JP2019505164A5

JP2019505164A5 -

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Publication number: JP2019505164A5
Application number: JP2018522671A
Authority: JP
Filing date: 2016-11-01
Publication date: 2019-12-12
Anticipated expiration: 2036-11-01

Claims

タンパク質の産生方法であって、タンパク質が、所定の割合でフコシル化形態及び脱フコシル化形態で産生され、方法が、
タンパク質を培地中で発現するように操作された宿主細胞を培養することを含み、
宿主細胞におけるＧＤＰ−ケト−６−デオキシマンノース−３，５−エピメラーゼ，４−レダクターゼ（ＦＸ）活性が不活性化されており、
宿主細胞が、ＦＸノックアウト宿主細胞であり、かつ
培地が、フコース源を、所定の割合でタンパク質のフコシル化形態及び脱フコシル化形態を産生するのに十分な量で含む、方法。
所定の割合が５０：１〜１：５０である、請求項１に記載の方法。
タンパク質を産生するように操作された宿主細胞によって産生されるタンパク質のフコシル化レベルの調整方法であって、方法が、
ａ）宿主細胞を初期培地中で培養することであって、宿主細胞におけるＦＸ活性が不活性化されており、宿主細胞がＦＸノックアウト宿主細胞であり、かつ培地がフコース源を含む、培養することと、
ｂ）タンパク質のフコシル化レベルを決定することと、
ｃ）培地中のフコース源の量を、タンパク質が所定のフコシル化レベルで産生されるように調整することと、を含む、方法。
フコース源の量を調整することが、フコシル化レベルが低い場合にフコース源の量を増加させること、またはフコシル化レベルが高い場合にフコース源の量を減少させることを含む、請求項３に記載の方法。
（ｉ）宿主細胞をフコース源を含む培地中で培養する前に、宿主細胞をフコース源を含まない培地中で培養することを含む、または（ｉｉ）培養ステップの開始時にフコース源が培地中に存在し、特に培養ステップの間の培地中のフコース源の量が、０．０１ｍＭ〜１ｍＭである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
培養ステップが、３７℃未満で実行される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
タンパク質を細胞培養物から単離することを更に含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
フコース源がフコースである、特に（ｉ）フコースがＬ−フコースである、（ｉｉ）フコースがＬ−フコース−１−ホスフェートである、または（ｉｉｉ）フコース源がＧＤＰ−フコースである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
タンパク質がＦｃ含有タンパク質である、特に（ｉ）Ｆｃ含有タンパク質が抗体重鎖またはその断片を含む、または（ｉｉ）Ｆｃ含有タンパク質が完全長抗体である、特に完全長抗体がモノクローナル抗体である、または（ｉｉｉ）Ｆｃ含有タンパク質がＦｃ含有融合タンパク質である、特にＦｃ含有融合タンパク質がイムノアドヘシンである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
宿主細胞が真核細胞である、かつ／または宿主細胞が哺乳動物細胞である、特に哺乳動物細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
宿主細胞が、不活性化されていない野生型ＦＸ遺伝子を含む宿主細胞と比較して、２０％以下のＦＸ活性を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
ＦＸ遺伝子が配列欠失、配列付加、または配列置換によって不活性化される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
ＦＸ遺伝子が、クラスターを形成し規則正しい間隔を持つ短いパリンドロームリピート（ＣＲＩＳＰＲ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、またはメガヌクレアーゼ系を使用して不活性化される、請求項１２に記載の方法。
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法によって産生されるタンパク質を含む、組成物。
請求項１４に記載の組成物を含む、それを必要とする個体における疾患の治療のための医薬。