JP2019514949A

JP2019514949A - 制御された持続放出用のｅｌｐ融合タンパク質

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Publication number: JP2019514949A
Application number: JP2018557415A
Authority: JP
Inventors: ジョウェット，ジェイムズ; バランス，デイヴィッド・ジェイムズ
Original assignee: フェーズバイオファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド
Priority date: 2016-05-06
Filing date: 2017-05-01
Publication date: 2019-06-06
Anticipated expiration: 2037-05-01
Also published as: KR20220136469A; AU2017261216A1; WO2017192449A1; BR112018072783A2; KR102646323B1; AU2023254863A1; KR102449167B1; EP3452021B1; CA3021644A1; CN109310641A; EP4043010A1; KR20190005171A; EP3452021A1; JP7050003B2; AU2017261216B2; ES2909074T3; EP3452021A4; MX2018013546A; US20190218274A1

Abstract

本開示は、持続放出用の医薬製剤、及び持続放出型の製剤と長期半減期製剤を組み合わせた治療計画を送達する方法を提供する。本開示は、ペプチド及び小分子薬物について改善した薬物動態を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１月４日出願の米国仮特許出願第６２／４４２，０５７号及び２０１６年５月６日出願の米国仮特許出願第６２／３３２，８０３号の利益を主張し、各号の内容は、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

本開示は、持続放出用の医薬製剤、及び持続放出型の製剤を用いた治療計画を送達する方法に関する。

電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、引用することにより本明細書の一部をなすものとする：配列表のコンピューター読み取り可能フォーマットのコピー（ファイルネーム：ＰＨＡＳ＿０３３＿０２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日：２０１７年５月１日、ファイルサイズ２８７キロバイト）。

ペプチド及び小分子薬物の有効性は、多くの場合、循環中でのそのような薬物の半減期、並びに実質的に一定の血漿レベルを得る難しさにより制約を受ける。例えば、インクレチン（ＧＬＰ−１）は、その循環中での短い半減期を埋め合わせるために、比較的高用量で投与されなければならず、またこのような高用量は、とりわけ悪心と関連する（ＭｕｒｐｈｙａｎｄＢｌｏｏｍ，Ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｉｃｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ１ｒｅｃｅｐｔｏｒａｇｏｎｉｓｔｓ：Ａｍａｇｉｃｂｕｌｌｅｔｆｏｒｄｉａｂｅｔｅｓ？ＰＮＡＳ１０４（３）：６８９−６９０（２００７））。更に、ペプチド薬剤（ｐｅｐｔｉｄｅａｇｅｎｔ）の血管活性腸管ペプチド（ＶＩＰ）は、いくつかの見積りでは１分未満の半減期を示し、医薬品としてこの薬剤を使用することを非実用的にしている（Ｄｏｍｓｃｈｋｅｅｔａｌ．，Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｉｎｍａｎ：ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ｍｅｔａｂｏｌｉｃａｎｄｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓ，Ｇｕｔ１９：１０４９−１０５３（１９７８）；ＨｅｎｎｉｎｇａｎｄＳａｗｍｉｌｌｅｒ，Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ：ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｅｆｆｅｃｔｓ，ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃｈ４９：２７−３７（２００１））。ペプチド薬物の血漿半減期が短いのは、腎クリアランスが速いこと、並びに体循環中の酵素的分解に多くの場合起因する。

本開示は、持続放出用の医薬製剤、及び持続放出型の製剤を用いた治療計画を送達する方法を提供する。本開示は、これによりペプチド及び小分子薬物について改善した薬物動態を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、持続放出型の医薬製剤を提供する。該製剤は、全身投与用の治療剤を含み、該治療剤は、活性薬剤と、対象の体温で可逆性マトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列とを含む。可逆性マトリックスは、水素結合（例えば、分子内及び／又は分子間水素結合）、並びに疎水的寄与により形成される。該製剤は、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を更に含む。マトリックスは、注射部位から循環への低速吸収を提供する。注射部位からの持続放出又は低速吸収は、注射部位において濃度分散するに従いマトリックスがゆっくりと逆転することに起因する。製品が循環中に移動すると、該製剤は半減期の長期化及び安定性の改善をもたらす。従って、低速吸収と長期半減期の独特な組み合わせが実現すると、トラフに対するピーク（Ｃｍｉｎに対するＣｍａｘ）が小さく、Ｔｍａｘに達するのが遅い又は遅延している望ましいＰＫプロファイルをもたらす。

特定の実施形態では、対象の体温で可逆性マトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列は、エラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）配列である。ＥＬＰ配列は、エラスチンタンパク質中に存在する反復配列と関連する、又はそれを模倣する構造的なペプチド単位若しくは配列を含む、或いはそれから構成される。ＥＬＰアミノ酸配列は、選択された製剤において目視可能で可逆的な逆相転移を示し得る。すなわち、アミノ酸配列は、転移温度（Ｔｔ）未満の製剤において構造的に無秩序化しており、また極めて可溶性であり得るが、該製剤の温度がＴｔより上昇すると、鋭敏な（２〜３℃の範囲で）無秩序から秩序への相転移を示す。いくつかの実施形態では、本開示は、約２６℃〜約３７℃の間で転移温度を有する治療剤を提供する。温度に付加して、ＥＬＰポリマーの長さ、ＥＬＰのアミノ酸組成、イオン強度、ｐＨ、圧力、選択された溶媒、有機溶質の存在、及びタンパク質濃度も、転移特性に影響を及ぼす可能性があり、またこれらは、所望の吸収プロファイルに応じて特別に調整され得る。いくつかの実施形態では、タンパク質濃度及び塩濃度が、転移特性（例えば、転移温度）に影響を及ぼす。マトリックスを形成するＥＬＰアミノ酸配列の代表的な配列又は構造が本明細書に開示される。

特定の実施形態では、全身投与用の活性薬剤は、タンパク質又はペプチドであり、例えば約３０秒〜約１時間、〜約２時間、又は〜約５時間等の短い循環半減期を有し得る。いくつかの実施形態では、タンパク質又はペプチドは、３０秒〜約１０時間の循環半減期を有する。治療剤は、タンパク質活性薬剤と、マトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列との間の組換え融合タンパク質であり得る。代表的なペプチド活性薬剤として、アペリン、アルギナーゼ、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬、ＧＬＰ−２受容体作動薬、ヘプシジン、ＩＧＦ−１、ウロジラチン、サイモシンβ４、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、副甲状腺ホルモン断片（例えば、残基１〜３４）、完全長副甲状腺ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン（Ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｃｈｏｒｍｏｎｅ）、コバーシン（Ｃｏｖｅｒｓｉｎ）、キスペプチン、キスペプチン断片（例えば、アミノ酸残基１〜１０又はアミノ酸残基１〜５４）、アネキシンＡ１由来のペプチド（例えば、アミノ酸残基２〜２６）、ＦＧＦ２１、又はその誘導体、類似体、模倣体、組み合わせ、若しくは断片が挙げられる。本開示に基づく送達用の小分子薬物が、本明細書に開示される。注射部位からの低速吸収を提供することにより、腎クリアランス及び分解が制御可能となり、これにより所望のＰＫプロファイルを実現する。

その他の態様では、本開示は、活性薬剤の持続放出型投薬計画を送達する方法を提供する。該方法は、本明細書に記載する製剤を、これを必要とする対象に投与することを含み、該製剤は、１ヶ月に約１〜約８回投与される。いくつかの実施形態では、（例えば）製剤は１週間に約１回投与され、そして皮下又は筋肉内に投与され得る。いくつかの実施形態では、投与部位は病理学的な部位ではない、すなわち、治療剤は意図した作用部位に直接投与されない。

ＣＮＰ構築物の能力を示す図である。ＣＮＰ構築物の能力を示す図である。ＰＥ０５５２又は生理食塩水（対照）を、１週間に３回、皮下注射したときの、５週齢雄ＦＶＢ／ｎＪマウス（ｎ＝１２／群）の成長に対する効果を示す図である。成長に対する効果を、鼻部から尾部までの長さを測定して決定した。グラフは、群毎の平均測定値と標準誤差を示す。ＰＥ０５５２又は生理食塩水（対照）を、１週間に３回、皮下注射したときの、５週齢雄ＦＶＢ／ｎＪマウス（ｎ＝１２／群）の成長に対する効果を示す図である。成長に対する効果を、鼻部から肛門までの長さを測定して決定した。グラフは、群毎の平均測定値と標準誤差を示す。ＰＥ０５５２又は生理食塩水（対照）を、１週間に３回、皮下注射したときの、５週齢雄ＦＶＢ／ｎＪマウス（ｎ＝１２／群）の成長に対する効果を示す図である。成長に対する効果を、尾部の長さを測定して決定した。グラフは、群毎の平均測定値と標準誤差を示す。ＰＥ９２０６、ＰＥ９２１６、ＰＥ９３０６、ＰＥ９３２６、又は生理食塩水（対照）を１日１回、３週間皮下注射したときの、３週齢雄ＦＶＢ／ｎＪマウス（ｎ＝１１／群）の成長に対する効果を示す図である。成長に対する効果を、鼻部から尾部までの長さを測定して決定した。グラフは、３週間経過時のベースラインからの平均成長変化を示す。ＰＥ９２０６、ＰＥ９２１６、ＰＥ９３０６、ＰＥ９３２６、又は生理食塩水（対照）を１日１回、３週間皮下注射したときの、３週齢雄ＦＶＢ／ｎＪマウス（ｎ＝１１／群）の成長に対する効果を示す図である。成長に対する効果を、鼻部から肛門までの長さを測定して決定した。グラフは、３週間経過時のベースラインからの平均成長変化を示す。ＰＥ９２０６、ＰＥ９２１６、ＰＥ９３０６、ＰＥ９３２６、又は生理食塩水（対照）を１日１回、３週間皮下注射したときの、３週齢雄ＦＶＢ／ｎＪマウス（ｎ＝１１／群）の成長に対する効果を示す図である。成長に対する効果を、尾部の長さを測定して決定した。グラフは、３週間経過時のベースラインからの平均成長変化を示す。ＰＥ０５０３又はＧＬＰ−２（Ａ２Ｇ）を、雄のスプラーグドーリーラット（２００〜２２０ｇ、ｎ＝１２／群）を対象に皮下注射したときの、１１日間投与期間における小腸重量に対する効果を示す図である。投与は、生理食塩水を１日１回投与された媒体群；ＰＥ０５０３を１．３ｍｇ／ｋｇで１日当たり１回投与されたＰＥ０５０３Ｑ１Ｄ；ＰＥ０５０３を５．１ｍｇ／ｋｇで２日に１回投与されたＰＥ０５０３Ｑ２Ｄ；ＰＥ０５０３を２０．５ｍｇ／ｋｇで４日に１回投与されたＰＥ０５０３Ｑ４Ｄ；０．１ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ２（Ａ２Ｇ）を１日２回投与されたＧＬＰ−２（Ａ２Ｇ）ＴＩＤであった。

本開示は、持続放出用の医薬製剤、及び持続放出型の製剤を用いた治療計画を送達する方法を提供する。特定の実施形態では、本明細書に開示する医薬組成物は、強化された有効性、バイオアベイラビリティー、循環半減期、持続性、分解抵抗等を有する。これにより、本開示は、トラフに対するピークの比が小さく、及び／又はＴｍａｘが延長した比較的平坦なＰＫプロファイルを含む、ペプチド及び小分子薬物等の活性薬剤の薬物動態を改善する。ＰＫプロファイルは、比較的低頻度の投与スケジュール、例えばいくつかの実施形態では１ヶ月に１〜８回の注射等により維持され得る。

いくつかの態様では、本開示は、持続放出型の医薬製剤を提供する。該製剤は、全身投与用の治療剤を含み、該治療剤は、活性薬剤と、対象の体温でマトリックス又はコアセルベートを形成する能力を有するアミノ酸配列とを含む。可逆性マトリックスは、水素結合（例えば、分子内及び／又は分子間水素結合）、並びに疎水的寄与により形成される。製剤は、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を更に含む。マトリックスは、注射部位から循環への低速吸収を提供する。理論に縛られるものではないが、この低速吸収は、注射部位デポ周辺におけるマトリックス又はコアセルベートの低速反転に起因する。低速吸収プロファイルは、平坦なＰＫプロファイル、並びに好都合で快適な投与計画を提供する。例えば、様々な実施形態では、活性薬剤の血漿濃度は、日数が経過しても（例えば、２〜約６０日間、又は約４〜約３０日間）、２０倍を超える、又は約１０倍を超える、又は約５倍を超える、又は約３倍を超えるような変化を示さない。一般的に、この平坦なＰＫプロファイルは、製剤を複数回にわたり（実質的に均等な間隔を置いて）投与しても、例えば少なくとも約２回、少なくとも約５回、又は少なくとも約１０回等投与する際にも認められる。いくつかの実施形態では、低速吸収は、約５時間を上回る、約１０時間を上回る、約２０時間を上回る、約３０時間を上回る、又は約５０時間を上回るＴｍａｘ（最高血漿中濃度に達するまでの時間）として顕在化する。

可逆性マトリックスを形成するアミノ酸配列
注射部位からの持続放出又は低速吸収は、対象の体温において、水素結合したマトリックス又はコアセルベートを形成する能力を有するアミノ酸配列により制御される。

いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、タンパク質骨格基及び／又は側鎖基を介して水素結合を形成し、及びマトリックス形成に対する疎水的相互作用に寄与し得る構造単位を含有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸側鎖は、水素結合供与基を含まず、水素結合は、実質的にタンパク質骨格を介して形成される。代表的なアミノ酸として、プロリン、アラニン、バリン、グリシン、及びイソロイシン、及び類似したアミノ酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、構造単位は、実質的に反復性の構造的モチーフ及び実質的に反復性の水素結合能力を生み出すために、実質的に反復性の構造単位である。このような及びその他の実施形態では、アミノ酸配列は、実質的に反復性のパターンで配置され得る少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、又は少なくとも約５０％のプロリンを含有する。この文脈において、実質的に反復性のパターンとは、アミノ酸配列のプロリン残基のうち、その少なくとも約５０％又は少なくとも約７５％が、定義可能な構造単位の一部であることを意味する。なおも別の実施形態では、アミノ酸配列は、水素結合ドナー側鎖を有するアミノ酸、例えばセリン、トレオニン、及び／又はチロシン等を含有する。いくつかの実施形態では、反復配列は、１〜約４個のプロリン残基を含み得るが、残りの残基は非極性残基、例えば、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、及びバリン等から独立に選択される。非極性又は疎水性残基は、マトリックス形成に対する疎水的相互作用に寄与し得る。

その他の実施形態では、体温でマトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列は、ランダムコイル又は非球形の伸長構造を含み得る。例えば、体温でマトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列は、それぞれが本明細書により引用することにより本明細書の一部をなすものとする米国特許公開第２００８／０２８６８０８号、ＷＩＰＯ特許公開第２００８／１５５１３４号、及び米国特許公開第２０１１／０１２３４８７号で開示されるアミノ酸配列を含み得る。

いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも４０個のアミノ酸からなる非構造化組換えポリマーを含む。非構造化ポリマーは、約１００、約１５０、約２００個を超える、又はそれ超の連続したアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、ランダムコイルドメインを形成する。特に、「ランダムコイルコンホメーション」を有する又は形成するポリペプチド又はアミノ酸ポリマーは、定義された二次及び三次構造を実質的に欠く。いくつかの実施形態では、非構造化ポリマーは、少なくとも４０個のアミノ酸を有するポリマーとして定義され、グリシン（Ｇ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びプロリン（Ｐ）残基の合計数は、ポリマー内の総アミノ酸の約８０％超を占める。いくつかの実施形態では、アミノ酸の少なくとも５０％が、チョウ−ファスマン（Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ）アルゴリズムにより決定される二次構造を欠損している。

アミノ酸配列は、注射した際に、保管温度よりも高い温度で「ゲル様の」状態を形成し得る。代表的な配列は、反復性のペプチド単位を有し、及び／又はより低い温度では比較的非構造的であり、またより高い温度では水素結合し、構造化した状態を実現する。

エラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）
いくつかの実施形態では、体温でマトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列は、４〜１０個のアミノ酸からなる反復単位を有するペプチドである。反復単位は、マトリックスの形成において１、２、又は３個の水素結合を形成し得る。特定の実施形態では、体温でマトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列は、絹、エラスチン、コラーゲン、ケラチン、若しくはその模倣体のアミノ酸配列、又は本明細書により参考として組み込まれる米国特許第６，３５５，７７６号で開示されるアミノ酸配列である。

特定の実施形態では、アミノ酸配列は、エラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）配列である。ＥＬＰ配列は、エラスチンタンパク質と関連する又はその模倣体である構造的ペプチド単位又は配列を含む、又はそれから構成される。ＥＬＰ配列は、３〜約２０個のアミノ酸、又はいくつかの実施形態では、約４〜約１０個のアミノ酸、例えば約４、約５、若しくは約６個のアミノ酸等からなる構造単位から構築される。個々の構造単位の長さは変化してもよく、又は均一であってもよい。代表的な構造単位は、配列番号１〜１３（下記）により定義され、タンデム反復単位を含む反復性構造単位として採用されてもよく、又はいくつか組み合わせて採用されてもよい。従って、ＥＬＰは、下記で定義されるような配列番号１〜１３から選択される構造単位（複数可）を本質的に含み得る又はそれから構成され得る。

いくつかの実施形態では、構造単位がＥＬＰ単位である実施形態を含め、アミノ酸配列は、約１〜約５００個の構造単位、又は特定の実施形態では約９〜約２００個の構造単位、又は特定の実施形態では約１０〜２００個の構造単位、又は特定の実施形態では約５０〜約２００個の構造単位、又は特定の実施形態では約８０〜約２００個の構造単位若しくは約８０〜約１５０個の構造単位を本質的に含む又はそれから構成される。いくつかの実施形態では、構造単位は、配列番号１〜１３のうちの１つ又は複数により定義されるＥＬＰ単位である。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは配列番号１〜１３により定義される単位の組み合わせを含む。従って、構造単位は、全体として、アミノ酸残基約５０〜約２０００個、又はアミノ酸残基約１００〜約８００個、又はアミノ酸残基約２００〜約７００個、又はアミノ酸残基約４００〜約６００個の長さを有し得る。代表的な実施形態では、ＥＬＰ構造単位のアミノ酸配列は、約３個の構造単位、約７個の構造単位、約９個の構造単位、約１０個の構造単位、約１５個の構造単位、約２０個の構造単位、約４０個の構造単位、約８０個の構造単位、約９０個の構造単位、約１００個の構造単位、約１２０個の構造単位、約１４０個の構造単位、約１４４個の構造単位、約１６０個の構造単位、約１８０個の構造単位、約２００個の構造単位、又は約５００個の構造単位を本質的に含む又はそれから構成される。代表的な実施形態では、構造単位は、全体として、アミノ酸残基約４５個、アミノ酸残基約９０個、アミノ酸残基約１００個、アミノ酸残基約２００個、アミノ酸残基約３００個、アミノ酸残基約４００個、アミノ酸残基約５００個、アミノ酸残基約６００個、アミノ酸残基約７００個、アミノ酸残基約７２０個、アミノ酸残基約８００個、又はアミノ酸残基約１０００個の長さを有する。

アミノ酸配列は、選択された製剤において目視可能で可逆的な逆相転移を示し得る。すなわち、アミノ酸配列は、転移温度（Ｔｔ）未満の製剤において構造的に無秩序化した状態にあり、また極めて可溶性であり得るが、製剤の温度がＴｔより上昇すると、鋭敏な（２〜３℃の範囲で）無秩序から秩序への相転移又はコアセルベーションを示す。温度に付加して、アミノ酸ポリマーの長さ、アミノ酸組成、イオン強度、ｐＨ、圧力、選択された溶媒、有機溶質の存在、及びタンパク質濃度も転移特性に影響を及ぼす可能性があり、またこれらは、製剤化において所望の吸収プロファイルが得られるように特別に調整され得る。吸収プロファイルは、血漿濃度又は活性薬剤の活性を経時的に決定することにより容易に試験可能である。

特定の実施形態では、ＥＬＰ成分（複数可）は、
（ａ）テトラペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、又はＶＰＧＧ（配列番号１）、
（ｂ）テトラペプチドＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、又はＩＰＧＧ（配列番号２）、
（ｃ）ペンタペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（配列番号３）、又はＶＰＧＸＧであって、式中、Ｘは、プロリンを除く任意の天然又は非天然のアミノ酸残基であり、及びＸは、ポリマー性又はオリゴマー性の反復において任意選択的に異なる前記ペンタペプチド、
（ｄ）ペンタペプチドＡｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ、又はＡＶＧＶＰ（配列番号４）、
（ｅ）ペンタペプチドＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ、又はＩＰＧＸＧ（配列番号５）であって、式中、Ｘは、任意の天然又は非天然のアミノ酸残基であり、及びＸは、ポリマー性又はオリゴマー性の反復において任意選択的に異なる前記ペンタペプチド、
（ｅ）ペンタペプチドＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、又はＩＰＧＶＧ（配列番号６）、
（ｆ）ペンタペプチドＬｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ、又はＬＰＧＸＧ（配列番号７）であって、式中、Ｘは、任意の天然又は非天然のアミノ酸残基であり、及びＸは、ポリマー性又はオリゴマー性の反復において任意選択的に異なる前記ペンタペプチド、
（ｇ）ペンタペプチドＬｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、又はＬＰＧＶＧ（配列番号８）、
（ｈ）ヘキサペプチドＶａｌ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、又はＶＡＰＧＶＧ（配列番号９）、
（ｉ）オクタペプチドＧｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、又はＧＶＧＶＰＧＶＧ（配列番号１０）、
（ｊ）ノナペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、又はＶＰＧＦＧＶＧＡＧ（配列番号１１）、
（ｋ）ノナペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、又はＶＰＧＶＧＶＰＧＧ（配列番号１２）、及び
（ｌ）ペンタペプチドＸａａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、又はＸＰＧＶＧ（配列番号１３）であって、式中、Ｘは任意の天然又は非天然のアミノ酸残基であり、及びＸは、ポリマー性又はオリゴマー性の反復において任意選択的に異なるペンタペプチド
を含む、但しこれらに限定されない構造単位から形成され得る。

配列番号１〜１３により定義されるそのような構造単位は、構造的反復単位を形成し得る、又はＥＬＰを形成するために組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、ＥＬＰ成分は、配列番号１〜１３から選択される構造単位の１つ又はその組み合わせ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の）から全体的に（又はほぼ全体的に）形成される。その他の実施形態では、ＥＬＰ成分の少なくとも約７５％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％は、反復単位として存在し得る、配列番号１〜１３から選択される構造単位の１つ又は組み合わせから形成される。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、タンデム反復単位を含め、Ｘが上記で定義したようなＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（配列番号３）からなる反復単位を含有し、またＥＬＰ成分全体（ＶＰＧＸＧ（配列番号３）以外の構造単位を含み得る）に対するＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（配列番号３）単位の占めるパーセンテージ（％）は、ＥＬＰの約５０％を上回る、又は約７５％を上回る、又は約８５％を上回る、又は約９５％を上回る。ＥＬＰは、配列番号３の５〜１５個の構造単位（例えば、約９又は約１０個の構造単位）からなるモチーフを含むことができ、ゲスト残基Ｘは、モチーフ内の少なくとも２又は少なくとも３個の単位において異なる。ゲスト残基は、非極性又は疎水性の残基等、例えばアミノ酸Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ、Ｇ、及びＷ等から独立に選択され得る（及び所望の逆相転移特性を保持するために選択され得る）。特定の実施形態では、ゲスト残基はＶ、Ｇ、及びＡより選択される。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、タンデム反復単位を含め、Ｘが上記で定義したようなＸａａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ（配列番号１３）からなる反復単位を含有し、またＥＬＰ成分全体（ＸＰＧＶＧ（配列番号１３）以外の構造単位を含み得る）に対するＸａａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ（配列番号１３）単位の占めるパーセンテージ（％）は、ＥＬＰの約５０％を上回る、又は約７５％を上回る、又は約８５％を上回る、又は約９５％を上回る。ＥＬＰは、配列番号１３の５〜１５個の構造単位（例えば、約９又は約１０個の構造単位）からなるモチーフを含むことができ、ゲスト残基Ｘは、モチーフ内の少なくとも２又は少なくとも３個の単位において異なる。ゲスト残基は、非極性又は疎水性の残基等、例えばアミノ酸Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ、Ｇ、及びＷ等から独立に選択され得る（及び所望の逆相転移特性を保持するために選択され得る）。特定の実施形態では、ゲスト残基はＶ及びＡより選択される。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号１〜１３のいずれか単独又はその組み合わせからなるタンデム反復単位を含め、反復単位を含有する。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、任意の配列番号１〜１３について、その２つ以上を組み合わせた反復部を含有する。特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号３及び配列番号１３からなる反復部を含有する。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３及び配列番号１３からなる反復部を含有し、ゲスト残基は非極性又は疎水性の残基等、例えばアミノ酸Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ、Ｇ、及びＷ等から独立に選択される（及び所望の逆相転移特性を保持するため選択され得る）。特定の実施形態では、ゲスト残基はＶ、Ｇ、及びＡより選択される。

いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示する１つ又は複数のＥＬＰ構造単位について、その９個のコピーを含む９−ｍｅｒを含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示するペンタペプチドについて、その９個のコピーを含む９−ｍｅｒを含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３及び１３を任意の組み合わせで含む９−ｍｅｒを含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３と１３とが交互に反復する配列を含む。異なる数の９−ｍｅｒからなるＥＬＰを組み合わせて、例えば１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９０、９９、１０８、１１７、１２６、１３５、１４４、１５３、１６２、１７１、又は１８０個の９−ｍｅｒのコピーを有するＥＬＰを生成することができる。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３を含む９−ｍｅｒを含み、ゲスト残基はＶ、Ｇ、及びＡから選択される。特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３を含む９−ｍｅｒを含み、Ｖ、Ｇ、及びＡが７：２：０の比で存在する（α）。特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３を含む９−ｍｅｒを含み、Ｖ、Ｇ、及びＡが７：０：２の比で存在する（βｖ１）。特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３を含む９−ｍｅｒを含み、Ｖ、Ｇ、及びＡが６：０：３の比で存在する（βｖ２）。特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３を含む９−ｍｅｒを含み、Ｖ、Ｇ、及びＡが５：２：２の比で存在する（γ）。特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号１３を含む９−ｍｅｒを含み、ゲスト残基がＶ、Ｇ、及びＡから選択される。特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号１３を含む９−ｍｅｒを含み、Ｖ、Ｇ、及びＡが、５：０：４の比で存在する（δ）。代表的な９−ｍｅｒを表１に開示する。表２は、いくつかの代表的な９−ｍｅｒの転移温度を示す。

いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、表１に掲載されている９−ｍｅｒの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、α、βｖ１、βｖ２、及び／又はδの９−ｍｅｒの組み合わせを含む。例えば、γＥＬＰは、１４４ｍｅｒが構築されるまで、αの９−ｍｅｒとβｖ１の９−ｍｅｒを交互に１６コピー反復することにより構築される。特定の実施形態では、ＥＬＰは、αとβｖ１の９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＥＬＰは、αとβｖ２の９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＥＬＰは、α及びδの９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＥＬＰは、βｖ１とβｖ２の９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＥＬＰは、βｖ１とδの９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＥＬＰは、βｖ２とδの９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＥＬＰは、α、βｖ１、及びβｖ２の９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＥＬＰは、α、βｖ１、及びδの９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＥＬＰは、α、βｖ２、及びδの９−ｍｅｒからなる組み合わせを含む。例えば、特別な配置では、ＥＬＰβｖ２は、次のゲスト残基を、次の配列、すなわちＡ−Ｖ−Ａ−Ｖ−Ｖ−Ａ−Ｖ−Ａ−Ｖで繰り返される構造単位に含むことができる。繰り返される配列は、ＥＬＰ内で約１０回、約１２回、約１５回、約１６回、約２０回、約２５回、約３０回、又は約３５回、又はそれ超の回数連続して反復され得る。いくつかの態様では、ＥＬＰは、約１０〜約２０個の繰り返し配列を含有する。その他の態様では、ＥＬＰは、約１５〜２０個の繰り返し配列を含有する。いくつかの態様では、ＥＬＰは、約１６個の繰り返し配列を含有する。

いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示する１つ又は複数のＥＬＰ構造単位のコピー１０個を含む１０−ｍｅｒを含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示するペンタペプチドのコピー１０個を含む１０−ｍｅｒを含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３及び１３を任意の組み合わせで含む１０−ｍｅｒを含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３と１３の間で交互に繰り返す配列を含む。異なる数の１０−ｍｅｒからなるＥＬＰを組み合わせて、例えば、２０、３０、４０、６０、９０、１００、１２０、１５０、１６０、又は２００個の１０−ｍｅｒのコピーを有するＥＬＰを生成することができる。代表的な１０−ｍｅｒを表３に開示する。

いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、βターン構造を形成し得る。βターン構造を作り出すのに適する代表的なペプチド配列は、本明細書によりその全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ第９６／０５１８６号に記載されている。例えば、配列ＶＰＧＸＧ（配列番号３）内の４番目の残基（Ｘ）は、βターン形成を損なわずに変化し得る。

代表的なＥＬＰの構造は、表記ＥＬＰ_ｋ［Ｘ_ｉＹ_ｊ−ｎ］を使用して記載することができ、式中、ｋは特定のＥＬＰ反復単位を表し、カッコ内の大文字は、一文字のアミノ酸コードであり、及びその対応する下付き文字は構造単位内の各ゲスト残基Ｘの相対的な比を表し（該当する場合）、そしてｎは、いくつかの構造的反復部内のＥＬＰの全長を記載する。例えば、ＥＬＰ１［Ｖ_５Ａ_２Ｇ_３−１０］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧ（配列番号３）の１０個の反復単位を含有するＥＬＰ成分を表し、式中、Ｘは、相対的な比が約５：２：３のバリン、アラニン、及びグリシンであり；ＥＬＰ１［Ｋ_１Ｖ_２Ｆ_１−４］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧ（配列番号３）の４個の反復単位を含有するＥＬＰ成分を表し、式中、Ｘは、相対的な比が約１：２：１のリジン、バリン、及びフェニルアラニンであり；ＥＬＰ１［Ｋ_１Ｖ_７Ｆ_１−９］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧ（配列番号３）の９個の反復単位を含有するポリペプチドを表し、式中、Ｘは、相対的な比が約１：７：１のリジン、バリン、及びフェニルアラニンであり；ＥＬＰ１［Ｖ−５］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧ（配列番号３）の５個の反復単位を含有するポリペプチドを表し、式中、Ｘはバリンであり；ＥＬＰ１［Ｖ−２０］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧ（配列番号３）の２０個の反復単位を含有するポリペプチドを表し、式中、Ｘはバリンであり；ＥＬＰ２［５］は、ペンタペプチドＡＶＧＶＰ（配列番号４）の５個の反復単位を含有するポリペプチドを表し；ＥＬＰ３［Ｖ−５］は、ペンタペプチドＩＰＧＸＧ（配列番号５）の５個の反復単位を含有するポリペプチドを表し、式中、Ｘはバリンであり；ＥＬＰ４［Ｖ−５］は、ペンタペプチドＬＰＧＸＧ（配列番号７）の５個の反復単位を含有するポリペプチドを表し、式中、Ｘはバリンである。

ＥＬＰに関して、Ｔｔは、ゲスト残基の疎水性の関数である。従って、ゲスト残基（複数可）の同一性及びそのモル分画（複数可）を変化させることにより、広範囲の温度にわたり逆相転移を示すＥＬＰが合成可能である。従って、所与のＥＬＰ長さにおけるＴｔは、ＥＬＰ配列内により大きな割合の疎水性ゲスト残基を組み込むことにより低下し得る。適する疎水性ゲスト残基の例として、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びメチオニンが挙げられる。中程度に疎水性であるチロシンも利用可能である。反対に、Ｔｔは、残基、例えばグルタミン酸、システイン、リジン、アスパラギン酸、アラニン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グリシン、アルギニン、及びグルタミンから選択される残基等を組み込むことにより上昇し得る。

分子量＞１００，０００を有するポリペプチドの場合、ＰＣＴ／ＵＳ第９６／０５１８６号（本明細書により参照としてその全体が組み込まれる）で開示される疎水性スケールが、特定のＥＬＰ配列のおよそのＴｔを予測するための１つの手段を提供する。分子量＜１００，０００を有するポリペプチドの場合、Ｔｔは次の二次関数、すなわちＴｔ＝Ｍ０＋Ｍ１Ｘ＋Ｍ２Ｘ２により予測又は決定可能であり、式中、Ｘは、融合タンパク質のＭＷ、及びＭ０＝１１６．２１；Ｍ１＝−１．７４９９；Ｍ２＝０．０１０３４９である。

ＥＬＰは、いくつかの実施形態では、約１０〜約３７℃の範囲の、例えば約２０〜約３７℃、又は約２５℃〜約３７℃等のＴｔを提供するように選択又は設計される。いくつかの実施形態では、周辺の体温がわずかに低めであることを考慮すれば、生理条件（例えば、０．９％の生理食塩水）における転移温度は約３４℃〜３６℃である。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、また各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択される。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：３：２であり得る。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_６０を含み、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：３：２であり得る。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_９０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：３：２であり得る。例えば、体温で水素結合したマトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列は、［ＶＰＧＸＧ］_１２０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：３：２であり得る。本明細書に示す通り、このＥＬＰの１２０個の構造単位は、約５〜１５ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１０ｍｇ／ｍｌ）のタンパク質において、約３７℃の転移温度を提供し得る。約５０〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度において、相転移温度は、セ氏約３５．５度（体温のすぐ下）であり、３７℃のすぐ下の周辺体温が許容される。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１４４を含むことができ、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：３：２であり得る。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１８０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：３：２であり得る。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：２：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_６０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：２：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_９０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：２：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１０８を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：２：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１２０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：２：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］_１４４を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：２：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１８０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：２：０である。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：０：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_６０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：０：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_９０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：０：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１０８を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：０：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１２０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：０：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１４４を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：０：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１８０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約７：０：２である。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約６：０：３である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_６０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約６：０：３である。特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］_９０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約６：０：３である。特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］_１０８を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約６：０：３である。特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］_１２０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約６：０：３である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１４４を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約６：０：３である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１８０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約６：０：３である。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：２：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_６０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：２：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_９０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：２：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１０８を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：２：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１２０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：２：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１４４を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：２：２である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１８０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：２：２である。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約１０：０：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_６０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約１０：０：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_９０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約１０：０：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１０８を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約１０：０：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１２０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約１０：０：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１４４を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約１０：０：０である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１８０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約１０：０：０である。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜１００の任意の数であり、各Ｘは、Ｖ及びＬから選択され、そしてＶ：Ｌの比は、約３：７又は約４：６又は約１：１又は約６：４又は約３：７である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_６０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ及びＬから選択され、そしてＶ：Ｌの比は、約３：７又は約４：６又は約１：１又は約６：４又は約３：７である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_５０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ及びＬから選択され、そしてＶ：Ｌの比は、約３：７又は約４：６又は約１：１又は約６：４又は約３：７である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_４０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ及びＬから選択され、そしてＶ：Ｌの比は、約３：７又は約４：６又は約１：１又は約６：４又は約３：７である。特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］_３０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ及びＬから選択され、そしてＶ：Ｌの比は、約３：７又は約４：６又は約１：１又は約６：４又は約３：７である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_２０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ及びＬから選択され、そしてＶ：Ｌの比は、約３：７又は約４：６又は約１：１又は約６：４又は約３：７である。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＸＰＧＶＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＸＰＧＶＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、そして各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択される。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＸＰＧＶＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数であり、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：０：４である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＸＰＧＶＧ］_６０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：０：４である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＸＰＧＶＧ］_９０を含み、式中、各ＸはＶ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：０：４である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＸＰＧＶＧ］_１２０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：０：４である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＸＰＧＶＧ］_１４４を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：０：４である。特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＸＰＧＶＧ］_１８０を含み、式中、各Ｘは、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、そしてＶ：Ｇ：Ａの比は、約５：０：４である。

特定の実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＶＧ］_ｍを含み、式中、ｍは、１〜２００の任意の数である。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、［ＶＰＧＶＧ］_６０、［ＶＰＧＶＧ］_９０、又は［ＶＰＧＶＧ］_１２０を含む。本明細書に示す通り、このＥＬＰの１２０個の構造単位は、約０．００５〜約０．０５ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．０１ｍｇ／ｍｌ）のタンパク質において、約３７℃の転移温度を提供することができる。或いは、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］_１４４又は［ＸＰＧＶＧ］_１４４を含む。本明細書に示す通り（表２）、このようなＥＬＰのいずれにおいても、その１４４個の構造単位は、２８℃及び３５℃を含む２８℃〜３５℃の転移温度を提供し得る。

様々な実施形態では、意図した対象はヒトであり、また体温は約３７℃であり、従って治療剤は、この温度又はその近傍（例えば、約２８℃〜約３７℃の間）で持続放出を提供するように設計される。水素結合及び／又は疎水的相互作用の逆転を伴う循環への低速放出は、体温が一定に留まったとしても、注射部位において製品が拡散するに従い濃度が低下することにより促進される。その他の実施形態では、対象はヒト以外の哺乳動物であり、また治療剤が約３０〜約４０℃であり得る哺乳動物の体温において持続放出を示すように、いくつかの実施形態では、例えば、特定の飼い慣らされたペット（例えば、イヌ若しくはネコ）又は家畜（例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、若しくはブタ）等について設計される。一般的に、Ｔｔは、治療剤が注射用溶液中に留まるように、製剤の保管条件（２〜約２５℃又は１５〜２２℃であり得る）よりも高い。

いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、２７℃及び３６℃を含む２７℃〜３６℃の範囲の転移温度を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、２８℃及び３５℃を含む２８℃〜３５℃の範囲の転移温度を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、２９℃及び３４℃を含む２９℃〜３４℃の範囲の転移温度を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、２７℃及び３３℃を含む２７℃〜３３℃の範囲の転移温度を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、３０℃及び３３℃を含む３０℃〜３３℃の転移温度を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、３１℃及び３１℃を含む３１℃〜３１℃の範囲の転移温度を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、又は３６℃の転移温度を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、１１０ｍＭのＮａＣｌ中、１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度において、２８℃及び３５℃を含む２８℃〜３５℃の範囲の転移温度を提供することができる。

本明細書により引用することにより本明細書の一部をなすものとする米国特許公開第２０１０／００２２４５５号の記載に従い、エラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）タンパク質ポリマー及び組換え融合タンパク質が調製され得る。いくつかの実施形態では、広範囲にわたる分子量において、任意の配列及び所定の長さを有する高度に反復性のポリペプチドをエンコードするＤＮＡを迅速にクローン化するために、ＥＬＰタンパク質ポリマーが、反復ライゲーションを通じて構築される。単一サイクルでは、親プラスミドを二等分したそれぞれは、オリゴマーのコピーを含有するが、それを同時にライゲーションし、これによりオリゴマーを二量体化させ、そして機能的プラスミドを再構成する。このプロセスは、反復的に実施され、所望の数の反復部を有するオリゴマー遺伝子が組み立てられる。例えば、１つのＥＬＰ構造的サブユニット（例えば、ペンタペプチド又はペンタペプチドの９−ｍｅｒ）がベクターに挿入される。ベクターは消化され、そして別のＥＬＰ構造単位（例えば、ペンタペプチド又はペンタペプチドの９−ｍｅｒ）が挿入される。消化及びライゲーションの後続する各ラウンドは、ＥＬＰポリマーが所望の長さになるまで、得られたベクターに含まれるＥＬＰ構造単位の数を二倍化する。初期の構造単位内のペンタペプチドの数を変化させることにより、異なる長さのＥＬＰが容易に構築され得る。代替的構築手段（すなわち、反復的ライゲーション以外）は、代替的長さのＥＬＰを生成するのに利用可能である。

いくつかの実施形態では、ベクターは、１つ又は複数の追加のアミノ酸又はＥＬＰ構造単位反復部を含有する。例えば、ｐＰＥ０２４８は、追加のペンタマー反復部をゲスト位置にバリンを有する１４４ｍｅｒのＮ末端に付加し、また追加のペンタマーをゲスト残基位置にトリプトファンを有するＣ末端に付加する。トリプトファンは、例えば２８０ｎｍでのより良好な吸収測定を可能にする分子吸光係数増加手段として利用可能であり、タンパク質濃度の決定、又は精製期間中のタンパク質含有量の監視に有用であり得る。エンコードＤＮＡが、ＥＬＰコーディング配列のいずれかの端部に融合パートナークローニング用の制限酵素認識部位を含有するように、いずれかの端部に付加されるペンタマーを設計することも可能である。

いくつかの実施形態では、治療剤は、活性薬剤及び１つ又は複数のＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、Ｎ末端又はＣ末端のいずれかに１つ又は複数のＥＬＰを有する活性薬剤を含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、Ｎ末端又はＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する活性薬剤を含む。いくつかの実施形態では、ＥＬＰはほぼ同一のサイズである。いくつかの実施形態では、ＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、一方の端部にあるＥＬＰは、他方の端部にあるＥＬＰよりも大きい。いくつかの実施形態では、Ｎ末端にあるＥＬＰは、Ｃ末端にあるＥＬＰより大きい。いくつかの実施形態では、Ｃ末端にあるＥＬＰは、Ｎ末端にあるＥＬＰより大きい。

活性薬剤
タンパク質活性薬剤
様々な実施形態では、活性薬剤は、それ自体、短い循環半減期、例えば、約３０秒〜約１時間等を有し得るタンパク質又はペプチドである。治療剤は、タンパク質活性薬剤と、対象の体温において水素結合したマトリックスを形成する能力を有するアミノ酸配列（例えば、ＥＬＰ）の間の組換え融合タンパク質であり得る。任意の適するタンパク質活性薬剤は、本開示の治療剤で使用可能である。様々な実施形態では、タンパク質活性薬剤は、アクチビン受容体２Ａ細胞外ドメイン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、α−２マクログロブリン、α−ＭＳＨ／アファメラノチド、アミリン（プラムリンチド）、アンジオテンシン（１−７）、アネキシンＡ１、アペリン、アルギナーゼ、アスパラギナーゼ、ブラジキニンＢ２受容体拮抗薬、コンプスタチン、コバーシン、ＣＴＬＡ−４、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド、センデリチド（ＣＤ−ＮＰ）、エラフィン、エキセンジン−４、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−１８／スプリフェルミン、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−２１、ガラニン、果粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、グレリン、ＧＬＰ−１／ＧＩＰデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１／グルカゴンデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１／ＧＬＰ−２デュアルアゴニスト、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１受容体拮抗薬、ＧＬＰ−２、果粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ヘプシジン、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ｈＧＨ拮抗薬、イカチバント、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−１、インターロイキン１受容体拮抗薬（ＩＬ−１Ｒａ）、インフェスチン−４、キスペプチン、Ｌ４Ｆペプチド、ラクリチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）、ＰＹＹ、レラモレリン、レラキシン、ソマトスタチン、チオレドキシン、サイモシンβ４、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、尿酸オキシダーゼ、ウロジラチン、ウログアニリン、副甲状腺ホルモン断片（例えば、残基１〜３４）、完全長副甲状腺ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、コバーシン、キスペプチン、キスペプチン断片（例えば、アミノ酸残基１〜１０又はアミノ酸残基１〜５４）、アネキシンＡ１由来ペプチド（例えば、アミノ酸残基２〜２６）、その類似体、誘導体、模倣体、断片、組み合わせ、又は機能的変異体である。いくつかの実施形態では、本開示は、タンパク質活性薬剤、及び持続放出を提供するアミノ酸配列を含む治療剤を提供する。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列は、エラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）である。

タンパク質活性薬剤の半減期は、サイズ、従ってタンパク質活性薬剤の流体力学的容積を増加させること、改変された又は非天然のアミノ酸を付加すること、部分のコンジュゲーション（例えば、ペグ化）、合成配列（例えば、ＸＴＥＮ（登録商標）配列、ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ（登録商標））の付加、ｈＣＧ（ＣＴＰ）からのカルボキシ末端延長、アルブミン結合配列（例えば、ＡｌｂｕｄＡｂ（登録商標））の付加、アルブミン結合化合物、例えば脂肪酸のコンジュゲーション、Ｎ−グリコシル化等の翻訳後修飾、及びその他のペプチドへの融合、又は哺乳動物の異種タンパク質、例えば、アルブミン、トランスフェリン、若しくは抗体のＦｃ配列等との融合を含む様々な手段により延長され得る。そのような配列は、米国特許第７，２３８，６６７号（特にアルブミンコンジュゲートに関して）、米国特許第７，１７６，２７８号（特にトランスフェリンコンジュゲートに関して）、及び米国特許第５，７６６，８８３号に記載されている。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示する１つ又は複数の活性タンパク質薬剤の模倣体、類似体、誘導体、変異体、又は突然変異体を提供する。いくつかの実施形態では、模倣体、類似体、誘導体、変異体、又は突然変異体は、天然型のペプチド薬剤のアミノ酸配列と比較して、１つ又は複数のアミノ酸置換を含有する。いくつかの実施形態では、１〜２０個のアミノ酸が置換される。いくつかの実施形態では、模倣体、類似体、誘導体、変異体、又は突然変異体は、天然型のペプチド薬剤のアミノ酸配列と比較して約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、又は約１０個のアミノ酸置換を含有する。いくつかの実施形態では、模倣体、類似体、誘導体、変異体、又は突然変異体は、天然型のペプチド薬剤のアミノ酸配列と比較して、１つ又は複数のアミノ欠損を含有する。いくつかの実施形態では、天然型のタンパク質剤のアミノ酸配列と比較して、１〜２０個のアミノ酸が欠損している。いくつかの実施形態では、模倣体、類似体、誘導体、変異体、又は突然変異体は、天然型のタンパク質剤のアミノ酸配列と比較して、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、又は約１０個のアミノ酸欠損を有する。いくつかの実施形態では、天然型のタンパク質剤のアミノ酸配列と比較して、いずれかの端部において１〜１０個のアミノ酸が欠損している。いくつかの実施形態では、天然型のタンパク質剤のアミノ酸配列と比較して、両方の端部から１〜１０個のアミノ酸が欠損している。いくつかの実施形態では、模倣体、類似体、誘導体、変異体、又は突然変異体のアミノ酸配列は、天然型のタンパク質剤のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一である。いくつかの実施形態では、模倣体、類似体、誘導体、変異体、又は突然変異体のアミノ酸配列は、天然型のタンパク質剤のアミノ酸配列と約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である。同一性のパーセンテージ（％）は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示する任意の２つ以上の活性薬剤からなる共製剤を提供する。いくつかの実施形態では、共製剤は、２つ以上のペプチド活性薬剤及び小分子活性薬剤を含む。いくつかの実施形態では、共製剤は、２つ以上の小分子活性薬剤を含む。いくつかの実施形態では、共製剤は、２つ以上のペプチド活性薬剤を含む。いくつかの実施形態では、共製剤内の活性薬剤のうちの１つ又は複数は、ＥＬＰにコンジュゲートしていない。いくつかの実施形態では、共製剤内の活性薬剤のすべてが、ＥＬＰにコンジュゲートしている。

アペリン
特定の実施形態では、タンパク質活性薬剤は、アペリン、その類似体、模倣体、誘導体、断片、又は機能的変異体である。ヒトアペリンは、アペリン受容体に対する内因性リガンド（ＡＰＪクラスＡＧタンパク質結合型受容体）である。アペリンは、ヒト心筋細胞、内皮細胞、及び血管平滑筋細胞を含むいくつかの細胞型で発現している。アペリン遺伝子は、ヒト、イヌ、ウシ、ラット、マウス、アカゲザル、及びゼブラフィッシュを含む様々な種において同定されており、また７７個のアミノ酸からなるアペリンプレプロタンパク質をコードする。３つのエクソンを含む１７２６塩基対のゲノムＤＮＡにわたり、アペリン遺伝子座は、種間で高度に保存されている。アペリンプレプロタンパク質のプロセシングでは、アペリンプレプロタンパク質の残基１〜２２に対応するシグナルペプチドが切り離されて、５５個のアミノ酸であるアペリンプロタンパク質が生じ、これは、アペリン−１２、アペリン−１３、アペリン−１６、アペリン−１７、及びアペリン−３６を含むいくつかの活性な分子形態に処理される。（Ｋａｗａｍａｔａｅｔａｌ．，２００１，ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ１５３８：１６２−７１）。そのような活性な分子形態は、全体としてアペリンと呼ばれ、そしてその長さ及び／又は修飾状態に基づき命名されている。完全長成熟ペプチドであるアペリン−３６は、５５個のアミノ酸からなる長いアペリンプロタンパク質に由来する３６個のアミノ酸からなる長いペプチドであり（Ｔａｔｅｍｏｔｏｅｔａｌ．，１９９８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２５１：４７１−４７６，１９９８）、またプレプロタンパク質の残基４２〜７７に対応する。アペリン−１７及びアペリン−１３は、アペリンのカルボキシ（Ｃ）末端に由来する。アペリン−１７は、アペリンプロタンパク質の残基６１〜７７に対応する。アペリン−１３は、アペリンプロタンパク質の残基６５〜７７に対応する。アペリンタンパク質は、アミノ酸誘導体又は修飾を含み得る。例えば、最も活性なアイソフォームは、アペリン−１３のピログルタミン酸化された形態（ｐｙｒ−アペリン１３）である。

アペリンは、内因性の血管拡張薬、及びレニン−アンジオテンシン系と拮抗することにより、おそらくは受容体ヘテロトリマーの形成により血圧を降下させ得る変力物質である。

本開示の特定の実施形態では、活性薬剤は、持続放出を提供するアミノ酸配列を含み、アペリン、その模倣体、類似体、誘導体、断片、又は機能的変異体と融合又はコンジュゲートしている。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。特定の実施形態では、アペリンは、哺乳動物のアペリンである。いくつかの実施形態では、アペリンはヒトアペリンであり（例えば、配列番号３９）、完全長成熟ヒトアペリンペプチド、アペリン−３６（配列番号３９）である。その他の実施形態では、アペリンは、アペリン−１６、アペリン−１７（配列番号４１）、アペリン−１３（配列番号４３）、及びアペリン−１２（配列番号４４）を含む、但しこれらに限定されないアペリン−３６のトランケーション体である。いくつかの実施形態では、アペリンは、１つ又は複数の修飾されたアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、アペリンは、１つ又は複数のアミノ酸誘導体を含む。いくつかの実施形態では、アペリンは、ｐｙｒ−アペリン１３（配列番号４２）である。

いくつかの実施形態では、アペリンは、アペリンのＮ末端及び／又はＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、又は最大約３０個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約３０個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物アペリンの機能的類似体である。その他の実施形態では、機能的変異体は、天然型又はトランケーションされた配列に対して、約１〜約３０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含有する（例えば、配列番号３９、４１、４２、４３、又は４４）。例えば、機能的変異体は、天然型又はトランケーションされた配列に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、又は最大約３０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る（例えば、配列番号３９、４１、４２、４３、又は４４）。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、アペリンは、天然型又はトランケーションされた配列と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する（例えば、配列番号３９、４１、４２、４３、又は４４）。同一性のパーセンテージ（％）は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、アペリンは、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、アペリンの機能的類似体は、Ｅｌａｂｅｌｌａ／Ｔｏｄｄｌｅｒ又はその類似体若しくは誘導体である（Ｙａｎｇｅｔａｌ．，２０１５，ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３６：５６０−５６７）。

特定の実施形態では、治療剤は、アペリン、その模倣体、類似体、誘導体、断片、又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの態様では、治療剤は、ヒトアペリン−３６のＮ末端に融合したＥＬＰを含む（配列番号４０）。いくつかの実施形態では、アペリンは、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、アペリンは、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、アペリンのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、アペリンのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、アペリンのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、アペリンのＮ末端に位置するＥＬＰは、アペリンのＣ末端に位置するＥＬＰより大きい。その他の実施形態では、アペリンのＣ末端に位置するＥＬＰは、アペリンのＮ末端に位置するＥＬＰより大きい。

その他の態様では、本開示は、ＥＬＰ及びアペリンを投与することにより、心不全、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、虚血性心疾患、糖尿病、がん、肥満、心臓血管異常、又は血管形成を伴う病理学的状態（例えば、がん）を含む、但しこれらに限定されない疾患を治療又は予防する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する治療剤は、血管拡張作用（例えば、内皮型一酸化窒素シンターゼ（ｅＮＯＳ）により媒介される）、正の変力作用（例えば、細胞内カルシウムの増加及び筋フィラメントカルシウム感受性の増加に起因する）、虚血再灌流傷害に対する保護（例えば、一酸化窒素（ＮＯ）依存性及びＮＯ非依存性の経路を経由する）、及びＡＰＪ受容体媒介型の心肥大（例えば、Ｇタンパク質媒介型よりはむしろβ−アレスチン媒介型）を含む、但しこれらに限定されない作用を提供するために投与され得る。方法は、ＥＬＰ及びアペリンを含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくアペリン治療剤による治療は、例えば、心不全、ＰＡＨ、虚血性心疾患、糖尿病、がん、肥満、心臓血管異常、又は血管形成を伴う病理学的状態（例えば、がん）を含む、但しこれらに限定されない様々な疾患に起因する又はそれと関連した合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。更なる実施形態では、本開示に基づくアペリン治療剤による治療は、例えば、血管拡張作用（例えば、内皮型一酸化窒素シンターゼ（ｅＮＯＳ）により媒介される）、正の変力作用（例えば、細胞内カルシウムの増加及び筋フィラメントカルシウム感受性の増加に起因する）、虚血再灌流傷害に対する保護（例えば、一酸化窒素（ＮＯ）依存性及びＮＯ非依存性の経路を経由する）、及びＡＰＪ受容体媒介型の心肥大（例えば、Ｇタンパク質媒介型よりはむしろβ−アレスチン媒介型）を含む、但しこれらに限定されない作用を提供する薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることができる。

アルギナーゼ
いくつかの実施形態では、タンパク質活性薬剤は、アルギナーゼ（ＥＣ３．５．３．１；Ｌ−アルギニンアミジノヒドロラーゼ）、そのアイソザイム、断片、又は機能的変異体である。アルギナーゼは、哺乳動物の肝臓における尿素形成の最終的な細胞基質反応である、Ｌ−アルギニンをオルニチンと尿素に変換する反応を触媒する、尿素サイクルにおいて重要な３５ｋＤａの酵素である。アルギナーゼは、３つの重要な機能、すなわち尿素の生成、オルニチンの生成、及び一酸化窒素シンターゼの基質であるアルギニンレベルの制御を担う（Ｊｅｎｋｉｎｓｏｎｅｔａｌ．，１９９６，Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１１４Ｂ：１０７−１３２；Ｋａｎｙｏｅｔａｌ．，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ３８３：５５４−５５７；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｏｎ，１９９７，Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．６７：２１７−２５２）。尿素生成は、極めて可溶性の無毒性化合物の形態で窒素を排泄する、従って高アンモニアレベルという危険な結果の可能性を回避する機構を提供する。Ｌ−オルニチンは、ポリアミン、スペルミン、及びスペルミジン生合成のための前駆体であり、細胞の増殖及び分化において重要な役割を有する。最終的に、アルギナーゼは、組織内に存在するアルギニンのレベルを制御することにより、一酸化窒素の生成を調節する。

一般的に、アルギナーゼは、尿素産生動物（例えば、哺乳動物、軟骨魚類、両生動物、及びカメ）の肝臓、腎臓、及び睾丸で発現している。ヒトを含むほとんどの哺乳動物では、アルギナーゼタンパク質のファミリーとして、肝細胞内で主に発現しているアルギナーゼＩ、並びに腎臓及び赤血球内で主に発現しているアルギナーゼＩＩの各アイソザイムが挙げられる。

いくつかの実施形態では、ヒト肝臓アルギナーゼ欠乏症は、アルギニン血症、高アンモニア血症を伴う遺伝性常染色体劣性遺伝障害、過剰のアルギニンが発作を引き起こす状態、認知能力障害、及びニューロン障害を引き起こす可能性がある。臨床的に有意な高アルギニン血症は、アルギナーゼＩ遺伝子内の突然変異に起因する（ＣｅｄｅｒｂａｕｍＳ．Ｄ．ｅｔａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔ．Ｒｅｓ．１３：８２７−８３３；ＣｅｄｅｒｂａｕｍＳ．ｅｔａｌ．，１９７７，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．９０：５６９−５７３；ＭｉｃｈｅｌＶ．Ｖ．ｅｔａｌ．，１９７８，Ｃｌｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．１３：６１−６７）。アルギナーゼ欠乏症に起因して、アルギニンは尿素に分解不能となり、オルニチン代謝サイクルに組み込まれ、通常よりも約７〜約１０倍高い血中アルギニンレベル、脳脊髄液内のアルギニンレベルの増加、尿生成量の増加、及びクレアチニンの尿素排泄の増加を引き起こす。アルギナーゼＩ欠損患者は、痙縮、発育遅滞、進行性の精神的機能障害、及び挿間性の高アンモニア血症を呈し得る（ＣｅｄｅｒｂａｕｍＳ．Ｄ．ｅｔａｌ．，１９７９，ＰｅｄｉａｔＲｅｓ１３：８２７−８３３；ＣｅｄｅｒｂａｕｍＳ．Ｄ．，ｅｔａｌ．，１９７７，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ９０：５６９−５７３；ＴｈｏｍａｓＫ．Ｒ．ａｎｄＣａｐｅｃｃｈｉＭ．Ｒ．，１９８７，Ｃｅｌｌ５１：５０３−５１２）。

本開示の特定の実施形態では、アルギナーゼ治療剤は、アルギナーゼ、その模倣体、類似体、誘導体、断片、又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸薬剤は、ＥＬＰである。

特定の実施形態では、アルギナーゼは、哺乳動物のアルギナーゼである。いくつかの実施形態では、アルギナーゼは、アルギナーゼＩである。その他の実施形態では、アルギナーゼは、アルギナーゼＩＩである。いくつかの実施形態では、アルギナーゼは、ヒトアルギナーゼ（配列番号４５）である。

いくつかの実施形態では、アルギナーゼはアルギナーゼのＮ末端及び／又はＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、最大約３５個のアミノ酸、最大約４０個のアミノ酸、最大約４５個のアミノ酸、又は最大約５０個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約５０個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物のアルギナーゼの機能的類似体である。その他の実施形態では、機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号４５）に対して約１〜約５０個のアミノ酸挿入、欠損、及び／又は置換を含有する。例えば、機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号４５）に対して最大約３個のアミノ酸、約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、最大約３５個のアミノ酸、最大約４０個のアミノ酸、最大約４５個のアミノ酸、又は最大約５０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、アルギナーゼは、天然型の配列（例えば、配列番号４５）と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージ（％）は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、アルギナーゼは、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、アルギナーゼは、コバルトの代わりにマンガンを補助因子として利用し得る。

特定の実施形態では、治療剤は、アルギナーゼ、その模倣体、類似体、誘導体、断片、又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ヒトアルギナーゼ（配列番号４６）のＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、アルギナーゼは、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、アルギナーゼは、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、アルギナーゼのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、アルギナーゼのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、アルギナーゼのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、アルギナーゼのＮ末端に位置するＥＬＰは、アルギナーゼのＣ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、アルギナーゼのＣ末端に位置するＥＬＰは、アルギナーゼのＮ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

その他の態様では、本開示は、アルギナーゼ遺伝子又はアルギナーゼ遺伝子発現における欠陥と関連した、又はこれにより引き起こされた疾患、例えば、尿素サイクルの疾患；高血圧症；低血圧症；高アンモニア血症；挿間性の高アンモニア血症；プロリン、グルタミン酸、一酸化窒素、及びオルニチンの生合成における欠陥；高アルギニン血症及びその関連する痙縮；発育遅滞；進行性の精神的機能障害；前立腺疾患、前立腺がん、前立腺炎又は良性の立腺過形成若しくは肥大、前立腺損傷；腎疾患、及び腎損傷；非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌、メラノーマ、又は腎細胞癌腫を非限定的に含むがん；自己免疫疾患；線維性疾患；勃起不全；肺高血圧症；アテローム性動脈硬化症；腎疾患；喘息；Ｔ細胞機能不全；虚血再灌流傷害；神経変性疾患；創傷治癒；アルギニン依存性過形成；腫瘍；肝細胞癌；メラノーマ；腎細胞癌腫；ＨＣＣ；又はメラノーマ等の疾患を治療又は予防する方法を提供する。該方法は、ＥＬＰ及びアルギナーゼを含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくアルギナーゼ治療剤による治療は、例えば、高血圧症；低血圧症；高アンモニア血症；挿間性の高アンモニア血症；プロリン、グルタミン酸、一酸化窒素、及びオルニチンの生合成における欠陥；高アルギニン血症及びその関連する痙縮；発育遅滞；進行性の精神的機能障害；前立腺疾患、前立腺がん；前立腺炎又は良性の立腺過形成若しくは肥大；前立腺損傷；腎疾患；腎損傷；非ホジキンリンパ腫、肝細胞癌、メラノーマ、又は腎細胞癌腫を非限定的に含むがん；自己免疫疾患；線維性疾患；勃起不全；肺高血圧症；アテローム性動脈硬化症；腎疾患；喘息；Ｔ細胞機能不全；虚血再灌流傷害；神経変性疾患；創傷治癒；アルギニン依存性過形成；腫瘍；肝細胞癌；メラノーマ；腎細胞癌腫；ＨＣＣ；又はメラノーマを非限定的に含む、様々な疾患に起因する又はそれと関連した合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）
いくつかの実施形態では、タンパク質活性薬剤は、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、その模倣体、類似体、誘導体、断片、又は機能的変異体である。ナトリウム利尿ペプチドは、心血管ホメオスタシス、利尿作用、ナトリウム利尿、及び血管拡張において役割を演じている。ナトリウム利尿ペプチドファミリーは、３つの構造的に関連したペプチド、すなわち心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、及びＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）から構成される。このような小さい、単鎖ペプチド（ＡＮＰ、ＢＮＰ、及びＣＮＰ）は、１７−アミノ酸ループ構造を有し（Ｌｅｖｉｎｅｔａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３３９：８６３−８７０（１９９８））ａｎｄｐｌａｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎｍｕｌｔｉｐｌｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓ．ＡＮＰａｎｄＢＮＰａｒｅｐｒｏｄｕｃｅｄｐｒｉｍａｒｉｌｙｗｉｔｈｉｎｔｈｅｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓｏｆｔｈｅｈｅａｒｔ，ａｎｄｈａｖｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２：１２０−１２３（１９９１））。ＣＮＰは、中枢神経系、生殖器系、骨、及び血管の内皮細胞内を含め、より幅広く発現しており（Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，４９：４１９−４２６（２００７））、また例えば、骨増殖、血管拡張薬、及び変力物質の制御因子として作用し、そして心血管作用を有する。

ヒトでは、ＣＮＰは、ナトリウム利尿ペプチド前駆体Ｃ（ＮＰＰＣ）遺伝子から、単鎖１２６−アミノ酸プレプロポリペプチドとして最初に生成される（Ｓｕｄｏｈ，Ｔ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９０，１６８：８６３−８７０）。シグナルペプチドが取り除かれるとプロＣＮＰとなり、そしてエンドプロテアーゼのフューリンにより更なる切断を受けると、活性な５３−アミノ酸ペプチド（ＣＮＰ−５３）が生成し、これは分泌され、再度切断されて、成熟した２２−アミノ酸ペプチド（ＣＮＰ−２２）が生成する（Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２００３年、２７８巻：２５８４７〜８５２頁）。ＣＮＰ−５３及びＣＮＰ−２２は、その分布が異なり、ＣＮＰ−５３は組織内に主に存在し、一方、ＣＮＰ−２２は血漿及び脳脊髄液に主に見出される（Ｊ．Ａｌｆｏｎｚｏ，Ｒｅｃｅｐｔ．Ｓｉｇｎａｌ．Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．，２００６，２６：２６９−２９７）。ＣＮＰの主要な生理活性形態は、ＣＮＰ−２２である。

ナトリウム利尿ペプチドは、２つの受容体、すなわちナトリウム利尿ペプチド受容体−Ａ（ＮＰＲ−Ａ）及びナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲ−Ｂ）を通じて主に作用する。このような受容体は、細胞質グアニリルシクラーゼドメインを有し、これは、ＡＮＰ、ＢＮＰ、又はＣＮＰと結合した際に活性化し、そして細胞内ｃＧＭＰの蓄積を引き起こす。ＣＮＰ−５３及びＣＮＰ−２２のいずれも、ＮＰＲ−Ｂに同様に結合し、そしてそれらはいずれも、用量依存的で類似した様式でｃＧＭＰ生成を誘発することができる（Ｙｅｕｎｇ，Ｖ．Ｔ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９９６，１７：１０１−１０６）。第３の受容体、ＮＰＲ−Ｃは、ナトリウム利尿ペプチドのそれぞれと高い親和性を有して結合し、そして細胞外コンパートメントからペプチドを捕捉するように主に機能し、そしてペプチドをリソソーム内に配置し、そこでペプチドは分解する（Ｍａａｋ，Ｔ．ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８７，２３８：６７５−６７８）。

ＣＮＰはＮＰＲ−Ｂと結合し、これを活性化させ、細胞内サイクリックグアノシンモノホスフェート（ｃＧＭＰ）レベルの増加を引き起こす。ｃＧＭＰ生成により媒介される下流シグナリングは、軟骨内骨化（縦方向の長骨成長を支配するプロセス）を含む多種多様な生物学的プロセスに影響を及ぼす。

本開示の特定の実施形態では、治療剤は、ＣＮＰ、その断片又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。

特定の実施形態では、ＣＮＰは、哺乳動物のＣＮＰである。いくつかの実施形態では、ＣＮＰはヒトＣＮＰ−５３（配列番号５１）である。その他の実施形態では、ＣＮＰは、ＣＮＰ−２２である（配列番号４７）。その他の実施形態では、ＣＮＰは、ＣＮＰ−３７（配列番号４９）である。なおもその他の実施形態では、ＣＮＰは、ＣＮＰ−３９（配列番号５２）である。

いくつかの実施形態では、ＣＮＰは、ＣＮＰのＮ末端及び／又はＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、又は最大約３０個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約３０個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物のＣＮＰの断片又は機能的変異体である。その他の実施形態では、機能的変異体は、天然型又はトランケーションされた配列（例えば、配列番号４７、４９、５１、又は５２）に対して約１〜約３０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含有する。例えば、機能的変異体は、天然型又はトランケーションされた配列（例えば、配列番号４７、４９、５１、又は５２）に対して最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、又は最大約３０個のアミノの挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、ＣＮＰは、天然型又はトランケーションされた配列（例えば、配列番号４７、４９、５１、又は５２）と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、ＣＮＰは、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

いくつかの態様では、治療剤は、ＣＮＰ、その断片又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ＣＮＰ−２２（配列番号４８）のＮ末端に融合したＥＬＰを含む。別の態様では、治療剤は、ＣＮＰ−３７（配列番号５０）のＮ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ＣＮＰ（例えば、配列番号５７又は９８）のＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、プロＣＮＰ（配列番号５６）に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、ＣＮＰは、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、ＣＮＰは、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、ＣＮＰのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ＣＮＰのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ＣＮＰのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約４０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、ＣＮＰのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、ＣＮＰのＮ末端に位置するＥＬＰは、ＣＮＰのＣ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、ＣＮＰのＣ末端に位置するＥＬＰは、ＣＮＰのＮ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、リンカー（配列番号８３及び５５）を介してＣＮＰのＣ末端及び／又はＮ末端に連結している。いくつかの実施形態では、リンカーは、トリペプチドＧＧＳ配列（配列番号８７）を含む。いくつかの態様では、リンカーは、トリペプチドＧＧＳ（配列番号８７）の単一コピーを含む。別の態様では、リンカーは、トリペプチドＧＧＳの複数の反復部を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＳ配列の２つの反復部（配列番号１０２）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＳ配列の３つの反復部を（配列番号１０３）含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ペンタペプチドＧＧＧＧＳ配列（配列番号９３）を含む。いくつかの態様では、リンカーは、ペンタペプチドＧＧＧＧＳ（配列番号９３）の単一コピーを含む。別の態様では、リンカーは、ペンタペプチドＧＧＧＧＳの複数の反復部を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳ配列の２つの反復部（配列番号１０４）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳ配列の３つの反復部（配列番号１０５）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ペンタペプチドＰＡＰＡＰ配列（配列番号９４）を含む。いくつかの態様では、リンカーは、ペンタペプチドＰＡＰＡＰの単一コピーを含む。別の態様では、リンカーは、ペンタペプチドＰＡＰＡＰの複数の反復部を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＰＡＰ配列の２つの反復部（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＰＡＰ配列の３つの反復部（配列番号１０７）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ペンタペプチドＥＡＡＡＫ配列（配列番号９５）を含む。いくつかの態様では、リンカーは、ペンタペプチドＥＡＡＡＫの単一のコピーを含む。別の態様では、リンカーは、ペンタペプチドＥＡＡＡＫの複数の反復部を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＥＡＡＡＫ配列の２つの反復部（配列番号１０８）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＥＡＡＡＫ配列の３つの反復部（配列番号１０９）を含む。

いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、プロテアーゼ認識部位を含むペプチド配列を介してＣＮＰのＣ末端及び／又はＮ末端に連結している。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ認識部位は、ｉｎｖｉｖｏで開裂し、これによりＣＮＰを放出する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ認識部位は、注射部位において開裂し、これによりＣＮＰを放出する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ認識部位は、循環内で開裂し、これによりＣＮＰを放出する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ認識部位は、必要とされる場合、成長板近傍の関節内で開裂し、これによりＣＮＰを放出し、そして副作用を最低限に抑える。プロテアーゼ認識部位は、第Ｘａ因子（例えば、ＩＥＧＲ↓、ＩＤＧＲ↓、ＧＲ↓）；トロンビン（例えば、ＬＶＰＲ↓ＧＳ、ＬＶＰＲ↓ＧＦ）；カテプシン（例えば、カテプシンＫ、ＲＫＰＲ↓Ｇ、ＲＫＬＲ↓Ｇ）；マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）（例えば、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、及びＭＭＰ９に対するＰＬＧＬ↓ＷＡＧ「コンセンサス」認識配列（Ｅｃｋｈａｒｄｅｔａｌ．（２０１６）ＭａｔｒｉｘＢｉｏｌｏｇｙ４９，３７−６０））に対する認識部位を含む。ＣｈｏｕらによるヒトカテプシンＫに関する好ましい切断部位の分析（２００６．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１，１２８２４−１２８３２）では、利用可能である代替的切断部位は、例えば、Ｐ３はＫ、Ｇ、Ｈ、又はＭであり得、Ｐ２はＰ、Ｉ、又はＬであり得、Ｐ１はＱ、Ｒ、又はＫであり得ることが示唆される。

その他の態様では、本開示は、骨成長の制御と関連した疾患（例えば、低身長症及び軟骨形成不全を含む骨格形成異常）；若年性突発性関節炎；骨関節炎；心血管系疾患；心血管ホメオスタシス、利尿作用、ナトリウム利尿作用、又は血管拡張に影響を及ぼす疾患；中枢神経系の疾患、生殖器系の疾患；又は血管内皮細胞に影響を及ぼす疾患を含む、但しこれらに限定されない疾患を治療又は予防する方法を提供する。該方法は、ＥＬＰ及びＣＮＰを含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくＣＮＰ治療剤による治療は、例えば、骨成長の制御に影響を及ぼす疾患（例えば、低身長症及び軟骨形成不全を含む骨格形成異常）；若年性突発性関節炎；骨関節炎；心血管系疾患；心血管ホメオスタシス、利尿作用、ナトリウム利尿作用、又は血管拡張に影響を及ぼす疾患；中枢神経系の疾患、生殖器系の疾患；又は血管内皮細胞に影響を及ぼす疾患を非限定的に含む様々な疾患に起因する又はそれと関連した合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１受容体拮抗薬
本開示の特定の実施形態では、治療剤は、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬、例えばアミノ酸１〜８を欠いているエキセンジン−４、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体等と融合した又はコンジュゲートしたＥＬＰ成分を含む。

ヒトＧＬＰ−１は、回腸遠位部内、膵臓内、及び脳内のＬ細胞中で合成されるプレプログルカゴンに由来する３７個のアミノ酸残基ペプチドである。プレプログルカゴンのプロセシングにより、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミド、ＧＬＰ−１（７〜３７）が生じ、またＧＬＰ−２はＬ細胞内で主に生ずる。

腸のＬ細胞内でのプロセシング後に、ＧＬＰ−１が、とりわけ食事に応答して循環中に放出される。ＧＬＰ−１の血漿濃度は、約１５ｐｍｏｌ／Ｌの絶食レベルから４０ｐｍｏｌ／Ｌの食後のピークレベルまで上昇する。

いくつかの態様では、本発明のタンパク質活性薬剤は、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬である。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、ＧＬＰ−１のＮ末端及び／又はＣ末端断片である。特定の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、アミノ酸配列ＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ（配列番号５４、６４、及び６５）又はその断片を含む。いくつかの態様では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、ＧＬＰ−１（９〜３１）（配列番号５４）である。その他の態様では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、ＧＬＰ−１（９〜２９）（配列番号６４）である。なおもその他の態様では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、ＧＬＰ−１−エキセンジン−４（配列番号６５）である。

その他の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、エキセンジン−４のＮ末端及び／又はＣ末端断片である。特定の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、次のアミノ酸配列ＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰ（配列番号２７、２８、６０、６１、６２、及び６３）又はその断片を含む。特定の実施形態では、エキセンジン−４断片として、エキセンジン−４（９〜３９）（配列番号２７）、エキセンジン−４（９〜３１）（配列番号２８）、エキセンジン−４（９〜３０）（配列番号６０）、Ｍ−エキセンジン−４（９〜３９）（配列番号６２）、Ｍ−エキセンジン−４（９〜３１）（配列番号６１）、又はＭ−エキセンジン−４（９〜３０）（配列番号６３）が挙げられるが、但しこれらに限定されない。

その他の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、アミノ酸配列ＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ（配列番号６６及び６７）又はその断片を含む。いくつかの態様では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、Ｊａｎｔ−４（９〜３０）（配列番号６６）である。別の態様では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、Ｊａｎｔ−４（９〜３９）（配列番号６７）である。

特定の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、哺乳動物のＧＬＰ−１受容体拮抗薬である。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬（例えば、配列番号２７、２８、５４、５６、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、又は６７）である。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＮ末端及び／又はＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、又は最大約３０個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約３０個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物のＧＬＰ−１受容体拮抗薬の機能的類似体である。その他の実施形態では、機能的変異体は、天然型又はトランケーションされた配列（例えば、配列番号２７、２８、５４、５６、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、又は６７）に対して、約１〜約３０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含有する。例えば、機能的変異体は、天然型又はトランケーションされた配列（例えば、配列番号２７、２８、５４、５６、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、又は６７）に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、又は最大約３０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、天然型又はトランケーションされた配列（例えば、配列番号２７、２８、５４、５６、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、又は６７）と、少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

特定の実施形態では、治療剤は、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬、その類似体、模倣体、誘導体、断片、又は機能的変異体のＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬（例えば、配列番号５８及び５９）のＮ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬は、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＮ末端に位置するＥＬＰは、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＣ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＣ末端に位置するＥＬＰは、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＮ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

その他の実施形態では、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬治療剤が、糖尿病（１型又は２型）；代謝性疾患；肥満；高インスリン血症と関連した低血糖症を含む、但しこれに限定されないインスリン過剰分泌に起因する疾患；胃手術後の後天性高インスリン性低血糖症；又は高インスリン症、例えば先天性高インスリン症若しくは胃手術、例えば肥満を治療するための胃手術後の後天性高インスリン症等を含む、但しこれらに限定されない疾患を治療するのに使用される。方法は、ＥＬＰ及びＧＬＰ−１受容体拮抗薬を含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくＧＬＰ−１受容体拮抗薬治療剤による治療は、例えば、糖尿病（１型又は２型）；代謝性疾患；肥満；高インスリン血症と関連した低血糖症を含む、但しこれらに限定されないインスリン過剰分泌に起因する疾患；胃手術後の後天性高インスリン性低血糖症；又は高インスリン症、例えば先天性高インスリン症若しくは胃手術、例えば肥満を治療するための胃手術後の後天性高インスリン症等を含む、但しこれらに限定されない疾患に起因する又はそれと関連した様々な合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−２受容体作動薬
本開示の特定の実施形態では、治療剤は、ＧＬＰ−２受容体作動薬、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートしたＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、ＧＬＰ−２である。

ＧＬＰ−２は、腸の腸内分泌Ｌ細胞における、及び脳幹の特異的領域におけるプログルカゴンの翻訳後プロセシングから放出される３３−アミノ酸ペプチドである。ＧＬＰ−２は、栄養分摂取に応答して、ＧＬＰ−１、オキシントモジュリン及びグリセンチンと共に同時分泌される。ＧＬＰ−２は、アミノ酸配列に関して、グルカゴン及びＧＬＰ−１との顕著な相同性を示す。異なる哺乳動物間でも、ＧＬＰ−２の形態は高度に保存されている。例えば、ヒトＧＬＰ−２（ｈＧＬＰ−２）及びデグー（南アメリカの齧歯類）ＧＬＰ−２は、それぞれアミノ酸１個及び３個だけ、ラットＧＬＰ−２（ｒＧＬＰ−２）と異なる。ＧＬＰ−２は、クラスＩＩグルカゴンセクレチンファミリーに属する単一のＧタンパク質共役受容体と結合する。ＧＬＰ−２受容体は、ＧＬＰ−２に対して応答性であることが公知の部位である小腸、結腸、及び胃内に局在する（Ｙｕｓｔａｅｔａｌ．，２０００，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１１９：７４４−５５）。

本開示の特定の実施形態では、活性薬剤は、ＧＬＰ−２受容体作動薬、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。本開示の特定の実施形態では、活性薬剤は、ＧＬＰ−２受容体作動薬及びｈＧＨと融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬とｈＧＨは、持続放出を提供するアミノ酸配列の異なる端部に連結している。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬が持続放出を提供するアミノ酸配列のアミノ末端に連結しており、またｈＧＨがカルボキシ末端に連結している。いくつかの実施形態では、ｈＧＨが持続放出を提供するアミノ酸配列のアミノ末端に連結しており、またＧＬＰ−２受容体作動薬が、カルボキシ末端に連結している。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。

特定の実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、哺乳動物のＧＬＰ−２受容体作動薬、例えばヒトＧＬＰ−２受容体作動薬等である。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、ヒトＧＬＰ−２ペプチド（配列番号６８）である。その他の実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、ＧＬＰ−２ペプチドのＮ末端の位置２に位置するアラニン（Ａ）がグリシン（Ｇ）に置き換わったＧＬＰ−２ペプチド類似体である（配列番号７０）。特定の実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、配列ＨＸＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤ（配列番号７４）を含み、式中、Ｘは、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、又はバリン（Ｖ）である。いくつかの実施形態では、Ｘは、アラニン（Ａ）又はグリシン（Ｇ）である。

いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、ヒトＧＬＰ−２ペプチドのＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、又は最大約２５個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約２５個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物ＧＬＰ−２ペプチドの機能的変異体である。その他の実施形態では、機能的変異体は、天然型又はコンセンサス配列（例えば、配列番号６８又は７４）に対して、約１〜約２５個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含み得る。例えば、機能的変異体は、天然型又はコンセンサス配列（例えば、配列番号６８又は７４）に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、又は最大約２５個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、天然型又はコンセンサス配列（例えば、配列番号６８又は７４）と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

特定の実施形態では、治療剤は、ＧＬＰ−２受容体作動薬、その断片又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ＧＬＰ−２ペプチドのＣ末端（配列番号６９、７１、及び７３）に融合したＥＬＰを含む。

いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬は、Ｎ末端及びＣ末端の両方に、１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、ＧＬＰ−２受容体作動薬のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬のＮ末端に位置するＥＬＰは、ＧＬＰ−２受容体作動薬のＣ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、ＧＬＰ−２受容体作動薬のＣ末端に位置するＥＬＰは、ＧＬＰ−２受容体作動薬のＮ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。いくつかの実施形態では、ＥＬＰは、リンカー（配列番号７１及び７３）を介してＧＬＰ−２受容体作動薬のＣ末端及び／又はＮ末端に連結している。いくつかの実施形態では、リンカーは、トリペプチドＧＧＳ配列（配列番号８７）を含む。いくつかの態様では、リンカーは、トリペプチドＧＧＳの単一コピーを含む。別の態様では、リンカーは、トリペプチドＧＧＳの複数の反復部を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＳ配列の２つの反復部（配列番号１０２）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＳ配列の３つの反復部（配列番号１０３）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ペンタペプチドＧＧＧＧＳ配列を含む（配列番号９３）。いくつかの態様では、リンカーは、ペンタペプチドＧＧＧＧＳ（配列番号９３）の単一コピーを含む。別の態様では、リンカーは、ペンタペプチドＧＧＧＧＳの複数の反復部を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳ配列の２つの反復部（配列番号１０４）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳ配列の３つの反復部（配列番号１０５）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ペンタペプチドＰＡＰＡＰ配列（配列番号９４）を含む。いくつかの態様では、リンカーは、ペンタペプチドＰＡＰＡＰの単一コピーを含む。別の態様では、リンカーは、ペンタペプチドＰＡＰＡＰの複数の反復部を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＰＡＰ配列の２つの反復部（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＰＡＰ配列の３つの反復部（配列番号１０７）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ペンタペプチドＥＡＡＡＫ配列（配列番号９５）を含む。いくつかの態様では、リンカーは、ペンタペプチドＥＡＡＡＫの単一コピーを含む。別の態様では、リンカーは、ペンタペプチドＥＡＡＡＫの複数の反復部を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＥＡＡＡＫ配列の２つの反復部（配列番号１０８）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＥＡＡＡＫ配列の３つの反復部（配列番号１０９）を含む。

その他の態様では、本開示は、腸の疾患、例えば炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、例えば潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病（ＣＤ）、若しくは短腸症候群（ＳＢＳ）等；化学療法誘発性の粘膜炎；化学療法誘発性の下痢；又は虚血再灌流傷害等を含む、但しこれらに限定されない腸の疾患を治療又は予防する方法を提供する。該方法は、ＥＬＰ及びＧＬＰ−２受容体作動薬を含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。いくつかの実施形態では、本開示に基づくＧＬＰ−２受容体作動薬による治療は、例えば、ＩＢＤ（例えば、ＵＣ若しくはＣＤ等）若しくはＳＢＳ等の腸の疾患；化学療法誘発性の粘膜炎；化学療法誘発性の下痢；又は虚血再灌流傷害等を含む、但しこれらに限定されない腸の疾患を非限定的に含む、様々な疾患に起因する又はそれと関連する様々な合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

ヘプシジン
特定の実施形態では、活性薬剤は、ヘプシジン（ａｋａＬＥＡＰ−１（肝臓で発現している抗菌ペプチド））、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体である。ヘプシジンは、炎症又は血中鉄レベル上昇に応答して肝細胞により産生される８ｋＤａペプチドホルモンである。

マウスにおいて８３個のアミノ酸からなるプレプロペプチド、並びにラット及びヒトにおいては８４個のアミノ酸からなるプレプロペプチドをエンコードするヘプシジンｃＤＮＡが、鉄の制御を受ける肝臓特異的遺伝子を探索した際に同定された（Ｐｉｇｅｏｎｅｔａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７８１１（２００１））。２４残基からなるＮ末端シグナルペプチドが最初に開裂してプロヘプシジンが生成し、次に更に処理されて、血液及び尿の両方に見出される成熟したヘプシジンが生成する。ヒト尿では、主要なヘプシジンの形態は、２５個のアミノ酸を含有するが、より短い２２個及び２０個のアミノ酸からなるペプチドも存在する。

ヒトヘプシジンは、２５−アミノ酸ペプチド（Ｈｅｐ２５）である。（Ｋｒａｕｓｅｅｔａｌ．，２０００，ＦＥＢＳＬｅｔｔ４８０：１４７−１５０，ａｎｄＰａｒｋｅｔａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７８０６−７８１０を参照）。ヘプシジンの生理活性型２５アミノ酸形態の構造は、４つのジスルフィド結合を形成する８個のシステインを含む単純なヘアピンである（Ｊｏｒｄａｎｅｔａｌ．，２００９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４：２４１５５−６７）。

ヘプシジンは、その受容体、鉄エクスポートチャネル（ｉｒｏｎｅｘｐｏｒｔｃｈａｎｎｅｌ）フェロポーチンと結合し、そしてその内部移行及び分解を引き起こし、これによりフェロポーチン媒介型の血中への鉄放出を低下させる。内部移行は、腸粘膜を横断する鉄輸送、並びに肝臓及びマクロファージによる取り込みを更に低下させる。ヘプシジン発現は、赤血球生成における鉄利用能を減少させる急性及び慢性の炎症において増加する。特定の実施形態では、ヘプシジン治療剤は、ヘプシジン、その断片又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。

特定の実施形態では、ヘプシジンは哺乳動物のヘプシジンである。いくつかの実施形態では、哺乳動物のヘプシジンは、ヒトヘプシジンである（配列番号７５）。いくつかの実施形態では、哺乳動物のヘプシジンは、活性にとって重要であるヘプシジンのＮ末端断片、ＤＴＨＦＰＩＣＩＦ（配列番号８８）を含む。特定の実施形態では、本発明は、生理活性型ヒト２５−アミノ酸形態であるＨｅｐ２５のヘプシジン活性を模倣するペプチド断片を提供する。そのようなペプチドは、「ミニヘプシジン」と呼ばれる。

いくつかの実施形態では、ヘプシジンは、ヘプシジンのＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、又は最大約２０個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約２０個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含むヒトヘプシジンの機能的変異体である。その他の実施形態では、機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号７５）に対して、Ｃ末端において約１〜約２０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含有する。例えば、機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号７５）に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、又は最大約２０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。

タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。本明細書で使用する場合、いくつかの実施形態では、「ヘプシジン活性」を有する化合物とは、対象（例えば、マウス又はヒト）に投与（例えば、非経口注射又は経口投与）したときに、用量依存的及び時間依存的に対象内の血漿鉄濃度を低下させる能力を該化合物が有することを表す（例えば、Ｒｉｖｅｒａｅｔａｌ．，２００５，Ｂｌｏｏｄ，１０６：２１９６−２１９９での実証を参照）。いくつかの実施形態では、Ｎｅｍｅｔｈｅｔａｌ．，２００６，Ｂｌｏｏｄ，１０７：３２８−３３３で教示するように、本発明のペプチドは、フェロポーチン発現細胞株においてフェロポーチンの内部移行及び分解を引き起こす能力によりアッセイしたとき、ｉｎｖｉｔｒｏ活性を有する。Ｉｎｖｉｔｒｏ活性は、Ｎｅｍｅｔｈｅｔａｌ．，２００６，Ｂｌｏｏｄ，１０７：３２８−３３で教示するように、例えば、緑色蛍光タンパク質に融合したフェロポーチンを提示するように工学的に作出された細胞の用量依存的蛍光損失により測定され得る。

いくつかの実施形態では、ヘプシジンは、天然型の配列（例えば、配列番号７５）と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、ヘプシジンは、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

特定の実施形態では、治療剤は、ヘプシジン、その断片又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ヒトヘプシジンのＮ末端（配列番号７６）に融合したＥＬＰを含む。その他の実施形態では、治療剤は、ヒトヘプシジンのＣ末端（配列番号７７）に融合したＥＬＰを含む。

いくつかの実施形態では、ヘプシジンは、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、ヘプシジンは、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、ヘプシジンのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ヘプシジンのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、ヘプシジンのＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、ヘプシジンのＮ末端に位置するＥＬＰは、ヘプシジンペプチドのＣ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。いくつかの実施形態では、ヘプシジンのＣ末端に位置するＥＬＰは、ヘプシジンのＮ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

その他の態様では、本開示は、鉄過剰症、例えば遺伝性のヘモクロマトーシス（ＨＨ）若しくは鉄負荷貧血等；２型ヘモクロマトーシス；心疾患、例えば心筋シデローシス若しくは心不全等；内分泌障害を引き起こす疾患；肝疾患、例えば肝硬変若しくは肝細胞癌等；糖尿病；ベータサラセミア；急性重度感染症；又は真性多血症を含む、但しこれらに限定されない腸の疾患を治療又は予防する方法を提供する。方法には、ＥＬＰ及びヘプシジンを含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくヘプシジン治療剤による治療は、例えば、鉄過剰症、例えば遺伝性のヘモクロマトーシス（ＨＨ）若しくは鉄負荷貧血等；２型ヘモクロマトーシス；心疾患、例えば心筋シデローシス若しくは心不全等；内分泌障害を引き起こす疾患；肝疾患、例えば肝硬変若しくは肝細胞癌等；糖尿病；ベータサラセミア；急性重度感染症；又は真性多血症を含む、但しこれらに限定されない様々な疾患に起因する又はそれと関連した様々な合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）
いくつかの実施形態では、タンパク質活性薬剤は、ＩＧＦ−１、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体である。ＩＧＦ−Ｉは、血漿及びその他の体液、並びに多くの細胞／組織中に存在する単鎖ペプチドであり、３個のジスルフィド結合を含む７０個のアミノ酸を含み、また広範囲の細胞型の増殖を刺激し、そして成長ホルモンのいくつかの作用と関係している。

ＩＧＦ−１は、全身的及び局所的効果の両方を有し、また異なる特異的結合タンパク質と主に関連しており、そのうちの４つは、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、及びＩＧＦＢＰ４と呼ばれる。これらの結合タンパク質は、ＩＧＦ−１の生物学的機能及び利用能を正及び負の両様式で調節する。

ＩＧＦ−１は、多くの異なる細胞型内の原形質膜外面に露出したＩＧＦ−１型受容体との相互作用により主に作用する。ＩＧＦ−１Ｒは、多くの異なる細胞型上で発現しており、従っていくつかの生物組織、すなわち肝臓、腎臓、肺、筋肉、骨組織、及び軟骨、並びに神経組織は、ＩＧＦ−１の作用に依存する。

特定の実施形態では、本開示のＩＧＦ−１治療剤は、ＩＧＦ−１、その断片又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。

特定の実施形態では、ＩＧＦ−１は、哺乳動物のＩＧＦ−１である。いくつかの実施形態では、哺乳動物のＩＧＦ−１は、ヒトＩＧＦ−１（配列番号７８）である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦ−１は、ＩＧＦ−１のＮ末端及び／又はＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、最大約３５個のアミノ酸、最大約４０個のアミノ酸、最大約４５個のアミノ酸、又は最大約５０個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約５０個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、ヒトＩＧＦ−１の断片又は機能的変異体である。その他の実施形態では、断片又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号７８）に対して約１〜約５０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含有する。例えば、断片又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号７８）に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、最大約３５個のアミノ酸、最大約４０個のアミノ酸、最大約４５個のアミノ酸、又は最大約５０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、ＩＧＦ−１、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号７８）と、少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦ−１、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

特定の実施形態では、治療剤は、ＩＧＦ−１、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。特定の実施形態では、治療剤は、ＩＧＦ−１のＣ末端（配列番号７９及び８０）に融合したＥＬＰを含む。

いくつかの実施形態では、ＩＧＦ−１、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、ＩＧＦ−１は、Ｎ末端及びＣ末端の両方に、１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、ＩＧＦ−１のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ＩＧＦ−１のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、ＩＧＦ−１のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、ＩＧＦ−１のＮ末端に位置するＥＬＰは、ＩＧＦ−１のＣ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、ＩＧＦ−１のＣ末端に位置するＥＬＰは、ＩＧＦ−１のＮ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

その他の態様では、本開示は、原発性ＩＧＦ−１欠乏症；神経障害；神経系疾患；がん；腎疾患；肝疾患；肺の疾患；糖尿病；成長欠陥；組換えＧＨに対する中和抗体を発現した、ＧＨ遺伝子が欠損している小児の治療；ラロン症候群若しくはラロン型低身長症；心疾患；又は脳卒中を含む、但しこれらに限定されない疾患を治療又は予防する方法を提供する。該方法は、ＥＬＰ及びＩＧＦ−１を含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくＩＧＦ−１化合物による治療は、化学療法と照射療法、並びに例えば、原発性ＩＧＦ−１欠乏症；神経障害；神経細胞疾患；がん；腎疾患；肝疾患；肺の疾患；糖尿病；成長欠陥；組換えＧＨに対する中和抗体を発現した、ＧＨ遺伝子が欠損している小児の治療；ラロン症候群、又はラロン型低身長症；心疾患；又は脳卒中を含む、但しこれらに限定されない様々な疾患に起因する又はそれと関連した合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

ウロジラチン
いくつかの実施形態では、タンパク質活性薬剤は、ウロジラチン、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体である。ウロジラチンは、ナトリウム利尿ペプチド受容体Ａ（ＮＰＲ−Ａ）作動薬である、３２個のアミノ酸からなるペプチドホルモンである。ウロジラチンは、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）の腎アイソフォームである。ウロジラチンは、腎臓内でのＡＮＰプロホルモンの差次的プロセシングにより形成され、その他のすべての組織とは対照的に、１２６個のアミノ酸からなるプロホルモンがアミノ酸９８と９９の間で開裂してＡＮＰとカリウム利尿ペプチドを形成するのではなく、該プロホルモンはアミノ酸９５と９６の間で開裂する。ＡＮＰプロホルモンが腎臓内で開裂すると、その結果、カリウム利尿ペプチドのＣ末端に由来する４個のアミノ酸（すなわち、トレオニン−アラニン−プロリン−アルギニン）が、ＡＮＰのＮ末端に連結する。従って、ウロジラチンは、Ｎ末端延長部の４個のアミノ酸（ＴＡＰＲ）の付加を除けば、２８アミノ酸含有型ＡＮＰと同一の構造を有する３２アミノ酸含有型ペプチドである。

ウロジラチンは、腎臓において生理学的な量で産生され、差示的プロセシングを受け、そして尿中に分泌され、そして集合管レベルで水とナトリウムの再吸収を制御する傍分泌系に対する基準を形成する（Ｆｏｒｓｓｍａｎｎ，Ｗ．−Ｇ．ｅｔａｌ．，１９９８，ＨｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ１１０（４）：３３５−３５７）。ウロジラチンは、腎臓の血流増加を通じて利尿作用を引き起こす。ウロジラチンは、平均動脈圧の上昇及び血液量の増加に応答して、遠位尿細管及び集合管の細胞から分泌される。ウロジラチンは、血清クレアチニンを低下させ、また尿量を増加させるので、乏尿患者（例えば、急性腎不全及び慢性腎不全の患者等）において重要である。

ウロジラチンは、ＡＮＰよりも強力であり、またＡＮＰの２倍の長さの半減期を有するが、それはウロジラチンのＮ末端が中性エンドペプチダーゼによる不活性化に対して抵抗性であることに起因し得る。特定の実施形態では、本開示のウロジラチン治療剤は、ウロジラチン、その断片又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。

特定の実施形態では、ウロジラチンは、哺乳動物のウロジラチンである。いくつかの実施形態では、哺乳動物のウロジラチンは、ヒトウロジラチン（配列番号８４）である。いくつかの実施形態では、ウロジラチンは、ウロジラチンのＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、又は最大約２５個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約２５個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物のウロジラチンの誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体である。その他の実施形態では、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号８４）に対して、約１〜約２５個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含有する。例えば、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号８４）に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、又は最大約２５個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号８４）と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

特定の実施形態では、治療剤は、ウロジラチン、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ヒトウロジラチンのＣ末端（配列番号８５）に融合したＥＬＰを含む。その他の実施形態では、治療剤は、ヒトウロジラチンのＮ末端（配列番号８６）に融合したＥＬＰを含む。

いくつかの実施形態では、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、ウロジラチンのＮ末端に位置するＥＬＰは、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、ウロジラチンのＣ末端に位置するＥＬＰは、ウロジラチン、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

その他の態様では、本開示は、心疾患、例えば急性心不全（ＡＨＦ）等；又は腎疾患、例えば急性腎不全若しくは慢性腎不全等を含む、但しこれらに限定されない疾患を治療又は予防する方法を提供する。該方法は、ＥＬＰ及びウロジラチンを含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくウロジラチンによる治療は、心疾患、例えばＡＨＦ等；又は腎疾患、例えば急性腎不全若しくは慢性腎不全等を含む、但しこれらに限定されない様々な疾患に起因する又はそれと関連した合併症及び障害を治療及び／又は予防するための利尿薬及び薬剤を含む、但しこれらに限定されない１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

サイモシンβ４
いくつかの実施形態では、タンパク質活性薬剤は、サイモシンβ４、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体である。サイモシンとは、胸腺から初めて同定され、また今日では、その他の多くの組織中に存在することが公知であり、そして異なる多様な生理機能を有する生化学的及び機能的に異なるタンパク質のファミリーを指す。２０を超えるβ−サイモシンのアイソフォームが異なる種で同定されており、またヒトでは、サイモシンβ４、サイモシンβ１０、及びサイモシンβ１５を含む３種のβ−サイモシンが同定されているが、そのすべてが有意なアミノ酸配列相同性を共有する。この相同性にもかかわらず、これらサイモシンβタンパク質のそれぞれは、異なる機能を有する異なる遺伝子産物である。

β−サイモシン中、最も豊富に存在するサイモシンβ４は、高度に保存された水溶性酸性ポリペプチドである。サイモシンβ４は、内皮細胞の移動及び分化期間中にｉｎｖｉｔｒｏで上方制御されるタンパク質として初めて同定された。サイモシンβ４をエンコードする哺乳動物遺伝子は、Ｘ染色体に局在している。ヒトサイモシンβ４、Ｘ連鎖型は、４４個のアミノ酸を有し、そして最初のメチオニル残基が除去されて、４．９ｋＤａの分子量を有する４３個のアミノ酸ペプチドに処理されることにより、Ｘ染色体不活性化を逃れる（Ｇｉｒａｒｄｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，２００３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１０９：１−７）。サイモシンβ４は、細胞質及び細胞の核の両方に局在する。サイモシンβ４は、多くの組織に存在し、また複数の生物学的機能を有する。サイモシンβ４は、アクチン重合を強力に制御し、組織リモデリング、細胞分化、及び傷害後の細胞と組織の治癒を刺激し、並びにいくつかの炎症性ケモカイン及びサイトカインの発現にも関与している。

特定の実施形態では、本開示のサイモシンβ４治療剤は、サイモシンβ４、その断片又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。

特定の実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、哺乳動物のサイモシンβ４である。いくつかの実施形態では、哺乳動物のサイモシンβ４はヒトサイモシンβ４（配列番号８９）である。いくつかの実施形態では、サイモシンβ４は、サイモシンβ４のＮ末端及び／又はＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、又は最大約３５個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約３５個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物のサイモシンβ４の誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体である。その他の実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号８９）に対して、約１〜約３５個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含有する。例えば、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号８９）に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、又は最大約３５個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号８９）と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

特定の実施形態では、治療剤は、サイモシンβ４、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、サイモシンβ４のＣ末端（配列番号９０）に融合したＥＬＰを含む。

いくつかの実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端に位置するＥＬＰは、サイモシンβ４のＣ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、サイモシンβ４、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端に位置するＥＬＰは、Ｎ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

その他の態様では、本開示は、心不全；肺高血圧症；虚血性心疾患；ドライアイ；又は肝線維症を含む、但しこれらに限定されない疾患を治療又は予防する方法を提供する。該方法は、ＥＬＰ及びサイモシンβ４を含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくサイモシンβ４による治療は、例えば、心不全；肺高血圧症；虚血性心疾患；ドライアイ；又は肝線維症を含む、但しこれらに限定されない様々な疾患に起因する又はそれと関連した合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

ＴＲＡＩＬ
特定の実施形態では、タンパク質活性薬剤は、ＴＲＡＩＬ（ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド）、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体である。

外因性細胞死経路は、細胞内シグナリングイベントを引き起こすリガンド−受容体相互作用を契機とし、最終的には、標的細胞死を引き起こす（アポトーシス）。１つのそのようなリガンドとして、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバーであるＴＲＡＩＬ又はＡｐｏ２Ｌが挙げられる（Ｗｉｌｅｙ，Ｓ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，１９９５，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ３：６７３−６８２；Ｐｉｔｔｉ，Ｒ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１２６８７−１２６９０）。ＴＲＡＩＬは、２８１個のアミノ酸からなるＩＩ型膜タンパク質である。その細胞外領域は、アミノ酸残基１１４〜２８１を含み、そしてプロテアーゼにより開裂すると、やはり生物学的に活性な２０ｋＤａサイズの可溶性のｓＴＲＡＩＬ分子が形成される。内因性のＴＲＡＩＬは、その生物学的機能にとって重要な要件であるホモトリマーとして存在する。活性化Ｔリンパ球及びＮＫ細胞は、高レベルのＴＲＡＩＬを発現する。

ＴＲＡＩＬタンパク質は、例えば、アポトーシス促進性のＴＲＡＩＬ表面受容体１及び２（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１／Ｒ２又はＤＲ４及びＤＲ５）に結合し、それを活性化させることにより作用する。ＴＲＡＩＬ及びｓＴＲＡＩＬのいずれも、標的細胞上に存在するＴＲＡＩＬ受容体との相互作用によりアポトーシスを引き起こす能力を有する。

特定の実施形態では、本開示のＴＲＡＩＬ治療剤は、ＴＲＡＩＬ、その断片又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。

特定の実施形態では、ＴＲＡＩＬは、哺乳動物のＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、哺乳動物のＴＲＡＩＬは、ヒトＴＲＡＩＬ（配列番号９１）である。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＩＬは、ＴＲＡＩＬのＮ末端及び／又はＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、最大約３５個のアミノ酸、最大約４０個のアミノ酸、最大約４５個のアミノ酸、最大約５０個のアミノ酸、最大約５５個のアミノ酸、最大約６０個のアミノ酸、最大約６５個のアミノ酸、最大約７０個のアミノ酸、最大約７５個のアミノ酸、最大約８０個のアミノ酸、最大約８５個のアミノ酸、最大約９０個のアミノ酸、最大約９５個のアミノ酸、最大約１００個のアミノ酸、最大約１０５個のアミノ酸、最大約１１０個のアミノ酸、最大約１１５個のアミノ酸、最大約１２０個のアミノ酸、最大約１２５個のアミノ酸、最大約１３０個のアミノ酸、最大約１３５個のアミノ酸、最大約１４０個のアミノ酸、最大約１４５個のアミノ酸、最大約１５０個のアミノ酸、最大約１５５個のアミノ酸、又は最大約１６０個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約１６０個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物のＴＲＡＩＬのその誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体であり得る。ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号９１）に対して、約１〜約１６０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含有し得る。例えば、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号９１）に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、最大約３５個のアミノ酸、最大約４０個のアミノ酸、最大約４５個のアミノ酸、最大約５０個のアミノ酸、最大約５５個のアミノ酸、最大約６０個のアミノ酸、最大約６５個のアミノ酸、最大約７０個のアミノ酸、最大約７５個のアミノ酸、最大約８０個のアミノ酸、最大約８５個のアミノ酸、最大約９０個のアミノ酸、最大約９５個のアミノ酸、最大約１００個のアミノ酸、最大約１０５個のアミノ酸、最大約１１０個のアミノ酸、最大約１１５個のアミノ酸、最大約１２０個のアミノ酸、最大約１２５個のアミノ酸、最大約１３０個のアミノ酸、最大約１３５個のアミノ酸、最大約１４０個のアミノ酸、最大約１４５個のアミノ酸、最大約１５０個のアミノ酸、最大約１５５個のアミノ酸、又は最大約１６０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号９１）と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

特定の実施形態では、治療剤は、ＴＲＡＩＬ、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ＴＲＡＩＬ（配列番号９２）のＮ末端に融合したＥＬＰを含む。

いくつかの実施形態では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端に位置するＥＬＰは、Ｃ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、ＴＲＡＩＬのＣ末端に位置するＥＬＰは、Ｎ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

その他の態様では、本開示は、腫瘍形成及び様々な種類のがん；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；硬変症；再発性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の結果として生じた、同所性肝臓移植後（ＰＯＬＴ）レシピエントにおける移植後の肝線維症又は硬変症；膵臓線維症を含む、但しこれらに限定されない疾患を治療又は予防する方法を提供する。該方法は、ＥＬＰ及びＴＲＡＩＬを含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくＴＲＡＩＬによる治療は、化学療法又は放射線療法と組み合わせることも可能である。その他の実施形態では、本開示に基づくＴＲＡＩＬによる治療は、例えば、腫瘍形成及び様々な種類のがん；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；硬変症；再発性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の結果として生じた、同所性肝臓移植後（ＰＯＬＴ）レシピエントにおける移植後の肝線維症又は硬変症；膵臓線維症を含む、但しこれらに限定されない様々な疾患と関連した合併症及び障害を治療及び／又は予防するため薬剤のから選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）
線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）は、動物の脂質レベル、体重、及びグルコース代謝に対して有益な効果を生み出すＦＧＦファミリーのメンバーである。ＦＧＦ２１を過剰発現する遺伝子導入マウスでは、グルコース及びトリグリセリドレベルの低下、及び食餌誘発性肥満に対する耐性が引き起こされることが明らかにされている（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖｅｔａｌ．（２００５），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５；１６２７−１６３５）。齧歯類及び霊長類に外因性ＦＧＦ２１を投与すると、血中グルコースレベルの正常化、トリグリセリド及びコレステロールレベルの低下、耐糖能の改善、及びインスリン感受性の改善を引き起こす（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖｅｔａｌ．（２００７），Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４８：７７４−７８１）。実験動物モデルを対象にＦＧＦ２１を投与すると、エネルギー消費量、身体活動、及び代謝速度が増加することにより、体重及び体脂肪が低下することが明らかにされている（ＬｏｎｇａｎｄＫｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ（２０１１）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１８１２：７９１−７９５）。

ＦＧＦ２１シグナリングは、βΚｌｏｔｈｏ（ＫＬＢ）、及び３つの異なるＦＧＦ受容体（ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦＲ２ｃ、又はＦＧＦＲ３ｃ）のうちの１つを含む受容体複合体とのその相互作用によって媒介される（Ｏｇａｗａｅｔａｌ．（２００７），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０４：７４３２−７４３７；Ｓｕｚｕｋｉｅｔａｌ．（２００８），Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２２：１００６−１０１４）。ＩｎｖｉｖｏでのＦＧＦ２１シグナリングに対する主要な機能的受容体は、ＫＬＢ／ＦＧＦＲ１ｃ複合体であると考えられている（この複合体は、本明細書では「ＦＧＦ２１Ｒ」と呼ぶ）。

ＦＧＦ２１シグナリングの薬理学的活性化が、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、非アルコール性脂肪性肝疾患（非アルコール性脂肪性肝炎、ＮＡＳＨ）、及びその他の代謝的状態を含む、ヒトにおける様々な疾患及び障害の治療を目的として提案されている（ＧｉｍｅｎｏａｎｄＭｏｌｌｅｒ（２０１４）ＴｒｅｎｄｓＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２５，３０３−３１１）。ＦＧＦ類似体ＬＹ２４０５３１９（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖｅｔａｌ．（２０１３）ＰＬＯＳＯｎｅ，８，ｅ５８５７５）が、２型糖尿病及び肥満の患者を対象とした臨床トライアルで評価された（Ｇａｉｃｈｅｔａｌ．（２０１３）ＣｅｌｌＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ１８，３３３−３４０）．Ｈｅｃｈｔｅｔａｌ．（２０１２，ＰＬＯＳＯｎｅ，７（１１）：ｅ４９３４５）は、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに融合した長時間作用型ＦＧＦ２１類似体を開発した。

特定の実施形態では、本開示のＦＧＦ２１治療剤は、ＦＧＦ２１、その断片又は機能的変異体と融合した又はコンジュゲートした、持続放出を提供するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、持続放出を提供するアミノ酸配列はＥＬＰである。

特定の実施形態では、ＦＧＦ２１は、哺乳動物のＦＧＦ２１である。いくつかの実施形態では、哺乳動物のＦＧＦ２１は、ヒトＦＧＦ２１（配列番号１１０）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１は、ＦＧＦ２１のＮ末端及び／又はＣ末端において、例えば、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、最大約３５個のアミノ酸、最大約４０個のアミノ酸、最大約４５個のアミノ酸、最大約５０個のアミノ酸、最大約５５個のアミノ酸、最大約６０個のアミノ酸、最大約６５個のアミノ酸、最大約７０個のアミノ酸、最大約７５個のアミノ酸、最大約８０個のアミノ酸、最大約８５個のアミノ酸、最大約９０個のアミノ酸、最大約９５個のアミノ酸、最大約１００個のアミノ酸、最大約１０５個のアミノ酸、最大約１１０個のアミノ酸、最大約１１５個のアミノ酸、最大約１２０個のアミノ酸、最大約１２５個のアミノ酸、最大約１３０個のアミノ酸、最大約１３５個のアミノ酸、最大約１４０個のアミノ酸、最大約１４５個のアミノ酸、最大約１５０個のアミノ酸、最大約１５５個のアミノ酸、又は最大約１６０個のアミノ酸による場合を含む、約１〜約１６０個のアミノ酸によりトランケーションされた機能的断片を含む、哺乳動物ＦＧＦ２１のその誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体であり得る。ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号１１０）に対して、約１〜約１６０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を含み得る。例えば、ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号１１０）に対して、最大約３個のアミノ酸、最大約５個のアミノ酸、最大約１０個のアミノ酸、最大約１５個のアミノ酸、最大約２０個のアミノ酸、最大約２５個のアミノ酸、最大約３０個のアミノ酸、最大約３５個のアミノ酸、最大約４０個のアミノ酸、最大約４５個のアミノ酸、最大約５０個のアミノ酸、最大約５５個のアミノ酸、最大約６０個のアミノ酸、最大約６５個のアミノ酸、最大約７０個のアミノ酸、最大約７５個のアミノ酸、最大約８０個のアミノ酸、最大約８５個のアミノ酸、最大約９０個のアミノ酸、最大約９５個のアミノ酸、最大約１００個のアミノ酸、最大約１０５個のアミノ酸、最大約１１０個のアミノ酸、最大約１１５個のアミノ酸、最大約１２０個のアミノ酸、最大約１２５個のアミノ酸、最大約１３０個のアミノ酸、最大約１３５個のアミノ酸、最大約１４０個のアミノ酸、最大約１４５個のアミノ酸、最大約１５０個のアミノ酸、最大約１５５個のアミノ酸、又は最大約１６０個のアミノ酸の挿入、欠損、及び／又は置換を有し得る。タンパク質の活性は、任意の利用可能なアッセイ法を使用して確認又はアッセイされ得る。その他の実施形態では、ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、天然型の配列（例えば、配列番号１１０）と少なくとも約７５％の同一性、約８０％の同一性、約９０％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、又は約９９％の同一性を有する。同一性のパーセンテージは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／において利用可能なアライメントプログラムＥＭＢＯＳＳＮｅｅｄｌｅを使用して計算可能である。下記のデフォルトパラメーター、すなわちＰｒｏｔｅｉｎＷｅｉｇｈｔＭａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ＧａｐＯｐｅｎ＝１０；ＧａｐＥｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．１が、ペアワイズアライメント用として利用可能である。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＩＬ、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、当技術分野において公知の追加の化学修飾を含み得る。

特定の実施形態では、治療剤は、ＦＧＦ２１、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端又はＣ末端に融合したＥＬＰを含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、ＦＧＦ２１（配列番号１１０）のＮ末端に融合したＥＬＰを含む。

いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、２つ以上のＥＬＰ配列を有する融合タンパク質の状態にある。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体は、Ｎ末端及びＣ末端の両方に１つ又は複数のＥＬＰを有する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０〜約１８０個の反復性構造単位を含む。その他の実施形態では、ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約９０個よりも少ない反復性構造単位を含む。その他の態様では、ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＣ末端及び／又はＮ末端に位置するＥＬＰは、約１８０個を上回る反復性構造単位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズはほぼ同一である。その他の実施形態では、Ｎ末端及びＣ末端に位置する２つ以上のＥＬＰのサイズは異なる。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１、誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端に位置するＥＬＰは、Ｃ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。その他の実施形態では、ＦＧＦ２１のＣ末端に位置するＥＬＰは、Ｎ末端に位置するＥＬＰよりも大きい。

いくつかの実施形態では、治療剤は、ＦＧＦ２１、その誘導体、類似体、模倣体、断片、又は機能的変異体のＮ末端に融合したＥＬＰを含み、そしてＧＬＰ−１作動薬がＥＬＰのＮ末端に融合している（配列番号１３３及び１３４）。そのような治療剤は、糖尿病、肥満、及び関連する障害の治療について、ＦＧＦ２１活性とＧＬＰ−１活性の両方の利益を併せ持つ。

その他の態様では、本開示は、腫瘍形成及び様々な種類のがん；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；硬変症；再発性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の結果として生じた、同所性肝臓移植後（ＰＯＬＴ）レシピエントにおける移植後の肝線維症又は硬変症；膵臓線維症を含む、但しこれらに限定されない疾患を治療又は予防する方法を提供する。該方法は、ＥＬＰ及びＦＧＦ２１を含む治療剤（上記のような）を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む。一般的に、患者は、ヒト又はヒト以外の動物患者（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、又はウマ）であり得る。好ましくは、患者はヒトである。

いくつかの実施形態では、本開示に基づくＦＧＦ２１による治療は、例えば、腫瘍形成及び様々な種類のがん；非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；硬変症；再発性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の結果として生じた、同所性肝臓移植後（ＰＯＬＴ）レシピエントにおける移植後の肝線維症又は硬変症；膵臓線維症を含む、但しこれらに限定されない様々な疾患と関連した合併症及び障害を治療及び／又は予防するための薬剤から選択される１つ又は複数の薬理学的に活性な物質と組み合わせることも可能である。

製剤
本開示は、本明細書に開示する治療剤、及び１つ若しくは複数の薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む持続放出型の製剤を提供する。例えば、そのような賦形剤は、塩及び水素結合を安定化するように作用し得るその他の賦形剤を含む。当技術分野において公知の任意の適する賦形剤が利用可能である。代表的な賦形剤として、アミノ酸、例えばヒスチジン、グリシン、又はアルギニン等；グリセロール；糖、例えばスクロース等；界面活性剤、例えばポリソルベート２０及びポリソルベート８０等；クエン酸；クエン酸ナトリウム；酸化防止剤；アルカリ土類金属の塩を含む塩、例えば、ナトリウム、カリウム、及びカルシウム等；カウンターイオン、例えば塩化物及びリン酸等；糖アルコール（例えば、マンニトール）；防腐剤；糖アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）；及び緩衝剤が挙げられるが、但しこれらに限定されない。代表的な塩として、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、二塩基性リン酸ナトリウム、塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びリン酸カリウムが挙げられる。

治療剤は、体温で（例えば３７℃、又はいくつかの実施形態では３４〜３６℃において）マトリックス形成を可能にするのに十分なｐＨ、イオン強度で、及び一般的に賦形剤と共に製剤化される。治療剤は、一般的に、保管条件ではマトリックスを形成しないように調製される。製剤は、凍結、冷蔵、又は室温で保管可能である。保管条件は、一般的に製剤の転移温度未満、例えば約３２℃未満、又は約３０℃未満、又は約２７℃未満、又は約２５℃未満、又は約２０℃未満、又は約１５℃未満等である。例えば、製剤は、血液と等張であり得る、又は生理条件を模倣するイオン強度を有する。例えば、製剤は、少なくとも２５ｍＭの塩化ナトリウム、又は少なくとも３０ｍＭの塩化ナトリウム、又は少なくとも４０ｍＭの塩化ナトリウム、又は少なくとも５０ｍＭの塩化ナトリウム、又は少なくとも７５ｍＭの塩化ナトリウム、又は少なくとも１００ｍＭの塩化ナトリウム、又は少なくとも１５０ｍＭの塩化ナトリウムのイオン強度を有し得る。特定の実施形態では、製剤は、０．９％の生理食塩水（１５４ｍＭの塩化ナトリウム）のイオン強度と同等のイオン強度を有する。

いくつかの実施形態では、製剤は保管条件で安定である。保管条件は、製剤を安定的に保管するのに使用される任意の条件であり得る。いくつかの実施形態では、製剤は冷蔵される。いくつかの実施形態では、製剤は凍結される。いくつかの実施形態では、保管条件として約３０℃未満の温度が挙げられる。いくつかの実施形態では、保管条件として約２℃〜約８℃の温度が挙げられる。いくつかの実施形態では、保管条件として０℃未満の温度が挙げられる。いくつかの実施形態では、保管条件として、約−１５℃〜約−８０℃の温度が挙げられる。

安定性は、当技術分野における任意の適する手段を使用して測定可能である。一般的に、安定な製剤とは、５％未満の分解生成物の増加又は不純物しか示さない製剤である。いくつかの実施形態では、製剤は、保管条件において少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約４ヶ月、少なくとも約５ヶ月、少なくとも約６ヶ月、又は少なくとも約１年、又はそれ超の期間安定である。いくつかの実施形態では、製剤は、２〜８℃において、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約４ヶ月、少なくとも約５ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約１年、又は少なくとも約２年、又はそれ超の期間安定である。いくつかの実施形態では、製剤は、２５℃において、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約４ヶ月、少なくとも約５ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約１年、又は少なくとも約２年、又はそれ超の期間安定である。いくつかの実施形態では、製剤は、−１５℃〜約−８０℃において、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約４ヶ月、少なくとも約５ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約１年、又は少なくとも約２年、又はそれ超の期間安定である。

いくつかの実施形態では、製剤は、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、塩基性リン酸ナトリウム、ヒスチジン、アルギニン、グリシン、グリセロール、抗菌性防腐剤（例えば、メタクレゾール）、張度調整剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ−ａｄｊｕｓｔｉｎｇａｇｅｎｔ）（例えば、マンニトール）、氷酢酸、酢酸ナトリウム三水和物；スクロース、塩基性リン酸ナトリウム一水和物、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物、亜鉛、ｍ−クレゾール、フェノール、ソルビトール、ポリソルベート８０、及びポリソルベート２０のうちの２つ以上を含む。

いくつかの実施形態では、製剤は、ヒスチジン約１０ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲で、ヒスチジン又は別のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ヒスチジン約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲で、ヒスチジン又は別のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ヒスチジン約１５ｍＭ〜約２５ｍＭの範囲で、ヒスチジン又は別のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ＮａＣｌ約１０ｍＭ〜約１６５ｍＭの範囲で、ＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５０ｍＭ〜約１６５ｍＭの間のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５４ｍＭ〜約１６２ｍＭの間のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１１０ｍＭ〜約１６２ｍＭの間のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲でリン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭの範囲でリン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２ｍＭ〜約１０ｍＭの範囲で塩基性リン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４ｍＭ〜約８ｍＭの範囲で塩基性リン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１ｍＭ〜約１０ｍＭの範囲で二塩基性リン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２ｍＭ〜約７ｍＭの範囲で二塩基性リン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２ｍＭ〜約５ｍＭの範囲で二塩基性リン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．０１％〜約０．２％の範囲でポリソルベート２０を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約０．０１％〜約０．２％の範囲でポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム（約７ｍＭの塩基性リン酸ナトリウム及び約３ｍＭの二塩基性リン酸ナトリウム）、約１１０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１％のポリソルベート２０を含む。

いくつかの実施形態では、製剤は、生理学的なｐＨで製剤化される。いくつかの実施形態では、製剤は、約５．５〜約７．５の範囲のｐＨで製剤化される。いくつかの実施形態では、製剤は、約６．０〜約７．０の範囲のｐＨで製剤化される。いくつかの実施形態では、製剤は、約６．５〜約７．０の範囲のｐＨで製剤化される。いくつかの実施形態では、より低いｐＨの製剤は、より高いｐＨの製剤と比較して改善した製剤安定性を示す。いくつかの実施形態では、ｐＨが約６．５の製剤は、ｐＨが約７．０の製剤と比較して改善した安定性を示す。いくつかの実施形態では、ｐＨが約６．０の製剤は、ｐＨが約６．５の製剤と比較して改善した安定性を示す。いくつかの実施形態では、より低いｐＨの製剤は、より高いｐＨの製剤と比較して、より高いパーセンテージのモノマーを保持する。いくつかの実施形態では、ｐＨが約６．５の製剤は、ｐＨが約７．０の製剤と比較して、より高いパーセンテージのモノマーを保持する。いくつかの実施形態では、ｐＨが約６．０の製剤は、ｐＨが約６．５の製剤と比較して、より高いパーセンテージのモノマーを保持する。

製剤中の治療剤のタンパク質濃度は、投与温度においてマトリックスの形成を促進するように調整される。例えば、より高いタンパク質濃度は、マトリックスの形成を促進するのに役立ち、またこの目的に必要とされるタンパク質濃度は、使用されるＥＬＰシリーズに応じて変化する。例えば、ＥＬＰ１−１２０、又は匹敵する転移温度を有するアミノ酸配列を使用する複数の実施形態では、タンパク質は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、又は約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する。ＥＬＰ４−１２０、又は匹敵する転移温度を有するアミノ酸配列を使用する複数の実施形態では、タンパク質は、約０．００５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、又は約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する。

いくつかの実施形態では、治療剤は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在し得る、又は約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する。いくつかの実施形態では、治療剤は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、又は約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１１０ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する。いくつかの実施形態では、治療剤は、約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

いくつかの態様では、本開示は、本明細書に開示する活性薬剤の持続放出型投薬計画を送達する方法を提供する。該方法は、本明細書に記載する医薬組成物を、必要とする対象に投与することを含み、該医薬組成物は、１ヶ月当たり約１〜約８回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１ヶ月当たり約１回、約２回、約３回、及び／又は約４回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１日１回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１週間に１〜３回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２週間毎に１回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１ヶ月に１〜２回投与される。特定の実施形態では、医薬組成物は、１ヶ月当たり約１回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２ヶ月毎に約１回、３ヶ月毎に約１回、４ヶ月毎に約１回、５ヶ月毎に約１回、及び／又は６ヶ月毎に約１回投与される。医薬組成物は、１週間当たり１回、１週間当たり２回、又は１ヶ月当たり１〜８回投与するための事前充填されたペン又はシリンジの形態で包装され得る、或いは従来型のバイアル等に充填され得る。

いくつかの実施形態では、製剤は、ほぼ１ヶ月に１回投与され、そして皮下又は筋肉内に投与され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、ほぼ１週間に１回投与され、そして皮下又は筋肉内に投与され得る。いくつかの実施形態では、投与部位は、病理学的部位ではない、例えば、意図した作用部位ではない。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示する医薬組成物は、長期的に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物は、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約１０年間、又はそれ超の期間投与される。医薬組成物は、本明細書に開示する任意の必要とされる用量及び／又は頻度で投与され得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示する医薬組成物は、疾患又は障害の症状が改善するまで投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する医薬組成物は、疾患又は障害の症状が良化、遅延、及び／又は治癒するまで投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示する医薬組成物は、患者が１つ又は複数の疾患又は障害の症状を示し始める前に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する医薬組成物は、疾患又は障害の症状が発現したときに投与される。

治療剤は、薬剤が病理学的部位又は作用部位に対して局所的に送達されないことを意味する「全身送達」用として一般的に製剤化される。むしろ、薬剤は注射部位から血流中に吸収され、その血流中で薬剤は全身的に作用する、又は循環により作用部位に輸送される。治療剤は、任意の公知の経路により、例えば経口、静脈内、筋肉内、鼻腔、皮下、膣腔内、及び直腸内等により投与され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、一般的に皮下投与用である。いくつかの実施形態では、薬剤が皮下に投与されると、薬物動態（ＰＫ）パラメーターは延長する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質の半減期は延長している。いくつかの実施形態では、薬剤が皮下に投与されると、その他の手段により（例えば、静脈内に）投与される薬剤と比較して、ＰＫパラメーターは延長する。いくつかの実施形態では、薬剤が皮下に投与されると、その他の手段により（例えば、静脈内に）投与される薬剤と比較して、薬剤のデポは延長する。注射部位からの低速吸収を提供することにより、腎クリアランス及び分解が制御可能となり、これにより所望のＰＫプロファイルが実現する。

有利には、組成物は、活性薬剤の持続放出に起因する延長した薬物動態曝露を提供する。特別な態様では、最大曝露レベルは、投与後約１０時間、約２４時間、約４８時間、又は約７２時間において達成され得る；一般的には、最大曝露レベルは、投与後約１０時間〜約４８時間の間に達成される。最大曝露レベルが達成された後、組成物は持続性の放出速度を実現し得るが、それによって最大レベルの相当なパーセンテージがある期間得られる。例えば、持続率は、最大曝露レベルの約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％であり得る。持続率が維持される代表的な期間は、最大曝露レベルが達成された後、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約４週間、約６週間、又は約８週間である。その後、持続率は、低曝露率まで低下し得る。そのような低曝露率は、最大曝露レベルの約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、又は約６０％であり得る。例えば、１つの実施形態では（ＰＥ０２５６）、最大曝露レベル１０００ｎｇ／ｍＬが、約１〜２日のうちに得られる。この期間後、最大曝露レベルの約７０〜１００％の持続率がおよそ１０〜１２日目までに維持され、その後、約６０％から約１０％に減少した低下曝露率が、残りの試験期間について得られる。

様々な実施形態では、活性薬剤の血漿濃度は、複数回、例えば少なくとも２回、少なくとも約５回、又は少なくとも約１０回等の製剤投与を経ても、約２０倍、又は約１０倍、又は約５倍、又は約３倍を超えて変化しない。いくつかの実施形態では、活性薬剤の血漿濃度は、各投与間で、約２０倍、又は約１０倍、又は約５倍、又は約３倍を超えて変化しない。いくつかの実施形態では、定常状態に達するまで（例えば、約３〜約４回の投与後）、若干の蓄積が生ずる。投与は、実質的に均等間隔、例えば、１日約１回、又は１週間当たり約１回、又は１ヶ月当たり１〜約５回、又は２ヶ月毎に約１回、又は３ヶ月毎に約１回等である。その他の実施形態では、用量は、数回の投与において着実に増加し得るが、そうすると５回又はそれ超の投与後には、定常状態に達する。

本明細書に開示の医薬組成物は、非融合又は非コンジュゲート型のカウンターパートよりも少ない用量及び／又は少ない頻度で投与され得る。当業者は、いずれの場合にも望ましい用量を決定することができるが、治療ベネフィットを達成するための治療剤の適する用量は、例えば、１用量につき、レシピエントの体重１キログラム当たり約１マイクログラム（μｇ）〜約１００ミリグラム（ｍｇ）の範囲、好ましくは１用量につき、体重１キログラム当たり約１０μｇ〜約５０ｍｇの範囲、及び最も好ましくは１用量につき、体重１キログラム当たり約１０μｇ〜約５０ｍｇの範囲であり得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、低用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１用量につき、体重１キログラム当たり１ｍｇ〜１用量につき、体重１キログラム当たり約９ｍｇの間の用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１用量につき、体重１キログラム当たり約１ｍｇ、１用量につき、体重１キログラム当たり約３ｍｇ、及び／又は１用量につき、体重１キログラム当たり約９ｍｇで投与される。望ましい用量は、１日を通じて１回の用量、又はしかるべき間隔で投与される２回若しくはそれ超のサブ用量として提供され得る。このようなサブ用量は、例えば、１単位剤形当たり、有効成分約１０μｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは約５０μｇ〜約５００ｍｇ、及び最も好ましくは約５０μｇ〜約２５０ｍｇを含有する単位剤形で投与され得る。或いは、レシピエントの状態が必要とする場合には、用量は連続輸液として投与され得る。

特定の実施形態では、対象はヒトであるが、その他の実施形態では、ヒト以外の哺乳動物、例えば飼い慣らされたペット（例えば、イヌ若しくはネコ）、又は家畜若しくは農耕動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、又はブタ）等であり得る。

単数形、例えば「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」等が本出願全体を通じて便宜上使用されるが、但し、文脈又は明示的記述が別途示唆する場合を除き、単数形は複数形も含むように意図されているものと理解すべきである。すべての数値範囲は、該数値範囲内の数値の点それぞれをすべて含むと理解されるべきであり、また各数値の点を個々にすべて列挙するものと解釈されるべきである。同一の成分又は特性に関する全範囲の端部の点も含まれ、そして独立に組み合わせ可能であるように意図される。

用語「約」は、引用された数値表示と関連して使用される場合、引用された数値表示±引用された数値表示の最大１０％を意味する。例えば、「約５０」という言語は、４５〜５５の範囲をカバーする。

本明細書で使用する場合、単語「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」とその変化形は非限定的であり、すなわちリスト内に各事項を列挙したからといって、この技術の物質、組成物、デバイス、及び方法においてもやはり有用であり得るその他の類似した事項を除外するに当たらないように意図されている。同様に、用語「〜することが可能である（ｃａｎ）」及び「〜することができる（ｍａｙ）」、並びにその変化形も非限定的であり、すなわち実施形態が特定の要素又は特性を含むことが可能である、又は含むことができるという記述は、そのような要素又は特性を含まない本技術のその他の実施形態が除外されないように意図されている。非制限的用語「〜を含むこと（ｃｏｍｐｉｓｉｎｇ）」は、例えば、〜を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、〜を含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）、又は〜を有すること（ｈａｖｉｎｇ）等の用語の類義語として、本開示を記載及び主張するために本明細書において使用されるが、本技術又はその実施形態は、より制限的用語、例えば列挙した配合物「からなる」又は「から本質的になる」等を使用して代替的に記載される場合もある。

本明細書で使用する場合、「半減期」（一般的に、ｉｎｖｉｖｏでの半減期又は循環半減期を意味する）は、活性薬剤の生物活性が５０％消失するのに必要とされる期間である。いくつかの実施形態では、この用語は、延長した曝露及び長期半減期の両方（例えば、非コンジュゲート型ペプチドと比較して、それより低速化した注射部位からの取り込み及び排出遅延の両方）を含む。

別途規定しない限り、本明細書内のすべての技術的及び科学的用語は、本開示が属する当業者により一般的に理解される意味と同一の意味を有する。本明細書に記載する方法及び物質と類似する又は同等の任意の方法及び物質が、本開示の実践又は試験において利用可能であるが、好ましい方法及び物質が本明細書に記載されている。

本開示は、下記の非限定的な実施例により更に説明される。

［実施例１］
ＣＮＰＥＬＰ構築物の調製
ＣＮＰ配列の３７個のアミノ酸からなるバージョンをエンコードするＤＮＡを合成し、制限酵素ＢｇｌＩ／ＥｃｏＲＩで消化し、次にプラスミドｐＰＥ０００３にサブクローン化してプラスミドｐＰＥ０４９３を提供し、ＣＮＰ配列をＥＬＰ１−１２０配列のＣ末端に配置した。

ＣＮＰ配列の３７個のアミノ酸からなるバージョンをエンコードするＤＮＡを合成し、制限酵素ＸｂａＩ及びＢｓｒＧＩで消化し、次にＸｂａＩ及びＡｃｃ６５Ｉで切断したプラスミドｐＰＥ０００３にサブクローン化してプラスミドｐＰＥ０５３１を提供し、ＣＮＰ配列をＥＬＰ１−１２０配列のＮ末端に配置した。

ＣＮＰ配列の３７個のアミノ酸からなるバージョンをエンコードするＤＮＡを、グリシン及びセリン反復リンカー（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）を含めて合成した。これを、制限酵素ＸｂａＩ及びＢｓｒＧＩで消化し、次にＸｂａＩ及びＡｃｃ６５Ｉで切断したプラスミドｐＰＥ０００３にサブクローン化してプラスミドｐＰＥ０５５２を提供し、ＣＮＰ配列をＥＬＰ１−１２０配列のＮ末端に配置し、両配列の間にリンカーを配置した。

ＣＮＰ配列の２２個のアミノ酸からなるバージョンをエンコードするＤＮＡを合成し、制限酵素ＢｇｌＩ及びＥｃｏＲＩで消化し、次にプラスミドｐＰＥ０００３にサブクローン化してプラスミドｐＰＥ０５１４を提供し、ＣＮＰ配列をＥＬＰ１−１２０配列のＣ末端に配置した。

ＣＮＰ配列の２２個のアミノ酸からなるバージョンをエンコードするＤＮＡを合成し、制限酵素ＸｂａＩ及びＢｓｒＧＩで消化し、次にＸｂａＩ及びＡｃｃ６５Ｉで切断したプラスミドｐＰＥ０００３にサブクローン化してプラスミドｐＰＥ０５５０を提供し、ＣＮＰ配列をＥＬＰ１−１２０配列のＮ末端に配置した。

ＣＮＰ配列の２２個のアミノ酸からなるバージョンをエンコードするＤＮＡを、グリシン及びセリン反復リンカー（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）を含め合成した。これを制限酵素ＸｂａＩ及びＢｓｒＧＩで消化し、次にＸｂａＩ及びＡｃｃ６５Ｉで切断したプラスミドｐＰＥ０００３にサブクローン化してプラスミドｐＰＥ０５６５を提供し、ＣＮＰ配列をＥＬＰ１−１２０配列のＮ末端に配置し、両配列の間にリンカーを配置した。

［実施例２］
ＣＮＰ構築物の効力決定
実施例１に記載の精製されたＣＮＰ構築物の効力を、Ｂ型ナトリウム利尿受容体（ＮＰＲＢ）を発現する一次子宮線維芽細胞、及びｃＧＭＰ蛍光アッセイキット（ＣａｔｃｈＰｏｉｎｔ、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ社、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を利用して実証した。受容体が活性化したとき、細胞内でｃＧＭＰの生成を引き起こす。この細胞を溶解し、そしてｃＧＭＰの量をｃＧＭＰの競合イムノアッセイ法により検出する。各サンプル中のｃＧＭＰは、抗ｃＧＭＰ抗体上の結合部位に対してホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識ｃＧＭＰコンジュゲートと競合する。ｃＧＭＰが存在しない場合、ほとんどのコンジュゲートは、抗体に結合する。ｃＧＭＰの濃度を増加させると、結合したコンジュゲートの量は競合的に減少し、ＨＲＰ活性測定値も減少する。

アッセイ前日に、一次子宮線維芽細胞を、９６ウェル組織培養プレート上に播種し、そして３７℃、５％のＣＯ_２中、オーバーナイトでインキュベートした。翌日、ＣＮＰ構築物の連続希釈物を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）中で調製した。細胞をクレブス−リンガー炭酸水素バッファー（ＫＲＢ）でリンスし、次にｃＧＭＰの分解を防止するために、２ｍＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を含むＫＲＢを用いて、室温で１０分間インキュベートした。サンプルの連続希釈物を、次にプレートに重複して添加し、そして該プレートを３７℃、５％のＣＯ_２中で４０分間インキュベートした。細胞溶解バッファーを、次に各ウェルに添加して細胞を溶解し、そしてｃＧＭＰを放出させた。このサンプルを、次にｃＧＭＰアッセイプレートに移した。抗ｃＧＭＰ抗体及びＨＲＰ−ｃＧＭＰの両方をアッセイプレートに添加し、そして室温で２時間インキュベートした。プレートを、次にｃＧＭＰ洗浄バッファーで洗浄した。洗浄後、ストップライトレッドサブストレート（ｓｔｏｐｌｉｇｈｔｒｅｄｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を各ウェルに添加し、そしてプレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを、次に５３０ｎｍでの励起、５９０ｎｍでの発光、及び５７０ｎｍでのカットオフにより、蛍光プレートリーダー上で読み取った。

融合タンパク質のＮ末端にＣＮＰを配置した構築物は、Ｃ末端にＣＮＰを配置した構築物よりも強力であった。最も強力な構築物はＰＥ０５５２であり、その効力はＣＮＰペプチドの約１／３０であった。図１Ａ〜Ｂを参照。

ＰＥ０５５２構築物を、通常のマウス（系統ＦＶＢ／ｎｊ）の皮下に１週間当たり３回、最長５週間注射した。マウスは、実験開始時において３〜５週齢であった。マウスの線形成長に対する効果を、通常の生理食塩水を注射した対照群との比較において、尾部の長さ、鼻部から肛門までの長さ、及び鼻部から尾部までの長さを各週の投与後に測定することにより決定した。図２Ａ〜Ｃは、両用量レベルのＰＥ０５５２は、いずれもより迅速な線形成長を引き起したことを示す。

［実施例３］
プロテアーゼ切断可能なＣＮＰＥＬＰ構築物の調製
ＣＮＰ配列の３７個のアミノ酸からなるバージョン、及び５つの異なるプロテアーゼ切断部位のうちの１つを含有する５つの異なる遺伝子をそれぞれ合成した（表４）。

各遺伝子配列を制限酵素ＸｂａＩ／ＢｓｒＧＩで消化し、次にＸｂａＩ／Ａｃｃ６５ｉで消化したｐＰＥ０００３プラスミドにサブクローン化して、プラスミドｐＰＥ９２０６、ｐＰＥ９２１６、ｐＰＥ９３０６、ｐＰＥ９３１６、及びｐＰＥ９３２６を提供した。このような融合では、ＣＮＰ配列がＥＬＰ１−１２０配列のＮ末端に配置され、両配列の間にある異なるプロテアーゼ感受性部位が切断可能となり、ＣＮＰ配列をｉｎｖｉｖｏで放出する。

実施例３に記載の精製されたＣＮＰ構築物の効力を、実施例２に記載するように、Ｂ型ナトリウム利尿受容体（ＮＰＲＢ）を発現する一次子宮線維芽細胞を利用して実証した。プロテアーゼ感受性ＣＮＰＥＬＰ構築物を事前処理すると、ＣＮＰ部分の遊離に起因して、未処理構築物と比較して効力が高まった。

上記構築物を、通常のマウス（系統ＦＶＢ／ｎｊ）に１日１回、３週間注射した。マウスは、実験開始時において３週齢であった。マウスの線形成長に対する効果を、通常の生理食塩水を注射した対照群との比較において、尾部の長さ、鼻部から肛門までの長さ、及び鼻部から尾部までの長さを、各週の投与後に測定することにより決定した。図３Ａ〜Ｃは、ＰＥ９３０６のみが、より迅速な線形成長を引き起したことを示す。体重に対する有意な効果は認められなかった。

カテプシンＫ切断部位リンカーを介してＥＬＰ１−１２０とＮ末端側で結び付いたＣＮＰ５３（ＰＥ９４４６；配列番号１１１及び１１２）、カテプシンＫ切断部位リンカーを介してＥＬＰ１−１２０とＮ末端側で結びついたＣＮＰ２２（ＰＥ９４５６；配列番号１１３及び１１４）、カテプシンＫ切断部位リンカーを介してＥＬＰ１−１２０とＣ末端側で結びついたＣＮＰ３７（ＰＥ９４８６；配列番号１１５及び１１６）、カテプシンＫ切断部位リンカーを介してＥＬＰ１−１２０とＣ末端側で結びついたＣＮＰ５３（ＰＥ９４９６；配列番号１１７及び１１８）、及びカテプシンＫ切断部位リンカーを介してＥＬＰ１−１２０とＣ末端側で結びついたＣＮＰ２２（ＰＥ９５０６；配列番号１１９及び１２０）を含む追加の代表的構築物を作製した。

［実施例４］
ＧＬＰ−２ＥＬＰ構築物の調製
ＧＬＰ−２配列をエンコードするＤＮＡを、ＤＰＰ−ＩＶ抵抗性を高めるためにＡ２Ｇ突然変異を組み込んで合成した。これを制限酵素ＸｂａＩ及びＢｓｒＧＩで消化し、次にＸｂａＩ及びＡｃｃ６５Ｉで切断したプラスミドｐＰＥ０００３にサブクローン化して、プラスミドｐＰＥ０５０３を提供した。この融合では、ＧＬＰ−２配列がＥＬＰ１−１２０配列のＮ末端に配置される。

精製されたＰＥ０５０３タンパク質を、細胞ベースのｃＡＭＰ効力アッセイで分析し、そしてＧＬＰ−２ペプチドの０．２４ｎＭと比較して、１．７５ｎＭのＥＣ_５０を有することが明らかとなった。

［実施例５］
ＧＬＰ−２ＥＬＰ構築物のｉｎｖｉｖｏでの評価
表５に示すように、雄スプラーグドーリーラット（２００〜２２０ｇ、ｎ＝１２／群）に、ＰＥ０５０３又はＧＬＰ−２（Ａ２Ｇ）ペプチドを、１１日間投与期間において皮下注射した。

１２日目に動物を絶命させ、そして正中線切開を行い、小腸を取り出し、その最大の長さまで伸ばして測定した。次に、糞便物を管腔からフラッシュし、そして小腸の重量を記録した。図４は、ＰＥ０５０３により処置すると、４日毎に投与（Ｑ４Ｄ）したとしても、プラセボと比較して小腸重量のきわめて有意な増加を引き起したことを示す。小腸切片の組織学的分析は、ＧＬＰ−２受容体作動薬について期待される通りに、媒体（生理食塩水）と比較して絨毛高の明確な増加を示した。ヒトでは半減期が有意により長いので、ＰＥ０５０３は、ヒトを対象としたとき、１週間当たり１回以下の投与に適することがデータから確認される。

［実施例６］
ＦＧＦ２１ＥＬＰ構築物の調製
ＦＧＦ２１遺伝子配列を合成し、制限酵素ＢｇｌＩ／ＥｃｏＲＩで消化し、次にプラスミドｐＰＥ０００３にサブクローン化してプラスミドｐＰＥ９１８３（配列番号１３１及び１３２）を提供し、ＦＧＦ２１配列をＥＬＰ１−１２０配列のＣ末端に配置した。

ＦＧＦ２１遺伝子配列を合成し、制限酵素ＢｇｌＩ／ＥｃｏＲＩで消化し、次にプラスミドｐＰＢ１０２３にサブクローン化してプラスミドｐＰＥ９１９３（配列番号１３３及び１３４）を提供し、ＦＧＦ２１配列をＥＬＰ１−１２０配列のＣ末端に配置した。こうして、ＥＬＰポリマーの一方の端部にＧＬＰ−１及び他方の端部にＦＧＦ２１を有するデュアル作動薬が形成される

参照による組み込み
本明細書で参照するすべての特許及び公開資料は、下記で開示する公開資料を含め、本明細書により参照としてその全体が組み込まれる。

本明細書で議論される公開資料は、本出願の出願日前にそれらを開示することを目的としてもっぱら提供される。本明細書内のいずれも、開示が先行するからといって、それを理由に先行する日付のそのような公開資料に対して本開示が権利を主張できないとする承認とは解釈されない。

本出願は、下記の公開資料及び出願、すなわち米国特許第２００１／００３４０５０Ａ１号；米国特許第２００９／０２２０４５５号；米国特許第８，３３４，２５７号；米国特許第２０１３／０３１０５３８号；米国特許第２０１３／０１７２２７４号；米国特許第２０１１／０２３６３８４号；米国特許第６，５８２，９２６号；米国特許第７，４２９，４５８号；米国特許第７，３６４，８５９号；米国特許第８，１７８，４９５号；米国特許第２０１３／００７９２７７号；米国特許第２０１３／００８５０９９号；米国特許第２０１３／０１４３８０２号；米国特許第２０１４／００２４６００号；米国特許第２０１１／０１７８０１７号；米国特許第７，７０９，２２７号；米国特許第２０１１／０１２３４８７号；米国特許第８，７２９，０１８号；米国特許第２０１４／０１７１３７０号；米国特許第２０１３／０１５０２９１号；国際公開第／２０１４／１１３４３４号；米国特許第２０１４／０２１３５１６号、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０６１９５５号；及び米国仮特許出願第６２／１１３，９４３号、同第６２／１４５，７７０号、及び同第６２／１５０，６７９号を、目的の如何を問わず引用することによりその全体を援用する。

［参考文献］

Claims

全身投与用の治療剤を含む持続放出型の医薬製剤であって、
前記治療剤が、タンパク質活性薬剤と、配列番号１〜１３の１つから選択される少なくとも６０個のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）構造単位とを含み、
前記タンパク質活性薬剤が、アペリン、アルギナーゼ、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１受容体拮抗薬、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−２受容体作動薬、ヘプシジン、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、ウロジラチン、サイモシンβ４、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＦＧＦ２１、又はその断片若しくは誘導体からなる群から選択される、医薬製剤。
投与後に、注射部位からの低速吸収を提供する、請求項１に記載の医薬製剤。
可逆性マトリックスを形成するアミノ酸配列が存在しない活性薬剤のＰＫプロファイルと比較して、投与後に、平坦なＰＫプロファイルを提供する、請求項２に記載の医薬製剤。
前記ＰＫプロファイルにおいて、トラフに対するピーク（Ｃ_ｍｉｎに対するＣ_ｍａｘ）が小さく、Ｔ_ｍａｘに達するのが遅い又は遅延している、請求項３に記載の医薬製剤。
体温で形成された可逆性マトリックスが、タンパク質濃度が減少するに従って逆転する、請求項１から４のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、配列番号３を含み、式中、ＸがＶａｌ、Ｇｌｙ、及びＡｌａから選択される、請求項１に記載の医薬製剤。
式中、各Ｘが、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、並びに
Ｖ：Ｇ：Ａの比が、
ａ）５：３：２、
ｂ）７：２：０、
ｃ）７：０：２、
ｄ）６：０：３、
ｅ）５：２：２、及び
ｆ）１０：０：０
からなる群から選択される、請求項６に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、配列番号１３を含み、式中、Ｘが、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、及びＡｌａから選択される、請求項１に記載の医薬製剤。
式中、各Ｘが、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、並びにＶ：Ｇ：Ａの比が、約５：０：４であり得る、請求項８に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる４０〜１８０個の反復単位を含み、式中、各Ｘが、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、並びにＶ：Ｇ：Ａの比が、
ａ）５：３：２、
ｂ）７：２：０、
ｃ）７：０：２、
ｄ）６：０：３、及び
ｅ）５：２：２
からなる群から選択される、請求項６に記載の医薬製剤。
Ｘが、約６：０：３の比でＶａｌ、Ｇｌｙ、及びＡｌａから選択される、請求項１０に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ＸＰＧＶＧ（配列番号１３）からなる４０〜１８０個の反復単位を含み、式中、各Ｘが、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、並びにＶ：Ｇ：Ａの比が、約５：０：４であり得る、請求項８に記載の医薬製剤。
対象が、ヒトである、請求項１から１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
対象が、ヒト以外の哺乳動物である、請求項１から１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、前記タンパク質活性薬剤とＥＬＰの間の組換え融合タンパク質である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、約３０秒〜約１０時間、又は約３０秒〜約１時間の範囲の循環半減期を有する、請求項１に記載の医薬製剤。
アペリン、アルギナーゼ、ＣＮＰ、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬、ＧＬＰ−２受容体作動薬、ヘプシジン、ＩＧＦ−１、ウロジラチン、サイモシンβ４、及びＴＲＡＩＬ、ＦＧＦ２１、又はその断片若しくは誘導体のうちの少なくとも２つを含む共製剤である、請求項１６に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、前記タンパク質活性薬剤とＥＬＰの間の化学的コンジュゲートである、請求項１から１４、及び１６から１７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項１から１８のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項１９に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、又は約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１１０ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項２０に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、約１００ｍｇ／ｍＬの量で存在する、請求項２１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、保管条件において相転移したマトリックスを形成しない、請求項１から２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記保管条件が、約４０℃未満、又は約３７℃未満、約３０℃未満、約２７℃未満、約２５℃未満、約０℃未満、約−１５℃未満、又は約−６０℃未満である、請求項２３に記載の医薬組成物。
前記保管条件において１ヶ月を超えて安定である、請求項２４に記載の医薬製剤。
ａ．約２５℃、
ｂ．約２℃、
ｃ．約８℃、
ｄ．約−１５℃、及び
ｅ．約−８０℃
からなる群から選択される温度において約１ヶ月を超えて安定である、請求項２５に記載の医薬製剤。
塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、リン酸ナトリウム、塩基性リン酸ナトリウム、ヒスチジン、及び二塩基性リン酸ナトリウムのうちの２つ以上を含む、請求項１から２６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む、請求項２７に記載の医薬製剤。
塩化ナトリウム及びヒスチジンを含む、請求項２７に記載の医薬製剤。
１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１１０ｍＭの塩化ナトリウム、及び０．１％のポリソルベート２０を含む、請求項２８に記載の医薬製剤。
１週間当たり約１回、１週間当たり約２回、又は１ヶ月当たり１〜８回投与するために事前用量化されたペン又はシリンジの形態で包装されている、請求項１から３０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
治療剤を含む持続放出型の医薬製剤であって、
前記治療剤が、タンパク質活性薬剤、及びＶＰＧＸＧ（配列番号３）又はＸＰＧＶＧ（配列番号１３）からなる６０〜１８０個の反復単位を含むＥＬＰアミノ酸配列を含み、式中、各Ｘが、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択され、及び前記ＥＬＰが、２６℃〜３７℃の転移温度を示し、
前記タンパク質活性薬剤が、アペリン、アルギナーゼ、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１受容体拮抗薬、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−２受容体作動薬、ヘプシジン、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、ウロジラチン、サイモシンβ４、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＦＧＦ２１、又はその断片若しくは誘導体である、医薬製剤。
投与後に、注射部位からの低速吸収を提供する、請求項３２に記載の医薬製剤。
前記アミノ酸配列が存在しない活性薬剤のＰＫプロファイルと比較して、投与後に、平坦なＰＫプロファイルを提供する、請求項３３に記載の医薬製剤。
前記ＰＫプロファイルにおいて、トラフに対するピーク（Ｃ_ｍｉｎに対するＣ_ｍａｘ）が小さく、Ｔ_ｍａｘに達するのが遅い又は遅延している、請求項３３に記載の医薬製剤。
体温で形成された可逆性マトリックスが、タンパク質濃度が減少するに従って逆転する、請求項３２から３５のいずれか１項に記載の医薬製剤。
Ｖ、Ｇ、及びＡが、
ａ）５：３：２、
ｂ）７：２：０、
ｃ）７：０：２、
ｄ）６：０：３、
ｅ）５：２：２、及び
ｆ）５：０：４
からなる群から選択される比にある、請求項３２から３６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含むＥＬＰ単位を含み、式中、各ＸがＶである、請求項３２に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、前記タンパク質活性薬剤と前記アミノ酸配列の間の組換え融合タンパク質である、請求項３２に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、約３０秒〜約１０時間、又は約３０秒〜約１時間の範囲の循環半減期を有する、請求項３２に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、アペリン、アルギナーゼ、ＣＮＰ、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬、ＧＬＰ−２受容体作動薬、ヘプシジン、ＩＧＦ−１、ウロジラチン、サイモシンβ４、ＴＲＡＩＬ、ＦＧＦ２１、又はその断片若しくは誘導体からなる群から選択される、請求項３２に記載の医薬製剤。
アペリン、アルギナーゼ、ＣＮＰ、ＧＬＰ−１受容体拮抗薬、ＧＬＰ−２受容体作動薬、ヘプシジン、ＩＧＦ−１、ウロジラチン、サイモシンβ４、ＴＲＡＩＬ、ＦＧＦ２１、又はその断片若しくは誘導体のうちの少なくとも２つを含む共製剤である、請求項３２に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、前記タンパク質活性薬剤と前記ＥＬＰアミノ酸配列の間の化学的コンジュゲートである、請求項３２から３８及び４０から４２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項３２から４３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項４４に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、又は約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１１０ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項４５に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、約１００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項４６に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、保管条件においてマトリックスを形成しない、請求項３２から４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
前記保管条件が、約４０℃未満、又は約３７℃未満、又は約３０℃未満、約２７℃未満、又は約２５℃未満、約０℃未満、約−１５℃未満、又は約−６０℃未満である、請求項４８に記載の医薬組成物。
塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、リン酸ナトリウム、塩基性リン酸ナトリウム、ヒスチジン、及び二塩基性リン酸ナトリウムのうちの２つ又はそれ超を含む、請求項３２から４９のいずれか１項に記載の医薬製剤。
リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む、請求項５０に記載の医薬製剤。
塩化ナトリウム及びヒスチジンを含む、請求項５０に記載の医薬製剤。
１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１１０ｍＭの塩化ナトリウム、及び０．１％のポリソルベート２０を含む、請求項５１に記載の医薬製剤。
１週間当たり１回、１週間当たり２回、又は１ヶ月当たり１〜８回投与するために事前用量化されたペン又はシリンジの形態で包装されている、請求項３２から５３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
請求項１から５４のいずれか１項に記載の製剤を、必要としている対象に投与することを含む、治療剤の持続放出型投薬計画を送達する方法。
前記治療剤が、１ヶ月当たり約１〜約８回投与される、請求項５５に記載の方法。
前記製剤が、１週間に約１回投与される、請求項５５又は５６のいずれか１項に記載の方法。
前記製剤が、皮下又は筋肉内に投与される、請求項５５から５７のいずれか１項に記載の方法。
投与部位が、病理学的部位ではない、請求項５５から５８のいずれか１項に記載の方法。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトアペリンであり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトアペリンのＣ末端に融合している、請求項６０に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトアペリンのＮ末端に融合している、請求項６０に記載の医薬製剤。
前記ヒトアペリンが、配列番号３９である、請求項６０に記載の医薬製剤。
前記ヒトアペリンが、配列番号４１である、請求項６０に記載の医薬製剤。
前記ヒトアペリンが、配列番号４２である、請求項６０に記載の医薬製剤。
前記ヒトアペリンが、配列番号４３である、請求項６０に記載の医薬製剤。
前記ヒトアペリンが、配列番号４４である、請求項６０に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号４０である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトアルギナーゼであり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトアルギナーゼのＣ末端に融合している、請求項６９に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトアルギナーゼのＮ末端に融合している、請求項６９に記載の医薬製剤。
前記ヒトアルギナーゼが、配列番号４５である、請求項６９に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号４６である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトＣＮＰであり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＣＮＰのＣ末端に融合している、請求項７４に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＣＮＰのＮ末端に融合している、請求項７４に記載の医薬製剤。
前記ヒトＣＮＰが、配列番号４７である、請求項７４に記載の医薬製剤。
前記ヒトＣＮＰが、配列番号４９である、請求項７４に記載の医薬製剤。
前記ヒトＣＮＰが、配列番号５１である、請求項７４に記載の医薬製剤。
前記ヒトＣＮＰが、配列番号５２である、請求項７４に記載の医薬製剤。
前記ＣＮＰ及び前記ＥＬＰが、プロテアーゼ切断部位を含有するリンカーにより分離されている、請求項７４から８０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記プロテアーゼ切断部位における切断が、ｉｎｖｉｖｏでの前記ＣＮＰの放出を可能にする、請求項８１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号４８である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号８３である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬であり、及び前記ＥＬＰが、配列番号１４である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬のＣ末端に融合している、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号５４である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号６４である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号６５である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号２７である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号２８である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号６０である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号６１である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号６２である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号６３である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号６６である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−１受容体拮抗薬が、配列番号６７である、請求項８５に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号５７である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号５８である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号５９である、請求項１から３０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトＧＬＰ−２受容体作動薬であり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＧＬＰ−２受容体作動薬のＣ末端に融合している、請求項１０１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＧＬＰ−２受容体作動薬のＮ末端に融合している、請求項１０１に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−２受容体作動薬が、配列番号６８である、請求項１０１に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−２受容体作動薬が、配列番号７０である、請求項１０１に記載の医薬製剤。
前記ヒトＧＬＰ−２受容体作動薬が、配列番号７４であり、式中、Ｘが、Ｇ、Ｌ、Ｉ、又はＶである、請求項１０１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号６９である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号７１である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号７３である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトヘプシジンであり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトヘプシジンのＣ末端に融合している、請求項１１０に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトヘプシジンのＮ末端に融合している、請求項１１０に記載の医薬製剤。
前記ヒトヘプシジンが、配列番号７５である、請求項１１０に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号７６である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号７７である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ＩＧＦ−１であり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトＩＧＦ−１であり、及び前記ＥＬＰが、ＸＰＧＶＧ（配列番号１３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＩＧＦ−１のＣ末端に融合している、請求項１１６又は請求項１１７に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＩＧＦ−１のＮ末端に融合している、請求項１１６又は請求項１１７に記載の医薬製剤。
ヒトＩＧＦ−１が、配列番号７８である、請求項１１６又は請求項１１７に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号７９である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号８０である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトウロジラチンであり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトウロジラチンのＣ末端に融合している、請求項１２４に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトウロジラチンのＮ末端に融合している、請求項１２４に記載の医薬製剤。
前記ヒトウロジラチンが、配列番号８４である、請求項１２４に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号８５である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号８６である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトサイモシンβ４であり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトサイモシンβ４のＣ末端に融合している、請求項１２９に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトサイモシンβ４のＮ末端に融合している、請求項１２９に記載の医薬製剤。
前記ヒトサイモシンβ４が、配列番号８９である、請求項１２９に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号９０である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記タンパク質活性薬剤が、ヒトＴＲＡＩＬであり、及び前記ＥＬＰが、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）からなる少なくとも６０個の反復単位を含む、請求項１に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＴＲＡＩＬのＣ末端に融合している、請求項１３４に記載の医薬製剤。
前記ＥＬＰが、ヒトＴＲＡＩＬのＮ末端に融合している、請求項１３４に記載の医薬製剤。
前記ヒトＴＲＡＩＬが、配列番号８９である、請求項１３４に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号９２である、請求項１に記載の医薬製剤。
前記治療剤が、配列番号９８である、請求項１に記載の医薬製剤。
タンパク質活性薬剤と、配列番号１〜１３のいずれか１つから選択される少なくとも６０個のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）構造単位とを含む治療用タンパク質であって、
前記タンパク質活性薬剤が、アペリン、アルギナーゼ、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１受容体拮抗薬、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−２受容体作動薬、ヘプシジン、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、ウロジラチン、サイモシンβ４、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＦＧＦ２１、又はその断片若しくは誘導体からなる群から選択される、治療用タンパク質。
治療剤を含む治療用タンパク質であって、
前記治療剤が、タンパク質活性薬剤と、ＶＰＧＸＧ（配列番号３）又はＸＰＧＶＧ（配列番号１３）からなる６０〜１８０個の反復単位を含むＥＬＰアミノ酸配列であって、式中、各Ｘが、Ｖ、Ｇ、及びＡから選択されるＥＬＰアミノ酸配列とを含み、並びに前記ＥＬＰが、２６℃〜３７℃の転移温度を示し、
前記タンパク質活性薬剤が、アペリン、アルギナーゼ、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１受容体拮抗薬、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−２受容体作動薬、ヘプシジン、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、ウロジラチン、サイモシンβ４、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＦＧＦ２１、又はその断片若しくは誘導体である、治療用タンパク質。