JP2019518051A - オジギソウの未分化細胞の抽出物および皮膚科学的組成物におけるその使用 - Google Patents
オジギソウの未分化細胞の抽出物および皮膚科学的組成物におけるその使用 Download PDFInfo
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Abstract
Description
a.オジギソウの無菌植物材料の準備、
b.前記植物材料からの細胞の脱分化、
c.未分化細胞を未分化状態で維持するための液体培地中での未分化細胞の懸濁培養、
d.前記培養培地中での未分化細胞バイオマスの増殖培養、
e.増殖の停止および5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する細胞抽出物の取得。
f.液体/固体分離、
g.5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する培養培地から分離されたバイオマスからなる細胞抽出物の回収。
f.液体/固体分離、
g.5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する培養培地の液相からなる細胞抽出物の回収。
P1:1−O−(4−クマロイル)−β−D−グルコース
C15H18O8
C13H13NO6
C14H15NO6
C9H9NO2
C14H14NO5
P1:1−O−(4−クマロイル)−β−D−グルコース
C15H18O8
C13H13NO6
C14H15NO6
C9H9NO2
C14H14NO5
「脱分化」という表現は、細胞を成長点状態、すなわち、未分化細胞の状態、すなわち、それらの形態的特徴を失い、それらが一部であった元の組織の細胞とは生理学的に異なる細胞に戻すことに関する。
a)細胞の脱分化、
b)細胞を未分化生理状態で維持する培養培地を用いた細胞懸濁液の調製、
c)培養培地を用いた増殖培養およびバイオマス生産、
d)特定の実施態様では、培養物の細胞内コンパートメントにおける生物変換による目的代謝産物の富化、
e)抽出物の取得。
1.不連続または回分培養、
2.再充填/収穫または流加培養および
3.連続培養。
オジギソウ外植体、より詳しくは種子を採取し、70%エタノール溶液、次いで、次亜塩素酸ナトリウムもしくはカルシウム溶液または塩化水銀溶液で室温にて数分間清浄化する。これらの組織を無菌蒸留水ですすぎ、その後、清浄化の終了時に無菌蒸留水で少なくとも1回洗浄する。
種子を使用する場合には、それらを清浄化し、ショ糖および成長因子を添加したムラシゲ・スクーグ栄養寒天培地で発芽させる。後者は外植体の細胞機構を、細胞分裂を刺激し、脱分化細胞塊またはカルスを生産する(カロゲネシス)ようにしむける。得られたカルスを3〜4週間ごとに新鮮な脱分化栄養培地に移植する。実際に、この寒天培地の特定の成分はカルスにより代謝され得るか、または空気の作用によって分解され得る。
寒天培地でのカルスの連続移植による細胞の脱分化は、砕けやすいカルスの形成をもたらす。この細胞間の密着の低下は、植物によって2か月〜6か月で起こり得る脱分化の結果である。この状態は、誘発される機械的ストレスを最小にしつつ細胞懸濁液中でカルスの崩壊を保証するので、液体培地への移行に有利である。よって、砕けやすいカルスの集合物は、ゲル化剤を含まないこと以外は脱分化寒天培地と同じ配合を用いて調製された液体栄養培地に導入する(10〜20体積%)。
数回のこのような継代培養の後、細胞懸濁液は、得られる細胞密度が期間内に一定である場合に安定化される。次に、バイオマスの生産性を最大にするために培養培地の組成(栄養素、成長因子など)を調整することができる。この最適化培地を、有効成分を抽出するためのバイオマス生産手段として使用する。
構造が最終産物に十分に近い「前駆体」を含む細胞を、それらが細胞内に存在する酵素機構を用いて組み込まれる、修飾される、または変換されることを期待して提供することが不可欠である場合もある。
P1:1−O−(4−クマロイル)−β−D−グルコース
C15H18O8
C13H13NO6
C14H15NO6
C9H9NO2
C14H14NO5
増殖を停止した後、得られた細胞懸濁液を濾過または遠心分離して培養培地からそれを分離し、細胞外培地(または培養上清)と収穫バイオマスの両方を得ることができる。次に、バイオマスを用途に応じて種々の方法で処理すればよい。それは凍結乾燥により乾燥させるか、または例えば、0.8%カラギーナンおよび1%クエン酸を含む68.2%グリセリン中に30%で再懸濁させる。また、細胞懸濁液に対して、例えば、音波処理またはフレンチプレスによる細胞分散をまず行うことにより溶媒抽出を行ってもよい。
本発明のもう一つの目的は、好ましくは局所適用に意図される、本発明による方法により得ることができるオジギソウ細胞のin vitro培養抽出物と1種類以上の美容的および/または皮膚科学的に許容可能な賦形剤とを含んでなる美容組成物または皮膚科学的組成物に関する。
材料および方法:4LのMS SENS培地(組成については上記の表を参照)を含有する有効容積5LのWAVEリアクター(Sartorius)に1Lのオジギソウ細胞培養懸濁液(細胞密度300〜400g/L新鮮重(FW))を植え込んだ。
パラメーター:
・温度:27℃
・空気体積:0.5L/分β(lpm)
・圧力:5mPa〜10mPa
・ロッキング角度:7°
・pO2は、rpmをD0(19rpm)〜D9(27rpm)に増すことにより75%に維持
・pO2は、25rpmにて、空気をO2でD9(5%O2)〜D15(20%O2)に富化することにより75%で維持。
4L培養物の13日(D13)の回分培養後、細胞濃度は300〜350g/L(FW)であり、12〜14g/L(DW)に相当する。この細胞濃度に到達したところで、除菌濾過により前駆体を注入することによって生物変換を行う:本発明者らは種々のアミノ酸(アスパラギン酸、桂皮酸、グルタミン酸またはL−フェニルアラニン)を選択し、本発明者らの培養条件下では、L−フェニルアラニンがNPA生物変換収量に関して最良の結果を示した。以下は下記の前駆体濃度の例である。
化合物をH2Oで希釈し、この混合物を除菌濾過によりバイオリアクターに添加する。48時間後、すなわち、D15〜D16に、例えば「20μmナイロンバッグ」を用いた直接濾過によりバイオマスを収穫する。バイオマスは、収穫されたバイオマスの容量に等しい容量の無菌脱塩水で一度洗浄する。D13に評価された細胞濃度は、D15まで等しくなければならない(+/−10%)。培養中、懸濁液容量の減少は主として採取されるサンプルによるものである。
P1:1−O−(4−クマロイル)−β−D−グルコース
C15H18O8
P2:N−p−クマロイルアスパラギン酸またはアスパラギン酸;(S)型、N−(4−ヒドロキシシンナモイル)
C13H13NO6
P3:N−シス−(p−クマロイル)グルタミン酸または
グルタミン酸;(S)型、N−(4−ヒドロキシ−Z−シンナモイル)
C14H15NO6
P5:4−ヒドロキシシンナミド
C9H9NO2
P6:
グルタミン酸;(S)型、N−シンナモイル
C14H14NO5
この目的は、抽出物中のミモシンを同定および定量するための分析条件を開発することである。オジギソウ細胞の懸濁培養(生物変換を伴う)由来のバイオマスをETOH80またはETOH60で抽出した。オジギソウの乾燥葉を乾燥させ、破砕し、同じ溶媒で抽出した。SigmaからのL−ミモシンを同定および定量の参照として用いる。サンプルをHPLC/質量分析により分析した。
ABSciex TripleTOF 4600質量分析計
方法(ES+):TOF(100ms)/MRM(50ms)
カラム:Acquity HSS C18、1.8μm、2.1×100mm、焼結0.5μm
溶出剤:A(H2O−0.1%HCO2H)/B(CH3CN−0.1%HCO2H)
流速:500μl/分
注入:10μl
勾配:
・細胞のEtOH80およびEtOH60抽出物(20%w/w)<1ng/gの新鮮細胞
・凍結乾燥細胞のEtOH60抽出物(5%w/w)<1ng/gの凍結乾燥細胞
・植物のEtOH60抽出物=2160ng/gの乾燥植物
・植物のEtOH80抽出物=780ng/gの乾燥植物
この実施例では、本発明者らは、2つのオジギソウ抽出物(E11とE13)の抗炎症活性を比較する。抽出物E11は、乾燥および破砕したオジギソウ葉の酢酸エチル抽出から得たものであり、抽出物E13は、エルレンマイヤーフラスコで、生物変換を行わないオジギソウ植物細胞培養由来の破砕材料の、同じ溶媒での抽出から得たものである。これら2つの抽出物を溶媒蒸発乾固の後に秤量した。それらをDMSOに取る。これら2つの抽出物の同じ濃度での抗炎症活性を評価および比較するために、本発明者らは、表面に相応の細菌LPSによってTLR4受容体を発現するマウスマクロファージRAW264.7細胞を刺激することからなるin vitro薬理試験を有する(Kang et al. 2002. J Pharmacol Exp Ther. 302:138−144)。いくつかのパラメーターを調べ、参照抗炎症薬デキサメタゾンと比較した:
・グリース技術による亜硝酸生産。亜硝酸レベルは、誘導型一酸化窒素合成酵素(inducible nitrite oxide synthase)(iNOS)により誘導されたNO合成のレベルを反映する。
・サイトカイン分泌:ELISAによるインターロイキン−6
・マルチプレックスアッセイによるTNF−α生産。
RAW264.7細胞は、マウスマクロファージ系譜である。これらの細胞は接着性があり、12ウェルプレートにて、10%FCS、2mM L.グルタミンおよび50μg/mLゲンタマイシンを添加したDMEM培地中、100000細胞/cm2(Millipore Scepter count)で培養する。
NO合成のレベルは、新鮮または冷凍(−80℃)細胞上清で、アッセイに影響を及ぼすことなく評価される。このアッセイの原理は、540nmに吸収を有する桃色のアゾ化合物を生産するグリース(ジアゾ化)反応に基づく。
IL−6は、供給者のプロトコール(R&D Systems、キットM6000B)に従い、比色定量ELISAにより、1/200希釈した細胞上清でアッセイされる。
細胞上清中のTNF−αの同時アッセイは、96ウェルマイクロプレートでのフローサイトメトリーおよびELISA原理に基づくLuminex xMAP(multi−analyte profiling)技術を用いて行った。基質として用いるマイクロビーズには、それらに識別カラーコード(異なる蛍光)を与える2つの蛍光色素を正確な比率で配合されている。サイトメーター(Bio−Plex 200)の光学系は、下記の2つのレーザーからなる:赤色レーザー(λ=635nm)は、各マイクロビーズにおいてその定義色素混合物を励起し、従って、アッセイされるサイトカインを識別する。第2のレーザー緑色(λ=532nm)は、サイトカインを定量するために特異的検出抗体に結合されたリポーター蛍光色素を励起する。この系は、データ取得および分析ソフトウエア(Bio−Plex Managerバージョン4.1)を備えたコンピューターによって制御される。
濃度を平均として表す。阻害パーセンテージは、抽出物に関して引用する場合、0.2%DMSO対照と比較する。DMSOは、細胞試験のための水性バッファーで希釈する前に、予め乾燥サンプルを溶解するために用いる。
図1:亜硝酸アッセイ
図2:IL6アッセイ
図3:TNF−αアッセイ
・O:陰性対照−0.2μg/mL LPSにより活性化したRAW246.7細胞の培養物
・DEXA:陽性対照−0.2μg/mL LPSにより活性化する1時間前の、1μMデキサメタゾン(Biovison 1042−1)を用いた細胞のインキュベーション。
・DMSO:0.2μg/mL LPSにより活性化する1時間前の、可溶化に使用する溶媒対照を用いたインキュベーション(E11およびE12)。
・E11:0.2μg/mL LPSにより活性化する1時間前の、オジギソウ葉(50μg/mL)由来の抽出物を用いたインキュベーション。
・E13:0.2μg/mL LPSにより活性化する1時間前の、植物細胞(50μg/mL)由来の抽出物を用いた場合。
NO生産は、もっぱら誘導性であり、デキサメタゾンにより有意に阻害可能である(%i=35)。0.2%DMSOは、アッセイに影響を及ぼさない。植物抽出物E11は亜硝酸生産を弱く阻害する(%i=16%)が、抽出物E13は、同様の方法で、参照抗炎症性で見られた阻害(%i=32%)に近く亜硝酸生産を阻害する。
LPSで活性化された細胞(O)はIL6を分泌する。デキサメタゾン(DEXA)は、IL−6分泌を阻害する(%i=38%)。抽出物は、E11(%i=24%)およびE13(%i=31%)に関して、IL−6分泌を阻害する。
RAW264.7細胞は、基底状態でTNF−αを分泌する(平均0.23ng/mL)。この生産は、0.2μg/mL LPSによって10ng/ml TNF−αまで活性化される。この活性化はデキサメタゾンにより弱く阻害可能である(%i=16%)。PCC抽出物E13は、TNF−α生産を低下させる(%i=40%)。逆に、植物抽出物E11はTNF−α生産を増加させ、LPSの活性を増強すると思われる(+112%)。
2つの抽出物E11とE13は同じ濃度で、このモデルにおいて亜硝酸NOの阻害、対照DEXAと同様に炎症誘発性サイトカインIL6の阻害により表される炎症を強く阻害する。驚くことに、これらの実験条件下で、PCC抽出物E13はDEXAよりも良好にTNF−αを阻害するが、植物抽出物E11はそれを増強する。
抗酸化活性は、酸素ラジカル吸収能(ORAC)試験を用いて評価した(Devalos A. et al.; Polish journal of foodおよびnutrition sciences; 2003;12/53:133−136)。このORAC値を、抽出物の抗酸化能を評価するために使用する。AAPH(2,2’−アゾビス−2−メチル−プロパンイミドアミド二塩酸塩)はペルオキシルフリーラジカルの供給源である。この試験では、それを、フリーラジカルによるフルオレセイン分解の動態を模倣するために使用する。これは抽出物または試験参照(ここでは、トロロックス)の経時的蛍光および濃度の低下をもたらす。トロロックス(ビタミンEの類似体)は、強い抗酸化剤として知られている。トロロックス(標準溶液)または抽出物の添加は、フルオレセインを分解から保護する。トロロックス標準溶液に対して測定される抗酸化活性を評価することを可能とする。
・採取した抽出物の水での希釈。
使用溶液:総ての溶液をリン酸バッファー75mMpH7.6中に調製する。1.17μMフルオレセイン(117mM保存溶液の使用、4℃で保存1週間)。即時調合される125mM AAPH。1mMトロロックス(保存−20℃)。
下記のものを黒色96ウェルプレート中に置く:20μlの抗酸化(トロロックス標準溶液または被験抽出物(破砕細胞培養培地))+160μlの1.17μMフルオレセイン。フィルムで覆ったプレートを37℃で15分間インキュベートする。20μlの125 mM AAPH/ウェルを加える。すぐに分光蛍光計(SpectraMax)にて37℃でインキュベートし、励起波長485nmおよび発光波長520nmで90分間、毎分、読み取りを行う。各試験を3反復で行う。各試験(トロロックス標準溶液またはサンプル)について曲線下面積(AUC)を計算する。正味のAUC=AUC標準溶液点またはサンプル−ブランクAUCを求める。正味AUCの関数として検量線:トロロックス濃度(μM)をプロットする。
μMでのEqトロロックス=a×(正味Auc)2+b×(正味AUC)
(式のaおよびbは線形方程式によって求められる)。
ORAC値は、μmトロロックス/100g抽出物に相当する。
ORAC値(TEAC)=トロロックス当量μM×20×(100 000/[供試抽出物の]×20)
アトピー性皮膚炎表現型を示すin vitroモデルにおけるオジギソウの抗炎症活性のマルチパラメトリック評価。この薬理モデルは、Castex−Rizzi et al.(Br J Dermatol. 2014. 170 Suppl 1:12−8)により記載されている。
破砕、乾燥した標準オジギソウ培養培地W01D15(生物変換有り)から採取したPCC抽出物を。40%EtOH中の溶液に初期濃度75mg/mlに溶解/希釈した。これらの化合物を生存率試験のために即時に、ならびに誘導アトピー性皮膚炎のモデルで薬理作用を測定するために適当な用量で可溶化した。
Lonzaからの正常ヒト表皮ケラチノサイト(NHEK)。これらの細胞を標準培養培地で増殖させる。
NHEK細胞を播種し、ケラチノサイト−SFM培養培地で培養する。次に、培養培地を、化合物と供試抽出物または対照として使用する溶媒(化合物処理の際に使用したものと同じ濃度のEtOH40%)を含有する培地に置き換える。1時間の「プレインキュベーション」の後、炎症誘発剤混合物(ポリ(I:C)、IL4、IL13)を加え、これらの細胞を24時間培養する。
4.5.1. 全RNAおよびcDNA合成の抽出
抽出は、RNABle(Eurobio)およびQIAGENからのRNeasyミニキットを用いて行った。抽出した全RNAを分光光度計(NanoDrop、ND1000、Thermo Scientific)でアッセイし、それらの質をアガロースゲルで分析した。
・原理
リアルタイムPCRは、遍在的に発現される参照遺伝子に対する標的遺伝子の発現率の相対的定量を可能とする正確、高感度かつ迅速な方法である。この技術は、メッセンジャーRNAの定量を可能とする。この操作は、RNAの相補的DNAへの逆転写の後に、DNAポリメラーゼを用いて増幅される標的のいずれのかの側に位置する2つのプライマーの伸長によって行われる。指数関数的増幅のハイブリダイゼーション工程中に蛍光団(SYBR Green)を組み込めば、新たに形成された増幅産物の量の定量およびリアルタイムのモニタリングが可能となる。定量値は、PCR産物の対数増殖に関連するシグナル増強が製造者のマニュアルに従ってBiosystems PE分析プログラムを用いて検出され始める閾値サイクルの数(Ct:サイクル閾値)から得られる。従って、ゼロ時点の標的遺伝子のcDNA量が多いほど、Ct数(閾値に達するまでのサイクル数)が少なくなる。
プライマーは、Oligo 4(National Biosciences、プリマス、MN)を含むコンピュータープログラムの補助で選択した。選択基準は、増幅される断片のサイズ(80〜120ヌクレオチド)、プライマーのサイズ(21〜25ヌクレオチド)、プライマーのハイブリダイゼーション温度(約65℃)およびプライマーの位置に関するものであり、プライマーは2つのプライマーのうち一方がイントロンおよびエキソンをまたぐように、または2つのプライマーが、それらを分断しているイントロンが2kbpより大きい場合には2つの異なるエキソンにあるように設計される。プライマーのかなり具体的な位置を選択することで、たとえ解離曲線(ABI、7900HT)に混入が見られなかったとしても、サンプル混入の場合にゲノムDNAの増幅が避けられる。これらの予防措置は総て、ゲノムDNAの混入が最小であることが、定量的RT−PCRのような感度によって得られる結果に極めて有意な影響を及ぼし得ることからくるものである。もう一つの重要な選択基準は、得られた特定のPCR産物に非特異的に干渉する、従って、結果を歪める(使用するSYBR Green技術に内在する)二重鎖を形成しないことを保証することである。最後に、プライマーは、コンセンサス領域および/または多形を含まないように選択される。標的遺伝子のプライマーとして選択されるヌクレオチド配列の全体的な特異性は、全ヒトゲノムのコラージュ(ヌクレオチド−ヌクレオチドblast)を作製することによってテストされる(Altschul et al., J. Mol. Biol., 215:403−410, 1990)。
プライマーの有効性は、NHEK細胞から抽出したRNAで、2反復で調製した5倍連続希釈液(4点)によって試験した。100%に近い有効性を有するプライマー対のみ(3.32に相当する傾き)を保持する。SYBR Green法により得られる定量的PCR結果を歪める可能性のある二重鎖を形成しないことを保証するために、非鋳型対照(NTC)増幅も行う。得られた増幅産物がユニークであることを保証するために、7900HT装置で得られた解離曲線を使用する。プライマー有効性の低下を避けるために、標準増幅曲線の定期的確認を行う。
増幅は、ABI Prism 7900配列検出システム(Applied Biosystems)にて、SYBR Green法(SYBR Green PCRコア試薬キット、Applied Biosystems)を用いて行う。増幅は、各ストランドの指数関数的倍加を保証する、変性工程(95℃で10分)、次いで、40サイクルのハイブリダイゼーション(95℃で15秒)の繰り返しおよび伸長(65℃で1分)からなる。
定量されたAD表現型に特徴的な遺伝子を表2の左の列に列挙する。応答値は正規化後のものである。表の左から右へ、ADと表示された列は、各遺伝子の誘導のレベル(有効薬剤の不在下)を示す。ETOH40と表示された列は、溶媒による潜在的応答干渉を検出するために有効薬剤を含まない溶媒単独により生じた値に相当する。次のW01と表示された2つの列は、誘導後の2種類の濃度、それぞれ1.5mg/mlおよび0.75mg/mlの試験サンプルである。最後の列は、陽性対照0.28mMデキサメタゾンにより生じた値を示す。
Claims (32)
- 5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有するオジギソウ細胞抽出物のin vitro調製のための方法であって、以下の工程:
a.オジギソウの無菌植物材料の準備工程、
b.前記植物材料からの細胞の脱分化工程、
c.未分化細胞を未分化状態で維持するための液体培地中での未分化細胞の懸濁培養工程、
d.前記培養培地中での未分化細胞バイオマスの増殖培養工程、
e.増殖の停止および5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する細胞抽出物の取得工程、
を含んでなる、方法。 - 前記オジギソウ植物材料が、葉、茎、葉柄、根、種子、花および蕾からなる群から選択されるものである、請求項1に記載の方法。
- 脱分化の工程b)が、1以上の成長因子を含有する固体培地上で行われる、請求項1または2に記載の方法。
- 前記1以上の成長因子が、オーキシン、サイトカイン、ジベレリンおよびそれらの混合物からなる群から選択されるホルモンを含むものである、請求項3に記載の方法。
- 脱分化細胞のカルスを得るために、脱分化の工程b)が繰り返される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 工程c)が、1以上の成長因子を含有する液体培地で行われる、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記1以上の成長因子が脱分化培地のものと同じものである、請求項6に記載の方法。
- 増殖培養の工程d)が、連続継代培養または液体培養培地での希釈により一定細胞密度が得られるまで行われる、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 以下の付加的工程:
f.液体/固体分離工程、
g.5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する培養培地から分離されたバイオマスからなる細胞抽出物の回収工程、
を含んでなる、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。 - 以下の付加的工程:
f.液体/固体分離工程、
g.5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する培養培地の液相からなる細胞抽出物の回収工程、
を含んでなる、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。 - 抽出物を破砕し、5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する破砕細胞材料を回収する付加的工程を含んでなる、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 得られた破砕材料の液体/固体分離が行われ、次いで、5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する細胞抽出物としての液相の回収が行われる、請求項11に記載の方法。
- 得られた破砕材料の液体/固体分離が行われ、次いで、5ng/g乾燥重量未満のミモシン含量を有する細胞抽出物としての細胞残屑の固相の回収が行われる、請求項11に記載の方法。
- 前記工程c)および/または工程d)の培養培地が、フェニルアンモニアリアーゼ基質を含有するものである、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記フェニルアンモニアリアーゼ基質が、フェニルアラニン、特にL−フェニルアラニン、桂皮酸、アスパラギン酸、グルタミン酸およびそれらの混合物からなる群から選択されるものである、請求項14に記載の方法。
- 得られた抽出物が、少なくとも1種類のN−フェニルプロペノイルアミノ酸を含有する、請求項14または15に記載の方法。
- 前記N−フェニルプロペノイルアミノ酸が、
P1:1−O−(4−クマロイル)−β−D−グルコース
C15H18O8
C13H13NO6
C14H15NO6
C9H9NO2
C14H14NO5
からなる群から選択される、請求項16に記載の方法。 - 乾燥重量5ng/g未満のミモシン含量を有する、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる、オジギソウ細胞のin vitro培養抽出物。
- ミモシン含量が5ng/g乾燥重量未満である、オジギソウ細胞のin vitro培養抽出物。
- 少なくとも1種類のN−フェニルプロペノイルアミノ酸を含有する、請求項18または19に記載の抽出物。
- 前記少なくとも1種類のN−フェニルプロペノイルアミノ酸が、
P1:1−O−(4−クマロイル)−β−D−グルコース
C15H18O8
C13H13NO6
C14H15NO6
C9H9NO2
C14H14NO5
からなる群から選択される、請求項20に記載の抽出物。 - 抽出物中の少なくとも1種類のN−フェニルプロペノイルアミノ酸の総含量が、1〜50μg/g乾燥バイオマスである、請求項20または21に記載の抽出物。
- 前記細胞が未分化細胞である、請求項18〜22のいずれか一項に記載の抽出物。
- 炎症性皮膚障害の処置において使用するための、請求項18〜23のいずれか一項に記載の抽出物。
- 胸腺間質性リンパ球新生因子の阻害剤として使用するための、請求項18〜23のいずれか一項に記載の抽出物。
- 前記炎症性皮膚障害が、アトピー性皮膚炎、掻痒症および掻痒症のためのかゆみ、湿疹ならびに乾癬から選択されるものである、請求項24に記載の抽出物。
- 請求項18〜23のいずれか一項に記載の抽出物を含んでなる、胸腺間質性リンパ球新生因子の阻害剤として使用するための、組成物。
- アトピー性皮膚炎、掻痒症および掻痒症のためのかゆみ、湿疹ならびに乾癬から選択される炎症性皮膚障害の処置のための、有効量の請求項18〜23のいずれか一項に記載の抽出物と少なくとも1種類の皮膚科学的賦形剤とを含んでなる、皮膚科学的組成物。
- 皮膚老化の、および環境汚染による酸化ストレスを含む皮膚酸化ストレスに関連する皮膚障害の美容的処置のための、請求項18〜23のいずれか一項に記載の抽出物の使用。
- 請求項18〜23のいずれか一項に記載の抽出物と美容的に許容可能な賦形剤と組み合わせて含んでなる、美容組成物。
- 請求項18〜23のいずれか一項に記載の抽出物を皮膚科学的に許容可能な賦形剤と組み合わせて含んでなる、皮膚科学的組成物。
- 皮膚老化の、および環境汚染による酸化ストレスなどの皮膚酸化ストレスに関連する皮膚障害の美容的処置のための、請求項30に記載の組成物の使用。
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