH勾配分離。流量4ml/min。図18A:32%Bの15カラム体積ステップ勾配、続いて32%B〜71%Bの20カラム体積リニア勾配、続いて71%Bの15カラム体積ホールドを用いて、重鎖pI計算理論値の差が1.68である(pI HC1計算理論値=7.05;pI HC2計算理論値=8.73)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体を精製した。図18B:22%Bの15カラム体積ステップ勾配、続いて22%B〜75%Bの20カラム体積リニア勾配、続いて75%Bの15カラム体積ホールドを用いて、重鎖pI計算理論値の差が1.99である(pI HC1計算理論値=6.74;pI HC2計算理論値=8.73)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体を精製した。図18C:25%Bの15カラム体積ステップ勾配、続いて25%B〜83%Bの20カラム体積リニア勾配、続いて83%Bの15カラム体積ホールドを用いて、重鎖pI計算理論値の差が1.77である(pI HC1計算理論値=7.27;pI HC2計算理論値=9.04)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体を精製した。図18D:21%Bの15カラム体積ステップ勾配、続いて21%B〜75%Bの20カラム体積リニア勾配、続いて75%Bの15カラム体積ホールドを用いて、重鎖pI計算理論値の差が1.94である(pI HC1計算理論値=6.74;pI HC2計算理論値=8.68)共通軽鎖二重特異性ホモ二量体及びヘテロ二量体を精製した。
強カチオン交換体Mono S 10/100 GLカラム及びリニアpH勾配を用いた、開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0及び最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0での、理論上の重鎖pIの差が様々な共通軽鎖二重特異性IgG1/IgG4ハイブリッドヘテロ二量体、ならびにIgG1及びIgG4ホモ二量体抗体種(上記の実施例で試験した組成物及び型のスキームCに記載の型)の混合物のリニアpH勾配分離。流量4ml/min。図19A:24.5%Bの15カラム体積ステップ勾配、続いて24.5%B〜51%Bの20カラム体積リニア勾配、続いて51%Bの15カラム体積ホールドを用いて、重鎖pI計算理論値の差が2.2である(pI HC1(IgG4)計算理論値=7.05;pI HC2(IgG1)計算理論値=9.22)共通軽鎖二重特異性IgG1及びIgG4ホモ二量体ならびにIgG1/IgG4ヘテロ二量体を精製した。図19B:24.5%Bの15カラム体積ステップ勾配、続いて24.5%B〜58%Bの20カラム体積リニア勾配、続いて58%Bの15カラム体積ホールドを用いて、重鎖pI計算理論値の差が2.4である(pI HC1(IgG4)計算理論値=7.05;pI HC2(IgG1)計算理論値=9.46)共通軽鎖二重特異性IgG1及びIgG4ホモ二量体ならびにIgG1/IgG4ヘテロ二量体を精製した。IgG1及びIgG4主鎖間のpIの大きな差はヘテロ二量体からのIgG1及びIgG4ホモ二量体の優れた分離につながる。
ある場合において、親ホモ二量体種及び対応するMAI(上記の実施例で試験した組成物及び型のスキームDに記載の型)の2つの異なる混合物のそれぞれの溶出プロファイルを図示する図20A及び20Bに示すように、非常に広い溶出プロファイルが観察された。勾配及び溶離液組成物は実施例1〜9に記載の通りであった。図20Aに示す実験において、完全IgGのpI計算理論値の差が1.81である(IgG4ホモ二量体親種AのpI計算理論値=7.41;IgG4ホモ二量体親種BのpI計算理論値=9.22)2つの異なるIgG4ホモ二量体(ホモ二量体親種)及び完全IgG4のpI計算値が8.87である対応するMAIに、強カチオン交換体Mono S 5/50 GLカラム及びリニアpH勾配を用いた、開始バッファーA:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH4.0及び最終バッファー:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH11.0でのカチオン交換クロマトグラフィーを行った。図20Aにあるように第1混合物中の様々な種それぞれの溶出が観察されたpHは、7.30(ホモ二量体親種A)、9.73(ホモ二量体親種B)、及び9.14(MAI(ヘテロ二量体親種))であった。図20Bは、異なるIgG4ホモ二量体親種A及びB(しかし、偶然にも、図20Aに示した親種について計算されたものと同じpI計算理論値を有していた)を用いた同様の実験の結果を示す。図20Bに示したMAIはpI計算値=8.76を有していた。図20Bにあるように第1混合物中の様々な種それぞれの溶出が観察されたpHは、7.43(ホモ二量体親種A)、9.77(ホモ二量体親種B)、及び9.18(MAI(ヘテロ二量体親種))であった。
次に、サンプル混合物のより穏やかな開始pH(例えばより低いpHに対してpH6)及び浅いリニアpH勾配(すなわち、比較的大きな溶離液体積(多数の画分/画分体積)にわたって加えられる勾配)を用いることで、互いに値が非常に近いpI計算値及び/またはpI実験値を有する対応するホモ二量体親種からのMAIの分割及び分離が得られるかどうかを判定することが望まれた。
あるサンプル混合物では、カチオン交換またはアニオン交換いずれも単独ではMAIをホモ二量体親種から満足のいく純度に分離するのに十分でないことが観察された。そうすると、カチオン交換法のMAI溶出ピークに対応する画分をプールしたもの一式に、続けてアニオン交換法を行うことによって、そのようなMAIの分割及び精製が満足いくほどに改善され得るかどうかを評価することが望まれた。各手法は実施例1〜9に記載し、図24に示した通りである。
1,4−ジメチルピペラジン、5.8mMビス−トリス、7.7mMヒドロキシルアミン、及び10mM塩化ナトリウム、pH=8.07でのリニアpH勾配を用いて溶出した。最初のカチオン交換法からのMAIを含有すると推定されるプールの試料の質量分析により、ピークはホモ二量体親種の一方を相当な量含んでいたことが明らかとなった。その後のアニオン交換カラムから溶出したMAIを含有すると推定されるピークの質量分析により、このピークに対応する画分のプールはMAIを含有しており、ホモ二量体親種をいずれも実質的に含んでいないことが明らかとなった。
次に、特定のMAI及び対応するホモ二量体親種の混合物では、異なるバッファー系または溶離液、とりわけ、アニオン交換樹脂での使用のために設計されたものを用いることが有利であり得るかどうか判定することが望まれた。
HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH9.20及び最終バッファーB:15.6mM CAPS、9.4mM CHES、4.6mM TAPS、9.9mM HEPPSO、8.7mM MOPSO、11mM MES、13mM酢酸、9.9mMギ酸、10mM NaCl、pH8.20。図25Aに示す3つのピークすべてを質量分析によって分析し、ピーク組成を確認したところ、図25Aに示した通りに観察された。次に、同じMAI/ホモ二量体親種混合物の別個のアリコートに、以下のアニオン交換バッファー系を用いて、図25Bに示した条件の下でアニオン交換クロマトグラフィーを行った:開始バッファーA:9.8mMメチルアミン、9.1mM 1,2−エタンジアミン、6.4mM 1−メチルピペラジン、13.7mM 1,4−ジメチルピペラジン、5.8mMビス−トリス、7.7mMヒドロキシルアミン、及び10mM塩化ナトリウム、pH=9.34;及び最終バッファーB:9.8mMメチルアミン、9.1mM 1,2−エタンジアミン、6.4mM 1−メチルピペラジン、13.7mM 1,4−ジメチルピペラジン、5.8mMビス−トリス、7.7mMヒドロキシルアミン、及び10mM塩化ナトリウム、pH=7.53。図25Bに示す3つのピークすべてを質量分析によって分析し、ピーク組成を確認したところ、図25Bに示した通りに観察された。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
(項目1)
目的の多重特異性抗体(MAI)の精製方法であって、前記MAIが第1重鎖(HC)可変領域を含む第1重鎖ポリペプチド及び第2HC可変領域を含む第2重鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体を含み、前記第1及び前記第2可変領域が異なる抗原特異性及び異なる等電点を有し、
i)前記MAI、前記第1重鎖ポリペプチドの少なくとも1つのコピーまたは前記第1重鎖ポリペプチドの少なくとも2つのコピーのいずれかを含む第1親ホモ二量体抗体種、及び前記第2重鎖ポリペプチドの少なくとも1つのコピーまたは前記第2重鎖ポリペプチドの少なくとも2つのコピーのいずれかを含む第2親ホモ二量体抗体種を含む組成物を入手すること;ならびに
ii)前記MAIを前記第1及び前記第2親ホモ二量体抗体種から分離するクロマトグラフィーを実施すること;
を含み、
それによって前記MAIを精製する前記方法。
(項目2)
前記実施ステップii)が
a.前記組成物をクロマトグラフィー材料と接触させて組成物−クロマトグラフィー材料複合物を形成すること;ならびに
b.pH依存的に前記MAI及び親ホモ二量体抗体種を溶出可能な溶離液のサンプルと前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を接触させる溶出ステップを実施すること;
を含む、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記溶離液がそれぞれ異なる負対数酸解離定数(pKa)を有する少なくとも2種の緩衝剤を含む、項目2に記載の方法。
(項目4)
前記溶出ステップを実施する前に前記溶離液の第1サンプル中、望ましい開始pHで
i)前記組成物;または
ii)前記組成物−クロマトグラフィー材料複合物;
のいずれかを調製または平衡化することをさらに含む、項目2または項目3に記載の方法。
(項目5)
望ましい終了pHに調製された大量の前記溶離液の第2サンプルを前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物に流すことをさらに含む、項目2〜4のいずれか1項に記載の方法。
(項目6)
前記溶離液が前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を流れるにつれてpH勾配が発生する、項目2〜5のいずれか1項に記載の方法。
(項目7)
前記溶離液が前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を流れるにつれてpH勾配が発生し、前記pH勾配が
(i)リニアpH勾配段階の前のステップpH勾配段階;
(ii)リニア勾配段階の後のステップpH勾配段階;
(iii)ステップpH勾配段階を伴わないリニアpH勾配段階、少なくとも1つのリニアpH勾配段階;または
(iv)実質的にリニアなpH勾配段階;
を含む、項目2〜6のいずれか1項に記載の方法。
(項目8)
前記MAI、前記第1親ホモ二量体抗体種、及び前記第2親ホモ二量体抗体種が実質的に区別可能な溶出体積で前記クロマトグラフィー材料から溶出する、項目2〜7のいずれか1項に記載の方法。
(項目9)
前記溶離液が
次の緩衝剤:Nシクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、3−(N−モルホリニル)−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、酢酸、及びギ酸の
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;
少なくとも6つ;
少なくとも7つ;もしくは
8つ;または
次の緩衝剤:メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンの
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;もしくは
少なくとも6つ;
のいずれかを含む、項目2〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目10)
前記溶離液が(i)CAPS、CHES、TAPS、HEPPSO、MOPSO、MES、酢酸、及びギ酸;または
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンのいずれかを含む、項目2〜9のいずれか1項に記載の方法。
(項目11)
前記溶離液が
次の緩衝剤:Nシクロヘキシル−3−アミノプロパンスルホン酸(CAPS)、N−シクロヘキシル−2−アミノエタンスルホン酸(CHES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(2−ヒドロキシプロパンスルホン酸)(HEPPSO)、3−モルホリノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、3−(N−モルホリニル)−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(MOPSO)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、酢酸、及びギ酸の
少なくとも2つ;
少なくとも3つ;
少なくとも4つ;
少なくとも5つ;
少なくとも6つ;
少なくとも7つ;または
8つ;
を含むが、ただし、前記溶離液が次のイミダゾール;ピペラジン;トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)のいずれも含まない、項目2〜10のいずれか1項に記載の方法。
(項目12)
前記溶離液が(i)CAPS;CHES;TAPS;HEPPSO;MOPSO;MES;酢酸;及びギ酸;ならびに任意により少なくとも1つの塩;または
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩から本質的になる、項目2〜11のいずれか1項に記載の方法。
(項目13)
前記溶離液が(i)CAPS;CHES;TAPS;HEPPSO;MOPSO;MES;酢酸;及びギ酸;ならびに少なくとも1つの塩;または
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩ならびに任意により少なくとも1つの塩からなる、項目2〜12のいずれか1項に記載の方法。
(項目14)
前記溶離液がNaCl、KCl、及びNa2SO4からなる群から選択される少なくとも1つの塩を含む、項目2〜13のいずれか1項に記載の方法。
(項目15)
前記溶離液の各サンプルが0mM〜約100mM;0mM〜約60mM;0mM〜約50mM;0mM〜約40mM;0mM〜約30mM;0mM〜約20mM;0mM〜約10mM;0mM〜約5mM;約10mM〜約200mM;約10mM〜約100mM;約10mM〜約50mM;約10mM〜約40mM;約10mM〜約30mM;約10mM〜約20mM;約20mM〜約200mM;約20mM〜約100mM;約20mM〜約50mM;約20mM〜約30mM;約30mM〜約200mM;約30mM〜約100mM;及び約30mM〜約50mM;ならびに約5mM〜約15mMからなる群から選択される濃度範囲で少なくとも1つの塩を含む、項目2〜14のいずれか1項に記載の方法。
(項目16)
前記溶離液の各サンプルが約10mMの濃度で少なくとも1つの塩を含む、項目2〜15のいずれか1項に記載の方法。
(項目17)
前記溶離液の各サンプルが約10mMの濃度でNaClを含む、項目2〜16のいずれか1項に記載の方法。
(項目18)
a.前記第1重鎖ポリペプチドの実際の等電点及び前記第2重鎖ポリペプチドの実際の等電点の差が、7.0pH単位未満;6.5pH単位未満;6.0pH単位未満;5.5pH単位未満;5.0pH単位未満;4.5pH単位未満;4.0単位未満;3.5pH単位未満;2.5pH単位未満;2.4pH単位未満;2.3pH単位未満;2.2pH単位未満;2.1pH単位未満;2.0pH単位未満;1.9pH単位未満;1.8pH単位未満;1.7pH単位未満;1.6pH単位未満;1.5pH単位未満;1.4pH単位未満;1.3pH単位未満、1.2pH単位未満;1.1pH単位未満;1.0pH単位未満;0.95pH単位未満;0.90pH単位未満;0.85pH単位未満;0.80pH単位未満;0.75pH単位未満;0.70pH単位未満;0.65pH単位未満;0.60pH単位未満;0.55pH単位未満;0.50pH単位未満;0.45pH単位未満;0.40pH単位未満;0.35pH単位未満;0.30pH単位未満;0.25pH単位未満;0.20pH単位未満;0.15pH単位未満;0.14pH単位未満;0.13pH単位未満;0.12pH単位未満;0.11pH単位未満;0.10pH単位未満;0.09pH単位未満;0.08pH単位未満;0.07pH単位未満;0.06pH単位未満;0.04pH単位未満;0.03pH単位未満;0.025pH単位未満;0.02pH単位未満;もしくは前述の値のいずれかの間のpH値であるか;
b.前記第1親ホモ二量体種の実際の等電点及び前記第2親ホモ二量体種の実際の等電点の差が、7.0pH単位未満;6.5pH単位未満;6.0pH単位未満;5.5pH単位未満;5.0pH単位未満;4.5pH単位未満;4.0単位未満;3.5pH単位未満;2.5pH単位未満;2.4pH単位未満;2.3pH単位未満;2.2pH単位未満;2.1pH単位未満;2.0pH単位未満;1.9pH単位未満;1.8pH単位未満;1.7pH単位未満;1.6pH単位未満;1.5pH単位未満;1.4pH単位未満;1.3pH単位未満、1.2pH単位未満;1.1pH単位未満;1.0pH単位未満;0.95pH単位未満;0.90pH単位未満;0.85pH単位未満;0.80pH単位未満;0.75pH単位未満;0.70pH単位未満;0.65pH単位未満;0.60pH単位未満;0.55pH単位未満;0.50pH単位未満;0.45pH単位未満;0.40pH単位未満;0.35pH単位未満;0.30pH単位未満;0.25pH単位未満;0.20pH単位未満;0.15pH単位未満;0.14pH単位未満;0.13pH単位未満;0.12pH単位未満;0.11pH単位未満;0.10pH単位未満;0.09pH単位未満;0.08pH単位未満;0.07pH単位未満;0.06pH単位未満;0.04pH単位未満;0.03pH単位未満;0.025pH単位未満;0.02pH単位未満;もしくは前述の値のいずれかの間のpH値であるか;
c.前記第1重鎖ポリペプチドの計算等電点及び前記第2重鎖ポリペプチドの計算等電点の差が、7.0pH単位未満;6.5pH単位未満;6.0pH単位未満;5.5pH単位未満;5.0pH単位未満;4.5pH単位未満;4.0単位未満;3.5pH単位未満;2.5pH単位未満;2.4pH単位未満;2.3pH単位未満;2.2pH単位未満;2.1pH単位未満;2.0pH単位未満;1.9pH単位未満;1.8pH単位未満;1.7pH単位未満;1.6pH単位未満;1.5pH単位未満;1.4pH単位未満;1.3pH単位未満、1.2pH単位未満;1.1pH単位未満;1.0pH単位未満;0.95pH単位未満;0.90pH単位未満;0.85pH単位未満;0.80pH単位未満;0.75pH単位未満;0.70pH単位未満;0.65pH単位未満;0.60pH単位未満;0.55pH単位未満;0.50pH単位未満;0.45pH単位未満;0.40pH単位未満;0.35pH単位未満;0.30pH単位未満;0.25pH単位未満;0.20pH単位未満;0.15pH単位未満;0.14pH単位未満;0.13pH単位未満;0.12pH単位未満;0.11pH単位未満;0.10pH単位未満;0.09pH単位未満;0.08pH単位未満;0.07pH単位未満;0.06pH単位未満;0.04pH単位未満;0.03pH単位未満;0.025pH単位未満;0.02pH単位未満;もしくは前述の値のいずれかの間のpH値であるか;または
d.前記第1親ホモ二量体種の計算等電点及び前記第2親ホモ二量体種の計算等電点の差が、7.0pH単位未満;6.5pH単位未満;6.0pH単位未満;5.5pH単位未満;5.0pH単位未満;4.5pH単位未満;4.0単位未満;3.5pH単位未満;2.5pH単位未満;2.4pH単位未満;2.3pH単位未満;2.2pH単位未満;2.1pH単位未満;2.0pH単位未満;1.9pH単位未満;1.8pH単位未満;1.7pH単位未満;1.6pH単位未満;1.5pH単位未満;1.4pH単位未満;1.3pH単位未満、1.2pH単位未満;1.1pH単位未満;1.0pH単位未満;0.95pH単位未満;0.90pH単位未満;0.85pH単位未満;0.80pH単位未満;0.75pH単位未満;0.70pH単位未満;0.65pH単位未満;0.60pH単位未満;0.55pH単位未満;0.50pH単位未満;0.45pH単位未満;0.40pH単位未満;0.35pH単位未満;0.30pH単位未満;0.25pH単位未満;0.20pH単位未満;0.15pH単位未満;0.14pH単位未満;0.13pH単位未満;0.12pH単位未満;0.11pH単位未満;0.10pH単位未満;0.09pH単位未満;0.08pH単位未満;0.07pH単位未満;0.06pH単位未満;0.04pH単位未満;0.03pH単位未満;0.025pH単位未満;0.02pH単位未満;もしくは前述の値のいずれかの間のpH値であるか;
のいずれかである、項目1〜17のいずれか1項に記載の方法。
(項目19)
前記望ましい開始pHが、9.0未満;8.5未満;8.0未満;7.5未満;7.0未満;6.5未満;6.0未満;5.5未満;5.0未満;4.5未満;4.0未満;3.5未満;もしくは3.0未満;または前述の値のいずれかの間のpH値である、項目4〜18のいずれか1項に記載の方法。
(項目20)
前記望ましい終了pHが、7.0超;7.5超;8.0超;8.5超;9.0超;9.5超;10.0超;10.5超;もしくは11.0超;11.5超;12.0超;12.5超;13.0超;13.5超;または前述の値のいずれかの間のpH値である、項目5〜19のいずれか1項に記載の方法。
(項目21)
前記溶離液が少なくとも2種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数(pKa)が約3〜11である、項目2〜20のいずれか1項に記載の方法。
(項目22)
前記溶離液が少なくとも2種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数(pKa)が、約3.25〜約3.85;約4.5〜約4.85;約6.0〜約6.45;約6.60〜約7.0;約7.5〜約8.15;約8.35〜約8.55;約9.25〜約9.65;及び約10.00〜約11.5からなる群から選択される範囲にある、項目2〜21のいずれか1項に記載の方法。
(項目23)
前記溶離液が少なくとも2種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数(pKa)が、約3.25〜約3.85;約4.5〜約4.85;約6.0〜約6.45;約6.60〜約7.0;約7.5〜約8.15;約8.35〜約8.55;約9.25〜約9.65;及び約10.00〜約11.5からなる群から選択される異なる範囲にある、項目2〜22のいずれか1項に記載の方法。
(項目24)
前記溶離液が少なくとも2種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数(pKa)が、約3.75;約4.76;約6.10;約6.90;約8.04;約8.44;約9.39;及び約10.50からなる群から選択される、項目2〜23のいずれか1項に記載の方法。
(項目25)
前記MAIが第1軽鎖可変領域を含む第3ポリペプチドをさらに含む、項目1〜24のいずれか1項に記載の方法。
(項目26)
前記MAIが第3ポリペプチド及び第4ポリペプチドをさらに含み、前記第3ポリペプチド及び前記第4ポリペプチドのそれぞれが第2軽鎖可変領域を含む、項目1〜25のいずれか1項に記載の方法。
(項目27)
前記第1軽鎖可変領域及び前記第2軽鎖可変領域が同一である、項目26に記載の方法。
(項目28)
前記第3ポリペプチド及び前記第4ポリペプチドが同一である、項目26または項目27に記載の方法。
(項目29)
前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドそれぞれがFc領域をさらに含む、項目1〜28のいずれか1項に記載の方法。
(項目30)
前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドそれぞれが野生型Fc領域をさらに含む、項目1〜29のいずれか1項に記載の方法。
(項目31)
前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドそれぞれがIgG1アイソタイプFc領域、IgG3アイソタイプFc領域、IgG3アイソタイプFc領域、またはIgG4アイソタイプFc領域をさらに含む、項目1〜30のいずれか1項に記載の方法。
(項目32)
前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドそれぞれがIgG1アイソタイプFc領域をさらに含む、項目1〜31のいずれか1項に記載の方法。
(項目33)
前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドそれぞれが、前記第1親ホモ二量体抗体種、前記第2親ホモ二量体種、または前記MAIのpIを変化させるために改変されてはいないFc領域をさらに含む、項目1〜32のいずれか1項に記載の方法。
(項目34)
前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドそれぞれが、前記第1親ホモ二量体抗体種、前記第2親ホモ二量体種、または前記MAIのpIを変化させるために改変されてはいないIgG1アイソタイプFc領域をさらに含む、項目1〜33のいずれか1項に記載の方法。
(項目35)
前記MAIが天然抗体型であるか;少なくとも前記第1親ホモ二量体抗体種が天然型であるか;少なくとも前記第2親ホモ二量体抗体種が天然型であるか;前記第1親ホモ二量体抗体種が天然型であり、かつ、前記第2親ホモ二量体抗体種が天然型であるか;または前記MAIが天然抗体型であり、前記第1親ホモ二量体抗体種が天然型であり、かつ、前記第2親ホモ二量体抗体種が天然型であるかのいずれかである、項目1〜34のいずれか1項に記載の方法。
(項目36)
前記MAI;前記第1親ホモ二量体抗体種;前記第2親ホモ二量体抗体種;前記第1親ホモ二量体抗体種及び前記第2親ホモ二量体抗体種;または前記MAI、前記第1親ホモ二量体抗体種及び前記第2親ホモ二量体抗体種が、IgG1型、及びIgG2型、及びIgG3型、もしくはIgG4型であるか;またはハイブリッド型であるかのいずれかである、項目1〜35のいずれか1項に記載の方法。
(項目37)
前記クロマトグラフィーが実質的に同じイオン強度で実施される、項目1〜36のいずれか1項に記載の方法。
(項目38)
前記溶離液のイオン強度が前記溶出ステップの間中実質的に同じままである、項目2〜37のいずれか1項に記載の方法。
(項目39)
前記溶離液の前記第1サンプル及び前記溶離液の前記第2サンプルがそれぞれ実質的に同じイオン強度を有する、項目4〜38のいずれか1項に記載の方法。
(項目40)
前記クロマトグラフィーがイオン交換クロマトグラフィーである、項目1〜39のいずれか1項に記載の方法。
(項目41)
前記クロマトグラフィーが、カチオン交換クロマトグラフィー;アニオン交換クロマトグラフィー;多モードクロマトグラフィー;及び混合モードクロマトグラフィーからなる群から選択される、項目1〜40のいずれか1項に記載の方法。
(項目42)
前記クロマトグラフィーが項目2〜41からなる群から選択されるクロマトグラフィー材料を用いることをさらに含み、前記クロマトグラフィー材料が、Mustang S、Sartobind S、S03 Monolith、S Ceramic HyperD、Poros XS、Poros HS50、Poros HS20、HS20、SPSFF、Porors GoPure HS、Poros GoPure XS、SP−Sepharose XL (SPXL)、CM Sepharose Fast Flow、Capto Q ImpRes、Capto SP ImpRes、Capto S、Capto MMC、Fractogel Se HiCap、Fractogel
S03、Fractogel COO、Poros HQ 50、Poros PI 50、Poros D、Mustang Q、Q Sepharose FF、SP Sepharose FF、UNOshere S、Macro−Prep High S、DEAE、Mono S、Mono S 5/50 GL、Mono Q、Mono Q 5/50 GL、Mono S 10/100 GL、SP Sepharose HP、Source 30S、Poros XQ、Poros HQ、Q HP、及びSource 30Qからなる群から選択される、項目1〜41のいずれか1項に記載の方法。
(項目43)
前記クロマトグラフィーが、Mono S、Mono S 5/50 GL、Mono
Q、Mono Q 5/50 GL、SP Sepharose HP、Source
30S、Poros XQ、Poros HQ、Q HP、及びSource 30Q、及びMono S 10/100 GLからなる群から選択されるクロマトグラフィー材料を用いることをさらに含む、項目1〜42のいずれか1項に記載の方法。
(項目44)
前記クロマトグラフィー材料がイオン交換クロマトグラフィー材料である、項目2〜43のいずれか1項に記載の方法。
(項目45)
前記クロマトグラフィー材料が、カチオン交換クロマトグラフィー材料;アニオン交換クロマトグラフィー材料;多モードクロマトグラフィー材料;及び混合モードクロマトグラフィー材料からなる群から選択される、項目2〜44のいずれか1項に記載の方法。
(項目46)
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が
Mustang S、Sartobind S、S03 Monolith、S Ceramic HyperD、Poros XS、Poros HS50、Poros HS20、HS20、SPSFF、Porors GoPure HS、Poros GoPure XS、SP−Sepharose XL (SPXL)、CM Sepharose Fast Flow、Capto Q ImpRes、Capto SP ImpRes、Capto S、Capto MMC、Fractogel Se HiCap、Fractogel S03、Fractogel COO、Poros HQ 50、Poros PI 50、Poros D、Mustang Q、Q Sepharose FF、SP Sepharose FF、UNOshere S、Macro−Prep High S、DEAE、Mono S、Mono S 5/50 GL、Mono Q、Mono Q 5/50 GL、Mono S 10/100 GL、SP Sepharose HP、Source 30S、Poros XQ、Poros HQ、Q HP、及びSource 30Qからなる群から選択されるか;または
Mono S、Mono S 5/50 GL、Mono Q、Mono Q 5/50
GL、SP Sepharose HP、Source 30S、Poros XQ、Poros HQ、Q HP、及びSource 30Q、及びMono S 10/100 GLからなる群から選択される、項目2〜45のいずれか1項に記載の方法。
(項目47)
前記第1重鎖可変領域または前記第2重鎖可変領域のいずれかが、固有の重鎖可変領域を含む第1ライブラリーから第1抗原に対して第1選別を実施することによって得られる、項目1〜46のいずれか1項に記載の方法。
(項目48)
前記第1重鎖可変領域及び前記第2重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第1ライブラリーから第1抗原に対して第1選別を実施することによって得られる、項目1〜47のいずれか1項に記載の方法。
(項目49)
前記第1重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第1ライブラリーから第1抗原に対して第1選別を実施することによって得られ、前記第2重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第2ライブラリーから第2抗原に対して第2選別を実施することによって得られる、項目1〜48のいずれか1項に記載の方法。
(項目50)
前記第1重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第1ライブラリーから第1抗原に対して第1選別を実施することによって得られ、前記第2重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第2ライブラリーから第2抗原に対して第2選別を実施することによって得られる、項目1〜49のいずれか1項に記載の方法。
(項目51)
前記ライブラリーの少なくとも1つが、少なくとも1つの軽鎖をさらに含む、項目1〜50のいずれか1項に記載の方法。
(項目52)
前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドをコードする核酸配列それぞれが導入された原核宿主細胞または真核宿主細胞によって前記組成物が発現される、項目1〜51のいずれか1項に記載の方法。
(項目53)
前記第1ポリペプチド及び前記第2ポリペプチドをコードする核酸配列それぞれが導入された原核宿主細胞または真核宿主細胞によって前記組成物が発現される、項目25〜52のいずれか1項に記載の方法。
(項目54)
前記第1ポリペプチド、前記第2ポリペプチド、前記第3ポリペプチド、及び前記第4ポリペプチドをコードする核酸配列それぞれが導入された原核宿主細胞または真核宿主細胞によって前記組成物が発現される、項目26〜53のいずれか1項に記載の方法。
(項目55)
各コードされたポリペプチドが前記宿主細胞によって発現される、項目52〜54のいずれか1項に記載の方法。
(項目56)
前記組成物が前記宿主細胞によって発現される、項目52〜55のいずれか1項に記載の方法。
(項目57)
実質的にすべての宿主細胞が、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド、及び第4ポリペプチドで形質転換または形質移入されている、項目52〜56のいずれか1項に記載の方法。
(項目58)
実質的にすべての宿主細胞が、前記MAI、前記第1親抗体種及び前記第2親抗体種を発現する、項目52〜57のいずれか1項に記載の方法。
(項目59)
前記宿主細胞が、真核細胞;真菌細胞;酵母細胞;昆虫細胞;哺乳類細胞;Saccharomyces cerevisiae細胞;Pichia pastoris細胞;哺乳類細胞;COS細胞;ヒト胎児腎(HEK)細胞;及びCHO細胞からなる群から選択される、項目52〜58のいずれか1項に記載の方法。
(項目60)
(i)CAPS、CHES、TAPS、HEPPSO、MOPSO、MES、酢酸、ギ酸、及び塩;または
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩;
のいずれかを含むイオン交換溶離液。
(項目61)
CAPS、CHES、TAPS、HEPPSO、MOPSO、MES、酢酸、ギ酸、及びNaClを含むイオン交換溶離液。
(項目62)
TRIS、ピペラジン、またはイミダゾールを含まないという条件の、項目60または項目61に記載のイオン交換溶離液。
(項目63)
(i)CAPS、CHES、TAPS、HEPPSO、MOPSO、MES、酢酸、ギ酸、及び塩;または
(ii)(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩;
のいずれかから本質的になるイオン交換溶離液。
(項目64)
(i)CAPS、CHES、TAPS、HEPPSO、MOPSO、MES、酢酸、ギ酸、及び塩;または
(ii)メチルアミン、1,2−エタンジアミン、1−メチルピペラジン、1,4−ジメチルピペラジン、2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)プロパン−1,3−ジオール(ビス−トリス)、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも1つの塩;
のいずれかからなるイオン交換溶離液。
(項目65)
前記塩がNaCl、KCl、またはNa2SO4からなる群から選択される、項目61〜64のいずれか1項に記載のイオン交換溶離液。
(項目66)
MAI及び親ホモ二量体抗体種を含む組成物から前記MAIを精製するために用いられる、項目60〜65のいずれか1項に記載のイオン交換溶離液。
(項目67)
0mM〜約100mM;0mM〜約60mM;0mM〜約50mM;0mM〜約40mM;0mM〜約30mM;0mM〜約20mM;0mM〜約10mM;0mM〜約5mM;約10mM〜約200mM;約10mM〜約100mM;約10mM〜約50mM;約10mM〜約40mM;約10mM〜約30mM;約10mM〜約20mM;約20mM〜約200mM;約20mM〜約100mM;約20mM〜約50mM;約20mM〜約30mM;約30mM〜約200mM;約30mM〜約100mM;及び約30mM〜約50mM;ならびに約5mM〜約15mMからなる群から選択される濃度範囲で少なくとも1つの塩を含む、項目61〜66のいずれか1項に記載のイオン交換溶離液。
(項目68)
前記溶離液の各サンプルが約10mMの濃度で少なくとも1つの塩を含む、項目61〜67のいずれか1項に記載のイオン交換溶離液。
(項目69)
前記塩がNaClである、項目61〜68のいずれか1項に記載のイオン交換溶離液。(項目70)
前記溶離液の各サンプルが約10mMの濃度でNaClを含む、項目61〜69のいずれか1項に記載のイオン交換溶離液。
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- 本明細書に記載の発明。
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KR20210045413A (ko) * | 2018-08-17 | 2021-04-26 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 다량체 단백질의 양 및 순도를 측정하기 위한 방법 및 크로마토그래피 시스템 |
US11022585B2 (en) | 2019-06-09 | 2021-06-01 | Dionex Corporation | Methods and systems for optimizing buffer conditions with liquid chromatography |
CN114539416A (zh) * | 2020-11-26 | 2022-05-27 | 盛禾(中国)生物制药有限公司 | 一种双特异性抗体的层析纯化工艺 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013534217A (ja) * | 2010-07-30 | 2013-09-02 | メディミューン,エルエルシー | 活性ポリペプチドまたは免疫複合体の精製方法 |
Family Cites Families (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8188A (en) | 1851-07-01 | Htkstaht | ||
US459004A (en) | 1891-09-08 | Box for steaming cops | ||
US231A (en) | 1837-06-10 | Stove for heating irons for the use of tailors | ||
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US6291158B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertoire |
US6291159B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for producing polymers having a preselected activity |
DE69112207T2 (de) | 1990-04-05 | 1996-03-28 | Roberto Crea | "walk-through"-mutagenese. |
DE69216385T2 (de) | 1991-10-11 | 1997-06-12 | Promega Corp | Gekoppelte transkription und translation in zellfreien eukaryoten-extrakten |
US5492817A (en) | 1993-11-09 | 1996-02-20 | Promega Corporation | Coupled transcription and translation in eukaryotic cell-free extract |
US5665563A (en) | 1991-10-11 | 1997-09-09 | Promega Corporation | Coupled transcription and translation in eukaryotic cell-free extract |
US20030036092A1 (en) | 1991-11-15 | 2003-02-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Directed evolution of enzymes and antibodies |
US5866344A (en) | 1991-11-15 | 1999-02-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibody selection methods using cell surface expressed libraries |
US5667988A (en) | 1992-01-27 | 1997-09-16 | The Scripps Research Institute | Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
WO1997008320A1 (en) | 1995-08-18 | 1997-03-06 | Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh | Protein/(poly)peptide libraries |
US6706484B1 (en) | 1995-08-18 | 2004-03-16 | Morphosys Ag | Protein/(poly)peptide libraries |
US6165718A (en) | 1996-01-10 | 2000-12-26 | Novo Nordisk A/S Novo Alle | Method for in vivo production of a mutant library in cells |
US6261804B1 (en) | 1997-01-21 | 2001-07-17 | The General Hospital Corporation | Selection of proteins using RNA-protein fusions |
ATE332368T1 (de) | 1997-01-21 | 2006-07-15 | Gen Hospital Corp | Selektion von proteinen mittels rns-protein fusionen |
JP4093507B2 (ja) * | 1997-03-10 | 2008-06-04 | 旭化成ファーマ株式会社 | 緩衝液組成 |
US6159688A (en) | 1997-03-18 | 2000-12-12 | Novo Nordisk A/S | Methods of producing polynucleotide variants |
CA2289691C (en) | 1997-04-23 | 2008-01-15 | Andreas Pluckthun | Methods for identifying nucleic acid molecules encoding (poly)peptides that interact with target molecules |
US7951917B1 (en) | 1997-05-02 | 2011-05-31 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
ES2430857T3 (es) | 2000-12-18 | 2013-11-22 | Dyax Corp. | Bibliotecas focalizadas de paquetes genéticos |
US20060235208A1 (en) | 2002-09-27 | 2006-10-19 | Xencor, Inc. | Fc variants with optimized properties |
US20060134105A1 (en) | 2004-10-21 | 2006-06-22 | Xencor, Inc. | IgG immunoglobulin variants with optimized effector function |
WO2006020258A2 (en) | 2004-07-17 | 2006-02-23 | Imclone Systems Incorporated | Novel tetravalent bispecific antibody |
CA2957144C (en) | 2005-04-08 | 2020-06-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody substituting for function of blood coagulation factor viii |
CN101460622A (zh) * | 2006-03-31 | 2009-06-17 | 中外制药株式会社 | 用于纯化双特异性抗体的抗体修饰方法 |
US9670269B2 (en) | 2006-03-31 | 2017-06-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of modifying antibodies for purification of bispecific antibodies |
CN101558310B (zh) * | 2006-12-21 | 2013-05-08 | 积水医疗株式会社 | 含凝血酶的溶液中的α-凝血酶的稳定化方法 |
AU2008260498B2 (en) | 2007-05-30 | 2012-11-29 | Xencor, Inc. | Methods and compositions for inhibiting CD32b expressing cells |
KR20100052545A (ko) | 2007-08-28 | 2010-05-19 | 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 | Igf―1r의 다중 에피토프에 결합하는 조성물 |
BRPI0816785A2 (pt) | 2007-09-14 | 2017-05-02 | Adimab Inc | bibliotecas de anticorpos sintéticos racionalmente desenhadas, e, usos para as mesmas |
US8877688B2 (en) | 2007-09-14 | 2014-11-04 | Adimab, Llc | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
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CN101939776A (zh) | 2008-03-06 | 2011-01-05 | 富士电机控股株式会社 | 有源矩阵型显示设备 |
AU2009256250B2 (en) | 2008-06-03 | 2013-05-30 | Abbvie Inc. | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
CA2768325C (en) * | 2009-07-24 | 2019-10-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Optimizing the production of antibodies |
US9493578B2 (en) | 2009-09-02 | 2016-11-15 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
CA2781682A1 (en) | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies, antibody analogs, compositions, and methods |
RU2624027C2 (ru) * | 2010-04-23 | 2017-06-30 | Дженентек, Инк. | Получение гетеромультимерных белков |
MX360336B (es) | 2010-07-16 | 2018-10-30 | Adimab Llc Star | Colecciones de anticuerpos. |
LT2771364T (lt) * | 2011-10-27 | 2019-09-10 | Genmab A/S | Heterodimerinių baltymų gamyba |
US9815909B2 (en) | 2012-03-13 | 2017-11-14 | Novimmune S.A. | Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format |
KR20150084046A (ko) | 2012-11-15 | 2015-07-21 | 제넨테크, 인크. | 이온 강도-매개 pH 구배 이온 교환 크로마토그래피 |
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Non-Patent Citations (1)
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JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 1285, JPN6021043512, 2013, pages 78 - 87, ISSN: 0004631832 * |
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