CN102812932B - 一种储存网纹藤壶成熟卵块的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种储存网纹藤壶成熟卵块的方法。它是采集网纹藤壶（Balanus reticulatus Utinomi）性腺成熟个体，挑选完好无损的个体用海水清洗干净后，然后置于4~6℃冷藏贮存。本发明的储存网纹藤壶成熟卵块的方法简便实用，在确保孵化的无节幼虫能够正常生长发育的前提下，有效延长藤壶成熟卵块的储存备用时间，其储存时间可达24小时以上，解决了藤壶成熟卵块难以储存备用、每次进行幼虫培养前均需采集新鲜样品的难题，填充了这一技术领域中的空白，减少了野外采样作业的次数和费用，提高了样品的利用率，方便了幼虫培养工作的开展，为大规模开展藤壶幼虫培养工作奠定了基础，在防污剂筛选、涂料测试、附着机理探讨和环境毒理研究等领域均具有广阔的应用前景。

Description

一种储存网纹藤壶成熟卵块的方法

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种储存网纹藤壶成熟卵块的方法。

背景技术：

藤壶属甲壳纲围胸目无柄蔓足类，生活在潮间带及潮下带，常成群附着于岩石和各类船舶及人工设施上，是世界性的广布种，在海洋生态环境中占有重要地位，也是污损生物群落中极为重要的类群。

网纹藤壶（Balanus reticulatus Utinomi）广泛分布于热带和亚热带海域，是华南沿海污损生物优势种，具备幼虫培养便利、发育周期较短等特点，故不仅是海洋污损生物防除工作最为关注的对象，同时也是研究海洋生物附着机理和探讨海洋生态环境内在机制的理想对象之

夏秋季是藤壶的繁殖高峰期，然而，采回的样品如不及时处理，炎热的天气会导致其很快死亡。另外，室内暂养也不一定是最好的选择，因为小水体的环境状况肯定与野外存在差异，这可能诱导幼虫提前排放而影响成熟卵块的采集。因此，每次开展藤壶幼虫培养均需先赴野外现场采集新鲜成熟个体，运回实验室后马上进行解剖，采集成熟卵块进行孵化。

如能解决藤壶成熟卵块的储存问题，将可提高样品的利用率，减少采样次数野外作业费用，提高工作效率，这不仅可为大规模开展藤壶幼虫培养工作奠定基础，而且在防污剂筛选测试和环境毒理研究等领域均具有重要的现实意义和广阔的应用前景。

然而，对于网纹藤壶成熟卵块储存方法的探讨，目前国内外均未见有关的研究与报道。虽然构建室内海水循环及控制系统可对藤壶成体进行养殖并诱导其繁殖，但该方法运转、维护和建设费用开支较大，肯定会制约其推广应用的范围，因此，研发经济实用的藤壶成熟卵块储存方法应更有实际意义，而且也可为其他方向的工作提供借鉴。

发明内容：

本发明的目的是提供一种储存网纹藤壶成熟卵块的方法，该方法解决了藤壶成熟卵块难以储存备用、每次进行幼虫培养前均需采集新鲜样品的难题，填充了这一技术领域中的空白，减少了野外采样作业的次数和费用，提高了样品的利用率，方便了幼虫培养工作的开展，在防污剂筛选、涂料测试、附着机理探讨和环境毒理研究等领域均具有广阔的应用前景。

本发明的储存网纹藤壶成熟卵块的方法，其特征在于，包括以下步骤：采集网纹藤壶（Balanus reticulatus Utinomi）性腺成熟个体，挑选完好无损的个体用海水清洗干净后，然后置于4~6℃冷藏贮存。

所述的网纹藤壶可以采自于海中人工设施或海边岩石上。

所述的冷藏贮存是无需将网纹藤壶个体浸泡在海水中贮存。

所述的置于4~6℃冷藏贮存优选是将网纹藤壶放于容器中再置于4~6℃冷藏贮存，所述的容器不局限于烧杯，所有适宜尺寸的无毒器皿都可以。

所述的置于4~6℃冷藏贮存，其控制温度的冷藏设备不局限于冰箱，所有对相应温度范围能进行调控的设备均可以使用。

经过本发明处理后的网纹藤壶（Balanus reticulatus Utinomi）性腺成熟个体，在培养幼虫时，可直接将冷藏储存的网纹藤壶性腺成熟个体进行解剖，取出成熟受精卵块放入盛有消毒海水的培养器皿中，短时间内即可获得无节幼虫。所述的消毒海水是经过砂滤、煮沸消毒等步骤处理后,冷却至室温备用。所述的培养器皿需进行高温消毒和烘干。

经过本发明处理的网纹藤壶性腺成熟个体，其储存时间可达24小时以上，在需要培养网纹藤壶幼虫时，可直接将冷藏储存的网纹藤壶性腺成熟个体进行解剖，取出成熟受精卵块放入盛有消毒海水的培养器皿中，短时间内即可获得无节幼虫。按本发明方法储存24小时的网纹藤壶性腺成熟个体，与新鲜采集的网纹藤壶性腺成熟个体直接采集成熟卵块并进行幼虫孵化和培养相比，其幼虫成活率及各期幼虫所占比例没有显著性差异（P＞0.05），因此，采用本发明的方法冷藏储存的网纹藤壶成熟卵块，不会对其孵化的幼虫成活率及随后的生长发育过程产生不利影响。

因此本发明的储存网纹藤壶成熟卵块的方法简便实用，在确保孵化的无节幼虫能够正常生长发育的前提下，有效延长藤壶成熟卵块的储存备用时间，其储存时间可达24小时以上，解决了藤壶成熟卵块难以储存备用、每次进行幼虫培养前均需采集新鲜样品的难题，填充了这一技术领域中的空白，减少了野外采样作业的次数和费用，提高了样品的利用率，方便了幼虫培养工作的开展，为大规模开展藤壶幼虫培养工作奠定了基础，在防污剂筛选、涂料测试、附着机理探讨和环境毒理研究等领域均具有广阔的应用前景。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

赴海上水产养殖设施采集网纹藤壶性腺成熟个体后即运回实验室。挑选外表完好无损的个体并用海水清洗干净后，将其随机分为冷藏储存组（网纹藤壶放入烧杯内置于6℃环境的冰箱中）和室温储存组（网纹藤壶放入烧杯内置于室温环境中）和室温暂养组（网纹藤壶放入添加消毒海水的室内培养池内并持续注入空气）。幼虫孵化介质均为消毒海水，是将天然海水经过砂滤、煮沸消毒、冷却至室温后获得，放置于经高温消毒的器皿中备用。

实验结果显示，24小时后，室温储存组的样品全部死亡，且有异味出现；室温暂养组部分个体出现死亡，解剖剩余存活样品未发现怀有成熟卵块的个体；冷藏储存组个体全部存活，解剖能获得成熟卵块，将其放入盛有消毒海水的烧杯内，短时间内即可孵化出无节幼虫。

实施例2

赴海上水产养殖设施采集网纹藤壶性腺成熟个体后即运回实验室。挑选外表完好无损的个体并用海水清洗干净后，将其随机分为2组，其中一组直接进行冷藏储存（冷藏组I），另一组则解剖摘取成熟卵块置于冰箱中储存（冷藏组II）。冷藏时间均为24小时，温度4℃。

解剖冷藏组I的样品并把成熟卵块放入盛有室温消毒海水的烧杯中孵化，同时将冷藏组II的成熟卵块也放入室温消毒海水中孵化。观察无节幼虫孵化状况并进行采集。将无节幼虫置于29.5~30.5℃的黑暗环境培养5天，观察分析幼虫发育状况。

幼虫孵化和培养介质均为消毒海水，是将天然海水经过滤、煮沸消毒、冷却至室温后，放置于经高温消毒的器皿中备用。幼虫培养饵料为亚心形扁藻（投放量控制在2.5~3.0×10⁵个细胞/ml之内），幼虫密度约1~2个/ml。每天早晨和傍晚取出盛有藤壶幼虫的烧杯接受自然光照0.5小时。

表1列出了2个处理组的幼虫孵化率、成活率和发育状况；可见，冷藏组II的幼虫孵化率极低，再继续进行幼虫培养意义不大。而冷藏组I的样品冷藏储存方法明显优于冷藏组II。

表1各处理组网纹藤壶幼虫的孵化率、成活率和发育状况

实施例3

赴海上水产养殖设施采集网纹藤壶性腺成熟个体并迅速运回实验室。挑选外表完好无损的个体并用海水清洗干净后，将其随机分为2组，其中一组马上解剖采集成熟卵块并进行幼虫孵化和培养；另一组则置于6℃环境的冰箱中冷藏储存24小时，然后再采集成熟卵块进行幼虫孵化和培养。幼虫孵化和培养方法详情参阅实施例2。5天后统计分析幼虫成活及生长发育状况。

实验结果（表2）表明，从新鲜采集的样品和经过冷藏储存处理的样品中获得的成熟卵块，其幼虫成活率及各期幼虫所占比例没有显著性差异（P＞0.05）。因此，采用本发明的方法冷藏储存网纹藤壶成熟卵块，不会对其孵化的幼虫成活率及随后的生长发育过程产生不利影响。

表2卵块冷藏储存对网纹藤壶幼虫成活率及发育状况的影响

Claims (5)

1.一种储存网纹藤壶成熟卵块的方法，其特征在于，包括以下步骤：采集网纹藤壶(Balanusreticulatus Utinomi)性腺成熟个体，挑选完好无损的个体用海水清洗干净后，然后置于4～6℃，裸露于空气中，不添加消毒海水浸泡的环境下冷藏贮存。

2.根据权利要求1所述的储存网纹藤壶成熟卵块的方法，其特征在于，所述的网纹藤壶采自于海中人工设施或海边岩石上。

3.根据权利要求1所述的储存网纹藤壶成熟卵块的方法，其特征在于，所述的置于4～6℃冷藏贮存是将网纹藤壶放于容器中再置于4～6℃冷藏贮存。

4.根据权利要求3所述的储存网纹藤壶成熟卵块的方法，其特征在于，所述的容器为烧杯。

5.根据权利要求1所述的储存网纹藤壶成熟卵块的方法，其特征在于，所述的置于4～6℃冷藏贮存，其控制温度的冷藏设备为冰箱。