JP2019162623A - マイクロ流体処理のための方法およびシステム - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、全体として参照により本明細書に組み入れられる、2013年3月1日に出願された米国特許仮出願第61/771,708号の恩典を主張するものである。
本発明は、国立保健研究所(National Institutes of Health)によって与えられたNIH契約番号HHSN272200900029CおよびNIH助成金番号2R44AI073221の下、政府支援を受けて達成された。政府は、本発明において特定の権利を有する。
本発明は、アッセイシステムを通して流体を移動させ、処理するための方法およびシステムに関する。
マイクロ流体処理システムは、少量(典型的には1マイクロリットルから10ミリリットルの間)の反応物および生成物での、化学もしくは生化学反応または一連の反応を実施するためのものである。マイクロ流体処理システムは、弁およびセンサーなどの個別の構成要素と接続した管のネットワーク、あるいは、プラスチック、ガラス、金属もしくは他の材料または材料の組み合わせから作製された統合デバイスであって、弁およびセンサーなどの構成要素がデバイス内に内蔵され、かつ該材料中に形成された流通路によって接続されている統合デバイスを、含むことができる。
[本発明1001]
複数の流体通路と;
該複数の流体通路を接続する少なくとも1つの合流点と;
少なくとも1つの高性能流体アクチュエータを含む少なくとも2つの流体輸送手段であって、
該少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、
少なくとも10-8ワットの、および動力を少なくとも30秒間持続することができる、流体動力発生能力、および
10秒未満の該流体動力発生のための応答時間
を有する、カートリッジ内部の個別の構成要素である、前記少なくとも2つの流体輸送手段と
を含む、マイクロ流体カートリッジ。
[本発明1002]
500立方センチメートル以下の排水量を有する、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1003]
50立方センチメートル以下の排水量を有する、本発明1002のカートリッジ。
[本発明1004]
少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、電力を流体動力に変換することができる、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1005]
電力の流体動力への変換が、中間エネルギー状態なしで起こる、本発明1004のカートリッジ。
[本発明1006]
少なくとも1つの高性能流体アクチュエータの動作が、外部デバイスから該少なくとも1つの高性能流体アクチュエータへの力学的エネルギーの移動を含まない、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1007]
動力発生のための応答時間が、2秒未満である、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1008]
動力発生のための応答時間が、0.2秒未満である、本発明1007のカートリッジ。
[本発明1009]
動力発生のための応答時間が、0.04秒未満である、本発明1008のカートリッジ。
[本発明1010]
液体が、毎分少なくとも0.1mLの流量で、少なくとも1kPaの圧力降下に関連する流体抵抗の中でも流れるように、アクチュエータが、少なくとも10マイクロリットルの液体を加圧することができる、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1011]
高性能アクチュエータが、パルス発生器または他の制御型時変電圧源および少なくとも1つの電極に結合されている、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1012]
少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、界面動電効果によって流体動力を生成することができる、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1013]
界面動電効果が、電気浸透流を含む、本発明1012のカートリッジ。
[本発明1014]
電気浸透流が、少なくとも1つの流体アクチュエータの各々の内部の複数のスリットキャピラリー内部で発生される、本発明1013のカートリッジ。
[本発明1015]
電気浸透流が、少なくとも1つの流体アクチュエータの各々の内部の充填ビーズのベッド内部で発生される、本発明1013のカートリッジ。
[本発明1016]
電気浸透流が、少なくとも1つの流体アクチュエータの各々の内部の一体型多孔質構造内部で発生される、本発明1013のカートリッジ。
[本発明1017]
電気浸透流が、少なくとも1つの流体アクチュエータの各々の内部の円筒形チャネルのアレイ内部で発生される、本発明1013のカートリッジ。
[本発明1018]
出発物質を流体通路のネットワーク内に受け入れるための開口部を含む、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1019]
開口部が、栓またはキャッピング要素で閉鎖される、本発明1018のカートリッジ。
[本発明1020]
栓またはキャッピング要素が、流体導管を受け入れることができ、該流体導管が引き抜かれると密閉封鎖することができる、本発明1018のカートリッジ。
[本発明1021]
栓またはキャッピング要素によって受け入れられることができる流体導管が、針、管、剛性流体導管または半剛性流体導管を含む、本発明1020のカートリッジ。
[本発明1022]
栓またはキャッピング要素が、エラストマー材料を含む、本発明1020のカートリッジ。
[本発明1023]
栓またはキャッピング要素が、閉鎖機構を含む、本発明1020のカートリッジ。
[本発明1024]
動力源から少なくとも1つの高性能流体アクチュエータへの動力送達を制御することができる制御器をさらに含む、本発明1001のカートリッジ。
[本発明1025]
少なくとも1つの高性能流体アクチュエータに動作可能に結合された動力源をさらに含む、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1026]
動力源が、外部デバイス内に位置され、かつ電気的接続によってカートリッジに結合される、本発明1025のカートリッジ。
[本発明1027]
動力源が、電気式である、本発明1025のカートリッジ。
[本発明1028]
動力源が、空気式である、本発明1025のカートリッジ。
[本発明1029]
動力源が、電池を含む、本発明1025のカートリッジ。
[本発明1030]
電池が、カートリッジの内側に位置される、本発明1029のカートリッジ。
[本発明1031]
電池が、外部デバイスの内側に位置され、かつ電気的接続によってカートリッジに結合される、本発明1029のカートリッジ。
[本発明1032]
処理流体を受け入れるための、かつ流体通路のネットワークに結合された第二の開口部をさらに含む、本発明1001のカートリッジ。
[本発明1033]
流体通路のネットワーク内部に収容された処理流体をさらに含む、本発明1001のカートリッジ。
[本発明1034]
処理流体が、細胞または細胞小器官を溶解することができる第一の試薬を含む、本発明1033のカートリッジ。
[本発明1035]
第一の試薬が、界面活性剤または他の表面活性剤を含む、本発明1034のカートリッジ。
[本発明1036]
第一の試薬が、酵素を含む、本発明1034のカートリッジ。
[本発明1037]
酵素が、リゾチームである、本発明1036のカートリッジ。
[本発明1038]
処理流体が、組織サンプルまたは他の不均質な生物学的物質を均質化することができる均質化溶液を含む、本発明1033のカートリッジ。
[本発明1039]
処理流体が、生細胞、組織または生物体の生物活性を減少させるかまたは除去することができる溶液を含む、本発明1033のカートリッジ。
[本発明1040]
処理流体が、出発物質の機械的破砕を引き起こすことができるガラスビーズまたは他の固形物質を含む、本発明1033のカートリッジ。
[本発明1041]
処理流体が、グリコーゲンまたは他の多糖を含む、本発明1033のカートリッジ。
[本発明1042]
処理流体が、キャリアRNAを含む、本発明1033のカートリッジ。
[本発明1043]
アクチュエータ流体を受け入れるための、かつ少なくとも1つの高性能流体アクチュエータに結合された第三の開口部をさらに含む、本発明1001のカートリッジ。
[本発明1044]
少なくとも1つの高性能流体アクチュエータ内部にアクチュエータ作動流体をさらに含む、本発明1001のカートリッジ。
[本発明1045]
流体通路のネットワークの一部分が、第二の試薬を含む、本発明1001のカートリッジ。
[本発明1046]
第二の試薬が、シリカビーズまたは粒子を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1047]
第二の試薬が、常磁性ビーズを含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1048]
第二の試薬が、蛍光ビーズまたは蛍光分子を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1049]
第二の試薬が、化学発光分子を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1050]
化学発光分子が、アルカリホスファターゼ基質を含む、本発明1049のカートリッジ。
[本発明1051]
第二の試薬が、ランタニドまたはランタニドキレートを含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1052]
第二の試薬が、モノクローナルまたはポリクローナル抗体を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1053]
モノクローナルまたはポリクローナル抗体が、シグナリング分子に連結されている、本発明1052のカートリッジ。
[本発明1054]
第二の試薬が、オリゴヌクレオチドプローブもしくはプライマー、プローブの組み合わせ、またはプライマーの組み合わせを含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1055]
オリゴヌクレオチドプローブが、ヒト免疫不全ウイルスの遺伝物質の規定領域に特異的に結合する、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1056]
オリゴヌクレオチドプローブが、C型肝炎ウイルスの遺伝物質の規定領域に特異的に結合する、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1057]
オリゴヌクレオチドプローブが、B型肝炎ウイルスの遺伝物質の規定領域に特異的に結合する、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1058]
オリゴヌクレオチドプローブが、マイコバクテリウム・ツベルクローシス(M. tuberculosis)細菌の遺伝物質の規定領域に特異的に結合する、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1059]
オリゴヌクレオチドプローブが、クラミジア・トラコマチス(C. trachomatis)細菌の遺伝物質の規定領域に特異的に結合する、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1060]
オリゴヌクレオチドプローブが、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスまたはヒト気道の別のウイルスの遺伝物質の規定領域に特異的に結合する、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1061]
オリゴヌクレオチドプローブが、癌遺伝子のDNAまたはRNAの規定領域に特異的に結合する、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1062]
オリゴヌクレオチドプローブが、標識されている、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1063]
標識が、蛍光性もしくは発光性シグナリング分子またはそのクエンチャーを含む、本発明1062のカートリッジ。
[本発明1064]
オリゴヌクレオチドプローブが、アプタマーを含む、本発明1054のカートリッジ。
[本発明1065]
第二の試薬が、光増感剤分子を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1066]
第二の試薬が、光活性指示体前駆体分子を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1067]
第二の試薬が、光増感剤分子および光活性指示体前駆体分子を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1068]
光増感剤分子および光活性指示体前駆体分子が、
a.1つまたは複数の増感剤、1つまたは複数の増感剤オリゴヌクレオチド、およびかかる増感剤と増感剤オリゴヌクレオチドとを同じ場所に位置させるためのマトリクスを含む、少なくとも1つの増感剤標識粒子;ならびに
b.1つまたは複数のエミッタ剤、1つまたは複数の増感剤オリゴヌクレオチド、およびかかるエミッタ剤とエミッタオリゴヌクレオチドとを同じ場所に位置させるためのマトリクスを含む、少なくとも1つのエミッタ標識粒子
を含む、本発明1067のカートリッジ。
[本発明1069]
光増感剤分子が、一重項酸素分子を発生させる励起状態にあることができる、本発明1068のカートリッジ。
[本発明1070]
光活性指示体前駆体分子が、一重項酸素分子と反応して光活性指示体を形成することができる、本発明1068のカートリッジ。
[本発明1071]
第二の試薬が、量子ドットまたは他の結晶性半導体粒子を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1072]
第二の試薬が、核酸の配列非依存的測定のための核酸特異的な蛍光または発光色素を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1073]
第二の試薬が、フェルスター共鳴エネルギー転移(FRET)または他の共鳴エネルギー移動プロセスに関与することができる分子を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1074]
第二の試薬が、特異的細胞化合物の測定のための標識タンパク質、標識核酸または標識糖質種を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1075]
第二の試薬が、細胞の特異的または非特異的標識化のための色素を含む溶液を含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1076]
第二の試薬が、プライマー、プローブ、またはプライマーとプローブとの組み合わせを含む、本発明1045のカートリッジ。
[本発明1077]
酵素が、ポリメラーゼ連鎖反応、転写介在増幅、核酸配列を基にした増幅、または少なくとも1つの特定された核酸配列を増幅するための別の化学反応を触媒することができる、本発明1076のカートリッジ。
[本発明1078]
酵素が、DNAポリメラーゼ、逆転写酵素、RNAポリメラーゼ、リボヌクレアーゼH、DNAヘリカーゼまたはリコンビナーゼを含む、本発明1076のカートリッジ。
[本発明1079]
出発物質が、流体相、流体を含んだマトリクスまたは固相を含む、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1080]
出発物質が、血液、痰または他の体液を含む、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1081]
出発物質が、生物組織を含む、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1082]
出発物質が、薬剤またはワクチンのための原材料または中間物である、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1083]
出発物質が、農産物である、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1084]
出発物質が、土または別の環境サンプルである、本発明1000のカートリッジ。
[本発明1085]
第一の物質を含む第一の流体通路および第二の物質を含む第二の流体通路をさらに含む、本発明1000のカートリッジであって、該第一の流体通路および該第二の流体通路が、該マイクロ流体カートリッジ内に合流点を形成する、カートリッジ。
[本発明1086]
合流点が、T字合流点またはY字合流点である、本発明1085のカートリッジ。
[本発明1087]
合流点が、第一および第二の流体通路からの第一および第二の物質の融合から生じる1つまたは複数のマイクロ流体液滴の形成を可能にする、本発明1085のカートリッジ。
[本発明1088]
1つまたは複数の液滴が各々、分析物または試薬を含む、本発明1086のカートリッジ。
[本発明1089]
1つまたは複数の液滴が各々、少なくとも1つのプライマー、およびポリメラーゼ連鎖反応、転写介在増幅、核酸配列を基にした増幅、または少なくとも1つの標的核酸配列を増幅するための別の化学反応を触媒することができる酵素を含む、本発明1086のカートリッジ。
[本発明1090]
1つまたは複数の液滴が各々、標識を含む、本発明1086のカートリッジ。
[本発明1091]
第一または第二の物質が、処理流体を含む、本発明1085のカートリッジ。
[本発明1092]
1つまたは複数の液滴が各々、細胞を含む、本発明1086のカートリッジ。
[本発明1093]
複数の流体通路が、増幅反応の段階を実施するための異なる温度ゾーンを含む、本発明1001のカートリッジ。
[本発明1094]
複数の流体が、標識化またはハイブリダイゼーション反応を誘発するために、複数の流体通路内で合わされる、本発明1001のカートリッジ。
[本発明1095]
本発明1001〜1094のいずれかのマイクロ流体カートリッジ;および
動力源を含み、かつ電力を該マイクロ流体カートリッジに供給するように適合された装置
を含む、システム。
[本発明1096]
前記装置が、アッセイ結果の指標を感知するようにさらに適合されている、本発明1095のシステム。
[本発明1097]
センサーが、カートリッジ内部で発生した可視光線または別のタイプの電磁放射を感知する、本発明1095のシステム。
[本発明1098]
前記装置が、カートリッジ内部の常磁性ビーズの位置または分布を感知するようにさらに適合されている、本発明1095のシステム。
[本発明1099]
前記装置が、カートリッジ内部の種の電子スピン核磁気共鳴または他の物理的特性を感知するようにさらに適合されている、本発明1095のシステム。
[本発明1100]
マイクロ流体カートリッジ内で、複数の流体通路に接続され、かかる流体通路の間に少なくとも1つの合流点を含むチャネルに、第一の流体を提供する工程であって、該マイクロ流体カートリッジが、少なくとも1つの高速マイクロ流体アクチュエータをさらに含み、該少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、該カートリッジ内部の個別の構成要素であり、かつ該少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、少なくとも10-8ワットの、および動力を少なくとも30秒間持続することができる流体動力発生能力と、10秒未満の動力発生のための応答時間とを有する、工程;ならびに、
該第一の流体および第二の流体が、流体の交互栓を発生させるために該流体通路のネットワーク内に導入されるように、該マイクロ流体アクチュエータを時変方式で動作させる工程であって、各栓量の長さが、かかる流体通路のうちの最小の平均直径の5倍未満である、工程
を含む、方法。
[本発明1101]
高速マイクロ流体アクチュエータが、界面動電効果によって流体動力を生成する、本発明1100の方法。
[本発明1102]
界面動電効果が、電気浸透流によって発生される、本発明1101の方法。
[本発明1103]
電気浸透流が、スリットのアレイ内部で発生される、本発明1102の方法。
[本発明1104]
電気浸透流が、充填ビーズベッド内部で発生される、本発明1102の方法。
[本発明1105]
電気浸透流が、一体型多孔質構造内部で発生される、本発明1102の方法。
[本発明1106]
細胞膜内の少なくとも1つのタイプの分子に特異的な第二の流体内部の標識化分子または標識化粒子で、第一の流体内部の細胞のサブセットを標識する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1107]
第二の流体中に含有されている細胞透過色素で、第一の流体中の細胞を着色する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1108]
第二の流体中に含有されている光増感剤分子もしくは光活性指示体前駆体分子またはそれらの組み合わせで、第一の流体内部に含有されているDNAまたはRNAのサブセットを標識する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1109]
第二の流体中に含有されているランタニドキレートで、第一の流体内部に含有されているDNAまたはRNAのサブセットを標識する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1110]
第二の流体中に含有されている界面活性剤または他の表面活性剤で、第一の流体内部の細胞または他の生物学的物質を溶解する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1111]
界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウムを含む、本発明1110の方法。
[本発明1112]
界面活性剤が、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムまたは別の陽イオン界面活性剤を含む、本発明1110の方法。
[本発明1113]
第一の流体内部の細胞または他の生物学的物質を酵素で溶解する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1114]
酵素が、リゾチームを含む、本発明1113の方法。
[本発明1115]
第一の流体からの組織サンプルまたは他の不均質な生物学的物質を均質化する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1116]
第一の流体中の生細胞、組織または生物体の生物活性を減少させる工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1117]
生物活性を減少させる工程が、高塩基性溶液を使用することを含む、本発明1116の方法。
[本発明1118]
高塩基性溶液が、水酸化ナトリウムを含む、本発明1117の方法。
[本発明1119]
高塩基性溶液が、次亜塩素酸ナトリウムを含む、本発明1117の方法。
[本発明1120]
第二の流体中の機械的破砕のためのガラスビーズまたは他の固形物質で、第一の流体中の細胞または他の生物学的物質を溶解する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1121]
スワブまたは多孔質マトリクスと第一の流体とを混合する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1122]
スワブまたは多孔質マトリクス内部に結合されている土または他の環境サンプルを解放する工程をさらに含む、本発明1121の方法。
[本発明1123]
第一の流体が、樹状細胞を含む、本発明1100の方法。
[本発明1124]
攻撃に対する免疫応答の要素を誘導するために樹状細胞をパルスする工程をさらに含む、本発明1123の方法。
[本発明1125]
薬理学的物質またはワクチンを生成する工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1126]
薬理学的物質の生物活性を増加させる工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1127]
第一の流体内部に含有されているDNAまたはRNA分子をグリコーゲンに結合させる工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1128]
第一の流体内部に含有されているDNAまたはRNA分子をシリカに結合させる工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1129]
グリコーゲン複合または共沈DNAおよびRNAを精製する工程をさらに含む、本発明1127の方法。
[本発明1130]
シリカビーズまたはシリカ含有構造に結合されたDNAまたはRNA分子を精製する工程をさらに含む、本発明1128の方法。
[本発明1131]
グリコーゲンまたはシリカビーズもしくはシリカ含有構造から、DNAおよびRNAを溶離する工程をさらに含む、本発明1129または1130の方法。
[本発明1132]
第一の流体中の分析物の存在または非存在を検出する工程をさらに含む、本発明1100〜1131のいずれかの方法。
[本発明1133]
検出する工程が、分析物に結合されている化学発光または蛍光分子からの可視光線または別のタイプの電磁放射を感知することを含む、本発明1132の方法。
[本発明1134]
検出する工程が、分析物に結合されている常磁性ビーズの位置または分布を感知することを含む、本発明1132の方法。
[本発明1135]
検出する工程が、分析物に結合されている種の核磁気共鳴または他の物理的特性を感知することを含む、本発明1132の方法。
[本発明1136]
複数の流体通路内で複数の微液滴を発生させる工程をさらに含む、本発明1100の方法。
[本発明1137]
複数の微液滴が、少なくとも2つの流体を脈動させることによって形成され、該脈動させることが、マイクロ流体カートリッジ内の複数の高速マイクロ流体アクチュエータによって生じる、本発明1136の方法。
[本発明1138]
複数の微液滴の各々の中の分析物の存在または非存在を検出する工程をさらに含む、本発明1136の方法。
[本発明1139]
マイクロ流体カートリッジ内の複数の温度ゾーンを通過して複数の微液滴を移動させることによって、複数の微液滴の各々において増幅反応を実施する工程をさらに含む、本発明1136の方法。
[本発明1140]
複数の微液滴の各々の中の標的アンプリコンの存在を検出する工程をさらに含む、本発明1139の方法。
[本発明1141]
複数の微液滴の各々の中の標的核酸分子の融解温度を測定する工程をさらに含む、本発明1136の方法。
[本発明1142]
参考菌株からのウイルスRNAの遺伝学的相違の融解温度分析を実施する工程をさらに含む、本発明1141の方法。
概略
マイクロ流体処理システム内の流れは、典型的には、低レイノルズ数領域と称される、慣性効果に対する粘性効果の優勢性に関連している[1]、[2]。マイクロ流体処理システムの多くの適用は、対応して低い二元拡散率を有する1つまたは複数の高分子量反応物に関わる[3]、[4]。例えば、分子力学シミュレーション[5]は、3.1×106ダルトンの分子量を有するヒト免疫不全ウイルス(HIV)のゲノム物質を構成するおよそ9800個の塩基のリボ核酸鎖が、およそD=2×10-12 m2 s-1の水中拡散率を有し、そのため、10分間で1次元拡散はたった50ミクロンの変位と関連する、ということを示す。慣性効果に対する粘性効果の優勢性と、高い関心対象である反応物の比較的緩徐な拡散率との組み合わせは、マイクロ流体システムにおいて2つまたはそれ以上の溶液を巨視的に混合するための流体力学的機序の必要性を課するものである。
式中、aは、2つのポンピング表面の間の分離距離の二分の一であり、μは、流体粘性であり、dp/dxは、流れに反する圧力勾配であり、εは、流体誘電率であり、ζは、ゼータ電位であり、αは、イオンエネルギーパラメータであり、Gは、二重層の厚みのための補正項である。幅広平行表面が帯電し、対イオンを引きつけ、共イオンに反発して、電荷二重層を形成する。二重層のイオンの外層は、可動性である。軸方向電場を加えることは、可動イオンに力を及ぼし、可動イオンのエレクトロマイグレーションは、粘性相互作用によってバルク流体を引っ張る。ゼータ電位は、電気浸透流上の表面状態の効果を特徴付ける。ゼータ電位は、表面/流体界面の近くの正味過量の表面電荷平衡イオンと関連する経験的なパラメータである。
特許請求の範囲および明細書において使用される用語は、特に断りない限り以下に記載されるように定義される。
本発明は、カートリッジまたは同様の密閉された流体処理デバイスなどのマイクロ流体システムを含む。いくつかの態様において、マイクロ流体カートリッジは、機械式可動部を有さず、滑り接触、流体嵌め(fluidic fitting)などに関連する不具合モードを除去する。一態様において、マイクロ流体カートリッジは、電池電源で動き、外部シリンジポンプまたは流体発動の何らかの他の手段を必要とすることなくEO流体発動を組み込む。別の態様において、マイクロ流体カートリッジは、マイクロ流体アクチュエータによって加圧される流体を移動させるための内部機構を含む。
式中、Uは、平均速度であり、rは、動径座標であり、aは、円筒形通路の半径である。栓が流体通路を下って移動するにつれて、放物線状流れプロファイルは、対応する栓ひずみ1101、1102を引き起こす。栓と共に収容されている粒子は、ひずんだ栓1103から半径方向に拡散することができる。粒子は、流体通路中心線近くの栓前部から半径方向外側1103aと、壁近くの栓後部から半径方向内側1103bに、拡散する。この現象は、テイラー分散として知られており、それは2つまたはそれ以上の流体の効率的な混合を生じる。同様の拡散効果が、非円筒形流体通路内で生じることができる。
マイクロ流体カートリッジは、個々のプラスチック構成要素および個別のマイクロ流体アクチュエータから生成されることができる。構成要素は、種々の手段によって組み立てられることができる。
いくつかの態様において、反応物または反応物を含有する溶液を、処理およびその後の分析のために、マイクロ流体カートリッジに加える。反応物は、血液、痰、組織、体液、細胞、細胞成分、細胞外液、タンパク質、DNA、RNAなどを含み得る。出発物質はまた、処理流体に加えるための乾燥試薬または生物学的物質を含み得る。出発物質は、流体相、流体を含んだマトリクスまたは固相であることができる。出発物質は、薬剤またはワクチンのための中間物を含むことができる。ある場合には、出発物質は、農産物、土または環境サンプルを含む。
処理流体中の分析物を標識するための方法が提供される。分析物の例は、タンパク質、DNA、RNA、抗体、ペプチド、または宿主によって生成される他の化合物を含む。分析物は、DNA、RNA、抗体、ペプチド、または宿主の外側で生成されたタンパク質、例えば、感染の経過の間、病原体によって放出されたタンパク質を含むことができる。
サンプルまたは出発物質は、例えば、サンプル中の標的タンパク質に特異的に結合する第一の組の抗体を含有する第一の溶液と合わされることができる。合わされた流体は、通路内を電気浸透流によって移動して、流体通路の壁の領域のそばを通ることができる。壁は、標的タンパク質の異なるエピトープと特異的に結合する第二の組の抗体と結合される。壁領域に結合し、かつ第一の組の抗体とサンドイッチ状態を形成する標的タンパク質は、分光計または蛍光を測定する他の器具によって検出されることができる。
マイクロ流体カートリッジに使用される分析物のための例示的な標識化および検出方法は、一重項酸素触媒発光(SOCLE)である。SOCLEは、ルミネセンス酸素チャネリングの一変型であり(Ullman et al., Luminescent oxygen channeling assay (LOCI): sensitive, broadly applicable homogeneous immunoassay method.(1996). Clin. Chem 42, 1518-1526; Ullman et al., Luminescent oxygen channeling immunoassay: measurement of particle binding kinetics by chemiluminescence.(1994). Proceedings of the National Academy of Sciences 91, 5426-5430)、ウェル形式の市販のイムノアッセイシステムに広く使用されている。
本発明のマイクロ流体カートリッジは、介在する不混和担体流体によってそれぞれの液滴において互いから単離されている複数の区画されたアッセイ混合物に、サンプルまたは出発物質を分割することを含むアッセイを通して、サンプルまたは出発物質中の複数の分析物を検出し、定量するために使用されることができる。この分割は、カートリッジ内部のどこでも行われることができ、サンプルまたは出発物質の処理の任意の段階で起こることができる。分割が起こることができる段階の例は、サンプルまたは出発物質のカートリッジ内への導入直後;ろ過プロセス後;核酸抽出プロセス後;特定のカテゴリーの全ての種におけるゲノム物質のセグメント(例えば、細菌標的のための16S領域)がポリメラーゼ連鎖反応または別の方法によって増幅されるプロセス後;および、蛍光ビーズまたは他のシグナリング粒子での標識化後を含む。
単純なT字合流点またはY字合流点で流体を混合することに加えて、本発明は、急速混合を特に促進する合流点の幾何学的形状を有する合流点において、流体を混合するために使用されることができる。合流点にすぐ近接する1つまたは複数のチャネル横断面が、合流点からより遠い横断面よりも小さい合流点構成(ネックダウン合流点と称されることもある)は、本発明との組み合わせで、本発明での非ネックダウン合流点か、または本発明でない合流点(ネックダウンを有するかまたは有しない)のいずれかの場合よりも、より迅速な巨視的混合を促進することができる。すぐ近接するチャネル横断面がより小さいことは、本発明を使用する個別の栓注入のための最少流体栓量がより少量であることに対応する。一連の脈動が、合流点にすぐ近接する反応チャネルのネックダウン領域を越えて移動した後、質量の保存は、少量の流体栓が、ネックダウンチャネル領域内部の寸法と比較して、軸方向寸法がより短い栓へと拡張することを必要とする。テイラー分散の混合への寄与は、それに対応して、非ネックダウン幾何学的形状などの、より大容量の栓での合流点プロセスと比較して、増加される。
合流点に近接するチャネルの特徴は、本発明を使用する混合の性能を改善するために使用されることができる。流体通路を構成する材料に対して疎水性である流体について、合流点に近接するキャビティ様特徴の包含は、本発明と共に使用されて、混合前に流体を整列させることができる。ほぼ円筒形のチャネルのほぼ一様な半径方向拡張および収縮であり、かかる拡張および収縮が沿って起こる軸方向長さがチャネル直径と比較して短い、キャビティ特徴について、流体容量の流頭は、キャビティへの入口での表面張力介在流頭変形に関連するエネルギー貯蔵に起因して、所与のデューティーサイクルおよび平均動力で作用する高性能アクチュエータによって加圧されるとき、キャビティ内部で保持されることができる。高性能アクチュエータのデューティーサイクルおよび/または平均動力の増加は、メニスカスエネルギー貯蔵効果に打ち勝って、流体流頭をキャビティ入口を越えて移動させることができる。カートリッジ内部の流体の流れ特徴(例えば流量)が、例えば全血サンプル用のヘマトクリットにおける患者間変動のために、不確実性にさらされる場合、例えば、パラメータ空間の低流量極値での流体がカートリッジ設計用に企図される時間が経過するまで、高性能アクチュエータの動作を低デューティーサイクル/低動力状態で維持することによって、(例えば、生理学的範囲の上限でのヘマトクリットを用いて)キャビティでの低デューティーサイクル/低動力失速効果が、アッセイ性能へのかかる不確実性の影響を減少させるために使用されることができる。同様の効果の組み合わせによって、本発明を用いて、キャビティは、流体中に混入された空気または別の気体の気泡のためのトラップとして機能することができる。
本発明は、公知の方法と組み合わされて、溶液の成分と固相との間の反応を促進し、かかる成分の検出または検出および定量化を促進することができる。溶液は、プローブが結合されている1つまたは複数の内側表面領域を含有するチャンバー内に流されることができる。かかる表面結合プローブは、オリゴヌクレオチドプローブ、抗体プローブまたは他のプローブであり得る。表面結合プローブは、表面結合プローブと溶液相反応物との間の結合事象の同定を促進する感知要素または感知システムに対して位置付けられ得る。かかる反応物は、オリゴヌクレオチド、タンパク質、糖、細胞または他の反応物であり得る。表面結合プローブは、一次元、二次元または三次元アレイに構成されることができる。感知要素または感知システムは、該アレイの個々の要素の関心対象のパラメータを測定するために構成され得る。感知要素は、温度、pHおよび電磁放射を含むパラメータを測定するように設計され得る。2つのマイクロ流体アクチュエータ(その少なくとも1つは高性能アクチュエータである)は、プローブ機能化表面領域のいくつかまたは全てに近接する時変流れを誘導するために使用されることができる。時変流れは、結果的に、かかる表面領域にすぐ近接するある容量の溶液の交換をもたらすことができ、そのため、比較的高濃度の非結合反応物を含有する流体容量は、反応物がかかる表面結合プローブに結合することができるように、該表面に近接させられる。
本発明は、規定の容量の流体相反応物、例えば血液、血漿、尿もしくは別の生物流体、または化学もしくは生化学合成プロセスのための成分を含有する溶液を、カートリッジまたはその後の処理または分析のための他のマイクロ流体ネットワーク内に、引き入れることができる。ある容量の反応物は、ピペット操作によるか、別の容器から注ぐことによるか、供給源からの直接の流れによるか(例えば、機械的ランセットの作用によって生成された皮膚内の開口部から直接流れる血液)、または別の手段によって、チャンバー内に装填されることができる。装填プロセスは、例えば、看護師または他の医療専門家が、反応物の容量がチャンバー上の充填ラインによって示された最少容量を超えることを視覚的に確認するなど、不正確である可能性がある。そこで、第一のマイクロ流体アクチュエータは、規定の期間、かつ規定の動力レベルで動作することによって、ある容量の反応物を流体通路または取り入れチャンバーとは異なるチャンバー内に引き入れることができ、かかる動作パラメータは、その後の処理のための好ましい容量に対応するように、マイクロアクチュエータおよび関連マイクロ流体ネットワークの特徴付けによって予め決定されている。これは、本明細書において、開ループ計量と称される。代替的に、該第一のマイクロ流体アクチュエータは、センサーが、該流体通路内部のある容量の反応物が規定の値に達したことを示す時間まで動作することによって、その容量の反応物を流体通路内に引き入れることができる。かかるセンサーは、反応物流頭がチャネル内部を所定位置までに前進するときのキャパシタンスにおける変化を示す、容量センサーであることができる。これは、本明細書において、閉ループ計量と称される。
本発明は、生体マトリクス内部に収容された細胞を効率的に溶解するために使用されることができる。全血または血漿は、第一のマイクロアクチュエータによって流体通路内に引き入れられることができる。細胞壁および膜を分解する傾向がある1つまたは複数の化合物、例えば、チオシアン酸グアニジンまたは別のタンパク質変性剤、ポリソルベート20または別の界面活性剤/乳化剤、およびプロテイナーゼKまたは別のセリンプロテイナーゼを含有する溶液が、第二の流体通路内に装填され得る。溶解溶液での第二の流体通路の装填は、溶解溶液成分の1つまたは複数の、乾燥または凍結乾燥状態からの再構成によって先行されることができる。乾燥または凍結乾燥された材料は、ペレットの形態であることができるか、流体通路の内部表面の一部分を被覆するプラーク様構成物であることができるか、あるいは通路またはチャンバー内部に位置される多孔質材料中に分布されることができる。
本発明は、反応を促進するために抵抗加熱器と、熱電冷却器と、ならびに流体容量の温度を上昇させるか、低下させるか、または調節するための他の要素およびシステムと共に、使用されることができる。
本発明は、出発サンプルからのDNA、RNAおよび他の核酸の可逆的結合のための公知の方法と組み合わされることができる。核酸を含有する溶液は、マイクロ流体アクチュエータの作用によって多孔質構造を通して流されることができる。多孔質構造は、充填シリカビーズベッドであることができ、かかるビーズは、核酸と可逆的に結合することが知られている。多孔質構造は、細孔径分布を有し、他の点では、沈殿した物質、例えば、グリコーゲンへの結合によって溶液から沈殿した核酸を捕獲するように構成されることができる。核酸含有溶液が多孔質構造を通って流れることに先行して、細胞が細胞壁および膜を破壊する傾向がある化合物に曝露され、それによって当初は細胞内部に収容されていた核酸への結合の効率を改善するプロセスを行うことができる。核酸含有溶液が多孔質構造を通って流れることに先行して、その中に収容される核酸のいくらかまたは全てが、多糖と結合するか、またはそのような糖-核酸複合体を沈殿する傾向にさせる他の物質と結合するプロセスを行うことができる。核酸含有溶液が多孔質構造を通って流れることに先行して、糖-核酸複合体または他の沈殿しやすい複合体が溶液から沈殿して、多孔質構造の近くまたはその内部に保持されることができるように、第一のマイクロ流体アクチュエータおよび第二の流体アクチュエータ(その少なくとも一方は高性能流体アクチュエータである)が核酸含有溶液とブタノールまたは別の溶媒とを混合するプロセスを行うことができる。溶媒と核酸含有溶液との混合は、流体をチャンバー内に輸送することを伴うことができ、ここで、溶媒および核酸含有溶液の異なる密度に関連する浮力効果が2つの相の混合を促進する。溶媒と核酸含有溶液との混合は、チャンバー内に流体を輸送することを伴うことができ、ここで、1つまたは複数の液体相をチャンバーから引き出すと、表面張力効果、浮力効果またはこれら効果の組み合わせにより、気泡がかかるチャンバー内部に保持される。核酸含有溶液が多孔質構造を通過することは、その後に、タンパク質などの非結合材料を洗い流すために、エタノールなどの溶媒の多孔質構造を通って流れることが続くことができる。そのような洗浄工程は2つ以上存在することができる。核酸含有溶液が多孔質構造を通過することは、その後に、核酸の可逆結合の傾向がある水または別の溶液を通すことが続くことができ、そのため、核酸は、かかる水または他の溶液を該多孔質構造外に輸送すると、多孔質構造から溶離される傾向があろう。
上記で説明した方法は、HIV-1 RNAの遺伝物質またはウイルスタンパク質を検出するか、または分析するために使用されることができる。最も重症なHIV患者でさえ、その血流中のウイルスの量は、比較的少量であるので、標的種を直接検出することは、精巧な方法を必要とする。
上記で説明した方法は、デング熱(Dengue)ウイルスのゲノム物質を検出するか、または分析するために使用されることができる。デング熱ウイルス(DENV)は、潜在的な生物兵器防衛病原体であり、世界保健機関(WHO)によって重大な国際公衆衛生上の懸念として分類されている。上記で説明したマイクロ流体カートリッジおよび方法を使用して、デング熱ウイルスを、サンプル中で検出することができる。
MTBは、上記で説明した方法を使用して、サンプルまたは出発物質から同定されることができる。
本発明のマイクロ流体カートリッジは、HIV遺伝物質を含有していることが分かっているかまたは疑われる材料のサンプル中のHIV遺伝物質の量を正確に決定するために使用されることができる。かかる物質は、全血サンプル、血漿サンプルまたは他のサンプルであることができる。ある量のサンプルは、逆転写酵素と合わされて、ウイルスRNAのcDNAへの逆転写を促進することができる。このように合わせることは、ウイルス被膜を溶解するか、潜在的妨害物質を取り除くか、または別様に、逆転写のためにサンプルを調製するための、1つまたは複数のプロセスによって先行されることができる。かかるサンプル調製は、逆転写プロセスと同じカートリッジまたは他のマイクロ流体チャネルネットワークモジュール内部で行われることができるか、あるいは該カートリッジまたはマイクロ流体ネットワークモジュールの完全または部分的に外部で行われることができる。HIV遺伝物質を含有していることが分かっているかまたは疑われる材料と逆転写酵素を合わせることは、逆転写遺伝物質が溶液形態である場合、合流点で起こることができるか、あるいは凍結乾燥形態、乾燥形態または別の形態である逆転写酵素を収容するチャンバー内への材料の通過により起こることができる。再構成を必要とする、乾燥形態、凍結乾燥形態または別の形態である逆転写酵素の再構成は、1つまたは複数の高性能アクチュエータによって駆動される急速脈動流によって促進されることができる。
本発明は、参考菌株からのインフルエンザAウイルス(IAV)RNAの遺伝学的相違の融解温度(Tm)分析のために使用されることができる。標的とされた増幅は、可能な標的識別情報に基づいて実施されることができる。標的とされた増幅は、HAおよびNA抗原に集中することができる。標的とされた増幅は、8個のゲノムセグメントのいくつかまたは全てにわたって、参考菌株に対してIAVを迅速に分類することができる。標的とされた増幅は、予測された標的配列を組み込むことができるか、またはゲノムレベルでの再配列のための偏りのない調査として機能することができる。
Claims (43)
- 複数の流体通路と;
該複数の流体通路を接続する少なくとも1つの合流点と;
少なくとも1つの高性能流体アクチュエータを含む少なくとも2つの流体輸送手段であって、
該少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、
少なくとも10-8ワットの、および動力を少なくとも30秒間持続することができる、流体動力発生能力、および
10秒未満の該流体動力発生のための応答時間
を有する、カートリッジ内部の個別の構成要素である、前記少なくとも2つの流体輸送手段と
を含む、マイクロ流体カートリッジ。 - 少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、電力を流体動力に変換することができる、請求項1記載のカートリッジ。
- 動力発生のための応答時間が、2秒未満である、請求項1記載のカートリッジ。
- 液体が、毎分少なくとも0.1mLの流量で、少なくとも1kPaの圧力降下に関連する流体抵抗の中でも流れるように、アクチュエータが、少なくとも10マイクロリットルの液体を加圧することができる、請求項1記載のカートリッジ。
- 少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、電気浸透流によって流体動力を生成することができる、請求項1記載のカートリッジ。
- 電気浸透流が、少なくとも1つの流体アクチュエータの各々の内部の複数のスリットキャピラリー内部で、少なくとも1つの流体アクチュエータの各々の内部の充填ビーズのベッド内部で、少なくとも1つの流体アクチュエータの各々の内部の一体型多孔質構造内部で、または少なくとも1つの流体アクチュエータの各々の内部の円筒形チャネルのアレイ内部で、発生される、請求項5記載のカートリッジ。
- 処理流体を受け入れるための、第二の開口部をさらに含み、該第二の開口部が前記複数の流体通路に結合されている、請求項1記載のカートリッジ。
- 処理流体が、細胞または細胞小器官を溶解することができる第一の試薬;組織サンプルまたは他の不均質な生物学的物質を均質化することができる均質化溶液;生細胞、組織または生物体の生物活性を減少させるかまたは除去することができる溶液;出発物質の機械的破砕を引き起こすことができるガラスビーズまたは他の固形物質;グリコーゲンまたは他の多糖;またはキャリアRNAを含む、請求項7記載のカートリッジ。
- アクチュエータ流体を受け入れるための、かつ少なくとも1つの高性能流体アクチュエータに結合された第三の開口部をさらに含む、請求項1記載のカートリッジ。
- 流体通路のネットワークの一部分が、第二の試薬を含む、請求項1記載のカートリッジ。
- 第二の試薬が、シリカビーズもしくは粒子、常磁性ビーズ、蛍光ビーズもしくは蛍光分子、化学発光分子、ランタニドもしくはランタニドキレート、またはモノクローナルもしくはポリクローナル抗体である、請求項10記載のカートリッジ。
- モノクローナルもしくはポリクローナル抗体が、シグナリング分子に連結されている、請求項11記載のカートリッジ。
- 第二の試薬が、オリゴヌクレオチドプローブもしくはプライマー、プローブの組み合わせ、またはプライマーの組み合わせを含む、請求項10〜12のいずれか一項記載のカートリッジ。
- オリゴヌクレオチドプローブが、ヒト免疫不全ウイルスの遺伝物質の規定領域、C型肝炎ウイルスの遺伝物質の規定領域、またはB型肝炎ウイルスの遺伝物質の規定領域に特異的に結合する、請求項13記載のカートリッジ。
- オリゴヌクレオチドプローブが、マイコバクテリウム・ツベルクローシス(M. tuberculosis)細菌の遺伝物質の規定領域、クラミジア・トラコマチス(C. trachomatis)細菌の遺伝物質の規定領域、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルスもしくはヒト気道の別のウイルスの遺伝物質の規定領域、または癌遺伝子のDNAまたはRNAの規定領域に特異的に結合する、請求項13記載のカートリッジ。
- 第二の試薬が、光増感剤分子および光活性指示体前駆体分子を含む、請求項10記載のカートリッジ。
- 光増感剤分子および光活性指示体前駆体分子が、
a.1つまたは複数の増感剤、1つまたは複数の増感剤オリゴヌクレオチド、およびかかる増感剤と増感剤オリゴヌクレオチドとを同じ場所に位置させるためのマトリクスを含む、少なくとも1つの増感剤標識粒子;ならびに
b.1つまたは複数のエミッタ剤、1つまたは複数の増感剤オリゴヌクレオチド、およびかかるエミッタ剤とエミッタオリゴヌクレオチドとを同じ場所に位置させるためのマトリクスを含む、少なくとも1つのエミッタ標識粒子
を含む、
請求項16記載のカートリッジ。 - 第二の試薬が、量子ドットもしくは他の結晶性半導体粒子;核酸の配列非依存的測定のための核酸特異的な蛍光もしくは発光色素;フェルスター共鳴エネルギー転移(FRET)もしくは他の共鳴エネルギー移動プロセスに関与することができる分子;特異的細胞化合物の測定のための標識タンパク質、標識核酸もしくは標識糖質種;細胞の特異的もしくは非特異的標識化のための色素を含む溶液;またはプライマー、プローブ、もしくはプライマーとプローブとの組み合わせを含む、請求項10〜12のいずれか一項記載のカートリッジ。
- 第一の物質を含む第一の流体通路および第二の物質を含む第二の流体通路をさらに含み、該第一の流体通路および該第二の流体通路が、マイクロ流体カートリッジ内に合流点を形成する、請求項1記載のカートリッジ。
- 合流点が、第一および第二の流体通路からの第一および第二の物質の融合から生じる1つまたは複数のマイクロ流体液滴の形成を可能にする、請求項19記載のカートリッジ。
- 複数の流体通路が、増幅反応の段階を実施するための異なる温度ゾーンを含む、請求項1記載のカートリッジ。
- 複数の流体が、標識化またはハイブリダイゼーション反応を誘発するために、複数の流体通路内で合わされる、請求項1記載のカートリッジ。
- 請求項1〜22のいずれか一項記載のマイクロ流体カートリッジ;および
動力源を含み、かつ電力を該マイクロ流体カートリッジに供給するように適合された装置
を含む、システム。 - 前記装置が、アッセイ結果の指標を感知するように;カートリッジ内部で発生した可視光線または別のタイプの電磁放射を感知するように;カートリッジ内部の常磁性ビーズの位置または分布を感知するように;またはカートリッジ内部の種の電子スピン核磁気共鳴または他の物理的特性を感知するようにさらに適合されている、請求項23記載のシステム。
- マイクロ流体カートリッジ内で、複数の流体通路に接続され、かかる流体通路の間に少なくとも1つの合流点を含むチャネルに、第一の流体を提供する工程であって、該マイクロ流体カートリッジが、少なくとも1つの高速マイクロ流体アクチュエータをさらに含み、該少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、該カートリッジ内部の個別の構成要素であり、かつ該少なくとも1つの高性能流体アクチュエータが、少なくとも10-8ワットの、および動力を少なくとも30秒間持続することができる流体動力発生能力と、10秒未満の動力発生のための応答時間とを有する、工程;ならびに、
該第一の流体および第二の流体が、流体の交互栓を発生させるために該流体通路のネットワーク内に導入されるように、該マイクロ流体アクチュエータを時変方式で動作させる工程であって、各栓量の長さが、かかる流体通路のうちの最小の平均直径の5倍未満である、工程
を含む、方法。 - 細胞膜内の少なくとも1つのタイプの分子に特異的な第二の流体内部の標識化分子または標識化粒子で、第一の流体内部の細胞のサブセットを標識する工程;第二の流体中に含有されている細胞透過色素で、第一の流体中の細胞を着色する工程;第二の流体中に含有されている光増感剤分子もしくは光活性指示体前駆体分子またはそれらの組み合わせで、第一の流体内部に含有されているDNAまたはRNAのサブセットを標識する工程;第二の流体中に含有されているランタニドキレートで、第一の流体内部に含有されているDNAまたはRNAのサブセットを標識する工程;第一の流体からの組織サンプルまたは他の不均質な生物学的物質を均質化する工程;または第二の流体中の機械的破砕のためのガラスビーズまたは他の固形物質で、第一の流体中の細胞または他の生物学的物質を溶解する工程をさらに含む、請求項25記載の方法。
- 第一の流体内部の細胞または他の生物学的物質を酵素で溶解する工程をさらに含む、請求項25記載の方法。
- 酵素がリゾチームを含む、請求項27記載の方法。
- 第一の流体中の生細胞、組織または生物体の生物活性を減少させる工程をさらに含む、請求項25記載の方法。
- 生物活性を減少させる工程が高塩基性溶液を使用することを含む、請求項29記載の方法。
- スワブまたは多孔質マトリクスと第一の流体とを混合する工程をさらに含む、請求項25記載の方法。
- スワブまたは多孔質マトリクス内部に結合されている土または他の環境サンプルを解放する工程をさらに含む、請求項31記載の方法。
- 第一の流体が、樹状細胞を含む、請求項25記載の方法。
- 攻撃に対する免疫応答の要素を誘導するために樹状細胞をパルスする工程をさらに含む、請求項33記載の方法。
- 薬理学的物質またはワクチンを生成する工程、または薬理学的物質の生物活性を増加させる工程をさらに含む、請求項25記載の方法。
- 第一の流体内部に含有されているDNAまたはRNA分子をグリコーゲンまたはシリカに結合させる工程をさらに含む、請求項25記載の方法。
- シリカビーズまたはシリカ含有構造に結合されたDNAまたはRNA分子を精製する工程、および/またはグリコーゲンまたはシリカビーズもしくはシリカ含有構造から、該DNAおよびRNAを溶離する工程をさらに含む、請求項36記載の方法。
- 第一の流体中の分析物の存在または非存在を検出する工程をさらに含む、請求項25〜37のいずれか一項記載の方法。
- 検出する工程が、分析物に結合されている化学発光もしくは蛍光分子からの可視光線もしくは別のタイプの電磁放射を感知すること;分析物に結合されている常磁性ビーズの位置もしくは分布を感知すること;または分析物に結合されている種の核磁気共鳴もしくは他の物理的特性を感知することを含む、請求項38記載の方法。
- 複数の流体通路内で複数の微液滴を発生させる工程をさらに含む、請求項25記載の方法。
- 複数の微液滴が、少なくとも2つの流体を脈動させることによって形成され、該脈動させることが、マイクロ流体カートリッジ内の複数の高速マイクロ流体アクチュエータによって生じる、請求項40記載の方法。
- 複数の微液滴の各々の中の分析物の存在または非存在を検出する工程;マイクロ流体カートリッジ内の複数の温度ゾーンを通過して複数の微液滴を移動させることによって、複数の微液滴の各々において増幅反応を実施する工程;複数の微液滴の各々の中の標的アンプリコンの存在を検出する工程;または複数の微液滴の各々の中の標的核酸分子の融解温度を測定する工程をさらに含む、請求項40または41記載の方法。
- 参考菌株からのウイルスRNAの遺伝学的相違の融解温度分析を実施する工程をさらに含む、請求項42記載の方法。
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