JP2019511566A - 核酸凝縮ペプチド、核酸凝縮ペプチドセット、核酸送達キャリア、核酸送達方法、細胞作製方法、細胞検出方法及びキット - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
実施形態に従う核酸凝縮ペプチドは、核酸を凝縮させるためのペプチドである。当該核酸凝縮ペプチドは、例えば、以下のように使用される。図1に当該核酸凝縮ペプチドの使用時の一例を示した。
核酸凝縮ペプチドは、核酸を凝縮するためのペプチドである。
RQRQRGGRRRRRR(mHP−3) (配列番号2)。
実施形態によれば、核酸凝縮ペプチドセットが提供される。
ここで、Yはチロシン、Gはグリシンである。
ここで、Gはグリシン、Nはアスパラギン、Qはグルタミン、Sはセリン、Fはフェニルアラニン、Pはプロリン、Mはメチオニン、Kはリシン、Rはアルギニン、Yはチロシン、Aはアラニンである。
実施形態の核酸送達キャリアは、複合体と、核酸送達用膜とを備える。
実施形態によれば、上記の核酸凝縮ペプチドを用いた核酸送達方法が提供される。
実施形態によれば、上記核酸凝縮ペプチドを用いた細胞を作製する方法が提供される。当該細胞を作製する方法は、(C)核酸送達キャリアを用意することと、(D)核酸送達キャリアを細胞に接触させて核酸を細胞に送達することと、(E)上記(D)で得られた細胞を培養すること、及び(F)細胞のうち、核酸が導入された細胞を選択することを含む。
実施形態によれば、核酸送達方法を用いた細胞検出方法が提供される。
更なる実施形態によれば、核酸送達キャリアを含むキットが提供される。
<例1>
実施形態のペプチドによる核酸の凝縮性及びペプチド−核酸複合体の電位を評価した。
実施形態のペプチドによる核酸の凝縮性及びペプチドと核酸との解離性をゲル遅延度アッセイ(Gel Retardation Assay)によって評価した。
実施形態のペプチドによるリポソームへの核酸の内包性の評価を行った。
COATSOME/SS−20(日本油脂)、DOPE、コレステロール及びDMG−PEGをそれぞれ5:3:1:0.3のモル比でエタノール中に溶解し脂質溶液を得た。チューブに入れた脂質溶液(0.5ml)を2セット用意し、当該各脂質溶液に、撹拌しながら、例1の(8)(mHP−1)及び(16)(mHP−3)のペプチド−核酸溶液をそれぞれ0.5ml滴下し、リポソーム化した。当該各リポソーム溶液に10mMのHEPES(pH5.3)を9mLそれぞれ添加し、総量10mlとした(以下このリポソーム溶液を「Complex」と記す)。更に、当該リポソームを生体に取り込ませる場合を仮定し、Complexの溶媒であるエタノールをHEPESに置換したリポソーム溶液(以下「HEPES置換」と記す)を作製した。「HEPES置換」は、Complexの各溶液を、300kDa用の限外ろ過膜により1.5mlに濃縮し、更に100mMのHEPES(pH7.4)を8.5mlそれぞれを加え、限外ろ過を行った後、10mMHEPES(pH7.4)に溶媒を置換し、最終的に0.5mLに濃縮することによって作製した。更に、「HEPES置換」を孔径0.45μmのフィルターでろ過滅菌した溶液(以下「0.45μm」と記す)を調製した。
以上のように調製された、プロタミン、mHP−1、mHP−3をそれぞれ含む「ペプチド−核酸溶液」、「HEPES置換」及び「0.45μm」を用いて、リポソームの平均粒子径、Zeta電位、プラスミド内包量を調査した。平均粒子径とZeta電位とは、ゼータサイザーを用いて測定した。プラスミド内包量は、Quant―iT PicoGreen(登録商標)dsDNAアッセイキットを用いて測定した。
ゲル遅延度アッセイによって実施形態のペプチドによるリポソームへの核酸の内包性の評価を行った。
実施形態のペプチドによって核酸を内包したリポソームによる、核酸の細胞への導入度合いを評価した。
リポソームに内包する核酸として、pAmp−CMV−nLucを使用した。pAmp−CMV−nLucは、NanoLuc遺伝子をレポーター遺伝子として含むレポーターベクターである。pAmp−CMV−nLucは、遺伝子発現用プロモーターとしてのCMVプロモーターを含み、その下流にNanoLuc遺伝子と、IRES配列と、シミアンウイルス40(SV40)の複製開始白質(LT、ラージT抗原)遺伝子とがこの順番で連結され、その下流にSV40の複製開始配列(SV40ori)を含む。当該核酸と、例3のプロタミン、mHP−1及びmHP−3のペプチドを用いて、例3と同様の方法でリポソーム溶液を作製した。
上述のように作成したリポソーム溶液を、ヒト正常乳腺上皮細胞(HMEC)(クラボウ)に添加した。HMECは、HMEC凍結ストックから起眠後、37度、5%のCO2雰囲気のインキュベータ内で6〜7日間培養したものを用いた。HMECを培養した培地は、MammaryLife Basal Medium(クラボウ)に、MammaryLife LifeFactors(クラボウ)を添加した培地であり、培地中の各成分の最終濃度は、インスリン:5mg/mL、L−グルタミン:6mM、エピネフリン:1mM、アポ−トランスフェリン:5mg/mL、TGFa:0.5ng、ExtractP:0.4%、コハク酸ヒドロコルチゾン:100ng/mLであった。培養後、HMECを0.05%のトリプシン−EDTAを用いて、培養底面から剥離させた後、200×g、3分間の遠心で細胞を回収したのち、細胞数が1.4〜1.6×104細胞/100μLとなるように新鮮な培地を用いて調整した。この細胞縣濁液150μLに対して、前記リポソーム溶液を10μL加え、穏やかに混合した後、37℃、5%のCO2雰囲気下でさらに細胞を培養した。
リポソームの添加から48時間後に、発光基質(Nano−Glo Luciferase Assay Substrate、Promega社)を1/2000希釈となるように培地に加えた。この培養ディッシュをLV200(オリンパス社製発光イメージングシステム)にセットして撮影した。撮影条件は、以下の通りであった。対物レンズ倍率:×20、結像レンズ倍率:×0.2、露光時間:明視野100ms、暗視野1min、5min、EMGain:明視野4、暗視野610。LV200とImageMEXの制御及び撮影した明視野と暗視野像の画像処理は、MetaMorph(MolecularDevice)で行った。
実施形態のペプチドによる核酸の凝縮性及びペプチド−核酸複合体の電位を評価した。
実施形態のペプチドによる核酸の凝縮性及びペプチドと核酸との解離性を、ゲル遅延度アッセイによって評価した。
実施形態のペプチドによるリポソームへの核酸の内包性を評価した。
実施形態のペプチドによるリポソームへの核酸の内包性を、リポソームに内包された核酸量の測定によって評価した。リポソームに内包された核酸量は、AccuBlue(登録商標)dsDNA定量キットを用いて測定した。
実施形態のペプチドによって核酸を内包したリポソームによる、核酸の細胞への導入度合いを評価した。
実施形態のペプチドによる核酸の凝縮性及びペプチドと核酸との解離性を、ゲル遅延度アッセイによって評価した。
実施形態のペプチドによる核酸の凝縮性及びペプチド−核酸複合体の電位を評価した。
実施形態のペプチドによるリポソームへの核酸の内包性を評価した。
実施形態のペプチドによって核酸を内包したリポソームによる、核酸の細胞への導入度合いを評価した。
Claims (27)
- 核酸を凝縮するペプチドであって、
一方の端が第1の配列RRRRRRであり、他方の端が第2の配列RQRQRであり、 前記第1の配列と前記第2の配列との間に、RRRRRR又はRQRQRからなる中間配列を0個又は1個以上含み、
前記第1の配列、前記第2の配列及び前記中間配列のうち、隣り合う2つの配列の間に2つ以上の中性アミノ酸を含む
核酸凝縮ペプチド。 - 前記中性アミノ酸が、G又はYを含む請求項1に記載のペプチド。
- 全長が55アミノ酸以下である請求項1又は2に記載のペプチド。
- 前記Rが配列全体に対して45%以上の割合で含有される請求項1〜3の何れか1項に記載のペプチド。
- 硫酸イオンを含む塩として構成されている請求項1〜4の何れか1項に記載のペプチド。
- 配列が、RQRQRYYRQRQRGGRRRRRR又はRQRQRGGRRRRRRである請求項1に記載のペプチド。
- 核酸を凝縮するためのペプチドのセットであって、
第1の核酸凝縮ペプチドとしての請求項1〜6の何れか1項に記載の核酸凝縮ペプチド、並びに第2の核酸凝縮ペプチド及び/又は第3の核酸凝縮ペプチドを含み、
前記第2の核酸凝縮ペプチドは、一方の端が第3の配列RRRRRRであり、他方の端が第4の配列RRRRRRであり、前記第3の配列と前記第4の配列との間に、RRRRRR又はRQRQRからなる中間配列を0個又は1個以上含み、前記第3の配列、前記第4の配列及び前記中間配列のうち、隣り合う2つの配列の間に2つ以上の中性アミノ酸を含み、
前記第3の核酸凝縮ペプチドは、アミノ酸配列GNQSSNFGPMKGGNFGGRSSGPYGGGGQYFAKPRNQGGYを含む
核酸凝縮ペプチドセット。 - 前記第2の核酸凝縮ペプチドのアミノ酸配列が、RRRRRRYYRQRQRGGRRRRRRである請求項7に記載のペプチドセット。
- 前記第3の核酸凝縮ペプチドの一方の末端に任意のアミノ酸配列が連結している請求項7に記載のペプチドセット。
- 前記任意のアミノ酸配列は、前記核酸に結合するアミノ酸配列である請求項9に記載のペプチドセット。
- 前記第3の核酸凝縮ペプチドを含む場合、前記第1の核酸凝縮ペプチド及び/又は前記第2の核酸凝縮ペプチドと、前記第3の核酸凝縮ペプチドとが連結している請求項7に記載のペプチドセット。
- 請求項1〜6の何れか1項に記載の核酸凝縮ペプチド及び核酸を含む複合体と、核酸送達用膜とを備え、前記複合体は、前記核酸送達用膜内に封入されている核酸送達キャリア。
- 請求項7〜11に記載の核酸凝縮ペプチドセット及び核酸を含む複合体と、核酸送達用膜とを備え、前記複合体は、前記核酸送達用膜内に封入されている核酸送達キャリア。
- 機能向上剤を更に含み、前記機能向上剤は、前記核酸送達用膜内に封入されている請求項12又は13に記載の核酸送達キャリア。
- 前記核酸送達用膜が、脂質組成物である請求項12〜14の何れか1項に記載の核酸送達キャリア。
- 前記核酸送達用膜が、リポソームである請求項12〜14の何れか1項に記載の核酸送達キャリア。
- 請求項12〜16の何れか1項に記載の核酸送達キャリアを用意することと
前記核酸送達キャリアを細胞に接触させて前記核酸を前記細胞に送達することと
を含む核酸送達方法。 - 前記細胞が生体内の細胞である請求項17に記載の方法。
- 前記核酸送達キャリアと前記細胞を接触させる前又は後に、前記細胞の細胞膜に細孔を開けることを更に含む請求項17又は18に記載の方法。
- 前記細孔を開けることが、前記細胞に電圧又は超音波を印加することによって行われる請求項19に記載の方法。
- 請求項17〜20の何れか1項に記載の核酸送達方法を実行すること、
得られた前記細胞を培養すること、及び
前記細胞のうち、前記核酸が導入された細胞を選択すること
を含む細胞を作製する方法。 - 請求項17〜20の何れか1項に記載の核酸送達方法を実行することと、ここで、前記核酸はレポーター遺伝子を含むレポーター遺伝子発現カセットを含み、
前記レポーター遺伝子からの信号を検出することと
検出された前記信号に基づいて前記細胞の特性を判断することと
を含む細胞検出方法。 - 請求項12〜16の何れか1項に記載の核酸送達キャリア及び機能向上剤を含むキット。
- 前記キットは、細胞を検出するためのキットであって、前記核酸送達キャリアに含まれる前記核酸は、レポーター遺伝子を発現するためのレポーター遺伝子発現カセットを含み、前記機能向上剤は、前記レポーター遺伝子からの信号を検出するための試薬を含む請求項23に記載のキット。
- 前記キットは、細胞の機能を改変するためのキットであって、前記核酸送達キャリアに含まれる前記核酸は、前記細胞の機能を改変するための遺伝子を含み、前記機能向上剤は、前記細胞が引き起こす病害を予防、治療若しくは処置するための薬剤、又は分化を促進する薬剤、或いはそれらの何れかの組み合わせを含む請求項23に記載のキット。
- 前記キットは、細胞を死滅させるためのキットであって、前記核酸送達キャリアに含まれる前記核酸は、前記細胞を細胞死に導く遺伝子を含み、前記機能向上剤は、アクチノマイシンD、シスプラチン、ベンダムスチン塩酸塩又はベツリン酸、或いはそれらの何れかの組み合わせを含む請求項23に記載のキット。
- 前記キットは、細胞において物質生産を行うためのキットであって、前記核酸送達キャリアに含まれる前記核酸は、細胞に所望の物質を生産させるための遺伝子を含み、前記機能向上剤は、転写促進剤を含む請求項23に記載のキット。
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Cited By (1)
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JP2021016371A (ja) * | 2019-07-23 | 2021-02-15 | 株式会社東芝 | Car−t細胞の製造方法、核酸導入キャリア及びキット |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021016370A (ja) * | 2019-07-23 | 2021-02-15 | 株式会社東芝 | 核酸導入キャリア、核酸導入キャリアセット、核酸導入組成物及び核酸導入方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002514892A (ja) * | 1995-06-08 | 2002-05-21 | コブラ セラピューティクス リミテッド | 遺伝子治療における合成ウイルス様粒子の使用 |
JP2006502703A (ja) * | 2002-03-29 | 2006-01-26 | クレアゼン インコーポレーテッド | 細胞質残留性細胞膜透過ペプチド及びこれの用途{CytoplasmicTransductionPeptidesandUsesthereof} |
JP2006517790A (ja) * | 2003-01-09 | 2006-08-03 | インヴィトロジェン コーポレーション | ポリペプチド−核酸複合体の細胞の送達および活性化 |
JP2011501742A (ja) * | 2007-10-02 | 2011-01-13 | エムディーアールエヌエー,インコーポレイテッド | 核酸の送達のためのリポペプチド |
JP2011137001A (ja) * | 2003-10-24 | 2011-07-14 | Gencia Corp | ポリヌクレオチドを送達する方法、及び送達用組成物 |
JP2011520424A (ja) * | 2008-04-15 | 2011-07-21 | アメリカ合衆国 | 阻害性オリゴヌクレオチドを送達するための組成物および方法 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2730637B1 (fr) | 1995-02-17 | 1997-03-28 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations |
GB0027328D0 (en) * | 2000-06-23 | 2000-12-27 | Aventis Pharma Inc | Bioengineered vehicles for targeted nucleic acid delivery |
JP3965448B2 (ja) | 2000-11-24 | 2007-08-29 | 有限会社プロテオセラピー | 細胞内特定部位へ物質を導入するための化合物 |
JP3806059B2 (ja) | 2002-04-02 | 2006-08-09 | 一仁 富澤 | ペプチド核酸およびオリゴペプチドからなる化合物、その製造法ならびにその用途 |
DE10355559A1 (de) | 2003-11-21 | 2005-06-23 | Orthogen Ag | Transskin |
JP2005151908A (ja) | 2003-11-27 | 2005-06-16 | Japan Science & Technology Agency | 核酸凝縮制御剤キット及び核酸凝縮制御方法 |
JP2006067891A (ja) | 2004-09-01 | 2006-03-16 | Hokkaido Univ | 核移行性ペプチド |
JPWO2006101201A1 (ja) | 2005-03-24 | 2008-09-04 | 国立大学法人 北海道大学 | 目的物質を効率的に核内に送達可能なリポソーム |
JP2010537632A (ja) | 2007-08-29 | 2010-12-09 | タフツ ユニバーシティー | 組織及び細胞への核酸、タンパク質、薬物、及びアデノウイルスの送達を向上させるための細胞透過性ペプチドの製造及び使用方法、組成物並びにキット |
WO2011087804A2 (en) * | 2009-12-21 | 2011-07-21 | Medtronic, Inc. | Peptide-polynucleotide compositions, and methods for transfecting a cell with dna and treatment of neurodegenerative disease |
US10046065B2 (en) | 2013-08-06 | 2018-08-14 | Japan Science And Technology Agency | Nucleic acid-encapsulating polymer micelle complex and method for producing same |
-
2017
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- 2017-11-22 WO PCT/IB2017/057317 patent/WO2018096457A1/en active Application Filing
-
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Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002514892A (ja) * | 1995-06-08 | 2002-05-21 | コブラ セラピューティクス リミテッド | 遺伝子治療における合成ウイルス様粒子の使用 |
JP2006502703A (ja) * | 2002-03-29 | 2006-01-26 | クレアゼン インコーポレーテッド | 細胞質残留性細胞膜透過ペプチド及びこれの用途{CytoplasmicTransductionPeptidesandUsesthereof} |
JP2006517790A (ja) * | 2003-01-09 | 2006-08-03 | インヴィトロジェン コーポレーション | ポリペプチド−核酸複合体の細胞の送達および活性化 |
JP2011137001A (ja) * | 2003-10-24 | 2011-07-14 | Gencia Corp | ポリヌクレオチドを送達する方法、及び送達用組成物 |
JP2011501742A (ja) * | 2007-10-02 | 2011-01-13 | エムディーアールエヌエー,インコーポレイテッド | 核酸の送達のためのリポペプチド |
JP2011520424A (ja) * | 2008-04-15 | 2011-07-21 | アメリカ合衆国 | 阻害性オリゴヌクレオチドを送達するための組成物および方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
BIOCONJUGATE CHEMISTRY, vol. 15, JPN6019023657, 2004, pages 152 - 161, ISSN: 0004060461 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021016371A (ja) * | 2019-07-23 | 2021-02-15 | 株式会社東芝 | Car−t細胞の製造方法、核酸導入キャリア及びキット |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018096457A1 (en) | 2018-05-31 |
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US10765761B2 (en) | 2020-09-08 |
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