JP2019088900A5 - - Google Patents
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Description
これらの方法は、低エンドトキシンアルギン酸の1価金属塩を含有し、流動性を有する組成物を、椎間板変性抑制または髄核再生を必要とする対象の椎間板の髄核部位に適用し、適用した組成物の一部を硬化することを含む。前記の方法は、本発明の組成物を髄核部位へ適用する前に、髄核の少なくとも一部を除去する工程を含んでもよい。
1−(2)アルギン酸ビーズの作製、培養
下記表1に示す(A)低エンドトキシン処理されたアルギン酸ナトリウム(持田製薬(株))と、(B)食品グレード(commercial grade)のアルギン酸ナトリウム(和光純薬工業(株)、199−09961)の2種類のアルギン酸ナトリウムとをそれぞれ用いて、ヒト髄核細胞を培養し、比較を行った。
下記表1に示す(A)低エンドトキシン処理されたアルギン酸ナトリウム(持田製薬(株))と、(B)食品グレード(commercial grade)のアルギン酸ナトリウム(和光純薬工業(株)、199−09961)の2種類のアルギン酸ナトリウムとをそれぞれ用いて、ヒト髄核細胞を培養し、比較を行った。
2−(2)低エンドトキシンアルギン酸ナトリウム溶液の充填
低エンドトキシンアルギン酸ナトリウムは、次の2種類を用いた。いずれもエンドトキシン含量は、50EU/g未満であった。各低エンドトキシンアルギン酸ナトリウムの見掛け粘度及び重量平均分子量は表2のとおりである。アルギン酸ナトリウムの見掛け粘度測定は、日本薬局方(第16版)の粘度測定法に従い、回転粘度計法(コーンプレート型回転粘度計)を用いて測定した。具体的な測定条件は以下のとおりである。試料溶液の調製は、MilliQ水を用いて行った。測定機器は、コーンプレート型回転粘度計(粘度粘弾性測定装置レオストレスRS600(Thermo Haake GmbH)センサー:35/1)を用いた。回転数は、1w/w%アルギン酸ナトリウム溶液測定時は1rpm、2w/w%アルギン酸ナトリウム溶液測定時は0.5rpmとした。読み取り時間は、1w/w%溶液測定時は、2分間測定し、開始1分から2分までの平均値とし、2w/w%溶液測定時は、2.5分間測定し、開始0.5分から2.5分までの平均値とした。3回の測定の平均値を測定値とした。測定温度は20℃とした。
低エンドトキシンアルギン酸ナトリウムは、次の2種類を用いた。いずれもエンドトキシン含量は、50EU/g未満であった。各低エンドトキシンアルギン酸ナトリウムの見掛け粘度及び重量平均分子量は表2のとおりである。アルギン酸ナトリウムの見掛け粘度測定は、日本薬局方(第16版)の粘度測定法に従い、回転粘度計法(コーンプレート型回転粘度計)を用いて測定した。具体的な測定条件は以下のとおりである。試料溶液の調製は、MilliQ水を用いて行った。測定機器は、コーンプレート型回転粘度計(粘度粘弾性測定装置レオストレスRS600(Thermo Haake GmbH)センサー:35/1)を用いた。回転数は、1w/w%アルギン酸ナトリウム溶液測定時は1rpm、2w/w%アルギン酸ナトリウム溶液測定時は0.5rpmとした。読み取り時間は、1w/w%溶液測定時は、2分間測定し、開始1分から2分までの平均値とし、2w/w%溶液測定時は、2.5分間測定し、開始0.5分から2.5分までの平均値とした。3回の測定の平均値を測定値とした。測定温度は20℃とした。
Claims (11)
- 対象の髄核部位に適用するように用いられ、適用時に流動性を有する、低エンドトキシンアルギン酸の1価金属塩を含有する、椎間板組織再生用組成物。
- 対象の髄核部位に適用するように用いられ、適用時に流動性を有する、低エンドトキシンアルギン酸の1価金属塩を含有する、椎間板変性抑制用組成物。
- 対象の髄核部位に適用するように用いられ、適用時に流動性を有する、低エンドトキシンアルギン酸の1価金属塩を含有する、臨床症状緩和用組成物。
- 前記流動性を有する組成物の見掛け粘度が、コーンプレート型粘度計を用いた測定により、500mPa・s〜6000mPa・sであり、前記測定の測定温度が20℃であり、回転数が0.5rpmであり、読み取り時間は2.5分間測定し、開始0.5分から2.5分までの平均値とする、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記低エンドトキシンアルギン酸の1価金属塩は、GPC−MALS法により測定された重量平均分子量(絶対分子量)が8万以上である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、低エンドトキシンアルギン酸の1価金属塩の濃度が0.5w/w%〜5w/w%である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記流動性を有する組成物は、組成物を20℃で1時間静置した後に、21Gの注射針で注入できる流動性を有する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、細胞を含有しない、請求項1〜7のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、細胞および細胞の成長を促進する因子からなる群から選択される少なくとも1種と組み合わせて適用される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、適用前に乾燥状態または溶液状態である、請求項1〜9のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記乾燥状態の低エンドトキシンアルギン酸の1価金属塩が、凍結乾燥体である、請求項10に記載の組成物。
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