JP2019108381A - クロストリジウム毒素医薬組成物 - Google Patents

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Abstract

【課題】クロストリジウム毒素（例えば、ボツリヌス毒素）が非タンパク質賦形剤によって安定化されているクロストリジウム毒素医薬組成物を提供する。【解決手段】クロストリジウム毒素活性成分および少なくとも２つの賦形剤を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物。【選択図】なし

Description

本願は、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１１９（ｅ）に従って２００８年１２月１０日に出願された米国仮特許出願番号第６１／１２１,３４５号の優先権を主張し、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１２０に従って２００８年１２月１０日に出願された米国特許出願番号第１２／３３１,８１６号の優先権を主張する国際特許出願である（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）。
医薬組成物は、少なくとも１つの活性成分および少なくとも１つの不活性成分（これは、賦形剤と称され、活性成分に対する希釈剤またはビヒクルとして使用される）を含む。賦形剤は、安定剤、界面活性剤、増量剤、抗凍結剤、抗溶解剤、保存剤および緩衝剤の１つ以上に有用である。医薬組成物は、固体形態、例えば、患者への投与前に生理食塩水または水のような適当な液体で還元することができる凍結乾燥粉末または真空乾燥粉末に処理され得る。別法として、医薬組成物は、水性溶液または水性懸濁液として製剤化され得る。
大部分の医薬組成物は、それらの活性物質として小分子（または化学物質）を含む。最近、バイオテクノロジー産業の出現に伴い、タンパク質活性成分を含む医薬組成物が開発されてきており、現在も開発されている。残念なことに、タンパク質活性成分は、安定化（すなわち、生物学的活性の損失を最少にする状態での維持）が非常に困難であり、それにより、製剤化、還元（必要な場合）および使用前の医薬組成物の貯蔵の間にタンパク質の損失および／またはタンパク質活性の損失が生じる。安定性の問題は、タンパク質活性成分の表面吸着、物理的不安定性、例えば、変性もしくは凝集、または化学的不安定性、例えば、架橋、脱アミド、異性化、酸化、酸性もしくは塩基性種の形成、メイラード反応および断片化に起因して生じ得る。このような不安定性を防止するため、医薬組成物中に存在するタンパク質活性成分を安定化するためにアルブミンおよびゼラチンのような様々なタンパク質系賦形剤が使用されてきた。
残念なことに、それらの既知の安定化効果にもかかわらず、医薬組成物におけるアルブミンまたはゼラチンのようなタンパク質賦形剤の使用には重大な欠点が存在する。例えば、アルブミンおよびゼラチンは、高価であり、入手がますます困難になってきている。さらにまた、アルブミンおよびゼラチンのような血液製剤または動物由来製剤は、患者に投与した場合に、血液由来病原体または感染病原体を受ける潜在的なリスクを患者に負わせる可能性がある。かくして、医薬組成物における動物由来タンパク質賦形剤の存在によって医薬組成物への感染因子の不注意な取り込みがもたらされる可能性があることが知られている。例えば、ヒト血清アルブミンの使用によって医薬組成物がプリオンに感染する可能性があることが報告されている。かくして、医薬組成物中に存在するタンパク質活性成分を安定化するために使用され得る好適な非タンパク質賦形剤、例えば、安定剤、抗凍結剤および抗溶解剤を見出すことが望ましい。
クロストリジウム毒素の特有の特徴は、また、クロストリジウム毒素活性成分を含む医薬組成物に適している非タンパク質賦形剤の選択を制限し妨げる。例えば、クロストリジウム毒素は、平均分子量が約１５０ｋＤａの大きなタンパク質であり、非毒素関連タンパク質と複合体を形成してサイズを約３００〜９００ｋＤａに増大させる。このサイズのクロストリジウム毒素複合体は、小さな複合タンパク質よりも非常に脆弱で不安定になり、それにより、クロストリジウム毒素安定性が維持されるべきである場合に製剤化および取扱の困難さの度合いを増す。したがって、非タンパク質賦形剤、例えば、安定剤、抗凍結剤および抗溶解剤の使用は、毒素を変性、断片化もしくは不活性化させないかまたは毒素複合体中に存在する非毒素関連タンパク質の分解を引き起こさない方法でクロストリジウム毒素活性成分と相互作用できなければならない。
クロストリジウム毒素活性成分に関連する別の問題は、製剤化プロセスの全ての段階に必要とされる優れた安全性、精密度および正確度である。かくして、非タンパク質賦形剤は、それ自体、毒性であってはならず、または、クロストリジウム毒素活性成分を含む医薬組成物を製剤化するために現在適当な非常に厳しい要件を悪化させないように取り扱うのが困難であってはならない。
クロストリジウム毒素活性成分に関連する別の問題は、医薬組成物において使用されるクロストリジウム毒素の量が信じられないほど少ないことである。一般に酵素と同様に、クロストリジウム毒素の生物学的活性は、少なくともある程度は、それらの三次構造に依存している。かくして、クロストリジウム毒素は、熱、様々な化学物質、表面の延伸および表面の乾燥によって解毒される。また、公知の培養法、発酵法および精製法によって得られるクロストリジウム毒素複合体の、医薬組成物中で使用される非常に低い濃度への希釈により、該毒素の急激な不活性化が生じる。医薬組成物中で使用されるクロストリジウム毒素活性成分の量が非常に少ないために、この活性成分は、例えば実験用ガラス製品の表面、容器、医薬組成物を還元するバイアル、および医薬組成物の注射に使用される注射器の内面に、非常に吸着し易くなる。このような表面へのクロストリジウム毒素活性成分の吸着は、活性成分の喪失および残ったクロストリジウム毒素活性成分の変性（ともに、医薬組成物中に存在する該活性成分の全活性を低下させる）を引き起こす可能性がある。したがって、非タンパク質賦形剤、例えば、安定剤、抗凍結剤および抗溶解剤の使用は、クロストリジウム毒素活性成分の表面への吸着を防止するために表面ブロッカーとして作用できなければならない。これまで、この目的が達成できた唯一の安定剤は、動物由来タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンおよびゼラチンであった。
クロストリジウム毒素活性成分に関連する別の問題は、複合体形成に関連するｐＨ感受性である。例えば、９００ｋＤａのＢｏＮＴ／Ａ複合体は、ｐＨ３.５〜６.８で希水溶液に溶解することが知られている。しかしながら、約７以上のｐＨで、非毒素関連タンパク質は、１５０ｋＤａの神経毒から分離され、特にｐＨがｐＨ８.０以上に上昇した場合には毒素の喪失をもたらす。非特許文献１を参照。非毒素関連タンパク質は毒性を左右する二次構造および三次構造を保存するかまたはその安定化に役立つと考えられるので、これらのタンパク質の分離は、より不安定なクロストリジウム毒素活性成分を生じる。かくして、クロストリジウム毒素活性成分を含む医薬組成物の製剤化に有用な非タンパク質賦形剤は、クロストリジウム毒素活性成分の活性の維持に必要なｐＨレベルの範囲内で操作できなければならない。
上記したクロストリジウム毒素の特有の性質および要件を考慮すると、クロストリジウム毒素活性成分を含む医薬組成物の製剤化に有用な好適な非タンパク質賦形剤を見出すことは困難であった。本発明の前に、唯一の動物由来タンパク質賦形剤、例えば、ヒト血清アルブミンおよびゼラチンは、安定剤として成功裏に使用された。かくして、アルブミンは、それ自体で、または、リン酸ナトリウムもしくはクエン酸ナトリウムのような１つ以上のさらなる物質と一緒になって、凍結乾燥後にボツリヌス毒素の毒性の高い回復を可能にすることが知られている。残念ながら、既に記載したように、貯蔵した血液製剤としてのヒト血清アルブミンは、少なくとも潜在的に、医薬組成物中に存在する場合に感染または疾患原因因子を担持している可能性がある。実際に、ヒト血清アルブミンまたはゼラチンのような動物製剤またはタンパク質は、患者への注射後に有害反応を引き起こす可能性のあるパイロジェンまたは他の物質を潜在的に含有する可能性がある。
Edward J. Schantz et al., pp. 44-45, Preparation and characterization of botulinum toxin type A for human treatment, in Jankovic, J., et al., THERAPY WITH BOTULINUM TOXIN (Marcel Dekker, Inc., 1994)
したがって、クロストリジウム毒素（例えば、ボツリヌス毒素）が非タンパク質賦形剤によって安定化されているクロストリジウム毒素医薬組成物が必要とされている。本発明は、医薬組成物中に存在するクロストリジウム毒素を安定化するように機能する１つ以上の非タンパク質賦形剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物に関する。
かくして、本発明の一の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、動物タンパク質不含賦形剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含む。別の態様においては、クロストリジウム毒素医薬組成物は、少なくとも２つの動物タンパク質不含賦形剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含む。さらに別の態様においては、クロストリジウム毒素医薬組成物は、少なくとも３つの動物タンパク質不含賦形剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含む。クロストリジウム毒素活性成分は、約１５０ｋＤａのクロストリジウム毒素および総称して非毒素関連タンパク質（ＮＡＰ）と称される他のタンパク質を含むクロストリジウム毒素複合体、約１５０ｋＤａのクロストリジウム毒素単独、または修飾クロストリジウム毒素、例えば再標的クロストリジウム毒素であり得る。
かくして、本発明の一の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、非タンパク質系賦形剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含む。別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、少なくとも２つの非タンパク質系賦形剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含む。さらに別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、少なくとも３つの非タンパク質系賦形剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含む。クロストリジウム毒素活性成分は、約１５０ｋＤａのクロストリジウム毒素および総称して非毒素関連タンパク質（ＮＡＰ）と称される他のタンパク質を含むクロストリジウム毒素複合体、約１５０ｋＤａのクロストリジウム毒素単独、または修飾クロストリジウム毒素、例えば再標的クロストリジウム毒素であり得る。
本発明の別の態様において、ボツリヌス毒素医薬組成物は、動物タンパク質不含賦形剤およびボツリヌス毒素活性成分を含む。別の態様において、ボツリヌス毒素医薬組成物は、少なくとも２つの動物タンパク質不含賦形剤およびボツリヌス毒素活性成分を含む。さらに別の態様において、ボツリヌス毒素医薬組成物は、少なくとも３つの動物タンパク質不含賦形剤およびボツリヌス毒素活性成分を含む。ボツリヌス毒素活性成分は、約１５０ｋＤａのボツリヌス毒素およびＮＡＰを含むボツリヌス毒素複合体、１５０ｋＤａのボツリヌス毒素単独、または修飾ボツリヌス毒素、または標的小胞開口放出調節タンパク質（ＴＶＥＭＰ）、例えば、再標的クロストリジウム毒素であり得る。
本発明の別の態様において、ボツリヌス毒素医薬組成物は、非タンパク質系賦形剤およびボツリヌス毒素活性成分を含む。別の態様において、ボツリヌス毒素医薬組成物は、少なくとも２つの非タンパク質系賦形剤およびボツリヌス毒素活性成分を含む。さらに別の態様において、ボツリヌス毒素医薬組成物は、少なくとも３つの非タンパク質系賦形剤およびボツリヌス毒素活性成分を含む。ボツリヌス毒素活性成分は、約１５０ｋＤａのボツリヌス毒素およびＮＡＰを含むボツリヌス毒素複合体、１５０ｋＤａのボツリヌス毒素単独、または修飾ボツリヌス毒素、例えば、再標的ボツリヌス毒素であり得る。
クロストリジウム・ボツリナム（Clostridium botulinum）、クロストリジウム・テタニ（Clostridium tetani）、クロストリジウム・バラティイ（Clostridium baratii）およびクロストリジウム・ブチリカム（Clostridium butyricum）によって生産されるクロストリジウム毒素は、ヒトおよび他の動物の治療的処置および美容的処置に最も広範囲に使用されている。クロストリジウム・ボツリナムは、ヒトにおけるボツリヌス中毒発生の研究によって同定されたもの（ＢｏＮＴ／Ａ、／Ｂ、／Ｅおよび／Ｆ）、または動物におけるボツリヌス中毒発生の研究によって同定されたもの（ＢｏＮＴ／Ｃ1および／Ｄ）、または土壌から単離されたもの（ＢｏＮＴ／Ｇ）である７つの抗原的に異なるタイプのボツリヌス毒素（ＢｏＮＴ）を生産する。これらのＢｏＮＴは、互いに約３５％アミノ酸同一性を有し、同一の機能性ドメイン構成および全体構造を共有する。当業者には、クロストリジウム毒素の各タイプには、それらのアミノ酸配列またはこれらのタンパク質をコードする核酸が多少異なるサブタイプがあり得ることが理解される。例えば、現在、５つのＢｏＮＴ／Ａサブタイプ、ＢｏＮＴ／Ａ１、ＢｏＮＴ／Ａ２、ＢｏＮＴ／Ａ３、ＢｏＮＴ／Ａ４およびＢｏＮＴ／Ａ５があり、特定のサブタイプは、別のＢｏＮＴ／Ａサブタイプと比較した場合に約８９％アミノ酸同一性を示す。７つのＢｏＮＴ血清型は全て類似の構造および薬理学的特性を有するが、各々、異なる細菌学的特徴を示す。対照的に、破傷風毒素（ＴｅＮＴ）は、クロストリジウム・テタニの均一グループによって生産される。２つの他の種類クロストリジウム、クロストリジウム・バラティイおよびクロストリジウム・ブチリカムもまた、それぞれ、それぞれＢｏＮＴ／ＦおよびＢｏＮＴ／Ｅと類似している毒素ＢａＮＴおよびＢｕＮＴを生産する。
クロストリジウム毒素は、クロストリジウム細菌によって、非毒素タンパク質（ＮＡＰ）とともに約１５０ｋＤａのボツリヌス毒素を含む複合体として放出される。同定されるＮＡＰは、赤血球凝集活性を有するタンパク質、例えば、約１７ｋＤａの赤血球凝集素（ＨＡ−１７）、約３３ｋＤａの赤血球凝集素（ＨＡ−３３）および約７０ｋＤａの赤血球凝集素（ＨＡ−７０）、ならびに約１３０ｋＤａのタンパク質である非毒性非赤血球凝集素（ＮＴＮＨ）を含む（Eric A. Johnson and Marite Bradshaw, Clostridial botulinum and its Neurotoxins: A Metabolic and Cellular Perspective, 39 Toxicon 1703-1722 (2001)；およびStephanie Raffestin et al., Organization and Regulation of the Neurotoxin Genes in Clostridium botulinum and Clostridium tetani, 10 Anaerobe 93-100 (2004)を参照）。かくして、ボツリヌス毒素タイプＡ複合体は、クロストリジウム細菌によって、９００ｋＤａ、５００ｋＤａおよび３００ｋＤａのものとして生産され得る。ボツリヌス毒素タイプＢおよびＣ1は、明らかに、５００ｋＤａ複合体としてのみ生産される。ボツリヌス毒素タイプＤは、３００ｋＤａ複合体５００ｋＤａ複合体として生産される。最後に、ボツリヌス毒素タイプＥおよびＦは、約３００ｋＤａ複合体としてのみ生産される。複合体の分子量の差は、ＮＡＰの割合が異なることに起因する。毒素複合体は、有害な環境条件からの保護およびプロテアーゼ消化に対する抵抗性をもたらし、該毒素の内部移行および活性化を促進すると思われるので、中毒プロセスにとって重要である。
クロストリジウム毒素は、各々、一本鎖ポリペプチドとして翻訳され、その後、天然プロテアーゼによるジスルフィドループ内でのタンパク質分解性切断によって切断される。この切断は、ジスルフィド架橋を形成している２つのシステイン残基の間で創製される別個の二本鎖ループ領域内で生じる。この翻訳後プロセシングは、単一のジスルフィド結合および二本鎖間の非共有相互作用によって一緒に保持される約５０ｋＤａの軽鎖（ＬＣ）および約１００ｋＤａの重鎖（ＨＣ）を含む二本鎖分子を生じる。一本鎖分子を二本鎖に変換するのに使用される天然プロテアーゼは現在知られていない。いくつかの血清型、例えばＢｏＮＴ／Ａにおいては、天然プロテアーゼは細菌血清型によって内因的に生産され、環境中に毒素が放出される前に細胞内に開裂が生じる。しかしながら、他の血清型、例えばＢｏＮＴ／Ｅにおいては、細菌株は、一本鎖形態の毒素を二本鎖形態に変換することができる内在性プロテアーゼを生産しないと考えられる。これらの状況下で、毒素は、細胞から一本鎖毒素として放出され、その後、環境中に存在する天然プロテアーゼによって二本鎖形態に変換される。
Figure 2019108381
各成熟二本鎖分子は、機能的に異なる３つのドメインを含む：１）典型的には神経伝達物質放出装置の中心成分を標的とする亜鉛依存性エンドペプダーゼ活性を含むメタロプテアーゼ領域を含むＬＣに位置する酵素的ドメイン；２）細胞内小胞から標的細胞の細胞質中へのＬＣの放出を促進するＨＣのアミノ末端ハーフ（ＨN）内に含有される移行ドメイン；および３）標的細胞の表面に位置する受容体複合体と毒素の結合活性および結合特異性を判定するＨＣのカルボキシ末端ハーフ（ＨC）内にある結合ドメイン。ＨCドメインは、機能を示し、ＨCNおよびＨCCサブドメインと命名される、ほぼ同等のサイズの２つの異なる構造特徴を含む。典型的なクロストリジウム毒素に存在する各ドメインおよびサブドメインについてのおおよその境界領域が表１に示されている。
これら３つの機能性ドメインの結合、移行および酵素活性の全てが毒性に必要である。このプロセスの全ての詳細はまだ正確には知られていないが、クロストリジウム毒素がニューロンに侵入して神経伝達物質放出を阻害する全体的な細胞中毒メカニズムは、タイプに関係なく類似している。出願人は、以下の記載によって限定されることを望まないが、中毒メカニズムとしては、少なくとも４つの工程を含むということができる：１）受容体結合、２）複合体内部移行、３）軽鎖移行、および４）酵素的標的修飾。このプロセスは、クロストリジウム毒素のＨcドメインが標的細胞の細胞膜表面にある毒素特異的受容体複合体と結合した場合に開始される。受容体複合体の結合特異性は、ガングリオシドと各々が明らかにクロストリジウム毒素受容体複合体を含むと考えられるタンパク質受容体との特異的な組み合わせによってある程度達成されると考えられる。一旦結合すると、毒素／タンパク質複合体はエンドサイトーシスによって内部移行され、内部移行した小胞は、特定の細胞内経路に分類される。移行工程は、小胞コンパートメントの酸性化によって引き金が引かれると考えられる。このプロセスは、毒素の疎水性を増強して二本鎖形態の形成を促進する２つの重要なｐＨ依存性構造的移行を開始すると考えられる。一旦活性化されると、毒素の軽鎖エンドペプチダーゼが細胞内小胞から細胞質ゾルへ放出され、そこではそれが神経伝達物質放出装置の公知のコア成分３つのうち１つを特異的に標的とする。これらのコアタンパク質、小胞関連膜タンパク質（ＶＡＭＰ）／シナプトブレビン、２５ｋＤａのシナプトソーム関連タンパク質（ＳＮＡＰ−２５）およびシンタキシンは、神経終末でのシナプス小胞ドッキングおよび融合に必要であり、可溶性Ｎ−エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体（ＳＮＡＲＥ）ファミリーのメンバーを構成する。ＢｏＮＴ／ＡおよびＢｏＮＴ／Ｅは、ＳＮＡＰ−２５をカルボキシ末端領域で開裂し、それぞれ、９または２６アミノ酸セグメントを放出し、ＢｏＮＴ／Ｃ１は、ＳＮＡＰ−２５をカルボキシ末端付近で開裂する。ＢｕＮＴは、ＳＮＡＰ−２５のカルボキシ末端付近の保存部分で開裂する。ボツリヌス血清型ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／ＦおよびＢｏＮＴ／Ｇ、ＴｅＮＴ、ならびにＢａＮＴは、ＶＡＭＰの保存中心部に対して作用し、ＶＡＭＰのアミノ末端部を細胞質ゾルへ放出する。ＢｏＮＴ／Ｃ1は、シンタキシンを細胞質ゾル膜表面付近の単一部位で開裂する。シナプスＳＮＡＲＥの選択的タンパク質分解は、インビボでクロストリジウム毒素によって引き起こされる神経伝達物質放出のブロックの原因である。クロストリジウム毒素のＳＮＡＲＥタンパク質標的は、様々な非神経タイプにおける開口放出に共通している；これらの細胞において、ニューロンにおけると同様に、軽鎖ペプチダーゼ活性は、開口放出を阻害する（例えば、Yann Humeau et al., How Botulinum and Tetanus Neurotoxins Block Neurotransmitter Release, 82(5) Biochimie. 427-446 (2000)；Kathryn Turton et al., Botulinum and Tetanus Neurotoxins: Structure, Function and Therapeutic Utility, 27(11) Trends Biochem. Sci. 552-558. (2002)；Giovanna Lalli et al., The Journey of Tetanus and Botulinum Neurotoxins in Neurons, 11(9) Trends Microbiol. 431-437, (2003)を参照）。
クロストリジウム毒素、例えばＢｏＮＴ／Ａ、ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｃ１、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／Ｅ、ＢｏＮＴ／ＦおよびＢｏＮＴ／Ｇ、ＴｅＮＴ、ＢａＮＴならびにＢｕＮＴの神経伝達物質阻害能は、多種多様の治療用途および美容用途において利用されている（例えば、William J. Lipham, COSMETIC AND CLINICAL APPLICATIONS OF BOTULINUM TOXIN (Slack, Inc., 2004)を参照）。医薬組成物として市販されているクロストリジウム毒素としては、ＢｏＮＴ／Ａ製剤、例えば、ＢＯＴＯＸ（登録商標）（Allergan, Inc.、カリフォルニア州アーバイン）、ＤＹＳＰＯＲＴ（登録商標）／ＲＥＬＯＸＩＮ（登録商標）（Beaufour Ipsen、英国ポートン・ダウン）、ＮＥＵＲＯＮＯＸ（登録商標）（Medy-Tox, Inc.、韓国オチャン−ミョン）、ＢＴＸ−Ａ（Lanzhou Institute Biological Products、中国）およびＸＥＯＭＩＮ（登録商標）（Merz Pharmaceuticals, GmbH.、ドイツ国フランクフルト）；およびＢｏＮＴ／Ｂ製剤、例えば、ＭＹＯＢＬＯＣTM／ＮＥＵＲＯＢＬＯＣTM（Solstice Neurosciences, Inc.、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）が挙げられる。一例として、ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、現在、１カ国以上で以下の適応症に適用されている：アカラシア、成人痙縮、裂肛、背痛、眼瞼痙攣、歯ぎしり、頸部ジストニア、本態性振戦、眉間のしわまたは多動による顔面のしわ、頭痛、片側顔面痙攣、膀胱運動亢進、多汗症、若年性脳性麻痺、多発性硬化症、ミオクローヌス障害、法令線、痙攣性発声障害、斜視およびＶＩＩ神経障害。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、クロストリジウム毒素医薬組成物を提供する。本明細書で使用する場合、用語「クロストリジウム毒素医薬組成物」とは、活性成分がクロストリジウム毒素である製剤をいう。本明細書で使用する場合、用語「製剤」とは、医薬組成物にクロストリジウム毒素活性成分のほかに少なくとも１つのさらなる成分があることを意味する。したがって、医薬組成物は、ヒト患者のような対象体への予防的または治療的投与に適している製剤である。該医薬組成物は、固体製剤、例えば、凍結乾燥または真空乾燥状態、または水性製剤であることができる。医薬組成物の構成成分は、単一の組成物中に含まれてもよく（すなわち、必要な還元用液体を除いて構成成分の全てが医薬組成物の初期配合時に存在している）、または二成分系として含まれてもよく、例えば希釈する生理食塩水のような希釈剤で還元された真空乾燥組成物は、医薬組成物の初期配合において存在しない成分を含有する。二成分系は、長期貯蔵に十分に適していない成分を二成分系の最初の成分と配合させる利点をもたらす。例えば、還元ビヒクルまたは希釈剤は、使用期間の間、例えば、１週間の冷蔵保存の間、細菌増殖に対して十分な保護を与える保存剤を含むことができるが、毒素を分解するかもしれない２年間の冷凍保存の間存在しない。クロストリジウム毒素活性成分と適合しない可能性のある他の成分または長期間にわたる他の成分は、この方法で配合され得る；すなわち、ほぼ使用時に第二のビヒクル（すなわち、還元用液体）中にて添加され得る。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、動物タンパク質不含クロストリジウム毒素医薬組成物を提供する。本明細書で使用する場合、用語「動物タンパク質不含」とは、血液由来製剤、血液貯蔵製剤および他の動物由来製剤または化合物の不在をいう。本明細書で使用する場合、用語「動物」とは、哺乳動物、鳥類、両生類、は虫類、魚類、節足動物、または他の動物種をいう。「動物」は、植物、ならびに酵母および細菌のような微生物を除外する。例えば、動物タンパク質不含医薬組成物は、血清由来アルブミンおよびゼラチンならびに免疫グロブリンのような他の動物由来タンパク質を実質的に含まないかまたは本質的に含まないかまたは全く含まない医薬組成物であり得る。本明細書で使用する場合、用語「全く含まない」（または専門用語「からなる」）とは、使用する装置またはプロセスの検出範囲内で、該物質が検出できないかまたはその存在が確認できないことを意味する。本明細書で使用する場合、用語「本質的に含まない」（または「本質的に〜からなる」）とは、該物質をほんの微量しかを検出できないことを意味する。本明細書で使用する場合、用語「実質的に含まない」とは、医薬組成物の１重量％未満のレベルで存在することを意味する。本明細書で使用する場合、用語「動物由来」とは、動物原料から直接精製された化合物または製品をいう。したがって、微生物から組換え技術により生成された動物タンパク質は、用語「動物由来製品または化合物」から除外される。かくして、動物タンパク質不含クロストリジウム毒素医薬組成物は、本明細書に記載のクロストリジウム神経毒活性成分のいずれかを含むことができる。動物タンパク質不含クロストリジウム毒素医薬組成物の非限定的例は、活性成分としてＢｏＮＴ／Ａ毒素、ならびに賦形剤として適当な糖および界面活性剤を含む医薬組成物である。動物タンパク質不含クロストリジウム毒素医薬組成物の別の非限定的例は、活性成分として９００ｋＤａ ＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体、ならびに賦形剤として好適な糖および界面活性剤を含む医薬組成物である。動物タンパク質不含クロストリジウム毒素医薬組成物のさらに別の非限定的例は、活性成分としてさらなるジロイシンモチーフを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａ毒素、ならびに賦形剤として好適な糖および界面活性剤を含む医薬組成物である。動物タンパク質不含クロストリジウム毒素医薬組成物のさらに別の非限定的例は、活性成分としてオピオイドペプチド標的部分を含む再標的ＢｏＮＴ／Ａ、ならびに賦形剤として好適な糖および界面活性剤を含む医薬組成物である。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、クロストリジウム毒素活性成分を提供する。本明細書で使用する場合、用語「クロストリジウム毒素活性成分」とは、治療上有効な濃度のクロストリジウム毒素活性成分、例えば、クロストリジウム毒素複合体、クロストリジウム毒素、修飾クロストリジウム毒素または再標的クロストリジウム毒素をいう。本明細書で使用する場合、用語「治療上有効な濃度」とは、「治療上有効な量」、「有効な量」「有効な用量」および「治療上有効な用量」と同義語であり、所望の治療効果を達成するのに必要なクロストリジウム毒素活性成分の最少用量をいい、治療される栄養物に関連する症状を軽減するのに十分な容量を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量は、治療される栄養物に関連する症状を、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも１００％軽減する。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な濃度は、治療される栄養物に関連する症状を、例えば最大で１０％、最大で２０％、最大で３０％、最大で４０％、最大で５０％、最大で６０％、最大で７０％、最大で８０％、最大で９０％または最大で１００％軽減する。
クロストリジウム毒素活性成分のいかなる量も、治療上有効な量のクロストリジウム毒素活性成分が回収可能であることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化において添加することができると考えられる。この実施態様の態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、少なくとも０.００１Ｕ／ｋｇ、少なくとも０.０１Ｕ／ｋｇ、少なくとも０.１Ｕ／ｋｇ、少なくとも１.０Ｕ／ｋｇ、少なくとも１０Ｕ／ｋｇ、少なくとも１００Ｕ／ｋｇまたは少なくとも１０００Ｕ／ｋｇである。この実施態様の別の態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、最大で０.００１Ｕ／ｋｇ、最大で０.０１Ｕ／ｋｇ、最大で０.１Ｕ／ｋｇ、最大で１.０Ｕ／ｋｇ、最大で１０Ｕ／ｋｇ、最大で１００Ｕ／ｋｇまたは最大で１０００Ｕ／ｋｇである。この実施態様のさらに別の態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、約０.００１Ｕ／ｋｇ〜約１０００Ｕ／ｋｇ、約０.０１Ｕ／ｋｇ〜約１０００Ｕ／ｋｇ、約０.１Ｕ／ｋｇ〜約１０００Ｕ／ｋｇ、または約１.０Ｕ／ｋｇ〜約１０００Ｕ／ｋｇである。この実施態様のさらに別の態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、約０.００１Ｕ／ｋｇ〜約１００Ｕ／ｋｇ、約０.０１Ｕ／ｋｇ〜約１００Ｕ／ｋｇ、約０.１Ｕ／ｋｇ〜約１００Ｕ／ｋｇ、または約１.０Ｕ／ｋｇ〜約１００Ｕ／ｋｇである。本明細書で使用する場合、用語「単位」または「Ｕ」とは、クロストリジウム毒素、クロストリジウム毒素複合体または修飾クロストリジウム毒素を注射したマウスの５０％を殺したクロストリジウム毒素、クロストリジウム毒素複合体または修飾クロストリジウム毒素の量として定義されるＬＤ50量をいう。本明細書で使用する場合、記載した項目、数、パーセンテージまたは期間の値を定量化する場合の用語「約」とは、記載した項目、パーセンテージ、パラメーターまたは期間の値の±１０％の範囲をいう。
この実施態様の別の態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、少なくとも１.０ｐｇ、少なくとも１０ｐｇ、少なくとも１００ｐｇ、少なくとも１.０ｎｇ、少なくとも１０ｎｇ、少なくとも１００ｎｇ、少なくとも１.０μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも１００μｇまたは少なくとも１.０ｍｇである。この実施態様の態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、最大で１.０ｐｇ、最大で１０ｐｇ、最大で１００ｐｇ、最大で１.０ｎｇ、最大で１０ｎｇ、最大で１００ｎｇ、最大で１.０μｇ、最大で１０μｇ、最大で１００μｇまたは最大で１.０ｍｇである。この実施態様のさらに別の態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、約１.０ｐｇ〜約１０μｇ、約１０ｐｇ〜約１０μｇ、約１００ｐｇ〜約１０μｇ、約１.０ｎｇ〜約１０μｇ、約１０ｎｇ〜約１０μｇ、または約１００ｎｇ〜約１０μｇである。この実施態様のさらに別の態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、約１.０ｐｇ〜約１.０μｇ、約１０ｐｇ〜約１.０μｇ、約１００ｐｇ〜約１.０μｇ、約１.０ｎｇ〜約１.０μｇ、約１０ｎｇ〜約１.０μｇ、または約１００ｎｇ〜約１.０μｇである。この実施態様のさらなる態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、約１.０ｐｇ〜約５.０μｇ、約１０ｐｇ〜約５.０μｇ、約１００ｐｇ〜約５.０μｇ、約１.０ｎｇ〜約５.０μｇ、約１０ｎｇ〜約５.０μｇ、または約１００ｎｇ〜約５.０μｇである。この実施態様のさらなる態様において、製剤に添加されるクロストリジウム毒素活性成分の量は、約１.０ｐｇ〜約１０μｇ、約１０ｐｇ〜約１０μｇ、約１００ｐｇ〜約１０μｇ、約１.０ｎｇ〜約１０μｇ、約１０ｎｇ〜約１０μｇ、または約１００ｎｇ〜約１０μｇである。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、クロストリジウム毒素活性成分としてのクロストリジウム毒素を提供する。本明細書で使用する場合、用語「クロストリジウム毒素」とは、クロストリジウム毒素が細胞を中毒させ、クロストリジウム毒素の低親和性または高親和性クロストリジウム毒素受容体への結合、毒素／受容体複合体の内部移行、クロストリジウム毒素軽鎖の細胞質への移行およびクロストリジウム毒素基質の酵素的修飾を含む全体的な細胞メカニズムを遂行することができるクロストリジウム毒素株によって生産されるいずれかの神経毒をいう。クロストリジウム毒素の非限定的例としては、ＢｏＮＴ／Ａ、ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｃ1、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／Ｅ、ＢｏＮＴ／Ｆ、ＢｏＮＴ／Ｇ、破傷風毒素（ＴｅＮＴ）、バラティイ毒素（ＢａＮＴ）、およびブチリカム毒素（ＢｕＮＴ）のようなボツリヌス毒素が挙げられる。神経毒ではないＢｏＮＴ／Ｃ2細胞毒およびＢｏＮＴ／Ｃ3細胞毒は、用語「クロストリジウム毒素」から除外される。クロストリジウム毒素は、例えば、List Biological Laboratories, Inc.（カリフォルニア州キャンベル）、the Centre for Applied Microbiology and Research（英国ポートン・ダウン）、和光純薬工業株式会社（日本国大阪）およびSigma Chemicals（ミズーリ州セントルイス）から入手することができる。さらに、クロストリジウム毒素は、当業者に知られている標準的な精製または組換え生物学的技術を使用して生成され得る。例えば、Schantz法を使用すると、ＮＡＰを分取して、精製毒素、例えば、１〜２×１０8 ＬＤ50Ｕ／ｍｇ以上の比効力を有する分子量約１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ、１〜２×１０8 ＬＤ50Ｕ／ｍｇ以上の比効力を有する分子量約１５６ｋＤの精製ＢｏＮＴ／Ｂ、および１〜２×１０7 ＬＤ50Ｕ／ｍｇ以上の比効力を有する分子量約１５５ｋＤの精製ＢｏＮＴ／Ｆを得ることができる。Edward J. Schantz & Eric A. Johnson, Properties and use of Botulinum Toxin and Other Microbial Neurotoxins in Medicine, Microbiol Rev. 56: 80-99 (1992)を参照。別の例として、Lance E. Steward et al., Optimizing Expression of Active Botulinum Toxin Type A, 米国特許出願公開第2008/0057575号；およびLance E. Steward et al., Optimizing Expression of Active Botulinum Toxin Type E, 米国特許出願公開第2008/0138893号（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載されているように組換え技術により組換えクロストリジウム毒素を生成することができる。
クロストリジウム毒素としては、天然クロストリジウム毒素変異体、例えば、クロストリジウム毒素アイソフォームおよびクロストリジウム毒素サブタイプ；非天然クロストリジウム毒素変異体、例えば、保存的クロストリジウム毒素変異体、非保存的クロストリジウム毒素変異体、クロストリジウム毒素キメラ変異体およびそれらの活性クロストリジウム毒素フラグメント、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書で使用する場合、用語「クロストリジウム毒素変異体」は、天然であるか非天然であるかにかかわらず、記載した参照配列（表１を参照）の対応する領域からの少なくとも１つのアミノ酸変化を有するクロストリジウム毒素をいい、その参照配列の対応する領域との同一性パーセントで記載され得る。非限定的な例として、配列番号１のアミノ酸１−１２９６を含むＢｏＮＴ／Ａ変異体は、配列番号１のアミノ酸領域１−１２９６と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号２のアミノ酸１−１２９１を含むＢｏＮＴ／Ｂ変異体は、配列番号２のアミノ酸領域１−１２９１と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号３のアミノ酸１−１２９１を含むＢｏＮＴ／Ｃ1変異体は、配列番号３のアミノ酸領域１−１２９１と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号４のアミノ酸１−１２７６を含むＢｏＮＴ／Ｄ変異体は、配列番号４のアミノ酸領域１−１２７６と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号５のアミノ酸１−１２５２を含むＢｏＮＴ／Ｅ変異体は、配列番号５のアミノ酸領域１−１２５２と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号６のアミノ酸１−１２７４を含むＢｏＮＴ／Ｆ変異体は、配列番号６のアミノ酸領域１−１２７４と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号７のアミノ酸１−１２９７を含むＢｏＮＴ／Ｇ変異体は、配列番号７のアミノ酸領域１−１２９７と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号８のアミノ酸１−１３１５を含むＴｅＮＴ変異体は、配列番号８のアミノ酸領域１−１３１５と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号９のアミノ酸１−１２６８を含むＢａＮＴ変異体は、配列番号９のアミノ酸領域１−１２６８と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する；配列番号１０のアミノ酸１−１２５１を含むＢｕＮＴ変異体は、配列番号１０のアミノ酸領域１−１２５１と比べた場合に少なくとも１つのアミノ酸差異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を有する。
同一性のパーセントを決定するために、グローバル法、ローカル法およびバイブリッド法、例えば、セグメントアプローチ法を包含するがこれらに限定されない様々なシーケンスアラインメント方法のいずれかを使用することができる。同一性のパーセントを決定するためのプロトコールは、当業者の範囲内であり、かつ、本明細書における教示によるルーチン的な手順である。
グローバル法は、分子の始まりから終わりまでの配列を整列させ、個々の残基対のスコアを加算することにより、また、ギャップペナルティを課すことにより、最良のアラインメントを決定する。非限定的な方法として、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗ（例えば、Julie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position-Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)を参照）；および反復改良法（例えば、Osamu Gotoh ,Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. Mol. Biol. 823-838 (1996)を参照）が挙げられる。
ローカル法は、入力した配列の全てによって共有されている１つ以上の保存モチーフを同定することによって配列を整列させる。非限定的な方法として、例えば、Ｍａｔｃｈ−ｂｏｘ（例えば、Eric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501-509 (1992)を参照）；Ｇｉｂｂｓサンプリング（例えば、C. E. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals: A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131) Science 208-214 (1993)を参照）；Ａｌｉｇｎ−Ｍ（例えば、Ivo Van Walle et al., Align-M - A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics,:1428-1435 (2004)を参照）が挙げられる。
ハイブリッド法は、グローバルアラインメント法とローカルアラインメント法の機能的特徴を合わせもつ。非限定的な方法として、include、例えば、セグメント間の比較（例えば、Burkhard Morgenstern et al., Multiple DNA and Protein Sequence Alignment Based 0n Segment-To-Segment Comparison, 93(22) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 12098-12103 (1996)を参照）；Ｔ−Ｃｏｆｆｅｅ（例えば、Cedric Notredame et al., T-Coffee: A Novel Algorithm for Multiple Sequence Alignment, 302(1) J. Mol. Biol. 205-217 (2000)を参照）；ＭＵＳＣＬＥ（例えば、Robert C. Edgar, MUSCLE: Multiple Sequence Alignment With High Score Accuracy and High Throughput, 32(5) Nucleic Acids Res. 1792-1797 (2004)を参照）；およびＤＩＡＬＩＧＮ−Ｔ（例えば、Amarendran R Subramanian et al., DIALIGN-T: An Improved Algorithm for Segment-Based Multiple Sequence Alignment, 6(1) BMC Bioinformatics 66 (2005)を参照）が挙げられる。
かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分としてクロストリジウム毒素を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ＢｏＮＴ／Ａ、ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｃ1、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／Ｅ、ＢｏＮＴ／Ｆ、ＢｏＮＴ／Ｇ、ＴｅＮＴ、ＢａＮＴ、またはＢｕＮＴを含む。別の実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分としてクロストリジウム毒素変異体を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、天然クロストリジウム毒素変異体または非天然クロストリジウム毒素変異体を含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ＢｏＮＴ／Ａ変異体、ＢｏＮＴ／Ｂ変異体、ＢｏＮＴ／Ｃ1変異体、ＢｏＮＴ／Ｄ変異体、ＢｏＮＴ／Ｅ変異体、ＢｏＮＴ／Ｆ変異体、ＢｏＮＴ／Ｇ変異体、ＴｅＮＴ変異体、ＢａＮＴ変異体、またはＢｕＮＴ変異体を含む（ここで、該変異体は、天然変異体または非天然変異体のいずれかである）。
この実施態様の態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置の疎水性アミノ酸を別の疎水性アミノ酸で置換することができる。疎水性アミノ酸の例としては、例えば、Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、ＶおよびＷが挙げられる。この実施態様の別の態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置の脂肪族アミノ酸を別の脂肪族アミノ酸で置換することができる。芳香族アミノ酸の例としては、例えば、Ａ、Ｉ、Ｌ、ＰおよびＶが挙げられる。この実施態様のさらに別の態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置の脂肪族アミノ酸を別の芳香族アミノ酸で置換することができる。芳香族アミノ酸の例としては、例えば、Ｆ、Ｈ、ＷおよびＹが挙げられる。この実施態様のさらに別の態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置のスタッキングアミノ酸を別のスタッキングアミノ酸で置換することができる。スタッキングアミノ酸の例としては、例えば、Ｆ、Ｈ、ＷおよびＹが挙げられる。この実施態様のさらなる態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置の極性アミノ酸を別の極性アミノ酸で置換することができる。極性アミノ酸の例としては、例えば、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｎ、ＱおよびＲが挙げられる。この実施態様のさらなる態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置の低極性または中性アミノ酸を別の低極性または中性アミノ酸で置換することができる。低極性または中性アミノ酸の例としては、例えば、Ａ、Ｈ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、ＴおよびＹが挙げられる。この実施態様のさらに別の態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置の正電荷アミノ酸を別の正電荷アミノ酸で置換することができる。正電荷アミノ酸の例としては、例えば、Ｋ、ＲおよびＨが挙げられる。この実施態様のさらに別の態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置の負電荷アミノ酸を別の負電荷アミノ酸で置換することができる。負電荷アミノ酸の例としては、例えば、ＤおよびＥが挙げられる。この実施態様の別の態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置の小アミノ酸を別の小アミノ酸で置換することができる。小アミノ酸の例としては、例えば、Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、ＳおよびＴが挙げられる。この実施態様のさらに別の態様において、ポリペプチド鎖における１つの特定の位置のＣ−β分枝アミノ酸を別のＣ−β分枝アミノ酸で置換することができる。Ｃ−β分枝アミノ酸の例としては、例えば、Ｉ、ＴおよびＶが挙げられる。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、クロストリジウム毒素活性成分としてクロストリジウム毒素複合体を提供する。本明細書で使用する場合、用語「クロストリジウム毒素複合体」とは、クロストリジウム毒素および関連ＮＡＰを含む複合体、例えば、ボツリヌス毒素複合体、破傷風毒素複合体、バラティイ毒素複合体およびブチリカム毒素複合体をいう。クロストリジウム毒素複合体の非限定的な例としては、クロストリジウム・ボツリナムによって生産されるもの、例えば、９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｂ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｃ1複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｄ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｄ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｅ複合体、および３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｆ複合体が挙げられる。クロストリジウム毒素複合体は、Schantz (1992)（上掲）；Hui Xiang et al., Animal Product Free System and Process for Purifying a Botulinum Toxin, 米国特許第7,354,740号（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載された方法を使用して精製され得る。クロストリジウム毒素複合体は、例えば、List Biological Laboratories, Inc.（カリフォルニア州キャンベル）、the Centre for Applied Microbiology and Research（英国ポートン・ダウン）、和光純薬工業株式会社（日本国大阪）およびSigma Chemicals（ミズーリ州セントルイス）から入手され得る。
例えば、高品質結晶性ＢｏＮＴ／Ａ複合体は、Schantz法を使用して、≧３×１０7Ｕ／ｍｇ、０.６０未満のＡ２６０／Ａ２７８、およびゲル電気泳動での特徴的な結合パターンの特徴を有するクロストリジウム・ボツリナムのＨａｌｌ Ａ株から生産され得る。Schantz (1992)（上掲）を参照。一般に、ＢｏＮＴ／Ａ複合体は、適当な培地中にてクロストリジウム・ボツリナム・タイプＡを培養することにより嫌気性発酵から単離および精製され得る。生毒素は、硫酸による沈殿により収穫され、超精密濾過により濃縮され得る。精製は、該酸性沈殿物を塩化カルシウムに溶解することによって行われ得る。次いで、該毒素は、冷エタノールにより沈殿され得る。該沈殿物は、リン酸ナトリウム緩衝液に溶解し、遠心分離させることができる。次いで、乾燥後、３×１０7 ＬＤ50Ｕ／ｍｇ以上の比効力を有する約９００ｋＤの結晶性ＢｏＮＴ／Ａ複合体を得ることができる。
かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分としてクロストリジウム毒素複合体を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ＢｏＮＴ／Ａ複合体、ＢｏＮＴ／Ｂ複合体、ＢｏＮＴ／Ｃ1複合体、ＢｏＮＴ／Ｄ複合体、ＢｏＮＴ／Ｅ複合体、ＢｏＮＴ／Ｆ複合体、ＢｏＮＴ／Ｇ複合体、ＴｅＮＴ複合体、ＢａＮＴ複合体、またはＢｕＮＴ複合体を含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｂ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｃ1複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｄ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｄ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｅ複合体、または３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｆ複合体を含む。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、クロストリジウム毒素活性成分として修飾クロストリジウム毒素を提供する。本明細書で使用する場合、用語「修飾クロストリジウム毒素」とは、非修飾クロストリジウム毒素には存在しない特性または特徴を与えるがクロストリジウム毒素が細胞を中毒させる全体的な細胞性メカニズムを実行することができるある方法（例えば、クロストリジウム毒素の低親和性または高親和性クロストリジウム毒素受容体との結合、該毒素／受容体複合体の内部移行、クロストリジウム毒素軽鎖の細胞質への移行、およびクロストリジウム毒素基質の酵素的修飾を包含する）で修飾されたクロストリジウム毒素をいう。クロストリジウム毒素変異体の非限定的な例は、以下のものに記載されている：Steward, L.E. et al., Post-Translational Modifications and Clostridial Neurotoxins, 米国特許第7,223,577号；Wei-Jen Lin et al., Neurotoxins with Enhanced Target Specificity, 米国特許第7,273,722号；Lance E. Steward et al., Clostridial Neurotoxin Compositions and Modified Clostridial Toxin Neurotoxins, 米国特許出願公開第2004/0220386号；Steward, L.E. et al., Clostridial Toxin Activatable Clostridial Toxins, 米国特許出願公開第2007/0166332号；Lance E. Steward et al., Modified Clostridial Toxins With Enhanced Targeting Capabilities For Endogenous Clostridial Toxin Receptor Systems, 米国特許出願公開第2008/0096248号；Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capability and Enhanced Targeting Activity, 米国特許出願第11/776,043号；Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Clostridial Toxin Target Cells, 米国特許出願第11/776,052号（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）。Steward, L.E. et al., Degradable Clostridial Toxins, 米国特許出願第12/192,905号（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）。
かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分として修飾クロストリジウム毒素を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、修飾ＢｏＮＴ／Ａ、修飾ＢｏＮＴ／Ｂ、修飾ＢｏＮＴ／Ｃ1、修飾ＢｏＮＴ／Ｄ、修飾ＢｏＮＴ／Ｅ、修飾ＢｏＮＴ／Ｆ、修飾ＢｏＮＴ／Ｇ、修飾ＴｅＮＴ、修飾ＢａＮＴまたは修飾ＢｕＮＴを含む。
別の実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメイン、クロストリジウム毒素結合ドメインおよびさらなるジロイシンモチーフを含む。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、クロストリジウム毒素活性成分として再標的クロストリジウム毒素を提供する。本明細書で使用する場合、用語「再標的クロストリジウム毒素」とは、非クロストリジウム毒素標的細胞上に存在する非クロストリジウム毒素受容体に選択的に結合するがクロストリジウム毒素の残存する中毒工程を実行するように修飾（例えば、毒素／受容体複合体の内部移行、クロストリジウム毒素軽鎖の細胞質への移行、およびクロストリジウム毒素基質の酵素的修飾）されたクロストリジウム毒素をいう。再標的クロストリジウム毒素は、クロストリジウム毒素に対して行われた修飾に依存して神経細胞または非神経細胞を中毒させることができる。再標的クロストリジウム毒素は、再標的ボツリヌス毒素、再標的破傷風毒素、再標的バラティイ毒素および再標的ブチリカム毒素であり得る。再標的クロストリジウム毒素の非限定的な例は、以下のものに記載されている：例えば、Keith A. Foster et al., Clostridial Toxin Derivatives Able To Modify Peripheral Sensory Afferent Functions, 米国特許第5,989,545号；Clifford C. Shone et al., Recombinant Toxin Fragments, 米国特許第6,461,617号；Conrad P. Quinn et al., Methods and Compounds for the Treatment of Mucus Hypersecretion, 米国特許第6,632,440号；Lance E. Steward et al., Methods And Compositions For The Treatment Of Pancreatitis, 米国特許第6,843,998号；J. Oliver Dolly et al., Activatable Recombinant Neurotoxins, 米国特許第7,132,259号；Stephan Donovan, Clostridial Toxin Derivatives and Methods For Treating Pain, 米国特許出願公開第2002/0037833号；Keith A. Foster et al., Inhibition of Secretion from Non-neural Cells, 米国特許出願公開第2003/0180289号；Lance E. Steward et al., Multivalent Clostridial Toxin Derivatives and Methods of Their Use, 米国特許出願公開第2006/0211619号；Keith A. Foster et al., Non-Cytotoxic Protein Conjugates, 米国特許出願公開第2008/0187960号；Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, 米国特許出願第11/776,075号；Keith A. Foster et al., Re-targeted Toxin Conjugates, 米国特許出願第11/792,210号（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）。
かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分として再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、再標的ＢｏＮＴ／Ａ、再標的ＢｏＮＴ／Ｂ、再標的ＢｏＮＴ／Ｃ1、再標的ＢｏＮＴ／Ｄ、再標的ＢｏＮＴ／Ｅ、再標的ＢｏＮＴ／Ｆ、再標的ＢｏＮＴ／Ｇ、再標的ＴｅＮＴ、再標的ＢａＮＴまたは再標的ＢｕＮＴを含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、オピオイド標的部分、例えば、エンケファリン、エンドモルフィン、エンドルフィン、ダイノルフィン、ノシセプチンまたはヘモルフィンを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様のさらに別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、タキキニン標的部分、例えば、サブスタンスＰ、ニューロペプチドＫ（ＮＰＫ）、ニューロペプチドγ（ＮＰγ）、ニューロキニンＡ（ＮＫＡ；サブスタンスＫ、ニューロキニンα、ニューロメジンＬ）、ニューロキニンＢ（ＮＫＢ）、ヘモキニンまたはエンドキニンを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様のさらに別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、メラノコルチン標的部分、例えば、メラニン細胞刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモンまたはリポトロピンを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様のさらに別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ガラニン標的部分、例えば、ガラニンまたはガラニンメッセージ関連ペプチドを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、グラニン標的部分、例えば、クロモグラニンＡ、クロモグラニンＢまたはクロモグラニンＣを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ニューロペプチドＹ関連ペプチド標的部分、例えば、ニューロペプチドＹ、ペプチドＹＹ、膵臓ペプチドまたは膵臓イコサペプチドを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様のさらに別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、神経ホルモン標的部分、例えば、コルチコトロピン放出ホルモン、甲状腺ホルモン、サイロトロピン放出ホルモンまたはソマトスタチンを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様のさらに別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、神経調節サイトカイン標的部分、例えば、毛様体神経栄養因子、グリコホリンＡ、白血病抑制因子、コリン作動性分化因子、インターロイキン、オンコスタチンＭ、カルジオトロフィン１、カルジオトロフィン様サイトカインまたはニューロロイキンを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、キニンペプチド標的部分、例えば、ブラジキニン、カリジン、脱Ａｒｇ９ブラジキニンまたは脱Ａｒｇ１０ブラジキニンを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、線維芽細胞増殖因子標的部分、神経成長因子標的部分、インスリン増殖因子標的部分、上皮増殖因子標的部分、血管内皮増殖因子標的部分、脳由来神経栄養因子標的部分、成長由来神経栄養因子標的部分、ニューロトロフィン標的部分、例えば、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４／５、頭部活性化因子ペプチド標的部分、ニュールツリン標的部分、パーセフィン標的部分、アルテミン標的部分、形質転換増殖因子β標的部分、例えば、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３またはＴＧＦβ４、骨形成タンパク質標的部分、例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８またはＢＭＰ１０、増殖分化因子標的部分、例えば、ＧＤＦ１、ＧＤＦ２、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１０、ＧＤＦ１１またはＧＤＦ１５、またはアクチビン標的部分、例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥまたはインヒビンＡを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、グルカゴン様ホルモン標的部分、例えば、セクレチン、グルカゴン様ペプチド、例えばＧＬＰ１およびＧＬＰ２、脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド標的部分、成長ホルモン放出ホルモン標的部分、血管作用性小腸ペプチド標的部分、例えばＶＩＰ１またはＶＩＰ２、胃抑制ポリペプチド標的部分、カルシトニン関連ペプチド内臓腸ペプチド標的部分、例えば、ガストリン、ガストリン放出ペプチドまたはコレシストキニン、またはＰＡＲペプチド標的部分、例えば、ＰＡＲ１ペプチド、ＰＡＲ２ペプチド、ＰＡＲ３ペプチドまたはＰＡＲ４ペプチドを含む再標的クロストリジウム毒素を含む。
別の実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび非クロストリジウム毒素結合ドメインを含む。この実施態様の態様において、該一本鎖タンパク質は、直線でアミノからカルボキシへの順序で、１）クロストリジウム酵素的ドメイン、クロストリジウム移行ドメインおよび非クロストリジウム結合ドメイン；２）クロストリジウム酵素的ドメイン、非クロストリジウム結合ドメインおよびクロストリジウム移行ドメイン；３）非クロストリジウム結合ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素的ドメイン；４）非クロストリジウム結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素的ドメインおよびクロストリジウム毒素移行ドメイン；５）クロストリジウム毒素移行ドメイン、クロストリジウム毒素酵素的ドメインおよび非クロストリジウム結合ドメイン；または６）クロストリジウム毒素移行ドメイン、非クロストリジウム結合ドメインおよびクロストリジウム毒素酵素的ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびオピオイド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびエンケファリン結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびウシ副腎髄質２２（ＢＡＭ２２）ペプチド結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびエンドモルフィン結合ドメイン；４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびエンドルフィン結合ドメイン；５）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびダイノルフィン結合ドメイン；６）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびノシセプチン結合ドメイン；７）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびヘモルフィン結合ドメイン；または８）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびリモルフィン結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびメラノコルチンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびメラニン細胞刺激ホルモン結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび副腎皮質刺激ホルモン結合ドメイン；または３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびリポトロピン結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびガラニンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびガラニン結合ドメイン；または２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびガラニンメッセージ関連ペプチド（ＧＭＡＰ）結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびグラニンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびクロモグラニンＡ結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびクロモグラニンＢ結合ドメイン；または３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびクロモグラニンＣ結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびタキキニンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびサブスタンスＰ結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロペプチドＫ結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロペプチドγ結合ドメイン；４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロキニンＡ結合ドメイン；５）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびヘモキニン結合ドメイン；または６）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびエンドキニン結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロペプチドＹ関連ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびペプチドＹＹ（ＰＹＹ）結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび膵臓ペプチド（ＰＰ）結合ドメイン；または４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび膵臓イコサペプチド（ＰＩＰ）結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび神経ホルモンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびコルチコトロピン放出ホルモン（ＣＣＲＨ）結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびサイロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）結合ドメイン；または４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびソマトスタチン結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびサイトカインペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびグリコホリンＡ（ＧＰＡ）結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ドメイン；４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびインターロイキン（ＩＬ）結合ドメイン；５）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびオンコスタチンＭ結合ドメイン；６）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびカルジオトロフィン１（ＣＴ-１）結合ドメイン；７）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびカルジオトロフィン様サイトカイン（ＣＬＣ）結合ドメイン；８）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロロイキン結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびキニンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびブラジキニン結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびカリジン結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび脱Ａｒｇ９ブラジキニン結合ドメイン；または４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび脱Ａｒｇ１０ブラジキニン結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＦＧＦ−１結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＦＧＦ−２結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＦＧＦ−４結合ドメイン；４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＦＧＦ−８結合ドメイン；５）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＦＧＦ−９結合ドメイン；６）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＦＧＦ−１７結合ドメイン；または４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＦＧＦ−１８結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロトロフィンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび神経成長因子（ＮＧＦ）結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロトロフィン３（ＮＴ-３）結合ドメイン；４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニューロトロフィン４／５（ＮＴ-４／５）結合ドメイン；または５）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび頭部活性化因子ペプチド（ＨＡ）結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ペプチド結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびグリア由来増殖因子（ＧＤＮＦ）ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびニュールツリン結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびパーセフリン（persephrin）結合ドメイン；または３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびアルテミン結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＴＧＦβ１結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＴＧＦβ２結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＴＧＦβ３結合ドメイン；または４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＴＧＦβ４結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび骨形成タンパク質β（ＢＭＰ）ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＢＭＰ２結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＢＭＰ３結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＢＭＰ４結合ドメイン；４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＢＭＰ５結合ドメイン；５）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＢＭＰ６結合ドメイン；６）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＢＭＰ７結合ドメイン；７）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＢＭＰ８結合ドメイン；または８）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＢＭＰ１０結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび増殖分化因子β（ＧＤＦ）ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ１結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ２結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ３結合ドメイン；４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ５結合ドメイン；５）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ６結合ドメイン；６）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ７結合ドメイン；７）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ８結合ドメイン；８）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ１０結合ドメイン；９）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ１１結合ドメイン；または１０）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＧＤＦ１５結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびアクチビンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびアクチビンＡ結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびアクチビンＢ結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびアクチビンＣ結合ドメイン；４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびアクチビンＥ結合ドメイン；または５）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびインヒビンＡ結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）ペプチド結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびインスリン増殖因子（ＩＧＦ）ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＩＧＦ-１結合ドメイン；または２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＩＧＦ-２結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび上皮増殖因子（ＥＧＦ）ペプチド結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびグルカゴン様ホルモンペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびセクレチン結合ドメイン；または２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびグルカゴン様ペプチド結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）ペプチド結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）ペプチド結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）ペプチド結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＶＩＰ１結合ドメイン；または２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＶＩＰ２結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよび胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）ペプチド結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびカルシトニン関連ペプチド内臓腸ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびガストリン結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびガストリン放出ペプチド結合ドメイン；または３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびコレシストキニン（ＣＣＫ）結合ドメインを含む。
この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびプロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ）ペプチド結合ドメインを含む。この実施態様のさらなる態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、１）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＰＡＲ１結合ドメイン；２）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＰＡＲ２結合ドメイン；３）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＰＡＲ３結合ドメイン；または４）クロストリジウム毒素酵素的ドメイン、クロストリジウム毒素移行ドメインおよびＰＡＲ４結合ドメインを含む。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、薬理学的に許容される賦形剤を提供する。本明細書で使用する場合、用語「薬理学的に許容される賦形剤」は、「薬理学的賦形剤」または「賦形剤」と同義語であり、哺乳動物に投与された場合に長期的または永久的に有害な影響を実質的に及ぼさない賦形剤をいい、例えば、安定剤、増量剤、抗凍結剤、抗溶解剤、添加剤、ビヒクル、担体、希釈剤、または補助剤のような化合物を包含する。賦形剤は、一般に、活性成分と混合されるか、または活性成分を希釈または封入することが許されており、固体、半固体または液体の薬剤であり得る。クロストリジウム毒素活性成分を含む医薬組成物は、医薬上許容される組成物への活性成分のプロセシングを容易にする１つ以上の医薬上許容される賦形剤を含むことができることが考えられる。薬理学的に許容される賦形剤がクロストリジウム毒素活性成分と不適合ではない限り、医薬上許容される組成物におけるその使用は意図される。薬理学的に許容される賦形剤の非限定的な例は、例えば、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7th ed. 1999)；Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20th ed. 2000)；Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10th ed. 2001)；およびHandbook of Pharmaceutical Excipients (Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4th edition 2003)（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に見ることができる。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、有効量を提供する。本明細書で使用する場合、用語「有効量」は、クロストリジウム毒素組成物に添加される賦形剤または賦形剤の組み合わせの量に関して使用される場合、クロストリジウム毒素活性成分の所望の初期回収効力を達成するために必要な各賦形剤の量をいう。この実施態様の態様において、賦形剤または賦形剤の組み合わせの有効量は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも１００％の初期回収効力をもたらす。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な濃度は、治療される栄養物に関連する症状を、例えば、最大で１０％、最大で２０％、最大で３０％、最大で４０％、最大で５０％、最大で６０％、最大で７０％、最大で８０％、最大で９０％または最大で１００％軽減させる。
この実施態様のさらに別の態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、少なくとも０.１ｍｇ、少なくとも０.１２５ｍｇ、少なくとも０.２ｍｇ、少なくとも０.２５ｍｇ、少なくとも０.３ｍｇ、少なくとも０.３１２５ｍｇ、少なくとも０.４ｍｇ、少なくとも０.５ｍｇ、少なくとも０.６ｍｇ、少なくとも０.６２５ｍｇ、少なくとも０.７ｍｇ、少なくとも０.８ｍｇ、または少なくとも０.９ｍｇである。この実施態様のさらなる態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、少なくとも１.０ｍｇ、少なくとも２.０ｍｇ、少なくとも３.０ｍｇ、少なくとも４.０ｍｇ、少なくとも５.０ｍｇ、少なくとも６.０ｍｇ、少なくとも７.０ｍｇ、少なくとも８.０ｍｇ、または少なくとも９.０ｍｇである。この実施態様のさらなる態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも４０ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも６０ｍｇ、少なくとも７０ｍｇ、少なくとも８０ｍｇ、少なくとも９０ｍｇ、または少なくとも１００ｍｇである。
この実施態様のさらに別の態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、最大で０.１ｍｇ、最大で０.１２５ｍｇ、最大で０.２ｍｇ、最大で０.２５ｍｇ、最大で０.３ｍｇ、最大で０.３１２５ｍｇ、最大で０.４ｍｇ、最大で０.５ｍｇ、最大で０.６ｍｇ、最大で０.６２５ｍｇ、最大で０.７ｍｇ、最大で０.８ｍｇ、または最大で０.９ｍｇである。この実施態様のさらなる態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、最大で１.０ｍｇ、最大で２.０ｍｇ、最大で３.０ｍｇ、最大で４.０ｍｇ、最大で５.０ｍｇ、最大で６.０ｍｇ、最大で７.０ｍｇ、最大で８.０ｍｇ、または最大で９.０ｍｇである。この実施態様のさらなる態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、最大で１０ｍｇ、最大で２０ｍｇ、最大で３０ｍｇ、最大で４０ｍｇ、最大で５０ｍｇ、最大で６０ｍｇ、最大で７０ｍｇ、最大で８０ｍｇ、最大で９０ｍｇ、または最大で１００ｍｇである。
この実施態様のさらに別の態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、約０.１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０.１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０.１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０.２５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０.２５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０.２５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０.５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０.５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０.５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０.７５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０.７５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０.７５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１.０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１.０ｍｇ〜約５０ｍｇ、または約１.０ｍｇ〜約１０ｍｇである。
この実施態様のさらに別の態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、少なくとも０.００１％、少なくとも０.００２％、少なくとも０.００３％、少なくとも０.００４％、少なくとも０.００５％、少なくとも０.００６％、少なくとも０.００７％、少なくとも０.００８％、または少なくとも０.００９％である。この実施態様のさらに別の態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、少なくとも０.０１％、少なくとも０.０２％、少なくとも０.０３％、少なくとも０.０４％、少なくとも０.０５％、少なくとも０.０６％、少なくとも０.０７％、少なくとも０.０８％、または少なくとも０.０９％である。この実施態様のさらなる態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、少なくとも０.１％、少なくとも０.２％、少なくとも０.３％、少なくとも０.４％、少なくとも０.５％、少なくとも０.６％、少なくとも０.７％、少なくとも０.８％、または少なくとも０.９％である。この実施態様のさらなる態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、または少なくとも９％である。
この実施態様のさらに別の態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、最大で０.００１％、最大で０.００２％、最大で０.００３％、最大で０.００４％、最大で０.００５％、最大で０.００６％、最大で０.００７％、最大で０.００８％、または最大で０.００９％である。この実施態様のさらに別の態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、最大で０.０１％、最大で０.０２％、最大で０.０３％、最大で０.０４％、最大で０.０５％、最大で０.０６％、最大で０.０７％、最大で０.０８％、または最大で０.０９％である。この実施態様のさらなる態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、最大で０.１％、最大で０.２％、最大で０.３％、最大で０.４％、最大で０.５％、最大で０.６％、最大で０.７％、最大で０.８％、または最大で０.９％である。この実施態様のさらなる態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、最大で１％、最大で２％、最大で３％、最大で４％、最大で５％、最大で６％、最大で７％、最大で８％、または最大で９％である。
この実施態様のさらに別の態様において、賦形剤の有効な量は、例えば、約０.００１％〜約０.０１％、約０.００１％〜約０.１％、約０.００１％〜約１％、約０.００１％〜約１０％、約０.０１％〜約０.１％、約０.０１％〜約１％、約０.０１％〜約１０％、約０.１％〜約１％、または約０.１％〜約１０％である。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、非タンパク質賦形剤を提供する。本明細書で使用する場合、用語「非タンパク質賦形剤」とは、１５個以上のアミノ酸を含むポリペプチドではない賦形剤をいう。いかなる非タンパク質賦形剤も、この非タンパク質賦形剤を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、糖を提供する。本明細書で使用する場合、用語「糖」とは、１〜１０単糖単位を含む化合物、例えば、単糖、二糖、三糖、および４〜１０単糖単位を含むオリゴ糖をいう。いかなる糖も、この糖を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。単糖は、親単糖が（潜在的な）カルボニル基を有することを条件として、アルドース、ジアルドース、アルドケトース、ケトースおよびジケトースを包含する３個以上の炭素原子を有するポリヒドロキシアルデヒドまたはポリヒドロキシケトン、ならびに環状形態、デオキシ糖およびアミノ糖、およびそれらの誘導体である。単糖としては、トリオース、例えば、グリセルアルデヒドおよびジヒドロキシアセトン；テトロース、例えば、エリトロース、エリトルロースおよびトレオース；ペントース、例えば、アラビノース、リキソース、リボース、リブロース、キシロース、キシルロース；ヘキソース、例えば、アロース、アルトース、フルクトース、フコース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、プシコース、ラムノース、ソルボース、タガトース、タロースおよびトレハロース；ヘプトース、例えば、セドヘプツロースおよびマンノヘプツロース；オクトース、例えば、オクツロースおよび２−ケト−３−デオキシ−マンノ−オクトナート；ノノース、例えば、シアロース；およびデコースが挙げられる。オリゴ糖は、少なくとも２つの単糖単位がグリコシド結合によって結合されている化合物である。単位に数に従って、それらは、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖、十糖などと称される。オリゴ糖は、非分枝、分枝または環状であり得る。一般的な二糖としては、シュークロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、セルビオース、ゲンチオビオース、コージビオース、ラミナリビオース、マンノビオース、メリビオース、ニゲロース、ルチノースおよびキシロビオースが挙げられるが、これらに限定されるものではない。一般的な三糖としては、ラフィノース、アカルボース、マルトトリオースおよびメレチトースが挙げられるが、これらに限定されるものではない。糖賦形剤の特定の使用の他の非限定的な例は、例えば、ANSEL (1999)（上掲）；GENNARO (2000)（上掲）；HARDMAN (2001)（上掲）；およびROWE (2003)（上掲）（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に見ることができる。
かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、糖を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、単糖を含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、二糖、三糖、四糖、五糖、６糖、七糖、八糖、九糖または十糖を含む。この実施態様のさらに別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、２〜１０単糖単位を含むオリゴ糖を含む。
糖のいかなる量も、この糖量を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。この実施態様の態様において、該製剤に添加される糖の量は、約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.５％（ｗ／ｖ）、約１.０％（ｗ／ｖ）、約１.５％（ｗ／ｖ）、約２.０％（ｗ／ｖ）、約２.５％（ｗ／ｖ）、約３.０％（ｗ／ｖ）、約３.５％（ｗ／ｖ）、約４.０％（ｗ／ｖ）、約４.５％（ｗ／ｖ）、約５.０％（ｗ／ｖ）、約５.５％（ｗ／ｖ）、約６.０％（ｗ／ｖ）、約６.５％（ｗ／ｖ）、約７.０％（ｗ／ｖ）、約７.５％（ｗ／ｖ）、約８.０％（ｗ／ｖ）、約８.５％（ｗ／ｖ）、約９.０％（ｗ／ｖ）、約９.５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、または約３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様の別の態様において、該製剤に添加される糖の量は、少なくとも０.１％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３０％（ｗ／ｖ）、または少なくとも３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様のさらに別の態様において、該製剤に添加される糖の量は、最大で０.１％（ｗ／ｖ）、最大で０.５％（ｗ／ｖ）、最大で１.０％（ｗ／ｖ）、最大で１.５％（ｗ／ｖ）、最大で２.０％（ｗ／ｖ）、最大で２.５％（ｗ／ｖ）、最大で３.０％（ｗ／ｖ）、最大で３.５％（ｗ／ｖ）、最大で４.０％（ｗ／ｖ）、最大で４.５％（ｗ／ｖ）、最大で５.０％（ｗ／ｖ）、最大で５.５％（ｗ／ｖ）、最大で６.０％（ｗ／ｖ）、最大で６.５％（ｗ／ｖ）、最大で７.０％（ｗ／ｖ）、最大で７.５％（ｗ／ｖ）、最大で８.０％（ｗ／ｖ）、最大で８.５％（ｗ／ｖ）、最大で９.０％（ｗ／ｖ）、最大で９.５％（ｗ／ｖ）、最大で１０％（ｗ／ｖ）、最大で１５％（ｗ／ｖ）、最大で２０％（ｗ／ｖ）、最大で２５％（ｗ／ｖ）、最大で３０％（ｗ／ｖ）、または最大で３５％（ｗ／ｖ）である。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、ポリオールを提供する。本明細書で使用する場合、用語「ポリオール」は、「糖アルコール」、「多価アルコール」および「ポリアルコール」と同義語であり、アルデヒド基（ＣＨＯ）の代わりにアルコール基（ＣＨ2ＯＨ）を有する糖誘導体をいい、例えば、マンノースからのマンニトール、キシロースからのキシリトール、およびラクツロースからのラクチトールである。いかなるポリオールも、このポリオールを使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。ポリオールの非限定的な例としては、グリコール、グリセロール、アラビトール、エリトリトール、キシリトール、マルチトール、ソルビトール（グルクチオール）、マンニトール、イノシトール、ラクチトール、ガラクチトール（イジトール）、イソマルトが挙げられる。賦形剤の他の非限定的な例は、例えば、Ansel (1999)（上掲）；Gennaro (2000)（上掲）；Hardman (2001)（上掲）；およびRowe (2003)（上掲）（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に見ることができる。
かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ポリオールを含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、グリコール、グリセロール、アラビトール、エリトリトール、キシリトール、マルチトール、ソルビトール（グルクチオール）、マンニトール、イノシトール、ラクチトール、ガラクチトール（イジトール）またはイソマルトを含む。
ポリオールのいかなる量も、このポリオール量を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。この実施態様の態様において、該製剤に添加されるポリオールの量は、約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.５％（ｗ／ｖ）、約１.０％（ｗ／ｖ）、約１.５％（ｗ／ｖ）、約２.０％（ｗ／ｖ）、約２.５％（ｗ／ｖ）、約３.０％（ｗ／ｖ）、約３.５％（ｗ／ｖ）、約４.０％（ｗ／ｖ）、約４.５％（ｗ／ｖ）、約５.０％（ｗ／ｖ）、約５.５％（ｗ／ｖ）、約６.０％（ｗ／ｖ）、約６.５％（ｗ／ｖ）、約７.０％（ｗ／ｖ）、約７.５％（ｗ／ｖ）、約８.０％（ｗ／ｖ）、約８.５％（ｗ／ｖ）、約９.０％（ｗ／ｖ）、約９.５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、または約３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様の別の態様において、該製剤に添加されるポリオールの量は、少なくとも０.１％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３０％（ｗ／ｖ）、または少なくとも３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様のさらに別の態様において、該製剤に添加されるポリオールの量は、最大で０.１％（ｗ／ｖ）、最大で０.５％（ｗ／ｖ）、最大で１.０％（ｗ／ｖ）、最大で１.５％（ｗ／ｖ）、最大で２.０％（ｗ／ｖ）、最大で２.５％（ｗ／ｖ）、最大で３.０％（ｗ／ｖ）、最大で３.５％（ｗ／ｖ）、最大で４.０％（ｗ／ｖ）、最大で４.５％（ｗ／ｖ）、最大で５.０％（ｗ／ｖ）、最大で５.５％（ｗ／ｖ）、最大で６.０％（ｗ／ｖ）、最大で６.５％（ｗ／ｖ）、最大で７.０％（ｗ／ｖ）、最大で７.５％（ｗ／ｖ）、最大で８.０％（ｗ／ｖ）、最大で８.５％（ｗ／ｖ）、最大で９.０％（ｗ／ｖ）、最大で９.５％（ｗ／ｖ）、最大で１０％（ｗ／ｖ）、最大で１５％（ｗ／ｖ）、最大で２０％（ｗ／ｖ）、最大で２５％（ｗ／ｖ）、最大で３０％（ｗ／ｖ）、または最大で３５％（ｗ／ｖ）である。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、ポリマーを提供する。本明細書で使用する場合、用語「ポリマー」とは、少なくとも１１単量体単位を含む高分子量化合物をいう。１種類の反復単位からなるポリマーはホモポリマーと称され、一方、２種類以上の反復単位から形成されるポリマーは、コポリマーと称される。ポリマーは、天然であっても合成であってもよい。ポリマーの非限定的な例としては、多糖、例えば、デキストラン（例えば、デキストラン１Ｋ、デキストラン４Ｋ、デキストラン４０Ｋ、デキストラン６０Ｋおよびデキストラン７０Ｋ）、デキストリン、グリコーゲン、イヌリン、デンプン、デンプン誘導体（例えば、ヒドロキシメチルデンプン、ヒドロキシエチルデンプン、ヒドロキシプロピルデンプン、ヒドロキシブチルデンプン、およびヒドロキシペンチルデンプン）、ヘタスターチ、セルロース、ＦＩＣＯＬＬ、メチルセルロース（ＭＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシエチルメチルセルロース（ＨＥＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）；ポリ酢酸ビニル（ＰＶＡ）；１８以下のＫ値、１８より大きく９５以下のＫ値、または９５より大きいＫ値を有する、ポビドンとしても知られているポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、例えば、ＰＶＰ１２（ＫＯＬＬＩＤＯＮ（登録商標）１２）、ＰＶＰ１７（ＫＯＬＬＩＤＯＮ（登録商標）１７）、ＰＶＰ２５（ＫＯＬＬＩＤＯＮ（登録商標）２５）、ＰＶＰ３０（ＫＯＬＬＩＤＯＮ（登録商標）３０）、ＰＶＰ９０（ＫＯＬＬＩＤＯＮ（登録商標）９０）；ポリエチレングリコール、例えば、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ７００、ＰＥＧ８００、ＰＥＧ９００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１１００、ＰＥＧ１２００、ＰＥＧ１３００、ＰＥＧ１４００、ＰＥＧ１５００、ＰＥＧ１６００、ＰＥＧ１７００、ＰＥＧ１８００、ＰＥＧ１９００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２１００、ＰＥＧ２２００、ＰＥＧ２３００、ＰＥＧ２４００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ２６００、ＰＥＧ２７００、ＰＥＧ２８００、ＰＥＧ２９００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３２５０、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ３５００、ＰＥＧ３７５０、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ４２５０、ＰＥＧ４５００、ＰＥＧ４７５０、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ５５００、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ６５００、ＰＥＧ７５０００、ＰＥＧ７５００、またはＰＥＧ８０００；およびポリエチレンイミン（ＰＥＩ）；ポリペプチド（タンパク質）、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、およびオボアルブミン；ポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡが挙げられる。ポリマー賦形剤の他の非限定的な例は、例えば、Ansel (1999)（上掲）；Gennaro (2000)（上掲）；Hardman (2001)（上掲）；およびＲowe (2003)（上掲）（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に見ることができる。
いかなる非タンパク質ポリマーも、この非タンパク質ポリマーを使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、非タンパク質ポリマーを含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、多糖である。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、デキストラン、イヌリン、デンプン、デンプン誘導体、ヘタスターチ、デキストリン、グリコーゲン、セルロース、ＦＩＣＯＬＬ、メチルセルロース（ＭＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシエチルメチルセルロース（ＨＥＭＣ）、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ポリ酢酸ビニルを含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ポリビニルピロリドンを含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、デキストラン１Ｋ、デキストラン４Ｋ、デキストラン４０Ｋ、デキストラン６０Ｋ、またはデキストラン７０Ｋを含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ＰＶＰ１２、ＰＶＰ１７、ＰＶＰ２５、ＰＶＰ３０、またはＰＶＰ９０を含む。この実施態様のさらに別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ポリエチレングリコールを含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、室温で固体であるＰＥＧを含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１１００、ＰＥＧ１２００、ＰＥＧ１３００、ＰＥＧ１４００、ＰＥＧ１５００、ＰＥＧ１６００、ＰＥＧ１７００、ＰＥＧ１８００、ＰＥＧ１９００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２１００、ＰＥＧ２２００、ＰＥＧ２３００、ＰＥＧ２４００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ２６００、ＰＥＧ２７００、ＰＥＧ２８００、ＰＥＧ２９００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３２５０、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ３５００、ＰＥＧ３７５０、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ４２５０、ＰＥＧ４５００、ＰＥＧ４７５０、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ５５００、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ６５００、ＰＥＧ７５０００、ＰＥＧ７５００、またはＰＥＧ８０００を含む。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ポリエチレンイミンを含む。
非タンパク質ポリマーのいかなる量も、この非タンパク質ポリマー量を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。この実施態様の態様において、該製剤に添加される非タンパク質ポリマーの量は、約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.５％（ｗ／ｖ）、約１.０％（ｗ／ｖ）、約１.５％（ｗ／ｖ）、約２.０％（ｗ／ｖ）、約２.５％（ｗ／ｖ）、約３.０％（ｗ／ｖ）、約３.５％（ｗ／ｖ）、約４.０％（ｗ／ｖ）、約４.５％（ｗ／ｖ）、約５.０％（ｗ／ｖ）、約５.５％（ｗ／ｖ）、約６.０％（ｗ／ｖ）、約６.５％（ｗ／ｖ）、約７.０％（ｗ／ｖ）、約７.５％（ｗ／ｖ）、約８.０％（ｗ／ｖ）、約８.５％（ｗ／ｖ）、約９.０％（ｗ／ｖ）、約９.５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、または約３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様の別の態様において、該製剤に添加される非タンパク質ポリマーの量は、少なくとも０.１％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３０％（ｗ／ｖ）、または少なくとも３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様のさらに別の態様において、該製剤に添加される非タンパク質ポリマーの量は、最大で０.１％（ｗ／ｖ）、最大で０.５％（ｗ／ｖ）、最大で１.０％（ｗ／ｖ）、最大で１.５％（ｗ／ｖ）、最大で２.０％（ｗ／ｖ）、最大で２.５％（ｗ／ｖ）、最大で３.０％（ｗ／ｖ）、最大で３.５％（ｗ／ｖ）、最大で４.０％（ｗ／ｖ）、最大で４.５％（ｗ／ｖ）、最大で５.０％（ｗ／ｖ）、最大で５.５％（ｗ／ｖ）、最大で６.０％（ｗ／ｖ）、最大で６.５％（ｗ／ｖ）、最大で７.０％（ｗ／ｖ）、最大で７.５％（ｗ／ｖ）、最大で８.０％（ｗ／ｖ）、最大で８.５％（ｗ／ｖ）、最大で９.０％（ｗ／ｖ）、最大で９.５％（ｗ／ｖ）、最大で１０％（ｗ／ｖ）、最大で１５％（ｗ／ｖ）、最大で２０％（ｗ／ｖ）、最大で２５％（ｗ／ｖ）、最大で３０％（ｗ／ｖ）、または最大で３５％（ｗ／ｖ）である。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、界面活性剤を提供する。本明細書で使用する場合、用語「界面活性剤」とは、天然または合成の両親媒性化合物をいう。界面活性剤は、非イオン性、双性イオン性またはイオン性であり得る。いかなる界面活性剤も、この界面活性剤量を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。界面活性剤の非限定的な例としては、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０）、ポリソルベート６１（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６１）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、およびポリソルベート８１（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８１）；ポロキサマー（ポリエチレン−ポリプロピレンコポリマー）、例えば、ポロキサマー１２４（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ４４）、ポロキサマー１８１（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ６１）、ポロキサマー１８２（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ６２）、ポロキサマー１８４（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ６４）、ポロキサマー１８８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ６８）、ポロキサマー２３７（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ８７）、ポロキサマー３３８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｌ１０８）、ポロキサマー４０７（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７）、ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、例えば、ＢＲＩＪ（登録商標）３０、およびＢＲＩＪ（登録商標）３５；２−ドデカオキシエタノール（ＬＵＢＲＯＬ（登録商標）−ＰＸ）；ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル（ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００）；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；３−[(３−コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]−１−プロパンスルホナート（ＣＨＡＰＳ）；３−[(３−コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホナート（ＣＨＡＰＳＯ）；モノラウリル酸シュークロース；およびコール酸ナトリウムが挙げられる。界面活性剤賦形剤の他の非限定的な例は、例えば、Ansel (1999)（上掲）；Gennaro (2000)（上掲）；Hardman (2001)（上掲）；およびＲowe (2003)（上掲）（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に見ることができる。
かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、界面活性剤を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、ポリソルベート、ポロキサマー、ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、２−ドデカオキシエタノール、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ドデシル硫酸ナトリウム、３−[(３−コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]−１−プロパンスルホナート、３−[(３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ]−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホナート、モノラウリル酸シュークロース；またはコール酸ナトリウムを含む。
界面活性剤のいかなる量も、この界面活性剤量を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。この実施態様の態様において、該製剤に添加される界面活性剤の量は、約０.０１％（ｗ／ｖ）、約０.０２％（ｗ／ｖ）、約０.０３％（ｗ／ｖ）、約０.０４％（ｗ／ｖ）、約０.０５％（ｗ／ｖ）、約０.０６％（ｗ／ｖ）、約０.０７％（ｗ／ｖ）、約０.０８％（ｗ／ｖ）、約０.０９％（ｗ／ｖ）、約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.５％（ｗ／ｖ）、約１.０％（ｗ／ｖ）、約１.５％（ｗ／ｖ）、約２.０％（ｗ／ｖ）、約２.５％（ｗ／ｖ）、約３.０％（ｗ／ｖ）、約３.５％（ｗ／ｖ）、約４.０％（ｗ／ｖ）、約４.５％（ｗ／ｖ）、約５.０％（ｗ／ｖ）、約５.５％（ｗ／ｖ）、約６.０％（ｗ／ｖ）、約６.５％（ｗ／ｖ）、約７.０％（ｗ／ｖ）、約７.５％（ｗ／ｖ）、約８.０％（ｗ／ｖ）、約８.５％（ｗ／ｖ）、約９.０％（ｗ／ｖ）、約９.５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、または約３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様の別の態様において、該製剤に添加される界面活性剤の量は、少なくとも０.０１％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.０２％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.０３％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.０４％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.０５％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.０６％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.０７％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.０８％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.０９％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.１％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３０％（ｗ／ｖ）、または少なくとも３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様のさらに別の態様において、該製剤に添加される界面活性剤の量は、最大で０.０１％（ｗ／ｖ）、最大で０.０２％（ｗ／ｖ）、最大で０.０３％（ｗ／ｖ）、最大で０.０４％（ｗ／ｖ）、最大で０.０５％（ｗ／ｖ）、最大で０.０６％（ｗ／ｖ）、最大で０.０７％（ｗ／ｖ）、最大で０.０８％（ｗ／ｖ）、最大で０.０９％（ｗ／ｖ）、最大で０.１％（ｗ／ｖ）、最大で０.５％（ｗ／ｖ）、最大で１.０％（ｗ／ｖ）、最大で１.５％（ｗ／ｖ）、最大で２.０％（ｗ／ｖ）、最大で２.５％（ｗ／ｖ）、最大で３.０％（ｗ／ｖ）、最大で３.５％（ｗ／ｖ）、最大で４.０％（ｗ／ｖ）、最大で４.５％（ｗ／ｖ）、最大で５.０％（ｗ／ｖ）、最大で５.５％（ｗ／ｖ）、最大で６.０％（ｗ／ｖ）、最大で６.５％（ｗ／ｖ）、最大で７.０％（ｗ／ｖ）、最大で７.５％（ｗ／ｖ）、最大で８.０％（ｗ／ｖ）、最大で８.５％（ｗ／ｖ）、最大で９.０％（ｗ／ｖ）、最大で９.５％（ｗ／ｖ）、最大で１０％（ｗ／ｖ）、最大で１５％（ｗ／ｖ）、最大で２０％（ｗ／ｖ）、最大で２５％（ｗ／ｖ）、最大で３０％（ｗ／ｖ）、または最大で３５％（ｗ／ｖ）である。
この実施態様の態様において、該製剤に添加される界面活性剤の量は、約０.０１％（ｖ／ｖ）、約０.０２％（ｖ／ｖ）、約０.０３％（ｖ／ｖ）、約０.０４％（ｖ／ｖ）、約０.０５％（ｖ／ｖ）、約０.０６％（ｖ／ｖ）、約０.０７％（ｖ／ｖ）、約０.０８％（ｖ／ｖ）、約０.０９％（ｖ／ｖ）、約０.１％（ｖ／ｖ）、約０.５％（ｖ／ｖ）、約１.０％（ｖ／ｖ）、約１.５％（ｖ／ｖ）、約２.０％（ｖ／ｖ）、約２.５％（ｖ／ｖ）、約３.０％（ｖ／ｖ）、約３.５％（ｖ／ｖ）、約４.０％（ｖ／ｖ）、約４.５％（ｖ／ｖ）、約５.０％（ｖ／ｖ）、約５.５％（ｖ／ｖ）、約６.０％（ｖ／ｖ）、約６.５％（ｖ／ｖ）、約７.０％（ｖ／ｖ）、約７.５％（ｖ／ｖ）、約８.０％（ｖ／ｖ）、約８.５％（ｖ／ｖ）、約９.０％（ｖ／ｖ）、約９.５％（ｖ／ｖ）、約１０％（ｖ／ｖ）、約１５％（ｖ／ｖ）、約２０％（ｖ／ｖ）、約２５％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）、または約３５％（ｖ／ｖ）である。この実施態様の別の態様において、該製剤に添加される界面活性剤の量は、少なくとも０.０１％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.０２％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.０３％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.０４％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.０５％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.０６％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.０７％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.０８％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.０９％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.１％（ｖ／ｖ）、少なくとも０.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも１.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも１.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも２.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも２.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも３.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも３.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも４.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも４.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも５.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも５.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも６.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも６.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも７.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも７.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも８.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも８.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも９.０％（ｖ／ｖ）、少なくとも９.５％（ｖ／ｖ）、少なくとも１０％（ｖ／ｖ）、少なくとも１５％（ｖ／ｖ）、少なくとも２０％（ｖ／ｖ）、少なくとも２５％（ｖ／ｖ）、少なくとも３０％（ｖ／ｖ）、または少なくとも３５％（ｖ／ｖ）である。この実施態様のさらに別の態様において、該製剤に添加される界面活性剤の量は、最大で０.０１％（ｖ／ｖ）、最大で０.０２％（ｖ／ｖ）、最大で０.０３％（ｖ／ｖ）、最大で０.０４％（ｖ／ｖ）、最大で０.０５％（ｖ／ｖ）、最大で０.０６％（ｖ／ｖ）、最大で０.０７％（ｖ／ｖ）、最大で０.０８％（ｖ／ｖ）、最大で０.０９％（ｖ／ｖ）、最大で０.１％（ｖ／ｖ）、最大で０.５％（ｖ／ｖ）、最大で１.０％（ｖ／ｖ）、最大で１.５％（ｖ／ｖ）、最大で２.０％（ｖ／ｖ）、最大で２.５％（ｖ／ｖ）、最大で３.０％（ｖ／ｖ）、最大で３.５％（ｖ／ｖ）、最大で４.０％（ｖ／ｖ）、最大で４.５％（ｖ／ｖ）、最大で５.０％（ｖ／ｖ）、最大で５.５％（ｖ／ｖ）、最大で６.０％（ｖ／ｖ）、最大で６.５％（ｖ／ｖ）、最大で７.０％（ｖ／ｖ）、最大で７.５％（ｖ／ｖ）、最大で８.０％（ｖ／ｖ）、最大で８.５％（ｖ／ｖ）、最大で９.０％（ｖ／ｖ）、最大で９.５％（ｖ／ｖ）、最大で１０％（ｖ／ｖ）、最大で１５％（ｖ／ｖ）、最大で２０％（ｖ／ｖ）、最大で２５％（ｖ／ｖ）、最大で３０％（ｖ／ｖ）、または最大で３５％（ｖ／ｖ）である。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、アミノ酸を提供する。本明細書で使用する場合、用語「アミノ酸」とは、一般式Ｈ2ＮＣＨＲＣＯＯＨ（式中、Ｒは有機置換基である）で示される分子をいう。いかなるアミノ酸も、このアミノ酸量を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。アミノ酸は、標準的なアミノ酸および非標準的なアミノ酸の両方を包含する。アミノ酸の非限定的な例としては、グリシン、プロリン、４−ヒドロキシプロリン、セリン、グルタメート、アラニン、リジン、サルコシン、γ−アミノ酪酸が挙げられる。アミノ酸賦形剤の他の非限定的な例は、例えば、Ansel (1999)（上掲）；Gennaro (2000)（上掲）；Hardman (2001)（上掲）；およびＲowe (2003)（上掲）（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に見ることができる。
かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、アミノ酸を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、グリシン、プロリン、４−ヒドロキシプロリン、セリン、グルタメート、アラニン、リジン、サルコシン、またはγ−アミノ酪酸を含む。
アミノ酸のいかなる量も、このアミノ酸量を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。この実施態様の態様において、該製剤に添加されるアミノ酸の量は、約０.１％（ｗ／ｖ）、約０.５％（ｗ／ｖ）、約１.０％（ｗ／ｖ）、約１.５％（ｗ／ｖ）、約２.０％（ｗ／ｖ）、約２.５％（ｗ／ｖ）、約３.０％（ｗ／ｖ）、約３.５％（ｗ／ｖ）、約４.０％（ｗ／ｖ）、約４.５％（ｗ／ｖ）、約５.０％（ｗ／ｖ）、約５.５％（ｗ／ｖ）、約６.０％（ｗ／ｖ）、約６.５％（ｗ／ｖ）、約７.０％（ｗ／ｖ）、約７.５％（ｗ／ｖ）、約８.０％（ｗ／ｖ）、約８.５％（ｗ／ｖ）、約９.０％（ｗ／ｖ）、約９.５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約２５％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、または約３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様の別の態様において、該製剤に添加されるアミノ酸の量は、少なくとも０.１％（ｗ／ｖ）、少なくとも０.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも３.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも４.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも５.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも６.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも７.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも８.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.０％（ｗ／ｖ）、少なくとも９.５％（ｗ／ｖ）、少なくとも１０％（ｗ／ｖ）、少なくとも１５％（ｗ／ｖ）、少なくとも２０％（ｗ／ｖ）、少なくとも２５％（ｗ／ｖ）、少なくとも３０％（ｗ／ｖ）、または少なくとも３５％（ｗ／ｖ）である。この実施態様のさらに別の態様において、該製剤に添加されるアミノ酸の量は、最大で０.１％（ｗ／ｖ）、最大で０.５％（ｗ／ｖ）、最大で１.０％（ｗ／ｖ）、最大で１.５％（ｗ／ｖ）、最大で２.０％（ｗ／ｖ）、最大で２.５％（ｗ／ｖ）、最大で３.０％（ｗ／ｖ）、最大で３.５％（ｗ／ｖ）、最大で４.０％（ｗ／ｖ）、最大で４.５％（ｗ／ｖ）、最大で５.０％（ｗ／ｖ）、最大で５.５％（ｗ／ｖ）、最大で６.０％（ｗ／ｖ）、最大で６.５％（ｗ／ｖ）、最大で７.０％（ｗ／ｖ）、最大で７.５％（ｗ／ｖ）、最大で８.０％（ｗ／ｖ）、最大で８.５％（ｗ／ｖ）、最大で９.０％（ｗ／ｖ）、最大で９.５％（ｗ／ｖ）、最大で１０％（ｗ／ｖ）、最大で１５％（ｗ／ｖ）、最大で２０％（ｗ／ｖ）、最大で２５％（ｗ／ｖ）、最大で３０％（ｗ／ｖ）、または最大で３５％（ｗ／ｖ）である。
複数の非タンパク質賦形剤も、この複数の非タンパク質賦形剤を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、複数の非タンパク質賦形剤を含む。この実施態様の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、例えば、少なくとも２つの非タンパク質賦形剤、少なくとも３つの非タンパク質賦形剤、少なくとも４つの非タンパク質賦形剤、少なくとも５つの非タンパク質賦形剤、少なくとも６つの非タンパク質賦形剤、少なくとも７つの非タンパク質賦形剤または少なくとも８つ非タンパク質賦形剤を含むことができる。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、例えば、最大で２つの非タンパク質賦形剤、最大で３つの非タンパク質賦形剤、最大で４つの非タンパク質賦形剤、最大で５つの非タンパク質賦形剤、最大で６つの非タンパク質賦形剤、最大で７つの非タンパク質賦形剤または最大で８つの非タンパク質賦形剤を含むことができる。この実施態様の別の態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、例えば、２〜１０個の非タンパク質賦形剤、２〜８つの非タンパク質賦形剤、２〜６つの非タンパク質賦形剤、２〜４つの非タンパク質賦形剤、３〜１０つの非タンパク質賦形剤、３〜８つの非タンパク質賦形剤、３〜６つの非タンパク質賦形剤、３〜４つの非タンパク質賦形剤、４〜１０つの非タンパク質賦形剤、４〜８つの非タンパク質賦形剤、または４〜６つの非タンパク質賦形剤を含むことができる。例えば、クロストリジウム毒素医薬組成物は、２種類の糖およびクロストリジウム毒素活性成分を含むことができるか、クロストリジウム毒素医薬組成物は、糖、界面活性剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含むことができるか、クロストリジウム毒素医薬組成物は、非タンパク質ポリマー、界面活性剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含むことができるか、またはクロストリジウム毒素医薬組成物は、糖、非タンパク質ポリマー、界面活性剤およびクロストリジウム毒素活性成分を含むことができる。
非タンパク質賦形剤のいかなる割合も、この賦形剤割合を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。この実施態様の態様において、該製剤に２つの非タンパク質賦形剤を添加する場合、第１の賦形剤対第２の賦形剤の比率は、少なくとも４００：１、少なくとも３００：１、少なくとも２００：１、少なくとも１５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５０：１、少なくとも２０：１、少なくとも１５：１、少なくとも１０：１、少なくとも９：１、少なくとも８：１、少なくとも７：１、少なくとも６：１、少なくとも５：１、少なくとも４：１、少なくとも３：１、少なくとも２：１、少なくとも１：１、少なくとも１：２、少なくとも１：３、少なくとも１：４、少なくとも１：５、少なくとも１：６、少なくとも１：７、少なくとも１：８、少なくとも１：９、少なくとも１：１０、少なくとも１：１５、少なくとも１：２０、少なくとも１：５０、少なくとも１：１００、少なくとも１：１５０、少なくとも１：２００、少なくとも１：３００、または少なくとも１：４００である。この実施態様の別の態様において、該製剤に３つの非タンパク質賦形剤を添加する場合、第１の賦形剤対第２の賦形剤対第３の賦形剤の割合は、少なくとも１０：２：１、少なくとも９：２：１、少なくとも８：２：１、少なくとも７：２：１,少なくとも６：２：１、少なくとも５：２：１、少なくとも４：２：１、少なくとも３：２：１、少なくとも２：２：１、少なくとも１０：１：１、少なくとも９：１：１、少なくとも８：１：１、少なくとも７：１：１、少なくとも６：１：１、少なくとも５：１：１、少なくとも４：１：１、少なくとも３：１：１、少なくとも２：１：１、または少なくとも１：１：１である。
また、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、所望により、緩衝剤、保存剤、浸透圧調整剤、塩、抗酸化剤、オスモル濃度調整剤、乳化剤、甘味料または矯味矯臭剤などが挙げられるがこれらに限定されるものではない他の医薬上許容される成分（または医薬成分）を含むことができるがこれに限定されるものではないと考えられる。本明細書に記載の医薬組成物を調製するために様々な緩衝剤およびｐＨを調製するための手段を使用することができる。かかる緩衝剤としては、酢酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、中性緩衝生理食塩水、およびリン酸緩衝生理食塩水が挙げられるが、これらに限定されるものではない。必要な場合は医薬組成物のｐＨを調製するために酸または塩基を使用することができると解される。いかなる緩衝ｐＨレベルも、この有効なｐＨレベルを使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、クロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であり得ると考えられる。この実施態様の態様において、有効なｐＨレベルは、少なくとも約ｐＨ５.０、少なくとも約ｐＨ５.５、少なくとも約ｐＨ６.０、少なくとも約ｐＨ６.５、少なくとも約ｐＨ７.０または約ｐＨ７.５である。この実施態様の別の態様において、有効なｐＨレベルは、最大で約ｐＨ５.０、最大で約ｐＨ５.５、最大で約ｐＨ６.０、最大で約ｐＨ６.５、最大で約ｐＨ７.０または最大で約ｐＨ７.５である。この実施態様のさらに別の態様において、有効なｐＨレベルは、約ｐＨ５.０〜約ｐＨ８.０であり、有効なｐＨレベルは、約ｐＨ５.０〜約ｐＨ７.０であり、有効なｐＨレベルは、約ｐＨ５.０〜約ｐＨ６.０であり、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ８.０であり、有効なｐＨレベルは、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ７.０であり、有効なｐＨレベルは、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ５.０であり、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ７.５であり、有効なｐＨレベルは、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５である。
緩衝剤のいかなる濃度も、この有効な緩衝剤濃度を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、クロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であり得ると考えられる。この実施態様の態様において、緩衝剤の有効な濃度は、少なくとも０.１ｍＭ、少なくとも０.２ｍＭ、少なくとも０.３ｍＭ、少なくとも０.４ｍＭ、少なくとも０.５ｍＭ、少なくとも０.６ｍＭ、少なくとも０.７ｍＭ、少なくとも０.８ｍＭ、または少なくとも０.９ｍＭである。この実施態様の別の態様において、緩衝剤の有効な濃度は、少なくとも１.０ｍＭ、少なくとも２.０ｍＭ、少なくとも３.０ｍＭ、少なくとも４.０ｍＭ、少なくとも５.０ｍＭ、少なくとも６.０ｍＭ、少なくとも７.０ｍＭ、少なくとも８.０ｍＭ、または少なくとも９.０ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、緩衝剤の有効な濃度は、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも５０ｍＭ、少なくとも６０ｍＭ、少なくとも７０ｍＭ、少なくとも８０ｍＭ、または少なくとも９０ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、緩衝剤の有効な濃度は、少なくとも１００ｍＭ、少なくとも２００ｍＭ、少なくとも３００ｍＭ、少なくとも４００ｍＭ、少なくとも５００ｍＭ、少なくとも６００ｍＭ、少なくとも７００ｍＭ、少なくとも８００ｍＭ、または少なくとも９００ｍＭである。この実施態様のさらなる態様において、緩衝剤の有効な濃度は、最大で０.１ｍＭ、最大で０.２ｍＭ、最大で０.３ｍＭ、最大で０.４ｍＭ、最大で０.５ｍＭ、最大で０.６ｍＭ、最大で０.７ｍＭ、最大で０.８ｍＭ、または最大で０.９ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、緩衝剤の有効な濃度は、最大で１.０ｍＭ、最大で２.０ｍＭ、最大で３.０ｍＭ、最大で４.０ｍＭ、最大で５.０ｍＭ、最大で６.０ｍＭ、最大で７.０ｍＭ、最大で８.０ｍＭ、または最大で９.０ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、緩衝剤の有効な濃度は、最大で１０ｍＭ、最大で２０ｍＭ、最大で３０ｍＭ、最大で４０ｍＭ、最大で５０ｍＭ、最大で６０ｍＭ、最大で７０ｍＭ、最大で８０ｍＭ、または最大で９０ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、緩衝剤の有効な濃度は、最大で１００ｍＭ、最大で２００ｍＭ、最大で３００ｍＭ、最大で４００ｍＭ、最大で５００ｍＭ、最大で６００ｍＭ、最大で７００ｍＭ、最大で８００ｍＭ、または最大で９００ｍＭである。この実施態様のさらなる態様なおいて、緩衝剤の有効な濃度は、約０.１ｍＭ〜約９００ｍＭ、０.１ｍＭ〜約５００ｍＭ、０.１ｍＭ〜約１００ｍＭ、０.１ｍＭ〜約９０ｍＭ、０.１ｍＭ〜約５０ｍＭ、１.０ｍＭ〜約９００ｍＭ、１.０ｍＭ〜約５００ｍＭ、１.０ｍＭ〜約１００ｍＭ、１.０ｍＭ〜約９０ｍＭ、または１.０ｍＭ〜約５０ｍＭである。
医薬上許容される抗酸化剤としては、メタ亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチルヒドロキシアニソール、およびブチルヒドロキシトルエンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。有用な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、安定化オキシクロロ組成物、例えば、ＰＵＲＩＴＥ（登録商標）およびケラント（chelant）、例えば、ＤＴＰＡまたはＤＴＰＡ−ビスアミド、カルシウムＤＴＰＡ、およびＣａＮａＤＴＰＡ−ビスアミドが挙げられるが、これらに限定されるものではない。医薬組成物において有用な浸透圧調整剤としては、塩、例えば、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムが挙げられるが、これらに限定されるものではない。該医薬組成物は、塩として提供され得、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などを包含するがこれらに限定されるものではない多くの酸を用いて形成され得る。塩は、対応する遊離塩基形態よりも、水性または他のプロトン性溶媒に溶解し易い。本発明において有用な医薬組成物中に、薬理技術分野で知られているこれらの物質および他の物質を含むことができると解される。薬理学的に許容される成分の他の非限定的な例は、例えば、Ansel (1999)（上掲）；Gennaro (2000)（上掲）；Hardman (2001)（上掲）；およびＲowe (2003)（上掲）（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に見ることができる。
塩のいかなる濃度も、この有効な塩濃度を使用した場合にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、クロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であり得ると考えられる。この実施態様の態様において、塩の有効な濃度は、少なくとも０.１ｍＭ、少なくとも０.２ｍＭ、少なくとも０.３ｍＭ、少なくとも０.４ｍＭ、少なくとも０.５ｍＭ、少なくとも０.６ｍＭ、少なくとも０.７ｍＭ、少なくとも０.８ｍＭ、または少なくとも０.９ｍＭである。この実施態様の別の態様において、塩の有効な濃度は、少なくとも１.０ｍＭ、少なくとも２.０ｍＭ、少なくとも３.０ｍＭ、少なくとも４.０ｍＭ、少なくとも５.０ｍＭ、少なくとも６.０ｍＭ、少なくとも７.０ｍＭ、少なくとも８.０ｍＭ、または少なくとも９.０ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、塩の有効な濃度は、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも５０ｍＭ、少なくとも６０ｍＭ、少なくとも７０ｍＭ、少なくとも８０ｍＭ、または少なくとも９０ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、塩の有効な濃度は、少なくとも１００ｍＭ、少なくとも２００ｍＭ、少なくとも３００ｍＭ、少なくとも４００ｍＭ、少なくとも５００ｍＭ、少なくとも６００ｍＭ、少なくとも７００ｍＭ、少なくとも８００ｍＭ、または少なくとも９００ｍＭである。この実施態様のさらなる態様において、塩の有効な濃度は、最大で０.１ｍＭ、最大で０.２ｍＭ、最大で０.３ｍＭ、最大で０.４ｍＭ、最大で０.５ｍＭ、最大で０.６ｍＭ、最大で０.７ｍＭ、最大で０.８ｍＭ、または最大で０.９ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、塩の有効な濃度は、最大で１.０ｍＭ、最大で２.０ｍＭ、最大で３.０ｍＭ、最大で４.０ｍＭ、最大で５.０ｍＭ、最大で６.０ｍＭ、最大で７.０ｍＭ、最大で８.０ｍＭ、または最大で９.０ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、塩の有効な濃度は、最大で１０ｍＭ、最大で２０ｍＭ、最大で３０ｍＭ、最大で４０ｍＭ、最大で５０ｍＭ、最大で６０ｍＭ、最大で７０ｍＭ、最大で８０ｍＭ、または最大で９０ｍＭである。この実施態様のさらに別の態様において、塩の有効な濃度は、最大で１００ｍＭ、最大で２００ｍＭ、最大で３００ｍＭ、最大で４００ｍＭ、最大で５００ｍＭ、最大で６００ｍＭ、最大で７００ｍＭ、最大で８００ｍＭ、または最大で９００ｍＭである。この実施態様のさらなる態様なおいて、塩の有効な濃度は、約０.１ｍＭ〜約９００ｍＭ、０.１ｍＭ〜約５００ｍＭ、０.１ｍＭ〜約１００ｍＭ、０.１ｍＭ〜約９０ｍＭ、０.１ｍＭ〜約５０ｍＭ、１.０ｍＭ〜約９００ｍＭ、１.０ｍＭ〜約５００ｍＭ、１.０ｍＭ〜約１００ｍＭ、１.０ｍＭ〜約９０ｍＭ、または１.０ｍＭ〜約５０ｍＭである。
本明細書に記載の医薬組成物は、一般に、ボツリヌス毒素活性成分を含む医薬組成物として投与される。本明細書で使用する場合、用語「医薬上許容される」とは、個体に投与した場合に有害な反応、アレルギー性反応または他の不適当な反応もしくは望まれない反応を引き起こさないいずれもの分子実体または組成物を意味する。本明細書で使用する場合、用語「医薬上許容される組成物」は、「医薬組成物」と同義語であり、治療上有効な濃度の、活性成分、例えば、本明細書に記載のクロストリジウム毒素活性成分のいずれかを意味する。クロストリジウム毒素活性成分を含む医薬組成物は、医学的用途および獣医学的用途に有用である。医薬組成物は、単独で、または、他の補助的な活性成分、薬剤、薬物またはホルモンと併用して、投与され得る。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、医薬組成物の回収効力を提供する。本明細書で使用する場合、用語「回収効力」とは、「回収活性」と同義語であり、固体形態のクロストリジウム毒素医薬組成物に言及して使用する場合は、貯蔵した還元製剤中のクロストリジウム毒素活性成分の効力を、試験溶液中に添加する前に測定した活性クロストリジウム毒素成分の効力で割って算出したパーセンテージをいう。液体形態のクロストリジウム毒素医薬組成物に言及して使用する場合は、「回収効力」とは、貯蔵した製剤中のクロストリジウム毒素活性成分の効力を、試験溶液中に添加する前に測定した活性クロストリジウム毒素成分の効力で割って算出したパーセンテージをいう。本明細書で使用する場合、用語「効力」とは、例えばマウスバイオアッセイまたはインビトロクロストリジウム毒素軽鎖活性アッセイによって測定される、クロストリジウム毒素活性成分によって示される生物学的活性のレベルをいう。非限定的な例として、固体形態のクロストリジウム毒素医薬組成物に関して、６０％の回収は、還元後のクロストリジウム毒素活性成分の効力が、製剤に添加する前のクロストリジウム毒素活性成分の効力の６０％であったことを意味する。別の非限定的な例として、水性形態のクロストリジウム毒素医薬組成物に関して、５０％の回収は、貯蔵後のクロストリジウム毒素活性成分の効力が、製剤に添加する前のクロストリジウム毒素活性成分の効力の５０％であったことを意味する。
回収効力を測定するために幅広い範囲の効力または活性アッセイを使用することができる。例えば、致死能を有するクロストリジウム毒素活性成分については、回収効力を測定するために、該クロストリジウム毒素活性成分のＬＤ50値を測定するインビボアッセイ、例えば、マウス致死アッセイまたはＤｉｇｉｔ Ａｂｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ（ＤＡＳ）アッセイを使用することができる。別法として、細胞に基づいた効力アッセイまたはインビトロ効力アッセイを使用することができる。別の例として、致死能を有しないクロストリジウム毒素活性成分については、回収効力を測定するために、細胞に基づいた活性アッセイまたはインビボ活性アッセイを使用することができる。インビボ効力アッセイの例は、例えば、Lindstrom and Korkeala, Laboratory Diagnostics of Botulism, Clin. Microbiol. Rev. 19(2): 298-314(2006)（出典明示により本明細書の一部を構成する）に記載されている。細胞に基づいた効力アッセイの例は、例えば、Fernandez-Salas, et al., Cell-based Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) Assays for Clostridial Toxins, 米国特許第7,183,066；Fernandez-Salas, et al., Botulinum Toxin Screening Assays, 米国特許第7,598,027；（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載されている。インビトロ効力アッセイの例は、例えば、Steward, et al., FRET Protease Assays for Clostridial Toxins, 米国特許第7,332,567；Williams, et al., Fluoresence Polarization Assays for Determining Clostridial Toxin Acivity, 米国特許第7,300,607；Steward, et al., GFP-SNAP25 Fluorescence Release Assay for Botulinum Neurotoxin Protease Activity, 米国特許第7,374,896；Cai, et al., Botulism Diagnostics: From Clinical Symptoms to in vitro Assays, Crit. Rev. Microbiol. 33(2): 109-125(2007)；（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載されている。
回収効力のいかなるレベルも、クロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が存在することを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の製剤化に有用であると考えられる。かくして、実施態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％の回収効力を示す。別の実施態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、最大で１０％、最大で２０％、最大で３０％、最大で４０％、最大で５０％、最大で６０％、最大で７０％、最大で８０％、最大で９０％、または最大で１００％の回収効力を示す。さらに別の実施態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、約２０％〜約１００％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８０％、約２０％〜約７０％、約２０％〜約６０％、または約２０％〜約５０％の回収効力を示す。さらに別の実施態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、約４０％〜約１００％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８０％、約４０％〜約７０％、約４０％〜約６０％、または約４０％〜約５０％の回収効力を示す。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、医薬組成物形態を提供する。本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物形態」とは、医薬組成物が固体形態または水性形態のどちらに処理されるかをいう。医薬組成物の製剤の固体形態への処理は、例えば凍結乾燥または真空乾燥によって行われ得る。医薬組成物の製剤の水性形態への処理は、固体賦形剤を溶解または懸濁して溶液形態を形成する溶質の添加による配合工程の間に簡単に行われ得る。かくして、実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、固体形態である。別の実施態様において、クロストリジウム毒素医薬組成物は、水性形態である。
本発明の医薬組成物の態様は、一部、医薬組成物の貯蔵条件を提供する。本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物の貯蔵条件」とは、医薬組成物が投与前に適当な溶液で復元する前に固体形態のままで貯蔵される場所をいう。いかなる貯蔵条件も、適当な溶液による還元後にクロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な量が回収されることを条件として、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の貯蔵に有用であることが考えられる。実施態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、周囲温度で貯蔵される。この実施態様の態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、少なくとも１６℃、少なくとも１８℃、少なくとも２０℃、または少なくとも２２℃の周囲温度で貯蔵される。この実施態様の別の態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、最大で１６℃、最大で１８℃、最大で２０℃、または最大で２２℃の周囲温度で貯蔵される。この実施態様のさらに別の態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、約１６℃〜約２４℃、約１６℃〜約２２℃、約１６℃〜約２０℃、または約１８℃〜約２４℃の周囲温度で貯蔵される。別の実施態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、氷点下の温度で貯蔵される。この実施態様の態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、少なくとも０℃、少なくとも−２０℃、少なくとも−７０℃、または少なくとも−１２０℃の温度で貯蔵される。この実施態様の別の態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、最大で０℃、最大で−２０℃、最大で−７０℃、または最大で−１２０℃の温度で貯蔵される。この実施態様のさらに別の態様において、本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物は、約０℃〜約−２０℃、約−５℃〜約−２０℃、約０℃〜約−１５℃、約−５℃〜約−１５℃、約０℃〜約−７０℃、約−２０℃〜約−７０℃、または約−２０℃〜約−１２０℃の温度で貯蔵される。
発明の医薬組成物の態様は、一部、安定なクロストリジウム毒素活性成分を提供する。クロストリジウム毒素医薬組成物の目的のために、クロストリジウム毒素活性成分は、該活性成分の回収効力が特定の期間保存された場合の活性成分の回収効力が、活性成分についての初期回収効力の少なくとも７０％である場合に、安定である。例えば、クロストリジウム毒素活性成分は、該クロストリジウム毒素活性成分を含有するクロストリジウム毒素医薬組成物が、例えば、１００％の初期回収効力を示し、１年後に試験した場合に少なくとも７０％の回収効力を示す場合、９０％の初期回収効力を示し、１年後に試験した場合に少なくとも６３％の回収効力を示し、８０％の初期回収効力を示し、１年後に試験した場合に少なくとも５６％の回収効力を示す場合、７０％の初期回収効力を示し、１年後に試験した場合に少なくとも４９％の回収効力を示す場合、または６０％の初期回収効力を示し、１年後に試験した場合に少なくとも４２％の回収効力を示す場合に、安定である。
本明細書に記載のクロストリジウム毒素医薬組成物の態様は、以下のとおり記載され得る：
１． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のシュークロスを含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のラクトースを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のラクトースを含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のラクトースを含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５． 塩化ナトリウム溶液中にてクロストリジウム毒素活性成分および有効な量のラクトースを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
６． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のデキストラン３Ｋを含むリン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
７． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のＰＶＰ１７を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
８． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のＰＶＰ１７を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
９． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のＰＶＰ１７を含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１０． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７、および有効な量の塩化ナトリウムを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１１． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のＰＥＧ３３５０を含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１２． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のＰＥＧ３３５０を含むヒスチジン緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１３． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のポロキサマー１８８を含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１４． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のポロキサマー１８８を含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１５． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトースおよび有効な量のシュークロースを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１６． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトースおよび有効な量のシュークロースを含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１７． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトースおよび有効な量のシュークロースを含むリン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１８． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトース、有効な量のシュークロースおよび有効な量の塩化ナトリウムを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
１９． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロースおよび有効な量のＰＶＰ１７を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２０． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロースおよび有効な量のＰＶＰ１７を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２１． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロースおよび有効な量のＰＶＰ１７を含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２２． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロースおよび有効な量のＰＶＰ１７を含むリン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２３． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量の塩化ナトリウムを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２４． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロースおよび有効な量のＰＥＧ３３５０を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２５． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトースおよび有効な量のＰＶＰ１７を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２６． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトースおよび有効な量のＰＥＧ３３５０を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２６． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトースおよび有効な量のＰＥＧ３３５０を含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２７． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロースおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２８． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロースおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
２９． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のポロキサマー１８８および有効な量の塩化ナトリウムを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３０． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロースおよび有効な量のポリソルベート８０を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３１． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトースおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３２． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトースおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３３． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトース、有効な量のポロキサマー１８８および有効な量の塩化ナトリウムを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３４． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のデキストラン３Ｋおよび有効な量のＰＥＧ３３５０を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３５． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のＰＥＧ３３５０を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３６． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のＰＥＧ３３５０を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３７． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のデキストラン３Ｋおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３８． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のデキストラン３Ｋおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
３９． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のデキストラン４０Ｋおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４０． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のデキストラン４０Ｋおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４１． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４２． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４３． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７、有効な量のポロキサマー１８８および有効な量の塩化ナトリウムを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４４． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＥＧ３３５０および有効な量のポロキサマー１８８を含むクエン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４５． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＥＧ３３５０および有効な量のポロキサマー１８８を含むリン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４６． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＥＧ３３５０および有効な量のポロキサマー１８８を含むヒスチジン緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４７． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のポリソルベート８０を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４８． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
４９． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５０． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のポロキサマー１８８を含むリン酸緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５１． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のＰＶＰ１７、有効な量のポロキサマー１８８および有効な量の塩化ナトリウムを含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５２． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のラクトースおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５３． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のラクトースおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５４． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のシュークロース、有効な量のＰＶＰ１７および有効な量のＰＥＧ３３５０を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５５． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のラクトース、有効な量のＰＥＧ３３５０および有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５６． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のデキストラン３Ｋ、有効な量のＰＥＧ３３５０および有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５７． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のデキストラン３Ｋ、有効な量のＰＥＧ３３５０および有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５７． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７、有効な量のＰＥＧ３３５０および有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５８． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７、有効な量のＰＥＧ３３５０および有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５８． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量のＰＶＰ１７、有効な量のグリシンおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
５９． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量の糖賦形剤および有効な量の界面活性剤賦形剤を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物。
６０． 糖賦形剤が単糖、二糖または三糖である、５９に記載の組成物。
６１． 界面活性剤賦形剤がポロキサマー、ポリソルベート、ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテルまたはポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルである、５９に記載の組成物。
６２． クロストリジウム毒素活性成分が周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である、５９に記載の組成物。
６３． 該組成物が約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化される、５９に記載の組成物。
６４． 該組成物がクエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤またはヒスチジン緩衝剤を使用して緩衝化される、６３に記載の組成物。
６５． 該組成物がさらに有効な量の塩化ナトリウムを含む、５９に記載の組成物。
６６． 該組成物がさらに有効な量の非タンパク質ポリマー賦形剤を含む、５９に記載の組成物。
６７． 非タンパク質ポリマー賦形剤がデキストラン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、ポリビニルピロリドン、ポリ酢酸ビニル、イヌリン、デンプン、またはデンプン誘導体である、６６に記載の組成物。
６８． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量の非タンパク質ポリマー賦形剤および有効な量の界面活性剤賦形剤を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物。
６９． 非タンパク質ポリマー賦形剤がデキストラン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、ポリビニルピロリドン、ポリ酢酸ビニル、イヌリン、デンプン、またはデンプン誘導体である、６８に記載の組成物。
７０． 界面活性剤賦形剤がポロキサマー、ポリソルベート、ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、またはポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルである、６８に記載の組成物。
７１． クロストリジウム毒素活性成分が周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である、６８に記載の組成物。
７２． 該組成物が約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化される、６８に記載の組成物。
７３． 該組成物がクエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤またはヒスチジン緩衝剤を使用して緩衝化される、７２に記載の組成物。
７４． 該組成物がさらに有効な量の塩化ナトリウムを含む、６８に記載の組成物。
７５． クロストリジウム毒素活性成分、有効な量の第１の非タンパク質ポリマー賦形剤、有効な量の第２の非タンパク質ポリマー賦形剤、および有効な量の界面活性剤賦形剤を含む動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物。
７６． 第１の非タンパク質ポリマー賦形剤がデキストラン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、ポリビニルピロリドン、ポリ酢酸ビニル、イヌリン、デンプン、またはデンプン誘導体である、７５に記載の組成物。
７７． 第２の非タンパク質ポリマー賦形剤がデキストラン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、ポリビニルピロリドン、ポリ酢酸ビニル、イヌリン、デンプン、またはデンプン誘導体である、７５に記載の組成物。
７８． 界面活性剤賦形剤がポロキサマー、ポリソルベート、ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、またはポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルである、７５に記載の組成物。
７９． クロストリジウム毒素活性成分が周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である、７５に記載の組成物。
８０． 該組成物が約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化される、７５に記載の組成物。
８１． 該組成物がクエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤またはヒスチジン緩衝剤を使用して緩衝化される、８０に記載の組成物。
８２． 該組成物がさらに有効な量の塩化ナトリウムを含む、７５に記載の組成物。
８３． クロストリジウム毒素活性成分がクロストリジウム毒素複合体、クロストリジウム毒素、修飾クロストリジウム毒素または再標的クロストリジウム毒素である、１〜８２に記載の組成物。
８４． クロストリジウム毒素複合体がＢｏＮＴ／Ａ複合体、ＢｏＮＴ／Ｂ複合体、ＢｏＮＴ／Ｃ1複合体、ＢｏＮＴ／Ｄ複合体、ＢｏＮＴ／Ｅ複合体、ＢｏＮＴ／Ｆ複合体、ＢｏＮＴ／Ｇ複合体、ＴｅＮＴ複合体、ＢａＮＴ複合体、またはＢｕＮＴ複合体である、８３に記載の組成物。
８５． クロストリジウム毒素複合体が９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｂ複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｃ1複合体、５００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｄ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｄ複合体、３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｅ複合体、または３００ｋＤのＢｏＮＴ／Ｆ複合体である、８３に記載の組成物。
８６． クロストリジウム毒素がＢｏＮＴ／Ａ、ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｃ1、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／Ｅ、ＢｏＮＴ／Ｆ、ＢｏＮＴ／Ｇ、ＴｅＮＴ、ＢａＮＴ、またはＢｕＮＴである、８３に記載の組成物。
８７． ＢｏＮＴ／ＡがＢｏＮＴ／Ａ１、ＢｏＮＴ／Ａ２、ＢｏＮＴ／Ａ３、ＢｏＮＴ／Ａ４、またはＢｏＮＴ／Ａ５である、８３に記載の組成物。
８８． 再標的クロストリジウム毒素が再標的ＢｏＮＴ／Ａ、再標的ＢｏＮＴ／Ｂ、再標的ＢｏＮＴ／Ｃ1、再標的ＢｏＮＴ／Ｄ、再標的ＢｏＮＴ／Ｅ、再標的ＢｏＮＴ／Ｆ、再標的ＢｏＮＴ／Ｇ、再標的ＴｅＮＴ、再標的ＢａＮＴ、または再標的ＢｕＮＴである、８３に記載の組成物。
８９． 再標的クロストリジウム毒素がオピオイド標的部分、タキキニン標的部分、メラノコルチン標的部分、グラニン標的部分、ニューロペプチドＹ関連ペプチド標的部分、神経ホルモン標的部分、神経調節サイトカイン標的部分、キニンペプチド標的部分、線維芽細胞増殖因子標的部分、神経成長因子標的部分、インスリン増殖因子標的部分、上皮増殖因子標的部分、血管内皮増殖因子標的部分、脳由来神経栄養因子標的部分、成長由来神経栄養因子標的部分、ニューロトロフィン標的部分、頭部活性化因子ペプチド標的部分、ニュールツリン標的部分、パーセフィン標的部分、アルテミン標的部分、形質転換増殖因子β標的部分、骨形成タンパク質標的部分、増殖分化因子標的部分、アクチビン標的部分、グルカゴン様ホルモン標的部分、脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド標的部分、成長ホルモン放出ホルモン標的部分、血管作用性小腸ペプチド標的部分、胃抑制ポリペプチド標的部分、カルシトニン関連ペプチド内臓腸ペプチド標的部分、またはＰＡＲペプチド標的部分を含む、８３に記載の組成物。
９０． オピオイド標的部分がエンケファリン、エンドモルフィン、エンドルフィン、ダイノルフィン、ノシセプチンまたはヘモルフィンである、８９に記載の組成物。
９１． タキキニン標的部分がサブスタンスＰ、ニューロペプチドＫ、ニューロペプチドγ、ニューロキニンＡ、ニューロキニンＢ、ヘモキニンまたはエンドキニンである、８９に記載の組成物。
９２． クロストリジウム毒素活性成分および有効な量のトレハロースおよび有効な量のポロキサマー１８８を含む緩衝化動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物（ここで、該組成物は、約ｐＨ５.５〜約６.５に緩衝化され、クロストリジウム毒素活性成分は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である）。
以下の実施例は、本発明のクロストリジウム毒素医薬組成物の具体的な例を示すものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１
非タンパク質安定化製剤 − 単一賦形剤
還元後のクロストリジウム毒素活性成分回収に対する単一非タンパク質賦形剤を含む製剤の効果を判定するために実験を行った。試験する非タンパク質賦形剤は、記載した緩衝剤または塩（表２）と別々にまたは合わせて添加した。製剤は、全て、異なる非タンパク質賦形剤を用いるかまたは非タンパク質賦形剤を異なる量で使用して製剤を調製したことを除いて、同一の方法で配合され、凍結乾燥され、還元され、効力評価され、各製剤中にて同一のクロストリジウム毒素活性成分が使用された。
製剤は、最初に所定量の非タンパク質賦形剤を滅菌水に添加して溶液を形成することによって配合された。次いで、該溶液にクロストリジウム毒素活性成分を添加して製剤を生成した。添加したクロストリジウム毒素活性成分は、約１５０単位の９００ｋＤａのＢｏＮＴ／Ａ複合体、約１５０単位の１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ、または約２５０ｎｇの１００ｋＤａの再標的ＢｏＮＴ／Ａであった（ここで、修飾は、ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインのオピオイドリガンドによる置換であった；例えば、Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non- Clostridial Toxin Target Cells, 米国特許出願第11/776,075 (Jul. 11, 2007)；Dolly, J.O. et al., Activatable Clostridial Toxins, 米国特許出願第11/829,475 (Jul. 27, 2007)；Foster, K.A. et al., Fusion Proteins, International Patent Publication WO 2006/059093 (Jun. 8, 2006)；およびFoster, K.A. et al., Non-Cytotoxic Protein Conjugates, International Patent Publication WO 2006/059105 (Jun. 8, 2006)（それぞれ、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）を参照）。該製剤を固体形態に処理し（凍結乾燥または真空乾燥による）、所定の期間（約１日、少なくとも３ヶ月間、または少なくとも１年間）貯蔵し、滅菌水または所定の緩衝剤で還元し、次いで、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力を測定するためにアッセイした。
クロストリジウム毒素、クロストリジウム毒素複合体または修飾クロストリジウム毒素の回収効力を測定するために、還元した製剤をマウスＬＤ50バイオアッセイによってアッセイした。還元した製剤の各々について、生理食塩水で１.３３用量間隔で少なくとも６段階の希釈液を調製し、典型的には、各投与グループにおいて５または６匹のマウス（体重１７〜２２ｇの雌性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｅｒ種）を使用した。マウスの右下腹部に腹腔内注射し、各希釈液についてその後の７２時間にわたって死亡率を記録した。希釈液は、最高濃度の希釈液が、注射されたマウスの少なくとも８０％の死亡率をもたらし、最低濃度の希釈液が、注射されたマウスの２０％以下の死亡率をもたらすように調製された。少なくとも４つの希釈液が死亡率の単調減少範囲内に入らなければならない。すなわち、２つの最大率および２つの最少率が減少しなければならない（同じではない）。単調減少範囲は、８０％以上の死亡率をもって始まる。同時に２つの参考標準アッセイが行われる。注射後３日間の観察期間内にマウスの５０％が脂肪する希釈液を、１単位（Ｕ）のボツリヌス毒素を含む希釈液であると定義する。マウスＬＤ50バイオアッセイによって、そのマウス５０％致死用量または「ＬＤ50」に関して、クロストリジウム毒素、クロストリジウム毒素複合体または修飾クロストリジウム毒素の効力の測定を行う。かくして、１単位（Ｕ）のクロストリジウム毒素、クロストリジウム毒素複合体または修飾クロストリジウム毒素は、腹腔内注射後に注射したマウスの５０％を殺した毒素の量、すなわち、ＬＤ50であると定義される。
回収は、パーセンテージとして表され、貯蔵した還元製剤中のクロストリジウム毒素活性成分の効力を、試験溶液に添加する前に測定した活性クロストリジウム毒素成分の効力で割って算出される。かくして、例えば、６０％の回収は、還元後のクロストリジウム毒素活性成分の効力が、製剤に添加する前のクロストリジウム毒素活性成分の効力の６０％であったことを意味する。理論的上最大の回収効力は１００％である。結果は、一般に、クロストリジウム毒素複合体を含むクロストリジウム毒素医薬組成物が、単一非タンパク質賦形剤を含んだ場合にはわずかに安定化されたことを示している（表２）。
使用された単一賦形剤が糖であった場合、二糖ラクトースだけがさまざまな程度の初期回収効力も示し、ラクトース約１０ｍｇ〜約５０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ））を添加した場合にはクロストリジウム毒素活性成分の約１５％〜約４１％の回収を示した（表２）。また、回収を示したが、単一賦形剤としてラクトースを含有する試験製剤は、１年間の貯蔵後に、回収効力がラクトース２０ｍｇの場合を除いて試験したいかなる量についてもこの時点で検出されなかったので非常に安定ではなかった（表２）。１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５.５）およびリン酸カリウム（ｐＨ５.５）の添加は、単一賦形剤としてラクトースを含有するクロストリジウム毒素医薬組成物におけるクロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性を向上させた。初期回収効力は、ラクトース製剤が１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５.５）を含む場合には約４１％から約６０％へ上昇し、ラクトース製剤が１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ５.５）を含む場合には約４１％から約７１％へ上昇した（表２）。また、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵したクロストリジウム毒素医薬組成物におけるいずれかのｐＨ５.５緩衝剤を使用した場合には、水とは対照的に、少なくとも１年間の貯蔵後にクロストリジウム毒素活性成分の上昇した回収効力が観察された（表２）。しかしながら、単一賦形剤としてラクトースを含有するクロストリジウム毒素医薬組成物への１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ６.５）の添加は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力または長期安定性を向上させなかった（表２）。意外にも、単一賦形剤としてラクトースを含有するクロストリジウム毒素医薬組成物への１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ６.５）の添加は、実際に、クロストリジウム毒素活性成分の回収をなくした（表２）。最後に、単一賦形剤としてラクトースを含有するクロストリジウム毒素医薬組成物への１０ｍＭ塩化ナトリウムの添加は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力または長期安定性を向上させなかった（表２）。
二糖シュークロースおよびトレハロースならびに三糖ラフィノースは、単一賦形剤として使用した場合に、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力を全く示さなかった。さらにまた、１つの例を除いて、単一賦形剤としてこれらの糖を含有するクロストリジウム毒素医薬組成物への緩衝剤または塩化ナトリウムの添加は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性を向上させなかった（表２）。１つの例外は、シュークロースおよび１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５.５）を含むクロストリジウム毒素医薬組成物であった。この製剤は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力４４％を示し、この回収率は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間維持された（表２）。
単一賦形剤としてポリオール（マンニトール）を含有するクロストリジウム毒素医薬組成物は、回収効力を示さなかった（表２）。単一賦形剤としてマンニトールを含有するクロストリジウム毒素医薬組成物への緩衝剤または塩化ナトリウムの添加は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力または長期安定性を向上させなかった（表２）。
Figure 2019108381
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 a 製剤あたりの添加したボツリヌス神経毒血清型Ａ複合体の量は１５０単位であった。製剤の総体積は、１.０ｍＬであった。
b シュークロース、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マンニトール、イヌリン、デキストラン３Ｋ、デキストラン４０Ｋ、ＰＥＧ３５５０、ＰＶＰ１７、ポロキサマー１８８およびグリシンについて、添加した賦形剤の単位量は、ｍｇである。ポリソルベート２０およびポリソルベート８０について、添加した賦形剤の単位量はｍＬである。
c 緩衝剤の略語は以下のとおりである：ＳＣ、クエン酸ナトリウム緩衝剤；ＰＰ、リン酸カリウム緩衝剤；ＨＢ、ヒスチジン緩衝剤；ＨＰＢ、ヒスチジンリン酸緩衝剤。
d 回収は、パーセンテージとして表され、還元後に測定した活性成分の効力を、製剤に添加する前に測定した活性成分の効力で割ることによって算出する。３ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。１２ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。
e 周囲温度は約１８℃〜約２２℃である。
f 氷点下の温度は約−５℃〜約−２０℃である。
使用した単一賦形剤が非タンパク質ポリマーである場合、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力は、使用した非タンパク質ポリマーのタイプおよび使用した特定の緩衝剤の両方に依存する。例えば、デキストラン３Ｋおよびデキストラン４０Ｋは、単一賦形剤として使用された場合、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を全く示さなかった。他方、ＰＥＧ３３５０約６０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））の添加により、約４７％の初期回収効力が得られた。同様に、ＰＶＰ１７約５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））の添加により、約３９％〜約５２％の初期回収効力が得られた（表２）。
一般に、様々なさらなる緩衝剤は、デキストラン３Ｋまたはデキストラン４０Ｋを単一賦形剤として使用した場合、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を向上させなかった。唯一の例外は、１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ５.５）中にデキストラン３Ｋを含むクロストリジウム毒素医薬組成物であり、その場合、初期回収効力は０％から約６６％に増大し、その回収効力は少なくとも１年間維持された。意外にも、様々なさらなる緩衝剤は、ＰＥＧ３３５０またはＰＶＰ１７を単一賦形剤として使用された場合、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力および長期安定性の両方を劇的に向上させた。例えば、ＰＥＧ３３５０を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５.５）の添加は、回収効力を０％から約７６％に増大させた；１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ５.５）の添加は、回収効力を０％から約８０％に増大させた；１０ｍＭヒスチジン緩衝剤（ｐＨ５.５）の添加は、回収効力を０％から約７２％に増大させた（表２）。いかなる場合でも、これらの様々な緩衝剤の添加により、周囲温度および氷点下の温度どちらの温度でも、少なくとも１年間の長期安定性を生じた。
単一賦形剤としてＰＶＰ１７を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、同様であるがより複雑な結果が得られた。例えば、ＰＶＰ１７を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５.５）の添加は、初期回収効力を約４３％から約１１３％に増大させた；１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ６.５）の添加は、初期回収効力を約４３％から約８１％に増大させた；１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ５.５）の添加は、初期回収効力を約４３％から約９７％に増大させた；１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ５.５）の添加は、初期回収効力を約４３％から約８３％に増大させた。しかしながら、試験した全ての緩衝剤は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力の増大を示したが、一方、クエン酸ナトリウム緩衝剤を添加した場合だけは、少なくとも１年間の長期安定性を示した。最後に、単一賦形剤としてＰＶＰ１７を含有する医薬組成物への１０ｍＭ塩化ナトリウムの添加は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性のどちらも向上させなかった
使用された単一賦形剤が界面活性剤である場合、依存するクロストリジウム毒素活性成分の回収効力は検出されなかった。加えて、様々な緩衝剤の使用は、複雑な回収効力をもたらした。例えば、ポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５.５）の添加は、初期回収効力を０％から約８１％に増大させた；１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ６.５）の添加は、初期回収効力を０％から約５６％に増大させた；そして、１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ５.５）の添加は、初期回収効力を０％から約３９％に増大させた；しかし、１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ６.５）の添加は、全く回収を向上させなかった（表２）。しかしながら、１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５.５）を添加した場合だけは、周囲温度または氷点下の温度のどちらでもクロストリジウム毒素活性成分の長期安定性が得られた（表２）。
かくして、一般に、単一賦形剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、特にかかる組成物を少なくとも１年間貯蔵した場合には、クロストリジウム毒素活性成分の有意な回収効力が得られなかった。しかしながら、意外にも、クロストリジウム毒素医薬組成物への緩衝剤の添加は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力の向上および長期安定性の増大をもたらすことができる。しかしながら、、特定の賦形剤と特定の緩衝剤との組み合わせは、経験的に決定され得るだけである。
実施例２
非タンパク質安定化製剤 − ２つの賦形剤
還元後のクロストリジウム毒素活性成分回収に対する２種類の非タンパク質賦形剤を含む製剤の効果を判定するために実験を行った。試験する非タンパク質賦形剤は、記載した緩衝剤または塩（表３〜５）と別々にまたは合わせて添加した。製剤は、全て、異なる非タンパク質賦形剤を用いるかまたは非タンパク質賦形剤を異なる量で使用して製剤を調製したことを除いて、同一の方法で配合され、凍結乾燥され、還元され、効力評価され、各製剤中にて同一のクロストリジウム毒素活性成分が使用された。
試験される製剤は、実施例１の記載と同様に配合され、処理され、貯蔵され、還元させた。回収効力は、実施例１に記載のマウスＬＤ50バイオアッセイを使用して判定された。回収は、パーセンテージとして表され、貯蔵した還元製剤中のクロストリジウム毒素活性成分の効力を、試験溶液に添加する前に測定した活性クロストリジウム毒素成分の効力で割って算出される。結果は、クロストリジウム毒素複合体を含むクロストリジウム毒素医薬組成物が、２つの非タンパク質賦形剤を含んだ場合には安定化され得たことを示している（表３〜５）。
２種類の糖を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、複雑な結果を生じた。例えば、ラクトースおよびシュークロースを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、回収効力を劇的に向上させるようには思われなかった。例えば、約５％（ｗ／ｖ）ラクトースを含む組成物は、約３５％の初期回収効力を生じ（表２）、約５％（ｗ／ｖ）シュークロースを含む組成物は回収効力を生じず（表２）、約５％（ｗ／ｖ）ラクトースおよび約５％（ｗ／ｖ）シュークロースを含む組成物は、約２７％の初期回収効力を生じた（表３）。同様に、約２％（ｗ／ｖ）ラクトースを含む組成物は、約４１％の初期回収効力を生じ（表２）、約１％（ｗ／ｖ）シュークロースを含む組成物は、回収効力を生じず（表２）、約２％（ｗ／ｖ）ラクトースおよび約１％（ｗ／ｖ）シュークロースを含む組成物は、約６８％の初期回収効力を生じた（表３）。約２％（ｗ／ｖ）ラクトースおよび約１％（ｗ／ｖ）シュークロースを含む組成物は初期回収効力を増大させたが、約２％ラクトースおよび約１％シュークロースを含むクロストリジウム毒素医薬組成物におけるクロストリジウム毒素活性成分の長期安定性は約２％（ｗ／ｖ）ラクトースだけを含む組成物と類似していた（表３および４を参照）。
同様に、１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ５.５）、１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ６.５）、および１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ５.５）の添加は、単一糖賦形剤として約２％ラクトースを含む組成物と比べて、約２％ラクトースおよび約１％シュークロースを含むクロストリジウム毒素医薬組成物におけるクロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性に対して影響を及ぼさなかった。しかしながら、意外にも、ラクトース、２％（ｗ／ｖ）、およびシュークロース、１％（ｗ／ｖ）を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、１０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ６.５）の添加は、初期回収効力を０％から約５０％に増大させ、この製剤は、氷点下の温度で少なくとも１年間安定であった。同様に顕著には、ラクトース、２％（ｗ／ｖ）、およびシュークロース、１％（ｗ／ｖ）を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、１０ｍＭ塩化ナトリウムの添加は、初期回収効力を増大させた（ラクトース、２％（ｗ／ｖ）、１０ｍＭ塩化ナトリウムの場合の約３９％、シュークロース、２％（ｗ／ｖ）、１０ｍＭ塩化ナトリウムの場合の０％、そして、ラクトース、２％（ｗ／ｖ）、シュークロース、１％（ｗ／ｖ）、１０ｍＭ塩化ナトリウムの場合の約６１％との比較）。さらに重要なことには、この製剤は、周囲温度および氷点下の温度のどちらでも少なくとも１年間の長期安定性が得られた。
シュークロースおよびトレハロースまたはマンニトールを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は初期回収効力を向上させず、ほとんどの組み合わせが全く回収を生じなかった。同様に、ラクトースおよびマンニトールを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力を向上させなかった（５％（ｗ／ｖ）ラクトースの場合の約３５％（表２）、５％（ｗ／ｖ）マンニトールの場合の０％（表２）、そして、５％（ｗ／ｖ）ラクトースおよび５％（ｗ／ｖ）マンニトールの場合の約２３％（表３）との比較）。
糖および非タンパク質ポリマーを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性を生じるのに有効な賦形剤量の範囲を拡大した。例えば、様々な量のＰＶＰ１７との組み合わせにおける様々な量のシュークロースは、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力および長期安定性の増大に有効な賦形剤量の範囲を拡大した。約５ｍｇ〜約２５０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２５％（ｗ／ｖ））の範囲のシュークロースを単一賦形剤として使用した場合にはクロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収抗力が得られなかったが、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））のＰＶＰ１７は、初期回収効力を生じた。しかしながら、約３０ｍｇ〜約２５０ｍｇ（約３％（ｗ／ｖ）〜約２５％（ｗ／ｖ））のシュークロースを約３０ｍｇ〜約２５０ｍｇ（約３％（ｗ／ｖ）〜約２５％（ｗ／ｖ））のＰＶＰ１７と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、約３９〜約６２％のクロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を生じた（これらの量のこれらの賦形剤の各々だけでは、検出可能な回収を生じなかった）。別の例として、シュークロース約５ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ））とＰＶＰ１７約５０ｍｇ（約５％（ｗ／ｖ））との併用は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力を約３９％に増大させた（表３）（これらの量のこれらの賦形剤の各々だけでは、検出可能な回収を生じなかった）。
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 a 製剤あたりの添加したボツリヌス神経毒血清型Ａ複合体の量は１５０単位であった。製剤の総体積は、１.０ｍＬであった。
b シュークロース、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マンニトール、イヌリン、デキストラン３Ｋ、デキストラン４０Ｋ、ＰＥＧ３５５０、ＰＶＰ１７、ポロキサマー１８８およびグリシンについて、添加した賦形剤の単位量は、ｍｇである。ポリソルベート２０およびポリソルベート８０について、添加した賦形剤の単位量はｍＬである。
c 緩衝剤の略語は以下のとおりである：ＳＣ、クエン酸ナトリウム緩衝剤；ＰＰ、リン酸カリウム緩衝剤；ＨＢ、ヒスチジン緩衝剤；ＨＰＢ、ヒスチジンリン酸緩衝剤。
d 回収は、パーセンテージとして表され、還元後に測定した活性成分の効力を、製剤に添加する前に測定した活性成分の効力で割ることによって算出する。３ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。１２ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。
e 周囲温度は約１８℃〜約２２℃である。
f 氷点下の温度は約−５℃〜約−２０℃である。
添加量に依存して、シュークロースおよびＰＶＰ１７を含むクロストリジウム毒素医薬組成物への様々な緩衝剤の添加は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性に影響を及ぼす（表３）。例えば、シュークロース約２０ｍｇおよびＰＶＰ１７ １０ｍｇを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、約７７％の初期回収効力を生じた（表２）。しかしながら、この製剤へのクエン酸ナトリウム緩衝剤の添加は、約８７％〜約１００％の増大した回収効力を生じた（表３）。さらにまた、シュークロース約２０ｍｇおよびＰＶＰ１７ １０ｍｇを含むクロストリジウム毒素医薬組成物への約ｐＨ５.５クエン酸ナトリウム緩衝剤の添加は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間の長期安定性を生じた（表３）。同様に、約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５リン酸カリウム緩衝剤中におけるシュークロース約２０ｍｇおよびＰＶＰ１７ １０ｍｇを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、観察された初期回収効力の程度は増大しなかったが、周囲温度で貯蔵した製剤の長期安定性を有意に増大させた（表３）。
シュークロースおよびＰＶＰ１７を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、該製剤への塩化ナトリウムの添加は、初期回収効力に対して大きな効果を及ぼすとは思われなかった。しかしながら、塩化ナトリウム中におけるシュークロース約２０ｍｇおよびＰＶＰ１７ １０ｍｇを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、周囲温度で貯蔵した製剤の長期安定性を有意に増大させた（表３）。
別の例として、シュークロース約５ｍｇ〜約５０ｍｇ（約０.５（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ））を単一賦形剤として使用した場合、またはＰＥＧ３３５０約５０ｍｇ（約５％（ｗ／ｖ））を単一賦形剤として使用した場合には検出可能な回収効力は得られなかったが、組み合わせた場合には、約３５％〜約４４％のクロストリジウム毒素活性成分の回収効力の増大が示された（表３）。
ラクトースおよび非タンパク質ポリマーを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、また、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性を生じるのに有効な賦形剤量の範囲を拡大した。例えば、単一賦形剤として使用された場合、ラクトースは、約１０ｍｇ〜約５０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ））で回収効力の増大に有効であり（表２）、一方、ＰＶＰ１７は、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））で回収効力の増大に有効であった（表２）。しかしながら、ラクトース約５ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ））をＰＶＰ１７（約０.０５％（ｗ／ｖ））約０.５ｍｇと組み合わせた場合、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を約５２％に増大させた（表３）（これらの量のこれらの賦形剤の各々だけでは、検出可能な回収を生じなかった；表２を参照）。別の例として、ラクトース約５ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ））をＰＶＰ１７約５０ｍｇ（約５％（ｗ／ｖ））と組み合わせた場合、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を約５２％に増大させた（表３）（これらの濃度のこれらの賦形剤の各々だけでは、検出可能な回収を生じなかった；表２を参照）。
さらにまた、この糖単独がクロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を生じるのに有効でない量でのラクトースの添加は、単一賦形剤として初回効力効果を生じるのに十分なＰＶＰ１７の量を含むクロストリジウム毒素医薬組成物中の初期回収効力を増大させると思われる。例えば、ラクトース約５ｍｇ（０.５％（ｗ／ｖ））とＰＶＰ１７約５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））との組み合わせは、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力をそれぞれ約５７％、約６５％、および約４９％に増大させた（表３）。この回収効力は、ＰＶＰ１７を単一賦形剤として使用した場合に得られる回収よりも有意に高い（表２を参照；ＰＶＰ１７ ５ｍｇ、０.５％（ｗ／ｖ）単独の場合の約４８％；ＰＶＰ１７ １０ｍｇ、１％（ｗ／ｖ）単独の場合の約５２％；ＰＶＰ１７ ２０ｍｇ、２％（ｗ／ｖ）単独の場合の約４３％）。同様に、ラクトース約０.５ｍｇ（０.０５％（ｗ／ｖ））とＰＶＰ１７約５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））との組み合わせは、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力をそれぞれ約６５％、約４７％、および約６５％に向上させた（表３）。一銀に、この回収効力は、ＰＶＰ１７を単一賦形剤として使用した場合に観察された回収率よりも有意に高い（表２を参照；ＰＶＰ１７ ５ｍｇ、０.５％（ｗ／ｖ）単独の場合に約４８％；ＰＶＰ１７ １０ｍｇ、１％（ｗ／ｖ）単独の場合に約５２％；ＰＶＰ１７ ２０ｍｇ、２％（ｗ／ｖ）の場合の約４３％）。
ラクトースをＰＥＧ３３５０と組み合わせた場合に同様の結果が見られた。ラクトース約５０ｍｇ（約５％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、３５％の初期回収効力を生じたが（表２）、ＰＥＧ３３５０約５０ｍｇ（約５％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を生じなかった（表２）。しかしながら、ラクトース約５０ｍｇ（約５％（ｗ／ｖ））およびＰＥＧ３３５０約５０ｍｇ（約５％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素組成物は、５３％の初期回収効力を生じた（表３）。様々な緩衝剤溶液中におけるラクトースおよびＰＥＧ３３５０を含むクロストリジウム毒素組成物において初期回収効力の増強が見られた（表３を参照）。
糖および界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、広範囲の賦形剤量にわたってクロストリジウム毒素活性成分の回収効力および長期安定性の有効な増大を生じた。例えば、シュークロース単独およびポロキサマー１８８単独は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。意外にも、シュークロース約１.２５ｍｇ〜約６０ｍｇ（約０.１２５％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ））をポロキサマー１８８約０.２５ｍｇ〜約５０ｍｇ（約０.０２５％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ））と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、全て、約４３％〜約１１５％のクロストリジウム毒素活性成分の回収効力の増大を示した（表３）。また、かかる組み合わせは、全て、少なくとも氷点下の温度で貯蔵した場合にクロストリジウム毒素活性成分の少なくとも１年間の長期安定性を生じた（表３）。
興味深いことに、シュークロースおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、該製剤への様々な緩衝剤の添加は、氷点下の温度で貯蔵した場合にクロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性に対する大きな効果を及ぼすとは思われなかった（表３）。しかしながら、意外にも、シュークロースおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物への様々な緩衝剤の添加は、周囲温度で貯蔵した場合にクロストリジウム毒素活性成分の長期安定性を劇的に向上させた（表３）。シュークロースおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物への塩化ナトリウムの添加は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性に対して大きな効果を及ぼすとは思われなかった（表３）。
シュークロースをポリソルベート８０と組み合わせた場合に同様の結果が見られた。シュークロースを単一賦形剤として含むクロストリジウム毒素組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。しかしながら、シュークロース約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））およびポリソルベート８０約０.２５ｍｇ〜約２.５ｍｇ（約０.０２５％（ｗ／ｖ）〜約０.２５％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素組成物は、約７８％〜約１０２％の初期回収効力を生じた（表３）。シュークロースおよびポリソルベート８０を含むクロストリジウム毒素組成物において、長期安定性の増強も見られた（表３を参照）。
別の例として、シュークロース単独およびポロキサマー１８８単独は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。意外にも、シュークロース約１.２５ｍｇ〜約６０ｍｇ（約０.１２５％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ））をポロキサマー１８８約０.２５ｍｇ〜約５０ｍｇ（約０.０２５％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ））と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、全て、約４３％〜約１１５％のクロストリジウム毒素活性成分の回収効力の増大を生じた（表３）。また、かかる組み合わせは、全て、少なくとも氷点下の温度で貯蔵した場合、クロストリジウム毒素活性成分の少なくとも１年間の長期安定性を生じた（表３）。
ラクトースおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、また、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性を生じるのに有効な賦形剤量の範囲を拡大した。例えば、ラクトースは、単一賦形剤として使用した場合、約１０ｍｇ〜約５０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ））でクロストリジウム毒素活性成分を回収するのに有効であったが（表２）、ポロキサマー１８８単独はクロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。しかしながら、ラクトース約０.６２５〜約５ｍｇ（約０.０６２５％（ｗ／ｖ）〜約０.５％（ｗ／ｖ））とポロキサマー１８８約０.３１２５ｍｇ〜約２.５ｍｇ（約０.０３１２５％（ｗ／ｖ）〜約０.２５％（ｗ／ｖ））との組み合わせは、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を約７３％〜約１０７に増大させた（表３）（これらの量のこれらの賦形剤の各々だけでは、検出可能な回収を生じなかった；表２を参照）。また、かかる組み合わせは、全て、少なくとも氷点下の温度で貯蔵した場合、クロストリジウム毒素活性成分の少なくとも１年間の長期安定性を生じた（表３）。
さらにまた、ポロキサマー１８８単独ではクロストリジウム毒素活性成分の回収を生じるのに有効ではない量でのポロキサマー１８８の添加は、単一賦形剤として初期回収効力を生じるのに十分なラクトースの量を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において初期回収効力を増強させると思われた。例えば、ラクトース約２０ｍｇ〜約５５ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ）〜約５.５％（ｗ／ｖ））とポロキサマー１８８約５.５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））との組み合わせは、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を約６３％〜約１０８％に増大させた（表３）。この回収効力は、ラクトースを単一賦形剤として使用した場合に得られた回収よりも有意に高い（表２を参照；ラクトース１０ｍｇ、１％（ｗ／ｖ）単独の場合約１５％；ラクトース２０ｍｇ、２％（ｗ／ｖ）単独の場合約４１％；ラクトース５０ｍｇ、５％（ｗ／ｖ）単独の場合約３５％）。
添加量に依存して、ラクトースおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物への様々な緩衝剤の添加は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性に影響を及ぼした（表３）。例えば、ラクトース約２０ｍｇおよびポロキサマー１８８ １０ｍｇを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、約６３％の初期回収効力を生じた（表２）。しかしながら、この製剤への約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５緩衝化溶液の添加は、約８１％〜約１１５％の初期回収効力の増大を生じた（表３）。同様に、これらの製剤への緩衝剤の添加は、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合、少なくとも１年間の長期安定性の増強を生じた。同様に、ラクトースおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物への塩化ナトリウムの添加は、初期回収効力に対する劇的な効果をもたらさなかったが、特に種運温度で貯蔵した場合にクロストリジウム毒素活性成分の長期安定性を非常に増大させた（表３）。
２つの非タンパク質ポリマーを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力および長期安定性を増強させた。例えば、デキストラン３Ｋ単独ではクロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力を生じるのに有効ではない量のデキストラン３Ｋの添加は、単一賦形剤として初期回収効力を生じるのに十分なＰＥＧ３３５０の量を含むクロストリジウム毒素医薬組成物における初期回収効力を増大させると思われた。かくして、デキストラン３ＫおよびＰＥＧ３３５０の両方を含む組成物は、水中における初期回収効力の増強（ＰＥＧ３３５０単独の初期回収効力０％（表２）とデキストラン３ＫおよびＰＥＧ３３５０併用の初期回収効力４７％（表４）との比較）；クエン酸ナトリウム緩衝剤中における初期回収効力の増強（クエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるＰＥＧ３３５０単独の初期回収効力７６％（表２）とクエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるデキストラン３ＫおよびＰＥＧ３３５０併用の初期回収効力９２％(表４）との比較；ならびにクエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）中におけるＰＥＧ３３５０単独の初期回収効力５７％（表２）とクエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）中におけるデキストラン３ＫおよびＰＥＧ３３５０併用の初期回収効力８２％（表４）との比較）；リン酸カリウム緩衝剤中における初期回収効力の増強（リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるＰＥＧ３３５０単独の初期回収効力８０％（表２）とリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるデキストラン３ＫおよびＰＥＧ３３５０併用の初期回収効力１０１％（表４）との比較；リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）中におけるＰＥＧ３３５０単独の初期回収効力０％（表２）とリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるデキストラン３ＫおよびＰＥＧ３３５０併用の初期回収効力１０２％（表４）との比較）；ならびにヒスチジン緩衝剤中における初期回収効力の増強（リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるＰＥＧ３３５０単独の初期回収効力７２％（表２）とヒスチジン緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるデキストラン３ＫおよびＰＥＧ３３５０併用の初期回収効力８２％（表４）との比較）を示した。
ＰＶＰ１７およびＰＥＧ３３５０を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性を生じるのに有効な賦形剤量の範囲を拡大した。例えば、ＰＶＰ１７を約３０ｍｇ〜約２５０ｍｇ（約３％（ｗ／ｖ）〜約２５％（ｗ／ｖ））の範囲で単一賦形剤として使用した場合、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力は見られなかったが、ＰＥＧ３３５０は、約６０ｍｇ（約６％（ｗ／ｖ））以上の量でのみ初期回収効力を生じた（表２）。しかしながら、ＰＶＰ１７約３０ｍｇ〜約４０ｍｇ（約３％（ｗ／ｖ）〜約４％（ｗ／ｖ））をＰＥＧ３３５０約２０ｍｇ〜約３０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ）〜約３％（ｗ／ｖ））と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、約８０％の初期回収効力を生じた（表４）（これらの賦形剤の各々だけでは検出可能な初期回収効力を生じなかった）。同様に、ＰＥＧ３３５０を単一賦形剤として約６０ｍｇ（約６％（ｗ／ｖ））以上の範囲で使用した場合、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力は見られなかったが、ＰＶＰ１７約５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））は、初期回収効力を生じた（表２）。しかしながら、ＰＥＧ３３５０約４０ｍｇ〜約５５ｍｇ（約４％（ｗ／ｖ）〜約５.５％（ｗ／ｖ））をＰＶＰ１７約２０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力約６８％を生じた（ＰＶＰ１７ ２０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））単独は、４３％の初期回収効力を生じた）（表４）。該製剤に様々な緩衝化溶液を添加した場合にもこの初期回収の増強が見られた（表４）。
非タンパク質ポリマーおよび界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力および長期安定性の有効な増大を生じた。例えば、デキストラン３Ｋ単独およびポロキサマー１８８単独は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。意外にも、デキストラン３Ｋおよびポロキサマー１８８の両方を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力約７８％〜約９８％を生じた（表４）。さらにまた、緩衝化溶液中におけるデキストラン３Ｋおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物においてもこの相乗効果が見られた（表４）。デキストラン３Ｋ単独およびポロキサマー１８８単独は、クエン酸ナトリウム緩衝剤またはリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）を含む製剤においてクロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。しかしながら、デキストラン３Ｋおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）を添加した場合に初期回収効力約８２％〜約１００％を生じ；クエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）を添加した場合に初期回収効力約８５％〜約９９％を生じ；リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）を添加した場合に初期回収効力約８２％〜約１０３％を生じ；ヒスチジン緩衝剤（ｐＨ５.５）を添加した場合に初期回収効力約１０３％〜約１２５％を生じ；ヒスチジン緩衝剤（ｐＨ６.５）を添加した場合に初期回収効力約１１５％〜約１３４％を生じた。また、かかる緩衝化クロストリジウム毒素医薬組成物は、少なくとも１年間の長期安定性の増強を生じた。同様に、リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるデキストラン３Ｋおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、回収の増強も見られた（デキストラン３Ｋ単独の初期回収効力６６％（表２）；ポロキサマー１８８単独の初期回収効力３９％（表２）；およびデキストラン３Ｋおよびポロキサマー１８８併用の初期回収効力約９０％〜約１２０％（表４）を比較）。リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるデキストラン３Ｋおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物もまた、長期安定性 周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合、長期安定性の増強を示した。
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 a 製剤あたりの添加したボツリヌス神経毒血清型Ａ複合体の量は１５０単位であった。製剤の総体積は、１.０ｍＬであった。
b シュークロース、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マンニトール、イヌリン、デキストラン３Ｋ、デキストラン４０Ｋ、ＰＥＧ３５５０、ＰＶＰ１７、ポロキサマー１８８およびグリシンについて、添加した賦形剤の単位量は、ｍｇである。ポリソルベート２０およびポリソルベート８０について、添加した賦形剤の単位量はｍＬである。
c 緩衝剤の略語は以下のとおりである：ＳＣ、クエン酸ナトリウム緩衝剤；ＰＰ、リン酸カリウム緩衝剤；ＨＢ、ヒスチジン緩衝剤；ＨＰＢ、ヒスチジンリン酸緩衝剤。
d 回収は、パーセンテージとして表され、還元後に測定した活性成分の効力を、製剤に添加する前に測定した活性成分の効力で割ることによって算出する。３ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。１２ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。
e 周囲温度は約１８℃〜約２２℃である。
f 氷点下の温度は約−５℃〜約−２０℃である。
デキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において、同程度の初期回収および長期安定性の向上が見られた。例えば、デキストラン４０Ｋ単独およびポロキサマー１８８単独は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。意外にも、デキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８の両方を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力約８５％〜約１０２％を生じた（表４）。緩衝化溶液中におけるデキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物においてもこの相乗効果が見られた。デキストラン４０Ｋ単独およびポロキサマー１８８単独は、リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）を含む製剤においてクロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。しかしながら、デキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）を用いた場合に初期回収効力約１０２％〜約１１５％を生じた（表４）。さらにまた、様々な他の緩衝化溶液中におけるデキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力および長期安定性の増強を生じた。かくして、デキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８の両方を含む組成物は、クエン酸ナトリウム緩衝剤中における初期回収効力の増強（クエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるポロキサマー１８８単独の初期回収効力８１％（表２）とクエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるデキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８併用の初期回収効力１２８％（表４）との比較；ならびにクエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるポロキサマー１８８単独の初期回収効力５６％（表２）とクエン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ６.５）中におけるデキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８併用の初期回収効力１００％（表４）との比較）；ならびにリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中における初期回収効力の増強（リン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるポロキサマー１８８単独の初期回収効力３９％（表２）とリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ５.５）中におけるデキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８併用の初期回収効力１０３％（表４）との比較）を示した。
ＰＶＰ１７および界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、広範囲の賦形剤量にわたってクロストリジウム毒素活性成分の回収効力および長期安定性の有効な増強を生じた。例えば、ＰＶＰ１７は、単一賦形剤として使用された場合、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））の範囲の量で回収効力の増大に有効であった。上記のように、ポロキサマー１８８単独は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった。しかしながら、ＰＶＰ１７約０.３１２５ｍｇ〜約２.５ｍｇ（約０.０３％（ｗ／ｖ）〜約０.２５％（ｗ／ｖ））とポロキサマー１８８約０.６２５ｍｇ〜約５ｍｇ（約０.０６％（ｗ／ｖ）〜約０.５％（ｗ／ｖ））との組み合わせは、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力を約６４％〜約８０％に増大させた（これらの濃度のこれらの賦形剤の各々だけでは、検出可能な回収を生じなかった）。同様に、ＰＶＰ１７約３０ｍｇ〜約６０ｍｇ（約３％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ））とポロキサマー１８８約１.５ｍｇ〜約５ｍｇ（約０.１５％（ｗ／ｖ）〜約０.５％（ｗ／ｖ））との組み合わせは、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力を約６８％〜約７７％に増大させた（これらの濃度のこれらの賦形剤の各々だけでは、検出可能な回収を生じなかった）。ＰＶＰ１７およびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物への様々な緩衝剤または塩化ナトリウムの添加は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性に対する大きな影響を及ぼすとは思われなかった（表４）。
ＰＶＰ１７をポリソルベート８０と組み合わせて使用した場合に、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力の同様の増大が見られた（表４）。ＰＶＰ１７約５ｍｇ〜約１０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約１％（w／Ｖ））を単一賦形剤として含むクロストリジウム毒素組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力約４８％〜約５２％を生じた（表２）。しかしながら、ＰＶＰ１７約５ｍｇ〜約１０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約１％（w／Ｖ））およびポリソルベート８０約０.２５ｍｇ〜約２.５ｍｇ（約０.０２５％（ｗ／ｖ）〜約０.２５％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素組成物は、初期回収効力約８２％〜約９０％を生じた（表４）。シュークロースおよびポリソルベート８０を含むクロストリジウム毒素組成物において、長期安定性の増強も見られた（表４を参照）。
ＰＥＧ３３５０および界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、ある緩衝化溶液を用いて製剤化した場合、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性の増強を生じた。例えば、ＰＥＧ３３５０単独およびポロキサマー１８８単独は、どちらもクロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。同様に、水においてＰＥＧ３３５０およびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表４）。しかしながら、意外にも、緩衝化製剤ＰＥＧにおいて３３５０およびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、全て、クロストリジウム毒素活性成分の有効な回収効力を生じ、多くの場合の初期回収および長期安定性の増強を生じた（表４）。例えば、約ｐＨ５.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるＰＥＧ３３５０約６０ｍｇ（約６％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力約７６％を生じたが、一方、ＰＥＧ３３５０約２０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））を約ｐＨ５.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中に含む組成物は、初期回収効力約８１％を生じた。しかしながら、約ｐＨ５.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるＰＥＧ３３５０約４０ｍｇ〜約６０ｍｇ（約４％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ））およびポロキサマー１８８約３ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.３％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力約９０％〜約１０１％を生じた。これらの製剤において、クロストリジウム毒素活性成分の長期安定性もまた増強された（表４）。
同様に、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるＰＥＧ３３５０約６０ｍｇ（約６％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力約５７％を生じたが、一方、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるＰＥＧ３３５０約２０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））を含む組成物は、初期回収効力約８０％を生じた。しかしながら、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるＰＥＧ３３５０約４０ｍｇ〜約６０ｍｇ（約４％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ））およびポロキサマー１８８約３ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.３％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力約８３％〜約９８％を生じた。これらの製剤において、クロストリジウム毒素活性成分の長期安定性もまた増強された（表４）。
Figure 2019108381
 a 製剤あたりの添加したボツリヌス神経毒血清型Ａ複合体の量は１５０単位であった。製剤の総体積は、１.０ｍＬであった。
b シュークロース、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マンニトール、イヌリン、デキストラン３Ｋ、デキストラン４０Ｋ、ＰＥＧ３５５０、ＰＶＰ１７、ポロキサマー１８８およびグリシンについて、添加した賦形剤の単位量は、ｍｇである。ポリソルベート２０およびポリソルベート８０について、添加した賦形剤単位量はｍＬである。
c 緩衝剤の略語は以下のとおりである：ＳＣ、クエン酸ナトリウム緩衝剤；ＰＰ、リン酸カリウム緩衝剤；ＨＢ、ヒスチジン緩衝剤；ＨＰＢ、ヒスチジンリン酸緩衝剤。
d 回収は、パーセンテージとして表され、還元後に測定した活性成分の効力を、製剤に添加する前に測定した活性成分の効力で割ることによって算出する。３ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。１２ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。
e 周囲温度は約１８℃〜約２２℃である。
f 氷点下の温度は約−５℃〜約−２０℃である。
ポリオールおよび界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、また、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力を生じた。例えば、マンニトール単独およびポロキサマー１８８単独は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。意外にも、マンニトールおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力を生じた（表５）。
アミノ酸および界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物もまた、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力を生じた。例えば、グリシン単独およびポロキサマー１８８単独は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表２）。意外にも、グリシンおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力約３０％〜約３５％を生じた（表５）。
実施例３
非タンパク質安定化製剤 − ３つの賦形剤
還元後のクロストリジウム毒素活性成分回収に対する３種類の非タンパク質賦形剤を含む製剤の効果を判定するために実験を行った。試験する非タンパク質賦形剤は、記載した緩衝剤または塩（表６）と別々にまたは合わせて添加した。製剤は、全て、異なる非タンパク質賦形剤を用いるかまたは非タンパク質賦形剤を異なる量で使用して製剤を調製したことを除いて、同一の方法で配合され、凍結乾燥され、還元され、効力評価され、各製剤中にて同一のクロストリジウム毒素活性成分が使用された。
試験される製剤は、実施例１の記載と同様に配合され、処理され、貯蔵され、還元させた。回収効力は、実施例１に記載のマウスＬＤ50バイオアッセイを使用して判定された。回収は、パーセンテージとして表され、貯蔵した還元製剤中のクロストリジウム毒素活性成分の効力を、試験溶液に添加する前に測定した活性クロストリジウム毒素成分の効力で割って算出される。結果は、クロストリジウム毒素複合体を含むクロストリジウム毒素医薬組成物が、２つの非タンパク質賦形剤を含んだ場合には安定化され得たことを示している（表６）。
糖、非タンパク質ポリマーおよび界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の有効な回収効力および長期安定性を生じた。例えば、シュークロース約１０ｍｇ（１％（ｗ／ｖ））およびＰＶＰ１７約１０ｍｇ（１％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力約７７％を示した（表４）。同様に、シュークロース約１０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ））およびポロキサマー１８８約１０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力約５９％を示した（表４）。同様に、Ｋｏｌｌｏｄｏｎ１７約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））およびポロキサマー１８８約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力約７１％〜約８２％を示した（表４）。しかしながら、シュークロース約１０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ））、ＰＶＰ１７約１０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ））、およびポロキサマー１８８約１０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力約１０２％を示した（表６）。シュークロース約１５ｍｇ（約１.５％（ｗ／ｖ））、ＰＶＰ１７約３０ｍｇ（約３％（ｗ／ｖ））、およびポロキサマー１８８約１５ｍｇ（約１.５％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物において約８９％の初期回収効力の同様の増大が見られた（表６）。シュークロース、ＰＶＰ１７およびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物への様々な緩衝剤または塩化ナトリウムの添加は、添加した各賦形剤の量に依存して、クロストリジウム毒素活性成分の初期回収効力および長期安定性を増強した（表６）。
２種類の糖および界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の有効な回収効力および長期安定性を生じた。例えば、シュークロース、ラクトースおよびポロキサマー１８８を含む組成物は、初期回収効力約８１％〜約１１４％を生じた（表６）。意外にも、シュークロース、ラクトースおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤を添加した場合に初期回収効力を増強した。例えば、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるシュークロース約２０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））およびラクトース約２０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力４１％を生じた（表３）。同様に、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるシュークロース約２０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））およびポロキサマー１８８約１０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力９０％を生じた（表３）。同様に、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるラクトース約２０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ））およびポロキサマー１８８約１０ｍｇ（約１％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、８１％初期回収効力を生じた（表３）。しかしながら、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中における３つの賦形剤を全て含む組成物は、初期回収効力約９９％を生じた（表６）。
糖および２種類の非タンパク質ポリマーを含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力および長期安定性の増強を生じた。例えば、シュークロース約５ｍｇ〜約２０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））およびＰＶＰ１７約５ｍｇ〜約１５ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約１.５％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力約５８％〜約７７％を生じた（表３）。同様に、シュークロース約５ｍｇ〜約５０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ））およびＰＥＧ３３５０約５ｍｇ〜約５０ｍｇ（約０.５％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力約３５％〜約４４％を生じた（表３）。同様に、ＰＶＰ１７約３０ｍｇ〜約４０ｍｇ（約３％（ｗ／ｖ）〜約４％（ｗ／ｖ））およびＰＥＧ３３５０約２０ｍｇ〜約３０ｍｇ（約２％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ））を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力約８０％を生じた（表４）。しかしながら、３つの賦形剤の全てを含む組成物は、初期回収効力約８２％〜約１０２％を生じた（表６）。
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 a 製剤あたりの添加したボツリヌス神経毒血清型Ａ複合体の量は１５０単位であった。製剤の総体積は、１.０ｍＬであった。
b シュークロース、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マンニトール、イヌリン、デキストラン３Ｋ、デキストラン４０Ｋ、ＰＥＧ３５５０、ＰＶＰ１７、ポロキサマー１８８およびグリシンについて、添加した賦形剤の単位量は、ｍｇである。ポリソルベート２０およびポリソルベート８０について、添加した賦形剤の単位量はｍＬである。
c 緩衝剤の略語は以下のとおりである：ＳＣ、クエン酸ナトリウム緩衝剤；ＰＰ、リン酸カリウム緩衝剤；ＨＢ、ヒスチジン緩衝剤；ＨＰＢ、ヒスチジンリン酸緩衝剤。
d 回収は、パーセンテージとして表され、還元後に測定した活性成分の効力を、製剤に添加する前に測定した活性成分の効力で割ることによって算出する。３ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。１２ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。
e 周囲温度は約１８℃〜約２２℃である。
f 氷点下の温度は約−５℃〜約−２０℃である。
２種類の非タンパク質ポリマーおよび界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の有効な回収効力および長期安定性を生じた。例えば、デキストラン３Ｋ、ＰＥＧ３３５０およびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、水中における場合には約８１％〜約１０４％、約ｐＨ５.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中における場合には約８８％〜約１０６％、約ｐＨ６.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中における場合には約７６％〜約９６％、約ｐＨ６.５リン酸カリウム緩衝剤中における場合には約８７％〜約９６％、約ｐＨ６.５リン酸カリウム緩衝剤中における場合には約８２％〜約１０６％、約ｐＨ５.５ヒスチジン緩衝剤中における場合には約７０％〜約１０２％、約ｐＨ６.５ヒスチジン緩衝剤中における場合には約６５％〜約１０２％の初期回収効力を生じた（表６）。同様に、ＰＶＰ１７、ＰＥＧ３３５０およびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の有効な回収効力および長期安定性を生じた（表６）。
実施例４
製剤に含有されるクロストリジウム毒素活性成分が１５０ｋＤクロストリジウム毒素である場合の複数の製剤を調製するための実験を行った（表７）。試験する非タンパク質賦形剤は、記載した緩衝剤または塩（表７）と別々にまたは合わせて添加した。製剤は、全て、異なる非タンパク質賦形剤を用いるかまたは非タンパク質賦形剤を異なる量で使用して各製剤を調製したことを除いて、同一の方法で配合され、凍結乾燥され、還元され、効力評価され、各製剤中にて同一のクロストリジウム毒素活性成分が使用された。
試験される製剤は、添加されたクロストリジウム毒素活性成分が１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ約１５０単位であったことを除いて、実施例１の記載と同様に配合され、処理され、貯蔵され、還元させた。回収効力は、実施例１に記載のマウスＬＤ50バイオアッセイを使用して判定された。回収は、パーセンテージとして表され、貯蔵した還元製剤中のクロストリジウム毒素活性成分の効力を、試験溶液に添加する前に測定した活性クロストリジウム毒素成分の効力で割って算出される。結果は、１５０ｋＤクロストリジウム毒素複合体を含むクロストリジウム毒素医薬組成物が、２つ以上の非タンパク質賦形剤を含んだ場合には安定化され得たことを示している（表７）。
糖および界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の有効な初期回収効力を生じた。例えば、シュークロース単独およびポロキサマー１８８単独は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表７）。意外にも、シュークロースをポロキサマー１８８と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の回収効力約１１３％を生じた（表７）。１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａに関するこれらの結果は、実施例１〜３において９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体を用いて見られた相乗効果と類似しており、この場合、シュークロースをポロキサマー１８８と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は初期回収効力９９％を生じた（表３）。
ラクトースおよび／またはポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、実施例１〜３において９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体を用いて見られたような複雑な結果を生じた。例えば、ラクトースを単一賦形剤として含む医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ）（表７）。クロストリジウム毒素活性成分が９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体であった場合にラクトースを単一賦形剤として含む医薬組成物についての回収効力が約３５％であった（表２）ことを考えると、この回収欠如は予想されなかった。ポロキサマー１８８を単一賦形剤として含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、クロストリジウム毒素活性成分の検出可能な回収効力を生じなかった（表７）。この結果は、実施例１に記載のものと類似している。さらに著しくは、賦形剤としてラクトースおよびポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、初期回収効力約１１０％を生じた（表７）。かくして、９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体と同様に、ラクトースおよびポロキサマー１８８を含む医薬組成物において１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａの相乗的な回収が得られた。
２つの非タンパク質ポリマーを含むクロストリジウム毒素医薬組成物はまた、クロストリジウム毒素活性成分の有効な初期回収効力を生じた。例えば、デキストラン４０Ｋおよび／またはポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物はまた、実施例１〜３において９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体を用いて得られた結果と比較に値する結果を生じた。例えば、デキストラン４０Ｋおよびポロキサマー１８８を含む医薬組成物においては、１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａの回収は見られたが、１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａについての初期回収効力は、低かった（表７における１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａの初期回収効力約５０％と表４における９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体の初期回収効力約８５％との対比）。
ＰＥＧ３３５０および／またはポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、実施例１〜３において９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体を用いて得られた結果と多少異なる結果を生じた。例えば、ＰＥＧ３３５０およびポロキサマー１８８を含む医薬組成物においては、１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａの初期回収効力約４７％が見られた（表７）。クロストリジウム毒素活性成分が９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体であった場合にＰＥＧ３３５０およびポロキサマー１８８を含む医薬組成物について回収効力が検出されなかったことを考えると、この回収は予想されなかった（表４）。しかしながら、約ｐＨ５.５クエン酸ナトリウム緩衝剤中におけるＰＥＧ３３５０および／またはポロキサマー１８８を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、実施例１〜３において９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体を用いて得られた結果と比較に値する結果を生じた。例えば、約ｐＨ５.５クエン酸ナトリウム緩衝剤におけるＰＥＧ３３５０および／またはポロキサマー１８８を含む医薬組成物において、１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａの回収は見られたが、１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａについての初期回収効力は低かった（表７における１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａの初期回収効力約５２％と表４における９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体の初期回収効力約９０％との比較）。同様に、約ｐＨ５.５リン酸カリウム緩衝剤中におけるＰＥＧ３３５０および／またはポロキサマー１８８を含む医薬組成物において、１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａの回収は観察されたが、１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａについての初期回収効力は低かった（表７における１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａの初期回収効力約５３％と表４における９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体の初期回収効力約９８％との比較）。
Figure 2019108381
 a 製剤あたりの添加した１５０ｋＤａボツリヌス神経毒血清型Ａの量は１５０単位であった。製剤の総体積は、１.０ｍＬであった。
b シュークロース、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マンニトール、イヌリン、デキストラン３Ｋ、デキストラン４０Ｋ、ＰＥＧ３５５０、ＰＶＰ１７、ポロキサマー１８８およびグリシンについて、添加した賦形剤の単位量は、ｍｇである。ポリソルベート２０およびポリソルベート８０について、添加した賦形剤単位量はｍＬである。
c 緩衝剤の略語は以下のとおりである：ＳＣ、クエン酸ナトリウム緩衝剤；ＰＰ、リン酸カリウム緩衝剤；ＨＢ、ヒスチジン緩衝剤；ＨＰＢ、ヒスチジンリン酸緩衝剤。
d 回収は、パーセンテージとして表され、還元後に測定した活性成分の効力を、製剤に添加する前に測定した活性成分の効力で割ることによって算出する。
実施例５
非タンパク質安定化製剤 − 再標的クロストリジウム毒素
製剤に含有されるクロストリジウム毒素活性成分が再標的クロストリジウム毒素である場合の複数の製剤を調製するために実験を行った（表８）。試験する非タンパク質賦形剤は、記載した緩衝剤または塩（表８）と別々にまたは合わせて添加した。製剤は、全て、異なる非タンパク質賦形剤を用いるかまたは非タンパク質賦形剤を異なる量で使用して各製剤を調製したことを除いて、同一の方法で配合され、凍結乾燥され、還元され、効力評価され、各製剤中にて同一のクロストリジウム毒素活性成分が使用された。
試験される製剤は、添加されたクロストリジウム毒素活性成分が１００ｋＤａ再標的ＢｏＮＴ／Ａ（ここで、変更は、ＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインのオピオイドリガンドによる置換であった）約２５０ｎｇであったことを除いて、実施例１の記載と同様に配合され、処理され、貯蔵され、還元させた。例えば、Steward, L.E. et al., Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells, 米国特許出願第11/776,075号 (Jul. 11, 2007)；Dolly, J.O. et al., Activatable Clostridial Toxins, 米国特許出願第11/829,475 (Jul. 27, 2007)；Foster, K.A. et al., Fusion Proteins, 国際特許出願公開第2006/059093号 (Jun. 8, 2006)；およびFoster, K.A. et al., Non-Cytotoxic Protein Conjugates, 国際特許出願公開第2006/059105号 (Jun. 8, 2006)（出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）を参照。
再標的クロストリジウム毒素の回収効力を判定するために、インビトロ軽鎖アッセイによって酵素活性について還元製剤をアッセイした。このアッセイにおいて、固体製剤を２ｍＭ ＤＴＴ、３００μＭ ＺｎＣｌ2、および５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７.４）を含む消化緩衝剤１.０ｍＬで還元し、３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、このインキュベートした製剤５００μＬを新しい管に移し、２００μＭのクエンチ放出蛍光基質（ＳＮＡＰＴＩＤＥ（登録商標）５２０）５.０μＬを添加した。この混合物を３０℃で約１８〜約２０時間インキュベートして、クロストリジウム毒素活性成分についてクエンチ−放出蛍光基質を消化させる。この反応は、消化混合物への５％ＴＦＡ ２５μＬの添加によって停止する。次いで、このクエンチした消化混合物を、逆相高速クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）法によって分析して、還元製剤によって開裂されたクエンチ−放出蛍光基質の量を分取して測定した。このＲＰ−ＨＰＬＣ分析について、このクエンチした消化混合物をＨＰＬＣバイアルに移し、この混合物２５μＬを、１.０ｍＬ／分の流速および３５℃のカラム温度で、カラム（Ｗａｔｅｒｓ ＳＹＭＭＥＴＲＹ ３００TM Ｃ１８、３.５μｍ、４.６×１５０ｍｍ）セットに注入した。走行時間は５分間の注射遅延を伴う２０分間であった。勾配移動相は、水中０.１％ＴＦＡを含む溶液Ａ、およびアセトニトリル中０.１％ＴＦＡを含む溶液Ｂであった。勾配プログラムは以下のとおりであった：０−１０分、Ａ９０％およびＢ１０％；１０−１５分、Ａ８０％およびＢ２０％；ならびに１５−２０分、１００％Ｂ。多波長蛍光検出器を３２２ｎｍの励起波長および４２０ｎｍの発光波長に設定し、データを回収し、標準ソフトウェアを使用して分析した。蛍光検出を使用する保持時間によって開裂生成物を同定し、ピーク面積によって定量化した。開裂したクエンチ−放出蛍光基質は、典型的には、５.７分の保持時間で溶離された。
Figure 2019108381
Figure 2019108381
Figure 2019108381
Figure 2019108381
 a 製剤あたりの添加した再標的クロストリジウム毒素の量は１〜５μｇであった。製剤の総体積は、１.０ｍＬであった。
b シュークロース、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マンニトール、イヌリン、デキストラン３Ｋ、デキストラン４０Ｋ、ＰＥＧ３５５０、ＰＶＰ１７、ポロキサマー１８８およびグリシンについて、添加した賦形剤の単位量は、ｍｇである。ポリソルベート２０およびポリソルベート８０について、添加した賦形剤の単位量はｍＬである。
c 緩衝剤の略語は以下のとおりである：ＳＣ、クエン酸ナトリウム緩衝剤；ＰＰ、リン酸カリウム緩衝剤；ＨＢ、ヒスチジン緩衝剤；ＨＰＢ、ヒスチジンリン酸緩衝剤。
d 回収は、パーセンテージとして表され、還元後に測定した活性成分の効力を、製剤に添加する前に測定した活性成分の効力で割ることによって算出する。３ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。１２ヶ月は、所定の温度で製剤を最小限に貯蔵した期間の長さである。
e 最初の数字は、インビトロ軽鎖アッセイから算出された数値であり、二番目の数字は、ＥＬＩＳＡから算出された数値である。
f 周囲温度は約１８℃〜約２２℃である。
g 氷点下の温度は約−５℃〜約−２０℃である。
再標的クロストリジウム毒素の回収効力を判定するために、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して回収されたクロストリジウム毒素活性成分の総量によって還元製剤をアッセイした。ＥＬＩＳＡアッセイに使用されるマイクロタイタープレートは、（ＢｏＮＴ／Ａ抗体におけると同じ再標的クロストリジウム毒素のエピトープの存在に起因して）１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａに対する一次ポリクローナル抗体（捕捉抗体）で被覆される。２〜８℃で１４〜７２時間９６ウェルプレート上で抗体を被覆した後、試験試料を添加し、軽く振盪しながら２５℃で９０分間インキュベートする。二次抗体（ビオチン分子と結合した捕捉抗体）を添加し、軽く振盪しながら２５℃で６０分間インキュベートした。１時間インキュベートし、数回の洗浄工程の後、該プレートにストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲートを添加し、軽く振盪しながら２５℃でさらに６０分間インキュベートする。最終工程において、数回の洗浄工程の後、発色基質溶液（ＴＭＢ−基質）を添加し、アッセイが発色するまで、室温で５〜７分間インキュベートする。ＵＶ／可視分光法によって４５０ｎｍでの吸光度を測定する。試験試料の吸光度を標準曲線と比較し、タンパク質濃度を測定する。
回収は、パーセンテージとして表され、貯蔵した還元製剤中のクロストリジウム毒素活性成分の効力を、試験溶液に添加する前に測定した活性クロストリジウム毒素成分の効力で割って算出される。再標的クロストリジウム毒素を含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体および１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａと同様に、製剤が２つ以上の非タンパク質賦形剤を含む場合に安定であり得た。
結果は、糖および界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物がクロストリジウム毒素活性成分の有効な初期回収効力を生じたことを示した。例えば、シュークロースまたはラクトースをポロキサマー１８８と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体（実施例１〜３を参照）および１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ（実施例４）について得られた結果と類似の再標的クロストリジウム毒素の回収効力を生じた。別の例として、シュークロースをポリソルベート２０と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、再標的クロストリジウム毒素の高い回収効果を生じた（表８）。さらに別の例として、シュークロースをポロキサマー１８８と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、再標的クロストリジウム毒素の高い回収効力を生じた（表８）。さらに別の例として、トレハロースをポロキサマー１８８と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、再標的クロストリジウム毒素の高い回収効力を生じた（表８）。別の例として、トレハロースをＰＥＧ３５５０およびポリソルベート２０と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、再標的クロストリジウム毒素の高い回収効力を生じた（表８）。
結果は、また、非タンパク質ポリマーおよび界面活性剤を含むクロストリジウム毒素医薬組成物がクロストリジウム毒素活性成分の有効な初期回収効力を生じたことを示した。例えば、デキストラン４０ＫまたはＰＥＧ３５５０をポロキサマー１８８と合わせて含むクロストリジウム毒素医薬組成物は、９００ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ毒素複合体（実施例１〜３を参照）および１５０ｋＤのＢｏＮＴ／Ａ（実施例４）について得られた結果と類似の再標的クロストリジウム毒素の回収効力を生じた。

Claims (10)

  1. クロストリジウム毒素活性成分、有効な量の糖賦形剤および有効な量の界面活性剤賦形剤を含む、動物タンパク質不含固体形態クロストリジウム毒素医薬組成物。
  2. 糖賦形剤が単糖、二糖または三糖である、請求項１記載の組成物。
  3. 単糖がシュークロースまたはトレハロースである、請求項１記載の組成物。
  4. 界面活性剤賦形剤がポロキサマー、ポリソルベート、ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、またはポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルである、請求項１記載の組成物。
  5. クロストリジウム毒素活性成分が、周囲温度または氷点下の温度で貯蔵した場合に少なくとも１年間安定である、請求項１記載の組成物。
  6. 組成物が約ｐＨ５.５〜約ｐＨ６.５に緩衝化される、請求項１記載の組成物。
  7. 組成物がクエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、またはヒスチジンリン酸緩衝剤を使用して緩衝化される、請求項６記載の組成物。
  8. 組成物が、さらに、有効な量の塩化ナトリウムを含む、請求項１記載の組成物。
  9. 組成物が、さらに、有効な量の非タンパク質ポリマー賦形剤を含む、請求項１記載の組成物。
  10. 非タンパク質ポリマー賦形剤がデキストラン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、ポリビニルピロリドン、ポリ酢酸ビニル、イヌリン、デンプン、またはデンプン誘導体である、請求項９記載の組成物。
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