JP2019526810A - バイオマーカーサインおよびそれらの使用 - Google Patents
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Abstract
Description
a)被験試料を提供するステップと、
b)表Aに定義される群から選択される1つ以上のバイオマーカー(複数可)の試験試料中の存在および/または量を測定するステップと、を含み、
表Aに定義される群から選択される1つ以上のバイオマーカー(複数可)の試験試料中の存在および/または量が、対象における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を示す。
c)試験試料とは異なる全身性エリテマトーデス関連疾患状態を有する個体からの対照試料を提供するステップと、
d)ステップ(b)で測定された1つ以上のバイオマーカーの対照試料中の存在および/または量を測定するステップと、をさらに含み、
全身性エリテマトーデス関連疾患状態は、ステップ(b)で測定された1つ以上のバイオマーカーの試験試料中の存在および/または量が、対照試料中の存在および/または量とは異なる場合に特定される。
e)試験対象と同一の全身性エリテマトーデス関連疾患状態を有する個体からの対照試料を提供するステップと、
f)ステップ(b)で測定された前記1つ以上のバイオマーカーの前記対照試料中の存在および/または量を測定するステップと、をさらに含むか、またはそれらからなり、
全身性エリテマトーデス関連疾患状態は、ステップ(b)で測定された1つ以上のバイオマーカーの試験試料中の発現が、ステップ(f)で測定された1つ以上のバイオマーカーの対照試料中の発現に対応する場合に特定される。
a)表B(I)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(I)に定義されるバイオマーカーのうちの2つもしくは3つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
b)表B(II)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(II)に定義されるバイオマーカーのうちの2つもしくは3つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
c)表B(III)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(III)に定義されるバイオマーカーのうちの2つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
d)表B(IV)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(IV)に定義されるバイオマーカーのうちの2つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
e)表B(V)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(V)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、もしくは4つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
f)表B(VI)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、例えば、表BV(VI)に定義されるバイオマーカーのうちの2つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
g)表B(VII)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
h)表B(VIII)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
i)表B(IX)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
j)表B(X)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(X)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、もしくは7つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
k)表B(XI)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XI)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、もしくは8つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
l)表B(XII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XII)に定義されるバイオマーカーのうちの2つもしくは3つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
m)表B(XIII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XIII)に定義されるバイオマーカーのうちの2つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
n)表B(XIV)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
o)表B(XV)に定義されるバイオマーカーに定義される前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
p)表B(XVI)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XVI)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、もしくは8つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
q)表B(XVII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XVII)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16もしくは17個の前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
r)表B(XVIII)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、ならびに/または
s)表B(XIX)に定義されるバイオマーカーの試験試料中の存在および/または量を測定すること、を含むか、またはそれらからなる。
a)健常な個体(非SLE)、
b)非活動性SLEを有する個体(非フレアリングSLE)、
c)活動性SLEを有する個体(フレアリングSLE)、または
d)高度に活動性のSLE(強度のフレアリングSLE)から提供される。
a)SLEサブタイプ1(SLE1)を有する個体、
b)SLEサブタイプ2(SLE2)を有する個体、または
c)SLEサブタイプ3(SLE3)を有する個体。
最も単純な分類ツリー:SLEは、ヒトが免疫学的障害(抗DNA抗体、抗Smith抗体、偽陽性菌試験、またはLE細胞)または頬部発疹を有する場合に診断される。
完全な分類ツリー:6つの基準を使用する。
(i)プロリンは、ペプチド構造体を、その側鎖がアルファ炭素ならびに窒素の両方に結合されるときに安定させることができる。
(ii)フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンは、芳香族側鎖を有し、かつ高度に疎水性であり、ロイシンおよびイソロイシンは、脂肪族側鎖を有し、かつ疎水性も有する。
(iii)リジン、アルギニン、およびヒスチジンは、塩基性側鎖を有し、かつ中性pHで正電荷を帯びており、アスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩は、酸性側鎖を有し、かつ中性pHで負電荷を帯びている。
(iv)アスパラギンおよびグルタミンは、中性pHで中性であるが、水素結合に関与し得るアミド基を含有する。
(v)セリン、レオニン、およびチロシン側鎖は、水素結合に関与し得るヒドロキシル基を含有する。
−高速対単位整列パラメータ:K−tuple(ワード)サイズ、1、ウィンドウサイズ、5、ギャップペナルティ、3、上斜線の数、5。スコア付け方法:xパーセント。
−複数整列パラメータ:ギャップオープンペナルティ、10、ギャップエクステンションペナルティ、0.05。
−スコア付けマトリクス:BLOSUM。
(g)表Aに定義される群から選択される1つ以上のバイオマーカー(複数可)の試験試料中の存在および/または量に基づいて、対象におけるある/その全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するステップを含む。
(h)適切なSLE療法を個体に提供するステップと含む。
(h)適切なSLEフレア療法を個体に提供するステップを含む。
i)本発明の第1の態様に定義されるような1つ以上の結合剤、または本発明の第1もしくは第2の態様に定義されるようなアレイ、および
ii)(任意選択的に)本発明の第1の態様に定義されるような方法を行うための指示、を含む、キットを提供する。
(a)本発明の第1の態様に定義される方法による個体における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するステップ、および
(b)全身性エリテマトーデス療法を個体に提供するステップ、を含む、方法を提供する。
−発熱(高温)
−リンパ腺の腫れ(頸部、腋窩、および鼠径部体全体にわたって見られる小腺)
−再発性の口腔内潰瘍
−抜け毛(脱毛症)
−高血圧(高血圧症)
−頭痛および片頭痛
−胃(腹)痛
−胸痛
−鬱
−ドライアイ
−記憶喪失
−発作(引き付け)
−思考が乱れ、現実と空想との間の差を明確に伝えることが困難である(精神病)
−息切れ
−レイノー現象−冷えたときに手および脚への血液供給を制限する状態
−足首の腫れおよび体液鬱滞(浮腫)
(a)太陽への曝露の制限、
(b)ビタミンDの補充、
(c)イブプロフェン等の非ステロイド抗炎症薬(NSAID)、
(d)ヒドロキシクロロキン等の抗マラリア剤、
(e)コルチコステロイド、
(f)免疫抑制剤、
(g)リツキシマブ、および
(h)ベリムマブ。
目的。全身性エリテマトーデス(SLE)における疾患活動性を反映する多重血清バイオマーカーパネルを定義して、フレアの血清に基づく検出に向かう次のステップに進むため。
<臨床試料>
全体で、197個の血清試料を、SLE患者(n=86)および標準対照群(N)(n=50)を含む、Department of Rheumatology、Skane University Hospital(スウェーデン国Lund)で収集した(表I)。SLE患者は、臨床SLE診断(22)を有し、American College of Rheumatology分類基準(23、24)のうちの4つ以上を表示した。SLE試料を、追跡調査中に経時的に収集し、患者を、フレアまたは寛解のいずれかと共に提示し、すなわち、何人かの患者について、最大4つの試料を異なる時点で収集した。SLE患者(試料)を、疾患表現型(25)、1)皮膚および筋骨格障害(SLE1、n=30)、2)腎臓障害ではなく、漿膜炎、全身性血管炎(SLE2、n=30)、3)SLE糸球体腎炎の存在(SLE3、n=87)に従ってマーク付けした。臨床疾患活動性を、SLE疾患活動性指数2000(SLEDAI−2K)スコア(5)として定義した。SLE試料を、SLEDAI−2Kスコアに従って3つの群、<5=非活動性(n=63)、>5=活動性(n=83)、>16=高度に活動性(n=28)で群分けした。全ての試料をアリコートし、分析まで−80℃で保存した。この後ろ向き研究は、スウェーデン国Lundの地域倫理審査委員会によって承認された。C1qおよびC4の血清レベルを、ロケット免疫電気泳動法(C1q)および比濁法(C4)を使用して判定した。SLE診断のための血清バイオマーカーを画定することを目的として、同じ試料を並行しているが別個の研究で、使用した(Delfaniら、2016、上記)。
血清プロテオーム(26〜28)のために前に最適化された標識化プロトコルを使用して、EZリンクSulfo−NHS−LC−ビオチン(Pierce、Rockford、米国イリノイ州)により血清試料を標識化した。簡潔には、試料を、PBS(約2mgのタンパク質/ml)中に1:45で希釈し、15:1のビオチン:タンパク質のモル比でビオチン化した。未反応のビオチンを、4℃で72時間PBS(pH7.4)に対して広範な透析により除去した。試料をアリコートし、さらに使用するまで−20℃で保存した。
全体で、SLEにおいて行われる事象を反映するように予測される73個の主に免疫調節分析を標的とする180個の抗体、および15個の短いアミノ酸モチーフ(4〜6個のアミノ酸長)を標的とする15個のscFv抗体(29)を含む、195個のヒト組換え単鎖断片可変(scFv)抗体を、大きいファージ表示ライブラリから選択した(補足表I)(30)(Sallら、提出済み)。scFv抗体の特異性、親和性、およびオンチップ機能は、前に検証されている(詳細については、補足付属書1を参照のこと)。
scFvマイクロアレイを生成し、前に最適化され、検証されたセットアップ(19)を使用して取り扱った(Delfaniら、2016、上記)(詳細については、補足付属書1を参照のこと)。簡潔には、14個の同一の25x28サブアレイを、非接触プリンター(SciFlexarrayer S11、Scienion、ドイツ国ベルリン)を使用して、各黒色ポリマーMaxiSorpマイクロアレイスライド(NUNC A/S、デンマーク国ロスキレ)上に印刷した。ビオチン化試料を追加し、任意の結合タンパク質抗原を、Alexa647標識化ストレプトアビジン(SA647)(Invitrogen)を使用して視覚化した。最後に、スライドを共焦点マイクロアレイスキャナ(ScanArray Express、PerkinElmer Life&Analytical Sciences)でスキャンした。
ScanArray Expressソフトウェアv4.0(PerkinElmer Life&Analytical Sciences)を使用して、スポット信号強度を定量化した。局所背景減算による信号強度を、データ分析のために使用した。各データ点は、任意の複製CVが15%を超えない限り、3つ全ての技術的複製スポットの平均値を表し、この場合、最悪の実行複製は排除され、2つの残りの複製の平均値が代わりに使用された。その後の分析のために、信号強度のログ10値を使用した。マイクロアレイデータを、半世界正規化方法(19、31、32)、および「群平均による減算」アプローチを使用して2ステップ手順で標準化した(詳細については、補足付属書1を参照のこと)。
該当する場合、試料コホートを、訓練セット(試料の2/3)および試験セット(試料の1/3)にランダムに分割し、SLE対対照群の分布および/または活動性対非活動性疾患を有する試料が、2つのセット間で類似することを確実にした。1つ超の試料が手元にあるこうしたSLE患者について、試料を各比較のためにランダムに選択し、バイアス(すなわち、特定の患者の過剰表示)を回避するために、患者毎に1つのみの試料を各サブセット比較に含めたことが留意されるべきである。
<抗体の生成および精製>
全体で、SLEにおいて行われる事象を反映するように予測される、73個の主に免疫調節分析を標的とする180個の抗体、および15個の短いアミノ酸モチーフ(4〜6個のアミノ酸長)を標的とする15個のscFv抗体(1)を含むは、195個のヒト組換えscFv抗体を、大きなファージ表示ライブラリから選択した(補足表I)(2)(Sall、未公開データ)。これらのファージ表示由来scFv抗体の特異性、親和性(通常はnM範囲内)、およびオンチップ機能を、i)厳密なファージ表示選択およびスクリーニングプロトコル(2)、ii)標的毎に複数のクローン(1〜9)、iii)マイクロアレイ適用に適合された分子設計(3)を使用して確実にした。加えて、抗体のうちのいくつかの特異性はまた、十分に特徴付けされた標準化血清試料(標的化分析物の既知の分析物を含む)、ならびに質量分析(親和性プルダウン実験)、ELISA、メソスケールディスカバリー(MSD)アッセイ、サイトメトリービーズアッセイ、およびMS等の直交方法を使用して、ならびにスパイキングおよびブロッキングを使用して前に評価されている(補足表I)(4〜12)。顕著なことに、試料を標識化して検出を可能にするために使用される標識(ビオチン)が抗体への親和性結合をブロックする(エピトープマスキング)ことができるため、いくつかの抗体の反応性が失われる場合がある。しかしながら、我々は、同じタンパク質に対して1つ超の抗体クローンを頻繁に含むことによってこの潜在的問題に対処したが、異なるエピトープに対して指向した(3)。
scFvマイクロアレイを、前に最適化され、かつ検証されたセットアップを使用して生成した(9)(Delfaniら、未公開データ)。簡潔には、非接触プリンター(SciFlexarrayer S11、Scienion、ドイツ国ベルリン)を使用して、各位置において一滴(約330pL)をスポットすることによって、黒色ポリマーMaxiSorpマイクロアレイスライド(NUNC A/S、デンマーク国ロスキレ)上で印刷した。195scFv抗体と比較して、各マイクロアレイ、1つの陰性対照群(PBS)、および1つの陽性対照群(ビオチン化BSA、b−BSA)を、25x28スポットの14個のサブアレイに分割した。さらに、各サブアレイを、3つのセグメントに分割し、25個の複製スポットからなるb−BSAの列を、各セグメントの開始および終了時に印刷した。適切な再現性を確実にするために、各scFv抗体を、各セグメント内1つ、3つの複製で分配した。
ScanArray Expressソフトウェアv4.0(PerkinElmer Life&Analytical Sciences)を使用し、固定円方法を使用して、スポット信号強度を定量化した。局所背景減算による信号強度を、データ分析のために使用した。各データ点は、任意の複製CVが15%を超えない限り、3つ全ての複製スポットの平均値を表し、その場合、最悪の実行の複製は排除され、2つの残りの複製の平均値を代わりに使用した。その後の分析のために、信号強度のログ10値を使用した。
サポートベクトルマシン(SVM)は、試料を分類するために使用されたR(15〜17)内の教師付き学習法である。教師付き分類を、線形カーネルを使用して行い、制約の費用を、R関数SVM内のデフォル値である1に設定し、それを調整しなかった。このパラメータ調整の不在は、過剰な適合を回避するために選択された。SVMを訓練する前に、データに対するフィルタリングは行わず、すなわち、マイクロアレイ上で使用される全ての抗体が、分析に含まれた。さらに、SVM決定値および曲線下面積(AUC)を使用して構築されるような、レシーバ動作特性(ROC)曲線を計算した。
この研究で、我々は、SLEにおける疾患活動性を反映する血清バイオマーカーパネルを正確に示すための組換えscFv抗体マイクロアレイを使用した。136人の患者(86個のSLEおよび50個の対照群)を表す合計197個のビオチン化血清試料(SLE n=147、標準対照群n=50)(表I)を、主に免疫調節分析物を標的とする195重抗体マイクロアレイを使用してプロファイルした。生成されたマイクロアレイ画像を、タンパク質発現プロファイル、またはタンパク質マップに変換し、SLE関連血清バイオマーカーを解明した。
活動性SLEを反映する血清バイオマーカーを復号するために、我々は、第1に、活動性疾患を有するSLE患者(活動性SLEと表される)対標準対照群を区別することができるかどうかを調査した。このために、データセットを、訓練セット(全ての試料の2/3)および試験セット(全ての試料の1/3)にランダムに分割した。次に、活動性SLE対標準対照群を示差するために必要とされる最小セットの抗体、すなわち、バイオマーカーを特定するために、後方段階的排除手順を訓練セットに適用した。結果は、最小の誤差の観点で評価される10個の抗体の組み合わせが、最良の分類を提供することを示した(図1A)。しかし、サインにおけるいくつかの可撓性を可能にするために、上位25個の抗体を、縮合バイオマーカーパネルを表すために選択した(図1A)。
次に、我々は、寛解でのSLE患者に焦点を当てた(非活動性SLEで表される)。上記のように、試料を訓練セットおよび試験セットにランダムに分割し、その後、非活動性SLE対標準対照群を区別する縮合された25重バイオマーカーサインを定義し、凍結SVMモデル(訓練セット)を訓練するために使用した。その後、独立した試験セットを使用して、モデルを評価した。結果は、非活動性SLE対標準対照群を示差することができることを実証する、0.89のROC AUC値が得られる(図2A)ことを示した。PCAに基づく分析は、同様の異なる識別が得られることを示した(図2Bおよび2C)。25重サインに基づく試験セットに対するヒートマップを図2Dに示す。パネルは、上方調節タンパク質(例えば、IL−6、IL−18、およびTNF−α)および下方調節タンパク質(例えば、C3およびC4)の両方から構成されることが見出されたが、前者が優勢であった。よって、データは、非活動性SLEを反映するバイオマーカーの多重化された区別的なパネルも、粗血清から定義することができることを実証した。
次に、我々は、非活動性SLE(SLEDAI−2K:平均2、範囲0〜5)および活動性SLE(SLEDAI−2K):平均13、範囲6〜32)の血清タンパク質を比較した。上記のものと同じ厳密なバイオインフォマティクスアプローチを使用して、0.83のROC AUC値による非活動性SLE対活動性SLEを区別する、縮合された25重血清バイオマーカーサインを解明した(図2E)。PCAに基づく分析を使用して、同様の異なる識別を観察した(図2Fおよび2G)。図2Hにおけるヒートマップとして例示されるパネルは、サイトカイン(例えば、IL−16およびIFN−γ)、補体タンパク質(例えば、C4および因子B)、可溶性表面タンパク質(例えば、CD40およびCD40L)ならびに他のタンパク質(例えば、IgM)から構成されることが見出された。合わせると、結果は、よって、非活動性SLE対活動性SLEを区別する、すなわち、疾患活動性を反映する血清バイオマーカーの多重化パネルを描写することができることを示した。
上記の分類に関してデータセットの堅牢性を試験するために、我々は、データセット全体を、訓練セットおよび試験セットの9つの追加の対にランダムに分割し、上記の比較の3つ全てを再実行した。結果は、10個全ての比較が、活動性SLE対対照群について0.94(範囲0.83〜0.98)(図3A)、非活動性SLE対対照群について0.77(0.65〜0.98)(3B図)、および活動性SLE対非活動性SLEについて0.72(0.59〜0.88)(図3C)のROC AUC中央値を生じることを示した。よって、データは、分類の能力および堅牢性が変化し、活動性SLE対標準(高)>非活動性SLE対標準(中〜高)、および活動性SLE対非活動性SLE(低〜中)の順序で低減することを示した。データの堅牢性を例示することに加えて、試料がその後のデータ分析に対してどのように分割されたかについての重要性も概説する。
疾患活動性の生物学は、後方排除(上記を参照のこと)に基づく分類に最も適しているものとして特定されたバイオマーカーによってのみ反映されないため、我々はまた、サイン強度および/または倍率変化に基づいて、有意に示差的に発現される(p<0.05)ものとして特定されるバイオマーカーに対処した。このために、活動性SLE対標準、非活動性SLE対標準、および活動性SLE対非活動性SLEについて、組み合わせた非冗長の上位31個の示差的に発現されたバイオマーカーリストを、図4Aに示す。興味深いことに、可溶性サイトカイン受容体(例えば、IL−1ra)、サイトカイン(IL−16、およびIFN−γ)、可溶性表面タンパク質(例えば、CD40)、補体タンパク質(例えば、C1q、C3、およびC4)、ならびにいくつかの他のタンパク質(例えば、シスタチンCおよびIgM)等の様々なバイオマーカーが、無調節であることが見出された。C1q、C4、およびシスタチンCの無調節のパターンを強調する(図4B)。よって、結果は、SLE疾患活動性を反映する無調節のバイオマーカーの多重化パネルを解明することができることを示した。
疾患活動性を反映するより良好なバイオマーカーを見つけるために、高度な活動性(SLEDAI−2Kの観点から)を表示するSLE患者を選択し(高度に活動性のSLEで表される)(SLEDAI−2K>=16)、それらの血清タンパク質プロファイルを、標準対照群および非活動性SLEのものと再び比較した。試料コホートが過剰に小さいために訓練セットおよび試験セットに分割されるべき試料を正当化することができないときに用いることができる最も厳密なアプローチである、一個抜き交差検証を採用して、分類を行った。
疾患表現型は、SLE疾患活動性を反映する血清バイオマーカーを定義する際に、いくつかの潜在的な交絡要因の1つであり得る。これに対処するための試行において、また、表現型(SLE1、SLE2、およびSLE3)に従って試料を群化し、分類の一部(十分な数の試料が依然として得られる群に対して)を再実行した。一個抜き交差検証を採用して、分類を行った。
最後に、SLE疾患活動性を経時的に監視することができるかどうかを検討するための第1の試行において、限定されたセットの時系列試料をプロファイルした。このために、4人の患者をショーケースとして選択し、患者毎に4つの血清試料を、フレアおよび寛解(3つの活動性対1つの非活動性、2つの活動性対2つの非活動性、または1つの活動性対3つの非活動性)で経時的に≦3.3年内に)収集した。各患者について、上位≦20個の無調節のタンパク質を、複数群比較を使用して特定し、ヒートマップと組み合わせた教師付き階層クラスタリングを使用して、代湯を視覚化した(図8)。サイトカイン(例えば、IL−10、IL−12、IL−18、IFN−γ、およびMCP−1)、補体タンパク質(例えば、C3、C4、およびC5)、可溶性表面タンパク質(例えば、CD40)、ならびに他のタンパク質(例えば、IgMおよびSialle x)を含む、様々な無調節のタンパク質を示した。前のように、これらのパイロット観察は、同じタンパク質に対して指向されるか、異なるエピトープを標的とする、いくつかの抗体が、同様のプロファイルを生じることによって支持された。4人全ての患者について、時系列試料が8つのフレアを収集したことを意味する、2つの群、活動性対非活動性としてクラスタリングされた試料は、寛解で収集されたものよりも互いにより同様であり、逆も同様であった。これは、粗血清が、親和性プロテオミクスを使用して収穫することができる疾患活動性を反映する情報(バイオマーカー)を含有するという見解をさらに支持し、疾患活動性を経時的に監視するための可能性を示している。
SLEレアを検出、監視、および/または予測するために使用することができるバイオマーカーは、非常に価値のある臨床ツール(9、11)であろう。主な努力にもかかわらず、血液試験に優先的に基づく、そのような高性能マーカーが、依然として早期の段階にあることが明らかである(37)。我々は測定することができるものを管理することができるだけであるので、粗臨床試料のタンパク質発現プロファイリングのためのさらなるおよび/または精製された方法が、必須であろう。ここで、我々は、前の努力(19、20)を拡大し(Nordstoomら、提出済み、Delfaniら、2016、上記)、さらに、組換え抗体マイクロアレイを使用して、収穫することができる関連する生物学的バイオマーカーの様式で、一滴の血液が、有意な量のSLE関連情報を含有することをさらに示した。
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**1つのSLE3試料は、疾患活動状態に関する臨床情報を欠いた。
Claims (46)
- 対象における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するための方法であって、
a)被験試料を提供するステップと、
b)表Aに定義される群から選択される1つ以上のバイオマーカー(複数可)の試験試料中の存在および/または量を測定するステップと、を含み、
表Aに定義される群から選択される1つ以上のバイオマーカー(複数可)の試験試料中の存在および/または量が、対象における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を示す、方法。 - c)試験試料とは異なる全身性エリテマトーデス関連疾患状態を有する個体からの対照試料を提供するステップと、
d)ステップ(b)で測定された1つ以上のバイオマーカーの対照試料中の存在および/または量を測定するステップと、をさらに含み、
前記全身性エリテマトーデス関連疾患状態は、ステップ(b)で測定された前記1つ以上のバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量が、前記対照試料中の存在および/または量とは異なる場合に特定される、請求項1に記載の方法。 - e)試験対象と同一の全身性エリテマトーデス関連疾患状態を有する個体からの対照試料を提供するステップと、
f)ステップ(b)で測定された前記1つ以上のバイオマーカーの前記対照試料中の存在および/または量を測定するステップと、をさらに含むか、またはそれらからなり、
前記全身性エリテマトーデス関連疾患状態は、ステップ(b)で測定された前記1つ以上のバイオマーカーの前記試験試料中の発現が、ステップ(f)で測定された前記1つ以上のバイオマーカーの前記対照試料中の発現に対応する場合に特定される、請求項1または2に記載の方法。 - ステップ(b)が、表Aに定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表Aに定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、もしくは69個の前記試験試料中の存在および/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項1、2または3に記載の方法。
- ステップ(b)が、表A(I)および/もしくは(II)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表A(I)および/もしくは(II)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、もしくは20個の前記試験試料中の存在/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)が、表A(III)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表A(III)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、21、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、もしくは49個の前記試験試料中の存在および/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)が、
a)表B(I)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(I)に定義されるバイオマーカーのうちの2つもしくは3つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
b)表B(II)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(II)に定義されるバイオマーカーのうちの2つもしくは3つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
c)表B(III)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(III)に定義されるバイオマーカーのうちの2つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
d)表B(IV)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(IV)に定義されるバイオマーカーのうちの2つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
e)表B(V)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(V)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、もしくは4つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
f)表B(VI)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、例えば、表BV(VI)に定義されるバイオマーカーのうちの2つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
g)表B(VII)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
h)表B(VIII)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
i)表B(IX)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
j)表B(X)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(X)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、もしくは7つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
k)表B(XI)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XI)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、もしくは8つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
l)表B(XII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XII)に定義されるバイオマーカーのうちの2つもしくは3つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
m)表B(XIII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XIII)に定義されるバイオマーカーのうちの2つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
n)表B(XIV)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
o)表B(XV)に定義されるバイオマーカーに定義される前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
p)表B(XVI)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XVI)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、もしくは8つの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
q)表B(XVII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上、例えば、表B(XVII)に定義されるバイオマーカーのうちの2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16もしくは17個の前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、
r)表B(XVIII)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、ならびに/または
s)表B(XIX)に定義されるバイオマーカーの前記試験試料中の存在および/または量を測定すること、を含むか、またはそれらからなる、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。 - 前記方法が、SLE関連疾患状態が活動性SLEであるか非SLEであるかを判定することを含むか、それからなるか、またはそのためのものである、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)が、表B(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VIII)、(IX)、(X)、(XI)、(XIV)、および/もしくは(XVI)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上の前記試験試料中の存在および/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項8に記載の方法。
- 前記方法が、前記SLE関連疾患状態が非活動性SLEであるか非SLEであるかを判定することを含むか、それからなるか、またはそのためのものである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)が、表B(I)、(II)、(III)、(V)、(VII)、(IX)、(X)、(XII)、および/もしくは(XV)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上の前記試験試料中の存在および/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項10に記載の方法。
- 前記方法が、前記SLE関連疾患状態が高度に活動性のSLEであるか非SLEであるかを判定することを含むか、それからなるか、またはそのためのものである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)が、表B(I)、(II)、(IV)、(VI)、(XII)、(XIII)、(XIV)、および/もしくは(XVIII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上の前記試験試料中の存在および/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項12に記載の方法。
- 前記方法が、前記SLE関連疾患状態が活動性SLEであるか非活動性SLEであるかを判定することを含むか、それからなるか、またはそのためのものである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)が、表B(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VII)、(VIII)、(XI)、(XV)、および/もしくは(XVII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上の前記試験試料中の存在および/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項14に記載の方法。
- 前記方法が、前記SLE関連疾患状態が高度に活動性のSLEであるか非活動性SLEであるかを判定することを含むか、それからなるか、またはそのためのものである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)が、表B(I)、(II)、(IV)、(VI)、(XII)、(XIII)、(XIV)、および/もしくは(XVIII)に定義されるバイオマーカーのうちの1つ以上の前記試験試料中の存在および/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項16に記載の方法。
- 前記方法が、表Aおよび表Bに列挙されるバイオマーカーのうちの全てを測定することを含むか、またはそれからなる、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(c)またはステップ(e)の前記対照試料が、
a)健常な個体(非SLE)、
b)非活動性SLEを有する個体(非フレアリングSLE)、
c)活動性SLEを有する個体(フレアリングSLE)、または
d)高度に活動性のSLE(強度のフレアリングSLE)から提供される、請求項2〜18のいずれか一項に記載の方法。 - ステップ(c)またはステップ(e)の前記対照試料が、
a)SLEサブタイプ1(SLE1)を有する個体、
b)SLEサブタイプ2(SLE2)を有する個体、または
c)SLEサブタイプ3(SLE3)を有する個体から提供される、請求項2〜18または請求項19(b)、(c)、または(d)のいずれか一項に記載の方法。 - 前記SLE関連疾患状態の身体的症状が存在する、請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記SLE関連疾患状態が、前記SLE関連疾患状態の身体的症状の出現前に判定される、請求項1〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記SLE関連疾患状態が、前記SLE関連疾患状態の身体的症状の出現の少なくとも1日前に、例えば、前記SLE関連疾患状態の身体的症状の出現の少なくとも2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、9週間、10週間、11週間、12週間、4ヶ月、5ヶ月、6ヶ月、7ヶ月、8ヶ月、9ヶ月、10ヶ月、11ヶ月、12ヶ月、13ヶ月、14ヶ月、15ヶ月、16ヶ月、17ヶ月、18ヶ月、19ヶ月、20ヶ月、21ヶ月、22ヶ月、23ヶ月、または24ヶ月前に判定される、請求項22に記載の方法。
- ステップ(b)および/またはステップ(d)が、前記1つ以上のバイオマーカー(複数可)に結合することができる結合剤を使用して行われる、請求項1〜23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1の結合剤が、抗体またはその断片である、請求項24に記載の方法。
- 前記抗体もしくはその断片が、組換え抗体もしくはその断片である、請求項25に記載の方法。
- 前記抗体もしくはその断片が、scFv、Fab、免疫グロブリン分子の結合ドメインからなる群から選択される、請求項25または26に記載の方法。
- 前記試験試料中の前記1つ以上のバイオマーカー(複数可)および/または1つ以上の結合剤(複数可)が、検出可能な部分で標識される、請求項1〜27のいずれか一項に記載の方法。
- 前記検出可能な部分が、蛍光部分、発光部分、化学発光部分、放射性部分、および酵素部分からなる群から選択される、請求項27または28に記載の方法。
- ステップ(b)、(d)、および/または(f)が、存在する場合、アレイを使用して行われる、請求項1〜29のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アレイが、ビーズに基づくアレイである、請求項30に記載の方法。
- 前記アレイが、表面に基づくアレイである、請求項30または31に記載の方法。
- 前記アレイが、マクロアレイ、マイクロアレイ、およびナノアレイからなる群から選択される、請求項30、31、または32に記載の方法。
- ステップ(b)、ステップ(d)、および/またはステップ(f)が、存在する場合、ELISA(酵素結合免疫吸着アッセイ)を使用して行われる、請求項1〜29のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(b)が、図1(E)、図2(D)、図2(H)、図3(D)、図3(E)、図3(F)、図4(A)、図5(A)、図5(B)、図8(A)、図8(B)、図8(C)、および/もしくは図8(D)に列挙されたバイオマーカーのうちの1つ以上の前記試験試料中の存在および/または量を測定することを含むか、またはそれからなる、請求項1〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項24〜29のいずれか一項に定義される1つ以上の結合剤を含む、個体における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するためのアレイ。
- 前記アレイが、請求項1〜35のいずれか一項に記載の方法において使用するためのものである、請求項36に記載のアレイ。
- 前記アレイが、請求項30〜33のいずれか一項に定義される通りである、請求項36または37に記載のアレイ。
- 前記1つ以上の結合剤が、表Aに定義されるタンパク質のうちの全てに結合することができる、請求項36〜38のいずれか一項に記載のアレイ。
- 個体における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するためのバイオマーカーとして表Aに定義される群から選択される1つ以上のバイオマーカーの使用。
- 表Aに定義されるバイオマーカーのうちの全てが、個体における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するためのバイオマーカーとして使用される、請求項40に記載の使用。
- 個体における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するための請求項24〜29のいずれか一項に定義される1つ以上の結合剤の使用。
- 表Aに定義されるバイオマーカーのうちの全てに対する結合剤が、個体における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するために使用される、請求項42に記載の使用。
- 個体における全身性エリテマトーデス関連疾患状態を判定するためのキットであって、
i)請求項24〜29のいずれか一項に定義されるような1つ以上の結合剤または請求項36〜39に記載のアレイと、
ii)請求項1〜35のいずれか一項に定義されるような前記方法を行うための指示と、を含む、キット。 - 実質的に本明細書で説明されるような方法または使用。
- 実質的に本明細書で説明されるようなアレイまたはキット。
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