JP2019112326A

JP2019112326A - Ｂ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ｐｅｔプローブ

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Publication number: JP2019112326A
Application number: JP2017245355A
Authority: JP
Inventors: 節丹羽; Takashi Niwa; 裕太植竹; Yuta Uetake; 秀紀落合; Hideki Ochiai; 孝充細谷; Takamitsu Hosoya; 洋介金山; Yosuke Kanayama; 恭良渡辺; Yasuyoshi Watanabe; 聡一小嶋; Soichi Kojima; 小川　健司; Kenji Ogawa; 健司小川; 保恵市川; Yasue Ichikawa
Original assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Current assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Priority date: 2017-12-21
Filing date: 2017-12-21
Publication date: 2019-07-11
Anticipated expiration: 2037-12-21
Also published as: JP7072213B2

Abstract

【課題】非侵襲的に肝臓内のＢ型肝炎ウイルス(ＨＢＶ)を観察する方法の提供。【解決手段】下記式（Ｉ）で表される化合物又はその塩を含むＢ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブ。［Ｒ1は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基又は置換されたフェニル基；Ｒ2は、フェニル基又は置換されたフェニル基；Ｒ3は、２位がハロゲンで置換されていてもよい１，３−フェニレン基、又はピリジン−２，６−ジイル基であり、前記化合物は、11Ｃで標識されるか、又はフッ素原子を含む場合には18Ｆで標識されている］【選択図】図６

Description

本発明は、Ｂ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブに関するものである。

B型肝炎はB型肝炎ウイルス（HBV）に血液・体液を介して感染して生じ、感染者の10%程度が慢性化すると言われている。慢性B型肝炎は進行すると肝硬変、肝不全または肝細胞がんへ発展し、患者生命に関わる疾患であるが、現時点では根治的治療法は存在せず、新たなHBVの産生と感染拡大を防ぎつつ、免疫や代謝により感染細胞が減少・死滅する、もしくはHBVが不活性化するのを待つ姑息的治療法しか存在しない。

慢性B型肝炎の治療には現在、免疫作用によって感染細胞を除去するインターフェロン製剤と、HBV-DNAの逆転写を阻害する核酸アナログ製剤が使用されている。特に核酸アナログ製剤はHBV-DNA増殖を抑制することで高い治療効果を発揮する一方で、投薬停止時期の判断が非常に難しい側面を持つ。HBVはDNAウイルスであり、肝細胞核内でcccDNA（covalently closed circular DNA）の形で存在する。肝細胞に感染すると核内に侵入してプレゲノム RNAを作り、このRNAからHBV-DNAや各種抗原タンパク質を合成することで、これが鋳型となり新たなウイルス粒子を形成し増殖する（スキーム参照）。

従って、投薬により血中のHBV-DNA量が減少しても肝細胞中のHBVは除去できておらず、不用意な投薬中止は薬剤耐性株の出現を誘導し、治療が困難となる危険がある。現在のところcccDNAを直接除去する根治的治療法はないため、治療には長期間を要する上、上述の通り、投薬停止の判断には慎重を要する。また、一旦肝炎症状が回復しウイルスの増殖が低下・停止した場合でも完治とは言えず、変異株の出現や免疫力の低下等により潜伏するウイルスが再活性化する問題があり、定期的な観察が必要となる。現在のB型肝炎病態の診断は血液分析が主であり、組織・細胞中のB型肝炎ウイルス感染状態については肝生検による侵襲的検査が必要となる上、巨大な臓器である肝臓内の全体的な感染分布については知ることは出来ない。このため、非侵襲的に肝内HBVウイルスを観察する手段の開発が望まれている。

そこで、本発明は、非侵襲的に肝内ＨＢＶウイルスを観察する手段の開発を目的とする。

本発明は、一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含むＢ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブである。なお、前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。

［式中、
Ｒ¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ²は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ³は、

（ここで、Ｒ⁴は、水素またはハロゲンである。）
である。］

本発明のイメージング用ＰＥＴプローブは、非侵襲的に肝内ＨＢＶウイルスを観察することができるという利点がある。

Ａ：ＨＢＶ複製活性評価核酸の一例を示す概念図である。Ｂ：Ａで示すＨＢＶ複製活性評価核酸が発現ベクターに組み込まれたＨＢＶ複製活性評価ベクターを細胞内に導入し、発現させたときのレポーターｐｇＲＮＡの概念図である。レポーターｐｇＲＮＡでは、レポーター配列内のイントロンがｐｒｅ−ｍＲＮＡスプライシングによって除去されている。Ｃ：Ｂで示すレポーターｐｇＲＮＡを鋳型にＨＢＶ−Ｐｏｌの逆転写活性によって合成されたレポーターマイナス鎖ＤＮＡ（ｒｅｐｏｒｔｅｒ（−）ＤＮＡ）の概念図である。ＨＢＶ複製活性評価核酸とレポーターマイナス鎖ＤＮＡはイントロンの有無によって区別することができる。図２は、ＨＢＶ複製活性評価システムを構成する各種発現ベクターの一例を示す概念図である。Ａ：ＨＢＶ複製活性評価ベクターの一例であるｐＢＢ−ｉｎｔｒｏｎの概念図である。Ｂ：ＨＢＶ−ＰｏｌをコードするＰ遺伝子の発現ベクターであるｐＣＩ−ＨＢＶ−Ｐｏｌの概念図である。Ｃ：ＨＢｃをコードするＣ遺伝子の発現ベクターであるｐＣＩ−ＨＢｃの概念図である。Ｄ：ＨＢｘをコードするＸ遺伝子の発現ベクターであるｐＣＩ−ＨＢｘの概念図である。図３Ａは、アガロースゲル電気泳動の結果である。ＨＢＶ複製活性評価ベクターを、図に示す組み合わせのＨＢＶタンパク質発現ベクター（Ｃ：ＨＢｃ、Ｐ：ＨＢＶ−Ｐｏｌ、Ｘ：ＨＢｘ）と共にＨｅＬａ細胞に遺伝子導入した後、ＤＮＡ抽出を行い、レポーターマイナス鎖ＤＮＡを特異的に検出するプライマーペアでＰＣＲを行ったときのＰＣＲ産物（１３１ｂｐ）を示す。図３Ｂは、レポーターマイナス鎖ＤＮＡの検量線を示す図である。細胞から抽出したＤＮＡを段階希釈し、リアルタイムＰＣＲを用いて作成した。Ｃ：Ａの実験で用いたＤＮＡサンプルでリアルタイムＰＣＲを行い、Ｂの検量線によって定量解析した結果である。図３Ｃは、図３Ａの実験で用いたＤＮＡサンプルでリアルタイムＰＣＲを行い、図３Ｂの検量線によって定量解析した結果である。図３Ｄは、ＨＢＶタンパク質（ＨＢｃ、ＨＢＶ−Ｐｏｌ、及びＨＢｘ）の発現量とＤＮＡ複製との相関をリアルタイムＰＣＲで定量解析した結果を示す図である。図４は、肝組織切片ＨＢｃ染色像を示す。「Ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」は、ｐＣＩ−ＨＢｃ投与していないもの、「ｐＣＩ−ＨＢｃＩｎｊｅｃｔｅｄ」は、ｐＣＩ−ＨＢｃを投与したものである。図５は、ｐＣＩ−ＨＢｃ投与量による組織ライセート中ＨＢｃ濃度及びＣＲＰ濃度の比較を示す。図６は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８及び［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９を用いたＰＥＴ撮像結果を示す。投与１時間後のＭａｘｉｍｕｍＩｎｔｅｎｓｉｔｙＰｒｏｊｅｃｔｉｏｎ画像である。画像中、白矢印は肝臓、黒矢印は胆汁排泄（十二指腸・腸管）、△は膀胱、▲は胆のうの位置を示す。「０７８−ＨＢｃ」は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８を用いたＨＢｃ発現マウスのＰＥＴ撮像結果、「０７８−Ｖｅｈｉｃｌｅ」は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８を用いたＶｅｈｉｃｌｅ（ＰＢＳ）投与マウスのＰＥＴ撮像結果、「０７８−Ｂｌｏｃｋｉｎｇ」は、ＨＢｃ発現マウスに［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８投与する前に未標識化合物ＣＢＴ−０７８投与を投与した競合阻害試験のＰＥＴ撮像結果、「０３９−ＨＢｃ」は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９を用いたＨＢｃ発現マウスのＰＥＴ撮像結果、、「０３９−Ｖｅｈｉｃｌｅ」は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９を用いたＶｅｈｉｃｌｅ（ＰＢＳ）投与マウスのＰＥＴ撮像結果を示す。図７は、肝臓における時間放射能曲線を示す。「０７８−ＨＢｃ」は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８を用いたＨＢｃ発現マウスのＰＥＴ撮像結果、「０７８−Ｖｅｈｉｃｌｅ」は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８を用いたＶｅｈｉｃｌｅ（ＰＢＳ）投与マウスのＰＥＴ撮像結果、「０７８−Ｂｌｏｃｋｉｎｇ」は、ＨＢｃ発現マウスに［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８投与する前に未標識化合物ＣＢＴ−０７８投与を投与した競合阻害試験のＰＥＴ撮像結果、「０３９−ＨＢｃ」は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９を用いたＨＢｃ発現マウスのＰＥＴ撮像結果、「０３９−Ｖｅｈｉｃｌｅ」は、［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９を用いたＶｅｈｉｃｌｅ（ＰＢＳ）投与マウスのＰＥＴ撮像結果を示す。図８は、組織放射能分布を示す。

本発明者らは、既存の治療薬とは作用機序の異なる非核酸アナログ治療薬の開発に向け、ＨＢＶ感染により産生するウイルス粒子を形成するＨＢコア関連分子（ＨＢｃ；ＨＢＶヌクレオカプシドを構成するコアタンパク質）を標的とする化合物を見出した。ＨＢｃは、全長１８３アミノ酸からなるタンパク質であり、Ｎ末端のアッセンブリドメイン（１−１４４残基）とＣ末端のＲＮＡ／ＤＮＡ結合ドメイン（１４５−１８３残基）からなる。ウイルス感染細胞で発現したＨＢｃは、アッセンブリドメインによって二量体を形成し、この二量体を単位として会合が起こり、ＨＢＶのヌクレオカプシドが作られる。カプシド形成の際にｐｇＲＮＡとポリメラーゼが取り込まれ、逆転写反応によってＨＢＶ−ＤＮＡが生成されることで、ウイルス粒子が産生される。本発明者らは、このＨＢｃの二量体形成を数値化するアッセイ法を別途開発したＨＢＶ−ＤＮＡ複製阻害アッセイにより、阻害活性を有する化合物を見出した。

本発明は、そのような阻害活性を有する化合物を含む、ＨＢｃを標的とした新規ＰＥＴイメージングプローブに関する。

ＰＥＴ（陽電子放射断層撮像）は、陽電子放射核種から放出される放射線の検出を原理とする分子イメージング技術の一つであり、生体内におけるＰＥＴイメージングプローブの体内動態を低侵襲的に画像化することができる。現在のＢ型肝炎病態の診断は血液分析が主であり、組織・細胞中のＢ型肝炎ウイルス感染状態については肝生検による侵襲的検査が必要となる上、巨大な臓器である肝臓内の全体的な感染分布については知ることは出来ない。ＰＥＴを活用した非侵襲的な画像診断により、直接的にＨＢＶ感染状況を確認することが出来れば、治療計画、投薬停止の判断などに有用な情報となることが期待される。肝組織中のＨＢｃ分布を画像診断により定量評価することで、実質的な肝細胞中のウイルス量の客観的な評価に基づく、合理的な治療中止の判断が可能になると期待できる。

すなわち、本発明は、
一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含むＢ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブである。なお、前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。

式中、
Ｒ¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ²は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ³は、

（ここで、Ｒ⁴は、水素またはハロゲンである。）
である。

本発明のＢ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブにおいて、
前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、Ｒ³が

であるのが好ましい。

本発明のＢ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブにおいて、
前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、
Ｒ³が

であり、
Ｒ¹は、フェニル基、または炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ²は、フェニル基、または炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、炭素数１〜３のアルキルチオ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのがより好ましい。

また、本発明のＢ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブにおいて、
前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、以下の一般式（ＸＩ）で表される化合物、一般式（ＸＩＩ）で表される化合物、一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物または一般式（ＸＩＶ）で表される化合物であるのが好ましい。なお、前記一般式（ＸＩ）で表される化合物、前記一般式（ＸＩＩ）で表される化合物、前記一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物または前記一般式（ＸＩＶ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。

前記一般式（ＸＩ）で表される化合物を以下に示す。

式（ＸＩ）中、
Ｒ⁴は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。

前記一般式（ＸＩ）で表される化合物は、
Ｒ⁴が、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、または炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのが好ましく、
Ｒ⁴は、炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのが更に好ましい。

前記一般式（ＸＩＩ）で表される化合物を以下に示す。

式（ＸＩＩ）中、
Ｒ⁵は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。

前記一般式（ＸＩＩ）で表される化合物は、
Ｒ⁵は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのが好ましく、
Ｒ⁵は、１〜３のハロゲンで置換されたフェニル基であるのがより好ましい。

前記一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物を以下に示す。

式（ＸＩＩＩ）中、
Ｒ⁶は、フェニル基、または１〜３の炭素数１〜６のアルキルで置換されたフェニル基であり
Ｒ⁷は、フェニル基、または１〜３のハロゲンで置換されたフェニル基であり、
Ｒ⁸は、

である。

前記一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物は、
Ｒ⁶は、１〜３の炭素数１〜６のアルキルで置換されたフェニル基であり
Ｒ⁷は、１〜３のハロゲンで置換されたフェニル基であるのが好ましく、
Ｒ⁶は、１〜３の炭素数１〜６のアルキルで置換されたフェニル基であり
Ｒ⁷は、１〜３のハロゲンで置換されたフェニル基であり、
Ｒ⁸は、

であるのがより好ましい。

前記一般式（ＸＩＶ）で表される化合物を以下に示す。

式（ＸＩＶ）中、
Ｒ⁹は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。

前記一般式（ＸＩＶ）で表される化合物は、
Ｒ⁹は、フェニル基、または炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、炭素数１〜３のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜３のアルコキシ、炭素数１〜３のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのが好ましい。

また、本発明は、
一般式（ＸＸ）で表される化合物またはその塩、もしくは¹¹Ｃで標識されるか、もしくはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識された化合物である。

前記一般式（ＸＸ）で表される化合物を以下に示す。

式（ＸＸ）中、
Ｒ¹¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ¹²は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
ただし、Ｒ¹²がハロゲンで置換されたフェニル基の場合、Ｒ¹¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基または、ｏ位もしくはｐ位がハロゲンで置換されたフェニル基であり、
ただし、Ｒ¹²がフェニル基の場合、Ｒ¹¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。

前記一般式（ＸＸ）で表される化合物は、
Ｒ¹¹は、フェニル基、または炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ¹²は、フェニル基、または炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、炭素数１〜３のアルキルチオ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのがより好ましい。

前記一般式（ＸＸ）で表される化合物は、一般式（ＸＶ）で表される化合物であってもよい。

式（ＸＶ）中、
Ｒ^4'は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基または、ｏ位もしくはｐ位がハロゲンで置換されたフェニル基である。

前記一般式（ＸＶ）で表される化合物は、
Ｒ^4'が、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、または炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのが好ましく、
Ｒ^4'は、炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのが更に好ましい。

前記一般式（ＸＸ）で表される化合物は、一般式（ＸＩＩ）で表される化合物であってもよい。

式（ＸＩＩ）中、
Ｒ⁵は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、もしくはハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。

前記一般式（ＸＸ）で表される化合物は、一般式（ＸＶＩ）で表される化合物であってもよい。

式（ＸＶＩ）中、
Ｒ⁹は、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。

前記一般式（ＸＶＩ）で表される化合物は、
Ｒ^9'は、フェニル基、または炭素数１〜３のアルキル、炭素数１〜３のアルコキシ、炭素数１〜３のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜３のアルコキシ、炭素数１〜３のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であるのが好ましい。

本発明において、「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素が挙げられ、好ましくはフッ素、塩素、臭素、より好ましくはフッ素である。

本発明において、「炭素数１〜６のアルキル」とは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、２−メチルプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルなどが挙げられる。「炭素数１〜６のアルキル」は、好ましくは炭素数１〜５のアルキル、より好ましくは炭素数１〜４のアルキル、さらに好ましくは炭素数１〜３のアルキルである。

本発明において、「炭素数１〜６のアルキルシリル」とは、メチルシリル、トリメチルシリル、エチルシリル、ｎ−プロピルシリル、イソプロピルシリル、２−メチルプロピルシリル、ｎ−ブチルシリル、ｔ−ブチルシリル、ペンチルシリル、ヘキシルシリルなどが挙げられる。「炭素数１〜６のアルキルシリル」は、好ましくは炭素数１〜５のアルキルシリル、より好ましくは炭素数１〜４のアルキルシリルである。

本発明において、「炭素数１〜６のアルコキシ」とは、炭素数１〜６のアルキルオキシを意味し、具体的には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、２−メチルプロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシなどが挙げられる。「炭素数１〜６のアルコキシ」は、好ましくは炭素数１〜５のアルコキシ（炭素数１〜５のアルキルオキシ）、より好ましくは炭素数１〜４のアルコキシ（炭素数１〜４のアルキルオキシ）、さらに好ましくは炭素数１〜３のアルコキシ（炭素数１〜３のアルキルオキシ）である。

本発明において、「ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ」とは、フッ化メチルオキシ、フッ化エチルオキシ、ヨウ化メチルオキシなどが挙げられる。「ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ」は、好ましくはハロゲンで置換された炭素数１〜５のアルコキシ、より好ましくはハロゲンで置換された炭素数１〜４のアルコキシ、さらに好ましくはハロゲンで置換された炭素数１〜３のアルコキシである。

本発明において、「炭素数１〜６のアルキルチオ」とは、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、２−メチルプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、ｔ−ブチルチオ、ペンチルチオ、ヘキシルチオなどが挙げられる。「炭素数１〜６のアルキルチオ」は、好ましくは炭素数１〜５のアルキルチオ、より好ましくは炭素数１〜４のアルキルチオ、さらに好ましくは炭素数１〜３のアルキルチオである。

本発明において、「炭素数３〜７のシクロヘキシル」とは、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが挙げられる。「炭素数３〜７のシクロヘキシル基」は、好ましくは炭素数４〜７のシクロヘキシル、より好ましくは炭素数４〜６のシクロヘキシルである。

本発明において、「炭素数２〜６のアルケニル」とは、ビニル、アリル、イソプロペニル、ブテニル、ペンテニル、へキセニルなどが挙げられる。「炭素数２〜６のアルケニル」は、好ましくは炭素数２〜５のアルケニル、より好ましくは炭素数２〜４のアルケニルである。

本発明において、「炭素数２〜６のアルキニル」とは、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルなどが挙げられる。「炭素数２〜６のアルキニル」は、好ましくは炭素数２〜５のアルキニル、より好ましくは炭素数２〜４のアルキニルである。

本発明において、「炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル」とは、１−トリメチルシリルエチニル、１−エチルシリルブチニルなどが挙げられる。

本発明において、「炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ」とは、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、２−メチルプロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノ、ｔ−ブチルアミノ、ペンチルアミノ、ヘキシルアミノなどが挙げられる。「炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ」は、好ましくは炭素数１〜５のアルキルアミノ、より好ましくは炭素数１〜４のアルキルアミノ、さらに好ましくは炭素数１〜３のアルキルアミノである。

本発明において、「１〜３の炭素数１〜６のアルキルで置換されたフェニル」とは、２−メチルフェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル、１−エチルフェニルなどが挙げられる。「炭素数１〜６のアルキルで置換されたフェニル」は、好ましくは炭素数１〜５のアルキルで置換されたフェニル、より好ましくは炭素数１〜４のアルキルで置換されたフェニルである。

本発明において、「１〜３のハロゲンで置換されたフェニル」とは、１−フルオロフェニル、２−フルオロフェニル、３−フルオロフェニル、２，３，４−トリフルオロフェニル、１−クロロフェニル、２−クロロフェニル、３−クロロフェニル、１−ブロモフェニル、２−ブロモフェニル、３−ブロモフェニル、１−ヨードフェニル、２−ヨードフェニル、３−ヨ−ドフェニルなどが挙げられる。

本発明において、塩としては、無毒性で医薬として許容しうる慣用の塩であり、例えばナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩、アンモニウムなどの無機塩基との塩、及びトリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンアミンなどの有機アミンとの塩、及び塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸との塩、及びギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、酒石酸などの有機カルボン酸との塩、及びメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸との塩、及びアルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などの塩基性又は酸性アミノ酸といった塩基との塩又は酸との塩が挙げられる。

本発明において、「前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている」とは、

（ａ）前記一般式（Ｉ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される、
（ｂ）前記一般式（Ｉ）におけるＲ¹が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換された炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲン（好ましくはフッ素）からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｃ）前記一般式（Ｉ）におけるＲ²が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換された炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲン（好ましくはフッ素）からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｄ）前記一般式（Ｉ）におけるＲ³が、

（ここで、Ｒ⁴は、ハロゲン（好ましくはフッ素）である。）
である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

前記（ａ）前記一般式（Ｉ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される場合については、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識されてもよい。具体的には、Ｒ¹が炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、置換基である炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシの炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識されていてもよい。

「前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている」例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。

本発明において、「前記一般式（ＸＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。」とは、同様に、

（ａ）前記一般式（ＸＩ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される、
（ｂ）前記一般式（ＸＩ）におけるＲ⁴が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換された炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲン（好ましくはフッ素）からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｃ）前記一般式（ＸＩ）における

のフッ素が¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

「前記一般式（ＸＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている」例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。

本発明において、「前記一般式（ＸＩＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。」とは、同様に、

（ａ）前記一般式（ＸＩＩ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される、
（ｂ）前記一般式（ＸＩＩ）におけるＲ⁵が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｃ）前記一般式（ＸＩＩ）における

のフッ素が¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

「前記一般式（ＸＩＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている」例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。

本発明において、「前記一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。」とは、同様に、

（ａ）前記一般式（ＸＩＩＩ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される、
（ｂ）前記一般式（ＸＩＩＩ）におけるＲ⁷が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

「前記一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている」例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。

（ａ）前記一般式（ＸＩＶ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される、
（ｂ）前記一般式（ＸＩＶ）におけるＲ⁹が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換された炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲン（好ましくはフッ素）からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｃ）前記一般式（ＸＩＶ）における

のフッ素が¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

本発明において、「¹¹Ｃで標識されるか、もしくはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識された一般式（ＸＸ）で表される化合物」とは、

（ａ）前記一般式（ＸＸ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される、
（ｂ）前記一般式（ＸＸ）におけるＲ¹¹が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換された炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲン（好ましくはフッ素）からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｃ）前記一般式（ＸＸ）におけるＲ¹²が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換された炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲン（好ましくはフッ素）からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｄ）前記一般式（ＸＸ）における

のフッ素が¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

「前記一般式（ＸＸ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている」例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。

本発明において、「¹¹Ｃで標識されるか、もしくはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識された一般式（ＸＶ）で表される化合物」とは、

（ａ）前記一般式（ＸＶ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される、
（ｂ）前記一般式（ＸＶ）におけるＲ^4'が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換された炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲン（好ましくはフッ素）からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｃ）前記一般式（ＸＶ）における

のフッ素が¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

「前記一般式（ＸＶ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている」例としては、例えば、以下の化合物が挙げられる。

本発明において、「¹¹Ｃで標識されるか、もしくはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識された一般式（ＸＩＩ）で表される化合物」とは、

のフッ素が¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

本発明において、「¹¹Ｃで標識されるか、もしくはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識された一般式（ＸＶＩ）で表される化合物」とは、

（ａ）前記一般式（ＸＶＩ）における炭素原子のいずれか一つが、¹¹Ｃで標識される、
（ｂ）前記一般式（ＸＶＩ）におけるＲ^9'が、ハロゲン（好ましくはフッ素）で置換された炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲン（好ましくはフッ素）からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である場合、そのハロゲンが¹⁸Ｆで標識される、
（ｃ）前記一般式（ＸＶＩ）における

のフッ素が¹⁸Ｆで標識される、
のいずれかを意味する。

本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法は、以下のとおりである。

（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³は、式（Ｉ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、ハロゲン原子または炭素数１〜３のアルコキシである。）

一般式（Ｉ）で表される化合物は、例えば、式（ＸＸＸＩ）で表される化合物と式（ＸＸＸＩＩ）で表されるアミンとを縮合させることにより、得ることができる。または、一般式（Ｉ）で表される化合物は、例えば、式（ＸＸＸＩＩＩ）で表される化合物と式（ＸＸＸＩＶ）で表されるアミンとを縮合させることにより、得ることができる。

前記縮合工程は、従来公知の縮合剤を用いて、行うことができる。縮合剤としては、例えば、カルボジイミド系、イミダゾール系、トリアジン系、ホスホニウム系、ウロニウム系、ハロニウム系などが知られている。カルボジイミド系縮合剤としては、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣＩ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ・ＨＣｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）などが挙げられる。前記イミダゾール系縮合剤としては、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，１’−カルボニルジ（１，２，４−トリアゾール）（ＣＤＴ）などが挙げられる。前記トリアジン系縮合剤としては、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物（ＤＭＴ−ＭＭ）などが挙げられる。ホスホニウム系縮合剤としては、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＢＯＰ）、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＰｙＢＯＰ）などが挙げられる。ウロニウム系縮合剤としては、｛｛［（１−シアノ−２−エトキシー２−オキソエチリデン）アミノ］オキシ｝−４−モルホリノメチレン｝ジメチルアンモニウムヘキサンフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）などが挙げられる。ハロニウム系縮合剤としては、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＩＰ）が挙げられる。

前記式（ＸＸＸＩ）で表される化合物は、公知文献に従い製造しても、市販で入手してもよいが、以下のようにしても製造することができる。

（式中、Ｒ¹、Ｒ³は、式（Ｉ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、または炭素数１〜３のアルコキシである。）

式（ＸＸＸＶＩ）の化合物と、式（ＸＸＸＩＶ）で表されるアミンとを縮合し、式（ＸＸＸＶ）の化合物を得る。この縮合は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法における縮合と、同様にして行うことができる。

式（ＸＸＸＶ）の化合物は、不活性ガス雰囲気下に、酢酸パラジウムおよび１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパンの混合物へ、トリエチルアミンと共に添加し、反応容器を一酸化炭素ガスで置換して加熱しながら攪拌することにより、式（ＸＸＸＩ）の化合物を得ることができる。

前記式（ＸＸＸＩＩＩ）で表される化合物は、公知文献に従い製造しても、市販で入手してもよいが、以下のようにしても製造することができる。

（式中、Ｒ²、Ｒ³は、式（Ｉ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、または炭素数１〜３のアルコキシである。）

式（ＸＸＸＶＩ）の化合物と、式（ＸＸＸＩＩ）で表されるアミンとを縮合し、式（ＸＸＸＶＩ）の化合物を得る。この縮合は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法における縮合と、同様にして行うことができる。

式（ＸＸＸＶＩ）の化合物は、不活性ガス雰囲気下に、酢酸パラジウムおよび１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパンの混合物へ、トリエチルアミンと共に添加し、反応容器を一酸化炭素ガスで置換して加熱しながら攪拌することにより、式（ＸＸＸＩＩＩ）の化合物を得ることができる。

本発明の一般式（ＸＩ）で表される化合物も、同様にして製造することができる。製造スキームの一例を以下に示す。

（式中、Ｒ⁴は、式（ＸＩ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、ハロゲン原子または炭素数１〜３のアルコキシである。）

本発明の一般式（ＸＩＩ）で表される化合物も、同様にして製造することができる。製造スキームの一例を以下に示す。

（式中、Ｒ⁵は、式（ＸＩＩ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、ハロゲン原子または炭素数１〜３のアルコキシである。）

本発明の一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物も、同様にして製造することができる。製造スキームの一例を以下に示す。

（式中、Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸は、式（ＸＩＩＩ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、ハロゲン原子または炭素数１〜３のアルコキシである。）

本発明の一般式（ＸＩＶ）で表される化合物も、同様にして製造することができる。製造スキームの一例を以下に示す。

（式中、Ｒ⁹、式（ＸＩＶ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、ハロゲン原子または炭素数１〜３のアルコキシである。）

本発明の一般式（ＸＸ）で表される化合物も、同様にして製造することができる。製造スキームの一例を以下に示す。

（式中、Ｒ¹¹、Ｒ¹²は、式（ＸＸ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、ハロゲン原子または炭素数１〜３のアルコキシである。）

一般式（ＸＸ）で表される化合物は、例えば、式（ＸＸＸＸ）で表される化合物と式（ＸＸＸＸＩ）で表されるアミンとを縮合させることにより、得ることができる。または、一般式（ＸＸ）で表される化合物は、例えば、式（ＸＸＸＸＩＩ）で表される化合物と式（ＸＸＸＸＩＩＩ）で表されるアミンとを縮合させることにより、得ることができる。この縮合は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法における縮合と、同様にして行うことができる。

前記式（ＸＸＸＸ）で表される化合物は、公知文献に従い製造しても、市販で入手してもよいが、以下のようにしても製造することができる。

（式中、Ｒ¹¹は、式（ＸＸ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、または炭素数１〜３のアルコキシである。）

式（ＸＸＸＸＩＶ）の化合物と、式（ＸＸＸＸＩＩＩ）で表されるアミンとを縮合し、式（ＸＸＸＸＶ）の化合物を得る。この縮合は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法における縮合と、同様にして行うことができる。

式（ＸＸＸＸＶ）の化合物は、不活性ガス雰囲気下に、酢酸パラジウムおよび１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパンの混合物へ、トリエチルアミンと共に添加し、反応容器を一酸化炭素ガスで置換して加熱しながら攪拌することにより、式（ＸＸＸＸ）の化合物を得ることができる。

前記式（ＸＸＸＸＩＩ）で表される化合物は、公知文献に従い製造しても、市販で入手してもよいが、以下のようにしても製造することができる。

（式中、Ｒ¹²は、式（ＸＸ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、または炭素数１〜３のアルコキシである。）

式（ＸＸＸＸＩＶ）の化合物と、式（ＸＸＸＸＩ）で表されるアミンとを縮合し、式（ＸＸＸＸＶＩ）の化合物を得る。この縮合は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法における縮合と、同様にして行うことができる。

式（ＸＸＸＸＶＩ）の化合物は、不活性ガス雰囲気下に、酢酸パラジウムおよび１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパンの混合物へ、トリエチルアミンと共に添加し、反応容器を一酸化炭素ガスで置換して加熱しながら攪拌することにより、式（ＸＸＸＸＩＩ）の化合物を得ることができる。

本発明の一般式（ＸＶ）で表される化合物も、同様にして製造することができる。製造スキームの一例を以下に示す。

（式中、Ｒ^4'は、式（ＸＶ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、ハロゲン原子または炭素数１〜３のアルコキシである。）

本発明の一般式（ＸＶＩ）で表される化合物も、同様にして製造することができる。製造スキームの一例を以下に示す。

（式中、Ｒ^9'は、式（ＸＶＩ）における定義と同様であり、
Ｘは、ＯＨ、ハロゲン原子または炭素数１〜３のアルコキシである。）

本発明の「¹¹Ｃで標識された」化合物は、前記本発明の化合物の製造方法に、従来公知の高速¹¹Ｃ−メチル化反応（Ｃｈｅｍ．Ｒｅｃ．２０１４，１４，５１６−５４１．）を組み合わせて製造することができる。また、本発明の「フッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識された」化合物は、前記本発明の化合物の製造方法に、従来公知の¹⁸Ｆ−標識法（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１５，１７，５７８０−５７８３；Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１６，５２，８３６１−８３６４）を組み合わせて製造することができる。

本発明のイメージング用ＰＥＴプローブは、従来公知の方法により、注射剤などの適切な剤形に製剤化することができる。注射剤、例えば、静脈内投与用注射剤としては、媒体、ｐＨ調整剤、緩衝剤、懸濁化剤、可溶化剤、酸化防止剤、保存剤などを、一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩に必要に応じて加え、従来の方法によって処理することにより製剤化することができる。

［略語］
本明細書中、以下の略語を用いることがある。
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＥＤＣｌ・ＨＣｌ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＣＯＭＵ：｛｛［（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデン）アミノ］オキシ｝−４−モルホリノメチレン｝ジメチルアンモニウムヘキサンフルオロリン酸塩
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水

＜製造例１＞
中間体の合成
２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）の製造

工程１：３−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（４−フルオロフェニル）ベンズアミド（２）の製造

３−ブロモ−２−フルオロ安息香酸（１）（２．１７ｇ，９．９１ｍｍｏｌ，１当量）の塩化メチレン（１００ｍＬ）溶液へ、４−フルオロアニリン（２．２０ｇ，１９．８ｍｍｏｌ，２．０当量）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１２１ｍｇ，０．９９１ｍｍｏｌ，０．１０当量）、および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣｌ・ＨＣｌ）（２．８５ｇ，１４．９ｍｍｏｌ，１．５当量）を室温で添加した。室温で１５時間攪拌したのち、混合物へ水（約１００ｍＬ）を加えた。得られた混合溶液は酢酸エチル（約５０ｍＬ）で３回抽出した。合一した有機相は、飽和食塩水（約１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。その有機相をショートパッドのシリカゲルに通して濾過（酢酸エチルで溶出）した後、減圧下に溶媒を留去した。純粋な３−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（４−フルオロフェニル）ベンズアミド（２）（２．３９ｇ，７．６６ｍｍｏｌ，３８．７％）が無色固体として得られた。さらなる精製を行わず、次の反応に用いた。

¹H NMR (CDCl₃) δ 7.06-7.12 (AA'BB'X, 2H), 7.22 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.59-7.63 (AA'BB'X, 2H), 7.75 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.5 Hz, 1H), 8.09 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.5 Hz, 1H), 8.31 (br d, J = 14.3 Hz, 1H);
HRMS (ESI⁺) m/z 333.9644 (C₁₃H₈BrF₂NNaO⁺として算出、333.9650, [M+Na]⁺).

工程２：２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸メチル（３）の製造

酢酸パラジウム（５１６ｍｇ，２．３０ｍｍｏｌ，０．３０当量）のメタノール（３８ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３８ｍＬ）の混合溶液へ、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（９４７ｍｇ，２．３０ｍｍｏｌ，０．３０当量）をアルゴン雰囲気下室温で加えた。室温で３０分攪拌した後、混合物へトリエチルアミンと３−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（４−フルオロフェニル）ベンズアミド（２）（２．３９ｇ，７．６６ｍｍｏｌ，１当量）を加えた。混合物を含む反応容器を一酸化炭素で置換した後、７５℃で２０時間加熱攪拌した。室温まで戻した後、溶液はショートパッドのシリカゲルを通して濾過し、ジエチルエーテルで溶出した。そのジエチルエーテル液は、減圧下に溶媒を留去した。残渣に水を加えた後、ジエチルエーテルで３回抽出した。合一した有機相は、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、有機相から減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸メチル（３）（２．０８ｇ，７．１４ｍｍｏｌ，９３．３％）を無色固体として得た。

¹H NMR (CDCl₃)δ 3.99 (s, 3H), 7.05-7.12 (AA'BB'X, 2H), 7.39 (dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.60-7.65 (AA'BB'X, 2H), 8.12 (ddd, J = 7.7, 7.7, 1.5 Hz, 1H), 8.36 (ddd, J = 7.7, 7.7, 1.5 Hz, 1H), 8.41 (br d, J = 14.5 Hz, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 314.0599 (C₁₅H₁₁F₂NNaO₃ ⁺として算出, 314.0651 ,[M+Na]+).

工程３：２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）の製造

２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸メチル（３）（１．９８ｇ，６．８０ｍｍｏｌ，１当量）の塩化メチレン（２０ｍＬ）、メタノール（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）の混合溶液へ、水酸化ナトリウム（８１５ｍｇ，２０．４ｍｍｏｌ，３．０当量）を室温で加え、室温で４時間攪拌した。反応終了後の溶液に、塩酸（３Ｍ水溶液）をｐＨが１以下になるまで加えた。その溶液は、酢酸エチル（約２０ｍＬ）で３回抽出した。合一した有機相は、飽和食塩水（約４０ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、その有機相から減圧下溶媒を留去することにより、２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（１．４０ｇ，５．０５ｍｍｏｌ，７５．４％）を白色固体として得た。

¹H NMR (DMSO-d₆) δ7.19-7.23 (AA'BB'X, 2H), 7.41 (dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.72-7.75 (AA'BB'X, 2H), 7.83-7.87 (m, 1H), 7.99 (ddd, J = 7.7, 7.7, 1.5 Hz, 1H), 10.59 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 300.0440 (C₁₄H₉F₂NNaO₃ ⁺として算出, 300.0443, [M+Na]+).

＜製造例２＞
２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）の製造
工程１：３−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−フェニルベンズアミド（５）の製造

化合物（５）は、４−フルオロアニリンの代わりにアニリンを用いた以外は、製造例１の工程１に従い製造した。収率３２％。

¹H NMR (CDCl₃)δ 7.05-7.11 (AA'BB'X, 2H), 7.21 (dd, J = 7.9, 7.9 Hz, 1H), 7.60-7.63 (AA'BB'X, 2H), 7.75 (ddd, J = 7.9, 7.5, 1.8 Hz, 1H), 8.08 (ddd, J = 7.9, 7.5, 1.8 Hz, 1H), 8.31 (br d, J = 13.4 Hz, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 293.9922 (C₁₃H₁₀ON⁷⁹BrF⁺として算出、293.9924、 [M+H]⁺).

工程２：２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸メチル（６）の製造

化合物（６）は、３−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（４−フルオロフェニル）ベンズアミド（２）の代わりに３−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−フェニルベンズアミド（５）を用いた以外は、製造例１の工程２に従い製造した。収率５３％。

¹H NMR (CDCl₃)δ 3.93 (s, 3H), 7.19 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.37-7.41 (m, 3H), 7.67 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 8.11 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.8 Hz, 1H), 8.36 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.8 Hz, 1H), 8.45 (br d, J = 14.3 Hz, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 274.0870 (C₁₅H₁₃O₃NF₊として算出、274.0874、 [M+H]⁺).

工程３：２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）の製造

化合物７は、２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸メチル（３）の代わりに２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸メチル（６）を用いた以外は、製造例１の工程３に従い製造した。収率５４％。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 7.10-7.14 (m, 1H), 7.34-7.43 (m, 3H), 7.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.83-7.87 (m, 1H), 7.99 (ddd, J = 7.4, 7.4, 1.8 Hz, 1H), 10.54 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 260.0716 (C₁₄H₁₁O₃NF⁺として算出、260.0717、 [M+H]⁺).

＜製造例３＞
２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の製造
工程１：３−ブロモ−２−フルオロ−３−（Ｎ−（ｏ−トリル）ベンズアミド（８）の製造

化合物８は、４−フルオロアニリンの代わりに２−メチルアニリンを用いた以外は、製造例１の工程１に従い製造した。収率８０％。

¹H NMR (CDCl₃)δ 2.37 (s, 3H), 7.14 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.20-7.30 (m, 3H), 7.75 (ddd, J = 8.0, 6.8, 1.8 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12-8.16 (m, 1H), 8.29 (br d, J = 15.2 Hz, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 308.0078 (C₁₄H₁₂ON⁷⁹BrF⁺として算出、308.0081、[M+H]⁺).

工程２：２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸メチル（９）の製造

化合物（９）は、３−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−（４−フルオロフェニル）ベンズアミド（２）の代わりに３−ブロモ−２−フルオロ−３−（Ｎ−（ｏ−トリル）ベンズアミド（８）を用いた以外は、製造例１の工程２に従い製造した。収率７９％。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.27 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 7.15-7.25 (m, 2H), 7.28 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.43-7.47 (m, 2H), 7.92-7.95 (m, 1H), 8.02 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.8 Hz, 1H), 10.01 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 288.1027 (C₁₆H₁₅O₃NF⁺として算出、288.1030 、[M+H]⁺).

工程３：２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の製造

化合物（１０）は、２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸メチル（３）の代わりに２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸メチル（９）を用いた以外は、製造例１の工程３に従い製造した。収率６３％。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.27 (s, 3H), 7.14-7.24 (m, 2H), 7.27 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.86-7.89 (m, 1H), 7.98 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 9.95 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 274.0871 (C₁₅H₁₃O₃NF⁺として算出、274.0874 、[M+H]⁺).

＜実施例１＞
化合物ＣＢＴ−０７８（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（ｏ−トリル）イソフタルアミド）の製造

製造例３の工程３において得られた２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）（１０３ｍｇ，０．３７７ｍｍｏｌ，１当量）の１，２−ジクロロエタン溶液（３．８ｍＬ）へ、４−フルオロアニリン（４６μＬ，０．４９ｍｍｏｌ，１．３当量）、４−ジメチルアミノピリジン（９．１ｍｇ，７５μｍｏｌ，０．２０当量）、および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１０９ｍｇ，０．５６５ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加し、混合物を５０℃で終夜加熱攪拌した。室温まで戻したのち、反応溶液をシリカゲルに吸着後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝４／１から２／１）で精製することにより、ＣＢＴ−０７８（１０７ｍｇ，０．２９０ｍｍｏｌ，７６．９％）を無色固体として得た。

mp 167.6-169.1 ℃
¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.28 (s, 3H), 7.15-7.29 (m, 5H), 7.43-7.47 (m, 2H), 7.75-7.87 (m, 4H), 9.96 (s, 1H), 10.61 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 389.1068 (C₂₁H₁₆F₂N₂NaO₂ ⁺として算出、389.1072, [M+Na]⁺).

＜実施例２＞
化合物ＣＢＴ−０９７（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−Ｎ³−（ｏ−トリル）イソフタルアミド）の製造

製造例３の工程３において得られた２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（１．２ｍＬ）へ、４−フルオロ−２−メチルアニリン（１９．５ｍｇ，０．１５６ｍｍｏｌ，１．３当量）、ＣＯＭＵ（７７．１ｍｇ，０．１８０ｍｍｏｌ，１．５当量）およびジイソプロピルエチルアミン（３１．０ｍｇ，０．２４０ｍｍｏｌ，２．０当量）を室温で添加した。終夜室温で攪拌した後、反応溶液に水（約１ｍＬ）を加えた。溶液は酢酸エチル（約１ｍＬ）で３回抽出した。合一した有機相は、飽和食塩水（約１ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、有機相から減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２／１）で精製することにより、ＣＢＴ−０９７（３７．２ｍｇ，９７．８μｍｏｌ，８１．４％）を無色固体として得た。

mp 217.8-218.8 ℃
¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.29 (s, 3H+ 3H, two signals overlapped), 7.07 (ddd, J = 8.5, 8.5, 2.8 Hz, 1H), 7.15-7.19 (m, 2H), 7.24 (dd, J = 7.3, 7.3 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.43-7.48 (m, 3H), 7.84-7.87 (m, 2H), 9.97 (s, 1H), 9.99 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 403.1226 (C₂₂H₁₈F₂N₂NaO₂ ⁺ として算出、403.1229, [M+Na]⁺).

＜実施例３＞
化合物ＣＢＴ−０４２（２−フルオロ−Ｎ¹−フェニル−Ｎ³−（ｏ−トリル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０４２は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（９１．２ｍｇ，０．３５２ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに２−メチルアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率５０．６％（６２．１ｍｇ，０．１７８ｍｍｏｌ）。

mp 164.3-166.4 ℃
¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.28 (s, 3H), 7.11-1.19 (m, 2H), 7.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.35-7.39 (AA'BB'X, 2H), 7.43-7.48 (m, 2H), 7.73-7.75 (AA'BB'X, 2H), 7.79-7.87 (m, 2H), 9.95 (s, 1H), 10.54 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 371.1162 (C₂₁H₁₇FN₂NaO₂ ⁺として算出、371.1166 、[M+Na]⁺).

＜実施例４＞
化合物ＣＢＴ−０４３（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−メチルフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０４３は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（３１．３ｍｇ，０．１２０ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに４−メチルアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率２９．１％（１２．２ｍｇ，３５．０μｍｏｌ）。

＜実施例５＞
化合物ＣＢＴ−０４４（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０４４は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（５３．３ｍｇ，０．２０６ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに４−フルオロアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率６８．０％（４９．４ｍｇ，０．１４０ｍｍｏｌ）。

＜実施例６＞
化合物ＣＢＴ−０５３（２−フルオロ−Ｎ¹−（２−フルオロフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０５３は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（４７．９ｍｇ，０．１８５ｍｍｏｌ）を、２−フルオロアニリンの代わりに４−フルオロアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率２１．０％（１３．６ｍｇ，３８．６μｍｏｌ）。

＜実施例７＞
化合物ＣＢＴ−０５４（２−フルオロ−Ｎ¹−（３−フルオロフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド
）の製造

化合物ＣＢＴ−０５４は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（４４．５ｍｇ，０．１７２ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに３−フルオロアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率４６．０％（２７．９ｍｇ，７９．２μｍｏｌ）。

mp 221.5-223.5 ℃
¹H NMR (DMSO-d₆)δ 6.97 (dddd, J = 8.4, 8.4, 2.5, 0.9 Hz, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 7.34-7.48 (m, 5H), 7.69-7.74 (m, 3H), 7.80-7.84 (m, 2H), 10.53 (s, 1H), 10.74 (s, 1H);
HRMS (ESI⁺) m/z 375.0913 (C₂₀H₁₄F₂N₂NaO₂ ⁺として算出、375.0916、[M+Na]⁺).

＜実施例８＞
化合物ＣＢＴ−０５５（２−フルオロ−Ｎ¹−（２−メトキシフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０５５は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（３０．４ｍｇ，０．１１７ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに２−メトキシアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率４２．９％（１８．３ｍｇ，５０．２μｍｏｌ）。

¹H NMR (CDCl₃)δ 3.93 (s, 3H), 6.94 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.03 (ddd, J = 7.8, 7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.13 (ddd, J = 7.8, 7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.18-7.23 (m, 1H), 7.39-7.44 (m, 3H), 7.70 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 8.15-8.22 (m, 2H), 8.33 (br d, J = 9.7 Hz, 1H), 8.54 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 8.93 (br d, J = 10.7 Hz, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 387.1113 (C₂₁H₁₇FN₂NaO₃ ⁺として算出,387.1115、 [M+Na]+).

＜実施例９＞
化合物ＣＢＴ−０５６（２−フルオロ−Ｎ¹−（２−（メチルチオ）フェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０５６は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（４８．５ｍｇ，０．１８７ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに２−メチルチオアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率１７．１％（１２．２ｍｇ，３２．０μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.45 (s, 3H), 7.13 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.23-7.32 (m, 2H), 7.35-7.47 (m, 4H), 7.56 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.72-7.74 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 9.93 (s, 1H), 10.56 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 403.0885 (C₂₁H₁₇FN₂NaO₂S⁺ として算出, 403.0887、[M+Na]⁺).

＜実施例１０＞
化合物ＣＢＴ−０５７（Ｎ¹−（２−クロロフェニル）−２−フェニル−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０５７は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（２００ｍｇ，０．７７２ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに２−クロロアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率１２．０％（３４．１ｍｇ，９２．５μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 7.11-7.15 (m, 1H), 7.29 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.35-7.48 (m, 4H), 7.57 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.70-7.84 (m, 4H), 7.89 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 10.13 (s, 1H), 10.56 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 391.0619 (C₂₀H₁₄ ³⁵ClFN₂O₂Na⁺として算出、391.0620, [M+Na]⁺).

＜実施例１１＞
化合物ＣＢＴ−０５８（Ｎ¹−（２−ブロモフェニル）−２−フルオロ−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０５８は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（２００ｍｇ，０．７７２ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに２−ブロモアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率１３．６％（４３．５ｍｇ，０．１０５ｍｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 7.11-7.15 (m, 1H), 7.23 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.35-7.39 (m, 2H), 7.43-7.48 (m, 2H), 7.72-7.75 (m, 4H), 7.81-7.85 (m, 1H), 7.91 (dd, J = 6.5, 6.5 Hz, 1H), 10.09 (s, 1H), 10.58 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 435.0116 (C₂₀H₁₄ ⁷⁹BrFN₂O₂Na⁺として算出、435.0115, [M+Na]⁺).

＜実施例１２＞
化合物ＣＢＴ−０５９（２−フルオロ−Ｎ¹−フェニル−Ｎ³−（２−トリフルオロメトキシフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０５９は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（４５．１ｍｇ，０．１７４ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに２−トリフルオロメトキシアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率４．１％（３．０ｍｇ，７．２μｍｏｌ）。

＜実施例１３＞
化合物ＣＢＴ−０６０（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−メトキシフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０６０は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（５３．２ｍｇ，０．２０５ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに４−メトキシアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率５７．６％（４３．０ｍｇ，０．１１８ｍｍｏｌ）。

＜実施例１４＞
化合物ＣＢＴ−０６４（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−ジメチルアミノフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０６４は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（５９．３ｍｇ，０．２２９ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに４−メトキシアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率３８．４％（３３．２ｍｇ，８８．０μｍｏｌ）。

＜実施例１５＞
化合物ＣＢＴ−０６５（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０６５は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（２９．４ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに４−フルオロ−２−メチルアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率３７．０％（１５．３ｍｇ，４１．８μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.28 (s, 3H), 7.06 (dd, J = 8.5, 8.5, 3.0 Hz, 1H), 7.10-7.17 (m, 2H), 7.35-7.39 (m, 2H), 7.42-7.46 (m, 2H), 7.73 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.78-7.87 (m, 2H), 9.96 (s, 1H), 10.54 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 389.1070 (C₂₁H₁₆F₂N₂NaO₂ ⁺として算出,389.1072、 [M+Na]⁺).

＜実施例１６＞
化合物CBT-073（２−フルオロ−（Ｎ¹，Ｎ³−ビス（２−メチルフェニル）イソフタルアミド）の製造

２−フルオロフタル酸（４０．４ｍｇ，０．２１９ｍｍｏｌ，１当量）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．０ｍＬ）へ、２−メチルアニリン（５６．５ｍｇ，０．５２７ｍｍｏｌ，２．４当量）、４−ジメチルアミノピリジン（５．３ｍｇ，４４μｍｏｌ，０．２０当量）、およびＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１０５ｍｇ，０．５４８ｍｍｏｌ，２．５当量）を室温で添加し、室温で１．５時間攪拌した。反応後の溶液に、塩酸（３Ｍ水溶液）をｐＨが１以下になるまで加えた。溶液は酢酸エチル（約２０ｍＬ）で３回抽出した。合一した有機相を飽和食塩水（約４０ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、有機相から減圧下溶媒を留去した。残渣をジエチルエーテルで洗浄することで、ＣＢＴ−０７３（３６．７ｍｇ，０．１０１ｍｍｏｌ，４６．１％）を白色固体として得た。

＜実施例１７＞
化合物ＣＢＴ−０７５（２−フルオロ−Ｎ¹−フェニル−Ｎ³−（ｍ−トリル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０７５は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（６８．１ｍｇ，０．２６３ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに３−メチルアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率３９．５％（３６．２ｍｇ，０．１０４ｍｍｏｌ）。

mp 181.9-184.1 ℃
¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.31 (s, 3H), 6.94 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 7.24 (dd, J = 8.0, 8.0 Hz, 1H), 7.35-7.39 (m, 2H), 7.43 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (br s, 1H), 7.72-7.74 (m, 2H), 7.72-7.81 (m, 2H), 10.44 (s, 1H), 10.52 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 371.1166 (C₂₁H₁₇FN₂NaO₂ ⁺として算出、 371.1166, [M+Na]+).

＜実施例１８＞
化合物ＣＢＴ−０７６（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−シアノフェニル）−Ｎ³−フェニルイソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０７６は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例２の工程３において得られた２−フルオロ−３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（７）（５３．２ｍｇ，０．２０５ｍｍｏｌ）を、４−フルオロアニリンの代わりに４−シアノアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率１９．５％（１４．４ｍｇ，４０．１μｍｏｌ）。

＜実施例１９＞
化合物ＣＢＴ−０８８（Ｎ¹−（２−エチルフェニル）−２−フルオロ−Ｎ³−（４−フルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（５０．０ｍｇ，０．１８０ｍｍｏｌ，１当量の１，２−ジクロロエタン溶液（２．０ｍＬ）へ、２−エチルアニリン（７０．５μＬ，０．５４１ｍｍｏｌ，３．０当量）およびＣＯＭＵ（１５４ｍｇ，０．３６１ｍｍｏｌ，２．０当量）を室温で添加し、５０℃で終夜攪拌した。室温に戻した後、反応溶液に塩酸（１ｍｏｌ／Ｌ水溶液、約２ｍＬ）を加えた。溶液は酢酸エチル（約１ｍＬ）で３回抽出した。合一した有機相は、飽和食塩水（約１ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、有機相から減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２／１）で精製することにより、化合物ＣＢＴ−０８８（５６．０ｍｇ，０．１５４ｍｍｏｌ，８５．７％）を無色固体として得た。

mp 169.1-169.8 ℃;
¹H NMR (DMSO-d₆)δ 1.16 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 2.66 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 7.19-7.26 (m, 4H), 7.29-7.32 (m, 1H), 7.41-7.47 (m, 2H), 7.74-7.85 (m, 4H), 9.96 (s, 1H), 10.61 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 403.1226 (C₂₂H₁₈F₂N₂NaO₂ ⁺として算出、403.1229, [M+Na]⁺).

＜実施例２０＞
化合物ＣＢＴ−０８９（２−フルオロ−Ｎ¹−（２−フルオロフェニル）−Ｎ³−（４−フルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（５０．０ｍｇ，０．１８０ｍｍｏｌ，１当量）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．０ｍＬ）へ、２−フルオロアニリン（５２．２μＬ，０．５４１ｍｍｏｌ，３．０当量）およびＣＯＭＵ（１５４ｍｇ，０．３６１ｍｍｏｌ，２．０当量）を室温で添加し、５０℃で終夜攪拌した。室温に戻した後、反応溶液に塩酸（１ｍｏｌ／Ｌ水溶液、約２ｍＬ）を加えた。溶液は酢酸エチル（約１ｍＬ）で３回抽出した。合一した有機相を飽和食塩水（約１ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、有機相から減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２／１）で精製することにより、化合物ＣＢＴ−０８９（１７．６ｍｇ，５０．０μｍｏｌ，２７．７％）を無色固体として得た。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 7.18-7.34 (m, 5H), 7.44 (dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.74-7.77 (AA'BB'X, 2H), 7.80-7.86 (m, 3H), 10.29 (s, 1H), 10.59 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 393.0820 (C₂₀H₁₃F₃N₂NaO₂ ⁺として算出、393.0821, [M+Na]⁺).

＜実施例２１＞
化合物ＣＢＴ−０９０（Ｎ¹−（２−クロロフェニル）−２−フルオロ−Ｎ³−（４−フルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（５０．０ｍｇ，０．１８０ｍｍｏｌ，１当量）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．０ｍＬ）へ、２−クロロアニリン（５６．６μＬ，０．５４１ｍｍｏｌ，３．０当量）およびＣＯＭＵ（１５４ｍｇ，０．３６１ｍｍｏｌ，２．０当量）を室温で添加し、５０℃で終夜攪拌した。室温に戻した後、反応溶液に塩酸（１ｍｏｌ／Ｌ水溶液、約２ｍＬ）を加えた。溶液は酢酸エチル（約１ｍＬ）で３回抽出した。合一した有機相は、飽和食塩水（約１ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、有機相から減圧下溶媒を留去した。残渣はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２／１）で精製することにより、化合物ＣＢＴ−０９０（トレース量）を無色固体として得た。

¹H NMR (CDCl₃)δ 7.08-7.16 (m, 3H), 7.36 (dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.44-7.51 (m, 2H), 7.62-7.66 (m, 2H), 8.18-8.30 (m, 3H), 8.56 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.86 (br d, J = 11.8 Hz, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 409.0529 (C₂₀H₁₃O₂N₂ ³⁵ClF₂Na⁺ として算出、409.0526, [M+Na]⁺).

＜実施例２２＞
化合物ＣＢＴ−０９１（Ｎ¹−（２−ブロモフェニル）−２−フルオロ−Ｎ³−（４−フルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０９１は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（４４．３ｍｇ，０．１６０ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−ブロモアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率５０．０％（３４．５ｍｇ，８０．０μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 7.19-7.25 (m, 3H), 7.43-7.49 (m, 2H), 7.71-7.79 (m, 4H), 7.82-7.85 (m, 1H), 7.91 (dd, J = 6.6, 6.6 Hz, 1H), 10.10 (s, 1H), 10.63 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 453.0018 (C₂₀H₁₃BrF₂N₂NaO₂ ⁺として算出、453.0021, [M+Na]⁺).

＜実施例２３＞
化合物ＣＢＴ−０９２（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（２−メトキシフェニル）イソフタルアミド）の製造

製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（５０．０ｍｇ，０．１８０ｍｍｏｌ，１当量）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．０ｍＬ）へ、２−メトキシアニリン（６１．０μＬ，０．５４１ｍｍｏｌ，３．０当量）およびＣＯＭＵ（１５４ｍｇ，０．３６１ｍｍｏｌ，２．０当量）を室温で添加し、５０℃で終夜攪拌した。室温に戻した後、反応溶液に塩酸（１ｍｏｌ／Ｌ水溶液、約２ｍＬ）を加えた。溶液は酢酸エチル（約１ｍＬ）で３回抽出した。合一した有機相を飽和食塩水（約１ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、有機相から減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝２／１）で精製することにより、化合物ＣＢＴ−０９２（２３．７ｍｇ，６５．０μｍｏｌ，３６．１％）を無色固体として得た。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 3.86 (s, 3H), 6.99 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.15-7.25 (m, 3H), 7.46 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.74-7.78 (m, 2H), 7.84 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 9.58 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 10.61 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 405.1021 (C₂₁H₁₆O₃N₂F₂Na⁺として算出、405.1021, [M+Na]⁺).

＜実施例２４＞
化合物ＣＢＴ−０９３（２−フルオロ−Ｎ¹−（ｏ−トリル）−Ｎ³−（３，４，５−トリフルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０９３は、製造例３の工程３において得られた２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）（５５．６ｍｇ，０．２０３ｍｍｏｌ）を用い、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに３，４，５−トリフルオロアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率４５．２％（３６．９ｍｇ，９１．７μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.28 (s, 3H), 7.17-7.25 (m, 2H), 7.28 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.45-7.49 (m, 2H), 7.64-7.68 (m, 2H), 7.80-7.84 (m, 1H), 7.87-7.90 (m, 1H), 9.99 (s, 1H), 10.91 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 425.0883 (425.0884 として算出、C₂₁H₁₄F₄N₂NaO₂ ⁺、 [M+Na]+).

＜実施例２５＞
化合物ＣＢＴ−０９４（Ｎ¹−（４−クロロフェニル）−２−フルオロ−Ｎ³−（ｏ−トリル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０９４は、製造例３の工程３において得られた２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）（４６．６ｍｇ，０．１７１ｍｍｏｌ）を用い、４−フルオロアニリンの代わりに４−クロロアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率７４．８％（４９．０ｍｇ，０．１２７ｍｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.29 (s, 3H), 7.17 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.42-7.48 (m, 4H), 7.78-7.89 (m, 4H), 9.97 (s, 1H), 10.71 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 409.0529 (C₂₀H₁₃F₂N₂NaO₂として算出、409.0526, [M+Na]⁺)

＜実施例２６＞
化合物ＣＢＴ−０９５（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−ブロモフェニル）−Ｎ³−（２−メチルフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０９５は、製造例３の工程３において得られた２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）（４４．９ｍｇ，０．１６４ｍｍｏｌ）を用い、４−フルオロアニリンの代わりに４−ブロモアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率３８．３％（２６．９ｍｇ，６２．９μｍｏｌ）。

＜実施例２７＞
化合物ＣＢＴ−０９６（２−フルオロ−Ｎ¹−（２−メチルフェニル）−Ｎ³−（４−メトキシフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０９６は、製造例３の工程３において得られた２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）（５６．３ｍｇ，０．２０６ｍｍｏｌ）を用い、４−フルオロアニリンの代わりに４−メトキシアニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率６４．０％（４９．９ｍｇ，０．１３２ｍｍｏｌ）。

＜実施例２８＞
化合物ＣＢＴ−０９８（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０９８は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（１７５ｍｇ，０．６３１ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリンを用いた以外は実施例２に従い、製造した。収率２６．５％（８０．０ｍｇ，０．１６７ｍｍｏｌ）。

＜実施例２９＞
化合物ＣＢＴ−０９９（２−フルオロ−Ｎ¹−（２−ビフェニリル）−Ｎ³−（４−フルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−０９９は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（２６．０ｍｇ，９３．８μｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−フェニルアニリンを用いた以外は実施例２に従い、製造した。収率８３．６％（３３．６ｍｇ，７８．４μｍｏｌ）。

＜実施例３０＞
化合物ＣＢＴ−１００（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（ナフタレン−１−イル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１００は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（３１．３ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに１−ナフチルアミンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率６８．８％（３１．３ｍｇ，７７．８μｍｏｌ）。

mp 209.1-209.9 ℃
¹H NMR (DMSO-d₆)δ 7.21-7.25 (m, 2H), 7.49 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.55-7.62 (m, 3H), 7.75-7.80 (m, 3H), 7.83-7.88 (m, 2H), 7.93-8.00 (m, 2H), 8.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 10.58 (s, 1H), 10.64 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 425.1069 (C₂₄H₁₆F₂N₂NaO₂ ⁺として算出、 425.1072, [M+Na]⁺)

＜実施例３１＞
化合物ＣＢＴ−１０１（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（２−イソプロピルフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１０１は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（３４．７ｍｇ，０．１２５ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−イソプロピルアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率５１．５％（２５．４ｍｇ，６４．４μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 1.18 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 3.26 (sept, J = 7.0 Hz, 1H), 7.19-7.25 (m, 3H), 7.28 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.74-7.85 (m, 4H), 10.01 (s, 1H), 10.62 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 417.1382 (C₂₃H₂₀O₂N₂F₂Na⁺として算出417.1391, [M+Na]⁺).

＜実施例３２＞
化合物ＣＢＴ−１０２（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（２−（１−プロペン−２−イル）フェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１０２は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（３４．３ｍｇ，０．１２４ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−（１−プロペン−２−イル）アニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率１２％（５．７ｍｇ，１５μｍｏｌ）。

＜実施例３３＞
化合物ＣＢＴ−１０３（２−フルオロ−Ｎ¹−（２−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−Ｎ³−（４−フルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１０３は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（２２．９ｍｇ，８２．６μｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−ｔｅｒｔ−ブチルアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに６０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率６１．６％（２０．８ｍｇ，５０．９μｍｏｌ）。

＜実施例３４＞
化合物ＣＢＴ−１０４（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（２−（トリメチルシリル）エチニルフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１０４は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（４５．０ｍｇ，０．１６２ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−（トリメチルシリル）エチニルアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率５３．８％（３９．１ｍｇ，８７．２μｍｏｌ）。

＜実施例３５＞
化合物ＣＢＴ−１０５（Ｎ¹−（２−エチニルフェニル）−２−フルオロ−Ｎ³−（４−フルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１０５は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（３６．４ｍｇ，０．１３１ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−エチニルアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率５２．７％（２６．０ｍｇ，６９．１μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 4.60 (s, 1H), 7.19-7.26 (m, 3H), 7.45-7.50 (m, 2H), 7.57 (dd, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.74-7.78 (AA'BB'X, 2H), 7.83-7.87 (m, 1H), 7.97 (br s, 1H), 7.99 (br s, 1H), 9.93 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 10.64 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 377.1084 (C₂₂H₁₅N₂O₂F₂として算出、377.1096, [M+H]⁺).

＜実施例３６＞
化合物ＣＢＴ−１０６（Ｎ¹−シクロヘキシル−２−フルオロ−Ｎ³−（４−フルオロフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１０６は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（３７．６ｍｇ，０．１３６ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりにシクロヘキシルアミンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率８３．０％（４０．４ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 1.12-1.36 (m, 5H), 1.56-1.84 (m, 5H), 3.74-3.80 (m, 1H), 7.17-7.24 (AA'BB'X, 2H), 7.36 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 7.64-7.68 (m, 1H), 7.70-7.77 (m, 3H), 8.29 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 10.53 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 381.1382 (C₂₀H₂₀F₂N₂NaO₂ ⁺として算出、381.1385, [M+Na]⁺).

＜実施例３７＞
化合物ＣＢＴ−１０７（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（２−ヨードフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１０７は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（３３．２ｍｇ，０．１２０ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−ヨードアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率５４．８％（３１．４ｍｇ，６５．７μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 7.07 (ddd, J = 7.5, 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.19-7.25 (AA'BB'X, 2H), 7.44-7.49 (m, 2H), 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.74-7.79 (AA'BB'X, 2H), 7.83 (ddd, J = 7.0, 7.0, 1.5 Hz, 1H), 7.91-7.96 (m, 2H), 10.08 (s, 1H), 10.65 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 500.9871 (C₂₀H₁₃F₂IN₂NaO₂として算出、500.9882, [M+H]⁺).

＜実施例３８＞
化合物ＣＢＴ−１０８（２−フルオロ−Ｎ¹−（４−フルオロフェニル）−Ｎ³−（２，６−ジメチルフェニル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１０８は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに製造例１の工程３において得られた２−フルオロ−３−（（４−フルオロフェニル）カルバモイル）安息香酸（４）（３４．０ｍｇ，０．１２３ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２，６−ジメチルアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率６１．８％（２８．９ｍｇ，７６．０μｍｏｌ）。

＜実施例３９＞
化合物ＣＢＴ−１１４（２−フルオロ−Ｎ¹−（３−フルオロフェニル）−Ｎ³−（ｏ−トリル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１１４は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）（２８．５ｍｇ，０．１０４ｍｍｏｌ）を用い、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに３−フルオロアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率７８．２％（２９．８ｍｇ，８１．３μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.28 (s, 3H), 6.97 (dddd, J = 8.4, 8.4, 2.5, 0.9 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.38-7.49 (m, 4H), 7.71-7.73 (m, 1H), 7.82 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 7.0, 7.0 Hz, 1H), 9.97 (s, 1H), 10.77 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 389.1068 (C₂₁H₁₆F₂N₂NaO₂ ⁺として算出、389.1072, [M+Na]⁺).

＜実施例４０＞
化合物ＣＢＴ−１１５（２−フルオロ−Ｎ１−（２−フルオロフェニル）−Ｎ３−（ｏ−トリル）イソフタルアミド）の製造

化合物ＣＢＴ−１１５は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）（３１．９ｍｇ，０．１１７ｍｍｏｌ）を用い、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに２−フルオロアニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率６８．４％（２９．３ｍｇ，８０．０μｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆)δ 2.28 (s, 3H), 7.15-7.34 (m, 6H), 7.43-7.48 (m, 2H), 7.82-7.88 (m, 3H), 9.96 (s, 1H), 10.31 (s, 1H);
HRMS (ESI+) m/z 389.1071 (C₂₁H₁₆F₂N₂NaO₂ ⁺として算出、389.1072, [M+Na]⁺).

＜実施例４１＞
¹¹Ｃで標識された化合物ＣＢＴ−０７８（化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８）の製造
化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の製造は、国際公開第２００８／０２３７８０号明細書およびＣｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００９，１５，４１６５−４１７１を参考にして行った。

反応容器１および２を用意した。反応はオーブンドライした器具を用い、反応開始前に前記反応容器１および２を２５０℃で加熱しながら流速４００ｍＬ／分のヘリウムガスを流すことで、流路を乾燥させた。乾燥終了後、反応容器１は−１０℃まで、反応容器２は室温まで冷却し、反応容器２へ実施例２８で製造した化合物ＣＢＴ−０９８（１．３ｍｇ，２．７μｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（２．０ｍｇ，２．２μｍｏｌ）、オルトトリルホスフィン（２．０ｍｇ，６．６μｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１．２ｍｇ，８．７μｍｏｌ）を溶解したテトラヒドロフラン溶液（３００μＬ）を導入した。［¹¹Ｃ］二酸化炭素の製造完了の約２分前に反応容器１内に水素化リチウムアルミニウムヒドリドのテトラヒドロフラン溶液（０．１ｍｍｏｌ／Ｌ，４００μＬ，ＡＢＸＧｍｂＨ，８０２．０００１）を導入した。

微量の酸素（０．５％）を包含する窒素混合ガスに対して、住友重機械工業製サイクロトロン（ＣＹＰＲＩＳＨＭ−１２Ｓ）を用いてプロトンレーザー（５０μＡ）を５２分間照射することで、［¹¹Ｃ］二酸化炭素（約４０ＧＢｑ）を合成した。合成した［¹¹Ｃ］二酸化炭素を酸素含有窒素ガス（酸素０．５％、流速４００ｍＬ／分）で自動合成装置に移送し、反応容器１の溶液内にバブリングした。反応容器１に隣接するＲＩ検出器の値が最大値を示したことを確認した後、バブリングを停止した。反応容器１を２００℃に加熱し、ヘリウムガス（流速２００ｍＬ／分）を９０秒間流すことで、反応容器１内のテトラヒドロフランを留去した。反応容器を室温まで冷却した後、反応容器１にヨウ化水素酸（５５％，５００μＬ）を加えた。この反応容器１を２００℃に加熱し、［¹¹Ｃ］ヨウ化メチルを合成した。加熱したままヘリウムガス（流速３０ｍＬ／分）を流し、すでに導入済みの反応容器２の溶液内にバブリングすることで、［¹¹Ｃ］ヨウ化メチルを反応容器２へ蒸留移送した。この際、反応容器間にアスカライト（１．６ｇ，ＴｈｏｍａｓＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ，Ｃ０４９Ｕ９０）とシカペント（２．０ｇ，Ｍｅｒｃｋ，１．００５４３．０５００）を充填したカラム（内径：１４０ｍｍ）を設置し、［¹¹Ｃ］ヨウ化メチル以外の水分やヨウ化水素など、未反応の［¹¹Ｃ］二酸化炭素などを除去した。反応容器２に隣接するＲＩ検出器の値が最大値を示したことを確認した後、バブリングを停止し、反応容器２を６５℃で５分間加熱した。反応終了後、アセトニトリル（５００μＬ）および水（５００μＬ）の混合溶媒を反応容器２に導入し、得られた混合物をメンブレンフィルター（ＰＶＤＦ製、０．２μｍ，直径１３ｍｍ，ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，６７７９−１３０２）でろ過した後、セミ分取ＨＰＬＣに導入した。ＨＰＬＣ付属のＵＶセンサー、ＲＩ検出器を参照し、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８が含まれる画分を分取した。この画分をホットセル内に設置されたエバポレーターに取り付けたフラスコへ移送し、減圧下加熱することで３分間減圧留去した。フラスコ内を常温常圧にした後、投与用希釈溶液（生理食塩水：プロピレングリコール：Ｔｗｅｅｎ８０＝１００：１０：１，１ｍＬ）と生理食塩水（１ｍＬ）をフラスコ内に導入し、４０秒間回転攪拌した。得られた溶液をメンブレンフィルター（ＰＶＤＦ製、０．４５μｍ，直径３３ｍｍ，Ｍｅｒｃｋ，ＳＬＨＶ０３３ＮＢ）を透過させつつ投与バイアルに移送することで、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の溶液を取得した。

得られた化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８溶液の総放射能量はドーズキャリブレーター（ＣＡＰＩＮＴＥＣ，Ｉｎｃ．，５１３０−３２３５）で測定した。また純度検定は、ＵＶ検出器とＲＩ検出器を備えたＨＰＬＣを用いて行った。さらに、得られた溶液の密度を１ｇ／ｍＬとして、ＨＰＬＣにおける化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８のＵＶ吸収量からその濃度を計算し、総放射能量との比を計算することで、非放射能を算出した。セミ分取、純度検定におけるＨＰＬＣの詳細な分析条件とその結果の例を以下に示す。

［セミ分取ＨＰＬＣの条件］
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（ナカライテスク）１０×２０ｍｍと１０×２５０ｍｍを連結して使用；
流速：５ｍＬ／分；移動相：アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ＝５０：５０；
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ；保持時間：１２．５分。

［分析ＨＰＬＣの条件］
カラム：
ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（ナカライテスク）４．６×１５０ｍｍ；
流速：１ｍＬ／分；移動相：アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ＝５５：４５
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ；保持時間：６．１分。

［［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８溶液の分析結果（［¹¹Ｃ］二酸化炭素合成後３５分経過時のデータ）］
総放射能量：１５０１ＭＢｑ；比放射能：１０８．５ＧＢｑ／μｍｏｌ；溶液の体積：１．９ｍＬ；
［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の重量濃度：２．７μｇ／ｍＬ；溶液のｐＨ：７．０
化学純度：９３．０％；放射化学純度：９９．３％。

＜実施例４２＞
¹¹Ｃで標識された化合物ＣＢＴ−０３９（化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９）の製造
化合物ＣＢＴ−０９８の代わりに化合物ＣＢＴ−１２２（１．２ｍｇ，２．７μｍｏｌ）を用いて、実施例４１と同様に行って、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９を得た。

なお、化合物ＣＢＴ−１２２は、２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）の代わりに３−（フェニルカルバモイル）安息香酸（５１．３ｍｇ，０．２１３ｍｍｏｌ）を、４−フルオロ−２−メチルアニリンの代わりに４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリンを用い、反応温度を室温の代わりに５０℃にした以外は実施例２に従い、製造した。収率４０．１％（３７．７ｍｇ，０．０８５２ｍｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆) δ1.26 (s, 12H), 7.08−7.24 (m, 2H), 7.33−7.43 (m, 3H), 7.56 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.62−7.87 (m, 4H), 8.15−8.26 (br s, 1H), 8.24 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 10.49 (s, 1H), 11.56 (br s, 1H);
HRMS (ESI⁺) m/z 443.2136 (C₂₆H₂₈O₄N₂B⁺として算出, 443.2137 ,[M+H]⁺).

［セミ分取ＨＰＬＣの条件］
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（ナカライテスク）１０×２０ｍｍと１０×２５０ｍｍを連結して使用；
流速：５ｍＬ／分；移動相：アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ＝５０：５０；
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ；保持時間：９．８分。

［分析ＨＰＬＣの条件］
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（ナカライテスク）４．６×１５０ｍｍ；
流速：１ｍＬ／分；移動相：アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ＝５５：４５
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ；保持時間：６．１分。

化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９溶液の分析結果（［¹¹Ｃ］二酸化炭素合成後３２分経過時のデータ）
総放射能量：１０４９ＭＢｑ；比放射能：５０．０ＧＢｑ／μｍｏｌ；溶液の体積：１．７ｍＬ；
［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９の重量濃度：４．５μｇ／ｍＬ；溶液のｐＨ：７．０
化学純度：９６．１％；放射化学純度：＞９９％。

＜実施例４３＞
¹⁸Ｆで標識された化合物ＣＢＴ−０７８（化合物［¹⁸Ｆ］ＣＢＴ−０７８）の製造
化合物［¹⁸Ｆ］ＣＢＴ−０７８の製造は、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１６，５２，８３６１−８３６４並びにＯｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１５，１７，５７８０−５７８３を参考にして行った。

密閉バイアルおよび反応用Ｖバイアルを用意した。反応はオーブンドライした器具を用い、反応開始前に反応容器を１５０℃で加熱しながら減圧、ヘリウムガスでの加圧を繰り返すことで流路を乾燥させた。

化合物ＣＢＴ−１４０（１．９ｍｇ，４．０μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド溶液（３００μＬ）およびトリフルオロメタンスルホン酸銅（ＩＩ）（７．２ｍｇ，２０μｍｏｌ）、ピリジン（８０．５μＬ，１．００ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド溶液（３００μＬ）は［¹⁸Ｆ］フッ化物イオンの製造完了の１０分前に調製した。

［¹⁸Ｏ］Ｈ₂Ｏ（２ｍＬ，¹⁸Ｏ：＞９８ａｔｏｍ％，ＴａｉｙｏＮｉｐｐｏｎＳａｎｓｏＣｏｒｐ．，Ｆ０３−００２７）に対して、住友重機械工業製サイクロトロン（ＣＹＰＲＩＳＨＭ−１２Ｓ）を用いてプロトンレーザー（３５μＡ）を４０分間照射することで、［¹⁸Ｆ］フッ化物イオン（約４０ＧＢｑ）を合成した。合成した［¹⁸Ｆ］フッ化物イオンを標識用合成装置内部に設置した密閉バイアル内に移送した。密閉バイアルに隣接するＲＩ検出器の値が最大値を示したことを確認した後、密閉バイアルを流速５００ｍＬ／分の窒素ガスで加圧することで［¹⁸Ｆ］フッ化物イオンを含む［¹⁸Ｏ］Ｈ₂Ｏを移送し、イオン交換樹脂（Ｗａｔｅｒｓ，１８６００４５４０）中を通過させ［¹⁸Ｆ］フッ化物イオンを捕捉した。イオン交換樹脂に隣接するＲＩ検出器の値が最大値を示したことを確認した後、窒素ガスでの加圧を停止し、イオン交換樹脂に吸着した［¹⁸Ｆ］フッ化物イオンをトリフルオロメタンスルホン酸カリウム（５ｍｇ）、炭酸カリウム（５０μｇ）を含む水溶液（５００μＬ）とアセトニトリル（１０００μＬ）の混合溶媒で溶出しつつ、反応用Ｖバイアル内に移送した。溶出した［¹⁸Ｆ］フッ化カリウム溶液を、１３０℃で５分間減圧し、水を留去した。残存した少量の溶液にアセトニトリル（３００μＬ）を加え、１５０℃で５分間減圧し、水分を共沸した。これをもう一度繰り返し、反応用Ｖバイアル内にて無水［¹⁸Ｆ］フッ化カリウムを調製した。反応用Ｖバイアル内にＣＢＴ−１４０（１．９ｍｇ，４．０μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド溶液（３００μＬ）を導入し、１３０℃で５分間加熱した。続いてＶバイアルを室温まで冷却した後、トリフルオロメタンスルホン酸銅（ＩＩ）（７．２ｍｇ，２０μｍｏｌ）とピリジン（８０．５μＬ，１．００ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（３００μＬ）溶液を導入し、１３０℃で２０分間加熱した。Ｖバイアルを室温まで冷却した後、アセトニトリル（５００μＬ）と水（５００μＬ）の混合溶媒をＶバイアル内に導入し、得られた混合物をメンブレンフィルター（ＰＶＤＦ製、０．２μｍ，直径１３ｍｍ，ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，６７７９−１３０２）でろ過した後、セミ分取ＨＰＬＣに導入した。ＨＰＬＣ付属のＵＶセンサー、ＲＩ検出器を参照し、化合物［¹⁸Ｆ］ＣＢＴ−０７８が含まれる画分を分取した。この画分をホットセル内に設置されたエバポレーターに取り付けたフラスコへ移送し、減圧下加熱することで３分間減圧留去した。フラスコ内を常温常圧にした後、投与用希釈溶液（生理食塩水：プロピレングリコール：Ｔｗｅｅｎ８０＝１００：１０：１，１ｍＬ）と生理食塩水（１ｍＬ）をフラスコ内に導入し、４０秒間回転攪拌した。得られた溶液をメンブレンフィルター（ＰＶＤＦ製、０．４５μｍ，直径３３ｍｍ，Ｍｅｒｃｋ，ＳＬＨＶ０３３ＮＢ）を透過させつつ投与バイアルに移送することで、化合物［¹⁸Ｆ］ＣＢＴ−０７８の溶液を取得した。

得られた化合物［¹⁸Ｆ］ＣＢＴ−０７８の溶液の総放射能量はドーズキャリブレーター（ＣＡＰＩＮＴＥＣ，Ｉｎｃ．，５１３０−３２３５）で測定した。また純度検定は、ＵＶ検出器とＲＩ検出器を備えたＨＰＬＣを用いて行った。さらに、得られた溶液の密度を１ｇ／ｍＬとして、ＨＰＬＣにおける化合物［¹⁸Ｆ］ＣＢＴ−０７８のＵＶ吸収量からその濃度を計算し、総放射能量との比を計算することで、非放射能を算出した。セミ分取、純度検定におけるＨＰＬＣの詳細な分析条件とその結果の例を以下に示す。

［セミ分取ＨＰＬＣの条件］
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（ナカライテスク）１０×２０ｍｍと１０×２５０ｍｍを連結して使用；
流速：５ｍＬ／分；移動相：アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ＝４８：５２；
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ；保持時間：１８．１分。

［分析ＨＰＬＣの条件］
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ（ナカライテスク）４．６×１５０ｍｍ；
流速：１ｍＬ／分；移動相：アセトニトリル／Ｈ₂Ｏ＝５５：４５
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ；保持時間：５．９分。

［［¹⁸Ｆ］ＣＢＴ−０７８溶液の分析結果（［¹⁸Ｆ］フッ化物イオン合成後８１分経過時のデータ）］
総放射能量：９７２ＭＢｑ；比放射能：８９．４ＧＢｑ／μｍｏｌ；溶液の体積：３．７ｍＬ；
［¹⁸Ｆ］ＣＢＴ−０７８の重量濃度：１．１μｇ／ｍＬ；
化学純度：９４．５％；放射化学純度：９６．７％。

なお、化合物ＣＢＴ−１４０は、製造例３の工程３において得られた２−フルオロ−３−（ｏ−トリルカルバモイル）安息香酸（１０）（１７３ｍｇ，０．６３３ｍｍｏｌ）と、４−フルオロアニリンの代わりに４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリンを用いた以外は実施例１に従い、製造した。収率５９．９％（１８０ｍｇ，０．３７９ｍｍｏｌ）。

¹H NMR (DMSO-d₆) δ1.30 (s, 12H), 2.28 (s, 3H), 7.14−7.31 (m, 3H), 7.41−7.50 (m, 2H), 7.64−7.70 (AA′BB′, 2H), 7.73−7.78 (AA′BB′, 2H), 7.78−7.90 (m, 2H), 9.94 (s, 1H), 10.67 (s, 1H);
HRMS (ESI⁺) m/z 475.2197 (C₂₇H₂₉O₄N₂BF⁺として算出, 475.2199,[M+H]⁺).

＜ＨＢＶ複製活性評価方法の確立＞
ＨＢＶ複製活性評価方法
（方法）
（１）ＨＢＶ複製活性評価ベクター（ｐＢＢ−ｉｎｔｒｏｎ）の作製
ジェノタイプＣのＨＢＶｐｇＲＮＡにおける第１ＤＲ１配列および第１ε配列を含む５’末端の９９塩基（ＨＢＶｐｇＲＮＡの３２位〜１３０位に相当）と、ＤＲ２配列、第２ＤＲ１配列および第２ε配列を含む３’末端の３４９塩基（ＨＢＶｐｇＲＮＡの３０１３位〜３２１５位および１位〜１４６位に相当）の間、すなわち第１ε／ＤＲ２配列（ＨＢＶｐｇＲＮＡの１３１位〜３０１２位に相当）を、イントロンを含む３２０塩基のレポーター配列と置換して、本発明の第７態様に記載の配列番号１で示すＨＢＶ複製活性評価核酸を作成した（図１Ａ）。このレポーター配列は、ｐＣＲＥ−ＭｅｔＬｕｃ２ベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社）の４８３部位〜４５３部位（３１塩基対）、ｐＣＩベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社）の８５７部位〜９８９部位（１３３塩基対）及びｐＣＲＥ−ＭｅｔＬｕｃ２ベクターの４５２部位〜３３７部位（１１６塩基対）の塩基配列に由来する。

作成したＨＢＶ複製活性評価核酸の上流にＣＭＶプロモーター（７４２塩基対）及びＴＡＴＡ−ｂｏｘ（４６塩基対）を、下流には合成ｐｏｌｙＡシグナル配列（４９塩基対）挿入し、これら全ての配列をｐＣＩベクターのバックボーン（ファージｆ１オリジン、アンピシリン耐性遺伝子および複製起点のみを含む）に挿入して本発明の第８態様に記載のＨＢＶ複製活性評価ベクターであるｐＢＢ−ｉｎｔｒｏｎを作製した（図２Ａ）。

このＨＢＶ複製活性評価ベクターを宿主細胞に導入すると、宿主細胞のＲＮＡ−ｐｏｌＩＩによってｍＲＮＡが合成される。このｍＲＮＡは、ｐｒｅ−ｍＲＮＡとして合成された後、レポーター配列中のイントロンが宿主細胞内でｐｒｅ−ｍＲＮＡスプライシングによって直ちに除去される。イントロンがスプライスアウトされた成熟ｍＲＮＡがレポーターｐｇＲＮＡに相当する（図１Ｂ)。レポーターｐｇＲＮＡは、次述のＨＢＶ−Ｐ発現ベクター、ＨＢｃ発現ベクター、そしてＨＢｘ発現ベクターから発現されるＨＢＶ−Ｐｏｌ、ＨＢｃ、およびＨＢｘの働きによって逆転写されることによって、元のＨＢＶ複製活性評価ベクターのレポーター配列とは異なる、すなわちイントロンが除去されたレポーター配列を含むレポーターマイナス鎖ＤＮＡが合成される（図１Ｃ）。

（２）ＨＢＶ−Ｐ発現ベクターの（ｐＣＩ−ＨＢＶ−Ｐ）作製
ＨＢＶの配列番号４で示すＰ遺伝子に基づいて人工的に設計された配列番号５で示す配列をｐＣＩベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社）のＣＭＶプロモーター制御下に挿入して本発明における第８態様に記載のＨＢＶ−Ｐ発現ベクターであるｐＣＩ−ＨＢＶ−Ｐを作製した（図２Ｂ）。

（３）ＨＢｃ発現ベクター（ｐＣＩ−ＨＢｃ）の作製
ＨＢＶの配列番号２で示すＣ遺伝子に基づいて人工的に設計された配列番号３で示す配列をｐＣＩベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社）のＣＭＶプロモーター制御下に挿入して本発明の第８態様に記載のＨＢＶ−Ｃ発現ベクターであるｐＣＩ−ＨＢｃを作製した（図２Ｃ）。

（４）ＨＢｘ発現ベクター（ｐＣＩ−ＨＢｘ）の作製
ＨＢＶの配列番号６で示すＸ遺伝子に基づいて人工的に設計された配列番号７で示す配列をｐＣＩベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ社）のＣＭＶプロモーター制御下に挿入して本発明の第８態様に記載のＨＢｘ発現ベクターであるｐＣＩ−ＨＢｃを作製した（図２Ｄ）。

（５）ＨＢＶ複製活性評価方法
ＨｅＬａ細胞にＨＢＶ複製活性評価ベクターと、ＨＢＶ−Ｐ発現ベクター、ＨＢｃ発現ベクターおよびＨＢｘ発現ベクターを様々な組み合わせで導入した（導入工程）。組み合わせのパターンは、図３Ａに記載のとおりである。ＨｅＬａ細胞への遺伝子導入には、エレクトロポレーション法を用いた。エレクトロポレーターＮｅｐａ２１（ネッパジーン社）により、１０μｇのＤＮＡを１２５Ｖ／２．５ｍｓｐｌｕｓｌｅｎｇｔｈの条件で、約１×１０⁶個のＨｅＬａ細胞に導入した。ＨＢｃ発現ベクター：ＨＢＶ−Ｐ発現ベクター：ＨＢｘ発現ベクターの比率は９：３：１とし、組み合わせにより導入しない発現ベクターがある場合には、その導入しない発現ベクターと同比率の空ベクター（ｐＣＩ）を導入した。ＨＢＶ複製活性評価ベクターと他の発現ベクターの総和の比率は、１：１（５μｇ：５μｇ）とし、導入しない発現ベクターについては、その比率分のｐＣＩを導入した。

さらに、逆転写されたレポーターマイナス鎖ＤＮＡの量が、細胞内におけるＨＢｃ、ＨＢＶ−Ｐｏｌ、およびＨＢｘの機能を反映しているか否かを確認するために、ＨＢｃ／ＨＢＶ−Ｐ／ＨＢｘの各発現ベクターの比率（ＨＢｃ：ＨＢＶ−Ｐ：ＨＢｘ＝９：３：１）を変えずに、ＨＢＶ複製活性評価ベクター：ＨＢｃ／ＨＢＶ−Ｐ／ＨＢｘ発現ベクターの比率を１：０（５μｇ：ｐＣＩ５μｇ）、１：０．００４（５μｇ：０．０２μｇ）、１：０．０１６（５μｇ：０．０８μｇ）、１：０．０６２（５μｇ：０．３１μｇ）、１：０．２５（５μｇ：１．２５μｇ）、および１：１（５μｇ：５μｇ）と段階的に変化させた際の、逆転写反応への影響をレポーターマイナス鎖ＤＮＡ量により解析した。

遺伝子導入後のＨｅＬａ細胞は、２ｍＬの１０％ＦＢＳ添加したＤＭＥＭで５％ＣＯ₂存在下にて３７℃で４８時間培養した（培養工程）。

培養後、ＨｅＬａ細胞からＤＮｅａｓｙＭｉｎｉ（Ｑｉａｇｅｎ社）用いてＤＮＡ抽出した。プライマーには、配列番号８で示す塩基配列からなるフォワードプライマーと配列番号９で示す塩基配列からなるリバースプライマーのプライマーペアを用いた。このフォワードプライマーは３’末端の２塩基が下流側のエクソンにおける５’末端の２塩基に一致するが、イントロンの５’末端の２塩基とは一致しない。したがって、イントロンが除去されたレポーター配列を有するレポーターマイナス鎖ＤＮＡが存在する場合にのみプライマーとして機能し、レポーターマイナス鎖ＤＮＡを鋳型として１３１塩基のＤＮＡ断片が増幅される。

また、図３Ａに記載の組み合わせで各発現ベクターを導入した細胞由来のＤＮＡについて、ＰＣＲ後のＰＣＲ産物を２％アガロースゲルで泳動分離し、エチジウムブロマイドで染色した。

さらに、検量線の作成のために、ＨＢｃ：ＨＢＶ−Ｐ：ＨＢｘの各発現ベクターの比率が９：３：１、かつＨＢＶ複製活性評価ベクター：ＨＢｃ／ＨＢＶ−Ｐ／ＨＢｘ発現ベクターの比率が１：１になるように、導入したＨｅＬａ細胞由来のＤＮＡを段階希釈して、鋳型ＤＮＡを調製し、リアルタイムＰＣＲを行った。

（結果）
図３に結果を示す。
図３Ａは、各組み合わせで発現ベクターを導入した細胞に由来するＰＣＲ産物を２％アガロースゲル電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色した結果である。ＣはＣ遺伝子を含むＨＢｃ発現ベクターを、ＰはＰ遺伝子を含むＨＢＶ−Ｐ発現ベクターを、そしてＸはＸ遺伝子を含むＨＢｘ発現ベクターを示す。＋はＨｅＬａ細胞への導入を、−は未導入を示す。レポーターマイナス鎖ＤＮＡに由来する１３１ｂｐのＰＣＲ産物は、ＨＢｃ発現ベクター及びＨＢＶ−Ｐ発現ベクターを導入したときにのみ認められた。よって、ｐｇＲＮＡの逆転写には、ＨＢｃ及びＨＶＰ−Ｐｏｌが必須であることが明らかとなった。また、ＨＢｘは、ｐｇＲＮＡの逆転写に必須ではないものの、ＨｂｃとＨＢＶ−Ｐｏｌによる逆転写を著しく促進することが確認された。

図３Ｂは、段階希釈したＤＮＡのリアルタイムＰＣＲの結果により作成した検量線である。この図が示すように、Ｒ²＝０．９９９６の精密な検量線が得られ、逆転写されたレポーターマイナス鎖ＤＮＡの量はリアルタイムＰＣＲによって定量可能であることが立証された。

図３Ｃは、リアルタイムＰＣＲとＢの検量線を用いた定量解析結果である。上記Ａで用いたＤＮＡサンプルをリアルタイムＰＣＲで増幅した後、上記Ｂで示す検量線で定量解析した結果である。Ａのアガロースゲル電気泳動による解析結果とほぼ同様の結果が得られた。

図３Ｄは、ＨＢＶタンパク質（ＨＢｃ、ＨＢＶ−Ｐ、ＨＢｘ）の発言量とＨＢＶＤＮＡ複製、すなわちレポーターマイナス鎖ＤＮＡの量との相関を示す図である。ｐｇＲＮＡの逆転写は、ＨＢＶタンパク質の発現量に従って指数関数的に増加した。この結果から、このＨＢＶ複製活性評価システムを用いたＨＢＶ複製活性評価方法によれば、宿主細胞内のＨＢＶタンパク質の働きを反映し、逆転写の活性、すなわち、複製の活性を測定し、定量化できることが明らかとなった。

＜ＨＢＶ複製活性評価＞
前記ＨＢＶ複製活性評価システムを用いて、サンプルの効果を検証した。
（方法）
前記ＨＢＶ複製活性評価方法に準じて、ＨｅＬａ細胞にＨＢＶ複製活性評価ベクターと、ＨＢＶ−Ｐ発現ベクター、ＨＢｃ発現ベクター及びＨＢｘ発現ベクターを導入した。ＨＢｃ：ＨＢＶ−Ｐ：ＨＢｘの各発現ベクターの導入比率は９：３：１とし、ＨＢＶ複製活性評価ベクターとＨＢｃ＋ＨＢＶ−Ｐ＋ＨＢｘの発現ベクターの導入比率は、１：１（５μｇ：５μｇ）とした。導入工程後のＨｅＬａ細胞に２ｍＬの１０％ＦＢＳ添加したＤＭＥＭを加え、０．１ｍＬ／ｗｅｌｌで９６ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅに分注した後、各培地に０．０４μｇ／ｗｅｌｌ、０．０８μｇ／ｗｅｌｌ、０．１６μｇ／ｗｅｌｌ、０．３１μｇ／ｗｅｌｌ、０．６３μｇ／ｗｅｌｌ、１．２５μｇ／ｗｅｌｌ、２．５０μｇ／ｗｅｌｌ、及び５．００μｇ／ｗｅｌｌのサンプルを加え、５％ＣＯ₂存在下にて３７℃で２４時間培養した。

培養後、各ウェルに２％ＮＰ−４０／ＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫを加えてＨｅＬａ細胞からＤＮＡを抽出し、前記ＨＢＶ複製活性評価方法に準じてリアルタイムＰＣＲを行った。

（結果）
リアルタイムＰＣＲで増幅した後、前記ＨＢＶ複製活性評価方法で作成した検量線で、レポーターマイナス鎖ＤＮＡを定量解析し、ＥＣ₅₀を算出した。得られた結果を以下の表２〜表５に示す。

前記ＨＢＶ複製活性測定方法により、サンプルとしての実施例１〜４０において得られた化合物、およびＨＢＶ１１０６、化合物ＣＢＴ−１８８、化合物ＣＢＴ−０３９、化合物ＣＢＴ−０８３について、得られたＥＣ₅₀の結果を以下の表に示す。以下の公知化合物については、下記ＣＡＳ登録番号の下の公知文献に従い、製造した。

表２に示すように、式（ＸＩ）の化合物は、ＨＢＶ複製阻害活性を有する。

表３に示すように、式（ＸＩＩ）の化合物は、ＨＢＶ複製阻害活性を有する。

表４に示すように、式（ＸＩＩＩ）の化合物は、ＨＢＶ複製阻害活性を有する。

表５に示すように、式（ＸＩＶ）の化合物は、ＨＢＶ複製阻害活性を有する。

＜ＨＢｃ発現モデルマウスを用いた化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８によるＰＥＴ撮像＞
実施例４１で製造した化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の体内動態、排泄挙動、ＨＢｃ発現肝組織に対する集積性とイメージングによる描出能について検討するため、ＨＢｃ発現モデルマウスを用いたＰＥＴイメージング試験を実施した。全ての動物実験は国立研究開発法人理化学研究所の動物実験に関するガイドラインに則り、研究計画について同研究所倫理委員会の承認を得て、法令に遵守し実施した。

・ＨＢｃ発現モデルマウスの作成
ＨＢｃ発現モデルマウスはＢＡＬＢ／ｃマウスに対しＨＢｃタンパク質のみをコードする発現ベクターｐＣＩ−ＨＢｃをハイドロダイナミックインジェクション法による遺伝子導入を行い作成した。使用したｐＣＩ−ＨＢｃの塩基配列については配列番号１０に示す。［ＹＫ１］ｐＣＩ−ＨＢｃは６週齢雄のＢＡＬＢ／ｃマウスに対し体重の１０％相当のＰＢＳ溶液を使用した。これは例えば体重２０ｇの場合２ｍｌのｐＣＩ−ＨＢｃ／ＰＢＳ溶液を投与する。投与の際、マウスは体温維持のためホットパッド上でイソフルラン麻酔下におき、テルモ２６Ｇ針及び２．５ｍｌディスポーザブルシリンジを用いて尾静脈より上記の溶液を５秒間かけてほぼ等速で投与しハイドロダイナミックインジェクションを行った。投与後のマウスは速やかにケージに戻し、回復させた。ｐＣＩ−ＨＢｃは投与溶液量＋１００μｌ（デッドボリューム分）のＰＢＳ溶液に溶解し、ミキサーで混合後、全量をシリンジに取り時間を置かず投与に使用した。マウスは投与後約２４時間で解剖に供し、肝組織を採取した。肝組織は一部は凍結組織切片作成に使用し、また一部は組織ライセート溶液作成に使用した。ＨＢｃ発現は凍結切片の免疫組織化学染色と血漿、肝ライセート溶液を使用したＥＬＩＳＡ分析により評価した。

免疫組織化学染色はＭ．Ｏ．ＭＩｍｍｕｎｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎｋｉｔ（ＶＥＣＴＯＲ）を使用し、１次抗体にＡｎｔｉ−ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢＶｉｒｕｓＣｏｒｅＡｎｔｉｇｅｎ抗体（Ａｂｃａｍ，ａｂ８６３８）、二次抗体にＭ．Ｏ．ＭＢｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄａｎｔｉ−ｍＩｇＧを使用し、ＶｅｃｔａｓｔａｉｎＡＢＣ−ＡＰ（ＶＥＣＴＯＲ）を反応後ＡＰ基質により発色し、ヘマトキシリンで核染色した。肝組織切片の染色像を図４に示す。ｐＣＩ−ＨＢｃ投与により切片全体に薄く染色されるＨＢｃタンパク質の発現が確認された。さらに斑点状の濃染色部分が見られ、これはＨＢｃタンパク質の多量体化によるものと思われる。

ＥＬＩＳＡ分析には市販のＨＢｃＥＬＩＳＡｋｉｔ（ＱｕｉｃｋＴｉｔｅｒ（登録商標）ＨＢＶＣｏｒｅＡｎｔｉｇｅｎＥＬＩＳＡＫｉｔ，ＣＥＬＬＢＩＯＬＡＢＳ，ＩＮＣ）を使用した。投与するｐＣＩ−ＨＢｃ量によるＨＢｃ発現量の変化を比較するため、１０、２０、４０、８０μｇのｐＣＩ−ＨＢｃ投与量で肝ライセート中ＨＢｃ濃度の比較を行った。またハイドロダイナミック法による肝組織損傷の可能性を確認するため肝ライセート中ＣＲＰ濃度についてもＭｏｕｓｅＨｉｇｈ−ＳｅｎｓｉｔｉｖｅＣＲＰＥＬＩＳＡｋｉｔ（ＫＡＭＩＹＡＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ）を用いて測定を行った。図５に示すようにＥＬＩＳＡにより算出した投与量ごとのＨＢｃ発現濃度の比較により４０μｇのｐＣＩ−ＨＢｃ投与群で最も高いＨＢｃ発現濃度が見られた。ｐＣＩ−ＨＢｃ投与量が過剰になると逆にＨＢｃ発現量が減少した。一方でＣＲＰ濃度にはｐＣＩ−ＨＢｃを投与しないＶｅｈｉｃｌｅ群（ＰＢＳのみ投与）と大きな差はなく、肝組織への損傷はないと思われる。

これらの結果より、ＰＥＴ試験に用いるＨＢｃ発現モデルマウスはＨＢｃ濃度の高かったｐＣＩ−ＨＢｃ４０μｇをハイドロダイナミックインジェクション法により投与し２４時間後のものを使用することとした。

・ＰＥＴイメージング試験
化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８のＰＥＴ撮像は上記ＨＢｃ発現モデルマウスを用いて実施した。さらに化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の集積挙動のＨＢｃ特異性を明らかにするため、対照群としてＰＢＳのみをハイドロダイナミックインジェクションしたＶｅｈｉｃｌｅ群及びＨＢｃ発現マウスに非標識化合物ＣＢＴ−０７８を投与した競合阻害（Ｂｌｏｃｋｉｎｇ）群についてもＰＥＴ撮像を行うこととした。ＨＢｃ発現群４匹、Ｖｅｈｉｃｌｅ群３匹、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ群３匹を使用した。さらに、ネガティブコントロールとして［１１Ｃ］ＣＢＴ−０３９を用いたＨＢｃ発現群３匹及びＶｅｈｉｃｌｅ群３匹の撮像も行った。

ＰＥＴ撮像は動物用ＰＥＴ撮像装置ＭｉｃｒｏＰＥＴＦｏｃｕｓ２２０（ＳＩＥＭＥＮＳ）を使用し、イソフルラン麻酔下にて、直腸検温プローブとホットパッドにより体温を維持しながら実施した。あらかじめ尾静脈に留置したカテーテルを用い、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８または化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９の投与と同時にＰＥＴ撮像を開始し、９０分間のデータ収集を行った。撮像時のマウスの平均体重は１９．０±１．１ｇで各マウスに化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８は約４７ＭＢｑ（≒２６７ｎｇ）、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９は約３９ＭＢｑ（≒３５６ｎｇ）を投与した。Ｂｌｏｃｋｉｎｇ群においては非標識化合物ＣＢＴ−０７８はジメチルスルホキシドに１００μｇ／μｌの濃度で溶解した後、１μｌを１０％２−ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンと１０％ポリエチレングリコール３００の混合溶液１ｍｌに加え、１００μｌ（＝１０μｇ）を化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８投与１０分前に投与した（化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８のおよそ３７倍当量）。マウスはＰＥＴ撮像終了後速やかに解剖に供し、血液、各臓器を採取し、秤量後、ガンマカウンターによる放射能測定を行った。また撮像により収集したデータは画像再構成後、ＰＥＴ画像解析ソフトウェアＡＳＩＰｒｏＶＭを用いて肝臓の集積を解析した。この際、肝臓の右葉部分の一部のみに関心領域ＶＯＩ（ＶｏｌｕｍｅｏｆＩｎｔｅｒｅｓｔ）を設定することで大血管、胆のう・腸内の放射能分布の変化による影響を可能な限り排除して解析を行った。

得られたＰＥＴ画像の結果を図６に、画像解析による肝臓内の時間放射能曲線を図７に示す。また解剖試料の放射能測定による組織放射能分布の解析結果を図８に示す。ＰＥＴ画像の結果で見て取れるように、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９ともに肝臓・胆汁を介した腸管排泄と尿排泄により体内から排泄されることが明らかとなった。化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の撮像結果においては投与１時間後の時点でＨＢｃ発現群の肝臓に顕著に高い集積が見られ、その集積はＶｅｈｉｃｌｅ群では見られず、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ群ではＶｅｈｉｃｌｅ群よりはやや高いながら、ＨＢｃ発現群と比較し著しく低下した集積を示した。化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９の撮像結果では化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８に比べ肝臓への集積は低く、ＨＢｃ発現群とＶｅｈｉｃｌｅ群に差は見られなかった。化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９投与群では化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８投与群に比べマウスの輪郭が見えないほど全身の集積が少なく、一方で明確な胆のうの描出が見られており、より速くクリアランスされると考えられる。図７に示す肝臓内の時間放射能曲線の結果からも化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８投与群と化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９投与群のクリアランス速度の違いは明らかである。化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の肝集積は投与直後に最大値を迎えた後、投与後９０分の時点まで徐々に減少しており、ＨＢｃとの結合により化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の排泄が阻害され肝臓内の滞留時間が延長しているものと思われる。Ｂｌｏｃｋｉｎｇ群においては投与後早期の集積濃度はＶｅｈｉｃｌｅ群と差がないのに対し、時間が経過するにつれＶｅｈｉｃｌｅ群よりも高い値を示す様になる。これも、ＨＢｃとの反応により排泄速度が低下していることが原因と思われる。化合物ＣＢＴ−０７８が難溶性であり、Ｂｌｏｃｋｉｎｇのための投与量が十分でないためにＶｅｈｉｃｌｅ群との差が生じたと考えられる。化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９の結果ではＨＢｃ発現群とＶｅｈｉｃｌｅ群に差は見られず、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８に比べ迅速に排泄され投与後９０分の時点でほぼ横ばいとなっている。図８に示す組織放射能分布の結果では化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８においては尿、胆のう、腸管を除く全ての部位で肝臓の時間放射能曲線同様の差、即ちＨＢｃ群＞Ｂｌｏｃｋｉｎｇ群＞Ｖｅｈｉｃｌｅ群となる集積差が見られた。一方化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９においてはＨＢｃ群とＶｅｈｉｃｌｅ群の臓器集積に大きな差は見られなかった。

化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の結果からＨＢｃ発現群では肝臓に顕著な集積が見られ、その集積がＶｅｈｉｃｌｅ群、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ群で減少することから特異的集積であることが強く示唆された。しかし一方で、Ｖｅｈｉｃｌｅ群においても若干の肝集積が見られており、ハイドロダイナミックインジェクション法によるＨＢｃ発現操作が肝胆排泄経路に影響を与え、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８の肝組織への滞留時間延長に寄与した可能性が懸念される。しかし、よく似た構造を持つ化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０３９の結果ではＨＢｃ発現群とＶｅｈｉｃｌｅ群の組織放射能分布に大きな差は見られず、ＨＢｃ発現操作による肝胆排泄経路への影響はほとんどないものと示唆された。これにより、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８のＨＢｃ発現肝への集積が特異的な結合によるものであることがより明確となった。以上の結果より、化合物［¹¹Ｃ］ＣＢＴ−０７８がＨＢｃ発現肝に特異的に集積することを明らかにし、ＰＥＴイメージングによるＨＢｃ発現肝臓の描出に成功した。

実際のＢ型肝炎罹患者に対しマイクロドーズ臨床ＰＥＴ試験を実施し、血液分析における血中ＨＢｃ濃度とＰＥＴイメージングにおける肝放射能集積の相関性から診断情報としての有用情報を提供する用途にも適用できる。

Claims

一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含むＢ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブ。
［式中、
Ｒ¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ²は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ³は、
（ここで、Ｒ⁴は、水素またはハロゲンである。）
である。
前記一般式（Ｉ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。］
一般式（Ｉ）で表される化合物が、以下の一般式（ＸＩ）で表される化合物、一般式（ＸＩＩ）で表される化合物、一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物または一般式（ＸＩＶ）で表される化合物である請求項１に記載のＢ型肝炎抗原タンパク質を標的としたイメージング用ＰＥＴプローブ。
［式（ＸＩ）中、
Ｒ⁴は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。
前記一般式（ＸＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。］
［式（ＸＩＩ）中、
Ｒ⁵は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。
前記一般式（ＸＩＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。］
［式（ＸＩＩＩ）中、
Ｒ⁶は、フェニル基、または１〜３の炭素数１〜６のアルキルで置換されたフェニル基であり
Ｒ⁷は、フェニル基、または１〜３のハロゲンで置換されたフェニル基であり、
Ｒ⁸は、
である。
前記一般式（ＸＩＩＩ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。］
［式（ＸＩＶ）中、
Ｒ⁹は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。
¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。
前記一般式（ＸＩＶ）で表される化合物は、¹¹Ｃで標識されるか、またはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識されている。］
一般式（ＸＸ）で表される化合物またはその塩、もしくは¹¹Ｃで標識されるか、もしくはフッ素原子を含む場合には¹⁸Ｆで標識された化合物。
［式中、
Ｒ¹¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
Ｒ¹²は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基であり、
ただし、Ｒ¹²がハロゲンで置換されたフェニル基の場合、Ｒ¹¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基または、ｏ位もしくはｐ位がハロゲンで置換されたフェニル基であり、
ただし、Ｒ¹²がフェニル基の場合、Ｒ¹¹は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、ハロゲン、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３からなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。］
一般式（ＸＸ）で表される化合物が、一般式（ＸＶ）で表される化合物である請求項３に記載の化合物。
［式中、
Ｒ^4'は、炭素数３〜７のシクロヘキシル基、ナフチル基、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数２〜６のアルケニル、炭素数２〜６のアルキニル、炭素数１〜６のアルキルシリルで置換された炭素数２〜６のアルキニル、フェニル、およびジオキサボラニルからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基または、ｏ位もしくはｐ位がハロゲンで置換されたフェニル基である。］
一般式（ＸＸ）で表される化合物が、一般式（ＸＩＩ）で表される化合物である請求項３に記載の化合物。
［式中、
Ｒ⁵は、フェニル基、または炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、もしくはハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。］
一般式（ＸＸ）で表される化合物が、一般式（ＸＶＩ）で表される化合物である請求項３に記載の化合物。
［式中、
Ｒ⁹は、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルチオ、ハロゲンで置換された炭素数１〜６のアルコキシ、炭素数１〜６のアルキルで置換されたアミノ、シアノ、およびハロゲンからなる群から選択される１〜３で置換されたフェニル基である。］