JP2019520040A5 - - Google Patents

Claims (16)

1. フジツボの卵、フジツボのノープリウス幼生及び／又はフジツボの幼体の凍結保存用の方法であって、
   前記方法は、以下の順序で実施される工程：
   生体から水を排水する工程と、
   エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール、ジメチルスルホキシド及びこれらの混合物質からなる群から選択される抗凍結剤を含有する抗凍結溶液を５〜８Ｍ添加する工程と、
   以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）に続く工程に従って、容器中の前記混合物を凍結する工程と、
   （ｉ）前記混合物中の前記生体が結晶化し始める温度に至るまで、−１℃／分以下の第１の低速凍結速度で凍結する工程；
   （ｉｉ）前記混合物中の前記生体及び前記抗凍結剤が完全に結晶化するまで、−０．１℃／分以下の第２の低速凍結速度で凍結する工程；並びに
   （ｉｉｉ）低温保存温度まで第１の高速凍結速度で凍結する工程
   を含む。
2. 前記第１の低速凍結速度は、−０．５℃／分以下、好ましくは−０．３℃／分以下、より好ましくは−０．１℃／分以下である、請求項１に記載の方法。
3. 前記第１の凍結工程の前に、平衡化工程を実施し、好ましくは５〜６０分間、より好ましくは１５〜３０分間、最も好ましくは約１５分間平衡化工程を実施する、上記請求項のいずれかに記載の方法。
4. 前記第２の低速凍結速度は、−０．０１５℃／分〜−０．１℃／分、好ましくは−０．０４℃／分〜０．０８℃／分、より好ましくは−０．０５℃／分であり、最も好ましくは−０．０４℃／分である、上記請求項のいずれかに記載の方法。
5. 前記排水された生体は、排水後において、６〜１４％、より好ましくは８〜１２％、最も好ましくは約１０％の乾燥重量含量を有する、上記請求項のいずれかに記載の方法。
6. 前記生体に添加される前記抗凍結剤の濃度は、６Ｍ〜８Ｍ、より好ましくは６．５Ｍ〜７．５Ｍである、最も好ましくは７．２Ｍである、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
7. 前記抗凍結剤は、エチレングリコールとプロピレングリコールとの混合物であり、好ましくはそれぞれ約５０％、より好ましくは約７５％のエチレングリコールと２５％のプロピレングリコールとの混合物である、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
8. １つのユニット中で凍結保存される材料の量は、少なくとも５ｇ〜１０ｇ、好ましくは少なくとも１０ｇ〜５０ｇ、より好ましくは少なくとも５０ｇ〜１００ｇ、最も好ましくは２００ｇ〜２０００ｇである、上記請求項のいずれかに記載の方法。
9. 前記材料における均一温度が約−１０℃〜約１３℃、好ましくは約−１２℃〜約−１３℃に至ると、前記第１の低速凍結速度が終了する、上記請求項のいずれかに記載の方法。
10. 前記凍結プロセスの全体は、少なくとも５時間、好ましくは６〜１０時間、より好ましくは１０〜１２時間、最も好ましくは１２時間超継続する、上記請求項のいずれかに記載
    の方法。
11. 前記生体は、適切なサイズの型内、好ましくはシリコーン製の型内で、５〜５０ｍｌ、好ましくは１０〜２５ｍｌの容量で凍結保存される、上記請求項のいずれか１項に記載の方法。
12. 前記生体は、プレート又はポーチ内で凍結され、凍結保存された生体を備えた前記プレート又は前記ポーチは、液体窒素中で小さな粒子に粉砕され、それにより、得られた前記粒子は、好ましくは、液体窒素中に充填されることなく保存される、上記請求項のいずれかに記載の方法。
13. 前記凍結保存された生体を蘇生する生体の蘇生化方法であって
    ３０〜４０℃の温水浴中で前記凍結保存された生体を解凍すること、
    前記凍結された材料を粉砕し、１０℃以下の冷海水の流水で前記材料を洗ってから、５℃未満で最大３６時間かけて前記生体を蘇生化すること、及び
    前記凍結した材料を粉砕し、１０℃以下で通気して海水中で前記材料をインキュベートした後、５℃未満で最大３６時間かけて前記生体を蘇生化すること、から選択されるいずれかの方法を適用する、上記請求項のいずれかに記載の凍結保存された生体の蘇生化方法。
14. 前記解凍された生体は、解凍後に給餌される魚の培養物中の水温に適応する、請求項１
    ３に記載の方法。
15. 請求項１〜１２のいずれかに記載の方法によって得られることを特徴とする、凍結保存製品又は飼料。
16. 請求項１〜１２のいずれかに記載の方法によって初期発育期のフジツボを凍結保存し、かつその後蘇生化する、海洋魚類の幼生及び無脊椎動物用の生餌としての初期発育期のフ
    ジツボの使用。