RU2639566C1 - Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq. в условиях in vitro - продуцент туркестерона - Google Patents
Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq. в условиях in vitro - продуцент туркестерона Download PDFInfo
- Publication number
- RU2639566C1 RU2639566C1 RU2016132377A RU2016132377A RU2639566C1 RU 2639566 C1 RU2639566 C1 RU 2639566C1 RU 2016132377 A RU2016132377 A RU 2016132377A RU 2016132377 A RU2016132377 A RU 2016132377A RU 2639566 C1 RU2639566 C1 RU 2639566C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- turkesterone
- strain
- briq
- vitro
- regel
- Prior art date
Links
- 241001519271 Ajuga Species 0.000 title claims abstract description 19
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 6
- WSBAGDDNVWTLOM-UHFFFAOYSA-N lesterone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(C(O)CC3(C(C(C)(O)C(O)CCC(C)(O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 WSBAGDDNVWTLOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 21
- DXGPJKXCWRHUMH-UHFFFAOYSA-N turkesterone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(C(O)CC3(C(C(C(O)CCC(C)(C)O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 DXGPJKXCWRHUMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 21
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 14
- WSBAGDDNVWTLOM-XHZKDPLLSA-N turkesterone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](O)C[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 WSBAGDDNVWTLOM-XHZKDPLLSA-N 0.000 abstract description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 9
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002061 ecdysteroids Chemical class 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 2
- HXWZQRICWSADMH-SEHXZECUSA-N 20-hydroxyecdysone Natural products CC(C)(C)CC[C@@H](O)[C@@](C)(O)[C@H]1CC[C@@]2(O)C3=CC(=O)[C@@H]4C[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C HXWZQRICWSADMH-SEHXZECUSA-N 0.000 description 2
- DCEFCUHVANGEOE-UHFFFAOYSA-N Ecdysterone Natural products CC(CC(C)(C)O)C(O)C(C)(O)C1CCC2(O)C3=CC(=O)C4CC(O)C(O)CC4(C)C3CCC12C DCEFCUHVANGEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 2
- NKDFYOWSKOHCCO-UHFFFAOYSA-N beta-ecdysone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(CCC3(C(C(C)(O)C(O)CCC(C)(O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 NKDFYOWSKOHCCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 2
- 238000013337 sub-cultivation Methods 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- AYNKMIRASXKWSW-AGCORWTGSA-N (3S,4S,5R)-4-[(2R,3R)-2-acetyl-2,3-dihydroxy-3-[(2S,3R,5R,9R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihydroxy-10,13-dimethyl-6-oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]butyl]-3,5-dimethyloxolan-2-one Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@@H](C)[C@@H]1C[C@](O)(C(C)=O)[C@](C)(O)[C@@H]1[C@@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@H](O)[C@H](O)C[C@H]4C(=O)C=C3[C@]2(O)CC1 AYNKMIRASXKWSW-AGCORWTGSA-N 0.000 description 1
- GFPSWBAAJFSDOH-UHFFFAOYSA-N 22-O-acetylcyasterone Natural products CC1OC(=O)C(C)C1CC(OC(C)=O)C(C)(O)C1C2(C)CCC3C4(C)CC(O)C(O)CC4C(=O)C=C3C2(O)CC1 GFPSWBAAJFSDOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000207923 Lamiaceae Species 0.000 description 1
- XWALNWXLMVGSFR-HLXURNFRSA-N Methandrostenolone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@](C)(O)[C@@]1(C)CC2 XWALNWXLMVGSFR-HLXURNFRSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000005712 elicitor Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002311 liver mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- SOUHUMACVWVDME-UHFFFAOYSA-N safranin O Chemical compound [Cl-].C12=CC(N)=CC=C2N=C2C=CC(N)=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 SOUHUMACVWVDME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Каллусный штамм живучки туркестанской Ajuga turkestanica (Regel) Briq. At21, обладающий способностью продуцировать в условиях in vitro туркестерон, депонирован во Всероссийской Коллекции культивируемых клеток высших растений под регистрационным номером 88. Штамм может быть использован для получения туркестерона. Изобретение обеспечивает высокий выход туркестерона. 2 ил.,2 табл.
Description
Область применения
Изобретение относится к биотехнологии, в частности, культивированию клеток растения живучки туркестанской, и может быть использовано для получения ценного биологически активного соединения - туркестерона, которое широко применяется в спортивной медицине и косметологии.
Уровень техники
Живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Rgl.) Briq. многолетнее травянистое растение, относится к семейству Lamiaceae - эндемик Западного Тянь-Шаня и Гиссаро-Алая, произрастает на территории Узбекистана и Таджикистана, полукустарник семейства Яснотковые. Побеги живучки туркестанской применяются в спортивной медицине и косметологии, благодаря наличию в них специфического фитоэкдистероида - туркестерона, который по анаболическому эффекту не уступает синтетическим препаратам, не являясь при этом допингом. Туркестерон не токсичен, проявляет тонизирующее действие, стимулирует работоспособность, предохраняет от негативного воздействия различных стрессорных факторов. Живучка туркестанская является источником фитоэкдистероидов. Вид продуцирует экдистерон, аюгалактон, аюгастерон, циастерон, 22-ацетилциастерон, туркестерон [Б.З. Усманов, М.Б. Горовиц, Н.К. Абубакиров. Фитоэкдизоны Ajuga turkestanica V. // Химия природных соединений. - 1977. - №5. - Р. 710-714].
Для соединений установлен широкий спектр биологической активности при различных экспериментальных патологических состояниях [З. Саатов, В.Н. Сыров, А.У. Маматханов, Н.К. Абубакиров. Фитоэкдистероиды растений рода Ajuga и их биологическая активность. 1. Распространение и химические структуры выделенных соединений // Химия природных соединений. - 1994. - №2. - С. 152]. Сумма экдистероидов растения обладает гипогликемической активностью [Т.А. Кутепова, В.Н. Сыров, З.А. Хушбактова, З. Саатов. Кутепова Т.А. Гипогликемическая активностьсуммы экдистероидов из Ajuga turkestanica. // Химико фармацевтический журнал, - Т. 35 - №11 - С. 24-25].
Экдистерон и туркестерон оказывают благотворное действие на энергетические реакции организма [Ташмухамедова М.А., К.Г. Алматов, З.А. Хушбактова, В.Н. Сыров, А.А. Абидов. Функционирование митохондрий печени крыс при введении им фитоэкдистероидов и неробола. // Узбекский биологический журнал, - 1987 - т. 3 - с. 3].
Также эти соединения обладают способностью блокировать процессы свободнорадикального окисления. Растение является среднеазиатским эндемиком с узким ареалом распространения. В связи с этим большой интерес представляет разработка биотехнологического способа получения экдистероидов с использованием культур клеток Ajuga turkestanica.
Ранее было установлено, что полученная культура тканей и клеток Ajuga turkestanica сохраняет биосинтез доминирующих в растении экдистероидов: экдистерона (20Е) и туркестерона [С.В. Лев, Р.П. Закирова, З. Саатов, М.Б. Горовиц, Н.К. Абубакиров. Экдистероиды культуры тканей и клеток Ajuga turkestanica. II Химия природных соединений-1990. - №1. - С. 51-52].
Содержание веществ в первые циклы выращивания составляло соответственно 0,12% и 0,032% на сухой вес. В процессе длительного культивирования биосинтетическая активность каллусной культуры существенно снижалась [Р.П. Закирова М.Р. Якубова. Продуктивность каллусной ткани Ajuga turkestanica при многолетнем культивировании. // Химия природных соединений. - 2002. - №4. - С. 298]. Как правило, содержание вторичных соединений в условиях in vitro на порядок ниже и беднее по составу, чем в интактном растении и часто снижается при культивировании в течение нескольких лет. Была показана возможность повышения синтеза туркестерона путем индукции морфогенеза, но повышенный синтез не был стабилен и сохранялся на срок до 11-12 циклов субкулитивирования [Р.П. Закирова, И.Т. Абдукадыров, М.Р. Якубова Возможность повышения содержания экдистероидов в каллусных и суспензионных культурах клеток Ajuga turkestanica за счет использования индуцированного морфогенеза. // Биотехнология. 2012. №3. С. 44-47]. Также для повышения синтеза туркестерона добавляли элиситоры, либо проводили трансформацию с помощью агробактерий [Cheng, D. M., Yousef, G. G., Grace, M., Rogers, R. В., & Lila, M. A. (2007). In vitro production of phytoecdysteroids from Ajuga turkestanica II The FASEB Journal - V. 21(6) - A1079].
Таким образом, в литературе не было найдено работ по получению культуры клеток живучки туркестанской, обладающей стабильным и относительно высоким синтезом туркестерон в клетках самого штамма, а также высокими ростовыми характеристиками.
Задача изобретения
Задача изобретения - создание нового каллусного штамма живучки туркестанской (Ajuga turkestanica (Regel) Briq.), который является продуцентом туркестерона, со стабильными ростовыми параметрами, высокой жизнеспособностью, устойчивым синтезом туркестерона в процессе культивирования и отсутствием сезонной зависимости его получения.
Решение задачи
Эта задача была решена созданием нового каллусного штамма живучки туркестанской в условиях in vitro, депонированного в Российскую Коллекцию Культивируемых Клеток Высших Растений при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской академии наук под обозначением At21 №88, который является продуцентом туркестерона.
Новизна изобретения
Новизной настоящего изобретения является то, что впервые был получен штамм растения живучка туркестанская - продуцент туркестерона с высокими ростовыми характеристиками и стабильным относительно высоким синтезом туркестерона, по сравнению с описанными в литературе аналогами, сохраняющимся без дополнительных методов индукции синтеза.
Сущность изобретения
По мнению авторов, предлагаемое изобретение состоит в том, что за основу взяты листья, черешки и завязи растений живучки туркестанской, привезенных из горных районов Узбекистана, которые стерилизуют и помещают в жидкую питательную среду в качестве эксплантов. В результате был создан новый каллусный штамм - продуцент туркестерона.
Перечень иллюстративных материалов
Фигура 1. Ростовые характеристики культуры клеток живучки туркестанской Ajuga turkestanica.
Фигура 2. ВЭЖХ-хроматограмма анализа содержания туркестерона в биомассе культуры клеток живучки туркестанской Ajuga turkestanica.
Таблица 1. Состав сред для инициации каллусообразования и последующего выращивания каллусов живучки туркестанской Ajuga turkestanica.
Таблица 2. Ростовые параметры культуры клеток живучки туркестанской Ajuga turkestanica.
Реализация изобретения
Культуру клеток живучки туркестанской получают из интактных растений, используя в качестве эксплантов листья, стебли и завязи. Образцы растений для получения были привезены из горных районов Узбекистана. Растительные образцы промывают проточной водой, после чего выдерживают 20 сек. в 96% этаноле. Потом промывают стерильной дистиллированной водой. Затем растительные образцы помещают в раствор диацида на 4 мин., промывают стерильной дистиллированной водой, снова помещают в раствор диацида на 4 мин, после чего 3-кратно промывают в дистиллированной стерильной воде. Завязи, листовые пластинки и стебли подсекают скальпелем, предварительно разрезав на сегменты длиной 5 мм, и используют в качестве эксплантов, которые помещают на агаризованную питательную среду. Для инициации каллусообразования живучки туркестанской используют агаризованную среду Гамборга без гормонов (табл.1, среда 1), через неделю помещают на среду Гамборга с добавлением 4 мг/л 2,4-дихлорфеноскиуксусной кислоты (2,4-Д) и 0,1 мг/л кинетина (табл.1, среда 2), на которой культуры выращивают в течение 1 недели. Затем полученные каллусные культуры переводят на среду с 2 мг/л 2,4-Д и 0,1 мг/л кинетина (табл.1, среда 3), на которой проводят 2 цикла субкультивирования по 2 недели. Для последующего выращивания используют среду с 1 мг/л а-нафтилуксусной кислоты (НУК) и 0,05 мг/л бензиламинопурина (БАП) (табл. 1, среда 4).
Культивирование проводят в темноте, при 26±1°C, влажности помещения 70±5%, в чашках Петри диаметром 60 мм (10 среды в чашке). Цикл субкультивирования составляет 4 недели. При пересеве каллус делят на 3-5 частей, в зависимости от ростовых параметров культуры на данный момент.
Полученные каллусные культуры клеток выращивают в течение более 20 циклов. В процессе культивирования определяют ростовые и биосинтетические характеристики.
Штамм Ajuga turkestanica (Regel) Briq. под обозначением At21 №88 обладает следующими признаками.
Культуральные признаки: биомасса клеток гомогенная, светло-кремовой окраски.
Индекс роста (кратность прироста биомассы за одно субкультивирование) определяют по числу клеток, по сырому и сухому весу биомассы. Для определения веса сырой биомассы клетки отделяют от среды культивирования, промывают водой на бумажных фильтрах на вакуумном насосе и взвешивают. Сухую биомассу клеток получают после высушивания образцов при 25°±1С в потоке теплого воздуха. Жизнеспособность оценивают по проценту неокрашенных клеток в 0,1% растворе феносафранина.
В результате постоянного мониторинга состояния культур установлено, что жизнеспособность суспензионных культур стабильно держится на 90-97%. Ростовые характеристики культуры клеток живучки туркестанской представлены на фиг.1.
При анализе представленных кривых роста следует отметить отсутствие лаг-фазы. Начало экспоненциальной фазы роста отмечено на 14 сутки субкультивирвания. Замедление роста на 29 сутки культивирования позволяет использовать 4-недельный цикл выращивания. Ростовые параметры рассчитывали по сухому весу биомассы. Результаты представлены в табл.2.
Для определения содержания туркестерона навеску лиофилизированной биомассы культуры клеток подвергают кислотному гидролизу в 1.0 н. растворе соляной кислоты. Реакцию проводят в течение 14 часов при температуре 85оС.После гидролиза содержимое колбы переносят в делительную воронку, разбавляют водой и нейтрализуют 1.0 н. NH4OH. Экдистероиды исчерпывающе экстрагируют этилацетатом, растворитель отгоняют на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 мл смеси ацетонитрил-вода (27:73, по объему). Полученный раствор фильтруют через нейлоновый фильтр с порами 0,2 мкм (Acrodisc, США) и используют для ВЭЖХ анализа.
Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводят на приборе Agilent 1200 (Agilent Technologies, США). Пробу объемом 20 мкл наносят на колонку Zorbax С18 (250×4,6 мм, 5 мкм). Скорость подвижной фазы 0,5 мл/мин. В качестве компонентов подвижной фазы используют ацетонитрил и воду. Элюирование осуществляют в изократическом режиме при соотношении ацетонитрил:вода 27:73, по объему. Детектирование осуществляют по поглощению при 247 нм. Количественное содержание туркестерона определяют методом внешней калибровки по стандарту туркестерона.
Результаты изобретения
Как видно из таблицы 2, штамм обладает высокой жизнеспособностью - около 95% при стабильных ростовых характеристиках. В штамме At21 №88 культуры клеток живучки туркестанской был обнаружен туркестерон, содержание которого в сухой биомассе достигало 0,05%.
В результате изобретения был показан способ получения каллусной культуры клеток живучки туркестанской, обладающей высокими ростовыми и относительно высоким устойчивым синтезом туркестерона в процессе культивирования, превышающими таковые у мировых аналогов. Удобство такого способа получения туркестерона состоит в отсутствии сезонной зависимости их производства.
Claims (1)
- Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq., депонированный во Всероссийской коллекции культивируемых клеток высших растений под регистрационным номером 88, в условиях in vitro - продуцент туркестерона.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016132377A RU2639566C1 (ru) | 2016-08-05 | 2016-08-05 | Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq. в условиях in vitro - продуцент туркестерона |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016132377A RU2639566C1 (ru) | 2016-08-05 | 2016-08-05 | Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq. в условиях in vitro - продуцент туркестерона |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2639566C1 true RU2639566C1 (ru) | 2017-12-21 |
Family
ID=63857494
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016132377A RU2639566C1 (ru) | 2016-08-05 | 2016-08-05 | Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq. в условиях in vitro - продуцент туркестерона |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2639566C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2726067C1 (ru) * | 2019-10-16 | 2020-07-08 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский государственный университет" (КемГУ) | Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (rhodiola rosea l.) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2296154C1 (ru) * | 2005-10-19 | 2007-03-27 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Штамм культивированных клеток растений ajuga reptans l. |
| RU2296155C1 (ru) * | 2005-10-19 | 2007-03-27 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Штамм культивированных клеток растений serratula coronata l. |
-
2016
- 2016-08-05 RU RU2016132377A patent/RU2639566C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2296154C1 (ru) * | 2005-10-19 | 2007-03-27 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Штамм культивированных клеток растений ajuga reptans l. |
| RU2296155C1 (ru) * | 2005-10-19 | 2007-03-27 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Штамм культивированных клеток растений serratula coronata l. |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| JOSE M ZUBELDIA, AARON HERNANDEZ- SANTANA, et, al., In vitro characterization of the efficacy and safety profile of a proprietzry Ajuga turkestanica extract, Chinese Medicine, 2012, N.3, p.215-222. * |
| ЗАКИРОВА Р.П., АБДУКАДЫРОВ И.Т., ЯКУБОВА М.Р., Возможность повышения содержания экдистероидов в каллусных и суспензионных культурах клеток Ajuga turkestanica за счет использования индуцированного морфогенеза, Биотехнология, 2012, N 3., с. 44-47. * |
| ЗАКИРОВА Р.П., АБДУКАДЫРОВ И.Т., ЯКУБОВА М.Р., Возможность повышения содержания экдистероидов в каллусных и суспензионных культурах клеток Ajuga turkestanica за счет использования индуцированного морфогенеза, Биотехнология, 2012, N 3., с. 44-47. JOSE M ZUBELDIA, AARON HERNANDEZ- SANTANA, et, al., In vitro characterization of the efficacy and safety profile of a proprietzry Ajuga turkestanica extract, Chinese Medicine, 2012, N.3, p.215-222. * |
| ЗАКИРОВА Р.П., Экдистероиды в культуре тканей и клеток Ajuga turkestanica (Rgl.) Brig. и возможность регуляции их биосинтеза, Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук, Ташкент, 1992, с. 3-22. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2726067C1 (ru) * | 2019-10-16 | 2020-07-08 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский государственный университет" (КемГУ) | Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (rhodiola rosea l.) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4769868B2 (ja) | 植物細胞懸濁培養によるコロソール酸の製造方法 | |
| JPH08500973A (ja) | タキソール、関連タキサン及び他の新規な抗癌／抗ウイルス性化合物原料としてのイチイ培養組織 | |
| Shohael et al. | Application of bioreactor system for large-scale production of Eleutherococcus sessiliflorus somatic embryos in an air-lift bioreactor and production of eleutherosides | |
| FR3051116B1 (fr) | Procede de production du celastrol et de derives triterpeniques pentacycliques | |
| Wadegaonkar et al. | Direct rhizogenesis and establishment of fast growing normal root organ culture of Withania somnifera Dunal | |
| CA1308375C (en) | Flavor composition and method | |
| CN102659521A (zh) | 一种海藻溴代倍半萜类化合物及其制备和应用 | |
| KR102140050B1 (ko) | 갈란타민 생산을 위한 석산 부정근의 생산방법 | |
| CN107333651B (zh) | 一种提高霍山石斛原球茎生物碱含量的方法 | |
| JP2010233517A (ja) | フコキサンチン含有微細藻類培養物、及びその製造方法 | |
| Hemmati et al. | Accumulation of ajmalicine and vinblastine in cell cultures is enhanced by endophytic fungi of Catharanthus roseus cv. Icy Pink | |
| Łuczkiewicz et al. | Production of pulchelin E in hairy roots, callus and suspension cultures of Rudbeckia hirta L. | |
| JP2016538887A (ja) | タプシア細胞懸濁培養によるタプシガルギンの産生 | |
| RU2639566C1 (ru) | Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq. в условиях in vitro - продуцент туркестерона | |
| RU2360964C1 (ru) | КУЛЬТУРА КОРНЯ Hed.th. (Hedysarum theinum Krasnob.) - ПРОДУЦЕНТ ИЗОФЛАВОНОВ | |
| Behera et al. | Experimental studies on the growth and usnic acid production in “lichen” Usnea ghattensis in vitro | |
| Kang et al. | Rapid in vitro adventitious shoot propagation of Scopolia parviflora through rhizome cultures for enhanced production of tropane alkaloids | |
| Nazirah et al. | Production of 9-methoxycanthin-6-one in elicited Eurycoma longifolia hairy root | |
| WO2007107803A2 (en) | Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. | |
| KR101467661B1 (ko) | 생리활성물질의 함량이 증가된 섬오갈피 부정근의 배양방법 | |
| RU2605912C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРЫ ИЗОЛИРОВАННЫХ КОРНЕЙ Silene linicola К1601 - ПРОДУЦЕНТА ЭКДИСТЕРОИДОВ | |
| Georgiev et al. | Production of iridoids and phenolics by transformed Harpagophytum procumbens root cultures | |
| RU2296155C1 (ru) | Штамм культивированных клеток растений serratula coronata l. | |
| Zavala-Ortiz et al. | Interest of cellular differentiation in the production of vincristine and vinblastine in suspension cultures of Catharanthus roseus (L.) G Don. | |
| KR102140231B1 (ko) | 구상나무 추출물, 구상나무 이차대사물질의 분리정제방법 및 그로부터 정제된 구상나무 이차대사물질 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190806 |