JP2019507780A - パパイヤ樹液の水不溶性フラクションにより活性化された脂肪および／またはワックス - Google Patents

Abstract

本発明は、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の水不溶性フラクションを得る方法、この方法によって得ることができる水不溶性フラクション、パパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションにより活性化脂肪および／または活性化ワックスを調製する方法、この方法により得ることが可能な活性化脂肪および／または活性化ワックス、前記活性化脂肪および／または前記活性化ワックスを一緒にした組成物、ならびにこれらの生成物の美容的使用に関する。

Description

本発明は、化粧品の分野に関する。より具体的には、本発明は、皮膚適用／経路により投与可能な活性化脂肪および／または活性化ワックスであって、化粧品において、特に、皮膚老化の外観の遅延もしくは徴候の限定、すべてのタイプの外部攻撃からの皮膚および／もしくは外皮の防御、ならびに／または皮膚レベルにおける細胞分化の促進、または皮膚および／もしくは外皮のバリア機能の強化にとって有用な、活性化脂肪および／または活性化ワックスに関する。

皮膚は、センサー機能および防御機能、ならびに複数の外部攻撃に対する免疫機能、代謝機能または体温調節機能などの多機能（バリア機能）をもたらす重要器官である。これらの役割は、３つの個別した重なり合ったコンパートメント、すなわち表皮、真皮および下皮にある構造のおかげで可能になっている。表皮は、皮膚の外側構造を構成する表面上皮であり、その防御機能を確保している。この機能は、上皮細胞の密着性により、およびフィラメント状のレジスタントプロテイン、ケラチンの生成により確保されている。真皮は、基礎物質からなる結合組織であり、線維芽細胞、コラーゲン繊維およびエラスチン繊維、線維芽細胞により合成されるタンパク質繊維が覆われている。コラーゲン繊維は、真皮の強度の大部分をもたらし、弾力性、とりわけ皮膚および／または粘膜の張りに寄与している。真皮の下に、脂肪組織の層である、下皮が存在する。

皮膚は、他のすべての器官と同様に老化する。皮膚老化プロセスに関与する要因は、様々であり、多数存在する。皮膚の時間による老化の現象は、とりわけ、細胞機能の減速、および細胞外マトリックスのある種のタンパク質の構造異常の外観を伴う。皮膚は、柔軟さが減り、薄さが増し、乾燥することが多くなるようになり、しわおよび小じわを伴って、その弾力性を失う。

表皮では、年齢に伴うケラチノサイト増殖および分化の減速は、老化中における皮膚の菲薄化を説明する要因である。表皮は萎縮し、皮膚はその防御能力を失う。真皮線維芽細胞もまた改変され、コラーゲンまたはエラスチンなどの細胞外マトリックスタンパク質の生成が低下する。

紫外線および他の攻撃性の環境因子への慢性的な曝露は、皮膚の老化現象を加速させて、悪化させる。本発明者らは、光老化について述べている。

老化プロセスにおける主要な役割を果たす機構の１つは、脂質膜、タンパク質、ＤＮＡ、およびより具体的にはミトコンドリアＤＮＡにおけるような、必須分子における酸化的損傷の蓄積である。したがって、これらの損傷の蓄積の重要な結果の１つは、細胞がＡＴＰを生成する能力の低下である。

長年の間、健康および美容の専門家は、皮膚の老化現象と闘う方法、または少なくとも皮膚の老化現象を低減する方法、ならびに外部攻撃および皮膚が毎日受けているストレスに対する皮膚の耐性を向上する方法を探求し続けてきた。

化粧品では、油は、天然化粧品の概念の基礎となるものである。天然処理により得られ、合成化学品が添加されていない植物油が、その潤い特性および防御特性のために伝統的に使用されている。

特殊な組成のため、化粧品に使用されている大部分の油は、長鎖多価不飽和酸、特にガンマ−リノレン酸から構成され、ガンマ−リノレン酸は、膜の流動性、経表皮水分蒸散量の低下、および皮膚老化の予防において特異な役割を果たしている。実際に、一部の脂肪酸は、皮膚の潤い度を改善または維持する可能性が高い。

油は、賦形剤として最も多く使用されており、活性成分としては使用されていない。しかし、本出願人は、生理学的に許容される媒体中に、活性成分として、ある特定のジアシルグリセロール（「ＤＡＧ」と略す）と特定の脂肪アルコールとの組合せを少なくとも含む、美容目的にとりわけ有用な組成物を以前に開発した。この組成物は、本出願人の名で、参照文献ＷＯ２００４／０９３８３２Ａ２で公開され、特許出願ＰＣＴ／ＦＲ２００４／０００９４４に記載され、特許請求されている。

ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）は、そのマーカー特性のため、先行技術において具体的に記載されている化合物である。それらは、特に、タンパク質キナーゼＣに及ぼす作用による基礎的役割を果たし、こうして、細胞のアクチベーターの機能を有する。

特許出願ＷＯ２００４／０９３８３２に開示されている通り、ＤＡＧを得るための反応方法は、例えばトリグリセリド脂肪の加水分解など、酸性またはアルカリ性媒体中で実施される化学反応とすることができる。この加水分解はまた、例えば、リパーゼなどのヒドロラーゼを使用する生化学反応などの、酵素により実施され得る。好ましくは、ＷＯ２００４／０９３８３２の組成物中に使用されるＤＡＧは、具体的に、リパーゼによる酵素加水分解を受けたトリグリセリドを含む脂肪（動物、植物または合成油）から得られる。

リパーゼは、グリセロールエステルを加水分解する酵素である。いくつかのタイプのリパーゼが、その異なる反応速度レベルに従って決定される。これらの酵素はまた、基質に関する、位置特異性または位置選択性、脂肪酸の性質に関する特異性またはタイプ選択性（ｔｙｐｏ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）、位置に関する特異性または立体特異性といった、その異なる特異性に従って、いくつかのグループに分類され得る。

一部のリパーゼは、特定の特異性を有していない。他のものは位置選択的であり、すなわち、例えば、膵臓リパーゼおよび微生物起源のリパーゼであるアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、リソプス・ミエヘイ（Ｒｈｙｓｏｐｕｓ ｍｉｅｈｅｉ）またはリゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）は、１，３選択的リパーゼである。位置選択的リパーゼは、脂肪産業および洗剤の両方において一般的に工業的に使用されている。キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）リパーゼなどの他のリパーゼは、立体特異性であり、これはｓｎ２タイプの立体特異性を有する。ｓｎという命名は、Ｆｉｓｈｅｒ投影法において表される不斉炭素の立体配置に従い、トリグリセリド骨格のｓｎ１、ｓｎ２およびｓｎ３位を決める。

ＷＯ２００４／０９３８３２において、ｓｎ３タイプ（すなわち、これは、トリグリセリドの３位での加水分解を可能にする）の立体特異的リパーゼが、有利に使用される。このようにこのリパーゼは、３位のトリグリセリドを加水分解して、１，２−ＤＡＧを優先的に形成する。使用されるリパーゼは、植物起源（パパイヤ（Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａ））または微生物起源（ペニセリウム・シクロピウム（Ｐｅｎｉｃｅｌｌｉｕｍ ｃｙｃｌｏｐｉｕｍ））のものであることができる。好ましい実施形態によれば、トリグリセリドの加水分解は、ＷＯ２００４／０９３８３２では、パパイヤのリパーゼを用いて実施される（Ｖｉｌｌｅｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＯＣＳ，７２，６：７５３．１９９５）。

しかしながら、特許出願ＷＯ２００４／０９３８３２の教示を実施することにより得られる組成物は、特に、皮膚レベルにおいて満足な美容特性を有するものの、本出願人は、１０年を超える間、これらの組成物を調製するための方法を改善するための努力を行い、この方法は、ＷＯ２００４／０９３８３２の実施例１に例示されている。より具体的には、およびこの実施例１に示されている通り、１，２−ＤＡＧを得るための酵素加水分解反応は、粗パパイヤ樹液を用いて可能であるが、水性媒体中での可溶化後のこの樹液の精製調製物を使用して、およびポリオールまたは凍結乾燥保存したものを使用しても可能である。実際に、ＷＯ２００４／０９３８３２の実施例１の目的である調製方法は、実際に行う場合、いくつかの実施上の難題が存在する。実際に、粗パパイヤ樹液の使用に関すると、このことは、粗パパイヤ樹液が目的のリパーゼだけではなく、リパーゼを分解するか、または少なくともその酵素活性に負の影響を及ぼす可能性が高いプロテアーゼ（これらのなかには、パパイン、プロテアーゼシステインがある）も含有しているという観点から、特に不利である。

このように、ＷＯ２００４／０９３８３２の実施例１が、ポリオール（例えば、ソルビトール）中に保存されているか、または凍結乾燥された水性媒体中での可溶化後のこの樹液の精製調製物の使用を支持していることは理にかなっている。後者の可能性に関すると、凍結乾燥物にはいくつかの欠点があり、欠点のなかには、大気水分に対し極めて感受性が高いこと、およびその製造方法が複雑（および、したがって高価）であることが含まれることが、当業者に知られている。

ポリオール（ソルビトールなど）中の水性媒体および保存剤（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ）に可溶化した後のパパイヤ樹液の精製調製物を使用する技術的解決策に関すると、この技法は、トリグリセリドの部分加水分解後に複雑な処理を必要とする特有の欠点を有することが判明している。実際に、トリグリセリドの部分加水分解反応を停止するために、ポリオール中で、とりわけ有機溶媒を使用して保存されたパパイヤリパーゼを含有する水性媒体のいくつかの洗浄工程を行う必要がある。

また、本出願人は、水性媒体中に可溶化し、かつポリオール中で保存されたパパイヤリパーゼが凍結を受けて、その結果、凍結形態でほとんど保存され得ない、またはまったく保存され得ないことさえある一方、このことが、経時的なパパイヤリパーゼの良好な品質、便利かつ安価な保存を確実にするという観点から、著しく望ましいと思われることを発見した。

本研究により、本出願人は、上述の欠点のすべてまたは一部を克服するための、現実的な技術プラットフォームを開発した。この技術プラットフォームは、パパイヤ樹液の水不溶性（水に可溶ではない）フラクションを得て、これを使用することに主に基づくものである。よって、本発明の目的は、パパイヤリパーゼが富化された、パパイヤ樹液の水不溶性フラクションを得るための方法であって、
ａ）蒸留水中に乾燥粗パパイヤ樹液を、有利には、約０．０１〜約０．５の間（好ましくは、０．０１〜０．５の間）、好ましくは、約０．０５〜約０．２５の間（好ましくは、０．０５〜０．２５の間）、好ましくは、約０．０８〜約０．２の間（好ましくは、０．０８〜０．２の間）、特に好ましくは、約０．１（好ましくは、０．１）を含む、乾燥粗パパイヤ／蒸留水の重量比で、懸濁させるステップ、
ｂ）ステップａ）において得られた懸濁液を、パパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションを含有するペレットを得るように、有利には、約５分間〜約９０分間の間（好ましくは、５分間〜９０分間の間）、好ましくは、約１５〜約６０分間の間（好ましくは、１５分間〜６０分間の間）、好ましくは、約２０〜約４０分間の間（好ましくは、２０〜４０分間の間）を含む時間、および有利には、約２０００〜約６０００ｒｐｍの間（好ましくは、２０００〜６０００ｒｐｍの間）、好ましくは約３０００〜約５０００ｒｐｍの間（好ましくは、３０００〜５０００ｒｐｍの間）、好ましくは、約４０００ｒｐｍ（好ましくは、４０００ｒｐｍ）を含む回転速度において遠心分離するステップ、
ｃ）パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションを含有するペレットを回収するステップ
を含む、方法である。

特に有利な実施形態では、前記方法は、ステップａ）の後であってステップｂ）の前に、
ａ'）ステップａ）において得られた懸濁液を、約１５分間〜約２４０分間の間（好ましくは、１５分間〜２４０分間の間）を含む時間の間、有利には、約３０分間〜約１８０分間の間（好ましくは、３０分間〜１８０分間の間）、好ましくは、約６０分間〜約１５０分間の間（好ましくは、６０分間〜１５０分間の間）、特に好ましくは、約１２０分間（好ましくは、１２０分間）の時間の間、および約１０℃〜約３０℃の間（好ましくは、１０℃〜３０℃の間）を含む温度、および約１５℃〜約２５℃の間（好ましくは、１５℃〜２５℃の間）の温度、好ましくは室温において撹拌するステップ
を含む。

室温とは、約２０℃〜約２５℃の間を含む温度、（好ましくは２０℃〜２５℃の間）、有利には、約２０℃（好ましくは、２０℃）の温度を意味する。

好ましくは、前記方法は、ステップｂ）の後であってステップｃ）の前に、
ｂ'）微粒子粉末が得られるまで湿潤ペレットを乾燥するステップ
を含み、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の水不溶性フラクションが、微粒子粉末の形態で、ステップｃ）において回収される。

本発明の別の目的は、上述の方法によって得ることができる、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の水不溶性フラクションに関する。

本発明はまた、上記の方法によって直接得られた、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の水不溶性フラクションに関する。

特に有利には、本出願人は、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液のこの水不溶性フラクションが、凍結により簡単に保存され得ることを発見した。さらに、パパイヤリパーゼ富化パパイヤ樹液のこの水不溶性フラクションを得るための方法は、実施がかなり簡単であり、安価である。

本発明はまた、脂肪をジアシルグリセロールで富化する（すなわち、活性化脂肪を得る）ため、および／またはワックスを脂肪アルコールで富化する（すなわち、活性化ワックスを得る）ための、本発明に係るパパイヤ樹液の水不溶性フラクションの使用に関する。

本発明の別の目的は、ジアシルグリセロール富化脂肪（活性化脂肪）を調製する方法であって、
ｉ）脂肪と、カルシウムイオンまたはマグネシウムイオンなどの二価イオンを好ましくは含有する水または生理食塩溶液とを、約０．００５〜約０．５の間（好ましくは、０．００５〜０．５の間）、好ましくは、約０．０１〜約０．４の間（好ましくは、０．０１〜０．４の間）を含む水または生理食塩溶液／脂肪の体積比で混合するステップ、
ｉｉ）撹拌下（好ましくは、激しい撹拌、好ましくは、約２０００〜約３０００ｒｐｍ（好ましくは、２０００〜３０００ｒｐｍ）の速度であって、前記激しい撹拌は、エマルションを促進する装置により有利に得られる）に、約３０℃〜約７０℃の間（好ましくは、３０℃〜７０℃の間）、有利には、約５０℃（好ましくは、５０℃）の温度において、好ましくは約１〜約３０分間の間（好ましくは、１〜３０分間の間）、好ましくは約５〜約２０分間の間（好ましくは、５〜２０分間の間）、および好ましくは約１０分間（好ましくは、１０分間）を含む時間の間、エマルションが脂肪と水との間に得られるまで、この混合物を維持するステップ、
ｉｉｉ）引き続き撹拌下（好ましくは、中程度の撹拌、好ましくは約２００〜約３００ｒｐｍ［好ましくは２００〜３００ｒｐｍ］の速度）で、前記温度において、約０．０１〜約０．２の間（好ましくは、０．０１〜０．２の間）、有利には約０．０５〜０．０１５の間（好ましくは、０．０５〜０．０１５の間）、好ましくは約０．１（好ましくは、０．１）を含む、使用されるパパイヤ樹液の水不溶性フラクション／脂肪の体積比で、前のステップで得られた混合物に、上述のパパイヤ樹液の水不溶性フラクションを得るための方法を実施することにより得られるパパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の所与の体積の水不溶性フラクションを接触させる、ステップ、
ｉｖ）ジアシルグリセロール富化脂肪が得られるよう、約１時間〜約６時間（好ましくは、１時間〜６時間）、有利には約２時間〜約５時間（好ましくは、２時間〜５時間）、好ましくは約４時間（好ましくは４時間）の時間、前記温度および撹拌を維持するステップ
を含む方法に関する。

特に好ましい一実施形態では、ジアシルグリセロール富化脂肪（活性化脂肪）を調製するためのこの方法は、ステップｉｖ）の後、
ｖ）ジアシルグリセロール富化脂肪を含有する反応媒体から、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションを分離するよう、少なくとも１つの勾配フィルター、または多孔度の低下した少なくとも２つのフィルターであって、有利には、約５００μｍ〜約２５０μｍ（好ましくは、５００μｍ〜２５０μｍ）の多孔度の低下した少なくとも２つのフィルターを重ね合わせたものを少なくとも１つ好ましくは使用して、ステップｉｖ）において得られた混合物をろ過するステップ
を含む。

好ましくは、前記方法は、ステップｖ）の後、
− 無水硫酸マグネシウムなどの乾燥剤により、ジアシルグリセロール富化脂肪を含有する反応媒体中に存在する残留水を除去するステップ、ならびに／または
− 活性炭によりジアシルグリセロール富化脂肪を脱臭する、および／もしくはそのつやを改善するステップ
の２つのステップのうちの少なくとも１つ、有利にはそれらの両方を含む。

このろ過ステップｖ）により、ポリオール中に保存されているリパーゼを含有する、水性媒体による複数の洗浄ステップ（ＷＯ２００４／０９３８３２の実施例１の方法の場合と同様）を必要とすることなく、脂肪中に含有しているトリグリセリドの部分加水分解反応を容易に停止させること、および有機溶媒の使用を回避することが可能になる。このろ過ステップｖ）に続いて、パパイヤ樹液の水不溶性フラクションは、容易に回収されて、再利用することができる。

一般に、前述の生成方法によって得られるパパイヤ樹液の水不溶性フラクションを使用することができるという事実により、部分加水分解後の脂肪の取り扱いが比較的容易となる。さらに、本出願人は、パパイヤリパーゼ富化パパイヤ樹液のこの水不溶性フラクションの使用により、有利な美容特性を有する不飽和脂肪酸が保存されることを発見した。

特定の実施形態によれば、ステップｖ）においてろ過された、パパイヤリパーゼが富化されているパパイヤ樹液の水不溶性フラクションは、本発明に係る、ジアシルグリセロール富化脂肪を調製する方法のステップｉｉｉ）において再利用される。

好ましくは、前記脂肪は、動物、植物および／または海洋起源の油、バージンオイルまたは精製油、有利には、バージンオイルであり、前記油は、好ましくは植物および／または海洋起源、好ましくは植物起源のものである。

パパイヤ樹液の水不溶性フラクションを使用すると、バージンオイルと共に「働く」こと、すなわち、ジアシルグリセロールを含むバージンオイルを富化する（活性化する）ことが可能になり、このことは、特に、安全性および無毒性の理由のため（油などの精製に関連する有機溶媒の非存在）、特に望ましいことに留意することが、特に重要である。さらに、本発明に係る、ジアシルグリセロール富化脂肪を調製する方法は、バージンオイルのケン化不可フラクションが、前記方法により悪化しない限り、バージンオイルの富化に特に好適であり、使用される酸素活性は、トリアシルグリセロールエステラーゼタイプである。これにより、ジアシルグリセロールによる富化方法の後に、バージンオイルの生物活性を保存することが可能である。この生物活性は、前記方法によってさらに改善される。

好ましくは、前記脂肪は、
− １２〜２６の間、有利には１６〜２０の間、特に好ましくは１６〜１８の間の炭素数を有する脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖であって、線状または分岐状の、有利には線状の飽和または不飽和であり、有利には不飽和であって、１〜６の間、好ましくは１〜３の間の不飽和数を好ましくは有する不飽和である、前記脂肪族炭化水素鎖、または
− モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖
を有するトリグリセリドを含む油である。

本発明の特に好ましい実施形態によれば、油、好ましくはバージンオイルは、脂肪として使用され、テリハボク（ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｉｎｏｐｈｙｌｌｕｍ）オイル、ラズベリーオイル、ツバキオイル、ツキミソウオイル、ブラジルナッツオイル、バオバブオイルおよびオリーブオイル、またはこれらのオイルのうちの少なくとも２つの混合物から選択され、前記油、好ましくはバージンオイルは、テリハボクオイル、ラズベリーオイル、ツバキオイル、ツキミソウオイル、ブラジルナッツオイルおよびバオバブオイル、またはこれらの油のうちの少なくとも２つの混合物から有利には選択され、前記油、好ましくはバージンオイルは、テリハボクオイル、ラズベリーオイル、ツキミソウオイルおよびバオバブオイル、またはこれらの油のうちの少なくとも２つの混合物から好ましくは選択され、特に好ましくは、前記脂肪は、テリハボクオイル、好ましくはバージンテリハボクオイルである。

上記のジアシルグリセロールは、式（Ｉ）および（ＩＩ）：
（式中、Ｒ１およびＲ２は、
− １２〜２６の間、有利には１６〜２０の間、特に好ましくは１６〜１８の間の炭素数を有する脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖（言い換えると、Ｒ１およびＲ２は、その炭素数が１１〜２５の間、有利には１５〜１９の間、特に好ましくは、１５〜１７の間である、脂肪族炭化水素鎖を表す）であって、線状または分岐状の、有利には線状の飽和または不飽和であり、有利には不飽和であって、１〜６の間、好ましくは１〜３の間の不飽和数を好ましくは有する不飽和である、前記脂肪族炭化水素鎖、または
− モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖である）
によりそれぞれ表される１，２−ジアシルグリセロールおよび１，３−ジアシルグリセロールからなる。

好ましくは、前記ジアシルグリセロールは、式（Ｉ）
（式中、Ｒ１およびＲ２は、
− １２〜２６の間、有利には１６〜２０の間、特に好ましくは１６〜１８の間の炭素数を有する脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖（言い換えると、Ｒ１およびＲ２は、その炭素数が１１〜２５の間、有利には１５〜１９の間、特に好ましくは、１５〜１７の間である、脂肪族炭化水素鎖を表す）であって、線状または分岐状の、有利には線状の飽和または不飽和であり、有利には不飽和であって、１〜６の間、好ましくは１〜３の間の不飽和数を好ましくは有する不飽和である、前記脂肪族炭化水素鎖、または
− モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖である）
により表される、１，２−ジアシルグリセロールを主に含み、好ましくは１，２−ジアシルグリセロールから本質的になる。

本発明はまた、
− ワックスは、脂肪として使用される、および
− ジアシルグリセロール富化脂肪の代わりに、脂肪アルコール富化ワックス、有利には、式（ＩＩＩ）の脂肪アルコール
（ＩＩＩ） Ｒ”−ＯＨ
（式中、Ｒ”は、
− １０〜３４個の炭素原子、好ましくは１２〜２６個の炭素原子、特に好ましくは１６〜２２個の炭素原子を含有する脂肪アルコールの脂肪族炭化水素鎖であって、線状または分岐状の、有利には線状の飽和または不飽和であり、好ましくは最大で６の不飽和数を有している、前記脂肪族炭化水素鎖、または
− モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖
を表す）を得る、
という適用を行うことにより、脂肪アルコール富化ワックス（活性化ワックス）を調製する方法、上記のジアシルグリセロール富化脂肪を調製する方法を実施する方法に関する。

言い換えると、本発明は、脂肪アルコール富化ワックス（活性化ワックス）を調製する方法であって、
ｉ’）ワックスと、カルシウムイオンまたはマグネシウムイオンなどの二価イオンを好ましくは含有する水または生理食塩溶液とを、約０．００５〜約０．５の間（好ましくは、０．００５〜０．５の間）、好ましくは、約０．０１〜約０．４の間（好ましくは、０．０１〜０．４の間）を含む水または生理食塩溶液／ワックスの体積比で混合するステップ、
ｉｉ’）約３０℃〜約７０℃の間（好ましくは、３０℃〜７０℃の間）を含む温度、有利には、約５０℃（好ましくは、５０℃）において、好ましくは有利には、約１〜３０分間（好ましくは、１〜３０分間）、好ましくは約５〜約２０分間の間（好ましくは、５〜２０分間の間）、好ましくは約１０分間（好ましくは、１０分間）を含む時間の間、エマルションが、ワックスと水との間に得られるまで、この混合物を撹拌下に維持するステップ、
ｉｉｉ’）引き続き撹拌下で前記温度において、約０．０１〜約０．２（好ましくは、０．０１〜０．２の間）、有利には約０．０５〜０．０１５の間（好ましくは、０．０５〜０．０１５の間）、好ましくは、約０．１（好ましくは、０．１）の、使用されるパパイヤ樹液の水不溶性フラクション／ワックスの体積比で、前のステップにおいて得られた混合物に、前述のパパイヤ樹液の水不溶性フラクションを得るための方法を行うことにより得られるパパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の、所与の体積の水不溶性フラクションを接触させるステップ、
ｉｖ’）脂肪アルコール中に富化したワックスが得られるよう、約１時間〜約６時間の間（好ましくは、１時間〜６時間の間）、有利には約２時間〜約５時間の間（好ましくは、２時間〜５時間の間）、好ましくは約４時間（好ましくは４時間）を含む時間、前記温度および撹拌を維持するステップ
を含む方法に関する。

好ましくは、この方法は、ステップｉｖ’）の後、
ｖ’）脂肪アルコール富化ワックスを含有する反応媒体から、カリカ属（Ｃａｒｉｃａ）のリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションを分離するよう、少なくとも１つの勾配フィルター、または多孔度の低下した少なくとも２つのフィルターであって、有利には、約５００μｍ〜約２５０μｍ（好ましくは、５００μｍ〜２５０μｍ）の多孔度の低下した少なくとも２つのフィルターを重ね合わせたものを少なくとも１つ好ましくは使用して、ステップｉｖ’）において得られた混合物をろ過するステップ
を含む。

好ましくは、前記方法は、ステップｖ’）の後、
− 無水硫酸マグネシウムのような乾燥剤により、脂肪アルコール富化ワックスを含有する反応媒体中に存在する残留水を除去するステップ、ならびに／または
− 活性炭により脂肪アルコール富化ワックスを脱臭する、および／もしくはそのつやを改善するステップ
の２つのステップのうちの少なくとも１つ、有利にはそれらの両方を含む。

本発明の目的のために、ワックスは、
− 例えば、ビーワックスなどの動物起源のワックス、
− 無機物起源のワックス、または好ましくは、
− ホホバワックス、カルナウバワックス、カンデリラワックスまたはそれらの混合物などの、植物起源のワックス
から好ましくは選択され、
前記ワックスは、有利にはホホバワックスである。

特に重要な実施形態では、本発明はまた、本発明に係るジアシルグリセロール富化脂肪を調製する方法によって得ることができる、ジアシルグリセロール富化脂肪を、目的のため有する（上記を参照されたい）。当然ながら、本発明はまた、本発明に係るジアシルグリセロール富化脂肪を調製する方法によって直接得られる、ジアシルグリセロール富化脂肪に関する（上記を参照されたい）。

好ましい実施形態によれば、前記脂肪は、約５％〜約３０％の間（好ましくは、５％〜３０％の間）、好ましくは約７％〜約１８％の間（好ましくは、７％〜３０％の間）を含むジアシルグリセロール含有量、約１５〜約５０ｍｇ／ｇ（好ましくは、１５〜５０ｍｇ／ｇ）の酸指数、および約５〜３０ｍｇ／ｇ（好ましくは、５〜３０ｍｇ／ｇ）、好ましくは、２０ｍｇ／ｇ未満の過酸化物指標を有する。

このジアシルグリセロール富化脂肪は、「活性化脂肪」とも呼ばれる。

上記した通り、このジアシルグリセロール富化脂肪（活性化したもの）は、動物、植物および／または海洋起源の油、バージンオイルまたは精製油、有利にはバージンオイルであり、前記油は、好ましくは、植物および／または海洋起源、好ましくは植物起源のものである。

特に好ましい実施形態では、このジアシルグリセロール富化脂肪（活性化したもの）は、テリハボクオイル、ラズベリーオイル、ツバキオイル、ツキミソウオイル、ブラジルナッツオイル、バオバブオイルおよびオリーブオイル、またはこれらの油のうちの少なくとも２つの混合物から選択される油、好ましくはバージンオイルであり、前記油、好ましくはバージンオイルは、テリハボクオイル、ラズベリーオイル、ツバキオイル、ツキミソウオイル、ブラジルナッツオイルおよびバオバブオイル、またはこれらの油のうちの少なくとも２つの混合物から有利には選択され、特に好ましくは、前記脂肪は、テリハボクオイル、好ましくはバージンテリハボクオイルである。実際に、本出願人は、これら（好ましくは、バージンオイル）のジアシルグリセロール富化油、好ましくは、１，２ジアシルグリセロールが、皮膚適用により投与されると、特に有利な美容特性を有することを発見した。これが、本発明が、活性化油を生成するために使用されるジアシルグリセロールを富化するための方法から独立して、上で定義したジアシルグリセロール富化油（活性化油）、有利には１，２ジアシルグリセロールに一層、幅広く適用される理由である。

本発明の別の目的は、上記の脂肪アルコール富化ワックスを調製するための方法により得ることが可能な、脂肪アルコール富化ワックス（活性化ワックス）に関する。当然ながら、本発明はまた、上記の脂肪アルコール富化ワックスを調製するための方法により直接得られる、脂肪アルコール富化ワックス（活性化ワックス）に関する。

本発明はまた、別の目的のため、
組成物の総重量の１０^−６％〜２０％を表す量、好ましくは、最終組成物の総重量の、１０^−４％〜１０％を表す量、好ましくは、１０^−３％〜２％を表す量、好ましくは０．０１％〜５％、さらにより優先的には、０．５〜２．５％を表す量の、上記の少なくとも１つのジアシルグリセロール富化脂肪、および
− 少なくとも１つの生理学的に許容される賦形剤
を含む、これらから本質的になる、またはこれらからなる、化粧用組成物を有する。

本発明はまた、別の目的のため、
組成物の総重量の１０^−６％〜１０％を表す量、好ましくは、最終組成物の総重量の、１０^−４％〜１％、好ましくは、０．０１％〜３％、さらにより好ましくは、０．１〜２．０％を表す量の、上記の少なくとも１つの脂肪アルコール富化ワックス、および
− 少なくとも１つの生理学的に許容される賦形剤
を含む、これらから本質的になる、またはこれらからなる、化粧用組成物を有する。

特に重要な実施形態では、本発明はまた、別の目的のため、上記の少なくとも１つのジアシルグリセロール富化脂肪と上記の少なくとも１つの脂肪アルコール富化ワックスとの混合物を含む、これらから本質的になる、またはこれらからなる化粧用組成物を、有利には０．０１〜０．１１の間、好ましくは、０．０２〜０．０８の間、好ましくは約０．０３（好ましくは、０．０３）を含む脂肪アルコール富化ワックス／ジアシルグリセロール富化脂肪の重量比で有する。

本発明はまた、別の目的のため、
− 有利には、０．０１〜０．１１の間、好ましくは、０．０２〜０．０８の間、好ましくは、約０．０３（好ましくは、０．０３）を含む、脂肪アルコール富化ワックス／ジアシルグリセロール富化脂肪の重量比の、少なくとも１つの上記のジアシルグリセロール富化脂肪と少なくとも１つの上記の脂肪アルコール富化ワックスとの混合物、および
− 少なくとも１つの生理学的に許容される賦形剤
を含む、これらから本質的になる、またはこれらからなる、化粧用組成物を有する。

本発明はまた、別の目的のため、
組成物の総重量の１０^−６％〜２０％を表す量、好ましくは、最終組成物の総重量の、１０^−４％〜１０％、好ましくは、０．０１％〜５％、さらにより優先的には０．５〜２．５％を表す量の、少なくとも１つの上記のジアシルグリセロール富化脂肪と少なくとも１つの上記の脂肪アルコール富化ワックスとの混合物、および
− 少なくとも１つの生理学的に許容される賦形剤
を含む、これらから本質的になる、またはこれらからなる、化粧用組成物を有する。

本発明に係る組成物は、任意の適切な経路によって、特に、経口または外部局所によって適用され得、本組成物の製剤は、当業者により適合される。

好ましくは、本発明に係る組成物は、局所適用に好適な形態である。したがって、これらの組成物は、生理学的に許容される媒体、すなわち、その適用中に不快になるリスクを伴わないで皮膚およびその付属器官と適合可能で、かつすべての好適な化粧品形態を網羅する媒体を含有する。

局所適用によって、皮膚または粘膜の表面上に、本発明に係る組成物を適用すること、または広げることが意図されている。

本発明の文脈では、生理学的に許容される賦形剤は、皮膚またはその付属器官の外側層に接触するのに好適なビヒクル、すなわち、毒性を示さず、かつ刺激、過度のアレルギー反応または不耐容反応を引き起こさないビヒクルを表す。生理学的に許容される賦形剤は、１つまたは複数の化合物を含んでもよい。

適用の意図される分野において一般に使用される生理学的に許容される賦形剤として、例えば、溶媒、増粘剤、希釈剤、抗酸化剤、色素、日焼け防止剤、セルフタンニング剤（ｓｅｌｆ−ｔａｎｎｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、顔料、充填剤、保存剤、香料、臭気吸収剤、エッセンシャルオイル、ビタミン、必須脂肪酸、界面活性剤、フィルム形成性ポリマーなどの、製剤化に必要な補助剤を言及することができる。

すべての場合において、当業者は、これらの補助剤およびその割合が、本発明に係る組成物の望ましい有利な特性を害することのないよう選択されるようにするであろう。

生理学的に許容される賦形剤は、１つまたは複数の化合物を含んでもよい。

本発明を実施するための組成物は、とりわけ、水中油型エマルション、油中水型または多層エマルションからなる、水溶液、水性アルコール溶液または油性溶液の形態にあってもよく、それらはまた、皮膚、粘膜、唇および／または毛髪に適用するのに好適な、懸濁液の形態にあってもよく、または粉末の形態にさえあってもよい。

これらの組成物は、多少なりとも流体であってもよく、クリーム剤、ローション剤、ミルク、セラム、軟膏剤、ゲル剤、ペースト剤または発泡剤の外観を有することもできる。それらはまた、スティックとして固体の形態とすることができるか、またはエアゾールの形態で、皮膚に適用することができる。

適用の意図される分野において一般に使用される生理学的に許容される賦形剤として、例えば、溶媒、増粘剤、希釈剤、抗酸化剤、色素、日焼け防止剤、セルフタンニング剤、顔料、充填剤、保存剤、香料、臭気吸収剤、エッセンシャルオイル、ビタミン、必須脂肪酸、界面活性剤、フィルム形成性ポリマーなどの、製剤化に必要な補助剤を言及することができる。

すべての場合において、当業者は、これらの補助剤およびその割合が、本発明に係る組成物の望ましい有利な特性を害することのないよう選択されるようにするであろう。これらの補助剤は、例えば、組成物の総重量の０．０１〜２０％に相当することができる。本発明に係る組成物がエマルションである場合、脂肪相は、組成物の総重量に対して、５〜８０重量％、好ましくは５〜５０重量％とすることができる。本組成物において使用される乳化剤および共乳化剤は、熟慮の元、本分野において従来的に使用されるものから選択される。例えば、それらは、組成物の総重量に対して、０．３〜３０重量％の範囲の割合で使用することができる。

本発明の別の有利な実施形態によれば、本発明に係る活性成分は、化粧品分野において使用されるリポソームまたは任意の他のナノカプセルもしくはマイクロカプセルなどの、化粧用ベクター中にカプセル封入され得るか、もしくは含まれ得る、または粉末有機ポリマー、タルクおよびベントナイトのような無機支持体に吸着され得る。

有利には、本発明に係る組成物は、本発明に係る活性成分に加えて、本発明のものと類似および／または相補性の美容作用を有する、少なくとも１つの他の活性成分を含むことができる。本発明によれば、この活性成分は、「追加の活性成分」として定義される。

例えば、追加の活性成分は、暖かい印象、ならびに生き生きしたおよびほっそりした印象をもたらす、抗老化剤、引き締め剤、美白剤、保湿剤、排出剤（ｄｒａｉｎｉｎｇ）、微小循環促進剤、医薬剤、スクラブ剤、剥離剤、細胞外マトリックスを刺激するもの、エネルギー代謝活性化剤、抗細菌剤、抗真菌剤、鎮静剤、抗遊離ラジカル剤、抗ＵＶ剤、抗にきび剤、抗炎症剤、麻酔剤から選択することができる。

そのような追加剤は、
− ビタミンＡ、ならびに特にレチノイン酸、レチノール、プロピオン酸レチノールおよびパルミチン酸レチノール、
− ビタミンＢ３、より具体的にはナイアシンアミド、ニコチン酸トコフェロール、
− ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、パンテノール、
− ビタミンＣ、特にアスコルビン酸、アスコルビルグルコシド、テトラパルミチン酸アスコルビル、アスコルビルリン酸マグネシウムおよびアスコルビルリン酸ナトリウム、
− ビタミンＥ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、ＰＰ、コエンザイムＱ１０、
− メタロプロテイナーゼ阻害剤、またはＴＩＭＰのアクチベーター、
− ＤＨＥＡ、その前駆体および誘導体、
− アルギニン、オルニチン、ヒドロキシプロリン、ジパルミチン酸ヒドロキシプロリン、パルミトイルグリシン、ヒドロキシリシン、メチオニンおよびその誘導体、Ｎ−アシルアミノ酸化合物などのアミノ酸、
− ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチドおよびヘキサペプチド、ならびにそれらの脂溶性誘導体、異性体、ならびに金属イオン（例えば、銅、亜鉛、マンガン、マグネシウムなど）などの他の化学種と錯体形成したものを含めた、天然または合成ペプチド（例として、ＭＡＴＲＩＸＹＬ（登録商標）、ＡＲＧＩＲＥＬＩＮＥ（登録商標）、ＣＨＲＯＮＯＧＥＮ（商標）、ＬＡＭＩＮＩＸＹＬ ＩＳ（商標）、ＰＥＰＴＩＤＥ Ｑ１０（商標）、ＣＯＬＬＡＸＹＬ（商標）（特許ＦＲ２８２７１７０、ＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標））、ＰＥＰＴＩＤＥ ＶＩＮＣＩ ０１（商標）（特許ＦＲ２８３７０９８、ＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標））、ＰＥＰＴＩＤＥ ＶＩＮＣＩ０２（商標）（特許ＦＲ２８４１７８１、ＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標））、ＡＴＰｅｐｔｉｄｅ（商標）（特許ＦＲ２８４６８８３、ＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標））という名称で知られている市販のペプチド、またはＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標）による名称ＡＴＰｅｐｔｉｄｅ（商標）で上市されている合成ペプチド配列のＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−ＮＨ２を言及することができる）、
− ＧＰ４Ｇ（商標）（ＦＲ２８１７７４８、ＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標））という名称で上市されているアルテミア・サリナ（Ａｒｔｅｍｉａ ｓａｌｉｎａ）抽出物、
− アマニ抽出物（Ｌｉｐｉｇｅｎｉｎｅ（商標）、特許ＦＲ２９５６８１８、ＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標））、ダイズ、スペルトコムギ、ブドウのつる、ナタネ、アサ、コメ、トウモロコシおよびエンドウ抽出物などの植物ペプチド抽出物、
− 酵母抽出物、例えばＤｙｎａｇｅｎ（商標）（特許ＦＲ２９５１９４６、ＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標））またはＡｃｔｏｐｏｎｔｉｎｅ（商標））（特許ＦＲ２９４４５２６、ＡＳＨＬＡＮＤ（登録商標））、
− デヒドロ酢酸（ＤＨＡ）、
− 合成または天然起源のフィトステロール、
− サリチル酸およびその誘導体、アルファおよびベータ−ヒドロキシ酸、シラノール、
− アミノ糖、グルコサミン、Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、マンノサミン、Ｎ−アセチルマンノサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、
− ブドウ抽出物、マツ抽出物、オリーブ抽出物などのポリフェノール抽出物、イソフラボン、フラボノイド、
− セラミドもしくはリン脂質などの脂質、スクアレンもしくはスクワランなどの動物起源の油、スイートアーモンド、ココナッツ、トウゴマ、ホホバ、オリーブ、ナタネ、ピーナッツ、ヒマワリ、コムギ胚芽、トウモロコシ胚芽、ダイズ、ワタ、アルファルファ、ケシ、カボチャ、ツキミソウ、キビ、オオムギ、ライムギ、ベニバナ、パッションフラワー、ヘーゼルナッツ、パーム、アプリコットカーネル、アボカド、キンセンカなどの植物油、エトキシ化植物油およびシアバター、
− すべてのＵＶスクリーン剤および日焼け防止剤、
− 環式ＡＭＰおよびその誘導体、アデニル酸シクラーゼ酵素およびホスホジエステラーゼ酵素阻害剤の活性化剤、ツボクサ抽出物、アシアチコシドおよびアシアチン酸、メチルキサンチン、テイン、カフェインおよびその誘導体、テオフィリン、テオブロミン、フォルスコリン、エスクリンおよびエスクロシド、ＡＣＥ阻害剤、Ｖａｌ−Ｔｒｐペプチド、ニューロペプチドＹ阻害剤、エンケファリン、イチョウ（ｇｉｎｇｋｏ ｂｉｌｏｂａ）の抽出物、ヤマノイモ（ｄｉｏｓｃｏｒｅａ）抽出物、ルチン、マテ茶抽出物、ガラナ抽出物、オリゴ糖、多糖類、カルニチン、セイヨウキズタ抽出物、ヒバマタ（ｆｕｃｕｓ）抽出物、加水分解したウツボグサ（Ｐｒｕｎｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）抽出物、ケイトウ（Ｃｅｌｏｓｉａ ｃｒｉｓｔａｔａ）の加水分解抽出物、アノゲイスス・レイオカルプス（Ａｎｏｇｅｉｓｓｕｓ ｌｅｉｏｃａｒｐｕｓ）抽出物、キャッサバ（Ｍａｎｉｈｏｔ ｕｔｉｌｉｓｉｓｓｉｍａ）葉抽出物、パルミトイルカルニチン、カルノシン、タウリン、エルダーベリー抽出物、ダルス（Ｐａｌｍａｒｉａ Ｐａｌｍａｔａ）抽出物などの海草抽出物
を含む群から選択され得る。

本発明の目的はまた、健常なヒトまたは動物個体（好ましくは、哺乳動物）、好ましくはヒトにおいて、
− 皮膚の老化の外観を遅延させる、もしくはその徴候を制限するため、ならびに／または
− すべてのタイプの外部攻撃から、皮膚および／もしくはその付属器官を防御するため、ならびに／または
− 表皮分化を促進するため、ならびに／または
− 皮膚および／もしくはその付属器官のバリア機能を強化するための、
皮膚適用による、本発明に係る有効量の少なくとも１つのジアシルグリセロール富化脂肪、本発明に係る有効量の少なくとも１つの脂肪アルコール富化ワックス、または本発明に係る有効量の組成物の美容的使用である。

「皮膚老化の目視可能な徴候」は、老化による皮膚の外観の任意の変化、例えば、例として、小じわおよびしわ、色素性欠損、例えば、しみまたは輝きの欠如、目の下のたるみ、くま、萎縮；弾力性、引き締まりおよび／または皮膚の張りの喪失を意味するが、例えば、皮膚の菲薄化などの外観の変化、または汚染およびＵＶ照射などの環境ストレスに起因する皮膚への内部損傷を体系的にもたらすことのない皮膚の内部変化も意味する。

皮膚は器官であって、その上部、角質層およびそれを覆う水脂質膜（ｈｙｄｒｏｌｉｐｉｄｉｃ ｆｉｌｍ）が、外部環境から防御する物理障壁として作用する。「皮膚バリア機能」としてより一般に知られているこの障壁役割は、組織ホメオスタシスにおいて主に重要なものである。しかし、バリア機能の変質は、紫外線照射（ＵＶＡおよびＵＶＢ）、冷却、乾燥、環境汚染、ある種の化学物質などの作用因子による外部攻撃に起因することが知られている。バリア機能の変質はまた、皮膚の老化中に観察され、とりわけ、減速および異常な表皮分化によるものであり、これは皮膚の透過性の増大をもたらし得る。

本発明に係る組成物は、最適な表皮分化を有利に働かせることによって、これらの外部攻撃のすべてと闘うことを可能にし、これにより、皮膚により表されるこの必須のバリア機能を維持するのに十分な、機能的な組織学的構造および生理学的透過性を維持することが可能になる。

本発明の目的はまた、皮膚の老化の外観を遅延またはその徴候を制限するため、ならびに／または皮膚レベルにおける細胞老化現象と闘うため、ならびに／またはすべてのタイプの外部攻撃から皮膚および／もしくはその付属器官を防御するため、ならびに／または皮膚レベルにおける細胞分化を促進するため、ならびに／または皮膚および／もしくは付属器官のバリア機能を強化するための美容的処置方法であって、上で定義した本発明に係る組成物の有効量を皮膚および／またはその付属器官の少なくとも一部に適用することからなる、方法である。

完全性を目的として、パパイヤ樹液の水不溶性フラクションを特徴付けるため、本出願人によって得られた実験データが、以下の発明を実施するための形態内に提示されている。この実験データは、図１〜４を指し、以下に簡潔に提示されている。

パパイヤ樹液（１）、パパイヤ樹液の水不溶性フラクション（２）（「非水溶性」とも称される）、パパイヤ樹液の水中の可溶性フラクション（３）（「水溶性」とも称される）、市販のパパイン（Ｆｌｕｋａ）（４）に存在するタンパク質、および、１２％ポリアクリルアミドゲル上の分子量マーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（Ｍ）のタンパク質の電気泳動プロファイルの図である。 パパイヤ樹液（１）、パパイヤ樹液の水不溶性フラクション（２）、パパイヤ樹液の水溶性フラクション（３）、およびパパインを標的とする抗体を含む市販のパパイン（４）について行った、ウエスタンブロットの写真である。 プロテアーゼ検出用に１０％カゼインを含有する１２％ポリアクリルアミドザイモグラムゲルであり、パパイヤ樹液（１）、パパイヤ樹液の水不溶性フラクション（２）、パパイヤ樹液の水溶性フラクション（３）、標準品のパパイン（Ｓｉｇｍａ、参照Ｐ４７５２）（５）が置かれたザイモグラムゲルを示す図である。このザイモグラムゲルは、クマシーブルーで染色されている。 クマシーブルーにより明らかにされた１４％ポリアクリルアミドゲルに関する非変性状態のザイモグラムゲルであり、パパイヤ樹液（１）、パパイヤ樹液の水不溶性フラクション（２）、パパイヤ樹液の水溶性フラクション（３）、市販のパパイン（Ｆｌｕｋａ）（４）、および分子量マーカー（Ｍ）が置かれたザイモグラムゲルを示す図である。 オリーブオイルおよびビクトリアブルー（B）から構成されるゲルを覆うことにより明らかにされた１４％ポリアクリルアミドゲルに関する非変性状態のザイモグラムゲルであり、パパイヤ樹液（１）、パパイヤ樹液の水不溶性フラクション（２）、パパイヤ樹液の水溶性フラクション（３）、市販のパパイン（Ｆｌｕｋａ、参照Ｐ４７５２）（４）、および分子量マーカー（Ｍ）が置かれたザイモグラムゲルの図である。 ヒト皮膚試料における、タマヌ、バオバブ、ラズベリーおよびツキミソウの０．５％活性化油および不活性化油のパンサイトケラチン標識の定量を示すグラフである。

［定義］
脂肪。本発明の意味では、脂肪は、技術の現状において一般に許容される定義を有し、すなわち疎水特性を有する分子から構成される物質である。脂肪は、主に、グリセロールおよび３つの脂肪酸の分子に由来するエステルであるトリグリセリドから構成される。他の構成成分は、不ケン化フラクションまたは「不ケン化物」と呼ばれるものを形成する。主な脂肪は、
− 低い融点を有する不飽和脂肪酸から主になるので、室温では液体状態である油、
− より高い融点を有する飽和脂肪酸から大部分がなるので、室温においてペースト状または固体である、脂肪
である。

上記の通り、本発明のため、動物、植物および／または海洋起源の油、バージンオイルまたは精製油、有利には、バージンオイルが脂肪として使用され、前記油は、好ましくは植物および／または海洋起源、好ましくは植物起源のものである。

海洋起源の脂肪。海洋の脂肪は動物、植物、細菌とすることができ、かつ／または藻（例えば、以下に示されている微細藻）とすることができる。例として、サメ肝油およびタラ肝油などの魚油、ならびにヘマトコッカス藻（ｈａｅｍｏｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）などの藻および微細藻の油を言及することができる。

植物起源の油（または、より簡単には、「植物油」）。本発明の特に好ましい実施形態によれば、オリーブオイル、ナタネ油、ダイズ油、トウモロコシ油、スイートアーモンドオイル、アンディローバオイル、シルバースミスオイル（Ｓｉｌｖｅｒｍｉｔｈｓ Ｏｉｌ）、ババスオイル、ローレルベリーオイル、ルリチシャオイル、ブロッコリオイル、ブリティオイル（ｂｕｒｉｔｉ ｏｉｌ）、テリハボクオイル、ツバキオイル、ベニバナオイル、クロフサスグリオイル、ヘンプオイル、ココナッツオイル、キューカンバーシードオイル、クランベリーオイル、ラズベリー種子オイル、パッションフルーツオイル、キーウィシードオイル、ヘーゼルナッツオイル、ブラジルナッツオイル、シアオレインオイル（ｓｈｅａ ｏｌｅｉｎ ｏｉｌ）、グレープシードオイル、アプリコットカーネルオイル、ゴマ油、米ぬか油、ナツメグシードオイル、トマトシードオイル、バオバブオイル、ツキミソウオイル、ツバキオイル、アマナズナオイル、マリアアザミオイル、グレープシードオイル、ニンジン油、セントジョンズワートオイル、アマニ油、クルミ油、ザクロシードオイル、ニゲラシードオイル（ｎｉｇｅｌｌａ ｓｅｅｄ ｏｉｌ）、ルリチシャオイル、カボチャシードオイル、エゴマ油、グリーンコーヒービーンオイル、アボカドオイル、ハイビスカスオイル、アルガンオイル、ベニバナオイル、ローズヒップオイル、クラウドベリーオイル（ｃｌｏｕｄｂｅｒｒｙ ｏｉｌ）、チア（サルビア・ヒスパニカ（ｓａｌｖｉａ ｈｉｓｐａｎｉｃａ））オイルなどの植物油が使用されるが、また、バニラ、セントジョンズワート、ユリ、ニンジン、ヒナギク、アルニカ、アロエベラ、キンセンカ、ウチワサボテン（非網羅的リスト）などの花の油温浸物（ｍａｃｅｒａｔｅ）も使用される。上記した通り、これらの植物油のなかで、本発明の実施中に見出されたもの、すなわち、テリハボクオイル（好ましくはバージンオイル）、ラズベリーオイル（好ましくはバージンオイル）、ツバキオイル（好ましくはバージンオイル）、ツキミソウオイル（好ましくはバージンオイル）、ブラジルナッツオイル（好ましくはバージンオイル）、バオバブオイル（好ましくはバージンオイル）およびオリーブオイル（好ましくは）は、それらの特に興味深い美容特性のために好ましく、最初の６つを特に好ましい条件とする。

テリハボクオイル（カロフィルム・イノフィルム（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｉｎｏｐｈｙｌｌｕｍ） Ｌ．；タマヌ）。タヒチのヒトによりタマヌと呼ばれ、マダガスカルのヒトによりフォアラ（Ｆｏｈａｒａ）と呼ばれている木である、カロフィルムは、皮膚に有益な作用をもたらす優れた油を生成する。これは、非常に芳香性であり、この油は、伝統的に、多くの皮膚病疾患（湿疹、乾癬、帯状疱疹など）を処置するために使用される。

多数の検討により、カロフィルムオイルは、殺菌特性および防御特性を有する、多数の活性成分を含有し、これにより、皮膚の問題に対する価値のある協働体（ａｌｌｙ）になることが知られている。

ケン化可能フラクションは、リノール酸（３０〜３５％）、オレイン酸（３０〜３５％）、パルミチン酸（１５〜２０％）、ステアリン酸（１５〜２０％）から構成される。

不ケン化フラクションは、抗細菌性の殺菌作用のイノフィリン（Ｉｎｏｐｈｙｌｌｉｎ）Ａ、強力な治癒および皮膚修復のカラウストラリン（Ｃａｌａｕｓｔｒａｌｉｎｅ）およびイノフィロリド（ｉｎｏｐｈｙｌｌｏｌｉｄｅ）、抗酸化剤および治癒作用（これらはまた、静脈循環に対して非常に強力な作用を有する）のポリフェノール、天然抗酸化剤のビタミンＥから構成される。

バオバブオイル（アダンソニア・ジギタタ（Ａｄａｎｓｏｎｉａ ｄｉｇｉｔａｔａ））。バオバブオイルは、セネガル薬局方において、その抗アレルギー特性および抗炎症特性のために使用される。化粧品では、この非常に柔軟性かつ鎮静性の油は、乾燥した皮膚、裂けた皮膚およびひび割れした皮膚に特に有効である。治癒および再生でよく知られているので、火傷のケア用に推奨されている。ケン化可能フラクションは、リノール酸（２２〜２６％）、オレイン酸（３０〜４０％）、パルミチン酸（２０〜２５％）、ステアリン酸（２〜６％）を含む。不ケン化フラクションは、フィトステロール（ベータ−シトステロールを含む）およびビタミンＥから構成される。

ブラジルナッツオイル（ベルトレチア・エクセルサ（Ｂｅｒｔｈｏｌｌｅｔｉａ ｅｘｃｅｌｓａ））。ブラジルナッツまたはアマゾンナッツは、ベルトレチア・エクセルサと呼ばれる、南アメリカの木に由来している。リン脂質、トコフェロールおよびフィトステロールの植物源であるブラジルナッツオイルは、天然抗酸化剤として作用しながら、皮膚に柔らかさ、快適さおよび弾力性をもたらす。

ケン化可能フラクションは、リノール酸（４０〜４５％）、オレイン酸（オメガ−９）（３０〜３５％）、パルミチン酸（１０〜１５％）、ステアリン酸（５〜１０％）から構成される。不ケン化フラクションは、フィトステロール（ベータ−シトステロールを含む）（細胞膜の構造および機能を維持して、炎症を軽減する）、スクアレン（皮膚表面の主要構造であり、柔軟特性および抗酸化特性を有する）、トコフェロール（脂肪酸の酸敗を予防し遊離ラジカルによる損傷から細胞を防御する強力な抗酸化剤である天然ビタミンＥ）、リン脂質（細胞膜を形成するものと類似の化合物、柔軟特性および防御特性）、セレン（抗酸化特性を有する微量元素）から構成される。

ツキミソウオイル（エノテラ・ビエニス（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ））。ツキミソウオイルは、リノール酸が非常に豊富であり、ガンマ−リノレン酸を含有する、希少油の１つである。細胞膜を再構築するこれらの必須脂肪酸は、驚く程の軟化特性、活力特性、再構築特性および抗しわ特性を有する。やはりビタミンＥが豊富なツキミソウオイルは、早期老化から皮膚を防御する。

ケン化可能フラクションは、リノール酸（７０〜７５％）、ガンマ−リノレン酸（５〜１０％）、オレイン酸（４〜８％）、パルミチン酸（４〜８％）、ステアリン酸（１〜４％）から構成される。

不ケン化フラクション（１．５〜２％）は、フィトステロール（治癒作用および回復作用があり、また炎症を軽減する）、トリテルペン（抗ラジカル作用があり、退行から組織を防御する）、ビタミンＥを含むステロール（天然抗酸化剤）から構成される。

ツバキオイル（カメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）Ｌ．）。緑茶油とも呼ばれるツバキオイルは、チャノキの種子から抽出される。ツバキの植物油は、皮膚に対して、滋養特性、防御特性、軟化特性および保湿特性を有する。

ケン化可能フラクションは、リノール酸（５〜１０％）、オレイン酸（７５〜８０％）、パルミチン酸（５〜１０％）、ステアリン酸（１〜５％）から構成される。

不ケン化フラクション（１．５〜２％）は、トリテルペン、スクアラン、サポニンおよびケンフェロールとそのグリコシドから構成され、これらは、ケルセチンなどの強力な抗炎症化合物である。これらは、炎症状態によって引き起こされる損傷から身体を防御する一助となる。

ラズベリーオイル（ルブス・イダエウス（Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ）Ｌ．）。ラズベリーオイルは、必須脂肪酸（オメガ−３およびオメガ−６）の含有量が非常に多いため、治癒特性を有しており、かゆみおよび湿疹を軽減するためにも使用される。ラズベリーオイルはまた、ＵＶＡおよびＵＶＢ光線の一部を吸収して、日光に対する光防御をもたらすことが知られている。ラズベリーオイルは、抗酸化剤およびカロテノイドが豊富であり、日焼けケアおよび日焼け後の修復に理想的な油でもある。

ケン化可能フラクションは、リノール酸（５０〜５５％）およびアルファ−リノレン酸（３０〜３５％）、オレイン酸（オメガ−９）（１０〜１５％）、パルミチン酸（０〜５％）から構成される。

不ケン化フラクションは、ビタミンＥ（約５６００ｍｇ／ｋｇ）（天然抗酸化剤）、没食子酸（天然抗酸化剤）、カロテノイド（ベータ−カロテン、ルテインおよびクリプトキサンチン）（抗ラジカル作用があり、退行から組織を防御する）から構成される。

オリーブオイル（オレア・エウロパエア（Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ）Ｌ．）。オリーブの木は、千年というその非常に長い寿命で知られている。オリーブの木は、世界の歴史において引用された最初の木でもある。

その種子ではなく、その果肉の冷間圧縮によって得られるので、オリーブオイルは、オレイン酸の最も豊富な油の１つである。滋養性、軟化性および柔軟性があり、本発明者らは、伝統的なアレッポ石鹸およびマルセル石鹸の組成中にオリーブオイルを見出している。

オリーブオイルは、優れた治癒剤であり、天候および日焼けの有害作用に対し抗酸化剤、鎮静および防御特色をもたらす不ケン化物を高い濃度で有する（約１〜２％）。体内では、オリーブオイルは、消化性の障害、とりわけ胃の障害に推奨される、消化特性およびわずかな緩下特性を有する。

ケン化可能フラクションは、リノール酸（１５〜２０％）、オレイン酸（５５〜６０％）、パルミチン酸（１５〜２０％）、ステアリン酸（０〜５％）から構成される。

不ケン化フラクションは、フェノール性化合物（ヒドロキシチロソール）（主要な抗酸化剤）、フィトステロール（治癒作用および回復作用）、スクアレン（皮膚表面の主要構成成分であり、柔軟特性および抗酸化特性を有する）、ビタミンＥ（アルファ−トコフェロール）、クロロフィル（天然抗酸化剤）から構成される。

本発明のために使用される脂肪が油（好ましい実施形態）である場合、この油は、バージンオイルであってもよく、または精製されていてもよい。本発明の特に好ましい実施形態によれば、少なくとも１つのバージンオイル、好ましくはバージン植物油が使用される。実際に、本出願人により開発された技術プラットフォームは、精製油にする必要なしに、ジアシルグリセロールおよび／または脂肪アルコール（美容活性成分）が富化されているバージンオイル、好ましくはバージン植物油を得ることが可能であるという大きな利点を有する。

バージン植物油。「バージン」と呼ばれる植物油は、一般に、栽培植物から最初の冷圧搾（最大温度６０℃）により、果実、種子、仁から機械的方法により、単独で抽出された純粋な植物油である。これらの油は、その不ケン化フラクションおよびケン化可能フラクションを特徴とする。不ケン化フラクションは、残留フラクションであり、この残留フラクションは、水に不溶性であるが、ケン化後、有機酸に可溶となる。ケン化不能な脂肪含有量は、一般に、０．５〜２％の範囲にある。これは、ステロール、炭化水素（スクアレンなど）、トリテルペン、脂肪アルコール（ワックス）、脂溶性顔料、ビタミンなどを含む複雑な混合物である。植物油の不ケン化フラクションは、その生物学的特性のため、化粧品への応用が見出されている。油のケン化可能フラクションは、脂肪酸、グリセリドおよびトリグリセリドを特徴とする。脂肪酸は、２つのタイプ、すなわち飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸（一価不飽和／ＭＵＦＡまたは多価不飽和／ＰＵＦＡ）である。脂肪としてこれらのバージン植物油を使用することは、本発明の意味内において特に好ましい。

精製油。上記した通り、バージンオイル、好ましくはバージン植物油の使用が、本発明の意味において好ましいが、本発明はまた、精製油でも良好に働く。油が精製される場合、それは、熱圧縮を受けなければならない。これは、圧縮しながら、８０℃〜１２０℃の間の温度において行われる。これにより、粗製油が生成され、この粗製油は、そのまま消費することはできず、望ましくない味および色調を取り除くため、長い一連の処理を受けなければならない。脱ガムステップは、加水分解をもたらす酸性水と共に撹拌することにより、不安定性、ならびに高温処理中の泡および煙（遊離脂肪酸、リン脂質）の生成に寄与する物質を除去することを含み、これにより、物質を分離する。次に、味は、重層溶液により中和される。この後に、漂白土により９０℃での漂白が続き、ろ過して、油からその顔料を除去する。この方法は、油の品質をよりよく保存するため、低圧水蒸気を使用する脱臭で終える。この方法で、風味がほとんどなく、澄んだ、臭いのない精製油が得られる。これらの油は、そのケン化可能フラクションを特徴としているに過ぎず、不ケン化フラクションは、この処理によって除去される。

本出願人は、不ケン化フラクションの構成成分、すなわちステロール、炭化水素（スクアレンなど）、トリテルペン、脂肪アルコール（ワックス）、脂肪可溶性顔料、およびビタミン（非網羅的リスト）は、本発明に係るこれらを含有している活性化脂肪および組成物の生物学的（美容）活性を増大させることができることを発見した。これが、この価値のある不ケン化フラクションを含むバージンオイル（好ましくはバージン植物油）の使用が、本発明に関して特に好ましい理由の１つであり、本発明を構成する技術プラットフォームは、バージンオイルの富化／活性化にかなり好適である。

活性化脂肪／活性化油。本発明は、ジアシルグリセロール富化脂肪（好ましくは、油）、特に、１，２−ジアシルグリセロールを得ることを特に目的としている。ジアシルグリセロールは、皮膚適用の文脈において、こうして富化されて美容活性成分として作用する、脂肪／油中に存在している。言い換えると、ジアシルグリセロール富化脂肪は、皮膚レベルにおいて、改変された構造、および増大した生物学的（美容）活性を有する。これが、こうして富化された脂肪／油が、活性化脂肪／活性化油とも呼ばれる理由である。

ワックス。ワックスは、エチレングリコールと２つの脂肪酸とのエステル、または脂肪酸と長鎖アルコールとのモノエステルである。ワックスは、ビーワックスなどの動物起源、ホホバ、カルナウバもしくはカンデリラワックスなどの植物起源、または無機物起源とすることができる。

脂肪アルコールは、末端位における単一ヒドロキシル官能基を有する長い炭化水素鎖を有する脂肪族アルコールである。脂肪アルコールとは、式（ＩＩＩ）の化合物：
（ＩＩＩ） Ｒ”-ＯＨ
（式中、Ｒ”は、脂肪アルコールの脂肪族鎖を表す）を意味する。この脂肪アルコールは、１０〜３４個の炭素原子を含む炭素鎖によって構成されている。

本発明の特定の一実施形態によれば、脂肪アルコールは、その炭素数が１２〜２６個の間の炭素鎖を有する。本発明の別の好ましい実施形態によれば、脂肪アルコールは、その脂肪鎖上に、１６〜２２個の間の炭素原子を有する。

したがって、これらの脂肪アルコールは、飽和または不飽和な平均サイズの脂肪族鎖脂肪アルコールからなる群から好ましくは選択されよう。

さらに、脂肪アルコールの脂肪族鎖（すなわち、基Ｒ"）は、線状または分岐状の炭素鎖、および／または飽和もしくは不飽和とすることができ、不飽和数は、１〜６の間である。Ｒ”基はまた、モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖とすることができる。したがって、これは、既存の天然形態のすべての中に存在することができる。

これらの脂肪アルコールは、ワックス中に多量に見出される。これらのワックスは、ビーワックスなどの動物起源、またはホホバ、カルナウバもしくはカンデリラワックスなどの植物起源、または無機物起源とすることができる。

したがって、例えば、ホホバ油ワックス（「ホホバワックス」と略す。ホホバ油の９６％超を構成するワックス）の加水分解の制御は、その中に含有している主な脂肪族脂肪アルコールを放出する作用を有しており、これにより、飽和または不飽和線状炭化水素鎖の脂肪アルコールの混合物がもたらされる。

特に、ホホバ油ワックスの加水分解により、その脂肪族鎖中に、１６〜２２個の間の炭素原子を有する、高純度の脂肪アルコールの混合物を得ることが可能になる。

ホホバ油ワックスは、南アリゾナおよびカリフォルニア、ならびに北西メキシコを原産とする低木植物である、ホホバ種子（シモンドシア・キネンシス（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））中に含有している液体ワックスである。ホホバ種子は、その重量の約５０％の油収率を有する。ホホバ油は、３６〜４６個の炭素原子の鎖を有するワックス（ｃｅｒｉｄｉｃ）エステルの混合物である。各分子は、エステル結合によって連結されている脂肪酸および脂肪アルコールからなる。ホホバ油は、１０％のオレイン酸（Ｃ_１８：１）、７０％のガドレイン酸（Ｃ_２０：１）、１５％のエルカ酸（Ｃ_２２：１）、５％のネルボン酸（Ｃ_２４：１）および関連する脂肪アルコールであるオクタコセノール（Ｃ_１８：１）、エイコセノール（Ｃ_２０：１）、ドコセノール（Ｃ_２２：１）およびテトラコセノール（Ｃ_２４：１）の存在を特徴としている。したがって、ホホバワックスの加水分解の制御は、その中に含有している主な脂肪族脂肪アルコールを放出する作用を有しており、これにより、飽和または不飽和な直鎖脂肪アルコールがもたらされる。

したがって、例えば、ホホバワックス（ホホバ油の９６％超を構成するワックス）の加水分解の制御は、その中に含有している主な脂肪族脂肪アルコールおよび脂肪酸を放出する作用を有しており、これにより、飽和および不飽和な炭化水素をベースとする脂肪アルコールおよび脂肪酸が富化されたワックスを得ることが可能である。特に、本発明に係るホホバ油の加水分解により、１８〜２４個の間の炭素原子を有する脂肪アルコール富化ワックスおよび脂肪酸を得ることが可能になる。したがって、この加水分解により、皮膚に作用することができる活性成分をすべて濃縮することが可能になる。

本発明に係る脂肪酸および脂肪アルコールの混合物は、好ましくは、ホホバ油（シモンドシア・キネンシス）中に存在しているワックスの加水分解から得られるであろう。この加水分解により、このワックスの構成体である脂肪アルコールの放出が可能になる。この加水分解は、アルコールおよび酸を放出するため、その主な活性がエステル結合を加水分解することである、トリアシルグリセロールヒドロラーゼを使用して、酵素により実施され得る。本発明の特に有利な可能性の１つは、トリアシルグリセロールの加水分解に使用されるものと同じリパーゼを使用することである。

好ましくは、本発明によれば、グループを構成する活性成分、すなわち、ジアシルグリセロール富化油、ならびに脂肪酸および脂肪アルコール中に富化されているワックスは、植物、海洋または動物起源となろう。

活性化ワックス。本発明は、特に、上で定義した、脂肪アルコール富化ワックス（好ましくは、ホホバ油ワックス、「ホホバワックス」と略す）を得ることが目的である。こうして富化されたワックス中に存在している脂肪アルコールは、有利には、皮膚適用の文脈において、活性化脂肪／油（上記を参照されたい）のジアシルグリセロールと組み合わせて、活性な日医用成分として作用する。言い換えると、脂肪アルコール富化ワックスは、皮膚レベルにおいて、改変された構造、および増大した生物学的（美容）活性を有する。これが、こうして富化されたワックスが、活性化ワックスとも呼ばれる理由である。

パパイヤのリパーゼ。リパーゼ（トリアシルグリセロールヒドロラーゼ；ＥＣ．３．１．１．３）は、可逆性酵素であり、これは、反応の大部分の有利な意味において、グリセロールエステルを加水分解する。これらの酵素はまた、その異なる特異性に従い、いくつかのグループ、すなわち基質に関する特異性、位置特異性または立体特異性、脂肪酸の性質に関する特異性またはタイプ選択性、位置特異性または立体特異性に分類され得る。本発明では、ｓｎ３タイプの立体特異的リパーゼが使用される。すなわち、このリパーゼは、１−２ジアシルグリセロールを優先的に形成することによりトリグリセリドを加水分解する。使用されるリパーゼは、植物起源（例：パパイヤ）または微生物起源（例：ペニセリウム・シクロピウム）であることができる。本出願人によって開発された技術プラットフォームは、パパイヤリパーゼの使用に基づく（Ｖｉｌｌｅｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＯＣＳ，７２，６：７５３．１９９５）。

パパイヤ（カリカ・パパヤ（Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａ））は、世界中の、主に熱帯および亜熱帯地域において育っている。パパイヤは、パパイヤ科（Ｃａｒｉｃａｃｅａｅ）のメンバーであり、これは、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｌｅｓ）に属する。パパイヤのラテックスは、パパイン、キモパパインおよびカリカインを含めた、システインの豊富な源である、エンドペプチダーゼが既に知られている。これらのプロテイナーゼは、水溶性ラテックスタンパク質として抽出され得る。リパーゼ活性の存在は、Ｇｉｏｒｄａｎｉらによって報告されている。最近まで、このラテックスフラクションからの酵素活性を可溶化するための試みはすべて、不成功であった。したがって、パパイヤラテックスリパーゼ（ＣＰＬ）は、伝統的に、「天然の固定化」生物触媒と見なされている。リパーゼ活性を含有する乾燥粉末は、水でラテックス粒子を洗浄し遠心分離した後に得ることができる。パパイヤラテックスの粗製樹液の立体特異性およびタイプ選択性は、加水分解中およびアシル転移反応中の両方で検討された。加水分解工程中に、１，３−立体特異的活性は、好ましくはｓｎ−３立体活性により、この生物触媒により決定された。

その実験手順の文脈では、本出願人は、記載されている実験条件下、本発明である、脂肪酸に対するこのリパーゼのある種のタイプ選択性を実証し、このリパーゼを、１８〜２０の間の長さの長鎖脂肪酸を有し、かつ０〜３の間の不飽和数を有するトリアシルグリセロールに向かわせた。実際に、以前に行われた試験では、本発明において使用した操作条件下で、１，２−ジアシルグリセロール富化油を得るための収率は、１８〜２０個の間の炭素鎖長を有する脂肪酸を主に有し、かつ不飽和を有する油（例えば、オリーブオイル）の場合の方が、飽和脂肪酸が、それぞれ、８〜１０個の間の炭素（カプリル酸トリグリセリド／カプリン酸トリグリセリド−Ｍｙｇｌｉｏｌ（登録商標）８１２）、１２〜１６個の炭素（動物性バター）、１６〜１８個の炭素（パーム油）の鎖長を有する油の場合よりも高いことを示した。これらの結果が、以下の表１にまとめられている。

上記した通り、本出願人によって開発された技術プラットフォームは、パパイヤリパーゼの使用に基づいており、より具体的には、その樹液の水不溶性フラクションの使用に基づいている。しかし、本発明はまた、有利には、１，２−ジアシルグリセロールの場合、好ましくは上で定義されている式（Ｉ）の１，２−ジアシルグリセロールの場合、任意の好適なリパーゼによる（好ましくは、ｓｎ３タイプ、例えば、植物または微生物起源の立体特異的リパーゼによる）ジアシルグリセロール富化脂肪に一層幅広く適用され、前記脂肪は、テリハボクオイル（好ましくはバージンオイル）、ラズベリーオイル（好ましくはバージンオイル）、ツバキオイル（好ましくはバージンオイル）、ツキミソウオイル（好ましくはバージンオイル）、ブラジルナッツオイル（好ましくはバージンオイル）およびバオバブオイル（好ましくはバージンオイル）から選択され、前記脂肪は、テリハボクオイル（好ましくはバージンオイル）である。さらに、本発明はまた、前記ジアシルグリセロール富化脂肪（有利には、１，２−ジアシルグリセロール、好ましくは上で定義した式（Ｉ）の１，２−ジアシルグリセロール）および脂肪アルコール富化ワックス（好ましくは、上で定義した式（ＩＩＩ）のもの）を含む、これらから本質的になる、またはこれらからなる組成物に適用される。

パパイヤ樹液（「粗パパイヤ樹液」とも呼ばれる）。パパイヤ樹液は、パパイヤラテックスから得られる。このラテックスは、まだ緑色の果実を切り刻むことにより採集される。緑色の果実は、表面を切って、空気に接触すると固化する白色ラテックスを採集する。これは、エンドペプチダーゼ酵素（生のパパイン＝パパイン、キモパパイン、パパイヤプロテイナーゼ；パパインは、２３０００ダルトンの分子量の２１２アミノ酸のタンパク質である）、リパーゼ（パパイヤのリパーゼ、英語ではパパイヤリパーゼと呼ぶ；Ｖｉｌｌｅｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ． ＪＡＯＣＳ，７２，６：７５３．１９９５）を含めたタンパク質、ならびに糖およびビタミンから主に構成される。

付属器官。付属器官は、集中的な角質化を特徴とする、表皮の目視可能な防御性産物である。毛髪、歯、爪および毛髪は、付属器官である。

皮膚。本発明の意味内では、皮膚は、身体の被覆を構成する身体の構成成分として、幅広い意味で理解され、頭皮（毛髪により覆われている頭蓋骨の皮膚）をとりわけ含む。

精製パパイヤ樹液、より具体的にはこのパパイヤ樹液の水不溶性フラクション（非水溶性）の特徴付け
乾燥パパイヤ樹液が水中に懸濁している場合、脂肪分解活性およびプロテアーゼ活性を示す酵素は様々な溶解度を示した。プロテアーゼは、リパーゼ活性を担う酵素とは異なり、可溶性である（Ｇｉｏｒｄａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１）。この特性により、パパイヤ樹液を２つのフラクションに部分的に分離することが可能である（以下の表２を参照されたい）。

パパイヤ樹液の分別は、乾燥物の含有量、および得られたフラクションのタンパク質含有量を特徴としており、これらの値を樹液のそれと比較する。使用した樹液は１８％の水分を有しており、その懸濁液は、水中の１０％であり、遠心分離により２つのフラクションに分離することで、出発の乾燥物の９２％および最初に存在するタンパク質の９９．７％の回収量になる。これらのタンパク質のなかで、８８％は、水溶性フラクション中に見出され、１２％が水不溶性粒子フラクション中に見出される（上の表２を参照されたい）。第２のステップでは、分離方法によって得られたタンパク質をより正確に特徴付けた。したがって、プロテアーゼおよびリパーゼ酵素活性の検討後、これらの２つのフラクション中に存在するタンパク質の分子量を決定することが可能であった。粗製樹液中および各フラクション中に存在しているタンパク質の量は、ケルダール法に従って決定し、以下の表３に報告する。次に、プロテアーゼ活性および脂肪分解活性を、パパイヤ樹液について、ならびに水溶性フラクションおよび水不溶性フラクション中で測定した。

水中のパパイヤ樹液の懸濁液は、樹液中に最初に含まれている、リパーゼ活性からプロテアーゼ活性を効率よく分離することを可能にする。実際に、最初に存在しているタンパク質分解活性および脂肪分解活性の約９０％は、それぞれ水溶性フラクションおよび水不溶性フラクション中に見出される。

パパイヤ樹液中、ならびにその水溶性フラクションおよび水不溶性フラクション中に存在するタンパク質の分子量を、変性および還元条件下１２％ポリアクリルアミドゲル上で決定した。こうして得られた電気泳動プロファイルが、図１に示されている。トラックＭは、分子量マーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に相当する。トラック１は、パパイヤ樹液に相当する。トラック２は、パパイヤ樹液の水中のフラクションに相当する。トラック３は、このパパイヤ樹液の水溶性フラクションに相当する。トラック４は、商業的に購入したパパイン（Ｆｌｕｋａ）に相当する。

観察された主要なタンパク質の分子量は、表示ｌｏｇＰＭ＝ｆ（Ｒｆ）（Ｒｆ＝タンパク質からの移動距離／ゲルの前面からの移動距離）を使用して、分子量マーカーの分子量との相関関係により決定した。

これらの分子量が、以下の表４に示されている。

パパイヤ樹液は、それぞれ、１８、２２、２３および３５ｋＤａの分子量の４つの主要なタンパク質を有する。水不溶性フラクションは、２３ｋＤａの分子量を有する単一タンパク質から構成されるように思われる。６つのタンパク質の水溶性フラクションは、１５、１８、２２、２３、２８および３５ｋＤａの分子量を有するので、１５ｋＤａのタンパク質の存在は、パパイヤ樹液を懸濁している間に起こる加水分解によるものに違いない。脂肪分解活性を有していない市販のパパインは、パパイヤ樹液と同じ５種のタンパク質形態から構成される。電気泳動プロファイル間の類似性は、確かに、この市販の抽出物が、プロ酵素および／または成熟酵素の形態のパパイヤ樹液のエンドペプチダーゼの混合物であるということによる。

これらの結果に基づくと、パパイヤリパーゼは、２３ｋＤａの分子量を有するように思われる。しかし、同じ分子量のタンパク質は、水溶性フラクションおよび市販のパパイン中にも存在しており、単一プロテアーゼ活性であることが明らかになった。

［ウエスタンブロットによる特徴付け］
次に、パパインタイプの活性に対応するタンパク質の分子量を特定するため、ウエスタンブロットによるこれらの同じ試料の分析を行った。

使用した抗体は、パパインを標的とするヤギ血清に由来するポリクローナル抗体であり、（Ｒｏｃｋｌａｎｄ、抗パパイン［パパイヤ］）、３５ｋＤａのタンパク質であることが主に判明する。より弱いシグナルが、分子量１５〜２８ｋＤａの間のタンパク質に関して観察される。

パパインは、２１〜２３ｋＤａの範囲の分子量を有することが記載されている（Ａｚａｒｋａｎ ｅｔ ａｌ．，２００３）。使用した抗体は、Ｎ−末端領域（１３４アミノ酸）を有するパパインのプロ酵素前駆体である、プロパパインに明らかに結合しており、次に、２１２アミノ酸から構成される成熟酵素に結合している。実際に、このプロ酵素は、３４５アミノ酸からなる（Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９、Ａｚａｒｋａｎ ｅｔ ａｌ．，２００３）。

強度の低いシグナルのより詳細な分析により、不溶性フラクションおよび水不溶性フラクションの２８ＫＤａの分子量を有するタンパク質、ならびに水溶性フラクションの２２ｋＤａのタンパク質への抗体の特異的な結合はそれほど存在していないことを特定することが可能となる。

水不溶性フラクションの場合、抗パパイン抗体は、２３ｋＤａの分子量を有するタンパク質に結合しなかった。これにより、このタンパク質は、パパインタイプのプロテアーゼではなく、パパイヤのリパーゼであることが確認される。

［ザイモグラムゲルによる特徴付け］
ザイモグラムゲル技法により、タンパク質混合物中の酵素の存在を、それ自体の活性に着目することにより決定することが可能となる。特異的な基質は、ポリアクリルアミドゲルに既に含まれており、個別のトラックを形成し、同じ反応により明らかにされる酵素をアイソザイムと呼ぶ。

様々な抽出物中の、プロテアーゼおよびパパイヤリパーゼの存在を位置づけるために、２つのザイモグラムゲル（脂肪分解性およびタンパク質分解性）の実施を検討した。

＜− プロテアーゼを明らかにするザイモグラム＞
使用されるＮｏｖｅｘ Ｃａｓｅｉｎ Ｚｙｍｏｇｒａｍのザイモグラムゲルは、１２％のポリアクリルアミドから構成され、プロテアーゼの潜在的な基質である１０％のカゼインを含有する分離用ゲルから構成される。このゲルは、酵素活性を維持するため、非還元条件下で生成される。タンパク質分解活性を有する酵素は、ゲルのカゼインを局所的に加水分解するであろう。クマシーブルーでゲルを染色した後、図３に示されるように、タンパク質が加水分解されているゾーンは、均一な青色の背景に白色で強調される。この図３では、トラック１はパパイヤ樹液に相当し、トラック２は、パパイヤ樹液の水不溶性フラクションに相当し、トラック３は、パパイヤ樹液の水溶性フラクションに相当し、トラック４は、商業的に購入したパパイン（Ｆｌｕｋａ）に相当する。

カゼインの加水分解、したがって多少なりとも重要なプロテアーゼ活性の存在が、分析したすべてのフラクションに観察される（図３）。２つのアイソフォームが観察され、アイソフォーム２は、水溶性フラクションおよび市販のパパインに対してより強い強度を有している。

＜− リパーゼを明らかにするザイモグラム＞
リパーゼ酵素活性を検出するためのザイモグラムの生成は、プロテアーゼの場合よりも複雑である。文献は、２つのゲル、すなわちタンパク質が分離される第１のもの、および基質を含有する第２のものからなる系を記載している（Ｇｉｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ａｂｏｕｓａｌｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２０００）。第１の工程では、タンパク質は、天然の条件下でポリアクリルアミドゲル上を移動する。次に、リパーゼの存在は、脂質基質および着色指示薬であるビクトリアブルー（その色は酸性媒体中では青色であり、塩基性媒体では赤色である（Ｙａｄａｖ ｅｔ ａｌ．，１９９７））の両方を含有する、第２のポリアクリルアミドゲルから構成される被覆層を適用することにより明らかになる。したがって、このタイプのザイモグラムでは、リパーゼ活性の存在は、オリーブオイルのトリアシルグリセロールの加水分解ゾーン、したがってオレイン酸の生成に対応する青色の外観により表示される。

２つのポリアクリルアミドゲルを、平行で実施する。第１の対照ゲルは、クマシーブルーにより染色され（図４Ａ）、非変性条件において、タンパク質の移動プロファイルを示すことが可能になる。平行して、第２のザイモグラムゲルは、基質を含有する被覆層により明らかになる（図４Ｂを参照されたい）。

より具体的には、図４Ａは、クマシーブルーで明らかになった、１４％のポリアクリルアミドゲルにおける、非変性条件でのザイモグラムゲルを表し、図４Ｂは、オリーブオイルおよびビクトリアブルー（Ｂ）から構成されるゲルを被覆することにより明らかになった、１４％のポリアクリルアミドゲルにおける、非変性条件でのゲルを表している。

図４Ａおよび４Ｂの対象物であるザイモグラムゲルのトラックは、同一であり、
− トラック１は、パパイヤ樹液、
− トラック２は、パパイヤ樹液の水不溶性フラクション、
− トラック３は、パパイヤ樹液の水溶性フラクション、
− トラック４は、商業的に購入したパパイン（Ｆｌｕｋａ）、および
− トラック（Ｍ）は、分子量マーカー
に相当する。

非変性条件下では、移動は正確ではなく、２つのタンパク質実体しか観察されない（図４Ａ）。

ザイモグラム自体に関すると、オレイン酸の生成に対応するゲルの青色の着色は、パパイヤ樹液およびその水不溶性フラクションに観察される。脂肪分解活性は、これらのフラクションにしか存在しない。

市販のパパインは、リパーゼ活性を有していない。したがって、この抽出物中に存在している２３ｋＤａタンパク質は、様々なフラクションの酵素活性の検討が既に示唆されているので、リパーゼに相当するものではない（上の図２を参照されたい）。

このザイモグラムの検討は、タンパク質分解活性および脂肪分解活性を明らかにすることが可能であり、これにより、パパイヤエンドペプチダーゼが、検討した抽出物において大きなタンパク質分解酵素活性を有するタンパク質のグループであることが確認された。

この検討はまた、パパイヤ樹液およびその水不溶性フラクションしか、２３ｋＤａに近い分子量のタンパク質に結合している脂肪分解活性を有していないことを実証した。

１，２−ジアシルグリセロールを定量するために使用するＧＰＣ（ガスクロマトグラフィー）方法
このアッセイは、内部標準に１，３−ジパルミチンを使用して、ガスクロマトグラフィーにより行う。この分析は、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ（登録商標）ソフトウェアにより制御され、水素炎イオン化型検出器および自動インジェクタを有する、Ａｇｉｌｅｎｔ７８９０ガスクロマトグラフィーを使用し、非極性タイプのキャピラリーカラム（ＨＰ５（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５ｍｍ）で行う。

ベクターガスは、ヘリウム（１．０ｍＬ／分）であり、インジェクタおよび検出器は、３３０℃まで加熱し、オーブンは、３２５℃で３０分間、等温でプログラム化されている。注入した試料の体積は、１μｌである。これらの条件下では、１，３−ジパルミチンは、それぞれ１３分間の保持時間を有する。様々なジアシルグリセロールは、以前の書誌検討、および質量分析法に連結したガスクロマトグラフィーにより実施された以前の分析である、標準品の使用によって決定した保持時間を有する。

応答係数の決定（１，２−ジアシルグリセロールはすべて、１，２−ジオレインとして、同一の応答係数を有するという作業仮説である）では、１，２−ジオレインを参照分子として使用する。

標準溶液：以下の質量を正確に秤量することにより、以下の通り４種の溶液を調製する。

本発明者らの分析条件下では、１，２−ジオレインの応答係数は１．２３１５（１．６３％のＣＶ）である。

次に、富化油を以下の通り分析する。

次に、溶液中に含有している１，２−ジアシルグリセロールの量を、以下の通り決定する。溶液中に含有する１，２−ジオレインの質量を算出する：
ｍ（Ｅｃｈ）＝［α（Ｅｃｈ）ｘＡ（Ｅｃｈ）ｘｍ（ＳＩ）］／Ａ（ＳＩ）
［式中：ｍ＝質量（ｍｇ）
Ａ＝ピーク下面積
α＝応答係数
Ｅｃｈ＝試料（１，２−ジアシルグリセロール）
ＳＩ＝内部標準（１，３−ジパルミチン）］
または
ｍ（１，２−ジアシルグリセロール）＝［１．２３１５×ΣＡ（１，２−ジアシルグリセロール）ｘｍ（１，３−ジパルミチン）］／Ａ（１，３−ジパルミチン）
含有量の算出：含有量（％）＝［ｍ（１，２−ジアシルグリセロール）／ｍ（富化油）］ｘ１００

［実施例１］
＜パパイヤのリパーゼが富化された、パパイヤ樹液の水不溶性フラクションを得る方法＞
リパーゼ富化パパイヤ抽出物は、９００ｇの蒸留水中の乾燥粗パパイヤ１００ｇの懸濁液を生成することにより得る。こうして、乾燥粗パパイヤ樹液は、懸濁した粒子および水溶性フラクションを含む二相懸濁液となる。

この混合物を室温で２時間、１分間あたり５００回の回転速度（ｒｐｍ）で、アンカータイプの撹拌器を用いて撹拌する。

パパイヤ樹液の水不溶性（非水溶性）フラクション（上記に特徴付けされている）を、３０分間、１時間あたり２００リットルの流速で、プレート遠心分離器などの遠心分離器を使用して、混合物の遠心分離によって可溶性フラクションから分離する。

遠心分離のペレットは、目的のフラクション、すなわち粗パパイヤ樹液の水不溶性フラクションを有する。

こうして、２５％の乾燥重量を有する、２０ｇの微粒子フラクションが得られる。

［実施例２］
＜活性化１，２−ジアシルグリセロール富化油を調製する方法＞
この化合物を、２つの個別のステップで調製し、次に、単純な混合により、適切な割合でこれらの２つの方法からの生成物を一緒にする。

１，２−ジアシルグリセロール富化油を、バージンのテリハボクオイル、またはラズベリーオイル、またはバオバブオイル、またはツキミソウオイル、またはブラジルナッツオイル、またはツバキオイル（それらは、本発明の意味内で、活性化されると、優れた皮膚美容特性をもたらす）、および油の体積の０．５〜５０％、好ましくは１〜４０％となる二価イオン（カルシウムイオンまたはマグネシウムイオンなど）を含有する、ある量の水または生理食塩溶液から調製する。サーモスタットにより制御されている槽内で、この混合物を３０〜７０℃の間の温度、好ましくは５０℃の温度で維持する。この混合物を、油と水との間にエマルションの形成を可能にするために、ステータロータタイプの装置を使用する撹拌下に維持する。

次に、この混合物を、約０．０１〜約０．２の間、有利には約０．０５〜０．０１５の間、好ましくは約０．１を含んで使用される、パパイヤ樹液の水不溶性フラクション／脂肪の体積比で、実施例１の方法を実施することにより得られた、パパイヤリパーゼ富化パパイヤ樹液の所与の体積の水不溶性フラクションの存在下で撹拌下のままにする。

撹拌および温度は、１〜６時間の間（好ましくは、４時間）の時間、すなわち、形成するジアシルグリセロールの量を最大化するのに十分な時間、維持する。

この反応のモニタリングは、慣用的な脂肪産業の指標（酸性度指標ＮＦ ＥＮ ＩＳＯ６６０および過酸化物指標ＮＦ ＩＳＯ３９７６の測定）を決定することにより、および特に、ジアシルグリセロールを特定してその含有量を定量するためのガスクロマトグラフィーによる、クロマトグラフィー法の使用により行う。

次に、この反応媒体を物理化学的な精製技法により精製するが、その目標は、反応に最初に使用した油に最も近い色調を有する、光沢があって無臭の１，２−ジアシルグリセロール富化油を得ることである。

最初に、反応媒体を、多孔度の低い（５００〜２５０μｍ）一連のセルロースフィルターによってろ過する。これにより、まずエマルションが分解して、次に媒体の濁りがなくなる。

次に、無水硫酸マグネシウム吸水剤を使用して残留水を除去する。次に、こうして得られた油を脱臭して、活性炭（好ましくは、ＣＮ１タイプのＣａｂｏｔ Ｎｏｒｉｔ（登録商標）活性炭）の手助けにより、光沢が付与される。

こうして得られた油の特徴は、本発明において記載されている方法に特有の共通部分を有しているが、使用した油の性質に固有の特定の特徴をやはり有する。反応媒体は、主に、未加工のトリグリセリド、モノグリセリド、ならびに１，２−および１，３型ジアシルグリセロールからなる。

油は、１５〜５０の間の酸性度指標、５〜３０の間の過酸化物指標、および５〜３０％の間の１，２−ジアシルグリセロール比により一般に特徴付けられる。

得られたジアシルグリセロールの性質は、油中に最初に存在しているトリアシルグリセロールに基づいている。

以下の表７および８により、
− 本発明の意味において特に好ましい、６つのバージンオイルと、
− 同一の６つのバージン１，２−ジアシルグリセロール富化油
の１，２−ジアシルグリセロールおよび１，３−ジアシルグリセロールの酸性度指標、過酸化物指標および含有量を比較することが可能である。

さらに、液体脂肪アルコール富化ワックスは、上記の調製方法に必要な変更を行うことにより、すなわち油の代わりにワックスを使用し、脂肪アルコール富化ワックスを得ることにより、調製される。完全なものとするため、この方法を、以下に記載する。

第１に、ホホバワックスは、ｐＨの修正なしに、前記ワックスと、ワックスの体積の０．５〜５０％、好ましくは１〜４０％となる、カルシウムイオンまたはマグネシウムイオンなどの二価イオンを含有するある量の水または生理食塩溶液とを混合することで、ステータロータタイプの撹拌器を使用して乳化する。サーモスタットにより制御されている槽内で、この混合物を３０〜７０℃の間の温度、好ましくは５０℃の温度に維持する。この混合物は、ワックスと水との間の安定したエマルションの形成が可能となるよう、ステータロータタイプの装置を使用する撹拌下に維持する。

次に、この混合物を、約０．０１〜約０．２の間、有利には約０．０５〜０．０１５の間、好ましくは約０．１を含んで使用される、パパイヤ樹液の水不溶性フラクション／脂肪の体積比で、実施例１の方法を実施することにより得られた、パパイヤリパーゼ富化パパイヤ樹液の所与の体積の水不溶性フラクションの存在下で撹拌下のままにする。

撹拌および温度を、１〜６時間の間（好ましくは、６時間）の時間、すなわち、形成する脂肪アルコールの量を最大化するのに十分な時間、維持する。

最初に、反応媒体を、多孔度の低い（５００〜２５０μｍ）一連のセルロースフィルターによってろ過する。これにより、まずエマルションを分解して、次に媒体の濁りがなくなる。

次に、無水硫酸マグネシウム吸水剤を使用して残留水を除去する。次に、こうして得られたワックスを脱臭して、活性炭（好ましくは、ＣＮ１タイプのＣａｂｏｔ Ｎｏｒｉｔ（登録商標）活性炭）の手助けにより、光沢が付与される。

反応生成物は、酸性度指標ＮＦ ＥＮ ＩＳＯ６６０を測定することにより、およびクロマトグラフィー方法を使用することにより、特に脂肪酸および脂肪アルコールを特定して、それらの含有量を定量することを可能にするガスクロマトグラフィーにより行われる。

得られた生成物は、２〜４％の間の脂肪アルコール含有量および５ｍｇ／ワックス１ｇの酸性度指標を好ましくは特徴とする。

本発明の特定の実施形態では、組成物は、１，２−ジアシルグリセロール富化油（活性化油）、またはいくつかの１，２−ジアシルグリセロール富化油（活性化油）の混合物に相当する。

本発明の特定の実施形態では、組成物は、脂肪アルコール富化液体ワックス（活性化ワックス）、またはいくつかの脂肪アルコール富化液体ワックス（活性化ワックス）の混合物に相当する。

好ましい実施形態では、次に、本発明に係る組成物は、１，２−ジアシルグリセロール富化油（活性化油）と脂肪アルコール富化液体ワックス（活性化ワックス）とを、１００〜９０％の間の富化油および０〜１０％の富化液体ワックスを含む重量割合で、単に混合することにより得られる。

［実施例３］
＜活性化油を含む化粧品製剤＞
（３．１ アイコントゥールゲル）

特性：
外観：滑らかな半透明ゲル
ｐＨ：５．５０〜６．０
粘度（Ｄ０） １５０００〜２５０００（ブルックフィールドＲＶＴ／スピンドルＢ／５ＲＰＭ／１分／２５℃）

この配合物は、実験室において３か月間の加速安定性試験を受けた。この配合物の保存は、２８日間にわたる二重効力試験（ｄｏｕｂｌｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｔｅｓｔ）により、確認した。しかし、保存剤は、その最低の効率レベルに最適化しなかった。
（３．２−二相フェイシャルセラム）

特性：
外観：緑色および暗青色二相液体 − 使用前に振とう
ｐＨ：５．０〜６．０
粘度（Ｄ０） Ｎ．Ａ．

この配合物は、実験室において３か月間の加速安定性試験を受けた。この配合物の保存は、２８日間にわたる二重効力試験により確認した。しかし、保存剤は、その最低の効率レベルに最適化しなかった。

［実施例４］
＜本発明に係る様々な活性化油の存在下で、エクスビボでのヒト皮膚における、サイトケラチンの発現の検討＞
（４．１ − サイトケラチンの序論）
サイトケラチンは、中間フィラメントのタンパク質であり、他のタンパク質と一緒になって、細胞の細胞骨格を形成する。これらは、上皮構造の維持、損傷からの防御、および他の細胞質構成成分との伝達を含めた、多数の機能を有する（Ｆｕｅｒｔｅｓ Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２０１３）。

これらは、様々な発現プロファイルがその位置に依存して、一対で発現され、その分子量および等電点に従い、１〜２０の番号でランク付けされる。サイトケラチンは、２つの群に分類される（Ｆｕｅｒｔｅｓ Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２０１３）：
− タイプＩのサイトケラチンは、酸であり、一般に、低分子量を有するサイトケラチンに相当する。
− タイプＩＩのサイトケラチンは、塩基性であり、一般に、高分子量を有する。

表皮分化の過程中に、基底層のケラチノサイトは、その増殖可能性を喪失し、上部層に移動し、ケラチン５および１４の発現が阻止される一方、ケラチン１および１０の発現が増大する（Ｐａｌａｄｉｎｉ ＲＤ ｅｔ ａｌ．，１９９９）。

（４．２ 検討の目的）
この検討の目的は、エクスビボでのヒト皮膚において、サイトケラチンの発現に及ぼす、実施例２の方法を実施することにより得られる、本発明に係る様々な活性化油／活性化ワックスブレンドの影響を決定することである。
（４．３ − 試験した油）
試験した様々な油は、
天然のバージンタマヌオイルに対して、実施例２の方法により得られた、活性化タマヌオイル（テリハボク）／活性化ホホバワックスブレンド（実施例４の残りにおいて、「活性化タマヌオイル」と略す）、
天然のバージンバオバブオイルに対して、実施例２の方法により得られた、活性化バオバブオイル／活性化ホホバワックスブレンド（実施例４の残りにおいて、「活性化バオバブオイル」と略す）、
天然のバージンラズベリーオイルに対して、実施例２の方法により得られた、活性化ラズベリーオイル／活性化ホホバワックスブレンド（実施例４の残りにおいて、「活性化ラズベリーオイル」と略す）、
天然のバージンツキミソウオイルに対して、実施例２の方法により得られた、活性化ツキミソウオイル／活性化ホホバワックスブレンド（実施例４の残りにおいて、「活性化ツキミソウオイル」と略す）
である。

（４．３ − プロトコル）
直径が６ｍｍであるヒト皮膚試料を、空気／液体界面において培養する。活性化油は、対応する非活性化油中に０．５％まで希釈する。２０μＬの油を皮膚試料（１回のみの適用）に局所的に適用し、次に、これらの生検体を３７℃において２４時間、インキュベートする。培養の終了時に、ヒト皮膚試料は、最適切削温度（ＯＣＴ）ゲルに含まれている。ＯＣＴは、冷たいもの（液体窒素）に接触すると固化する。皮膚試料を含有するこれらのかたまりを−２０℃において保管する。

次に、６μｍの厚さの切片を採取する。次に、皮膚試料のこれらの切片を３７℃でオーブン乾燥し、次に、アセトン（予め−２０℃まで冷却）により固定化する。

免疫標識を、パンサイトケラチンに特異的なマウスモノクロナール抗体（Ａｂｃａｍ、参照番号ａｂ２７９８８）、次いで蛍光色素を結合した抗マウス二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、参照番号Ａ２１２０２）を使用して行い、その後、皮膚試料の切片を落射蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ ２００Ｍ）下で試験する。得られた写真からの蛍光の定量は、Ｖｏｌｏｃｉｔｙソフトウェアを用いて実施した。

（４．４ −結果）
顕微鏡観察により、対応する非活性化油と比較した、活性化タマヌオイル、活性化バオバブオイル、活性化ラズベリーオイルおよび活性化ツキミソウオイルにより処理した生検体の表皮において、かなり一層の強い蛍光が示される。得られたデータが、以下の表１１〜１４中に示されている。

統計学的解析を、対応する非活性化油に対して行った（平均値±標準誤差、ｎ＝８、^＊＊＊：スチューデントｔ検定によりかなり有意性がある）。

活性化油と対応するバージンオイルとの間に観察された発現の差異を強調するため、得られたデータを、図５に示されているグラフにプロットした。

（４．５− 結論）
サイトケラチンの発現は、活性化タマヌオイル、活性化バオバブオイル、活性化ラズベリーオイルおよび活性化ツキミソウオイルによって、エクスビボのヒト皮膚において増大する。したがって、これらの活性化油は表皮分化を刺激し、したがって、興味深い美容特性を有する。

（４．６ −書誌参照）

Claims (19)

1. パパイヤリパーゼが富化された、パパイヤ樹液の水不溶性フラクションを得るための方法であって、
   ａ）蒸留水中に乾燥パパイヤ樹液を、有利には０．０１〜０．５の間、好ましくは０．０５〜０．２５の間、好ましくは０．０８〜０．２の間、特に好ましくは０．１を含む乾燥粗パパイヤ／蒸留水の重量比で懸濁させるステップと、
   ｂ）ステップａ）において得られた前記懸濁液を、前記パパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションを含有するペレットを得るように、有利には５分間〜９０分間の間、好ましくは１５分間〜６０分間の間、好ましくは２０〜４０分間の間を含む時間の間、および２０００〜６０００ｒｐｍの間、好ましくは３０００〜５０００ｒｐｍの間、好ましくは４０００ｒｐｍを含む回転速度において遠心分離するステップと、
   ｃ）パパイヤリパーゼが富化された前記パパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションを含有するペレットを回収するステップと
   を含み、
   ステップａ）の後かつステップｂ）の前に、
   ａ'）ステップａ）において得られた前記懸濁液を、１５分間〜２４０分間の間を含む時間の間、有利には３０分間〜１８０分間の間、好ましくは６０分間〜１５０分間の間、特に好ましくは１２０分間の時間の間、および１０℃〜３０℃の間を含む温度、有利には１５℃〜２５℃の間の温度、好ましくは室温において撹拌するステップ、
   を含む方法。
2. ステップｂ）の後かつステップｃ）の前に、
   ｂ'）微粒子粉末が得られるまで前記湿潤ペレットを乾燥するステップ
   を含み、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションが、微粒子粉末の形態で、ステップｃ）において回収される、請求項１に記載の方法。
3. 請求項１または２に記載の方法により得られた、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤの水不溶性フラクション。
4. 脂肪をジアシルグリセロールで富化するため、および／またはワックスを脂肪アルコールで富化するための、請求項３に記載の前記水不溶性パパイヤフラクションの使用。
5. ジアシルグリセロール富化脂肪の調製方法であって、
   ｉ）脂肪と、カルシウムイオンまたはマグネシウムイオンなどの二価イオンを好ましくは含有する水または生理食塩溶液とを、０．００５〜０．５の間、好ましくは０．０１〜０．４の間を含む水または生理食塩溶液／脂肪の体積比で混合するステップと、
   ｉｉ）エマルションが前記脂肪と前記水との間に得られるまで、この混合物を、３０℃〜７０℃の間を含む温度、有利には５０℃において、好ましくは１〜３０分間の間、好ましくは５〜２０分間の間、および好ましくは１０分間を含む時間の間、撹拌下に維持するステップと、
   ｉｉｉ）引き続き撹拌下および前記温度において、０．０１〜０．２の間、有利には０．０５〜０．０１５の間、好ましくは０．１を含む、使用されるパパイヤ樹液の水不溶性フラクション／脂肪の体積比で、前記ステップにおいて得られた前記混合物に、請求項３に記載の前記パパイヤ樹液の所与の体積の前記水不溶性フラクションを接触させるステップと、
   ｉｖ）前記ジアシルグリセロール富化脂肪が得られるよう、１時間〜６時間の間、有利には２時間〜５時間の間、好ましくは４時間を含む時間、前記温度および撹拌を維持するステップと
   を含む、方法。
6. ステップｉｖ）の後に、
   ｖ）前記ジアシルグリセロール富化脂肪を含有する反応媒体から、パパイヤリパーゼが富化されたパパイヤ樹液の前記水不溶性フラクションを分離するよう、少なくとも１つの勾配フィルター、または多孔度の低下した少なくとも２つのフィルターであり、有利には、約５００μｍ〜約２５０μｍの多孔度の低下した少なくとも２つのフィルターを重ね合わせたものを少なくとも１つ好ましくは使用して、ステップｉｖ）において得られた前記混合物をろ過するステップ、
   を含む、請求項５に記載の方法。
7. ステップｖ）の後、
   無水硫酸マグネシウムのような乾燥剤により、前記ジアシルグリセロール富化脂肪を含有する前記反応媒体中に存在する残留水を除去するステップ、ならびに／または
   活性炭により前記ジアシルグリセロール富化脂肪を脱臭する、および／もしくはそのつやを改善するステップ
   の２つのステップのうちの少なくとも１つ、有利にはこれらの両方を含む、請求項６に記載の方法。
8. 前記脂肪が、動物、植物および／または海洋起源の油、バージンオイルまたは精製油、有利には、バージンオイルであり、前記油が、好ましくは植物および／または海洋起源、好ましくは植物起源のものである、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記脂肪が、
   １２〜２６の間、有利には１６〜２０の間、特に好ましくは１６〜１８の間の炭素数を有する脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖であって、線状または分岐状の、有利には線状の飽和または不飽和であり、有利には不飽和であって、１〜６の間、好ましくは１〜３の間の不飽和数を好ましくは有する不飽和である、前記脂肪族炭化水素鎖、または
   モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖
   を有するトリグリセリドを含む油である、請求項５〜８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記脂肪が油、好ましくはバージンオイルであり、テリハボクオイル、ラズベリーオイル、ツバキオイル、ツキミソウオイル、ブラジルナッツオイル、バオバブオイルおよびオリーブオイル、またはこれらの油のうちの少なくとも２つの混合物から選択される油であり、前記油、好ましくはバージンオイルは、テリハボクオイル、ラズベリーオイル、ツバキオイル、ツキミソウオイル、ブラジルナッツオイルおよびバオバブオイルまたはこれらの油のうちの少なくとも２つの混合物から有利には選択され、特に好ましくは、前記脂肪は、テリハボクオイル、好ましくはバージンテリハボクオイルである、請求項５〜９のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記ジアシルグリセロールが、式（Ｉ）および（ＩＩ）：
    （式中、Ｒ１およびＲ２は、
    １２〜２６の間、有利には１６〜２０の間、特に好ましくは１６〜１８の間の炭素数を有する脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖であって、線状または分岐状の、有利には線状の飽和または不飽和であり、有利には不飽和であって、１〜６の間、好ましくは１〜３の間の不飽和数を好ましくは有する不飽和である、前記脂肪族炭化水素鎖、または
    モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖である。）
    によりそれぞれ表される１，２−ジアシルグリセロールおよび１，３−ジアシルグリセロールからなる、請求項５〜１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記ジアシルグリセロールが、式（Ｉ）：
    （式中、Ｒ１およびＲ２は、
    １２〜２６の間、有利には１６〜２０の間、特に好ましくは１６〜１８の間の炭素数を有する脂肪酸の脂肪族炭化水素鎖であって、線状または分岐状の、有利には線状の飽和または不飽和であり、有利には不飽和であって、１〜６の間、好ましくは１〜３の間の不飽和数を好ましくは有する不飽和である、前記脂肪族炭化水素鎖、または
    モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖である。）
    により表される１，２−ジアシルグリセロールを主に含み、好ましくは上記の１，２−ジアシルグリセロールから本質的になる、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法を実施することを含む、脂肪アルコール富化ワックスを調製する方法であって、ワックスが脂肪として使用され、ジアシルグリセロール富化脂肪の代わりに、脂肪アルコール富化ワックス、有利には、式（ＩＩＩ）の脂肪アルコール：
    （ＩＩＩ） Ｒ”-ＯＨ
    （式中、Ｒ”は、
    １０〜３４個の炭素原子、好ましくは１２〜２６個の炭素原子、特に好ましくは１６〜２２個の炭素原子を含有する脂肪アルコールの前記脂肪族炭化水素鎖であって、
    線状または分岐状の、有利には線状の飽和または不飽和であり、好ましくは最大で６の不飽和数を有している、前記脂肪族炭化水素鎖、または
    モノもしくはポリヒドロキシル化、および／またはモノもしくはポリメトキシ化、および／またはモノもしくはポリ酸化、および／またはモノもしくはポリエポキシ化鎖
    を表す。）
    の脂肪アルコール富化ワックスが得られる、方法。
14. 前記ワックスが、
    例えば、ビーワックスなどの動物起源のワックス、
    無機物起源のワックス、または好ましくは、
    ホホバ、カルナウバ、カンデリラワックスなどの植物起源のワックス、
    またはそれらの混合物
    から選択され、前記ワックスが、有利にはホホバワックスである、
    請求項１３に記載の方法。
15. 請求項５〜１２のいずれか一項に記載の方法により得られた、ジアシルグリセロール富化脂肪。
16. 前記脂肪が、５％〜３０％の間、好ましくは７％〜１８％の間を含むジアシルグリセロール含有量、１５〜５０ｍｇ／ｇの間の酸性度指標、および５〜３０ｍｇ／ｇの間、好ましくは２０ｍｇ／ｇ未満の過酸化物指標を有する、請求項１５に記載のジアシルグリセロール富化脂肪。
17. 請求項１３または１４に記載の方法により得られた、脂肪アルコール富化ワックス。
18. 請求項１５または１６に記載の少なくとも１つのジアシルグリセロール富化脂肪と請求項１７に記載の少なくとも１つの脂肪アルコール富化ワックスとのブレンドを、有利には、０．０１〜０．１１の間、好ましくは、０．０２〜０．０８の間、好ましくは０．０３を含む、脂肪アルコール富化ワックス／ジアシルグリセロール富化脂肪の重量比で含む組成物。
19. 健常なヒト個体または動物、好ましくはヒトにおいて、
    皮膚の老化の外観を遅延させる、もしくはその徴候を制限するため、ならびに／または
    すべてのタイプの外部攻撃から、皮膚および／もしくはその付属器官を防御するため、ならびに／または
    表皮分化を促進するため、ならびに／または
    皮膚および／もしくはその付属器官のバリア機能を強化するための、
    皮膚適用による、有効量の請求項１５若しくは１６に記載の少なくとも１つのジアシルグリセロール富化脂肪、請求項１７に記載の少なくとも１つの脂肪アルコール富化ワックス、または請求項１９に記載の組成物の美容的使用。