JP2019516719A - ファブリー病の治療のためのα−ガラクトシダーゼAをコードするポリヌクレオチド - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2016年5月18日に出願された米国仮出願第62/338,354号の優先権の利益を主張するものであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
この電子的に提出された配列表の内容(名前:3529.107PC02_Sequence_Listing_ST25.txt、サイズ:177,526バイト、作成日:2017年5月17日)は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
現在、ファブリー病に対する治療は、典型的には、疼痛を低減するためのジフェニルヒダントイン、カルバマゼピン、またはガバペンチン、タンパク尿症を低減するためのACE阻害剤またはアンギオテンシン受容体遮断剤、ならびに腎疾患を治療するための慢性血液透析及び/または腎移植からなる。酵素補充療法もまた推奨されることが多いが、その有効性は証明されていない。Mehta et al.GeneReviews:Fabry Disease,University of Washington,Seattle(2013)。故に、ファブリー病を治療するための改善された治療薬及び療法が必要とされる。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、あるいはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、
−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−N(R)R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1−6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2−6アルケニル、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、
但し、R4が−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、または−CQ(R)2であるとき、(i)Qは、nが1、2、3、4もしくは5である場合の−N(R)2ではないか、あるいは(ii)Qは、nが1または2である場合の5、6、または7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、あるいはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、
−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−N(R)R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1−6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2−6アルケニル、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及び
C3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及び
C2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、但し、R4が−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、または−CQ(R)2であるとき、(i)Qは、nが1、2、3、4もしくは5である場合の−N(R)2ではないか、あるいは(ii)Qは、nが1または2である場合の5、6、または7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする。
R1は、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、あるいはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、
−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、
−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及び
C3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及び
C2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、但し、R4が−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、または−CQ(R)2であるとき、(i)Qは、nが1、2、3、4もしくは5である場合の−N(R)2ではないか、あるいは(ii)Qは、nが1または2である場合の5、6、または7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする。
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
mは、5、6、7、8、及び9から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、1、2、3、4、または5であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、−NHC(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)R8、−NHC(=NR9)N(R)2、−NHC(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、
−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される。
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
mは、5、6、7、8、及び9から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、1、2、3、4、または5であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、または−NHC(O)N(R)2であり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、
−P(O)(OR’)O−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される。
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、2、3、または4であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、−NHC(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)R8、−NHC(=NR9)N(R)2、−NHC(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される。
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、2、3、または4であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、または−NHC(O)N(R)2であり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、
−P(O)(OR’)O−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される。
式中、nは、2、3、及び4から選択され、m、R’、R”、及びR2〜R6は、本明細書に記載される通りである。例えば、R2及びR3の各々は独立して、C5−14アルキル及びC5−14アルケニルからなる群から選択され得る。
式中、R2及びR3は独立して、C5−14アルキル及びC5−14アルケニルからなる群から選択され、nは、2、3、及び4から選択され、R’、R’’、R5、R6及びmは、本明細書で定義される通りである。
環Aは、
tは、1または2であり、
A1及びA2は各々独立して、CHまたはNから選択され、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、
−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
X1、X2、及びX3は独立して、結合、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
i)X1、X2、及びX3のうちの少なくとも1つは、−CH2−ではないか、及び/または
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、−R”MR’である。
A1及びA2は各々独立して、CHまたはNから選択され、A1及びA2のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立して、C6−20アルキル及びC6−20アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
i)R1、R2、R3、R4、及びR5は同じであり、ここでR1は、C12アルキル、C18アルキル、またはC18アルケニルではない、
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの1つのみが、C6−20アルケニルから選択される、
iii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも別の1つとは異なる数の炭素原子を有する、
iv)R1、R2、及びR3は、C6−20アルケニルから選択され、R4及びR5は、C6−20アルキルから選択される、あるいは
v)R1、R2、及びR3は、C6−20アルキルから選択され、R4及びR5は、C6−20アルケニルから選択される。
A3は、CHまたはNであり、
A4は、CH2またはNHであり、A3及びA4のうちの少なくとも1つは、NまたはNHであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、及びR3は独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
X1及びX2は独立して、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択される。
A6及びA7は各々独立して、CHまたはNから選択され、A6及びA7のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
X4及びX5は独立して、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
R1、R2,R3、R4、及びR5は各々、独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択される。
α−ガラクトシダーゼA(GLA)は、ホモ二量体グリコシド加水分解酵素である48,767Daのポリペプチドである。それは、糖脂質及び糖タンパク質からの末端アルファ−ガラクトシル部分を加水分解する。GLAは、ヒトにおけるGLA遺伝子によってコードされる。
本発明は、ファブリー病の治療(すなわち、予防的及び/または治療的治療)において使用するためのmRNAを特徴とする。本発明における使用のために特徴が示されるmRNAは、対象に投与され、インビボでヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)タンパク質(複数可)をコードする。したがって、本発明は、ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)、そのアイソフォーム、その機能的断片、及びGLAを含む融合タンパク質をコードする連結したヌクレオシドのオープンリーディングフレームを含む、ポリヌクレオチド、例えば、mRNAに関する。いくつかの実施形態では、オープンリーディングフレームは、配列最適化される。特定の実施形態では、本発明は、ヒトGLAのポリペプチド配列、または配列最適化ポリヌクレオチドとの高い配列同一性を有する配列をコードするヌクレオチドを含む、配列最適化ポリヌクレオチドを提供する。
(i)完全長GLAポリペプチド(例えば、野生型GLAと同じまたは本質的に同じ長さを有する)、
(ii)野生型GLAの機能的断片(例えば、野生型GLAよりも短いが、依然としてGLA酵素活性を保持する、切詰め(例えば、カルボキシ末端、アミノ末端、または内部領域の欠失)配列)、
(iii)そのバリアント(例えば、1つ以上のアミノ酸が置き換えられた完全長または切詰めタンパク質、例えば、野生型GLAのGLA活性の全てまたはほとんどを保持するバリアント)、または
(iv)(i)完全長GLAタンパク質、機能的断片またはそのバリアント、及び(ii)異種タンパク質を含む融合タンパク質。
本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)はまた、コードされるポリペプチドが治療的に関連性のある部位へ輸送されるのを容易にする追加の特徴をコードする、ヌクレオチド配列も含み得る。タンパク質輸送を補助する1つのかかる特徴は、シグナル配列、または標的化配列である。これらのシグナル配列によってコードされるペプチドは、標的化ペプチド、輸送ペプチド、及びシグナルペプチドを含めて、多様な名称で知られている。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、本明細書に記載のGLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結された、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、目的のポリペプチドをコードする1つを超える核酸配列(例えば、ORF)を含み得る。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、GLAポリペプチド、その機能的断片、またはバリアントをコードする単一のORFを含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、1つを超えるORF、例えば、GLAポリペプチド(第1の目的のポリペプチド)、その機能的断片、またはバリアントをコードする第1のORFと、第2の目的のポリペプチドを発現する第2のORFとを含み得る。いくつかの実施形態では、2つ以上の目的のポリペプチドが遺伝子融合され得る、すなわち、2つ以上のポリペプチドが同じORFによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、2つ以上の目的のポリペプチド間のリンカー(例えば、G4Sペプチドリンカーまたは当該技術分野で既知の別のリンカー)をコードする核酸配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、配列最適化される。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、配列最適化される、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)、別の目的のポリペプチド、5’−UTR、3’−UTR、miRNAをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)、リンカーをコードするヌクレオチド配列、またはそれらの任意の組み合わせ)を含む。配列最適化の一態様
(i)参照ヌクレオチド配列(例えば、GLAポリペプチドをコードするORF)における少なくとも1つのコドンを、ウリジン含量を増加または減少させるように代替のコドンで置換して、ウリジン修飾配列を生成すること、
(ii)同義コドン組において参照ヌクレオチド配列(例えば、GLAポリペプチドをコードするORF)における少なくとも1つのコドンを、より高いコドン頻度を有する代替のコドンで置換すること、
(iii)参照ヌクレオチド配列(例えば、GLAポリペプチドをコードするORF)における少なくとも1つのコドンを、G/C含量を増加させるように代替のコドンで置換すること、あるいは
(iv)それらの組み合わせ。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に開示されるGLAポリペプチドをコードする配列最適化ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、GLAポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含み、このORFは、配列最適化されたものである。
(i)本明細書に提供される5’キャップ、例えば、CAP1、
(ii)本明細書に提供される配列、例えば、配列番号33等の5’UTR、
(iii)GLAポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、例えば、配列番号3〜27、79〜80、及び141〜159として記載される、または表2に示されるGLAをコードする配列最適化核酸配列、
(iv)少なくとも1つの停止コドン;
(v)本明細書に提供される配列、例えば、配列番号81、82、または103等の3’UTR、ならびに
(vi)上記で提供されるポリA尾部。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、例えば、mRNA(例えば、GLAポリペプチド(例えば、野生型配列、その機能的断片、またはバリアント)をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、配列最適化される。配列最適化ヌクレオチド配列(ヌクレオチド配列は、本明細書で「核酸」とも称される)は、参照配列(例えば、GLAポリペプチドをコードする野生型配列)に対して、少なくとも1つのコドン修飾を含む。故に、配列最適化核酸において、少なくとも1つのコドンが、参照配列(例えば、野生型配列)における対応するコドンとは異なる。
(i)逐次的:各配列最適化方法または設計規則の各組が、全体的配列のうちの異なる部分配列に適用される、例えば、コドン1〜30位においてウリジンを低減し、次いでその配列の残りの部分について高頻度コドンを選択する、
(ii)階層的:いくつかの配列最適化方法または設計規則の組が、階層的、確定的様式で組み合わされる。例えば、最もGCリッチなコドンを使用して、それらのコドンのうち最も頻繁なものを選定することによって連結(共通である)を破断する。
(iii)多因子的/多パラメータ的:機械学習または他のモデリング手法を用いて、複数の重複する及びことによると矛盾する要件を最もよく満たす単一の配列を設計する。このアプローチは、いくつかの数学的手法、例えば、遺伝子アルゴリズムを適用するコンピュータの使用を必要とする。
核酸配列における局所的に高濃度のウリジンの存在は、とりわけ、修飾されたウリジン類似体が合成mRNAの生産において使用される場合、例えば、緩徐なまたは未成熟で終結した翻訳等、翻訳に有害な影響を有し得る。さらに、高ウリジン含量はまた、TLR活性化に起因して合成mRNAのインビボ半減期を低減し得る。
(i)全体的なウリジン含量の増加または減少
(ii)局所的なウリジン含量の増加または減少(すなわち、ウリジン含量の変化は、特定の部分配列に限定される)、
(iii)全体的なウリジン含量を変化させることのないウリジン分布の変化、
(iv)ウリジンクラスタリングの変化(例えば、クラスターの数、クラスターの箇所、またはクラスター間の距離)、あるいは
(v)それらの組み合わせ。
参照核酸配列は、参照核酸配列のグアニン/シトシン(G/C)含量(絶対または相対)を変化させることを含む方法を用いて配列最適化され得る。かかる最適化は、参照核酸配列の全体的なG/C含量(絶対または相対)を変化させる(例えば、増加させるまたは減少させる)こと、参照核酸配列におけるG/C含量の局所的な変更を導入すること(例えば、参照核酸配列における選択される領域または部分配列のG/Cを増加または減少させる)、参照核酸配列におけるG/Cクラスターの頻度、サイズ、及び分布を変化させること、またはそれらの組み合わせを含み得る。
当該技術分野で既知の多数のコドン最適化方法は、参照核酸配列におけるコドンの、より高い頻度を有するコドンでの置換に基づく。故に、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるGLAをコードする核酸配列は、非コドン最適化配列における使用頻度に対する、配列最適化核酸における他の同義コドンと比べた1つ以上のコドンの使用頻度の変更を含む方法を用いて、配列最適化され得る。
配列最適化に影響し得る様々なモチーフが存在し、それは、例えば以下の非排他的部類に分類される。
(i)モチーフに基づく一次配列:ヌクレオチドの単純な配置によって定義されるモチーフ。
(ii)構造モチーフ:ある特定の二次構造を形成する傾向にあるヌクレオチドの配置によってコードされるモチーフ。
(iii)局所モチーフ:1つの隣接する部分配列中にコードされるモチーフ。
(iv)分布モチーフ:2つ以上の分解された部分配列中にコードされるモチーフ。
(v)有利なモチーフ:ヌクレオチドの構造または機能を改善するモチーフ。
(vi)不利なモチーフ:ヌクレオチドの構造または機能への有害な影響を有するモチーフ。
他の実施形態では、不利なモチーフの同定及びそれらの除去は、本明細書に開示される配列最適化方法のうちの2つ以上を含む多パラメータ核酸最適化方法において統合された追加の配列最適化技術として使用される。この仕方で使用される場合、最適化プロセスの間に同定される不利なモチーフは、例えば、元々の設計原理(複数可)(例えば、低いU、高い頻度等)と可能な限り綿密に維持するために、最も低い可能な数のヌクレオ塩基を置換することによって除去され得る。例えば、米国公開第US2014/0228558号、第US2005/0032730号、または第US2014/0228558号を参照されたく、それらは、それらの全体において参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの特定の実施形態では、GLAポリペプチドをコードする参照核酸配列における配列最適化は、限られたコドンセット、例えば、自然数より少ないコドンが20個の天然アミノ酸、20個の天然アミノ酸のサブセット、または例えば非天然アミノ酸を含むアミノ酸の拡大されたセットをコードするために使用されるコドンセットを使用して行われ得る。
(i)最適化コドンセットは、元々のもしくは天然コドンセットより高い平均G/C含量を有する;または、
(ii)最適化コドンセットは、元々のもしくは天然コドンセットより低い平均U含量を有する;または、
(iii)最適化コドンセットは、最も高い頻度を有するコドンからなる;または、
(iv)最適化コドンセットは、最も低い頻度を有するコドンからなる;または、
(v)それらの組み合わせ。
本発明のいくつかの実施形態では、GLAポリペプチドをコードする本明細書に開示される配列最適化核酸を含むポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、少なくとも1つの核酸配列特性(例えば、ヌクレアーゼに曝露される場合の安定性)または発現特性が、非配列最適化核酸に関して改善されているかどうかを判定するために試験され得る。
本発明のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの所望の特性は、核酸配列の固有特性である。例えば、ヌクレオチド配列(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、インビボまたはインビトロでの安定性のために配列最適化され得る。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は、特定の標的組織または細胞中の発現のために配列最適化され得る。いくつかの実施形態では、核酸配列は、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼによるその分解を防ぐことによってその血漿半減期を増加させるために配列最適化される。
本発明のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド所望の特性は、本明細書に開示される配列最適化配列によってコードされるGLAポリペプチドの発現のレベルである。タンパク質発現レベルは、1つ以上の発現系を使用して測定され得る。いくつかの実施形態では、発現は、細胞培養系、例えば、CHO細胞またはHEK293細胞中で測定され得る。いくつかの実施形態では、発現は、生細胞の抽出物、例えば、ウサギ網状赤血球ライセートから調製されたインビトロ発現系、または精製された個々の構成成分の集合体によって調製されたインビトロ発現系を使用して測定され得る。他の実施形態では、タンパク質発現は、インビボ系、例えば、マウス、ウサギ、サル等において測定される。
いくつかの実施形態では、核酸配列によってコードされる異種治療用タンパク質の発現は、標的組織及び細胞において有害な影響を有し得、タンパク質産出を低減するか、または発現された生成物の質を低減するか(例えば、タンパク質断片の存在または封入体中の発現されたタンパク質の沈殿に起因する)、または毒性を引き起こす。
いくつかの場合では、GLAポリペプチドまたはその機能的断片をコードする配列最適化核酸の投与は、免疫応答を引き起こし得、それは、(i)治療剤(例えば、GLAポリペプチドをコードするmRNA)、または(ii)かかる治療剤の発現生成物(例えば、mRNAによってコードされるGLAポリペプチド)、または(iv)それらの組み合わせによって引き起こされ得る。したがって、本開示のいくつかの実施形態では、本明細書に開示される核酸配列(例えば、mRNA)の配列最適化減少免疫は、GLAポリペプチドをコードする核酸の投与によって、またはかかる核酸によってコードされるGLAの発現生成物によって引き起こされる、免疫もしくは炎症性反応を減少させるために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、化学修飾されたヌクレオ塩基、例えば、5−メトキシウラシルを含む。いくつかの実施形態では、mRNAは、GLAポリペプチドをコードするORFを含むウラシル修飾配列を含み、mRNAは、化学修飾されたヌクレオ塩基、例えば、5−メトキシウラシルを含む。
本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含む修飾されたポリヌクレオチドを含む(例えば、ポリヌクレオチド、例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むmRNA)。修飾されたポリヌクレオチドは、化学修飾及び/または構造修飾され得る。本発明のポリヌクレオチドは、化学修飾及び/または構造修飾されている場合、ポリヌクレオチドは、「修飾されたポリヌクレオチド」と称され得る。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、構造的に修飾されている。本明細書で使用されるように、「構造」修飾は、ヌクレオチド自体への著しい化学修飾なしでポリヌクレオチド中で2つ以上の結合されたヌクレオシドが、挿入、欠失、重複、転化、またはランダム化されるものである。化学結合が必然的に破壊及び改質されて、構造修飾に影響を与えるため、構造修飾は化学的性質であり、それ故に化学修飾である。しかしながら、構造修飾は、ヌクレオチドの異なる配列をもたらす。例えば、ポリヌクレオチド「ATCG」は、「AT−5meC−G」に化学修飾され得る。同じポリヌクレオチドは、「ATCG」から「ATCCCG」に構造的に修飾され得る。ここで、ジヌクレオチド「CC」は挿入され、ポリヌクレオチドへの構造修飾をもたらす。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、化学修飾されている。ポリヌクレオチドの参照において本明細書で使用されるように、「化学修飾」または、適切な場合、「化学修飾された」という用語は、1つ以上のそれらの位置、パターン、パーセント、または集団において、アデノシン(A)、グアノシン(G)、ウリジン(U)、チミジン(T)、またはシチジン(C)リボ−もしくはデオキシリボヌクレオシドに関する修飾を指す。一般に、本明細書において、これらの用語は、天然発生型5’−末端mRNAキャップ部分におけるリボヌクレオチド修飾を指すことは意図しない。
メルカプトグアノシンTP;2’−デオキシ−2’−b−チオメトキシグアノシンTP;4’−アジドグアノシンTP;4’−炭素環式グアノシンTP;4’−エチニルグアノシンTP;5’−ホモ−グアノシンTP;8−ブロモ−グアノシンTP;9−デアザグアノシンTP;N2−イソブチル−グアノシンTP;1−メチルイノシン;イノシン;1,2’−O−ジメチルイノシン;2’−O−メチルイノシン;7−メチルイノシン;2’−O−メチルイノシン;エポキシキューオシン;ガラクトシル−キューオシン;マンノシルキューオシン;キューオシン;アリアミノ−チミジン;アザチミジン;デアザチミジン;デオキシ−チミジン;2’−O−メチルウリジン;2−チオウリジン;3−メチルウリジン;5−カルボキシメチルウリジン;5−ヒドロキシウリジン;5−メチルウリジン;5−タウリノメチル−2−チオウリジン;5−タウリノメチルウリジン;ジヒドロウリジン;シュードウリジン;(3−(3−アミノ−3−カルボキシプロピル)ウリジン;1−メチル−3−(3−アミノ−5−カルボキシプロピル)シュードウリジン;1−メチルシュードウリジン;1−エチル−シュードウリジン;2’−O−メチルウリジン;2’−O−メチルシュードウリジン;2’−O−メチルウリジン;2−チオ−2’−O−メチルウリジン;3−(3−アミノ−3−カルボキシプロピル)ウリジン;3,2’−O−ジメチルウリジン;3−メチル−シュード−ウリジンTP;4−チオウリジン;5−(カルボキシヒドロキシメチル)ウリジン;5−(カルボキシヒドロキシメチル)ウリジンメチルエステル;5,2’−O−ジメチルウリジン;5,6−ジヒドロ−ウリジン;5−アミノメチル−2−チオウリジン;5−カルバモイルメチル−2’−O−メチルウリジン;5−カルバモイルメチルウリジン;5−カルボキシヒドロキシメチルウリジン;5−カルボキシヒドロキシメチルウリジンメチルエステル;5−カルボキシメチルアミノメチル−2’−O−メチルウリジン;5−カルボキシメチルアミノメチル−2−チオウリジン;5−カルボキシメチルアミノメチル−2−チオウリジン;5−カルボキシメチルアミノメチルウリジン;5−カルボキシメチルアミノメチルウリジン;5−カルバモイルメチルウリジンTP;5−メトキシカルボニルメチル−2’−O−メチルウリジン;5−メトキシカルボニルメチル−2−チオウリジン;5−メトキシカルボニルメチルウリジン;5−メチルウリジン,)、5−メトキシウリジン;5−メチル−2−チオウリジン;5−メチルアミノメチル−2−セレノウリジン;5−メチルアミノメチル−2−チオウリジン;5−メチルアミノメチルウリジン;5−メチルジヒドロウリジン;5−オキシ酢酸−ウリジンTP;5−オキシ酢酸−メチルエステル−ウリジンTP;N1−メチル−シュード−ウラシル;N1−エチル−シュード−ウラシル;ウリジン5−オキシ酢酸;ウリジン5−オキシ酢酸メチルエステル;3−(3−アミノ−3−カルボキシプロピル)−ウリジンTP;5−(イソ−ペンテニルアミノメチル)−2−チオウリジンTP;5−(イソ−ペンテニルアミノメチル)−2’−O−メチルウリジンTP;5−(イソ−ペンテニルアミノメチル)ウリジンTP;5−プロピニルウラシル;α−チオ−ウリジン;1(アミノアルキルアミノ−カルボニルエチルエニル)−2(チオ)−シュードウラシル;1(アミノアルキルアミノカルボニルエチルエニル)−2,4−(ジチオ)シュードウラシル;1(アミノアルキルアミノカルボニルエチルエニル)−4(チオ)シュードウラシル;1(アミノアルキルアミノカルボニルエチルエニル)−シュードウラシル;1(アミノカルボニルエチルエニル)−2(チオ)−シュードウラシル;1(アミノカルボニルエチルエニル)−2,4−(ジチオ)シュードウラシル;1(アミノカルボニルエチルエニル)−4(チオ)シュードウラシル;1(アミノカルボニルエチルエニル)−シュードウラシル;1置換2(チオ)−シュードウラシル;1置換2,4−(ジチオ)シュードウラシル;1置換4(チオ)シュードウラシル;1置換シュードウラシル;1−(アミノアルキルアミノ−カルボニルエチルエニル)−2−(チオ)−シュードウラシル;1−メチル−3−(3−アミノ−3−カルボキシプロピル)シュードウリジンTP;1−メチル−3−(3−アミノ−3−カルボキシプロピル)シュード−UTP;1−メチル−シュード−UTP;1−エチル−シュード−UTP;2(チオ)シュードウラシル;2’デオキシウリジン;2’フルオロウリジン;2−(チオ)ウラシル;2,4−(ジチオ)シュードウラシル;2’メチル、2’アミノ、2’アジド、2’フルロ−グアノシン;2’−アミノ−2’−デオキシ−UTP;2’−アジド−2’−デオキシ−UTP;2’−アジド−デオキシウリジンTP;2’−O−メチルシュードウリジン;2’デオキシウリジン;2’フルオロウリジン;2’−デオキシ−2’−a−アミノウリジンTP;2’−デオキシ−2’−a−アジドウリジンTP;2−メチルシュードウリジン;3(3アミノ−3カルボキシプロピル)ウラシル;4(チオ)シュードウラシル;4−(チオ)シュードウラシル;4−(チオ)ウラシル;4−チオウラシル;5(1,3−ジアゾール−1−アルキル)ウラシル;5(2−アミノプロピル)ウラシル;5(アミノアルキル)ウラシル;5(ジメチルアミノアルキル)ウラシル;5(グアニジニウムアルキル)ウラシル;5(メトキシカルボニルメチル)−2−(チオ)ウラシル;5(メトキシカルボニル−メチル)ウラシル;5(メチル)2(チオ)ウラシル;5(メチル)2,4(ジチオ)ウラシル;5(メチル)4(チオ)ウラシル;5(メチルアミノメチル)−2(チオ)ウラシル;5(メチルアミノメチル)−2,4(ジチオ)ウラシル;5(メチルアミノメチル)−4(チオ)ウラシル;5(プロピニル)ウラシル;5(トリフルオロメチル)ウラシル;5−(2−アミノプロピル)ウラシル;5−(アルキル)−2−(チオ)シュードウラシル;5−(アルキル)−2,4(ジチオ)シュードウラシル;5−(アルキル)−4(チオ)シュードウラシル;5−(アルキル)シュードウラシル;5−(アルキル)ウラシル;5−(アルキニル)ウラシル;5−(アリールアミノ)ウラシル;5−(シアノアルキル)ウラシル;5−(ジアルキルアミノアルキル)ウラシル;5−(ジメチルアミノアルキル)ウラシル;5−(グアニジニウムアルキル)ウラシル;5−(ハロ)ウラシル;5−(l,3−ジアゾール−l−アルキル)ウラシル;5−(メトキシ)ウラシル;5−(メトキシカルボニルメチル)−2−(チオ)ウラシル;5−(メトキシカルボニル−メチル)ウラシル;5−(メチル)2(チオ)ウラシル;5−(メチル)2,4(ジチオ)ウラシル;5−(メチル)4(チオ)ウラシル;5−(メチル)−2−(チオ)シュードウラシル;5−(メチル)−2,4(ジチオ)シュードウラシル;5−(メチル)−4(チオ)シュードウラシル;5−(メチル)シュードウラシル;5−(メチルアミノメチル)−2(チオ)ウラシル;5−(メチルアミノメチル)−2,4(ジチオ)ウラシル;5−(メチルアミノメチル)−4−(チオ)ウラシル;5−(プロピニル)ウラシル;5−(トリフルオロメチル)ウラシル;5−アミノアリール−ウリジン;5−ブロモ−ウリジン;5−ヨード−ウリジン;5−ウラシル;6(アゾ)ウラシル;6−(アゾ)ウラシル;6−アザ−ウリジン;アリアミノ−ウラシル;アザウラシル;デアザウラシル;N3(メチル)ウラシル;シュード−UTP−1−2−エタン酸;シュードウラシル;4−チオ−シュード−UTP;1−カルボキシメチル−シュードウリジン;1−メチル−1−デアザ−シュードウリジン;1−プロピニル−ウリジン;1−タウリノメチル−1−メチル−ウリジン;1−タウリノメチル−4−チオ−ウリジン;1−タウリノメチル−シュードウリジン;2−メトキシ−4−チオ−シュードウリジン;2−チオ−1−メチル−1−デアザ−シュードウリジン;2−チオ−1−メチル−シュードウリジン;2−チオ−5−アザ−ウリジン;2−チオ−ジヒドロシュードウリジン;2−チオ−ジヒドロウリジン;2−チオ−シュードウリジン;4−メトキシ−2−チオ−シュードウリジン;4−メトキシ−シュードウリジン;4−チオ−1−メチル−シュードウリジン;4−チオ−シュードウリジン;5−アザ−ウリジン;ジヒドロシュードウリジン;(±)1−(2−ヒドロキシプロピル)シュードウリジンTP;(2R)−1−(2−ヒドロキシプロピル)シュードウリジンTP;(2S)−1−(2−ヒドロキシプロピル)シュードウリジンTP;(E)−5−(2−ブロモ−ビニル)アラ−ウリジンTP;(E)−5−(2−ブロモ−ビニル)ウリジンTP;(Z)−5−(2−ブロモ−ビニル)アラ−ウリジンTP;(Z)−5−(2−ブロモ−ビニル)ウリジンTP;1−(2,2,2−トリフルオロエチル)−シュード−UTP;1−(2,2,3,3,3−ペンタフルオロプロピル)シュードウリジンTP;1−(2,2−ジエトキシエチル)シュードウリジンTP;1−(2,4,6−トリメチルベンジル)シュードウリジンTP;1−(2,4,6−トリメチル−ベンジル)シュード−UTP;1−(2,4,6−トリメチル−フェニル)シュード−UTP;1−(2−アミノ−2−カルボキシエチル)シュード−UTP;1−(2−アミノ−エチル)シュード−UTP;1−(2−ヒドロキシエチル)シュードウリジンTP;1−(2−メトキシエチル)シュードウリジンTP;1−(3,4−ビス−トリフルオロメトキシベンジル)シュードウリジンTP;1−(3,4−ジメトキシベンジル)シュードウリジンTP;1−(3−アミノ−3−カルボキシプロピル)シュード−UTP;1−(3−アミノ−プロピル)シュード−UTP;1−(3−シクロプロピル−プロップ−2−イニル)シュードウリジンTP;1−(4−アミノ−4−カルボキシブチル)シュード−UTP;1−(4−アミノ−ベンジル)シュード−UTP;1−(4−アミノ−ブチル)シュード−UTP;1−(4−アミノ−フェニル)シュード−UTP;1−(4−アジドベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−ブロモベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−クロロベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−フルオロベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−ヨードベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−メタンスルホニルベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−メトキシベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−メトキシ−ベンジル)シュード−UTP;1−(4−メトキシ−フェニル)シュード−UTP;1−(4−メチルベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−メチル−ベンジル)シュード−UTP;1−(4−ニトロベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−ニトロ−ベンジル)シュード−UTP;1(4−ニトロ−フェニル)シュード−UTP;1−(4−チオメトキシベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−トリフルオロメトキシベンジル)シュードウリジンTP;1−(4−トリフルオロメチルベンジル)シュードウリジンTP;1−(5−アミノ−ペンチル)シュード−UTP;1−(6−アミノ−ヘキシル)シュード−UTP;1,6−ジメチル−シュード−UTP;1−[3−(2−{2−[2−(2−アミノエトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−プロピオニル]シュードウリジンTP;1−{3−[2−(2−アミノエトキシ)−エトキシ]−プロピオニル}シュードウリジンTP;1−アセチルシュードウリジンTP;1−アルキル−6−(1−プロピニル)−シュード−UTP;1−アルキル−6−(2−プロピニル)−シュード−UTP;1−アルキル−6−アリール−シュード−UTP;1−アルキル−6−エチニル−シュード−UTP;1−アルキル−6−ホモアリール−シュード−UTP;1−アルキル−6−ビニル−シュード−UTP;1−アリールシュードウリジンTP;1−アミノメチル−シュード−UTP;1−ベンゾイルシュードウリジンTP;1−ベンジルオキシメチルシュード
ウリジンTP;1−ベンジル−シュード−UTP;1−ビオチニル−PEG2−シュードウリジンTP;1−ビオチニルシュードウリジンTP;1−ブチル−シュード−UTP;1−シアノメチルシュードウリジンTP;1−シクロブチルメチル−シュード−UTP;1−シクロブチル−シュード−UTP;1−シクロへプチルメチル−シュード−UTP;1−シクロへプチル−シュード−UTP;1−シクロヘキシルメチル−シュード−UTP;1−シクロヘキシル−シュード−UTP;1−シクロオクチルメチル−シュード−UTP;1−シクロオクチル−シュード−UTP;1−シクロペンチルメチル−シュード−UTP;1−シクロペンチル−シュード−UTP;1−シクロプロピルメチル−シュード−UTP;1−シクロプロピル−シュード−UTP;1−エチル−シュード−UTP;1−ヘキシル−シュード−UTP;1−ホモアリールシュードウリジンTP;1−ヒドロキシメチルシュードウリジンTP;1−イソ−プロピル−シュード−UTP;1−Me−2−チオ−シュード−UTP;1−Me−4−チオ−シュード−UTP;1−Me−α−チオ−シュード−UTP;1−メタンスルホニルメチルシュードウリジンTP;1−メトキシメチルシュードウリジンTP;1−メチル−6−(2,2,2−トリフルオロエチル)シュード−UTP;1−メチル−6−(4−モルホリノ)−シュード−UTP;1−メチル−6−(4−チオモルホリノ)−シュード−UTP;1−メチル−6−(置換フェニル)シュード−UTP;1−メチル−6−アミノ−シュード−UTP;1−メチル−6−アジド−シュード−UTP;1−メチル−6−ブロモ−シュード−UTP;1−メチル−6−ブチル−シュード−UTP;1−メチル−6−クロロ−シュード−UTP;1−メチル−6−シアノ−シュード−UTP;1−メチル−6−ジメチルアミノ−シュード−UTP;1−メチル−6−エトキシ−シュード−UTP;1−メチル−6−エチルカルボキシレート−シュード−UTP;1−メチル−6−エチル−シュード−UTP;1−メチル−6−フルオロ−シュード−UTP;1−メチル−6−ホルミル−シュード−UTP;1−メチル−6−ヒドロキシアミノ−シュード−UTP;1−メチル−6−ヒドロキシ−シュード−UTP;1−メチル−6−ヨード−シュード−UTP;1−メチル−6−イソ−プロピル−シュード−UTP;1−メチル−6−メトキシ−シュード−UTP;1−メチル−6−メチルアミノ−シュード−UTP;1−メチル−6−フェニル−シュード−UTP;1−メチル−6−プロピル−シュード−UTP;1−メチル−6−tert−ブチル−シュード−UTP;1−メチル−6−トリフルオロメトキシ−シュード−UTP;1−メチル−6−トリフルオロメチル−シュード−UTP;1−モルホリノメチルシュードウリジンTP;1−ペンチル−シュード−UTP;1−フェニル−シュード−UTP;1−ピバロイルシュードウリジンTP;1−プロパルギルシュードウリジンTP;1−プロピル−シュード−UTP;1−プロピニル−シュードウリジン;1−p−トリル−シュード−UTP;1−tert−ブチル−シュード−UTP;1−チオメトキシメチルシュードウリジンTP;1−チオモルホリノメチルシュードウリジンTP;1−トリフルオロアセチルシュードウリジンTP;1−トリフルオロメチル−シュード−UTP;1−ビニルシュードウリジンTP;2,2’−アンヒドロ−ウリジンTP;2’−ブロモ−デオキシウリジンTP;2’−F−5−メチル−2’−デオキシ−UTP;2’−OMe−5−Me−UTP;2’−OMe−シュード−UTP;2’−a−エチニルウリジンTP;2’−a−トリフルオロメチルウリジンTP;2’−b−エチニルウリジンTP;2’−b−トリフルオロメチルウリジンTP;2’−デオキシ−2’,2’−ジフルオロウリジンTP;2’−デオキシ−2’−a−メルカプトウリジンTP;2’−デオキシ−2’−a−チオメトキシウリジンTP;2’−デオキシ−2’−b−アミノウリジンTP;2’−デオキシ−2’−b−アジドウリジンTP;2’−デオキシ−2’−b−ブロモウリジンTP;2’−デオキシ−2’−b−クロロウリジンTP;2’−デオキシ−2’−b−フルオロウリジンTP;2’−デオキシ−2’−b−ヨードウリジンTP;2’−デオキシ−2’−b−メルカプトウリジンTP;2’−デオキシ−2’−b−チオメトキシウリジンTP;2−メトキシ−4−チオ−ウリジン;2−メトキシウリジン;2’−O−メチル−5−(1−プロピニル)ウリジンTP;3−アルキル−シュード−UTP;4’−アジドウリジンTP;4’−炭素環式ウリジンTP;4’−エチニルウリジンTP;5−(1−プロピニル)アラ−ウリジンTP;5−(2−フラニル)ウリジンTP;5−シアノウリジンTP;5−ジメチルアミノウリジンTP;5’−ホモ−ウリジンTP;5−ヨード−2’−フルオロ−デオキシウリジンTP;5−フェニルエチニルウリジンTP;5−トリデューテロメチル−6−デューテロウリジンTP;5−トリフルオロメチル−ウリジンTP;5−ビニルアラウリジンTP;6−(2,2,2−トリフルオロエチル)−シュード−UTP;6−(4−モルホリノ)−シュード−UTP;6−(4−チオモルホリノ)−シュード−UTP;6−(置換−フェニル)−シュード−UTP;6−アミノ−シュード−UTP;6−アジド−シュード−UTP;6−ブロモ−シュード−UTP;6−ブチル−シュード−UTP;6−クロロ−シュード−UTP;6−シアノ−シュード−UTP;6−ジメチルアミノ−シュード−UTP;6−エトキシ−シュード−UTP;6−エチルカルボキシレート−シュード−UTP;6−エチル−シュード−UTP;6−フルオロ−シュード−UTP;6−ホルミル−シュード−UTP;6−ヒドロキシアミノ−シュード−UTP;6−ヒドロキシ−シュード−UTP;6−ヨード−シュード−UTP;6−イソ−プロピル−シュード−UTP;6−メトキシ−シュード−UTP;6−メチルアミノ−シュード−UTP;6−メチル−シュード−UTP;6−フェニル−シュード−UTP;6−フェニル−シュード−UTP;6−プロピル−シュード−UTP;6−tert−ブチル−シュード−UTP;6−トリフルオロメトキシ−シュード−UTP;6−トリフルオロメチル−シュード−UTP;α−チオ−シュード−UTP;シュードウリジン1−(4−メチルベンゼンスルホン酸)TP;シュードウリジン1−(4−メチル安息香酸)TP;シュードウリジンTP1−[3−(2−エトキシ)]プロピオン酸;シュードウリジンTP 1−[3−{2−(2−[2−(2−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ)−エトキシ}]プロピオン酸;シュードウリジンTP 1−[3−{2−(2−[2−{2(2−エトキシ)−エトキシ}−エトキシ]−エトキシ)−エトキシ}]プロピオン酸;シュードウリジンTP 1−[3−{2−(2−[2−エトキシ]−エトキシ)−エトキシ}]プロピオン酸;シュードウリジンTP 1−[3−{2−(2−エトキシ)−エトキシ}]プロピオン酸;シュードウリジンTP 1−メチルホスホン酸;シュードウリジンTP 1−メチルホスホン酸ジエチルエステル;シュード−UTP−N1−3−プロピオン酸;シュード−UTP−N1−4−ブタン酸;シュード−UTP−N1−5−ペンタン酸;シュード−UTP−N1−6−ヘキサン酸;シュード−UTP−N1−7−ヘプタン酸;シュード−UTP−N1−メチル−p−安息香酸;シュード−UTP−N1−p−安息香酸;ワイブトシン;ヒドロキシワイブトシン;イソワイオシン;ペルオキシワイブトシン;非修飾ヒドロキシワイブトシン;4−ジメチルワイオシン;2,6−(ジアミノ)プリン;1−(アザ)−2−(チオ)−3−(アザ)−フェノキサジン−1イル:1,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノチアジン−l−イル;1,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノキサジン−1イル;1,3,5−(トリアザ)−2,6−(ジオキサ)−ナフタレン;2(アミノ)プリン;2,4,5−(トリメチル)フェニル;2’メチル、2’アミノ、2’アジド、2’フルロ−シチジン;2’メチル、2’アミノ、2’アジド、2’フルロ−アデニン;2’メチル、2’アミノ、2’アジド、2’フルロ−ウリジン;2’−アミノ−2’−デオキシリボース;2−アミノ−6−クロロ−プリン;2−アザ−イノシニル;2’−アジド−2’−デオキシリボース;2’フルオロ−2’−デオキシリボース;2’−フルオロ−修飾塩基;2’−O−メチル−リボース;2−オキソ−7−アミノピリドピリミジン−3イル;2−オキソ−ピリドピリミジン−3イル;2−ピリジノン;3ニトロピロール;3−(メチル)−7−(プロピニル)イソカルボスチリル;3−(メチル)イソカルボスチリル;4−(フルオロ)−6−(メチル)ベンズイミダゾール;4−(メチル)ベンズイミダゾール;4−(メチル)インドリル;4,6−(ジメチル)インドリル;5ニトロインドール;5置換ピリミジン;5−(メチル)イソカルボスチリル;5−ニトロインドール;6−(アザ)ピリミジン;6−(アゾ)チミン;6−(メチル)−7−(アザ)インドリル;6−クロロ−プリン;6−フェニル−ピロロ−ピリミジン−2−オン−3イル;7−(アミノアルキルヒドロキシ)−1−(アザ)−2−(チオ)−3−(アザ)−フェノチアジン−lイル;7−(アミノアルキルヒドロキシ)−1−(アザ)−2−(チオ)−3−(アザ)−フェノキサジン−1イル;7−(アミノアルキルヒドロキシ)−1,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノキサジン−1イル;7−(アミノアルキルヒドロキシ)−l,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノチアジン−lイル;7−(アミノアルキルヒドロキシ)−l,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノキサジン−lイル;7−(アザ)インドリル;7−(グアニジニウムアルキルヒドロキシ)−1−(アザ)−2−(チオ)−3−(アザ)−フェノキサジンlイル;7−(グアニジニウムアルキルヒドロキシ)−1−(アザ)−2−(チオ)−3−(アザ)−フェノチアジン−lイル;7−(グアニジニウムアルキルヒドロキシ)−1−(アザ)−2−(チオ)−3−(アザ)−フェノキサジン−1イル;7−(グアニジニウムアルキルヒドロキシ)−1,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノキサジン−1イル;7−(グアニジニウムアルキル−ヒドロキシ)−l,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノチアジン−lイル;7−(グアニジニウムアルキルヒドロキシ)−l,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノキサジン−lイル;7−(プロピニル)イソカルボスチリル;7−(プロピニル)イソカルボスチリル、プロピニル−7−(アザ)インドリル;7−デアザ−イノシニル;7−置換1−(アザ)−2−(チオ)−3−(アザ)−フェノキサジン−1イル;7−置換1,3−(ジアザ)−2−(オキソ)−フェノキサジン−1イル;9−(メチル)−イミジゾピリジニル;アミノインドリル;アントラックエニル;ビス−オルト−(アミノアルキルヒドロキシ)−6−フェニル−ピロロ−ピリミジン−2−オン−3イル;ビス−オルト−置換−6−フェニル−ピロロ−ピリミジン−2−オン−3イル;ジフルオロトリル;ヒポキサンチン;イミジゾピリジニル;イノシニル;イソカルボスチリル;イソグアニシン;N2−置換プリン;N6−メチル−2−アミノ−プリン;N6−置換プリン;N−アルキル化誘導体;ナフタレニル;ニトロベンズイミダゾール;ニトロイミダゾイル;ニトロインダゾイル;ニトロピラゾイル;ヌブラリン;O6−置換プリン;O−アルキル化誘導体;オルト−(アミノアルキルヒドロキシ)−6−フェニル−ピロロ−ピリミジン−2−オン−3イル;オルト−置換−6−フェニル−ピロロ−ピリミジン−2−オン−3イル;オキソホルマイシンTP;パラ−(アミノアルキルヒドロキシ)−6−フェニル−ピロロ−ピリミジン−2−オン−3イル;パラ−置換−6−フェニル−ピロロ−ピリミジン−2−オン−3イル;ペンタセニル;フェナントレニル;フェニル;プロ
ピニル−7−(アザ)インドリル;ピレニル;ピリドピリミジン−3イル;ピリドピリミジン−3イル、2−オキソ−7−アミノ−ピリドピリミジン−3イル;ピロロ−ピリミジン−2−オン−3イル;ピロロピリミジニル;ピロロピリジニル;スチルベンジル;置換1,2,4−トリアゾール;テトラセニル;ツベルシジン;キサンチン;キサントシン−5’−TP;2−チオ−ゼブラリン;5−アザ−2−チオ−ゼブラリン;7−デアザ−2−アミノ−プリン;ピリジン−4−オンリボヌクレオシド;2−アミノ−リボシド−TP;ホルマイシンA TP;ホルマイシンB TP;ピロロジンTP;2’−OH−アラ−アデノシンTP;2’−OH−アラ−シチジンTP;2’−OH−アラ−ウリジンTP;2’−OH−アラ−グアノシンTP;5−(2−カルボメトキシビニル)ウリジンTP;及びN6−(19−アミノ−ペンタオキサノナデシル)アデノシンTPが挙げられる。
ある特定の実施形態では、化学修飾は、ポリヌクレオチド(例えば、mRNAポリヌクレオチド等のRNAポリヌクレオチド)中のヌクレオ塩基における。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド(例えば、mRNAポリヌクレオチド等のRNAポリヌクレオチド)中の修飾されたヌクレオ塩基は、1−メチル−シュードウリジン(m1ψ)、1−エチル−シュードウリジン(e1ψ)、5−メトキシ−ウリジン(mo5U)、5−メチル−シチジン(m5C)、シュードウリジン(ψ)、α−チオ−グアノシン、及びα−チオ−アデノシンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、前述の修飾されたヌクレオ塩基の少なくとも2つ(例えば、2、3、4、またはそれ以上)の組み合わせを含む。
ポリヌクレオチド(例えば、本明細書に記載されるようなRNAまたはmRNA)に組み込まれ得る、修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチド(例えば、ビルディングブロック分子)は、リボ核酸の糖上で修飾され得る。例えば、2’ヒドロキシル基(OH)は、数多くの異なる置換で修飾または置き換えられ得る。2’−位置における例となる置換としては、これらに限定されないが、H、ハロ、任意選択で置換されるC1−6アルキル;任意選択で置換されるC1−6アルコキシ;任意選択で置換されるC6−10アリールオキシ;任意選択で置換されるC3−8シクロアルキル;任意選択で置換されるC3−8シクロアルコキシ;任意選択で置換されるC6−10アリールオキシ;任意選択で置換されるC6−10アリール−C1−6アルコキシ、任意選択で置換されるC1−12(ヘテロシクリル)オキシ;糖(例えば、リボース、ペントース、または本明細書に記載されるいずれかのもの);ポリエチレングリコール(PEG)、−O(CH2CH2O)nCH2CH2OR、式中、Rは、Hまたは任意選択で置換されるアルキル、nは、0〜20(例えば、0〜4、0〜8、0〜10、0〜16、1〜4、1〜8、1〜10、1〜16、1〜20、2〜4、2〜8、2〜10、2〜16、2〜20、4〜8、4〜10、4〜16、及び4〜20)の整数であり;2’−ヒドロキシルが、C1−6アルキレンまたはC1−6ヘテロアルキレンによって連結されている「ロックされた」核酸(LNA)は、4’−同じリボース糖の炭素に架橋し、例となるブリッジは、メチレン、プロピレン、エーテル、またはアミノブリッジを含み;本明細書に定義されるアミノアルキル;本明細書に定義されるアミノアルコキシ;本明細書に定義されるアミノ;及び本明細書に定義されるアミノ酸が挙げられる。
本発明のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列または機能的断片またはそのバリアントを含むポリヌクレオチド)は、糖、ヌクレオ塩基、及び/またはヌクレオシド間結合への修飾の組み合わせを含み得る。これらの組み合わせは、本明細書に記載される任意の1つ以上の修飾を含み得る。
非翻訳領域(UTR)は、翻訳されていない開始コドン(5’UTR)の前及び停止コドン(3’UTR)の後のポリヌクレオチドの核酸部分である。いくつかの実施形態では、GLAポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含む本発明のポリヌクレオチド(例えば、リボ核酸(RNA)、例えば、メッセンジャーRNA(mRNA))は、UTR(例えば、5’UTRもしくはその機能的断片、3’UTRもしくはその機能的断片、またはそれらの組み合わせ)をさらに含む。
5’UTR−001(上流UTR)(GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号33);
5’UTR−002(上流UTR)(GGGAGAUCAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号34);
5’UTR−003(上流UTR)(配列番号35を参照されたい);
5’UTR−004(上流UTR)(GGGAGACAAGCUUGGCAUUCCGGUACUGUUGGUAAAGCCACC)(配列番号36);
5’UTR−005(上流UTR)(GGGAGAUCAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号37);
5’UTR−006(上流UTR)
(GGAAUAAAAGUCUCAACACAACAUAUACAAAACAAACGAAUCUCAAGCAAUCAAGCAUUCUACUUCUAUUGCAGCAAUUUAAAUCAUUUCUUUUAAAGCAAAAGCAAUUUUCUGAAAAUUUUCACCAUUUACGAACGAUAGCAAC)(配列番号38);
5’UTR−007(上流UTR)(GGGAGACAAGCUUGGCAUUCCGGUACUGUUGGUAAAGCCACC)(配列番号39);
5’UTR−008(上流UTR)(GGGAAUUAACAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号40);
5’UTR−009(上流UTR)(GGGAAAUUAGACAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号41);
5’UTR−010、上流(GGGAAAUAAGAGAGUAAAGAACAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号42);
5’UTR−011(上流UTR)(GGGAAAAAAGAGAGAAAAGAAGACUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号43);
5’UTR−012(上流UTR)(GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAUAUAUAAGAGCCACC)(配列番号44);
5’UTR−013(上流UTR)(GGGAAAUAAGAGACAAAACAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号45);
5’UTR−014(上流UTR)(GGGAAAUUAGAGAGUAAAGAACAGUAAGUAGAAUUAAAAGAGCCACC)(配列番号46);
5’UTR−15(上流UTR)(GGGAAAUAAGAGAGAAUAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号47);
5’UTR−016(上流UTR)(GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAAUUAAGAGCCACC)(配列番号48);
5’UTR−017(上流UTR)(GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUUUAAGAGCCACC)(配列番号49);または
5’UTR−018(上流UTR)
(UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC)(配列番号50)を含む。
142−3p 3’UTR(miR142−3pを含むUTR)
(UGAUAAUAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号51);
142−3p 3’UTR(miR142−3pを含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACACAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号52);
142−3p 3’UTR(miR142−3pを含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号53);
142−3p 3’UTR(miR142−3pを含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACACCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号54);
142−3p 3’UTR(miR142−3pを含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACACUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号55);
142−3p 3’UTR(miR142−3pを含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC)(配列番号56);
142−3p 3’UTR(miR142−3pを含むUTR)
(UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUUCCAUAAAGUAGGAAACACUACACUGAGUGGGCGGC)(配列番号57);
3’UTR−001(クレアチンキナーゼUTR)(配列番号58を参照されたい);
3’UTR−002(ミオグロビンUTR)(配列番号59を参照されたい);
3’UTR−003(α−アクチンUTR)(配列番号60を参照されたい);
3’UTR−004(アルブミンUTR)(配列番号61を参照されたい);
3’UTR−005(α−グロブリンUTR)(配列番号62を参照されたい);
3’UTR−006(G−CSF UTR)(配列番号63を参照されたい);
3’UTR−007(Col1a2;コラーゲン、I型、α2UTR)(配列番号64を参照されたい);
3’UTR−008(Col6a2;コラーゲン、VI型、α2UTR)(配列番号65を参照されたい);
3’UTR−009(RPN1;リボホリン I UTR)(配列番号66を参照されたい);
3’UTR−010(LRP1;低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質1UTR)(配列番号67を参照されたい);
3’UTR−011(Nnt1;カルジオトロフィン様サイトカイン因子1UTR)(配列番号68を参照されたい);
3’UTR−012(Col6a1;コラーゲン、VI型、α1UTR)(配列番号69を参照されたい);
3’UTR−013(Calr;カルレティキュリンUTR)(配列番号70を参照されたい);
3’UTR−014(Col1a1;コラーゲン、I型、α1UTR(配列番号71を参照されたい);
3’UTR−015(Plod1;プロコラーゲン−リジン、2−オキソグルタレート5−オキシゲナーゼ1UTR)(配列番号72を参照されたい);
3’UTR−016(Nucb1;クレオビンディン1UTR)(配列番号73を参照されたい);
3’UTR−017(α−グロビン)(配列番号74を参照されたい);
3’UTR−018(配列番号75を参照されたい);
3’UTR(miR142+miR126バリアント1)
UGAUAAUAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCCGCAUUAUUACUCACGGUACGAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC(配列番号81);
3’UTR(miR 142−3p及びmiR 126−3p結合部位バリアント2)
UGAUAAUAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGCUGGAGCCUCGGUGGCCUAGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCCGCAUUAUUACUCACGGUACGAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC(配列番号82);または
3’UTR(miR142結合部位)
UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCUAGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC(配列番号161)を含む。
本発明のポリヌクレオチドは、調節エレメント、例えば、マイクロRNA(miRNA)結合部位、転写因子結合部位、構造化mRNA配列及び/またはモチーフ、外因性核酸結合分子のシュード−受容体として作用するように操作された人工結合部位、ならびにそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、かかる調節エレメントを含むポリヌクレオチドは、「センサー配列」を含むとしても称される。センサー配列の非限定的な例は、米国公開2014/0200261に記載されており、その内容は、それらの全体において参照により本明細書に組み込まれる。
miR142−3p結合部位=下線
miR126−3p結合部位=太字下線
miR155−5p結合部位=陰影付き
miR142−5p結合部位=陰影付き及び太字下線
ある特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、本発明のGLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、3’UTRをさらに含む。
本発明は、また、5’キャップ及び本発明のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含むポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、ポリA尾部をさらに含む。さらなる実施形態では、ポリA尾部上の末端基が、安定化のために組み込まれ得る。他の実施形態では、ポリA尾部は、脱3’ヒドロキシル尾部を含む。
本発明は、また、開始コドン領域と本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含むポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、開始コドン領域に類似の領域または開始コドン領域のような機能を有し得る。
本発明は、また、停止コドン領域及び本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含むポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、3’非翻訳領域(UTR)前に少なくとも2つの停止コドンを含み得る。停止コドンは、DNAの場合、TGA、TAA、及びTAGから、またはRNAの場合、UGA、UAA、及びUAGから選択され得る。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、DNAの場合、停止コドンTGA、またはRNAの場合、停止コドンUGA、及び1つの追加の停止コドンを含む。さらなる実施形態では、追加の停止コドンは、TAAまたはUAAであり得る。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、3つの連続停止コドン、4つの停止コドン、またはそれ以上を含む。
本発明は、また、挿入及び/または置換をさらに含む本開示のポリヌクレオチドを含む。
ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチド、例えば、GLAポリペプチドをコードするmRNAヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、5’から3’末端へと、下記を含む。
(i)上記で提供される5’キャップ;
(ii)上記で提供される配列等の5’UTR;
(iii)GLAポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、例えば、本明細書に開示されるGLAをコードする配列最適化核酸配列;
(iv)少なくとも1つの停止コドン;
(v)上記で提供される配列等の3’UTR;
(vi)上記で提供されるポリA尾部。
本開示は、また、本発明のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)またはそれらの補体を作製する方法を提供する。
本明細書に開示される本発明のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、インビトロ転写(IVT)システムを使用して転写され得る。システムは、典型的には、転写緩衝、ヌクレオチドトリホスフェート(NTP)、RNase阻害剤、及びポリメラーゼを含む。NTPは、天然の及び非天然の(修飾された)NTPを含む本明細書に記載のものから選択され得るが、これらに限定されない。ポリメラーゼは、本明細書に記載のポリヌクレオチドを組み込み得るポリメラーゼ等であるが、これらに限定されない、T7 RNAポリメラーゼ、T3 RNAポリメラーゼ、及び変異体ポリメラーゼから選択され得るが、これらに限定されない。米国公開第US20130259923号を参照されたく、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
標準的な方法は、本発明のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)等の目的の単離されたポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド配列を合成するように適用され得る。例えば、特定の単離されたポリペプチドをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列を含む単一DNAまたはRNAオリゴマーは、合成され得る。他の態様では、所望のポリペプチドの部分をコードするいくつかの小さなオリゴヌクレオチドは、合成され得、次いでライゲーションされ得る。いくつかの態様では、個々のオリゴヌクレオチドは、典型的には、相補的な集合体のために5’または3’突出を含む。
本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の精製には、ポリヌクレオチドの浄化、品質保証、及び品質管理が含まれ得るが、これらに限定されない。浄化は、AGENCOURT(登録商標)ビーズ(Beckman Coulter Genomics,Danvers,MA)、ポリ−Tビーズ、LNA(商標)オリゴ−T捕捉プローブ(EXIQON(登録商標)Inc.,Vedbaek,Denmark)等の当該技術分野で知られている方法、または、これらに限定されないが、強アニオン交換HPLC、弱アニオン交換HPLC、逆相HPLC(RP−HPLC)、及び疏水的相互作用HPLC(HIC−HPLC)等のHPLCに基づく精製方法によって行われ得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)、それらの発現生成物、ならびに分解生成物及び代謝産物は、当該技術分野で知られている方法に従って定量化され得る。
本発明は、上記に記載されるポリヌクレオチドのうちのいずれかを含む医薬組成物及び製剤を提供する。いくつかの実施形態では、組成物または製剤は、送達剤をさらに含む。
a.脂質化合物
本開示は、有利な特性を有する医薬組成物を提供する。本明細書に記載の脂質組成物は、治療剤及び/または予防剤、例えば、mRNAの、哺乳類細胞または器官への送達のために、脂質ナノ粒子組成物として有利に使用され得る。例えば、本明細書に記載の脂質は、免疫原性をほとんどまたは全く有しない。例えば、本明細書に開示される脂質化合物は、参照脂質(例えば、MC3、KC2、またはDLinDMA)と比較してより低い免疫原性を有する。例えば、本明細書に開示される脂質及び治療剤または予防剤、例えば、mRNAを含む製剤は、参照脂質(例えば、MC3、KC2、またはDLinDMA)及び同じ治療剤または予防剤を含む対応する製剤と比較して、増加した治療インデックスを有する。
(a)GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドと、
(b)送達剤と、を含む、医薬組成物を提供する。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−N(R)R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1−6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2−6アルケニル、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
脂質化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含む。
R1は、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれ、式中、アルキル及びアルケニル基は、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、C3−6炭素環、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する5員〜14員のヘテロアリール、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−CRN(R)2C(O)OR、−N(R)R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、ならびに、オキソ(=O)、OH、アミノ、及びC1−3アルキルから選択される1つ以上の置換基で置換される、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する5員〜14員のヘテロシクロアルキルから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1−6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2−6アルケニル、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、C3−6炭素環、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する5員〜14員のヘテロアリール、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−CRN(R)2C(O)OR、ならびに、オキソ(=O)、OH、アミノ、及びC1−3アルキルから選択される1つ以上の置換基で置換される、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する5員〜14員のヘテロシクロアルキルから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、C3−6炭素環、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する5員〜14員の複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、CRN(R)2C(O)OR、−N(R)R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、及び−C(=NR9)N(R)2から選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、Qが5員〜14員の複素環であり、かつ(i)R4が−(CH2)nQ(nは1または2である)であるか、または(ii)R4が−(CH2)nCHQR(nは1である)であるか、または(iii)R4が−CHQR、及び−CQ(R)2であるとき、Qは、5員〜14員のヘテロアリールまたは8員〜14員のヘテロシクロアルキルのいずれかであり、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1−6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2−6アルケニル、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、C3−6炭素環、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する5員〜14員の複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−CRN(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、Qが5員〜14員の複素環であり、かつ(i)R4が−(CH2)nQ(nは1または2である)であるか、または(ii)R4が−(CH2)nCHQR(nは1である)であるか、または(iii)R4が−CHQR、及び−CQ(R)2であるとき、Qは、5員〜14員のヘテロアリールまたは8員〜14員のヘテロシクロアルキルのいずれかであり、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、C3−6炭素環、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する5員〜14員のヘテロアリール、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−CRN(R)2C(O)OR、−N(R)R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、及び−C(=NR9)N(R)2から選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1−6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2−6アルケニル、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、C3−6炭素環、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する5員〜14員のヘテロアリール、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−CRN(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C2−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、−(CH2)nQまたは−(CH2)nCHQRであり、式中、Qは、−N(R)2であり、nは、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC1−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C2−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、−(CH2)nQまたは−(CH2)nCHQRであり、式中、Qは、−N(R)2であり、nは、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC1−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、及び−CQ(R)2からなる群から選択され、式中、Qは、−N(R)2であり、nは、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC1−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R1は、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、及び−CQ(R)2からなる群から選択され、式中、Qは、−N(R)2であり、nは、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC1−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択される、
化合物、またはその塩もしくは立体異性体が含まれる。
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される。
式中、
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、mは、5、6、7、8、及び9から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、または−NHC(O)N(R)2でり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される。
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される。
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、2、3、または4であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、または−NHC(O)N(R)2であり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される。
環Aは、
tは、1または2であり、
A1及びA2は各々独立して、CHまたはNから選択され、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
X1、X2、及びX3は独立して、結合、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
i)X1、X2、及びX3のうちの少なくとも1つは、−CH2−ではない、及び/または
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、−R”MR’である。
A1及びA2は各々独立して、CHまたはNから選択され、A1及びA2のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立して、C6−20アルキル及びC6−20アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
i)R1、R2、R3、R4、及びR5は同じであり、ここでR1は、C12アルキル、C18アルキル、もしくはC18アルケニルではない、
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの1つのみが、C6−20アルケニルから選択される、
iii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも別の1つとは異なる数の炭素原子を有する、
iv)R1、R2、及びR3は、C6−20アルケニルから選択され、R4及びR5は、C6−20アルキルから選択される、または
v)R1、R2、及びR3は、C6−20アルキルから選択され、R4及びR5は、C6−20アルケニルから選択される。
A3は、CHまたはNであり、
A4は、CH2またはNHであり、A3及びA4のうちの少なくとも1つは、NまたはNHであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、及びR3は独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
X1及びX2は独立して、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択される。
A6及びA7は各々独立して、CHまたはNから選択され、A6及びA7のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
X4及びX5は独立して、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
R1、R2,R3、R4、及びR5は各々、独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択される。
(i)リン脂質
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、1つ以上のリン脂質、例えば、1つ以上の飽和もしくは(ポリ)不飽和リン脂質またはそれらの組み合わせを含み得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び1つ以上の脂肪酸部分を含む。
またはその塩であり、式中、
各R1は独立して、任意選択で置換されるアルキルであるか、または任意選択で、2つのR1が、介在する原子と一緒に連結して、任意選択で置換される単環式カルボシクリルもしくは任意選択で置換される単環式ヘテロシクリルを形成するか、または任意選択で、3つのR1が、介在する原子と一緒に連結して、任意選択で置換される二環式カルボシクリルもしくは任意選択で置換二環式ヘテロシクリルを形成し、
nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、
L2の各出現例は独立して、結合または任意選択で置換されるC1−6アルキレンであり、該任意選択で置換されるC1−6アルキレンの1つのメチレン単位は任意選択で、−O−、−N(RN)−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、または−NRNC(O)N(RN)−で置き換えられ、
R2の各出現例は独立して、任意選択で置換されるC1−30アルキル、任意選択で置換されるC1−30アルケニル、または任意選択で置換されるC1−30アルキニルであり、任意選択で、R2の1つ以上のメチレン単位は独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(RN)−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−NRNC(O)N(RN)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NRN)−、−C(=NRN)N(RN)−、−NRNC(=NRN)−、−NRNC(=NRN)N(RN)−、−C(S)−、−C(S)N(RN)−、−NRNC(S)−、−NRNC(S)N(RN)−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O)2−、−S(O)2O−、−OS(O)2O−、−N(RN)S(O)−、−S(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)N(RN)−、−OS(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)O−、−S(O)2−、−N(RN)S(O)2−、−S(O)2N(RN)−、−N(RN)S(O)2N(RN)−、−OS(O)2N(RN)−、または−N(RN)S(O)2O−で置き換えられ、
RNの各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意選択で置換されるカルボシクリル、任意選択で置換されるヘテロシクリル、任意選択で置換されるアリール、または任意選択で置換されるヘテロアリールであり、
pは、1または2であるが、
但し、該化合物は、下記式、
ある特定の実施形態では、本発明において有用なまたは有用な可能性のあるリン脂質は、修飾されたリン脂質頭部(例えば、修飾されたコリン基)を含む。ある特定の実施形態では、修飾された頭部を有するリン脂質は、修飾された第四級アミンを有するDSPC、またはその類似体である。例えば、式(IX)の実施形態では、R1のうちの少なくとも1つは、メチルではない。ある特定の実施形態では、R1のうちの少なくとも1つは、水素でもメチルでもない。ある特定の実施形態では、式(IX)の化合物は、以下の式のうちの1つのもの、
各tは独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各uは独立して、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各vは独立して、1、2、または3である。
wは、0、1、2、または3である。
ある特定の実施形態では、本発明において有用なまたは有用な可能性のあるリン脂質は、修飾された尾部を含む。ある特定の実施形態では、本発明において有用なまたは有用な可能性のあるリン脂質は、修飾された尾部を有するDSPC、またはその類似体である。本明細書に記載されるとき、「修飾された尾部」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖を有する尾部、分岐が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、1つ以上のメチレンが環状もしくはヘテロ原子基で置き換えられた脂肪族鎖、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。例えば、ある特定の実施形態では、(IX)の化合物は、式(IX−a)のもの、またはその塩であり、式中、R2の少なくとも1つの出現例は、R2の各出現例は、任意選択で置換されるC1−30アルキルであり、R2の1つ以上のメチレン単位は独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(RN)−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−NRNC(O)N(RN)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NRN)−、−C(=NRN)N(RN)−、−NRNC(=NRN)−、−NRNC(=NRN)N(RN)−、−C(S)−、−C(S)N(RN)−、−NRNC(S)−、−NRNC(S)N(RN)−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O)2−、−S(O)2O−、−OS(O)2O−、−N(RN)S(O)−、−S(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)N(RN)−、−OS(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)O−、−S(O)2−、−N(RN)S(O)2−、−S(O)2N(RN)−、−N(RN)S(O)2N(RN)−、−OS(O)2N(RN)−、または−N(RN)S(O)2O−で置き換えられている。
各xは独立して、整数0〜30(端点を含む)であり、
各出現例は、Gは独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(RN)−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−NRNC(O)N(RN)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NRN)−、−C(=NRN)N(RN)−、−NRNC(=NRN)−、−NRNC(=NRN)N(RN)−、−C(S)−、−C(S)N(RN)−、−NRNC(S)−、−NRNC(S)N(RN)−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O)2−、−S(O)2O−、−OS(O)2O−、−N(RN)S(O)−、−S(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)N(RN)−、−OS(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)O−、−S(O)2−、−N(RN)S(O)2−、−S(O)2N(RN)−、−N(RN)S(O)2N(RN)−、−OS(O)2N(RN)−、または−N(RN)S(O)2O−からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別個の実施形態を代表する。
vの各出現例は独立して、1、2、または3である。
ある特定の実施形態では、代替的な脂質が、本発明のリン脂質の代わりに使用される。かかる代替的な脂質の非限定的な例としては、以下が挙げられる。
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、1つ以上の構造脂質を含み得る。本明細書で使用されるとき、「構造脂質」という用語は、ステロール、そしてまたステロール部分を含有する脂質を指す。
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、1つ以上のポリエチレングリコール(PEG)脂質を含み得る。
R3は、−OROであり、
ROは、水素、任意選択で置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
rは、1〜100(端点を含む)の整数であり、
L1は、任意選択で置換されるC1−10アルキレンであり、該任意選択で置換されるC1−10アルキレンの少なくとも1つのメチレンは独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−O−、−N(RN)−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、または−NRNC(O)N(RN)−で置き換えられ、
Dは、クリックケミストリーによって得られた部分または生理的条件下で切断可能な部分であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、
L2の各出現例は独立して、結合または任意選択で置換されるC1−6アルキレンであり、該任意選択で置換されるC1−6アルキレンの1つのメチレン単位は任意選択で、−O−、−N(RN)−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、または−NRNC(O)N(RN)−で置き換えられ、
R2の各出現例は独立して、任意選択で置換されるC1−30アルキル、任意選択で置換されるC1−30アルケニル、または任意選択で置換されるC1−30アルキニルであり、任意選択で、R2の1つ以上のメチレン単位は独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(RN)−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−NRNC(O)N(RN)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NRN)−、−C(=NRN)N(RN)−、−NRNC(=NRN)−、−NRNC(=NRN)N(RN)−、−C(S)−、−C(S)N(RN)−、−NRNC(S)−、−NRNC(S)N(RN)−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O)2−、−S(O)2O−、−OS(O)2O−、−N(RN)S(O)−、−S(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)N(RN)−、−OS(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)O−、−S(O)2−、−N(RN)S(O)2−、−S(O)2N(RN)−、−N(RN)S(O)2N(RN)−、−OS(O)2N(RN)−、または−N(RN)S(O)2O−で置き換えられ、
RNの各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意選択で置換されるカルボシクリル、任意選択で置換されるヘテロシクリル、任意選択で置換されるアリール、または任意選択で置換されるヘテロアリールであり、
pは、1または2である。
sは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10である。
R3は、−OROであり、
ROは、水素、任意選択で置換されるアルキルまたは酸素保護基であり、
rは、1〜100(端点を含む)の整数であり、
R5は、任意選択で置換されるC10−40アルキル、任意選択で置換されるC10−40アルケニル、または任意選択で置換されるC10−40アルキニルであり、任意選択で、R51つ以上のメチレン基は、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(RN)−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−NRNC(O)N(RN)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NRN)−、−C(=NRN)N(RN)−、−NRNC(=NRN)−、−NRNC(=NRN)N(RN)−、−C(S)−、−C(S)N(RN)−、−NRNC(S)−、−NRNC(S)N(RN)−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O)2−、−S(O)2O−、−OS(O)2O−、−N(RN)S(O)−、−S(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)N(RN)−、−OS(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)O−、−S(O)2−、−N(RN)S(O)2−、−S(O)2N(RN)−、−N(RN)S(O)2N(RN)−、−OS(O)2N(RN)−、または−N(RN)S(O)2O−で置き換えられ、
RNの各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基である。
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、式(I)、(III)、(IV)、(V)、または(VI)による脂質に加えて、1つ以上のイオン性アミノ脂質を含み得る。
本明細書に開示される医薬組成物の脂質組成物は、上述のものに加えて1つ以上の構成成分を含み得る。例えば、脂質組成物は、1つ以上の透過促進分子、炭水化物、ポリマー、表面改質剤(例えば、界面活性剤)、または他の構成成分を含み得る。例えば、透過促進分子は、米国特許出願公開第2005/0222064号に記載される分子であり得る。炭水化物は、単糖(例えば、グルコース)及び多糖類(例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及び類似体)を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、脂質ナノ粒子(LNP)として製剤化される。したがって、本開示はまた、(i)本明細書に記載される式(I)または(III)の化合物等の送達剤を含む脂質組成物と、(ii)GLAポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとを含む、ナノ粒子組成物も提供する。かかるナノ粒子組成物において、本明細書に開示される脂質組成物は、GLAポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをカプセル封入することができる。
a.リポソーム、リポプレックス、及び脂質ナノ粒子
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、送達剤、例えば、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、1つ以上のリポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子を使用して製剤化され得る。これらの製剤は、ポリヌクレオチドによる細胞へのトランスフェクションを増加させる、及び/またはコードされるタンパク質の翻訳を増加させることができるため、リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子を使用して、タンパク質産生に向けられるポリヌクレオチドの有効性を改善することができる。リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子をまた使用して、ポリヌクレオチドの安定性を増加させることもできる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、送達剤、例えば、脂質様物質を含む。本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、脂質様物質と共に製剤化され得る。これらの脂質様物質を含有する複合体、ミセル、リポソームまたは粒子を調製して、したがって、局所及び/または全身投与経路を介した脂質様物質製剤の注射後、コードされるタンパク質産生によって判定するとき、ポリヌクレオチドの有効な送達を達成することができる。ポリヌクレオチドの脂質様物質複合体は、静脈内、筋肉内、または皮下経路を含むがこれらに限定されない、種々の手段によって投与され得る。
いくつかの実施形態では、注射(例えば、筋肉内または皮下注射)用の、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)及びヒアルロニダーゼ。ヒアルロニダーゼは、間質障壁の構成物質である、ヒアルロナンの加水分解を触媒する。ヒアルロニダーゼは、ヒアルロナンの粘度を低下させ、それによって組織透過性を増加させる(Frost,Expert Opin.Drug Deliv.(2007)4:427−440)。代替的に、ヒアルロニダーゼを使用して、筋肉内または皮下投与されたポリヌクレオチドに曝露される細胞の数を増加させることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、ナノ粒子模倣体内にカプセル封入され、及び/またはそれに吸収させられる。ナノ粒子模倣体は、送達機能生物または粒子、例えば、限定されないが、病原体、ウイルス、細菌、真菌、寄生生物、プリオン及び細胞を模倣し得る。非限定的な例として、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ウイルスの送達機能を模倣し得る非バイロン粒子にカプセル封入され得る(例えば、国際公開第WO2012006376号ならびに米国公開第US20130171241号及び同第US20130195968号を参照されたく、同文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、限定されないが、ロゼットナノチューブ、リンカーによるツイン塩基を有するロゼットナノチューブ、カーボンナノチューブ及び/または単層カーボンナノチューブ等の少なくとも1つのナノチューブに付着されたまたは別様に結合させられた(例えば、立体的、イオン性、共有結合性及び/または他の力)、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。ポリヌクレオチドを含むナノチューブ及びナノチューブ製剤は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2014152211号に記載される。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、送達用の自己組織化ナノ粒子、または両親媒性高分子(AM)中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。AMは、ポリ(エチレングリコール)に共有結合性で連結されたアルキル化糖骨格を有する、生体適合性両親媒性ポリマーを含む。水溶液中で、AMは自己組織化してミセルを形成する。核酸自己組織化ナノ粒子は、国際出願第PCT/US2014/027077号に記載され、AM及びAMの形成方法は、米国公開第US20130217753号に記載され、同文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、無機ナノ粒子、または半導電もしくは金属材料を含む水分散性ナノ粒子中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。無機ナノ粒子には、水膨潤性の粘土物質が含まれ得るが、これらに限定されない。水分散性ナノ粒子は、疎水性または親水性のナノ粒子であり得る。非限定的な例として、無機、半導電及び金属ナノ粒子は、例えば、米国特許第5,585,108号及び同第8,257,745号、ならびに米国公開第US20120228565号、同第US 20120265001号及び同第US 20120283503号に記載され、同文献の各々は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、外科用シーラント中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。ゲル及びヒドロゲル等の外科用シーラントは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際出願第PCT/US2014/027077号に記載される。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、懸濁液中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。いくつかの実施形態では、懸濁液は、ポリヌクレオチド、水非混和性油デポー、界面活性剤及び/または補助界面活性剤及び/または補助溶媒を含む。懸濁液は、まず、ポリヌクレオチドの水溶液、及び1つ以上の界面活性剤を含む油系相を調製し、次いでこれらの2つの相(水性及び油系)を混合することによって、形成され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)ならびにカチオンまたはアニオン、例えば、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Mg2+及びそれらの組み合わせを含む。例となる製剤は、金属カチオンと錯化したポリマー及びポリヌクレオチドを含み得、これは例えば、米国特許第6,265,389号及び同第6,555,525号に記載され、同文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、カチオン性ナノ粒子は、二価及び一価カチオンの組み合わせを含有し得る。カチオン性ナノ粒子を含むカチオン性ナノ粒子中または1つ以上のデポー中でのポリヌクレオチドの送達は、長期作用型デポーとして作用する及び/またはヌクレアーゼによる分解速度を低減することによって、ポリヌクレオチドの生物学的利用能を改善し得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、種々のサイズ、形状及び化学的性質の成型ナノ粒子中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。例えば、ナノ粒子及び/または微粒子は、LIQUIDA TECHNOLOGIES(登録商標)(Morrisville,NC)によるPRINT(登録商標)技術を用いて作製することができる(例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第WO2007024323号)。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、Keystone Nano(State College,PA)によるナノジャケット及びナノリポソーム中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。ナノジャケットは、カルシウム、リン酸塩を含む、体内で天然に見出される材料で作製され、少量のケイ酸塩もまた含み得る。ナノジャケットは、5〜50nmの範囲のサイズを有し得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、エクスビボで細胞にトランスフェクションされ、その後対象に移植される、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。本明細書に開示されるポリヌクレオチドの細胞ベースの製剤を使用して、細胞トランスフェクション(例えば、細胞担体中)を確実にし、ポリヌクレオチドの生体分布を変化させ(例えば、細胞担体を特定の組織または細胞型に対して標的化することによって)、及び/またはコードされるタンパク質の翻訳を増加させることができる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、半固体またはペースト様組成物を形成するための疎水性マトリックス中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。非限定的な例としては、半固体またはペースト様組成物は、国際公開第WO201307604号に記載される方法で作製することができ、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、エクソソーム中の本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含み、これには、少なくとも1つのポリヌクレオチドが充填され、細胞、組織、及び/または生物に送達され得る。非限定的な例としては、ポリヌクレオチドは、国際公開第WO2013084000号に記載されるように、エクソソームに充填され得、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、絹ベースの送達用に製剤化された本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。絹ベースの送達系は、絹フィブロイン溶液を本明細書に記載のポリヌクレオチドと接触させることによって形成することができる。非限定的な例としては、持続放出性の絹ベースの送達系及びかかる系の作製方法は、米国公開第US20130177611号に記載され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、アミノ酸脂質を含む製剤である本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。アミノ酸脂質は、アミノ酸残基及び1つ以上の親油性尾部を含む親油性化合物である。アミノ酸脂質及びアミノ酸脂質の作製方法の非限定的な例は、米国特許第8,501,824号に記載されている。アミノ酸脂質製剤は、ポリヌクレオチドに結合し、このポリヌクレオチドを放出するアミノ酸脂質を含む、放出可能な形態のポリヌクレオチドを送達することができる。非限定的な例としては、本明細書に記載のポリヌクレオチドの放出は、例えば、米国特許第7,098,032号、同第6,897,196号、同第6,426,086号、同第7,138,382号、同第5,563,250号、及び同第5,505,931号に記載される酸不安定性リンカーによってもたらされ得、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、微小胞製剤中の本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。例となる微小胞としては、米国公開第US20130209544号(参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)に記載されるものが含まれる。いくつかの実施形態では、微小胞は、国際公開第WO2013119602号(参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)に記載されるARRDC1媒介性微小胞(ARMM)である。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、高分子間電解質複合体中の本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。高分子間電解質複合体は、動的電荷ポリマーが、1つ以上のアニオン性分子と複合したときに形成される。動的電荷ポリマー及び高分子間電解質複合体、ならびに高分子間電解質複合体の作製方法の非限定的な例は、米国特許第8,524,368号に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、結晶性高分子系中の本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。結晶性高分子系は、結晶性部分及び/または結晶性部分を含む末端単位を有するポリマーである。例となるポリマーは、米国特許第8,524,259号(参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)に記載されている。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)、ならびに天然及び/または合成ポリマーを含む。ポリマーには、ポリエテン、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリ(l−リジン)(PLL)、PLLにグラフトしたPEG、カチオン性リポポリマー、生分解性カチオン性リポポリマー、ポリエチレンイミン(PEI)、架橋分岐状ポリ(アルキレンイミン)、ポリアミン誘導体、修飾されたポロキサマー、弾性生分解性ポリマー、生分解性コポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、マルチブロックコポリマー、ポリ[α−(4−アミノブチル)−L−グリコール酸)(PAGA)、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマレート、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ(オルトエステル)、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ(エチレンイミン)、ポリ(セリンエステル)、ポリ(L−ラクチド−co−L−リジン)、ポリ(4−ヒドロキシ−L−プロリンエステル)、アミン含有ポリマー、デキストランポリマー、デキストランポリマー誘導体、またはそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、ポリヌクレオチドによる細胞のトランスフェクションを増加させるように、及び/または(例えば、特定の組織もしくは細胞型を標的化することによって)ポリヌクレオチドの体内分布を改変するように、及び/またはコードされるタンパク質の翻訳を増加させる(例えば、国際公開第WO2012110636号及び同第WO2013123298号)ように、ペプチド及び/またはタンパク質と共に製剤化される、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドは、米国公開第US20130129726号、同第US20130137644号、及び同第US20130164219号に記載のものであり得る。これらの参考文献の各々の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、担体もしくは標的基に共有結合しているか、またはコンジュゲートとして融合タンパク質を共に生産する2つのコード領域を含んでいる(例えば、標的基及び治療タンパク質もしくはペプチドを持つ)、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。コンジュゲートは、ナノ粒子を組織中もしくは生物内のニューロンへと選択的に指向するか、または血液脳関門の通過を補助するペプチドであり得る。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を微小器官内に含み、これは次いで持続性治療製剤中で目的のコードされるポリペプチドを発現し得る。例となる微小器官及び製剤は、国際公開第WO2014152211号(その全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載される。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)をシュードビリオン(例えば、Aura Biosciences,Cambridge,MAによって開発されたシュードビリオン)内に含む。
本発明は、生物活性剤等の反復投与される活性剤に対するABCの効果を低減するための化合物、組成物、及びそれらの使用方法を提供する。容易に明らかになるように、投与される活性剤に対するABCの効果の完全な低減または排除は、その半減期及び故にその有効性を効果的に増加させる。
LNPを含む、本明細書に提供される種々の化合物及び組成物は、インビボ投与時にABC活性を促進しない。これらのLNPは、後述のもの等であるがこれらに限定されないいくつかのアッセイのうちのいずれか、及び実施例の節(実施例の方法小節を含む)に開示されるアッセイのうちのいずれかを通して特性評価及び/または特定され得る。
本開示に提供されるある特定の組成物は、B1aもしくはB1b細胞(CD19+CD5+)及び/または従来のB細胞(CD19+CD5−)等のB細胞を活性化しない。B1a細胞、B1b細胞、または従来のB細胞の活性化は、いくつかの方法で決定することができ、これらの方法のいくつかを、以下に提供する。B細胞集団は、分画化B細胞集団または脾細胞もしくは末梢血単核球(PBMC)の未分画化集団として提供され得る。後者の場合、細胞集団は、選択されるLNPと共にある期間インキュベートされ、次いでさらなる分析のために採取され得る。代替的に、上清が採取され、分析されてもよい。
B1a細胞、B1b細胞、または従来のB細胞の活性化は、CD86等の後期活性化マーカーを含むB細胞活性化マーカーの増加した発現として示され得る。例となる非限定的なアッセイにおいて、未分画B細胞は、脾細胞集団としてまたはPBMC集団として提供され、選択されるLNPと共に特定の期間インキュベートされ、次いでCD19等の標準的なB細胞マーカーについて及びCD86等の活性化マーカーについて染色され、例えば、フローサイトメトリーを用いて分析される。好適な陰性対照は、同じ集団を培地と共にインキュベートし、次いで同じ染色及び可視化工程を行うことを伴う。陰性対照との比較での、試験集団におけるCD86発現の増加は、B細胞活性化を示す。
B細胞活性化はまた、サイトカイン放出アッセイによっても評価することができる。例えば、活性化は、目的のLNPへの曝露時のIL−6及び/またはTNF−アルファ等のサイトカインの生産及び/または分泌を通して評価することができる。
B細胞へのLNP会合または結合もまた、目的のLNPを評価し、かかるLNPをさらに特性評価するために使用することができる。会合/結合及び/または取り込み/内部移行は、検出可能に標識されたLNP(蛍光標識されたもの等)を用い、種々の期間のインキュベーション後にB細胞中またはB細胞上でのかかるLNPの位置を追跡して、評価することができる。
ABCを促進することなく、治療剤等の薬剤をカプセル封入し得るLNPを対象に送達する方法もまた、本明細書に提供される。
本発明は、部分的には、LNP投与に関連する用量制限毒性の根底をなす機構の解明をさらに前提としている。かかる毒性は、凝固障害、急性であるか慢性であるかに関わらず播種性血管内凝固(DIC、消費性凝固障害とも称される)、及び/または血管血栓症を伴い得る。いくつかの例では、LNPに関連する用量制限毒性は、急性相応答(APR)または補体活性化関連シュードアレルギー(CARPA)である。
本明細書に記載のポリヌクレオチド、医薬組成物、及び製剤は、GLA関連疾患、障害、または病態を治療及び/または予防するための調製、製造、ならびに治療用途において使用される。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、組成物、及び製剤を使用して、ファブリー病を治療及び/または予防する。
本発明のある特定の態様は、対象における、例えば、動物(例えば、げっ歯類及び霊長類等)における、またはヒト対象における、α−ガラクトシダーゼA(GLA)タンパク質の発現レベル(複数可)の測定、決定、及び/または監視を特徴とする。動物としては、正常で健康または野生型の動物、ならびにファブリー病及びその治療の理解に使用するための動物モデルを含む。例となる動物モデルとしては、げっ歯類モデル、例えば、GLA−/−ノックアウトマウスとも称されるGLA欠乏マウスが挙げられる。
ファブリー病患者において、GLA酵素活性は低減され、ファブリー病患者は、典型的には、GLA活性をほぼまたは全く有しない。本発明のさらなる態様は、対象における、例えば、動物(例えば、げっ歯類及び霊長類等)における、またはヒト対象における、GLAタンパク質の活性レベル(複数可)(すなわち、酵素活性レベル(複数可))の測定、決定、及び/または監視を特徴とする。活性レベルは、当該技術分野において認識されている、任意の生物学的試料中の酵素活性レベルの決定方法によって測定または決定され得る。本明細書で使用されるとき、「活性レベル」または「酵素活性レベル」という用語は、試料の体積、質量、もしくは重量当たりの、または試料中のタンパク質当たりの酵素の活性を意味する。例となる実施形態では、「活性レベル」または「酵素活性レベル」は、1ミリリットルの流体(例えば、体液、例えば、血清、血漿、及び尿等)当たりの単位に関して記載されるか、または試料中の1重量の組織当たりもしくは1重量のタンパク質(例えば、全タンパク質)当たりの単位に関して記載される。酵素活性の単位(「U」)は、単位時間当たりに加水分解される基質の重量または質量に関して記載され得る。本発明の例となる実施形態は、U/mlの血漿またはU/mgのタンパク質(組織)に関して記載されるGLA活性を特徴とし、単位(「U」)は、1時間当たりに加水分解されるnmolの基質(またはnmol/時)に関して記載される。例となるGLA酵素アッセイは、GLA酵素活性が非蛍光4MU−α−Gal基質から蛍光指標4−メチルウンベリフェロン(4−MU)を放出する能力を測定する。血漿及び組織(例えば、肝臓、心臓、腎臓、または脾臓)中のGLA活性は、例えば、1時間当たり1mgのタンパク質当たりで生産される4−MUの量として定量化され得る。
本発明のさらなる態様は、(例えば、同じ患者からの、別の患者からの、対照からの、及び/または同じもしくは異なる時点からの)別の試料中の同じもしくは別のバイオマーカーのレベル(例えば、参照レベル)、及び/または生理的レベル、及び/または高まったレベル、及び/または超生理的レベル、及び/または対照のレベルと比較して、試料中で決定される、バイオマーカー、例えば、Gb3及び/またはリゾ−Gb3のレベル(複数可)を決定することを特徴とする。当業者であれば、バイオマーカーの生理的レベル、例えば、正常または野生型の動物及び正常または健康な対象等におけるレベル、特に、健康及び/または正常に機能している対象に特有のレベル(複数可)に精通しているだろう。本明細書で使用されるとき「高まったレベル」という語句は、正常もしくは野生型の前臨床動物において、または正常もしくは健康な対象(例えば、ヒト対象)において通常見出されるよりも多い量を意味する。本明細書で使用されるとき、「超生理的」という用語は、任意選択で有意に増大した生理的応答を生産している、正常もしくは野生型の前臨床動物において、または正常もしくは健康な対象(例えば、ヒト対象)において通常見出されるよりも多い量を意味する。本明細書で使用されるとき、「比較する」または「と比較して」という用語は、好ましくは、2つ以上の値の、例えば、バイオマーカー(複数可)のレベルの、数学的な比較を意味する。故に、当業者にとって、かかる値のうちの少なくとも2つが互いに比較される場合、値のうちの1つが、別の値または値の群よりも高いか、それよりも低いか、またはそれと同一であるかは容易に明らかになるだろう。比較することまたはとの比較は、例えば、投与前の該対象における(例えば、ファブリー病を患う人における)、または正常もしくは健康な対象における対照値と比較する文脈においてであり得る。比較することまたはとの比較はまた、例えば、投与前の該対象における(例えば、ファブリー病を患う人における)、または正常もしくは健康な対象における参照レベルとの比較での、例えば、対照値と比較する文脈においてでもあり得る。
本発明のある特定の態様は、上記に開示されるポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物または製剤を対象とする。
(i)GLAポリペプチド(例えば、野生型配列、その機能的断片、またはバリアント)をコードする配列最適化ヌクレオチド配列(例えば、ORF)を含むポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)であって、このポリヌクレオチドは、少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基、例えば、5−メトキシウラシル(例えば、ウラシルの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が、5−メトキシウラシルである)を含み、このポリヌクレオチドは、miRNA結合部位、例えば、miR−142(例えば、miR−142−3pまたはmiR−142−5p結合部位)に結合するmiRNA結合部位、及び/またはmiR−126(例えば、miR−126−3pまたはmiR−126−5p結合部位)に結合するmiRNA結合部位をさらに含む、ポリヌクレオチドと、
(ii)例えば、式(I)を有する化合物、例えば、化合物1〜232のうちのいずれか、例えば、化合物18、式(III)、(IV)、(V)、もしくは(VI)を有する化合物、例えば、化合物233〜342のうちのいずれか、例えば、化合物236、または式(VIII)を有する化合物、例えば、化合物419〜428のうちのいずれか、例えば、化合物428、またはそれらの任意の組み合わせを含む送達剤と、を含む。
上記の本発明のポリヌクレオチド、医薬組成物、及び製剤は、治療的に有効な結果をもたらす任意の経路によって投与され得る。これらには、経腸(腸内へ)、胃腸内、硬膜外(epidural)(硬膜へ)、経口(口を通って)、経皮、硬膜外(peridural)、脳内(大脳へ)、脳室内(脳室へ)、皮膚上(皮膚への塗布)、皮内(皮膚自体の中へ)、皮下(皮膚の下)、経鼻投与(鼻を通って)、静脈内(静脈へ)、静脈内ボーラス、静脈内持続点滴、動脈内(動脈へ)、筋肉内(筋肉へ)、心臓内(心臓へ)、骨内注入(骨髄内へ)、髄腔内(脊柱管内へ)、腹腔内(腹腔への注入または注射)、膀胱内注入、硝子体内(眼を通って)、空洞内(病理学的空洞内へ)、体腔内(陰茎の付け根へ)、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮(全身分布のための無処置の皮膚を通した拡散)、経粘膜(粘膜を通した拡散)、経膣、吹送法(吸飲)、舌下、口唇下、浣腸、点眼(結膜の上へ)、点耳液中、耳介(耳の中または耳を通って)、口腔(頬に向けて)、結膜、皮膚、歯(歯(複数可)へ)、電気浸透、子宮頸管内、副鼻腔内、気管内、体外、血液透析、浸透、間質内、腹腔内、羊水内、関節内、胆管内、気管支内、嚢内、軟骨内(軟骨の中)、仙骨内(馬尾の中)、槽内(大槽の中)、角膜内(角膜の中)、歯冠内、冠内(冠動脈内)、海綿体内(陰茎の海綿体の拡張可能な空間内)、円板内(円板の中)、管内(腺管内)、十二指腸内(十二指腸の中)、硬膜内(硬膜の中または下)、表皮内(表皮へ)、食道内(食道へ)、胃内(胃の中)、歯肉内(歯肉の中)、回腸内(小腸の遠位部分の中)、病変内(局所化した病変の中またはそこに直接導入する)、管腔内(管腔の中)、リンパ内(リンパの中)、骨髄内(骨の髄腔内)、脳脊髄膜内(髄膜内)、眼内(眼の中)、卵巣内(卵巣の中)、心膜内(心膜の中)、胸膜内(肋膜内)、前立腺内(前立腺の中)、肺内(肺またはその気管支の中)、鼻内(鼻または眼窩周囲洞内)、脊髄内(脊柱内)、関節滑液嚢内(関節の滑膜腔内)、腱内(腱の中)、精巣内(精巣の中)、髄腔内(任意のレベルの脳脊髄軸での脳脊髄液の中)、胸腔内(胸部の中)、管内(器官の管の中)、鼓室内(中耳内)、血管内(血管(複数可)の中)、脳室内(脳室の中)、イオン泳動(電流によって、可溶塩が身体の組織内に移動する)、潅注(開放創または体腔を浸すかまたは洗い流す)、喉頭(喉頭に直接)、鼻腔胃(鼻を通して胃の中へ)、密封包帯法(局所経路投与の後、領域を密封する包帯によって被覆する)、眼(外眼へ)、中咽頭(口及び咽頭に直接)、非経口、経皮、関節周囲、硬膜外、神経周囲、歯周、直腸、呼吸器(局所または全身効果のために経口吸入または経鼻吸入によって気道内へ)、延髄後(脳橋の後ろまたは眼球の後ろ)、心筋内(心筋に入る)、軟組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、局所、経胎盤(胎盤を通すかまたはその全体に)、経気管(気管の壁を通して)、鼓膜内(鼓室全体またはそれを通して)、尿管(尿管へ)、尿道(尿道へ)、膣、仙骨麻酔、診断、神経ブロック、胆道灌流、心臓潅流、循環光療法、または脊髄が含まれるが、これらに限定されない。具体的な実施形態では、組成物は、それらが血液脳関門、血管関門、または他の上皮性関門を通過することを可能にする方法で投与され得る。いくつかの実施形態では、投与の経路のための製剤は、1つ以上の不活性成分を含み得る。
a.キット
本発明は、特許請求される本発明のヌクレオチドを、好都合及び/または有効に使用するための多様なキットを提供する。典型的には、キットは、使用者が対象(複数可)の複数の治療を実施し、及び/または複数の実験を実施することを可能にするために十分な量及び/または数の構成要素を含む。
本発明は、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込み得るデバイスを提供する。これらのデバイスは、安定な製剤中に、ヒト患者等の、必要のある対象に直ちに送達されるように利用可能な製剤中でポリヌクレオチドを合成するための試薬を含有する。
カテーテル及びルーメンを使用する方法及びデバイスを用いて、本発明のポリヌクレオチドを、単回、複数回、または分割投与スケジュールで投与することができる。かかる方法及びデバイスは、国際出願公開第WO2013151666号に記載され、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
電流を利用する方法及びデバイスを用いて、本明細書に教示される単回、複数回、または分割レジメンに従って本発明のポリヌクレオチドを送達することができる。かかる方法及びデバイスは、国際出願公開第WO2013151666号に記載され、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示をより容易に理解され得るように、ある特定の用語を最初に定義する。本出願で使用されるとき、本明細書で別途明確に提供される場合以外、以下の用語は各々、以下に記載される意味を有するものとする。さらなる定義は、本出願全体を通して記載される。
この節全体を通して、実施形態という用語は、「E」とそれに続く序数として略称される。例えば、E1は、実施形態1に等しい。
(i)ORFは、GLA−CO1、GLA−CO5、またはGLA−CO11と少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、もしくは100%同一である、
(ii)ORFは、GLA−CO2、GLA−CO3、GLA−CO6、GLA−CO7、GLA−CO9、GLA−CO10、GLA−CO12、GLA−CO13、GLA−CO14、GLA−CO15、GLA−CO18、GLA−CO20、GLA−CO21、GLA−CO22、GLA−CO23、またはGLA−CO24と少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、もしくは100%同一である、
(iii)ORFは、GLA−CO8、GLA−CO16、GLA−CO17、GLA−CO19、またはGLA−CO25と少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、もしくは100%同一である、または
(iv)ORFは、GLA−CO4と少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、もしくは100%同一である、E1〜E18のいずれか1つに記載のポリヌクレオチド。
(i)ORFは、GLA−CO1、GLA−CO5、またはGLA−CO11と少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、もしくは100%同一である、
(ii)ORFは、GLA−CO2、GLA−CO3、GLA−CO6、GLA−CO7、GLA−CO9、GLA−CO10、GLA−CO12、GLA−CO13、GLA−CO14、GLA−CO15、GLA−CO18、GLA−CO20、GLA−CO21、GLA−CO22、GLA−CO23、またはGLA−CO24と少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、もしくは100%同一である、
(iii)ORFは、GLA−CO8、GLA−CO16、GLA−CO17、GLA−CO19、またはGLA−CO25と少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、もしくは100%同一である、または
(iv)ORFは、GLA−CO4と少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、もしくは100%同一である、ポリヌクレオチド。
(i)より長い血漿中半減期、
(ii)ORFによってコードされるGLAポリペプチドの増加した発現、
(iii)発現断片をもたらす停止した翻訳のより低い頻度、
(iv)より高い構造安定性、または
(v)それらの任意の組み合わせ、
を有する、E1〜E50のいずれか1つに記載のポリヌクレオチド。
(i)5’−末端キャップ、
(ii)5’−UTR、
(iii)GLAポリペプチドをコードするORF、
(iv)3’−UTR、及び
(v)ポリA領域。
(a)E1〜E53のいずれか1つに記載のポリヌクレオチドと、
(b)送達剤と、を含む、組成物。
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、
但し、R4が−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、または−CQ(R)2であるとき、(i)Qは、nが1、2、3、4もしくは5である場合の−N(R)2ではないか、または(ii)Qは、nが1もしくは2である場合の5、6、もしくは7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする、E56〜E59のいずれか1つに記載の組成物。
R1は、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、
mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、
但し、R4が−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、または−CQ(R)2であるとき、(i)Qは、nが1、2、3、4もしくは5である場合の−N(R)2ではないか、または(ii)Qは、nが1もしくは2である場合の5、6、もしくは7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする、組成物。
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
mは、5、6、7、8、及び9から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、1、2、3、4、または5であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、または−NHC(O)N(R)2であり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される、E60または61に記載の組成物。
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、2、3、または4であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、または−NHC(O)N(R)2であり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される、E60〜E63のいずれか1つに記載の組成物。
式中、R2及びR3は独立して、C5−14アルキル及びC5−14アルケニルからなる群から選択され、nは、2、3、及び4から選択され、R’、R’’、R5、R6及びmは、E60またはE61で定義される通りである、E60またはE61に記載の組成物。
当業者であれば、ほんの日常的な実験を用いて、本明細書に記載の本発明による具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識するか、またはそれを確認することができよう。本発明の範囲は、上記の説明に限定されることを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲に記載される通りである。
A.トリホスフェート経路
キメラポリヌクレオチドの2つの領域または部分は、トリホスフェートの化学的性質を使用して結合され得るか、またはライゲーションされ得る。この方法に従って、第1の領域または100個以下のヌクレオチドは、5’モノホスフェート及び末端3’desOHまたはブロックOHで化学合成され得る。領域が80個のヌクレオチドよりも長い場合、それはライゲーションのために2つの鎖として合成され得る。
キメラポリヌクレオチドは、一連のセグメントの開始を使用して作製され得る。かかるセグメントは、以下を含む。
(a)正常な3’OHを含むキャップ及び保護5’セグメント(セグメント1)
(b)ポリペプチドのコード領域を含み得、正常な3’OHを含む5’トリホスフェート酸セグメント(セグメント2)
(c)コルジセピンを含むか、または3’OHを含まないキメラポリヌクレオチドの3’末端の5’モノホスフェートセグメント(例えば、尾部)(セグメント3)
cDNAの製剤のPCR手順は、Kapa Biosystems(Woburn,MA)の2倍のKAPA HIFI(商標)HotStart ReadyMixを使用して行われ得る。このシステムは、2倍のKAPA ReadyMix12.5μl、フォワードプライマー(10μM)0.75μl、リバースプライマー(10μM)0.75μl、テンプレートcDNA−100ng、及び25.0μlに希釈されたdH20を含む。PCR反応条件は、95℃で5分間、及び98℃で20秒間の25サイクル、次いで58℃で15秒間、次いで72℃で45秒間、次いで72℃で5分間、次いで4℃で終了までであり得る。
インビトロ転写反応は、均一に修飾されたポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを生成し得る。かかる均一に修飾されたポリヌクレオチドは、本発明のポリヌクレオチドの領域または部分を含み得る。インプットヌクレオチドトリホスフェート(NTP)混合物は、天然及び非天然NTPを使用して作製され得る。
1 テンプレートcDNA−1.0μg
2 10倍転写緩衝剤(400mMのトリス−HCl pH8.0、190mMのMgCl2、50mMのDTT、10mMのスペルミジン)−2.0μl
3 カスタムNTP(各25mM)−7.2μl
4 RNase阻害剤−20U
5 T7 RNAポリメラーゼ−3000U
6 dH20−最大20.0μl及び
7 37℃で3時間〜5時間インキュベート
ポリヌクレオチドのキャッピングは、IVT RNA 60μg〜180μg及びdH20最大72μlを含む混合物で行われ得る。混合物は、65℃で5分間インキュベートされ、RNAを変性させ得、次いで、氷に直ちに移される。
cDNA中のポリ−Tなしで、ポリ−Aテール反応は、最終生成物を浄化する前に行われなければならない。これは、キャッピングされたIVT RNA(100μl)、RNase阻害剤(20U)、10倍のテール緩衝剤(0.5Mのトリス−HCl(pH8.0)、2.5MのNaCl、100mMのMgCl2)(12.0μl)、20mMのATP(6.0μl)、ポリ−Aポリメラーゼ(20U)、dH20最大123.5μlを混合し、37℃で30分間インキュベートすることによって行われ得る。ポリ−Aテールが既に転写中である場合、次いで、テール反応は、省略され得、AmbionのMEGACLEAR(商標)kit(Austin,TX)(最大500μg)での浄化に直接進行する。ポリ−Aポリメラーゼは、いくつかの場合において、酵母で発現される組換え酵素である。
ポリヌクレオチドの5’−キャッピングは、以下の化学RNAキャップ類似体を使用してインビトロ−転写反応の間に同時に完了され、製造者のプロトコルに従って5’−グアノシンキャップ構造を生成し得る:3’−O−Me−m7G(5’)ppp(5’)G[ARCAキャップ]、G(5’)ppp(5’)A、G(5’)ppp(5’)G、m7G(5’)ppp(5’)A、m7G(5’)ppp(5’)G(New England BioLabs,Ipswich,MA)。修飾されたRNAの5’−キャッピングは、ワクシニアウイルスキャッピング酵素を使用して転写後に完了され、「キャップ0」構造を生成し得る:m7G(5’)ppp(5’)G(New England BioLabs,Ipswich,MA)。キャップ1の構造は、ワクシニアウイルスキャッピング酵素及び2’−Oメチル−トランスフェラーゼの両方を使用して生成され、m7G(5’)ppp(5’)G−2’−O−メチルを生成し得る。キャップ2の構造は、キャップ1の構造から生成され得、その後に2’−Oメチル−トランスフェラーゼを使用して5’−最後から3番目のヌクレオチドの2’−O−メチル化が続く。キャップ3の構造は、キャップ2の構造から生成され得、その後に2’−Oメチル−トランスフェラーゼを使用して5’−最後から4番目のヌクレオチドの2’−O−メチル化が続く。酵素は、組換え源に由来し得る。
A.タンパク質発現アッセイ
本明細書で教示されるキャップのうちのいずれかを含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、等しい濃度で細胞にトランスフェクションされ得る。トランスフェクション後の6、12、24、及び36時間後、培地に分泌されたタンパク質の量は、ELISAによって評価され得る。より高いレベルのタンパク質を培地に分泌する合成ポリヌクレオチドは、より高い翻訳応答性のキャップ構造を有する合成ポリヌクレオチドに対応するであろう。
本明細書で教示されるキャップのうちのいずれかを含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、変性アガロース−尿素ゲル電気泳動法またはHPLC分析を使用して純度について比較され得る。単一の、電気泳動法によって固定されたバンドを有するポリヌクレオチドは、複数のバンドまたはストリーキングバンドを有するポリヌクレオチドと比較して、より高い純度の生成物に対応する。単一のHPLCピークを有する合成ポリヌクレオチドはまた、より高い純度の生成物に対応するであろう。より高い効率性を有するキャッピング反応は、より純粋なポリヌクレオチド集団を提供するであろう。
本明細書で教示されるキャップのうちのいずれかを含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、複数の濃度で細胞にトランスフェクションされ得る。トランスフェクション後の6、12、24、及び36時間後、培地に分泌されたTNF−α及びIFN−β等の炎症誘発性サイトカインの量は、ELISAによって評価され得る。より高いレベルの炎症誘発性サイトカインの培地への分泌をもたらすポリヌクレオチドは、免疫−活性化キャップ構造を含むポリヌクレオチドに対応するであろう。
本明細書で教示されるキャップのうちのいずれかを含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ヌクレアーゼ処理の後に、LC−MSによってキャッピング反応効率性について分析され得る。キャッピングされたポリヌクレオチドのヌクレアーゼ処理は、遊離ヌクレオチドとLC−MSによって検出可能なキャッピングされた5’−5−トリホスフェートキャップ構造との混合物を産出するであろう。LC−MSスペクトル上でキャッピングされた生成物の量は、反応から全ポリヌクレオチドのパーセントとして表され得、キャッピング反応効率性に対応する。より高いキャッピング反応効率性を有するキャップ構造は、LC−MSによってキャッピングされた生成物のより高い量を有するであろう。
個々のポリヌクレオチド(20μl容積中に200〜400ng)または逆転写PCR生成物(200〜400ng)は、非変性の1.2%アガロースE−ゲル(Invitrogen,Carlsbad,CA)上でウエルに投入され、製造者のプロトコルに従って12〜15分間実行され得る。
TE緩衝剤(1μl)中の修飾されたポリヌクレオチドは、Nanodrop UV吸光度読取りのために使用され、化学合成またはインビトロ転写反応から各ポリヌクレオチドの収率を定量化し得る。
ポリヌクレオチドは、細胞への添加の前に、所定の比率でポリヌクレオチドを脂質様物質と混合することによってインビトロ試験のために調製化され得る。インビボでの製剤化は、身体全体を通しての循環を容易にするために、余分な成分の添加を必要とする。インビボでの作業に好適な粒子を形成するためのこれらの脂質様物質の能力を試験するために、siRNA−脂質様物質製剤に使用される標準的な製剤プロセスは、開始点として使用され得る。粒子の形成後、ポリヌクレオチドは、添加され、複合体と融合することを可能にし得る。カプセル封入効率は、標準的な色素排除アッセイを使用して測定され得る。
A.エレクトロスプレーイオン化
対象に投与されるポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を含み得る生体試料は、調製され、1、2、3、または4つの質量分析器を使用して、エレクトロスプレーイオン化(ESI)について製造者のプロトコルに従って分析され得る。生体試料はまた、タンデムESI質量分析システムを使用して分析され得る。
対象に投与される1つ以上のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を含み得る生体試料は、調製され、マトリックス支援レーザー脱離/イオン化(MALDI)について製造者のプロトコルに従って分析され得る。
1つ以上のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を含み得る、生体試料は、トリプシン酵素で処理され、中に含まれるタンパク質を消化し得る。結果として得られるペプチドは、液体クロマトグラフィー−質量分析−質量分析(LC/MS/MS)によって分析され得る。ペプチドは、質量分析器中で断片化され、コンピュータアルゴリズムを介してタンパク質配列のデータベースに適合され得る診断パターンを産出する。消化された試料は、希釈され、特定のタンパク質のための1ng以下の開始物質を達成し得る。単純な緩衝剤バックグラウンド(例えば、水または揮発性塩)を含む生体試料は、直接溶液内消化に適しており、より複雑なバックグラウンド(例えば、洗剤、非揮発性塩、グリセロール)は、追加の洗浄工程を必要とし、試料分析を容易にする。
GLAポリペプチドをコードする配列最適化ポリヌクレオチド、例えば、配列番号1は、実施例1〜11に記載されているように合成され、特徴付けられる。ヒトGLAをコードするmRNAは、以下に記載される実施例のために調製され、実施例1〜11に記載されているように合成され、特徴付けられる。
5’UTR
GGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACC(配列番号33);及び
3’UTR
UGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC(配列番号75)
または
3’UTR
UGAUAAUAGUCCAUAAAGUAGGAAACACUACAGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCCGCAUUAUUACUCACGGUACGAGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC(配列番号81)
GLA発現は、マウス及びヒトの源の両方に由来する様々な細胞株において特徴付けられる。細胞は、標準的な条件で培養され、細胞抽出物は、細胞を溶解緩衝剤中に置くことによって得られる。比較の目的のために、適切な対照もまた調製される。GLA発現を分析するために、ライセート試料は、試験された細胞から調製され、リチウムドデシルサルフェート試料のローディングバッファーと混合され、標準的なウエスタンブロット分析にかけられる。GLAの検出のために、使用される抗体は、商業用の抗−GLA抗体である。負荷制御の検出のために、使用される抗体は、抗−シトラーゼシンターゼ(ウサギポリクローナル;PA5−22126;Thermo−Fisher Scientific(登録商標))である。内因性GLAの局在化を試験するために、免疫蛍光分析は、細胞上で行われる。GLA発現は、商業用の抗−GLAを使用して検出される。特定の細胞小器官の位置は、既存の商業用製品で検出され得る。例えば、ミトコンドリアは、Mitotrackerを使用して検出され得、核はDAPIで染色され得る。画像分析は、Zeiss ELYRA画像システム上で行われる。
HeLa細胞中のGLAのインビトロでの発現を測定するために、これらの細胞は、トランスフェクションの1日前に、12ウエルプレート(BD Biosciences,San Jose,USA)上に播種される。ヒトGLAまたはGFP制御を含むmRNA製剤は、ウエル当たり60μLのOPTI−MEM中で800ngのmRNA及び2μLのリポフェクタミン2000を使用してトランスフェクションされ、インキュベートされる。
インビトロでのGLA活性アッセイは、GLA配列を含むmRNAの導入後に外因的に発現されるGLAが活性であるかどうかを決定するために行われる。
HeLa細胞は、ヒトGLAまたはGFP制御を含むmRNA製剤でトランスフェクションされる。細胞は、リポフェクタミン2000でトランスフェクションされ、上記の実施例14に記載されるように溶解される。適切な対照もまた調製される。
外因性GLAが機能し得るかどうかを評価するために、インビトロでの活性アッセイは、酵素活性の源として、トランスフェクションされたHeLa細胞ライセートを使用して行われる。GLA活性は、細胞ライセート試料を、プレートに基づくアッセイにおいてpH4.6で2mMの4−メチルウンベリフェリル−α−D−ガラクトピラノシド(4MU−α−Gal)、及びα−ガラクトシダーゼBの50mMのN−アセチルガラクトサミン阻害剤と混合することによって測定された。アッセイ混合物は、37℃で30分間インキュベートされた。反応物は、0.5Mのエチレン−ジアミン(pH=10.4)の等しい容量の添加によって終了した。4−MU生成は、365nmの励起波長及び450nmの発光波長を有する蛍光プレート読取り器を使用して測定された。
正常な対象及びファブリー病患者の細胞は、外因性GLAを発現するそれらの容量について試験される。細胞は、標準的なプロトコルを使用してエレクトロポレーションを介してヒトGLA、マウスGLA、またはGFP制御を含むmRNA製剤でトランスフェクションされる。各構築物は、別々に試験される。インキュベートの後、細胞は溶解され、各ライセートのタンパク質濃度は、好適なアッセイを使用して、例えば、BCAアッセイによって測定される。GLA発現を分析するために、各ライセートの等しい負荷は、ローディングバッファー中で調製され、標準的なウエスタンブロット分析にかけられる。GLAの検出のために、抗−GLAが使用される。負荷制御の検出のために、使用される抗体は、抗−シトラーゼシンターゼ(ウサギポリクローナル;MA5−17625;Pierce(登録商標))である。
A.発現
正常なヒト対象及びファブリー病患者の細胞が培養される。細胞は、標準的なプロトコルを使用してエレクトロポレーションを介してヒトGLA、マウスGLA、またはGFP制御を含むmRNA製剤でトランスフェクションされる。
外因性GLAが機能するかどうかを評価するために、インビトロでの活性アッセイは、酵素活性の源として、トランスフェクションされた細胞ライセートを使用して行われる。GLA活性は、単離されたタンパク質試料を、プレートに基づくアッセイにおいてpH4.6で2mMの4−メチルウンベリフェリル−α−D−ガラクトピラノシド(4MU−α−Gal)、及びα−ガラクトシダーゼBの50mMのN−アセチルガラクトサミン阻害剤と混合することによって測定された。アッセイ混合物は、37℃で30分間インキュベートされた。反応物は、0.5Mのエチレン−ジアミン(pH=10.4)の等しい容量の添加によって終了した。4−MU生成は、365nmの励起波長及び450nmの発光波長を有する蛍光プレート読取り器を使用して測定された。
インビボでのGLA発現を容易にするGLA含有mRNAの能力を評価するために、ヒトGLAをコードするmRNAは、C57B/L6マウスに導入される。C57B/L6マウスは、対照のmRNA(NT−FIX)またはヒトGLA mRNAのいずれかを静脈内注射される。mRNAは、マウスへの送達のために脂質ナノ粒子中に製剤化される。マウスは、24時間後に屠殺し、肝臓ライセートにおけるGLAタンパク質レベルは、キャピラリー電気泳動法(CE)によって測定される。クエン酸シンターゼ発現は、負荷制御としての使用のために試験される。対照NT−FIX注射のために、4匹のマウスは、各時点で試験される。ヒトGLA mRNA注射のために、4匹のマウスは、各時点で試験される。GLAをコードするmRNAでの処理は、GLAの発現を確実に誘発することが予期されている。
本発明のポリヌクレオチドは、ヒトGLAをコードする連結されたヌクレオシド少なくとも第1の領域を含み得、それは、上記の実施例に従って構築され、発現され、特徴付けられ得る。同様に、ポリヌクレオチド配列は、増加または減少した活性を有するGLAの発現をもたらす1つ以上の変異体を含み得る。さらに、GLAをコードするポリヌクレオチド配列は、キメラ融合タンパク質をコードする構築物の一部であり得る。
A.ナノ粒子組成物の生成
ナノ粒子は、マイクロフルイディクス及び2つの流体の流れのT字路混合等の混合プロセスで作製され得、そのうちの一方は、ポリヌクレオチドを含み、他方は、脂質構成成分を有する。
ゼータサイザーナノZS(Malvern Instruments Ltd,Malvern,Worcestershire,UK)は、粒子サイズの決定においては1倍のPBS及びゼータ電位の決定においては15mMのPBSで、ナノ粒子組成物の粒子サイズ、多分散指数(PDI)、及びゼータ電位を測定するために使用され得る。
A.活性アッセイ
GLA活性アッセイは、蛍光指示薬4−メチルウンベリフェロン(4−MU)を非蛍光4MU−α−Gal基質から放出するGLA酵素活性の能力を測定する。アッセイは、野生型及びファブリーマウスの両方のバックグラウンドについて最適化された。マウスの血漿、腎臓、心臓、脾臓、及び肝臓について、4−MUの標準曲線が、開発された。GLA活性の1単位[U]は、1時間当たりに1nmolの基質を加水分解することができる量であると考えられた。このアッセイは、Desnick et al.,J.Lab.Clin.Med.81(2):157−171(1973)、Ziegler et al.,Human Gene Therapy 10:1667−1682(July 1,1999)、及びIoannou et al.,Am.J.Hum.Genet.68:14−25,2001から適用された。
GLA活性をインビボで促進する配列最適化、化学修飾されたGLA−コードmRNAの能力が試験された。野生型CD1マウス(群当たりN=3)は、(i)制御mRNA(NT−FIX)、(ii)ヒトGLAをコードする配列操作なしの野生型mRNA(GLA−mRNA番号3)、(iii)ヒトGLAをコードする配列最適化、化学修飾されたmRNA(GLA−mRNA番号1〜2及び4〜22)、または(iv)PBS制御溶液を静脈内注射された。配列最適化、化学修飾されたGLA mRNAは、非翻訳領域においてmir142/126結合部位を含んだ。mRNAは、各マウスに送達への0.5mg/kgのmRNAの送達のために、脂質ナノ粒子(MC3)中で製剤化された。マウスは、24時間後に屠殺され、マウスの肝臓は、採取された。
野生型マウスの血漿及び組織におけるGLAタンパク質発現及びGLA活性は、ヒトGLAをコードする配列最適化、化学修飾されたmRNA(GLA−mRNA番号2)、またはGFPをコードする制御mRNAが野生型CD1マウスに投与された後で、評価された。GLA mRNAは、mir142/126結合部位を含んだ。mRNAは、送達のために脂質ナノ粒子(MC3)中で製剤化され、0.5mg/kg(群当たりN=3)の単回用量として静脈内注射された。マウスは、投与の24時間、48時間、72時間、96時間、または7日間後に屠殺された。屠殺後、マウスは、PBSで灌流され、組織は、収集された(肝臓、脾臓、腎臓、及び心臓)。血漿もまた、マウスから収集された。試料は、以下に詳細にあるように分析された。
GLA mRNAの注射後48時間のマウスの肝臓におけるGLAタンパク質発現は、免疫組織化学(IHC)によって分析された。組織部分は、ライカ希釈剤中で1:400に希釈された抗−GLA抗体(アブカムウサギモノクローナルab168341)で固定され、埋め込まれ、区分され、染色された。肝臓部分は、ヘマトキシリンで対比染色された。
対照GFP mRNA及びGLA mRNAを注射した野生型CD1マウスの血漿、肝臓、脾臓、腎臓、及び心臓におけるGLAタンパク質レベルは、上記の実施例21に記載される4−MU蛍光発生GLA活性アッセイを使用して分析された。
GLA−/−ノックアウトマウス(SV129/C57B6系統、雄、生後24〜26週間)は、GLAをコードする、配列最適化、化学修飾されたmRNA(GLA−mRNA番号1)(群当たりN=5)、またはGFPをコードする制御mRNA(群当たりN=3)を投与された。GLA mRNAは、送達のために脂質ナノ粒子(MC3)中で製剤化され、mRNAを0.5mg/kg、または0.1mg/kg、または0.05mg/kgで単回用量として静脈内注射された。3匹のマウスは、脂質ナノ粒子(MC3)中で製剤化されたGFPをコードする制御mRNAを投与され、mRNAを0.5mg/kgで単回用量として注射された。PBS(mRNAなし)中で脂質ナノ粒子(MC3)を投与された3匹の野生型マウス(CD1系統、雄、生後24〜26週間)はまた、比較のために研究に含まれた。血液は、0.6時間、24時間、及び72時間で各マウスから収集された。72時間後、マウスは屠殺され、心臓、腎臓、肝臓、及び脾臓は採取された。試料は、以下に詳細にあるように分析された。
静脈内投与後72時間でのGLAノックアウトマウスの肝臓におけるGLAタンパク質レベルは、キャピラリー電気泳動法(CE)によって分析された。図11Aは、GLAをコードするmRNAの投与の72時間後の肝臓におけるGLA発現の投与−反応を示す。GFP制御に対する有意なGLA発現は、投与されたGLA mRNAの各濃度で観察され、GLA発現の最も高いレベルは0.5mg/kg用量で観察された。GLA発現は、制御GFP mRNAを投与されたGLAノックアウトマウスの肝臓において観察されなかった。72時間でのタンパク質発現の定量化は、図11Bに図示される。0.5mg/kg用量での平均GLA発現は、152.5ng/mgであった。
血漿は、投与の0時間、6時間、24時間、及び72時間後に収集された血液試料から調製された。上記の実施例21に記載される4−MU蛍光発生GLA活性アッセイは、各血漿試料上で行われた。
GLA活性は、GLA mRNAの投与の72時間後のGLAノックアウトマウスから採取された、それぞれ、心臓、腎臓、肝臓、及び脾臓組織について測定された。図14A、14B、14C、及び14Dは、それぞれ、心臓、腎臓、肝臓、及び脾臓におけるGLA活性レベルを示す。各組織において、GLA活性は、用量依存的様式でGLA mRNA処置されたマウスについて高められた。PBS中の脂質ナノ粒子で処置された制御GFP mRNA及び野生型マウスのGLA活性データは、比較のために含まれる。GLAをコードする0.5mg/kgのmRNAでの処置後72時間で、全組織中のGLA活性レベルは、対照と比較して増加された。図15A、15B、及び15Cは、同じ組織特異型GLA活性を示すが、PBSを注射された野生型マウスにおけるGLA活性に対する百分率として示す。図15A、15B、及び15Cは、0.5mg/kgのGLA mRNA投与での肝臓、血漿、及び心臓における超生理的(>100%)GLA活性、及び0.5mg/kgのGLA mRNA投与での腎臓におけるGLA活性の少なくとも50%回復を示す。
GLAをコードするmRNAが、内因性GLAの欠乏を修正し、ファブリー病の症状と戦うことができるかどうかを判定するために、リゾ−Gb3は、GLA mRNAの投与後、GLAノックアウトマウスにおいて測定された。
GLA−/−ノックアウトマウス(SV129/C57B6系統、雄、生後22〜25週間)は、GLA、具体的にはGLA−mRNA番号1またはGLA−mRNA番号23をコードする、配列最適化、化学修飾されたmRNAを投与された。GLA mRNAは、送達のために脂質ナノ粒子(化合物18)中で製剤化され、0.5mg/kgのmRNA(試験されるmRNA当たりN=3)の単回用量として静脈内注射された。
A.活性アッセイ
GLA活性アッセイは、蛍光指示薬4−メチルウンベリフェロン(4−MU)を非蛍光4MU−α−Gal基質から放出するGLA酵素活性の能力を測定する。アッセイは、野生型及びファブリーマウスの両方のバックグラウンドについて最適化された。カニクイザルの血漿について4−MUの標準曲線が、開発された。GLA活性の1単位[U]は、1時間当たりに1nmolの基質を加水分解することができる量であると考えられた。このアッセイは、Desnick et al.,J.Lab.Clin.Med.81(2):157−171(1973)、Ziegler et al.,Human Gene Therapy 10:1667−1682(July 1,1999)、及びIoannou et al.,Am.J.Hum.Genet.68:14−25,2001から適用された。
GLA活性をインビボで促進する配列最適化、化学修飾されたGLA−コードmRNAの能力が試験された。カニクイザル(群当たりN=4)は、(i)脂質ナノ粒子中で製剤化された0.2mg/kgのGLA−mRNA番号23(化合物18)、(ii)脂質ナノ粒子中で製剤化された0.5mg/kgのGLA−mRNA番号23(化合物18)、または(iii)脂質ナノ粒子中で製剤化された0.5mg/kgのGLA−mRNA番号23(化合物18及び化合物428)を静脈内注射された。
複数回投与後、インビボでGLA活性を促進する、配列最適化、化学修飾されたGLA−コードmRNAの能力が試験された。カニクイザル(N=4)は、脂質ナノ粒子中で製剤化された0.5mg/kgのGLA−mRNA番号23(化合物18)を、1日目及び14日目に静脈内注射された。
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
(項目1)
医薬組成物であって、
(a)(i)α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)であって、少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組み合わせを含む、ORF、及び(ii)マイクロRNA(miRNA)結合部位を含む非翻訳領域(UTR)を含む、mRNAと、
(b)送達剤と、を含み、
ファブリー病の治療を必要とするヒト対象への投与に好適である、医薬組成物。
(項目2)
ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、その必要のあるヒト対象に単回静脈内用量として投与されるとき、(i)投与後少なくとも24時間にわたって血漿中GLA活性レベルを参照の生理的レベル以上に増加させる、及び/または(ii)投与後少なくとも24時間にわたって血漿中GLA活性レベルを参照の血漿中GLA活性レベルの10%、20%、30%、40%、50%、もしくはそれよりも高くに維持するのに十分である、医薬組成物。
(項目3)
前記組成物は、ファブリー病を患う前記ヒト対象に単回静脈内用量として投与されるとき、投与後72時間、参照の血漿中GLA活性の少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%を維持するのに十分である、項目2に記載の医薬組成物。
(項目4)
ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含む、脂質ナノ粒子にカプセル封入されたmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、その必要のあるヒト対象に単回静脈内用量として投与されるとき、(i)投与後少なくとも24時間にわたって肝臓、心臓及び/または腎臓GLA活性レベルを参照の生理的レベル以上に増加させる、及び/または(ii)投与後少なくとも24時間にわたって血漿中GLA活性レベルを参照の血漿中GLA活性レベルの10%、20%、30%、40%、50%、もしくはそれよりも高くに維持するのに十分である、医薬組成物。
(項目5)
前記組成物は、それを必要とする前記ヒト対象に単回静脈内用量として投与されるとき、投与後72時間、参照の肝臓及び/または心臓GLA活性の少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%を維持するのに十分である、項目4に記載の医薬組成物。
(項目6)
前記組成物は、それを必要とする前記ヒト対象に単回静脈内用量として投与されるとき、(i)投与後少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少なくとも5週間、もしくは少なくとも6週間にわたって、リゾ−Gb3血漿中レベルを少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減する、かつ/または(ii)投与後少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少なくとも5週間、もしくは少なくとも6週間にわたって、Gb3血漿中レベルを少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減するのに十分である、項目1〜5のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目7)
ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、その必要のある対象に単回静脈内用量として投与されるとき、
(i)投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、Gb3の血漿中レベルを治療前のGb3血漿中レベルと比較して少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減する、かつ/または
(ii)投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、リゾ−Gb3の血漿中レベルを治療前のリゾ−Gb3血漿中レベルと比較して少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減するのに十分である、医薬組成物。
(項目8)
ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、その必要のある対象に単回静脈内用量として投与されるとき、
(i)投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、心臓、腎臓、肝臓、または脾臓組織中のGb3の組織中レベルをその組織中の治療前のGb3レベルと比較して少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減する、かつ/または
(ii)投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、心臓、腎臓、肝臓、または脾臓組織中のリゾ−Gb3の組織中レベルをその組織中の治療前のリゾ−Gb3レベルと比較して少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減するのに十分である、医薬組成物。
(項目9)
ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、その必要のある対象に単回静脈内用量として投与されるとき、
(i)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、血漿中GLA活性レベルを増加させる、
(ii)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、心臓組織中GLA活性レベルを増加させる、
(iii)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、肝臓組織中GLA活性レベルを増加させる、
(iv)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、腎臓組織中GLA活性レベルを増加させる、及び/または
(v)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、脾臓組織中GLA活性レベルを増加させるのに十分である、及び/または
前記増加されたGLA活性レベルは、対応する参照のGLA活性レベルの少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、または100%超である、医薬組成物。
(項目10)
送達剤をさらに含む、項目2〜9のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目11)
α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むポリヌクレオチドであって、前記GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論上最小ウラシルまたはチミン含量と比べた前記ORFのウラシルまたはチミン含量(%U TM または%T TM )が約100%〜約150%である、ポリヌクレオチド。
(項目12)
前記%U TM または%T TM は、約110%〜約150%、約115%〜約150%、約120%〜約150%、約110%〜約145%、約115%〜約145%、約120%〜約145%、約110%〜約140%、約115%〜約140%、または約120%〜約140%である、項目11に記載のポリヌクレオチド。
(項目13)
対応する野生型ORFのウラシルまたはチミン含量と比べた前記ORFの前記ウラシルまたはチミン含量(%U WT または%T WT )は、100%未満である、項目11または12に記載のポリヌクレオチド。
(項目14)
前記%U WT または%T WT は、約95%未満、約90%未満、約85%未満、80%未満、75%未満、74%未満、73%未満、72%未満、71%未満、または70%未満である、項目13に記載のポリヌクレオチド。
(項目15)
前記ORF中の総ヌクレオチド含量と比べた前記ORF中の前記ウラシルまたはチミン含量(%U TL または%T TL )は、約50%未満、約40%未満、約30%未満、または約20%未満である、項目11〜14のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目16)
前記%U TL または%T TL は、約20%未満である、項目15に記載のポリヌクレオチド。
(項目17)
前記GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論上最大グアニン含量に対する前記ORFのグアニン含量(%G TMX )は、少なくとも64%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、または約100%である、項目11〜16のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目18)
前記%G TMX は、約64%〜約85%、約65%〜約85%、または約65%〜約80%である、項目17に記載のポリヌクレオチド。
(項目19)
前記GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論上最大シトシン含量と比べた前記ORFのシトシン含量(%C TMX )は、少なくとも54%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、または約100%である、項目11〜18のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目20)
前記%C TMX は、約60%〜約95%、約65%〜約95%、約70%〜約95%、または約75%〜約90%である、項目19に記載のポリヌクレオチド。
(項目21)
前記GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列における理論上最大グアニン及びシトシン(G/C)含量と比べた前記ORFのG/C含量(%G/C TMX )は、少なくとも約73%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、または約100%である、項目11〜20のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目22)
前記%G/C TMX は、約80%〜約100%、約85%〜約99%、約90%〜約99%、または約95%〜約99%である、項目21に記載のポリヌクレオチド。
(項目23)
対応する野生型ORFにおけるG/C含量と比べた前記ORFにおけるG/C含量(%G/C WT )は、少なくとも102%、少なくとも103%、少なくとも104%、少なくとも105%、少なくとも106%、少なくとも107%、少なくとも110%、少なくとも115%、少なくとも120%、または少なくとも約125%である、項目11〜22のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目24)
前記ORFは、配列番号3〜27、79、80、及び141〜159からなる群から選択される核酸配列との少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%の配列同一性を有する、項目11〜23のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目25)
前記ORFは、配列番号79または80の核酸配列との少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%の配列同一性を有する、項目11〜24のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目26)
前記ORFは、配列番号79または80の核酸配列との少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%の配列同一性を有する、項目11〜25のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目27)
前記ORFは、配列番号79または80の核酸配列を含む、項目11〜26のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目28)
mRNAである、項目11〜27のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目29)
項目28に記載のmRNAと送達剤とを含む、医薬組成物。
(項目30)
前記送達剤は、脂質様物質、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、またはコンジュゲートを含む、項目1、6、10、及び29のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目31)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、3−(ジドデシルアミノ)−N1,N1,4−トリドデシル−1−ピペラジンエタンアミン(KL10)、N1−[2−(ジドデシルアミノ)エチル]−N1,N4,N4−トリドデシル−1,4−ピペラジンジエタンアミン(KL22)、14,25−ジトリデシル−15,18,21,24−テトラアザ−オクタトリアコンタン(KL25)、1,2−ジリノレイルオキシ−N,N−ジメチルアミノプロパン(DLin−DMA)、2,2−ジリノレイル−4−ジメチルアミノメチル−[1,3]−ジオキソラン(DLin−K−DMA)、ヘプタトリアコンタ−6,9,28,31−テトラエン−19−イル4−(ジメチルアミノ)ブタノアート(DLin−MC3−DMA)、2,2−ジリノレイル−4−(2−ジメチルアミノエチル)−[1,3]−ジオキソラン(DLin−KC2−DMA)、1,2−ジオレイルオキシ−N,N−ジメチルアミノプロパン(DODMA)、(13Z,165Z)−N,N−ジメチル−3−ノニドコサ−13−16−ジエン−1−アミン(L608)、2−({8−[(3β)−コレスト−5−エン−3−イルオキシ]オクチル}オキシ)−N,N−ジメチル−3−[(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエン−1−イルオキシ]プロパン−1−アミン(オクチル−CLinDMA)、(2R)−2−({8−[(3β)−コレスト−5−エン−3−イルオキシ]オクチル}オキシ)−N,N−ジメチル−3−[(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエン−1−イルオキシ]プロパン−1−アミン(オクチル−CLinDMA(2R)、(2S)−2−({8−[(3β)−コレスト−5−エン−3−イルオキシ]オクチル}オキシ)−N,N−ジメチル−3−[(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエン−1−イルオキシ]プロパン−1−アミン(オクチル−CLinDMA(2S)、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される脂質を含む、項目1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目32)
前記脂質ナノ粒子は、DLin−MC3−DMAを含む、項目31に記載の医薬組成物。
(項目33)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(I)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
R 1 は、C 5−30 アルキル、C 5−20 アルケニル、−R * YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R 2 及びR 3 は独立して、H、C 1−14 アルキル、C 2−14 アルケニル、−R * YR”、−YR”、及び−R * OR”からなる群から選択されるか、あるいはR 2 及びR 3 は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、
R 4 は、C 3−6 炭素環、−(CH 2 ) n Q、−(CH 2 ) n CHQR、−CHQR、−CQ(R) 2 、及び非置換C 1−6 アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH 2 ) n N(R) 2 、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX 3 、−CX 2 H、−CXH 2 、−CN、−N(R) 2 、−C(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O) 2 R、−N(R)C(O)N(R) 2 、−N(R)C(S)N(R) 2 、−N(R)R 8 、−O(CH 2 ) n OR、−N(R)C(=NR 9 )N(R) 2 、−N(R)C(=CHR 9 )N(R) 2 、−OC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O) 2 R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R) 2 、−N(OR)C(S)N(R) 2 、−N(OR)C(=NR 9 )N(R) 2 、−N(OR)C(=CHR 9 )N(R) 2 、−C(=NR 9 )N(R) 2 、−C(=NR 9 )R、−C(O)N(R)OR、及び−C(R)N(R) 2 C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R 5 は独立して、C 1−3 アルキル、C 2−3 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R 6 は独立して、C 1−3 アルキル、C 2−3 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O) 2 −、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R 7 は、C 1−3 アルキル、C 2−3 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R 8 は、C 3−6 炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R 9 は、H、CN、NO 2 、C 1−6 アルキル、−OR、−S(O) 2 R、−S(O) 2 N(R) 2 、C 2−6 アルケニル、C 3−6 炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C 1−3 アルキル、C 2−3 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C 1−18 アルキル、C 2−18 アルケニル、−R * YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C 3−14 アルキル及びC 3−14 アルケニルからなる群から選択され、
各R * は独立して、C 1−12 アルキル及びC 2−12 アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C 3−6 炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、
但し、R 4 が−(CH 2 ) n Q、−(CH 2 ) n CHQR、−CHQR、または−CQ(R) 2 である場合、(i)nが1、2、3、4もしくは5であるとき、Qは−N(R) 2 ではないか、あるいは(ii)nが1または2であるとき、Qは5、6、または7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする、項目1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目34)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、前記化合物が式(IA)、
またはその塩もしくは立体異性体のものであることを含み、式中、
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
mは、5、6、7、8、及び9から選択され、
M 1 は、結合またはM’であり、
R 4 は、非置換C 1−3 アルキル、または−(CH 2 ) n Qであり、式中、Qは、OH、−NHC(S)N(R) 2 、−NHC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O) 2 R、−N(R)R 8 、−NHC(=NR 9 )N(R) 2 、−NHC(=CHR 9 )N(R) 2 、−OC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R 2 及びR 3 は独立して、H、C 1−14 アルキル、及びC 2−14 アルケニルからなる群から選択される、項目33に記載の医薬組成物。
(項目35)
mは、5、7、または9である、項目33〜34のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目36)
前記化合物は、式(II)
またはその塩もしくは立体異性体のものであり、式中、
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
M 1 は、結合またはM’であり、
R 4 は、非置換C 1−3 アルキル、または−(CH 2 ) n Qであり、式中、nは、2、3、または4であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R) 2 、−NHC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O) 2 R、−N(R)R 8 、−NHC(=NR 9 )N(R) 2 、−NHC(=CHR 9 )N(R) 2 、−OC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R 2 及びR 3 は独立して、H、C 1−14 アルキル、及びC 2−14 アルケニルからなる群から選択される、項目33〜35のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目37)
M 1 は、M’である、項目34〜36のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目38)
M及びM’は独立して、−C(O)O−または−OC(O)−である、項目37に記載の医薬組成物。
(項目39)
lは、1、3、または5である、項目34〜38のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目40)
前記化合物は、化合物1〜化合物232、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、項目33に記載の医薬組成物。
(項目41)
前記化合物は、化合物1〜化合物147、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、項目40に記載の医薬組成物。
(項目42)
前記化合物は、化合物18、その塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせである、項目41に記載の医薬組成物。
(項目43)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(III)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
環Aは、
であり、
tは、1または2であり、
A 1 及びA 2 は各々独立して、CHまたはNから選択され、
Zは、CH 2 または不在であり、ZがCH 2 であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 は独立して、C 5−20 アルキル、C 5−20 アルケニル、−R”MR’、−R * YR”、−YR”、及び−R * OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S− −SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O) 2 −、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
X 1 、X 2 、及びX 3 は独立して、結合、−CH 2 −、−CH 2 ) 2 −、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)−、−C(O)O−CH 2 −、−OC(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)O−、−CH 2 −OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C 3−6 炭素環であり、
各R * は独立して、C 1−12 アルキル及びC 2−12 アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C 1−3 アルキル及びC 3−6 炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C 1−12 アルキル、C 2−12 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C 3−12 アルキル及びC 3−12 アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
であるとき、
i)X 1 、X 2 、及びX 3 のうちの少なくとも1つは、−CH 2 −ではない、かつ/または
ii)R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 のうちの少なくとも1つは、−R”MR’である、項目1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目44)
前記化合物は、下記式を有する、項目43に記載の医薬組成物
(項目45)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(IV)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
A 1 及びA 2 は各々独立して、CHまたはNから選択され、A 1 及びA 2 のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH 2 または不在であり、ZがCH 2 であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 は独立して、C 6−20 アルキル及びC 6−20 アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
であるとき、
i)R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 は同じであり、ここでR 1 は、C 12 アルキル、C 18 アルキル、またはC 18 アルケニルではない、
ii)R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 のうちの1つのみが、C 6−20 アルケニルから選択される、
iii)R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 のうちの少なくとも1つは、R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 のうちの別の少なくとも1つとは異なる数の炭素原子を有する、
iv)R 1 、R 2 、及びR 3 は、C 6−20 アルケニルから選択され、R 4 及びR 5 は、C 6−20 アルキルから選択される、あるいは
v)R 1 、R 2 、及びR 3 は、C 6−20 アルキルから選択され、R 4 及びR 5 は、C 6−20 アルケニルから選択される、項目1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目46)
前記化合物は、式(IVa)のものである、項目45に記載の医薬組成物。
(項目47)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(V)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
A 3 は、CHまたはNであり、
A 4 は、CH 2 またはNHであり、A 3 及びA 4 のうちの少なくとも1つは、NまたはNHであり、
Zは、CH 2 または不在であり、ZがCH 2 であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R 1 、R 2 、及びR 3 は独立して、C 5−20 アルキル、C 5−20 アルケニル、−R”MR’、−R * YR”、−YR”、及び−R * OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O) 2 −、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
X 1 及びX 2 は独立して、−CH 2 −、−(CH 2 ) 2 −、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)−、−C(O)O−CH 2 −、−OC(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)O−、−CH 2 −OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C 3−6 炭素環であり、
各R * は独立して、C 1−12 アルキル及びC 2−12 アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C 1−3 アルキル及びC 3−6 炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C 1−12 アルキル、C 2−12 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C 3−12 アルキル及びC 3−12 アルケニルからなる群から選択される、項目1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目48)
前記化合物は、式(Va)のものである、項目47に記載の医薬組成物。
(項目49)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(VI)を有する化合物、
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
A 6 及びA 7 は各々独立して、CHまたはNから選択され、A 6 及びA 7 のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH 2 または不在であり、ZがCH 2 であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
X 4 及びX 5 は独立して、−CH 2 −、−(CH 2 ) 2 −、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)−、−C(O)O−CH 2 −、−OC(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)O−、−CH 2 −OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
R 1 、R 2, R 3 、R 4 、及びR 5 は各々、独立して、C 5−20 アルキル、C 5−20 アルケニル、−R”MR’、−R * YR”、−YR”、及び−R * OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O) 2 −、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
各Yは独立して、C 3−6 炭素環であり、
各R * は独立して、C 1−12 アルキル及びC 2−12 アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C 1−3 アルキル及びC 3−6 炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C 1−12 アルキル、C 2−12 アルケニル、及びHからなる群から選択され、各R”は独立して、C 3−12 アルキル及びC 3−12 アルケニルからなる
群から選択される、項目1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目50)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、化合物233〜化合物342、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される化合物を含む、項目1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目51)
前記化合物は、化合物236、その塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせである、項目50に記載の医薬組成物。
(項目52)
α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、式(I)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含む送達剤とを含む、医薬組成物であって、式中、
R 1 は、C 5−30 アルキル、C 5−20 アルケニル、−R * YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R 2 及びR 3 は独立して、H、C 1−14 アルキル、C 2−14 アルケニル、−R * YR”、−YR”、及び−R * OR”からなる群から選択されるか、あるいはR 2 及びR 3 は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、
R 4 は、C 3−6 炭素環、−(CH 2 ) n Q、−(CH 2 ) n CHQR、−CHQR、−CQ(R) 2 、及び非置換C 1−6 アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH 2 ) n N(R) 2 、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX 3 、−CX 2 H、−CXH 2 、−CN、−N(R) 2 、−C(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O) 2 R、−N(R)C(O)N(R) 2 、−N(R)C(S)N(R) 2 、−N(R)R 8 、−O(CH 2 ) n OR、−N(R)C(=NR 9 )N(R) 2 、−N(R)C(=CHR 9 )N(R) 2 、−OC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O) 2 R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R) 2 、−N(OR)C(S)N(R) 2 、−N(OR)C(=NR 9 )N(R) 2 、−N(OR)C(=CHR 9 )N(R) 2 、−C(=NR 9 )N(R) 2 、−C(=NR 9 )R、−C(O)N(R)OR、及び−C(R)N(R) 2 C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R 5 は独立して、C 1−3 アルキル、C 2−3 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R 6 は独立して、C 1−3 アルキル、C 2−3 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O) 2 −、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R 7 は、C 1−3 アルキル、C 2−3 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R 8 は、C 3−6 炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R 9 は、H、CN、NO 2 、C 1−6 アルキル、−OR、−S(O) 2 R、−S(O) 2 N(R) 2 、C 2−6 アルケニル、C 3−6 炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C 1−3 アルキル、C 2−3 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C 1−18 アルキル、C 2−18 アルケニル、−R * YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C 3−14 アルキル及びC 3−14 アルケニルからなる群から選択され、
各R * は独立して、C 1−12 アルキル及びC 2−12 アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C 3−6 炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、
但し、R 4 が−(CH 2 ) n Q、−(CH 2 ) n CHQR、−CHQR、または−CQ(R) 2 である場合、(i)nが1、2、3、4もしくは5であるとき、Qは−N(R) 2 ではないか、あるいは(ii)nが1または2であるとき、Qは5、6、または7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする、医薬組成物。
(項目53)
前記送達剤は、前記化合物は、式(IA)のもの、
またはその塩もしくは立体異性体であり、式中、
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
mは、5、6、7、8、及び9から選択され、
M 1 は、結合またはM’であり、
R 4 は、非置換C 1−3 アルキル、または−(CH 2 ) n Qであり、式中、Qは、OH、−NHC(S)N(R) 2 、−NHC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O) 2 R、−N(R)R 8 、−NHC(=NR 9 )N(R) 2 、−NHC(=CHR 9 )N(R) 2 、−OC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R 2 及びR 3 は独立して、H、C 1−14 アルキル、及びC 2−14 アルケニルからなる群から選択される、項目52に記載の医薬組成物。
(項目54)
mは、5、7、または9である、項目52〜53のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目55)
前記化合物は、式(II)
またはその塩もしくは立体異性体のものであり、式中、
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
M 1 は、結合またはM’であり、
R 4 は、非置換C 1−3 アルキル、または−(CH 2 ) n Qであり、式中、nは、2、3、または4であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R) 2 、または−NHC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O) 2 R、−N(R)R 8 、−NHC(=NR 9 )N(R) 2 、−NHC(=CHR 9 )N(R) 2 、−OC(O)N(R) 2 、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、 M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R 2 及びR 3 は独立して、H、C 1−14 アルキル、及びC 2−14 アルケニルからなる群から選択される、項目52〜54のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目56)
M 1 は、M’である、項目53〜55のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目57)
M及びM’は独立して、−C(O)O−または−OC(O)−である、項目56に記載の医薬組成物。
(項目58)
lは、1、3、または5である、項目53〜57のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目59)
前記化合物は、化合物1〜化合物232、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、項目52に記載の医薬組成物。
(項目60)
前記化合物は、化合物1〜化合物147、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、項目59に記載の医薬組成物。
(項目61)
前記化合物は、化合物18、その塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせである、項目60に記載の医薬組成物。
(項目62)
α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、式(III)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
環Aは、
であり、
tは、1または2であり、
A 1 及びA 2 は各々独立して、CHまたはNから選択され、
Zは、CH 2 または不在であり、ZがCH 2 であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 は独立して、C 5−20 アルキル、C 5−20 アル
ケニル、−R”MR’、−R * YR”、−YR”、及び−R * OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O) 2 −、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
X 1 、X 2 、及びX 3 は独立して、結合、−CH 2 −、−CH 2 ) 2 −、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)−、−C(O)O−CH 2 −、−OC(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)O−、−CH 2 −OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C 3−6 炭素環であり、
各R * は独立して、C 1−12 アルキル及びC 2−12 アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C 1−3 アルキル及びC 3−6 炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C 1−12 アルキル、C 2−12 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C 3−12 アルキル及びC 3−12 アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
であるとき、
i)X 1 、X 2 、及びX 3 のうちの少なくとも1つは、−CH 2 −ではない、かつ/または
ii)R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 のうちの少なくとも1つは、−R”MR’である、医薬組成物。
(項目63)
前記化合物は、下記式を有する、項目62に記載の医薬組成物。
(項目64)
α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、式(IV)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
A 1 及びA 2 は各々独立して、CHまたはNから選択され、A 1 及びA 2 のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH 2 または不在であり、ZがCH 2 であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 は独立して、C 6−20 アルキル及びC 6−20 アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
であるとき、
i)R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 は同じであり、ここでR 1 は、C 12 アルキル、C 18 アルキル、またはC 18 アルケニルではない、
ii)R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 のうちの1つのみが、C 6−20 アルケニルから選択される、
iii)R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 のうちの少なくとも1つは、R 1 、R 2 、R 3 、R 4 、及びR 5 のうちの別の少なくとも1つとは異なる数の炭素原子を有する、
iv)R 1 、R 2 、及びR 3 は、C 6−20 アルケニルから選択され、R 4 及びR 5 は、C 6−20 アルキルから選択される、あるいは
v)R 1 、R 2 、及びR 3 は、C 6−20 アルキルから選択され、R 4 及びR 5 は、C 6−20 アルケニルから選択される、医薬組成物。
(項目65)
前記化合物は、式(IVa)のものである、項目64に記載の医薬組成物。
(項目66)
α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、式(V)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
A 3 は、CHまたはNであり、
A 4 は、CH 2 またはNHであり、A 3 及びA 4 のうちの少なくとも1つは、NまたはNHであり、
Zは、CH 2 または不在であり、ZがCH 2 であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R 1 、R 2 、及びR 3 は独立して、C 5−20 アルキル、C 5−20 アルケニル、−R”MR’、−R * YR”、−YR”、及び−R * OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O) 2 −、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
X 1 及びX 2 は独立して、−CH 2 −、−(CH 2 ) 2 −、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)−、−C(O)O−CH 2 −、−OC(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)O−、−CH 2 −OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C 3−6 炭素環であり、
各R * は独立して、C 1−12 アルキル及びC 2−12 アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C 1−3 アルキル及びC 3−6 炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C 1−12 アルキル、C 2−12 アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C 3−12 アルキル及びC 3−12 アルケニルからなる群から選択される、医薬組成物。
(項目67)
前記化合物は、式(Va)のものである、項目66に記載の医薬組成物。
(項目68)
α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、式(VI)を有する化合物
またはその塩もしくは立体異性体を含み、式中、
A 6 及びA 7 は各々独立して、CHまたはNから選択され、A 6 及びA 7 のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH 2 または不在であり、ZがCH 2 であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
X 4 及びX 5 は独立して、−CH 2 −、−(CH 2 ) 2 −、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)−、−C(O)O−CH 2 −、−OC(O)−CH 2 −、−CH 2 −C(O)O−、−CH 2 −OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
R 1 、R 2, R 3 、R 4 、及びR 5 は各々、独立して、C 5−20 アルキル、C 5−20 アルケニル、−R”MR’、−R * YR”、−YR”、及び−R * OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O) 2 −、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
各Yは独立して、C 3−6 炭素環であり、
各R * は独立して、C 1−12 アルキル及びC 2−12 アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C 1−3 アルキル及びC 3−6 炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C 1−12 アルキル、C 2−12 アルケニル、及びHからなる群から選択され、各R”は独立して、C 3−12 アルキル及びC 3−12 アルケニルからなる群から選択される、医薬組成物。
(項目69)
α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、化合物233〜化合物342、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される化合物を含む、医薬組成物。
(項目70)
前記化合物は、化合物236、それらの塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせである、項目69に記載の医薬組成物。
(項目71)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、PEG脂質をさらに含む、項目29〜70のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目72)
前記PEG脂質は、式(VII)、
またはその塩を有し、式中、
R 3 は、−OR O であり、
R O は、水素、任意選択で置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
rは、1〜100(端点を含む)の整数であり、
L 1 は、任意選択で置換されるC 1−10 アルキレンであり、前記任意選択で置換されるC 1−10 アルキレンの少なくとも1つのメチレンは独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−O−、−N(R N )−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(R N )−、−NR N C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(R N )−、−NR N C(O)O−、または−NR N C(O)N(R N )−で置き換えられ、
Dは、クリックケミストリーによって得られた部分または生理的条件下で切断可能な部分であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、
のものであり、
L 2 の各出現例は独立して、結合または任意選択で置換されるC 1−6 アルキレンであり、前記任意選択で置換されるC 1−6 アルキレンの1つのメチレン単位は任意選択で、−O−、−N(R N )−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(R N )−、−NR N C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(R N )−、−NR N C(O)O−、または−NR N C(O)N(R N )−で置き換えられ、
R 2 の各出現例は独立して、任意選択で置換されるC 1−30 アルキル、任意選択で置換されるC 1−30 アルケニル、または任意選択で置換されるC 1−30 アルキニルであり、任意選択で、R 2 の1つ以上のメチレン単位は独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(R N )−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(R N )−、−NR N C(O)−、−NR N C(O)N(R N )−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(R N )−、−NR N C(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NR N )−、−C(=NR N )N(R N )−、−NR N C(=NR N )−、−NR N C(=NR N )N(R N )−、−C(S)−、−C(S)N(R N )−、−NR N C(S)−、−NR N C(S)N(R N )−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O) 2 −、−S(O) 2 O−、−OS(O) 2 O−、−N(R N )S(O)−、−S(O)N(R N )−、−N(R N )S(O)N(R N )−、−OS(O)N(R N )−、−N(R N )S(O)O−、−S(O) 2 −、−N(R N )S(O) 2 −、−S(O) 2 N(R N )−、−N(R N )S(O) 2 N(R N )−、−OS(O) 2 N(R N )−、または−N(R N )S(O) 2 O−で置き換えられ、
R N の各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意選択で置換されるカルボシクリル、任意選択で置換されるヘテロシクリル、任意選択で置換されるアリール、または任意選択で置換されるヘテロアリールであり、
pは、1または2である、項目71に記載の医薬組成物。
(項目73)
前記PEG脂質は、式(VIII)、
またはその塩を有し、式中、
R 3 は、−OR O であり、
R O は、水素、任意選択で置換されるアルキルまたは酸素保護基であり、
rは、1〜100(端点を含む)の整数であり、
R 5 は、任意選択で置換されるC 10−40 アルキル、任意選択で置換されるC 10−40 アルケニル、または任意選択で置換されるC 10−40 アルキニルであり、任意選択で、R 5 の1つ以上のメチレン基は、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(R N )−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(R N )−、−NR N C(O)−、−NR N C(O)N(R N )−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(R N )−、−NR N C(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NR N )−、−C(=NR N )N(R N )−、−NR N C(=NR N )−、−NR N C(=NR N )N(R N )−、−C(S)−、−C(S)N(R N )−、−NR N C(S)−、−NR N C(S)N(R N )−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O) 2 −、−S(O) 2 O−、−OS(O) 2 O−、−N(R N )S(O)−、−S(O)N(R N )−、−N(R N )S(O)N(R N )−、−OS(O)N(R N )−、−N(R N )S(O)O−、−S(O) 2 −、−N(R N )S(O) 2 −、−S(O) 2 N(R N )−、−N(R N )S(O) 2 N(R N )−、−OS(O) 2 N(R N )−、または−N(R N )S(O) 2 O−で置き換えられ、
R N の各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基である、項目71に記載の医薬組成物。
(項目74)
前記PEG脂質は、下記式、
を有し、式中、rは、1〜100の整数である、項目73に記載の医薬組成物。
(項目75)
前記PEG脂質は、化合物428である、項目74に記載の医薬組成物。
(項目76)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、リン脂質をさらに含む、項目29〜75のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目77)
前記リン脂質は、式(IX)、
またはその塩を有し、式中、
各R 1 は独立して、任意選択で置換されるアルキルであるか、あるいは任意選択で、2つのR 1 が、介在する原子と一緒に連結して、任意選択で置換される単環式カルボシクリルまたは任意選択で置換される単環式ヘテロシクリルを形成するか、あるいは任意選択で、3つのR 1 が、介在する原子と一緒に連結して、任意選択で置換される二環式カルボシクリルまたは任意選択で置換二環式ヘテロシクリルを形成し、
nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、
のものであり、
L 2 の各出現例は独立して、結合または任意選択で置換されるC 1−6 アルキレンであり、前記任意選択で置換されるC 1−6 アルキレンの1つのメチレン単位は任意選択で、−O−、−N(R N )−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(R N )−、−NR N C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(R N )−、−NR N C(O)O−、または−NR N C(O)N(R N )−で置き換えられ、
R 2 の各出現例は独立して、任意選択で置換されるC 1−30 アルキル、任意選択で置換されるC 1−30 アルケニル、または任意選択で置換されるC 1−30 アルキニルであり、任意選択で、R 2 の1つ以上のメチレン単位は独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(R N )−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(R N )−、−NR N C(O)−、−NR N C(O)N(R N )−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(R N )−、−NR N C(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NR N )−、−C(=NR N )N(R N )−、−NR N C(=NR N )−、−NR N C(=NR N )N(R N )−、−C(S)−、−C(S)N(R N )−、−NR N C(S)−、−NR N C(S)N(R N )−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O) 2 −、−S(O) 2 O−、−OS(O) 2 O−、−N(R N )S(O)−、−S(O)N(R N )−、−N(R N )S(O)N(R N )−、−OS(O)N(R N )−、−N(R N )S(O)O−、−S(O) 2 −、−N(R N )S(O) 2 −、−S(O) 2 N(R N )−、−N(R N )S(O) 2 N(R N )−、−OS(O) 2 N(R N )−、または−N(R N )S(O) 2 O−で置き換えられ、
R N の各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意選択で置換されるカルボシクリル、任意選択で置換されるヘテロシクリル、任意選択で置換されるアリール、または任意選択で置換されるヘテロアリールであり、
pは、1または2であるが、
但し、前記化合物は、下記式、
のものではないことを条件とし、式中、R 2 の各出現例は独立して、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルである、項目76に記載の医薬組成物。
(項目78)
前記リン脂質は、下記式、
またはその塩を有し、式中、
各tは独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各uは独立して、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各vは独立して、1、2、または3である、項目77に記載の医薬組成物。
(項目79)
前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、化合物18、DSPC、コレステロール、及び化合物428を約50:10:38.5:1.5のモル比で含む、項目1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目80)
前記mRNAは、マイクロRNA(miR)結合部位を含む、項目1〜10及び29〜79のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目28に記載のポリヌクレオチド。
(項目81)
前記mRNAは、少なくとも2つの異なるマイクロRNA(miR)結合部位を含み、前記マイクロRNAは、造血系の免疫細胞、またはTLR7及び/またはTLR8を発現し、炎症誘発性サイトカイン及び/またはケモカインを分泌する細胞において発現され、前記mRNAは、1つ以上の修飾されたヌクレオ塩基を含む、項目80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目82)
前記mRNAは、造血系の免疫細胞において豊富なマイクロRNAの少なくとも1つの第1のマイクロRNA結合部位を含み、少なくとも1つの第2のマイクロRNA結合部位は、内皮細胞において豊富なマイクロRNAのものである、項目81に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目83)
前記mRNAは、第1のマイクロRNA結合部位の複数のコピーと、第2のマイクロRNA結合部位の少なくとも1つのコピーとを含む、項目80〜82のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目84)
前記mRNAは、同じマイクロRNAの第1及び第2のマイクロRNA結合部位を含む、項目80〜83のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目85)
前記マイクロRNA結合部位は、前記同じマイクロRNAの3p及び5pアームのものである、項目84に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目86)
前記マイクロRNA結合部位は、miR−126、miR−142、miR−144、miR−146、miR−150、miR−155、miR−16、miR−21、miR−223、miR−24、miR−27、miR−26a、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるマイクロRNAに対するものである、項目80〜85のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目87)
前記マイクロRNA結合部位は、miR126−3p、miR−142−3p、miR−142−5p、miR−155、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるマイクロRNAに対するものである、項目86に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目88)
少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、miR−126結合部位である、項目80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目89)
少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、miR−142結合部位である、項目80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目90)
1つのマイクロRNA結合部位は、miR−126結合部位であり、第2のマイクロRNA結合部位は、miR−142−3p、miR−142−5p、miR−146−3p、miR−146−5p、miR−155、miR−16、miR−21、miR−223、miR−24及びmiR−27からなる群から選択されるマイクロRNAに対するものである、項目80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目91)
少なくとも1つのmiR−126−3p結合部位と、少なくとも1つのmiR−142−3p結合部位とを含む、項目80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目92)
少なくとも1つのmiR−142−3p結合部位と、少なくとも1つの142−5p結合部位とを含む、項目80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目93)
前記マイクロRNA結合部位は、前記mRNAの5’UTR、3’UTR、または5’UTR及び3’UTRの両方に位置する、項目80〜92のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目94)
前記マイクロRNA結合部位は、前記mRNAの3’UTRに位置する、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目95)
前記マイクロRNA結合部位は、前記mRNAの5’UTRに位置する、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目96)
前記マイクロRNA結合部位は、前記mRNAの5’UTR及び3’UTRの両方に位置する、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目97)
少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の停止コドンに直接隣接する3’UTRに位置する、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目98)
少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の停止コドンから70〜80塩基下流にある3’UTRに位置する、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目99)
少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の開始コドンの直前の5’UTRに位置する、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目100)
少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の開始コドンより15〜20ヌクレオチド前の5’UTRに位置する、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目101)
少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の開始コドンより70〜80ヌクレオチド前の5’UTRに位置する、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目102)
前記mRNAは、互いに直接隣接して位置付けられた、または5未満、5〜10、10〜15、もしくは15〜20ヌクレオチドのスペーサーを伴う、同じマイクロRNA結合部位の複数のコピーを含む、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目103)
前記mRNAは、前記3’UTRに位置する同じマイクロRNA結合部位の複数のコピーを含み、第1のマイクロRNA結合部位は、停止コドンに直接隣接して位置付けられ、第2及び第3のマイクロRNA結合部位は、前記第1のマイクロRNA結合部位の最も3’側の残基から30〜40塩基下流に位置付けられている、項目93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目104)
前記mRNAは、miR−142、miR−126、またはそれらの組み合わせから選択されるマイクロRNA結合部位を含む3’UTRを含む、項目1〜10及び29〜103のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目28及び80〜103に記載のポリヌクレオチド。
(項目105)
前記mRNAは、配列番号51〜75、81〜82、88、103、106〜113、118、及び161〜170、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される3’UTR配列と少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%、または100%同一である核酸配列を含む3’UTRを含む、項目1〜10及び29〜104のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目28及び80〜104に記載のポリヌクレオチド。
(項目106)
前記3’UTRは、配列番号51〜75、81〜82、88、103、106〜113、118、及び161〜170、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される核酸配列を含む、項目105に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目107)
前記mRNAは、5’UTRを含む、項目1〜10及び29〜106のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目28及び80〜106のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目108)
前記5’UTRは、配列番号33〜50、77、及び115〜117、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される5’UTR配列と少なくとも90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%、または100%同一である核酸配列を含む、項目107に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目109)
前記5’UTRが、配列番号33〜50、77、及び115〜117、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される配列を含む、項目108に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目110)
前記mRNAは、5’末端キャップをさらに含む、項目1〜10及び29〜109のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目28及び80〜109のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目111)
前記5’末端キャップは、Cap0、Cap1、ARCA、イノシン、N1−メチル−グアノシン、2’−フルオロ−グアノシン、7−デアザ−グアノシン、8−オキソ−グアノシン、2−アミノ−グアノシン、LNA−グアノシン、2−アジドグアノシン、Cap2、Cap4、5’メチルGキャップ、またはそれらの類似体を含む、項目110に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目112)
前記5’末端キャップは、Cap1を含む、項目111に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目113)
前記mRNAは、ポリA領域をさらに含む、項目1〜10及び29〜112のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目28及び80〜112のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目114)
前記ポリA領域は、少なくとも約10、少なくとも約20、少なくとも約30、少なくとも約40、少なくとも約50、少なくとも約60、少なくとも約70、少なくとも約80、または少なくとも約90ヌクレオチド長である、項目113に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目115)
前記ポリA領域は、約10〜約200、約20〜約180、約50〜約160、約70〜約140、または約80〜約120ヌクレオチド長を有する、項目114に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目116)
前記mRNAは、少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組み合わせを含む、項目1〜10及び29〜115のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目28及び80〜115のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目117)
前記少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基は、シュードウラシル(ψ)、N1−メチルシュードウラシル(m1ψ)、1−エチルシュードウラシル、2−チオウラシル(s2U)、4’−チオウラシル、5−メチルシトシン、5−メチルウラシル、5−メトキシウラシル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、項目116に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目118)
ウラシルまたはチミンの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が化学修飾されている、項目116または117に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目119)
グアニンの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が化学修飾されている、項目116〜118のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目120)
シトシンの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が化学修飾されている、項目116〜119のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目121)
アデニンの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が化学修飾されている、項目116〜120のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目122)
前記mRNAは、精製されている、項目1〜10及び29〜121のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目28及び80〜121のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
(項目123)
前記GLAポリペプチドは、GLA活性を有する野生型、バリアント、または変異体である、先行項目のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目124)
前記GLAポリペプチドは、配列番号1からなる野生型ポリペプチド配列を含む、項目123に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目125)
前記GLAポリペプチドは、GLA融合タンパク質である、先行項目のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目126)
前記GLA融合タンパク質は、異種タンパク質部分を含む、項目125に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目127)
mRNAを含むポリヌクレオチドであって、
(i)5’UTRと、
(ii)ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)であって、配列番号3〜27、79〜80、及び141〜159からなる群から選択される核酸配列を含む、ORFと、
(iii)miR−142、miR−126、またはそれらの組み合わせから選択されるマイクロRNA結合部位を含む3’UTRと、を含み、
前記mRNAは、少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基を含む、前記ポリヌクレオチド。
(項目128)
mRNAを含むポリヌクレオチドであって、
(i)5’−末端キャップと、
(ii)配列番号33〜50、77、及び115〜117、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される配列を含む5’UTRと、
(iii)ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)であって、配列番号3〜27、79〜80、及び141〜159からなる群から選択される配列を含む、ORFと、
(iv)配列番号51〜75、81〜82、88、103、106〜113、118、及び161〜170、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される核酸配列を含む3’UTRと、
(v)ポリA領域と、を含み、
前記mRNAは、シュードウラシル(ψ)、N1−メチルシュードウラシル(m1ψ)、1−エチルシュードウラシル、2−チオウラシル(s2U)、4’−チオウラシル、5−メチルシトシン、5−メチルウラシル、5−メトキシウラシル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基を含む、前記ポリヌクレオチド。
(項目129)
配列番号119〜120、122〜140、及び160からなる群から選択される核酸配列を含む、項目127または128に記載のポリヌクレオチド。
(項目130)
項目127〜129のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドと、送達剤とを含む、医薬組成物。
(項目131)
前記送達剤は、化合物1〜342もしくは化合物419〜428のうちのいずれか一方からなる群から選択される化合物、その塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせを含む脂質ナノ粒子である、項目130に記載の医薬組成物。
(項目132)
前記送達剤は、化合物18もしくは化合物236、化合物428、それらの塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせを含む脂質ナノ粒子である、項目130に記載の医薬組成物。
(項目133)
前記送達剤は、化合物18、DSPC、コレステロール、及び化合物428を約50:10:38.5:1.5のモル比で含む、項目130に記載の医薬組成物。
(項目134)
前記対象は、ファブリー病に対する治療または予防を必要とするヒト対象である、項目1〜10、29〜126、及び130〜133のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目135)
前記対象に投与されると、前記mRNAは、配列番号2の核酸配列を有する及び/またはネイキッドmRNAとして投与される対応するmRNAと比べて、
(i)より長い血漿中半減期、
(ii)前記ORFによってコードされるGLAポリペプチドの増加した発現、
(iii)より高い構造安定性、または
(iv)それらの任意の組み合わせ、
を有する、項目1〜10、29〜126、及び130〜134のいずれか1項に記載の医薬組成物。
(項目136)
1つの単回単位用量または複数の単回単位用量としての投与に好適である、先行項目のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目137)
前記対象においてファブリー病の1つ以上のバイオマーカーのレベルを低減するのに好適である、先行項目のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目138)
前記対象においてファブリー病の徴候または症状の発症を治療、予防または遅延させるのに使用するための、先行項目のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目139)
前記徴候または症状には、疼痛、胃腸障害、被角血管腫等の皮膚病変、腎機能障害、心筋症、卒中、またはそれらの組み合わせが含まれる、項目138に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
(項目140)
α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドの発現をその必要のあるヒト対象において行う方法であって、前記対象に、有効量の、項目1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを投与することを含み、前記医薬組成物またはポリヌクレオチドは、1つの単回用量としてまたは複数の単回単位用量として前記対象に投与するのに好適である、方法。
(項目141)
ファブリー病の徴候または症状の治療、予防、または、その発症の遅延をその必要のあるヒト対象において行う方法であって、前記対象に、有効量の、項目1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを投与することを含み、前記投与は、前記対象におけるファブリー病の前記徴候または症状のうちの1つ以上を、治療するか、予防するか、またはその発症を遅延させる、方法。
(項目142)
前記投与は、前記対象の血漿または組織中のGb3またはリゾ−Gb3の漸進的蓄積を減速する、停止する、または逆行させる、項目141に記載の方法。
(項目143)
ファブリー病の治療方法であって、ファブリー病を患うヒト対象に、項目1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドの単回静脈内用量を投与することを含む、前記方法。
(項目144)
ヒト対象におけるGb3血漿中レベル及び/またはリゾ−Gb3血漿中レベルの低減方法であって、前記対象に、有効量の、項目1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを投与することを含み、前記投与は、前記対象における前記Gb3血漿中レベルまたはリゾ−Gb3血漿中レベルを低減する、方法。
(項目145)
(i)前記Gb3血漿中レベルは、投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、治療前のGb3血漿中レベルと比較して少なくとも50%低減される、かつ/または
(ii)前記リゾ−Gb3血漿中レベルは、投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、治療前のリゾ−Gb3血漿中レベルと比較して少なくとも50%低減される、項目144に記載の方法。
(項目146)
前記Gb3血漿中レベルは、前記対象において10nmol/mL未満、9nmol/mL未満、8nmol/mL未満、7nmol/mL未満、6nmol/mL未満、5nmol/mL未満、4nmol/mL未満、3nmol/mL未満、または2nmol/mL未満に低減される、項目144に記載の方法。
(項目147)
ヒト対象におけるGb3組織中レベル及び/またはリゾ−Gb3組織中レベルの低減方法であって、前記対象に、有効量の、項目1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または項目11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを投与することを含み、前記投与は、前記対象における前記Gb3組織中レベル及び/またはリゾ−Gb3組織中レベルを低減する、前記方法。
(項目148)
前記組織は、心臓、腎臓、肝臓、または脾臓組織である、項目147に記載の方法。
(項目149)
(i)前記Gb3組織中レベルは、投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、その組織中の治療前のGb3レベルと比較して少なくとも50%低減される、かつ/または
(ii)前記リゾ−Gb3組織中レベルは、投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、その組織中の治療前のリゾ−Gb3血漿中レベルと比較して少なくとも50%低減される、項目145に記載の方法。
(項目150)
前記医薬組成物またはポリヌクレオチドが前記対象に投与された24時間後、前記対象におけるGLA活性は、参照個体におけるGLA活性の少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも150%、少なくとも200%、少なくとも300%、少なくとも400%、少なくとも500%、または少なくとも600%に増加している、項目140〜149のいずれか1項に記載の方法。
(項目151)
前記GLA活性は、前記対象の心臓、腎臓、肝臓、または脾臓において増加する、項目150に記載の方法。
(項目152)
前記増加したGLA活性は、24、36、48、60、72、96、120、144、または168時間を超えて持続する、項目150または151に記載の方法。
(項目153)
前記医薬組成物またはポリヌクレオチドが前記対象に投与された24時間後、前記対象におけるGb3のレベルは、前記対象のベースラインGb3レベルと比較して少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、または100%低減されている、項目140〜152のいずれか1項に記載の方法。
(項目154)
前記Gb3のレベルは、前記対象の血漿、心臓、腎臓、肝臓、及び/または脾臓のうちの1つ以上において低減される、項目153に記載の方法。
(項目155)
前記対象への投与後、前記対象における前記Gb3のレベルは、少なくとも1日間、少なくとも2日間、少なくとも3日間、少なくとも4日間、少なくとも5日間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、または少なくとも6週間前記対象における前記ベースラインレベルと比較して低減される、項目153または154に記載の方法。
(項目156)
前記医薬組成物またはポリヌクレオチドが前記対象に投与された24時間後、前記対象におけるリゾ−Gb3のレベルは、前記対象のベースラインリゾ−Gb3レベルと比較して少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、または100%低減されている、項目140〜155のいずれか1項に記載の方法。
(項目157)
前記リゾ−Gb3のレベルは、前記対象の血漿、心臓、腎臓、肝臓、及び/または脾臓のうちの1つ以上において低減される、項目156に記載の方法。
(項目158)
前記対象への投与後、前記対象における前記リゾ−Gb3のレベルは、少なくとも1日間、少なくとも2日間、少なくとも3日間、少なくとも4日間、少なくとも5日間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、または少なくとも6週間前記対象における前記ベースラインレベルと比較して低減される、項目156または157に記載の方法。
(項目159)
前記医薬組成物またはポリヌクレオチドは、1.5mg/kg未満、1.25mg/kg未満、1mg/kg未満、0.75mg/kg未満、または0.5mg/kg未満の単回用量として投与される、項目140〜158のいずれか1項に記載の方法。
(項目160)
前記対象への前記投与は、約週1回、約2週間に1回、または約1カ月に1回である、項目140〜159のいずれか1項に記載の方法。
(項目161)
前記医薬組成物またはポリヌクレオチドは、静脈内投与される、項目140〜160のいずれか1項に記載の方法。
Claims (161)
- 医薬組成物であって、
(a)(i)α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)であって、少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組み合わせを含む、ORF、及び(ii)マイクロRNA(miRNA)結合部位を含む非翻訳領域(UTR)を含む、mRNAと、
(b)送達剤と、を含み、
ファブリー病の治療を必要とするヒト対象への投与に好適である、前記医薬組成物。 - ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、必要のあるヒト対象に単回静脈内投与として投与されるとき、(i)投与後少なくとも24時間にわたって血漿中GLA活性レベルを参照の生理的レベル以上に増加させる、及び/または(ii)投与後少なくとも24時間にわたって血漿中GLA活性レベルを参照の血漿中GLA活性レベルの10%、20%、30%、40%、50%、もしくはそれよりも高く維持するのに十分である、前記医薬組成物。
- 前記組成物は、ファブリー病を患うヒト対象に単回静脈内投与として投与されるとき、投与後72時間、参照の血漿中GLA活性の少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%を維持するのに十分である、請求項2に記載の医薬組成物。
- ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含む、脂質ナノ粒子にカプセル封入されたmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、必要のあるヒト対象に単回静脈内投与として投与されるとき、(i)投与後少なくとも24時間にわたって肝臓、心臓及び/または腎臓GLA活性レベルを参照の生理的レベル以上に増加させる、及び/または(ii)投与後少なくとも24時間にわたって血漿中GLA活性レベルを参照の血漿中GLA活性レベルの10%、20%、30%、40%、50%、もしくはそれよりも高く維持するのに十分である、前記医薬組成物。
- 前記組成物は、それを必要とする前記ヒト対象に単回静脈内投与として投与されるとき、投与後72時間、参照の肝臓及び/または心臓GLA活性の少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%を維持するのに十分である、請求項4に記載の医薬組成物。
- 前記組成物は、それを必要とする前記ヒト対象に単回静脈内投与として投与されるとき、(i)投与後少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少なくとも5週間、もしくは少なくとも6週間にわたって、リゾ−Gb3血漿中レベルを少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%、及び/または(ii)投与後少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少なくとも5週間、もしくは少なくとも6週間にわたって、Gb3血漿中レベルを少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減するのに十分である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、必要のある対象に単回静脈内投与として投与されるとき、
(i)投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、Gb3の血漿中レベルを治療前のGb3血漿中レベルと比較して少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減する、及び/または
(ii)投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、リゾ−Gb3の血漿中レベルを治療前のリゾ−Gb3血漿中レベルと比較して少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減するのに十分である、前記医薬組成物。 - ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、必要のある対象に単回静脈内投与として投与されるとき、
(i)投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、心臓、腎臓、肝臓、または脾臓組織中のGb3の組織中レベルをその組織中の治療前のGb3レベルと比較して少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減する、及び/または
(ii)投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、心臓、腎臓、肝臓、または脾臓組織中のリゾ−Gb3の組織中レベルをその組織中の治療前のリゾ−Gb3レベルと比較して少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、もしくは少なくとも50%低減するのに十分である、前記医薬組成物。 - ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAを含む、医薬組成物であって、前記組成物は、必要のある対象に単回静脈内投与として投与されるとき、
(i)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、血漿中GLA活性レベルを増加させる、
(ii)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、心臓組織中GLA活性レベルを増加させる、
(iii)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、肝臓組織中GLA活性レベルを増加させる、
(iv)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、腎臓組織中GLA活性レベルを増加させる、及び/または
(v)投与後少なくとも24時間、少なくとも48時間、少なくとも72時間、少なくとも96時間、少なくとも120時間、少なくとも144時間、もしくは少なくとも168時間にわたって、脾臓組織中GLA活性レベルを増加させるのに十分である、及び/または
前記増加されたGLA活性レベルは、対応する参照のGLA活性レベルの少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、または100%超である、前記医薬組成物。 - 送達剤をさらに含む、請求項2〜9のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むポリヌクレオチドであって、前記GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論上最小ウラシルまたはチミン含量と比べた前記ORFのウラシルまたはチミン含量(%UTMまたは%TTM)が約100%〜約150%である、前記ポリヌクレオチド。
- 前記%UTMまたは%TTMは、約110%〜約150%、約115%〜約150%、約120%〜約150%、約110%〜約145%、約115%〜約145%、約120%〜約145%、約110%〜約140%、約115%〜約140%、または約120%〜約140%である、請求項11に記載のポリヌクレオチド。
- 前記対応する野生型ORFの前記ウラシルまたはチミン含量と比べた前記ORFの前記ウラシルまたはチミン含量(%UWTまたは%TWT)は、100%未満である、請求項11または12に記載のポリヌクレオチド。
- 前記%UWTまたは%TWTは、約95%未満、約90%未満、約85%未満、80%未満、75%未満、74%未満、73%未満、72%未満、71%未満、または70%未満である、請求項13に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ORF中の総ヌクレオチド含量と比べた前記ORF中の前記ウラシルまたはチミン含量(%UTLまたは%TTL)は、約50%未満、約40%未満、約30%未満、または約20%未満である、請求項11〜14のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記%UTLまたは%TTLは、約20%未満である、請求項15に記載のポリヌクレオチド。
- 前記GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論上最大グアニン含量に対する前記ORFの前記グアニン含量(%GTMX)は、少なくとも64%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、または約100%である、請求項11〜16のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記%GTMXは、約64%〜約85%、約65%〜約85%、または約65%〜約80%である、請求項17に記載のポリヌクレオチド。
- 前記GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論上最大シトシン含量と比べた前記ORFの前記シトシン含量(%CTMX)は、少なくとも54%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、または約100%である、請求項11〜18のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記%CTMXは、約60%〜約95%、約65%〜約95%、約70%〜約95%、または約75%〜約90%である、請求項19に記載のポリヌクレオチド。
- 前記GLAポリペプチドをコードするヌクレオチド配列における理論上最大グアニン及びシトシン(G/C)含量と比べた前記ORFの前記G/C含量(%G/CTMX)は、少なくとも約73%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、または約100%である、請求項11〜20のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記%G/CTMXは、約80%〜約100%、約85%〜約99%、約90%〜約99%、または約95%〜約99%である、請求項21に記載のポリヌクレオチド。
- 前記対応する野生型ORFにおける前記G/C含量と比べた前記ORFにおける前記G/C含量(%G/CWT)は、少なくとも102%、少なくとも103%、少なくとも104%、少なくとも105%、少なくとも106%、少なくとも107%、少なくとも110%、少なくとも115%、少なくとも120%、または少なくとも約125%である、請求項11〜22のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ORFは、配列番号3〜27、79、80、及び141〜159からなる群から選択される核酸配列との少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%の配列同一性を有する、請求項11〜23のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ORFは、配列番号79または80の前記核酸配列との少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%の配列同一性を有する、請求項11〜24のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ORFは、配列番号79または80の前記核酸配列との少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%の配列同一性を有する、請求項11〜25のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ORFは、配列番号79または80の前記核酸配列を含む、請求項11〜26のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- mRNAである、請求項11〜27のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項28に記載のmRNAと送達剤とを含む、医薬組成物。
- 前記送達剤は、脂質様物質、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、またはコンジュゲートを含む、請求項1、6、10、及び29のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、3−(ジドデシルアミノ)−N1,N1,4−トリドデシル−1−ピペラジンエタンアミン(KL10)、N1−[2−(ジドデシルアミノ)エチル]−N1,N4,N4−トリドデシル−1,4−ピペラジンジエタンアミン(KL22)、14,25−ジトリデシル−15,18,21,24−テトラアザ−オクタトリアコンタン(KL25)、1,2−ジリノレイルオキシ−N,N−ジメチルアミノプロパン(DLin−DMA)、2,2−ジリノレイル−4−ジメチルアミノメチル−[1,3]−ジオキソラン(DLin−K−DMA)、ヘプタトリアコンタ−6,9,28,31−テトラエン−19−イル4−(ジメチルアミノ)ブタノアート(DLin−MC3−DMA)、2,2−ジリノレイル−4−(2−ジメチルアミノエチル)−[1,3]−ジオキソラン(DLin−KC2−DMA)、1,2−ジオレイルオキシ−N,N−ジメチルアミノプロパン(DODMA)、(13Z,165Z)−N,N−ジメチル−3−ノニドコサ−13−16−ジエン−1−アミン(L608)、2−({8−[(3β)−コレスト−5−エン−3−イルオキシ]オクチル}オキシ)−N,N−ジメチル−3−[(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエン−1−イルオキシ]プロパン−1−アミン(オクチル−CLinDMA)、(2R)−2−({8−[(3β)−コレスト−5−エン−3−イルオキシ]オクチル}オキシ)−N,N−ジメチル−3−[(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエン−1−イルオキシ]プロパン−1−アミン(オクチル−CLinDMA(2R)、(2S)−2−({8−[(3β)−コレスト−5−エン−3−イルオキシ]オクチル}オキシ)−N,N−ジメチル−3−[(9Z,12Z)−オクタデカ−9,12−ジエン−1−イルオキシ]プロパン−1−アミン(オクチル−CLinDMA(2S)、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される脂質を含む、請求項1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ナノ粒子は、DLin−MC3−DMAを含む、請求項31に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(I)を有する化合物
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、あるいはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−N(R)R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1−6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2−6アルケニル、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、
但し、R4が−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、または−CQ(R)2であるとき、(i)Qは、nが1、2、3、4もしくは5である場合の−N(R)2ではないか、あるいは(ii)Qは、nが1または2である場合の5、6、または7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする、請求項1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、前記化合物が式(IA)、
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
mは、5、6、7、8、及び9から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、−NHC(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)R8、−NHC(=NR9)N(R)2、−NHC(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される、請求項33に記載の医薬組成物。 - mは、5、7、または9である、請求項33〜34のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、式(II)
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、2、3、または4であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、−NHC(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)R8、−NHC(=NR9)N(R)2、−NHC(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される、請求項33〜35のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - M1は、M’である、請求項34〜36のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- M及びM’は独立して、−C(O)O−または−OC(O)−である、請求項37に記載の医薬組成物。
- lは、1、3、または5である、請求項34〜38のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、化合物1〜化合物232、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項33に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、化合物1〜化合物147、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項40に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、化合物18、それらの塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項41に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(III)を有する化合物
環Aは、
tは、1または2であり、
A1及びA2は各々独立して、CHまたはNから選択され、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S− −SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
X1、X2、及びX3は独立して、結合、−CH2−、−CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択され、
Aが
i)X1、X2、及びX3のうちの少なくとも1つは、−CH2−ではないか、及び/または
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、−R”MR’である、請求項1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - 前記化合物は、下記式を有する、請求項43に記載の医薬組成物
- 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(IV)を有する化合物
A1及びA2は各々独立して、CHまたはNから選択され、A1及びA2のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立して、C6−20アルキル及びC6−20アルケニルからなる群から選択され、
Aが
i)R1、R2、R3、R4、及びR5は同じであり、ここでR1は、C12アルキル、C18アルキル、またはC18アルケニルではない、
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの1つのみが、C6−20アルケニルから選択される、
iii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも別の1つとは異なる数の炭素原子を有する、
iv)R1、R2、及びR3は、C6−20アルケニルから選択され、R4及びR5は、C6−20アルキルから選択される、あるいは
v)R1、R2、及びR3は、C6−20アルキルから選択され、R4及びR5は、C6−20アルケニルから選択される、請求項1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - 前記化合物は、式(IVa)のものである、請求項45に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(V)を有する化合物
A3は、CHまたはNであり、
A4は、CH2またはNHであり、A3及びA4のうちの少なくとも1つは、NまたはNHであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、及びR3は独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
X1及びX2は独立して、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択される、請求項1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - 前記化合物は、式(Va)のものである、請求項47に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、式(VI)を有する化合物、
A6及びA7は各々独立して、CHまたはNから選択され、A6及びA7のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
X4及びX5は独立して、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
R1、R2,R3、R4、及びR5は各々、独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択される、請求項1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、化合物233〜化合物342、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される化合物を含む、請求項1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、化合物236、それらの塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項50に記載の医薬組成物。
- α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、式(I)を有する化合物
R1は、C5−30アルキル、C5−20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、C2−14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、あるいはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成し、
R4は、C3−6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1−6アルキルからなる群から選択され、式中、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−N(R)R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、各nは独立して、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R7は、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1−6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2−6アルケニル、C3−6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル、C2−3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−18アルキル、C2−18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−14アルキル及びC3−14アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各Xは独立して、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、mは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択されるが、
但し、R4が−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、または−CQ(R)2であるとき、(i)Qは、nが1、2、3、4もしくは5である場合の−N(R)2ではないか、あるいは(ii)Qは、nが1または2である場合の5、6、または7員ヘテロシクロアルキルではないことを条件とする、前記医薬組成物。 - 前記送達剤は、前記化合物は、式(IA)のもの、
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
mは、5、6、7、8、及び9から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、−NHC(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)R8、−NHC(=NR9)N(R)2、−NHC(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される、請求項52に記載の医薬組成物。 - mは、5、7、または9である、請求項52〜53のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、式(II)
lは、1、2、3、4、及び5から選択され、
M1は、結合またはM’であり、
R4は、非置換C1−3アルキル、または−(CH2)nQであり、式中、nは、2、3、または4であり、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、または−NHC(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)R8、−NHC(=NR9)N(R)2、−NHC(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、
M及びM’は独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
R2及びR3は独立して、H、C1−14アルキル、及びC2−14アルケニルからなる群から選択される、請求項52〜54のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - M1は、M’である、請求項53〜55のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- M及びM’は独立して、−C(O)O−または−OC(O)−である、請求項56に記載の医薬組成物。
- lは、1、3、または5である、請求項53〜57のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、化合物1〜化合物232、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項52に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、化合物1〜化合物147、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項59に記載の医薬組成物。
- 前記化合物は、化合物18、それらの塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項60に記載の医薬組成物。
- α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、式(III)を有する化合物
環Aは、
tは、1または2であり、
A1及びA2は各々独立して、CHまたはNから選択され、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
X1、X2、及びX3は独立して、結合、−CH2−、−CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択され、
Aが
i)X1、X2、及びX3のうちの少なくとも1つは、−CH2−ではないか、及び/または
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、−R”MR’である、前記医薬組成物。 - 前記化合物は、下記式を有する、請求項62に記載の医薬組成物。
- α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、式(IV)を有する化合物
A1及びA2は各々独立して、CHまたはNから選択され、A1及びA2のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立して、C6−20アルキル及びC6−20アルケニルからなる群から選択され、
環Aが
i)R1、R2、R3、R4、及びR5は同じであり、ここでR1は、C12アルキル、C18アルキル、またはC18アルケニルではない、
ii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの1つのみが、C6−20アルケニルから選択される、
iii)R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも別の1つとは異なる数の炭素原子を有する、
iv)R1、R2、及びR3は、C6−20アルケニルから選択され、R4及びR5は、C6−20アルキルから選択される、あるいは
v)R1、R2、及びR3は、C6−20アルキルから選択され、R4及びR5は、C6−20アルケニルから選択される、前記医薬組成物。 - 前記化合物は、式(IVa)のものである、請求項64に記載の医薬組成物。
- α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、式(V)を有する化合物
A3は、CHまたはNであり、
A4は、CH2またはNHであり、A3及びA4のうちの少なくとも1つは、NまたはNHであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
R1、R2、及びR3は独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、
X1及びX2は独立して、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択される、前記医薬組成物。 - 前記化合物は、式(Va)のものである、請求項66に記載の医薬組成物。
- α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、式(VI)を有する化合物
A6及びA7は各々独立して、CHまたはNから選択され、A6及びA7のうちの少なくとも1つは、Nであり、
Zは、CH2または不在であり、ZがCH2であるとき、破線(1)及び(2)は各々単結合を表し、Zが不在であるとき、破線(1)及び(2)は両方とも不在であり、
X4及びX5は独立して、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)−CH2−、−CH2−C(O)−、−C(O)O−CH2−、−OC(O)−CH2−、−CH2−C(O)O−、−CH2−OC(O)−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
R1、R2,R3、R4、及びR5は各々、独立して、C5−20アルキル、C5−20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
各Mは独立して、−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
各Yは独立して、C3−6炭素環であり、
各R*は独立して、C1−12アルキル及びC2−12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立して、C1−3アルキル及びC3−6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立して、C1−12アルキル、C2−12アルケニル、及びHからなる群から選択され、各R”は独立して、C3−12アルキル及びC3−12アルケニルからなる群から選択される、前記医薬組成物。 - α−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含むmRNAと、送達剤とを含む、医薬組成物であって、前記送達剤は、化合物233〜化合物342、それらの塩及び立体異性体、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される化合物を含む、前記医薬組成物。
- 前記化合物は、化合物236、それらの塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項69に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、PEG脂質をさらに含む、請求項29〜70のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記PEG脂質は、式(VII)、
R3は、−OROであり、
ROは、水素、任意選択で置換されるアルキル、または酸素保護基であり、
rは、1〜100(端点を含む)の整数であり、
L1は、任意選択で置換されるC1−10アルキレンであり、前記任意選択で置換されるC1−10アルキレンの少なくとも1つのメチレンは独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−O−、−N(RN)−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、または−NRNC(O)N(RN)−で置き換えられ、
Dは、クリックケミストリーによって得られた部分または生理的条件下で切断可能な部分であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、
L2の各出現例は独立して、結合または任意選択で置換されるC1−6アルキレンであり、前記任意選択で置換されるC1−6アルキレンの1つのメチレン単位は任意選択で、−O−、−N(RN)−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、または−NRNC(O)N(RN)−で置き換えられ、
R2の各出現例は独立して、任意選択で置換されるC1−30アルキル、任意選択で置換されるC1−30アルケニル、または任意選択で置換されるC1−30アルキニルであり、任意選択で、R2の1つ以上のメチレン単位は独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(RN)−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−NRNC(O)N(RN)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NRN)−、−C(=NRN)N(RN)−、−NRNC(=NRN)−、−NRNC(=NRN)N(RN)−、−C(S)−、−C(S)N(RN)−、−NRNC(S)−、−NRNC(S)N(RN)−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O)2−、−S(O)2O−、−OS(O)2O−、−N(RN)S(O)−、−S(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)N(RN)−、−OS(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)O−、−S(O)2−、−N(RN)S(O)2−、−S(O)2N(RN)−、−N(RN)S(O)2N(RN)−、−OS(O)2N(RN)−、または−N(RN)S(O)2O−で置き換えられ、
RNの各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意選択で置換されるカルボシクリル、任意選択で置換されるヘテロシクリル、任意選択で置換されるアリール、または任意選択で置換されるヘテロアリールであり、
pは、1または2である、請求項71に記載の医薬組成物。 - 前記PEG脂質は、式(VIII)、
R3は、−OROであり、
ROは、水素、任意選択で置換されるアルキルまたは酸素保護基であり、
rは、1〜100(端点を含む)の整数であり、
R5は、任意選択で置換されるC10−40アルキル、任意選択で置換されるC10−40アルケニル、または任意選択で置換されるC10−40アルキニルであり、任意選択で、R51つ以上のメチレン基は、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(RN)−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−NRNC(O)N(RN)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NRN)−、−C(=NRN)N(RN)−、−NRNC(=NRN)−、−NRNC(=NRN)N(RN)−、−C(S)−、−C(S)N(RN)−、−NRNC(S)−、−NRNC(S)N(RN)−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O)2−、−S(O)2O−、−OS(O)2O−、−N(RN)S(O)−、−S(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)N(RN)−、−OS(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)O−、−S(O)2−、−N(RN)S(O)2−、−S(O)2N(RN)−、−N(RN)S(O)2N(RN)−、−OS(O)2N(RN)−、または−N(RN)S(O)2O−で置き換えられ、
RNの各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基である、請求項71に記載の医薬組成物。 - 前記PEG脂質は、下記式、
- 前記PEG脂質は、化合物428である、請求項74に記載の医薬組成物。
- 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、リン脂質をさらに含む、請求項29〜75のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記リン脂質は、式(IX)、
各R1は独立して、任意選択で置換されるアルキルであるか、あるいは任意選択で、2つのR1が、介在する原子と一緒に連結して、任意選択で置換される単環式カルボシクリルまたは任意選択で置換される単環式ヘテロシクリルを形成するか、あるいは任意選択で、3つのR1 が、介在する原子と一緒に連結して、任意選択で置換される二環式カルボシクリルまたは任意選択で置換二環式ヘテロシクリルを形成し、
nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、
L2の各出現例は独立して、結合または任意選択で置換されるC1−6アルキレンであり、前記任意選択で置換されるC1−6アルキレンの1つのメチレン単位は任意選択で、−O−、−N(RN)−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、または−NRNC(O)N(RN)−で置き換えられ、
R2の各出現例は独立して、任意選択で置換されるC1−30アルキル、任意選択で置換されるC1−30アルケニル、または任意選択で置換されるC1−30アルキニルであり、任意選択で、R2の1つ以上のメチレン単位は独立して、任意選択で置換されるカルボシクリレン、任意選択で置換されるヘテロシクリレン、任意選択で置換されるアリーレン、任意選択で置換されるヘテロアリーレン、−N(RN)−、−O−、−S−、−C(O)−、−C(O)N(RN)−、−NRNC(O)−、−NRNC(O)N(RN)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(RN)−、−NRNC(O)O−、−C(O)S−、−SC(O)−、−C(=NRN)−、−C(=NRN)N(RN)−、−NRNC(=NRN)−、−NRNC(=NRN)N(RN)−、−C(S)−、−C(S)N(RN)−、−NRNC(S)−、−NRNC(S)N(RN)−、−S(O)−、−OS(O)−、−S(O)O−、−OS(O)O−、−OS(O)2−、−S(O)2O−、−OS(O)2O−、−N(RN)S(O)−、−S(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)N(RN)−、−OS(O)N(RN)−、−N(RN)S(O)O−、−S(O)2−、−N(RN)S(O)2−、−S(O)2N(RN)−、−N(RN)S(O)2N(RN)−、−OS(O)2N(RN)−、または−N(RN)S(O)2O−で置き換えられ、
RNの各出現例は独立して、水素、任意選択で置換されるアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意選択で置換されるカルボシクリル、任意選択で置換されるヘテロシクリル、任意選択で置換されるアリール、または任意選択で置換されるヘテロアリールであり、
pは、1または2であるが、
但し、前記化合物は、下記式、
- 前記リン脂質は、下記式、
各tは独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各uは独立して、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各vは独立して、1、2、または3である、請求項77に記載の医薬組成物。 - 前記脂質ナノ粒子または前記送達剤は、化合物18、DSPC、コレステロール、及び化合物428を約50:10:38.5:1.5のモル比で含む、請求項1、6、10、29、及び30のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記mRNAは、マイクロRNA(miR)結合部位を含む、請求項1〜10及び29〜79のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項28に記載のポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、少なくとも2つの異なるマイクロRNA(miR)結合部位を含み、前記マイクロRNAは、造血系の免疫細胞、またはTLR7及び/またはTLR8を発現し、炎症誘発性サイトカイン及び/またはケモカインを分泌する細胞において発現され、前記mRNAは、1つ以上の修飾されたヌクレオ塩基を含む、請求項80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、造血系の免疫細胞において豊富なマイクロRNAの少なくとも1つの第1のマイクロRNA結合部位を含み、少なくとも1つの第2のマイクロRNA結合部位は、内皮細胞において豊富なマイクロRNAのものである、請求項81に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、第1のマイクロRNA結合部位の複数のコピーと、第2のマイクロRNA結合部位の少なくとも1つのコピーとを含む、請求項80〜82のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、同じマイクロRNAの第1及び第2のマイクロRNA結合部位を含む、請求項80〜83のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記マイクロRNA結合部位は、前記同じマイクロRNAの3p及び5pアームのものである、請求項84に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記マイクロRNA結合部位は、miR−126、miR−142、miR−144、miR−146、miR−150、miR−155、miR−16、miR−21、miR−223、miR−24、miR−27、miR−26a、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるマイクロRNAに対するものである、請求項80〜85のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記マイクロRNA結合部位は、miR126−3p、miR−142−3p、miR−142−5p、miR−155、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるマイクロRNAに対するものである、請求項86に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、miR−126結合部位である、請求項80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、miR−142結合部位である、請求項80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 1つのマイクロRNA結合部位は、miR−126結合部位であり、第2のマイクロRNA結合部位は、miR−142−3p、miR−142−5p、miR−146−3p、miR−146−5p、miR−155、miR−16、miR−21、miR−223、miR−24及びmiR−27からなる群から選択されるマイクロRNAに対するものである、請求項80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのmiR−126−3p結合部位と、少なくとも1つのmiR−142−3p結合部位とを含む、請求項80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのmiR−142−3p結合部位と、少なくとも1つの142−5p結合部位とを含む、請求項80に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記マイクロRNA結合部位は、前記mRNAの5’UTR、3’UTR、または5’UTR及び3’UTRの両方に位置する、請求項80〜92のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記マイクロRNA結合部位は、前記mRNAの3’UTRに位置する、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記マイクロRNA結合部位は、前記mRNAの5’UTRに位置する、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記マイクロRNA結合部位は、前記mRNAの5’UTR及び3’UTRの両方に位置する、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の停止コドンに直接隣接する3’UTRに位置する、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の停止コドンから70〜80塩基下流にある3’UTRに位置する、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の開始コドンの直前の5’UTRに位置する、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の開始コドンより15〜20ヌクレオチド前の5’UTRに位置する、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 少なくとも1つのマイクロRNA結合部位は、前記mRNAのコード領域の開始コドンより70〜80ヌクレオチド前の5’UTRに位置する、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、互いに直接隣接して、または5、5〜10、10〜15、もしくは15〜20ヌクレオチド未満のスペーサーを置いて位置付けられた、同じマイクロRNA結合部位の複数のコピーを含む、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、前記3’UTRに位置する同じマイクロRNA結合部位の複数のコピーを含み、前記第1のマイクロRNA結合部位は、停止コドンに直接隣接して位置付けられ、前記第2及び第3のマイクロRNA結合部位は、前記第1のマイクロRNA結合部位の最も3’側の残基から30〜40塩基下流に位置付けられている、請求項93に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、miR−142、miR−126、またはそれらの組み合わせから選択されるマイクロRNA結合部位を含む3’UTRを含む、請求項1〜10及び29〜103のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項28及び80〜103に記載のポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、配列番号51〜75、81〜82、88、103、106〜113、118、及び161〜170、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される3’UTR配列と少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%、または100%同一である核酸配列を含む3’UTRを含む、請求項1〜10及び29〜104のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項28及び80〜104に記載のポリヌクレオチド。
- 前記3’UTRは、配列番号51〜75、81〜82、88、103、106〜113、118、及び161〜170、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される核酸配列を含む、請求項105に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、5’UTRを含む、請求項1〜10及び29〜106のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項28及び80〜106のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記5’UTRは、配列番号33〜50、77、及び115〜117、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される5’UTR配列と少なくとも90%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%、または100%同一である核酸配列を含む、請求項107に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記5’UTRが、配列番号33〜50、77、及び115〜117、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される配列を含む、請求項108に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、5’末端キャップをさらに含む、請求項1〜10及び29〜109のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項28及び80〜109のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記5’末端キャップは、Cap0、Cap1、ARCA、イノシン、N1−メチル−グアノシン、2’−フルオロ−グアノシン、7−デアザ−グアノシン、8−オキソ−グアノシン、2−アミノ−グアノシン、LNA−グアノシン、2−アジドグアノシン、Cap2、Cap4、5’メチルGキャップ、またはそれらの類似体を含む、請求項110に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記5’末端キャップは、Cap1を含む、請求項111に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、ポリA領域をさらに含む、請求項1〜10及び29〜112のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項28及び80〜112のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ポリA領域は、少なくとも約10、少なくとも約20、少なくとも約30、少なくとも約40、少なくとも約50、少なくとも約60、少なくとも約70、少なくとも約80、または少なくとも約90ヌクレオチド長である、請求項113に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記ポリA領域は、約10〜約200、約20〜約180、約50〜約160、約70〜約140、または約80〜約120ヌクレオチド長を有する、請求項114に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項1〜10及び29〜115のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項28及び80〜115のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基は、シュードウラシル(ψ)、N1−メチルシュードウラシル(m1ψ)、1−エチルシュードウラシル、2−チオウラシル(s2U)、4’−チオウラシル、5−メチルシトシン、5−メチルウラシル、5−メトキシウラシル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項116に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記ウラシルまたはチミンの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が化学修飾されている、請求項116または117に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記グアニンの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が化学修飾されている、請求項116〜118のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記シトシンの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が化学修飾されている、請求項116〜119のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記アデニンの少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、少なくとも約95%、少なくとも約99%、または100%が化学修飾されている、請求項116〜120のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記mRNAは、精製されている、請求項1〜10及び29〜121のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項28及び80〜121のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記GLAポリペプチドは、GLA活性を有する野生型、バリアント、または変異体である、先行請求項のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記GLAポリペプチドは、配列番号1からなる野生型ポリペプチド配列を含む、請求項123に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記GLAポリペプチドは、GLA融合タンパク質である、先行請求項のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記GLA融合タンパク質は、異種タンパク質部分を含む、請求項125に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- mRNAを含むポリヌクレオチドであって、
(i)5’UTRと、
(ii)ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)であって、配列番号3〜27、79〜80、及び141〜159からなる群から選択される核酸配列を含む、ORFと、
(iii)miR−142、miR−126、またはそれらの組み合わせから選択されるマイクロRNA結合部位を含む3’UTRと、を含み、
前記mRNAは、少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基を含む、前記ポリヌクレオチド。 - mRNAを含むポリヌクレオチドであって、
(i)5’−末端キャップと、
(ii)配列番号33〜50、77、及び115〜117、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される配列を含む5’UTRと、
(iii)ヒトα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)であって、配列番号3〜27、79〜80、及び141〜159からなる群から選択される配列を含む、ORFと、
(iv)配列番号51〜75、81〜82、88、103、106〜113、118、及び161〜170、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される核酸配列を含む3’UTRと、
(v)ポリA領域と、を含み、
前記mRNAは、シュードウラシル(ψ)、N1−メチルシュードウラシル(m1ψ)、1−エチルシュードウラシル、2−チオウラシル(s2U)、4’−チオウラシル、5−メチルシトシン、5−メチルウラシル、5−メトキシウラシル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも1つの化学修飾されたヌクレオ塩基を含む、前記ポリヌクレオチド。 - 配列番号119〜120、122〜140、及び160からなる群から選択される核酸配列を含む、請求項127または128に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項127〜129のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドと、送達剤とを含む、医薬組成物。
- 前記送達剤は、化合物1〜342もしくは化合物419〜428のうちのいずれか一方からなる群から選択される化合物、その塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせを含む脂質ナノ粒子である、請求項130に記載の医薬組成物。
- 前記送達剤は、化合物18もしくは化合物236、化合物428、それらの塩もしくは立体異性体、またはそれらの任意の組み合わせを含む脂質ナノ粒子である、請求項130に記載の医薬組成物。
- 前記送達剤は、化合物18、DSPC、コレステロール、及び化合物428を約50:10:38.5:1.5のモル比で含む、請求項130に記載の医薬組成物。
- 前記対象は、ファブリー病に対する治療または予防を必要とするヒト対象である、請求項1〜10、29〜126、及び130〜133のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記対象に投与されると、前記mRNAは、配列番号2の前記核酸配列を有する及び/またはネイキッドmRNAとして投与される対応するmRNAと比べて、
(i)より長い血漿中半減期、
(ii)前記ORFによってコードされるGLAポリペプチドの増加した発現、
(iii)より高い構造安定性、または
(iv)それらの任意の組み合わせ、
を有する、請求項1〜10、29〜126、及び130〜134のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - 1つの単回単位用量または複数の単回単位用量としての投与に好適である、先行請求項のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記対象においてファブリー病の1つ以上のバイオマーカーのレベルを低減するのに好適である、先行請求項のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記対象においてファブリー病の徴候または症状の発症を治療、予防または遅延させるのに使用するための、先行請求項のいずれか1項に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 前記徴候または症状には、疼痛、胃腸障害、被角血管腫等の皮膚病変、腎機能障害、心筋症、卒中、またはそれらの組み合わせが含まれる、請求項138に記載の医薬組成物またはポリヌクレオチド。
- 必要のあるヒト対象におけるα−ガラクトシダーゼA(GLA)ポリペプチドの発現方法であって、前記対象に、有効量の、請求項1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを投与することを含み、前記医薬組成物またはポリヌクレオチドは、1つの単回用量としてまたは複数の単回単位用量として前記対象に投与するのに好適である、前記方法。
- 必要のあるヒト対象におけるファブリー病の徴候または症状の治療、予防、または、その発症の遅延方法であって、前記対象に、有効量の、請求項1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを投与することを含み、前記投与は、前記対象におけるファブリー病の前記徴候または症状のうちの1つ以上を、治療するか、予防するか、その前記発症を遅延させる、前記方法。
- 前記投与は、前記対象の血漿または組織中のGb3またはリゾ−Gb3の進行的蓄積を減速する、停止する、または逆行させる、請求項141に記載の方法。
- ファブリー病の治療方法であって、ファブリー病を患うヒト対象に、請求項1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドの単回静脈内投与を投与することを含む、前記方法。
- ヒト対象におけるGb3血漿中レベル及び/またはリゾ−Gb3血漿中レベルの低減方法であって、前記対象に、有効量の、請求項1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを投与することを含み、前記投与は、前記対象における前記Gb3血漿中レベルまたはリゾ−Gb3血漿中レベルを低減する、前記方法。
- (i)前記Gb3血漿中レベルは、投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、治療前のGb3血漿中レベルと比較して少なくとも50%低減される、及び/または
(ii)前記リゾ−Gb3血漿中レベルは、投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、治療前のリゾ−Gb3血漿中レベルと比較して少なくとも50%低減される、請求項144に記載の方法。 - 前記Gb3血漿中レベルは、前記対象において10nmol/mL未満、9nmol/mL未満、8nmol/mL未満、7nmol/mL未満、6nmol/mL未満、5nmol/mL未満、4nmol/mL未満、3nmol/mL未満、または2nmol/mL未満に低減される、請求項144に記載の方法。
- ヒト対象におけるGb3組織中レベル及び/またはリゾ−Gb3組織中レベルの低減方法であって、前記対象に、有効量の、請求項1〜10、29〜126、及び130〜139のいずれか1項に記載の医薬組成物、または請求項11〜28、80〜130、及び136〜139のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを投与することを含み、前記投与は、前記対象における前記Gb3組織中レベル及び/またはリゾ−Gb3組織中レベルを低減する、前記方法。
- 前記組織は、心臓、腎臓、肝臓、または脾臓組織である、請求項147に記載の方法。
- (i)前記Gb3組織中レベルは、投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、その組織中の治療前のGb3レベルと比較して少なくとも50%低減される、及び/または
(ii)前記リゾ−Gb3組織中レベルは、投与後少なくとも7日間、少なくとも14日間、少なくとも21日間、少なくとも28日間、少なくとも35日間、もしくは少なくとも42日間にわたって、その組織中の治療前のリゾ−Gb3血漿中レベルと比較して少なくとも50%低減される、請求項145に記載の方法。 - 前記医薬組成物またはポリヌクレオチドが前記対象に投与されてから24時間、前記対象における前記GLA活性は、参照個体における前記GLA活性の少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも150%、少なくとも200%、少なくとも300%、少なくとも400%、少なくとも500%、または少なくとも600%に増加する、請求項140〜149のいずれか1項に記載の方法。
- 前記GLA活性は、前記対象の前記心臓、腎臓、肝臓、または脾臓において増加する、請求項150に記載の方法。
- 前記増加したGLA活性は、24、36、48、60、72、96、120、144、または168時間を超えて持続する、請求項150または151に記載の方法。
- 前記医薬組成物またはポリヌクレオチドが前記対象に投与されてから24時間、前記対象における前記Gb3のレベルは、前記対象のベースラインGb3レベルと比較して少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、または100%低減される、請求項140〜152のいずれか1項に記載の方法。
- 前記Gb3のレベルは、前記対象の前記血漿、心臓、腎臓、肝臓、及び/または脾臓のうちの1つ以上において低減される、請求項153に記載の方法。
- 前記対象への投与後、前記対象における前記Gb3のレベルは、前記対象における前記ベースラインレベルと比較して少なくとも1日間、少なくとも2日間、少なくとも3日間、少なくとも4日間、少なくとも5日間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、または少なくとも6週間低減される、請求項153または154に記載の方法。
- 前記医薬組成物またはポリヌクレオチドが前記対象に投与されてから24時間、前記対象における前記リゾ−Gb3のレベルは、前記対象のベースラインリゾ−Gb3レベルと比較して少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%、少なくとも約90%、または100%低減される請求項140〜155のいずれか1項に記載の方法。
- 前記リゾ−Gb3のレベルは、前記対象の前記血漿、心臓、腎臓、肝臓、及び/または脾臓のうちの1つ以上において低減される、請求項156に記載の方法。
- 前記対象への投与後、前記対象における前記リゾ−Gb3のレベルは、前記対象における前記ベースラインレベルと比較して少なくとも1日間、少なくとも2日間、少なくとも3日間、少なくとも4日間、少なくとも5日間、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、または少なくとも6週間低減される、請求項156または157に記載の方法。
- 前記医薬組成物またはポリヌクレオチドは、1.5mg/kg未満、1.25mg/kg未満、1mg/kg未満、0.75mg/kg未満、または0.5mg/kg未満の単回用量として投与される、請求項140〜158のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象への前記投与は、約週1回、約2週間に1回、または約1カ月に1回である、請求項140〜159のいずれか1項に記載の方法。
- 前記医薬組成物またはポリヌクレオチドは、静脈内投与される、請求項140〜160のいずれか1項に記載の方法。
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