JP2019038796A - ５−フルオロウラシル化学療法における［６ｒ］−ｍｔｈｆの複数回ボーラス投与 - Google Patents

Abstract

【課題】癌などの固形腫瘍の治療方法の提供。【解決手段】以下のａ）〜ｅ）の投与計画による方法：ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ２（ＢＳＡ）の５−ＦＵのＩＶボーラス投与を行う。ｂ）その後同時に、又は１０分〜４時間後に、互いに約１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上の５〜１０００ｍｇ／ｍ2の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（［６Ｒ］−ＭＴＨＦ）のＩＶボーラス投与を行う。ｃ）５−ＦＵを４６時間ないし第２日目の終わりまで持続注入によって投与する。ｄ）任意に、第１日目が終わる迄に、５〜１０００ｍｇ／ｍ2の［６Ｒ］−ＭＴＨＦのＩＶボーラス投与を１回行う。ｅ）任意に、第２日目に５〜１０００ｍｇ／ｍ2の［６Ｒ］−ＭＴＨＦのＩＶボーラス投与を１又は複数回行う。【選択図】図２

Description

本発明は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）化学療法との併用による、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（［６Ｒ］−ＭＴＨＦ）の複数回ボーラス投与を伴う、癌等のヒトの固形腫瘍の治療に関する。

５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は１９５７年に初めて導入され、乳癌、頭頸部腫瘍、及び消化器腫瘍等の広範な固形腫瘍の治療において未だ重要な位置を占めている。

５−ＦＵは合理的に設計された抗癌剤の例である。ラット肝腫瘍におけるウラシル利用の観察により、この核酸塩基（ＲＮＡの核酸においては４種の核酸塩基が存在する）（非特許文献１）の利用が、非悪性組織におけるよりも腫瘍においてより顕著であることが示された。このことは、ウラシル利用の酵素経路が悪性の細胞と正常の細胞とで異なっていることを意味している（非特許文献２）。その後、５−ＦＵが代謝拮抗薬として合成された（非特許文献３）。５−ＦＵにおいてはウラシルの５位の水素原子がサイズの類似したフッ素に置き換えられており、５−ＦＵは酵素の活性部位を占有して悪性細胞の代謝をブロックするように設計された。

５−ＦＵ単独での全奏効率は１０〜１５％と極めて限定的であり（非特許文献４）、５−ＦＵの抗癌活性を高めるためのモジュレーション戦略が開発された。最も広く用いられる戦略は、フォリン酸のカルシウム塩であるロイコボリンの同時投与である。ロイコボリン（ＬＶ）は、¹⁾ＬＶの活性代謝物である５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、²⁾５−ＦＵの活性代謝物であるＦｄＵＭＰ、及び³⁾チミジル酸生成酵素、から形成される構造である三元複合体の安定化剤として働く。この三元複合体は、ＤＮＡ合成に必要な酵素であるチミジル酸生成酵素（非特許文献５）を阻害する。ＬＶを５−ＦＵに加えることにより、全奏効率が２０％超に増加した（非特許文献５）。

乳癌は、世界的に、女性において最も高頻度で診断される癌であり、癌関連死の主因となっている（Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｕｋ．ｏｒｇ／ｃａｎｃｅｒ−ｉｎｆｏ／ｃａｎｃｅｒｓｔａｔｓ／ｗｏｒｌｄ／ｂｒｅａｓｔ−ｃａｎｃｅｒ−ｗｏｒｌｄ／）。早期発見の増加にも関わらず、米国で乳癌と診断される女性のうち５パーセントまでが初診時に転移病変を有する。さらには、診断時に早期の非転移乳癌であった女性のうち、３０パーセントまでで遠隔転移が発生する（非特許文献６）。転移性乳癌は根治不可能であるが、新規の全身療法の導入に伴い、生存率は大幅に改善されてきている（非特許文献７〜９を参照のこと）。

転移性乳癌の治療の目標は、癌関連症状の緩和による生存期間の延長と生活の質の改善である。細胞傷害性化学療法（５−ＦＵの使用を含む）は、ホルモン受容体陰性患者、症候性ホルモン受容体（ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を有し、急速な疾患進行又は臓器を巻き込んだ大型の腫瘍を有する患者において特に用いられる（非特許文献１０）。５−ＦＵは通常、シクロホスファミド及びメトトレキサートと併用される（ＣＭＦ）。奏効率はおよそ２０％であり、ＯＳはおよそ２０ヶ月である（非特許文献１１）。

５−ＦＵは、進行性及び再発性の頭頸部扁平上皮癌の治療にも用いられる。この患者群の予後は概して悪く、ほとんどの研究において生存期間中央値が６〜９ヶ月となっている。５−ＦＵは白金化合物を用いた併用療法において主に用いられる。奏効率はおよそ３０％であるが、生存期間はおよそ６ヶ月で依然として低い（非特許文献１２及び１３を参照のこと）。

しかし、５−ＦＵを基盤としたレジメンが広く用いられているのは消化器腫瘍である。結腸直腸癌（ＣＲＣ）は男性において３番目に多く（全体の１０％）、女性において２番目に多い癌であり（９．２％）、２０１２年内に世界で１３０万を超える症例（男性で７４６，０００例、女性で６１４，０００例）が報告されている。ＣＲＣの罹患率を地理的に見ると、世界で大きく異なっており、男性と女性では、この地理的なパターンが極めて似通っている。罹患率は両性とも世界で１０倍の差があり、推定された罹患率が最も高いのはオーストラリア／ニュージーランド（ＡＳＲは男性及び女性において、それぞれ１００，０００人あたり４４．８人及び３２．２人）、最も低いのは西アフリカ（１００，０００人あたり４．５人及び３．８人）である。年齢とともに罹患率は増加し、高齢集団で最も高くなる：１００，０００人あたりでは、６０〜６４歳で６７．４人、６５〜６９歳で９５．１人、７０〜７４歳で１２７．８人、７５歳以上で１９６．２人である（非特許文献１４）。

罹患患者のうち約４０〜５０％で転移病変を生じ、ＣＲＣを原因とした死亡は年間５０万例以上報告されている（非特許文献１５）。実際、２０１２年内には、ＣＲＣ単独による死亡が６９４，０００例（全体の８．５％）を占めた（非特許文献１６）。

ＣＲＣ患者は通常、外科的な処置を受け、それは多くの場合に根治目的である。実際、手術は、未だ下部消化管の悪性腫瘍に対する第一治療法であり、標準切除は早期癌に必要とされる唯一の療法である（非特許文献１７）。腫瘍の病期進行に伴い、浸潤の深度とリンパ節転移の問題から、手術単独での根治の機会は減少し、局所再発率が増加する。このような場合、手術は、補助療法と併用して行われるか、又は症状の緩和コントロールのためだけに行われることがある。

補助療法は、転移性ＣＲＣにおける治療成績を改善し、生存期間の延長をもたらすことが示されている（非特許文献１８）。ＣＲＣの標準的な第一選択肢の補助療法として、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）剤の単独及び併用療法（非特許文献１９）が挙げられる。通常、５−ＦＵによる治療は、転移性結腸直腸癌において５−ＦＵの治療効果を有意に増強する、高用量の葉酸（又はロイコボリン、ＬＶ）との併用で行われる。実際、転移性疾患でＬＶによる５−ＦＵのモジュレーションを行うことにより、疾患の無増悪期間（ＴＴＰ）の延長が見られた（非特許文献２０）。

大腸腫瘍に対しては、５−ＦＵを単剤療法として与えた際の本来の奏効率は、約１０％しかなかった。ロイコボリン（ＬＶ）を加えた場合、奏効率は２１％に改善された（非特許文献２１）。しかし、ＬＶは活性代謝物である［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（メチレンＴＨＦ）に変換される必要があり、続いてこれが、ｄＵＭＰのｄＴＭＰへの変換の反応において、デオキシウリジン一リン酸（ｄＵＭＰ）及び標的酵素であるチミジル酸生成酵素（ＴＳ）と三元複合体を形成する（非特許文献２２）。この反応は、５−ＦＵのフッ素化代謝物であるＦｄＵＭＰがｄＵＭＰの代わりに前記複合体に結合すると阻害される（非特許文献２３）。このように、ＬＶは抗腫瘍効果を有していないが、前記三元複合体を安定化するメチレンＴＨＦを大量に提供することで、５−ＦＵの効果を増強する（非特許文献２４）。この阻害によって、増殖速度が速い腫瘍上皮細胞等の細胞が最も影響を受ける。これにより、それら細胞内のＤＮＡ合成が抑制され、アポトーシスによる細胞死がもたらされ得る。

上記で必要なＬＶからメチレンＴＨＦへの代謝的活性化には個人差が生ずる傾向があり、これが原因となって、単独療法として投与される５−ＦＵの奏効率が２１％にまでしか改善しなかった可能性がある。

還元葉酸であるフォトレキソリンカルシウム（ＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標））（（ｄｌ）−５，１０，−メチレンプテロイル−モノグルタミン酸カルシウム塩、又は［６Ｒ，Ｓ］−５，１０−メチレン−ＴＨＦ Ｃａ塩）はラセミ体メチレンＴＨＦとしても知られ、ＬＶの代わりに該還元葉酸メチレンＴＨＦを直接投与すると有意な臨床活性上の利益が得られる可能性があるという推定に基づき、ＬＶの代替薬となることが示唆されている。ＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）は２種のジアステレオマーの１：１混合物である（非特許文献２５）。［６Ｒ］−異性体は直接活性のあるＴＳの補基質であるため、臨床的安全性及び有効性の両面で患者間及び患者内のばらつきが少なく、ロイコボリンの代わりにＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）を投与する事は有利であると予測された。

実際、未治療の転移性結腸直腸癌における第ＩＩ相試験において、ＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）の奏効率は３５％であり（非特許文献２６）、別の第Ｉ／ＩＩ相臨床試験では、５−ＦＵをＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）と併用した際、膵臓癌において、安定状態又は腫瘍反応として定義される臨床的有用性が４０％の患者に見られることが示された（非特許文献２７）。しかし、不要な肝臓解毒負荷を示すことは別にしても、非天然の（６Ｓ）−異性体は、ＴＳに対する補基質としての効果に関して天然の［６Ｒ］−異性体の部分的拮抗阻害剤である（非特許文献２８）。さらに、第ＩＩｂ相試験においては、試験群間で有効性又は安全性に有意差が見出されなかったことから、結腸直腸癌におけるＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）がロイコボリンと比べてより有効であることは示されず、計画された結腸直腸癌の第ＩＩＩ相試験は完了前に中止となった（非特許文献２９）。したがって、三元複合体を安定化し、ＴＳの阻害をロイコボリンで現在達成可能な水準よりも高めることができる、改善された葉酸増強５−ＦＵ治療プロトコルに対する需要が未だ存在する。

定義
ここで用いられる、ロイコボリン（登録商標）又はフォリン酸という語は、ともに５−ホルミルテトラヒドロ葉酸、すなわちテトラヒドロ葉酸の５−ホルミル誘導体のことを意味する。フォリン酸は２個の不斉中心を有する。市販のロイコボリン（ＬＶ）は、右旋性及び左旋性ジアステレオマー（それぞれｄ−ロイコボリン（ｄ−ＬＶ；（６Ｒ，２’Ｓ）−配置）及びｌ−ロイコボリン（ｌ−ＬＶ；（６Ｓ，２’Ｓ）−配置））の１：１混合物からなり、（ｄ，ｌ−ＬＶ）とも呼ばれることがある。

ここで用いられる、レボロイコボリン（Ｌｅｖｏｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）という語は、薬理学的に活性のあるレボ異性体ｌ−ＬＶ（又はＬＬＶ）のみを含む市販品のことを表す。ｉｎ ｖｉｔｒｏでは、ｌ−ＬＶは、生物学的に利用可能なメチル−テトラヒドロ葉酸型へと速やかに変換されることが示されているが、右旋型ｄ−ＬＶ（ＤＬＶ）は腎臓でゆっくりと排泄される。しかし、ロイコボリンとレボロイコボリンは薬物動態学的に同一であることが示されており、有効性又は副作用に限定的な違いはあるものの、互換的に使用可能である（Ｋｏｖｏｏｒ ｅｔ ａｌ， Ｃｌｉｎ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ ８ ２００−６ （２００９））。

ここで用いられる、ＭＴＨＦ又はメチレンＴＨＦという語は、ともに５，１０−メチレン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のことを表す。

ここで用いられる、ラセミ体メチレンＴＨＦ、ＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）、及び［６Ｒ，Ｓ］−５，１０−メチレンＴＨＦという語は、全て［６Ｒ，Ｓ］−５，１０−メチレン−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の１：１ジアステレオマー混合物のことを表す。

ここで用いられる、［６Ｒ］−５，１０−ＭＴＨＦという語は、単一のジアステレオマーである［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸のことを表す。これは、ロイコボリン及びレボロイコボリンを含む、現在臨床的に用いられる全ての葉酸ベースの薬剤の主要な活性代謝物であり、代謝活性化を必要としない。

ここで用いられる、ＩＶ又はｉ．ｖ．という語は、ともに静脈内（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ）のことを表す。

ここで用いられる、ＤＬＴという語は、用量制限毒性（ｄｏｓｅ−ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）のことを表す。用量制限毒性（ＤＬＴ）は、少なくとも医薬品（すなわち１種又は複数種の化学療法剤）と関連する可能性があると評価される医療上の出来事であり、治療薬の用量又は強度をさらに増加することができない程度、又は任意の用量における治療の継続が妨げられる程度、に深刻なものである。

ここで用いられる、ＯＲＲという語は、客観的奏効率（Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｒａｔｅ）、すなわち所定の量の腫瘍量の減少が見られた患者の割合のことを表す。これは次のように算出される：ＯＲＲ ＝ ＲＥＣＩＳＴ １．１に従った部分奏効と完全奏効の和（ＲＥＣＩＳＴ １．１は公表済の基準の組み合わせであり、治療中に癌患者の腫瘍が進行した際に、その反応が以下のように定義される）。
完全奏効（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ；ＣＲ）：
・全ての標的病変の消滅。いずれの病的リンパ節（標的又は非標的を問わず）も短径１０ｍｍ未満に減少している必要がある。
部分奏効（Ｐａｒｔｉａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ；ＰＲ）：
・ベースライン径和を基準とした際に、標的病変の直径の和が少なくとも３０％減少。
進行（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＰＤ）
・試験中の最小和（試験中にベースライン和が最小であった場合はそれを含む）を基準とした際に、標的病変の直径の和が少なくとも２０％の増加。
・上記の２０％の相対的な増加に加え、上記の和が少なくとも５ｍｍの絶対的な増加を示す必要がある。（注意：１又は複数箇所に新規病変が現れた場合も進行と見なす）。
安定（Ｓｔａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＳＤ）
・試験中の最小径和を基準とした際に、ＰＲと評価するのに充分な退縮も、ＰＤと評価するのに充分な増加も無い。
（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡ， Ｔｈｅｒａｓｓｅ Ｐ， Ｂｏｇａｅｒｔｓ Ｊ， Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＬＨ， Ｓａｒｇｅｎｔ Ｄ， Ｆｏｒｄ Ｒ， ｅｔ ａｌ． Ｎｅｗ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ： ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ （ｖｅｒｓｉｏｎ １．１）． Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ． ２００９ Ｊａｎ； ４５（２）：２２８−４７）

ここで用いられる、ｄＵという語は、デオキシウリジン（ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）のことを表す。

ここで用いられる、ＢＳＡという語は、体表面積（Ｂｏｄｙ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｒｅａ）のことを表す。

ここで用いられる、増殖性疾患という語は、細胞の過剰増殖と細胞マトリクスの代謝回転が、いくつかの疾患、例えば癌、アテローム性動脈硬化、関節リウマチ、乾癬、特発性肺線維症、強皮症、肝硬変、クローン病、及び潰瘍性大腸炎等の病因に有意に関与しているという統一概念のことを表す。

Ｂｅｒｇ ＪＭ； Ｔｙｍｏｃｚｋｏ ＪＬ； Ｓｔｒｙｅｒ Ｌ （２００２）． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （５ｔｈ ｅｄ．）， ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ． ｐｐ． １１８−１９， ７８１−８０８． ＩＳＢＮ ０−７１６７−４６８４−０． ＯＣＬＣ １７９７０５９４４ Ｒｕｔｍａｎ ＲＪ ｅｔ ａｌ． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ ２−ａｃｅｔｙｌａｍｉｎｏｆｌｕｏｒｅｎｅ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ． ＩＩＩ． Ｔｈｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｒａｃｉｌ ２−14Ｃ ｂｙ ｐｒｅｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｒａｔ ｈｅｐａｔｏｍａ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９５４； １４： １１９−１２３ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ． Ｆｌｕｏｒｉｎａｔｅｄ ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ， ａ ｎｅｗ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ． Ｎａｔｕｒｅ １９６７； １７９： ６６３−６６６ Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｐ．Ｇ．， Ｋａｙｅ Ｓ． Ｃａｐｃｅｔａｂｉｎｅ； ａ ｎｏｖｅｌ ａｇｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ． Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ２００１， １２： ６３９−６４６ Ｌｏｎｇｌｅｙ Ｄ．Ｂ． ｅｔ ａｌ． ５−Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ． ２００３ Ｍａｙ；３（５）：３３０−８． 総説］ Ｅａｒｌｙ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｉａｌｉｓｔｓ’ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ （ＥＢＣＴＣＧ）． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｏｎ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ａｎｄ １５−ｙｅａｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ： ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ ｔｒｉａｌｓ． Ｌａｎｃｅｔ ２００５； ３６５：１６８７ Ｃｈｉａ Ｓ．Ｋ．， Ｓｐｅｅｒｓ Ｃ．Ｈ．， Ｄ’ｙａｃｈｋｏｖａ Ｙ． ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｎｅｗ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ａｇｅｎｔｓ ｏｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｃｏｈｏｒｔ ｏｆ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ． Ｃａｎｃｅｒ ２００７； １１０：９７３ Ｇｅｎｎａｒｉ Ａ．， Ｃｏｎｔｅ Ｐ．， Ｒｏｓｓｏ Ｒ． ｅｔ ａｌ． Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｏｖｅｒ ａ ２０−ｙｅａｒ ｐｅｒｉｏｄ： ａ ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｐａｔｉｅｎｔ ｄａｔａ ｆｒｏｍ ｓｉｘ ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ ｓｔｕｄｉｅｓ． Ｃａｎｃｅｒ ２００５； １０４：１７４２ Ｄａｆｎｉ Ｕ．， Ｇｒｉｍａｎｉ Ｉ．， Ｘｙｒａｆａｓ Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｆｉｆｔｅｅｎ−ｙｅａｒ ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ Ｇｒｅｅｃｅ． Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ ２０１０； １１９：６２１ Ｗｉｌｃｋｅｎ Ｎ．， Ｈｏｒｎｂｕｃｋｌｅ Ｊ．， Ｇｈｅｒｓｉ Ｄ．； Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｌｏｎｅ ｖｅｒｓｕｓ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ａｌｏｎｅ ｆｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ． Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ Ｒｅｖ ２００３； ：ＣＤ００２７４７ Ｓｔｏｃｋｌｅｒ Ｍ．Ｒ．， Ｈａｒｖｅｙ Ｖ．Ｊ．， Ｆｒａｎｃｉｓ Ｐ．Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ ｖｅｒｓｕｓ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ， ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ， ａｎｄ ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ａｓ ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ａｄｖａｎｃｅｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１１； ２９：４４９８ Ｃｌａｖｅｌ Ｍ．， Ｖｅｒｍｏｒｋｅｎ Ｊ．Ｂ．， Ｃｏｇｎｅｔｔｉ Ｆ． ｅｔ ａｌ． Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ， ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ， ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ ａｎｄ ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ （ＣＡＢＯ） ｖｅｒｓｕｓ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ａｎｄ ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ （ＣＦ） ｖｅｒｓｕｓ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ （Ｃ） ｉｎ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ． Ａ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ＥＯＲＴＣ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ １９９４； ５：５２１ Ｆｏｒａｓｔｉｅｒｅ Ａ．Ａ．， Ｍｅｔｃｈ Ｂ．， Ｓｃｈｕｌｌｅｒ Ｄ．Ｅ． ｅｔ ａｌ． Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｐｌｕｓ ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ａｎｄ ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ ｐｌｕｓ ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｖｅｒｓｕｓ ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｑｕａｍｏｕｓ−ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ： ａ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ ｓｔｕｄｙ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９９２； １０：１２４５］ Ｆｅｒｌａｙ Ｊ， Ｓｏｅｒｊｏｍａｔａｒａｍ Ｉ， Ｅｒｖｉｋ Ｍ， Ｄｉｋｓｈｉｔ Ｒ， Ｅｓｅｒ Ｓ， Ｍａｔｈｅｒｓ Ｃ， Ｒｅｂｅｌｏ Ｍ， Ｐａｒｋｉｎ ＤＭ， Ｆｏｒｍａｎ Ｄ， Ｂｒａｙ， Ｆ． ＧＬＯＢＯＣＡＮ ２０１２ ｖ１．０， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ： ＩＡＲＣ ＣａｎｃｅｒＢａｓｅ Ｎｏ． １１． Ｌｙｏｎ， Ｆｒａｎｃｅ： Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｇｅｎｃｙ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ； ２０１３ Ｊｅｍａｌ Ａ， Ｂｒａｙ Ｆ， Ｃｅｎｔｅｒ ＭＭ， Ｆｅｒｌａｙ Ｊ， Ｗａｒｄ Ｅ， Ｆｏｒｍａｎ Ｄ． Ｇｌｏｂａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ． ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ． ２０１１ Ｍａｒ−Ａｐｒ；６１（２）：６９−９０ Ｆｅｒｌａｙ Ｊ， Ｓｏｅｒｊｏｍａｔａｒａｍ Ｉ， Ｅｒｖｉｋ Ｍ， Ｄｉｋｓｈｉｔ Ｒ， Ｅｓｅｒ Ｓ， Ｍａｔｈｅｒｓ Ｃ， Ｒｅｂｅｌｏ Ｍ， Ｐａｒｋｉｎ ＤＭ， Ｆｏｒｍａｎ Ｄ， Ｂｒａｙ， Ｆ． ＧＬＯＢＯＣＡＮ ２０１２ ｖ１．０， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ： ＩＡＲＣ ＣａｎｃｅｒＢａｓｅ Ｎｏ． １１ ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］． Ｌｙｏｎ， Ｆｒａｎｃｅ： Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｇｅｎｃｙ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ； ２０１３ Ｎｅｌｓｏｎ Ｈ， Ｐｅｔｒｅｌｌｉ Ｎ， Ｃａｒｌｉｎ Ａ， Ｃｏｕｔｕｒｅ Ｊ， Ｆｌｅｓｈｍａｎ Ｊ， Ｇｕｉｌｌｅｍ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ２０００ ｆｏｒ ｃｏｌｏｎ ａｎｄ ｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ． Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． ２００１ Ａｐｒ １８；９３（８）：５８３−９６ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ Ｄ， Ａｔｋｉｎ Ｗ， Ｌｅｎｚ ＨＪ， Ｌｙｎｃｈ ＨＴ， Ｍｉｎｓｋｙ Ｂ， Ｎｏｒｄｌｉｎｇｅｒ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ． Ｌａｎｃｅｔ． ２０１０ Ｍａｒ ２０；３７５（９７１９）：１０３０−４７ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ Ｄ （２０１０） Ｐｅｔｒｅｌｌｉ Ｎ， Ｄｏｕｇｌａｓｓ ＨＯ Ｊｒ， Ｈｅｒｒｅｒａ Ｌ， Ｒｕｓｓｅｌｌ Ｄ， Ｓｔａｂｌｅｉｎ ＤＭ， Ｂｒｕｃｋｎｅｒ ＨＷ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｗｉｔｈ ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ： ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｔｒｉａｌ． Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｔｕｍｏｒ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ． １９８９ Ｏｃｔ；７（１０）：１４１９−２６ Ｔｈｉｒｉｏｎ Ｐ， Ｍｉｃｈｉｅｌｓ Ｓ， Ｐｉｇｎｏｎ ＪＰ， Ｂｕｙｓｅ Ｍ， Ｂｒａｕｄ ＡＣ， Ｃａｒｌｓｏｎ ＲＷ， Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ Ｍ， Ｓａｒｇｅｎｔ Ｐ， Ｐｉｅｄｂｏｉｓ Ｐ （２００４） Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｂｙ ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ： ａｎ ｕｐｄａｔｅｄ ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２２（１８）：３７６６−３７７５ Ｊａｒｍｕｌａ Ａ， Ｃｉｅｐｌａｋ Ｐ， Ｍｏｎｔｆｏｒｔ ＷＲ （２００５） ５，１０−Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ−５，６，７，８−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ ｕｐｏｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ： ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｃｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｉｎｕｕｍ ｓｏｌｖｅｎｔ ｓｔｕｄｉｅｓ． Ｊ Ｃｏｍｐｕｔ Ａｉｄｅｄ Ｍｏｌ Ｄｅｓ １９（２）：１２３−１３６ Ｐａｒｋｅｒ ＷＢ， Ｃｈｅｎｇ ＹＣ （１９９０） Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ４８（３）：３８１−３９５ Ｐｏｒｃｅｌｌｉ Ｌ， Ａｓｓａｒａｆ ＹＧ， Ａｚｚａｒｉｔｉ Ａ， Ｐａｒａｄｉｓｏ Ａ， Ｊａｎｓｅｎ Ｇ， Ｐｅｔｅｒｓ ＧＪ （２０１１） Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｆｏｌａｔｅ ｓｔａｔｕｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ １２（１０）：９７５−９８４ Ｏｄｉｎ， Ｅ．， Ｃａｒｌｓｓｏｎ， Ｇ．， Ｆｒｏｓｉｎｇ， Ｒ．， Ｇｕｓｔａｖｓｓｏｎ， Ｂ．， Ｓｐｅａｒｓ， Ｃ．Ｐ．， Ｌａｒｓｓｏｎ， Ｐ．Ａ．， １９９８． Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｒｅｄｕｃｅｄ ｆｏｌａｔｅｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｖｅｓｔ． １６， ４４７−４５５ Ｓａｉｆ， Ｍ．Ｗ， Ｍｅｒｒｉｔｔ， Ｊ， Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｊ， Ｓｔｅｗａｒｔ Ｊ．， Ｓｃｈｕｐｐ， Ｊ， ２００６． Ｐｈａｓｅ ＩＩＩ Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ ｔｏ Ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＣｏＦａｃｔｏｒ(登録商標)／５−Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ／Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ Ｖｅｒｓｕｓ Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ／５−Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ／ Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ａｓ Ｉｎｉｔｉａｌ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ， Ｖｏｌ． ６， Ｎｏ． ３， ２２９−２３４， ２００６ Ｓａｉｆ， Ｍ．Ｗ．， Ｍａｋｒｉｌｉａ Ｎ．， Ｓｙｒｉｇｏｓ Ｋ．， ２０１０． ＣｏＦａｃｔｏｒ： Ｆｏｌａｔｅ Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ５−Ｆｌｕｏｕｒａｃｉｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ． １−５ Ｌｅａｒｙ， Ｒ．Ｐ．， Ｇａｕｍｏｎｔ， Ｙ．， Ｋｉｓｌｉｕｋ， Ｒ．Ｌ．， １９７４． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉａｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． ５６， ４８４−４８８ プレスリリース： ＡＤＶＥＮＴＲＸ Ｐｒｏｖｉｄｅｓ Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ Ｃｏｆａｃｔｏｒ Ｐｒｏｇｒａｍ． Ｎｏｖ ２， ２００７

近年、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（［６Ｒ］−５，１０−ＭＴＨＦ）の安定な製剤が開発された。これはＭＴＨＦの天然のジアステレオマーの安定な製剤である。先に述べたように、［６Ｒ］−ＭＴＨＦはロイコボリン（ＬＶ）の代謝産物でもある。ＬＶとは異なり、［６Ｒ］−ＭＴＨＦはさらなる代謝を受ける必要がなく、ＦｄＵＭＰ−ＴＳ三元複合体の形成に直接関与すると考えられる。

本発明により、驚くべき事に、５−ＦＵの初回投与と、それに続く各ボーラス間に約１０〜６０分間の間隔を空けた［６Ｒ］−ＭＴＨＦの複数回ＩＶボーラス投与とを含んだ各種化学療法プロトコルに従って結腸直腸癌患者を治療することにより、６０〜８５％というＯＲＲ（客観的奏効率）が達成されることが発見された。

さらには、驚くべき事に、５−ＦＵとの同時投与において、［６Ｒ］−ＭＴＨＦを投与した際、等モル濃度のＬＶを投与した場合と比べ、２’−デオキシウリジン（ｄＵｒｄ）の血漿中濃度が増加することが発見された。このｄＵｒｄの上昇はＴＳ阻害のマーカーである（Ｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ８（１）： １０３−１０９）。

したがって、本発明の第一の局面においては、癌などの固形腫瘍の治療における、ヒトにおいて使用するための、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記治療は、
ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与する工程；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
ｂ）互いに約１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む工程；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与する工程；その後、
ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含んだ１回のＩＶボーラス投与を行う工程；及び、その後、
ｅ）第２日目に、任意に１又は複数回のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む工程；
を含み、工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復される。

本発明の第二の局面においては、癌などの固形腫瘍と診断されたヒトを治療する方法が提供され、前記方法は、
ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与すること；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
ｂ）互いに約１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含むこと；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与すること；その後、
ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含んだ１回のＩＶボーラス投与を行うこと；及び、その後、
ｅ）第２日目に、任意に１又は複数回のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含むこと；
を含み、工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復される。

さらには、驚くべき事に、本発明の第１又は第２の局面によって、［６Ｒ］−ＭＴＨＦ及び５−ＦＵを少なくとも８週間の治療期間にわたって投与することで、固形腫瘍のヒトにおける進行を防止又は遅延させることができ、治療開始後８〜１６週の間、前記固形腫瘍の統計的に有意な進行が見られないことが発見された。

本発明の第三の局面においては、癌などの固形腫瘍のヒトにおける進行を防止又は遅延させることにおける使用のための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記使用は、少なくとも計８週間の治療期間にわたり、工程ａ）〜ｅ）を本発明の第一の局面に従って行い、反復することを含む。

本発明の第四の局面においては、癌などの固形腫瘍と診断されたヒトにおける進行を防止又は遅延させるための方法が提供され、前記方法は、少なくとも計８週間の治療期間にわたり、工程ａ）〜ｅ）を本発明の第二の局面に従って行い、反復することを含む。

（Ｗｅｔｔｅｒｇｒｅｎ Ｙ， Ｔａｆｌｉｎ Ｈ， Ｏｄｉｎ Ｅ， Ｋｏｄｅｄａ Ｋ， Ｄｅｒｗｉｎｇｅｒ Ｋ； Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ （２０１５） ７５：３７−４７） 図１は、単純化した葉酸代謝の概略である。細胞内で、［６Ｒ］−ＭＴＨＦ（［６Ｒ］−５，１０−メチレンＴＨＦ）は、ｄＵＭＰからｄＴＭＰを合成する際のメチル基供与体として直接使用され得る。この反応はチミジル酸生成酵素（ＴＳ）によって触媒される。一方、アイソボリン（Ｉｓｏｖｏｒｉｎ）（登録商標）（レボ−ロイコボリン；５−ホルミルＴＨＦ）は２段階を経てメチレンＴＨＦに変換される必要がある。５−ＦＵを用いた治療により、ＴＳに結合するＦｄＵＭＰの形成を介したｄＴＭＰの合成が阻害される。ＤＨＦ：ジヒドロ葉酸、ＤＨＦＲ：ジヒドロ葉酸還元酵素、ＳＨＭＴ１：セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ１、ＭＴＨＦＲ：メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素、ＭＴＨＦＤ：メチレンテトラヒドロ葉酸脱水素酵素、ＭＴＨＦＳ：メテニルテトラヒドロ葉酸合成酵素。 図２は、ＩＳＯ−ＣＣ−００５試験からの８週間の治療後の結果である。１２名の第一選択患者及び１名の第二選択患者における、ＲＥＣＩＳＴ １．１に従った奏効率を示す。 図３は、５−ＦＵを３０又は６０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−ＭＴＨＦ（「６Ｒ ３０」又は「６Ｒ ６０」と表記）とともに投与した後のＴＳ阻害の増加を、３０ｍｇ／ｍ²のＬＬＶ（「ＬＬＶ ３０」と表記）を、薬理学的に活性のあるレボ−異性体ｌ−ＬＶを５０％含んだ６０ｍｇ／ｍ²のロイコボリン（ＬＶ）として投与した場合と比較したものである。 図４は、３０又は６０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−ＭＴＨＦ（「６Ｒ ３０」又は「６Ｒ ６０」と表記）とともに５−ＦＵを投与した後の血漿中ｄＵｒｄ濃度を、３０ｍｇ／ｍ²のＬＬＶ（薬理学的に活性のあるレボ−異性体ｌ−ＬＶを５０％含んだ６０ｍｇ／ｍ²のロイコボリン（ＬＶ）として投与）との比較における相対値で示したものである。 図５は、ＬＶと［６Ｒ］−ＭＴＨＦの等モル比較であり、５００ｍｇ／ｍ²の５−ＦＵのボーラス注入と、¹⁾薬理学的に活性のあるレボ−異性体ｌ−ＬＶを５０％含んだ６０ｍｇ／ｍ²のロイコボリン（ＬＶ）（「ＬＶ３０」と表記）又は²⁾３０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−ＭＴＨＦ（「Ｍ３０」と表記）のボーラス注入と、の併用を行ってから２４時間後の血漿中ｄＵｒｄ濃度の増加量を示したものである。増加量は、ＬＶサイクル（ｎ＝４８）及び６Ｒ−ＭＴＨＦサイクル（ｎ＝１８）に対して、２４時間（ｔ₂₄）の時点の血漿中ｄＵｒｄ濃度から、注入直前（ｔ₀）の血漿中ｄＵｒｄ濃度を差し引いた値として個別に算出した。［６Ｒ］−ＭＴＨＦ及びｌ−ＬＶの分子量は等モル比較の基盤として充分に近いものである。群間の相違をマン・ホイットニーＵ検定によって検定した（ｐ＜０．０５）。 図６は、５００ｍｇ／ｍ²の５−ＦＵのボーラス注入を、¹⁾薬理学的に活性のあるレボ−異性体ｌ−ＬＶを５０％含んだ６０ｍｇ／ｍ²のロイコボリン（ＬＶ）（「ＬＶ３０」と表記）、又は²⁾３０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−ＭＴＨＦ（「Ｍ３０」と表記）、又は³⁾６０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−ＭＴＨＦ（「Ｍ６０」と表記）、の投与と併用した際の、２４時間後の血漿中ｄＵｒｄ濃度の増加量の、［６Ｒ］−ＭＴＨＦ用量依存的増加である。増加量は、ｌ−ＬＶサイクル（３０ｍｇ／ｍ²、ｎ＝４８）及び［６Ｒ］−ＭＴＨＦサイクル（３０ｍｇ／ｍ²、ｎ＝１８；６０ｍｇ／ｍ²、ｎ＝１６）に対して、２４時間（ｔ₂₄）の時点の血漿中ｄＵｒｄ濃度から、注入直前（ｔ₀）の血漿中ｄＵｒｄ濃度を差し引いた値として個別に算出した。群間の相違は有意であり、フリードマンの２元配置分散分析によって検定した（ｐ＜０．０５）。 図７は、ＩＳＯ−ＣＣ−００５試験における１６週間の治療後の結果である。８名の第一選択患者における、ＲＥＣＩＳＴ １．１に従った奏効率を示す。 図８は、２００７年１０月１日に発表されたＡｄｖｅｎｔｒｘプレスリリースの抜粋であり、ロイコボリンをＣｏＦａｃｔｏｒ、すなわち［６Ｒ，Ｓ］−５，１０−メチレンＴＨＦと比較した第ＩＩＢ相試験の結果を示す。

５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は、恐らく世界で最も広く使用されている抗癌剤である。Ｓｐｅａｒｓほか（Ｓｐｅａｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４２：４５０ − ５６ （１９８２））は、マウス結腸癌に対する５−ＦＵの治療機序が、ＤＮＡ酵素であるチミジル酸生成酵素（ＴＳ）の完全阻害又はＴＳ活性の抑止であることを発見した。上述のように、葉酸（具体的にはテトラヒドロ葉酸塩）は、プリン、及びピリミジンであるデオキシチミジン一リン酸（ｄＴＭＰ）の合成における一炭素供与体（ｏｎｅ−ｃａｒｂｏｎ ｄｏｎｏｒｓ）として働き、５−ＦＵの作用をモジュレートするために使用することができる。図１も参照のこと。

５−ＦＵを基盤とする癌治療レジメンがいくつか開発されており、それらにおいては、「葉酸」が付随的に、又は治療の一部として他の手段により、投与される。これらのレジメンの多くは、ＦＯＬＦＯＸレジメンと呼ばれる併用化学療法のバリエーションである。これは、ｄｅ Ｇｒａｍｏｎｔによって改変されたオキサリプラチンを意味する「Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ ｄｅ Ｇｒａｍｏｎｔ」又はＯｘＭｄＧとしても知られ、次の薬剤からなる：
ＦＯＬ − フォリン酸（典型的にはロイコボリン又はホリナートカルシウム）
Ｆ − フルオロウラシル（５−ＦＵ）
ＯＸ − オキサリプラチン。

転移性ＣＲＣにおいて高頻度で投与される第一及び第二選択化学療法剤の例として、５−ＦＵ／葉酸、カペシタビン、イリノテカン、オキサリプラチン、ベバシズマブ、セツキシマブ、及びパニツムマブが挙げられ、これらは単独又は併用で使用され、併用の例として、ＦＯＬＦＯＸ（すなわちＬＶ／５−ＦＵ／オキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（すなわちＬＶ／５−ＦＵ／イリノテカン）、ＦＯＬＦＯＸ／ベバシズマブ、並びに５−ＦＵ−ＬＶ／ベバシズマブ及び／又はイリノテカン、が挙げられる。

具体例としてＦＯＬＦＯＸ４プロトコルが挙げられ、そこでは、第１日目と第２日目の５−ＦＵ（５−ＦＵ ４００ｍｇ／ｍ² ｉｖボーラス、次いで２２時間６００ｍｇ／ｍ² ｉｖ持続注入、第１日目及び第２日目）に先立って２００ｍｇ／ｍ²のロイコボリンが２時間ｉｖ投与される。このプロトコルはオキサリプラチン（エロキサチン）８５ｍｇ／ｍ²を第１日目にｉｖ投与することを含み、この治療をＱ２ｗ×１２サイクル行う（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ ＲＭ ｅｔ ａｌ． Ｐｏｏｌｅｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ ｐｌｕｓ ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ／ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｂｉｍｏｎｔｈｌｙ ｉｎ ｅｌｄｅｒｌｙ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２００６； ２４：４０８５を参照のこと）。

他の例として、ＦＯＬＦＯＸ６プロトコルが挙げられ、そこでは、第１日目の５−ＦＵに先立って４００ｍｇ／ｍ²のロイコボリンを２時間ｉｖ投与し、その後２４００ｍｇ／ｍ²を４６時間ｉｖ投与する。このプロトコルは、第１日目にオキサリプラチン（エロキサチン）１００ｍｇ／ｍ²を２時間ｉｖ投与することを含み、この治療をＱ２ｗ×１２サイクル行う（Ｔｏｕｒｎｉｇａｎｄ， Ｃ ｅｔ ａｌ． ＦＯＬＦＩＲＩ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ＦＯＬＦＯＸ６ ｏｒ ｔｈｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ： Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ＧＥＲＣＯＲ ｓｔｕｄｙ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２００４； ２２：２２９を参照のこと）。

他の例として、ＲＯＳＷＥＬＬ ＰＡＲＫ ＲＥＧＩＭＥＮが挙げられ、そこでは、ロイコボリン（５００ｍｇ／ｍ² ｉｖ）の２時間の持続注入による投与を開始した１時間後に、５−ＦＵを５００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡでｉｖボーラス投与する。この治療を８週間毎にＱｗ×６ｗｋｓ（週１回で６週間）、３〜４サイクルおこなう（Ｌｅｍｂｅｒｓｋｙ ＢＣ ｅｔ ａｌ． Ｏｒａｌ ｕｒａｃｉｌ ａｎｄ ｔｅｇａｆｕｒ ｐｌｕｓ ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｉｖ ５−ＦＵ ａｎｄ ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ ｉｎ ｓｔａｇｅ ＩＩ ａｎｄ ＩＩＩ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎ： ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｕｒｇｉｃａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ ｂｒｅａｓｔ ａｎｄ ｂｏｗｅｌ ｐｒｏｊｅｃｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｃ−０６． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２００６； ２４：２０５９を参照のこと）。

他のさらなる例としては、計画されたＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）の第ＩＩＩ相試験に対する試験設計（Ｓａｉｆ ２００６、上記）が挙げられ、そこでは、ＣｏＦａｃｔｏｒ（登録商標）を６０ｍｇ／ｍ²の用量で２〜３分間Ｉ．Ｖ．ボーラスで投与し、その２０分後に５−ＦＵを５００ｍｇ／ｍ²の用量でボーラスにて２〜３分間投与することを１週間毎に６週間行い、それを８週間毎に反復する。この試験においては、オキサリプラチンがベバシズマブに置き換えられ、５ｍｇ／ｋｇの用量で、持続Ｉ．Ｖ．にて９０分間、２週間毎に投与された。

典型的には、上記引用のものを含む現在用いられている治療プロトコルでは、５−ＦＵは常に葉酸アジュバント（例えばロイコボリン）よりも後に投与されるのに対し、本発明では５−ＦＵのボーラス投与から治療が開始される。上に述べたプロトコルを用いて達成される最高奏効率（ＯＲＲ）は３５〜４０％程度であった。

本発明によると、したがって驚くべき事に、最初に５−ＦＵを投与し、次いで［６Ｒ］−ＭＴＨＦの複数回ＩＶボ−ラス投与を、各ボーラス間に約１０〜６０分間の間隔を空けて行うことを含んだ各種化学療法プロトコルに従って結腸直腸癌患者を治療することで、６０〜８５％のＯＲＲ（客観的奏効率）が達成できることを見出した。

したがって、本発明の第一の局面においては、癌などの固形腫瘍のヒトにおける治療で使用するための、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記治療は、
ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与する工程；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
ｂ）互いに約１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む工程；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与する工程；その後、
ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸の１回のＩＶボーラス投与を行う工程；及び、その後、
ｅ）第２日目に、任意に１又は複数回のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む工程；
を含み、工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復される。

本発明の第一の局面の一態様においては、工程ａ）に先立って、第１日目の抗癌剤の投与を、ＩＶボーラス又は１〜４時間の注入のいずれかによって行う。

他の一態様においては、本発明の第一の局面に従った治療のために［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、工程ａ）に先立って、第１日目の抗癌剤の投与を、ＩＶボーラス又は１〜４時間の注入のいずれかによって行う。

本発明の第二の局面においては、癌などの固形腫瘍と診断されたヒトを治療する方法が提供され、前記方法は、
ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与すること；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
ｂ）互いに約１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含むこと；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与すること；その後、
ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含んだ１回のＩＶボーラス投与を行うこと；及び、その後、
ｅ）第２日目に、任意に１又は複数回のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含むこと；
を含み、工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復される。

また驚くべき事に、現在（２０１７年１２月）進行中の臨床研究においては、本発明の第１又は第２の局面に従って［６Ｒ］−ＭＴＨＦ及び５−ＦＵを少なくとも８週間の治療期間にわたって投与することで、固形腫瘍のヒトにおける進行を防止又は遅延させられることが発見された。治療開始後８〜１６週の間、前記固形腫瘍の統計的に有意な進行は見られなかった。

本発明の第三の局面においては、したがって、癌などの固形腫瘍のヒトにおける進行を防止又は遅延させることにおける使用のための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記使用は、少なくとも計８週間の治療期間にわたり、工程ａ）〜ｅ）を本発明の第一の局面に従って行い、反復することを含む。

第三の局面の好ましい一態様においては、固形腫瘍のヒトにおける進行を防止又は遅延させることにおける使用のための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、少なくとも計１６週間の治療期間にわたり、工程ａ）〜ｅ）を本発明の第一の局面に従って行い、反復し、治療開始後８〜１６週の間、前記固形腫瘍の統計的に有意な進行は見られない。

本発明の第四の局面においては、癌などの固形腫瘍と診断されたヒトにおける進行を防止又は遅延させるための方法が提供され、前記方法は、少なくとも計８週間の治療期間にわたり、工程ａ）〜ｅ）を本発明の第二の局面に従って行い、反復することを含む。

第四の局面の好ましい一態様においては、癌などの固形腫瘍と診断されたヒトにおける進行を防止又は遅延させるための方法が提供され、前記方法は、少なくとも計８週間の治療期間にわたり、工程ａ）〜ｅ）を本発明の第二の局面に従って行い、反復することを含み、治療開始後８〜１６週の間、前記固形腫瘍の統計的に有意な進行は見られない。

本発明のある具体的態様においては、癌などの固形腫瘍のヒトにおける治療で使用するための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記治療は、
ａ）第１日目に、４００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶボーラスにて投与する工程；その３０分後に、
ｂ）２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回３０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶ溶液で４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入する工程；及び、その後、
ｄ）第２日目に、２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回３０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；
を含み、全工程ａ）〜ｄ）は隔週で８サイクルまで、すなわち１６週間まで、反復される。

本発明の好ましい一態様においては、癌などの固形腫瘍のヒトにおける治療で使用するための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記治療は、
ａ）第１日目に、４００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶボーラスにて投与する工程；その３０分後に、
ｂ）２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回６０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶ溶液で４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入する工程；及び、その後、
ｄ）第２日目に、２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回６０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；
を含み、全工程ａ）〜ｄ）は隔週で８サイクルまで、すなわち１６週間まで、反復される。

本発明の他の具体的態様においては、癌などの固形腫瘍のヒトにおける治療で使用するための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記治療は、
ａ）第１日目に、４００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶボーラスにて投与する工程；その３０分後に、
ｂ）２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回１２０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶ溶液で４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入する工程；及び、その後、
ｄ）第２日目に、２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回１２０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；
を含み、全工程ａ）〜ｄ）は隔週で８サイクルまで、すなわち１６週間まで、反復される。

本発明の他の具体的態様においては、癌などの固形腫瘍のヒトにおける治療で使用するための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記治療は、
ａ）第１日目に、４００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶボーラスにて投与する工程；その３０分後に、
ｂ）２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回３０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；及び、その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶ溶液で４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入する工程；
を含み、全工程ａ）〜ｃ）は隔週で８サイクルまで、すなわち１６週間まで、反復される。

本発明の好ましい一態様においては、癌などの固形腫瘍のヒトにおける治療で使用するための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記治療は、
ａ）第１日目に、４００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶボーラスにて投与する工程；その３０分後に、
ｂ）２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回６０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；及び、その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶ溶液で４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入する工程；
を含み、全工程ａ）〜ｃ）は隔週で８サイクルまで、すなわち１６週間まで、反復される。

本発明の他の具体的態様においては、癌などの固形腫瘍のヒトにおける治療で使用するための［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が提供され、前記治療は、
ａ）第１日目に、４００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶボーラスにて投与する工程；その３０分後に、
ｂ）２回のＩＶボーラス投与を３０分間の間隔を空けて行い、それによって各回１２０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を投与する工程；及び、その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）をＩＶ溶液で４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入する工程；
を含み、全工程ａ）〜ｃ）は隔週で８サイクルまで、すなわち１６週間まで、反復される。

本発明の他の一態様においては、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の毒性を減少させる、及び／又は治療効果を改善するための薬剤の調製における、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸の使用が提供され、前記薬剤は、癌などの固形腫瘍の治療のために以下のレジメン：
ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与し；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
ｂ）互いに１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与し；その後、
ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含んだ１回のＩＶボーラス投与を行い；その後、
ｅ）第２日目に、任意に１又は複数回のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；
工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復されること；
に従って５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）と同時投与される。

本発明の他の具体的態様においては、癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む医薬組成物が提供され、前記医薬組成物は、以下の投与計画：
ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与し；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
ｂ）互いに１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与し；その後、
ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含んだ１回のＩＶボーラス投与を行い；その後、
ｅ）第２日目に、任意に１又は複数回のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；
工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復されること；
によって５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）と同時投与される。

本発明のさらなる他の具体的態様においては、癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を含む医薬組成物が提供され、前記医薬組成物は、以下の投与計画：
ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与し；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
ｂ）互いに１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与し；その後、
ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含んだ１回のＩＶボーラス投与を行い；その後、
ｅ）第２日目に、任意に１又は複数回のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；
工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復されること；
によって［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸とともに投与される。

本発明の他の具体的態様においては、癌などの固形腫瘍の治療のための薬剤の製造における、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸の使用が提供され、前記薬剤は、以下のレジメン：
ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与し；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
ｂ）互いに１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；その後、
ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与し；その後、
ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含んだ１回のＩＶボーラス投与を行い；その後、
ｅ）第２日目に、任意に２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；
工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復されること；
に従って５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）と同時投与される。

本発明の任意の局面の好ましい一態様においては、ＩＶボーラスの［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸は、３０、６０、又は１２０ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む。

本発明の任意の局面の好ましい一態様においては、前記第１日目の２回以上のＩＶボーラス投与における各ボーラスは、２０〜２５０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、例えば３０〜２４０ｍｇ／ｍ²、例えば３０〜１２０ｍｇ／ｍ²、又は例えば約３０ｍｇ／ｍ²、又は例えば約６０ｍｇ／ｍ²、又は例えば約１２０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む。

本発明の任意の局面の他の好ましい一態様においては、計６０〜１２０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が、任意に２回の別々のボーラスとして、すなわち２×３０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸 〜 ２×６０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸として、第１日目及び第２日目にわたって投与される。

本発明の任意の局面の他の好ましい一態様においては、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が第１日目に２回投与され、第２日目には投与されない。

本発明の任意の局面の他の一態様においては、第１日目に、工程ａ）に先立って、１又は複数種の抗癌剤の投与をＩＶボーラス又は１〜４時間の注入のいずれかによって行う。個々の態様において、前記抗癌剤は、
シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン（ＣＢＤＣＡ）、及びオキサリプラチン（エロキサチン）等のプラチナ剤；５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（ゼローダ）、ゲムシタビン（ジェムザール）、メトトレキセート、及びペメトレキセド（アリムタ）等の代謝拮抗物質；ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ダウノルビシン、アクチノマイシン−Ｄ、及びマイトマイシン−Ｃ（ＭＴＣ）等の抗腫瘍抗生物質；イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、トポテカン（ハイカムチン）、及びエトポシド（ＶＰ−１６）等のトポイソメラーゼ阻害剤；パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール）、及びビンクリスチン（オンコビン）等の分裂抑制剤；並びに、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（ソルメドロール）、及びデキサメタゾン（デカドロン）等のコルチコステロイド；から選択される１種又は複数種の薬剤であってよく、
あるいは、セツキシマブ（エルビタックス）、リツキシマブ（リツキサン）、及びベバシズマブ（アバスチン）等のモノクローナル抗体（ＭＡＢ）；並びに、ゲフィチニブ（イレッサ）等の小分子ＥＧＦＲ阻害剤；を含むターゲット療法から選択されてもよく、
あるいは、タモキシフェン（ノルバデックス）及びビカルタミド（カソデックス）等のホルモン療法から選択されてもよく、
あるいは、モノクローナル抗体等の癌免疫療法剤；ペムブロリズマブ（キイトルーダ）及びニボルマブ（オプジーボ）を含むＰＤ−１阻害剤、並びにアテゾリズマブ（テセントリック）を含むＰＤ−Ｌ１阻害剤、等の免疫チェックポイント阻害剤；並びに癌ワクチン；から選択されてもよい。

本発明の任意の局面の一態様においては、前記第１日目に投与される１又は複数種の抗癌剤は、オキサリプラチン（エロキサチン）である。

本発明の任意の局面の他の一態様においては、前記第１日目に投与される１又は複数種の抗癌剤は、オキサリプラチン（エロキサチン）のベバシズマブ（アバスチン）との併用である。

本発明の任意の局面の他の一態様においては、投与される［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸は単一ジアステレオマーであり、ジアステレオマー過剰率（ｄ．ｅ．）が＞９０％ｄ．ｅ．、例えば＞９３％ｄ．ｅ．、例えば＞９５％ｄ．ｅ．、例えば＞９８％ｄ．ｅ．、例えば＞９９％ｄ．ｅ．、例えば＞９９．５％ｄ．ｅ．、又は例えば＞９９．９％ｄ．ｅ．である。好ましい一態様においては、投与される［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸は単一ジアステレオマーであり、ジアステレオマー過剰率（ｄ．ｅ．）が＞９８％ｄ．ｅ．である。

本発明の任意の局面の他の一態様においては、前記固形腫瘍は、結腸癌、胃癌、乳癌、大腸癌、胆嚢癌、肺癌（具体的には腺癌）、転移性ＣＲＣ等の結腸直腸癌（ＣＲＣ）、頭頸部癌、肝癌、膵臓癌、及び骨肉腫等を含む、各種形態の癌から選択される。

本発明の任意の局面の特定の一態様においては、前記固形腫瘍は、結腸癌及び結腸直腸癌から選択される。

本発明の他の態様においては、前記５−ＦＵ類似体又はプロドラッグは、フッ素化ピリミジン塩基、例えば、カペシタビン（ゼローダ）、すなわちＮ４−ペンチルオキシカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン、テガフール、５−フルオロ−ピリミジノン、ＵＦＴ、ドキシフルリジン、２’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、１−（２’−オキソプロピル）−５−ＦＵ、及びアルキル−カルボニル−５−ＦＵ、ＢＯＦ−Ａ２、フトラフール（ＴＳ−１）、及びＳ−１から選択される。

一態様においては、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（［６Ｒ］−ＭＴＨＦ）は、任意に１種又は複数種の適した賦形剤及び／又はクエン酸もしくはアスコルビン酸もしくはその塩の形態等の抗酸化剤で安定化された、凍結乾燥物又は塩などの水溶性の固形剤として使用される。

一態様においては、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（［６Ｒ］−ＭＴＨＦ）は１又は複数回のＩＶボーラスで投与され、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば５ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば７ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば１０ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば１５ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば３０ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば６０ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば１２０ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば２４０ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば４８０ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば７２０ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、又は、例えば９６０ｍｇ／ｍ² ＢＳＡを含む。

さらなる一態様においては、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸は、第１日目に、各ボーラス投与間に２０〜３０分間の間隔を空けて４回まで投与される。

他の一態様においては、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸は、第２日目に、各ボーラス投与間に２０〜３０分間の間隔を空けて４回まで投与される。

さらなる他の一態様においては、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸は、第１日目及び第２日目の両方で、各ボーラス投与間に２０〜３０分間の間隔を空けて４回まで投与される。

一態様においては、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）は１又は複数回のＩＶボーラスで投与され、各ボーラスは１０〜１０００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば３００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば４００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば５００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば６００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば７００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば８００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、例えば９００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡ、又は、例えば１０００ｍｇ／ｍ² ＢＳＡを含む。

本発明の任意の局面の一態様においては、１治療サイクルは２日間を含む。このレジメンを任意に２週間毎に４サイクル、すなわち計８週間反復してもよい。

本発明の任意の局面の好ましい一態様においては、１治療サイクルは２日間を含む。このレジメンを任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち計１６週間まで反復してもよい。

本発明の任意の局面の他の一態様においては、前記治療サイクルの第１日目と第２日目は、例えばモニタリング目的のため、１〜５日間の期間によって隔てられる。

本発明の任意の局面の他の一態様においては、前記治療サイクルは第１日目と第２日目から１〜５日間の期間延長される。

ＩＶ期結腸直腸癌の患者において、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（［６Ｒ］−ＭＴＨＦ）の安全性及び有効性を、固定用量の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）単独との併用、又はそれに加えて固定用量のベバシズマブ、オキサリプラチン、もしくはイリノテカンとの併用によって、オープンラベルの、複数サイトにおける、第Ｉ／ＩＩ相用量コホート試験（ＩＳＯ−ＣＣ−００５）で分析する。第一、第二、又は第三選択治療の対象となる最大６３名のＩＶ期ＣＲＣ患者が本研究に参加するように計画され、以下の研究設計によって次のように配置される：各用量コホートに３〜６名の患者、それ以外に各治療群の１個の用量コホートに３名の患者（表１）。

略語：Ｎ／Ａ：該当なし、ＳＰ２Ｄ：選択された第２相用量。
¶ オキサリプラチン投与のためのタイムポイントウィンドウ（ｔｉｍｅ−ｐｏｉｎｔ ｗｉｎｄｏｗ）は、必要に応じて１２０分間までの注入時間を可能にするように拡張される。
＃ イリノテカン投与のためのタイムポイントウィンドウは、必要に応じて９０分間までの注入時間を可能にするように拡張される。
§ ５−ＦＵボーラス投与量は、体表面積に関わらず、最大推奨１日用量の１０００ｍｇを超えないこと。
＊ 本臨床研究プロトコルの以前のバージョンに本来含まれていたコホート＃３、コホート＃１０、及びコホート＃１１は削除した。
ａ 治療群＃４（コホート＃１２、＃１３、及び＃１４）及び治療群＃５（コホート＃１５）においては、［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸の総用量を２回のｉ．ｖ．ボーラス注入に分割し、それぞれ５−ＦＵボーラス投与（０分）の約３０及び６０分後に投与する。５−ＦＵの連続注入は［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸の２回目の投与のために一次中止する。
ｂ 以下の観察に対して最も好ましいプロファイルとなる用量として評価される、治療群＃４（ＭＯＦＯＸ）における［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸の用量。

［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸（［６Ｒ］−ＭＴＨＦ）は、バイアルあたり１００ｍｇ（遊離酸として計算）含まれる凍結乾燥粉末として製剤する。投与：３０、６０、１２０、又は２４０ｍｇ／ｍ²の固定用量で急速ｉ．ｖ．ボーラス注入によって行う；研究の全ての用量コホートにおいて（すなわち治療群を問わず）、各治療サイクルの第１日目及び第２日目の５−ＦＵ投与の約３０分後に投与を行う。前記レジメンを２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復する。

５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）は注射剤として製剤する。投与：５−ＦＵを、各治療サイクルにおいて、第１日目及び第２日目にｉ．ｖ．ボーラス注入で投与する。本研究の治療群＃２及び治療群＃３においては、５−ＦＵを、オキサリプラチン又はイリノテカン投与開始の約６０分後にそれぞれ投与する（下記参照）。前記治療を２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復する。

オキサリプラチンは濃縮輸液として製剤する。投与：オキサリプラチンを、本研究の治療群＃２（すなわちコホート＃４、＃５、＃１０、及び＃１１）において、各治療サイクルの第１日目に、ｉ．ｖ．注入により１５〜１２０分間投与し、これを２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復する。注入速度に影響する可能性のある、投与と関連した毒性について注意を払う（例えば、グレード≦２のアレルギー、咽喉頭異常感症、喉頭痙攣等）。このような場合、臨床ガイドラインに従って、以後のサイクルではオキサリプラチン投与の速度を延長すべきである。

イリノテカンは濃縮輸液として製剤する。投与：イリノテカンを、本研究の治療群＃３（すなわちコホート＃６及び＃７）において、各治療サイクルの第１日目にｉ．ｖ．注入により３０〜９０分間投与し、これを２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復する。イリノテカン投与と関連した早期毒性（２４時間以内）、すなわち早期下痢、嘔吐、発汗、腹部痙攣、並びに低頻度ではあるが流涙過多及び鼻漏、によって特徴付けられる急性コリン作動性症候群について注意を払う。このような場合、臨床ガイドラインに従った抗コリン薬の使用が必要である。

アバスチン（ベバシズマブ）は濃縮輸液として製剤する。投与：ベバシズマブを、本研究の治療群＃５（すなわちコホート＃１５）において、各治療サイクルの第１日目にｉ．ｖ．注入により３０〜９０分間投与し、これを２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復する。

ベバシズマブ関連毒性：患者が化学療法との併用でベバシズマブによる治療を主に受けた臨床試験からのデータに基づくと、以下がベバシズマブ関連毒性として認められる可能性がある。最も一般的な重篤な有害事象：胃腸穿孔、出血（肺出血／喀血を含む）、及び動脈血栓塞栓症；最も一般的な有害事象：高血圧、疲労又は無力症、下痢、及び腹痛。

結果
ＩＳＯ−ＣＣ−００５は、継続的な開発のため、［６Ｒ］−ＭＴＨＦの安全性評価と用量定義を行うために設計された、オープン臨床第Ｉ／ＩＩ相耐容性及び用量定義試験である。この試験では転移性結腸直腸癌患者において４種用量の［６Ｒ］−ＭＴＨＦが５−ＦＵと併用され、さらにイリノテカン又はオキサリプラチン及びベバシズマブの異なる組み合わせの使用の有無も含め、４種の異なるプロトコルを使用して評価が行われる。
・ＭＯＤ＋５−ＦＵ：［６Ｒ］−ＭＴＨＦの、５−ＦＵのみとの併用；Ｎｏｒｄｉｃ ＦＬＶプロトコルに類似。
・ＭＯＤ＋ＦＬＩＲＩ：［６Ｒ］−ＭＴＨＦの、５−ＦＵ及びイリノテカンとの併用；Ｎｏｒｄｉｃ ＦＬＩＲＩプロトコルに類似。
・ＭＯＤ＋ＦＬＯＸ：［６Ｒ］−ＭＴＨＦの、５−ＦＵ及びオキサリプラチンとの併用；Ｎｏｒｄｉｃ ＦＬＯＸプロトコルに類似。
・ＭＯＦＯＸ：［６Ｒ］−ＭＴＨＦの、５−ＦＵ及びオキサリプラチンとの併用；ＦＯＬＦＯＸ−６プロトコルに類似。

患者は、第一から第三、さらには第五選択にわたるいくつかの治療選択肢に属する。

患者は、第一から第三、さらには第五選択肢にわたるいくつかの治療選択肢に属する。研究の結果は定期的に評価され、第一選択治療を受けている患者群、及び部分的に第二、第三、及び第５選択治療を受けている患者群からの結果を、これまでに（２０１７年８月）及び今回再び（２０１７年１２月）分析した。この臨床研究は現在進行中である。

治療プロトコルの一つ（ＭＯＦＯＸ）においては、［６Ｒ］−ＭＴＨＦの総用量を２回のｉ．ｖ．ボーラス注入に分割し、それぞれ初回の５−ＦＵボーラス投与（０分）の約３０及び６０分後に投与した。

最初の１２名の第一選択患者が治療に入り、８治療週後の最初の腫瘍サイズ評価をＲＥＣＩＳＴ １．１基準に従って受けた際、６名の患者は部分奏効（ＰＲ）を示し、６名の患者は安定を示した。ＭＯＦＯＸプロトコルに従って治療を受けた１名の第二選択患者も８治療週後に分析され、部分奏効を示した。この時点で合計３名の患者がＭＯＦＯＸプロトコルに従って治療された。

８週間の治療の結果を図２に示す。

２０１７年８月までに分析された計１３名の患者のうち、７名の患者は部分奏効を示し、６名の患者は安定を示した（図２参照）。これはＯＲＲ（客観的奏効率）５４％（１２名の第一選択患者群については５０％）に相当する。さらには、少なくとも６０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−ＭＴＨＦで治療した群において、７名のうち５名（７１％）の患者が部分奏効（ＰＲ）を示した。それまでのところ、前記１２名の第一選択患者はいずれも進行（ＰＤ）を示さず、研究中の他の患者との比較において、また過去の対照群との比較において、安全性プロファイルの低下の兆候は無かった、

さらには、ＭＯＦＯＸプロトコルに従って治療を受けた全ての患者（２名の第一選択＋１名の第二選択患者）において、ベースライン径和を基準とした際に、標的病変の直径の和の少なくとも３０％の減少（平均値で４２％の減少）が見られた。

２０１７年９月までに、計３７名の患者について消化器（ＧＩ）副作用（ＡＥ）を分析した。前記３７名の患者のうち、２名（５．４％）の患者のみでグレード３又はそれ以上のＧＩ有害事象（嘔気、嘔吐、及び／又は脱水として定義される）が報告された。

２０１７年１２月までに、前記第一選択患者の評価を１６週間の治療後に再び行った（１６週間は、ＥＳＭＯ（欧州臨床腫瘍学会）の診療ガイドラインに従った癌治療の標準的なスケジュールと考えられる）。この１６週間の治療の結果を図７に示す。４名の第一選択患者については、研究プロトコルの形式上の理由から、追加の８週間の治療を追跡できず、また、さらなる第一選択患者はこの時点で分析されなかった。

前記８名の残った第一選択患者については、いずれも８〜１６週の間に腫瘍進行は見られず、８週の評価時点で部分奏効を示した全ての患者が、治療開始後１６週の時点で部分奏効を維持していた。したがって、この８名の第一選択患者のうち、５名が部分奏効を示し、３名が安定を示した。すなわちＯＲＲは６３％であった。

注目すべきは、ＭＯＦＯＸプロトコルに従って治療を受け、８週間の治療後に部分奏効を示した３名の患者（２名の第一選択及び１名の第二選択）が、８週間の治療後に依然として部分奏効を示したこと、また、ＭＯＦＯＸ治療を受けた１名の第二選択治療患者が、１６週間のＭＯＦＯＸ治療後に部分奏効を示した唯一の第二選択患者であったことである。

１：１ジアステレオマー混合物［６Ｒ，Ｓ］−ＭＴＨＦであるＣｏＦａｃｔｏｒについては、第一選択患者においてＣｏＦａｃｔｏｒをロイコボリンと比較した第ＩＩｂ相試験（それぞれ５−ＦＵとの併用）で７．７％のＣｏＦａｃｔｏｒ患者から少なくとも１件のグレード３以上のＡＥが報告されたのに対し、ロイコボリンでは３．３％であったこと、そしてＣｏＦａｃｔｏｒとロイコボリンのＯＲＲがそれぞれ１０．７％と１３．３％であったこと（Ａｄｖｅｎｔｒｘプレスリリース ２００７年１０月１日、図８）を踏まえると、前記の極めて高いＯＲＲ（８及び１６週の両者における観察）と低い有害事象（ＡＥ）発生率（８週の時点の分析）は驚くべきものである。

理論に縛られるものではないが、本発明者らは、このＣｏＦａｃｔｏｒと［６Ｒ］−ＭＴＨＦの間の違い、すなわち、ロイコボリンを用いた比較研究で評価されたそれらの有効性とＡＥに関する違いは、ＣｏＦａｃｔｏｒにおける５０％の［６Ｓ］−ＭＴＨＦ、すなわち［６Ｒ］−ＭＴＨＦの逆のジアステレオマー、の存在に帰する可能性があると推測する。ＣｏＦａｃｔｏｒは数年前に中止になったため、この疑問に対して臨床環境で直接的な取り組みを行うことはできないが、多くの医薬活性化合物では、純粋なエナンチオマーをラセミ体と比較した際、又はｃｉｓ−及びｔｒａｎｓ−異性体等の幾何異性体を比較した際に、目的とする効果及び副作用の両者に大きな違いが存在し得ることがよく知られている。今回のジアステレオマー異性体環境においては、非天然の［６Ｓ］−異性体は、チミジル酸生成酵素に対する補基質としての効果に関して、天然の［６Ｒ］−異性体である［６Ｒ］−ＭＴＨＦの部分的拮抗阻害剤であることが既に示されている［Ｌｅａｒｙ， Ｒ．Ｐ．， Ｇａｕｍｏｎｔ， Ｙ．， Ｋｉｓｌｉｕｋ， Ｒ．Ｌ．， １９７４． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉａｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． ５６， ４８４−４８８］。

ＩＳＯ−ＣＣ−００５試験の開始と同時にヒストリカルな群間比較研究（ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｓｔｕｄｙ）を行ったところ、ＬＶと比較して、等モル用量の［６Ｒ］−ＭＴＨＦでは、血漿中２’−デオキシウリジン（ｄＵｒｄ）濃度に反映される５−ＦＵによるチミジル酸生成酵素（ＴＳ）のグローバルな阻害が顕著に高い水準で起こることが分かった。血漿中２’−デオキシウリジン（ｄＵｒｄ）の上昇は、ＴＳ阻害のマーカーである。（Ｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ． （２００２） Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ８（１）： １０３−１０９）。

前記のヒストリカルな群間比較研究は次のように行った。

全ての患者の治療を、標準用量５００ｍｇの５−ＦＵのボーラス注入と、葉酸である［６Ｒ］−ＭＴＨＦ又はＬＶそれぞれの、同じくボーラス注入によって行った。

Ｇｏｔｈｅｎｂｕｒｇ（スウェーデン）では約２０年にわたり、全てのＣＲＣ患者の臨床、治療、及び結果データを地方大学病院（Ｏｓｔｒａ ｓｊｕｋｈｕｓｅｔ − Ｓａｈｌｇｒｅｎｓｋａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅｔｓｓｊｕｋｈｕｓｅｔ）において収集してきた。血漿及び組織試料は、長期保管のための適当な物理的条件のもとでバイオバンク内に保管されてきた。このデータベースとバイオバンクは、関連する倫理上及び規制上の許可のもとで運営されている。標準的な用量である５００ｍｇ／ｍ²の５−ＦＵに加えて６０ｍｇ／ｍ²のｉ．ｖ．ボーラスＬＶで治療された患者を、無作為に前記データバンクから抽出した。全ての患者について、保管された血漿試料を使用してｄＵｒｄを測定した。

ＬＶで治療された患者
５−ＦＵと６０ｍｇ／ｍ² ＬＶで治療された転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）患者２４名を前記データベースから無作為に抽出し、各患者について２治療サイクルからｔ₀とｔ₂₄の時点のｄＵｒｄの濃度を測定した。［６Ｒ］−ＭＴＨＦ患者における場合と同様に、平均値、及びｔ₂₄とｔ₀の差に対する標準偏差を求めた。ＬＶは天然（Ｓ−ホルミル−テトラヒドロ葉酸）及び非天然（Ｒ−ホルミル−テトラヒドロ葉酸）異性体の「ラセミ体」５０：５０混合物であるため、活性異性体は投与されたラセミ体ＬＶの用量の半分を構成する。ＬＶと［６Ｒ］−ＭＴＨＦの分子量は極めて近いため、６０ｍｇのＬＶは３０ｍｇの［６Ｒ］−ＭＴＨＦと等モルであると考えてよい。

［６Ｒ］−ＭＴＨＦで治療された患者
全ての患者がＩＳＯ−ＣＣ−００５試験に参加し、５−ＦＵを用いた２回の連続治療サイクルの間測定を行った。ｄＵｒｄの値を、５−ＦＵ注入の直前（ｔ₀）と２４時間後（ｔ₂₄）に測定した。平均値、及びｔ₂₄とｔ₀の差に対する標準偏差を、３０及び６０ｍｇ／ｍ²の用量の患者それぞれに対して求めた。

統計学的方法
３群全ての間の差をフリードマンの２元配置分散分析によって検定し、その後、ＬＶ ６０ｍｇ／ｍ²及び６Ｒ−ＭＴＨＦ ３０ ｍｇ／ｍ²の２つの等モル群の間の差をマン・ホイットニーＵ検定によって検定した。０．０５未満のＰ値を有意と見なした。

血漿中ｄＵｒｄの測定
血漿中ｄＵｒｄの測定を、液体クロマトグラフィーとその後のタンデム質量分析を含む方法によって行った。概要をまとめると以下の通りである。血漿試料を−８０℃フリーザーより取り出し、トリクロロ酢酸を血漿に加え、試料を混合及び遠心分離した。上清を１０ｋＤａの分画分子量のメンブレンフィルターで濾過し、再び３０分間遠心分離した。その結果、チューブ底部の溶液がＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析に使用できる状態となった。ブランクの血漿試料と複数の内部標準濃度を用いて同様な手順で校正試料を作製した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳへの注入量は４０μｌであった。デオキシウリジン及びクロロデオキシウリジンをエレクトロスプレーネガティブモードでイオン化した。ＭＳパラメーターは、全ての葉酸の最大反応に対して最適化した。ＭＳ／ＭＳ取得法（多重反応モニタリング）を利用した。

ＴＳ阻害の測定
３群全ての差は有意（ｐ＝０．０４）であり、前記２つの等モル群、ＬＶ ６０ｍｇ／ｍ²及び６Ｒ−ＭＴＨＦ ３０ ｍｇ／ｍ²の間の差も有意であった（ｐ＝０．０３）。等モル用量の［６Ｒ］−ＭＴＨＦを５−ＦＵとともに使用した場合、ｄＵｒｄ濃度はＬＶの場合よりも有意に高い。また、［６Ｒ］−ＭＴＨＦ用量の増加とＴＳ阻害水準の上昇との間には、血漿中ｄＵｒｄ濃度の増加に反映される用量反応関係があるように見受けられる（表２及び図３を参照のこと）。

本比較研究により、５−ＦＵの［６Ｒ］−ＭＴＨＦによるバイオモジュレーションが、ＬＶによるものと比較した際、より高い血漿中ｄＵｒｄとＴＳ阻害の増加をもたらすことが示された。また本研究により、ＬＶと比較において、等モル用量の［６Ｒ］−５，１０−ＭＴＨＦが、血漿中デオキシウリジン（ｐｄＵｒｄ）濃度に反映される５−ＦＵからの顕著に高い水準のグローバルＴＳ阻害を生じさせることが示された。

この観察はさらに、［６Ｒ］−ＭＴＨＦの用量を増加させた後のＴＳの用量依存的阻害によっても支持される。固定用量の５−ＦＵからのＴＳ阻害の上昇は用量依存的であり、極めて高い［６Ｒ］−５，１０−ＭＴＨＦ用量では横ばいとなる。これは前記ＩＳＯ−ＣＣ−００５試験からの１２０ｍｇ ｖｓ ２４０ｍｇのｄＵｒｄ測定に基づく。

６０ｍｇ／ｍ²のＬＶボーラス用量は、スカンジナビアで広く用いられている、いわゆるＮｏｒｄｉｃ治療レジメンにおいて使用される標準用量である。臨床結果は、ＬＶが注入、多くの場合２時間で４００ｍｇの注入、によって投与される他のレジメンで得られるものと類似している。（Ｇｕｓｔａｖｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， （２０１５） Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ， １４： １−１０）。興味深いのは、［６Ｒ］−ＭＴＨＦ投与後の顕著に高いＴＳ阻害（図４）である。

前記ＩＳＯ−ＣＣ−００５試験はさらに、［６Ｒ］−ＭＴＨＦを５−ＦＵと併用することによって、結腸直腸癌において、９０％超の治療患者が、安定又は部分奏効として定義される臨床的有用性を示すということ、そして、［６Ｒ］−ＭＴＨＦの複数回ボーラス投与で６０〜８０％という極めて高いＯＲＲを達成可能であるということを支持している。

上記研究結果はさらに、各種形態の細胞増殖抑制剤との併用において［６Ｒ］−ＭＴＨＦは安全であり得るということ、そして、［６Ｒ］−ＭＴＨＦはこれらの重症患者にとって有効かつ安全であり得るということを支持している。癌治療に用いられる細胞増殖抑制剤の用量制限毒性（ＤＬＴ）は、典型的には、治療薬の用量又は強度をさらに増加することを妨げるか、又は現在の用量水準における治療の継続を妨げる。ＤＬＴはしたがって、患者に投与され得る細胞増殖抑制剤の用量を厳しく制限することが多い。これまでに達成されたＩＳＯ−ＣＣ−００５試験の結果は、［６Ｒ］−ＭＴＨＦと併用した際の５−ＦＵの毒性は、５−ＦＵを他の葉酸アジュバントと併用した場合と比較して減少することを示している。上記で議論した比較研究の示唆によれば、この効果は、血漿中２’−デオキシウリジン（ｄＵｒｄ）濃度に反映される５−ＦＵからのグローバルなチミジル酸生成酵素（ＴＳ）の阻害を、ロイコボリンとの比較において、［６Ｒ］−ＭＴＨＦが顕著に高い水準で達成させることによって生じている可能性がある。これにより、より高用量の５−ＦＵの使用が、用量制限副作用を生ずることなく可能となることが期待される。

Claims (16)

1. ［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む、癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物であって、前記組成物は以下の投与計画：
   ａ）第１日目に、１０〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を含むＩＶボーラスを投与し；その後同時に、又は１０分〜４時間後に、
   ｂ）互いに約１０〜６０分間の間隔を空けた２回以上のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；その後、
   ｃ）５−ＦＵ（又はその類似体もしくはプロドラッグ）を４６時間にわたって、又は第２日目の終わりまで、持続注入によって投与し；その後、
   ｄ）任意に、第１日目の終わりの前に、５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含んだ１回のＩＶボーラス投与を行い；その後、
   ｅ）第２日目に、任意に１又は複数回のＩＶボーラス投与を行い、各ボーラスは５〜１０００ｍｇ／ｍ²（ＢＳＡ）の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含み；
   工程ｂ）は、任意に第１日目に各反復の間隔を１０分間〜４時間として４回まで反復され、工程ｅ）は、任意に第２日目に各ボーラス投与の間隔を１０分間〜６０分間として４回まで反復され、全ての工程ａ）〜ｅ）は、任意に２週間毎に８サイクルまで、すなわち１６週間まで反復されること；
   によって５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）と同時投与される、医薬組成物。
2. 前記固形腫瘍が、結腸癌、胃癌、乳癌、大腸癌、胆嚢癌、肺癌（具体的には腺癌）、転移性ＣＲＣ等の結腸直腸癌（ＣＲＣ）、頭頸部癌、肝癌、骨肉腫、及び膵臓癌から選択される癌の形態である、請求項１記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
3. 前記第１日目の２回以上のＩＶボーラス投与における各ボーラスが、２０〜２５０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、例えば３０〜２４０ｍｇ／ｍ²、例えば３０〜１２０ｍｇ／ｍ²、又は例えば約３０ｍｇ／ｍ²、又は例えば約６０ｍｇ／ｍ²、又は例えば約１２０ｍｇ／ｍ²の［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸を含む、請求項１又は２に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
4. 前記固形腫瘍が転移性ＣＲＣ等の結腸直腸癌（ＣＲＣ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
5. 前記工程ａ）に先立って、第１日目に１又は複数種の抗癌剤の投与をＩＶボーラス又は１〜４時間の注入のいずれかによって行う、請求項１〜４のいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
6. 前記抗癌剤がオキサリプラチン、イリノテカン（ＣＰＴ１１）、及びベバシズマブ（アバスチン）から選択される、請求項４又は５のいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
7. 前記の第１日目に投与される１又は複数種の抗癌剤がオキサリプラチンである、請求項４又は５のいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
8. 前記の第１日目に投与される１又は複数種の抗癌剤がオキサリプラチンのベバシズマブ（アバスチン）との併用である、請求項４又は５のいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
9. 少なくとも２回のボーラスの［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が第２日目に工程ｅ）のもとで投与される、請求項１〜８のうちいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
10. ４回までのボーラスの［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が、各ボーラス間に２０〜３０分間の間隔を空けて投与される、請求項８記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
11. ４回までのボーラスの［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が、各ボーラス間に２０〜３０分間の間隔を空けて投与される、請求項９記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
12. 前記［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が、任意に１種又は複数種の適した賦形剤及び／又はクエン酸もしくはアスコルビン酸もしくはその塩の形態等の抗酸化剤で安定化された、凍結乾燥物又は塩などの水溶性の固形剤として使用される、請求項１〜１１のうちいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
13. 前記［６Ｒ］−５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸が ＞９８％ ｄ．ｅ．のジアステレオマー純度を有する、請求項１〜１２のうちいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
14. 前記５−ＦＵ類似体又はプロドラッグが、フッ素化ピリミジン塩基、例えば、カペシタビン（ゼローダ）、すなわちＮ４−ペンチルオキシカルボニル−５’−デオキシ−５−フルオロシチジン、テガフール、５−フルオロ−ピリミジノン、ＵＦＴ、ドキシフルリジン、２’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、１−（２’−オキソプロピル）−５−ＦＵ、及びアルキル−カルボニル−５−ＦＵ、ＢＯＦ−Ａ２、フトラフール（ＴＳ−１）、及びＳ−１から選択される、請求項１〜１３のうちいずれか１項に記載の癌などのヒトにおける固形腫瘍を治療するための医薬組成物。
15. 請求項１〜１４のうちいずれか１項に記載の工程ａ）〜ｅ）を少なくとも計８週間の治療期間にわたって行い、反復することを含む、癌などの固形腫瘍のヒトにおける進行を防止又は遅延させることにおける使用のための医薬組成物。
16. 請求項１〜１３のうちいずれか１項に記載の工程ａ）〜ｅ）を少なくとも計１６週間の治療期間にわたって行い反復し、治療開始後８〜１６週の間、前記固形腫瘍の統計的に有意な進行が見られない、請求項１５記載の癌などの固形腫瘍のヒトにおける進行を防止又は遅延させることにおける使用のための医薬組成物。